SE447629B - Till fast form overford farmaceutisk komposition innehallande cellveggskelett av nocardia rubra - Google Patents
Till fast form overford farmaceutisk komposition innehallande cellveggskelett av nocardia rubraInfo
- Publication number
- SE447629B SE447629B SE7808414A SE7808414A SE447629B SE 447629 B SE447629 B SE 447629B SE 7808414 A SE7808414 A SE 7808414A SE 7808414 A SE7808414 A SE 7808414A SE 447629 B SE447629 B SE 447629B
- Authority
- SE
- Sweden
- Prior art keywords
- oil
- cvs
- rubra
- mice
- bound
- Prior art date
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/74—Bacteria
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
- A61K47/14—Esters of carboxylic acids, e.g. fatty acid monoglycerides, medium-chain triglycerides, parabens or PEG fatty acid esters
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55566—Emulsions, e.g. Freund's adjuvant, MF59
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55583—Polysaccharides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55588—Adjuvants of undefined constitution
- A61K2039/55594—Adjuvants of undefined constitution from bacteria
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
- A61K9/19—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles lyophilised, i.e. freeze-dried, solutions or dispersions
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Mycology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Description
. 15 im 25 30 35 447 629 z mot humantumör /I. Azuma et al, Gann (Cancer), 67, 669-677 (l975)/- t ' ~ Ehuru oljebundet CVS har fördelar betr. komplikation och kvalitetskontroll som immunoterapeutikum 1 fiämförelse med lev- ande mikroorganismer såsom förklarats ovan, det förelåg be- svärande defekter i det att suspensionen av oljebundet CVS är instabil och har bristande förmåga att bibehålla oförändrat tillstånd under längre tid än l dygn, varför beredningarna för- sämras med avseende på kvalitet och har tendens till minskning i aktiviteten. Det har följaktligen varit nödvändigt att fram-I ställa nämnda suspension av oljebundet CVS omedelbart före varje användning, dvs administration på patienter, men eftersom detta är mycket komplicerat och olämpligt för terapi har det -varit i huvudsak omöjligt att använda sådan suspensionsberedning för praktisk terapi vid själva användningsstället på sjukhuset.
I syfte att eliminera de besvärande olägenheterna med suspensionsberedningen av oljebundet CVS såsom angivits ovan så att beredningarna kan användas på ett effektivt och prak- tiskt sätt på sjukhuset, har i anslutning till föreliggande upp- finning studerats framställning av stabila beredningar av olje- bundet CVS, vilka kan lagras under lång tid utan aktivitets- förlust. Som ett resultat av omfattande undersökningar har genom föreliggande uppfinning det lyckats att åstadkomma en fill fast form Överförd komposition av oljehundet CVS, vilken är stabil och idealisk för industriell framställning och användning på sjukhus.
Den till fast form överförda farmaceutiska kompositionen en- ligt föreliggande uppfinning innefattar CVS av Nocardia rubra, bärarolja, suspenderingsmedel och dispergeringsmedel och kan framställas genom lyofilisering av en suspension av CVS, bärarol- ja, suspenderingsmedel och dispergeringsmedel.
Det CVS som användes i föreliggande uppfinning kan framstäl- las genom fraktíonering och rening av cellvâggar från celler av iodlade bakterier på konventionellt sätt (I.Azuma et al, J.Nath.
Cancer Inst., 52, 95 (1974) och I.Azuma et al, Biken J., 18, 1 (1975)). Ett exempel på en sådan framställning av CVS visas fort- sättningsvis i föreliggande framställning.
Den bârarolja som användes i föreliggande uppfinning är en olja som har förmåga att stimulera adjuvant- och antitumöraktivi- 10 15 20 25 30 35 3 447 629 teterna. Nämnda bararolja kan vara naturlig eller syntetisk eller halv- syntetisk olja, och sådana oljor kan exemplifieras genom de oljor som illustreras i Immunology,27,311-329(l924), företrädesvis en animalisk I olja (ex.vis 2,6,10,l5,l9,23-hexametyl-2-6-10-l4-l8-22-tetracosahex- aen (squalene), vitamin A-olja, vitamin E-olja, ubikinon, etc. och metaboliter därav), en växtolja (ex.vis en triglyceridbland- ning av mättade vegetabiliska fettsyror av medelkedjelängd (mi- glyol), AD-65 (handelsnamn, en blandning av jordnötsolja, aracel och aluminiummonostearat), etc), syntetiska eller halvsyntetiska oljor därav (ex.vis Z,6,l0,l5,l9,23-hexametyltetracosan (squalene), vitamin A-palmitat, etc.), mineralolja (ex.vis flytande paraffin, Bayol F (handelsnamn), flytande petrolatum med handelsnamnet Drake- ol 6VR (Pennsylvania Refining Co.), etc.) och liknande och speci- ellt 2,6,l0,l5,l9,23-hexametyl-2,6,10,14,18,22-tetracosahexaen, 2,6,10,15,19,23-hexametyltetracosan, en triglyceridblandning av mättade vegetabiliska fettsyror av medelkedjelängd, flytande petro- latum och vitamin A-palmitat. Betr. ovan illustrerade bärarolja bör det observeras, att sådana oljor är effektiva och användbara för stimulering av transporten av CVS till det aktuella området (ex.vis tymuscellområdet), så att CVS uppehåller sig i området under tämligen lång tidrymd och att befrämja dess immuniserande förmåga.
Bland de häri exemplifierade bäraroljorna kan den animaliska oljan, speciellt squalene, med fördel användes enligt före- liggande uppfinning med hänsyn till att sådan bärarolja härrör från naturlig källa och följaktligen har affinitet till den levande humankroppen.
Det suspenderingsmedel som användes i föreliggande upp- finning kan innefatta ett konventionellt emulgeringsmedel, såsom kolväte (ex.vis pulvriserat akaoiagummi, tragantpulver, agar, pektinämnen, natriumalginat, metylcellulosa, karboximetyl- cellulosa, etc), protein eller fosfolipid (ex.vis deutoplasm, kasein, gelatin, lecitin, etc), polyalkoholester (ex.vis poly- oxietylensorbitanmonolaurat (Tween-20), -monopalmitat (Tween-80), sorbitanmonolaurat (Span-20), -monopalmitat (Span-40), -mono- stearat (Span-60), -monooleat (Span-80), etc, och liknande, bland vilka polyalkoholester med fördel kan användas vid före- liggande uppfinning och speciellt polyoxietylensorbitanester, såsom polyoxietylensorbitanmonooleat, är föredragen. 10 20 25 R 35 447 629 4 Det i föreliggande uvpfinninl använda disperßeriflßsmedlefi är socker och sockeralkohol, såsom glukos, mannitol, sorbitol eller liknande, företrädesvis sockeralkohol och speciellt mannitol.
Betr. effektiviteten av det i den solidifierade farma- ceutiska kompositionen ingående dispergeringsmedlet har det ob- serverats, att nämnda medel är användbart ej endast i syfte av att underlätta dess överföring till suspension men även att göra den bildade suspensionen isotonisk.
Förhållandet mellan varje komponent som ingår i den till fast form överförda kompositionen enligt föreliggande uppfinning (dvs CVS, bärarolja, suspenderingsmedel och dispergeringsmedel) kan om det är önskvärt bestämmas, och föredragna och lämpliga förhållanden framgår av nedan beskrivna konkreta exempel. f Den till fast form överförda farmaceutiska kompositíonen kan ex.vis framställas genom suspendering av en blandning av varje kom- ponent såsom omnämnts ovan på konventionellt sätt och lyofilise- ring av den sålunda beredda suspensionen. Speciellt kan ex.vis CVS placeras i en vävnadshomogenisator och bäraroljan tillsättas, varvid om det är önskvärt blandningen males till en slät pasta.
Till blandningen sättes droppvis en vaüænlösning av disperge- ringsmedel innehållande suspenderingsmedel och blandningen males och homogeniseras till bildning av en enhetlig suspension, vilken sedan överföres till en glasbehàllare, fryses snabbt under användning av ex.vis flytande kväve och lyofiliseras. lO 15 25 BO 35 40 447 629 Den enligt föreliggande uppfinning framställda till fäst form överförda farmaceutiska kompositionen kan användas genom förnyad suspenderíng av densamma genom tillsats av steriliserat vatten före administration på patienter, och kompositionen har an- vändbarhet och fördelar, som kommer att framgå av följande, synpunkter. (1) Den till fast form överförda farmaceutiska kompositionen enligt föreliggande uppfinning kan lagras under längre tid ån en nyberedd suspension av oljebundet CVS och bibehåller ej endast sin fysi- kaliska stabilitet utan även aktiviteterna i huvudsak oför- ändrade.
I anslutning härtill bör det observeras, att en nyberedd suspension av oljebundet CVS vanligen sönderdelas åtminstone efter l timme till oenhetlig och ojämn suspension, som svårligen kan överföras till en enhetlig suspension, vilket kan resultera i att den ursprungliga terapeutiska effektiviteten av CVS som sådant efter lagring ej längre föreligger. (2) Den till fast form överförda farmaceutiska kompositionen en- ligt föreliggande uppfinning kan lätt och reproducerbart överföras till en enhetlig suspension av oljebundet CVS, som är mycket sta- bil i samma tillstånd som en nyberedd suspension genom enkel till~ sats av steriliserat vatten även efter det att en lång lagrings- tid förflutit, och nämnda ånyo suspenderade beredning kan upp- visa samma aktivitet som den nyberedda suspensionen av oljebundet CVS och kan såsom angivits ovan uppvisa högre terapeutisk effek- tivitet av CVS som sådant än en suspension av oljebundet CVS lagrad under en längre tidsperiod. (3) Fram till nu har suspensionen av oljebundet CVS framställts varje gång omedelbart före administrationen, såsom omnämnts Eftersom à andra sidan en enkel dos av CVS utgör en I g) är operationen att ovan. mycket liten mängd (ex.vis ca lOO-300 framställaßsuspensionen av oljebundet CVS mycket besvärlig och det är mycket svårt att bereda en suspension av jämn kvalitet innehållande given kvantitet. Även om en större mängd av sus- pensionen av oljebundet CVS beredes på en gång för eliminering av dessa problem är suspensionen som sådan mycket instabil och kan ej förvaras under en längre tidsperiod såsom omnämnts ovan, varför största delen av suspensionen ej kan terapeutiskt an- vändas och måste kastas. Enligt föreliggande uppfinning däremot är det lätt och möjligt att framställa den till fast form överför- 10 15 20 25 ÉO 55 ~ 40 447 629 da komposítionen innehållande en given liten mängd av oljebundet CVS i stor skala och att kontrollera produktens kvalitet.
Betr. den bättre stabiliteten och högre graden av aktivitet av den suspension som framställes av den till fast form överförda kompo- sitionen enligt föreliggande uppfinning, vilket förklarats vara uppfinningsmerit i form av oväntade och överraskande egen- skaper, bör det observeras, att sådan förbättrad högre stabili- tet och aktivitet synes bero på det faktum, att det oljebundna CVS kan dispergeras i en sådan reproducerad suspension och att det dispergerade oljebundna CVS kan föreligga i form av fina globuler (med en diameter av ex.vis ca 5/um) utan agglutination till större partiklar . _flv ovanstående förklaring av föreliggande uppfinning fram- går och betonas även att man genom uppfinningen för första gången löst det svåra och skenbart omöjliga problemet att i industriell skala framställa ett antitumörmedel av oljebundet ' CVS av hög kvalitet så att CVS praktiskt kan användas på sjukhus på ett enkelt och praktiskt utförbart sätt. Detta förhållande är epokgörande och betyder att föreliggande uppfinning kan sägas vara välsignelsebringande för kancerpatienter.
I syfte att visa och bekräfta de uppfinningsmässiga och tekniska fördelarna hos den solidifierade farmaceutiska kompo- sitionen enligt föreliggande uppfinning anges i det följande farmakologiska och farmaceutiska testresultat.
Material och metoder Adjuvans: Framställning av CVS av Nocardia rubra (i fortsättningen kallad N.rubra) har beskrivits ovan. Drakeol 6VR (Pennsylvania Refining Co., Butler, USA), squalene (Tokyo Kasei Co., Itd., Japan) och squalane (Katayama Kagaku Co., Itd., Japan) användes som oljor för framställningen av oljebundet CVS av N.rubra.
Antigener: m-/Ä-(4'-monofenylazo)fenyl/-N-acetyl-L-tyrosin (ABA-N- acetyltyrosin) och ABA-bakteriellt o-amylas (ABA-BaA) fram- ställdes genom det förfarande som beskrives i J.Biol.Chem., 258, 1726-1730 (1959). Bakterielit Q-amyias (Liquefying Type, Lot Nr. E5XO1) renat från Bacillus subtilis inköptes från Seikagaku Kbgyo Co., Imd., Japan. e Tumörer: Leukemia EL4 av C57BL/6J möss, mastocytoma P8l5-X2 av 10 15 20 25 ÉO 35 ÄO 447 629 DBA/Q möss, Meth A av BALB/b möss, fibrosarkominducerat av 5-metylkolantræupáC57B/6J möss betecknat MClO4 användes. EL4, mastocytoma P8l5-X2 och Meth A upprätthölls i serie genom passage av ascites på syngenesiska honmöss. MCl04 bringades att passera i serie genom subkutan transplantation på syngene- siska möss.
Möss; Mössen, 6-8 veckor gamla honmöss av BALBXc, C578BL/BJ och DBA/2 erhölls från Shizuoka Jikken Dobutsu Nokyo, Shizuoka, Japan. Djuren gavs föda (fràn Oriental Yeast Ind., Japan) och vatten fritt.
Mediumlösning: Eagles minimal essential medium (MEM) innehållande 100 U/ml penicillin och 100 ug/ml süæptomycin erhölls från Research Foundation for Microbial Diseases, Osaka University, Japan.
Medium RPMI-1640 för vävnadsodling erhölls från Nissui Seiyaku Co., Ltd., Japan. Fetalt kalvserum (Lot No. 4055722) inköptes från Flow Laboratories (Rockville, USA) och inaktiverades genom upphettning vid 560 i 30 min. före användning.
Direkt cytotoxiskt test: En tumörcellsuspension (Mêth A) i MEM-lösning blandades med en lika stor volym oljebundet CVS eller oljedroppar och hölls i isvattenbad i 60 min. ldvskraften hos tumörcellerna bestämdes genom Eosin Y exclusion test.
Bestämning av adjuvansaktivitet på induktion av hypersensi- tivitet av fördröjd typ: Marsvin gavs primärt immunisering i fyra fotdynor med totalt 50/ug ABA-N-acetyltyrosin med eller utan CVS av N.rubra i olika bäraroljor som vatten-i- oljeemulsion. Två veckor senare ut- fördes ett hudtest med 100 g ABA-BaA och reaktionen uppmättes 24 och 48 timmar efter intradermal injicering av testantigen.
Cellmedierat cytotoxicitetstest: C57BL/EJ möss (H-2b) immuniserades intraperitonealt med levande celler av mastocytoma P8l5-X2 (H-2d) med eller utan olje- bundet CVS av N.rubra. ll dygn efter immunisering utfördes cell- medierad cytotoxicitetsanalys genom användning av mjältcellerna från immuniserade möss och 51Cr-märkta mastocytoma P8l5-X2- celler genom förfarandet enligt Brunner et al /lmmunology, 18, 501-515 (l970)/ med vissa modifikationer. /T. Taniyama et al, Jpn. J. Microbiol 19, 255-26Ä (1975)/. Förhållandet mjältceller 10 15 20 25, ÉO 55 40 'Tween 80-lösning. 447 629 (effektorceller) till 51-Cr-märkta mastocytoma P8l5-X2-celler (targetceller) var lOO:l. Targetcell-lys uttrycktes som pro- cent specifik targetcell-lys enligt följande formel: Procent specifik targetcell-lys Utlösning av specifik targetcell-lys Maximal utlösning - spontan utlösning Maximal kromutlösning uppmättes genom fullständig cell-lys, där targetceller enbart frystes och upptinades två gånger.
Beredning av oljebundet CVS av N.rubra: Den solidifierade beredningen av CVS av N.rubra framställ- des såsom beskrives i följande konkreta exempel, Resultat Effekt av CVS av N.rubra behandlat med olika oljor på cell- medierad cytotoxicitet på allogena möss: CVS av N.rubra behandlades med squalene eller Drakeol 6VR och suspenderades i O,9% koksaltlösning innehållande O,2% C57BL/EJ möss immuniserades med en blandning Såsom X 100 *av mastocytomaceller och.adjuvantia såsom beskrives ovan. framgår av tabell I var beredningarna av CVS av N.rubra behand- lade med Drakeol 6VR-koksaltlösning, squalene-koksaltlösning 5 eller squalene-mannitol uppenbarligen effektiva som adjuvantia för induktion av effektorceller i mjälten på allogena möss. Det visades även, att lyofiliserade adjuvantia som ånyo suspendera- des genom tillsats av steriliserat vatten före användning var lika effektiva som tidigare använda nyberedda adjuvantia.
Direkt cytotoxicitet på tumörceller: Såsom framgår av tabell II uppvisade ingautestade beredning- ar innehållande CVS av N.rubra cytotoxicitet när dessa adjuvantía och tumörceiier (Meta A från BALB/c) hölls i isvattenbaa i 60 min., medan däremot lyofiliserad beredning av squalene-0,9% koksaltlösning innehållande O,2% Tween 80 uppvisade viss toxi- citet gentemot tumörceller. Nyberedd komposition var under samma betingelser icke cytotoxisk. Den lyofiliserade beredningen av pCVS av N.rubra behandlad med squalenæmannitol var emellertid ej cytotoxisk.
Antitumöraktivitet av oljebundet N.rubra-CVS:, Antitumöraktiviteten av N.rubra-CVS behandlat med squalene, squalane eller Drakeol 6VR och suspenderat i 5,6% mannitol- lösning innehållande O,2% Tween 80 testades under användning av 10 15 20 25 447 629 transplanterbara tumörer på syngenesiska möss. Såsom framgår av tabellerna III, IV, V och VI visade sig beredningarna av N.rubra-CVS behandlade med olika typer av oljor ha nära nog samma aktivitet för hämning av tumörtillväxt av EL-4 leukemia, Meth A och MClO4 på resp. syngenesiska möss. Såsom framgår av tabell III är den hämmande aktiviteten av CVS av N.rubra på tillväxten av Meth A i BALB/o möss ej annorlunda än nyberedd Drakeol-koksaltberedning och squalene-mannitol- eller squalane- mannitol-beredningar som lyofiliserats och suspenderats med steriliserat vatten före användning.
Effektiviteten av oljekomposition på hypersensitivitet av fördröjd typ hos marsvin: CVS av N.rubra suspenderades i en blandning av olja (såsom Drakeol 6VR, squalene eller squalane) och Arlacel A (mannitmono- oleat, emulgator, varumärke, framställt av Kao Corporation) i förhållandet 85:15 och blandades sedan med en lösning av ABA-N- -acetyltyrosín med eller utan CVS av N. rubra i form av vatten- -i-oljeemulsion. Marsvin immuniserades genom intramuskulár in- jektion av ovanstående blandning av adjuvantia och antigen. Två veckor senare utfördes hudtest med ABA-BaA och hudreaktíonen av- lästes 24 och 48 timmar efter intradermal injícering av testanti- gen. Såsom framgår av tabell VII observerades positiv hudreaktíon för ABA-BaA på marsvin som immuniserats med ABA-N-acetyltyrosin tillsammans med CVS av N. rubra och squalene eller squalane så- vä1_som Drakeol 6VR i form av vatten-i-oljeemulsion.
Erhållna testdata visas i följande tabeller. 10 447 629 TABELL I Effekt av oljebundet N-rubra-CVS på cellmedierad cytotoxicitet för Mastocytoma P8l5-X2 1 C57BL/ÉJ möss Möss immuníserades med Specifik target-cell- e analys S%) b) exp. la exp. 2 Mastocytoma-P815-X2-celler (lxlO4) + N.rubra-CVS-squalene-mannitol 64,2 41,1 + N.rubra-CVS-Drakeol 6VR-mannitol - 58,3 + N.rubra-CVS-squalene-koksaltlösning 50,4 - + N.rubra-CVS-Drakeol 6VR-koksaltlösn. 26,9 _ 28,4 + Squalene-mannitol l8,2 14,1 + Drakeol 6VR-mannitol - 8,7 + Squalene-koksaltlösning 2,3 -_ - + Drakeol 6VR-koksaltlösning 0,7 16,8 Mastocytoma-P8l5-X2-celler (3xlO7) enbart 87,9 67,5 Anm.: Tre av C57BIy@J'möss 1 varje grupp immuniserades intra- peritonealt med en blandning av mastocytomaceller och oljebundet CVS av N.rubra. ll dygn senare bestämdes cell- medierad cytotoxicitet genom inkubering av mjältceller från immuniserade möss och 5lCr-märkta mastocytomaceller i förhållandet lOO:l i 20 timmar. Alla proven utfördes dubbelt. d l a) Nyberedda adjuvantia användes. b) Lyofiliserade material suspenderades ånyo genom till- sats av steriliserat vatten före användning. 10 15 20 25 50 55 ll 447 629 TABELL II Direkt cytotoxicitet mot tumörceller (Meth A) av oljebundet N.rubra-CVS in vitro Tumörceller blandades med: :3nå$êt:§ Nyb2ïerleVâ;gfí?) N.rubra redd liserad N.rubra-CVS~squalene- 2 mg/ml 90,0 89,7 mannitol 0,4 mgfinl 88,8 85,0 N.rubra-CVS-squalene- 2 mg/ml 92,5 87,0 koksalclösning 0,4 mg/ml 87,9 91,7 N. rubra-cvs-Draxeol-óvn- 2 mg/ml 86, 7 85, 8 koksaltlösning 0,4 mg/ml 86,4 84,7 Oljedroppar Squalene-mannitol - 85,5 87,1 Squalene-koksaltlösning - 75,7 45,5 Draxeol óvn-xoksaltlösn. - 87, 1 79, 1 MEM - lOO .lOO Anm.: En tumörcellsuspension (Meth A från BALB/b möss) (4 x 107/ml 1 MEM) blandades med oljebundet N.rubra-CVS eller oljedroppar och hölls i isvattenbad i 60 min., varefter tumörcellernas överlevnad bestämdes genom Eosin Y-exclusion test. Siffrorna illustrerar förhållandena till överlevnad av tumörceller 1 MM-lösning.
TABELL III Hämning av tumörtillväxt (Meth A) med oljebundet CVS av N.rubra i BALB/b honmöss Nybe-a) Lyofili- Beredningar redd Serad ) N.rubra CVS (100/ug) behandlat med: squalene 1o/1o 9/1o° ) Squalane 9/10 10/10 Dr-akeoi 6v11 10/10 - Kontroll (oljedroppar) Squalene O/10 0/lO Squalane 0/l0 O/lO Drakeol öva 0/10 - Anm.: En blandning av tumörceller (Meth A, 2 x 105) och 100/ug oljebundet CVS av N.rubra eller oljedroppar inokulerades intradermalt pà BALB/b honmöss. Siffrorna visar resul- taten 4 veckor efter inokulering. 10 15 20 25 30 44- Beredningara) Experiment-nr O82§ 1108 N.rubra-CVS (100/ug) behandlat med: squalene-mannitøl 10/10 8/10b) Squalane-mannitol - 10/lO Drakeol 6VR-mannitol alO/lO 10/l0 Migiyoi-mannicol 10/10 10/10 Kontroll (oljedroppar) Squalene-mannitol '°2/10 0/l0T_ Squalane-mannitol - 0/10 i Draxeol .övn-manni m1 0/10 0/10 Migiyol-mannitol 2/10 0/10 NIEM 0/10_ 0/10 012 7 629 a) N.rubra CVS behandlades med olika oljor och suspen- derades i O,9% koksaltlösning innehållande 0,2% I Tween 80.
N.rubra CVS behandlat med olika oljor suspenderades i 5,6% mannitol innehållande 0,2% Tween 80 och lyo- Beredningarna suspenderades ånyo med Beredningen framställdes före användning. b). filiserades.7 steriliserat vatten före användning.
Antal tumörfria möss/antal testade möss.
TABELL IV Hämning av tumörtillväxt (Meth A) med oljebundet CVS av N.rubra i BALB/0 möss G) Anm.: En blandning av 3-metylkolantreninducerad fibrosarcoma (Meth A) (1 x 105) och 100/ug oljebundet CVS av N.rubra eller oljedroppar inokulerades intradermalt på honmöss av BALB/b. efter>inokulering.
Siffrorna illustrerar resultaten 42 dygn a) Lyofiliserade material suspenderades ånyo med ste- riliserat vatten före användning{ b) Antal tumörfria möss/antal testade möss.
UT 10 15 20 25 BO 55 40 13 TABELL V Hämning ev tumörcillväxt (Mc104) med olgebundet CVS av N.rubra pà honmöss av C57BL/6J 447 629 Beredninga) Experiment-nr 0819 1109 N.rubra-CVS (100/ug) behandlat med: Squalene-mannitol 6/10 10/10 Squalane-mannitol - 10/10 Drekeel óvn-mennieel 7/10 7/10 Miglyel-menn1te1 7/10 -10/10 Kontroll (oljedroppar) sque1ene-menn1ee1 0/10 0/10 Squalane-mannitol - 0/10 Draxeol 6vR-mennitel 0/10 0/10 M1g1ye1-mennitel 0/10 L 0/10 Anm.: En blandning av 3-metylkolantren-inducerad fibrosarkoma (M0104) (1 x 106) och 100 g eljebundet N.rubra-cvs eller oljedroppar inokulerades intradermalt pà honmöss ev c57BL/BJ. inokulering.
Siffiorna visar resultaten 42 dygn efter a) Lyofiliserade material suspenderades ånyo med ste- riliserat vatten före användning. b) Ante1 tumörfrie möss/ente1 teeteae möss.
TABELL VI Hämning av tumört111växt (EL-4 1eukem1e) med elje- bunden cvs ev N.rubre på henmöes ev c57BL/SJ Beredningara) Experiment nr } 0824 0830 0907 N.rubra-CVS (100/ug) behandlat med: squelene-mennitel 8/10 9/10 7/10b) nrekee1 öva-mennicel 5/10 7/10 5/10 Mig1ye1~menn1ue1 4/10 8/10 8/10 Kontroll (oljedroppar) , Squalene-mannítol O/10 O/10 O/10 0rekee1 öva-menn1ue1 0/10 0/10 0/10 M1g1ye1-menn1te1 0/10 0/10 0/10 mm 0fl0 000 oflo Anm.: En blandning av EL-4-leukemiaceller (l x 105) och 100/ug oljebundet CVS av N.rubra eller oljedroppar inokulerades intradermalt på C57BL/BJ honmössl 10 15 20 25 30 35 40 a 14 447 629 Siffrorna visar resultaten 28 dygn efter inokulering. a) Lyofiliserade material suspenderades ånyo med ateriliserat vatten före användning._ b) Antal tumörfria möss/antal testade möss.
TABELL VII f Effekt av oljekomposition på hypersensitivitet av för- dröjd typ mot ABA-N-acetyltyrosin i marsvin Hudreaktion för ABA- bakteriellt d-amylas Marsvin immuniserades med - ABA-N-acetyltyrosin jämte: N.rubra-CVS (100/ug) i Drakeol 6VR- Arlacei A (85:15) 23,4ïo,8mm 25,7ïo,7mma) i squalene- + + Ariacei A (85 15) 20,1-1,5 17,9-1,0 i squalane- _ + I +_ Arlacei A (85=15) _ 18,9=o,5 16,6-0,6 Kontroll /brakeol 6VB- Ariaeei A (85=15)/ o . of flnm.: 5 marsvin i varje grupp immuniserades med 50 g ABA-N- acetyltyrosin med eller utan 100/ug CVS av N.rubra suspenderat i olika typer av oljebärare eller vatten- i-oljeemulsion. Två veckor efter immunisering utfördes hudtest med lOO/ug ABA-bakteriellt a-amylas. a) Medelhudreaktion (påverkat område, mm i diameter) f standardfel.
Nocardia-rubra-CVS använt i följande exempel bereddes på följande sätt.
Nocardia rubra odlades i ett medium innehållande polypepton (2%) och jästextrakt (1%) (pH 7,0) i'3o°c 1 3 dygn och odlings- mediet (18 liter) filtrerades. Vått mycel (ca 400 g) suspen- derades i vatten (l liter) och maldes med Dynomill (0,1-0,2 mm kulor; 3000 varv/min.; 2 liter/timme) 3 ggr. Det erhållna ämnet buffrades (pH 7,5), behandlades med nukleikacidas (DNase och RNase) i 30 min. och centrifugerades därefter (800xg, 15 min.).
Den ovanförliggande vätskan avskildes och centrifugerades vidare (lO;OOO-20.000 xg¿ 30 min.). Fällningarna uppsamlades och sus- penderades i aceton (l liter) och omrördes i 24 timmar.- Fäll- ningarna uppsamlades genom filtrering, suspenderades i 2% Tritone X-100 (polyoxíetylenglykol-p-teoktylfenyleter, ytaktivt 'medel, varumärke, framställt av Rohm and Haas po.) (1 liter) om- rördes i 24 timmar och centrifugerades därefter (l0.000-20.000 xg, 10 15 20 25 30 35 40 15 447 629 30 min.). Fällníngarna behandlades åter med Tritone X-100 på sam- ma sätt som ovan. De erhållna fällningarna tvättades med en blandning (1 liter) av etanol och vatten (l:l) och sedan med vat- ten (l liter) två gånger och centrifugerades (l0.000-20.000 Xg, 30 mín.). Fällningarna suspenderades i Veronal buffert (barbital, buffertmedel, varumärke,framställt av Bayer AG) (pH 9,5), behand- lades med Pronase (blandning av flera proteaser framställd av streptomyces griseus, varumärke, framställd av Calbiochem- Behring Co.) (50 mg) under omröring vid rumstemperatur i 24 tim- mar och centrífugerades därefter (l0.000-20,000 xg, 30 min.).
Fällningarna tvättades med vatten (1 liter) 3 ggr och centrifuge- rades (l0.000-20.000 xg, 30 min.). Fällningarna tvättades med en blandning (l liter) av dietyleter och etanol (l:1), torkades un- der reducerat tryck vid rumstemperatur i 3 dygn, pulvriserades och siktades sedan (125 Pm) till bildning av ett fint pulver av N. rubra-CVS (ca 7 g).
Den till fast form överförda kompositionen enligt föreliggan- de uppfinning suspenderas ånyo i steriliserat vatten och administ- reras på patienter intrapleuralt, intralesionalt, intradermalt,i subkutant, intramuskulärt eller intraperitonealt i en enkel dos om 10-2000 pg, företrädesvis 100-300 pg av CVS.
Följande exempel återges för mera detaljerad illustration av uppfinningen.
Exempel l N.rubra-CVS 4 mg Miglyol 2 droppar . 5,6% mannitollösning innehållande 0,2% Tween 80 l ml CVS av N.rubra (140 mg) placerades i en vävnadshomogenisator utrustad med en Teflonpestle (Takashima Shoten Co., Ltd., Japan) Miglyol (70 droppar) tillsattes från en injektionsnål nr 27 till CVS och denna blandning maldes till en slät pasta vid 1000 varv/min. Därefter sattes till pastan 5,6% vattenlösning (55 ml) av mannitol innehållande O,2% Tween 80 och malning upp- rätthölls till bildning av en enhetlig suspension av små olje- droppar förenad med CVS av N.rubra. För framställning av lyo- filiserat material överfördes oljebunden suspension av N.rubra- CVS till 55 glas (10 ml volym) som snabbt frystes under använd- ning av flytande kväve och sedan lyofiliserades vid rumstempe- ratur. l ml steriliserat vatten sattes till det lyofiliserade 10 15 20 25 30 35 16 447 629 materialet för bildning av en suspension före användning.
Exempel 2 N.rubra-CVS Drakeol-6VR 5,6% mannitollösning innehållande 0,2% Tween 80 l_ml Drakeol 6VR användes istället för den miglyol som användes i ovanstående ex. l och blandningen behandlades på samma sätt som 1 ex§ 1 till bildning av en till fast form överförd komposition. 4 mg 2 droppar *J Exem el p N. rubra-cvs 4 mgër Squalene ' 2 droppar 5,6% mannitollösning innehållande 0,2% Tween_80 * l ml Squalene användes istället för den i ovanstående ex. l använda miglyolen och blandningen behandlades på samma sätt som i ex. l till bildning av en till fast form Överförd komposition.
Exempel 4 N.rubra-CVS 4 mg Vitamin-A-palmitat 2 droppar 5,6% mannitollösning innehållande 0,2% Tween 80 l ml Vitamin-A-palmitat användes istäl1et'för den i ex. l använda ,miglyolen och blandningen behandlades på samma sätt som i ex. l till bildning av en till fast form överförd komposition.
Exempel 5 N.rubra-CVS 4 mg Miglyol 2 droppar 5,6% glukoslösning innehållande O,2% Tween 80 4 ml 5% vattenlösning av glukos användes istället för 5,6% vatten- lösning av mannitol använd i ex. l och blandningen behandlades på samma sätt som i ex. l till bildning av en till fast f0rm Överförd komposition. 'in
Claims (6)
1. Till fast form överförd farmaceutisk komposition innehål- lande cellväggskelett av Nocardia rubra, bärarolja, suspenderings- medel och dispergeringsmedel, k ä n n e t e c k n a d av att den framställts genom lyofilisering och att den innehåller socker eller sockeralkohol som dispergeringsmedel.
2. Komposition enligt krav 1, vari bäraroljan är animalisk olja, vâxtolja, mineralolja eller semisyntetisk olja därav.
3. 5. Komposition enligt krav 2, vari bäraroljan är flytande petrolatum, 2,6,10,l5,19,23-hexametyl-2,6,l0,l4,18,22-tetracosa- hexaen, 2,6,l0,15,19,23-hexametyltetracosan, en triglyceridbland- ning av mättade vegetabiliska fettsyror av medelkedjelängd eller vitamin-A-palmitat.
4. Komposition enligt något av föregående krav, vari suspen- deringsmedlet är polyalkoholester.
5. Komposition enligt krav 4, vari suspenderingsmedlet är polyoxietylensorbitanester. 7
6. Komposition enligt något av föregående krav, k ä ni- n e t e c k n a d av att dispergeringsmedlet är mannitol, sorbitol eller glukos.
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP9587177A JPS5428813A (en) | 1977-08-09 | 1977-08-09 | Solid preparation containing cell membrane extract substance used as suspension when using same |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
SE7808414L SE7808414L (sv) | 1979-02-10 |
SE447629B true SE447629B (sv) | 1986-12-01 |
Family
ID=14149407
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SE7808414A SE447629B (sv) | 1977-08-09 | 1978-08-04 | Till fast form overford farmaceutisk komposition innehallande cellveggskelett av nocardia rubra |
Country Status (15)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US4543253A (sv) |
JP (1) | JPS5428813A (sv) |
AU (1) | AU526788B2 (sv) |
BE (1) | BE869610A (sv) |
CA (1) | CA1118348A (sv) |
CH (1) | CH643459A5 (sv) |
DE (1) | DE2834893A1 (sv) |
DK (1) | DK153443C (sv) |
FI (1) | FI65370C (sv) |
FR (1) | FR2399844A1 (sv) |
GB (1) | GB2002229B (sv) |
HU (1) | HU179726B (sv) |
IT (1) | IT1098381B (sv) |
NL (1) | NL7808337A (sv) |
SE (1) | SE447629B (sv) |
Families Citing this family (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CA1206415A (en) * | 1982-06-30 | 1986-06-24 | John L. Cantrell | Pyridine soluble extract of a microorganism |
CA1206416A (en) * | 1982-06-30 | 1986-06-24 | John L. Cantrell | Pyridine soluble extract of a microorganism |
US4806350A (en) * | 1986-04-18 | 1989-02-21 | Norden Laboratories, Inc. | Vaccine formulation |
DD273198A5 (de) * | 1986-06-09 | 1989-11-08 | �������@�������k���Kk�� | Verfahren zur herstellung eines modifikationsmittels |
DE3727987A1 (de) * | 1987-08-21 | 1989-03-02 | Sleytr Uwe B | Pharmazeutische struktur |
US6090385A (en) * | 1993-12-10 | 2000-07-18 | Maes; Hubert | Method of treating cancer |
EP1097715A4 (en) * | 1998-07-16 | 2004-12-29 | Hayashi Akira | PREPARATIONS FOR ANTICANCER IMMUNOTHERAPY COMPRISING A BACTERIAL SOMATIC COMPONENT AS AN ACTIVE INGREDIENT |
AU2003254792A1 (en) * | 2002-08-02 | 2004-02-23 | Sumitomo Pharmaceuticals Company, Limited | Bacterial cell wall skeleton component preparaion |
US20080032384A1 (en) * | 2004-04-22 | 2008-02-07 | Takehiko Nomura | Pharmaceutical Preparation Containing Bacterial Cell Wall Skeleton |
CN115300490B (zh) * | 2021-05-07 | 2024-04-16 | 安徽远望乐桓药业有限公司 | 包含角鲨烯和甘露醇的药物组合物及其用途 |
Family Cites Families (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3185623A (en) * | 1960-05-31 | 1965-05-25 | Smith Fred | Preservation of animal semen |
US3177117A (en) * | 1961-12-26 | 1965-04-06 | Joseph F Saunders | Process for freezing blood |
FR2268531B1 (sv) * | 1974-04-25 | 1978-07-21 | Anvar | |
FR2275224A1 (fr) * | 1974-06-20 | 1976-01-16 | Anvar | Fractions mycobacteriennes utilisables comme agent anti-infectieux, et procede pour leur preparation |
FR2345159A2 (fr) * | 1976-03-26 | 1977-10-21 | Anvar | Agents solubles dans l'eau ayant des proprietes mitogenes et/ou immuno-stimulantes, obtenus a partir de cellules de nocardia, et leurs procedes de preparation |
FR2345158A1 (fr) * | 1976-03-26 | 1977-10-21 | Anvar | Agents mitogenes, provenant notamment de peptidoglycanes bacteriens |
-
1977
- 1977-08-09 JP JP9587177A patent/JPS5428813A/ja active Granted
-
1978
- 1978-08-02 US US06/930,409 patent/US4543253A/en not_active Expired - Lifetime
- 1978-08-03 GB GB7832134A patent/GB2002229B/en not_active Expired
- 1978-08-04 SE SE7808414A patent/SE447629B/sv not_active IP Right Cessation
- 1978-08-08 BE BE78189775A patent/BE869610A/xx not_active IP Right Cessation
- 1978-08-08 IT IT26609/78A patent/IT1098381B/it active
- 1978-08-09 NL NL787808337A patent/NL7808337A/xx not_active Application Discontinuation
- 1978-08-09 AU AU38791/78A patent/AU526788B2/en not_active Expired
- 1978-08-09 DK DK352578A patent/DK153443C/da not_active IP Right Cessation
- 1978-08-09 HU HU78JU295A patent/HU179726B/hu not_active IP Right Cessation
- 1978-08-09 CA CA000309032A patent/CA1118348A/en not_active Expired
- 1978-08-09 CH CH847978A patent/CH643459A5/de not_active IP Right Cessation
- 1978-08-09 FI FI782442A patent/FI65370C/fi not_active IP Right Cessation
- 1978-08-09 FR FR7823522A patent/FR2399844A1/fr active Granted
- 1978-08-09 DE DE19782834893 patent/DE2834893A1/de active Granted
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
FR2399844A1 (fr) | 1979-03-09 |
FR2399844B1 (sv) | 1982-08-20 |
IT7826609A0 (it) | 1978-08-08 |
DE2834893C2 (sv) | 1987-08-27 |
US4543253A (en) | 1985-09-24 |
JPS631291B2 (sv) | 1988-01-12 |
FI65370C (fi) | 1984-05-10 |
HU179726B (en) | 1982-11-29 |
GB2002229A (en) | 1979-02-21 |
JPS5428813A (en) | 1979-03-03 |
AU526788B2 (en) | 1983-02-03 |
CH643459A5 (de) | 1984-06-15 |
GB2002229B (en) | 1982-05-26 |
DE2834893A1 (de) | 1979-02-22 |
DK153443B (da) | 1988-07-18 |
BE869610A (fr) | 1979-02-08 |
FI65370B (fi) | 1984-01-31 |
IT1098381B (it) | 1985-09-07 |
DK153443C (da) | 1988-12-05 |
DK352578A (da) | 1979-02-10 |
CA1118348A (en) | 1982-02-16 |
NL7808337A (nl) | 1979-02-13 |
FI782442A (fi) | 1979-02-10 |
AU3879178A (en) | 1980-02-14 |
SE7808414L (sv) | 1979-02-10 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US4877611A (en) | Vaccine containing tumor antigens and adjuvants | |
Shimada et al. | Antitumor activity of the DNA fraction from Mycobacterium bovis BCG. II. Effects on various syngeneic mouse tumors | |
US6375945B1 (en) | Adjuvant compositions for vaccines | |
CA1217136A (en) | Refined detoxified endotoxin product | |
EP0752870B1 (en) | Use of mycobacterium for the treatment of tumours | |
KR101124363B1 (ko) | 면역조절곤란증을 포함하는 질병을 치료하기 위한 그람양성균 제제 | |
SE447629B (sv) | Till fast form overford farmaceutisk komposition innehallande cellveggskelett av nocardia rubra | |
YAMAWAKI et al. | Antitumor activity of squalene-treated cell-wall skeleton of Nocardia rubra in mice | |
US4504473A (en) | Pyridine soluble extract of a microorganism | |
JP4371437B2 (ja) | 悪性腫瘍の治療方法 | |
US5336666A (en) | Immunostimulant drug based on polar glyopeptidolipids of mycobacterium chelonae | |
KR101146469B1 (ko) | 다른 약물과 공동으로 결핵의 복합 치료에 유용한면역치료제 | |
Butler et al. | Combined immunostimulation in the prevention of tumor take in mice using endotoxins, their derivatives, and other immune adjuvants | |
JPH0737479B2 (ja) | ムラミルジペプチド誘導体 | |
Dinney et al. | Immunotherapy of murine renal adenocarcinoma by systemic administration of liposomes containing the synthetic macrophage activator CGP 31362 or CGP 19835A in combination with interleukin 2 or γ-interferon | |
Kobayashi et al. | In vitro and in vivo comparisons of amphotericin B and ND-ornithyl amphotericin B methyl ester | |
CA1206416A (en) | Pyridine soluble extract of a microorganism | |
GB2122897A (en) | Treatment of cancer with microorganism obtained products | |
CA1202903A (en) | Stable composition and preparation thereof | |
KR820000420B1 (ko) | 세포의 벽조직을 구성하는 고형화된 제약 조성물의 제조방법 | |
Schindler et al. | Stimulatory effects of muramyl dipeptide and its butyl ester derivative on the proliferation and activation of macrophages in vitro | |
磯貝浩 et al. | Biological effects of lipopolysaccharide from Achromobacter stenohalis on lymphocytes and macrophages. | |
GB2411357A (en) | Vaccine for fish cold-water disease | |
GB2123006A (en) | Pyridine soluble extract of a microorganism | |
Okamoto et al. | Toll-like receptor-targeting immunotherapy for oral cancer |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
NAL | Patent in force |
Ref document number: 7808414-2 Format of ref document f/p: F |
|
NUG | Patent has lapsed |
Ref document number: 7808414-2 Format of ref document f/p: F |