SI9300313A - Derivati hidroksamske kisline - Google Patents

Description

Predloženi izum se nanaša na derivate hidroksamske kisline.

Derivati hidroksamske kisline, ki jih nudi predloženi izum, so spojine s splošno formulo

v kateri

Rl predstavlja 1 - 7C alkil·,

R² predstavlja vodik, 3-6C alkil ali skupino s formulo -(CH2)_n-aril ali -(CH2)_n-Het, kjer n stoji za 1 do 4 in Het predstavlja 5- ali 6- členski N-heterocikličen obroč, ki je (a) vezan preko N-atoma, (b) v danem primeru vsebuje N,O in/ali S kot dodatni ali dodatne heteroatom(e) v položaju ali položajih, različnih od sosednjega k veznemu N-atomu, (e) je substituiran z okso na enem ali obeh Catomih, sosednjih k veznemu N-atomu in (d) je v danem primeru benz-sklenjen ali v danem primeru substituiran na enem ali več drugih C atomih z 1-6C alkilom ali okso in/ali na morebitnem ali morebitnih dodatnih N atomih z 1-6C alkilom;

R³ predstavlja karakteristično skupino naravne ali nenaravne (sintetične) a-amino kisline, v kateri je morebitna prisotna funkcionalna skupina lahko zaščitena, s pridržkom, da R³ ne predstavlja vodika;

predstavlja karboksil, (1-6C alkoksijkarbonil, karbamoil ali (1-6C alkiljkarbamoil; R^ predstavlja karakteristično skupino naravno nastopajoče α-amino kisline, v kateri je morebitna prisotna funkcionalna skupina lahko zaščitena;

R^ predstavlja vodik; ali

R4, r5 in r6 vsak posamezno predstavlja vodik ali 1-6C alkil;

in njihove farmacevtsko sprejemljive soli.

Spojine s formulo I imajo dragocene farmakološke lastnosti. So zlasti inhibitorji matrike metaloproteinaze in se jih da uporabiti pri kontroli ali preventivi degenerativnih sklepnih bolezni, kot revmatoidnega artritisa in osteoartritisa, ali pri zdravljenju invazivnih tumorjev, ateroskleroze ali multiple skleroze.

Predmeti predloženega izuma so spojine s formulo 1 in njihove farmacevtsko sprejemljive soli same in za uporabo kot terapevtsko učinkovite snovi; postopek za pripravo navedenih spojin in soli; intermediati, ki so koristni pri navedenem postopku; zdravila, ki vsebujejo navedene spojine in soli ter priprava teh zdravil; ter uporaba navedenih spojin in soli pri kontroli ali preventivi bolezni ali pri izboljšanju zdravja, zlasti pri kontroli ali preventivi degenerativnih sklepnih bolezni, ali pri zdravljenju invazivnih tumorjev ali ateroskleroze, ali za pripravo zdravila za kontrolo ali preventivo degenerativnih sklepnih bolezni ali za zdravljenje invazivnih tumorjev, ateroskleroze ali multiple skleroze.

1-6C ali 1-7C alkilna skupina sama ali v kombinaciji, npr. v alkoksi, vsebuje prednostno do 4 atome ogljika. Je lahko ravna ali razvejana, npr. metil, etil, n-propil, izopropil, nbutil, izobutil, sek.butil, terc.butil ipd. Metoksikarbonil, etoksikarbonil, npropoksikarbonil, izopropoksikarbonil ipd. so primeri za (1-6C alkoksijkarbonilne skupine. (1-6C alkiljkarbamoilna skupina je lahko npr. metilkarbamoil, etilkarbamoil, n-propilkarbamoil, izopropilkarbamoil ipd. Arilni del -(CH2)_n- arilne skupine je lahko fenil ali naftil, ki je v danem primeru substituiran, npr. s halogenom, kot fluorom klorom, bromom ali jodom, 1-6C alkilom, 1-6C alkoksi, trifluorometilom ipd.

Karakteristična skupina naravne ali nenaravne (sintetične ) α-amino kisline je skupina R v naravni ali nenaravni α-amino kislini s formulo H2N-CH(R)-C00H. Primeri za take karakteristične skupine, ki so izvedene iz naravnih α-amino kislin, so naslednje, pri čemer navajamo odgovarjajočo naravno α-amino kislino za njo v oklepaju : vodik (glicin), metil (alanin), izopropil (valin), izobutil (levcin), benzil (fenilalanin), phidroksibenzil (tirozin), hidroksimetil (serin), merkapto metil (cistein), 1-hidroksietil (treonin), 2-metiltioetil (metionin), karboksimetil (aspartinska kislina), 2-karboksietil (glutaminska kislina) in 4-aminobutil (lizin). Primeri za take karakteristične skupine, izvedene iz nenaravnih (sintetičnih) α-amino kislin so naslednje, pri čemer je odgovarjajoča nenaravna α-amino kislina navedena za njo v oklepaju : etil (a-amino-nmaslena kislina), n-propil (α-amino-n-pentanojska kislina), n-butil (a-amino-nheksanojska kislina), terc.-butil (α-amino-neoheksanojska kislina), neopentil (a-aminoneoheptanojska kislina), n-heptil (α-amino-n-nonanojska kislina), cikloheksilmetil (cikloheksilalanin), fenil (α-amino-fenilocetna kislina), 2-fenil-etil (homofenilalanin), 1-naftil (α-amino-l-naftilocetna kislina), 2-naftil (a-amino-2-naftilocetna kislina), fenetil (a-amino-3-fenilmaslena kislina), α-metilbenzil (0-metilfenilaIanin), a,adimetilbenzil (β,β-dimetilfenilalanin) ipd.

Vse funkcionalne (t.j. reaktivne) skupine, prisotne v R³ in R⁵, so lahko zaščitene na način, ki je znan sam po sebi v peptidni kemiji. Tako npr. amino skupino zaščitimo s terc.butoksikarbonilno, benziloksikarbonilno, formilno, tritilno, trifluoracetilno, 2(bifenilil) izopropoksikarbonilno skupino ali izoborniloksikarbonilno skupino v obliki ftalimido skupine. Karboksi skupina se da zaščititi npr. v obliki zlahka cepljivega estra, kot metil-, etil-, terc.butil-, benzil estra ali podobnega estra. Zaščita hidroksi skupine je lahko v obliki etra kot metil-, terc.butil-, benzil- ali tetrahidropiranil etra, ali v obliki estra kot acetata. Merkapto skupino se da zaščititi npr. s terc.butilno, benzilno ali podobno skupino.

Spojine s formulo 1 tvorijo farmacevtsko sprejemljive soli z bazami, kot so hidroksidi alkalijskih kovin (npr. natrijev hidroksid in kalijev hidroksid), hidroksidi zemljoalkalijskih kovin (npr. kalcijev hidroksid in magnezijev hidroksid), amonijev hidroksid ipd. Spojine s formulo 1, ki so bazične, tvorijo farmacevtsko sprejemljive soli s kislinami. Kot take soli ne pridejo v poštev samo soli z anorganskimi kislinami kot hidrohalogenidne kisline (npr. klorovodikova in bromovodikova kislina), žveplova kislina, solitrna kislina, fosforova kislina itd., ampak tudi soli z organskimi kislinami kot ocetno, vinsko, jantarno, fumarovo, maleinsko, jabolčno, salicilno, citronsko, metansulfonsko in p-toluensulfonsko kislino itd.

Spojine s formulo 1 vsebujejo vsaj dva asimetrična atoma ogljika in zato lahko obstajajo kot optično aktivni enantiomeri, kot diastereoizomeri ali kot racemati. S predloženim izumom naj bodo obsežene vse te oblike.

V spojinah s formulo I zgoraj R¹ prednostno predstavlja etil, izopropil, n-butil ali nheksil, zlasti etil.

R² predstavlja prednostno vodik, metil, skupino s formulo -(CH2)_n-anl, kjer je arilna skupina fenil, ali skupino s formulo -(CH2)_n-Het, kjer ima n prej navedeni pomen in Het predstavlja 5-ali 6- členski n-heterocikličen obroč, ki v danem primeru vsebuje kot dodaten ali dodatne hetero atom(e) en ali dva N atoma, en N atom in en O atom ali en O atom. Het prednostno predstavlja skupino s formulo

v katerih

R? in R8 vsakokrat pomenita vodik ali skupaj predstavljata dodatno vez ali preostanek sklenjenega benzenskega obroča;

R^ pomeni vodik ali 1-6C alkil;

X pomeni -CO-, -CH2-, -CH(J-6Calkil), -C(1-6Calkil)₂·, -NH-, -N(1-6Calkil)ali -O; in

Υ pomeni -Ο-, -NH- ali -N(1-6C alkil)-.

Pri posebno prednostni izvedbi predstavlja Het skupino s formulo (b), zlasti ftalimido, ali (c) zlasti 3-metil-2,5-diokso-l-imidazolidinil.

Glede simbola n le-ta prednostno stoji za 1, če predstavlja skupino s formulo -(CH2)_n-Het in za 3, če predstavlja skupino s formulo -(CH2)_n-aril.

R^ prednostno predstavlja metil, izobutil, terc.butil, zaščiten 4-aminobutil, neopentil, n-heptil, cikloheksilmetil, benzil, α-metilbenzil ali a,o:-dimetilbenzil. 4-Ftalimidobutil je prednostna zaščitena 4-aminobutilna skupina.

Prednostno predstavlja R^ (1-6C alkiljkarbamoil, zlasti metilkarbamoil ali etilkarbamoil, R^ predstavlja izobutil in predstavlja vodik, ali R^, r5 jn R⁶ vsakokrat predstavljajo vodik, ali l3 in R^ vsakokrat predstavljata vodik in R^ predstavlja terc.butil, ali R^, r5 jn r6 vsakokrat predstavljajo metil.

Najbolj prednostne spojine s formulo I so:

[4-(N-hidroksiamino)-2-(R ali S)-heptilsukcinil]-L-leveil-L-levcin etilamid, [4-(N-hidroksiamino)-2-(R ali S)-nonilsukcinilj-L-levcil-L-levcin etilamid, [4-(N-hidroksiamino)-2-(R ali S)-heptil-3(S)-metilsukcinil]-L-levcil-L-levcin etilamid, [4-(N-hidroksiamino)-2-(R)-heptil-3(R ali S)-(ftalimidometil)sukcinil]-L-levcil-L-levcin etilamid, [4-(N-hidroksiamino)-2-(RS)-nonilsukcinil]-L-terc.butilglicin metilamid, [4-(N-hidroksiamino)-2-(RS)-heptilsukcinil]-L-fenilalanin metilamid, [4-(N-hidroksiamino)-2-(R)-heptil-3(R ali S)-(ftalimidometil)sukcinil]-L-terc.butilglicin metilamid in [4-(N-hidroksiamino)-2-(R)-heptil-3(R ali S)-(3-fenilpropil)sukcinil]-L-levcil-L-levcin etilamid.

Primeri za druge zanimive spojine s formulo 1 so:

[4-(N-hidroksiamino)-2-(RS)-heptilsukcinil]-L-levcin metilamid, [4-(N-hidroksiamino)-2-(RS)-heptilsukcinil]-L-levcin neopentilamid, [4-(N-hidroksiamino)-2-(RS)-hepti]sukcinil]-L-alanil-L-levcin etilamid, [4-(N-hidroksiamino)-2-(RS)-heptilsukcinil]-L-(N^fi-ftaloil)’lizil-L-levcin etilamid, [4-(N-hidroksiamino)-2-(RS)-undecilsukcinil]-L-levcil-L-levcin etilamid, [4-(N-hidroksiamino)-2-(RS)-heptilsukcinil]-L-fenilalanil-L-levcin etilamid, [4-(N-hidroksiamino)-2-(RS)-heptilsukcinil]-L-nonalil-L-levcin etilamid, [4-(N-hidroksiamino)-2-(RS)’heptilsukcinil]-L-fenilalanin terc.butilamid, [4-(N-hidroksiamino)-2*(RS)-heptilsukcinil]-L-terc.butilglicin metilamid, [4-(N-hidroksiamino)-2-(RS)-heptilsukcinil]-L-neopentilglicin metilamid, ^-(N-hidroksiaminoj^RSj-heptilsukcinilj-L-homofenilalanil-L-levcin etilamid, [4-(N-hidroksiamino)-2-(RS)-heptiIsukcinil]-L-cikloheksilalanin metilamid, [4-(N-hidroksiamino)-2-(RS)-izooktilsukcinil]-L-fenilalanin metilamid, [4-(N-hidroksiamino)-2-(R)-heptilsukcinil]-L-neopentilglicin metilamid, [4-(N-hidroksiamino)'2-(R)-heptilsukcinil]-(D ali L)-0,0-dimetilfenilalanin metilamid, [4-(N-hidroksiamino)-2-(R)-heptilsukcinil]-(D ali L)-treo-/?-metilfenilalanin metilamid, [4-(N-hidroksiamino)-2-(R)-heptilsukcinil]-DL-eritro-3-metilfenilalanin metilamid in [4-(N-hidroksiamino)-2-(R)-heptil-3(R ali S)-[(3-metil-2,5-diokso-l-imidazolidinil)metiljsukcinilj-L-levcil-L-levcin etilamid.

V skladu s postopkom, ki ga nudi predloženi izum, pripravimo spojine z zgornjo formulo I in njihove farmacevtsko sprejemljive soli tako, da (a) katalitsko hidrogeniramo spojino s splošno formulo

(Π) v kateri imajo R¹, R², R^, R⁴, R$ in R^ prej navedeni pomen in Bz predstavlja benzil, ali (b) kislina s splošno formulo

(ΠΙ) v kateri imajo Rl, R^, r3, r4, r5 }_n r6 p_rej navedeni pomen, ali njen aktiviran ester reagira s spojino s splošno formulo

H₂N-OZ (IV) v kateri Z predstavlja vodik, tri( 1-6C alkil)silil ali difenil( 1-6C alkil)silil, in po potrebi odcepimo morebitno difenil(l-6C alkil)sililno skupino, prisotno v reakcijskem produktu, in po želji pretvorimo dobljeno spojino s formulo I v farmacevtsko sprejemljivo sol.

Katalitsko hidrogeniranje spojine s formulo II v skladu z izvedbo (a) postopka lahko izvedemo na znan način, npr. v inertnem organskem topilu ob uporabi vodika v prisotnosti katalizatorja plemenite kovine. Primerna inertna organska topila so npr. 1-6C alkanoli kot metanol, etanol itd. Glede katalizatorja je le-ta lahko npr. platinov, paladijev ali rodijev katalizator, kije lahko nanešen na primernem nosilnem materialu. Paladij na oglju je prednosten katalizator. Temperatura in tlak nista kritična, čeprav zaradi prikladnosti izvedemo katalitsko hidrogeniranje prednostno pri sobni temperaturi in pri atmosferskem tlaku.

Reakcijo kisline s formulo 111 ali njenega aktiviranega estra s spojino s formulo IV v skladu z izvedbo (b) postopka lahko izvedemo na znan način. Tako npr. pri uporabi kisline lahko izvedemo reakcijo prikladno v inertnem organskem topilu kot dimetilformamidu ali podobnem, ob uporabi hidroksibenzotriazola v prisotnosti kondenzacijskega sredstva kot l-etil-3-(3-dimetilaminopropil)karbodiimid hidroklorida pri okoli 0 °C do okoli sobne temperature. Pri uporabi aktiviranega estra kisline s formulo III lahko reakcijo prikladno izvedemo v inertnem organskem topilu kot tetrahidrofuranu pri okoli 0 °C do sobne temperature. Prednostne spojine s formulo IV so tiste v katerih Z predstavlja vodik, terc.butil-dimetilsilil ali terc.butil-difenilsilil. Če uporabimo spojino s formulo IV, v kateri Z predstavlja tri(l-6C alkil)silil to skupino odcepimo med reakcijo in obdelavo ter direktno dobimo spojino s formulo I. Po drugi strani pa pri uporabi spojine s formulo IV, v kateri Z predstavlja diaril-( 1-6C alkil)silil, ta skupina ostane v reakcijskem produktu in jo je zatem potrebno odcepiti na znan način, npr. s pomočjo fluoridnih ionov.

Spojine s formulo I lahko pretvorimo v farmacevtsko sprejemljive soli z obdelavo z bazami in bazične spojine s formulo I se dajo pretvoriti v farmacevtsko sprejemljive soli z obdelavo s kislinami. Take obdelave lahko izvedemo na običajen način.

Spojine s formulama II in III, uporabljene kot izhodni materiali pri postopku, so nove in so tudi predmet predloženega izuma.

Pripraviti se jih da npr. s kondenzacijo spojine s splošno formulo

(V)

R² kjer imata Rl in R² prej navedeni pomen in Rl® predstavlja zaščitno skupino, s spojino s splošno formulo

R* 'CO-NH

R⁵⁰ (VI) kjer ima r6 prej navedeni pomen in imajo R³^, R⁴0 in R^O pomene, navedene prej za R³, R⁴ oz. R³, vendar je vsaka morebitno prisotna funkcionalna skupina zaščitena, z odcepitvijo zaščitne skupine, označene z R^, iz kondenzacijskega produkta s splošno formulo

kjer imajo R², r6, RlO, r30 r40 in r50 prej navedeni pomen, da dobimo spojino s splošno formulo

(IHa) kjer imajo R¹, R², R⁶, R³⁰, R⁴⁰ in R³® prej navedeni pomen, in (i) če je zahtevana spojina s formulo Π, kondenziramo spojino s formulo lila, v danem primeru pred ali po odcepitvi ene ali več zaščitnih skupin, prisotnih v r30, r40 in r50, z O-benzilhidroksilaminom, ali (ii), če je zahtevana spojina s formulo III, v kateri ena ali več funkcionalnih skupin, prisotnih v R30, r40 j_n R50, ni zaščitena, z odcepitvijo ene ali več zaščitnih skupin, prisotnih v spojini s formulo lila.

Simbol, označen z RW v formuli (V), lahko predstavlja vsako običajno karboksi zaščitno skupino, npr. metil, etil, benzil ali prednostno terc.butil.

Kondenzacijo spojine s formulo V s spojino s formulo VI lahko izvedemo po metodah, ki so same po sebi znane v peptidni kemiji; npr. po metodi s kislinskim halidom, kislinskim azidom, kislinskim anhidridom, aktiviranim amidom, mešanim anhidridom ogljikove kisline ali aktiviranim estrom.

Odcepitev zaščitne skupine R^ iz kondenzacijskega produkta s formulo VII lahko izvedemo na sam po sebi znan način, npr. s hidrolizo, ali v primeru terc.butilne zaščitne skupine, z obdelavo z brezvodno trifluorocetno kislino. Upoštevati je treba, da se da eno ali več zaščitnih skupin, prisotnih v R^O, r40 j_n r50 istočasno odcepiti, v odvisnosti od narave takih skupin.

Reakcijo spojine s formulo lila z O-benzilhidroksilaminom lahko izvedemo na običajen način; npr. tako, kot je prej opisano v zvezi s kondezacijo spojine s formulo V s spojino s formulo VI.

Cepitev zaščitnih skupin, prisotnih v R^O, r40 j_{n R}50 v zgornjem opisu priprave izhodnih materialov s formulama II in III, lahko izvedemo po metodah, znanih samih po sebi iz peptične kemije; npr. z umiljenjem, obdelavo z brezvodno trifluorocetno kislino ali hidrogenolizo, v skladu z naravo zaščitne skupine.

Kisline s formulo III lahko pretvorimo v ustrezne aktivirane estre, ki so tudi novi in tvorijo nadaljnji predmet predloženega izuma, na sam po sebi znan način, npr. z reakcijo z n-hidroksisukcinimidom v prisotnosti dicikloheksilkarbodiimida, da dobimo N-hidroksisukcinimidni ester.

Spojine z zgornjima formulama V in VI, v kolikor nista znani spojini ali analoga znanih spojin, lahko dobimo tako, kot je opisano v Primerih v nadaljevanju ali v analogiji z njimi.

Kot smo že omenili, so derivati hidroksamske kisline, ki jih nudi predloženi izum, inhibitorji matrike metaloproteinaze. Ta aktivnost proti stromelizinu in gelatinazi, dveh tovrstnih encimih, se da prikazati z uporabo testnih postopkov, opisanih v nadaljevanju.

Stromelizin (Test A j

Prostromelizin smo očistili iz gojilnega medija humanega fibroblasta z afinitetno kromatografijo s protitelesom za prostromelizin. [Ganja-Smith Z, Nagase H, Woessner

J F Jr., Biochem J. 1989, vol 285 (1) str. 115-119]. Latentni pro-encim smo aktivirali z inkubacijo s tripsinom (5mg/ml) pri 25 °C v 2 urah in po tem času smo tripsin inaktivirali z uporabo desetkratnega prebitka tripsinskega inhibitorja iz soje. Inhibitorsko aktivnost zgoraj omenjenih derivatov hidroksamske kisline smo določili z uporabo ^C-acetiliranega b-kazeinskega substrata. Stromelizin (5 nM) smo dodali k raztopini substrata (4mg/ml) v 25 mM Tris HCl pufru, pH 7.5, ki je vseboval 10 mM CaCl2 in 0.05 % Brij^R. Dobljeno raztopino smo inkubirali 20 ur pri 37 °C. Encimsko digestijo substrata smo končali z dodatkom 45% triklorocetne kisline in oborjen, nedigerirani substrat peletirali s centrifugiranjem pri 10 000 g v teku 0.25 ur. Vrhnji sloj (supernatant) smo odsesali in določili aktivnost s tekočinsko scintilacijsko spektrometrijo. IC50 je tista koncentracija derivata hidroksamske kisline pri encimski digestiji, ki zmanjša cepitev substrata na 50 % tiste, ki jo doseže sam encim.

Stromelizin (Test B)

Latentni pro-encim (30 Mg/ml) smo aktivirali z inkubacijo s tripsinom (0.5 Mg/ml) v teku 30 minut pri 25 °C in nato inaktivirali tripsin z uporabo dvajsetkratnega prebitka tripsinskega inhibitorja. Inhibitorsko aktivnost derivatov hidroksamske kisline smo določili z uporabo fluorescenčnega peptidnega substrata (7-metoksikumarin-4il)acetil-L-prolil-L-levcil-L-alanil-L-nonalil-[3-(2,4-dinitrofenil)-L-2,3-diaminopropil]L-arginil-L-arginin. Stromelizin (končna koncentracija 35 ng/ml) smo dodali raztopini substrata (4mM) in spremenljive koncentracije hidroksilaminskega derivata v 50 mM Tris HCl pufru, pH 7.5, ki vsebuje 200 mM NaCl, lOmM CaCl2, 0.05 % Brij^R35 in 5% metanola. To raztopino smo inkubirali 16 ur pri 37 °C. Tvorbo produkta smo ugotavljali s spektrofluorometrijo z uporabo ekseitacijske valovne dolžine 325 nm in emisijske valovne dolžine 395 nm. IC50 je tista koncentracija hidroksilaminskega derivata, ki zmanjša cepitev substrata na 50 % tiste, ki bi jo dosegli s samim encimom.

Gelatinaza (Test CJ

In vitro inhibitorsko aktivnost hidroksilaminskih derivatov proti gelatinazi B, dobljeni iz humanih nevtrofilcev, se da dokazati z uporabo naslednjega testnega postopka. Pro-gelatinazo B smo očistili iz humanih nevtrofilcev, tako, da smo najprej ločili nevtrofilce iz humane krvi z zgostilnim centrifugiranjem in odsedanjem dekstrana. Odločene nevtrofilce smo razbili s skupno obdelavo z 0.05% Tritona X-100^R in sonifikacijo. Delce celic smo odstranili s centrifugiranjem z veliko hitrostjo. Pro12 gelatinazo B smo očistili iz supernatanta z afinitetno kromatografijo z želatino agarozo, vezani pro-encim pa smo eluirali z afinitetne matrike z izpiranjem z 10 % dimetilsulfoksidom/pufrom. Analiza očiščenega materiala je odkrila pas enega samega proteina z molekulsko maso 95 kDa pri vizualizaciji s SDS-Page. Gelatinazo B smo inkubirali čez noč pri 37 °C z 1 mM p-aminofenil-živosrebrovega acetata. Inhibitorsko aktivnost prisotnih derivatov hidroksamina smo ugotavljali z uporabo sintetičnega substrata N-acetil-Pro-Gln-Gly-Leu-Leu-Gly etil estra za ta encim. Gelatinazo smo dodali k raztopini 0.25 mM substrata v 50 mM boratnega pufra (pH 7.5), ki vsebuje 1 mM kalcijevega klorida in znano koncentracijo hidroksilaminskega derivata. Nastalo raztopino smo inkubirali 16 ur pri 37 °C. Encimsko aktivnost smo končali z dodatkom enakega volumna 2 % (mas./vol.) raztopine natrijevega hidrogenkarbonata v 50 % vodnega metanola, ki vsebuje 0.05 % (mas./vol.) pikrilsulfonske kisline. Dobljeno raztopino smo inkubirali pri 37 °C za nadaljnjo uro in reakcijo nato končali in stabilizirali z nakisanjem z IN klorovodikovo kislino. Koncentracijo tvorjenega trinitrofenil-Leu-Leu-Gly etil estra smo določili s spektrofotometrijo pri 335 nm.

IC50 je tista koncentracija hidroksilaminskega derivata, ki zmanjša cepitev substrata na 50 % vrednosti, dosežene s samim encimom.

Rezultati, dobljeni pri zgornjih testih z reprezentančnimi derivati hidroksamske kisline, kijih nudi predloženi izum, so zbrani v naslednji Tabeli:

Tabela

Spojina s formulo I	Test A IC5o(mol)	Test B 1C5O (mol)	Test C IC50 (mol)
A	3.3 x IO8	1.25 x JO'8	3.2 x IO'7
B	2.6 x IO'8	9.3 χ 10'9	5.0x IO8
C	1.1 χ 1O8	2.3 x IO'9	-
D	1.0 x K)'8	5.9x IO’10*	-
E	-	1.8 x 10'8	1.5 x IO'9*
F	-	2.2 χ IO’8	3.2 x IO’9*
G	-	1.2 x IO’9	9.0 χ ]0'1θ*
H	-	6.6 χ 1()-1()ίί	-

Zvezdica* označuje, da je bila vrednost IC50 omejena s skupno porabo (deplecijo) encima.

Spojina A: [4-(N-hidroksiamino)-2-(R ali S)-heptilsukcinil]-L-levcil-L-levcin etilamid, Spojina B: [4-(N-hidroksiamino)-2-(R ali S)-nonilsukcinil]-L-levcil-L-levcin etilamid, Spojina C: [4-(N-hidroksiamino)-2-(R ali S)-heptil-3(S)-metilsukcinil]-L-levcil-L-levcin etilamid,

Spojina D: [4-(N-hidroksiamino)-2-(R)-heptil-3(R ali S)-(ftalimidometil)sukcinil]-Llevcil-L-levcin etilamid,

Spojina E: [4-(N-hidroksiamino)-2-(RS)-nonilsukcinil]-L-terc.butilglicin metilamid, Spojina F: [4-(N-hidroksiamino)-2-(RS)-heptilsukcinil]-L-fenilalanin metilamid, Spojina G: [4-(N-hidroksiamino)-2-(R)-heptil-3(R ali S)-(ftalimidometil)sukcinil]-Lterc.butilglicin metilamid,

Spojina H: [4-(N-hidroksiamino)-2-(R)-heptil-3(R ali S)-(3-fenilpropil)sukcinil]-Llevcil-L-levcin etilamid.

Spojine s formulo I in njihove farmacevtsko sprejemljive soli lahko uporabimo kot zdravila, npr. v obliki farmacevtskih pripravkov. Farmacevtske pripravke lahko dajemo oralno, npr. v obliki tablet, prevlečenih tablet, dražejev, trdih in mehkih želatinskih kapsul, raztopin, emulzij ali suspenzij. Vendar pa se jih da dajati tudi rektalno, npr. v obliki supozitorijev, ali parenteralno, npr. v obliki injekcijskih raztopin.

Za pripravo farmacevtskih pripravkov lahko formuliramo spojine s formulo I in njihove farmacevtsko sprejemljive soli s terapevtsko inertnimi anorganskimi ali organskimi nosilci. Kot take nosilce za tablete, prevlečene tablete, dražeje in trde želatinske kapsule, lahko uporabimo npr. laktozo, koruzni škrob ali njihove derivate, smukec, stearinsko kislino ali njene soli. Primerni nosilci za mehke želatiske kapsule so npr. rastlinska olja, voski, maščobe, poltrdni in tekoči polioli ipd. V odvisnosti od narave učinkovite sestavine na splošno niso potrebni nosilci pri mehkih želatinskih kapsulah. Primerni nosilci za pripravo raztopin in sirupov so npr. voda, polioli, saharoza, invertni sladkor, glukoza ipd. Primerni nosilci za pripravo injekcijskih raztopin so npr. voda, alkoholi, polioli, glicerin, rastlinska olja ipd. Naravna in strjena olja, voski, maščobe, poltekoči polioli ipd. so primerni nosilci za pripravo supozitorijev.

Farmacevtski pripravki lahko vsebujejo tudi konzervanse, stabilizatorje, omakala, emulgatorje, sladila, barvila, snovi za izboljšanje arome, soli za nastavitev osmotskega tlaka, pufre, prevlečna sredstva ali antioksidante.

Zdravila, ki vsebujejo spojino s formulo I ali njeno farmacevtsko sprejemljivo sol in terapevtsko sprejemljiv nosilec, kot tudi postopek za pripravo takih zdravil, so prav tako predmeti predloženega izuma. Ta postopek obsega pomešanje spojine s formulo I ali njene farmacevtsko sprejemljive soli s terapevtsko inertnim nosilnim materialom in formuliranje zmesi v pripravek za galensko dajanje.

Kot smo že omenili, se da spojine s formulo I in njihove farmacevtsko sprejemljive soli uporabiti pri kontroli ali preventivi bolezni, zlasti pri kontroli ali preventivi degenerativnih bolezni sklepov ali pri zdravljenju invazivnih tumorjev, ateroskleroze ali multiple skleroze. Doziranje lahko variira v širokih mejah in bo seveda prilagojeno individualnim potrebam v vsakem posameznem primeru. Na splošno bo pri dajanju odraslim primerna dnevna doza od okoli 5 mg do okoli 30 mg, prednostno od okoli 10 mg do okoli 15 mg, čeprav se da zgornjo mejo tudi preseči, če bi se to izkazalo kot koristno. Dnevno dozo lahko dajemo v enem samem doziranju ali s porazdeljenimi doziranji.

Naslednji Primeri pojasnjujejo predloženi izum. Strukturo produktov smo potrdili z NMR spektroskopijo in masno spektroskopijo. Sestava tankoslojnih kromatografskih sistemov je bila naslednja:

Sistem A: Kloroforrmmetanokocetna kislina:voda 120:15:3:2;

Sistem B: kloroforrmmetanokocetna kislina:voda 240:24:3:2.

Nadalje so vse temperature navedene v stopinjah Celzija.

Primer 1

0.10 g (0.17 mmolov) [4-(N-benziloksiamino)-2(R ali S)-heptilsukcinil]-L-levcilL-levcin etilamida (izomer 1) v 10 ml metanola smo hidrogenirali 1 uro v prisotnosti

0.05 g 5 % paladija na oglju. Zmes smo filtrirali, filtrat uparili in ostanek izprali z dietil etrom in sušili v vakuumu, da smo dobili 0.083 g (98%) [4-(N-hidroksiamino)-2(R ali

S)-heptilsukcinil]-L-levcil-L-levcin etilamida kot higroskopno belo trdno snov;

Rf (sistem A) 0.54; MS:(M + H) + 485.

Analiza za C25H48N4O5 0.6H₂O:

Izrač.: C 60.60 H 10.01 N 11.31%

Ugot.: C 60.62 H 9.75 N 11.39% [4-(N-benziloksiamino)-2(R ali S)-heptilsukcinil]-L-levcil-L-levcin etilamid, uporabljen kot izhodni material, smo pripravili kot sledi:

A) 25.95 g (0.15 molov) DL-a-amino-nonanojske kisline smo raztopili v 900 ml ocetne kisline ob segrevanju na 40 °C. 20.7 g (0.3 mole) natrijevega nitrita smo dodajali po deležih v teku 6 ur, nakar smo odstranili segrevanje po dodatku okoli ene tretjine natrijevega nitrita. Zmes smo mešali 16 ur pri sobni temperaturi, uparili, dodali vodo in dobljeno olje ekstrahirali z dietil etrom (2 x 200 ml). Združene etrne ekstrakte smo sušili nad brezvodnim natrijevim sulfatom in uparili, da smo dobili 31.9 g bistrega rjavega olja. To olje smo raztopili v 150 ml metanola, dodali raztopino 18 g natrijevega hidroksida v 150 ml vode in zmes mešali 2 uri pri sobni temperaturi. Metanol smo uparili, dodali vodo in raztopino nakisali z 38 ml koncentrirane klorovodikove kisline. Produkt smo ekstrahirali z dietiletrom (2 x 150 ml) in ekstrakte sušili nad magnezijevim sulfatom in uparili, da smo dobili trdno snov. Prekristalizacija iz 120 ml 60 do 80° petrol etra je dala 20.58 g (79 %) 2(RS)-hidroksinonanojske kisline s tal. pri 67 - 69 °C.

(B) 21.4 g (0.123 molov) 2(RS)-hidroksinonanojske kisline smo raztopili v 240 ml etil acetata. Dodali smo 17.3 ml (0.123 molov) trietilamina in 14.8 ml (0.123 molov) benzil bromida in zmes segrevali ob refluksu 3 ure. Zmes smo ohladili, filtrirali, izprali z 2M klorovodikovo kislino, vodo in raztopino 5 % natrijevega hidrogen karbonata in nato sušili nad brezvodnim magnezijevim sulfatom. Uparjenje topila je dalo 25.4 g (78 %) benzil 2(RS)-hidroksinonanoata kot olje; Rf (etil acetat/heksan 1:1) 0.68.

(C) Raztopino 24.3 g (92 mmolov) benzil 2(RS)-hidroksinonanoata in 8.9 ml (110 mmolov) piridina v 150 ml suhega diklorometana smo dodajali ob mešanju v teku 0.5 ur k raztopini 18.6 ml (110 mmolov) anhidrida trifluormetansulfonske kisline v 200 ml suhega diklorometana pri 0 °C. Zmes smo mešali pri 0 °C nadaljnjo uro. Dodali smo 3.7 ml (46 mmolov) piridina in raztopino 7.7 ml (46 mmolov) anhidrida trifluorometansulfonske kisline v 100 ml suhega diklorometana. Zmes smo mešali 1 uro pri °C, izprali z vodo (2 x 100 ml), sušili nad magnezijevim sulfatom in uparili, daje dala olje. Kromatografija na silikageiu ob uporabi etil acetata/heksana (1:9) za elucijo je dala 26.7 g (73%) benzil 2(RS)-trifluormetansulfoniloksinonanoata;

Rf (heksan/etil acetat 3:1) 0.66.

(D) Raztopino 26.5 g (67 mmolov) benzil 2(RS)-trifluormetansulfoniloksinonanoata v 100 ml suhega diklorometana smo dokapavali k suspenziji 2.11 g (70 mmolov) 80 % natrijevega hidrida in 16.75 g (67 mmolov) benzil terc.butil malonata v 170 ml suhega dimetilformamida pri 0 °C. Zmes smo mešali 2 uri pri 0 °C in 16 ur pri sobni temperaturi, razredčili z diklorometanom, izprali zapored z vodo, 5 % raztopino natrijevega hidrogen karbonata in nasičeno raztopino natrijevega klorida, sušili nad magnezijevim sulfatom in uparili, da smo dobili olje (34.6 g), ki je vsebovalo dibenzil 3terc.butoksikarbonil-2(RS)-heptilsukcinat; Rf (etil acetat/heksan 3:1) 0.49. Olje smo raztopili v 540 ml izopropanola in hidrogenirali 2 uri v prisotnosti 0.5 g 5 % paladija na oglju. Zmes smo filtrirali, filtrat uparili, dodali toluen in zmes uparili, da smo odstranili sledove izopropanola. Ostanek (27.8 g ) v 400 ml toluena in 9.1 ml (65 mmolov ) trietil amina smo vzdrževali 2 uri ob refluksu, uparili in ostanek raztopili v etil acetatu. Raztopino smo izprali z 0.5 M klorovodikovo kislino (2 x 80 ml) in vodo, sušili nad magnezijevim sulfatom in uparili, da smo dobili 17.55 g (96 %) 4-terc.butil hidrogen 2(RS)-heptilsukcinata; Rf (etil acetat) 0.63; MS: (M + H)⁺ 273.

(E) 1.5 g (4 mmolov) N-terc.butoksikarbonil-L-levcil-L-levcin etilamida smo raztopili v 20 ml 4M hidrogen klorida v etil acetatu, mešali pri sobni temperaturi 0.75 ur, uparili in ostanek sušili v vakuumu. Ostanek v 10 ml suhega dimetilformamida smo obdelali pri 0 °C zapored z 0.51 ml (4 mmoli ) N-etilmorfolina, raztopino 1.1 g (4 mmole) 4terc.butil hidrogen 2(RS)-heptilsukcinata v 5 ml diklorometana, 0.82 g (6 mmolov) hidroksibenzotriazola in 0.92 g (4.4 mmole) dicikloheksilkarbodiimida. Zmes smo mešali 1 uro pri 0 °C in 16 ur pri sobni temperaturi. Dodali smo nekaj kapljic 2dimetilaminoetilamina, suspenzijo hladili na 0 °C 3 ure, filtrirali in uparili. Ostanek smo prevzeli v etil acetatu, izprali zapored s 5% raztopino citronske kisline, vodo, 5% raztopino natrijevega hidrogen karbonata in nasičeno raztopino natrijevega klorida, sušili nad magnezijevim sulfatom in uparili. Kromatografija na silikagelu ob uporabi etil acetata/heksana (2:1) za elucijo je dala 1.5 g (71 %) [4-terc.butoksi 2(RS)heptilsukcinil]-L-levcil-L-levcin etilamida kot belo trdno snov;

Rf (diklorometan/-metanol 19:1) 0.3; MS: (M + H) ⁺ 526.

(F) 0.8 g (1.5 mmolov) [4-terc.butoksi 2(RS)-heptilsukcinil]-L-levcil-L-levcin etilamida smo raztopili v 15 ml trifluorocetne kisline in raztopino mešali 2 uri ter uparili. Ostanek smo trikrat uparili s toluenom, nato pa raztopili v 10 ml suhega diklorometana in ohladili na 0 °C. Dodali smo 0.37 ml (4.5 mmolov) piridina in 0.64 g (1.5 mmolov) di(lbenzotriazolil)karbonata (70%) in zmes mešali 1 uro pri 0 °C. Dodali smo 0.22 ml (1.8 mmolov) O-benzilhidroksilamina in zmes mešali 1 uro pri 0 °C in 16 ur pri sobni temperaturi. Nastalo suspenzijo smo filtrirali, trdno snov zapored izprali z diklorometanom, 5% raztopino natrijevega hidrogen karbonata, vodo, 2M klorovodikovo kislino in vodo ter zatem sušili v vakuumu. Kromatografija na silikagelu ob uporabi metanola/diklorometana (1:19) za elucijo je dala 0.21 g (24%) [4-(Nbenziloksiamino)-2(R ali S)-heptilsukcinil]-L-levcil-L-levcin etilamina (izomer 1); Rf (metanol/-diklorometan 1:19) 0.21; MS: (M + H)+ 575; HPLC (ODS reverzna faza, eluirano s 60% acetonitrila/trietilamonijevega fosfatnega pufra pH 2.5) Rt 6.4 min.

Diklorometanski filtrat smo izprali zapored s 5% raztopino natrijevega hidrogen karbonata, 2M klorovodikovo kislino, 5% raztopino natrijevega hidrogen karbonata in nasičeno raztopino natrijevega klorida, sušili nad magnezijevim sulfatom in uparili. Kromatografija na silikagelu ob uporabi metanola/diklorometana (1:40) za elucijo je dala 0.42 g (49%) [4-(N-benziloksiamino)-2(R ali S)-heptilsukcinil]-L-levcil-L-levcin etilamida kot zmes izomerov. Rf (metanol/diklorometan 1:19) 0.20; MS: (M+H) ⁺ 575; HPLC (ODS reverzna faza, eluirano s 60% acetonitrila/trietilamonijevega fosfatnega pufra pH 2.5) Rt 6.4 in 11.3 min.; razmerje izomer 1/izomer 2: 1:3.7

Analiza za

Izrač.:

Ugot.:

C32H54N4O5 (574.81)

C 66.87 H 9.47

C 66.51 H 9.41

N 9.75% N 9.68%

IX

Primer 2

0.5 g (1.12 mmolov) [4-(N-benziloksiamino) 2(RS)-heptilsukcinil]-L-levcin metilamida v 10 ml metanola smo hidrogenirali 2 uri v prisotnosti 0.01 g 5% paladija na oglju. Zmes smo filtrirali, filtrat uparili in ostanek sušili v vakuumu, da smo dobili 0.36 g (90%) [4-(N-hidroksiamino) 2(RS)-heptilsukcinil]-L-Ievcin metilamida kot bel prah; Rf (metanol/diklorometan 1:19) 0.47 in 0.39; MS: (M+H) + 358.

Analiza za CJ8H35N3O4 (357.50)

Izrač.: C 60.48 H 9.87 N 11.75%

Ugot.: C 60.71 H 9.93 N 11.34%

Izhodni material smo pripravili kot sledi:

(A) 1.08 g benziloksikarbonil-L-levcin metilamida v 20 ml metanola, ki vsebuje 3.7 ml IM klorovodikove kisline, smo hidrogenirali 2 uri v prisotnosti 0.05 g 5% paladija na oglju. Zmes smo filtrirali, filtrat uparili in ostanek ponovno uparili s toluenom in nato sušili v vakuumu. Ostanek smo prevzeli v 10 ml dimetilformamida, ohladili na 0 °C in nevtralizirali z 0.5 ml (3.9 mmolov) N-etilmorfolina. Dodali smo raztopino 1.01 g (3.7 mmolov) 4-terc.butil hidrogen 2(RS)-heptilsukcinata v 20 ml dimetilformamida, zatem pa 0.6 g (4.4 mmole) hidroksibenzotriazola in 0.84 g (4.08 mmolov) dicikloheksilkarbodiimida. Zmes smo mešali 1 uro pri 0 °C in 16 ur pri sobni temperaturi, zatem pa uparili. Ostanek smo prevzeli v diklorometanu, filtrirali in filtrat izprali zapored z dvema deležema 5% raztopine natrijevega hidrogen karbonata, vodo, 0.5M klorovodikovo kislino in vodo, sušili nad magnezijevim sulfatom in uparili, da smo dobili olje. Kromatografija na silikagelu z uporabo metanola/diklorometana (3:97) za elucijo je dala 0.99 g (67 %) [terc.butoksi 2(RS)-heptilsukcinil]-L-levcin metilamida kot olje; Rf (etil acetat) 0.47 in 0.55; MS: (M + H)+ 399.

(B) 0.96 g (2.4 mmola) [terc.butoksi 2(RS)-heptilsukcinil]-L-levcin metilamida smo raztopili v 20 ml trifluorocetne kisline, mešali 2 uri pri sobni temperaturi in uparili. Ostanek smo trikrat uparili s toluenom, nato raztopili v 10 ml dimetilformamida in ohladili na 0 °C. Raztopino smo nevtralizirali z dodatkom 0.61 ml (4.8 mmolov) N-etil morfolina. Dodali smo 0.39 g (2.89 mmolov) hidroksibenzotriazola in 0.57 g (2.97 mmolov) l-etil-3-(3-dimetilaminopropil)-karbodiimid hidroklorida in zmes mešali 1 uro pri 0 °C. Dodali smo raztopino 0.35 g (2.8 mmolov) O-benzilhidroksilamina v 5 ml diklorometana, zmes mešali 1 uro pri 0 °C in čez noč pri sobni temperaturi in zatem uparili. Olje smo porazdelili med 5% raztopino natrijevega hidrogen karbonata in diklorometana. Organski sloj smo izprali zapored z vodo, 2M klorovodikovo kislino in nasičeno raztopino natrijevega klorida, sušili nad magnezijevim sulfatom in uparili, da smo dobili trdno snov. Kromatografija na silikagelu ob uporabi metanola/heksana (1:9) za elucijo je dala 0.56 g (52%) [4-(N-benziloksiamino) 2(RS)-heptilsukcinil]-L-levcin metilamida kot belo trdno snov; Rf (etil acetat) 0.24 in 0.36; MS:(M+H)⁺ 448.

Primer 3

Na analogen način, kot smo opisali v prvem odstavku Primera 2, smo iz [4-(Nbenziloksiamino)-2(RS)-heptilsukcinil]-L-levcin neopentilamida pripravili [4-(Nhidroksiamino) 2(RS)-heptilsukcinil]-L-levcin neopentilamid kot peno;

Rf (metanol/-diklorometan 1:9) 0.52; MS:(M + H) ⁺ 414.

Izhodni material smo pripravili kot sledi:

Iz N-terc.butoksikarbonil-L-levcin neopentilamida ob uporabi metod, analognih tistim, opisanim v Primeru 1 (E-F), smo dobili [4-(N-benziloksiamino) 2(RS)-heptilsukcinil]L-levcin neopentilamid kot belo peno;

Rf (metanol/diklorometan 1:19) 0.59; MS:(M + H)+ 504.

Primer 4

Na analogen način, kot smo opisali v prvem odstavku Primera 2, smo iz [4-(Nbenziloksiamino)-2(RS)-heptilsukcinil]-L-alanil-L-levcin etilamida pripravili [4-(Nhidroksiamino)-2(RS)-heptilsukcinil]-L-alanil-L-levcin etilamid kot belo trdno snov; MS:(M+H)+ 443.

Analiza za ^c22^h42ⁿ4°5 (442.60)

Izrač.:

Ugot.:

C 59.70 C 59.95

H 9.57 H 9.59

N 12.66% N 12.25%

Izhodni material smo pripravili kot sledi:

Iz N-benziloksikarbonil-L-alanil-L-levcin etilamida ob uporabi metod, analognih tistim, opisanim v Primeru 2 (A-B), smo dobili [4-(N-benziloksiamino) 2(RS)-heptilsukcinil]— L-alanil-L-levcin etilamid kot steklasto trdno snov;

Rf (metanol/diklorometan 1:19) 0.25 in 0.41; MS: (M+H)⁺ 533.

Primer 5

Na analogen način, kot smo opisali v prvem odstavku Primera 2, smo iz [4-(Nbenziloksiamino)-2(RS)-heptilsukcinil]-L-(N^£-ftaloil)-L-lizil-L-levcin etilamida pripravili [4-(N-hidroksiamino)-2(RS)-heptilsukcinil]-L-(N^£-ftaloil)-lizil-L-levcin etilamid kot belo trdno snov; Rf (metanol/diklorometan 1:19) 0.30; MS:(M+H)⁺ 630.

Izhodni material smo pripravili kot sledi:

Iz N^-benziloksikarbonil-N^-ftaloil-L-lizil-L-levcin etilamida ob uporabi metod, analognih tistim, opisanim v Primeru 2 (A-B), smo dobili [4-(N-benziloksiamino)2(RS)-heptilsukcinil]-L-(N^£-ftaloil)-Iizil-L-levcin etilamid kot peno;

Rf (metanol/diklorometan 1:19)0.41 in 0.50; MS:(M + H)⁺ 720.

Primer 6

0.2 g (0.33 mmolov) [4-(N-benziloksiamino) 2(R ali S)-nonilsukcinil]-L-levcil -L-levcinetilamida (izomer 1) v 20 ml metanola smo hidrogenirali 80 minut v prisotnosti 0.07 g 5% paladija na oglju. Zmes smo filtrirali, filtrat uparili in ostanek sušili v vakuumu, da smo dobili 0.166 g (98%) [4-(N-hidroksiamino) 2(R ali S)-nonilsukcinil]-L-levcil-Llevcin etilamida kot belo trdno snov; Rf (sistem B) 0.35; MS: (Μ + Η)+ 513.

Analiza za C27H52N4O5 (512.74)

Izrač.: C 63.25 H 10.22 N 10.93%

Ugot.: C 62.83 H 10.14 N 10.74%

Izhodni material smo pripravili kot sledi:

(A) 6.25 ml (25 mmolov) dibenzilmalonata smo raztopili v 25 ml suhega dimetilformamida pod dušikom in dodajali 0.75 g (80% natrijevega hidrida v teku 10 minut. Zmes smo mešali 0.5 ur, ohladili na 0 °C in dodali raztopino 4.75 ml (25 mmolov) 1-bromononana v 10 ml suhega dimetilformamida. Nadaljevali smo z mešanjem 1 uro pri 0 °C in zmes pustili 64 ur pri sobni temperaturi. Raztopino smo uparili in ostanek raztopili v dietil etru. Ogansko fazo smo izprali z vodo in nasičeno raztopino natrijevega klorida, sušili nad magnezijevim sulfatom in uparili. Kromatografija na silikagelu ob uporabi etil acetata/heksana (1:5) za elucijo je dala 5.85 g (56%) dibenzil nonilmalonata kot olje; Rf (etil acetat/heksan 1:3) 0.58.

(B) 5.85 g (14 mmolov) dibenzil nonilmalonata smo obdelali z 0.43 g (14 mmoli) 80% natrijevega hidrida in 2.33 ml (14 mmoli) terc.butil bromoacetata na način, opisan v odstavku (A). Kromatografija na silikagelu ob uporabi etil acetata/heksana (1:19) za elucijo je dala 6.24 g (33%) benzil 4-terc. butil hidrogen (2-nonil-2benziloksikarboniljsukeinata kot olje; Rt'(etil acetat/heksan 1:19) 0.74.

(C) Benzil 4-terc.butil hidrogen (2-nonil-2-benziloksikarbonil)-sukcinat iz odstavka B smo raztopili v 80 ml izopropanola in hidrogenirali 1 uro v prisotnosti 0.2 g 5% paladija na oglju. Suspenzijo smo filtrirali, filtrat uparili, dodali 100 ml toluena in zmes refluktirali 3 ure. Uparjenje je dalo 3.5 g (97%) 4-terc.butil hidrogen 2-(RS)nonilsukcinata kot olje; Rf (sistem A) 0.73.

(D) 1.5 g (4 mmolov) N-tere.butoksikarbonil-L-leveil-L-levcin etilamida smo raztopili v 20 ml 4M klorovodikove kisline v etil acetatu, mešali pri sobni temperaturi 0.5 ur, uparili, izprali z dietil etrom in sušili v vakuumu. Trdni ostanek smo prevzeli v 10 ml suhega dimetilformamida, obdelali z 0.6 ml (4.7 mmoli ) N-etil morfolina, 1.2 g (4.0 mmoli) 4-terc.butil hidrogen 2(RS)-nonilsukcinata, 0.66 g (4.9 mmolov) hidroksi benzotriazola in 0.78 g (4.0 mmolov) l-etil-3-(3-dimetilaminopropil)karbodiimid hidroklorida. Zmes smo mešali 1 uro pri 0 °C, pustili stati 16 ur pri sobni temperaturi in uparili. Ostanek smo prevzeli v etil acetatu, izprali zapored s 5% raztopino natrijevega hidrogen karbonata, vodo, 5% raztopino citronske kisline, vodo, 5% raztopino natrijevega hidrogen karbonata in nasičeno raztopino natrijevega klorida, ter uparili, da smo dobili trdno snov. Kromatografija na silikagelu ob uporabi etil acetata za elucijo je dala 1.9 g (36 %) [4-terc.butoksi 2(RS)-nonilsukcinil]-L-levcil-Llevcin etilamida kot belo trdno snov; Rf (etil acetat) 0.60; MS: (M+H)⁺ 554.

(E) 0.95 g (1.7 mmolov) [4-terc.butoksi 2(RS)-nonilsukcinil]-L-levcil-L-levcin etilamida smo raztopili v 15 ml trifluorocetne kilsine in raztopino mešali 2 uri pri sobni temperaturi ter uparili. Ostanek smo uparili s toluenom, raztopili v diklorometanu, izprali z vodo, sušili nad magnezijevim sulfatom in uparili. Ostanek smo prevzeli v 10 ml dimetilformamida pri - 15 °C in obdelali z 0.22 ml (1.7 mmolov) N-etilmorfolina in 0.22 ml (1.7 mmolov) izobutil kloroformiata. Po 10 minutah pri -15 °C smo dodali 0.42 ml (3.4 mmolov) O-benzilhidroksilamina in zmes mešali 1 uro pri 0 °C in pustili stati 16 ur pri sobni temperaturi. Zmes smo razredčili z vodo, izločeno trdno snov odfiltrirali, zapored izprali s 5% raztopino citronske kisline, vodo in 5% raztopino natrijevega hidrogen karbonata, ter zatem sušili v vakuumu. Kromatografija ostanka na silikagelu ob uporabi metanola/diklorometana (3:97) za elucijo je dala 0.55 g (54%) [4-(N-benziloksiamino)-2(RS)-nonilsukcinil]-L-levcil-L-levcin etilamida kot belo trdno snov; Rf (metanol/diklorometan 1:19) 0.47; MS: (M + H)⁺ 603; HPLC (ODS reverzna faza, eluirano s 70% acetonitrila/trimetilamonijevega fosfatnega pufra pH 2.5) Rt 4.7 in 7.7 min.

Izomera smo ločili kot sledi:

1.0 g (1.66 mmolov) zmesi smo raztopili v 10 ml vročega diklorometana in raztopino pustili stati pri sobni temperaturi 2 uri in 16 ur pri 4 ^WC. Trdno snov smo odfiltrirali, izprali z diklorometanom in sušili v vakuumu, da smo dobili 0.41 g (41%) [4-(Nbenziloksiamino)-2(R ali S)-nonilsukcinil]-L-levcil-L-levcin etilamida (izomer 1) kot trdno snov; Rf (sistem B) 0.46. HPLC Rt 4.6 min.

Matične lužnice smo uparili, da smo dobili 0.47 g (47%) [4-(N-benziloksiamino)-2(R ali S)-nonilsukcinil]-L-levcil-L-levcin etilamida (izomer 2) kot trdno snov;

Rf (sistem B) 0.52. HPLC Rt 7.5 min.

Primer 7

Na analogen način, kot smo opisali v prvem odstavku Primera 6, smo iz [4-(Nbenziloksiamino)-2(RS)-nonilsukeinil]-L-tere.butilgliein metilamida pripravili [4-(Nhidroksiamino)-2(RS)-nonilsukcinil]-L-tere.butil glicin metilamid kot belo peno;

Rf (sistem A) 0.58 in 0.64; MS:(M + H)+ 386.

Analiza za

C20H39N3O4 O.4CH3OH

Izrač.:

Ugot.:

C 61.51

C 61.50

H 10.27 H 10.13

N 10.55% N 10.27%

Izhodni material smo pripravili kot sledi:

Na analogen način, kot smo opisali v Primem 6 (D-E), le izhajajoč iz L-terc.butil glicin metilamida namesto nezaščitenega terc.butoksikarbonil-L-levcil-L-levcin etilamida, smo dobili [4-(N-benziloksiamino)-2(RS)-nonilsukcinil]-L-terc.butilglicin metilamid kot peno; Rf (metanol/diklorometan 1:19) 0.27 in 0.34; MS(EI): M⁺475.

Primer 8

Na analogen način, kot smo opisali v prvem odstavku Primera 6, smo iz [4-(Nbenziloksiamino)-2(RS)-undeeilsukeinil]-L-levcil-L-levcin etilamida pripravili [4-(Nhidroksiamino)-2(RS)-undecilsukcinil]-L-levcil-L-levcin etilamid kot peno;

Rf (sistem A) 0.62 in 0.66; MS:(M + H) + 541.

Izhodni material smo pripravili kot sledi:

Na analogen način, kot smo opisali v Primeru 6 (A-E), le ob uporabi 1bromoundekana namesto 1-bromononana, smo dobili [4-(N-benziloksiamino)-2(RS)undecilsukcinilj-L-Ievcil-L-levcin etilamid kot gel;

Rf (metanol/diklorometan 1:9)0.70; MS: (M + H)⁺631.

Primer 9

0.3 g (0.536 mmolov) [4-(N-benziloksiamino) 2(R ali S)-heptil-3(S)-metilsukcinil]-Llevcil-L-levcin-etilamida (diastereoizomer 1) v 50 ml metanola smo hidrogenirali 1.5 ur v prisotnosti 0.1 g 5% paladija na oglju. Zmes smo filtrirali, filtrat uparili in ostanek triturirali z dietil etrom, da smo dobili 0.23 g [4-(N-hidroksiamino) 2(R ali S)-heptil3(S)-metilsukcinil]-L-levcil-L-levcin etilamida (diastereoizomer 1) kot belo trdno snov; MS: 499(M + H)+.

Analiza za C26H50N4O5 0.4 PbO

Izrač.: · C 61.72 H 10.12 N 11.08%

Ugot.: C 61.92 H 10.05 N 10.85%

Izhodni material smo pripravili kot sledi:

(A) 2.0 g (0.11 molov) benzil estra L-mlečne kisline in 10.8 ml (0.13 molov) piridina v 220 ml diklorometana smo dodajali v teku 0.5 ur k raztopini anhidrida trifluorometansulfonske kisline v 250 ml diklorometana pri 0 °C. Po nadaljnjih 0.5 urah smo raztopino dvakrat izprali z 250 ml vode vsakič in z 250 ml nasičene raztopine natrijevega klorida, nato pa sušili nad brezvodnim magnezijevim sulfatom. Raztopino smo nato dodajali v teku 0.5 ur k raztopini di-terc.butil natrijevega malonata (0.11 molov), (pripravljenega iz 22.8 g di-terc.butil malonata in 3.48 g 80% natrijevega hidrida v olju) v 250 ml dimetilformamida pri 0 °C. Zmes smo pustili ogreti na sobno temperaturo čez noč in topilo uparili. Ostanek smo porazdelili med 200 ml etil acetata in 200 ml 5% raztopine natrijevega hidrogen karbonata. Organski sloj smo izprali z vodo (2 x 200 ml), sušili nad brezvodnim magnezijevim sulfatom in uparili, da smo dobili rumeno olje. Flash kromatografija na silikagelu ob uporabi 10% etil acetata v heksanu za elucijo je dala 35.4 g (88%) 1-benzil 4-terc.butil 3(RS)-terc.butoksikarbonil-2(S)-metilsukcinata kot brezbarvno olje; Rf (30 % etil acetat v heksanu) 0.63.

(B) 952 mg 80% natrijevega hidrida smo dodali k mešani raztopini 10 g 1-benzil 4terc.butil 3(RS)-terc.butoksi-karbonil-2(S)-metilsukcinata v 100 ml suhega dimetil formamida. Raztopino smo mešali pri sobni temperaturi 2 uri in nato dodali 6.23 ml 1bromoheptana. Zmes smo segrevali pri 60 °C 4 ure in nato mešali čez noč pri sobni temperaturi. Topilo smo uparili in ostanek raztopili v etil acetatu. Raztopino smo izprali zapored s 5% raztopino natrijevega hidrogen karbonata, vodo in nasičeno raztopino natrijevega klorida in nato sušili nad brezvodnim magnezijevim sulfatom. Topilo smo uparili in ostanek očistili s flash kromatografijo ob uporabi 5% etil acetata v heksanu za elucijo, da smo dobili 6.83 g benzil 3,3(RS)-di-terc.butoksikarbonil-2(S)metildekanoata kot brezbarvno olje; Rf (10%) etil acetata v heksanu) 0.5.

(C) 6.8 g benzil-3,3(RS)-di-terc.butoksikarbonil-2(S)-metildekanoata v 20 ml trifluorocetne kisline srno mešali pri sobni temperaturi 1 uro. Topilo smo uparili in ostanek ponovno uparili iz toluena (2 x 25 ml), da smo dobili oranžno olje. Olje smo ponovno raztopili v 100 ml toluena, obdelali s 3.64 ml N-etilmorfolina in segrevali ob refluksu 1 uro. Raztopino smo izprali zapored z 2M klorovodikovo kislino, vodo in raztopino natrijevega klorida, sušili nad brezvodnim magnezijevim sulfatom uparili, da smo dobili rjavo olje. Čiščenje s flash kromatografijo ob uporabi 2% metanola v diklorometanu za elucijo je dalo 3.02 g 1-benzil-3(RS)-karboksi-2(S)-metildekanoata kot rumeno olje; Rf (5% metanola v diklorometanu) 0.47, 0.52; MS: 321 (M + H)+.

(D) Na analogen način, kot smo opisali v Primeru 1 odstavki (D-F), smo iz 1.5 g benzil

3(RS)-karboksi-2(S)-metildekanoata dobili 0.315 g [4-(N-benziloksiamino)-2(R ali S)heptil-3(S)-metilsukcinil]-L-levcil-L-levcin etilamida (diastereoizomer 1) kot umazano belo trdno snov.

Primer 10

0.25 g [4-(N-benziloksiamino)-2(R)-heptil-3(R ali S)-ftalimidometil)sukcinil]-L-levcilL-levcin etilamida (diastereoizomer 1) v 100 ml dimetilformamida smo hidrogenirali v prisotnosti 100 mg 10% paladija na oglju 24 ur. Katalizator smo odfiltrirali in topilo uparili. Trituracija ostanka z dietil etrom je dala 0.17 g [4-(N-hidroksiamino)-2(R)heptil-3(R ali S)-ftalimidometil)sukcinil]-L-levcil-L-levcin etilamida (diastereoizomer 1) kot siv prah; Rf (10% metanol v diklorometanu) 0.5; MS: 644 (M + H) ⁺ .

Analiza za C34H53N5O7 0.8 H?O

Izrač.: C 62.04 H 8.36 N 10.64%

Ugot.: C 61.99 H 8.04 N 10.60%

Izhodni material smo pripravili kot sledi:

(A) Na analogen način, kot smo opisali v Primeru 1 odstavki (A-D), smo iz 20 g D-aamino nonanojske kisline dobili 10.28 g dibenzil 3(RS)-terc.butoksikarbonil-2(R)heptil-sukcinata kot bledo rumeno olje; Rf (10% etil acetata v heksanu) 0.32.

(B) 8.2 g dibenzil-3(RS)-terc.butoksikarbonil-2(R)-heptil-sukcinata v 100 ml suhega dimetil-formamida smo obdelali z 0.49 g 80% disperzije natrijevega hidrida. Po 2 urah smo zmes ohladili na 0 °C in po deležih dodali 4.18 g N-bromometilftalimida. Zmes smo mešali pri 0 °C nadaljnjo uro in nato čez noč pri sobni temperaturi. Topilo smo uparili in ostanek porazdelili med etil acetatom in 5% raztopino natrijevega hidrogen karbonata. Organsko fazo smo izprali z vodo in nasičeno raztopino natrijevega klorida in zatem sušili nad brezvodnim magnezijevim sulfatom. Topilo smo uparili in ostanek očistili s flash kromatografijo na silikagelu ob uporabi 20% etil acetata v heksanu za elucijo, da smo dobili 6.42 g dibenzil-3(RS)-terc.butoksikarbonil-2(R)-heptil-3(RS)(ftalimido-metil)sukeinata.

(C) 3.5 g dibenzil 3(RS)-terc.butoksikarbonil-2(R)-heptil-3(RS)-(ftalimidometil)sukcinata v 50 ml etanola smo hidrogenirali v prisotnosti 0.35 g 5% paladija na oglju. Katalizator smo odfiltrirali in topilo uparili. Ostanek smo raztopili v 50 ml toluena, odelali z 0.58 ml N-etil morfolina in segrevali ob refluksu 2 uri. Raztopino smo izprali zapored z 2M klorovodikovo kislino, vodo in nasičeno raztopino natrijevega klorida in nato sušili nad brezvodnim magnezijevim sulfatom. Čiščenje ostanka s flash kromatografijo na silikagelu ob uporabi 4% metanola v diklorometanu za elucijo je dalo 1.54 g 4-terc.butil hidrogen 2(R)-heptil-3(RS)-(ftalimidometil)sukcinata kot olje; Rf (5% metanola v diklorometanu) 0.3.

(D) Na analogen način, kot v Primeru 1 odstavka (E)-(F), srno iz 0.6 g 4-terc.butil 2(R)-heptil-3(RS)-(ftalimidometil)sukcinata dobili 0.27 g [4-(N-benziloksiamino)2(R)-heptil-3(R ali S)-(ftalimidometil)sukcinil]-L-levcil-L-Ievcin etilamida (diastereomer 1) kot belo trdno snov; MS: (M + H)⁺ 734.

Analiza za C41H59N5O7 0.6 PbO

Izrač.: C 66.12 H 8.15 N 9.4%

Ugot.: C 66.08 H 8.08 N 9.53%

Primer 11

Na analogen način, kot smo opisali v prvem odstavku Primera 2, smo iz [4-(Nbenziloksiamino)-2(RS)-heptilsukcinil]-L-fenilalanil-L-levcjn-etilamida pripravili [4(N-hidroksiamino)-2(RS)-heptilsukcinil]-L-fenilalanil-L-levcin etilamid kot belo trdno snov; Rf (metanol/diklorometan 1:19) 0.28 in 0.43; MS:(M + H) ⁺ 519.

Analiza za C28H46N4O5 0.3 PbO

Izrač.: C 64.17 H 8.96 N 10.69%

Ugot.: C 64.07 H 8.77 N 10.64%

Izhodni material smo pripravili kot sledi:

Iz N-terc.butiloksikarbonil-L-fenilalanil-L-levcin etilamida smo z uporabo metod, analognih tistim, opisanih v Primeru I (E)-(F), dobili [4-(N-benziloksiamino)-2(RS)heptilsukcinil]-L-fenilalanil-L-levcin etilamid kot belo trdno snov;

Rf (metanol/-diklorometan 1:19) 0.64; MS: (M + H)⁺609.

Primer 12

Na analogen način, kot smo opisali v prvem odstavku Primera 2, smo iz [4-(Nbenziloksiamino)-2(RS)-heptilsukcinil]-L-nona]il-L-levcin etilamida pripravili [4-(Nhidroksiamino)-2(RS)-heptilsukcinil]-L-nonalil-L-levcin etilamid kot belo trdno snov; MS:(M+H)+ 527.

Analiza za C28H54N4O5 (526.76)

Izrač.: C 63.84 H 10.33 N 10.64%

Ugot.: C 63.64 H 10.39 N 10.63%

Izhodni material smo pripravili kot sledi:

Iz N-terc.butoksikarbonil-L-nonalil-L-levcin etilamida smo z uporabo metod, analognih tistim, opisanih v Primeru 1 (E-F), dobili [4-(benziloksiamino)-2(RS)heptilsukcinil]-L-nonalil-L-levcin etilamid kot belo trdno snov; Rf (metanol/diklorometan 1:19) 0.55 in 0.62; MS: (M + H)⁺ 617.

Primer 13

Na analogen način, kot smo opisali v prvem odstavku Primera 2, smo iz [4-(Nbenziloksiamino)-2(RS)-heptilsukeinil]-L-fenilalanin terc.butilamida pripravili [4-(Nhidroksiamino)-2(RS)-heptilsukcinil]-L-fenilalanin terc.butilamid kot higroskopno peno; Rf (metanol/kloroform 1:19) 0.31; MS (M + H)⁺ 434.

Izhodni material smo pripravili kot sledi:

Iz N-terc.butoksikarbonil-L-fenilalanin terc.butilamida smo z uporabo metod, analognih tistim, opisanih v Primeru 1 (E-F), dobili [4-(N-benziloksiamino)-2(RS)heptilsukcinil]-L-fenilalanin terc.butilamid kot belo trdno snov;

Rf (etil acetat) 0.75; MS: (M + H) + 524.

Primer 14

Na analogen način, kot smo opisali v prvem odstavku Primera 2, smo iz [4-(Nbenziloksiamino)-2(RS)-heptilsukcinil]-L-fenilalanin metilamida pripravili [4-(N2Χ hidroksiamino)-2(RS)-heptilsukcinil]-L-fenilalanin metilamid kot belo trdno snov; Rf (metanol/kloroform 1:19) 0.16 in 0.21; MS (M + H)+ 392.

Izhodni material smo pripravili kot sledi:

Iz N-terc.butoksikarbonil-L-fenilalanin metilamida smo z uporabo metod, analognih tistim, opisanih v Primeru 1 (E-F), dobili [4-(N-benziloksiamino)-2(RS)-heptilsukcinil]-L-fenilalanin metilamid kot belo trdno snov;

Rf (metanol/kloroform 1:19)0.29 in 0.36;

Analiza za C28H39N3O4 (481.64)

Izrač.: C 69.83 H 8.16 N 8.72%

Ugot.: C 69.56 H 8.05 N 9.00%

Primer 15

Na analogen način, kot smo opisali v prvem odstavku Primera 2, smo iz [4-(Nbenziloksiamino)-2(RS)-heptilsukeinil]-L-terc.butil glicin metilamida pripravili [4-(Nhidroksiamino)-2(RS)-heptil.sukcinil]-L-terc.butilglicin metilamid kot peno;

Rf (metanol/diklorometan 1:19) 0.23 in 0.29; MS:(M + H)+ 358.

Analiza za C j 8H35N3O4 . 0.3 CH3OH

Izrač.: C 59.87 H 9.94 N 11.45%

Ugot.: C 59.80 H 9.76 N 11.44%

Izhodni material smo pripravili kot sledi:

Na analogen način, kot je opisano v Primeru 1 (E-F), le izhajajoč iz L-terc.butilglicin metilamida namesto nezaščitenega benziloksikarbonil-L-levcin-metilamida, smo pripravili [4-(N-benzilok.siamino)-2(RS)-heptilsukcinil]-L-terc.butilglicin metilamid kot belo peno; Rf (metanol/kloroform 1:19) 0.29 in 0.36; MS: (M + H)+ 448.

Primer 16

Na analogen način, kot smo opisali v prvem odstavku Primera 2, smo iz [4-(Nbenziloksiamino)-2(RS)-heptilsukcinil]-L-neopentilglicin metilamida pripravili [4-(N29 hidroksiamino)-2(RS)-heptilsukcinil]-L-neopentilglicin metilamid kot belo trdno snov; MS: (M + H) + 372.

Analiza za C13H37N3O4 (371.52)

Izrač.: C 61.43 H 10.04 N 11.31%

Ugot.: C 61.04 H 9.93 N 11.13%

Izhodni material smo pripravili kot sledi:

Iz N-terc.butoksikarbonil-L-neopentilglicin metilamida smo ob uporabi metod, analognih tistim, opisanim v Primeru 1 (E-F), pripravili [4-(N-benziloksiamino)-2(RS)heptilsukcinil]-L-neopentilgliein metilamid kot belo peno;

Rf (metanol/kloroform 1:19) 0.47 in 0.55; MS: (M + H)⁺ 462.

Analiza za C26H43N3O4 (461.65)

Izrač.: C 67.65 H 9.39 N 9.10%

Ugot.: C 67.57 H 9.12 N 9.02%

Primer 17

Na analogen način, kot smo opisali v prvem odstavku Primera 2, smo iz [4-(Nbenziloksiamino)-2(RS)-heptilsukcinil]-L-homofenilalanil-L-levcin etilamida pripravili [4-(N-hidroksiamino)-2(RS)-heptilsukcinil]-L-homofenilalanil-L-levein kot bel higrokopen granuliran prašek: MS: (N + H)⁺ 533.

Analiza za C29H43N4O5 . 0.4 H₂O

Izrač.: C 64.51 H 9.11 N 10.38%

Ugot.: C 64.59 H 8.94 N 10.14%

Izhodni material smo pripravili kot sledi:

Iz N-benziloksikarbonil-L-homofenilalanil-L-levcin etilamida smo ob uporabi metod, analognih tistim, opisanim v Primeru 2 (A-B), pripravili [4-(N-benziloksiamino)-2(RS)heptilsukcinil]-L-homofenilalanin-L-levcin etilamid kot trdno snov;

Rf (metanol/-kloroform 1:19) 0.55; MS: (M + H)+ 623.

Analiza za

Izrač.:

Ugot.:

C36H54N4O5 (622.85)

C 69.42 H 8.74 N 9.00%

C 69.02 H 8.85 N 8.87%

Primer 18

Na analogen način, kot smo opisali v prvem odstavku Primera 2, smo iz [4-(Nbenziloksiamino)-2(RS)-heptilsukcinil]-L-cikloheksilalanin metilamida pripravili [4(N-hidroksiamino)-2(RS)-L-cikloheksilalanin metilamid kot belo trdno snov;

MS: (M + H)+ 398.

Analiza za C21H39N3O4 (397.56)

Izrač.: C 63.45 H 9.89 N 10.57%

Ugot.: C 63.24 H 10.04 N 10.33%

Izhodni material smo pripravili kot sledi:

Iz N-tere.butoksikarbonil-L-cikloheksilalanin metilamida smo ob uporabi metod, analognih tistim, opisanim v Primeru 1 (E-F), pripravili [4-(N-benziloksiamino)-2(RS)heptilsukcinilj-L-cikloheksilalanin metilamid kot belo trdno snov;

Rf (metanol/-diklorometan 1:9) 0.30 in 0.37; MS: (M + H)+ 488.

Primer 19

0.6 g (1.14 mmolov) [4-terc.butoksi 2(RS)-heptilsukcinil]-L-levcil-L-levcin etilamida [pripravljenega v Primeru 1(E)], smo raztopili v 10 ml trifluorocetne kisline in raztopino mešali 3 ure in uparili. Ostanek smo štirikrat uparili iz toluena nato pa raztopili v 200 ml diklorometana, ki vsebuje 5 ml metanola, dvakrat izprali z vodo, sušili nad magnezijevim sulfatom in uparili. Ostanek smo raztopili v 1 ml dimetilformamida in 10 ml 1,2-dimetoksietana pri 0 °C. Dodali smo 0.135 g (1.17 mmolov) Nhidroksisukcinimida in 0.243 g (1.17 mmolov) dicikloheksilkarbodiimida, zmes mešali 1 uro pri 0 °C in 16 ur pri 4 °C. filtrirali in uparili, da smo dobili surovi N-hidroksisukcinimidni ester kot lepljivo trdno snov. Ta ester smo suspendirali v 5 ml tetrahidrofurana, obdelali z raztopino, pripravljeno iz 0.178 g (2.56 mmolov) hidroksilamin hidroklorida in 0.094 g (2,35 mmolov) natrijevega hidroksida v 5 ml vode, mešali 16 ur pri sobni temperaturi, filtrirali in uparili. Nastalo gumo smo izprali z vodo z dekantiranjem in sušili z uparjenjem toluena. Kromatografija na silikagelu ob uporabi 1% metanola v diklorometanu in nato 2%, 3% in 5% metanola v diklorometanu za elucijo, in uparjenje je dalo [4-(N-hidroksiamino)-2(R ali S)-heptil-sukeinil]-L-levcil-Llevcin etilamid, izomera 1 in 2, kot bele trdne snovi.

Rf (metanol/diklorometan 1:12.5) 0.34 (izomer 2) in Rf 0.26 (izomer 1).

Izomer 1 smo izprali z diklorometanom in etil acetatom in nato sušili, da smo dobili 0.083 g (15%) [4-(N-hidroksiamino)-2(R ali S)-heptil-sukcinil]-L-levcil-L-levcin etilamida (izomer 1), identičnega s tistim, pripravljenim v Primeru 1.

Rf (sistem A) 0.54. MS: (M + H) + 485.

Analiza za	C25H4SN4O5	0.2 H2O
Izrač.:	C 61.50	H 9.99	N 11.47%
Ugot.:	C 61.41	H 10.09	N 11.48%
		Primer 20

0.30 g (0.6 mmolov) [4-(N-benziloksiamino-2(RS)-izooktilsukcinil]-L-fenilalanin metilamida v 200 ml metanola smo hidrogenirali 3 ure v prisotnosti 0.1 g 10% paladija na oglju. Zmes smo filtrirali in filtrat uparili, da smo dobili 0.20 g 81% [4-(Nhidroksiamino)-2(RS)-izooktilsukeinil]-L-fenilalanin metilamida kot belo trdno snov; MS: (M+H)+ 406.

Analiza za C22H35N3O4 (405.54)

Izrač.: C 65.16 H 8.70 N 10.36%

Ugot.: C 65.04 H 8.75 N 10.20% [4-(N-benziloksiamino-2(RS)-izooktilsukcinil]-L-fenilalanin metilamid, uporabljen kot izhodni material, smo pripravili kot sledi:

(A) Raztopino 13.03 g (60 mmolov) dietil acetamidomalonata v 50 ml suhega dimetilformamida smo dodajali v teku 0.5 ur k suspenziji 2.16 g (72 mmolov) 80% natrijevega hidrida v 50 ml suhega dimetilformamida pri 0 °C v atmosferi dušika. Zmes smo mešali 3 ure pri sobni temperaturi, dodali raztopino 15.05 g (78 mmolov) 1bromo-6-metilheptana v 50 ml suhega dimetilformamida in zmes mešali 64 ur in uparili v olje. Olje smo dvakrat ekstrahirali z etil acetatom, združene ekstrakte izprali z vodo, sušili nad magnezijevim sulfatom in uparili. Ostanek smo vzdrževali 4 ure ob refluksu v 6M klorovodikovi kislini (180 ml) 4 ure, ohladili in voskasto trdno snov odfiltrirali. Surovi produkt v 120 ml 50% vodnega etanola smo filtrirali, dodali 7 ml piridina in zmes hladili na ledu, da smo dobili 6.49 g (57%) DL-izooktilglicina kot fin umazano bel prah.

(B) 6.45 g (34.5 mmolov) DL-izooktilglicina smo suspendirali v 200 ml ocetne kisline pri sobni temperaturi. Po deležih smo v teku 3 ur dodali 4.8 g (69 mmolov) natrijevega nitrita. Bistro raztopino smo mešali 16 ur pri sobni temperaturi, uparili, dodali vodo in dietil eter in zmes filtrirali. Etrno raztopino smo sušili nad magnezijevim sulfatom in uparili v olje. Rekuperirani in sušeni izhodni material (1.76 g) smo reciklirali po zgornjem postopku, da smo dobili v etru topno olje. Združeni produkt (7.43 g) smo raztopili v 16 ml metanola, dodali raztopno 3.9 g natrijevega hidroksida v 33 ml vode in zmes mešali 2 uri pri sobni temperaturi. Metanol smo uparili, dodali vodo in raztopino ekstrahirali z dietiletrom in nakisali s koncentrirano klorovodikovo kislino. Produkt smo ekstrahirali z dietil etrom in je po uparjenju dal 5.88 g (91%) 2(RS)-hidroksiizooktanojske kisline kot bistro olje, ki seje strdilo pri stanju.

(C) 5.84 g (31.3 mmole) 2(RS)-hidroksi-izooktanojske kisline smo raztopili v 60 ml etil acetata. Dodali smo 4.4 ml (31.3 mmole) trietilamina in 3.8 ml (31.3 mmole) benzil bromida ter zmes segrevali 3 ure ob refluksu. Zmes smo ohladili, filtrirali, izprali zapored z 2M klorovodikovo kilsino, vodo in 5% raztopino natrijevega hidrogen karbonata, sušili nad magnezijevim sulfatom in uparili. Kromatografija na silikagelu ob uporabi etil acetata/heksana (3:7) za elucijo je dala 5.55 g (64%) benzil 2(RS) hidroksiizooktenoata kot olje; Rf (etil acetat/heksan 1:1) 0.50.

(D) Raztopino 5.45 g (19.6 mmolov) benzil 2(RS)-hidroksi-izooktanoata in 1.91 ml (23.5 mmolov) piridina v 35 ml suhega diklorometana smo dodajali ob mešanju v teku 0.5 ure k raztopini 4 ml (23.5 mmolov) anhidrida trifluorometansulfonske kisline v 40 ml suhega diklorometana pri 0 °C. Zmes smo mešali 1 uro pri 0 °C in 1 uro pri sobni temperaturi. Raztopino smo izprali dvakrat z vodo, sušili nad magnezijevim sulfatom in uparili, da smo dobili 7.32 g (95%) benzil 2(RS)-trifluorometansulfoniloksiizooktanoata; Rf (etil acetat/heksan 1:4) 0.73.

(E) Raztopino 7.31 g (18.55 mmolov) benzil 2(RS)-trifluorometansulfoniloksiizooktanoata v 30 ml suhega diklorometana smo dokapavali v teku 1 ure k suspenziji

0.58 g (19.5 mmolov) 80% natrijevega hidrida in 4.64 g (18.55 mmolov) benzil terc.butil malonata v 50 ml suhega dimetilformamida pri 0 °C. Zmes smo mešali 6 ur pri sobni temperaturi, pustili stati pri sobni temperaturi 16 ur in uparili v olje. Ostanek v diklorometanu smo izprali dvakrat z vodo in z nasičeno raztopino natrijevega klorida, sušili nad magnezijevim sulfatom in uparili. Kromatografija na silikagelu ob uporabi etil acetata/heksana (1:4) za elucijo je dala 6.08 g (64%) dibenzil 3(RS)terc.butoksikarbonil-2(RS)-izooktil sukcinata kot bledo jantarno olje;

Rf (etil acetat/heksan 1:3) 0.49.

(F) 6.02 g (11.8 mmolov) triestra iz odstavka (E) v 90 ml izopropanola smo hidrogenirali 16 ur v prisotnosti 0.2 g 10% paladija na oglju. Zmes smo filtrirali, filtrat uparili, dodali toluen in zmes uparili, da smo odstranili sledove izpopropanola. Ostanek v 75 ml toluena in 1.65 ml (11.8 mmolov) trietilamina smo vzdrževali 2 uri ob refluksu in uparili, ostanek pa raztopili v etil acetatu. Raztopino smo izprali z 0.5M klorovodikovo kislino in vodo, sušili nad magnezijevim sulfatom in uparili, da smo dobili 3.23 g (96%) 4-terc.butil hidrogen 2(RS)-izooktilsukcinata kot olje.

(G) 1.25 g (4.5 mmolov) N-terc.butoksikarbonil-L-fenilalanin metilamida smo raztopili v 15 ml 4M hidrogen klorida v etil acetatu, mešali 1 uro pri sobni temperaturi, uparili in sušili v vakuumu. Ostanek v K) ml suhega dimetilformamida smo ohladili na °C in obdelali z (1.6 ml (4.7 mmoli) N-etilmorfolina, raztopino 0.86 g (3 mmoli) 4terc.butil hidrogen 2(RS)-izooktilsukcinata v 15 ml diklorometana, 0.49 g (3.6 mmolov) hidroksibenzotriazola in 0.72 g (3.75 mmolov) l-etil-3-(3-dimetilaminopropil)karbodiimid hidroklorida. Zmes smo mešali 1 uro pri 0 °C, pustil stati 16 ur pri 4 °C in uparili. Ostanek v diklorometanu smo zapored izprali s 5% raztopino citronske kisline, vodo, 5% raztopino natrijevega hidrogen karbonata in nasičeno raztopino natrijevega klorida, sušili nad magnezijevim sulfatom in uparili. Kromatografija na silikagelu ob uporabi etil acetata za elucijo je dala 1.17 g (87%) [4-terc.butoksi 2(RS)izooktilsukcinil]-L-fenilalanin metilamida kot olje, ki se strdi pri stanju;

Rf (etil acetat/heksan 1:1) 0.34 in 0.44.

(H) 1.02 g (2.28 mmolov) [4-terc.butoksi 2(RS)-izooktilsukcinil]-L-fenilalanin metilamida smo raztopili v 10 ml trifluorocetne kisline, raztopino mešali 1.5 ur in uparili. Ostanek smo trikrat uparili s toluenom, raztopili v kloroformu, dvakrat izprali z vodo, sušili in uparili, da smo dobili trdno snov. Trdno snov smo raztopili v 15 ml dimetilformamida, ohladili na 0 °C in obdelali z 0.6 ml (4.6 mmoli) N-etil morfolina,

0.37 g (2.7 mmoli) hidroksibenzotriazola, 0.54 g (2.8 mmoli) 1 -etil-3-(3-dimetilaminopropil)-karbodiimid hidroklorida in 0.42 g (3.4 mmoli) O-benzilhidroksilamina. Zmes smo mešali 1 uro pri 0 °C in 16 ur pri sobni temperaturi, uparili in dodali vodo. Trdno snov, ki se je izločila, smo izprali zapored s 5% raztopino natrijevega hidrogenkarbonata, vodo, 5% raztopino citronske kisline, vodo, 5% raztopino natrijevega hidrogen karbonata in vodo ter zatem sušili v vakuumu. Dobljeno trdno snov smo raztopili v metanolu/kloroformu (1:1) in po dodatku dietiletra dobili 0.71 g (63%) [4-(N-benziloksiamino)-2(RS)-izooktilsukcinil]-L-fenilalanin metilamida kot belo trdno snov. MS: (M + H)⁺ 496.

Analiza za	C29H41N3O4	0.2 CH3OH
Izrač.:	C 69.85	H 8.39	N 8.37%
Ugot.:	C 69.81	H 8.34	N 8.40%
		Primer 21
1.0 g (2.17	mmolov) [4-(N-benzi	looksiamino)-2(R)-heptilsukcinil]-L-neopentilglicin

metilamida v 50 ml metanola smo hidrogenirali 1.5 ur v prisotnosti 0.33 g 5% paladija na oglju. Zmes smo filtrirali in filtrat uparili, da smo dobili 0.8 g (99%) [4-(Nhidroksiamino)-2(R )-he pti Is u kc i n il]-L-neopenti Iglicin metilamida kot belo trdno snov; MS: (M + H)+ 372.

Analiza za C19H37N3O4 (371.52)

Izrač.: C 61.43 H 10.04 N 11.31%

Ugot.: C 61.21 H 10.17 N 11.35% [4-(N-benziloksiamino-2(R)-heptilsukcinil]-L-neopentilglicin metilamid, uporabljen kot izhodni material, smo pripravili kot sledi:

(A) 5.6 g (22.8 mmolov) terc.butoksikarbonil-L-neopentilglicina smo raztopili v 50 ml diklorometana pri 0 °C. Dodali smo 1.85 ml (22.8 mmolov) piridina in 9.67 g (22.8 mmolov) 70% di(J-benzotriazolil)karbonata in zmes mešali 1 uro pri 0 °C. Dodali smo 3.94 mi (45.6 mmolov) 40% vodne raztopine metilamina in zmes mešali 1 uro pri 0 °C in 16 ur pri sobni temperaturi. Raztopino srno izprali zapored s 5% raztopino natrijevega hidrogen karbonata, vodo, 2M raztopino klorovodikove kisline, vodo, 5% raztopino natrijevega hidrogen karbonata in nasičeno raztopino natrijevega klorida, sušili nad magnezijevim sulfatom in uparili. Prekristalizacija iz etil acetata je dala 5.26 g (89%) terc.butoksikarbonil-L-neopentilglicin metilamida kot belo trdno snov;

Rf (etil acetat) 0.47.

(B) 4.84 g (18.8 mmolov) terc.butoksikarbonil-L-neopentilglicin metilamida smo mešali s 50 ml 4M hidrogen klorida v etil acetatu 1 uro pri sobni temperaturi in uparili. Dodali smo etil acetat, raztopino uparili in ostanek sušili v vakuumu. Dobljeni amin hidroklorid smo raztopili v 15 ml suhega dimetilformamida pri 0 °C, nevtralizirali z dodatkom 3.58 ml (28.2 mmola) N-etilmorfolina in dodali k hlajeni (0 °C) raztopini 4.25 g (15.6 mmolov) 4-terc.butil hidrogen 2R-heptilsukeinata, pripravljenega na analogen način kot pri Primeru 1 (A-D), izhajajoč iz D-a-amino nonanojske kisline, 2.87 g (18.8 mmolov) hidroksibenzotriazol hidrata in 3.74 g (19.5 mmolov) l-etil-3-(3dimetilaminopropilj-karbodiimid hidroklorida v 50 ml suhega diklorometana pri 0 °C. Zmes smo mešali 1 uro pri 0 °C in 16 ur pri sobni temperaturi, nato pa uparili v olje. Ostanek v etil acetatu smo izprali s 5% raztopino citronske kisline, vodo, 5% raztopino natrijevega hidrogen karbonata in nasičeno raztopino natrijevega klorida, sušili nad magnezijevim sulfatom in uparili v olje. Kromatografija na silikagelu ob uporabi etil acetata/heksana (1:1) za elucijo je dala 5.13 g (80%) [4-terc.butoksi 2(R) heptilsukcinil]-L-neopentiIglicin metilamina kot olje;

Rf (etil acetat/heksan 1:1) 0.49, MS: (M + H)⁺ 413.

(C) 5.1 g (12.4 mmole) [4-terc.butoksi 2(R) heptilsukcinilj-L-neopentilglicin metilamida smo raztopili v 50 ml trifluorocetne kilsiline. Raztopino smo mešali 2.5 ur in nato uparili. Ostanek smo uparili dvakrat s toluenom in raztopili v diklorometanu. Raztopino smo trikrat izprali z vodo in z nasičeno raztopino natrijevega klorida, sušili nad magnezijevim sulfatom in uparili. Ostanek v 25 ml suhega diklorometana smo obdelali pri 0 °C s 3.2 ml (25 mmoli) N-etilmorfolina, 2.28 g (14.9 mmoli) hidroksibenzotriazol hidrata in 3.0 g (15.6 mmoli) l-etil-3-(3-dimetilaminopropil)karbodiimid hidroklorida in raztopino mešali 1 uro pri 0 °C. Dodali smo 3.05 g (24.8 mmolov) O-benzilhidroksilamina in zmes mešali 1 uro pri 0 °C in 16 ur pri sobni temperaturi, zatem pa uparili. Dodali smo vodo in dobljeno trdno snov izprali zapored z 2M klorovodikovo kislino, vodo, 5% raztopino natrijevega hidrogen karbonata, vodo in heksanom in sušili v vakuumu. Dobljeno trdno snov smo segreli z dietiletrom in po dodatku heksana in hlajenju dobili 5.2 g (91%) [4-(N-benziloksiamino)2(R) heptilsukcinilj-L-neopentilglicin metilamida kot higroskopni gel, ki smo ga sušili v vakuumu; MS: (M + H)⁺ 462.

Analiza za	c26h43n3°4	. 0.6 H2O
Izrač.:	C 66.10	H 9.43	N 8.89%
Ugot.:	C 66.13	H 9.39	N 8.74%

Primer 22

0.09 g (0.177 mmolov) [4-(N-benzilooksiamino)-2(R)-heptilsukcinil]-(D ali L)-jS,/3dimetilfenilalanin metilamida (izomer 1) v 10 ml metanola smo hidrogenirali 1.5 ur v prisotnosti 30 mg 5% paladija na oglju. Zmes smo filtrirali, filtrat uparili in ostanek sušili v vakuumu, da smo dobili 0.075 g (100%) [4-(N-hidroksiamino)-2(R)heptilsukcinil]-(D ali L)-/3,3-dimetilfenilalanin metilamida kot belo peno;

MS: (M+H)+ 420.

Analiza za C23H37N3O4 . 0.4 PbO

Izrač.: C 64.73 H 8.93 N 9.85%

Ugot.: C 64.81 H 8.77 N 10.14% [4-(N-benziloksiamino)-2(R)-heptilsukcinil]-(D ali L)-3,0-dimetilfenilalanin metilamida (izomer 1), uporabljen kot izhodni material, smo pripravili kot sledi:

(A) 2.3 g (11.9 mmolov) DL-O-dimetilfenilalanina smo raztopili v 9 ml vode, kije vsebovala 0.48 g (12 mmolov) natrijevega hidroksida ob mešanju pri 0 °C. Dodali smo 6.0 ml 4M raztopine natrijevega hidroksida in 3.4 ml (23.8 mmolov) benzil kloroformiata po kapljicah v teku 0.3 ure. Zmes smo mešali 1 uro pri 0 °C in 16 ur pri sobni temperaturi. Raztopino smo ekstrahirali z dietil etrom, nakisali na pH 2 s koncentrirano klorovodikovo kislino in produkt ekstrahirali z etil acetatom. Organsko raztopino smo izprali z nasičeno raztopino natrijevega klorida, sušili nad magnezijevim sulfatom in uparili, da smo dobili 3.86 g (99%) N-benziloksikarbonil-DLOdimetilfenilalanina kot olje; Rf (sistem A) 0.54; MS: (M + H)⁺ 328.

(B) 3.8 g (11.6 mmolov) N-benziloksikarbonil-DLO-dimetilfenilalanina smo pretvorili v 2.45 g (62%) N-benziloksikarbonil-DL-jS,/3-dimetilfenilalanin metilamida po postopku, opisanem v Primeru 21 (A); Rf (etil acetat) 0.61; MS: (M+H)⁺341.

(C) 2.4 g (7.06 mmolov) N-benziloksikarbonil-DL-0,0-dimetilfenilalanin metilamida smo suspendirali v 30 ml metanola in 3.5 ml 2M klorovodikove kisline in hidrogenirali uri v prisotnosti 0.24 g 5% paladija na oglju. Zmes smo filtrirali, filtrat uparili, ostanek trikrat uparili s toluenom in nato sušili v vakuumu, da smo dobili 1.75 g DLO-dimetilfenilalanin metilamid hidroklorida, ki vsebuje sled toluena;

Rf (sistem A) 0.31; MS: (M + H) + 207.

(D) 0.485 g (2 mmola) DL-$,)3-dimetilfenilalanin metilamid hidroklorida smo raztopili v 2 ml suhega dimetilformamida in raztopino ohladili na 0 °C. Dodali smo 0.35 ml (2.8 mmolov) N-etilmorfolina, 0.544 g (2 mmola) 4-tere.butil hidrogen 2(R)-heptilsukcinata in 0.46 g (2.4 mmole) l-etil-3-(3-dimetilaminopropil)-karbodiimid hidroklorida in zmes mešali 1 uro pri 0 °C in 64 ur pri 4 °C. K suspenziji smo dodali vodo in belo trdno snov odfiltrirali, izprali zapored z 2M klorovodikovo kislino, vodo, 5% raztopino natrijevega hidrogenkarbonata in vodo in sušili v vakuumu, da smo dobili 0.72 g (78%) [4terc.butoksi 2(R)-heptiIsukcinil]-DL-/3,/?-dimetilfenilalanin metilamida;

Rf (etil acetat) 0.56 in 0.61; MS: (M + H) ⁺ 461.

(E) 0.71 g (1.54 mmole) 4-terc.butoksi 2(R)-heptilsukcinil]-DL-/3,/3-dimetilfenilalanin metilamida smo raztopili v 7 ml trifluorocetne kisline in raztopino mešali 2.5 ur in uparili. Ostanek smo dvakrat uparili s toluenom in raztopili v 30 ml diklorometana. Raztopino smo izprali z vodo, sušili nad magnezijevim sulfatom in uparili. Ostanek v ml dimetilformamida smo obdelali pri 0 °C z 0.31 g (2.02 mmoli) hidroksibenzotriazol hidrata in 0.37 g (1.93 mmolov) l-etil-3-(3-dimetilaminopropil)karbodiimid hidroklorida in raztopino mešali 1 uro pri 0 °C. Dodali smo 0.38 g (3.08 mmolov) O-benzilhidroksilamina in zmes mešali 1 uro pri 0 °C in 16 ur pri sobni temperaturi, nato pa uparili. Ostanek v etil acetatu smo izprali zapored s 5% raztopino natrijevega hidrogen karbonata, vodo, 2M klorovodikovo kislino, vodo, 5% raztopino natrijevega hidrogen karbonata in nasičeno raztopino natrijevega klorida, sušili nad magnezijevim sulfatom in uparili. Kromatografija na silikagelu ob uporabi etil acetata/heksana (2:1), zatem etil acetata/heksana (3:1) in končno etil acetata za elucijo, je dala [4-(N-benziloksiamino)-2(R)-heptilsukcinil]-(D ali L)-/3,j8-dimetilfenilalanin metilamid (kot 2 izomera).

Izomer 1 (0.18 g; 23%); Rt' (etil acetat/heksan 2:1) ().32 ; MS: (M + H)+ 510 in izomer 2 (0.27 g; 34%); Rf (etil acetat/heksan 2:1) 0.22 ; MS: (M + H)+ 510.

Primer 23

0.09 g (0.18 mmolov) [4-(N-benziloksiamino)-2(R)-heptilsukcinil]-(D ali L)-treo-0metilfenilalanin metilamida (izomer 1) v 10 ml metanola smo hidrogenirali 4 ure v prisotnosti 0.03 g 5% paladija na oglju. Zmes smo filtrirali, filtrat uparili in ostanek sušili v vakuumu, da smo dobili 0.072 g (98%) [4-(N-hidroksiamino)-2(R)heptilsukcinil]-(D ali L)-treo-0-metilfenilalanin metilamida kot belo higroskopno peno; MS: (M + H)⁺ 406.

Analiza za C22H35N3O4 . 0.15 FbO

Izrač.: C 64.73 H 8.72 N 10.29%

Ugot.: C 64.69 H 8.93 N 10.09% [4-(N-benziloksiamino)-2(R)-heptilsukcinil]-(D ali L)-treo-/3-metilfenilalanin metilamid (izomer 1), uporabljen kot izhodni material, smo pripravili iz Nbenziloksikarbonil-DL-treo-/?-metilfenilalanina po postopku, opisanem v Primeru 22 (A)-(E). Izomere smo ločili s kromatografijo na silikagelu ob uporabi 1% metanola/diklorometana, 2% metanola/diklorometana in končno 3% metanola/diklorometana za elucijo.

Izomer 1 je imel Rf (metanol/diklorometan 1:19) 0.51 in MS: (M + H)⁺ 496 in izomer 2 je imel Rf (metanol/diklorometan 1:19) 0.41 in MS: (M + H)⁺ 496.

Primer 24

Na analogen način, kot je opisano v prvem odstavku Primera 22, smo iz [4-(Nbenziloksiamino)-2(R)-heptilsukcinil]-DL-eritro-/3-metilfenilalanin metilamida pripravili [4-(N-hidroksiamino)-2(R)-heptilsukcinil]-DL-eritro-/3-metilfenilalanin metilamid kot belo higroskopno peno;

Rf (sistem B) 0.22 in 0.29; MS: (M + H)+ 406.

Analiza za C22H35N3O4 0.3 PbO

Izrač.: C 64.30 H 8.73

Ugot.: C 64.29 H 8.64

N 10.23% N 10.09%

Izhodni material smo pripravili kot sledi:

Na analogen način, kot je opisano v Primeru 22 (B-E), le izhajajoč iz Nbenziloksikarbonil-DL-eritro-f3-metilfenilalanina, smo dobili [4-(N-benziloksiamino)heptilsukcinil]-DL-eritro-)3-metilfenilalanin metilamid kot belo trdno snov;

Rf (metanol/diklorometan 7:93) 0.40 in 0.45; MS: (M + H) + 496.

Primer 25

0.12 g [4-(N-benziloksiamino)-2(R)-heptiI-3(R ali S)-(ftalimidometil)sukcinil]-L-terc,butil glicin metilamida (diastereoizomer 1), pripravljen na analogen način, kot smo opisali v Primeru 10 (A)-(D), v 10 ml metanola smo hidrogenirali v prisotnosti 50 mg 10% paladija na oglju 16 ur. Katalizator smo odfiltrirali in filtrat uparili, da smo dobili želatinozno trdno snov. Čiščenje na silikagelu ob uporabi 5% metanola v diklorometanu za elucijo je dalo 0,06 g [4-(N-hidroksiamino)-2(R)-heptil-3(R ali S)(ftalimidometil)-sukcinil]-L-terc.butilglicin metilamida (diastereoizomer 1) kot belo trdno snov; Rf ( 10% metanol v diklorometanu) 0.34; MS: (M + H)⁺ 517.

Primer 26

0.17 g [4-(N-benziloksiamino)-2(R)-heptil-3(R ali S)-(3-fenilpropil)sukcinil]-L-levcil-Llevcin etilamida (diastereoizomer 1), v 10 ml metanola smo hidrogenirali v prisotnosti 55 mg paladija na oglju 3 ure. Katalizator smo odfiltrirali in filtrat uparili, da smo dobili 0.13 g [4-(N-hidroksiamino)-2(R)-heptil-3(R ali S)-(3-fenilpropil)-sukcinil]-L-levcil-Llevcin etilamida diastereoizomer Γ) kot belo trdno snov;

Rf (10% metanol v diklorometanu) 0.36; MS: (M + H)+ 603.

Analiza za C34H53N4O5 (602.83)

Izrač.: C 67.74 H 9.70 N 9.30%

Ugot.: C 68.00 H 9.93 N 9.20%

Izhodni material smo pripravili kot sledi:

Na analogen način, kot je opisano v Primeru 10 (B)-(D), smo iz 2.0 g dibenzil 3(RS)terc.butoksikarbonil-2(R)-heptil-sukeinata in 0.84 g cinamil bromida dobili 0.17 g [4(N-benziloksiamino-2(R)-heptil-3(R ali S)-(trifenilpropil)sukcinil]-L-levcil]-L-levcin etilamida (diastereoizomer 1) kot umazanobelo trdno snov;

Rf (5% metanol v diklorometanu ) 0.47; MS: (M + H)⁺ 693.

Primer 27

0.25 g [4-(N-benziloksiamino-2(R)-heptil-3(R ali S)-(trimetil-2,5-diokso-l-imidazolidinil)metil]sukcinil-L-levcil-L-levcin etilamida (diastereoizomer 1) v 25 ml metanola smo hidrogenirali v prisotnosti 100 mg 5% paladija na oglju 6 ur. Katalizator smo odfiltrirali in filtrat uparili, da smo dobili 0.16 g [4-(N-hidroksiamino)-2(R)-heptil-3(R ali S)-[(3-metil-2,5-diokso-l-imidazolidinil)metil]sukcinil]-L-levcil-L-levcin etilamida (diastereoizomer 1) kot belo trdno snov;

Rf ( 10% metanol v diklorometanu) 0.25; MS: (M + H)+ 611.

Analiza za C30H54N0O7 0.6 H₂O

Izrač.: C 57.91 H 8.95 N 13.51%

Ugot.: C 58.17 H 8.99 N 13.23%

Izhodni material smo pripravili kot sledi:

Na analogen način, kot je opisano v Primeru 10 (B)-(D), smo iz 2.0 g dibenzil 3(RS)terc.butoksikarbonil-2(R)-heptilsukcinata in 0.88 g 3-bromometil-l-metilhidantoina dobili 0.28 g [4-(N-benziloksiamino-2(R)-heptil-3(R ali S)-[(3-metil-2,5-diokso-limidazolidinil)metil]sukcinil]-L-levcil-L-levcin etilamida (diastereoizomer 1);

Rf (10% metanol v diklorometanu ) 0.7; MS: (M + H)⁺ 701.

Naslednja Primera pojasnjujeta farmacevtske pripravke, ki vsebujejo derivate hidroksamske kisline, kijih nudi predloženi izum:

Primer A

Tablete, ki vsebujejo naslednje sestavine, lahko pripravimo na običajen način:

Sestavina	Na tableto
Derivat hidroksamske kisline	10.0 mg
Laktoza	125.0 mg
Koruzni škrob	75.0 mg
Smukec	4.0 mg
Magnezijev stearat	1.0 ma
Celotna masa	215.0 mg

Primer B

Kapsule, ki vsebujejo naslednje sestavine, lahko pripravimo na običajen način:

Sestavina Na kapsulo

Derivat hidroksamske kisline 10.0 mg

Laktoza 165.0 mg

Koruzni škrob 20.0 mg

Smukec 5.0 mg

Masa polnitve kapsule 200.0 mg

Za :

F. HOFMANN-LA ROCHE AG

VRELIJA/GRTaU- GORJUP

Claims (32)

1. PATENTNI ZAHTEVKI

   1. Derivati hidroksamske kisline s splošno formulo

   R¹ v kateri

   R.1 predstavlja 1 - 7C alkil;

   predstavlja vodik, 1-6C alkil ali skupino s formulo -(CH2)_n’aril ali -(CH2)n^_Het, kjer n stoji za 1 do 4 in Het predstavlja 5- ali 6- členski N-heterocikličen obroč, ki je (a) vezan preko N-atoma, (b) v danem primeru vsebuje N,O in/ali S kot dodatni ali dodatne heteroatom(e) v položaju ali položajih, različnih od sosednjega k veznemu N-atomu, (c) je substituiran z okso na enem ali obeh Catomih, sosednjih k veznemu N-atomu in (d) je v danem primeru benz-sklenjen ali v danem primeru substituiran na enem ali več drugih C atomih z 1-6C alkilom ali okso in/ali na morebitnem ali morebitnih dodatnih N atomih z 1-6C alkilom;

   r3 predstavlja karakteristično skupino naravne ali nenaravne (sintetične) a-amino kisline, v kateri je morebitna prisotna funkcionalna skupina lahko zaščitena, s pridržkom, da R^ ne predstavlja vodika;

   R^ predstavlja karboksil, (1-6C alkoksi)karbonil, karbamoil ali (1-6C alkil)karbamoil; RS predstavlja karakteristično skupino naravno nastopajoče α-amino kisline, v kateri je morebitna prisotna funkcionalna skupina lahko zaščitena; predstavlja vodik; ali

   R^, r5 jn RČ vsak posamezno predstavlja vodik ali 1-6C alkil;

   in njihove farmacevtsko sprejemljive soli.
2. 2. Spojine po zahtevku 1, kjer predstavlja vodik, 1-6C alkil ali skupino s formulo -(CH2)_n-Het in predstavlja vodik.
3. 3. Spojine po zahtevku 1 ali 2, kjer Rl predstavlja etil, izopropil, n-butil ali n-heksil.
4. 4. Spojine po zahtevku 3, kjer Rl predstavlja etil.
5. 5. Spojine po katerem koli izmed zahtevkov 1 do 4, kjer R² predstavlja vodik, metil, skupino s formulo -(CH₂)_n-aril, kjer je arilna skupina fenil, ali skupino s formulo -(CH2)n'Het, kjer Het predstavlja 5- ali 6- členski n-heterocikličen obroč, ki v danem primeru vsebuje kot dodaten ali dodatne hetero atom(e) en ali dva N atoma, en N atom in en O atom ali en O atom.
6. 6. Spojine po zahtevku 5, kjer Het predstavlja skupino s formulo

   R² in RS vsakokrat pomenita vodik ali skupaj predstavljata dodatno vez ali preostanek sklenjenega benzenskega obroča;

   R^ pomeni vodik ali 1-6C alkil;

   X pomeni -CO-, -CH₂-, -CH(1-6C alkil), -C(1-6C alkil)₂-, -NH-, -N(1-6C alkii)ali -O; in

   Υ pomeni -Ο-, -NH- ali -N(1-6C alkil)-.
7. 7. Spojine po zahtevku 6, kjer Het predstavlja skupino s formulo (b) ali (c).
8. 8. Spojine po zahtevku 7, kjer Het predstavlja ftalimido ali 3-metil-2,5-diokso-limidazolidinil.
9. 9. Spojine po katerem koli izmed zahtevkov 1 do 8, kjer n stoji za 1, če Rl predstavlja skupino s formulo -(CH2)n’Het in za 3, če Rl predstavlja skupino s formulo -(CH2)_n-aril.
10. 10. Spojine po katerem koli izmed zahtevkov 1 do 9, kjer R^ predstavlja metil, izobutil, terc.butil, zaščiten 4-aminobutil, neopentil, n-heptil, cikloheksilmetil, benzil, ametilbenzil ali α,α-dimetilbenzil.
11. 11. Spojine po zahtevku 10, kjer je zaščitena 4-aminobutilna skupina

    4-ftalimidobutil.
12. 12. Spojine po katerem koli izmed zahtevkov 1 do 11, kjer predstavlja (1-6C alkil)karbamoil, predstavlja izobutil in R^ predstavlja vodik.
13. 13. Spojine po zahtevku 12, kjer R^ predstavlja metilkarbamoil ali etilkarbamoil.
14. 14. Spojine po katerem koli izmed zahtevkov 1 do 11, kjer R^ r5 j_n r6 vsakokrat predstavljajo vodik, ali R^ in vsakokrat predstavljata vodik in predstavlja terc.butil, ali R4, r5 in R6 vsakokrat predstavljajo metil.
15. 15. [4-(N-hidroksiamino)-2-(R ali S)-heptilsukcinil]-L-levcil-L-levcin etilamid.
16. 16. [4-(N-hidroksiamino)-2-(R ali S)-nonilsukcinilj-L-levcil-L-levcin etilamid.
17. 17. [4-(N-hidroksiamino)-2-(R ali S)-heptil-3(S)-metik$ukcinil]-L-levcil-L-levcin etilamid.
18. 18. [4-(N-hidroksiamino)-2-(R)-heptil-3(R ali S)-(ftalimidometil)sukcinil]-L-levcilL-levcin etilamid.
19. 19. [4-(N-hidroksiamino)-2-(RS)-nonilsukcinil]-L-terc.butilglicin metilamid.
20. 20. [4-(N-hidroksiamino)-2-(RS)-heptilsukcinil]-L-fenilalanin metilamid.
21. 21. [4-(N-hidroksiamino)-2-(R)-heptil-3(R ali S)-(ftalimidometil)sukcinil]-Lterc.butilglicin metilamid.
22. 22. [4-(N-hidroksiamino)-2-(R)-heptil-3(R ali S)-(3-fenilpropil)sukcinil]-L-levcil-Llevcin etilamid.
23. 23. Spojina po zahtevku 2 izbrana izmed:

    [4-(N-hidroksiamino)-2-(RS)-heptilsukcinil]-L-levcin metilamid, [4-(N-hidroksiamino)-2-(RS)-heptilsukeinil]-L-levcin neopentilamid, [4-(N-hidroksiamino)-2-(RS)-heptiksukcinil]-L-alanil-L-levcin etilamid, [4-(N-hidroksiamino)-2-(RS)-heptilsukcinil]-L-(N^£—ftaloil)-lizil-L-levcin etilamid, [4-(N-hidroksiamino)-2-(RS)-undecilsukcinil]-L-levcil-L-levcin etilamid in [4-(N-hidroksiamino)-2-(RS)-heptilsukciniI]-L-fenilalanil-L-]evcin etilamid.
24. 24. Spojina po zahtevku 1 izbrana izmed:

    [4-(N-hidroksiamino)-2-(RS)-heptiisukcinil]-L-nonalil-L-levcin etilamid, [4-(N-hidroksiamino)-2-(RS)-heptilsukcinil]-L-fenilalanin terc.butilamid, [4-(N-hidroksiamino)-2-(RS)-heptilsukcinil]-L-terc.butilglicin metilamid, [4-(N-hidroksiamino)-2-(RS)-heptilsukeinil]-L-neopentilglicin metilamid, [4-(N-hidroksiamino)-2-(RS)-heptilsukcinil]-L-homofenilalanil-L-levcin etilamid, [4-(N-hidroksiamino)-2-(RS)-heptilsukcinil]-L-cikloheksilalanin metilamid, [4-(N-hidroksiamino)-2-(RS)-izooktilsukciniI]-L-feniIalanin metilamid, [4-(N-hidroksiamino)-2-(R)-heptilsukcinil]-L-neopentilglicin metilamid, [4-(N-hidroksiamino)-2-(R)-heptilsukcinil]-(D ali L)-/3,jS-dimetilfenilalanin metilamid, [4-(N-hidroksiamino)-2-(R)'heptilsukcinil]-(D ali L)-treo-/3-metilfenilalanin metilamid, [4-(N-hidroksiamino)-2-(R)-heptilsukcinil]-DL-eritro-/3-metilfenilalanin metilamid in [4-(N-hidroksiamino)-2-(R)-heptil-3(R ali S)-[(3-metil-2,5-diokso-l-imidazolidinil)metiljsukcinilj-L-levcil-L-levcin etilamid.
25. 25.

    Spojine s splošno formulo II

    R¹ (Π) kjer imajo Rl> R²’ R²> r4, r5 j_n r6 pomen, naveden v zahtevku 1, in Bz pomeni benzil.
26. 26. Spojine s splošno formulo kjer imajo Rl, R², R^, R^, r5 in r6 pomen, naveden v zahtevku 1, in njihovi aktivirani estri.
27. 27. Spojine po kateremkoli izmed zahtevkov 1 do 24, uporabne kot terapevtsko učinkovite snovi.
28. 28. Spojine po kateremkoli izmed zahtevkov 1 do 24, uporabne za kontrolo ali preventivo degenerativnih sklepnih bolezni ali pri terapiji invazivnih tumoijev, ateroskleroze ali multiple skleroze.
29. 29. Postopek za pripravo spojin po kateremkoli izmed zahtevkov 1 do 24, označen s tem, da (a) katalitsko hidrogeniramo spojino s splošno formulo v kateri imajo R⁴, R³, R³, R4, R³ in r6 pomen, naveden v zahtevku 1, in Bz predstavlja benzil, ali (b) kislina s splošno formulo

    R¹ v kateri imajo R⁴, R2, R³, r4 r5 j_n r6 pomen, naveden v zahtevku 1, ali njen aktiviran ester, reagira s spojino s splošno formulo

    Η2ΝΌΖ (IV) v kateri Z predstavlja vodik, tri(l-6C alkil)silil ali difenil( 1-6C alkil)silil, in po potrebi odcepimo morebitno difenil(l-6C alkil)sililno skupino, prisotno v reakcijskem produktu, in po želji pretvorimo dobljeno spojino s formulo I v farmacevtsko sprejemljivo sol.
30. 30. Zdravilo, označeno s tem, da vsebuje spojino po kateremkoli izmed zahtevkov 1 do 24 in terapevtsko inerten nosilni material.
31. 31. Zdravilo za uporabo za kontrolo ali preventivo degenerativnih sklepnih bolezni ali za terapijo invazivnih tumorjev, ateroskleroze ali multiple skleroze, označeno s tem, da vsebuje spojino po kateremkoli izmed zahtevkov 1 do 24 in terapevtsko inerten nosilni material.
32. 32. Uporaba spojine po kateremkoli izmed zahtevkov 1 do 24 za pripravo zdravila za kontrolo ali preventivo degenerativnih sklepnih bolezni ali za terapijo invazivnih tumorjev, ateroskleroze ali multiple skleroze.