SE438739B - Anordning anvendbar for utforande av immunologiska och biokemiska analyser - Google Patents

Description

15 20 h) \J'| 30 35 vscssvv-3 2 antikropp har fastlänkats permanent; (c) bildning av antigen-anti- kroppkcmplex på i förväg utfällda andra antikroppartiklar; och (d) bildning av antigen-antikroppkomplex på innerytan av rör, på vilka antikropp har immobiliserats.

Med undantag av de belagda rören och belagda fasta bärare kräver alla vätskefas- och heterogenfasreagens centrifugering för separation av fällning eller fast material från analysmediet. Detta steg är inte enbart tidskrävande utan kräver ofta speciell eller delikat hantering av materialet, när supernatantfluidum avlägsnas.

Om analysresultatet är tidsberoende, kan enbart ett litet antal för- sök utföras för att man skall försäkra sig om tidsnoggrannhet. Även om man med hjälp av det belagda röret undviker dessa separatione- problem och att detta rör är enkelt att använda, uppvisar det nack- delen att uppvisa mycket låg bindningskapacitet och dålig överens- stämmelse från prov till prov på grund av tillverkningssvårig- heter.

Fasta bärare, sorbent- eller proteinbelagda, som inte kräver centrifugering för att de skall separeras från vätskemediet har nyligen framtagits för användning vid heterogena analyser. Dessa måste emellertid beredas från början av den tekniker, som utför analysen. Normalt innebär detta inte någon allvarlig inskränkning, men i det fall då den fasta bärareihar belagts med patogena anti- gener eller radiomärkta reagens, är det bäst om beredningen av den fasta bäraren kan undanröjas. Vidare krävs avsugning av super- natantvätskan för att avskilja den fasta bäraren och adsorberade komponenter från reaktionsmediet vid slutet av analysen.

Enligt föreliggande uppfinning åstadkommas en anordning som är användbar vid utförandet av immunologiska och biokemiska analy- ser och som innefattar: (a) en behållare försedd med en öppning för införsel och uttag av reagens; (b) ett fastfasreagens eller adsorberande fast fas placerad i behållaren; och (c) ett kvarhål- lande organ, som är erhållet genom íhoppressning av behållarens sidor vid öppningen för att förhindra ett avlägsnande av den ad- sorberande fasta fasen men för att tillåta ett avlägsnande av icke-adsorberande reagens.

Fastfasreagenset är tillräckligt stort för att inte kräva centrifugering för att sedimentera i analysmediet och för att kvarhållas i reaktionsbehållaren av det kvarhållande organet, när behållaren vändes upp och ned för dekantering av reaktionsmediet. 10 15 20 25 30 35 7900577-3 3 Genom det kvarhållande organet elimineras de begränsningar som gäller för konventionella heterogena reagens, och användningen av detta organ gör det möjligt att utföra ett stort antal analyser med hög hastighet därigenom att det förenklar en exakt tillred- ning och dekantering av reagens.

Uppfinningen kommer nu att belysas ytterligare_i anslutning till bifogade ritning, på vilken: Fig. l är en perspektivvy visande framsidan och överdelen av en anordning enligt föreliggande uppfinning; Fig. 2 är ett parti- ellt tvärsnitt taget längs linjen 2-2; Fig. 3 är en toppvy av an- ordningen, vilken vy visar hur fastfasreagenset är inneslutet i behållaren med hjälp av en utföringsform av det kvarhållande orga- net; Fig. 4 är en toppvy av en anordning enligt uppfinningen, vil- ken vy visar hur fastfasreagenset är inneslutet i behållaren med hjälp av en andra utföringsform av det kvarhållande organet;_och Fig. 5 är ett partiellt tvärsnitt av en anordning, vilket visar hur fastfasreagenset kvarhålles i behållaren, när nämnda behållare är uppochnedvänd för dekantering av analysmediet.

En utföringsform av anordningen enligt uppfinningen kommer sålunda att beskrivas i anslutning till den bifogade ritningen.

Anordningen l0 utgöres i huvudsak av en behållare ll försedd med en öppning 15 för införsel och uttag av reagens. Behållaren ll är lämpligen tillverkad av ett plastiskt, polymert material men skulle likaväl kunna vara tillverkad av metall eller glas. Formen på behållaren ll är inte av någon speciell betydelse. Dock kan de flesta analyser utföras på ett enkelt sätt i lângsträckta behålla- re liknande teströr. _ Fastfasreagenset 12 är beläget inuti behållaren ll. Det bör vara av en sådan storlek att det lätt kan röra sig fritt i behål- laren ll men också tillräckligt stort för att påverka eller till- handahålla tillräcklig kvantitet komponent för genomförande av ana- lysen. Fastfasreagenset 12 kan lämpligen vara tillverkat av något plastiskt, polymert material. Andra fasta material, såsom glas, metall eller kemiskt behandlat papper, kan också användas, men det lämpliga i att använda ett plastmaterial är svårt att förbigå.

Fastfasreagenset 12 kan vara belagt, impregnerat eller helt och hållet utgöras av adsorbenter, immunoadsorbenter, immunoreak- tanter eller märkta komponenter därav. Det kan vara en bärare för immunoreaktanter, som frigöres i reaktionsmediet i kvantiteter som 10 15 20 h) UI 50 35 7900577-3 H är proportionella mot kvantiteten av det okända som skall analyse- ras. Dessa immunoreaktanter kan eventuellt vara märkta med radio- aktiva isotoper, enzymer eller fluorescerande substanser som under- lättar bestämningen av kvantiteter reaktant använda vid analysen.

.De fastfasreagens 12, som är avsedda att rymmas inom före- liggande uppfinnings ram, inkluderar fasta plastpärlor belagda med en mångfald material för användning vid ett likaså stort antal analyser. Exempel på beläggningar, som har visat sig vara använd- bara, är aktivt träkol, talk, harts och liknande. Dessa sorbenter gör det möjligt för fastfasreagenset att separera komponenter vid biokemiska analyser genom att adsorbera speciella molekyler. Andra adsorbentbeläggningar inkluderar immunoadsorbenter, såsom antige- ner, antikroppar och komplex därav. På liknande sätt underlättar dessa beläggningar separation och avlägsnande av vilken som helst immunoreaktant som uppvisar affinitet för den speciella belägg- ning som användes.

Den fasta bäraren 12 bör vara av en sådan storlek att den lätt går in i det inre utrymmet av behållaren ll samt uppvisa tillräcklig ytarea för att analysen skall kunna utföras på optimalt sätt. En sfärisk styrenpärla har visat sig uppvisa en yta som lätt kan beläggas med vilket som helst av ovannämnda adsorptionsmedel samt ge den önskade ytarean.

När man använder sig av den föredragna utföringsformen av an- ordningen enligt uppfinningen, är det lämpligt att anordna en grop lä i bottnen av den rörformiga behållaren ll, så att den sfäriska pärlan l2 inte blir kvar och blir immobiliserad i den krökta bott- nen av behållaren. Denna olägenhet kan också undvikas genom att man använder sig av en pärla med en sfärisk radie som är mindre än den för den rörformiga behållaren.

Funktionen för det kvarhållande organet lj är helt enkelt att kvarhålla fastfasreagenset 12 i behållaren ll och att därigenom un- derlätta separationen av de vidhäftade reaktionskomponenterna från de som finns kvar i analysmediet vid avslutad analysreaktion. Kvar- hållningsorganet 13 bör vara anordnat i närheten av behållaröpp- ningen 15 för att tillåta maximal mobilitet för fastfasreagenset 12 i behållaren. I idealfallet bör det kvarhållande organet 13 vara utformat på ett sådant sätt att det möjliggör ett avlägsnande av analysmediet, samtidigt som den fasta bäraren kvarhålles. Med andra ord skulle det kvarhållande organet inte tjäna något syfte genom 10 20 25 DJ O 35 7900577-3 5 att vara beläget på ett sådant sätt att det kvarhållna fastfasrea- genset 12 skulle blockera öppningen l5 på behållaren och förhindra ett avlägsnande av analysmediet.

Ritningen illustrerar tvâ variationer av ihoppressningen av behållarens sidor. Om man minskar behållarens ll diameter ge- nom att klämma ihop behållaren vid eller nära öppningen 15, kan man på ett enkelt och billigt sätt åstadkomma ett kvarhållande organ 15. Ihoppressningen kan bestå av en eller en serie av in- tryckningar, varvid det enda kravet är att en enda intryckning är tillräckligt stor för att kvarhålla det fasta reagenset och att ett mycket stort antal intryckningar inte lägger hinder i vägen för ett avlägsnande av analysmedium, samtidigt som det fasta rea- genset kvarhålles.

Om kvarhållningen av fastfasreagenset skall åstadkommas med hjälp av intryckning av sidorna på en plastbehållare, kan in- tryckningarna eller även utsprång bildas på ett antal olika sätt.

Behållaren kan vara försedd med utsprång som är formade eller gjut- na från början eller som formas genom lokal applioering av värme.

En lösning, som har visat sig vara speciellt användbar, är använd- ning av en polypropenbehållare med dimensionerna 12 x 75 mm, var- vid plasten deformeras med hjälp av ultraljud vid kanten av behål- laren så att det bildas ett lämpligt kvarhållningsorgan för fast- fasreagenset.

Den föredragna utföringsformen av anordningen enligt uppfin- ningen skall kvarhålla den fasta bäraren 12 men tillåta att den tränger ut förbi randen av öppningen. Detta skulle tillåta en tek- niker att avlägsna överskott av reagensmedium från ytan av fastfas- reagenset genom att det inneslutna reagenset roteras, som en kula i ett kulledsäte, på ett adsorberande papper eller en handduk.

Såsom omtalats ovan är anordningen enligt uppfinningen spe- ciellt användbar vid utförande av radio- eller enzymimmunoanalyser för biokemiska substanser, såsom hormoner, läkemedel, antigener, antikroppar och liknande. En typisk analys kan utföras genom att man (1) pipetterar prover eller standardreagens i behållaren ll, som redan innehåller ett inneslutet fastfasreagens, (2) tillsätter ett reagens innehållande radio- eller enzymmärkta komponenter lik- nande eller av samma slag som de i provet som skall analyseras, (5) inkuberar blandningen under en viss tidsperiod, (4) dekanterar vätskan från behållaren genom att vända på denna, varvid fastfas~ *WÛÛSTY-š 6 reagenset kvarhålles inuti behållaren, och (5) mäter radio- eller enzymaktiviteten i rören.

Ovanstående utföringsformer har beskrivits för att under- lätta förståelsen av anordningen enligt uppfinningen, men dessa 5 utföringsformer är icke avsedda att begränsa uppfinningen i annat avseende än vad som framgår av de bilagda patentkraven.

Claims (7)

7900577-3 PATENTKRAV

1. Anordning användbar för utförande av immunologiska och biokemiska analyser, k ä n n e t e c k n a d av att den innefattar: (a) en behållare försedd med en öppning för införsel och uttag av reagens; (b) en adsorberande fast fas belägen 1 nämnda behållare; och (c) kvarhållande organ, som är erhållet genom ihoppressning av behållarens sidor vid öppningen för att förhindra ett avlägs- nande av nämnda adsorberande fasta fas men för att tillåta ett avlägsnande av icke-adsorberade reagens.

2. Anordning enligt krav l, k ä n n e t e c k n a d av att behållaren har rörform.

3. Anordning enligt krav 1 eller 2, k ä n n e t e c k - n a d av att den adsorberande fasta fasen är en bärare belagd med ett immunoadsorptionsmedel.

4. Anordning enligt krav 3, k ä n n e t e c k n a d av att immunoadsorptionsmedlet är en antikropp.

5. Anordning enligt krav l eller 2, k ä n n e t e c k - n a d av att den adsorberande fasta fasen är en bärare belagd med aktivt träkol.

6. Anordning enligt krav l eller 2, k ä n n e t e c k - n a d av att den adsorberande fasta fasen är en polystyren- pärla med en beläggning av aktivt träkol.

7. Anordning enligt krav l, k ä n n e t e c k n a d av att den adsorberande fasta fasen är en polystyrenpärla med en immunoadsorbentbeläggning.