SE123797C1 - - Google Patents

Description

Uppfinnare: E. Kull och J. M. Smith Fr.

Prioritet begard frOin den 13 augusti 1946 (A2neri1-as forenta stater).

FOreliggande uppfinning avser avskiljandet av folsyra fran en blandning av folsyra och med denna beslaktade pteriner, som atfolja denna. Folsyra har visat sig vara av betydande terapeutiskt vdrde, emedan den framjar hemoglobinbildningen och aven är terapeutiskt verksam vid behandlingen av vavnads-, hud- och liknande sjukdomar.

Den syntetiska framstallningen av Mnnen med samma eller analoga biologiska aktivitet som f olsyra, framstalld ur naturliga amnen, har nyligen astadkommits genom reaktion mellan 2,4,5-triamino-6-h.ydroxipyrimidin, en aminosyraamid av para-aminobensoesyra, sasom para-aminobensoylglutaminsyra, och en lamplig forening med 3 kolatomer, vilken innehaller reaktiva aldehyd- och/ eller halogengrupper, shsom foretradesvis all a, beta-dibrompropionaldehyd.

Den viktigaste biologiskt verksamma produkten av denna reaktion har formeln N-[4-1[(2- amino-4-hydroxi-6-pyrimido [4,5-b] pyrazyl)metyll-aminol bensoy1J glutaminsyra, men vanligtvis brukar den betecknas sasom »pteroylglutaminsyra» (jfr Science, bd. 103, maj 1946, sid. 669). Andra nara beslaktade produkter, vilka aga biologisk aktivitet i olika hog grad, kunna framstallas pa sá sdtt, att lampliga utgangsmaterial valjas, i vilka glutaminsyraresten av para-aminobensoylglutaminsyran ersatts av en annan aminosyra eller av en av dess polypeptider, exempelvis para - aminobensoylglutamylglutamylglutaminsy'ra. Eftersom nagra av dessa syntetiska produkter figa liknande aktivitet som folsyra ur naturliga amnen, anvandes termen »folsyra» i fortsattningen sã, att den omfattar de biologiskt verksamma aminosyraamiderna av 4-1[(2-amino-4- hydroxi-6-pyrimido [4,5-b] pyrazyl)metyl}aminol bensoesyra och sarskilt glutaminsyraamiderna med 1,2,3 eller fler gluLaminsyrarester, sammanfogade till en peptidkedja.

Reaktionsforloppet vid det forfaringssatt, med vilket syntetisk folsyra framstalles, är starkt komplext, sarskilt med avseende pa det faktum, att de olika ovan namnda mellanprodukterna kunna reagera pa mycket olika satt. Faclunannen ph omradet for heterocykliska organiska foreningar av denna typ skulle nu vanta sig, och detta har av erfarenheten visat sig vara riktigt, att talrika bireaktioner aga rum antingen samtidigt med eller efter huvudreaktionen. Som foljd harav innehaller reaktionsprodukten en relativt stor andel av icke onskvarda substanser inklusive icke omsatta mellanprodukter, kondensationsoch/eller polymerisationsprodukter av tva eller flera mellanprodukter, stdllnings-isomerer, oxidationsprodukter, olika hypotetiskt mojliga nedbrytningsprudukter, hydrolyseringsprodukter o. dyl. Manga av dessa icke identifierade produkter innehalla en pyrimidopyrazinkarna och kunna helt allmant betecknas som pteriner.

Nagra av reaktionens biprodukter kunna vara skadliga, och ndr reaktionsprodukten skall anvandas sasom terapeutiskt preparat, ãr det uppenbart, att dessa pteriner bor avldgsnas fran den biologiskt verksamma folsyran.

Olyckligtvis aga manga av dessa pteriner, vilka a.tfOlja folsyran i den raa reaktionsprodukten, delvis samma kemiska och fysikaliska egenskaper som den Asyftade biologiskt verksamma slutprodukten, och det har visat sig ytterst svArt att avskilja dessa biprodukter utan att samtidigt valla en allvarlig forlust av verksamt material. Flera fOrfaringssatt ha foreslagits, genom vilka det bliver mojligt att utvinna folsyra med en renhetsgrad av 85-90 % ur den raa reaktionsblandningen, men hOgre renhet har kunnat astadkommas endast under stern forluster av de verksamma bestandsdelarna i den raa blandningen.

Foreliggande uppfinning avser ett forfaringssatt att avskilja folsyra fran en blandning av folsyra och beslaktade pteriner, som atfOlja syran, pa fOljande satt. En dylik blandning behandlas med en magnesiumforening, det bildade magnesitunfolatet overfores till vattenlOsning, olosliga. 2— — amnen avskiljas fran det liisliga magnesiumfolatet, och slutligen behandlas losningen sh, attantingen magnesiumfolat eller folsyra utfalles.

Det har nu visat sig, att medelst forfaringssattet enligt fOreliggande uppfinning folsyra av nits- tan teoretisk renhet kan avskiljas Iran blandningar, som innehalla pteriner och andra biprodukter, som finnas i reaktionsprodukten niir folsyra framstalles ph syntetisk vag. Reningsprocessen Or relativt enkel och bygger ph det faktum, att magnesiumsalterna av pteroylglutaminsyra och beslaktade aminosyraamider av pteroinsyra intaga en sarstallning och figa loslighetsegenskaper, som i sh hog grad avvika frail dem has de icke onskvarda pterinerna, att de kunna avskiljas medelst enkel %suing, filtrering och utffillning, antingen genom kristallisering ur varm, koncentrerad vattenlosning eller shsom fri syra efter be-handling med en syra.

Ehuru forfaringssattet enligt foreliggande uppfinning Or sarskilt lampligt fOr reningen av folsyrapreparat med en andel av omkring 80-90 °,,"„' folsyra, atfbljd av andra pteriner, kan det Oven anvandas for reningen av raa reaktionsprodukter, som innehalla en sa. pass lag andel scan 10 % av sjalva folsyran.

Vid genomforandet av fOrfaringssattet enligt foreliggande uppfinning behandlas den framstallda icke renade folsyran, vilken atfoljes av beslaktade pteriner, med en magnesiumforening i och for omvandling av folsyran till dess magnesium-salt. For detta andamal anviindes foretradesvis magnesiumoxid, men Oven andra magnesiumforeningar, vilka kunna reagera med folsyra, kunna anvandas for att bilda dess magnesiumsalt, sasom t. ex. magnesiumkarbonat. Magnesiumfolatet kan Oven bildas i losningen av ett annat av dess losliga salter medelst en dubbel omsattning sasom askadliggores i nagot av exemplen. Nagnesiumfolatlosningen gores klar genom filtrering, dekantering, centrifugering eller ph annat satt, som Or lampligt for att avlagsna de olosliga fOroreningarna. En folsyra av fOrbattrad renhet kan sedan erhallas genom enkel surgoring med en syra, fOretradesvis till pl-f-vardet omkring 3. Den olosliga folsyran, som utkristalliserar ur liisningen, kan sedan atervinnas genom filtrering. Denna atgard kan upprepas tills produkten har den Onskade renhetsgraden.

En bathe rening astadkommes genom framstallning av en koncentrerad magnesiumfolatlosning i vatten vid en temperatur av 75-100° C, vid vilken temp eratur losningen filtreras och magnesiumsaltet atervinnes genom den koncentrerade hisningens kylning. Nlagnesiumfolatet kan omkristalliseras ur vatten tills en produkt med den onskade renhetsgraden erhallits. SurgOringen av en losning av magnesiumsaltet resulterar i en utMining av folsyrakristaller med hog renhetsgrad. De foljande exemplen Oro avsedda aft' aska.dligOra uppfinningen i detalj.

Exempel 1. g ra reaktionsprodukt, innehallande 15,7 viktsprocent av sjalva folsyran och for ovrigt be- slaktade pteriner och andra, icke identifierade reaktionsprodukter, blandas i en mortel med 6 g magnesiumoxid, blandningen forsattes med 1500 cm° vatten och uppvarmes till ° C. Darefter filtreras losningen och filtratet tvattas med vat-ten. Sedan surgores filtratet med utspadd saltsyra till ett pH-varde 3 och fallningen samlas genom filtrering och tvattas med vatten och alkohol. Produktens renhet hiiides till 34 %.

Exempel 2.

Omkring 1,6 g folsyra med renhetsgraden 78 %, som innehaller beslaktade pteriner, losas i 800 cm3 n/10 natriumhydroxidlosning. 8 g Hyflo Su- percel (diatomejord) tillsattas och lOsningens pHvarde installes med attiksyra pa omkring 3. Ut- fallningen samlas p0. ett filter och tvattas Tiled vatten. Den fuktiga filtermassan fOrsattes med 500 cm3 vatten och 5 g magnesiumoxid och blandningen uppvarmes till 55-60° C. Det olosliga materialet avlagsnas genom filtrering och filtermassan tvattas i en ringa mfingd varmt vat-ten. Filtratet behandlas sedan med en losning av kausLik soda tills ett pH-varde omkring 11,5 ar uppnatt, varefter ett filteringen gynnande amne tillfogas och losningen filtreras. Filtratet uppvarmes till 60° C och Mlles i en varm losning av 25 cm3 attiksyra och 75 cm3 vatten. Blandningen kyles till 50° C och filtreras. Efter produktens tvattning med vatten och alkohol samt dess torkning visade den framstallda folsyran en renhetsgrad av 87,3 %.

Exempel 3. 1 g folsyra med en renhetsgrad av 93,1 `;',) forsattes med 30 cm vatten och 0,5 g magnesiumoxid. Blandningen uppvarmes sedan till kokning och filtreras. Genom kylning av filtratet erhalles en gal fanning av magnesiumfolat i form av tunna nalar. Lasningen filtreras och den fuktiga filtermassan loses i omkring 25 cm° kokande vat-ten. Under kylning erhalles anyo en fanning av gull magnesiumfolat, vilken samlas pa filtret. Efter 5 omkristalliseringar av magnesiumfolatet ur vatten torkas produkten vid 1° C/0,5 mm Hg under 31/2 timmar. Vid analysen visar sig denna produkt vara 98 %-igt rent magnesiumfolat.

Exempel 4.

Efter magnesiumfolatets tredubbla omkristalIisering ur vatten tillsattes saltet langsamt till en varm 30 %-ig attiksyralbsning. Vid kylning utMlles folsyra, vilken utvinnes genom filtrering. Efter torkning vid 115° C/0,5 mm 1-1g under 31/2 timmar analyserades produkten, som visade sig innehalla 98 %-ig folsyra.

Exempel 5.

Den medelst ammoniak ur 30 g AlgS01, 7 H20 i 1 liter vatten utfallda magnesiumhydroxiden samlas pa ett filter, tvattas med vatten och blandas med 10 g folsyra (86 % enligt kemisk besMmning och innehallande 7,1 % vatten) i 400 cm3 vatten. Sedan tillsattes ytterligare magnesium- — —3 hydroxid, som utfallts ur 30 g MgSO4, 7 H20 i 1000 cm3 vatten medelst natriumhydroxid, filtrerats och tyattats med vatten. Vatskan uppvarmes darefter till 85° C. Den lamnar pa fenolftaleinpapper en syagt rodfargad flack. Den varma blandningen filtreras och det halmfdrgade filtratet kyles. Den gula massan, som utfalles, loses i 200 cm3 vatten vid 85° C. \rid kylning uppkommer en gul fanning, som samlas pa filtret och loses 1100 cm3 vatten Yid 8° C. Kylningen fOretages langsamt och vatskan far sta. i omkring 16 timmar. Sedan visar sig en orangefargad fallning pa karlets batten med ett ljusgult slat aro-yen Det ljusgula amnet isoleras och samlas pa filtret, loses i 100 cm3 varmt vatten och till denna lOsning sattas 50 cm3%-ig attiksyra vid 85° C. Den kristalliniska produkten torkas i en vakuumdesickator Over fast natriumhydroxid och vattenfritt kalciumsulf at under 24 timmar och darefter under 5 timmar yid 115° Cf0,5 mm Hg-yakuum. Produkten innehaller folsyra, som enligt kemisk bestamning fir 97,8 %-ig.

Exempel 6.

En Issuing av 2 g folsyra (86 %-ig) i 100 cm3 vatten behandlas med 1 g kalciumhydroxid yid 85° C. Darvid loses huvuddelen av den fasta gula bestandsdelen. De icke lbsliga delarna avlagsnas genom varm filtrering. Efter kylning till omkring 60° C behandlas filtratet med en losning av I g MgSO4, 7 H20 i en ringa mangd vatten. Den ringa fallningen avlagsnas genom filtrering och filtratet utspades med en lika stor volym etanol. En voluminos gul fallning uppkommer, som samlas pa filtret. Detta material kan omkristalliseras ur vatten; enligt foreliggande exempel loses det emellertid i varmt vatten, varefter losningen gores klar och 50 cm' 50 %-ig attiksyra vid omkring 80° C tillsattas. Efter kylning samlas det utfallda materialet pa filtret och torkas vid 60° C. Det erhalles 1,127 g material, som innehaller 86,0 % folsyra och 8,1 % vatten.

Exempel 7.

En lOsning av 1 g folsyra (86 % folsyra och 7,1 % vatten) i 50 cm' vatten behandlas med 1 g kaleiumhydroxid vid 80-85° C. Efter varm filtrering behandlas filtratet med 0,8 g magnesiumsulfatheptahydrat, lost i en ringa mangd vatten.

Det utfallda materialet avlagsnas och filtratet sates till ett overskott av varm, utspadd attiksyra (50 cm3, 50 °,'„-ig). Efter kylning samlas den gula fallningen pa filtret, tyattas med vatten och aceton samt torkas vid 60° C. Det erhallna materialet innehaller 90 % folsyra och 7,7 °A; vatten.

Claims (7)

Patentanspra'k:

1. Satt att utvinna folsyra ur en blandning av folsyra och med denna beslaktade pteriner, som atfolj a folsyran, kannetecknat darav, att denna blandning behandlas med en magnesiumforening for astadkommande av en vattenlosning av det darvid framkomna magnesiumfolatet och att icke losliga amnen skiljas fran det losliga magnesiumfolatet samt att losningen darefter behandlas sa, att antingen magnesiumfolat eller folsyra utfalles.

2. Satt enligt patentansprak 1, kannetecknat darav, att namnda blandning forst behandlas i och fOr bildandet av nagot annat 15sligt salt, vilket sedan bringas att reagera med en magnesiumforening, for all framstalla magnesiumfolat genom dubbel omsattning.

3. Satt enligt patentansprak 2, kanneteeknat darav, att namnda blandning fOrst behandlas med kalciumhydroxid och sedan med magnesiumsulf at.

4. Stitt enligt patentanspraken 1, 2 eller 3, kannetecknat darav, att en varm, koncentrerad yattenlosning av magnesiumfolat framstalles, att denna losning efter avlagsnandet av icke losliga amnen darur kyles i och f Or astadkommandet av en fallning av magnesiumfolat, att fallningen iso- leras och, om sa onskas, aterigen lOses i varmt vatten, samt att slutligen losningen surgOres for att erhalla en fanning av folsyra.

5. Satt enligt patentansprak 4, kannetecknat darav, att temperaturen av den varma losningen ligger mellan 75 och 100° C.

6. Satt enligt nagot av patentanspraken 1-5, kannetecknat darav, att ffillningen av folsyra astadkommes genom losningens surgoring till ett pH-varde omkring 3.

7. R.-ft enligt nagot av patentanspraken kannetecknat darav, att namnda magnesiumforening dr magnesiumoxid. Stockholm 1949. Kung,l. Boktr. P. A. Norstmlt &Miler 490089