SE447486B - Forfarande for kvantitativ bestemning av interferoner samt medel for genomforande av forfarandet - Google Patents

Forfarande for kvantitativ bestemning av interferoner samt medel for genomforande av forfarandet

Info

Publication number
SE447486B
SE447486B SE8002595A SE8002595A SE447486B SE 447486 B SE447486 B SE 447486B SE 8002595 A SE8002595 A SE 8002595A SE 8002595 A SE8002595 A SE 8002595A SE 447486 B SE447486 B SE 447486B
Authority
SE
Sweden
Prior art keywords
interferon
cell culture
cells
enzyme
amount
Prior art date
Application number
SE8002595A
Other languages
English (en)
Other versions
SE8002595L (sv
Inventor
M Revel
A Kimchi
L Shulman
D Wallach
Original Assignee
Yeda Res & Dev
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Yeda Res & Dev filed Critical Yeda Res & Dev
Publication of SE8002595L publication Critical patent/SE8002595L/sv
Publication of SE447486B publication Critical patent/SE447486B/sv

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6863—Cytokines, i.e. immune system proteins modifying a biological response such as cell growth proliferation or differentiation, e.g. TNF, CNF, GM-CSF, lymphotoxin, MIF or their receptors
    • G01N33/6866—Interferon
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/25—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving enzymes not classifiable in groups C12Q1/26 - C12Q1/66
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/34—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase
    • C12Q1/44—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase involving esterase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/48—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving transferase
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/52—Assays involving cytokines
    • G01N2333/555—Interferons [IFN]
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/811—Interferon

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Description

15 20 25 30 35 40 447 486 känsligt och noggrant.
Det finns ett antal enzym, vars mängd är en funktion av cellens exponering för interferon. I närvaro av interferon ökar mängden av dessa enzym. Denna ökning sker gradvis och börjar efter en induktionsperiod av några timmar. Efter ca 3 tim. kan, under fysiologiska förhållanden, en ökning mätas och denna uppnår en topp efter mellan ca 12 och 24 tim. Då försöket w utföres under kontrollerade betingelser är det fördelaktigt att mäta mängden enzym som uppmätes efter ca 8 tim. Andra tidsperioder kan väljas. Närvaron av interferon resulterar i en ökning av mängden av följande enzym: 1. Ett proteinkinas, vilket fosforylerar speciellt de små underenheterna av indikeringsfaktorn eIF2; 2. 0ligo-isoadenylatsyntetas som ur ATP ger en specifik oligonukleotid (z'_s') PPPAPAPA; 3. Ett fosfordiesteras som bryter ner (2'-5')dinukleosidmonofosfater, som t.ex. 2'-5') ApA.
När interferon, eller ett medium innehållande detta, tillsättes en cellkultur ökar halten av dessa enzym i cellerna. Även halten av andra enzym, som ökar på grund av interferon, kan användas för försöket. Då en liten mängd av celler från en cellkultur, vilken tidigare utsatts för interferon, extraheras efter en förutbestämd tidsperiod med hjälp av ett lämpligt extraktionsmedel, kan extraktet analyseras på dess halt av dessa enzym, vilka innehålles i cellerna, och mängden av enzym är ett mått på mängden interferon som cellen utsatts för. Försöket kan även utföras på leukocyter, vilka extraherats och dess enzymhalt bestämmes med hjälp av det speciella försöket enligt uppfinningen, vilket är anpassat att mäta ultrasmå mängder av nämnda enzym. Halten enzym indikerar hur starkt cellerna i kroppen utsatts för interferon och detta medger en definitiv härledning av patientens sjukdom. De celler som skall analyseras extraheras med hjälp av ett lämpligt extraktionsmedel, som t.ex. en icke-jonisk ytaktiv substans. En ytaktiv substans som befanns vara lämplig är Nonidet P40 (oktylfenoletylenoxidkondensat), tillverkad av Paz Company, Israel.
Extraktionen kan också utföras med hjälp av andra medel. Ökningen av enzymhalten i cellkulturer som utsättes för interferon är markant. Den är olika för de tre enzym som nämnts ovan: en faktor 10 för enzym (1); en faktor upp till 20-100 för enzym (2) och en faktor 3 för enzym (3).
Förfarandet enligt uppfinningen omfattar bestämning av enzymhalten för x provet som analyseras (varvid enzymerna är av den typ som ökar efter det att cellerna utsatts för interferon) och ur enzymhalten härledning av mängden av . interferon som cellen utsatts för.
Följande exempel visar bestämningen av interferon via en analys av de 10 15 20 25 30 35 40 447 486, 3 tre enzym som nämnts ovan, vars halt i cellerna ökar efter det att dessa ut- satts för interferon.
Såsom påpekats ovan, är ökningen av enzymhalten i cellerna av en cell- kultur, vilken utsatts för interferon, gradvis och en märkbar ökning kan de- tekteras efter ca 3 tim. exponering. En bestämning efter 8 tim. exponering är tillfredsställande då en väsentlig ökning har skett efter denna tid. Enzym- halten når en topp efter mellan 12 - 24 tim., beroende på enzym. När värdet bestämmas efter 8 tim., kan detta resulterande värde utnyttjas för att be- stämma interferonhalten genom att man går in i en kalibreringstabell, vilken gjorts upp under identiska förhållanden.
Följande exempel är enbart illustrativa och de är således enbart ämnade såsom exempel. Förfarandet kan baseras på varje annat enzym, vars mängd i celler ökar efter att dessa celler utsatts för interferon.
Exempel 1: Bestämning av interferon genom analys av Proteinkinas (PK-i) En serie utspädningar av interferon från 0 till 50 enheter/ml bereddes i groparna på en mikrotiterplatta av plast (96 gropar) som 5 på varandra följande utspädningar med en faktor av 1:5 för varje utspädning i vävnadod- lingsmedia med 10 % kalvserum. En färsk trypsinbehandlad suspension av L-mus- celler eller humana diploida fibroplaster tillsattes. Varje cell mottog approximativt 25000 celler. Den slutliga volymen var 0,1 ml. Efter 8 tim. tömdes mediet ut ur mikrotiterplattan och 0,025 ml av en lösning av 0,5 % Nonidet P40 i 20 mM Hepes buffert pH 7,5, 5 mM Mgßlz, 120 mM KCl, 1 mM ditiotreitol och 10 % glycerol tillsattes. Efter 6-9 min. centrifugerades plattan vid 4000 varv/min. under 5 min. i en centrifugrotor utrustad med en lämplig adapter. Från varje grop tages 0,015 ml och 0,5 pg/ml av dubbel- tvinnad polyinosin-polycytidílsyra ply(rI):(rC) tillsättes med 0,5 mM ATP.
Den slutliga volymen var 0,02 ml. Blandningen inkuberades 15 min. vid 3000. 5 g av proteinet som kallas eukarictisk initieringsfaktor 2 (renad från kaninretikulocyter genom förfarandet som beskrivas av Benne et al., J. Biol. them. (1976) 251, 7675-81) Den 0,075 mM [WP] - y-ATP (16 ci/mmoi) tin- sattes och inkubationen fortsatte under 15 min. vid 3000. Den radioaktivi- tet som införlivats i proteinet eIF2 mätes genom utfällning i syra eller hellre genom elektrofores av blandningen på en gel av 12 % polyakrylamid med 0,1 % natriumdodekylsulfat. Gelen torkades och utsattes för en röntgenfilm under några timmar. Efter framkallning visade filmen ett band med en molekyl- vikt av 35000. Intensiteten hos bandet mättes med hjälp av en densitometer vid 600 nonometer i en registrerande spektrcfotometer. Intensiteten av 35000 Mr-bandet är ett direkt mått på mängden över :ZP-fosfat som införlivats i protein eIF2 och är ett mått på aktiviteten hos proteinkinas PK-i.
Elektrofores på cellulosaacetat kan också utnyttjas. 10 l5 20 25 30 35 40 447 486 Tabell l visar att en ökning i PK-i-aktivitet gentemot obehandlade celler kan identifieras med 2 enheter interferon per ml.Den lägsta koncentration av inter feron, som blockerar över 90 % av replikationen av vesikulärt stomatitvirus i cellen framkallar den maximala ökningen i aktivitet för proteinkinas.PK-i. Tabell 2 visar ett tidsförlopp för PK-i-ökningen för L-musceller. ökningen började 3 tim. efter det att cellerna utsatts för interferon och var maximal efter 24 tim.
Halva den maximala ökningen erhölls 8 tim. efter interferonbehandlingen.
Exempel 2: Interferonanalys baserad på mätningar av oligoisoadenylat och fosfordi- esteras. ökningen för tvâ andra enzym mättes i samma NP40-extrakt av interferonbehane: lade celler: Dligoisoadenylatsyntetas och en 2'-fosfordiesteras. Som ett exempel visas ökningen av oligo-isoadenylatsyntetas E efter behandling med interferon.
Cellerna läts genomgå nedbrytning med NP40 såsom ovan och polyinosin-polycytidil- (dubbeltvinnad)-syror (poly(rI):(rC)), bundna till Sefaroskulor (med hjälp av tek- niken som beskrives av Wagner et al., Biochem. Biophys. Res. Commun. (l97l) fâ, l84-l89), tillsattes. Kulorna tvättades och suspenderas i en lika stor volym (25 ul, av NP40 cellextrakt. Det icke-adsorberade materialet avlägsnades och de små droppar : inkuberades i en nM IÉZPI-u-ATP (3 Ci/mmol) och l mM-ditiotreitol under 20 tim. vid 30°C. Supernatanten (l0 pl) behandlades med 0,35 enheter alkaliskt bakteriefosfatas i 30 mM Trisbas, under 60 min. vid 3700. Det sammanlagda utsättes för pappersetektrr- fores på whatmans SMM-papper vid 3000 V under 4 tim. eller hellre för tunnskikts- kromatografi på polyetenimincellulosa med ättiksyra. De fläckar som motsvarar (2'-5')ApA och (2'-5')ApApA klippes ut och räknas med hjälp av scintillation. ökningen i oligo-isoadenylatsyntäæ Lttrycks som mängden radioaktivt fosfat som ur [ßzpl-a-ATP infariivats 1 (2'-s*) aiadenyiatmonofosfatet eiier i (2'-5')-triaaenyiafi disfosfatet eller i bägge av dessa.
Ett snabbare och enklare förfarande är att tillsätta den samlade lösningen till små disponibla aluminiumoxidkolonner (kolonnvolym 0,3 ml), vilka tidigare brin¿~ ats i jämvikt i GM-glycin och 0,75 N HCl -buffert (pH 2). En volym av 3 ml av samma buffert låtes därefter passera genom kolonnen och uppsamlas direkt i kärl som är lämpliga för radioaktiva mätningar i'en scñntillationskammare.
Samma resultat erhålles med diploida fibroblaster från människoförhud, vilka behandlats med humant fibroblastinterferon. Den största fördelen med detta nya för- farande är (l) att det inte är beroende av en virusinfektion av cellerna efter inter feronbehandlingen; (2) att det är noggrant, reproducerbart och snabbt; (3) att det inte enbart kan användas för att mäta mängden av närvarande interferon i en okänd lösning, utan även för att undersöka huruvida celler av en given vävnad har reagerat med interferon. Om t.ex. interferon injiceras i en patient, kan ett blodprov tas ock man kan bestämma huruvida de vita blodcellerna (lymfocyterna) innehåller förhöjda mängder av proteinkinas PK-i. Samma bestämning kan göras på ett litet biopsiprov 10 15 25 30 35 447 486 från konjuktivan eller på hud som lokalt utsatts för interferon.
Liknande mätningar utfördes med fosfodiesteras och analoga resultat erhölls.
Fosfodiesteras mätes med användande av (2'-5')ApA lmM som substrat och cellextrakt l0 mikroliter. Efter 30 min vid 37°C utsättes reaktionsblandningen för tunnskikts~ kromatografi på polyetenimincellulosa med O,32M LiCl. Mängden producerad 5'AMP är ett mått på fosfodiesterasen. 5'AMP mätes genom elution med D,7M MgCl2 från cellulosan och absorbansmätning vid 250 m .
Mätningarna kan göras i sanma cellextrakt som mätningarna av proteinkinas, vilka beskrevs i Exempel l.
Exempel 3: Nivå av dligo-isoadenylatsyntetas i humana blodceller Analyserna av interferoninducerad enzym medger en ny och behändig metod för bestämning av den biologiska reaktionen av celler eller vävnader av människa eller djur på interferon. Som ett exempel utfördes mätningar av oligo-isoadenylatsyntetas på blodceller från människor och från patienter i olika patologiska tillstånd.
Ett 2 ml blodprov erhölls genom venpunktering och de vita blodcellerna separerades från blodets andra beståndsdelar. T.ex. användes Ficoll-Paque från Pharmacia för att erhålla blodlymfocyter och andra mononukleära celler. Eellerna suspenderas vid 107 celler per ml och fick genomgå sönderdelning (lysis) med Nonidet P40 innehållande buffert, såsom beskrivits i exempel l. Prover (5-lO pl) av lysatet blandades med poly(rI):(rC)-agaros- eller sefaroskulor och dessa inkuberades med [GZPJ-ATP, såsom beskrivits i exempel 2. Producerade mängder (2'-5') oligo-isoadenylat mättes med hjälp av högspänningselektrofores eller med hjälp av aluminiumoxid-kolonnförfarandet enligt exempel 2.
De data som ges i tabell 3 visar variationerna av uppmätta nivåer oligo-iso- adenylatsyntetas i humana vita blodceller under olika patologiska betingelser.
Det framgår tydligt att vid två olika former av akut leukemi, är de erhållna värdena l0 ggr lägre än i normalt blod. Vid en tredje form av akut leukemi har värdena ändrats svagt lägre än normalt. Vid kronisk lymfatisk leukemi, erhölls låga värden men de var högre än vid akut lymfatisk leukemi. Vid en typ av autoimmun sjukdom, nämligen lupuserytematosus erhölls en ökad enzymnivå.
En inkubering av leukemiceller med interferon kan bringa nivån av oligo-isoade- nylat tillbaka till den normala (tabell 3). De häri beskrivna enzymförsöken skulle därför vara mycket värdefulla för att följa reaktionen hos dessa leukemipatienter på interferonterapi. Mätningarna kan göras på små mängder blod (mindre än 2 ml) och inom mindre än 24 tim. Försöket han utnyttjas för olika typer av-blodceller och för andra vävnader. De patologiska tillstånd som skulle kunna vara av intresse inne- fattar cancer, infektionssjukdomar-och immunologisha rubbningar. l0 l5 20 25 447 486 Exempel 4: Utrustning för interferonanalys. a. Proteinkinasanalys: reagensen som krävs för att utföra detta försök är: l). Lysisbuffert (0,5 % Nonidet P40, 20 mM Hepes-HCl-buffert pH 7,5, 5 mM MgCl2, l20 mM KCl, l mM ditiotreitol, 10 % glycerol). 2). Poly(rI):(rC)-adenosintrifosfat (ATP)-blandning (i koncentrerad form). 3). Renat kaninprotein eIF2 (över 100 g/ml) 4). PZPJ- -ATP (över io ci/mmoi och i moi/mi) Dessa tillhandahâlles som en samlad utrustning. Blandningarna ovan erhölls frystorkade och kan unplösas före användandet enligt vad som angivits. Plattor för odling av cellerna är tillgängliga från Nunc Company. Kommersiell utrustning för på] akrylamidgelelektrofores och röntgenfilmer är tillgängliga frán kommersiella företag Standardlösningar av interferoner (t.ex. mus, människa etc.) innefattas i utnustning en för kalibrerihgskurvor. b. 0ligo-isoadenylatsyntetasförsök: Reagensen som kräves är: l) Lysisbuffert 2) Sefarosbunden poly (rI):(rC) 3)[32É]- -ATP(över3 Ci/mmol och l mCi/ml) 4) Alkalisk bakteriell fosfatas 5) 2'-5' diadenosinmonofosfat 2'-5'-triadenosindifosfat 6) Små tillgängliga kolonner innehållande 0,3 ml aluminiumoxid 7) Aluminiumoxid-elutionsbuffert: l M glycin, 0,75 N HCl, pH 2.
Dessa reagens tillhandahâlles som en samlad utrustning såsom ovan. Behövlig utrustning för papperselektrofores och tunnskiktskromatografi finns'allmänt till- gänglig.
Behövlig mängd reagens tillhandahållas i olika mängder, beroende på antalet bestämningar som användaren önskar utföra. 447 43eH IEÉELL 1 Interferoninducerat enzym- och antivira1ti11stând i L-ce11er Interferon VSVRNA Proteinkinas 01igo-isoadeny1at- Fosfodiesteras U/m] PK-i syntetas E 2'~PDi 0 100 15 4 25 2 20 35 5 72 10 5 80 20 86 50 2 100 42 100 250 0 ' 66 1250 0 100 100 Resu1taten ges i procent av maxima1 aktivitet. Ce11erna behand1ades med interferon under 8 tim. Enzymana1yserna utfördes en1igt beskrivningen och mätning av RNA-syntes hos Vesim1ärt Stomatitis Virus (VSV) en1igt weissenbach et a1 (European J. Brochem 197, 28 1-8) TABELL 2 Kinetik för enzyminduktion med hjäip av interferon Tid efter L-musce11er x Humana fibrob1asterXx interferon- Proteinkinas PKi o1igo-isoadeny1atsyntetas ti11sats timmar fosfory1ering av 35.000 Mr underenheter (2'-5') o1igo A syntetise- av eIF2, godtyck1iga enheter rat impu1ser/min 0 15 900 2 15 900 4 30 1.500 8 55 3.750 10 75 6.500 24 100 13.500 * med 200 enheter/m1 musinterferon xx med 50 enheter/m1 humant fibrob1astinterfer0n 447 486 8 iABELL 3 VARIATIONER I NIVÅN AV OLIGO-ISOADENYLATAKTIVITET I HUMANA VITA BLODCELLER UNDER OLIKA PATOLOGISKA FÖRHALLANDEN Biodkälia 01igo-isoadenylatsyntetas [32ÉI(2'-5')o1igo A, impulser/min Ngrmaia givare 200-240 Akut ïymfatisk leukemi 20- 25 Kronisk iymfatisk leukemi 50 -70 Akut Monocytisk ieukemi _ 2 160-200 Akut Myeloid ieukemi 20 Samma inkuberade o.n. med humantinterferon x^ 200 Lupus erythematosus 270-300 Förfarande: 2 m1 biod-e Ficoll gradient-*107 Teukocytcelier/m1-> iysis med NP40-9 bindning tiiï agaros-po1y(rI):(rC§-kuïor-> inkubation med [32Él-ATP -> analys av (2'-5')o1igo A med högspänningselektrofores eiler aiuminiumoxidkoïatomer x humant leucocytinterferon 500 enheter/ml

Claims (5)

10 15 20 25 30 35 40 447 486 9 PATENTKRAV
1. Förfarande för kvantitativ bestämning av interferon, utan krav på viral infektion, k ä n n e t e c k n a t av att interferon eller ett substrat innehållande interferon tillsättes en cellkultur; att, efter en förutbestämd tid, cellkulturen extraheras med hjälp av ett icke-joniskt ytaktivt medel; och att i detta extrakt mängden proteinkinas (PK-i), oligo- isoadenylatsyntetas eller fosfodiesteras bestämmes på känt sätt, vara halt i cellkulturen är en funktion av mängden interferon som cellkulturen utsatts för.
2. Förfarande enligt krav 1, k ä n n e t e c k n a t av att den använda cellkulturen består av leucosyter, lymfosyter, humanfibroblaster eller L-mus- celler.
3. Förfarande enligt krav 1, k ä n n e t e c k n a t av att enzym- analysen utföres genom införlivande av radioaktivt märkta ämnen och att dessa bestämmes.
4. Förfarande enligt krav 1, k ä n n e t e c k n a t av att cellkul- turen extraheras mellan 3-24 timmar efter det att cellkulturen utsatts för substratet.
5. Medel för kvantitativ bestämning av standardlösningar av interferon, k ä n n e t e c k n a t av att det omfattar, i kombination, lysisbuffert; reaktionsbuffert; substrat; aluminiumoxidkolonner; reagens tillhandahållna i frystorkad form och i enhetsdoser, innefattande radioaktivt ATP; och poly(rI):(rC), vilka samtliga har en förutbestämd koncentration.
SE8002595A 1979-04-22 1980-04-03 Forfarande for kvantitativ bestemning av interferoner samt medel for genomforande av forfarandet SE447486B (sv)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
IL57108A IL57108A (en) 1979-04-22 1979-04-22 Assay for the quantitative determination of interferon and a kit therefor

Publications (2)

Publication Number Publication Date
SE8002595L SE8002595L (sv) 1980-10-23
SE447486B true SE447486B (sv) 1986-11-17

Family

ID=11050997

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SE8002595A SE447486B (sv) 1979-04-22 1980-04-03 Forfarande for kvantitativ bestemning av interferoner samt medel for genomforande av forfarandet

Country Status (8)

Country Link
US (1) US4302533A (sv)
JP (1) JPS55144898A (sv)
DE (1) DE3015462A1 (sv)
FR (1) FR2455082A1 (sv)
GB (1) GB2048472B (sv)
IL (1) IL57108A (sv)
IT (1) IT1141293B (sv)
SE (1) SE447486B (sv)

Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2687995B2 (ja) 1980-04-03 1997-12-08 バイオゲン インコーポレイテッド Ｄｎａ配列、組替えｄｎａ分子およびヒト繊維芽細胞インターフェロン様ポリペプチドの製造方法
FR2505845A1 (fr) * 1981-05-13 1982-11-19 Choay Sa Procede de dosage de la 2',5'-oligo-adenylate-synthetase, methodes de detection d'une infection virale ou microbienne, de dosage de la concentration de l'interferon circulant ou present dans des tissus, apres administration de l'interferon, ou apres administration d'inducteurs de l'interferon et ensemble pret a l'emploi, ou kit, pour la mise en oeuvre desdits procedes de dosage et methodes de detection et de dosage
US4515890A (en) * 1982-11-08 1985-05-07 Abbott Laboratories Immunoassay of terminal deoxynucleotidyl transferase
US4515781A (en) * 1983-02-23 1985-05-07 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services 2',5'-Riboadenylate-morpholinoadenylate nucleotides
US4954617A (en) * 1986-07-07 1990-09-04 Trustees Of Dartmouth College Monoclonal antibodies to FC receptors for immunoglobulin G on human mononuclear phagocytes
DE4206431A1 (de) * 1992-02-29 1993-09-02 Basf Lacke & Farben Wasserverduennbare ueberzugsmittel
JP3467515B2 (ja) * 1994-11-01 2003-11-17 財団法人ルイ・パストゥール医学研究センター インターフェロン活性の測定法
EP0864860A1 (en) * 1997-03-10 1998-09-16 Japan Science and Technology Corporation Sample plate and multicapillary electrophoresis apparatus

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4061538A (en) * 1973-04-04 1977-12-06 Sandoz Ltd. Enzymatically oxidizing interferon
US3910824A (en) * 1973-10-18 1975-10-07 Searle & Co Interferon assay
US4241174A (en) * 1978-11-24 1980-12-23 Hoffmann-La Roche Inc. Interferon assay

Also Published As

Publication number Publication date
JPH0152000B2 (sv) 1989-11-07
DE3015462C2 (sv) 1992-07-02
US4302533A (en) 1981-11-24
IT8021525A0 (it) 1980-04-21
DE3015462A1 (de) 1980-10-30
FR2455082A1 (fr) 1980-11-21
IL57108A (en) 1981-12-31
GB2048472B (en) 1983-10-26
GB2048472A (en) 1980-12-10
FR2455082B1 (sv) 1984-11-09
IT1141293B (it) 1986-10-01
IL57108A0 (en) 1979-07-25
SE8002595L (sv) 1980-10-23
JPS55144898A (en) 1980-11-12

Similar Documents

Publication Publication Date Title
FI60720B (fi) Foerfarande och medel foer bestaemning av aktiviteten av kreatinkinas-mb
Oren et al. Post-translational regulation of the 54K cellular tumor antigen in normal and transformed cells
Furman et al. Acyclovir-resistant mutants of herpes simplex virus type 1 express altered DNA polymerase or reduced acyclovir phosphorylating activities
da Fonseca-Wollheim Preanalytical increase of ammonia in blood specimens from healthy subjects
Issinger et al. Phosphorylation in vitro of eukaryotic initiation factors IF-E2 and IF-E3 by protein kinases.
Sonnabend et al. Viral specific RNAs in infected cells
US4415655A (en) Electrophoretic separation of isoenzymes utilizing a stable polyacrylamide system
SE447486B (sv) Forfarande for kvantitativ bestemning av interferoner samt medel for genomforande av forfarandet
Hamada et al. Serological analysis of some enzymes present in pseudorabies virus-infected and noninfected cells
Obara et al. Ribosomal RNA in avian leukosis virus particles
Hruby et al. Encephalomyocarditis virus RNA: variations in polyadenylic acid content and biological activity
Bachmann et al. Comparative cytochemical measurements in the diploid-tetraploid species pair of hylid frogs Hyla chrysoscelis and H. versicolor
US4046634A (en) Assay of isoenzymes by ion exchange chromatography
Graham The chemical analysis of purified influenza virus A (PR8 strain) containing radioactive phosphorus
Schreiber et al. Alkaline phosphatase isoenzymes resolved by electrophoresis on lectin-containing agarose gel.
Fiala et al. Deoxynucleotidase activity in rat liver and certain tumors
Field et al. Isolation and characterization of acyclovir-resistant strains of herpes simplex virus
Wedner et al. Tyrosine phosphorylation of a 66,000 Mr soluble protein in lectin-activated human peripheral blood T lymphocytes.
Kiessling et al. Detection of reverse transcriptase activity in human cells
Piffkó et al. Biochemical properties of human tonsillar lymphocytes
Reese In vitro initiation in the newt iris of some early molecular events of lens regeneration
Freise et al. Studies on the multiple forms of γ-glutamyltransferase
Morris et al. Effect of interleukin‐2 on cell proliferation, sister‐chromatid exchange induction, and nuclear stress protein phosphorylation in Pha‐stimulated fischer 344 rat spleen lymphocytes: Modulation by 2‐mercaptoethanol
EP0094923B1 (en) A method of determining dtk isoenzyme activity and the use thereof
Allaudeen et al. Cellular and Epstein-Barr virus specific DNA polymerases in virus-producing Burkitt's lymphoma cell lines

Legal Events

Date Code Title Description
NAL Patent in force

Ref document number: 8002595-0

Format of ref document f/p: F

NUG Patent has lapsed

Ref document number: 8002595-0

Format of ref document f/p: F