SK13442000A3 - Postup na prípravu tetrapeptidu - Google Patents

Postup na prípravu tetrapeptidu Download PDF

Info

Publication number
SK13442000A3
SK13442000A3 SK1344-2000A SK13442000A SK13442000A3 SK 13442000 A3 SK13442000 A3 SK 13442000A3 SK 13442000 A SK13442000 A SK 13442000A SK 13442000 A3 SK13442000 A3 SK 13442000A3
Authority
SK
Slovakia
Prior art keywords
formula
derivative
phe
ester
protected
Prior art date
Application number
SK1344-2000A
Other languages
English (en)
Inventor
Henry Franz�N
Original Assignee
Astrazeneca Ab
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Astrazeneca Ab filed Critical Astrazeneca Ab
Publication of SK13442000A3 publication Critical patent/SK13442000A3/sk

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/10—Tetrapeptides
    • C07K5/1002—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/1016—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral and aromatic or cycloaliphatic
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/10—Tetrapeptides
    • C07K5/1027—Tetrapeptides containing heteroatoms different from O, S, or N

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Description

Predložený vynález sa týka nového postupu na prípravu tetrapeptidu, špecifickejšie tetrapeptidu H-Tyr-D-Ala-Phe(pF)-Phe-NH2, alebo jeho farmaceutický prijateľnej soli. Predložený vynález sa ďalej týka nových intermediátov použitých v tomto postupe.
Doterajší stav techniky
Predložený vynález sa týka nového postupu na prípravu peptidu H-Tyr-D-AlaPhe(pF)-Phe-NH2, alebo jeho farmaceutický prijateľnej soli.
WO 97/07129 uvádza postup na výrobu medzi inými aj peptidu H-Tyr-D-AlaPhe(pF)-Phe-NH2. Peptid H-Tyr-D-Ala-Phe(pF)-Phe-NH2 je uvedený aj vo WO 97107130. Uvedený peptid vykazuje periférnu analgetickú aktivitu a selektivitu pre μ subtyp ópioidných receptorov a je vhodný najmä na terapiu bolesti. Navyše sa pripravuje syntézou v tuhej fáze podľa zavedených postupov tejto oblasti techniky. Nedostatok syntézy v tuhej fáze, ktorá je bežnou a zavedenou metódou syntézy peptidov, je, že sa ťažko používa na výrobu vo veľkom meradle a je navyše drahá.
Postup podľa predloženého vynálezu poskytuje tetrapeptid H-Tyr-D-Ala-Phe(pF)Phe-NH2 s vyššou čistotou, nákladovo efektívnejším a lepším spôsobom v porovnaní so spôsobmi známymi v tejto oblasti techniky. Postup podľa predloženej prihlášky navyše dáva produkt vo vyššom výťažku.
Cieľom predloženého vynálezu je teda poskytnutie nového postupu vhodného na použitie pri syntéze vo veľkom meradle. Ďalším cieľom predloženého vynálezu je poskytnúť postup obsahujúci čo najmenej reakčných krokov.
Podstata vynálezu
Predložený vynález poskytuje nový postup na veľkoobjemovú prípravu peptidu H-Tyr-D-Ala-Phe(pF)-Phe-NH2, ktorý je peptidom vzorca I
Η2Ν
alebo jeho farmaceutický prijateľnej soli.
Postup podľa predloženého vynálezu na prípravu vyššie uvedenej zlúčeniny vzorca (I) pozostáva z nasledujúcich reakčných krokov:
Krok 1 (i) Krok spájania, kde aktivovaný p-fluórfenylalanínový derivát vzorca III,
H
O kde
A je chrániaca skupina aminoskupiny a
R je skupina zvyšku aktivačného činidla;
vopred pripravený v predaktivačnom kroku alebo generovaný in situ, reaguje s aminoskupinou fenylalanínu, kde karboxylová skupina je chránená ako ester alebo amid, t.j. zlúčenina vzorca Phe-R1, kde R1 je zvyšok esteru alebo amidu, za prítomnosti rozpúšťadla, pričom sa získa chránený dipeptidový derivát vzorca IV (IV),
kde
A je chrániaca skupina aminoskupiny a
R1 je zvyšok esteru alebo amidu;
(ii) Odstránenie chrániacej skupiny, pričom sa z chráneného dipeptidového derivátu vzorca IV pripraveného v predchádzajúcom kroku odstráni chrániaca skupina buď katalytickou hydrogenáciou alebo pôsobením bázy alebo kyseliny v závislosti od použitej chrániacej skupiny aminoskupiny, čím sa získa dipeptidový derivát vzorca 5,
kde
R1 je zvyšok esteru alebo amidu;
Krok 2 (i) Krok spájania, kde aktivovaný alanínový derivát vzorca VII,
A.
(VII), kde
A je chrániaca skupina aminoskupiny a R je skupina zvyšku aktivačného činidla;
pripravený vopred v predaktivačnom kroku alebo generovaný in situ reaguje s produktom kroku 1, t.j. dipeptidovým derivátom vzorca 5 za prítomnosti rozpúšťadla, pričom sa získa chránený tripeptidový derivát vzorca VIII
(VIII), kde
A je chrániaca skupina aminoskupiny a
R1 je zvyšok esteru alebo amidu;
(ii) Odstránenie chrániacej skupiny, pričom sa z chráneného trípeptidového derivátu vzorca VIII pripraveného v predchádzajúcom kroku odstráni chrániaca skupina buď katalytickou hydrogenáciou alebo pôsobením bázy alebo kyseliny v závislosti od použitej chrániacej skupiny aminoskupiny, čím sa získa tripeptidový derivát vzorca 9
kde
R1 je zvyšok esteru alebo amidu;
Krok 3 (i) Krok spájania, kde aktivovaný tyrozínový derivát vzorca X,
(X), kde
A je chrániaca skupina aminoskupiny,
R je skupina zvyšku aktivačného činidla a
R2 je H alebo skupina podobná benzylu;
pripravený vopred v predaktivačnom kroku alebo generovaný in situ reaguje s tripeptidovým derivátom vzorca 9, teda produktom z kroku 2, za prítomnosti rozpúšťadla, pričom sa získa chránený tetrapeptidový derivát vzorca XI
kde
A je chrániaca skupina aminoskupiny a R1 je zvyšok esteru alebo amidu;
(ii) Voliteľný transformačný krok uskutočnený vtedy, ak chránený tetrapeptidový derivát vzorca XI pripravený v predchádzajúcom kroku (i) je ester, pri ktorom esterová zlúčenina vzorca XI reaguje s amoniakom v organickom alkohole, s výhodou amoniakom v metanole, čím sa získa chránený dipeptidový derivát vzorca XII,
(XII), (iii) Krok odstránenia chrániacej skupiny, pri ktorom sa z chráneného tetrapeptidového derivátu vzorca XII odstráni chrániaca skupina buď katalytickou hydrogenáciou alebo pôsobením bázy alebo kyseliny v závislosti od použitej chrániacej skupiny aminoskupiny, čím sa získa konečný tetrapeptid vzorca I, ktorý možno voliteľne skonvertovať na soľ tetrapeptidu vzorca I.
Peptid H-Tyr-D-Ala-Phe(pF)-Phe-NH2 vzorca I možno v prípade potreby nechať reagovať s farmaceutický prijateľnou kyselinou, napríklad AcOH, H3PO4, kyselinou citrónovou, kyselinou mliečnou a HCI. HCI je výhodnou kyselinou na použitie v súlade s predloženým vynálezom. Možné soli, ktoré možno použiť, sú opísané v S. M. Berge, L. D. Bighley a D. C. Monkhouse, J. Pharmaceut. Sci., 66 (1977) 1-19.
Postup podľa predloženého vynálezu opísaného vyššie možno teda schematicky opísať ako pozostávajúci z nasledujúcich krokov:
Krok 1 (i) Krok spájania, (ii) Krok odstránenia chrániacej skupiny,
Krok 2 (i) Krok spájania, (ii) Krok odstránenia chrániacej skupiny,
Krok 3 (i) Krok spájania, (ii) Voliteľný transformačný krok, (iii) Krok odstránenia chrániacej skupiny
Voliteľný transformačný krok opísaný vyššie v kroku 3(ii) by sa mohol namiesto toho uskutočniť po kroku spájania (i) v kroku 1 alebo kroku 2. Transformačný krok sa s výhodou uskutočňuje po kroku spájania (i) v kroku 1. Výhodný spôsob uskutočňovania postupu podľa predloženého vynálezu by sa teda mohol schematicky opísať ako pozostávajúci z nasledujúcich krokov:
Krok 1 (i) Krok spájania, (ii) Voliteľný transformačný krok, (iii) Krok odstránenia chrániacej skupiny,
Krok 2 (i) Krok spájania, (ii) Krok odstránenia chrániacej skupiny
Krok 3 (i) Krok spájania, (ii) Krok odstránenia chrániacej skupiny
Chrániacu skupinu pre N“-aminoskupinu možno vybrať spomedzi akýchkoľvek chrániacich skupín vhodných na syntézu peptidov, ako sú napríklad ŕerc-butoxykarbonyl (Boe) alebo benzyloxykarbonyl, v skratke často Z-, pričom toto sú len dve z viacerých možných chrániacich skupín pre aminoskupiny. Benzyloxykarbonyl je však osobitne výhodný na použitie v tejto syntéze, pretože sa ľahko odstraňuje katalytickou hydrogenáeiou a na rozdiel od chrániacej skupiny Boe nevyžaduje neutralizáciu uvoľneného amínu. Odborníci z danej oblasti budú poznať vhodné chrániace skupiny aminoskupín a karboxylových skupín, ktoré možno použiť podľa predloženého vynálezu. Možno ich nájsť v nasledujúcich zdrojoch: J. Meienhofer in The Peptides, zv.
I, Eds.: E. Gross & J. Meienhofer, Academic Press, Inc, London 1979, s. 264-309; The peptides, zv. 1-9, E. Gross & J. Meienhofer, Eds., Academic Press Inc., London, 19791987; Houben-Weyl, Methoden der organischen Chemie, E. Muller, ed., zv. 15, Part 1II, Thieme, Stuttgart 1974; a M. Bodanszky, Principles of peptide Synthesis, Springer Verlag, Berlín 1984.
Predaktivačný krok predchádzajúci kroku 1-3, alebo generovanie aktivovaného aminokyselinového derivátu in situ, sa dosahuje reakciou aminokyseliny, pričom aminoskupina je chránená vhodnou chrániacou skupinou, napríklad ŕerc-butoxykarbonyl (Boe) alebo benzyloxykarbonyl (Z), ktoré sú buď komerčne dostupné alebo dostupné technikami známymi v danej oblasti techniky, s aktivačným činidlom za prítomnosti terciárneho amínu a organického rozpúšťadla, čím sa získa aktivovaný aminokyselinový derivát. Schematické zobrazenie predaktivačného kroku je uvedené nižšie.
aminokyselinový derivát aktivovaný aminokyselinový derivát kde
A je chrániaca skupina aminoskupiny a
R je skupina zvyšku aktivačného činidla;
Pri kroku spájania v kroku 1-3 opísanom vyššie možno použiť rad silných rozpúšťadiel, v ktorých je aminokyselinová zložka v zásade rozpustná a k dispozícii na okamžitú reakciu s aktivovaným peptidovým derivátom. Príkladmi vhodných rozpúšťadiel na krok spájania sú acetón, acetonitril, DMF, N-metylpyrolidón (NMP) a EtOAc alebo ich zmesi.
V tu používanom význame označuje pojem „skupina podobná benzylu“ akúkoľvek substituovanú alebo nesubstituovanú benzylovú skupinu, ktorá sa hydrogenolyzuje za podobných reakčných podmienok ako benzyloxykarbonylová skupina.
Pojem „pF“ označuje para-fluór substituent.
Možné ako aj výhodné činidlá a reakčné podmienky v každom kroku sú nasledujúce:
Predaktivačný krok
Vhodné aktivačné činidlá možno vybrať spomedzi tých, ktoré vytvárajú ktorékoľvek z bežne používaných aminokyselinových derivátov, okrem iného vrátane karbodiimidov, aktivovaných esterov, azidov alebo anhydridov. Výhodným aktivačným činidlom je izobutylchlórformiát (iBuOCOCI). Keď je aktivačným činidlom izobutylchlórformiát (iBuOCOCI), aktivovaný peptidový derivát bude mať nasledujúcu štruktúru, ktorá je zobrazená na príklade D-alanínu:
Terciárnym amínom môže byť akýkoľvek terciárny amín. Výhodné sú však NMIVI (N-metylmorfolín), diizopropyletylamín a trietylamín. Navyše možno použiť aj sekundárny amín, ktorý je stéricky bránený.
Organickým rozpúšťadlom môže byť akékoľvek organické rozpúšťadlo známe odborníkovi z danej oblasti ako vhodné v peptidovej chémii. V predaktivačnom kroku je však výhodný etylacetát, acetonitril, acetón a tetrahydrofurán.
Krok spájania; krok 1 (i), krok 2(i) a krok 3 (i)
Rozpúšťadlo použité na krok spájania môže byť vybrané z radu rozpúšťadiel, v ktorých je aminokyselinová zložka v zásade rozpustná a k dispozícii na okamžitú reakciu s aktivovaným aminokyselinovým zvyškom. Príkladmi vhodných rozpúšťadiel na kroky spájania sú acetón, acetonitril, DMF, N-metylpyrolidón (NMP) a EtOAc alebo ich zmesi, z ktorých výhodnými rozpúšťadlami sú acetón, EtOAc, NMP a DMF.
Možno použiť akúkoľvek teplotu, pri ktorej sa aktivovaný aminokyselinový derivát nerozkladá a pri ktorej reakčná rýchlosť nie je príliš malá. Výhodný interval je od 0 °C do -20 °C a osobitne výhodný je od -5 °C do -15 °C. Rýchlosť pridávania sa reguluje tak, aby sa udržiavala výhodná teplota.
Krok odstránenia chrániacej skupiny; krok 1 (ii), krok 2(ii) a krok 3(iii)
Katalyzátor použitý na hydrogenáciu možno vybrať z celého radu katalyzátorov, ako bude zrejmé odborníkovi z danej oblasti. Výhodným katalyzátorom je však 5 % Pd na uhlíku. Možno použiť akékoľvek rozpúšťadlo, ktoré dokáže rozpustiť aspoň časť peptidu, okrem ketónov ako acetón, alebo tých rozpúšťadiel, ktoré otravujú katalyzátor, alebo reagujú so zložkami reakčnej zmesi. Výber rozpúšťadla bude pre odborníka z danej oblasti zrejmý. Výhodným rozpúšťadlom je DMF.
Voliteľný krok 3(ii) sa vyžaduje iba vtedy, ak chránený tetrapeptidový derivát (XI) pripravený v kroku 3(i) je ester. Teda ak sa použije amid od fenylalanínu, krok 3(ii) sa zo syntetického postupu vylúči.
Ak sa na odstránenie α-chrániacej skupiny použije kyselina, je potrebné ekvivalentné molárne množstvo bázy na deprotonizáciu aminoskupiny peptidového derivátu.
Vo výhodnom uskutočnení predloženého vynálezu sa chránená aminokyselina, s výhodou pomocou benzyloxykarbonylu ako skupiny chrániacej Na-aminoskupinu, aktivuje ako zmiešaný anhydrid s izobutyloxykarbonylchloridom alebo podobným typom chlórformiátu. Použitá metóda je založená na všeobecnej metóde, ktorú revidoval J. Meienhofer v The Peptides, zv. 1, Eds.: E. Gross & I. Meienhofer, Academic Press, Inc, London 1979, s. 264-309.
Prekvapujúco sme zistili, že aktivačný čas možno predĺžiť na aspoň 30 minút pri teplote asi 0 až -15 °C oproti odporúčaným 1 až 2 min pri -15 °C. Tiež sme zistili, že prísne bezvodé podmienky nie sú potrebné, ako sa inak odporúča. Toto umožňuje použitie tohto spôsobu na výrobu vo veľkom meradle, kde dlhšie reakčné časy umožňujú uskutočňovanie bezpečného a reprodukovateľného procesu. Stereochemická integrita sa plne udržala a chemická čistota ako aj výťažky boli typicky vyše 90 %. Vytvorený zmiešaný anhydrid sa spojí pri pomalom pridávaní amínokyselinovej zložky (aminokyselinový alebo peptidový amid alebo ester) pri asi 0 až -15 °C a reakčná zmes sa potom nechá dosiahnuť 20 až 30 °C v priebehu asi 30 až 60 minút alebo dlhšie, kým sa iniciuje kryštalizácia produktu priamo z reakčnej zmesi.
Okrem toho sme prekvapujúco zistili, že pri použití tejto metódy a pri použití vhodne vybraných kombinácií rozpúšťadiel nie je potrebný osobitný krok premývania pred kryštalizáciou. S výhodou sa používa DMF, acetonitril, EtOAc a voda. Kontrolovanou kryšalizáciou sa dosahuje nielen vynikajúce vyčistenie, ale aj skrátenie filtrovania alebo centrifugovania počas spracovania ako aj skrátenie sušenia, ak sú potrebné suché intermediáty. Jedným dôležitým faktorom je vytvoriť dostatočne veľké kryštály s pomerne malou distribúciou veľkosti, aby sa neupchalo filtračné médium alebo centrifugačná textília. Pre peptidy je veľmi bežné, že vytvoria gély alebo amorfné kryštály, ktoré takmer nie je možné filtrovať.
Tripeptidový derivát vzorca 9
kde
R1 je zvyšok esteru alebo amidu;
je užitočným intermediátom na prípravu cieľovej zlúčeniny vzorca I.
Príklady uskutočnenia vynálezu
Teraz bude na nasledujúcich príkladoch podrobnejšie opísaná príprava peptidu H-Tyr-D-Ala-Phe(pF)-Phe-NH2 alebo jeho farmaceutický prijateľnej soli, čo by sa však nemalo vysvetľovať ako obmedzenie rozsahu vynálezu. Navyše nižšie uvedená schéma 1 poskytuje podrobný prehľad syntetického postupu prípravy peptidu vzorca I podľa predloženého vynálezu pomocou fenylalanínového derivátu, kde je karboxylová skupina chránená ako ester. Ďalej uvedená schéma 2 poskytuje podrobný prehľad syntetického postupu prípravy peptidu vzorca I podľa predloženého vynálezu pomocou fenylalanínového derivátu, kde je karboxylová skupina chránená ako amid. Čísla zlúčenín uvedené v podrobnom opise syntézy v nižšie uvedených príkladoch zodpovedajú číslovaniu zlúčenín v schémach 1 a 2.
Schéma 1
H-Phe(pF)-Phe-NH, (2)
Schéma 1 (pokračovanie)
Ô V -OH (i) iBuOCOCI jjr (ii) NMM (6)
ACN
-10 eC 20 min / CH3 λΛΥΛ
Z-D-Ala
H-D-Ala-Phe(pF)-Phe-NH2
Schéma 1 (pokračovanie)
(12)
Z-Tyr-D-Ala-Phe(pF)-Phe-NH,
O CH,
H-Tyr-D-Ala-Phe{pF)-Phe-NH,
HO/HjO
Acetóne
MIBK
H-Tyr-O-Ala-Phe(pF)-Phe-NH, x HCI
Krokl (i) Príprava Z-Phe(pF)-Phe-OMe (zlúčenina 3 v schéme 1) Škála - 3,5 mólu
Z-Phe(pF) (zlúčenina 1) (1 ekv.) sa najprv rozpustí v acetóne (4,7 l/mol) a ochladí sa pred pridaním IBK (0,9 -1,2 ekv.) (v skutočnosti 1 ekv.). Reakcia sa potom riadi rýchlosťou pridávania (asi 20 minút) NMM (N-metylmorfolínu) (0,9 - 1,2 ekv.) (v skutočností 1 ekv.). Odporúča sa reakčná teplota medzi 0 a -15 °C (v skutočnosti od 9 °C do -14 °C), kedy k reakcii dochádza okamžite po pridaní NMM, ale zmiešaný anhydrid sa pritom nerozkladá prirýchlo.
H-Phe-OMe x HCl (0,9 -1,3 ekv.) (v skutočnosti 1,04 ekv.) sa medzitým zmieša s acetónom (2,6 l/mol), neutralizuje sa pomocou NMM (0,9 - 1,5 ekv.) (v skutočnosti 1,04 ekv.) a ochladí sa na 0 až -20 °C (v skutočnosti asi -10 °C). Táto suspenzia sa po dokončení aktivácie pridá takou rýchlosťou, ktorá udrží teplotu okolo -10 °C (v skutočnosti od -8°C do -13 °C) (asi 30 minút). Potom sa pridá EtOAc (4 l/mol) a organická fáza sa premyje vodou (2x2 l/mol), po čom nasleduje azeotropická destilácia z ACN a rozpustenie v MeOH pred nasledujúcim krokom. 92 % čistota v metanolickej suspenzii.
Posun Multiplicita Integrál H
8,5 d 1
7,49 d 1
7,31 m 7
7,24 m 5
7,08 m 2
4,93 m 2
4,5 m 1
4,26 m 1
3,58 s 3
2,99 m 3
2,67 m 1
(ii) Príprava Z-Phe(pF)-Phe-NH2 (zlúčenina 4 v schéme 1)
Škála - 2,3 až 3,3 mólu
Do roztoku zlúčeniny 3 pripravenej v predchádzajúcom kroku (asi 8 I MeOH/mol) sa pridáva amoniak pri tlaku medzi 1 až 4 barmi pri 15 až 40 °C počas viac ako 5 hodín alebo do takmer úplného skončenia reakcie (skutočná konverzia 99 %). Po skončení sa amoniak odparí a reakčná zmes sa pred filtráciou alebo centrifugovaním ochladí. Produkt sa premyje pomocou MeOH a vysuší sa za vákua pri 20 až 50 °C. Výťažok 74 % vypočítaný na základe zlúčeniny 1 (Z-Phe(pF)) a 100 % čistota.
Posun Multiplicita Integrál H
8,05 d 1
7,49 d 1
7,24 m 11
7,07 m 3
4,94 m 2
4,46 m 1
4,21 m 1
3,00 m 1
2,88 m 1
2,66 m 1
Príprava H-Phe(pF)-Phe-NH2 (zlúčenina 5 v schéme 1)
Škála - 4,3 mólu
Zlúčenina 4 pripravená v predchádzajúcom kroku sa zmieša s DMF (4,2 l/mol) a pridá sa katalyzátor Pd/C (skutočný obsah Pd 5 %) (0,2 -10 % hmotnostných LEF-581) (v skutočnosti 7 %) a výsledná zmes sa hydrogenuje viac ako 0,5 hodiny (v skutočnosti 1,2 hodiny) pri 25 °C a 3 baroch H2. Reakčná zmes sa potom prefiltruje a pred nasledujúcim krokom sa ochladí na asi -15 °C. 99.6 % čistota v roztoku.
Krok 2 (i) Príprava Z-D-Ala-Phe(pF)-Phe-NH2 (zlúčenina 8 v schéme 1)
Škála - 4,4 mólu
Z-Phe(pF) (zlúčenina 6) (1 ekv.) sa najprv rozpustí v acetóne (4,7 l/mol) a ochladí sa pred pridaním IBK (0,9 - 1,2 ekv.) (použil sa 1 ekv.). NMM (0,9 - 1,2 ekv.) (použil sa 1 ekv.) sa potom pridal rovnakým spôsobom, ako je opísané vyššie pre prípravu zlúčeniny 3. Roztok zlúčeniny 5 (24,5 I) sa potom pridával v priebehu asi 30 minút, pričom sa teplota udržiavala okolo -10 °C (v skutočnosti od -8 °C do -14 °C). Po dokončení spájania sa produkt vykryštalizoval z reakčnej zmesi pomalým pridaním vody (3 x 3,6 l/mol + 1 x 1,3 l/mol) s prestávkou asi 25 min medzi každým pridaním a pri počiatočnej teplote asi 30 °C a konečnej teplote asi 20 °C. Kryštály možno potom centrifugovať a premyť zmesou vody a acetonitrilu (4 : 1) a vysušiť za vákua pri 20 50 °C. Výťažok 90 % a 99,5 % čistota.
Posun Multiplicita Integrál H
8,14 d 1
8,05 d 1
7,43 d 1
7,29 m 12
7,05 m 2
5,01 m 2
4,44 m 2
4,01 m 1
2,92 m 3
2,73 m 1
0,96 d 3
Príprava H-D-Ala-Phe(pF)-Phe-NH2 (zlúčenina 9 v schéme 1)
Zlúčenina 8 pripravená v predchádzajúcom kroku sa zmieša s DMF (4.2 l/mol) a pridá sa katalyzátor Pd/C (skutočný obsah Pd 5 %) (0,2 -10 % hmotnostných zlúčeniny 3) (v skutočnosti 7 %) a výsledná zmes sa hydrogenuje viac ako 0,5 hodiny (v skutočnosti 1,2 hodiny) pri 25 °C a 3 baroch H2. Reakčná zmes sa potom prefiltruje a pred nasledujúcim krokom sa ochladí na asi -15 °C. Čistota 97%. Konverzia východiskovej látky > 98 %.
Krok 3 (i) Príprava Z-Tyr-D-Ala-Phe(pF)-Phe-NH2 (zlúčenina 12 v schéme 1) Škála -4,1 mólu
Pri tejto syntéze sa použila rovnaká metóda ako v predchádzajúcich dvoch syntézach. Z-Tyr (zlúčenina 10) (1 ekv.) sa najprv rozpustí v ACN (2,3 l/mol) a ochladí sa pred pridaním IBK (0,9 -1,2 ekv.). NMM (0,9 - 1,2 ekv.) sa potom pridal rovnakým spôsobom, ako je opísané vyššie pre prípravu zlúčeniny 3. Roztok zlúčeniny 3 z predchádzajúceho kroku sa potom pridával v priebehu asi 30 minút, pričom sa teplota udržiavala okolo -10 °C (v skutočnosti od -7 °C do -14 °C). Po dokončení syntézy produkt vykryštalizoval z reakčnej zmesi pomalým pridaním acetonitrilu a vody (2 l/mol ACN + 0,3 l/mol 25 % NH3 v H2O, státie 2 h, pridanie 1,3 l/mol ACN : H2O (1:1), státie 1 h, zvýšenie teploty na 35 °C, pridanie očkovacích kryštálov (asi 1 % hmotnostné), státie 1 h, pridanie 1,3 l/mol ACN : H2O (1:1), státie 1 h, pridanie 1,2 l/mol H2O a státie 0,5 h pri 35 °C, pridanie 1,2 l/mol H2O a státie 2 h pri 20 °C, pridanie 1,2 l/mol H2O a státie 1 h pri 20 °C a pridanie 1,2 l/mol H2O a státie 0,5 h pri 20 °C). Centrifugovanie a premytie najprv vodou a potom ACN pred vysušením za vákua pri 20 - 50 °C.
Výťažok 81 % vypočítaný zo zlúčeniny 8. Čistota 98,4 %.
Posun Multiplicita Integrál H
9,18 s 1
8,18 d 1
8,11 d 1
8,05 d 1
7,43 d 1
7,24 m 12
7,04 m 4
6,63 d 2
4,92 m 2
4,45 m 2
4,22 m 2
3,00 m 1
2,83 m 1
2,64 m 1
0,89 d 3
(ii) Príprava H-Tyr-D-Ala-Phe(pF)-Phe-NH2 (zlúčenina I v schéme 1)
Škála - 3,1 a 3,2 mólu
Zlúčenina 4 sa zmieša s DMF (pri skutočnom experimente 2 - 2,6 l/mol) a pridá sa katalyzátor 5% Pd/C (skutočný obsah) (0,2 - 10% hmotnostných zlúčeniny 3) (v skutočnosti 6-7 %) a výsledná zmes sa hydrogenuje viac ako 0,5 hodiny (v skutočnom experimente 1-2 hodiny) pri 20 - 40 ’C (v skutočnom experimente 20 25 °C) a 3 baroch H2. Reakčná zmes sa potom prefiltruje, aby sa odstránil Pd/C, a produkt sa vykryštalizuje pridaním EtOAc do úplného vykryštalizovania látky (väčšinou 10 l/mol). Tuhá fáza sa oddelí filtráciou alebo centrifugovaním, premyje sa EtOAc a vysuší sa za vákua pri 20 - 50 °C.
Príprava H-Tyr-D-Ala-Phe(pF)-Phe-NH2 hydroehloridu
Škála-2,1 mólu
Voľná báza zlúčeniny I sa rozpustí v zmesi vody a acetónu s jedným ekvivalentom HCI a prefiltruje sa tak, aby sa získal číry roztok (146 g/mol, 25 % HCI/H2O, 2 I acetónu/mol v skutočnom experimente). Soľ má obmedzenú rozpustnosť v acetóne a preto sa filter raz premyje ďalšou dávkou zmesi acetónu a vody (95 : 5) (0,5 l/mol). Kryštalizácia sa iniciuje pomalým pridávaním acetónu (3,4 l/mol) pri intenzívnom miešaní a potom sa pridá aspoň 1 % hmotnostné očkovacích kryštálov. Po 30 minútach sa pomaly pridá prvá dávka MIBK (3 l/mol) a zmes sa nechá pomaly miešať, kým zjavne nezhustne. MIBK (3 l/mol) sa pridá ešte trikrát s prestávkami 30 - 60 minút, pričom sa udržiava vnútorná teplota reaktora na asi 20 °C. Tuhá fáza sa potom oddelí centrifugovaním alebo filtráciou, premyje sa MIBK a vysuší sa za vákua pri 20-50 °C počas viac ako 16 hodín, alebo kým nie je hladina rozpúšťadla nižšia ako v špecifikácii.
Schéma 2
Z-Phe(pF)
iBuOCOCI
NMM
EtOAc
Z-Phe(pF)-OCOOiBu Phe-NH2 x HCI •10*C 10 min EtOAc +
Z-Phe(pF)-Phe-NH2
Π3)
Phe(pF)-Phe-NH2 (14)
Schéma 2 (pokračovanie)
Schéma 2 (pokračovanie)
OH
H-Tyr-D-Ala-Phe(F)-Phe-NHj m
HCl
Acetón
3%H,O
MIBK
Z-Tyr-D-Ala-Phe(pF)-Phe-NHjX HCl
Krok 1 (i) Príprava Z-Phe(pF)-Phe-NH2 (zlúčenina 13 v schéme 2)
Škála - 6,7 mólu
Z-Phe(pF) (1 ekv.) sa najprv rozpustila v acetonitrile (EtOAc) (1,7 l/mol) a ochladila sa pred pridaním i-butylchlórformiátu (0,9 -1,2 ekv.) (v skutočnosti 1,05 ekv.). Reakcia sa potom riadi rýchlosťou pridávania (asi 20 minút, v skutočnosti 15 min) NMM (N-metylmorfolínu) (0,9 - 2,0 ekv.) (v skutočnosti 1,4 ekv.). Odporúča sa reakčná teplota medzi 0 a -15 °C (v skutočnosti od -8 °C do -11 °C), kedy k reakcii dochádza okamžite po pridaní /V-metylmorfolínu, ale zmiešaný anhydrid sa pritom nerozkladá prirýchlo.
H-Phe-NH2 x HCI (0,9 -1,3 ekv.) (v skutočnosti 1,04 ekv.) sa medzitým rozpustí v DMF (4,0 l/mol), neutralizuje sa N-metylmorfolínom (0,9 - 1,5 ekv.) (v skutočnosti 1,04 ekv.) a ochladí sa na 0 až -20 °C (v skutočnosti asi -10 °C). Táto suspenzia sa po dokončení aktivácie pridá takou rýchlosťou, ktorá udrží teplotu okolo -10 °C (v skutočnosti od -6 °C do -13 °C) (asi 15 minút, v skutočnosti 8 minút).
Po dokončení syntézy sa produkt vykryštalizoval z reakčnej zmesi pomalým pridávaním 50 % zmesi etanolu a vody (3,6 l/mol). Po 30 minútach státia sa pridalo celkovo 2,85 l/mol vody po troch častiach s asi 25 minútovými prestávkami a pri teplote asi 20 °C. Kryštály sa môžu po asi 17 hodinách odfiltrovať alebo centrifugovať a premyť 50 % zmesou etanolu a vody a potom niekoľkými dávkami acetonitrilu a vysušiť za vákua pri 20 - 60 °C. Výťažok 90 % a 99,9% čistota.
Príprava H-Phe(pF)-Phe-NH2 (zlúčenina 14 v schéme 2)
Škála - 6,7 mólu
Z-Phe(pF)-Phe-NH2 pripravený v predchádzajúcom kroku sa zmieša s DMF (3.5 l/mol) a pridá sa katalyzátor Pd/C (skutočný obsah Pd 5 %) (0,2 - 10 % hmotnostných LEF-582) (v skutočnosti 5%) a výsledná zmes sa hydrogenuje viac ako 0,5 hodiny (v skutočnosti 1,3 hodiny) pri 25 - 30 °C a 3 baroch H2. Reakčná zmes sa potom prefiltruje a pred nasledujúcim krokom sa ochladí na asi -15 °C. 99,6 % čistota v roztoku a > 99 % konverzia východiskovej látky.
Krok 2 (i) Príprava Z-D-Ala-Phe(pF)-Phe-NH2 (zlúčenina 15 v schéme 2)
Škála - 5,9 mólu
Z-D-Ala-OH (zlúčenina x) (1,03 ekv.) sa najprv rozpustila v acetonitrile (1,9 l/mol) a ochladila sa pred pridaním i-butylchlórformiátu (0,9 -1,2 ekv.) (použilo sa 1,07 ekv.). N-metylmorfolín (0,9 -2,0 ekv.) (použilo sa 1,2 ekv.) sa potom pridal podobným spôsobom, ako je opísané vyššie pre prípravu Z-Phe(pF)-Phe-NH2. Roztok H-Phe(pF)Phe-NH2 (25 I) sa potom pridával v priebehu asi 15 minút (v skutočnosti 8 minút), pričom sa teplota udržiavala okolo -10 °C (v skutočnosti od -8 °C do -11 °C). Po dokončení syntézy sa produkt vykryštalizoval z reakčnej zmesi pomalým pridaním vody (4 x 1,9 l/mol) s prestávkou asi 15 - 30 min medzi každým pridaním a pri počiatočnej teplote asi 20 °C. Kryštály možno potom odfiltrovať alebo centrifugovať a premyť zmesou vody a acetonitrilu (4 : 1) a potom acetonitrilom a vysušiť za vákua pri 20 60 °C. Výťažok vypočítaný na základe Z-Phe(pF)-Phe-NH2 93,8 % a 99,6 % čistota. Príprava H-D-Ala-Phe(pF)-Phe-NH2 (zlúčenina 16 v schéme 2)
Škála - 5,5 mólu
Z-D-Ala-Phe(pF)-Phe-NH2 pripravený v predchádzajúcom kroku sa zmieša s DMF (2.9 l/mol) a pridá sa katalyzátor Pd/C (skutočný obsah Pd 5 %) (0,2 - 10 % hmotnostných zlúčeniny 3) (v skutočnosti 5%) a výsledná zmes sa hydrogenuje viac ako 0,5 hodiny (v skutočnosti 3 hodiny) pri 25 - 35 °C a asi 3 baroch H2. Reakčná zmes sa potom prefiltruje a pred nasledujúcim krokom sa ochladí na asi -15 °C. Čistota 99,4%. Konverzia východiskovej látky > 99%.
Krok 3 (i) Príprava Z-Tyr-D-Ala-Phe(pF)-Phe-NH2 (zlúčenina 17 v schéme 2)
Škála - 5,5 mólu
Pri tejto syntéze sa použila podobná metóda ako v predchádzajúcich dvoch syntézach. Ζ-Tyr (zlúčenina x) (1,05 ekv.) sa rozpustila v MeCN (1,9 l/mol) a ochladila sa pred pridaním i-butylchlórformiátu (0,9 - 1,2 ekv.) (v skutočnosti 1,05). Nmetylmorfolín (0,9 - 2,0 ekv.) (v skutočnosti 1,3 ekv.) sa potom pridal podobným spôsobom, ako je opísané vyššie pre prípravu Z-Phe(pF)-Phe-NH2. Roztok H-D-AlaPhe(pF)-Phe-NH2 z predchádzajúceho kroku sa potom pridával v priebehu asi 20 minút (v skutočnosti 6 minút), pričom sa teplota udržiavala okolo -10 °C (v skutočnosti od -8 °C do -9 °C). Po dokončení syntézy sa produkt vykryštalizoval z reakčnej zmesi pri asi 20 - 45 °C pomalým pridávaním acetonitrilu a vody (3,4 l/mol MeCN + 0,9 l/mol 15 % NH3 v H2O, státie 5 min a naočkovanie, státie 4 - 24 h, potom pridanie celkovo 13,9 l/mol H2O v štyroch dávkach s prestávkami asi 30 min alebo viac). Filtrovanie alebo centrifugovanie a premytie najprv vodou a potom MeCN pred voliteľným vysušením za vákua pri 20 - 60 °C. Výťažok 87,7 % vypočítaný na základe Z-D-Ala-Phe(pF)-Phe-NH2 a 95,1 % čistota. Zistilo sa, že výťažok a čistotu možno zvýšiť zahrievaním reakčnej zmesi na asi 60 °C s prídavkom amoniaku na pH asi 9 v priebehu dvoch hodín. Tým sa skonvertuje najdôležitejšia nečistota, Z-Tyr(O-(/-butyloxykarbonyl))-D-Ala-Phe(pF)-PheNH2, na produkt.
(ii) Príprava H-Tyr-D-Ala-Phe(pF)-Phe-NH2 (zlúčenina 1 v schéme 2)
Škála - 5,4 mólu
Z-Tyr-D-Ala-Phe(pF)-Phe-NH2 sa zmieša s DMF (pri skutočnom experimente 2.6 l/mol) a pridá sa katalyzátor 5% Pd/C (skutočný obsah) (0,2 - 10% hmotnostných zlúčeniny 3) (v skutočnosti 6,4 %) a výsledná zmes sa hydrogenuje viac ako 0,5 hodiny (v skutočnom experimente 1,8 hodiny) pri 20 - 40 °C (v skutočnom experimente 20 25 °C) a asi 3 baroch H2. Reakčná zmes sa potom prefiltruje, aby sa odstránil Pd/C, a produkt sa vykryštalizuje pridaním EtOAc do úplného vykryštalizovania látky (väčšinou asi 14 l/mol). Tuhá fáza sa oddelí filtráciou alebo centrifugovaním, premyje sa EtOAc a vysuší sa za vákua pri 20 - 50 °C. Čistota 96,7%. Konverzia východiskovej látky > 99%.
Príprava H-Tyr-D-Ala-Phe(pF)-Phe-NH2 hydrochloridu
Škála - 4,6 mólu
Voľná báza H-Tyr-D-Ala-Phe(pF)-Phe-NH2 sa rozpustí v zmesi vody a acetónu s jedným ekvivalentom HCI a prefiltruje sa tak, aby sa získal číry roztok (146 g/mol, 25 % HCI/H2O, 2 I acetónu/mol v skutočnom experimente). Soľ je v acetóne takmer nerozpustná a preto sa filter raz premyje ďalšou dávkou zmesi acetónu a vody (95 : 5) (0,5 l/mol). Kryštalizácia sa iniciuje pomalým pridávaním acetónu (3,4 l/mol) pri intenzívnom miešaní a potom sa pridá približne 1 % hmotnostné očkovacích kryštálov. Po 30 minútach sa pomaly pridá prvá dávka MIBK (3 l/mol) a zmes sa nechá pomaly miešať, kým zjavne nezhustne. MIBK (3 l/mol) sa pridá ešte trikrát s prestávkami 30 - 60 minút, pričom sa udržiava vnútorná teplota reaktora na asi 20 °C. Tuhá fáza sa potom oddelí centrifugovaním alebo filtráciou, premyje sa MIBK a vysuší sa za vákua pri 20 50 °C počas viac ako 16 hodín, alebo kým nie je hladina rozpúšťadla nižšia ako v špecifikácii. Výťažok 95,8 % a čistota 99,89 %.
Opakované spracovanie
Produkt, ktorý nevyhovuje špecifikáciám pre liečivá, možno rekryštalizovať rovnakým postupom, ako je opísané vyššie pre kryštalizáciu zlúčeniny I, ale bez pridania HCI.
Priradenie NMR spektra pre H-Tyr-D-Ala-Phe(F)-Phe-NH2 x HCI, t.j. pre zlúčeninu I vo forme hydrochloridu
NMR spektrá sa získali z roztoku 36 mg zlúčeniny v približne 0,7 ml DMSO-d6 (99,95 atomárnych % D) pri 27,0 °C na prístroji Varian UMTY plus 400 MHz. Referenčnou hodnotou chemického posunu pre protónové spektrá bol stredný pík multipletu DMSO-d6 braný ako 2,49 ppm. Referenčnou hodnotou pre uhlíkové spektrá bol stredný pík multipletu DMS0-d6 braný ako 39,5 ppm.
Číslovanie atómov použité v priradení je ľubovoľné a vzťahuje sa na vyššie uvedený obrázok.
Protónové spektrá
Jednorozmerné protónové spektrum umožňuje skupinové priradenie alfa protónov (3,9 - 4,4 ppm), CH2 protónov benzylu (2,6 - 3,1 ppm), amidových NH a fenolových OH protónov (8,2 - 8,5 ppm) a tiež špecifické priradenie pre CH3 protóny alanínu (14-CH3) (0,74 ppm).
Dvojrozmerné DQFCOSY spektrum umožňuje skupinové priradenie spinových systémov (alfa, beta a NH protóny) v každom aminokyselinovom zvyšku a skupinové priradenie arylových protónov v každom aromatickom kruhu. Možno tiež špecificky priradiť všetky protóny v Ala zvyšku.
Uhlíkové spektrá
Jednorozmerné uhlíkové spektrum umožňuje skupinové priradenie alfa uhlíkov, CH2 protónov benzylu, karbonylov a arylových uhlíkov a samozrejme špecifické priradenie C-14. APT spektrum umožňuje priradenie CH multiplicity pre každý uhlík. Štiepenie čiar v dôsledku interakcie C-F umožňuje špecifické priradenie uhlíkov vo fluórovanom aromatickom kruhu.
Dvojrozmerné heterokorelované spektrá
Dvojrozmerné uhlíkovo-protónové korelované (HMQC) spektrum dáva koreláciu medzi protónovanými uhlíkmi a priamo viazanými protónmi. Možno tiež špecificky priradiť všetky protónované uhlíky v Ala zvyšku.
Dvojrozmerné uhlíkovo-protónové násobnoväzbové korelované (HMBC) spektrum dáva koreláciu medzi uhlíkmi a protónmi nachádzajúce sa vo vzdialenosti dvoch až troch väzieb. Toto umožňuje priradenie aminokyselinovej sekvencie cez alfa vodíky a karbonylovú skupinu susedného aminokyselinového zvyšku (trojväzbové korelácia), ako aj cez NH a karbonylovú skupinu susedného aminokyselinového zvyšku (dvojväzbová korelácia). Podobne dvoj- a trojväzbové korelácie medzi CH2 benzylu a arylovými uhlíkmi ako aj medzi arylovými protónmi a CH2 benzylu umožňujú špecifické priradenie arylových protónov a uhlíkov jednotlivých aromatických aminokyselín. Takto možno špecificky a jednoznačne priradiť všetky (nevymieňajúce sa) protóny a uhlíky vo všetkých štyroch aminokyselinových zvyškoch.
Tabuľka 1
Priradenie protónov
Chemický posun (ppm) Integrál Multiplicita Priradenie
9,4 1 H s 300 H
8,48 1 H d 9NH
8,37 1 H d 1 NH
8,35 1 H d 8 NH
8,26 2H s
7,53 1 H s
7,28 2H m 18 H,19 H
7,26 2H m 21 H,22 H
7,22 2H m 6 H, 7 H
7,18 1 H m 24 H
7,12 1 H s
7,04 2H m 10H, 11 H
6,98 2H m 26 H, 27 H
6,68 2H m 28 H,29 H
4,43 1 H m 1 H
4,39 1 H m 8 H
Chemický posun (ppm) Integrál Multiplicita Priradenie
4,26 1 H m 9H
3,96 1 H m 20 H
3,39 HDO
3,02 1 H m 12 Hb
2,99 1 H m 2 Hb
2,87 2H m 23 Ha, 23 Hb
2,85 1 H m 12 Ha
2,67 1 H m 2 Ha
0,74 3H d 14 H
Tabuľka 2
Priradenie uhlíkov
Chemický posun (ppm) Multiplicita Priradenie Jc-F
172,99 s 13
171,08 s 5
170,81 s 3
167,39 s 17
162,11 s 15 241 Hz
159,70 s 15 241 Hz
156,50 s 30
137,98 s 16
133,96 s 4 3,1 Hz
133,93 s 4 3,1 Hz
131,16 d 6,7 8,4 Hz
131,08 d 6,7 8,4 Hz
130,46 d 26,27
129,26 d 18,19
128,09 d 21,22
126,30 d 24
124,73 s 25
115,16 d 28,29
114,63 d 10,11 213 Hz
114,41 Γ d 10,11 213 Hz
54,33 d 8
54,01 d 1
53,37 d 20
47,96 d 9
37,57 t 12
36,83 t 2
36,17 t 23

Claims (12)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    1. Postup na prípravu tetrapeptidu H-Tyr-D-Ala-Phe(F)-Phe-NH2 vzorca I alebo jeho farmaceutický prijateľnej soli, vyznačujúci sa tým, že pozostáva z nasledujúcich krokov:
    (i) krok spájania, kde aktivovaný tyrozínový derivát vzorca X, (X).
    kde
    A je chrániaca skupina aminoskupiny,
    R je skupina zvyšku aktivačného činidla a R2 je H alebo skupina podobná benzylu; reaguje s tripeptidovým derivátom vzorca ιχ
    Η2Ν kde
    R1 je zvyšok esteru alebo amidu;
    za prítomnosti rozpúšťadla za štandardných podmienok, čím sa získa chránený tetrapeptidový derivát vzorca XI (XI).
    kde
    A je chrániaca skupina aminoskupiny a
    R1 je zvyšok esteru alebo amidu;
    (ii) krok odstránenia chrániacej skupiny, pri ktorom sa z chráneného tetrapeptidového derivátu vzorca XII odstráni chrániaca skupina buď katalytickou hydrogenáciou alebo pôsobením bázy alebo kyseliny za štandardných podmienok za prítomnosti rozpúšťadla, čím sa získa vzorca I.
  2. 2. Postup podľa nároku 1, vyznačujúci sa tým, že ďalej zahŕňa nasledujúce dodatočné kroky:
    (i) krok spájania, kde aktivovaný alanínový derivát vzorca VII,
    QH3 kde
    A je chrániaca skupina aminoskupiny a R je skupina zvyšku aktivačného činidla; reaguje s dipeptidovým derivátom vzorca 5 (5), kde
    R1 je zvyšok esteru alebo amidu za prítomnosti rozpúšťadla za štandardných podmienok, čím sa získa chránený tripeptidový derivát vzorca VIII (VIII) kde
    A je chrániaca skupina aminoskupiny a
    R1 je zvyšok esteru alebo amidu;
    (ii) odstránenie chrániacej skupiny, pričom sa z chráneného trípeptidového derivátu vzorca VIII pripraveného v predchádzajúcom kroku odstráni chrániaca skupina buď katalytickou hydrogenáciou alebo pôsobením bázy alebo kyseliny za prítomnosti rozpúšťadla za štandardných podmienok, čím sa získa tripeptidový derivát vzorca 9 kde
    R1 je zvyšok esteru alebo amidu.
  3. 3. Postup podľa nároku 2, vyznačujúci sa tým, že ďalej zahŕňa nasledujúce dodatočné kroky:
    (i) krok spájania, kde aktivovaný p-fluórfenylalanínový derivát vzorca lll, kde
    A je chrániaca skupina aminoskupiny a
    R je skupina zvyšku aktivačného činidla;
    reaguje s aminoskupinou fenylalanínu, pričom karboxylová skupina je chránená ako ester alebo amid, za prítomnosti rozpúšťadla za štandardných podmienok, čím sa získa chránený dipeptidový derivát vzorca IV kde
    A je chrániaca skupina aminoskupiny a
    R1 je zvyšok esteru alebo amidu;
    (ii) odstránenie chrániacej skupiny, pričom sa z chráneného dipeptidového derivátu vzorca IV pripraveného v predchádzajúcom kroku odstráni chrániaca skupina buď katalytickou hydrogenáciou alebo pôsobením bázy alebo kyseliny za prítomnosti rozpúšťadla za štandardných podmienok, čím sa získa dipeptidový derivát vzorca 5, kde
    R1 je zvyšok esteru alebo amidu.
  4. 4. Postup podľa nárokov 1 až 3, vyznačujúci sa tým, že po jednom z krokov spájania (i) nasleduje voliteľný krok transformácie, ktorý sa uskutoční, ak je karboxylová skupina aminokyselinového derivátu chránená ako ester, pričom ester reaguje s amoniakom v organickom alkohole.
  5. 5. Postup podľa nárokov 1 až 3, vyznačujúci sa tým, že aktivovaný aminokyselinový derivát použitý v aspoň jednom z krokov spájania je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z karbodiimidu, aktivovaného esteru, azidu alebo anhydridu.
  6. 6. Postup podľa nároku 5, vyznačujúci sa tým, že aktivačným činidlom je izobutylchlórformiát.
  7. 7. Postup podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 6, vyznačujúci sa tým, že rozpúšťadlom použitým v aspoň jednom z krokov spájania je acetón, acetonitril, NMP, DMF alebo EtOAc.
  8. 8. Postup podľa nárokov 1 až 3, vyznačujúci sa tým, že rozpúšťadlom v kroku spájania je DMF.
  9. 9.
  10. 10.
  11. 11.
  12. 12.
    9.
    10.
    11.
    12.
    Postup podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 3, vyznačujúci sa tým, že krok odstránenia chrániacej skupiny sa uskutočňuje pomocou Pd na aktívnom uhlí.
    Postup podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 9, vyznačujúci sa tým, že aspoň jedna z reakcií sa uskutočňuje pri teplote od 0 °C do -20 °C.
    Postup podľa nároku 10, vyznačujúci sa tým, že teplota je od -5 °C do -15 °C. Peptidový derivát vzorca 9 kde
    R1 je zvyšok esteru alebo amidu.
SK1344-2000A 1998-03-16 1999-03-16 Postup na prípravu tetrapeptidu SK13442000A3 (sk)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
SE9800865A SE9800865D0 (sv) 1998-03-16 1998-03-16 New Process
PCT/SE1999/000414 WO1999047548A1 (en) 1998-03-16 1999-03-16 Process for the preparation of a tetrapeptide

Publications (1)

Publication Number Publication Date
SK13442000A3 true SK13442000A3 (sk) 2001-04-09

Family

ID=20410566

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SK1344-2000A SK13442000A3 (sk) 1998-03-16 1999-03-16 Postup na prípravu tetrapeptidu

Country Status (19)

Country Link
EP (1) EP1062231A1 (sk)
JP (1) JP2002506880A (sk)
KR (1) KR20010041888A (sk)
CN (1) CN1300293A (sk)
AU (1) AU2968899A (sk)
BR (1) BR9908765A (sk)
CA (1) CA2323678A1 (sk)
EE (1) EE200000540A (sk)
HU (1) HUP0102877A3 (sk)
ID (1) ID26938A (sk)
IL (1) IL138244A0 (sk)
IS (1) IS5612A (sk)
NO (1) NO20004613L (sk)
PL (1) PL343277A1 (sk)
SE (1) SE9800865D0 (sk)
SK (1) SK13442000A3 (sk)
TR (1) TR200002652T2 (sk)
WO (1) WO1999047548A1 (sk)
ZA (1) ZA200004376B (sk)

Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SE9903291D0 (sv) * 1999-09-15 1999-09-15 Astra Ab New process
WO2009076672A1 (en) * 2007-12-13 2009-06-18 Cytogel, Llc Advantageous salts of mu-opiate receptor peptides
CN104371002B (zh) * 2013-06-20 2017-10-10 重庆理工大学 一种非蛋白氨基酸抗菌肽及其应用
CN104478993B (zh) * 2013-06-20 2017-10-10 重庆理工大学 一种非蛋白氨基酸抗菌肽及其应用
CN103319568B (zh) * 2013-06-20 2015-01-21 重庆理工大学 一种非蛋白氨基酸抗菌肽及其应用
CN104783298A (zh) * 2015-03-24 2015-07-22 湖州珍贝羊绒制品有限公司 一种生物灭菌组合物及其纳米乳的制备与应用

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SE9503924D0 (sv) * 1995-08-18 1995-11-07 Astra Ab Novel opioid peptides
GB9516994D0 (en) * 1995-08-18 1995-10-18 Iaf Biochem Int Solution synthesis of peripheral acting analgestic opioid tetrapeptides

Also Published As

Publication number Publication date
NO20004613L (no) 2000-10-30
NO20004613D0 (no) 2000-09-15
HUP0102877A3 (en) 2002-02-28
IL138244A0 (en) 2001-10-31
JP2002506880A (ja) 2002-03-05
TR200002652T2 (tr) 2000-11-21
PL343277A1 (en) 2001-08-13
KR20010041888A (ko) 2001-05-25
HUP0102877A2 (hu) 2002-01-28
WO1999047548A1 (en) 1999-09-23
BR9908765A (pt) 2000-11-07
IS5612A (is) 2000-08-30
CA2323678A1 (en) 1999-09-23
ID26938A (id) 2001-02-22
SE9800865D0 (sv) 1998-03-16
CN1300293A (zh) 2001-06-20
ZA200004376B (en) 2001-10-31
EE200000540A (et) 2002-02-15
AU2968899A (en) 1999-10-11
EP1062231A1 (en) 2000-12-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP3778621B1 (en) Peptide synthesis method
CS247159B2 (en) Method of cis,endo-2-azabicyclo(3,3,1) octal-3-carboxyl acid's derivatives production
EP1212350A1 (en) A process for the preparation of h-tyr-d-ala-phe(f)-phe-nh 2?
CN108727468B (zh) 环肽、包含其的医药或化妆品组成物及其制备方法
KR100607556B1 (ko) (2Ｓ, 3ａＳ,7ａＳ)-1-[(Ｓ)-알라닐]-옥타히드로-1Ｈ-인돌-2-카르복실산유도체의 신규한 합성 방법 및 페린도프릴 합성에서의이의 용도
JPH0357118B2 (sk)
JPS5973574A (ja) 環状ジペプチド類
SK13442000A3 (sk) Postup na prípravu tetrapeptidu
HU182866B (en) Process for preparing new tetrapeptide derivatives
EP0460446B1 (de) Ein neues Kupplungsreagenz für die Peptidsynthese
US4490386A (en) Phosphate salts of 1-[2-[(1-alkoxycarbonyl-3-aralkyl)-amino]-1-oxoalkyl]octahydro-1H-indole-2-carboxylic acids, preparation of, and medical compositions thereof
WO2017113502A1 (zh) 一种长链化合物的制备方法
DE60301820T2 (de) Verfahren zur Synthese von Perindopril und seiner pharmazeutischen annehmbaren Salze
BG107234A (bg) Нов метод за синтез на естери на n-[(s)-1-карбоксибутил]-(s)- аланин и приложението му при синтеза на периндоприл
JP2659990B2 (ja) 結晶性キナプリルおよびその製法
JP2018177790A (ja) シクロペプチド、それを含む医薬または化粧用組成物、及びその製造方法
EP0475184A1 (de) Verfahren zur Herstellung von Peptiden mittels Festphasensynthese
US3903077A (en) Direct synthesis of dopamine amino acid amides
EP0410182A2 (en) A new technique for rapid peptide coupling
MXPA00008828A (en) Process for the preparation of a tetrapeptide
CZ288448B6 (en) Pentapeptide hydrochloride, processes of its preparation and intermediates therefor
Obase et al. New Antihypertensive Agents. II. Studies on New Analogs of 4-Piperidylbenzimidazolinones
FR2543546A1 (fr) Derives de gonadoreline contenant un groupe b-aspartyle, procede pour leur preparation et preparations pharmaceutiques les contenant
CZ20003342A3 (cs) Způsob přípravy tetrapeptidu
EP0252030A2 (en) Derivatives of L-amino acyl L-carnitine, process for their preparation and pharmaceutical compositions having hepatoprotecting activity containing same