SA519401667B1 - تركيبة لتخفيف الألم أو علاجه - Google Patents

تركيبة لتخفيف الألم أو علاجه Download PDF

Info

Publication number
SA519401667B1
SA519401667B1 SA519401667A SA519401667A SA519401667B1 SA 519401667 B1 SA519401667 B1 SA 519401667B1 SA 519401667 A SA519401667 A SA 519401667A SA 519401667 A SA519401667 A SA 519401667A SA 519401667 B1 SA519401667 B1 SA 519401667B1
Authority
SA
Saudi Arabia
Prior art keywords
leu
ala
sequence
lys
gly
Prior art date
Application number
SA519401667A
Other languages
English (en)
Inventor
بارك جانجون
تشوي جونجهو
كيم جونسونج
كيم دايووك
كيم سوجيونج
لي سوندونج
كيم مينجو
كيم مينجونج
تشوي هيونسيك
كون يجين
سيم يوموون
Original Assignee
كولون لايف ساينسـز، إنك.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by كولون لايف ساينسـز، إنك. filed Critical كولون لايف ساينسـز، إنك.
Publication of SA519401667B1 publication Critical patent/SA519401667B1/ar

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/18—Growth factors; Growth regulators
    • A61K38/185—Nerve growth factor [NGF]; Brain derived neurotrophic factor [BDNF]; Ciliary neurotrophic factor [CNTF]; Glial derived neurotrophic factor [GDNF]; Neurotrophins, e.g. NT-3
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/20—Interleukins [IL]
    • A61K38/2066—IL-10
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
    • A61K38/51—Lyases (4)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A61K48/0008—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'non-active' part of the composition delivered, e.g. wherein such 'non-active' part is not delivered simultaneously with the 'active' part of the composition
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A61K48/005—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'active' part of the composition delivered, i.e. the nucleic acid delivered
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A61K48/0075—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the delivery route, e.g. oral, subcutaneous
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/04—Centrally acting analgesics, e.g. opioids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/475—Growth factors; Growth regulators
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • C07K14/54—Interleukins [IL]
    • C07K14/5428—IL-10
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C12N15/86—Viral vectors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/88—Lyases (4.)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y401/00—Carbon-carbon lyases (4.1)
    • C12Y401/01—Carboxy-lyases (4.1.1)
    • C12Y401/01015—Glutamate decarboxylase (4.1.1.15)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; CARE OF BIRDS, FISHES, INSECTS; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2207/00—Modified animals
    • A01K2207/30—Animals modified by surgical methods
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; CARE OF BIRDS, FISHES, INSECTS; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2227/00—Animals characterised by species
    • A01K2227/10—Mammal
    • A01K2227/105—Murine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; CARE OF BIRDS, FISHES, INSECTS; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2267/00—Animals characterised by purpose
    • A01K2267/03—Animal model, e.g. for test or diseases
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
    • C12N2750/00011—Details
    • C12N2750/14011—Parvoviridae
    • C12N2750/14111—Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
    • C12N2750/14133—Use of viral protein as therapeutic agent other than vaccine, e.g. apoptosis inducing or anti-inflammatory
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
    • C12N2750/00011—Details
    • C12N2750/14011—Parvoviridae
    • C12N2750/14111—Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
    • C12N2750/14141—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C12N2750/14143—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
    • C12N2750/00011—Details
    • C12N2750/14011—Parvoviridae
    • C12N2750/14111—Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
    • C12N2750/14171—Demonstrated in vivo effect
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2830/00—Vector systems having a special element relevant for transcription
    • C12N2830/48—Vector systems having a special element relevant for transcription regulating transport or export of RNA, e.g. RRE, PRE, WPRE, CTE

Abstract

يتعلق الاختراع الحالي بتركيبة لتخفيف الألم أو علاجه alleviating or treating pain. تحتوي التركيبة الصيدلانية الواردة في الاختراع الحالي على اثنين أو أكثر يتم اختيارهما من المجموعة التي تتكون من نازعة كربوكسيل الجلوتامات glutamate decarboxylase (GAD)، وإنترليوكين-10 interleukin-10 (IL-10)، وجين مشفر لعامل تغذوي عصبي مشتق من خلية دبقية glial cell-derived neurotrophic factor (GDNF). تظهر التركيبة الصيدلانية الواردة في الاختراع الحالي تأثير مسكن analgesic effect ممتاز عند جرعة أقل من تلك الخاصة بالإعطاء الفردي بما أن الجينات يتم إعطاؤها على نحوٍ متزامن، وبالتالي يمكن الحد من الآثار الجانبية التقليدية conventional side effects والسُمية toxicity. بناءً على ذلك، يمكن أن تكون التركيبة الصيدلانية الواردة في الاختراع الحالي مفيدة في تخفيف الألم أو علاجه. شكل 11.

Description

تركيبة لتخفيف الألم أو علاجه ‎Composition for Alleviating or Treating Pain‏ الوصف الكامل
خلفية الاختراع
يتعلق الاختراع الحالي بتركيبة لتخفيف أو علاج الألم وطريقة لتخفيف أو علاج الألم باستخدام
نفس التركيبة.
الألم يعني معاناة من تلف أنسجة ‎ad‏ أو محتمل أو أحاسيس ومشاعر غير سارة ترتبط بهذا التلف. يحمي الألم أجزاء الجسم التي تلفت أثناء شفاء الأنسجة التالفة من الوضع التالف ويوفر
دافع لتجنب تجارب مماثلة في المستقبل. يتم تخفيف معظم الألم ببطء عندما تتمت إزالة الحافز
السببي؛ ولكن في بعض الأحيان يستمر الألم على الرغم من شفاء الأنسجة حيث اختفى الحافز
وتم شفاء التلف بشكل واضح, أو يحدث الألم في حالة بدون أي تهيج؛ تلف أو مرض.
لعلاج الألم» يتم على نطاق واسع استخدام» بشكل أساسي»؛ مسكنات مخدرة مثل المورفين» والذي
0 هو شبيه قلوي أفيوني؛ أو مسكنات غير مخدرة ‎Jie‏ عقاقير مضادة للالتهابات غير ستيرويدية ‎lly (NSAIDS)‏ تحتوي على المكون حمض أسيتيل ساليسيليك؛ إيبوبروفين؛ أو أسيتامينوفين. تتمتع المسكنات المخدرة بميزة إظهار الاستجابة للجرعة والفاعلية العالية؛ ولكنها قد تؤدي إلى آثار جانبية للجهاز العصبي وإذا تم استخدامها لفترة طويلة؛ فقد تؤدي إلى المقاومة والاعتماد البدني عليهاء وقد يزداد الأمر سوءًا.
5 إذا تم استخدام الأسبرين؛ وهو مسكن غير مخدر ‎(ging‏ على حمض أسيتيل ساليسيليك كمكون رئيسي ‘ لغرض مسكن يجب أن يتم إعطاؤه بجرعة عالية 500 مجم على ا لأقل ‎٠‏ ومع ذلك ¢ يعتبر الأسبرين مسكن مضاد للالتهابات غير ستيرويدي والذي يعوق الإنزيم ‎(COX-1)‏ الذي يحفز إنتاج البروستاجلاندينات؛ التي تحمي المعدة؛ ويالتالي يمنع تكوين الغشاء المخاطي المعدي. لذلك؛ فقد تتلف المعدة بسهولة من قبل الحمض المعدي وقد يحدث نزيف في الجهاز الهضمي. بالإضافة
0 إلى ذلك؛ فإن الإيبويروفين هو أيضاً مسكن مضاد للالتهابات غير ستيرويدي؛ وقد يسبب
اضطرابات فى المعدة. أيضاً؛ فى حالة المسكنات التى تحتوي على أسيتامينوفين كمكون رئيسى؛ ‎Jie‏ تايلينول؛ يتم أيض الأسيتامينوفين غالباً في الكبد؛ وقد يسبب تلف في الكبد. وحتى لو كانت المسكنات السابقة فعالة في مرحلة مبكرة؛ فإنها غالباً ما تصبح غير فعالة بسبب المقاومة عند استخدامها 578 طويلة. ‎dag eg‏ التحديد؛ فى حالة ألم الاعتلال العصبىي؛ هناك مشكلة تتمثل في أن الألم لا يستجيب للجرعة القصوى من العامل المضاد للالتهابات غير
الستيرويدي وبالتالى يتم إعطاؤه بجرعة عالية لفترة قصيرة. في الآونة الأخيرة؛ تم تطوير عوامل علاجية جديدة لألم الاعتلال العصبي؛ ولكن لا يزال لها آثار جانبية. على سبيل ‎(Jill‏ فإن حاصرات قناة الصوديوم تكون في الغالب في شكل جزيئات صغيرة وتظهر انتقائية منخفضة للبروتينات إسوية الشكل. بالإضافة إلى ذلك؛ تُظهر آثار جانبية ‎Jie‏
0 شمية القلب واضطراب الحركة. ‎cell‏ هناك ‎dala‏ مُلحة لتطوير مسكن جديد لألم اعتلال عصبي يكون ممتازاً فى الفعالية المسكنة مع تقليل الآثار الجانبية. الوصف العام للاإختراع المشكلة التقنية
5 تبعاً لذلك؛ سعى المخترعون الحاليون إلى تطوير مسكن جديد ألم الاعتلال العصبي يُظهر فعالية مسكنة ممتازة حتى فى الجرعات المنخفضة. ونتيجة لذلك؛ فقد وجد المخترعون الحاليون أنه عندما يتم استخدام توليفة من واحد أو أكثر من نازعة كربوكسيل جلوتامات؛ سيتوكين مضاد للالتهابات؛ وعامل تغذوي عصبي مشتق من خلية دبقية؛ يمكن تخفيف الألم بشكل كبير أو علاجه بالمقارنة بالاستخدام الفردي»؛ وأكملوا الاختراع الحالي.
0 حل المشكلة يوفر الاختراع الحالي تركيبة صيدلانية لتخفيف أو علاج ألم تشتمل على اثنين أو أكثر مختارين من المجموعة التي تتكون من جين مشفر لنازعة كريوكسيل الجلوتامات (6/10)؛ وجين مشفر لإنترليوكين-10 ‎¢(IL=10)‏ وجين مشفر ‎Jalal‏ تغذوي عصبي مشتق من خلية دبقية (60117).
بالإضافة إلى ذلك»؛ يوفر الاختراع الحالي طريقة لتخفيف الألم أو علاجه؛ تشتمل على إعطاء التركيبة الصيدلانية وفقاً للإختراع الحالي. التأثيرات المفيدة للاختراع تشتمل التركيبة الصيدلانية الخاصة بالاختراع الحالي على اثنين أو أكثر مختارين من المجموعة التى تتكون من الجينات المشفرة ل ‎«GAD‏ 10-اا؛ 4 ‎.GDNF‏ لذلك» تُظهر التركيبة الصيدلانية وفقاً للاختراع الحالي فاعلية مسكنة ممتازة عند جرعة أقل من تلك التي تكون للإعطاء الفردي حيث يتم إعطاء ‎lial)‏ بشكل مشترك؛ وبالتالي يمكن تقليل الآثار الجانبية التقليدية والسمية. ‎(ell‏ فقد تكون التركيبة الصيدلانية الخاصة بالاختراع الحالي مفيدة في تخفيف الألم أو علاجه. شرح مختصر للرسومات 0 شكل 1 يوضح الرسم البياني التخطيطي للبلازميدات ‎PAAV-GADG5- 5 pPAAV-GADGS‏ ‎modi‏ المستخدمة لبناء الفيروس المرتبط بالفيروس الغدي لناتج ‎sage‏ الارتباط الجيني: (أ) يوضح الرسم البياني التخطيطي ل ‎PAAV-GADGS‏ و(ب) يوضح الرسم البياني التخطيطي ل ‎PAAV-‏ ‎.GADG5-modi‏ ‏شكل 2 يوضح الرسم البياني التخطيطي للبلازميد ‎PAAV-IL-10‏ المستخدم لبناء الفيروس 5 المرتبط بالفيروس الغدي لناتج عودة الارتباط الجيني. المرتبط بالفيروس الغدي لناتج عودة الارتباط الجيني. شكل 4 يمثل رسم بياني تخطيطي يوضح البلازميد ‎PAAV-GDNF-IL-10‏ ‏شكل 5 يوضح التعبير الوراثي لكل جين مدخل بواسطة البلازميد ‎PAV-IL- pAAV-GADGS‏ 0 10, أو ‎:pAAV-GDNF‏ () يوضح التعبير الوراثي ل 680065 بواسطة البلازميد ‎PAAV=‏ ‏5 (ب) يوضح التعبير الوراثي ل 1-10 بواسطة البلازميد ‎PAAV-IL-10‏ و(ج) يوضح التعبير الوراثي ل ‎GDNF‏ بواسطة البلازميد ‎.PAAV-GDNF‏
شكل 6 يوضح التعبير الوراثي لجين ‎GDNF‏ وجين ‎IL=10‏ بواسطة البلازميد ‎PAAV-GDNF-‏ ‏11-0 (أ) يوضح التعبير الوراثي ل 11-10 بواسطة البلازميد ‎{PAAV-GDNF-IL-10‏ ‏و(ب) يوضح التعبير الوراثي ل ‎GDNF‏ بواسطة البلازميد ‎.PAAV-GDNF-IL-10‏ ‏شكل 7 يوضح نتائج لطخة وسترن والتي توضح التعبير الوراثي لكل بروتين بعد معالجة خلايا ‎293T 5‏ أو ‎Hela‏ بواسطة كل فيروس مرتبط بالفيروس الغدي لناتج عودة الارتباط الجيني بعد بناء
الفيروسات المرتبطة بالفيروس الغدي لناتج عودة الارتباط الجيني والتي بها تم إدخال جين ‎«GADGS‏ جين 10-اا وجين ‎«GDNF‏ على التوالي: (أ) يوضح التعبير الوراثي ل 6/0065 بعد ‎dallas‏ الخلايا 2931 أو ‎Hela‏ بواسطة الفيروس المرتبط بالفيروس الغدي لناتج ‎sage‏ الارتباط الجيني 68065-/01//؛ (ب) يوضح التعبير الوراثي ل 6065 بعد معالجة ‎WIA‏ 2931 أو
‎Hela 0‏ بواسطة الفيروس المرتبط بالفيروس الغدي لناتج عودة الارتباط الجيني -68065-/أاهم ‎tmodi‏ (ج) يوضح التعبير ‎hell‏ ل 11-10 بعد معالجة الخلايا 2931 أو ‎Hela‏ بواسطة الفيروس المرتبط بالفيروس الغدي لناتج ‎sage‏ الارتباط الجيني 11-10-/0/81/؛ و(د) يوضح التعبير الوراثي ل ‎GDNF‏ بعد معالجة خلايا 2931 أو ‎Hela‏ بواسطة الفيروس المرتبط بالفيروس الغدي لناتج عودة الارتباط الجيني ‎AAV-GDNF‏
‏5 شكل 8 يوضح مستويات التعبير الوراثئي ل ‎GABA‏ مقاسة بواسطة ‎ELISA‏ بعد معالجة الخلايا 1 أو ‎Hela‏ بواسطة فيروس مرتبط بالفيروس الغدي لناتج ‎sage‏ الارتباط الجيني -/ام أو 6065-0001 -/اهل: (أ) يمثل رسم بياني يوضح مستوى التعبير الوراثي ل ‎GABA‏ بعد معالجة الخلايا 2931 أو ‎Hela‏ بواسطة الفيروس المرتبط بالفيروس الغدي لناتج عودة الارتباط الجيني ‎AAV-GADG6S‏ و(ب) ‎Jia‏ رسم بياني يوضح مستوى التعبير الوراثي ل
‎GABA 0‏ بعد معالجة الخلايا 2931 أو ‎Hela‏ بواسطة الفيروس المرتبط بالفيروس الغدي لناتج عودة الارتباط ‎AAV-GAD65-modi all‏ شكل 9 يمثل رسم ‎Sl‏ يوضح نتائج مقارنة فاعليات تخفيف الألم بين الإعطاء الفردي لفيروس ‎(AAV-IL-10 (AAV-GADGS‏ أو ‎AAV-GDNF‏ والإعطاء المشترك للفيروسات -/اهم 5 و6015 -/اهط ‎of‏ الفيروسات ‎AAV-GDNF 4 AAV-IL-10‏
الشكل 10 يمثل رسم بياني يوضح نتائج مقارنة فاعليات تخفيف الألم بين الإعطاء الفردي لفيروس ‎(AAV-IL-10 AAV-GAD65‏ أو ‎AAV-GDNF‏ والإعطاء المشترك للفيروسات ‎AAV-‏ ‏65 .؛ ‎AAV-IL-10‏ ر 60117 -لاخلط. شكل 11 يمثل رسم بياني يوضح نتائج مقارنة فاعليات تخفيف الألم بين الإعطاء المشترك للفيروسات 68065-/اهم 60117 -/اهط أى الفيرروسات ‎AAV-GDNF 4 AAV-IL-10‏ والإعطاء المشترك تجميع الفيرروسات ‎.AAV-GDNF 5 AAV-IL-10 (AAV-GADG65‏ شكل 12 يمثل رسم بياني يوضح نتائج مقارنة فاعليات تخفيف الألم بين الإعطاء الفردي لبلازميد ‎(pAAV-IL-10 pAAV-GADGS‏ أو ‎pAAV-GDNF‏ والإعطاء المشترك للبلازميدات 5 -/اههم ‎(pAAV-GDNF‏ أو البلازميدات ‎.PAAV-GDNF 5 pAAV-IL-10‏ 0 شكل 13 يمثل رسم بياني يوضح نتائج مقارنة فاعليات تخفيف الألم بين الإعطاء الفردي للبلازميد ‎(pAAV-IL-10 pAAV-GADG6S‏ أو ‎PAAV-GDNF‏ والإعطاء المشترك لجميع البلازميدات ‎pAAV-IL-10 pAAV-GAD65‏ ر ‎.PAAV-GDNF‏ ‏شكل 14 يمثل رسم بياني يوضح نتائج مقارنة فاعليات تخفيف الألم بين الإعطاء المشترك للبلازميدات ‎(pAAV-GDNF 5 pAAV-GADGS‏ أو البلازميدات ‎PAAV- 3 pAAV-IL-10‏ ‎GDNF 15‏ والإعطاء المشترك لجميع البلازميدات ‎PAAV- 5 pAAV-IL-10 pAAV-GADGS‏ ‎.GDNF‏ ‏شكل 15 يمثل رسم بياني يوضح نتائج مقارنة فاعليات تخفيف الألم بين الإعطاء المشترك للفيروسات ‎AAV-GDNF-IL-10 3 AAV-GAD65-modi‏ والإعطاء المشترك لجميع الفيروسات 681065-/اطلط ‎.AAV-GDNF 5 AAV-IL-10‏ الوصف التفصيلي: فيما يلى 4 سيتم وصف ا لاختراع الحالى بالتفصيل ‎٠‏ ‏يوفر الاختراع الحالي تركيبة صيدلانية لتخفيف أو علاج الألم تشتمل على اثنين أو أكثر يتم اختيارهما من المجموعة التي تتكون من جين مشفر لنازعة كربوكسيل الجلوتامات ‎(GAD)‏ جين
مشفر لإنترليوكين-10 (11-10)؛ وجين مشفر ‎Jalal‏ تغذوي عصبي مشتق من خلية دبقية ‎.(GDNF)‏ ‏في أحد النماذج؛ قد تكون توليفة الاثنين أو أكثر ‎IL-10 «GDNF 5 GAD «IL-103 GAD‏ ‎.GDNF 4 IL-10 «GAD i «GDNF,‏
قد يكون اثنين أو أكثر من الجينات المختارة من المجموعة التي تتكون من جين مشفر ل ‎GAD‏ ‏جين مشفر ل 1-10 وجين مشفر ل ‎GDNF‏ في صورة محتواة في حامل. وفي هذه الوثيقة؛ قد يكون الحامل ناقل فيروسي؛ أو ناقل غير فيروسي مثل بلازميد؛ جسيم دهني, الخ. بالإضافة إلى ذلك؛ قد تكون الجينات في شكل تكون فيه بعض الجينات موجودة في ناقل فيروسي وتكون بقية الجينات موجودة في ناقل غير فيروسي.
0 في أحد النماذج؛ قد تكون الجينات في شكل يوجد فيه ‎GAD‏ في ناقل فيروسي؛ ويوجد 10-اا في ناقل غير فيروسي. بالإضافة إلى ذلك؛ قد تكون الجينات في شكل يوجد فيه ‎GAD‏ في ناقل فيروسي؛ ويوجد ‎GDNF‏ في ناقل غير فيروسي. وأيضاً؛ قد تكون الجينات في شكل يوجد فيه ‎IL-10‏ في ناقل فيروسي؛ ويوجد ‎GDNF‏ في ناقل غير فيروسي. بالإضافة إلى ذلك؛ قد تكون الجينات في شكل يوجد فيه ‎GAD‏ في ناقل فيروسي» ويوجد ‎GDNF 5 ١-10‏ في ناقل غير
5 فيروسي. بالإضافة إلى ذلك؛ قد تكون الجينات في شكل يوجد فيه ‎GAD‏ و10-ا1 في ناقل فيروسي؛ ويوجد ‎GDNF‏ في ناقل غير فيروسي. بالإضافة إلى ذلك؛ قد تكون الجينات في شكل يوجد فيه ‎GAD‏ و ‎GDNF‏ في ناقل فيروسي» ويوجد 10-اا في ناقل غير فيروسي. بالإضافة إلى ذلك؛ قد تكون الجينات في شكل يوجد فيه 11-10 في ناقل فيروسي؛ ويوجد ‎GAD‏ و 506في ناقل غير فيروسي. بالإضافة إلى ذلك؛ قد تكون الجينات في شكل يوجد فيه ‎IL=10‏
‎GDNF 5 0‏ في ناقل فيروسي؛ ويوجد ‎GAD‏ في ناقل غير فيروسي. وأيضاً؛ قد تكون الجينات في شكل يوجد فيه ‎GDNF‏ في ناقل فيروسي» ويوجد ‎IL=105 GAD‏ في ناقل غير فيروسي. بالإضافة إلى ذلك؛ قد يكون الجين في شكل يكون فيه موجود بشكل عملي في ناقل. على ‎dag‏ ‏التحديد؛ قد يكون الجين في شكل يكون فيه موجود بشكل عملي في ناقل فيروسي أو ناقل غير فيروسي.
قد يكون الناقل الفيروسي واحد على الأقل مختار من المجموعة التي تتكون من فيروس غدي؛ فيروس مرتبط بالفيروس الغدي ‎(AAV)‏ فيروس الهريس البسيط؛» الفيروسة البطيئة؛ الفيروس الراجع 3 الفيروس المضخم للخلايا 3 الفيروس العصوي 3 الفيروسة الجدرية 3 إلخ . على ‎dag‏ التحديد 3 قد يكون الناقل الفيروسي فيروس مرتبط بالفيروس الغدي.
في أحد النماذج؛ قد يوجد الجين المشفر ل ‎GAD‏ بشكل عملي في ‎dela‏ 1 (على سبيل ‎JE‏ ‏ناقل أول)؛ وقد يوجد الجين المشفر ل 10-ا! بشكل عملي في حامل 2 (على سبيل المثال؛ ناقل ثاني) » وقد يوجد الجين المشفر لذ ‎GDNF‏ بشكل عملى فى حامل 3 (على سبيل المثال» تاقل ثالث). بالإضافة إلى ذلك؛ قد يحتوي أحد الحوامل على اثنين أو أكثر من الجينات. قد يكون الناقل غير الفيروسي واحد على الأقل مختار من المجموعة التي تتكون من بلازميد؛
0 جديم دهني؛ بوليمر كاتيوني؛ ‎(dhl‏ مستحلب؛ وجسيمات نانوية لدهون صلبة. يشير المصطلح 'بلازميد "كما هو مستخدم هنا إلى شظية ‎DNA‏ د ‎dy)‏ موجودة على نحو منفصل خارج كروموسوم البكتيريا. لا تحتوي البلازميدات على جينات أساسية لبقاء البكتيرياء لكنها تحتوي على جينات أساسية لمقاومة بعض المضادات ‎Lgl‏ ولتبادل الجينات بين البكتيريا. بالإضافة إلى ذلك؛ يمكن أن تنمو البلازميدات بشكل مستقل عن الكروموسومات وتحتوي على واسمات
5 يمكن اختيارها. يشير المصطلح ‎pan‏ د هني "كما هو مستخدم هنا إلى حويصلة صغيرة تم إنتاجها من تشكيل طبقة ثنائية ناجمة عن الجزء المحب للماء والجزءٍ الكاره للماء عند تعليق جزئ يحتوي على كل من جزءٍ كاره للماء وجزءِ محب للماء في جزئ؛ ‎Jie‏ الشحوم الفسفورية؛ في محلول ‎٠ le‏ يتم عزل الجسيم دهني عن الغشاء الخارجي بواسطة غشاء يتألف من طبقة ثنائية الدهون؛ ويمكن استخدام
0 الجسيمات الدهنية التي تحتوي على ‎(MRNA (DNA‏ إلخ» كوسطاء للمعلومات الوراثية. يشير المصطلح "بوليمر كاتيوني” كما هو مستخدم هنا إلى دهون كاتيونية أو مركب بوليمر وهو عبارة عن مادة تُشكل معقد من رابطة أيونية مع ‎DNA‏ أنيوني وتقوم بتوصيل ‎DNA‏ إلى خلية. يشير المصطلح ‎ALAS‏ كما هو مستخدم هنا إلى تجمع غروي مستقر بشكل ديناميكي حراري تم تشكيله من جزيئات تتكون من مجموعة قطبية ومجموعة غير قطبية كارهة ‎celal‏ مثل خافضات
التوتر السطحي وجزيئات الدهون؛ من خلال الارتباط بواسطة قوى فان دير فالس أو ما شابه ذلك في محلول. بالإضافة إلى ذلك؛ يمكن استخدام المذيلات التي تحتوي على ‎MRNA (DNA‏ وما شابه ذلك كوسطاء للمعلومات الوراثية. ويعني المصطلح 'مستحلب" كما هو مستخدم هنا أنه؛ عند خلط محلولين بأطوار مختلفة؛ يُشكل
أحد السوائل جسيمات دقيقة وينتشر في السائل الآخر. وقد يوجد ‎MRNA (DNA‏ وما شابه ذلك في مركز جسيم المستحلب ليتم استخدامها كوسطاء للمعلومات الوراثية. ‎LS‏ هو مستخدم ‎(lis‏ يشير المصطلح "جسيم نانوي لدهون صلبة" إلى تحضير نموذج يوجد فيه العقار في جسيم دقيق نانوي الحجم مصنوع من دهون صلبة بدلاً من الدهون السائلة. قد يكون للحامل 1 (على سبيل المثال؛ ناقل أول) الذي يشتمل على أي جين مختار من المجموعة
0 التي تتكون من ‎«GAD‏ 10-اا؛ 5 ‎«GDNF‏ والحامل 2 ‎le)‏ سبيل المثال؛ ناقل ثاني) الذي يشتمل على أي جين مختار من مجموعة الجينات المتبقية غير المضمنة في الحامل 1 وفقاً للاختراع الحالي نسبة خلط قائمة على عيار الفيروسات لكل وحدة حجم 1:1 إلى 100 أو 1 إلى 10:. على وجه التحديد؛ قد تكون نسبة الخلط القائمة على عيار الفيروسات لكل وحدة حجم للحامل 1 والحامل 2 1:1 إلى 10 أو 1 إلى 1:10.
5 قد يكون للحامل 1 (على سبيل ‎(Jal‏ ناقل أول) الذي يشتمل على جين مشفر ل ‎GAD‏ الحامل ‎le) 2‏ سبيل المثال؛ ناقل ثاني) الذي يشتمل على جين مشفر ل ‎IL-10‏ والحامل 3 (على سبيل المثال» ناقل ثالث) الذي يشتمل على جين مشفر ل ‎GDNF‏ وفقاً للاختراع الحالي نسبة خلط قائمة على عيار الفيروسات لكل وحدة حجم 0.1:1 إلى 0.1:10 إلى 10. وكما هو مستخدم هناء يعني المصطلح 'بشكل عملي" أن هناك جين تم إدخاله يرتبط بمتوالية
0 تنظيمية بحيث يمكن أن يحدث التعبير الوراثي في خلية مضيفة. وتمثل المتوالية التنظيمية متوالية ‎DNA‏ والتي تنظم التعبير الوراثي للجين؛ وقد تتضمن عناصر تنظيمية أخرى ‎Jie‏ المعززات والمحسنات أو التذييل بعديد الأدينيلات. بالإضافة إلى ذلك» توفر المتوالية التنظيمية موقع لريط عامل نسخ والذي يتحكم في التعبير الوراثي للجين الذي تم إدخاله؛ وقد تؤثر على بنية المعقد مع عامل النسخ لتحديد وظيفة عامل النسخ.
يشير المصطلح "6/80" كما هو مستخدم هنا إلى إنزيم والذي ينزع الكربوكسيل من الجلوتامات لإنتاج ‎GABA‏ (حمض جاما- أمينوبيوتيربك). وقد يكون ‎GAD‏ هو 68065 أو 6067. على وجه التحديد؛ قد يكون 68065 مشتق من إنسان» ‎(lS (dja‏ قطة؛ أو حصان لكنه لا يقتصر على ذلك. وقد يكون الجين المشفر ل ‎GAD‏ هو متوالية النيوكليوتيد المشفرة لمتوالية الحمض الأميني التي تمثلها المتوالية بهوية رقم: 1 4« 32 34 أو 36. بالإضافة إلى ذلك؛ قد تكون متوالية النيوكليوتيد المشفرة لمتوالية الحمض الأميني التي تمثلها المتوالية بهوية رقم: 1 هي متوالية ‎DNA‏ التي تمثلها المتوالية بهوية رقم: 2 أو 3؛ وقد تكون هي متوالية ‎MRNA‏ المبينة في المتوالية المرجعية ‎:NCBI‏ 000818.2_/ال!. بالإضافة إلى ذلك؛ قد تكون متوالية النيوكليوتيد المشفرة لمتوالية الحمض الأميني التي تمثلها المتوالية بهوية رقم: 4 0 هي متوالية النيوكليوتيد التي تم تحسين الكودون الخاص بها لتكون مناسبة لمتوالية ‎DNA‏ التي تمثلها المتوالية بهوية رقم: 5 أو الجين المشفر لمتوالية الحمض الأميني التي تمثلها المتوالية بهوية رقم: 4؛ والتي قد تكون متوالية ‎MRNA‏ المبينة في المتوالية المرجعية ‎iNCBI‏ ‏2 -0ل8. بالإضافة إلى ‎(ly‏ قد تكون متوالية النيوكليوتيد المشفرة لمتوالية الحمض الأميني التي تمثلها المتوالية بهوية رقم: 32 هي متوالية ‎DNA‏ التي تمثلها المتوالية بهوية رقم: 5 33. وقد تكون متوالية النيوكليوتيد المشفرة لمتوالية الحمض الأميني التي تمثلها المتوالية بهوية رقم: 34 هي متوالية ‎DNA‏ التي تمثلها المتوالية بهوية رقم: 35؛ وقد تكون متوالية النيوكليوتيد المشفرة لمتوالية الحمض الأميني التي تمثلها المتوالية بهوية رقم: 36 هي متوالية ‎DNA‏ التي تمثلها المتوالية بهوية رقم: 37. بالإضافة إلى ذلك؛ قد يكون الجين المشفر ل ‎GAD‏ هو متوالية نيوكليوتيد مشفرة لبديل ‎GAD‏ ‏0 والذي يمكنه الاحتفاظ بنشاط ‎GAD‏ وإنتاج 688/8. يتضمن بديل ‎GAD‏ جميع المتواليات التي تحتفظ بخصائص ‎GAD‏ لإنتاج ‎(GABA‏ ورغم أنها لا تقتصر على أي متوالية واحدة»؛ فإن متوالية النيوكليوتيد المشفرة لبديل ‎GAD‏ قد تكون؛ على نحو مفضل؛ متوالية نيوكليوتيد مشفرة لمتوالية حمض أميني لها تماثل متوالية على الأقل 9660 أو ‎«JST‏ 9670 أو ‎«<i‏ 9680 أو أكثر؛ أو 0 أو أكثرء مع متوالية الحمض الأميني ل ‎GAD‏ الموصوفة سابقاً؛ والأكثر تفضيلاً؛ قد تكون 5 متوالية نيوكليوتيد مشفرة لمتوالية حمض أميني لها تماثل متوالية بنسبة 9695 أو أكثر.
بالإضافة إلى ذلك؛ قد تكون متوالية النيوكليوتيد المشفرة لبديل ‎GAD‏ هي متوالية نيوكليوتيد لها ‎Sila‏ متوالية على الأقل 9660 أو أكثرء. 9670 أو ‎isi‏ « 9680 أو أكثرء أو 9690 أو أكثر مع متوالية نيوكليوتيد ‎GAD‏ الموصوفة سابقاً؛ والأكثر تفضيلاً؛ قد تكون متوالية نيوكليوتيد لها تماثل متوالية بنسبة 9695 أو أكثر.
يتم تحديد "النسبة المئوية لتطابق المتوالية" من خلال مقارنة مناطق المقارنة في الحالة التي يتم فيها محاذاة المتواليتين على النحو الأمثل. بالإضافة إلى ذلك؛ قد تتضمن بعض متواليات النيوكليوتيد في مناطق المقارنة عمليات إضافة أو حذف (أي؛ فجوات) بالنسبة للمتوالية المرجعية (بدون إضافة أو حذف) من أجل المحاذاة المثلى للمتواليتين. يشير المصطلح "1-10 كما هو مستخدم هنا إلى سيتوكين مضاد للالتهابات ينتمي إلى
0 السيتوكين من الفئة ‎Nat Rev Immunol, 2003) ١١‏ ,0ا4808!). ويكون ‎IL-10‏ في شكل دايمر متماثل يتكون من اثنين من الوحدات الفرعية طول كل منها 178 حمض أميني. ويُعرف أيضاً باسم العامل المثبط لتخليق السيتوكين ‎(CSIF)‏ في البشر. يقوم 11-10 بوظيفة تثبيط نشاط خلايا ‎NK‏ (القاتلة الطبيعية) في الاستجابة المناعية؛ ويُشكل معقد مع مستقبل 10-اا ليشارك في تنبيغ الإشارات. قد يكون ‎IL-10‏ بروتين مشتق من إنسان» ‎(lS cpa‏ قطة؛ أو حصان؛ لكنه لا
5 يقتصر على ذلك. قد يكون الجين المشفر ل 11-10 هو متوالية النيوكليوتيد المشفرة لمتوالية الحمض الأميني التي تمثلها المتوالية بهوية رقم: 6« 9< 38 40. أو 42. على وجه التحديد؛ قد تكون متوالية النيوكليوتيد المشفرة لمتوالية الحمض الأميني التي تمثلها المتوالية بهوية رقم: 6 هي متوالية ‎DNA‏ التي تمثلها المتوالية بهوية رقم: 7 أو 8؛ وقد تكون هي متوالية ‎MRNA‏ المبينة في المتوالية المرجعية ‎:NCBI‏ 012854.2_/ال. بالإضافة إلى ذلك؛
0 قد تكون متوالية النيوكليوتيد المشفرة لمتوالية الحمض الأميني التي تمثلها المتوالية بهوية رقم: 9 هي متوالية ‎DNA‏ التي تمثلها المتوالية بهوية رقم: 10 أو 14 وقد تكون هي متوالية ‎MRNA‏ ‏المبينة في المتوالية المرجعية ‎.NM_000572.2 :NCBI‏ قد تكون متوالية النيوكليوتيد المشفرة لمتوالية الحمض الأميني التي تمثلها المتوالية بهوية رقم: 38 هي متوالية ‎DNA‏ التي تمثلها المتوالية بهوية رقم: 39. بالإضافة إلى ذلك؛ قد تكون متوالية النيوكليوتيد المشفرة لمتوالية الحمض
5 الأميني التي تمثلها المتوالية بهوية رقم: 40 هي متوالية ‎DNA‏ التي تمثلها المتوالية بهوية رقم:
41 وقد تكون متوالية النيوكليوتيد المشفرة لمتوالية الحمض الأميني التي تمثلها المتوالية بهوية رقم: 42 هي متوالية ‎DNA‏ التي تمثلها المتوالية بهوية رقم: 43. بالإضافة إلى ذلك؛ قد يكون الجين المشفر ل ‎I-10‏ متوالية نيوكليوتيد مشفرة لبديل ‎IL=10‏ والذي يحتفظ بنشاط 10-. قد تكون متوالية النيوكليوتيد المشفرة لبديل 1-10 هي متوالية نيوكليوتيد مشفرة لمتوالية حمض أميني لها تماثل متوالية على الأقل 9660 أو أكثر؛ 9670 أو أكثر» 9680
أو ‎isl‏ « %90 أو أكثر مع متوالية الحمض الأميني 10--]! المبينة سابقاً؛ والأكثر تفضيلاً؛ قد تكون متوالية نيوكليوتيد مشفرة لمتوالية حمض أميني لها تماثل متوالية بنسبة 9695 أو أكثر. قد تكون متوالية النيوكليوتيد المشفرة لبديل 11-10 هي متوالية نيوكليوتيد لها تماثل متوالية على الأقل 9660 أو أكثرء 9670 أو أكثرء 9680 أو أكثرء 9690 أو أكثر مع متوالية النيوكليوتيد -!!
0 10 المبينة سابقاً؛ والأكثر تفضيلاً؛ قد تكون متوالية نيوكليوتيد لها تماثل متوالية بنسبة 1695 أو أكثر. يشير المصطلح ‎"GDNF"‏ كما هو مستخدم هنا إلى بروتين يُشكل عائلة المركب الترابطي ‎.GDNF‏ وتتكون عائلة المركب الترابطي ‎GDNF‏ من ‎«GDNF‏ نيورتورين (818710)؛ أرتيمين ‎((ARTN)‏ وبيرسيفين (05©51). بالإضافة إلى ذلك؛ فإن ‎GDNF‏ يمثل البروتين الذي يعزز بقاء
5 أنواع كثيرة من الخلايا العصبية وبنقل الإشارات خلال مستقبل 6740:1. وقد يكون ‎GDNF‏ ‏بروتين مشتق من إنسان؛ جرذء كلب؛ قطة؛ أو ‎elias‏ لكنه لا يقتصر على ذلك. قد يكون الجين المشفر ل ‎GDNF‏ هو متوالية النيوكليوتيد المشفرة لمتوالية الحمض الأميني التي تمثلها المتوالية بهوية رقم: 11( 44 46 أو 48. على وجه التحديد؛ قد تكون متوالية النيوكليوتيد المشفرة لمتوالية الحمض الأميني التي تمثلها
0 المتوالية بهوية رقم: 11 هي متوالية ‎DNA‏ التي تمثلها المتوالية بهوية رقم: 12 أو 13؛ وقد تكون هي متوالية ‎MRNA‏ المبينة في المتوالية المرجعية ‎:NCBI‏ 0/41_199231.2ل. بالإضافة إلى ذلك؛ قد تكون متوالية النيوكليوتيد المشفرة لمتوالية الحمض الأميني التي تمثلها المتوالية بهوية رقم: 4 هي المتوالية ‎DNA‏ التي تمثلها المتوالية بهوية رقم: 45. وقد تكون متوالية النيوكليوتيد المشفرة لمتوالية الحمض الأميني التي تمثلها المتوالية بهوية رقم: 46 هي متوالية ‎DNA‏ التي تمثلها
— 3 1 — المتوالية بهوية رقم: ‎AT‏ وقد تكون متوالية النيوكليوتيد المشفرة لمتوالية الحمض الأميني التي تمثلها المتوالية بهوية رقم: 48 هي متوالية ‎DNA‏ التي تمثلها المتوالية بهوية رقم: 49. بالإضافة إلى ذلك؛ قد يكون الجين المشفر ل ‎GDNF‏ هو متوالية نيوكليوتيد مشفرة لبديل ‎GDNF‏ ‏والذي يحتفظ بنشاط ‎GDNF‏ قد تكون متوالية النيوكليوتيد المشفرة لبديل ‎GDNF‏ هي متوالية نيوكليوتيد مشفرة لمتوالية حمض أميني لها تماثل متوالية على الأقل 9660 أو أكثر؛ 9670 أو أكثر» 9680 أو أكثرء أو 1690 أو أكثر مع متوالية الحمض الأميني ل ‎GDNF‏ المبينة ‎(Gls‏ ‏والأكثر تفضيلاً؛ قد تكون متوالية نيوكليوتيد مشفرة لمتوالية حمض أميني لها تماثل متوالية بنسبة 5 أو أكثر. بالإضافة إلى ذلك؛ قد تكون متوالية النيوكليوتيد المشفرة لبديل ‎GDNF‏ هي متوالية نيوكليوتيد لها 0 1 تمائل متوالية على الأقل 9660 أو أكثر ¢ 9670 أو أكثرء 9680 أو أكثرء 9690 أو أكثر مع متوالية نيوكليوتيد ‎GDNF‏ المبينة سابقاً؛ والأكثر تفضيلاً؛ قد تكون متوالية نيوكليوتيد لها تماثل متوالية بنسبة 9695 أو أكثر. ويكون ل ‎(GABA‏ المنتج من جين ‎(GAD‏ تأثير على منع تنبيغ إشارة الألم؛ ولكن الكميات المفرطة قد تسبب أعراض مثل الحكة؛ الدوخة؛ النعاس»؛ الخ؛ بالإضافة إلى الآثار الجانبية ‎Jie‏ ‏5 زبادة معدل ضريات القلب أو معدل التنفس )2000 ‎.(Longo, Am Fam Physician,‏ ومن المعروف أن ‎IL=10‏ هو السيتوكين الذي يُظهر أعمال مضادة للالتهابات؛ ولكن الآثار الجانبية ‎Jie‏ أعراض الأنفلونزا وما شابه ذلك يمكن أن تحدث ) ‎Friedrich, J Invest‏ ‎.(Dermatol, 2002‏ علاوة على ذلك؛ من المعروف أن التعبير الوراثي ل ‎GDNF‏ يُظهر كفاءات مسكنة للآلام على مجموعة متنوعة من | لآلام مثل ألم الاعتلال العصبي وما شابه ‎cella‏ لكنه تم ذكر في تجارب القرود أن الإفراط في إعطاؤه تسبب في تلف الخلايا العصبية في الدماغ ( ‎Hovland, Toxicol‏ ‎.(Pathol, 2007‏ قد تُظهر تركيبة صيدلانية وفقاً للاختراع الحالي أعمال مسكنة مع كمية صغيرة من الجينات أو الحوامل التي تحتوي عليها. وتتكون التركيبة وفقاً للاختراع الحالي من ناقل يحتوي على جين مشفر
ل ‎«GAD‏ ناقل يحتوي على جين مشفر لسيتوكين مضاد للالتهابات في الأنسجة العصبية؛ و/أو ناقل يحتوي على جين مشفر ل ‎(GDNF‏ وعن طريق الإعطاء المشترك لمواد لها آليات مسكنة مختلفة؛ يكون من الممكن تحقيق نفس تأثيرات تخفيف أو معالجة ‎a)‏ أو تأثيرات أفضل بجرعة أقل من جرعة الإعطاء الفردي.
على ‎dng‏ الخصوص» وفقاً للاختراع ‎(Jal)‏ عند الإعطاء المشترك لاثنين أو أكثر من الجينات المختارة من المجموعة التي تتكون من الجينات المشفرة ل 6/8065؛ 10-اا 5 ‎«GDNF‏ يحدث تأثير تآزري لتخفيف الألم. وبالتالي؛ قد تكون التركيبة الصيدلانية وفقاً للاختراع الحالي مفيدة لتخفيف أو علاج الألم. وفقاً لأحد نماذج الاختراع الحالي؛ قد يكون الناقل الأول الناقل الثاني و/أو الناقل الثالث فيروس
0 مرتبط بالفيروس الغدي. ولا يقتصر الفيروس المرتبط بالفيروس الغدي على نمط مصلي معين؛ ‎eg‏ نحو مفضل قد يكون أي من ‎AAVT‏ إلى ‎AAVY‏ ‏يمكن اختيار الألم من المجموعة التي تتكون من ألم مرتبط بمستقبلات الألم؛ ألم نفسي المنشاًء ألم التهابي؛ ألم مرضي؛ء ألم الأعصاب؛ ألم السرطان؛ ألم ما بعد الجراحة؛ ألم العصب الثلاثي التوائم؛ ألم مجهول السببء ألم الاعتلال العصبي السكري؛ أو الصداع النصفي. في مثال معين؛ قد يكون
5 الألم اعتلال الجذور القطنية العجزية (585]). يشير الألم الالتهابي إلى الألم المرتبط بتلف الأنسجة وارتشاح الخلايا المناعية. بالإضافة إلى ذلك؛ يعني الألم المرضي حالة المرض التي فيها يكون الألم بسبب تلف الأنسجة العصبية أو وظيفتها غير الطبيعية. ‎Lally‏ قد يكون الألم المرضي ألم ناجم عن خلل وظيفي؛ مثل الألم العضلي الليفي؛ متلازمة القولون المتهيج؛ أو صداع التوتر.
0 بالإضافة إلى ذلك؛ قد يتضمن الألم آلام الظهر التي يمكن تمييزها تشريحياً: آلام الرقبة؛ آلام منتصف الظهر» آلام أسفل الظهر» أو آلام عظمة المؤخرة. بالإضافة إلى ذلك؛ قد يكون الألم واحد على الأقل مختار من المجموعة التي تتكون من ألم الأعصاب؛ ألم السرطان؛ ألم ما بعد الجراحة؛ ألم العصب الثلاثي التوائم؛ ألم مجهول السبب؛ ألم الاعتلال العصبي السكري؛ الصداع النصفي؛ وما شابه ذلك. في مثال معين؛ قد يكون الألم اعتلال الجذور القطنية العجزية.
— 5 1 — يمكن أن يكون ألم الأعصاب بسبب تلف أو مرض يصيب الجهاز الحسي الجسدي. وقد يكون ألم الأعصاب إحساس غير طبيعي يسمى ألم ‎od‏ وضعف الحس. بالإضافة إلى ذلك؛ تتضمن الخصائص العامة لألم الأعصاب الشعور بالسخونة أو البرودة؛ الدبابيس والإبر؛ التخدير» والحكة. في المقابل؛ غالباً ما يتم التعبير عن الألم المرتبط بمستقبلات الألم بالوجع.
بالإضافة إلى ذلك؛ يرتبط الصداع النصفي بعدد من أعراض الجهاز العصبي الذاتي؛ وهو اضطراب مزمن يسبب الصداع بدرجات شدة من العادي إلى الخطير. ومن المعروف أن الصداع النصفي يرتبط بزيادة استثارة القشرة الدماغية والتنظيم غير الطبيعى ‎AN‏ الخلايا العصبية في نواة العصب ثلاثى التوائم لجذع الدماغ )2013 ‎.(Noseda, Pain,‏ على ‎dag‏ التحديد؛ يمكن استخدام تركيبة صيدلانية وفقاً للاختراع الحالي لتخفيف أو علاج آلام
0 الأعصاب وآلام السرطان المزمنة. وكما هو مستخدم هناء يعني المصطلح ‎CRRA‏ أو ‎fs‏ أي عمل يحسن أو يغير من أعراض الألم بطريقة مفيدة عن طريق إعطاء التركيبة ‎Tay‏ للاختراع الحالي. قد تشتمل التركيبة الصيدلانية وفقاً للاختراع الحالي أيضاً على حامل مقبول من الناحية الفسيولوجية. بالإضافة إلى ذلك؛ قد تشتمل التركيبات الصيدلانية وفقاً للاختراع الحالي أيضاً على 5 سواغات ومخففات مناسبة تستخدم بشكل تقليدي في تحضير التركيبات الصيدلانية. بالإضافة إلى ‎ells‏ يمكن استخدام التركيبات وفقاً للاختراع الحالي من خلال تحضيرها في شكل صياغات تُعطى عن طريق الفم ‎Jie‏ المساحيق؛ الحبيبات؛ ‎(aha‏ الكبسولات؛ المعلقات؛ المستحلبات؛ الشرابء الإيروسول؛ الخ صياغات خارجية؛ تحاميل؛ أو حقن بالطرق العامة. على ‎dag‏ التحديد؛ قد تكون التركيبة الصيدلانية فى شكل حقن. أما بالنسبة للصياغات المناسبة المعروفة فى المجال؛ يمكن 0 استخدام تلك المدرجة في )1985( ‎.Remington’s Pharmaceutical Science‏ بالإضافة إلى ذلك؛ قد تشتمل التركيبة الصيدلانية على ملح (كلوريد صوديوم)؛ لاكتوز؛ دكستروز» سكروز ‘ ‎Join) gu‏ مانيتول زاليتول إريثربتول مالتيتول + نشاء الصمغ العربي ألجينات جيلاتين؛ فوسفات كالسيوم؛ سيليكات كالسيوم؛ سليلوز؛ ميثيل سليلوز؛ سليلوز دقيق البلورات؛ بولي ‎did‏ بيروليدون؛ ‎cole‏ ميثيل هيدروكسي بنزوات؛ بروييل هيدروكسي بنزوات؛ تالك؛ ستيارات
— 1 6 —
ماغنسيوم؛ ‎cu)‏ معدنى؛ إخ؛ فى شكل حوامل سواغات ومخففات . ولصياغة التركيبة الصيدلانية
وفقاً للاختراع الحالي؛ يمكن استخدام المخففات أو السواغات المستخدمة عموماً مثل الحشوات؛
الممددات؛ المواد الرابطة؛ المرطبات؛ المفتتات؛ خافضات التوتر السطحيء إلخ.
قد تتضمن الصياغات للإعطاء عن غير طريق القناة الهضمية المحاليل المعقمة؛ المذيبات غير
المائية؛ المعلقات؛ المستحلبات؛ الصياغات المجففة بالتجميد؛ والتحاميل. يمكن استخدام بروبيلين
جليكول؛ بولي إيثيلين جليكول؛ ‎cu)‏ نباتي ‎ie‏ زيت الزيتون؛ وإستر قابل للحقن مثل إيثيلولات؛
الخ؛ للمذيبات غير المائية والمعلقات. ويمكن استخدام وبتيبسول؛ ماكروجول؛ توين 61؛ ‎cw)‏
الكاكاو» زبت اللورين؛ هلام الجليسرين؛ إلخ لقواعد التحاميل.
يوفر الاختراع الحالي أيضاً طريقة لتخفيف أو علاج الألم؛ تشتمل على إعطاء تركيبة صيدلانية 0 تشتمل على اثنين أو أكثر تم اختيارهما من المجموعة التي تتكون من الجينات المشفرة ل ‎«GAD‏
0-ال ‎GDNF‏ لخاضع في حاجة لذلك.
ويكون الألم كما تم وصفه سابقاً فيما يتعلق بالتركيبة الصيدلانية.
قد يكون الخاضع من الثدييات بما في ذلك الإنسان؛ أو خلية و/أو نسيج معزولين من حيوان ثديي
يتضمن الإنسان. يُقصد بالمصطلح ‎GIS‏ غير ‎Gd‏ كما هو مستخدم هنا أن يشتمل على جميع 5 الكائنات الفقارية؛ ‎ally‏ تتضمن الثدييات وغير الثدييات مثل الرئيسيات؛ الأغنام؛ الكلاب؛ القططء
الخيول؛ البقرء الدجاج؛ البرمائيات» الزواحف»؛ الخ.
وبالنسبة لطريقة | لإعطاء » الجرعة؛ وتكرار ‎١‏ لإعطاء » يمكن إعطاء التركيبة الصيدلانية للخاضع
بطرق وكميات مختلفة تعتمد على حالة المريض ووجود أو غياب آثار جانبية؛ ويمكن اختيار مدى
طرق ‎J‏ لإعطاء المتلى ‘ الجرعات وتكرارات | لإعطاء يشكل ملاثم من قبل هؤلاء الذين يمتلكون خبرة 0 عادية في المجال. بالإضافة إلى ذلك؛ فقد يتم إعطاء التركيبة الصيدلانية في توليفة مع عقار آخر
أو مادة فعالة فسيولوجياً والتي تكون معروفة لإظهار فاعلية علاجية على الاضطراب المراد
علاجه. ‎dad‏ يمكن تحضير التركيبة الصيدلانية فى شكل صيغة مركبة.
على وجه التحديد» يمكن توفير التركيبة الصيدلانية وفقاً للاختراع الحالي في شكل حقن. على سبيل
المتال ؛ حقن تحت الجلدء؛ حقن عضلى»؛ حقن وربدي « حقن فوق الجافية؛ أو حقن داخل القرابء؛
وما شابه ذلك يمكن تضمينه. وعلى ‎dag‏ التحديد؛ يمكن إعطاء التركيبة الصيدلانية عن طريق
حقن فوق الجافية أو حقن داخل القراب؛ ‎(Sg‏ أكثر ‎danas‏ يمكن إعطاؤها عن طريق حقن فوق
الجافية عبر الثقب أو حقن داخل القراب.
وكما هو مستخدم هناء يشير المصطلح "حقن فوق الجافية عبر الثقب" إلى طريقة لحقن عقار في داخل الثقب الفقري والذي هو مساحة حيث تظهر الأعصاب من الحبل الشوكي من خلال المساحة
بين العظام الشوكية؛ وفي المساحة خارج الجافية التي تحيط بالحبل الشوكي والأعصاب الشوكية.
في أحد النماذج؛ إذا تم تصنيع التركيبة الصيدلانية وفقاً للاختراع الحالي من فيروسات؛ يمكن
إعطاء العقار إلى داخل الثقب الفقري لخاضع عن طريق إجراء علاج بالحقن فوق الجافية.
‎LS‏ هو مستخدم هناء يشير المصطلح "حقن داخل القراب" إلى طريقة إعطاء عن طريق حقن
‏0 عقار في المساحة داخل الجافية في القناة الشوكية. في أحد النماذج؛ إذا تم تحضير التركيبة الصيدلانية وفقاً للاختراع الحالي من بلازميدات؛ يمكن إعطاء العقار في داخل القناة الشوكية لخاضع عن طريق إجراء علاج حقن داخل القراب. وعلى وجه التحديد؛ إذا تم تحضير التركيبة الصيدلانية من ناقلات فيروسية؛ يمكن إعطاؤها بكمية من 1.0 ‎x‏ 610 إلى 1.0 ‎x‏ 1410 جينوم فيروس على أساس البالغين. بالإضافة إلى ذلك؛
‏5 عندما يكون هناك نوعين من الفيروسات للإعطاء؛ يمكن إعطاء كل نوع من الفيروسات بكمية من 0 510 إلى 5.0 ‎x‏ 1310 جينوم فيروس. إذا كان هناك ثلاثة أنواع من الفيروسات للإعطاء؛ يمكن إعطاء كل نوع من الفيروسات بكمية من 3.0 ” 510 إلى 3.0 ‎x‏ 1310 جينوم فيروس. بالإضافة إلى ذلك؛ إذا تم تحضير التركيبة الصيدلانية من ناقلات غير فيروسية؛ يمكن إعطاؤها
‏0 بتركيز من 0.1 مجم/مل إلى 10 مجم/مل؛ على أساس البالغين. ‎clad‏ إذا تم تحضير التركيبة الصيدلانية من ناقلات بلازميد» فقد تكون الجرعة 0.1 مل» ‎del‏ 2 مل» 3 مل» 4 ملء؛ 5 ملء؛ 6 مل؛ 7 مل؛ 8 مل؛ 9 مل؛ 10 مل أو ‎GST‏ بما في ذلك جميع القيم والنطاقات فيما بينهم. أما بالنسبة لتكرار الإعطاء للناقل الفيروسي؛ يمكن إعطاؤه مرة أو أكثرء أو 1 إلى 10 مرات. ‎clad‏ يمكن إعطاؤه في فترات فاصلة من يوم إلى شهر؛ أو شهر إلى سنة في حالة الإعطاء
— 8 1 — المتكرر. بالإضافة إلى ذلك؛ إذا تم تحضير التركيبة الصيدلانية من ناقلات غير فيروسية؛ يمكن إعطاؤه مرة أو أكثرء أو مرة إلى 10 مرات. ‎clad‏ يمكن إعطاؤه فى فترة فاصلة من 12 إلى 24 ساعة أو 1 إلى 14 يوم في حالة الإعطاء المتكرر. يوفر الاختراع الحالي استخدام للتركيبة الصيدلانية وفقاً للاختراع الحالي لتخفيف أو علاج الألم. يوفر الاختراع الحالي استخدام التركيبة الصيدلانية وفقاً للاختراع الحالي لتحضير عامل علاجي لتخفيف أو علاج الألم. طرق تنفيذ الاختراع ‎Lad‏ يلي؛ سيتم وصف الاختراع الحالي بالتفصيل بالإشارة إلى الأمثلة. ومع ذلك؛ فإن الأمثلة التالية هي لأغراض توضيحية فقط وليس بهدف الحد من نطاق الاختراع الحالي. مثال 1. تحضير وتحليل خواص الفيروس المرتبط بالفيروس الغدي لناتج ‎sage‏ الارتباط الجيني يتم بناء وإنتاج الفيروسات المرتبطة بالفيروس الغدي المطلوية للاختراع الحالي على أساس نظام خالى من مساعف ‎AAV‏ (أصدعانو). مثال 1.1 بناء بلازميد ‎PAAV-GADG6S‏ ‏لبناء البلازميد ‎pPAAV-GADGS‏ وفقاً لشكل 1؛ تم تضخيم منطقة المعزز ‎1CMV‏ ->ا0الم ‎(Lee, Gene Ther, 2005) rGAD65 15‏ بواسطة ‎«PCR‏ ثم تم إدخال الناتج فى ‎pGEM-T‏ ‎(Promega)‏ لبناء ‎.JpGEM-T-CMV‏ متواليات البادئ المستخدمة لتضخيم المعزز ‎CMV‏ كما ‎F-JDK‏ (المتوالية بهوية رقم: 15): ='5 ‎TTCGGCCGTCGAGGAGCTTGGCCCATTG-3'‏ ‎R-JDK 0‏ (المتوالية بهوية رقم: 16): ='5 ‎.GACGTCGACCTAGCTAGCGAATTCGGGGCCGCGGAG-3'‏
— 9 1 — الكودون ليكون ملائم للبشر على أساس ‎GADOS‏ البشري ‎(NCBI NM_000818.2)‏ الممثل بمتوالية الحمض الأميني للمتوالية بهوية رقم: 1؛ ونُشار إلى ‎Bioneer‏ لتخليق الجينات. تمت ‎dallas‏ الجين ‎hGADGS‏ المدخل فى ‎pGEM-T‏ بواسطة ‎Nhel‏ واا58 لتحضير شظية ‎DNA‏ ‏5 1.7 كيلوبايت. بعد ذلك» تم إخضاعها للريط بالشظية 3.7 ‎DNA‏ كيلويايت الناتجة بواسطة pGEM-T-CMV- ‏واا58؛ لإكمال بناء‎ Nhel ‏بواسطة‎ pGEM-T-CMV dallas . 5 ‏ثم تمت‎ «US (Invitrogen) pCl ‏باستخدام‎ PCR ‏بواسطة إجراء‎ SV40PA ‏تم تضخيم‎ ‏بها 222 زوج قاعدة. تم إخضاع‎ DNA ‏لتحضير شظية‎ Sall 4 Clal ‏معالجة الناتج بواسطة‎
0 شظية ال ‎DNA‏ للريط بشظية ‎DNA‏ 5.4 كيلويايت المحضرة بواسطة قطع ‎PGEM-T-CMV~‏ ‏5 بواسطة ‎(Sally Clal‏ لتحضير أخيراً ‎.PGEM-T-CMV-hGADG5-SV40pA‏ ‏متواليات البادئ المستخدمة لتضخيم8/م51/40 هي كما يلى: ‎F-SV40pA‏ (المتوالية بهوية رقم: 17): ='5 ‎CCATCGATCAGACATGATAAGATACATTGATGAG-3'‏
‎R-SV40pA 5‏ (المتوالية بهوية رقم: 18): ='5 ‎.GACGTCGACGCGGCCGCTACCACATTTGTAGAGGTTTTACTTG-3'‏ ‏لبناء ناقل فيروس مرتبط بالفيروس الغدي؛ تم استبدال جين مقاومة الأمبيسيلين في ‎PAAV-‏ ‎(Agilent) MCS‏ بواسطة جين مقاومة الكانامايسين . تم تضخيم جين مقاومة الكانامايسين بواسطة ‎PCR‏ باستخدام ‎pET-28 (a) (Novagen)‏ كقالب. تم إخضاع جين مقاومة
‏0 الكانامايسين 816 زوج قاعدة المضخم للريط ب ‎pGEM-T‏ لبناء ‎pGEM-T-Kanr‏ متواليات البدء المستخدمة لتضخيم جين مقاومة الكانامايسين تكون كما ‎toh‏ ‎F-Kan‏ (المتوالية بهوية رقم: 19): - 5 ‎AGGCGCCATGAGCCATATTCAACGGGAA-3'‏
— 0 2 — ‎R-Kan‏ (المتوالية بهوية رقم: 20): ='5 ‎TTCATGATTAGAAAAACTCATCGAGCATC-3'‏ ‏لإدخال جين مقاومة الكانامايسين ‘ تم إنشاء المواقع ‎EcoRV Spel‏ على التوالى بواسطة تطفير قبلي وبعدي لجين مقاومة الأمبيسلين في ‎PAAV-MCS‏ ثم تمت ‎dallas‏ الناتج بواسطة ‎Spel‏ ‎ECORV 5‏ مرة أخرى. تم إخضاع الناتج للربط بشظية ‎DNA‏ الناتجة عن ‎aki‏ -1-/681م
PAAV-MCS-Kanr <ul (ECORV 3 Nhel ‏سابق البناء بواسطة‎ Kanr ‏ثم إخضاعه للريط بشظية‎ (BamHI 5 Notl ‏المبني بواسطة‎ pAAV-MCS-Kanr ‏تمت معالجة‎
PGEM-T-CMV-hGADG65-SV40Pa ‏كيلويايت الناتجة عن طريق قطع‎ 2.7 DNA ‏ال‎ ‎pssAAV-GADGS ‏لبناء‎ (Pvul 4 Eagl dads, 0 الإدخال كاسيت التعبير الوراثي ل 6/1065 في ‎(Invitrogen) pVAXT‏ تم إنشاء الموقع ‎BamHI‏ عن طريق تطفير بعدي ل /م6611. ثم؛ تم قطع الناتج بواسطة ‎Nhel g Miul‏ لتحضير ‎.DNA Las‏ تم تضخيم مناطق المعزز ‎CMV 5 LITR‏ بواسطة ‎PCR‏ باستخدام ‎pssaAV-‏ ‏5 كقالب واستنساخها في ‎pGEM-T‏ بسهولة ‎(Promega)‏ بعد ذلك؛ تم قطع الناتج بواسطة ‎«Nhel 5 Ascl‏ والإخضاع للريط بالناقل 01/8061 المحضر سابقاً ‎PVAX1— slid‏ /1/ا0©-4ا11ا. متواليات البادئ المستخدمة لتضخيم منطقة المعزز ‎CMV LITR‏ هي كما يلي: ‎F-ITR‏ (المتوالية بهوية رقم: 21): -5 ‎ATGGCGCGCCCCTGGCCTTTTGCTGGCC-3'‏ ‎R-JDK‏ (المتوالية بهوية رقم: 16): ='5 ‎.GACGTCGACCTAGCTAGCGAATTCGGGGCCGCGGAG-3'‏ تم قطع ‎pVAX1-LITR-CMV‏ بواسطة ‎Nhel y Notl‏ مرة أخرى لتحضير شظايا ‎DNA‏ ‏قطع ‎PSSAAV-GADGS‏ بواسطة ‎«Nhel y Eagl‏ والإخضاع للريط بشظايا ال ‎DNA‏ التي تم تحضيرها سابقاً ‎.pPVAX1-LITR-CMV-hGADG65-SV40Pa slid‏
— 1 2 — تم ‎pVAX]-LITR-CMV-hGAD65-SV40pAgds‏ بواسطة ‎BamHI g Hpal‏ لتحضير شظايا ‎(DNA‏ بالإضافة إلى ذلك؛ تمت معالجة ‎ll (psA-SV40pA-RITR‏ تم تحضيرها بواسطة التضخيم من خلال ‎PCR‏ باستخدام ‎llispssaAV-GADGS‏ والاستنساخ في ‎pGEM-T‏ سهل؛ بواسطة ‎(BamHI g Hpal‏ لتحضير ‎DNA Las‏ تم ريط ‎dad‏ ال ‎DNA‏ ب ‎pVAX]-LITR-CMV-hGAD65-SV40pA-RITR 5‏ كامل (يختصر فيما بعد ب ‎PAAV="‏ th ‏هي كما‎ RITR 5 SV40pA ‏متواليات البادئ المستخدمة لتضمين المنطقة‎ .("GADGS 5'= :)17 ‏(المتوالية بهوية رقم:‎ F-SV40Pa
CCATCGATCAGACATGATAAGATACATTGATGAG-3' - :)22 ‏(المتوالية بهوية رقم:‎ R-ITR ‎ATGGATCCGCTAGTAAATACCGCATCAG-3" 10‏ تم تنفيذ الإجراء ‎Aull‏ لبناء ‎PAAV-GADGS‏ معدل. ‎(Yl‏ تم قطع الناقل بواسطة ‎Nel‏ ثم تم إدراج متوالية نيوكليوتيد عشوائية اعتباطياً بين المعزز ‎(pally CMV‏ 61065 بواسطة طريقة تسريب. متواليات النيوكليوتيد المدرجة تكون كما يلى: حشوة ‎Scramble‏ (المتوالية بهوية رقم: 29): ‎5'-GTCGACGGTATCGATAAGCTTGATATCGAATTCCTGCAGCCC-3' 5‏ الحشوة ‎scramble F‏ (المتوالية بهوية رقم: 30): -3 ‎CTAGGTCGACGGTATCGATAAGCTTGATATCGAATTCCTGCAGCCC-3'‏ ‏الحشوة ‎scramble R‏ (المتوالية بهوية رقم: 31): ‎3- 0 .CTAGGGGCTGCAGGAATTCGATATCAAGCTTATCGATACCGTCGAC-3'
— 2 2 —
بعد ذلك؛ تم تضخيم متوالية النيوكليوتيد ‎«(Schambach, Gene Ther, 2000) WPRE‏ والذي منه تمت إزالة منطقة ‎X= (pig yall‏ مما قد يوفر تأثير مكون للورم» بواسطة ‎(PCR‏ والإدراج في الجزءِ ‎All‏ من جين 61065 باستخدام إنزيمات تقييد ‎Pacl‏ و1081. في نفس الوقت؛ تمت إزالة جزءِ من ‎SVA40PA‏ لبناء ‎SV40PA‏ معدل. متواليات البادئ المستخدمة لتضخيم
‎WPRE 5‏ تكون كما يلى: ‎WPRE_Pacl_F‏ (المتوالية بهوية رقم: 25): ‎5'-GGTGGTTTAATTAAAATCAACCTCTGGATTACAAAATTTG-3'‏ ‎WPRE_modi_Hpal R‏ (المتوالية بهوية رقم: 26): ='5 ‎.GGTGGTGTTAACGACAACACCACGGAATTG-3'‏
‏10 البلازميد المعدل النهائي كان ‎hGAD65--scramble s5.5a-pVAX1-LITR-CMV‏ ‎ai) PIT- SV40pA (modi)-WPRE (modi)‏ اختصاره لاحقاً ب '-6065-/اطحرم ‎(‘modi‏ 3 ورسمه التخطيطى مبين فى شكل 1 . مثال 2-1. بناء البلازميد ‎PAAV-IL-10‏ ‏تم بناء البلازميد ‎pAAV-IL-10‏ بنفس الطريقة كما في مثال 1-1. وبالنسبة لجين ‎IL-10‏
‏5 الجرذي؛ تم تصميم الجين الممثل بواسطة متوالية النيوكليوتيد للمتوالية بهوية رقم: 8 بواسطة تحسين الكودون ليكون مناسب للجرذان على أساس ‎IL=10‏ البشري ‎(NCBI NM-012854)‏ الممثل بمتوالية الحمض الأميني للمتوالية بهوية رقم: 6؛ والمشار إليه ب ‎Bioneer‏ لتخليق الجين. تم تضخيم الجين 11-10 بواسطة إجراء ‎PCR‏ باستخدام الجين ‎IL-10‏ الجرذي الذي يتم إدخاله في ‎pGEM-T‏ بسهولة كقالب»؛ ثم تمت ‎dallas‏ النتيجة بواسطة ‎Nhel‏ واا58 لتحضير شظية
‎DNA 20‏ 0.5 كيلوبايت. بالإضافة إلى ذلك؛ تمت معالجة ‎PGEM-T-CMV‏ بواسطة ‎Nhel‏ ‏و1ل58 لتحضير شظية ‎DNA‏ 3.7 كيلوبايت. تم ربط شظيتي ال ‎DNA‏ لتحضير ‎PGEM-T~‏ ‎.CMV-rIL-10‏ متواليات البادئ المستخدمة لتضخيم 2-10 تكون كما يلى: ‎F-rIL-10‏ (المتوالية بهوية رقم: 23): ‎5'-CCGCTAGCGCCACCATGCCT-3'‏
— 3 2 — ‎R-1IL-10‏ (المتوالية بهوية رقم: 24): ='5 ‎.GACGTCGACGCCATCGATGGCTTAATTAATCAATTCTTC-3'‏ ‏بالنسبة ل ‎«SV40pA‏ تم تضخيم الجين بواسطة إجراء ‎PCR‏ باستخدام ‎pCl‏ كقالب ثم معالجته بواسطة ‎Notl‏ واا58 لتحضير شظية ‎DNA‏ 222 زوج قاعدة. بالإضافة إلى ذلك؛ تمت معالجة ‎pGEM-T-CMV-rIL-10 5‏ بواسطة ‎Clal‏ وال58 لتحضير شظية ‎DNA‏ 4.2 كيلوبايت. تم ربط شظيتى ال ‎DNA‏ لبناء ‎pGEM-T-CMV-rIL-10-SV40pA‏ متواليات البادئ المستخدمة لتضخيم /م51/40 تكون كما يلي: ‎gill) F-SV40PA‏ بهوية رقم: 17): ='5 ‎CCATCGATCAGACATGATAAGATACATTGATGAG-3'‏ ‎R-SV40pA 0‏ (المتوالية بهوية رقم: 18): ='5 ‎.GACGTCGACGCGGCCGCTACCACATTTGTAGAGGTTTTACTTG-3'‏ ‏تمت ‎pGEM-T-CMV-rIL-10-SV40pAdalias‏ بواسطة ‎Fagl‏ لتحضير ثظية ‎DNA‏ ‏6 كيلوبايت. بالإضافة إلى ذلك»؛ تمت معالجة ‎pAAV-MCS-Kanr‏ بواسطة ‎Notl‏ ‏و ‎BamHI‏ لتحضير شظايا 8/ل/0. بعد ‎cll‏ تم ربط شظيتي ال ‎DNA‏ لبناء -/01/1-للطحيوم 1-10-57/4008) (يتم اختصاره بعد ذلك ب "11-10-/81//م"). الرسم البياني التخطيطي للبلازميد ‎PAAV-IL-10‏ مبين في شكل 2. مثال 3-1 بناء البلازميد ‎PAAV-GDNF‏ ‏بالنسبة للجين ‎GDNF‏ البشري؛ تم تصميم الجين الممثل بالمتوالية بهوية رقم: 13 بواسطة تحسين الكودون ليكون مناسب للبشر على أساس ‎GDNF‏ البشري ‎(NCBI NM_199231.2)‏ الممثل 0 بمتوالية الحمض الأمينى للمتوالية بهوية رقم: 11؛ وبشار إليه ب ‎Bioneer‏ لتخليق الجين. تمت معالجة الجين المدخل إلى البلازميد 81-/651م بواسطة ‎Nhel‏ وا080 لتحضير شثظية ‎DNA‏ ‏حوالي 0.6 كيلوبايت. تمت معالجة البلازميد 8/م21-10-51/40-/01/1©-1-/061 بواسطة ‎Nhel‏ وا086 لتحضير شظية 2.8 كيلويايت والتي بها تمت إزالة الجين 21-10. تم ريط شظيتى ال ‎DNA‏ لبناء البلازميد ‎.PGEM-T-CMV-hGDNF-SV40Pa‏
— 4 2 — بعد ذلك تمت معالجة البلازميد ‎pPGEM-T-CMV-hGDNF-SV40pA‏ الكامل بواسطة ‎Eagl‏ لتحضير شظية ‎DNA‏ 1.5 كيلويايت. بالإضافة إلى ذلك»؛ تمت ‎PAAV-MCS- dallas‏ ‎Kanr‏ بواسطة ‎Notl‏ و ‎BamHI‏ لتحضير شظية ‎DNA‏ 1.8 كيلويايت. تم ربط شظيتي ال ‎DNA‏ ‏لبناء ‎pssAAV-CMV-hGDNF-SV40pA-Kanr‏ (يتم اختصاره ‎Lad‏ يلي ب ‎'PAAV=‏ ‎(GDNF 5‏ الرسم البياني التخطيطي للبلازميد ‎PAAV-GDNF‏ مبين في شكل 3.
مثال 4-1 ‎oly‏ البلازميد ‎PAAV-GDNF-IL-10‏ ‏تم إخضاع المعزز ‎CAG‏ (محسن الفيروس المضخم للخلايا؛ معزز ‎(SHB‏ للدجاج؛ وإشارة 8- جلوبين بولي ‎A‏ للأرانب) لتضخيم ‎PCR‏ باستخدام ‎PAXCAWLL2‏ الموجود في مجموعة التعبير الوراثي الثنائية للفيروس الغدي ‎(Takara)‏ ومعالجته بواسطة ‎Xbal g Apal‏ لتحسين التعبير
0 الوراثي؛ وبالتالي إزالة حوالي 9680 من منطقة ]-أكتين للدجاج في المعزز ‎CAG‏ لإنتاج معزز ‎CAG‏ قصير ‎Gene Ther, 2014) (sCAG)‏ ,©8006"). وبالنسبة للجين ‎IL-10‏ البشري؛ تم تصميم الجين المشفر للمتوالية بهوية رقم: 14 بواسطة تحسين كودون الجين المشفر للمتوالية بهوية رقم: 9 ليكون مناسب للبشر؛ وبشار إليه ب ‎Bioneer‏ لتخليق الجينات. ثم؛ تم الحصول على شظية ‎DNA‏ لبولي ‎A‏ هرمون النمو البقري (0611) بواسطة تضخيم ‎PCR‏ تم بناء
‎pVAX] [sCAG-hIL-10-bGHpA 5‏ باستخدام 8061//ام ‎(Invitrogen)‏ ليحتوي على المعزز وبولي ‎A‏ وجينات ‎I-10‏ بشرية. ‎«od‏ تم تحضير ‎pVAXT/CMV-hGDNF-SV40Pa‏ بنفس الطريقة كما في مثال 1-1 باستخدام الجين ‎GDNF‏ البشري الخاص بمثال 3-1. بعد ذلك؛ تم تضخيم كاسيت الجين ‎SV40pA-hGDNF-CMV‏ بواسطة إجراء ‎PCR‏ باستخدام ‎PVAX1/CMV-hGDNF-‏
‏0 57/4008 كقالب؛ وتم تحضير شظية ‎DNA‏ 1.5 كيلويايت. متواليات البادئ المستخدمة لتضخيم كاسيت الجين تكون كما يلي: ‎SV40-CMV-sCAG-bGHpA-Infu-F‏ (المتوالية بهوية رقم: 27( ‎5'-CCTGCGGCCGGTCGACTACCACATTTGTAGAGGTTTTACTTGC-3'‏ ‎SV40-CMV-sCAG-bGHpA-Infu-R‏ (المتوالية بهوية رقم: 1(28
— 2 5 — 5'-AATAATCAATGTCGACTCGAGGAGCTTGGCCCATT-3'
DNA di ‏لتحضير‎ Sall ‏بواسطة‎ VAX [SCAG-hIL-10-bGHPA dallas ‏ثم»؛ تمت‎
DNA ‏كيلوبايت الموصوفة سابقاً في شظية ال‎ 1.5 DNA ‏حوالي 3.9 كيلوبايت» وتم إدراج شظية‎ ‏لبناء‎ (Clontech) In-Fusion HD Cloning Kit ‏كيلويايت باستخدام‎ 9 ‎pVAX1/SV40pA-hGDNF-CMV-sCAG-hIL-10-bGHpA 5‏ (يتم اختصاره فيما بعد ب ‎.('oAAV-GDNF-IL-10"‏ البلازميد ‎PAAV-GDNF-IL-10‏ مبين تخطيطياً فى شكل 4. مثال تجريبى 1. التأكيد على التعبير الوراثى للبلازميدات ‎(PAAV-IL-10 pAAV-GADGES5‏ ‎pAAV-GDNF-IL-10 y pAAV-GDNF‏ البلازميدات ‎pAAV-GDNF-IL- 3 pAAV-GDNF (pAAV-IL-10 pAAV-GADGS‏ ‏10 10 التي تم تحضيرها في الأمثلة 1-1 إلى 4-1 تم نقلها على التوالي إلى خلايا 2931 لسلالة خلايا كلى جنينية بشرية باستخدام ‎jetPRIME‏ (15ا7/0ا00). تمت زراعة الخلايا التي تم نقل المادة الوراثية الفيروسية إليها فى جهاز تحضين 37 درجة مئوية لمدة 48 ساعة. بعد ذلك؛ تم حصاد وسط مزرعة الخلية أو الخلايا المزروعة. تم إذابة الخلايا بواسطة ‎cule‏ وتمت معالجة العينات المحضرة بكل من الأجسام المضادة ل 680065 ‎IL-10 «(Merck Millipore)‏ ‎(Santa Cruz) 5‏ و ‎(R&D systems) GDNF‏ وخضعت للطخة وسترن. ‏على وجه التحديد؛ فى حالة ‎(pAAV-GADGS‏ تمت معالجة ‎WIA‏ 2931 لسلالة خلايا الكلى الجنينية البشرية بواسطة 2 ميكروجم من بلازميد ‎PAAV-GADGS‏ وتم زرعها لمدة 48 ساعة. بعد ذلك؛ تمت إذابة الخلايا المزروعة وتم التأكيد على التعبير الوراثقيى 1 681065 في الخلايا من خلال لطخة وسترن . ‏0 فى ‎dls‏ البلازميدات ‎(pAAV-GDNF 5 pAAV-IL-10‏ تمت معالجة ‎WIA‏ 2931 لسلالة خلايا الكلى الجنينية البشرية بواسطة 1 ميكروجم من بلازميد ‎pAAV-IL=10‏ أى ‎PAAV—‏ ‎«GDNF‏ وتم زرعها لمدة 48 ساعة. بعد ذلك؛ تم حصاد وسط المزرعة والتأكيد على التعبير الوراثى ل 10-اا أو ‎GDNF‏ فى الوسط من خلال لطخة وسترن.
— 6 2 — فى حالة البلازميد ‎(pAAV-GDNF-IL-10‏ تمت معالجة خلايا 2931 لسلالة خلايا الكلى الجنينية البشرية بواسطة 1 ميكروجم من بلازميد ‎PAAV-GDNF-IL-10‏ وتم زرعها لمدة 48 ساعة. بعد ذلك؛ تمت إذابة الخلايا المزروعة؛ وتم التأكيد على التعبير ‎hs‏ ل ‎IL-10‏ ‏و ‎GDNF‏ داخل الخلايا من خلال لطخة وسترن. ونتيجة لذلك؛ تم التأكيد على أن البلازميد ‎(pAAV-IL-10 pAAV-GAD6S‏ -/أاطحمم ‎GDNF‏ أو ‎pPAAV-GDNF-IL-10‏ الذي تم نقل المادة الوراثية الفيروسية إليه تم إجراء تعبير وراثي لها (أشكال 5 و6). مثال 2 . تحضير الفيروس المرتبط بالفيروس الغدي لناتج عودة الارتباط الجيني تم إنتاج فيروس ‎AAV=IL=10‏ المستخدم في التجرية وتنقيته بواسطة لب ناقل ‎JUNC‏ طريقة 0 الإنتاج تكون علي النحو التالي. تم نقل المادة الوراثية الفيروسية إلى ‎pHelper pVax—rlL-10‏ و0405 في خلايا 2931 لسلالة خلايا كلى جنينية بشرية. بعد ذلك؛ تم إخضاع الناتج للتنقية إلى كروماتوجرافيا العمود لتأمين فيروس 0/01/5-11-10. تم قياس العيار للفيروس الناتج باستخدام ‎QPCR‏ ‏تم إنتاج الفيروسات ‎AAV-GADGS‏ و ‎AAV-GDNF‏ وتنقيتهم بواسطة ‎\KRerogen‏ طريقة 5 الإنتاج تكون علي النحو التالي. تم نقل المادة الوراثية الفيروسية إلى الجينات المحورة-/لأهم (البلازميدات ‎(PAAV-GDNF 3 pAAV-GADGS‏ على التوالي في ‎Wa‏ 2931 لسلالة خلايا كلى جنينية بشرية باستخدام طريقة فوسفات الكالسيوم بالإضافة إلى ‎.pRC 5 pHelper‏ في حالة 5 .تم استخدام 01405 المدخل مع الجين القفيص من النمط المصلي 5. في ‎As‏ ‎«GDNF‏ تم استخدام 0401 المدخل مع الجين القفيص من ‎AAV‏ النمط المصلي 1. تمت 0 ززاعة الخلايا التي تم نقل المادة الوراثية الفيروسية إليها في جهاز تحضين 37 درجة مئوية وتم حصاد الخلايا بعد 48 ساعة. بعد ذلك؛ تم عزل وتنقية الفرق التي تحتوى علي ‎lg pill‏ فقط من خلال طريقة الطرد المركزى فائقة السرعة وفقاً لتدرج تركيز السيزيوم؛ لتأمين الفيروسات 5-6/8065/اقم ر-1/اظ ‎.GDNF‏ تم قياس العيارات للفيروسات الناتجة باستخدام ‎QPCR‏
تم إنتاج الفيروس ‎AAV-GDNF=IL=10‏ وتم نتقيته بواسطة ‎.Cdmogen‏ طريقة الإنتاج تكون علي النحو التالي. تم نقل المادة الوراثية الفيروسية إلى الجينات المحورة ‎AAV‏ (البلازميد ‎PAAV=‏ ‎(GDNF-IL-10‏ في خلايا 2931 لسلالة خلايا ‎AS‏ جنينية بشرية باستخدام طريقة فوسفات الكالسيوم بالإضافة إلي ‎pHelper‏ و01405. تمت زراعة الخلايا التي تم نقل المادة الوراثية الفيروسية إليها في جهاز تحضين 37 درجة مئوية وتم حصاد الخلايا بعد 48 ساعة.
بعد ذلك؛ تم عزل وتنقية الفرق التي تحتوى علي الفيروسات فقط من خلال الطرد ‎Gal‏ فائق السرعة وفقاً لتدرج تركيز السيزيوم؛ لتأمين فيروس ‎./01/5-60117-١-10‏ تم قياس العيار للفيروس الناتج باستخدام ‎(GPCR‏ ‏تم إنتاج ‎AAV-GAD6S-modi ug yu‏ وتم تنقيته بواسطة ‎.Cdmogen‏ طريقة الإنتاج تكون
0 علي ‎JW gail)‏ تم نقل المادة الوراثية الفيروسية إلى الجينات المحورة ‎AAV‏ (البلازميد ‎PAAV=‏ ‎(hGAD65-modi‏ إلى خلايا 2931 لسلالة خلايا كلى جنينية بشرية باستخدام طريقة فوسفات الكالسيوم بالإضافة إلي 0116/06 و40ام. تمت زراعة الخلايا التي تم نقل المادة الوراثية الفيروسية إليها في جهاز تحضين 37 درجة مئوية وتم حصاد الخلايا بعد 48 ساعة. بعد ذلك؛ تم عزل وتنقية الفرق التي تحتوى علي الفيروسات فقط بواسطة الطرد المركزى فائق
5 السرعة وفقاً لتدرج تركيز السيزيوم لتأمين فيروس أ1/5-6/065-0100ل/. تم قياس العيار للفيروس الناتج باستخدام ‎(GPCR‏ ‏مثال تجريبي 2. تحليل خواص الفيروس المرتبط بالفيروس الغدي لناتج عودة الارتباط الجيني لفحص التعبير الوراثي لبروتين الفيروس المرتبط بالفيروس الغدي لناتج ‎sage‏ الارتباط الجيني الذي تم توصيله إلى ‎(DAN‏ تمت معالجة خلايا 2931 أو ‎Hela‏ لسلالة خلايا الكلى الجنينية البشرية
0 بواسطة الفيروس ‎AAV-IL-10 AAV-GAD65-modi AAV-GADGS‏ أى ‎AAV-‏ ‎GDNF‏ الناتج سابقاً؛ وتم فحص التعبير ‎sll‏ للبروتين بواسطة لطخة وسترن. وعلى وجه التحديد تم بذر الخلايا 2931 أو ‎Hela‏ بمعدل 5 ‎X‏ 510 خلية/عين في طبق 6 عيون. وفي اليوم التالي؛ تمت معالجة الخلايا على التوالي بواسطة 3 أنواع من الفيروسات بمعدل 10,000 جينوم فيروس/عين؛ ثم زراعتها في جهاز تحضين عند 37 درجة مئوية. بعد 48 ساعة؛ تم حصاد
— 8 2 — الخلايا وإذابتها بواسطة مذيب وتم تركيز وسط المزرعة باستخدام الأميكون ‎.(Merck Millipore)‏ ثم؛ تمت معالجة العينات التي تم تحضيرها على التوالي بواسطة الأجسام المضادة إلى 68065 ‎(Santa Cruz) IL-10 «(Cell signaling)‏ و ‎«(R&D systems) GDNF‏ واخضاعها للطخة وسترن . وتتيجة لذلك؛ تم التأكيد على أن كل بروتين مستهدف تم التعبير ‎hel‏ عنه في حلالة الخلية
لسلالة ‎LDA‏ 2931 لكلى جنينية بشرية أو سلالة خلايا ‎Hela‏ تمت معالجته بواسطة الفيروس ‎AAV-IL-10 (AAV-GAD65modi (AAV-GADG6S‏ أى ‎AAV-GDNF‏ (شكل 7). ‎«lla‏ ‏تم التأكيد على عدم وجود أي خلل في بنى وخواص الفيروسات المرتبطة بالفيروس الغدي لناتج عودة ‎J‏ لارتباط الجينى المستخدمة فى التجرية.
0 كذلك؛ للتأكيد على أن ‎GABA‏ يتم إنتاجه بواسطة الفيروس ‎AAV-GADGS‏ أى ‎AAV=‏ ‎«GADGS-modi‏ تم حصاد وسط المزرعة للخلايا المعالجة بواسطة الفيروس ‎AAV-GADGS‏ ‏أو ‎AAV-GAD65-modi‏ وإخضاعه لتحليل ‎(LDN) GABA ELISA‏ لكل مجموعة تجريبية؛ تم تحضير عينتين متطابقتين بشكل منفصل لإجراء ‎cabal)‏ ويوضح الرسم البياني بالأعمدة قيمة كل عينة.
5 ونتيجة لذلك؛ تم التأكيد على أن ‎GABA‏ تم إفرازه لوسط المزرعة بواسطة 6065 المدخل إلى الخلايا بواسطة الفيروس ‎AAV-GADGS‏ أى ‎AAV-GADG5-modi‏ (شكل 8). مثال تجريبي 3. مقارنة الفاعليات المسكنة بين الإعطاء الفردي تلفيروس 68065 -لاطحطل ‎AAV-IL-10‏ أو ‎AAV-GDNF‏ والإعطاء المشترك ‎AAV- 3 AAV-GADGS lug pall‏ ‎AAV-GDNF 5 AAV-IL-10 4 «GDNF‏
‎Ja 20‏ تجرببي 1-3 ‎٠.‏ تحضير عينة الإعطاء تم استخدام الفيروسات التي تم تحضيرها في مثال 2 للاختبار. قبل 30 دقيقة من تجربة الإعطاء الحيواني» تمت إذابة الكواشف المخزنة عند -50 درجة مثوية عند درجة حرارة الغرفة وتحضيرها عن طريق الخلط بواسطة دوامة. تم تخفيف الفيروسات ‎AAV-IL-10 AAV-GADOS‏ ‎(AAV-GDNF‏ و60 -/اه// في ‎PBS‏ للحصول على العيارات المبينة في جدول 1. تم
— 9 2 — إعطاء الفيروس ‎AAV=GFP‏ بنفس الكمية مثل الفيروسات الأخرى المرتبطة بالفيروس الغدي لناتج عودة الارتباط الجيني. ال ‎GEP‏ هو بروتين ليس له فاعلية مسكنة. تم خلط الفيروسات المطلوية وفقاً للمحتويات المشار إليها في جدول 1؛ والإعطاء بكمية 9.0 ‎5/vg 810 x‏ ميكرولتر لكل حيوان (9: جينوم فيروس). [جدول 1] العينات ‎AAV- -‏ ‎AAV-GDNF | AAV-IL-10 | AAV-GADG65‏ ‎GFP‏ ‎x 9.0‏ 810 جينوم ‎AAV-GFP‏ ‏فيروس/5 ‏ميكرولتر ‎x 9.0‏ 810 ‎AAV-‏ ‏جينوم فيروس/5 165 ميكرولتر ‎x 9.0‏ 810 ‎AAV-IL-‏ ‏جينوم فيروس/5
ميكرولتر ‎x 0‏ 810 ‎AAV-‏ ‏جينوم فيروس/5 ‎GDNF‏ ‏ميكرولتر
— 3 0 —
AAV-
GADG65 810 x 4.5 810 x 4.5 + جينوم فيروس/5 جينوم فيروس/5 ‎AAV—‏ ميكرولتر ميكرولتر ‎GDNF ‎AAV-IL- ‎10 ‎810 x 4.5 810 x 4.5 ‏+ جينوم فيروس/5 | جينوم فيروس/5 ‎AAV—‏ ميكرولتر ميكرولتر ‎GDNF ‏الاعتلال العصبي وإعطاء العينات‎ all ‏مثال تجريبي 2-3. بناء جرذان مستحثة‎ ‏تم إخضاع ذكور جرذان-لا5 وزنها 150 إلى 200 جم إلى تخدير بالاستنشاق. ثم تم شق الجزء‎ die ‏العلوي من بطن الساق وتم ربط طرفي العصب الشظوي الأصلي والعصب الظنبوبي وتم عمل‎ ‏الحزمتين‎ ee ‏عند الفاصلة من 0.5 إلى 1 سم بواسطة خياطة 0-7 تم قطع المناطق بين‎ ‏5 العصبيتين بواسطة مقص وتم خياطة موقع الشق. بعد ذلك» تم تعافي الجرذان لإيقاظها من التخدير واعادتها إلى القفص. بعد أسبوعين» تم إجراء اختبار خطوط ‎von Frey‏ لفحص حث الألم؛ ثم تم إعطاء العينات ‎All‏ تم تحضيرها في مثال 1-2 على التوالي ( ‎Decosterd, Pain,‏ 2000(. تم إعطاء العينات بواسطة طريقة الحقن فوق الجافية في موقع مجاور للعقدة العصبية الجذرية 0 الظهرية ‎(DRG)‏ تم إخضاع الجرذ المستحث بالألم للتخدير عن طريق الاستنشاق» وتم كشف على جانب المساحة المكشوفة؛ تم جعل العملية العرضية 4اء إحدى بروز العمود الفقري؛ مرئية.
— 3 1 —
تم تثبيت الجرذ على جنبه بحيث يكون جانبه الجانبي مرئي من أعلى وكان الثقب بين الفقرات 4ا
مرئي.
بعد ذلك» تم إدراج إبرة متصلة بالقسطرة في العينة التي تم تحضيريهاء وتم توصيل محقنة هاملتون
بالطرف المعاكس من القسطرة وتم سحبها إلى خط العلامة 5 ميكرولتر لحقن العينة في القسطرة. تمت إزالة محقنة هاملتون من القسطرة ثم تم تأمين القسطرة عن طريق الإمساك بالنقطة 1 سم
بعيداً عن طرف الإبرة باستخدام ‎Halsted-Mosquito‏ ثم؛ أثناء إمساك وسحب العمود الفقري
4ا لأعلى بواسطة ‎(ladle‏ تم أخذ طرف الإبرة المثبتة بواسطة ‎Halstead Mosquito‏ حول
الثقبة الفقرية ‎La‏ باليد الأخرى. تم إدراج طرف الإبرة في المنطقة المنحنية داخل الثقبة الفقرية التي
تم تأمين مساحتها. ثم؛ تم تحرير الإبرة المحتجزة.
0 بعد التأكد من تثبيت الإبرة؛ تم توصيل محقنة 1 مل بالقسطرة المتصلة بالجانب المعاكس من الإبرة. تم ضغط مكبس المحقنة بلطف؛ تم حقن العينة ببطء حول العقدة الجذرية الظهرية للجرذ. بعد ‎cell)‏ تم خياطة موقع الشق. بعد 4 أسابيع من إعطاء العينة؛ تم ملاحظة استجابات الألم باستخدام اختبار الخيوط ‎von Frey‏ مثال تجريبي 3-3 ملاحظة الألم باستخدام اختبار خيوط ‎von Frey‏
5 .تم ملاحظة الألم باستخدام اختبار خيوط ‎von Frey‏ الطريقة بغرض حساب القيمة الحدية وفقاً لنمط محدد سابقاً لاستجابة الألم بإجمالي ثمانية خيوط 0.4؛ 0.6؛ 1< 2؛ 4؛ 6؛ 8 و15 جم. تم بحث مناطق توليد الألم عن ‎Gob‏ تغيير الموضع من جزءٍ بدء أصبع القدم الخارجي إلى كعب الأخمص حيث تم توليد الألم. حيث تم التحميل على الأخمص فجأة انكمشوا أو لعقوا الأخمس بأفواههم عند تولد الألم؛ يمكن إيجاد مناطق توليد الألم. إذا كان هناك ردود أفعال ثلاثة مرات
0 عنما تم وخز المنطقة المحيطة خمس مرات بواسطة خيوط كل خطوة؛ تم اعتبارها استجابة للألم. وتم إجراء الاختبار عن طريق استبدال الخيوط بتلك التى للخطوة التالية. بهذه الطريقة؛ تم تسجيل نمط كل خطوة. تم تسجيل أنماط الألم على أساس جدول الأنماط الذي تم وضعه بواسطة ‎Chaplan‏ .5.4؛ وتم حساب القيم الحدية باستخدام أنماط الألم )1994 ‎.(Chaplan, J Neurosci Methods,‏ أما
— 2 3 — بالنسبة للتحليل السلوكي؛ تم تعمية مجموعات الكائنات في وقت محدد وقام 3 باحثين على الأقل بالملاحظة؛ وتمت معالجة نتائج الأنماط المسجلة احصائياً؛ لتحليل نتائج الألم. ونتيجة ‎dag)‏ تبين أن التأثير المخفف للألم كان ‎Jel‏ عندما تم الجمع بين الفيروسات -/اهم ‎AAV-IL-10 5 GAD65‏ و ‎AAV-GDNF‏ وإعطاؤهم بشكل مشترك بالمقارنة بالإعطاء الفردي ‎AAV-GDNF i AAV-IL-10 AAV-GADGS [sgl 5‏ (شكل 9). مثال تجريبي 4. مقارنة الفاعليات المسكنة بين الإعطاء الفردي للفيروس ‎AAV-GADGS‏ ‎AAV-IL-10‏ أو ‎AAV-GDNF‏ والإعطاء المشترك للفيروسات ‎AAV-IL- (AAV-GADGS‏ ‎AAV-GDNF ; 0‏ تم استخدام الفيروسات التي تم تحضيرها في مثال 2 للاختبار. قبل 30 دقيقة من تجرية الإعطاء 0 الحيواني» تمت إذابة الكواشف المستخدمة عند -80 درجة ‎dogs‏ عند درجة حرارة الغرفة وتحضيرها عن طريق الخلط بواسطة دوامة. تم تخفيف الفيروسات ‎AAV-IL- JAAV-GAD6S‏ ‎AAV-GFP 5 (AAV-GDNF (10‏ في ‎PBS‏ للحصول على العيارات المبينة فى جدول 2. تم إعطاء الفيروس ‎AAV=GFP‏ بنفس الكمية مثل الفيروسات الأخرى المرتبطة بالفيروس الغدي لناتج عودة الارتباط الجيني. ‎GEP‏ هو بروتين والذي لم يتم الإبلاغ عن فاعلية مسكنة له. تم خلط الفيروسات وفقاً للمحتويات المبينة في جدول 2؛ والإعطاء بكمية 9.0 ‎x‏ 810 جينوم فيروس/5 ميكرولتر لكل حيوان. [جدول 2] أنواع ومحتويات الفيروس العينار” ‎AAV- AAV- =‏ ‎AAV-GFP AAV-IL-10‏ ‎GDNF 0985‏
— 3 3 — ‎x 9.0‏ 810 ‎pou AAV-GFP‏ فيروس/3 ميكرولتر ‎x 9.0 AAV-‏ 810 ‎GADGS‏ جينوم فيروس/5 ميكرولتر ‎x 9.0‏ 810 ‎pou AAV-IL-10‏ فيروس/3 ميكرولتر ‎x 9.0‏ 810 ‎AAV-GDNF‏ جينوم فيروس/5 ميكرولتر ‎AAV-‏ ‏6165 ‎x 3.0 810 x 3.0 810 x 3.0 +‏ 810 جينوم فيروس/5 | جينوم فيروس/5 | جينوم فيروس/5 ‎AAV-IL-10‏ ‏ميكرولتر ميكرولتر ميكرولتر + ‎AAV-GDNF‏ ‏وفقاً لنموذج الألم الحيواني المنتج بواسطة نفس الطريقة كما في المثال التجريبي 2-3؛ تم إعطاء العينات التي تم تحضيرها وفقاً لمحتويات الفيروس المبينة في جدول 2. بعد ذلك»؛ تم إجراء اختبار خيوط ‎von Frey‏ بطريقة مماثلة للمثال التجريبي 3-3 لملاحظة استجابات الألم.
— 4 3 — ونتيجة لذلك» تبين أن التأثير المخفف للألم كان أعلى عندما تم إعطاء جميع الفيروسات ‎AAV=‏ ‎AAV-GDNF 5 AAV-IL-10 «GADG5‏ بشكل مشترك بالمقارنة بالإعطاء الفردي للفيروسات 5- لاحل ‎AAV-IL-10‏ أى ‎AAV-GDNF‏ (شكل 10). مثال تجريبى 5. مقارنة الفاعليات المسكنة بين الإعطاء المشترك ‎AAV-GADGS lug pill‏ ولا60-لاهض أر ‎AAV-GDNF 5 AAV-IL-10‏ والإعطاء المشترك للفيروسات -/اهم 665 ؛ ‎AAV-GDNF ; (AAV-IL-10‏ تم استخدام فيروسات مرتبطة بالفيروس الغدي التي تم تحضيرها في مثال 2 للاختبار. قبل 30 دقيقة من تجرية الإعطاء الحيواني» تمت إذابة الكواشف المستخدمة عند -80 درجة ‎dogs‏ عند درجة حرارة الغرفة وتحضيرها عن طريق الخلط بواسطة دوامة. تم تخفيف الفيروسات -/لقظم ‎AAV-GFP 5 (AAV-GDNF (AAV-IL-10 «GADGS 0‏ في ‎PBS‏ للحصول على العيارات المبينة في جدول 3. تم إعطاء ‎AAV-GFP‏ بنفس الكمية ‎Jie‏ الفيروسات المرتبطة بالفيروس الغدي لناتج عودة الارتباط الجيني. ‎GEP‏ هو بروتين والذي ليس له مفعول مسكن. تم خلط الفيروسات المطلوبة ‎ag‏ للمحتويات المبينة في جدول 3؛ والإعطاء بكمية 9.0 ‎X‏ 810 جينوم فيروس/5 ميكرولتر لكل حيوان. 5 (جدول 3] أنواع ومحتويات الفيروس العينات ‎AAV- AAV- =‏ ‎AAV-GDNF | AAV-IL-10‏ ‎GFP 65‏ ‎x 0‏ 810 جينوم ‎AAV-GFP‏ ‏فيروس/5 ‏ميكرولتر
— 5 3 — ‎AAV-‏ ‎x 4.5 810 x 4.5 GADGS‏ 810 جينوم فيروس/5 جينوم فيروس/5 + ميكرولتر ميكرولتر ‎AAV-GDNF‏ ‎AAV-IL-10‏ ‎x 4.5 810 x 4.5‏ 810 + جينوم فيروس/5 | جينوم فيروس/5 ‎AAV-GDNF‏ ميكرولتر ميكرولتر ‎AAV-‏ ‎GADG65‏ ‎x 3.0 810 x 3.0 810 x 3.0 +‏ 810 جينوم فيروس/5 | جينوم فيروس/5 | جينوم فيروس/5 ‎AAV-IL-10‏ ‏ميكرولتر ميكرولتر ميكرولتر + ‎AAV-GDNF‏ ‏وفقاً لنموذج الألم الحيواني المنتج بواسطة نفس الطريقة كما في المثال التجريبي 2-3؛ تم إعطاء العينات التى تم تحضيرها وفقاً لمحتويات الفيروس المبينة في جدول 3. بعد ذلك؛ تم إجراء اختبار خيوط ‎von Frey‏ بطريقة مماثلة للمثال ‎pail)‏ 3-3. لملاحظة استجابات الألم. ونتيجة ‎cll‏ تبين أن التأثير المخفف للألم كان أعلى عندما تم إعطاء جميع الفيروسات -/أاظ ‎AAV-GDNF 5 AAV-IL-10 «GAD65 5‏ بشكل مشترك بالمقارنة بالإعطاء المشترك للفيروسات ‎<AAV-GDNF 5 AAV-GADG65‏ أى ‎AAV-IL-10‏ و ‎AAV-GDNF‏ (شكل 11).
— 6 3 — مثال تجريبي 6. مقارنة الفاعليات المسكنة بين الإعطاء الفردي للبلازميد ‎PAAV-GADGS‏ ‎(pAAV-IL-10‏ أو ‎pAAV-GDNF‏ والإعطاء المشترك للبلازميدات ‎PAAV-GADG5‏ و ‎.PAAV-GDNF , pAAV-IL-10 4 pAAV-GDNF‏ مثال تجرببي 1-6. تحضير عينات الإعطاء تم استخدام البلازميدات التي تم تحضيرها في مثال 1 للاختبار. قبل 30 دقيقة من تجرية الإعطاء الحيواني» تمت إذابة الكواشف المخزنة عند -50 درجة مثوية عند درجة حرارة الغرفة وتحضيرها عن طريق الخلط بواسطة دوامة. تم تخفيف البلازميدات ‎PAAV-IL-10 PAAV-GADGES‏ ‎pVAX] 5 pAAV-GDNF‏ في المحلول المنظم ,7055-5077 للحصول على التركيزات المبينة في جدول 4. تم إعطاء البلازميد ‎PVAXT‏ بنفس الكمية مثل البلازميدات الأخرى. لم يتم الإبلاغ 0 عن البلازميد ‎pVAXT‏ أن له فاعلية مسكنة. تم خلط البلازميدات المطلوبة وفقاً للمحتويات المبينة في جدول 4؛ والإعطاء بكمية 30 ميكروجم/50 ميكرولتر لكل حيوان. [جدول 4] أنواع ومحتويات البلازما العينات ‎PAAV- PAAV- =‏ ‎pVAX1 pAAV-IL-10‏ ‎GDNF GADG65‏ ميكروح ‎pVAX1‏ = /50 ميكرولتر ‎pAAV-‏ 30 ميكروجم ‎GADG65‏ /50 ميكرولتر 0 ميكروجم ‎pAAV-IL-10‏ ‏/50 ميكرولتر
— 7 3 — ‎PAAV-‏ 0 ميكروجم ‎GDNF‏ /50 ميكرولتر ‎pAAV—‏ ‎GADG65‏ ‏15 ميكروجم 15 ميكروجم + 50 ميكرولتر 50 ميكرولتر ‎pAAV—‏ ‎GDNF‏ ‎pAAV-IL-10‏ ‏+ 15 ميكروجم 15 ميكروجم ‎i 50 i 50‏ -/لترثرم /50 ميكرولتر ‎50/١‏ ميكرولتر ‎GDNF‏ ‏مثال تجريبي 2-6. بناء نموذج ألم اعتلال الأعصاب الحيواني وإعطاء العينة تم إخضاع 150 إلى 200 جم ذكور جرذان-5]0 للتخدير بالاستنشاق. ثم تم شق الجزء العلوي من بطن الساق وتم ربط طرفي العصب الشظوي الأصلي والعصب الظنبوبي وتم عمل عقد عند الفاصلة من 0.5 إلى 1 سم بواسطة خياطة 0-7. تم قطع المناطق بين عقد الحزمتين العصبيتين بواسطة مقص وتم خياطة موقع الشق. بعد ذلك»؛ تم تعافي الجرذان لإيقاظها من التخدير وإعادتها إلى القفص. بعد أسبوعين؛ تم إجراء اختبار خطوط ‎von Frey‏ لفحص حث الألم؛ ثم تم إعطاء العينات التى تم تحضيرها فى مثال 1-6 )2000 ‎(Decosterd, Pain,‏ . تم إعطاء العينات بواسطة طريقة الحقن داخل القراب. تم إخضاع الجرذ مستحث الألم لتخدير عن طريق الاستنشاق؛ وتم كشف العملية الدقيقة بواسطة شق خطى فى ظهر الجرذ في منطقة العمود 0 الفقري القطني 5ا. تم وضع أنبوب سعة 50 مل تحت الجرذان لتوسيع المساحة بين 5ا و6ا؛ وتم إدراج إبرة بمقاس 7 ‎x‏ 13 مم ‎٠.‏ بعد ذلك؛ تم توصيل محقنة سعة 1 مل مملوءة بواسطة
— 8 3 — 50 ميكرولتر من العينة بالإبرة. تم حقن العينة ببطء عن طريق الضغط ‎SUB‏ على مكبس المحقنة. بعد ذلك؛ تمت خياطة الشق وتم إنهاء هذه الخطوة ‎٠‏ بعد يوم واحد من إعطاء المادة؛ تمت ملاحظة استجابات الألم باستخدام اختبار الخيوط ‎von Frey‏ مثال تجريبيى 3-6 ملاحظة الألم باستخدام ‎lad)‏ خيوط ‎von Frey‏ تم إجراء اختبار خيوط ‎von Frey‏ بنفس الطريقة كما في المثال ‎wail)‏ 3-3. ونتيجة لهذاء؛ تم إيجاد أن التأثير المخفف للألم كان أعلى عندما تم الإعطاء المشترك للبلازميدات ‎PAAV-‏ ‎pAAV-GDNF 5 pAAV-IL-10 si (pAAV-GDNF 3 GADG5‏ بالمقارنة بالإعطاء الفردي للبلازميد ‎pAAV-IL-10 (pAAV-GADGE5‏ أى ‎pAAV-GDNF‏ (شكل 12(. مثال تجريبي 7. مقارنة الفاعليات المسكنة بين الإعطاء الفردي لبلازميد ‎(PAAV-GADGS‏ ‏0 10-اا-/اههم. أو ‎pAAV-GDNF‏ والإعطاء المشترك للبلازميدات ‎(PAAV-GADGES‏ ‎.PAAV-GDNF , pAAV-IL-10‏ تم استخدام البلازميدات المحضرة في مثال 1 للاختبار قبل تجربة الإعطاء الحيواني؛ تمت إذابة الكواشف المخزنة عند -80 درجة مثوية عند درجة حرارة الغرفة وتم تحضيرها عن طريق الخلط بواسطة دوامة. تم تخفيف البلازميدات 68065-/اطم ‎«PAAV-GDNF (pAAV-IL-10‏ 5 و621ل/لام في المحلول المنظم ,15-5011 للحصول على التركيزات المبينة في جدول 5. تم إعطاء البلازميد ‎PVAXT‏ بنفس الكمية مثل البلازميدات الأخرى. لم يتم الإبلاغ عن أن البلازميد 1 له فاعلية مسكنة. تم خلط البلازميدات المطلوبة وفقاً للمحتويات المبينة في جدول 5؛ وإعطاؤها بكمية 30 ميكروجم/50 ميكرولتر لكل حيوان. [جدول 5] أنواع ومحتويات البلازما العيناء” ‎PAAV- | pAAV-IL- PAAV- =‏ ‎pVAX1‏ ‏5م08 10 ‎GDNF‏
— 9 3 —
‎pAAV-‏ ‏ميكروجم/50 ‎VAX1‏ وجم/ ميكرولتر 30 ‎pAAV-‏ ‏ميكروجم/50 ‎GADG65‏ ‏ميكرولتر ‏30 ‎PAAV-IL-‏ ‏ميكروجم/50 ‏10 ‏ميكرولتر ‏30 ‎pAAV-‏ ‏ميكروجم/50 ‎GDNF‏ وجم/ ميكرولتر ‎pAAV-‏ ‎GADG65‏ ‏+ ‏10 10 10 ‎PAAV-IL-‏ ‏10 ميكروجم/50 . |ميكروجم/50 | ميكروجم/50 ميكرولتر ميكرولتر ميكرولتر + ‎pAAV-‏ ‎GDNF‏
— 0 4 — وفقاً لنموذج الألم الحيواني المنتج بواسطة نفس الطريقة كما في المثال التجريبي 2-6 تم إعطاء العينات التي تم تحضيرها وفقاً لمحتويات الفيروس المبينة في جدول 5. بعد ذلك؛ تم إجراء اختبار خيوط ‎von Frey‏ بطريقة مماثلة للمثال ‎pail)‏ 3-3. لملاحظة استجابات الألم. ونتيجة لذلك؛ تبين أن التأثير المخفف للألم كان أعلى عندما تم إعطاء جميع البلازميدات ‎pAAVS-GDNF 5 (pAAVS-IL-10 pAAV-GAD6S 5‏ على نحو مشترك بالمقارنة بالإعطاء الفردي للبلازميد 68065-/اطذم ‎pAAV-IL-10‏ أى ‎pAAV-GDNF‏ (شكل 13( مثال تجريبي 8. مقارنة الفاعليات المسكنة بين الإعطاء المشترك للبلازميدات ‎PAAV-GADGS‏ ‎(pAAV-GDNF 4‏ أو البلازميدات ‎pAAV-IL-10‏ ىو ‎pPAAV-GDNF‏ والإعطاء المشترك 0 لبلازميدات ‎PAAV-GDNF 5 pAAV-IL-10 pAAV-GAD6S‏ تم استخدام البلازميدات ‎Al‏ تم تحضيرها في مثال 1 للاختبار. قبل 30 4283 من تجرية إعطاء الحيوان؛ تمت إذابة الكواشف المخزنة عند -80 درجة مئوية عند درجة حرارة الغرفة وتحضيرها عن طريق الخلط بواسطة دوامة. تم تخفيف البلازميدات 68065-/اطذم ‎(PAAV-IL-10‏ ‎pVAX1 5 pAAV-GDNF‏ 3 المحلول المنظم ‎Tris—EDTA‏ للحصول على التركيزات المبينة في جدول 6. تم إعطاء البلازميد ‎PVAXT‏ بنفس التركيز والكمية مثل البلازميدات الأخرى. لم يتم الإبلاغ عن أن البلازميد ‎PVAXT‏ لها فاعلية مسكنة. تم خلط البلازميدات المطلوية وفقاً للمحتويات المبينة في جدول 6؛ والإعطاء بكمية 30 ميكروجم/50 ميكروجم لكل حيوان. [جدول 6] أنواع ومحتويات البلازما العينار” ‎PAAV- | pAAV-IL- PAAV- =‏ ‎pVAX1‏ ‏5م08 10 ‎GDNF‏
— 1 4 — ميكروح ‎pVAX1‏ = /50 ميكرولتر ‎pAAV-‏ ‏5م08 ‏15 ميكروجم 5 ميكروجم 0 /50 ميكرولتر /50 ميكرولتر ‎pAAV-GDNF‏ ‎PAAV-IL-10‏ ‏15 ميكروجم | 15 ميكروجم + ‎SOf‏ ميكرولتر | /50 ميكرولتر ‎pAAV-GDNF‏ ‎pAAV-‏ ‏5م08 ‏+ ‏0 ميكروجم |10 ميكروجم |10 ميكروجم ‎PAAV-IL-10‏ | /50 ميكرولتر | /50 ميكرولتر ‎50/١‏ ميكرولتر + ‎pAAV-GDNF‏ ‏وفقاً لنموذج الألم الحيواني المنتج بواسطة نفس الطريقة كما في المثال التجريبي 2-6؛ تم إعطاء العينات التي تم تحضيرها وفقاً لمحتويات البلازما المبينة في جدول 6. بعد ذلك؛ تم إجراء اختبار خيوط ‎von Frey‏ بطريقة مماثلة للمثال التجرببيى 3-6. لملاحظة استجابات الألم. ونتيجة لذلك؛ تبين أن التأثير المخفف للألم كان أعلى عندما تم إعطاء جميع البلازميدات ‎pAAVS-GDNF 5 (pAAVS-IL-10 pAAV-GAD6S 5‏ على نحو مشترك بالمقارنة
— 2 4 — بالإعطاء المشترك للبلازميدات ‎PAAV-IL-10 i pAAV-GDNF 5 pAAV-GADG5‏ و ‎pAAV-GDNF‏ (شكل 14). مثال تجريبى 9. مقارنة الفاعليات المسكنة للإعطاء المشترك للفيروسات ‎AAV-GADG5-Modi‏ ‎AAV-GDNF-IL-10‏ والإعطاء المشترك للفيروسات ‎AAV-IL-10 AAV-GADGS5‏ و ‎AAV-GDNF 5‏ تم استخدام الفيروسات المرتبطة بالفيروس الغدي التي تم تحضيرها في مثال 2 للاختبار. قبل 30 ‎dada‏ من تجرية الإعطاء الحيواني»؛ تمت إذابة الكواشف المخزنة عند -80 درجة مئوية عند درجة حرارة الغرفة وتم تحضيرها عن طريق الخلط بواسطة دوامة. تم تخفيف الفيروسات ‎AAV=‏ ‎AAV-IL-10 (AAV-GAD65 (AAV-GDNF-IL-10 «<GAD65-modi‏ ر -ناطلطظط ‎PBS GDNF 10‏ للحصول على العيارات المبينة في جدول 7. تم خلط الفيروسات المطلوية وفقاً للمحتويات المبينة في جدول ‎JT‏ وإعطاؤها بكمية 0 .1 ‎pou 91 0 x‏ فيروس/3 ميكرولتر أو 5 .1 ‎X‏ 910 جينوم فيروس/5 ميكرولتر لكل حيوان. [جدول 7[ أنواع ومحتويات الفيروس ‎AAV- AAV- al‏ ‎AAV- | AAV- AAV- =‏ ‎GDNF- GAD65-‏ ‎GDNF IL-10 65‏ ‎IL-10 modi‏ ‎x 5.0 | 810 x 5.0‏ 810 ‎AAV-‏ ‏جينوم جينوم -1065/ إ: فيروس/5 فيروس/5 ‎modi‏ ‏ميكرولتر ميكرولتر
— 3 4 — + ‎AAV-‏ ‎GDNF-IL-‏ ‏10 ‎AAV-‏ ‎GADG65‏ ‎x 5.0 0‏ 810 ‎x 0 x 0 :‏ جيدوم ‎asia 810 J AAV-IL-‏ 610 جيذ فيروس/5 جدوم جيدوم فيروس/5. | فيروس/5 ميكرولتر 1 ميكرولتر | ميكرولتر ‎AAV-‏ ‎GDNF‏ ‏وفقاً لنموذج الألم الحيواني المنتج بواسطة نفس الطريقة كما في المثال التجريبي 2-3 تم إعطاء العينات التي تم تحضيرها وفقاً لمحتويات الفيروس المبينة في جدول 7. بعد ذلك؛ تم إجراء اختبار خيوط ‎von Frey‏ بطريقة مماثلة للمثال ‎pail)‏ 3-3. لملاحظة استجابات الألم. ونتيجة لذلك؛ تبين أن التأثير المخفف للألم كان أعلى عندما تم إعطاء الفيروسات ‎AAV=‏ ‎AAV-GDNF-IL-10 s GAD65-modi 5‏ بالإعطاء المشترك بالمقارنة بالإعطاء المشترك لجميع الفيروسات ‎AAV-GDNF 3 AAV-IL-10 AAV-GADGS5‏ (شكل 15). 49 <160> ‎Kopatentin 2.0‏ >170< 1 >210<
<211> 5 <212> PRT ‏<213>الجنس البشري‎ >400< 1
Met Ala Ser Pro Gly Ser Gly Phe Trp Ser Phe Gly Ser Glu Asp Gly 5 1 5 10 15
Ser Gly Asp Ser Glu Asn Pro Gly Thr Ala Arg Ala Trp Cys Gin Val
Ala GIn Lys Phe Thr Gly Gly lle Gly Asn Lys Leu Cys Ala Leu Leu 10
Tyr Gly Asp Ala Glu Lys Pro Ala Glu Ser Gly Gly Ser Gin Pro Pro 60
Arg Ala Ala Ala Arg Lys Ala Ala Cys Ala Cys Asp Gin Lys Pro Cys 65 70 75 80
Ser Cys Ser Lys Val Asp Val Asn Tyr Ala Phe Leu His Ala Thr Asp 15 85 90 95
Leu Leu Pro Ala Cys Asp Gly Glu Arg Pro Thr Leu Ala Phe Leu Gin 100 105 110
Asp Val Met Asn lle Leu Leu GIn Tyr Val Val Lys Ser Phe Asp Arg
115 120 125
Ser Thr Lys Val lle Asp Phe His Tyr Pro Asn Glu Leu Leu Gin Glu 130 135 140
Tyr Asn Trp Glu Leu Ala Asp 60 Pro Gin Asn Leu Glu Glu lle Leu 145 150 155 160 5
Met His Cys GIn Thr Thr Leu Lys Tyr Ala lle Lys Thr Gly His Pro 165 170 175
Arg Tyr Phe Asn GIn Leu Ser Thr Gly Leu Asp Met Val Gly Leu Ala 180 185 190
Ala Asp Trp Leu Thr Ser Thr Ala Asn Thr Asn Met Phe Thr Tyr Glu 0 195 200 205 lle Ala Pro Val Phe Val Leu Leu Glu Tyr Val Thr Leu Lys Lys Met 210 215 220
Arg Glu lle lle Gly Trp Pro Gly Gly Ser Gly Asp Gly lle Phe Ser 225 230 235 240 5
Pro Gly Gly Ala lle Ser Asn Met Tyr Ala Met Met lle Ala Arg Phe 245 250 255
Lys Met Phe Pro Glu Val Lys Glu Lys Gly Met Ala Ala Leu Pro Arg 260 265 270
Leu lle Ala Phe Thr Ser Glu His Ser His Phe Ser Leu Lys Lys Gly 275 280 285
Ala Ala Ala Leu Gly lle Gly Thr Asp Ser Val lle Leu lle Lys Cys 290 295 300
Asp Glu Arg Gly Lys Met lle Pro Ser Asp Leu Glu Arg Arg lle Leu 5 305 310 315 320
Glu Ala Lys GIn Lys Gly Phe Val Pro Phe Leu Val Ser Ala Thr Ala 325 330 335
Gly Thr Thr Val Tyr Gly Ala Phe Asp Pro Leu Leu Ala Val Ala Asp 340 345 350 10 lle Cys Lys Lys Tyr Lys lle Trp Met His Val Asp Ala Ala Trp Gly 355 360 365
Gly Gly Leu Leu Met Ser Arg Lys His Lys Trp Lys Leu Ser Gly Val 370 375 380
Glu Arg Ala Asn Ser Val Thr Trp Asn Pro His Lys Met Met Gly Val 15 385 390 395 400
Pro Leu GIn Cys Ser Ala Leu Leu Val Arg Glu Glu Gly Leu Met GIn 405 410 415
Asn Cys Asn GIn Met His Ala Ser Tyr Leu Phe GIn Gin Asp Lys His
420 425 430
Tyr Asp Leu Ser Tyr Asp Thr Gly Asp Lys Ala Leu GIn Cys Gly Arg 435 440 445
His Val Asp Val Phe Lys Leu Trp Leu Met Trp Arg Ala Lys Gly Thr 450 455 460 5
Thr Gly Phe Glu Ala His Val Asp Lys Cys Leu Glu Leu Ala Glu Tyr 465 470 475 480
Leu Tyr Asn lle lle Lys Asn Arg Glu Gly Tyr Glu Met Val Phe Asp 485 490 495
Gly Lys Pro GIn His Thr Asn Val Cys Phe Trp Tyr lle Pro Pro Ser 10 500 505 510
Leu Arg Thr Leu Glu Asp Asn Glu Glu Arg Met Ser Arg Leu Ser Lys 515 520 525
Val Ala Pro Val lle Lys Ala Arg Met Met Glu Tyr Gly Thr Thr Met 530 535 540 15
Val Ser Tyr Gln Pro Leu Gly Asp Lys Val Asn Phe Phe Arg Met Val 545 550 555 560 lle Ser Asn Pro Ala Ala Thr His ‏صاى‎ Asp lle Asp Phe Leu lle Glu 565 570 575
— 4 8 —
Glu lle Glu Arg Leu Gly Gin Asp Leu 580 585 <210> 2 <211> 2824 <212> DNA 5 ‏<213>الجنس البشري‎ <400> 2 gcggcecgcecc 00801266090 cetetggete geccgaggac 000-1006836 gectcccace 60 ccctcactct gactccagcet ggcgtgcatg gtctgectcg catcctcacg actcagetce 10 120 ctcecetetet cgtgtttttt tcctcecgeeg ceccecteatt catccecact gggctecctt 180 tccctcaaat getetggggce tcteecgegct ttecctgagtc cgggetccga ggacccttag 240 gtagtcccgg tctcttttaa agctccecegg cttccaaagg gttgccacgt ccctaaacce 5 300 tgtctccagce tcgcatacac acacgcacag acacgcacgt tttctgttce tgcgtgacac 360 ccgccctege cgetcggece 006001666 cgegeggtge cctectceecg ccacacgggce 420 20
— 4 9 — acgcacgcgc gcgcagggcc aagcccgagg cagctcgecc gcagcetcgea ctcgcaggceg 480 acctgctcca gtctccaaag ccgatggcat ctccgggcte tggcttttgg tetttcgggt 540 cggaagatgg ctctggggat tccgagaatc ccggcacage gcgagcectgg tgccaagtgg 600 5 ctcagaagtt cacgggcggc atcggaaaca aactgtgcgc cctgctctac ggagacgcecg 660 agaagccggc ggagagcgge gggagcecaac cccecgeggge cgecgecegg aaggecgcect 720 gcgcectgega ccagaagcecc tgcagetgcet ccaaagtgga tgtcaactac gegttictce 0 780 atgcaacaga cctgctgccg gecgtgtgatg gagaaaggcc cactttggceg tttctgcaag 840 atgttatgaa cattttactt cagtatgtgg tgaaaagttt cgatagatca accaaagtga 900 ttgatttcca ttatcctaat gagcttctcc aagaatataa ttgggaattg gcagaccaac 960 15 cacaaaattt ggaggaaatt ttgatgcatt gccaaacaac tctaaaatat gcaattaaaa 1020 cagggcatcc tagatacttc aatcaacttt ctactggttt ggatatggtt ggattagcag 1080 cagactggct gacatcaaca gcaaatacta acatgttcac ctatgaaatt gctccagtat 20 1140
— 5 0 — ttgtgctttt ggaatatgtc acactaaaga aaatgagaga aatcattggc tggccagggg 1200 gctctggcga tgggatattt tctcccggtg gegecatate taacatgtat geccatgatga 1260 tcgcacgctt taagatgtic ccagaagtca aggagaaagg aatggctgct cttcccagge 5 1320 tcattgcctt cacgtctgaa catagtcatt tttctctcaa gaagggagct gcagcecttag 1380 ggattggaac agacagcgtg attctgatta aatgtgatga gagagggaaa atgattccat 1440 10 ctgatcttga aagaaggatt cttgaagcca aacagaaagg gtttgttcct ttcctcgtga 1500 gtgccacagc tggaaccacc gtgtacggag catttgaccc cctcttagcet gtcgcetgaca 1560 tttgcaaaaa gtataagatc tggatgcatg tggatgcagce ttggggtggg ggattactga 5 1620 tgtcccgaaa acacaagtgg aaactgagtg gcgtggagag ggccaactct gtgacgtgga 1680 atccacacaa gatgatggga gtccctttgc agtgctctge tctcetggtt agagaagagg 1740 20 gattgatgca gaattgcaac caaatgcatg cctcctacct ctttcagcaa gataaacatt 1800
— 5 1 — atgacctgtc ctatgacact ggagacaagg ccttacagtg cggacgccac gttgatgttt 1860 ttaaactatg gctgatgtgg agggcaaagg ggactaccgg gtttgaagcg catgttgata 1920 aatgtttgga gttggcagag tatttataca acatcataaa aaaccgagaa ggatatgaga 5 1980 tggtgtttga tgggaagcct cagcacacaa atgtctgctt ctggtacatt cctccaagcet 2040 tgcgtactct ggaagacaat gaagagagaa tgagtcgcct ctcgaaggtg gctccagtga 2100 10 ttaaagccag aatgatggag tatggaacca caatggtcag ctaccaaccc ttgggagaca 2160 aggtcaattt cttccgcatg gtcatctcaa acccagcggc aactcaccaa gacattgact 2220 tcctgattga agaaatagaa cgccttggac aagatttata ataaccttgc tcaccaaget 5 2280 gttccacttc tctagagaac atgccctcag ctaagccccc tactgagaaa cttcctttga 2340 gaattgtgcg acttcacaaa atgcaaggtg aacaccactt tgtctctgag aacagacgtt 2400 20 accaattatg gagtgtcacc agctgccaaa atcgtaggtg ttggctctge tggtcactgg 2460 agtagttgct actcttcaga atatggacaa agaaggcaca ggtgtaaata tagtagcagg 2520 atgaggaacc tcaaactggg tatcattttg cacgtgctct tctgttctca aatgctaaat 2580 gcaaacactg tgtatttatt agttaggtgt gccaaactac cgttcccaaa ttggtgtttc 2640 tgaatgacat caacattccc ccaacattac tccattacta aagacagaaa aaaataaaaa 5 2700 cataaaatat acaaacatgt ggcaacctgt tcttcctacc aaatataaac ttgtgtatga 2760 tccaagtatt ttatctgtgt tgtctctcta aacccaaata aatgtgtaaa tgtggacaca 2820 tctc 2824 0 <210> 3 <211> 1758 <212> DNA ‏<213>متوالية اصطناعية‎ <220> 5 31065 ‏>بشري محسن‎ 223< <400> 3 atggcatctc cgggctccgg cttttggtce ttcgggtcgg aagatggcetc aggggattce 60
— 5 3 — gagaatcccg gcacagcgceg ggcctggtgt caagtggetc agaagttcac gggcggceate 120 ggaaacaaac tgtgtgccct gctctacggc gacgccgaga agcccgcaga gagcggcgggd 180 80003800066 cgegggecge cgeccggaag gecgectgeg cetgtgacca gaageectge 5 240 tcatgcagca aggtagatgt caactacgcg tttctccatg ccacagatct gectgcecgget 300 tgcgacggtg aaaggcccac tttggccttt ctgcaggatg ttatgaacat tctgctgcag 360 10 tacgtggtga aaagtttcga ccggtcaacc aaagtgatcg actttcacta tcctaatgaa 420 cttctccagg agtacaattg ggagctggct gaccagccac agaacctgga ggaaatcttg 480 atgcattgcc aaactactct aaaatatgca attaaaacag gccatcctag atacttcaac 5 540 cagctttcta ccggtttgga tatggtgggg ctggcagcecg actggctgac atccaccgca 600 aataccaaca tgttcaccta tgagatcgct cctgtcttcg tgcttttgga atacgtcacc 660 ctaaagaaga tgcgtgaaat cattggctgg ccaggaggct ctggtgatgg tatattttct 0 720
— 5 4 — cccggeggeg cgatctctaa catgtatgec atgatgatcg cacgctttaa gatgttccca 780 gaagtcaagg agaaaggaat ggctgctctt cccaggctca ttgccttcac gagtgaacac 840 agtcactttt ccctcaagaa gggggctgcc gecttaggga tcggaacaga cagegtgatt 5 900 ctgataaagt gcgacgagag agggaaaatg attccatctg atcttgagag aaggattctt 960 gaagccaaac agaaagggtt tgtccctttc ctcgtgagtg ccacagcetgg aaccaccgtg 1020 10 tacggcgcat ttgaccccct cttagctgtc gcggatatat gtaagaagta taagatctgg 1080 atgcacgtgg atgctgcttg gggtggggga ttactgatgt ccaggaaaca caagtggaaa 1140 ctgtctggceg tggagcgege caacagcegtg acgtggaatc cacacaaaat gatgggagtc 15 1200 cctttgcagt gctctgctct cctggttcga gaagagggac tgatgcagaa ttgcaaccaa 1260 atgcatgcct cctacctctt tcagcaggat aaacattatg acctgtctta cgacactggt 1320 0 gacaaggccc tgcagtgtgg gcgccacgtt gatgtattca agctatggct gatgtggagg 1380
— 5 5 — gcaaagggga ctaccggttt tgaagcccat gttgacaaat gtctggagtt ggcagagtat 1440 ttatacaata tcataaaaaa ccgagaagga tatgagatgg tgtttgatgg caagcctcag 1500 cacacaaatg tctgcttctg gtacatccct cccagcectac gtactctgga ggacaacgaa ‏م‎ ‎1560 ‎gagagaatga gtcgcctctc gaaggtggct ccagtgatta aagccagaat gatggagtat 1620 ggaaccacaa tggtcagcta ccaacccttg ggggacaagg taaatttctt ccgcatggtc 1680 10 atctcaaacc cagcggcaac tcaccaagac attgatttcc tgattgaaga gatcgagcgg 1740 ctcggccagg atctgtga 1758 <210> 4 <211> 594 15 <212> PRT ‏<213>الجنس البشري‎ <400> 4
Met Ala Ser Ser Thr Pro Ser Ser Ser Ala Thr Ser Ser Asn Ala Gly 1 5 10 15 20
Ala Asp Pro Asn Thr Thr Asn Leu Arg Pro Thr Thr Tyr Asp Thr Trp
Cys Gly Val Ala His Gly Cys Thr Arg Lys Leu Gly Leu Lys lle Cys
Gly Phe Leu GIn Arg Thr Asn Ser Leu Glu Glu Lys Ser Arg Leu Val 60 5
Ser Ala Phe Lys Glu Arg Gin Ser Ser Lys Asn Leu Leu Ser Cys Glu 65 70 75 80
Asn Ser Asp Arg Asp Ala Arg Phe Arg Arg Thr Glu Thr Asp Phe Ser 85 90 95
Asn Leu Phe Ala Arg Asp Leu Leu Pro Ala Lys Asn Gly Glu Glu GIn 0 100 105 110
Thr Val Gin Phe Leu Leu Glu Val Val Asp lle Leu Leu Asn Tyr Val 115 120 125
Arg Lys Thr Phe Asp Arg Ser Thr Lys Val Leu Asp Phe His His Pro 130 135 140 15
His GIn Leu Leu Glu Gly Met Glu Gly Phe Asn Leu Glu Leu Ser Asp 145 150 155 160
His Pro Glu Ser Leu Glu Gin lle Leu Val Asp Cys Arg Asp Thr Leu 165 170 175
Lys Tyr Gly Val Arg Thr Gly His Pro Arg Phe Phe Asn Gin Leu Ser 180 185 190
Thr Gly Leu Asp lle lle Gly Leu Ala Gly Glu Trp Leu Thr Ser Thr 195 200 205
Ala Asn Thr Asn Met Phe Thr Tyr Glu lle Ala Pro Val Phe Val Leu 5 210 215 220
Met Glu GIn lle Thr Leu Lys Lys Met Arg Glu lle Val Gly Trp Ser 225 230 235 240
Ser Lys Asp Gly Asp Gly lle Phe Ser Pro Gly Gly Ala lle Ser Asn 245 250 255 10
Met Tyr Ser lle Met Ala Ala Arg Tyr Lys Tyr Phe Pro Glu Val Lys 260 265 270
Thr Lys Gly Met Ala Ala Val Pro Lys Leu Val Leu Phe Thr Ser Glu 275 280 285
GIn Ser His Tyr Ser lle Lys Lys Ala Gly Ala Ala Leu Gly Phe Gly 15 290 295 300
Thr Asp Asn Val lle Leu lle Lys Cys Asn Glu Arg Gly Lys lle lle 305 310 315 320
Pro Ala Asp Phe Glu Ala Lys lle Leu Glu Ala Lys GIn Lys Gly Tyr
325 330 335
Val Pro Phe Tyr Val Asn Ala Thr Ala Gly Thr Thr Val Tyr Gly Ala 340 345 350
Phe Asp Pro lle Gin Glu lle Ala Asp lle Cys Glu Lys Tyr Asn Leu 355 360 365 5
Trp Leu His Val Asp Ala Ala Trp Gly Gly Gly Leu Leu Met Ser Arg 370 375 380
Lys His Arg His Lys Leu Asn Gly lle Glu Arg Ala Asn Ser Val Thr 385 390 395 400
Trp Asn Pro His Lys Met Met Gly Val Leu Leu GIn Cys Ser Ala lle 0 405 410 415
Leu Val Lys Glu Lys Gly lle Leu GIn Gly Cys Asn Gln Met Cys Ala 420 425 430
Gly Tyr Leu Phe GIn Pro Asp Lys GIn Tyr Asp Val Ser Tyr Asp Thr 435 440 445 5
Gly Asp Lys Ala lle GIn Cys Gly Arg His Val Asp lle Phe Lys Phe 450 455 460
Trp Leu Met Trp Lys Ala Lys Gly Thr Val Gly Phe Glu Asn Gin lle 465 470 475 480
Asn Lys Cys Leu Glu Leu Ala Glu Tyr Leu Tyr Ala Lys lle Lys Asn 485 490 495
Arg Glu Glu Phe Glu Met Val Phe Asn Gly Glu Pro Glu His Thr Asn 500 505 510
Val Cys Phe Trp Tyr lle Pro GIn Ser Leu Arg Gly Val Pro Asp Ser 5 515 520 525
Pro Gin Arg Arg Glu Lys Leu His Lys Val Ala Pro Lys lle Lys Ala 530 535 540
Leu Met Met Glu Ser Gly Thr Thr Met Val Gly Tyr Gln Pro Gin Gly 545 550 555 560 10
Asp Lys Ala Asn Phe Phe Arg Met Val lle Ser Asn Pro Ala Ala Thr 565 570 575
Gln Ser Asp lle Asp Phe Leu lle Glu Glu lle Glu Arg Leu Gly Gin 580 585 590
Asp Leu 15 <210> 5 <211> 1784 <212> DNA
— 6 0 — ‏<213>الجنس البشري‎ <400> 5 atggcgtctc gaccccatct tcgtccgcaa cctecctcgaa cgecgggageg gaccccaata 60 ccactaacct gcgccccaca acgtacgata cctggtgecgg cgtggcccat ggatgcacca 5 120 gaaaactggg gctcaagatc tgcggcttct tgcaaaggac caacagcctg gaagagaaga 180 gtcgccettgt gagtgecttc aaggagaggce aatcctccaa gaacctgctt tectgtgaaa 240 10 acagcgaccg ggatgcccgce ttccggcgca cagagactga cttetctaat ctgtttgcta 300 gagatctgct tccggctaag aacggtgagg agcaaaccgt gcaattccte ctggaagtgg 360 tggacatact cctcaactat gtccgcaaga catttgatcg ctccaccaag gtgctggact 5 420 ttcatcaccc acaccagttg ctggaaggca tggagggctt caacttggag ctctctgacc 480 accccgagtc cctggagcag atcctggttg actgcagaga caccttgaag tatggggttc 540 0 gcacaggtca tcctcgattt ttcaaccagc tctccactgg attggatatt attggectag 600
— 6 1 — ctggagaatg gctgacatca acggccaata ccaacatgtt tacatatgaa attgcaccag 660 tgtttgtcct catggaacaa ataacactta agaagatgag agagatagtt ggatggtcaa 720 gtaaagatgg tgatgggata ttttctcctg ggggcgcecat atccaacatg tacagcatca 5 780 tggctgctecg ctacaagtac ttcccggaag ttaagacaaa gggcatggeg gcetgtgcecta 840 aactggtcct cttcacctca gaacagagtc actattccat aaagaaagct ggggctgcac 900 10 ttggctttgg aactgacaat gtgattttga taaagtgcaa tgaaaggggg aaaataattc 960 cagctgattt tgaggcaaaa attcttgaag ccaaacagaa gggatatgtt cccttttatg 1020 tcaatgcaac tgctggcacg actgtttatg gagcttttga tccgatacaa gagattgcag 5 1080 atatatgtga gaaatataac ctttggttgc atgtcgatgc tgcctgggga ggtgggctge 1140 tcatgtccag gaagcaccgc cataaactca acggcataga aagggccaac tcagtcacct 1200 20 ggaaccctca caagatgatg ggcgtgctgt tgcagtgctc tgccattctc gtcaaggaaa 1260
— 6 2 — agggtatact ccaaggatgc aaccagatgt gtgcaggata cctcttccag ccagacaagc 1320 agtatgatgt ctcctacgac accggggaca aggcaattca gtgtggccgce cacgtggata 1380 tcttcaagtt ctggctgatg tggaaagcaa agggcacagt gggatttgaa aaccagatca 5
1440 acaaatgcct ggaactggct gaatacctct atgccaagat taaaaacaga gaagaatttg 1500 agatggtttt caatggcgag cctgagcaca caaacgtctg tttttggtat attccacaaa
1560 10 gcctcagggg tgtgccagac agccctcaac gacgggaaaa gctacacaag gtggctccaa 1620 aaatcaaagc cctgatgatg gagtcaggta cgaccatggt tggctaccag ccccaagggg 1680 acaaggccaa cttcttccgg atggtcatct ccaacccagce cgctacccag tctgacattg 5 1740 acttcctcat tgaggagata gaaagactgg gccaggatct gtaa 1784 <210> 6 <211> 178
<212> PRT 20
<213>الجرذ النرويجي
<400> ‏م‎ ‎Met Pro Gly Ser Ala Leu Leu Cys Cys Leu Leu Leu Leu Ala Gly Val 1 5 10 15
Lys Thr Ser Lys Gly His Ser lle Arg Gly Asp Asn Asn Cys Thr His 5
Phe Pro Val Ser GIn Thr His Met Leu Arg Glu Leu Arg Ala Ala Phe
Ser 0 Val Lys Thr Phe Phe Gin Lys Lys Asp Gin Leu Asp Asn lle 60
Leu Leu Thr Asp Ser Leu Leu GIn Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys 0 65 70 75 80
Gln Ala Leu Ser Glu Met lle Lys Phe Tyr Leu Val Glu Val Met Pro 85 90 95
Gln Ala Glu Asn His Gly Pro Glu lle Lys Glu His Leu Asn Ser Leu 100 105 110 15
Gly Glu Lys Leu Lys Thr Leu Trp lle Gin Leu Arg Arg Cys His Arg 115 120 125
Phe Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu GIn Val Lys Asn 130 135 140
Asp Phe Asn Lys Leu GIn Asp Lys Gly Val Tyr Lys Ala Met Asn Glu 145 150 155 160
Phe Asp lle Phe lle Asn Cys lle Glu Ala Tyr Val Thr Leu Lys Met 165 170 175
Lys Asn 5 <210> 7 <211> 682 <212> DNA <213 >الجرذ الترويجي 7 >400< ‎catgcctggc tcagcactgc tatgttgcect gctcttactg gctggagtga agaccagcaa‏ 60 ‎aggccattcc atccggggtg acaataactg cacccacttc ccagtcagcc agacccacat‏ 120 5 gctccgagag ctgagggctg ccttcagtca agtgaagact ttctttcaaa agaaggacca 180 gctggacaac atactgctga cagattcctt actgcaggac tttaagggtt acttgggttg 240
— 6 5 — ccaagccttg tcagaaatga tcaagtttta cctggtagaa gtgatgcccc aggcagagaa 300 ccatggccca gaaatcaagg agcatttgaa ttccctggga gagaagctga agaccctctg 360 gatacagctg cgacgctgtc atcgatttct cccctgtgag aataaaagca aggcagtgga 5 420 gcaggtgaag aatgatttta ataagctcca agacaaaggt gtctacaagg ccatgaatga 480 glttgacatc ttcatcaact gcatagaagc ctacgtgaca ctcaaaatga aaaattgaac 540 10 cacccggcat ctactggact gcaggacata aatagagctt ctaaatctga tccagagatc 600 ttagctaacg ggagcaactc cttggaaaac ctcgtttgta cctctctcca aaatatttat 660 tacctctgat acctcagttc cc 682 <210> 8 15 <211> 537 <212> DNA ‏<213>متوالية اصطناعية‎ <220> ١ا-10نسحم ‏>جرذي‎ 223< 20 <400> 8
— 6 6 — atgcctggcet cagccctgcet atgttgectt ctecectgetgg cgggagtcaa gacaagcaag 60 ggccattcca tccggggaga taataactgc acccacttcc cagtctctca aacccacatg 120 ttgcgagagc tgagggctgc cttcagtcag gtgaagacgt tcttccagaa gaaggaccag 5 180 ctggacaaca ttctgctgac tgacagcctg ctgcaggatt tcaagggtta tttggggtgt 240 caagccctgt ctgaaatgat caagttttac ctggtagaag tgatgcccca ggcagagaat 300 10 catggccccg agatcaagga gcacctcaac tccectggggg agaagctgaa gacccetgtgg 360 attcagctga ggcgctgcca cagatttctc ccctgtgaaa acaagagcaa ggcagtggag 420 caggtgaaga acgattttaa taagctccag gacaagggcg tctacaaggc catgaacgag 15 480 ttcgacatct ttatcaactg catagaagct tacgttacac tcaagatgaa gaattga 537 <210> 9 <211> 178 <212> PRT 20 ‏<213>الجنس البشري‎
<400> 9
Met His Ser Ser Ala Leu Leu Cys Cys Leu Val Leu Leu Thr Gly Val 1 5 10 15
Arg Ala Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gin Ser Glu Asn Ser Cys Thr His 5
Phe Pro Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe
Ser Arg Val Lys Thr Phe Phe Gin Met Lys Asp Gin Leu Asp Asn Leu 60
Leu Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys 10 65 70 75 80
Gln Ala Leu Ser Glu Met lle GIn Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro 85 90 95
Gln Ala Glu Asn Gin Asp Pro Asp lle Lys Ala His Val Asn Ser Leu 100 105 110 15
Gly Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg 115 120 125
Phe Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu GIn Val Lys Asn 130 135 140
Ala Phe Asn Lys Leu GIn Glu Lys Gly lle Tyr Lys Ala Met Ser Glu 145 150 155 160
Phe Asp lle Phe lle Asn Tyr lle Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys lle 165 170 175
Arg Asn 5 <210> 10 <211> 1600 <212> DNA ‏<213>الجنس البشري‎ 10 <400> 10 aaaccacaag acagacttgc aaaagaaggc atgcacagct cagcactgct ctgttgcctg 60 gtcctectga ctggggtgag ggccagecca ggccagggcea cccagtctga gaacagcetge 120 5 acccacttcc caggcaacct gcctaacatg cttcgagatc tccgagatge cttcagcaga 180 gtgaagactt tctttcaaat gaaggatcag ctggacaact tgttgttaaa ggagtccttg 240 ctggaggact ttaagggtta cctgggttgc caagccttgt ctgagatgat ccagttttac 300 20
— 6 9 —
ctggaggagg tgatgcccca agctgagaac caagacccag acatcaaggc gcatgtgaac
360 tccctggggg agaacctgaa gaccctcagg ctgaggctac ggcgcetgtca tegatttett
420 ccctgtgaaa acaagagcaa ggccgtggag caggtgaaga atgcctttaa taagctccaa 5
480 gagaaaggca tctacaaagc catgagtgag tttgacatct tcatcaacta catagaagcc
540 tacatgacaa tgaagatacg aaactgagac atcagggtgg cgactctata gactctagga 600 10 cataaattag aggtctccaa aatcggatct ggggctctgg gatagctgac ccagcccectt
660 gagaaacctt attgtacctc tcttatagaa tatttattac ctctgatacc tcaaccccca 720 tttctattta tttactgagc ttctctgtga acgatttaga aagaagccca atattataat 780 ttttttcaat atttattatt ttcacctgtt tttaagctgt ttccataggg tgacacacta 840 15 tggtatttga gtgttttaag ataaattata agttacataa gggaggaaaa aaaatgttct 900 ttggggagcc aacagaagct tccattccaa gcctgaccac gctttctage tgttgagctg
960 ttttccctga ccteccteta atttatcttg tetctgggct tggggcttee taactgetac 1020 aaatactctt aggaagagaa accagggagc ccctttgatg attaattcac cttccagtgt 20
1080
— 7 0 — ctcggaggga ttccecctaac ctcattccce aaccacttca ticttgaaag ctgtggccag 1140 cttgttattt ataacaacct aaatttggtt ctaggccggg cgcggtggcet cacgcectgta 1200 atcccagcac tttgggaggc tgaggcgggt ggatcacttg aggtcaggag ttcctaacca 5
1260 gcctggtcaa catggtgaaa ccccgtctct actaaaaata caaaaattag ccgggcatgg 1320 tggcgcgcac ctgtaatccc agctacttgg gaggctgagg caagagaatt gettgaaccce
1380 10 aggagatgga agttgcagtg agctgatatc atgcccctgt actccagect gggtgacaga 1440 gcaagactct gtctcaaaaa ataaaaataa aaataaattt ggttctaata gaactcagtt 1500 ttaactagaa tttattcaat tcctctggga atgttacatt gtttgtctgt cttcatagca 1560 15 gattttaatt ttgaataaat aaatgtatct tattcacatc 1600 <210> 11 <211> 185 <212> PRT
<213>الجنس البشري 1 <400>
Met Lys Leu Trp Asp Val Val Ala Val Cys Leu Val Leu Leu His Thr 1 5 10 15
Ala Ser Ala Phe Pro Leu Pro Ala Ala Asn Met Pro Glu Asp Tyr Pro
Asp GIn Phe Asp Asp Val Met Asp Phe lle Gin Ala Thr lle Lys Arg 5
Leu Lys Arg Ser Pro Asp Lys Gin Met Ala Val Leu Pro Arg Arg Glu 60
Arg Asn Arg GIn Ala Ala Ala Ala Asn Pro Glu Asn Ser Arg Gly Lys 65 70 75 80 10
Gly Arg Arg Gly 60 Arg Gly Lys Asn Arg Gly Cys Val Leu Thr Ala 85 90 95 lle His Leu Asn Val Thr Asp Leu Gly Leu Gly Tyr Glu Thr Lys Glu 100 105 110
Glu Leu lle Phe Arg Tyr Cys Ser Gly Ser Cys Asp Ala Ala Glu Thr 5 115 120 125
Thr Tyr Asp Lys lle Leu Lys Asn Leu Ser Arg Asn Arg Arg Leu Val 130 135 140
Ser Asp Lys Val Gly Gln Ala Cys Cys Arg Pro lle Ala Phe Asp Asp
145 150 155 160
Asp Leu Ser Phe Leu Asp Asp Asn Leu Val Tyr His lle Leu Arg Lys 165 170 175
His Ser Ala Lys Arg Cys Gly Cys lle 180 185 5 <210> 12 <211> 558 <212> DNA ‏<213>الجنس البشري‎ <400> 12 0 2108891181 gggatgtcgt ggctgtctge ctggtgctge tccacaccgce 91060016 60 ccgctgeccg ccgcaaatat gccagaggat tatcctgatc agttcgatga tgtcatggat 120 tttattcaag ccaccattaa aagactgaaa aggtcaccag ataaacaaat ggcagtgctt 180 15 cctagaagag agcggaatcg gcaggctgca gctgccaacc cagagaattc cagaggaaaa 240 ggtcggagag gccagagggg caaaaaccgg ggttgtgtct taactgcaat acatttaaat 300
— 7 3 — gtcactgact tgggtctggg ctatgaaacc aaggaggaac tgatttttag gtactgcagc 360 ggctcttgcg atgcagctga gacaacgtac gacaaaatat tgaaaaactt atccagaaat 420 agaaggctgg tgagtgacaa agtagggcag gcatgttgca gacccatcgc ctttgatgat 5
480 gacctgtcgt ttttagatga taacctggtt taccatattc taagaaagca ttccgctaaa 540 aggtgtggat gtatctga 558 <210> 13
<211> 558 10 <212> DNA
<213>متوالية اصطناعية >220< >5,50<223( محسن ‎GDNF‏
<400> 13 15 atgaaacttt gggacgtggt ggctgtctgc ctggtgctcc tccacaccge cagtgcegttt 60 ccgctgeccg cecgctaacat gccagaggat tatcctgatc agttcgatga tgttatggac 120 ttcattcaag ccacaatcaa gcggctgaaa cgatcaccag ataaacagat ggcagtgctt 20 180
— 7 4 — cctcgeecgeg agcegtaatcg gcaggcetgca gcagcecaatc ccgagaattc ccgaggaaaa 240 gggcgcaggg gtcagagggg caagaaccgg gggtgtgtcc tgactgcaat acatttaaac 300 gtgactgact tgggtctggg ctatgagacc aaggaagaac tcattttcag gtactgcagc 5 360 ggctcttgcg atgccgcgga aacaacgtac gacaaaatct tgaagaacct ctccagaaac 420 agaaggctgg tgagtgacaa ggtaggacag gcctgttgca gacccatcgce ctttgacgac 480 10 gatctgagct ttctggatga caatctggtt taccacatcc tacggaagca ttctgctaaa 540 agatgtggat gtatttga 558 <210> 14 <211> 537 15 <212> DNA ‏<213>متوالية اصطناعية‎ <220>
IL-10¢ rune ‏>يشري‎ 2 3< <400> 14 20
— 7 5 — atgcacagct cagcactgct gtgctgcectg gtcctgctga caggggtgag ggcaagccca 60 ggccagggaa cccaatctga gaacagctgc acccacttcc ctggcaatct gcctaacatg 120 ctgcgcgacc tccgagatge cttcagcaga gtgaagactt ttttccagat gaaggatcag 5
180 ctggacaacc tgctgctgaa ggagtccctc ctggaggact ttaagggcta cctgggatgce 240 caggccctgt ctgagatgat ccaattctac ctggaagaag ttatgcccca ggctgagaac
300 10 caggacccag acattaaggc ccatgtcaac tccctggggg aaaatctgaa gaccctcagg 360 ctgcggctac ggcgcetgtca ccgttttctg ccctgtgaga ataagagcaa ggctgtggag 420 caggtgaaga acgccttcaa taagctccag gagaagggta tctacaaagc gatgagtgaa 5 480 tttgatatct tcattaatta tatagaagct tatatgacaa tgaaaatcag aaactga 537 <210> 15 <211> 28
<212> DNA 20
<213>متوالية اصطناعية
<220> ‏بادئ أمامي لتضخيم معزز‎ <223> (F-JDK) CMV <400> 5 ttcggccgtc gaggagcettg geccattg 28
<210> 16 5 <211> 36 <212> DNA
<213>متوالية اصطناعية >220< ‎<223(R-JDK) CMV 10‏ بادئ عكسي لتضخيم معزز 6 >400< ‎gacgtcgacc tagctagcga attcggggcc gcggag 36‏ 17 >210< 34 >211< ‎DNA 15‏ >212< <213>متوالية اصطناعية >220< ‎ (F-SV40pA) SV40pA‏ <223بادئ أمامي لتضخيم معزز 17 >400< ccatcgatca gacatgataa gatacattga tgag 34 <210> 18 <211> 43 <212> DNA ‏<213>متوالية اصطناعية‎ 5 <220> ‏<223>بادئ عكسي لتضخيم معزز‎ (R-SV40pA) SV40pA
<400> 18 gacgtcgacg cggccgctac cacatttgta gaggttttac ‏و‎ 43
<210> 19 10 <211> 28 <212> DNA
<213>متوالية اصطناعية
<220>
‎(F-Kan) 5‏ <223بادئ أمامي لتضخيم الجين المقاوم للكانامايسين 9 >400< ‎aggcgccatg agccatattc aacgggaa 28‏ >210< 29 >211<
‎DNA‏ >212< <213>متوالية اصطناعية >220< ‎ (R-Kan)‏ <223بادئ عكسي لتضخيم الجين المقاوم للكانامايسين 20 >400< ‎ttcatgatta gaaaaactca tcgagcatc 29‏ 21 >210< 28 >211< ‎DNA‏ >212< <213>متوالية اصطناعية >220< ‎(F-ITR) LITR‏ <223>و ‎CMV‏ بادئ أمامي لتضخيم 21 >400< ‎cetggecttt tgetggece 28‏ 2100000002 5 22 >210< 28 >211< ‎DNA‏ >212< <213>متوالية اصطناعية >220<
‏_بادئ عكسي لتضخيم‎ RITR ‏<223>و‎ (R-ITR) SV40pA <400> 2 atggatccgc tagtaaatac cgcatcag 28 <210> 23 <211> 20 5 <212> DNA ‏<213>متوالية اصطناعية‎
>220< ‎(F-rlL-10) 1-0‏ <223> بادئ أمامي لتضخيم
<400> 23 0 0001300026 caccatgcect 20 <210> 4 <211> 9 <212> DNA
<213>متوالية اصطناعية >220< ‎(R-rlL-10) rlL-10‏ >223< بادئ عكسي لتضخيم 24 >400< ‎gacgtcgacg ccatcgatgg cttaattaat caattcttc 39‏
>210< >211< ‎DNA‏ >212< <213>متوالية اصطناعية 5 >220<
‎WPRE_Pacl_F‏ <223>بادئ أمامي ل 5 >400< ‎ggtggtttaa ttaaaatcaa cctctggatt acaaaatttg 40‏ 26 >210<
‎<211> 30 10 <212> DNA
‏<213>متوالية اصطناعية
‏>220< ‎ WPRE_modi_Hpal_R‏ <223>بادئ عكسي ل
‎<400> 26 5 ggtggtgtta acgacaacac cacggaattg 30 <210> 27 <211> 43 <212> DNA
<213>متوالية اصطناعية >220< ‎ SV40-CMV-sCAG-bGHpA-Infu-F‏ <223 ببادئ أمامي ‎J‏ ‏7 >400<
01090090209 gtcgactacc acatttgtag aggttttact 6 43 5
<210> 28 <211> 35 <212> DNA
<213>متوالية اصطناعية
<220> 10 ‏<223>بادئ عكسي ل‎ SV40-CMV-sCAG-bGHpA-Infu-R <400> 28 aataatcaat gtcgactcga ggagcttggc ccatt 35 <210> 29 <211> 42 15
<212> DNA
<213>متوالية اصطناعية >220< ‎scramble‏ <223>متوالية نيوكليوتيد لحشوة
-2ع8- 9 >400< ‎gtcgacggta tcgataagct tgatatcgaa 160106802 cc 42‏ 30 >210< 46 >211< ‎DNA 5‏ >212< <213>متوالية اصطناعية >220< ‎scramble F‏ 223>بادئ أمامي لحشوة 0 >400< ‎ctaggtcgac ggtatcgata agcttgatat cgaattcctg cagccc 46 10‏ 31 >210< 46 >211< ‎DNA‏ >212< <213>متوالية اصطناعية >220< ‎scramble R‏ <223>بادئ عكسي لحشوة 1 >400< ‎ctaggggctg caggaattcg atatcaagct tatcgatacc gtcgac 46‏ 32 >210<
<211> 5 <212> PRT ‏<213>الذئب الرمادي‎ <400> 2
Met Ala Ser Pro Gly Ser Gly Phe Trp Ser Phe Gly Ser Glu Asp Gly 5 1 5 10 15
Ser Gly Asp Pro Glu Asn Pro Ser Thr Ala Arg Ala Trp Cys GIn Val
Ala GIn Lys Phe Thr Gly Gly lle Gly Asn Lys Leu Cys Ala Leu Leu 10
Tyr Gly Asp Ala Glu Lys Pro Ala Glu Ser Gly Gly Ser Glu Pro Pro 60
Arg Ala Thr Ser Arg Lys Ala Ala Cys Ala Cys Asn Gin Lys Pro Cys 65 70 75 80
Ser Cys Pro Lys Ala Glu Val Asn Tyr Ala Phe Leu His Ala Thr Asp 5 85 90 95
Leu Leu Pro Ala Cys Asp Gly Glu Arg Pro Thr Leu Ala Phe Leu Gin 100 105 110
Asp Val Met Asp lle Leu Leu GIn Tyr Val Val Lys Ser Phe Asp Arg
115 120 125
Ser Thr Lys Val lle Asp Phe His Tyr Pro Asn Glu Leu Leu Gin Glu 130 135 140
Tyr Asn Trp Glu Leu Ala Asp 60 Pro Gin Asn Leu Glu Glu lle Leu 145 150 155 160 5
Met His Cys GIn Thr Thr Leu Lys Tyr Ala lle Lys Thr Gly His Pro 165 170 175
Arg Tyr Phe Asn GIn Leu Ser Thr Gly Leu Asp Met Val Gly Leu Ala 180 185 190
Ala Asp Trp Leu Thr Ser Thr Ala Asn Thr Asn Met Phe Thr Tyr Glu 0 195 200 205 lle Ala Pro Val Phe Val Leu Leu Glu Tyr Val Thr Leu Lys Lys Met 210 215 220
Arg Glu lle lle Gly Trp Pro Gly Gly Ser Gly Asp Gly lle Phe Ser 225 230 235 240 5
Pro Gly Gly Ala lle Ser Asn Met Tyr Ala Met Leu lle Ala Arg Phe 245 250 255
Lys Met Phe Pro Glu Val Lys Glu Lys Gly Met Ala Ala Val Pro Arg 260 265 270
Leu lle Ala Phe Thr Ser Glu His Ser His Phe Ser Leu Lys Lys Gly 275 280 285
Ala Ala Ala Leu Gly lle Gly Thr Asp Ser Val lle Leu lle Lys Cys 290 295 300
Asp Glu Arg Gly Lys Met Val Pro Ser Asp Leu Glu Arg Arg lle Leu 5 305 310 315 320
Glu Ala Lys GIn Lys Gly Phe Val Pro Phe Leu Val Ser Ala Thr Ala 325 330 335
Gly Thr Thr Val Tyr Gly Ala Phe Asp Pro Leu Leu Ala Val Ala Asp 340 345 350 10 lle Cys Lys Lys Tyr Lys lle Trp Met His Val Asp Ala Ala Trp Gly 355 360 365
Gly Gly Leu Leu Met Ser Arg Lys His Lys Trp Lys Leu Ser Gly Val 370 375 380
Glu Arg Ala Asn Ser Val Thr Trp Asn Pro His Lys Met Met Gly Val 15 385 390 395 400
Pro Leu GIn Cys Ser Ala Leu Leu Val Arg Glu Glu Gly Leu Met GIn 405 410 415
Ser Cys Asn GIn Met His Ala Ser Tyr Leu Phe Gin GIn Asp Lys His
420 425 430
Tyr Asp Leu Ser Tyr Asp Thr Gly Asp Lys Ala Leu GIn Cys Gly Arg 435 440 445
His Val Asp Val Phe Lys Leu Trp Leu Met Trp Arg Ala Lys Gly Thr 450 455 460 5
Thr Gly Phe Glu Ala His lle Asp Lys Cys Leu Glu Leu Ala Glu Tyr 465 470 475 480
Leu Tyr Ser lle lle Lys Asn Arg Glu Gly Tyr Glu Met Val Phe Asp 485 490 495
Gly Lys Pro GIn His Thr Asn Val Cys Phe Trp Tyr Val Pro Pro Ser 10 500 505 510
Leu Arg Val Leu Glu Asp Asn Glu Glu Arg Met Asn Arg Leu Ser Lys 515 520 525
Val Ala Pro Val lle Lys Ala Arg Met Met Glu Tyr Gly Thr Thr Met 530 535 540 15
Val Ser Tyr Gln Pro Leu Gly Asp Lys Val Asn Phe Phe Arg Met Val 545 550 555 560 lle Ser Asn Pro Ala Ala Thr His Gin Asp lle Asp Phe Leu lle Glu 565 570 575
— 8 7 —
Glu lle Glu Arg Leu Gly Gin Asp Leu 580 585 <210> 33 <211> 1758 <212> DNA 5 ‏<213>الذئب الرمادي‎ <400> 3 atggcatctc caggctctgg cttctggtce ttcgggtctg 3808100-16 099031666 60 gagaacccca gcacagcgag agcctggtgt caggtggccc agaagttcac gggcggcatc 10 120 ggaaacaagc tgtgcgccct gctctacgga gatgccgaga agcccgecgga gagtggeggag 180 agcgagcccc cgcgecgcecac ctccaggaag gecgcectgeg cttgtaatca gaagcecttge 240 15 agctgcccca aagcggaggt caactatgcg tttctacacg caacagacct gectgccagcec 300 tgtgatggag aaaggcccac gttggcgttt ctgcaagatg ttatggacat tttgcttcag 360 tatgttgtga aaagtttcga tagatcaacc aaagtgattg atttccatta ccctaatgag 420 20
— 8 8 — ctccttcaag agtataactg ggaattggca gaccaaccac aaaatttgga ggaaattttg 480 atgcattgcc aaacgactct aaaatatgca attaaaacag ggcatcccag atatttcaat 540 cagctttcca ctggactgga tatggttgga ttagcagcag actggctgac atcaacagca 5
600 aacacaaaca tgttcaccta tgaaattgct ccagtatttg tgctcttgga atatgtcaca 660 ctaaagaaaa tgagagaaat cattggctgg ccgggaggct ctggcgatgg gatattttct 720 cctggtggceg ctatttctaa catgtatgcc atgctgatcg cacgctttaa gatgttccca 780 10 gaagtcaagg agaaaggaat ggctgcggtt cccaggctca ttgccttcac atctgagcat 840 agtcactttt ctctcaagaa gggagctgca gctttgggga ttggaacaga cagcgtgatt 900 ctgattaaat gtgatgagag ggggaaaatg gtcccatctg atcttgaaag aaggatcctt 5 960 gaagccaaac aaaaaggatt tgttcctttc cttgtgagcg ccacagctgg gaccaccgtg 1020 tatggagcat tcgaccccct cttagcagtt gctgacattt gtaaaaagta caagatctgg
1080 20 atgcatgtgg atgctgcttg gggtggggga ttactgatgt cccggaagca caaatggaag 1140
— 8 9 — ctgagcggceg tggagagggce caactctgtg acatggaacc cacacaagat gatgggcgtc 1200 cctttacagt gctccgctct cectggttaga gaagagggat tgatgcagag ttgcaaccag 1260 atgcatgcct cctacctctt ccagcaagat aaacactatg acctgtccta tgatactggg 5 1320 gataaggcct tacagtgtgg acgccacgtt gatgttttta aattatggct aatgtggagg 1380 gcaaagggca ccactgggtt tgaagcacat attgataagt gcctggagct ggctgagtat 1440 10 ttatacagta tcataaaaaa ccgagaagga tacgaaatgg tgtttgatgg aaagcctcag 1500 cacacaaatg tctgcttctg gtacgtgcct ccaagtttge gtgtcctgga agacaatgaa 1560 gagagaatga accgcctctc aaaggtggcc ccagtgatta aagcccgaat gatggagtat 5 1620 gggaccacaa tggtcagcta tcagcccttg ggagacaagg tcaatttctt ccgcatggtt 1680 atctcaaatc ccgcagcaac tcaccaagac atcgacttcc tgattgaaga aatagaacgc 1740 20 cttggacaag atttataa 1758 <210> 34
<211> 5 <212> PRT ‏<213>السنور البري‎ <400> 34
Met Ala Thr Pro Gly Ser Gly Phe Trp Ser Phe Gly Ser Glu Asp Gly 5 1 5 10 15
Ser Gly Asp Pro Glu Asn Pro Gly Thr Ala Arg Ala Trp Cys Gin Val
Ala GIn Lys Phe Thr Gly Gly lle Gly Asn Lys Leu Cys Ala Leu Leu 10
Tyr Gly Asp Ser Glu Lys Pro Ala Glu Ser Gly Gly Ser Gin Pro Ala 60
Arg Ala Thr Ser Arg Lys Ala Thr Cys Ala Cys Asn GIn Lys Pro Cys 65 70 75 80
Ser Cys Pro Lys Ala Asp Val Asn Tyr Ala Phe Leu His Ala Thr Asp 15 85 90 95
Leu Leu Pro Ala Cys Asp Gly Glu Arg Pro Thr Leu Ala Phe Leu Gin 100 105 110
Asp Val Met Gly lle Leu Leu GIn Tyr Val Val Lys Ser Phe Asp Arg
115 120 125
Ser Thr Lys Val lle Asp Phe His Tyr Pro Asn Glu Leu Leu Gin Glu 130 135 140
Tyr Asn Trp Glu Leu Ala Asp 60 Pro Gin Asn Leu Glu Glu lle Leu 145 150 155 160 5
Met His Cys GIn Thr Thr Leu Lys Tyr Ala lle Lys Thr Gly His Pro 165 170 175
Arg Tyr Phe Asn GIn Leu Ser Thr Gly Leu Asp Met Val Gly Leu Ala 180 185 190
Ala Asp Trp Leu Thr Ser Thr Ala Asn Thr Asn Met Phe Thr Tyr Glu 0 195 200 205 lle Ala Pro Val Phe Val Leu Leu Glu Tyr Val Thr Leu Lys Lys Met 210 215 220
Arg Glu lle lle Gly Trp Pro Gly Gly Ser Gly Asp Gly lle Phe Ser 225 230 235 240 5
Pro Gly Gly Ala lle Ser Asn Met Tyr Ala Met Leu lle Ala Arg Phe 245 250 255
Lys Met Phe Pro Glu Val Lys Glu Lys Gly Met Ala Ala Val Pro Arg 260 265 270
Leu lle Ala Phe Thr Ser Glu His Ser His Phe Ser Leu Lys Lys Gly 275 280 285
Ala Ala Ala Leu Gly lle Gly Thr Asp Ser Val lle Leu lle Lys Cys 290 295 300
Asp Glu Arg Gly Lys Met lle Pro Ser Asp Leu Glu Arg Arg lle Leu 5 305 310 315 320
Glu Ala Lys GIn Lys Gly Phe Val Pro Phe Leu Val Ser Ala Thr Ala 325 330 335
Gly Thr Thr Val Tyr Gly Ala Phe Asp Pro Leu Leu Ala Val Ala Asp 340 345 350 10 lle Cys Lys Lys Tyr Lys lle Trp Met His Val Asp Ala Ala Trp Gly 355 360 365
Gly Gly Leu Leu Met Ser Arg Lys His Lys Trp Lys Leu Ser Gly Val 370 375 380
Glu Arg Ala Asn Ser Val Thr Trp Asn Pro His Lys Met Met Gly Val 15 385 390 395 400
Pro Leu GIn Cys Ser Ala Leu Leu Val Arg Glu Glu Gly Leu Met GIn 405 410 415
Ser Cys Asn GIn Met His Ala Ser Tyr Leu Phe Gin GIn Asp Lys His
420 425 430
Tyr Asp Leu Ser Tyr Asp Thr Gly Asp Lys Ala Leu GIn Cys Gly Arg 435 440 445
His Val Asp Val Phe Lys Leu Trp Leu Met Trp Arg Ala Lys Gly Thr 450 455 460 5
Thr Gly Phe Glu Ala His lle Asp Lys Cys Leu Glu Leu Ala Glu Tyr 465 470 475 480
Leu Tyr Asn lle lle Lys Asn Arg Glu Gly Tyr Glu Met Val Phe Asp 485 490 495
Gly Lys Pro GIn His Thr Asn Val Cys Phe Trp Tyr Val Pro Pro Ser 10 500 505 510
Leu Arg Val Leu Glu Asp Asn Glu Glu Arg Met Ser Arg Leu Ser Lys 515 520 525
Val Ala Pro Val lle Lys Ala Arg Met Met Glu Tyr Gly Thr Thr Met 530 535 540 15
Val Ser Tyr Gln Pro Leu Gly Asp Lys Val Asn Phe Phe Arg Met Val 545 550 555 560 lle Ser Asn Pro Ala Ala Thr His ‏صاى‎ Asp lle Asp Phe Leu lle Glu 565 570 575
— 9 4 —
Glu lle Glu Arg Leu Gly Gin Asp Leu 580 585 <210> 35 <211> 1758 <212> DNA 5 ‏>السنور البري‎ 213< >400< 5 atggcaactc caggctcagg cttttggtcec ttcgggtctg aagatggctc 0000381666 60 gagaaccccg gcacagcgag agcctggtgt caggtggccc agaagttcac gggcggcatc 10 120 ggaaacaagc tgtgcgccct gctctacggg gattcagaga agccggcaga gagtggaggg 180 agccagcccg cgcgggcecac ctcccggaag gecacctgtg cctgtaacca gaagcecttge 240 15 agctgcccca aagcggatgt caactatgcg tttctacacg caacagacct gctgccagcec 300 tgtgatggag aaaggcccac tttggcgttt ctgcaagatg taatgggcat tttgcttcag 360 tatgtggtga aaagtttcga cagatcaacc aaagtgattg atttccatta ccctaatgag 20 420
— 9 5 — ctcctgcaag agtataactg ggaattggca gaccaaccac aaaatttgga ggaaattttg 480 atgcattgcc aaacgactct aaaatatgca ataaaaacag ggcatcccag gtacttcaat 540 caactttcca cgggactgga tatggttgga ttagcagcag actggctgac atcaacagca 5
600 aacactaata tgttcaccta tgaaattgct ccagtatttg tgctcttgga atatgtcaca 660 ctgaaaaaaa tgagagaaat cattggctgg cctgggggct ccggcgatgg gatattttct 720 cctggtggceg ctatatctaa catgtatgcc atgctgattg cacgctttaa gatgttccca 780 10 gaagtcaagg agaaaggaat ggctgctgtt cccaggctca ttgccttcac atccgagcat 840 agtcattttt ctctcaagaa gggagctgca gctctgggga ttggaacaga cagcgtgatt 900 ctgattaaat gcgatgagag agggaaaatg atcccatctg atcttgaaag aaggatcctt 15 960 gaagccaaac agaaaggatt tgttcctttc cttgtgagtg ccacagctgg gaccactgtg 1020 tatggagcat ttgaccccct cttggcggte gctgacattt gcaaaaagta caagatctgg
1080 20 atgcatgtgg atgcagcttg gggtggggga ttactgatgt cccggaaaca caagtggaaa 1140
— 9 6 — ctgagcggceg tggagagggce caactctgtg acatggaacc cacacaagat gatgggcegtc 1200 cccttacagt gctctgcetct cctggttaga gaagaggggt tgatgcagag ttgcaaccag 1260 atgcatgctt cctacctttt ccagcaagat aaacactacg acctgtccta cgacactgga 5 1320 gacaaggcct tacagtgtgg acgccatgtc gatgttttta aattatggct aatgtggagg 1380 gcaaagggca ccactgggtt tgaagcacat attgataagt gcttggagct ggcagaatat 1440 10 ttatacaata tcataaaaaa ccgagaagga tatgaaatgg tgtttgatgg aaagcctcag 1500 cacacaaatg tctgcttctg gtacgtgcct ccaagtttgc gagtcctgga agacaatgaa 1560 gagagaatga gccgcctctc aaaggtggec ccagtgatta aagccagaat gatggagtat 5 1620 gggaccacaa tggtcagcta tcagcccttg ggagacaagg tcaatttctt ccgcatggtc 1680 atctcaaatc ccgcagcaac tcaccaagac attgacttcc tgattgaaga aatagaacgc 1740 20 cttggacaag atttataa 1758 <210> 36
<211> 5 <212> PRT ‏<213>الحصان‎ ‎<400> 6
Met Ala Ser Pro Gly Ser Gly Phe Trp Ser Phe Gly Ser Glu Asp Gly 5 1 5 10 15
Ser Gly Asp Pro Glu Asn Pro Gly Thr Ala Arg Ala Trp Cys Gin Val
Ala GIn Lys Phe Thr Gly Gly lle Gly Asn Lys Leu Cys Ala Leu Leu 10
Tyr Gly Asp Ala Glu Lys Ala Ala Glu Ser Gly Gly Ser Glu Pro Pro 60
Arg Ala Thr Ser Arg Lys Ala Ala Cys Ser Cys Asn Gin Lys Pro Cys 65 70 75 80
Ser Cys Ser Lys Ala Asp Val Asn Tyr Ala Phe Leu His Ala Thr Asp 5 85 90 95
Leu Leu Pro Ala Cys Asp Gly Glu Arg Pro Thr Leu Ala Phe Leu Gin 100 105 110
Asp Val Met Asp lle Leu Leu GIn Tyr Val Val Lys Ser Phe Asp Arg
115 120 125
Ser Thr Lys Val lle Asp Phe His Tyr Pro Asn Glu Leu Leu Gin Glu 130 135 140
Tyr Asn Trp Glu Leu Ala Asp 60 Pro Gin Asn Leu Glu Glu lle Leu 145 150 155 160 5
Met His Cys GIn Thr Thr Leu Lys Tyr Ala lle Lys Thr Gly His Pro 165 170 175
Arg Tyr Phe Asn GIn Leu Ser Thr Gly Leu Asp Met Val Gly Leu Ala 180 185 190
Ala Asp Trp Leu Thr Ser Thr Ala Asn Thr Asn Met Phe Thr Tyr Glu 0 195 200 205 lle Ala Pro Val Phe Val Leu Leu Glu Tyr Val Thr Leu Lys Lys Met 210 215 220
Arg Glu lle lle Gly Trp Pro Gly Gly Ser Gly Asp Gly lle Phe Ser 225 230 235 240 5
Pro Gly Gly Ala lle Ser Asn Met Tyr Ala Met Leu lle Ala Arg Phe 245 250 255
Lys Met Phe Pro Glu Val Lys Glu Lys Gly Met Ala Ala Val Pro Arg 260 265 270
Leu lle Ala Phe Thr Ser Glu His Ser His Phe Ser Leu Lys Lys Gly 275 280 285
Ala Ala Ala Leu Gly lle Gly Thr Asp Ser Val lle Leu lle Arg Cys 290 295 300
Asp Glu Arg Gly Lys Met lle Pro Ser Asp Leu Glu Arg Arg lle Leu 5 305 310 315 320
Glu Ala Lys GIn Lys Gly Phe Val Pro Phe Leu Val Ser Ala Thr Ala 325 330 335
Gly Thr Thr Val Tyr Gly Ala Phe Asp Pro Leu Leu Ala Val Ala Asp 340 345 350 10 lle Cys Lys Lys Tyr Lys lle Trp Met His Val Asp Ala Ala Trp Gly 355 360 365
Gly Gly Leu Leu Met Ser Arg Lys His Lys Trp Lys Leu Ser Gly Val 370 375 380
Glu Arg Ala Asn Ser Val Thr Trp Asn Pro His Lys Met Met Gly Val 15 385 390 395 400
Pro Leu GIn Cys Ser Ala Leu Leu Val Arg Glu Glu Gly Leu Met GIn 405 410 415
Ser Cys Asn GIn Met His Ala Ser Tyr Leu Phe Gin GIn Asp Lys His
420 425 430
Tyr Asp Leu Ser Tyr Asp Thr Gly Asp Lys Ala Leu GIn Cys Gly Arg 435 440 445
His Val Asp Val Phe Lys Leu Trp Leu Met Trp Arg Ala Lys Gly Thr 450 455 460 5
Thr Gly Phe Glu Ala His lle Asp Lys Cys Leu Glu Leu Ala Glu Tyr 465 470 475 480
Leu Tyr Asn lle lle Lys Asn Arg Glu Gly Tyr Glu Met Val Phe Asp 485 490 495
Gly Lys Pro GIn His Thr Asn Val Cys Phe Trp Tyr Val Pro Pro Ser 10 500 505 510
Leu Arg Val Leu Glu Asp Asn Glu Glu Arg Met Ser Arg Leu Ser Lys 515 520 525
Val Ala Pro Val lle Lys Ala Arg Met Met Glu Tyr Gly Thr Thr Met 530 535 540 15
Val Ser Tyr Gln Pro Leu Gly Asp Lys Val Asn Phe Phe Arg Met Val 545 550 555 560 lle Ser Asn Pro Ala Ala Thr His ‏صاى‎ Asp lle Asp Phe Leu lle Glu 565 570 575
Glu lle Glu Arg Leu Gly 60 Asp Leu 580 585 <210> 7 <211> 1758 <212> DNA 5 ‏<213>الحصان‎ ‎<400> 7 atggcatctc ccggctecgg ctittggtce tttgggtctg aagatggctc 0999316-66 60 gagaaccctg gcacagcgag agcctggtgt caggtggccc agaagttcac cggcggcatc 120 10 ggaaacaagc tatgcgccct gctctacgga gacgccgaga aggcggcgga 080000 180 agcgagcccc cgecgggcecac ctcccggaag gecgcectget cctgcaacca gaagcecctge 240 agctgctcca aagccgatgt caactatgcg tttctacacg caacagactt gctgccaget 5 300 tgtgacggag aaagacccac tttggcgttt ctgcaagatg ttatggacat tttgcttcag 360 tatgtggtga aaagtttcga tagatcaacc aaagtgattg acttccatta ccctaatgag 420 20 ctccttcaag agtataattg ggaattggca gaccaaccac aaaatctgga ggaaattttg 480 atgcattgcc aaacaacttt aaaatatgca attaaaacag ggcatcctag atatttcaat 540 caactttcca ctggactgga tatggttgga ttagcagcag actggctgac atcaacagca 5
600 aacaccaaca tgttcaccta tgaaattgct ccagtattcg tgcttttgga atatgtcaca 660 ttaaagaaaa tgagagaaat cattggctgg ccaggaggct ctggcgatgg aatattttct 720 cctggtggceg ccatatctaa catgtatgcc atgctgattg cacgctttaa gatgttccca 0 780 gaagtcaagg agaaaggaat ggccgctgtt cccaggctca ttgccttcac gtctgagcat 840 agtcattttt ctctcaagaa gggagctgca gccttgggga ttggaacaga cagcgtaatt
900 15 ctgattagat gtgatgagag ggggaaaatg atcccatcgg atcttgaaag aagaatcctt 960 gaagccaaac aaaaaggatt tgtccctttt cttgtgagtg ccacggctgg gaccaccgtg 1020 tatggagcat tcgatcccct cttagctgtc gctgacattt gcaaaaagta caagatctgg 20 1080 atgcatgtgg atgcagcttg gggcggggga ttactgatgt cccggaaaca caagtggaaa 1140 ctgagtggcg tggagagggc caactctgtg acatggaatc cacacaagat gatgggtgtc 1200 cctttgcagt gcetctgcetcet cctggttaga gaagagggat tgatgcagag ttgcaaccag 5 1260 atgcatgcct cctacctctt tcagcaagat aaacactatg acctgtccta tgacactgga 1320 gacaaggcct tgcagtgcgg acgccacgtg gatgttttta agttatggct catgtggagg 1380 10 gcaaagggaa caactgggtt tgaagcacat attgataagt gtttggagtt ggcggagtat 1440 ttatacaata tcataaaaaa ccgagaagga tatgaaatgg tgtttgacgg aaagcctcag 1500 cacaccaatg tctgcttctg gtatgtacct ccgagtctge gtgttctaga agacaatgaa 15 1560 gagagaatga gccgcctctc aaaggtggcc ccggtgatta aagccagaat gatggagtat 1620 gggaccacaa tggtcagcta ccagcccttg ggagacaagg tcaatttctt ccgcatggtc 1680 20 atctcaaatc ccgcagcaac tcaccaagac attgacttcc tgattgaaga aatagaacgc 1740 cttggacaag atttataa 1758 <210> 38 <211> 181 <212> PRT ‏<213>الذئب الرمادي‎ 5 <400> 38
Met His Gly Ser Ala Leu Leu Cys Cys Cys Leu Val Leu Leu Ala Gly 1 5 10 15
Val Gly Ala Ser Arg His GIn Ser Thr Leu Leu Glu Asp Asp Cys Thr 10
His Phe Pro Ala Ser Leu Pro His Met Leu Arg Glu Leu Arg Ala Ala
Phe Gly Arg Val Lys lle Phe Phe ‏ما‎ Met Lys Asp Lys Leu Asp Asn 60 lle Leu Leu Thr Gly Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Ser Tyr Leu Gly 5 65 70 75 80
Cys GIn Ala Leu Ser Glu Met lle Glin Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met 85 90 95
Pro Arg Ala Glu Asn His Asp Pro Asp lle Lys Asn His Val Asn Ser
100 105 110
Leu Gly Glu Lys Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg 115 120 125
Cys His Arg Phe Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu GIn 130 135 140 5
Val Lys Ser Ala Phe Ser Lys Leu GIn Glu Lys Gly Val Tyr Lys Ala 145 150 155 160
Met Ser Glu Phe Asp lle Phe lle Asn Tyr lle Glu Thr Tyr Met Thr 165 170 175
Met Arg Met Lys lle 0 180 <210> 39 <211> 546 <212> DNA ‏<213>الذئب الرمادي‎ 15 <400> 9 atgcatggct cagcactgct ctgttgctgc ctggtcctce tggeccggggt gggagecagce 60 cgacaccaga gcaccctact tgaggacgac tgcacccact tcccagccag 010660086 120 atgctccgag agctccgagc tgccttcggg agggtgaaga tcttctttca aatgaaggac 180 aagctggaca acatactgct gaccgggtcc ctgctggagg actttaagag ttacctgggt 5 240 tgccaagccc tgtcggagat gatccagttt tacttggagg aggtgatgcc ccgggcetgag 300 aaccacgacc cagacatcaa gaaccacgtg aactccctgg gagagaagct caagaccctc 360 10 aggctgagac tgaggctgcg acgctgtcac cgatttcttc cctgtgagaa taagagcaag 420 gcggtggagce aggtgaagag cgcatttagt aagctccagg agaaaggtgt ctacaaagcc 480 atgagtgagt ttgacatctt catcaactac atagaaacct acatgacaat gaggatgaaa 15 540 atctga 546 <210> 40 <211> 178 <212> PRT 20 ‏>السنور البري‎ 213<
<400> 40
Met His Ser Ser Ala Leu Leu Cys Phe Leu Val Phe Leu Ala Gly Val 1 5 10 15
Gly Ala Ser Arg His 60 Ser Thr Leu Ser Glu Asp Asn Cys Thr His 5
Phe Ser Val Ser Leu Pro His Met Leu Arg Glu Leu Arg Ala Ala Phe
Gly Lys Val Lys Thr Phe Phe GIn Thr Lys Asp Glu Leu His Ser lle 60
Leu Leu Thr Arg Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys 0 65 70 75 80
Gln Ala Leu Ser Glu Met lle GIn Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro 85 90 95
Gln Ala Glu Asn Glu Asp Pro Asp lle Lys GIn His Val Asn Ser Leu 100 105 110 15
Gly Glu Lys Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg 115 120 125
Phe Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Val Val Glu 60 Val Lys Ser 130 135 140
Thr Phe Ser Lys Leu GIn Glu Lys Gly Val Tyr Lys Ala Met Gly Glu 145 150 155 160
Phe Asp lle Phe lle Asn Tyr lle Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Met 165 170 175
Lys lle 5 <210> 41 <211> 537 <212> DNA <213 >السنور البري 1 >400< ‎atgcacagct cagcacttct gtgtttcctg gtcttcctgg ccggggtagg agccagcecga‏ 60 ‎caccagagca ccctgtctga ggacaactgc acccacttct cagtcagcct gccccacatg‏ 120 15 ctccgagagc tccgagcetge cttcggcaag gtgaagactt tctttcaaac caaggacgag 180 ctgcacagca tattgttgac caggtccttg ctggaggact ttaagggtta cctgggttgc 240 caagccttgt ccgagatgat ccagttttat ttggaggagg tgatgcccca ggctgagaac 300 gaggacccag acatcaaaca gcacgtgaac tccctgggag aaaagctgaa gaccctccgg 360 ctgagactgc ggcgctgtca tcgatttctg ccctgtgaaa acaagagcaa ggtggtggag 5 420 caggtgaaga gtacctttag taagctccaa gagaaaggtg tctacaaagc catgggtgag 480 tttgacatct tcatcaacta catagaagct tacatgacaa tgaagatgaa aatctga 537 10 <210> 42 <211> 178 <212> PRT <213>الحصان <400> 42 5
Met His Ser Ser Ala Leu Leu Cys Tyr Leu Val Phe Leu Ala Gly Val 1 5 10 15
Gly Ala Ser Arg Asp Arg Gly Thr Glin Ser Glu Asn Ser Cys Thr His
Phe Pro Thr Ser Leu Pro His Met Leu His Glu Leu Arg Ala Ala Phe 20
Ser Arg Val Lys Thr Phe Phe ‏ماى‎ Met Lys Asp Gin Leu Asp Asn Met 60
Leu Leu Asn Gly Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys 65 70 75 80 5
Gln Ala Leu Ser Glu Met lle GIn Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro 85 90 95
Gln Ala Glu Asn His Gly Pro Asp lle Lys Glu His Val Asn Ser Leu 100 105 110
Gly Glu Lys Leu Lys Thr Leu Arg Val Arg Leu Arg Arg Cys His Arg 0 115 120 125
Phe Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu 60 Val Lys Ser 130 135 140
Ala Phe Ser Lys Leu GIn Glu Lys Gly Val Tyr Lys Ala Met Ser Glu 145 150 155 160 15
Phe Asp lle Phe lle Asn Tyr lle Glu Ala Tyr Met Thr Thr Lys Met 165 170 175
Lys Asn
<210> 3 <211> 7 <212> DNA ‏<213>الحصان‎ ‎>400< 43 5 atgcacagct cagcactgct atgttacctg gtcttcctgg ccggggtggg agccagecga 60 gaccggggca cccagtctga gaacagctgc acccacttcc caaccagcect geccccacatg 120 ctccatgagc tccgagccgce cttcagcagg gtgaagactt tctttcaaat gaaggaccag 10 180 ctggacaaca tgttgttgaa cgggtccctg ctggaggact ttaagggtta cctgggttge 240 caagccttgt cggagatgat ccagttttac ctggaggagg tgatgcccca ggctgagaac 300 15 cacggcccag acatcaagga gcacgtgaac tccctggggg aaaagctgaa gaccctccga 360 gtgaggctgc ggcgctgtca tcgatttctg ccctgtgaaa ataagagcaa ggcagtggag 420 caggtgaaga gtgccttcag taagctccaa gagaaaggtg tctacaaagc catgagtgag 20 480 tttgacatct tcatcaacta catagaagcc 1312103038 cgaagatgaa aaactga 537 <210> 44 <211> 185 <212> PRT 5 ‏<213>الذئب الرمادي‎ <400> 44
Met Lys Leu Trp Asp Val Val Ala Val Cys Leu Val Leu Leu His Thr 1 5 10 15
Ala Ser Ala Leu Pro Leu Pro Ala Ala Asn Val Pro Glu Asp Tyr Ser 10
Asp GIn Phe Asp Asp Val Met Asp Phe lle Gin Ala Thr lle Arg Arg
Leu Lys Arg Ser Pro Glu Lys GIn Met Ala Val Pro Ala Arg Arg Glu 60 15
Arg Asn Arg GIn Ala Ala Ala Ala Gly Pro Glu His Ser Arg Gly Lys 65 70 75 80
Gly Arg Arg Gly Pro Arg Gly Arg Asn Arg Gly Cys Val Leu Thr Ala 85 90 95 lle His Leu Asn Val Thr Asp Leu Gly Leu Gly Tyr Glu Thr Lys Glu 100 105 110
Glu Leu lle Phe Arg Tyr Cys Ser Gly Ser Cys Asp Ala Ala Glu Thr 115 120 125
Met Tyr Asp Lys lle Leu Lys Asn Leu Ser Lys Ser Arg Arg Leu Ala 5 130 135 140
Ser Asp Lys Ala Gly Gin Ala Cys Cys Arg Pro lle Ala Tyr Asp Asp 145 150 155 160
Asp Leu Ser Phe Leu Asp Asp Asn Leu Val Tyr His lle Leu Arg Lys 165 170 175 10
His Ser Ala Lys Arg Cys Gly Cys lle 180 185 <210> 45 <211> 558 <212> DNA 15 <213>الذئب الرمادي >400< ‎atgaagttat gggatgtcgt ggctgtctge ctggtgctge tccacaccge gtccgececte‏ 60
0001000609 ccgcaaacgt gccggaggac tattctgatc agtttgatga cgtcatggat 120 tttattcagg ccaccatcag aaggctgaaa aggtcacccg agaaacaaat ggccgtgcca 180 gcgagacgag agcggaatcg tcaggccgceg geccgecggec cggaacattc cagggggaag ‏م‎
240 gggcggcgag gcccgagggg cagaaaccgg ggttgtgtcet tgactgcgat acatttaaac 300 gtcactgacc tgggcttggg ctacgaaacc aaggaggaac tgatttttag gtactgcagce
360 10 ggctcctgeg acgcggecga gaccatgtac gacaaaatat taaaaaactt atccaaaagt 420 agaaggctgg cgagtgacaa agcagggcag gcttgctgca gacccatcgce ctacgatgac 480 gacctgtcgt ttttagatga caacctggtt taccatattc taagaaagca ttccgctaaa 540 15 aggtgtggat gtatctga 558 <210> 46 <211> 1 <212> PRT
<13 >السنور البري 6 >400<
Met Lys Leu Trp Asp Val Val Ala Val Cys Leu Val Leu Leu His Thr 1 5 10 15
Ala Ser Ala Phe Pro Leu Pro Ala Gly Lys Arg Pro Pro Glu Ala Pro
Ala Glu Asp Arg Ser Leu Gly Arg Arg Arg Ala Pro Phe Ala Leu Ser 5
Ser Asp Ser Asn Met Pro Glu Asp Tyr Pro Asp Gln Phe Asp Asp Val 60
Met Asp Phe lle Gin Ala Thr lle Arg Arg Leu Lys Arg Ser Pro Glu 65 70 75 80 10
Lys GIn Met Ala Leu Pro Pro Arg Arg Glu Arg Asn Arg Gin Ala Ala 85 90 95
Ala Ala Asn Pro Glu Asn Ser Arg Gly Lys Gly Arg Arg Gly Gin Arg 100 105 110
Gly Arg Asn Arg Gly Cys Val Leu Thr Ala lle His Leu Asn Val Thr 5 115 120 125
Asp Leu Gly Leu Gly Tyr Glu Thr Lys Glu Glu Leu lle Phe Arg Tyr 130 135 140
Cys Ser Gly Ser Cys Asp Ala Ala Glu Thr Met Tyr Asp Lys lle Leu
145 150 155 160
Lys Asn Leu Ser Lys Asn Arg Arg Leu Val Ser Asp Lys Val Gly 0 165 170 175
Ala Cys Cys Arg Pro lle Ala Tyr Asp Asp Asp Leu Ser Phe Leu Asp 180 185 190 5
Asp Asn Leu Val Tyr His lle Leu Arg Lys His Ser Ala Lys Arg Cys 195 200 205
Gly Cys lle 210 <210> 47 10 <211> 636 <212> DNA ‏<213>السنور البري‎ <400> 7 2108891181 gggatgtcgt ggctgtctge ctggtgctge tccacaccgce 91060016 60 15 ccgctgeccg ccggtaagag gcectccecgag gegececgecg aagaccgcte cctcggecge 120 cgccgegcegce ccttcgeget gagcagtgac tcaaatatge cagaggatta tcctgatcag 180 tttgacgacg tcatggattt tattcaagct accatcagaa gactgaaaag gtcacccgag 240 aaacaaatgg ccttgccgcc tagaagagag cggaatcggc aggcggecggce cgccaacccg 300 gagaattcca gagggaaagg tcggcgaggc cagaggggca gaaatcgggg ttgtgtctta 5 360 actgcgatac atttgaacgt caccgacctg ggtttgggct acgaaaccaa ggaggaactg 420 atttttaggt actgcagcgg ctcctgtgat gcagctgaga caatgtacga caaaatatta 480 10 aaaaacttat ccaaaaacag aaggctggtg agtgacaaag tcgggcaggc atgttgcaga 540 cccatcgcect atgacgacga cctgtegttt ttagatgaca acctggttta ccatattcta 600 agaaagcatt ccgctaaaag gtgtggatgt atctga 636 <210> 48 15 <211> 185 <212> PRT ‏<213>الحصان‎ ‎>400< 8
Met Lys Leu Trp Asp Val Val Ala Val Cys Leu Val Leu Leu His Thr 20 1 5 10 15
Ala Ser Ala Phe Pro Leu Pro Ala Ala Asn Met Pro Glu Asp Tyr Pro
Asp GIn Phe Asp Asp Val Met Asp Phe lle Gin Ala Thr lle Lys Arg
Leu Lys Arg Ser Pro Asp Lys Gin Met Ala Val Leu Pro Arg Arg Glu 5 60
Arg Asn Arg GIn Ala Ala Ala Ala Asn Pro Glu Asn Ser Arg Arg Lys 65 70 75 80
Gly GIn Arg Gly 60 Arg Gly Lys Asn Arg Gly Cys Val Leu Thr Ala 85 90 95 10 lle His Leu Asn Val Thr Asp Leu Gly Leu Gly Tyr Glu Thr Lys Glu 100 105 110
Glu Leu lle Phe Arg Tyr Cys Ser Gly Ser Cys Glu Ala Ala Glu Thr 115 120 125
Met Tyr Asp Lys lle Leu Lys Asn Leu Ser Lys Asn Arg Arg Leu Val 15 130 135 140
Ser Asp Lys Val Gly Gln Ala Cys Cys Arg Pro lle Ala Phe Asp Asp 145 150 155 160
Asp Leu Ser Phe Leu Asp Asp Asn Leu Val Tyr His lle Leu Arg Lys
165 170 175
His Ser Ala Lys Arg Cys Gly Cys lle 180 185 <210> 49 <211> 558 5 <212> DNA ‏<213>الحصان‎ >400< 9 2108891181 gggatgtcgt ggctgtctge ctggtgctge tccacaccgce 91060016 60 ccgctgcccg ccgcaaatat gccagaggat tatcctgatc agtttgatga tgtcatggat 10 120 tttattcaag ccaccattaa aagactgaaa aggtcaccag ataaacaaat ggcagtgctt 180 cctagaagag agcggaatcg gcaggctgca gctgccaacc cggagaattc cagaaggaaa 240 15 ggtcagcgag gccagagggg caaaaaccgg ggttgtgtct taaccgcgat acatttaaat 300 gtcactgact tgggtttggg ctacgaaacc aaggaggaac tgatttttag gtactgcagt 360 ggctcctgcg aggcagcecga gacaatgtac gacaaaatat taaaaaactt atccaaaaat 0 420 agaaggctgg tgagtgacaa agtagggcag gcatgttgca gacccatcgc cttcgatgac 480 gacctgtcat ttttagatga taacttggtt taccatattc taagaaagca ttccgctaaa 540 aggtgtggat gtatctga 558

Claims (1)

  1. عناصر الحمابة 1- تركيبة صيدلانية للاستخدام في تخفيف أو علاج الألم تشتمل على اثنين أو أكثر مختارين من المجموعة التي تتكون من جين مشفر لنازعة كريوكسيل الجلوتامات ‎(GAD)‏ جين مشفر لإنترليوكين-10 ‎¢(IL=10)‏ وجين مشفر لعامل تغذوي عصبي مشتق من خلية دبقية (60117). 2- التركيبة الصيدلانية وفقاً لعنصر الحماية 1؛ حيث يكون الجين في شكل قابل للعمل موجود في ناقل. 3- التركيبة الصيدلانية وفقاً لعنصر الحماية 2( حيث يكون الناقل ناقل فيروسي واحد على الأقل مختار من المجموعة التي تتكون من فيروس غدي؛ فيروس مرتبط بالفيروس الغدي؛ فيروس 0 الهربس البسيطء الفيروسة البطيئة؛ الفيروس القهقري؛ فيروس الجدري. 4- التركيبة الصيدلانية وفقاً لعنصر الحماية 2؛ حيث يكون الناقل ناقل غير فيروسي واحد على ‎JY‏ مختار من المجموعة التي تتكون من بلازميد؛ جسيم دهني؛ بوليمر كاتيوني؛ مذيلة؛ مستحلب»؛ وجسيمات نانوية دهنية صلبة.
    5- التركيبة الصيدلانية وفقاً لعنصر الحماية 1؛ حيث يكون ‎GAD‏ هو 6/065 أو 6067. 6- التركيبة الصيدلانية وفقاً لعنصر الحماية 1؛ ‎Gun‏ يكون الجين المشفر ل ‎GAD‏ هو متوالية النيوكليوتيد المشفرة لمتوالية الحمض الأميني الممثلة بالمتوالية بهوية رقم: 1» المتوالية بهوية ‎ad)‏ ‏0 4: المتوالية بهوية رقم: 32( المتوالية بهوية رقم: 34 أو المتوالية بهوية رقم: 36. 7- التركيبة الصيدلانية وفقاً لعنصر الحماية 1؛ ‎Gun‏ يكون الجين المشفر ل ‎GAD‏ هو متوالية النيوكليوتيد الممثلة بالمتوالية بهوية رقم: 2؛ المتوالية بهوية رقم: 3( المتوالية بهوية رقم: 5؛ المتوالية بهوية رقم: 33( المتوالية بهوية رقم: 35 أو المتوالية بهوية رقم: 37.
    8- التركيبة الصيدلانية وفقاً لعنصر الحماية 1؛ حيث يكون الجين المشفر لإنترليوكين-10 هو متوالية النيوكليوتيد المشفرة لمتوالية الحمض الأمينى الممثلة بالمتوالية بهوية رقم: 6 المتوالية بهوية رقم: 9< المتوالية بهوية رقم: 38( المتوالية بهوية رقم: 40 أو المتوالية بهوية رقم: 42. 9- التركيبة الصيدلانية وفقاً لعنصر الحماية 1؛ حيث يكون الجين المشفر لإنترليوكين-10 هو
    متوالية النيوكليوتيد الممثلة بالمتوالية بهوية رقم: 7 المتوالية بهوية رقم: 8؛ المتوالية بهوية رقم: 0 المتوالية بهوية رقم: 14( المتوالية بهوية رقم: 39( المتوالية بهوية رقم: 41 أو المتوالية بهوية رقم: 43
    0 10- التركيبة الصيدلانية وفقاً لعنصر الحماية 1 حيث يكون الجين المشفر ل ‎GDNF‏ هو متوالية النيوكليوتيد المشفرة لمتوالية الحمض الأميني الممثلة بالمتوالية بهوية رقم: 11( المتوالية بهوية رقم: 4 المتوالية بهوية رقم: 46 أو المتوالية بهوية رقم: 48. 1- التركيبة الصيدلانية وفقاً لعنصر الحماية 1 حيث يكون الجين المشفر ل ‎GDNF‏ هو متوالية
    النيوكليوتيد الممثلة بالمتوالية بهوية رقم :12 المتوالية بهوية رقم : 13 المتوالية بهوية رقم : 45 المتوالية بهوية رقم: 47 أو المتوالية بهوية رقم: 49. 2- التركيبة الصيدلانية وفقاً لعنصر الحماية 1؛ حيث يكون الألم هو ألم مستقبلة الأذية؛ ألم نفسى؛ ألم التهابى ‘ ألم ‎(raya‏ ألم اعتلال ‎(ac‏ ألم سرطان ألم ما يعد الجراحة؛ ألم العصب
    0 الثلاثي التوائم؛ ألم مجهول السبب؛ ألم اعتلال الأعصاب السكري؛ أو صداع نصفي. 3- التركيبة الصيدلانية وفقاً لعنصر الحماية 1 حيث تشتمل التركيبة الصيدلانية كذلك على حامل مقبول فسيولوجياً.
    5 14- التركيبة الصيدلانية وفقاً لعنصر الحماية 1؛ حيث تكون التركيبة الصيدلانية عبارة عن حقن.
    3 8 ‏الات‎ i ¥ i 3 x x = : ‏د‎ : 3 2 f ¥ 3 i oF E 3 k ] : ¥ 3 i k 3 3 : : rr : £3 3 : i Fa : a 1 1 : Ray 3 Ee) ‏ب‎ : : aN ; TF ‏المسسسسية‎ ‎BARRERA 3 = y 8 FRE ‏اجا د‎ 8 ‏اي جا = 3 ال‎ 8 BRR ON 3 > Sang : fala 5 EEA : Ea 3 we buhay E + Ee E 3 SNR RR 3 3 aE : : ‏ا‎ : NE 8 ‏إ: ا ا‎ ‏اح ارد جم جح جد ال‎ 8 ‏ادج مكار‎ 3 aN X ‏ا‎ 3 REN 8 AREY 8 1 ‏ا‎ * a X eee 3 pring x aes i = 3 F oF = 0% w= ‏له‎ ‎% ‏انين‎ *
    (Y) ‏الشكل‎
    ب
    ‏ض‎ ‎Poy ‎aay ‎ ‎Po ‏م‎ ‏ا‎ 3 ( ‏ا‎ 3 by Finn 1 i = 1 wd RNasin ‏بيع‎ ‏ال‎ ٌ ‏ب ال‎ = a SE ¥ <5 RENEE : Lo 4 [ ‏ا‎ i : ‏ا‎ fe 8 £ La ‏ال‎ ‎Pd ‎ENE ‏الم‎
    3
    يل ‎١ oe 3‏ 9
    , 5
    1 ٠ ) ‏خخ‎ i ‏ا‎ ‏الخ‎ ‏د‎ ‏ا إٍ‎ 0 a aaa Fo ER Pony Bg 0 $ a 3 Rw Ty < ‏ا ا‎ 0 ‏امح‎ 5 ‏ل‎ 2 Paid ¥ Ra SEE : ‏التي اا م‎ : PR = : ‏ال خخ‎ ‏ل‎ ‎Pay od SR Sa 3 Fa ‏م‎ ‏ا‎ ‎aS ‎Ta
    ِ 0 119 ض 79 »
    8 ‏الب لشكا‎ { 7 5 13 : ‏إ‎ 2 3 ‏أ‎ per] 1: = 3 © ‏ال‎ ‎(FI) ‏تتم‎ ‏يه |ه‎ ’ Ba NANA 1 § eee GADSS ‏كيلودالتوت)‎ 10) wy 1B = ST PAT wd 3 2 3 = C 8 > ‏بق‎ ‎TT ‎Yolo ٠. 2 ‏لا‎ ‎der TLIO (OEY 4 (=) 3 i 2 2 8 x 3 © ‏الثوت)‎ gh ST) ‏متت ص‎ ‏د‎ ‎Yai + ‏صلا‎ ‎| ‏ريح تي‎ (Cag ‏؟‎ +(
    4 Fo ow ES ( 5 ) 3 = { 4 7 1 " 0 - RK FRE 0 ‏اتيج ليق‎ 8 = + 5 ‏الت‎ : : ‏ا م 5 8 ادا ا‎ ‏لطا الا‎ Ll 0 ‏بط‎ « 10 IIs ¥ ¥ : . ¥ 3 8 : ¥ : 3 + ‏اج‎ 8 & 8 3 : ‏ل ا‎ ‏ام‎ FE § 7 8 ¥ 3 ¥ 3 Ua Sua \ ‏الأ ا‎ oi ‏34خ‎ 3 3 3 ud wd La obs ‏؟‎ * + 0 : 8 at ow ¥ 4 3 ¥ 3 ¥ 3 uy 3 § A i ¥ RRR 8 ¥ 3 ¥ 3 ¥ 3 ¥ 3 ¥ 3 ¥ 3 ¥ 3 ¥ 3 ¥ 3 ¥ 3 ¥ 3 ¥ 3 ¥ 3 i ‏الا‎
    ‏.يلقع 3 } ب‎ x i & 0) F * Ani ١ wk : 2% 3 0 N ‏الت‎ oe ‏جاحلا لا لا للا له لا للا لا لاطا للا لا لا للا ما ل ملالا لا لا لا ل لا لا ل لا لل لحلا اح‎ + 5 + ‏اا ا‎ “ CREE ‏ماك‎ 3 3 5 i. 13 oR = 3 + ‏ب‎ 8 . a ‏ا‎ i i +4 3 § al x 3 La x 3 : x 3 ; x 3 : 8 x ‏ام‎ ¥ . SA : 8 ‏م ل‎ i TO ¥ & i CW ga 0 | F fot Gt oh 5 ‏الخ‎ i % : 3 “8 5 3 & 3 & 3 & 3} & 3] 3 & 3 & 3 & 3 & 3 & 3 & 3 & 3 & 5 } & 3] 3 & 3 5 een
    (Vv) ‏الشكل‎ ‎5 ‎E ‎8 ) uy thy © ‏(ب)‎ = 8 a 5 ya 3 4 A 8 > 3 > 1 3 3 3 ‏(كيلودالتون) | | (كيلودالتون)‎ Vole, ‏بيه‎ & 1 ‏م‎ . Ma § i Fe {3ADESR 85 ‏كيلودالدون) ( 15 كيلودالتون)‎ 10] {>} @ 3 (3) ‏ام‎ ‎ol 4 © 8" 3 3 3 ‏(كيلودالتون) | | (كيلودالتوت)‎ vo i ْ ‏ب‎ * Ys | ‏يسو ؤ‎ ‏م | ولا‎ = Rat IL1D GONE ‏كيلودالتون)‎ Yu} ‏كيلودالتون)‎ ¥
    الشكل ‎(MN)‏ ‎YE say‏ 13( ‎or! ¥ Fok Ee ِ‏ . صسس>>" ‎WU © se‏ ‎K Yaa an 1‏ : ٍ ا وبع > خلايا معالجة ب ‎AAV-GADGS‏ خلايا طبيعية عه ّ ما ااا زب : ب ‎“ahead‏ ‏==< ‎iis —‏ د عاج أ ‎Sol ===‏ : ٍْ را وم ا ا أ . | ٍ + اج 3 * ؟ 8 ‎Yel 8‏ ] | + خلايا معالجة ب ‎AAV GAD6GS-modi‏ خلايا طبيعية .
    1 3 8 5 X : { 4 } ‏ا لشكل‎ ‏ا‎ * 1 ‏الم ساق‎ ْ oF Yn 3 % i } * ‏جيهي‎ i : + ‏اج ض‎ 1 eo ‏لم ا‎ mm BE NN ‏احج | لح حنم لح نذا‎ ¥ ‏لحت‎ Ba Sa = NN J ‏ا للش‎ 0 BE NN 7 Ll BEN yr ‏اجججحت 8 ميد لا‎ A ‏ججججججب‎ BR > RR aa ‏ا ججحب‎ : x > X ‏ا : ججحب‎ BAY HAY HAY AAV. | ‏يعم‎ BAN ‏لج عر‎ GFR GADSS ‏جيدةة‎ GDNF SADDER I-10 oo + # Hd GONE GDNF + SEP ck ont 0 ‏ع“‎ ‎3 Dey vege ¢ $ : 5 : ‏إ‎ ‎3 * ١0 34 ‏«م‎ 5 = Too ee ‏مواد‎ : x iy ‏لحت‎ Ra : ًُ ‏ا د‎ —- ‏بسنب‎ 22 ES Baan ‏ع‎ BB BB ْ 2, Le. ‏ل‎ oa Th ‏ل ا ا ال ا‎
    ABM. ‏مم ممم‎ AAV AAV- ‏مجبوعة‎ ‎GFP SADSS ‏تخي‎ GDNF ‏جكؤضحء‎ 3 + ‏طبيعية‎ ‏ما‎ PEE ot ‏هين‎ 9 ‏هد‎ ‎GONE
    (VY) ‏الشكل‎ ‎+“ ‏ض‎ *
    + . + 1 | * 3 3 | * Sl - | LL. ‏لأا‎ - 4 ‏كد ده‎ \ a 0 | i = X
    I.E NN ee. AAV- AAV. ‏مهم‎ AAV. ‏مجموعة‎ ‎GFF GADSS ‏ممه‎ GADSS i. + + + © GDNF GDNF 1-0 go ‏اتز+خدة و«‎ GDNF
    (VY) ‏الشكل‎ ‎A & } & I :
    341. ‏ض‎ ‏اج أ و‎ N : ® AANA
    3 . i nn MON I 1 Ie 5 ‏على ل اج‎ EE N § | | 2) B= ml VL EN PVAX1 pAAV- pAAV- pAAV- pAAV- AAV. ‏مجبيعة‎ ‎GADES 1-10 GONF GADSS 1-10 i. + GDNF GDNF Fad ‏ل سن‎
    4 i = x § (YF) ‏الشكل‎ ‎٠ ‎1 - ro | &
    = .7 نا ‎٠‏ 3 ‎BR‏ ل سب | 3 ‎Breed EE | |‏ سسب | 4 ‎poe Ee a 1‏ | 7 0 ا م 0 ال ‎a = ْ‏ 3 اع ‎ge‏ | ب ; | الست ي تيا - ؟ 0 : إْ ْ ; 0 ا ل إٍْ ; ‎NT Ea london‏ 4 اا ل لا ‎pVAXL pAAV- pAAV- pAAV- pAAV- ‏مجبوعة‎ ‎GADSS I-10 GONF GADSS ‏بزية‎ ‎+ 3 1-10 # GDNF ‏وك‎ sp
    الشكل ‎)١4(‏ ‏ل ‏اع ‎١‏ ‏* ذ ب ض 3 :ْ : § ممم 1 ا ض ‎٠.‏ 1 0 * | 3 ‎o a Bn‏ 1 ‎od‏ | حب ذا تح : ‎i‏ ‎od‏ | > :| : = ‎La ARN | | Cd‏
    ‎Ra. ARR : : :‏ : 0 | لح جح »د - للا ‎Ra ] ] :‏ الس 1 ‎ali a NAN | 0‏ ‎Cd‏ : 8 ال : : ‎k Ra EN RRR 3 3 3‏ : سس 0 لج سس ‎wd‏ + pVAXL pAAV. pAAV. pAAV. ‏مجموعة‎ GAD6S ‏قتعلا‎ GADES ‏طبعية‎ 4 ‏مم‎ + GDNF GDNF 1-0 GDNF LE ‏ترد‎
    (Yo) ‏الشكل‎ ‎* ‎¥ 3 : ® = 3 fod oT 3 ‏ض‎ * “TT ; ‏ض 7 ض‎ ‏الى لحار الى‎ ٍ ‏لحري‎ ٍ 1 ESPN . & oy iE WD & > . SOON a COON 3 y ‏ا ض‎ ٍ ‏انا‎ LI _* *« SEN ; [XXX ‏للا‎ RK ً + ‏بي المح ماقا ا‎ 1 ; ‏مجموعة‎ AAV- AAV ‏مجموعة‎ ‏طبيعية توق حضطفقة ضابطة‎ 4 modi L-10 + + GONF- GDNF 1-10 vr @nEp
    الحاضهة الهيلة السعودية الملضية الفكرية ‎Swed Authority for intallentual Property pW‏ ‎RE‏ .¥ + \ ا 0 § ام 5 + < ‎Ne‏ ‎ge‏ ”بن اج > عي كي الج دا لي ايام ‎TEE‏ ‏ببح ةا ‎Nase eg‏ + ‎Ed - 2 -‏ 3 .++ .* وذلك بشرط تسديد المقابل المالي السنوي للبراءة وعدم بطلانها ‎of‏ سقوطها لمخالفتها ع لأي من أحكام نظام براءات الاختراع والتصميمات التخطيطية للدارات المتكاملة والأصناف ع النباتية والنماذج الصناعية أو لائحته التنفيذية. »> صادرة عن + ب ب ‎٠.‏ ب الهيئة السعودية للملكية الفكرية > > > ”+ ص ب ‎101١‏ .| لريا ‎1*١ uo‏ ؛ المملكة | لعربية | لسعودية ‎SAIP@SAIP.GOV.SA‏
SA519401667A 2016-10-31 2019-04-28 تركيبة لتخفيف الألم أو علاجه SA519401667B1 (ar)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR20160143519 2016-10-31
PCT/KR2017/012136 WO2018080277A1 (ko) 2016-10-31 2017-10-31 통증 완화 또는 치료용 조성물

Publications (1)

Publication Number Publication Date
SA519401667B1 true SA519401667B1 (ar) 2023-01-11

Family

ID=62023801

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SA519401667A SA519401667B1 (ar) 2016-10-31 2019-04-28 تركيبة لتخفيف الألم أو علاجه

Country Status (14)

Country Link
US (1) US20190255152A1 (ar)
EP (1) EP3533471B1 (ar)
JP (1) JP6957614B2 (ar)
KR (2) KR102445192B1 (ar)
CN (1) CN110461367B (ar)
AU (1) AU2017351914B2 (ar)
BR (1) BR112019008788A2 (ar)
CA (2) CA3123063A1 (ar)
CL (1) CL2019001106A1 (ar)
ES (1) ES2905227T3 (ar)
RU (1) RU2725830C1 (ar)
SA (1) SA519401667B1 (ar)
SG (1) SG11201903517RA (ar)
WO (1) WO2018080277A1 (ar)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA3180304A1 (en) * 2020-05-28 2021-12-02 Kenan Christopher GARCIA Engineered interleukin-10 polypeptides and uses thereof
WO2022191658A1 (ko) * 2021-03-12 2022-09-15 코오롱생명과학 주식회사 퇴행성 뇌질환 예방 또는 치료용 조성물

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7261882B2 (en) * 2003-06-23 2007-08-28 Reagents Of The University Of Colorado Methods for treating neuropathic pain by administering IL-10 polypeptides
WO2006050211A2 (en) * 2004-10-28 2006-05-11 University Of Pittsburgh Of The Commonwealth System Of Higher Education Peripherally delivered glutamic acid decarboxylase gene therapy for spinal cord injury pain
RU2433825C2 (ru) * 2004-12-06 2011-11-20 Медисинова, Инк. Способ лечения невропатической боли и связанных с ней синдромов
US7527785B2 (en) * 2005-05-31 2009-05-05 Neurologix, Inc. Glutamic acid decarboxylase (GAD) chimera and methods of use
KR20080007968A (ko) * 2006-07-19 2008-01-23 연세대학교 산학협력단 Ｇａｄ65를 발현하는 재조합 벡터를 포함하는 신경병증성통증 완화용 조성물
WO2008010637A1 (en) * 2006-07-19 2008-01-24 Industry-Academic Cooperation Foundation, Yonsei University Composition for attenuating neuropathic pain comprising a recombinant vector expressing gad65
FI20070808A0 (fi) * 2007-10-25 2007-10-25 Mart Saarma GDNF:n silmukointivariantit ja niiden käytöt
CN101586096A (zh) * 2008-05-21 2009-11-25 王尚武 一种共表达人源谷氨酸脱羧酶和细胞因子的重组病毒
EP2457579A1 (en) * 2010-11-26 2012-05-30 Technische Universität Dresden Covalently linked interleukin -10
EP2672997A4 (en) * 2011-02-08 2015-05-06 Abbvie Inc TREATMENT OF ARTHROSIS AND PAIN
KR20170034701A (ko) * 2015-09-21 2017-03-29 코오롱생명과학 주식회사 통증 치료용 조성물

Also Published As

Publication number Publication date
AU2017351914A1 (en) 2019-05-23
KR20210107140A (ko) 2021-08-31
BR112019008788A2 (pt) 2019-07-16
ES2905227T3 (es) 2022-04-07
KR102445192B1 (ko) 2022-09-20
CA3041980A1 (en) 2018-05-03
KR20190067815A (ko) 2019-06-17
CL2019001106A1 (es) 2019-08-16
CA3041980C (en) 2023-06-13
AU2017351914B2 (en) 2020-09-10
JP2019537595A (ja) 2019-12-26
US20190255152A1 (en) 2019-08-22
JP6957614B2 (ja) 2021-11-02
RU2725830C1 (ru) 2020-07-06
EP3533471A1 (en) 2019-09-04
CN110461367B (zh) 2023-05-26
EP3533471B1 (en) 2022-01-19
WO2018080277A1 (ko) 2018-05-03
CN110461367A (zh) 2019-11-15
CA3123063A1 (en) 2018-05-03
EP3533471A4 (en) 2020-05-06
SG11201903517RA (en) 2019-05-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP1299126B1 (en) Glutamic acid decarboxylase (gad) delivery system for treating neurodegenerative diseases
US11951183B2 (en) Adeno-associated virus compositions for PAH gene transfer and methods of use thereof
CN110325199A (zh) 用于治疗苯丙酮尿症的基因疗法
CN111936172A (zh) 用于治疗视网膜病症的组合物和方法
SA519401667B1 (ar) تركيبة لتخفيف الألم أو علاجه
KR102050478B1 (ko) 통증 치료용 조성물
KR102267837B1 (ko) 재조합 백시니아 바이러스 및 이를 포함하는 약학 조성물
CN115029360A (zh) 用于治疗粘多糖贮积症iiia型的转基因表达盒
WO1997039629A1 (en) Viral vectors including polynucleotides encoding neurotrophic factors and uses therefor
JP2019505213A (ja) ベクター
CN114381465B (zh) 优化的cyp4v2基因及其用途
WO2021081826A1 (zh) Ptbp1抑制剂在预防和/或治疗视网膜疾病中的应用
US10898590B2 (en) Method for delivery of biological molecule to nervous tissue
JP2023554198A (ja) 発現ベクター組成物
WO2022011099A1 (en) Modified hexosaminidase and uses thereof
KR20220114028A (ko) 파킨슨병을 치료하는 방법
AU2004101085A4 (en) Glutamic acid decarboxylase (GAD)based delivery systems
Keen What is gene therapy?