SK282664B6

SK282664B6 - Deriváty L-arginínu, spôsob ich prípravy, farmaceutická kompozícia s ich obsahom a ich použitie

Info

Publication number: SK282664B6
Application number: SK1121-97A
Authority: SK
Inventors: Colette Broquet; De Lassauniere Pierre-Etienne Chabrier
Original assignee: Societe De Conseils De Recherches Et D'applications
Priority date: 1995-03-04
Filing date: 1996-03-04
Publication date: 2002-11-06
Also published as: US5972940A; EP0813529B1; HUP9801200A2; CZ268797A3; DE69623602T2; PL188916B1; RU2168493C2; PL322069A1; BG62520B1; SK112197A3; CZ290747B6; HK1013777A1; GB9504350D0; EP0813529A1; CN1071328C; DE69623602D1; KR19980702738A; CN1179774A; BG101942A; HUP9801200A3

Abstract

Sú opísané deriváty L-arginínu všeobecného vzorca (I), spôsob ich prípravy a farmaceutické kompozície obsahujúce uvedené deriváty. Takéto zlúčeniny sú biologicky aktívne ako inhibítory NO syntázy. Vo všeobecnom vzorci (I) A predstavuje atóm vodíka, C1-C6 alkylovú skupinu alebo nitroskupinu, E znamená atóm kyslíka alebo kovalentnú väzbu, n sa rovná 0, alebo znamená celé číslo od 1 do 12, a každý z R1 a R2 znamená priamy alebo rozvetvený C1-C6 alkylový reťazec, alebo R1 a R2 tvoria spoločne s atómom dusíka, ku ktorému sú viazané, nasýtený alebo nenasýtený 5- alebo 6-členný kruh vzorca (a), kde X znamená atóm kyslíka, atóm síry alebo atóm dusíka, alebo iminoskupinu, alkyliminoskupinu alebo metylénovú skupinu.ŕ

Description

Oblasť techniky

Vynález sa týka derivátov L-arginínu, spôsobu ich prípravy a farmaceutických kompozícií, ktoré ich obsahujú.

Doterajší stav techniky

Zlúčeniny podľa vynálezu majú biologickú aktivitu ako inhibítory NO syntázy. Pri zohľadnení potenciálnej úlohy NO syntázy vo fyziopatológii (S. Moncala, R.M.J. Palmer a kol., Nitric Oxide: Physiology, Pathophysiology, and Pharmacology, Pharmaceutical Reviews, vol. 43, No. 2, str. 109 - 142), takéto zlúčeniny môžu byť zaujímavé ako hypotenzické, antibakteriálne, imunosupresívne, antiarterosklerotické, vazotropické, analgetické, antimigrenické, oftalmologické alebo antidiabetické činidlá. Dá sa teda uvažovať o využití týchto zlúčenín ako účinnej zložky liečiv na liečenie patologických stavov centrálneho a periférneho nervového systému ako mozgová mŕtvica, migréna a bolesti hlavy, epilepsia, mozgová alebo spinálna trauma, neurodegeneratívne choroby a/alebo choroby autoimunitného systému, ako je napríklad Alzheimerova choroba, Parkinsonova choroba, tanec sv. Víta, amyotropická laterálna skleróza, infekčná cerebrálna neuropatia (AIDS), akútne a chronické bolesti, tolerancia a závislosť od derivátov morfínu, psychotrópnych látok a alkoholu, okulárna neuropatia a depresia. Dalo by sa tiež uvažovať o ich použití pri iných patologických stavoch, ako sú stavy spojené s dysfunkciou gastrointestinálneho systému a močových ciest zápalového alebo nezápalového typu, ako vredová kolitída, gastritída, Chronnovo ochorenie, ťažkosti s močovými cestami, ezofág-gastro reflux, diarea, ale tiež pre patologické stavy spojené s kardiovaskulárnym alebo bronchopulmonámym systémom ako je hypertenzia, ateroskleróza, pulmonárna fibróza, sklerodermia, astma, pulmonárna hypertenzia, cirhóza, diabetes, zápalové alebo infekčné ochorenia ako je artróza, polyartritída, septický šok, vaskulitída alebo dokonca ťažkosti s erekciou, priapizmus alebo kontraccpcia.

Podstata vynálezu

Vynález sa týka derivátov L-arginínu všeobecného vzorca (1)

v ktorom (D

A predstavuje atóm vodíka, C_rC₆ alkylovú skupinu alebo nitroskupinu,

E znamená atóm kyslíka alebo kovalentnú väzbu, n sa rovná 0 alebo znamená celé číslo od 1 do 12, a/alebo R¹ a R² predstavujú nezávisle od seba rozvetvený alebo lineárny C,-C₆ alkylový reťazec, alebo R¹ a R² tvoria spoločne s atómom dusíka, ku ktorému sú viazané, 5- alebo 6-členný kruh, nasýtený alebo nenasýtený vzorca:

X ktorom n sa rovná 0, E predstavuje kovalentnú väzbu a/alebo A predstavuje atóm vodíka a R¹ a R² znamenajú nezávisle od seba C_rC₆ alkylovú skupinu alebo spoločne tvoria piperidínový, morfolínový alebo imidazolový kruh, alebo A predstavuje nitroskupinu a R¹ a R² tvoria piperidínový kruh.

Pod pojmom nižšia alkylovú skupina sa rozumie alkylová skupina, ktorá obsahuje 1 až 6 atómov uhlíka. Toto sa týka predovšetkým alkylových skupín, lineárnych alebo rozvetvených, ktoré obsahujú od 1 do 4 atómov uhlíka, zvolené z metylovej, etylovej, n-propylovej, izopropylovej, n-butylovej, izobutylovej alebo terc.-butylovej skupiny.

R¹ a R² môžu tvoriť spoločne s atómom dusíka, na ktorý sú viazané, 5- alebo 6-členný kruh, nasýtený alebo nenasýtený. Takto vytvorené kruhy môžu zahrnovať pyrol, piperidín, pyrolidín, imidazol, imidazolidín, pyrazol, pyrazolidín, pyridín, piperazón, pyrazín, pyrimidín, pyridazin, izotiazol alebo morfolín.

Vynález sa týka predovšetkým zlúčenín všeobecného vzorca (I), v ktorom n je celé číslo od 1 do 12 a výhodne E znamená atóm kyslíka, A predstavuje nitroskupinu alebo atóm vodíka a R¹ a R² tvoria morfolínový, piperidínový alebo imidazolový kruh. Vynález sa týka predovšetkým výhodne zlúčeniny všeobecného vzorca (I), v ktorom n sa rovná 0, E predstavuje kovalentnú väzbu, A znamená nitroskupinu a R¹ a R² tvoria morfolínový kruh.

Vynález sa týka tiež farmaceutický prijateľných solí derivátov podľa vynálezu. Soli sú tvorené z organických alebo anorganických kyselín, ako je kyselina chlorovodíková, kyselina bromovodíková, kyselina octová, kyselina fumárová, kyselina sulfónová, kyselina toluénsulfónová, kyselina maleínová, kyselina karboxylová alebo kyselina fosforečná. Karboxylová kyselina môže byť zvolená napríklad z kyseliny acetylsalicylovej, kyseliny salicylovej, kyseliny mefenamovej, ibuprofénu, sulindaku alebo indometacínu.

Zlúčeniny všeobecného vzorca (I), v ktorom n sa rovná 0, E predstavuje kovalentnú väzbu a/alebo A znamená atóm vodíka a R¹ a R² spoločne tvoria piperidínový alebo morfolínový kruh, alebo A predstavuje nitroskupinu a R¹ a R²tvoria piperidínový kruh, sú opísané v literatúre. V týchto dokumentoch (European Joumal of Medicinal Chemistry, vol. 23, No. 6 (1988), Biochemistry, vol. 23, No. 1 (1984), prihlášky vynálezu FR 2 320 088 a FR 2 240 720), sa tieto deriváty použili na prípravu derivátov L-arginínu ako antitrombotických činidiel. Zlúčenina všeobecného vzorca (I), v ktorej n sa rovná 0, E predstavuje kovalentnú väzbu, A znamená atóm vodíka a R¹ a R² spoločne tvoria imidazolový kruh, sú opísané ako medziprodukt syntézy (Origins of Life, vol. 14 (1984), str. 351 - 357). Ale pri týchto produktoch nebola deklarovaná žiadna farmakologická účinnosť. Účinnosť iných derivátov všeobecného vzorca (I), v ktorých n sa rovná 0, E predstavuje kovalentnú väzbu, A znamená atóm vodíka a R¹ a R² predstavujú nezávisle od seba nižšiu alkylovú skupinu sa porovnala s účinnosťou inzulínu (Z. Naturforsch. Teil C., vol. 28, No. 5 - 6, 1973; HopeSeyler's Z. Physiol. Chem., vol. 353, #11, 1972, str. 1661 - 1670). Ale oblasť trombózy a diabetes sú veľmi odlišné od oblasti NO syntézy, ktorú pokrýva predložený vynález.

Vynález sa týka spôsobu prípravy zlúčenín všeobecného vzorca (I), pričom tento spôsob zahŕňa reakciu zlúčeniny všeobecného vzorca (II) v ktorom X predstavuje atóm kyslíka, atóm síry alebo atóm dusíka, iminoskupinu, alkyliminoskupinu alebo metylénovú skupinu, s výnimkou zlúčenín všeobecného vzorca (I), v

(II) v ktorom A predstavuje C_rC₆ alkylovú skupinu alebo nitroskupinu a R³ znamená chránenú skupinu, so zlúčeninou všeobecného vzorca (III)

H-E-ÍCHzj^NR'R² (III), v ktorom n, E, R¹ a R² sú definované, v prítomnosti spojovacieho prostriedku, pri teplote v rozsahu medzi 0 a 30 °C, potom odštiepenie ochrannej skupiny R³ z takto získanej zlúčeniny všeobecného vzorca (IV)

(iv) za získania zlúčeniny všeobecného vzorca (I), v ktorom A predstavuje nitroskupinu alebo C_rC₆ alkylovú skupinu. Ak sa požaduje získanie zlúčeniny všeobecného vzorca (1), v ktorom A predstavuje atóm vodíka, použije sa zodpovedajúca zlúčenina všeobecného vzorca (I), v ktorom A predstavuje NO₂ skupinu a nitroskupina sa odštiepi; odštiepenie sa môže uskutočniť hydrogenolýzou.

Východiskové zlúčeniny III a II, v ktorých A predstavuje nitroskupinu sú známe a komerčne dostupné: zlúčenina II, v ktorej A predstavuje nižšiu alkylovú skupinu sa môže pripraviť známym spôsobom (Synth. Commun. 21 (1), 99 (1991)). Prvý stupeň sa uskutočňuje pri teplote v rozsahu medzi 0 a 30 °C a výhodne medzi 0 a teplotou prostredia. Použité rozpúšťadlo musí rozpúšťať deriváty nitroarginínu vzorca (II): výhodne sa používa DMF. Reakcia sa uskutočňuje s použitím spojovacieho činidla. Vhodným je spojovacie činidlo vybrané spomedzi spojovacích činidiel, ktoré sa bežne používajú pri syntéze peptidov: môže sa použiť Ν,Ν'-dicyklohexylkarbodiimid (DCC), benzotriazol-1 -yl-oxytris(dimetylamino)fosfónium hexafluorofosfát (BOP) alebo benzotriazol-l-yl-oxy-trispyrolidinofosfónium hexafluórfosfát (PyBOP). Výhodne sa spolu so spojovacím činidlom môžu použiť aditíva, ako napríklad 1-hydroxybenzotriazol (HOBt) alebo 4-dimetylaminopyridín (DMAP), ktoré sú známe pri syntéze peptidov na urýchlenie spájania, pri ktorom sa na reakcii zúčastňuje karbodiimid.

Ochrannou skupinou R³ môže byť ktorákoľvek ochranná skupina bežne používaná pri syntéze peptidov, ako je benzyloxykarbonyl (Z) a terc.-butoxykarbonyl (BOC). Počas prípravy zlúčeniny všeobecného vzorca (I), v ktorom A predstavuje atóm vodíka, skupinou R³ je výhodne skupina, ktorá sa dá odštiepiť pri podmienkach hydrogenolytického odštiepenia nitroskupiny. Takýmto spôsobom sa odštiepenie skupiny R³ a nitroskupiny sa môže uskutočniť súčasne.

Vynález sa tiež týka farmaceutických kompozícií, ktoré ako účinnú zložku zahŕňa najmenej jednu zlúčeninu všeobecného vzorca (I)

v ktorom:

(I)

A predstavuje atóm vodíka, C_rC₆ alkylovú skupinu alebo nitroskupinu,

E znamená atóm kyslíka alebo kovalentnú väzbu, n sa rovná 0 alebo znamená celé číslo od 1 do 12, a/alebo R¹ a R² predstavujú nezávisle od seba rozvetvený alebo lineárny C_rC_s alkylový reťazec, alebo R¹ a R² tvoria spo ločne s atómom dusíka, ku ktorému sú viazané, 5- alebo

6-členný kruh, nasýtený alebo nenasýtený, vzorca

v ktorom X predstavuje atóm kyslíka, atóm síry alebo atóm dusíka, iminoskupinu, alkyliminoskupinu alebo metylénovú skupinu, s výnimkou zlúčenín všeobecného vzorca (I), v ktorom n sa rovná 0, E predstavuje kovalentnú väzbu a/alebo A predstavuje atóm vodíka a R¹ a R² znamenajú nezávisle od seba C_rC₆ alkylovú skupinu alebo spoločne tvoria imidazolový, morfolínový alebo piperidínový kruh, alebo A predstavuje nitroskupinu a R¹ a R² tvoria piperidínový kruh, alebo soľ týchto zlúčenín spolu s najmenej jedným rozpúšťadlom alebo farmaceutický prijateľným spojivom.

Vynález sa ďalej týka farmaceutických kompozícií, ktoré ako účinnú látku zahŕňajú najmenej jednu zlúčeninu všeobecného vzorca (Ι_Λ)

v ktorom

A predstavuje atóm vodíka, C_rC₆ alkylovú skupinu alebo nitroskupinu,

E znamená atóm kyslíka alebo kovalentnú väzbu, n sa rovná 0 alebo znamená celé číslo od 1 do 12, a/alebo R¹ a R² predstavujú nezávisle od seba rozvetvený alebo lineárny C_rC₆ alkylový reťazec, alebo R¹ a R² tvoria spoločne s atómom dusíka, ku ktorému sú viazané, 5- alebo 6-členný kruh, nasýtený alebo nenasýtený, vzorca

v ktorom X predstavuje atóm kyslíka, atóm síry alebo atóm dusíka, metylénovú skupinu, alkyliminoskupinu alebo iminoskupinu, s výnimkou zlúčenín všeobecného vzorca (I_A), v ktorom n sa rovná 0, E predstavuje kovalentnú väzbu, A predstavuje atóm vodíka a R¹ a R² znamenajú nezávisle od seba Cj-Čí alkylovú skupinu, alebo soľ týchto zlúčenín spolu s najmenej jedným rozpúšťadlom alebo ťarmaceuticky prijateľným spojivom.

Farmaceutické kompozície podľa vynálezu sú prispôsobené na zvolený spôsob podávania, predovšetkým orálne a parenterálne. Môžu byť teda napríklad vo forme kapsúl, piluliek, gélov, pitných roztokov, injekčných roztokov alebo vo forme prispôsobenej na predĺžené uvoľňovanie. Zlúčenina podľa vynálezu sa môže podávať v rozmedzí dávky medzi 0,1 a 1000 mg/deň. Výhodne sa zlúčeniny môžu podávať v dávke v rozsahu medzi 1 a 100 mg.

Vynález sa napokon týka použitia derivátov L-arginínu všeobecného vzorca (I_B)

v ktorom

A predstavuje atóm vodíka, CpCe alkylovú skupinu alebo nitroskupinu,

SK 282664 Β6

E znamená atóm kyslíka alebo kovalentnú väzbu, n sa rovná 0 alebo znamená celé číslo od 1 do 12, a/alebo R¹ a R² predstavujú nezávisle od seba rozvetvený alebo lineárny C|-C₆ aikylový reťazec, alebo R¹ a R² tvoria spoločne s atómom dusíka, ku ktorému sú viazané, 5- alebo 6-členný kruh, nasýtený alebo nenasýtený, vzorca

v ktorom X predstavuje atóm kyslíka, atóm síry alebo atóm dusíka, metylénovú skupinu, alkyliminoskupinu alebo iminoskupinu, na prípravu liečiva na liečenie patologických stavov centrálneho a periférneho nervového systému, ochorení gastrointestinálneho systému a močových ciest zápalového alebo nezápalového typu alebo ochorení spojených s kardiovaskulárnym alebo bronchopulmonámym systémom.

Vynález je ilustrovaný nasledujúcimi príkladmi uskutočnenia.

Príklady uskutočnenia vynálezu

Príklad 1

Morfolínoetylester L-N®-nitroarginínu (L-NNA):

—N = -N O A = NO₂ E = O n = 2 V >—>

1. stupeň

Ekvimolárna zmes (10'²M) L-N-Boc-N^G-nitroarginínu a Ν-β-hydroxyetylmorfolinu sa rozpustí v 30 ml bezvodého dimetylformamidu (DMF), potom sa pridá 3 x 10^-3 M dimetylaminopyridínu (DMAP). Roztok sa ochladí na teplotu 0 °C a pridá sa 10‘²M dicyklohexylkarbodiimidu (DCC). Zmes sa mieša pri teplote 0 °C počas 10 minút, potom sa v miešaní pokračuje pri laboratórnej teplote počas 24 hodín. Vzniknutá zrazenina dicyklohexylmočoviny sa odfiltruje a rozpúšťadlo sa odparí. Zvyšok sa znova rozpustí v octane etylovom, premyje sa jedenkrát vodou a jedenkrát nasýteným roztokom NaCl. Po odparení rozpúšťadla sa získa viskózny produkt, ktorý sa chromatografúje na kolóne s oxidom kremíka (eluent CHCl₃/MeOH 95 : 5 potom 90 : 10), získa sa zlúčenina (4) vo forme oleja, ktorý kryštalizuje.

Teplota topenia: 128 °C.

CCM: rf: 0,38 (CHCl₃/EtOH 85 : 15)

1. R. (cm'¹) nujol τ-ΝΗ:3400 - 3200, τ-ester: 1740, τ-BOC: 1710.

Hmotnostné spektrum: MH+ = 433. 'H-NMR, 100 MHz, CDC1₃, TSM Sppm:

7,8 (2H, NH₂), 5,5 (d, 1H, NHBoc), 4,3 (m, 3H, CH NHCO, CO₂CH₂), 3,8 - 3,2 (m, 7H, CH,HN. CH₂-CH₂, NH), 2,5 (m, 6H, 3CH₂N), 1,7 (m, 4H, CH₂CH₂), 1,4 (sing. 9H, tBu).

2. stupeň: deprotekcia NH₂ funkcie

Zlúčenina (4) získaná v predchádzajúcom stupni sa rozpustí v bezvodom dioxánc, po kvapkách sa pridá nadbytok 4 H HC1 v dioxáne pri teplote prostredia. Roztok sa zakalí, potom sa intenzívne mieša počas 15 hodín, pričom sa pomaly vytvára biela zrazenina. Dioxán sa dekantuje, dvakrát sa vymyje bezvodým éterom a vysuší na rotačnej odparke. Pevný zvyšok sa rozpustí vo vode a lyofilizuje sa. Zlúčenina I sa získa vo forme dihydrochloridu.

Teplota topenia: 230 °C - hygroskopický biely prášok.

CCM: rf: 0,39 (2-propanol/H₂0/NH₄OH: 7 : 3 : 0,1) MH+ (zásada) = 333.

[a_D ²⁰] = +3,81 (H₂O) ’H-NMR, 100 MHz, D₂O, ôppm:

4,5 (m, 2H, CO₂CH₂), 4,1 (t, 1H, CH(NH₂)CO), 3,7 (m, 4H, CH₂OCH₂), 3,4 - 3,1 (m, 8H, CH₂N), 1,9 (pevný 4H, CH₂-CH₂).

Príklad 2

Piperidinoetyl ester L-NNA

1. stupeň

Zodpovedajúca zlúčenina všeobecného vzorca (4) sa získa spôsobom opísaným v príklade 1, s použitím N-(B-hydroxyetylj-piperidínu namiesto N-(B-hydroxyetyl)morfolínu.

Biela pevná látka - teplota topenia: 98 °C. CCM: rf: 0,22 (CHClýEtOH: 8 : 2) 'H-NMR, 100 MHz, CDC1₃, TMS, ôppm:

7,6 (2H, NH₂), 5,5 (t, 1H, NHBoc), 4,3 (t, 3H, CH-NHCO a CO₂CH₂) 3,4 (pevný, 3H, CH₂HN, NH), 2,7 - 2,3 (pevný, 6H, 3CH₂N), 1,7 -1,4 (pevný 19H, tBu a5CH₂).

2. stupeň

Zlúčenina I sa získa vo forme dihydrochloridu spôsobom, ktorý je opísaný v príklade 1, druhý stupeň.

Teplota topenia: 250 °C - hygroskopická biela pevná látka.

CCM: rf: 0,36 (2-propanol/H₂0/NH₄OH: 7 ; 3 : 0,1) MH+ (zásada) = 331.

[a_D ²⁰] = + 5,78 (H₂O) ’H-NMR, 100 MHz, D₂O, ôppm:

4,5 (m, 2H, CO₂CH₂), 4,1 (t, 1H, CH(NH₂)CO), 3,5 - 2,7 (m, 8H, 4CH₂N), 1,7-1,3 (m, 10H, 5CH₂).

Príklad 3

3-(Dimetylamino)propylester L-NNA

1. stupeň

Zodpovedajúca zlúčenina všeobecného vzorca (4) sa získa spôsobom opísaným v príklade 1,1. stupeň, s použitím 3-(dimetylamino)propanolu namiesto N-(B-hydroxyetyljmorfolínu. Zlúčenina (4) sa prečistí rýchlou chromatografiou (CHCl₃/EtOH 8:2). Získa sa viskózny produkt.

CCM: rf: 0,17 (CHCl₃/MeOH: 7 : 3) ’H-NMR, 100 MHz, CDC1₃, TSM, Sppm:

5,4 (m, 1H, NHBoc), 4,2 (m, 3H, COOCIfy a CHNHBoc), 3,4 (m, 2H, NHCH₂), 2,3 (m, 8H, CH₂N a (CH₃)₂N), 1,7 (m, 6H, 3CH₂).

2. stupeň

Zlúčenina I sa získa vo forme dihydrochloridu spôsobom, ktorý je opísaný v príklade 1, 2. stupeň.

Teplota topenia: 178 °C - hygroskopický biely prášok. CCM: rf: 0,28 (2-propanol/H₂O/NH₄OH: 7:3: 0,1) MH+ (zásada) = 378.

'H-NMR, 100 MHz, D₂O, óppm:

4,15 (m, 3H, CH(NH₂)CO, COOCH,), 3,1 (m, 4H, NHCH₂a CH₂N), 2,2 (s, 6H, (CH₃)N), 1,7 (m, 6H, 3CH₂).

Príklad 4

Morfolinopropylester L-NNA
A = NO₂ E = O n = 3 V	Γ~\ = -N ,0 \__/

1. stupeň

Spôsobom ako je opísaný v príklade 1,1. stupeň, ale s použitím 3-morfolinopropanolu namiesto N-(fl-hydroxyetyl)morfolínu sa získa zodpovedajúca zlúčenina (4), ktorá sa prečistí rýchlou chromatografiou.

Teplota topenia: 106 °C.

CCM: rf: 0,34 (CHCl₃/EtOH: 85 : 15) 'H-NMR, 100 MHz, CDC1₃, TMS, óppm:

7,8 (2H, NH₂), 5,4 (d, 1H, NHBoc), 4,3 (m, 3H, CH-NHBoc, CO₂CH2) 3,8-3,3 (m, 7Η, CH₂NH, CH₂-O-CH₂, NH), 2,4 (m, 6H, 3CH₂N), 1,9 (m, 6H, 3CH₂), 1,4 (sing, 9H, tBu).

2. stupeň

Teplota topenia: 232 °C - hygroskopický biely prášok. CCM: rf: 0,39 (2-propanol/H₂O/NH₄OH: 7:3: 0,1) [a_D ²⁰] = + 8,2 (H₂O)

MH+ (zásada) = 347.

'H-NMR, 100 MHz, D₂O, ôppm:

4,15 (m, 3H, CH(NH₂)CO,CO₂-CH₂), 3,9 - 3,3 (m, 6H, CH₂OCH₂, CH₂NH), 3,1 - 2,9 (m, 6H, 3CH₂N), 2-1,4 (pevný, 6H, 3CH₂).

Príklad 5

Morfolinohexylester L-NNA / Γ\

-N = -N O

A = NO₂ E = O n = 6 V v_/

1. stupeň

Spôsobom ako je opísaný v príklade 1,1. stupeň, ale s použitím 6-morfolinohexanolu namiesto N-(B-hydroxyetyl)-morfolínu sa získa zodpovedajúca zlúčenina (4), ktorá sa prečistí rýchlou chromatografiou (CHCl₃/EtOH 90 : 10). Získa sa viskózny produkt.

Teplota topenia: 99 °C.

CCM: rf: 0,32 (CHClj/EtOH: 85 : 15) ‘H-NMR, 100 MHz, CDC1₃, TMS, Sppm:

7,7 (2H, NH₂), 5,4 (d, 1H, NNBoc), 4,25 (m, 3H, CHNHBoc, CO₂-CH₂) 3,6 - 3,3 (m, 7H, CH₂NH, CH₂OCH₂, NH), 2,4 (m, 6H, 3CH₂N), 1,8-1,3 (pevný, 23H, tBu + 6CH₂).

2. stupeň

Dihydrochlorid zlúčeniny I sa získa spôsobom ako je opísané v príklade 1,2. stupeň.

Teplota topenia: 214 °C - hygroskopická látka.

CCM: rf: 0,39 (2-propanol/H₂O/NH₄OH: 7:3: 0,1) MH+ = 389 (zásada) [a_D ²⁰] = + 6,67 (H₂O) 'H-NMR, 100 MHz, D₂O, 8ppm:

4,1 (m, 3H, CH(NH₂)CO, CO₂-CH₂), 4 - 3,3 (pevný, 6H, CH₂OCH₂, CHjNH). 2,1-1,9 (m, 6H, 3CH₂N), 1,8-1 (m, 12H, 6CH₂).

Príklad 6

Imidazoletylester L-NNA

L stupeň

Zodpovedajúca zlúčenina (4) sa získa spôsobom podľa postupu, ktorý je uvedený v príklade 1, L stupeň, ale s použitím 2-hydroxyetyl-3-imidazolu namiesto N-(B-hydroxyetylj-morfolínu. Zlúčenina sa prečistí chromatografiou na stĺpci silikagélu (CHCl₃/EtOH 9:1, potom 88 : 12).

Teplota topenia: 102 °C.

CCM: rf: 0,32 (CHCl₃/EtOH/NH₄OH: 85 : 15 : 0,1) ‘H-NMR, 100 MHz, CDC1₃, TMS, bppm:

(2H, NH₂), 7,6 (1H, NH) 7 (d, 2H, imidazol), 5,7 (d, 1H, NHBoc), 4,3 - 4,1 (m, 5H, CHNHBoc, CO₂CH₂, CH₂-imidazol) 3,3 (d, 2H, CH₂NH), 1,4 (m, 13H, tBu, 2CH₂).

2. stupeň

Požadovaná zlúčenina I sa získa vo forme dihydrochloridu spôsobom, ktorý je opísaný v príklade 1,2. stupeň.

Teplota topenia: 228 °C - hygroskopická žltá látka.

MH+ = 314 (zásada)

CCM: rf: 0,39 (2-propanol/H₂0/NH₄OH: 7 : 3 : 0,1) ‘H-NMR, 100 MHz, D₂O, Sppm:

7,3 (d, 2H,imidazol), 4,4 (m, 4H, CO₂CH₂ a CH₂-imidazol), 4 (t, 1H, CH(NH₂)CO), 3,1 (t, 2H, CH₂NH), 1,5 (m, 4H, 2CH₂).

Príklad 7

Morfolinoetylester L-arginínu
b⁴-N^ZA = H E = O n = 2 V	F~\ -N O
1. stupeň Postupom podľa opísaného spôsobu (príklad 1, L stu-

peň) sa získa zodpovedajúca zlúčenina (4) reakciou LN(Z)-N^G-nitroarginínu, napríklad zlúčeniny II, v ktorej skupina R³ predstavuje Z ochrannú skupinu, s N-(B-hydroxyetylj-morfolínom. Zlúčenina sa prečistí chromatografiou (CHCL/EtOH 9: 1, potom 88 : 11). Získa sa viskózny produkt.

Teplota topenia: 65 °C.

CCM: rf: 0,28 (CHCl₃/EtOH: 85 : 15) 'H-NMR, 100 MHz, CDC1₃, TMS, ôppm:

8,5 (1H, NH), 7,3 (2H, NH₂) 7,2 (s, 5H, φ), 5,7 (d, 1H, NHZ), 5 (s, 2H, φ), 4,2 (m, 3H, CHNHZ a CO₂CH₂) 3,6 (m, 6H, CH₂NH a CH₂OCH₂), 3,4 (1H, NH), 2,4 (m, 6H, 3CH₂N), 1,6 (m, 4H, 2CH₂).

2. stupeň

Zlúčenina (4) získaná v predchádzajúcom stupni sa rozpustí v etanole a podrobí sa hydrogenolýze, hydrogenolýza sa uskutoční v Parrovom prístroji v prítomnosti 10 % Pd/C a pri tlaku 50 psi a pri teplote prostredia. Vymiznutie prekurzora sa sleduje chromatografiou na tenkej vrstve a reakcia sa ukončí po štyroch hodinách. Po prefíltrovaní sa rozpúšťadlo odstráni pri teplote 40 °C. Viskózny zvyšok sa znovu rozpustí v minimálnom množstve etanolu. Pridá sa 1 N kyselina chlorovodíková v dietyléteri a v miešaní sa pokračuje počas troch hodín. Po častiach sa vytvorí zrazenina. Pevná látka sa dekantuje a premyje dvakrát so suchým éterom. Vysuší sa vo vákuu a lyofilizuje. Získa sa slabožltý produkt obsahujúci kyselinu chlorovodíkovú, ktorý je veľmi hygroskopický.

Teplota topenia: > 240 °C - rozklad MH+ = 288 (zásada) ’H-NMR, 100 MHz, D₂O, 5ppm:

4,4 (m, 2H, CO₂CH₂), 4,1 (t, 1H, CH(NH₂)CO), 3,7 (m, 4H, CH₂OCH,), 3,4 (m, 4H, CH₂N, NHCH₂), 3,1 (m, 4H, N(CH₂)₂), 1,6 (m, 4H, 2CH₂).

Príklad 8

Piperidinoetylester L-argininu

1. stupeň

Zodpovedajúca zlúčenina všeobecného vzorca (4) sa môže získať postupom podľa spôsobu z príkladu 7, 1. stupeň, ale s použitím N-(B-hydroxyetyl)piperidínu namiesto N-(fi-hydroxyetyl)morfolínu. Zlúčenina sa môže prečistiť rýchlou chromatografiou.

2. stupeň

Hydrochlorid zlúčeniny I sa môže získať podľa opísaného spôsobu (príklad 7,2. stupeň).

Príklad 9

N-Imidazoletylester L-arginínu

A=H E = O

1. stupeň

Zodpovedajúca zlúčenina všeobecného vzorca (4) sa môže získať postupom podľa spôsobu z príkladu 7, 1. stupeň, ale s použitím N-(B-hydroxyetyl)piperidínu namiesto N-(B-hydroxyetyl)morfolinu. Zlúčenina sa môže prečistiť rýchlou chromatografiou.

2. stupeň

Hydrochlorid zlúčeniny I sa môže získať podľa opísaného spôsobu (príklad 7, 2. stupeň).

Príklad 10

Morfolinoetylester L-N^G-metylarginínu (L-NMA)

A = CH₃ E = O n = 2

1. stupeň

Zodpovedajúca zlúčenina všeobecného vzorca (4) sa môže získať postupom podľa spôsobu z príkladu 1, 1. stupeň, reakciou L-N(Z)-N®-metylarginínu a N-(B-hydroxyetyl)morfolinu. Zlúčenina sa môže prečistiť chromatografiou na kolóne naplnenej oxidom kremíka.

2. stupeň

Hydrochlorid zlúčeniny I sa môže získať podľa spôsobu opísaného v príklade 7,2. stupeň.

Príklad 11

Morfolínoamid L-NNA

A = NO₂ E = kovalentná väzba

N

1. stupeň

Amid L-NBoc-N^G-nitroarginínu

Ekvimoláme množstvá L-N-Boc-N^G-nitroarginínu, morfolinu a 1-hydroxybenzotriazolu (HOBT) sa rozpustia v bezvodom DMF, zmes sa ochladí na teplotu 0 °C a pridá sa ekvivalentné množstvo DDC. Zmes sa udržiava pri teplote 0 °C počas 10 minút. Reakcia pokračuje počas 20 minút pri teplote 0 °C, potom pri teplote prostredia počas 6 hodín. Po zvyčajnom postupe sa rýchlou chromatografiou získa olej, ktorý kryštalizuje (eluent CHCl₃/MeOH: 95 : 5).

CCM: rf: 0,66 (CHCl₃/MeOH 8 : 2) IRnujol (cm^-1): τ_ΝΉ:3400 - 3300, t_Boc: 1700, T_amid: 1630. ’H-NMR, 100 MHz, CDC1₃, TSM óppm:

5,8 (1H, d, NHBoc), 3,7 (m, 1H, CHNHBoc), 3,5 (pevný, 4H, 2CH₂CO), 3,4 (m, 2H, NH-CH₂), 2,8 (m, 4H, CH₂-N-CH₂), 1,7 (m, 4H, CH₂CH₂), 1,4 (sing, 9H, tBu).

2. stupeň

Deprotekcia NH₂ funkcie

Produkt (4) získaný počas predchádzajúceho stupňa sa rozpustí v bezvodom dichlórmetáne a pridá sa 20 % kyseliny trifluóroctovej. Zmes sa mieša pri teplote prostredia a reakcia je sprevádzaná uvoľňovaním plynu. Rozpúšťadlo sa odstráni a zvyšok sa vytrepe vodou. Roztok sa nechá prejsť cez iónomeničovú živicu. Získa sa viskózny produkt, ktorý kryštalizuje po pridaní acetónu.

Teplota topenia: 246 °C

MH+ = 289

CCM: rf: 0,18 (CHCl₃/MeOH: 8 : 2) [a_D ^M] = + 17,2 (H₂O)

IR nujol (cm^-1): τ_Ν11:3400 - 3300, τ_;1ΓΤ1ι[1: 1630.

’H-NMR, 100 MHz, D₂O, ôppm:

3,8 (m, 1H, CII(NH₂)CO), 3,5 (m, 8H, morfolín), 3,1 (m, 2H, CH₂NH), 1,4 (m, 4H, CH₂CH₂).

Príklad 12

Soľ ibuprofénu a morfolinoetylesteru L-N^G-nitroarginínu x 10^_3M ibuprofénu sa rozpustí v 15 ml vody obsahujúcej 2 ekvivalenty hydroxidu sodného, tento roztok sa potom pomaly pridá k vodnému roztoku (7 ml) 2 x I0 ³ M morfolinoesteru L-NNA. Zmes sa zakalí, ďalej sa zahrieva za miešania pri teplote 60 °C počas 30 minút. Získa sa číry

SK 282664 Β6 roztok, ktorý sa po ochladení lyofilizuje za vzniku bieleho prášku.

Teplota topenia: > 260 °C - soľ rozpustná vo vode ‘H-NMR, 100 MHz, D₂O, óppm:

(4H, φ), 4,6 (m, 3H, CHNCO a CO₂CH₂), 3,7 - 3,4 (m, 6H, 2CH₂N), 3 - 2,9 (m, 4H, N(CH₂)₂), 2,3 (d, 2H, CH₂4), 1,7 (pevný, 5H, 2CH₂ a CH), 1,2 (d, 3H, CH₃), 0,7 (d, 6H, 2CH₃).

Ester soli z príkladu 1 s kyselinou salicylovou (príklad 13) a soľ toho istého esteru so sulindacom (príklad 14) sa získali tým istým spôsobom. Všetky tieto soli sú hygroskopické.

Príklad 15

Soľ kyseliny acetylsalicylovej a morfolinoamidu L-LNNA

Morfolinoamid L-NNA sa rozpustí v 30 ml vody. Za miešania sa pridá kyselina acetylsalicylová, ktorá sa pomaly rozpustí v reakčnej zmesi. Číry roztok sa potom lyofilizuje, čím sa získa biely prášok.

Teplota topenia: > 240 °C - soľ rozpustná vo vode

Soli z príkladu 11 s ďalšími karboxylovými kyselinami, ako kyselinou salicylovou, sulindacom alebo ibuprofénom, sa môžu získať tým istým spôsobom. Všetky tieto soli sú hygroskopické.

Biologická aktivita zlúčenín podľa tohto vynálezu je ilustrovaná v nasledujúcich testoch.

1. Meranie biologickej aktivity in vitro

1.1 Endotelová konštitutívna NO syntáza

Inhibičné vlastnosti konštitutívnej endotelovej NO syntázy produktov sa stanovili z ich schopností antagonizovať dependentnú endotelovú relaxáciu spôsobenú carbocholom na izolovanej aorte potkanov prekontraktovaných fenylefrínom (Auguet a kol., 1992).

Materiál a metódy

Torakálna aorta sa vybrala z tela samcov potkanov Spraque Dawley (290 až 350 g), ktoré boli usmrtené zlomením šije. Aorta sa umiestnila do glukózového Krebs Henseletovho média nasledovného zloženia:

(nm), NaCl: 118; KC1: 4,7; MgSO₄: 1,17; KH₂PO₄: : 1,18; CaCl₂: 2,5; NaHCO₃: 25; glukóza: 11. Toto médium sa udržiavalo pri teplote 37 °C a kontinuálne prebublávalo prúdom karbogénu (95 % O₂, 5 % CO₂).

Po odstránení nadbytku spojovacieho tkaniva a tuku sa cievy opatrne narezali na krúžky (2 mm široké) a zavesili pri napätí 2 g v 20 ml nádobe. Zaznamenávanie kontrakcií sa uskutočňovalo pomocou izometrických vzoriek pripojených k akvizičnému systému dát (IOS Dei-Lierre).

Prípravky a úprava

Po jednej hodine státia sa napätie artérie zvýšilo fenylefrínom (PE 1T⁶ M). Keď kontrakcie dosiahli maximum (10 minút), do nádoby sa pridal karbochol (10'⁵M) na stanovenie integrity endotelovej vrstvy. Preparáty sa potom premyli a po 45 minútach státia sa do kúpeľa znova pridal PE (10'⁶M) pri maximálnej kontrakcii, 10'⁵M karbocholu sa injektovalo, keď sa dosiahlo maximálne uvoľnenie. Testované prípravky sa zaviedli do kúpeľa v kumulatívnych dávkach.

Výsledky zo zosumarizované v nasledujúcej tabuľke 1:

Tabuľka 1

Prípravky	IC₅₀ (μ,Μ)
L-NHMA	12
L-NA	7
Aminoguanidín	> 100
Príklad 1	10
Príklad 2	30
Príklad 3	75
Príklad 4	10
Príklad 5	5
Príklad 6	80
Príklad 7	> IOO
Príklad 11	> 100
Príklad 12	5
Príklad 13	10
Príklad 14	9

1.2 Neurónová konštitutívna NO syntáza

Úvod

Meranie aktivity NO syntázy sa uskutočnilo podľa spôsobu, ktorý opísali Bredt a Snyder (1990).

Materiál a metódy

Mozoček potkanov Sprague Dawley (280 g Charles River) sa rýchlo extrahoval, vysušil pri teplote 4 °C a homogenizoval v extrakčnom objeme pufŕa zodpove-dajúceho 5 ml HEPES pufŕa na gram tkaniva s použitím Thomasovho zariadenia (10 kôl). Homogenáty sa potom centrifugovali (21 000 g počas 15 minút pri teplote 4 °C).

Plávajúca hmota sa odstránila a nechala sa prejsť cez kolónu 1 ml Dowex AG 50 WX-8 Na+ (forma BioRad), ktorá sa predtým vymyla destilovanou vodou a extrakčným pufŕom. Po prechode cez kolónu sa vzorky skladovali pri teplote 4 °C a rýchle sa pripravili na dávky.

Dávky sa pripravili v sklenených skúmavkách, do ktorých sa vnieslo 100 μΐ inkubačného pufŕa obsahujúceho 100 mM HEPES, pH 7,4 EDTA, 2,5 mM CaCl₂, 2 mM ditiotreitolu, 2 mM redukovaného NADPH, 10 pG/ml kalmodulínu a 10 μΜ tetrahydrobiopterínu. Pridalo sa 25 μΐ roztoku obsahujúceho 100 nM trítiovaného arginínu (označeného tritiom) (špecifická hustota: 56,4 Ci/mmol, Amersham) a 40 μΜ nerádioaktívneho arginínu. Reakcia sa iniciovala pridaním 50 μΐ homogenátu, konečný objem predstavoval 200 μΐ (chýbajúcich 25 μΐ je alebo voda, alebo testovaný produkt).

Po 30 minútach inkubácie pri teplote prostredia sa enzymatická reakcia zastavila pridaním 2 ml pufŕa (20 mM HEPES, pH 5,5, 2 mM EDTA). Vzorky sa nechali prejsť cez 1 ml kolóny Dowex AG 50 WX-8 živice. Na+ formy sa vymyli 2 ml destilovanej vody. Po pridaní 10 ml scintilačnej kvapaliny sa kvantitatívne stanovila rádioaktivita pomocou scintilačného spektrometra. Vzorky naslepo sa pripravili podľa rovnakého experimentálneho postupu, 50 μΐ vzorky sa nahradilo 50 μΐ extrakčného roztoku. Pre každý test sa stanovila celková rádioaktivita.

Výsledky sú vyjadrené v pmol citrulínu vytvoreného za minútu na mg proteínov. Koncentrácia proteínu bola v súlade s metódou Brandforda (1976) (tabuľka 2).

Tabuľka 2

Prípravky	IC₅₀ (μΜ)
L-NMMA	2,8
L-NA	0,6
Aninoguanidín	510
Príklad 1	2,3
Príklad 2	4
Príklad 3	10
Príklad 4	1,5
Príklad 5	2
Príklad 6	1,8
Príklad 7	> 10
Príklad 11	> 300
Príklad 12	0,36
Príklad 13	1
Príklad 14	0,7

1.3 Indukovaná NO syntáza

Makrofágy produkovali oxid dusný z indukovanej NO syntázy prozápalovou stimuláciou. Makrofágmi indukovaná NO syntáza sa pripravila z homogenátu J7744A] buniek myelomonocytov, ktoré boli vopred stimulované počas 48 hodín pomocou LPS (E. coli) pomocou IFNt .

Materiál a metódy

1. Bunky: kultivácia a indukcia NO syntázy

Bunky J7744A, (ATCC ref. TIB 67) sa kultivovali v DMEM pri 10% SVF pri teplote 37 °C pod atmosférou 5 % CO₂. Naočkovali sa v množstve 5 x 10³ buniek/cm² do 150 cm² baničiek. Inkubácia sa uskutočňovala v prítomnosti LPS (1 pg/ml) a IFN- xmurin (50 U/ml) v DMEM pri 10 % SVF počas 24 hodín.

2. Príprava čiastočne čistenej NO syntázy

Bunky sa premyli s PBS, potom sa umiestnili do skrapera buniek v 4 ml studenom pufre A (4 °C) (pufer A: : HEPES 50 mM 50 mM ditiotreitol 0,5 mM, adjustované na pH 4 s 1 N NaOH). Podľa postupu sa pridal: pepstatín A 1 mg/ml, leupeptín 1 mg/ml, inhibítor trypsínu zo sóje 1 mg/ml, antipaín 1 mg/ml, PMSF (Pefobloc) 10 mg/ml.

Po centrifugovaní (1000 g, 4 °C, 5 minút) sa centrifugované vrstvy zobrali a vložili opäť do 1 ml pufra A a potom sa spracovali pomocou zvukových vín pri teplote 4 °C a homogenát sa podrobil ultracentrifugovaniu (100 000, 4 °C, 60 minút). K vrstve materiálu plávajúcemu na povrchu sa pridal 10 % glycerol pred zmrazením pri teplote -80 °C, ktorý sa predtým frakcionoval. Prípravky sa testovali ešte ten istý deň, ale udržali si svoju aktivitu desať dní po skladovaní pri teplote -80 °C. Frakcia sa udržiavala na dávkovanie proteínov pomocou Brandfordovej mikrometódy.

3. Enzymatický test

Test pozostával z transformácie NO syntázy L-arginínu na L-citrulín.

a) Konverzia L-arginínu na L-citrulín

Reagujúci pufer B pufra: HEPES 100 mM, ditiotreitol 1 mM adjustovaný na pH 7,4 s 1 N NaOH. Tento roztok sa udržiaval počas niekoľkých dní pri teplote 4 °C. Podľa postupu sa pridali kofaktory NO syntázy: 10 μΜ tetrahydrobiopterín, 10 μΜ FAD, 2 mM NADPH, 2,5 mM CaCl₂, 1 mg/ml BSA (na rozpustenie enzýmu).

Roztok L-arginínu:

L-arginín do výslednej koncentrácie 40 μΜ. Na pokračovanie reakcie sa pripravil roztok izotopu pridaním (³H)-L-arginínu k roztoku do výslednej koncentrácie 100 nM.

Príprava enzýmu:

Podľa opísaného testu, ktorý znázorňuje enzymatickú aktivitu, sa roztok použil čistý alebo rádovo 1/10.

Inhibítor:

Tento sa pripravil v B pufre z koncentrovaného roztoku vo vodnom médiu alebo v DMSO a testoval sa v porovnaní s kontrolou bez inhibítora. DMSO kontrola sa pridala, kde to bolo použiteľné.

Objem (μΐ) použitý v teste

V2orka	Celkový B pufer	RO2tok arginínu	Príprava enzýmu	Celkový A pufer
naslepo	125	25	-	50
kontrola	125	25	50	-
inhibítor	125	25	50	-

Inkubácia sa uskutočnila v dvojitom ohrievači pri teplote 37 °C počas 15 minút.

Zastavenie reakcie:

Reakcia sa zastavila pridaním 2 ml pufra C: 20 mM HEPES, 2 nM EDTA, pH 5,5 adjustované s 1 N HC1.

Oddelenie L-arginínu a L-citrulínu:

Toto sa uskutočnilo na 0,5 ml Dowex 50X-8 (iónomeničová živica), ktorá sa vopred priviedla do rovnováhy v pufre C v 2 ml injekčných striekačkách zastavených sklenenou guľôčkou, ktorá týmto umožnila prejsť len kvapaline.

50X-8 zadržal L-arginín. Zhromaždená vzorka sa skladovala a zvyšok sa eluoval z citrulínu pomocou 2 ml destilovanej vody.

K 4 ml vodného média sa pridalo 16 ml Instagélu Plus a scintilačné banky sa podrobili Packardovej skúške.

Výpočet:

Pre každú hodnotu sa vykonal nasledujúci výpočet [cpm(vzorka)-cpm(vz.naslepo)]/[cpm(kontrola)-cpm(vz.naslepo)]

Regresná priamka sa potom vyniesla do grafu na obr. P 6C a stanovilo sa IC₅₀ produktov. IC₅₀ je priemerom z dvoch pokusov, uskutočnených na rozdielnych enzymatických prípravkoch. Výsledky sú uvedené v tabuľke 3.

Tabuľka 3

Prípravky IC₅₀ (μΜ)

L-NMMA	20,8
L-NA
Aminoguanidín	29,6
Príklad 1	29
Príklad 2	53
Príklad 3	30
Príklad 4	110
Príklad 5	380
Príklad 6	15
Príklad 7	22
Príklad 11	>300
Príklad 12	40
Príklad 13	28
Príklad 14	38

2. Meranie biologickej aktivity in vivo

Karagenámy edém

Princíp

Sub-plantáma injekcia suspenzie karagénu, mukopolysacharidov extrahovaných z rias, vyvoláva lokálnu zápalovú reakciu. Protizápalové zlúčeniny sú schopné antagonizovať tento edém rôznym spôsobom, podľa ich pôsobenia (Winter a kol., 1962). Inhibítory NO syntázy mali určitý vplyvná tento test (Antunes a kol., 1991).

Materiál a metódy

Použili sa samce 8 potkanov Spraque Dawley VAF (Charles River, St. Aubin les Elbeuf) s hmotnosťou 140 až 215 g, ktoré sa nechali hladovať počas 18 hodín (n = 8).

Edém sa dosiahol injekciou do vankúšika chodidla jednej zo zadných labiek, suspenzie karagénu v 1 % fyziologickom sére v dávke 0,1 ml na zviera.

Objem labky sa meral pletysmografiou pred aplikáciou, po 1,5 hodine a tri hodiny po injekcii karagénu. Percento zápalu labky sa vypočítalo pre každé zviera a každý meraný čas (vodný pletysmometer - Ugo Basile).

Výsledky

Výsledky sú uvedené v tabuľke 4 (NS = nesingifikantné, * = signifikantné, ** = veľmi signifikantné, *♦* = vysoko signifikantné).

Tabuľka 4

v ktorom X predstavuje atóm kyslíka, atóm síry alebo atóm dusíka, iminoskupinu, alkyliminoskupinu alebo metylénovú skupinu, s výnimkou zlúčenín všeobecného vzorca (I), v ktorom n sa rovná 0, E predstavuje kovalentnú väzbu a/alebo A predstavuje atóm vodíka a R¹ a R² znamenajú nezávisle od seba C_rC₆ alkylovú skupinu, alebo spoločne tvoria piperidínový, morfolínový alebo imidazolový kruh, alebo A predstavuje nitroskupinu a R¹ a R² tvoria piperidínový kruh, a ich farmaceutický prijateľné soli.

2. Deriváty podľa nároku 1, vyznačujúce sa t ý m , že n je celé číslo od 1 do 12.

3. Deriváty podľa nároku 2, vyznačujúce sa t ý m , že E predstavuje atóm kyslíka, A predstavuje nitroskupinu alebo atóm vodíka a R¹ a R² tvoria morfolínový, piperidínový alebo imidazolový kruh.

4. Derivát podľa nároku 1, vyznačujúci sa t ý m , že n sa rovná 0, E predstavuje kovalentnú väzbu, A znamená nitroskupinu a R¹ a R² tvoria morfolínový kruh.

5. Spôsob prípravy zlúčenín podľa ktoréhokoľvek z nárokov laž 4, vyznačujúci sa tým, že sa nechá reagovať zlúčenina všeobecného vzorca (II)

OH (II)

Prípravky	Dávka	Zníženie vzplanutia %
90 min,	180 nin,
L-NA	15	- 60,2**	- 52,8**
L-NMMA	15	- 30,5*	- 12,9 NS
Aminoguanidín	15	- 9 NS	- 13 NS
Príklad 1	15	- 62,5**	- 55,7**
Príklad 2	15	- 58,3**	- 56,3**
Príklad 3	15	- 48,7**	- 61,2**
Príklad 5	15	- 75,2**	- 4?**
Príklad 11	15	+ 3 NS	- 18 NS
Príklad 12	15	- 85,9**	- 85***

v ktorej A predstavuje C^Cq alkyl alebo nitroskupinu a R³predstavuje ochrannú skupinu, so zlúčeninou všeobecného vzorca (III)

H-E-(CH₂)_n-NR‘R² (III), v ktorom n, E, R¹ a R² sú definované, v prítomnosti spojovacieho činidla, pri teplote v rozsahu medzi 0 a 30 °C, potom odštiepenie ochrannej skupiny R³ z takto získanej zlúčeniny všeobecného vzorca (IV)

Vx z t C—E—(CHjJn-N

NHR³

Claims

1. Deriváty L-arginínu všeobecného vzorca (I) (D v ktorom

A predstavuje atóm vodíka, C_rC₆ alkylovú skupinu alebo nitroskupinu,

E znamená atóm kyslíka alebo kovalentnú väzbu, n sa rovná 0 alebo znamená celé číslo od 1 do 12, a/alebo R¹ a R² predstavujú nezávisle od seba rozvetvený alebo lineárny C_rC₆ alkylový reťazec, alebo R¹ a R² tvoria spoločne s atómom dusíka, ku ktorému sú viazané, 5- alebo 6-členný kruh, nasýtený alebo nenasýtený, vzorca: za získania zlúčeniny všeobecného vzorca (I), v ktorom A predstavuje nitroskupinu alebo C_rC_s alkylovú skupinu, a ak sa požaduje zlúčenina všeobecného vzorca (I), v ktorom A predstavuje atóm vodíka, deprotekcia zodpovedajúcej zlúčeniny všeobecného vzorca (I), v ktorom A predstavuje NO₂ skupinu, odštiepením nitroskupiny.

6. Spôsob podľa nároku 5, vyznačujúci sa tým, že spojovacím činidlom je Ν,Ν'-dicyklohexylkarbodiimid (DCC), benzotriazol-l-yl-oxytris(dimetylamino)fosfónium hexafluórfosfát (BOP) alebo benzotriazol-1-yl-oxy-trispyrolidinofosfóniumhexafluórfosfát (PyBOP).

7. Spôsob podľa ktoréhokoľvek z nárokov 5 alebo 6, vyznačujúci sa tým, že ako prísada spojovacieho činidla sa použije 1-hydroxybenzotriazol (HOBt) alebo 4-dimetylaminopyridín (DMAP).

8. Spôsob podľa ktoréhokoľvek z nárokov 5 až 7, vyznačujúci sa tým, že R³ ochrannou skupinou je benzyloxykarbonyl (Z) a terc.-butoxykarbonyl (Boe).

9. Spôsob podľa ktoréhokoľvek z nárokov 5 až 8, na prípravu zlúčenín všeobecného vzorca (I), v ktorom A predstavuje atóm vodíka, vyznačujúci sa t ý m , že skupina R³ a nitroskupina sa odštiepujú súčasne.

10. Farmaceutická kompozícia, vyznačujúca sa t ý m , že ako účinnú zložku obsahuje najmenej jednu zlúčeninu podľa nárokov 1 až 4 spolu s najmenej jedným farmaceutický prijateľným spojivom alebo riediacim činidlom.

11. Farmaceutická kompozícia, vyznačujúca sa t ý m , že ako účinnú zložku obsahuje najmenej jednu zlúčeninu všeobecného vzorca (I_A) liečenie patologickej dysfunkcie močových ciest a gastrointestinálneho systému, zápalového alebo nezápalového typu.

14. Použitie derivátov L-arginínu všeobecného vzorca (I_B) ako sú definované v nároku 12, na prípravu liečiva na liečenie ochorení spojených s bronchopulmonámym alebo kardiovaskulárnym systémom.

Koniec dokumentu v ktorom

A predstavuje atóm vodíka, C_rC₆ alkylovú skupinu alebo nitroskupinu,

E znamená atóm kyslíka alebo kovalentnú väzbu, n sa rovná 0 alebo znamená celé číslo od 1 do 12, a/alebo R¹ a R² predstavujú nezávisle od seba rozvetvený alebo lineárny C_rC{ alkylový reťazec, alebo R¹ a R² tvoria spoločne s atómom dusíka, ku ktorému sú viazané, 5- alebo 6-členný kruh, nasýtený alebo nenasýtený, vzorca

-N X v ktorom X predstavuje atóm kyslíka, atóm síry alebo atóm dusíka, iminoskupinu, alkyliminoskupinu alebo metylénovú skupinu, s výnimkou zlúčenín všeobecného vzorca (I), v ktorom n sa rovná 0, E predstavuje kovalentnú väzbu, a/alebo A predstavuje atóm vodíka a R¹ a R² znamenajú nezávisle od seba CrC₆ alkylovú skupinu, alebo soľ týchto zlúčenín, spolu s najmenej jedným rozpúšťadlom alebo farmaceutický prijateľným spojivom.

12. Použitie derivátov L-arginínu všeobecného vzorca (Ib) v ktorom

A predstavuje atóm vodíka, Cj-C₆ alkylovú skupinu alebo nitroskupinu,

E znamená atóm kyslíka alebo kovalentnú väzbu, n sa rovná 0 alebo znamená celé číslo od 1 do 12, a/alebo R¹ a R² predstavujú nezávisle od seba rozvetvený a/alebo lineárny C'-C,₅ alkylový reťazec, alebo R¹ a R² tvoria spoločne s atómom dusíka, ku ktorému sú viazané, 5- alebo 6-členný kruh, nasýtený alebo nenasýtený, vzorca v ktorom X predstavuje atóm kyslíka, atóm síry alebo atóm dusíka, metylénovú skupinu, alkyliminoskupinu alebo iminoskupinu, alebo soľ týchto derivátov, na prípravu liečiva na liečenie patologických stavov centrálneho a periférneho nervového systému.

13. Použitie derivátov L-arginínu všeobecného vzorca (I_B) ako sú definované v nároku 12, na prípravu liečiva na