SE433038B - Forfarande for rening av liposomsuspensioner fran icke- inneslutet lekemedel - Google Patents

Description

7810109-4 molekylarfilter Sepharose GB.

Liposomerna elueras först medan det fria läkemedlet hålles tillbaka genom sepharosen.

Ett annat lämpligt förfarande är ultracentrifugering vid 100.000 g och efterföljande tvättning, alltid med ultra- centrifugering, med buffrad lösning. Det har visat sig att liposomerna vid djur kan transportera antitumöralt verksamt läkemedel selektivt till neoplastiska celler.

Föreliggande uppfinning avser ett nytt förfarande för separation av liposomer från icke-inneslutet läkemedel.

Därvid användes jonbytarhartser och adsorberande hartser utan att användning av kromatografi är nödvändig. Jonbytarv hartset tillsättes liposomsuspensionen av läkemedlet som måste renas och det hela skakas l till 120 minuter.

Den fria liposomsuspensionen erhålles efter filtrering genom ett poröst skikt, som håller tillbaka hartset på vilket det fria läkemedlet är absorberat. Detta nya renings- förfarande vid vilket jonbytarhartser användes uppvisar den stora fördelen att mycket koncentrerade liposomsuspensioner (upp till 4 mg/ml adriamycinhydroklorid) kan erhållas vilka icke kan uppnås genom kromatografi med ett molekylarfilter (maximalt 200Y7ml. Den sålunda erhållna liposomsuspensionen är mycket stabil och har i motsats till de suspensioner som erhålles genom centrifugering med högt varvtal icke någon benägenhet för sedimentation. Den definitiva kemiska stabiliseringen uppnås genom frystorkning av liposomsuspen- sionen.

Uppfinningcn åskådliggöres närmare medelst följande exempel.

Exempel l: I en förtvålningskolv löstes 1,5 g ägglecitin, 0,4 g koleste- rin och 0,2 g dicetylfosfat i kloroform och lösningsmedlet «--».. .....--.-_.___......____a_..._.__.._ . ___ ,,_ 781.01 09-13 avdunstades till torrhet. En adriamycinhydrokloridlösning (koncentration 20 mg/ml) i 0,007 N buffertfosfat tillsattes därpå och lösningen skakades under 1 minut med ultraljud.

Därefter fick suspensionen stå under 30 minuter vid rums- temperatur och under kväveatmosfär varpå 2 g BDH IR-50-harts, som i förväg aktiverats i natriumformen, tillsattes (vikten hänför sig till torrvikten och motsvarar 5 ml expan- derat harts). Innehållet i kolven skakades under 30 minuter.

Därefter filtrerades suspensionen genom ett poröst skikt (G 1). Liposomer med en varierande storlek av från 0,5 till 2 mikron Ofllmed en halt av 60 % av utgångsmängden adriamycin erhölls. De gjordes stabila medelst frystorkning.

Exempel 2.

Samma förfaringssätt som i exempel l användes och samma mängder adriamycin och lipider användes varvid skakningen med ultraljud förlängdes till 10 minuter för erhållande av liposomer med en storlek mindre än l mikron. Ett icke- -granulärt harts valdes, som likaledes uppvisar funktionen av ett filter, eftersom den totala kroppen av liposomerna uppvisar en storlek som inte är helt homogen. I överens- stämmelse med detta infördes i kolven lO ml Dowex 5OW-4 (100-200 mesh) harts som i förväg aktiverats i natrium- formen. Efter filtreringen erhölls en suspension som inne- höll liposomer med en storlek av 0,2-0,8 mikron samt 75 % av utgångsadriamycinen. Därefter gjordes liposomerna stabila medelst frystorkning.

Exempel 3.

En lösning av 5-fluoruracil med en koncentration av 10 mg/ml i 0,007 N buffertfosfat och med pH-värde av 8 hälldes i förtvålningskolven som innehöll lipidfasen, vilken var fram- ställd såsom beskrevs ovan. Suspensionen behandlades såsom- i exempel l varvid man som filterharts använde lO ml Amberlite RA-400 (Cl) som i förväg aktiverats som klor- hydrat. De sålunda erhållna liposomerna gjordes stabila 7810109-4 medelst frystorkning.

Exemgel 4.

Liposomer_av 5-fluoruracil framställdes, såsom beskrevs ovan, under användning av 1,5 g ägglecitin, 0,4 g kolesterin och 0,2 g stearylamin. Som reningssystem användes 10 ml Dowexšà-harts (50-100 mesh) som var aktiverat i förväg. De sålunda erhållna liposomerna stabiliserades medelst frys- torkning.

Exemgel 5.

En adriamycin-liposomsuspension framställdes under samma betingelser och under användning av samma mängder som beskrevs i exempel 2 och renades under användning av l5 g adsorberande XAD -harts från Rohm & Haas, som infördes direkt i framställningskolven.

Efter skakning under 40 minuter och filtrering genom sinterfilterglas(3 l erhölls en liposomsuspension som inne- höll ungefär 50 % av utgångsmängden adriamycin; denna suspension stabiliserades medelst frystorkning.

Claims (4)

7810109-4 PATENTKRAV

1. l. Förfarande för rening av liposomsuspensioner från icke- -inneslutet läkemedel k ä n n e t e c k n a t därav, att jonbytarhartser användes både i aktiverad cch även i icke-akti- verad form i saltform och, om så önskas , frystorkas liposomsuspensionerna för stabilisering.

2. Förfarande enligt patentkravet 1, k ä n n e t e c k n a t därav, att man använder absorberande polymersubstan§er.

3. Förfarande enligt patentkravet l, k ä n n e t e c k n a t därav, att starka eller svaga hartser av anjontyp användes.

4. Förfarande enligt patentkravet l, k ä n n e t e c k n a t därav, att starka eller svaga hartser av katjontyp användes. . .__ _..,.__..._..._..__.__.... 7810109-4 SAMMANDRAG. Föreliggande uppfinning avser ett nytt förfarande för fram- ställning av injicerbara liposomer varvid liposomsuspensioner renas från icke-inneslutet läkemedel varvid jonbytarhartser användes såväl i aktiverad som även i iclše-aktiverad form i saltform.