SK22006A3 - Kmeň Streptomyces toxytricini produkujúci lipstatín a príprava lipstatínu s uvedeným kmeňom - Google Patents

Kmeň Streptomyces toxytricini produkujúci lipstatín a príprava lipstatínu s uvedeným kmeňom Download PDF

Info

Publication number
SK22006A3
SK22006A3 SK2-2006A SK22006A SK22006A3 SK 22006 A3 SK22006 A3 SK 22006A3 SK 22006 A SK22006 A SK 22006A SK 22006 A3 SK22006 A3 SK 22006A3
Authority
SK
Slovakia
Prior art keywords
strain
lipstatin
production
cultivation
leucine
Prior art date
Application number
SK2-2006A
Other languages
English (en)
Inventor
Ivan Varga
Blanka Gondová
Jana Gajdošíková
Ľudmila Kováčová
Original Assignee
Biotika, A. S.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Biotika, A. S. filed Critical Biotika, A. S.
Priority to SK2-2006A priority Critical patent/SK22006A3/sk
Priority to PCT/SK2006/050008 priority patent/WO2007078263A2/en
Publication of SK22006A3 publication Critical patent/SK22006A3/sk

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
    • C12P17/02—Oxygen as only ring hetero atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/465—Streptomyces

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Description

Oblasť techniky
Vynález sa týka kmeňa Streptomyces toxytricini uloženého v Českej zbierke mikroorganizmov v Brne pod číslom CCM 7349, a biotechnologickej prípravy lipstatínu s uvedeným kmeňom v množstve 3,0 až 3,2 g/kg fermentačnej pôdy za 180 až 230 hodín kultivácie v produkčnej pôde pri 28°C.
Doterajší stav techniky
Kmeň Streptomyces toxytricini CCM 7349 je za aeróbnych kultivačných podmienok producentom lipstatínu. Základnou stavebnou jednotkou lipstatínu je β-laktámový kruh nesúci dva alifatické zvyšky dlhých mastných kyselín so 6 - 14 atómami uhlíka. Jeden z postranných reťazcov obsahuje dve dvojité väzby a jednu hydroxy skupinu, ktorá je esterifikovaná ako N-formyl-leucín. Katalytickou hydrogenáciou lipstatínu je možné získať tetrahydrolipstatín (orlistat).
Mikroorganizmus Streptomyces toxytricini je schopný utilizovať tuky alebo mastné kyseliny až na acetyl - CoA. Ak v priebehu fermentácie prebieha biosyntéza lipstatínu, dochádza ku kondenzácii C14 a C8 mastných kyselín vznikajúcich z tukov alebo mastných kyselín s dlhým reťazcom. Kys.linolová obsahuje rovnaký počet dvojitých väzieb ako reťazec lipstatínu a je základnou stavebnou jednotkou lipstatínu. Claisenovou kondenzáciou 3-hydroxy-5,8-tetradekadienoyl-CoA a oktanoyl-CoA, vzniká základný medziprodukt ester kyseliny 5-hydroxy-2-hexyl-3-oxo-7,10-hexadekadiénovej. V ďalšom kroku nastáva katalytická hydrogenácia esterovej skupiny, po ktorej nasleduje formácia β-laktámového kruhu. K esterifikácii postranného reťazca dochádza v prítomnosti leucínu.
Orlistat (tetrahydrolipstatín) s molekulovou hmotnosťou 495,74 g/mol, je aktívna látka na redukciu telesnej hmotnosti. Pôsobí na mieste štiepenia tukov, tj. v žalúdku a tenkom čreve. Svojim účinkom blokuje pankreatický enzým zvaný lipáza, čím bráni absorpcii tukov z potravy až do jednej tretiny. Tento fenomén sa využíva pri liečbe obezity, a môže slúžiť aj ako prevencia voči hyperlipémii a artérioskleróze. Taxonómiu bakteriálnychjcrneňov Streptomyces species popisuje International Streptomyces Project v Journal of Fermentation Technology Vol2, p.52, 1974. Kmeň Streptomyces toxytricini Preobrazhenskaya & Sveshnikova je popísaný v Bergey's Manual of Determinative Bacteriology, 8th Edition, page 811.
U.S.Patent 4,598,089 a Eur.Pat.Appl. 129748 popisuje spôsob prípravy lipstatínu a orlistatu biotechnologickou cestou so špecifickým kmeňom Streptomyces toxytricini NRRL 15443. Tento patent popisuje prípravu dvojstupňového vegetatívneho inokula potrebného pre očkovanie produkčného stupňa.
Produkčné médium ako hlavné uhlíkaté zdroje obsahuje zmes zemiakového škrobu, glukózy, ribózy, a glycerínu. Ako zdroj dusíka uvádza peptón, sójovú múku a síran amónny. Počas kultivácie produkčného stupňa sa udržiava kultivačná teplota 28°C, vzdušnenie 1 vvm a miešanie 150 rpm. U.S.Patent pod publikačným číslom (JS2002/0110873 A1 uvádza produkciu lipstatínu za podmienok popísaných v patente U.S. 4,598,089 a s použitím kmeňa Streptomyces toxytricini NRRL 15443 produkciu lipstatínu 9106 mg/l za 184 hodín kultivácie.
Weibel et al. popisuje fermentačný proces lipstatínu ( Journal of Antibiotics Vol XL,No.8 pp.1086 1091) a E.Hochuli popisuje chemickú štruktúru lipstatínu ( Journal of Antibiotics Vol XL,No.8 pp.1081 1085).
EP 0 803 567 A2 popisuje fermentačný proces prípravy lipstatínu za pomoci prekurzorov, ktorými sú kyselina linolová, kyselina kaprylová a N-formyl-L-leucín alebo L-Leucín. Výťažnosť fermentácie je nízka pretože obe kyseliny sú toxické. V porovnaní s ním U.S.Patent 6,844,174 vo fermentačnom procese využíva produkčné médium obsahujúce voľné mastné kyseliny a oleje zo skupiny prírodných olejov, syntetických olejov alebo ich zmes. Výsledkom je uvoľňovanie mastných kyselín z olejov počas fermentačného procesu v závislosti od pH produčného média a vysoká zvyšková koncentrácia rezíduí oleja na konci fermentácie. Nadväzujúcim problémom je otázka emulzifikácie produkčného média vhodnými emulzifikátormi ako napr. Lecitín, Triton X-100, Brij 35 S. Nevýhodou je, že zvyšovaním množstva emulzifikátora sa zvyšuje viskozita produkčného média a zhoršuje sa prestup kyslíka do fermentačného média, čo má negatívny vplyv na produkciu lipstatínu.
Patent pod publikačným číslom WO 03/048335 popisuje fermentáciu lipstatínu baničkovou kultiváciou v produkčnom médiu obsahujúcom sójovú a bavlnníkovú múku, glycerín ako uhlíkatý substrát, poíypropyléngíykol ako odpeňovač a emulzifikátor lecitín. Fermentácia trvá v rozahu 6 až 7 dní s maximálnou produkciou 1,700 až 1,800 mg/l. V polprevádzkovom meradle 4 litrov fermentačného média dosahujú produkcie lipstatínu s rovnakou technológiou 1,500 až 1,600 mg/l po 144 až 168 hodinách kultivácie.
Pod publikačným patentovým číslom WO 2004/003212 A1 je popísaná príprava lipstatínu na rôznych škrobových substrátoch s maximálnou produkciou lipstatínu 1486 mg/ kg substrátu.
Podstata vynálezu
Vynález sa týka kmeňa mikroorganizmu Streptomyces toxytrícini CCM 7349 a biotechnologickej prípravy lipstatínu bez použitia emulgátora v produkčnej pôde, a s použitím prekurzorov, ktorými sú kyselina linolová a L-Leucín. Kmeň Streptomyces toxytrícini CCM 7349 produkuje lipstatín v koncentrácii 3,0 až 3,2 g/kg fermentačnej pôdy za 180 až 230 hodín kultivácie v produkčnom médiu pri 28°C za použitia dvojstupňového inokula.
Kultivácia kmeňa Streptomyces toxytrícini CCM 7349, využívaná pri fermentačnom procese, ktorého sa patent týka prebieha v štyroch krokoch:
1. Sporulácia kultúry
2. I. inokulačný stupeň
3. II. inokulačný stupeň
4. Produkčný stupeň
Sporulácia kultúry
Pre kvalitu inokula je dôležitá dobrá sporulácia (v priebehu 5 až 10 dní pri 28°C je kultúra vysporulovaná, kolónie sú okrúhle mierne vypuklé až zvrásnené, vzdušné mycelium je hnedoružovej farby s bielou zónou na okraji kolónie s veľkosťou kolónií cca 5 až 10 mm). Na sporuláciu kultúry sa používa sporulačná pôda s nasledovným zložením: dextrin 4g/l, kvasničný extrakt 4g/l, mált extrakt 10 g/l, CaCO3 2 g/l, agar 20 g/l a destilovaná voda do 1000 ml
I. inokulačný stupeň
Kultivácia vegetatívneho inokula I. inokulačného stupňa prebieha pri 28°C 24 hodín. Kvalitné inokulum sa vyznačuje nasledovnými vlastnosťami:
- pelety malé, rozvláknené
- sediment biomasy 14 až 16%
Inokulačné médium I.stupňa obsahuje len jeden zdroj uhlíkatého substrátu s nasledovným zložením: sójová múka 10 g/l, glycerín 10 g/l, kvasničný extrakt 5 g/l, pitná voda do 1000 ml.
II. inokulačný stupeň
Kultivácia vegetatívneho inokula II. inokulačného stupňa prebieha pri 28°C 12 až 16 hodín. Kvalitné inokulum sa vyznačuje nasledovnými vlastnosťami:
- pelety veľké, rozvláknené
- sediment biomasy 20 až 26%
Inokulačné médium II.stupňa obsahuje len jeden zdroj uhlíkatého substrátu s nasledovným zložením: sójová múka 30 g/l, kvasničný extrakt 5g/l, glycerín 20 g/l, (NH4)2SO4 2 g/l, CaCO3 6 g/l, odpeňovač Slovaník 1 g/l.
Produkčný stupeň
a.) V laboratórnom meradle sa na testovanie a výber produkčné najlepších izolátov produkčného mikroorganizmu Streptomyces toxytrícini CCM 7349 používa produkčné médium nasledovného zloženia: sójová múka 48 g/l, glycerín 30 g/l, CaCO3 5g/l, kvasničný extrakt 1 g/l, metylester sójového oleja 40 g/l, L-Leucín 5 g/l, MgSO4.7H2O 0,05 g/l, pitná voda do 1000 ml.
Produkčné médium obsahuje ako prekurzor lipstatínu netoxický metylester sójového oleja oproti kyseline linolovej, ktorej koncentrácia nad 1 g/l pôsobí toxicky na produkčný mikroorganizmus. Kultivácia priebeha pri kultivačnej teplote 28°C pri 250 rpm 72 hodín s produkciou lipstatínu 0,3 až 0,45 g/kg.
b.) Pre poloprevádzkovú prípravu lipstatínu s produkčným mikroorganizmom Streptomyces toxytricini CCM 7349 sa používa produkčné médium nasledovného zloženia: sójová múka 48 g/l, glycerín 50 g/l, kvasničný extrakt 1 g/l, CaCO3 5 g/l, KH2PO4 0,1 g/l, MgSO4.7H2O 0,3 g/l, FeSO4.7H2O 0,03 g/l, MnSO4.4H2O 0,04 g/l, ZnSO4.7H2O 0,005g/l, sójový olej 40 g/l, odpeňovač Slovanik 1 g/l.
Kultivácia priebeha za použitia dvojstupňového vegetatívneho inokula pri kultivačnej teplote 28°C hodín s produkciou listatinu 3,0 až 3,2 g/kg za 180 až 230 hodín. Hodnota pH počas kultivácie je udržiavaná v rozsahu od 6 do 8, optimálna hodnota pH od 6,7 do 7,3 s roztokom 28% roztoku hydroxidu sodného alebo 20% roztoku kyseliny sírovej.
Pri syntéze lipstatínu sa využíva ako prekurzor kyselina linolová s udržiavacou koncentráciou 0,2 až 1 g/l fermentačnej pôdy spolu s 8% roztoku L-Leucínu s pH 11. Začiatok dávkovania kyseliny linolovej a LLeucínu je na konci rastovej fázy v 34.hodine kultivácie, ktorá sa vyznačuje utilizáciou počiatočného uhlikatého zdroja sprevádzanou zvýšenou koncentráciou rozpustného kyslíka vo fermentačnej pôde. Kyselina linolová a L-Leucín sa dávkujú kontinuálne v pomere 1:0,8.
Celkové množstvo pridaného L-Leucinu počas kultivácie bolo 3265 g na objem fermentačnej pôdy 40 I. Produkčné médium ako zdroj uhlikatého substrátu využíva glycerín a sójový olej, ako zdroj organického dusíka a fosforu využíva sójovú múku a kvasničný extrakt. Výhodou kultivácie je, že do produkčného média nie je potrebné pridávať emulgátory ako je uvádzané v patente U.S.Patent 6,844,174 na zabezpečenie dostatočnej viskozity. V poloprevádzkovom meradle produkčný stupeň s objemom 40 litrov produkčného média, kultivácia prebieha v 10 krát väčšom objeme ako uvádza patent WO 03/048335 s prenosovými charakteristikami vzdušnenia nad 1vvm a miešania nad 450 rpm, udržiavacou koncentráciou rozpustného kyslíka vo fermentačnej pôde nie nižšou ako 30%. Uvedené parametre sú reálne dosiahnuteľné vo veľkoobjemovom meradle.
Výhodou kultivácie s kmeňom Streptomyces toxytricini CCM 7349 je, že vylúčením emulzifikátora zo základného zloženia produkčného média sa zlepšuje prestup kyslíka k bunkám producenta.
Popis kmeňa: Kmeň Streptomyces toxytricini CCM 7349
Morfológia: - substrátové mycélium kmeňa Streptomyces toxytricini CCM 7349 na sporulačnej pôde je tmavohnedej farby, vzdušné mycélium hnedoružovej farby. Jednotlivé kolónie kmeňa Streptomyces toxytricini sú okrúhle, mierne vypuklé až zvrásnené, hnedoružovej farby s bielou zónou na okraji kolónie, s priemerom 5 až 10 mm.
Optimálne pH kultivácie: od 6 do 8
Utilizácia uhlíkatého substrátu: dobre utilizuje glycerín, glukózu, dextrin, slabšie utilizuje sacharózu, laktózu
Optimálna teplota kultivácie: 28 ± 1°C
Prekurzory: Kyselina linolová, L-Leucin, metylester sójového oleja
Príklady uskutočnenia vynálezu:
Príklad.č.1
a) Príprava sporového materiálu
Sporová suspenzia kmeňa Streptomyces toxytridni sa nanesie na sporulačnú pôdu nasledovného zloženia: dextrin 4g/l, kvasničný extrakt 4g/l, mált extrakt 10 g/l, CaCO3 2 g/l, agar 20 g/l a destilovaná voda do 1000 ml. Kmeň sa kultivuje pri 28°C, 5 až 10 dní.
b) inokulačný stupeň
Spóry kmeňa Streptomyces toxytridni sa použijú na očkovanie 100 ml inokulačnej pôdy v 500 ml Erlenmayerových bankách. Zloženie inokulačnej pôdy je nasledovné: sójová múka 10 g/l, glycerín 10 g/l, kvasničný extrakt 5 g/l, pitná voda do 1000 ml. Po sterilizácii 30 minút pri 120 °C je optimálne pH 6,8 až 7,2. Inokulum sa kultivuje pri 28°C 24 až 26 hodín. Pripravené vegetatívne inokulum sa použije na očkovanie produkčného stupňa.
c) produkčný stupeň
Vegetatívne inokulum pripravené v Erlenmayerových bankách sa preočkuje v množstve 1% až 5% do 60 ml produkčného média v Erlenmayerových bankách nasledovného zloženia: sójová múka 48 g/l, glycerín 30 g/l, CaCO3 5g/l, kvasničný extrakt 1 g/l, metylester sójového oleja 40 g/l, L-Leucín 5 g/l, MgSO4.7H2O 0,05 g/l a pitná voda do 1000 ml. Produkčné médium sa sterilizuje 30 minút pri 120°C. Optimálne pH je 6,8 až 7,4. Po 72 hodinách kultivácie na rotačnom trepacom stroji pri 28°C a otáčkach 180 až 250 rpm sa Stanovi obsah lipstatínu metódou HPLC, ktorého koncentrácia dosahuje hodnoty 0,3 g/kg až 0,45 g/kg.
Príklad.č.2
a) Príprava sporového materiálu
Sporová suspenzia kmeňa Streptomyces toxytridni sa nanesie na sporulačnú pôdu nasledovného zloženia: dextrin 4g/l, kvasničný extrakt 4g/l, mált extrakt 10 g/l, CaCO3 2 g/l, agar 20 g/l a destilovaná voda do 1000 ml. Kmeň sa kultivuje pri 28°C, 5 až 10 dní.
b) inokulačný stupeň
Spóry kmeňa Streptomyces toxytridni sa použijú na očkovanie 100 ml inokulačnej pôdy v 500 ml Erlenmayerových bankách. Zloženie inokulačnej pôdy je nasledovné: sójová múka 10 g/l, glycerín 10 g/l, kvasničný extrakt 5 g/l, pitná voda do 1000 ml. Po sterilizácii 30 minút pri 120 °C je optimálne pH 6,9 až
7,5. Inokulum sa kultivuje pri 28°C 24 až 26 hodín. Pripravené vegetatívne inokulum sa použije na očkovanie produkčného stupňa.
c) produkčný stupeň
Vegetatívne inokulum pripravené v Erlenmayerových bankách sa preočkuje v množstve 1% až 5% do produkčného stupňa v 70 I fermentačnom tančíku s objemom 40 I produkčnej pôdy nasledovného zloženia: sójová múka 48 g/l, glycerín 50 g/l, kvasničný extrakt 1 g/l, CaCO3 5 g/l, KH2PO4 0,1 g/l, MgSO4.7H2O 0,3 g/l, FeSO4.7H2O 0,03 g/l, MnSO4.4H2O 0,04 g/l, ZnSO4.7H2O 0,005g/l, sójový olej 40 g/l, odpeňovač Siovanik 1g/l. V priebehu kultivácie sa udržiavajú optimálne kultivačné podmienky. Koncentrácia nasýteného kyslíka v pôde sa udržiava nad 30% nasýtenia, za vzdušnenia 1 až 1,25 wm, miešania nad 450 rpm a teploty 28°C. Optimálne pH v priebehu kultivácie sa udržiava na hodnotách od 6,8 do 7,2 s 20% -ným roztokom NaOH alebo 28% - ným roztokom H2SO4. Kyselina linolová a L-Leucín sa začínajú dávkovať od 34.h.k. v pomere 1 :0,8. V priebehu kultivácie sa udržiava optimálna koncentrácia kyseliny linolovej na hodnotách od 0,2 do 1,0 g/l dávkovaním kyseliny linolovej. V priebehu kultivácie sa dávkuje do produkčného média 8% roztok L-Leucínu s pH 11. Priemerná hodinová dávka roztoku L-Leucínu je 17, priemerná hodinová dávka kyseliny linolovej je 21 g na pracovný objem. Kultivácia je ukončená, keď nedochádza k poklesu koncentrácie kyseliny linolovej pod 0,2 g/l. Za 180 až 200 hodín kultivácie je koncentrácia lipstatínu vo fermentačnej pôde na úrovni 1,8 až 2,3 g/kg.
Príklad.č.3
a) Príprava sporového materiálu
Sporová suspenzia kmeňa Streptomyces toxytrícini sa nanesie na sporulačnú pôdu nasledovného zloženia: dextrin 4g/l, kvasničný extrakt 4g/l, mált extrakt 10 g/l, CaCO3 2 g/l, agar 20 g/l a destilovaná voda do 1000 ml. Kmeň sa kultivuje pri 28°C, 5 až 10 dní.
b) inokulačný stupeň I.
Spóry kmeňa Streptomyces toxytrícini sa použijú na očkovanie 100 ml inokulačnej pôdy v 500 ml Erlenmayerových bankách. Zloženie inokulačnej pôdy je nasledovné: sójová múka 10 g/l, glycerín 10 g/l, kvasničný extrakt 5 g/l, pitná voda do 1000 ml. Po sterilizácii 30 minút pri 120 °C je optimálne pH 6,9 až
7,5. Inokulum sa kultivuje pri 28°C 24 až 26 hodín. Pripravené vegetatívne inokulum sa použije na očkovanie produkčného stupňa.
c) inokulačný stupeň II.
Vegetatívne inokulum z inokulačného stupňa I. sa preočkuje v množstve 1% až 3% do 12 I inokulačnej pôdy v 30 I fermentore. Zloženie inokulačnej pôdy je nasledovné: sójová múka 30 g/l, kvasničný extrakt 5g/l, glycerín 20 g/l, (NH4)2SO4 2 g/l, CaCO3 6 g/l, odpeňovač Siovanik 1 g/l. Kultivácia prebieha za optimálnych podmienok , teplota 28°C, vzdušnenie 0,5 až 1 wm, miešanie 350 rpm, a koncentrácia nasýteného kyslíka v pôde nad 60% nasýtenia. Inokulum sa kultivuje pri 28°C za definovaných podmienok 12 až 16 hodín.
d) produkčný stupeň
Vegetatívne inokulum II. sa preočkuje do produkčnej pôdy ako je uvedené v príklade č.2, c).
Za 180 až 230 hodín kultivácie je koncentrácia lipstatínu vo fermentačnej pôde na úrovni 3,0 - 3,2 g/kg.
Priemyselná využiteľnosť:
Kmeň mikroorganizmu Streptomyces toxytricini CCM 7349, ktorý je predmetom vynálezu, je možné využívať na biotechnologickú prípravu farmaceutický aktívnej látky lipstatin, ktorej hydrogenáciou v procese izolácie dochádza k premene na orlistat (tetrahydrolipstatín), ktorý sa úspešne využíva pri liečbe obezity, kardiovaskulárnych ochorení, znižovania vysokého krvného tlaku, znižovania cholesterolu alebo liečbe cukrovky typu 2.

Claims (6)

1. Kmeň mikroorganizmu Streptomyces toxytricini CCM 7349, vyznačujúci sa tým, že produkuje lipstatín.
2. Spôsob produkcie lipstatinu, vyznačujúci sa tým, že zahŕňa kultiváciu kmeňa Streptomyces toxytricini CCM 7349 podľa patentového nároku 1 v produkčnej pôde za vhodných kultivačných podmienok.
3. Spôsob produkcie lipstatinu podľa patentového nároku 2, vyznačujúci sa tým, že produkčná pôda obsahuje ako prekurzor kyselinu linolovú a L-Leucín v pomere 1 : 0,8.
4. Spôsob produkcie lipstatinu podľa patentového nároku 3, vyznačujúci sa tým, že kyselina linolová a L-Leucin sa dávkujú kontinuálne od 34.hodiny kultivácie pričom koncentrácia kyseliny linolovej v produkčnej pôde sa udržiava od 0,2 do 1,0 g/l.
5. Spôsob produkcie lipstatinu podľa patentového nároku 2 až 4, vyznačujúci sa tým, že kmeň mikroorganizmu Streptomyces toxytricini CCM 7349 podľa patentového nároku 1 sa kultivuje v produkčnej pôde obsahujúcej glycerol a sójový olej ako zdroj uhlíka, kyselinu linolovú s L-Leucínom ako zdroj prekurzorov, pri kultivačnej teplote 28°C, pH v rozmedzí 6,7 až 7,3 pričom produkuje lipstatín v koncentrácii 3,0 až 3,2 g/kg počas 180 až 230 hodín kultivácie.
6. Spôsob produkcie lipstatinu podľa patentového nároku 2 až 5, vyznačujúci sa tým, že produkčné médium neobsahuje emulzifikátor.
SK2-2006A 2006-01-03 2006-01-03 Kmeň Streptomyces toxytricini produkujúci lipstatín a príprava lipstatínu s uvedeným kmeňom SK22006A3 (sk)

Priority Applications (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
SK2-2006A SK22006A3 (sk) 2006-01-03 2006-01-03 Kmeň Streptomyces toxytricini produkujúci lipstatín a príprava lipstatínu s uvedeným kmeňom
PCT/SK2006/050008 WO2007078263A2 (en) 2006-01-03 2006-12-18 The strain streptomyces toxytricini lipstatin-producing microorganism and preparation of lipstatin with inscribed strain

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
SK2-2006A SK22006A3 (sk) 2006-01-03 2006-01-03 Kmeň Streptomyces toxytricini produkujúci lipstatín a príprava lipstatínu s uvedeným kmeňom

Publications (1)

Publication Number Publication Date
SK22006A3 true SK22006A3 (sk) 2007-08-02

Family

ID=38198149

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SK2-2006A SK22006A3 (sk) 2006-01-03 2006-01-03 Kmeň Streptomyces toxytricini produkujúci lipstatín a príprava lipstatínu s uvedeným kmeňom

Country Status (2)

Country Link
SK (1) SK22006A3 (sk)
WO (1) WO2007078263A2 (sk)

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8501444B2 (en) 2008-03-26 2013-08-06 Biocon Limited Fermentation process for higher yield coefficient of lipase-inhibitor with respect to consumed fatty acid
EP2141236A1 (en) 2008-07-03 2010-01-06 KRKA, D.D., Novo Mesto Process for production of lipstatin and microorganisms therefore
CN101948450B (zh) * 2010-10-13 2013-04-24 鲁南制药集团股份有限公司 一种生产制备奥利司他的方法
CN102268466B (zh) * 2011-07-23 2013-06-12 鲁南新时代生物技术有限公司 一种发酵生产利普司他汀的方法及其培养基组份

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA1247547A (en) * 1983-06-22 1988-12-28 Paul Hadvary Leucine derivatives
MY116591A (en) * 1996-04-26 2004-02-28 Hoffmann La Roche Process for the production of lipstatin and tetrahydrolipstatin

Also Published As

Publication number Publication date
WO2007078263A3 (en) 2007-09-07
WO2007078263A2 (en) 2007-07-12

Similar Documents

Publication Publication Date Title
DK173310B1 (da) Fremgangsmåde til fremstilling af 2-keto-L-gulonsyre, mikroorganismestammer og -kulturer hertil og en fremgangsmåde til fre
IE51496B1 (en) Method for preparing 2,5-diketo-d-gluconic acid
US6844174B2 (en) Fermentation process for lipstatin and method of extracting lipstatin from a fermentation broth
CA2719581C (en) Improved fermentation process for higher yield coefficient of lipase-inhibitor with respect to consumed fatty acid
SK22006A3 (sk) Kmeň Streptomyces toxytricini produkujúci lipstatín a príprava lipstatínu s uvedeným kmeňom
JPH07106155B2 (ja) 抗生化合物の製法
CA2202016C (en) Process for the production of lipstatin and of tetrahydrolipstatin
KR100186758B1 (ko) 프라바스타틴(pravastatin)전구체의제조방법
KR20140007425A (ko) 일종의 사이클릭 리포펩티드 화합물의 제조방법
CA1339643C (en) Fermentation method for producing polyether antibiotics
EP0745681B1 (en) Optical resolution of chlorohydrin with microorganism
SK702019A3 (sk) Príprava farmaceutickej aktívnej látky lipstatín s použitím produkčného mikroorganizmu Streptomyces toxytricini NRL
JP3123428B2 (ja) 微生物によるクロロヒドリンの光学分割方法
EP0570593B1 (en) Process for producing optically active norborneol
US5849551A (en) Microbiological process for producing γ-decalactone
US6197560B1 (en) Metabolic controlled fermentation procedure for the manufacture of lovastatin hydroxy acid
CN112852898B (zh) 一种利普斯他汀发酵方法与发酵培养基
EP0906446A1 (en) Process for the preparation of clavulanic acid
US6500651B1 (en) Metabolic controlled fermentation procedure for the manufacture of lovastatin hydroxy acid
JP4439079B2 (ja) プラバスタチンの製造方法
SI9800144A (sl) Nov biotehnološki postopek pridobivanja 3-hidroksi-ML-236B derivatov poznanih kot M-4 in M-4'
WO2004003212A1 (en) Novel process for the production of pancreatic lipase inhibitor
SU1585331A1 (ru) Штамм гриба MUcoR LUSIтаNIсUS - продуцент липидов с повышенным содержанием @ -линоленовой кислоты
JPS6225357B2 (sk)
KR0178085B1 (ko) 트리코스포로노이데스 속 변이균주 및 이를 이용한 에리스리톨의 제조방법

Legal Events

Date Code Title Description
FC9A Refused patent application