KR20220114028A - 파킨슨병을 치료하는 방법 - Google Patents

Abstract

글루탐산 데카복실라제(GAD)를 사용하여 파킨슨병(PD)과 같은 신경 장애를 치료하는 방법, 및 PD를 치료하는 방법에 가장 수용적인 PD 환자를 확인하는 방법이 개시된다. 일 양태에서, 본 개시내용은 PD 치료를 필요로 하는 대상체에서 PD를 치료하는 방법으로서, (a) 하루에 약 10시간 미만, 및 바람직하게는, 약 8시간 미만의 약효 개시 시간을 갖는 대상체를 확인하는 단계; 및 (b) 대상체에게 치료학적 유효량의 하나 이상의 벡터를 포함하는 조성물을 환자의 시상하부 핵에 투여하는 단계로서, 각각의 벡터는 글루탐산 데카복실라제(GAD)를 인코딩하는 핵산 서열을 포함하며, 대상체의 약효 개시 시간은 증가되는 단계를 포함하는 방법을 제공한다.

Description

파킨슨병을 치료하는 방법

관련 출원에 대한 상호 참조문헌

본 출원은 2019년 12월 12일자로 출원된 미국 가출원 제62/947,418호를 우선권으로 주장하며, 이는 그 전문이 본 명세서에 참조에 의해 원용된다.

발명의 분야

본 개시내용은 파킨슨병(PD) 및 다른 신경퇴행성 장애를 치료하기 위한 방법 및 조성물에 관한 것이다. 보다 구체적으로, 대상체에 글루탐산 데카복실라제(GAD)의 아이소형을 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는 하나 이상의 벡터를 투여하는 것을 포함하는 방법, 및 PD를 치료하는 방법을 가장 잘 수용할 표적 환자 집단을 확인하는 것을 포함하는 방법이 본 명세서에 기술된다.

중추 신경계 장애, 특히 도파민 신경전달물질과 관련된 장애는 매년 전 세계에서 수백만 명의 사람들에게 영향을 미친다. 전 세계적으로 천만 명 이상의 사람들과 미국에서 거의 백만명의 환자가 가장 흔한 중추 신경계 장애 중 하나인 파킨슨병(PD)을 앓고 있다.

PD는 유전적 요인 및 비-유전적 요인 둘 모두를 포함하는 다인성 질환이다. PD의 발달에 기여할 수 있는 일부 메커니즘은 잘못 접힌 단백질 응집체의 축적, 단백질 제거 경로의 실패, 미토콘드리아 손상, 산화 스트레스, 흥분독성, 신경염증, 및 유전적 돌연변이를 포함한다. PD는 기저핵(basal ganglia) 및 흑색질(substantia nigra)로 불리는 뇌의 신경 세포 부분에 영향을 미친다. 흑색질은 보상 및 운동에서 중요한 역할을 하는 중뇌에 위치한 기저핵 구조이다. 이러한 구역은 주로 신경전달물질 도파민을 생산하는 도파민성 뉴런(DA)으로 구성된다. 뇌에서, 도파민은 균형 및 신체 움직임 제어에 관여하는, 뉴런의 흥분성을 조절하는 억제성 신경전달물질로서 기능한다. 정상 뇌에서, DA 뉴런은 시냅스를 가로지르고 수용 세포 상의 수용체에 맞는 도파민을 방출한다. 그러한 세포는 메시지를 전달하도록 자극된다. 메시지가 전달된 후, 수용체는 도파민 분자를 다시 시냅스로 방출하며, 여기서, 과량의 도파민은 방출 뉴런 내에서 "흡수"되거나 재순환된다.

감마-아미노부티르산 또는 γ-아미노부티르산(GABA)은 발달적으로 성숙한 포유동물 중추 신경계에서 주요 억제성 신경전달물질이다. 대부분의 흑색질 DA 뉴런은 감마-아미노부티르산(A)((GABA(A)) 수용체 및 감마-아미노부티르산(B)(GABA(B)) 수용체 둘 모두를 발현시킨다. DA 뉴런은 흑색질에서 단시냅스 GABA 생산을 조절한다. 도파민의 재순환은 감마-아미노부티르산(GABA) 경로에 의해 조절된다. GABA 경로의 활성화는 도파민의 증가를 야기하고, 결국 신경 세포의 발화율을 감소시킨다는 것이 당업계에 널리 공지되어 있다. 도파민성 뉴런의 발화 패턴은 또한 생체내 GABA성 투입에 의해 효과적으로 조절된다. GABA(A) 수용체의 비가용성은 도파민성 뉴런이 자발적인 발화율을 증가시키는 본래 발화 패턴(burst firing pattern)과 관계없이 버스트 발화 패턴으로 이동하게 한다.

아직 완전히 이해되지 않은 이유로, 흑색질의 도파민-생산 신경 세포는 PD 환자에서 죽기 시작하며, 이는 다시냅스 뉴런(polysynaptic neuron)에서 도파민 수용체를 통한 신호전달의 손실 및 도파민의 결핍을 야기한다. 추가적으로, DA 뉴런의 부족은 시상하부 핵으로의 감마-아미노부티르산(GABA) 억제 투입을 감소시켜, 시상하부 핵에서 활성을 증가시킨다. 시상하부 핵은 또한 기저핵 내의 다른 세포에 증가된 활성에 대한 신호를 보낸다. GABA 수준이 특정 역치 아래로 떨어질 때, 이는 뇌에서 도파민 고갈을 야기한다. 도파민의 손실은 기저핵 내의 뉴런의 활성을 변화시켜, 신경 세포의 제어되지 않은 발화를 야기한다. 도파민 수준이 특정 지점 아래로 떨어질 때(약 80% 감소), 제어되지 않은 근육 운동, 떨림과 같은 PD의 증상이 발생하기 시작한다.

PD는 신체의 근육 운동의 점진적인 악화; 빈약한 균형과 조정; 및 제어되지 않은 떨림을 특징으로 한다. PD의 표준 치료는 도파민 전구체 L-3,4-다이하이드록시페닐알라닌(레보도파 또는 L-도파)의 경구 투여를 포함하며, 이는 PD와 관련된 증상을 제거하지만, 궁극적으로 도파민성 세포의 변성을 막지 못한다. 이에 따라, PD에 대해 현재 사용되는 치료법은 질병 진행을 늦추거나 중단시키지 않으면서 단지 PD 증상을 감소시킨다.

L-도파의 투여는, PD 환자로 하여금, PD 환자가 PD 증상을 적절히 제어하는 기간인 "약효 개시 시간(on-time)"을 갖도록 허용한다. L-도파의 효과가 사라질 때, PD의 증상이 다시 나타난다. 이러한 기간은 "약효 종료 시간(off-time)"으로 지칭된다. 약효 개시 시간 및 약효 종료 시간의 측정은 통상적으로 환자에게 약물 일지를 작성하도록 요청함으로써 계산된다. 이러한 일지에서, 환자는 L-도파가 작용하고 사라지는 데 얼마나 길게 소요되는 지를 기록한다. PD의 초기 단계에서, 환자의 약효 개시 시간은 L-도파 투여 시 약 16시간이다. 그러나, 질환이 진행됨에 따라, 더 많은 용량의 약물에도 불구하고 약효 개시 시간의 양은 점차 감소한다. 추가적으로, L-도파의 장기 투여와 관련된 부작용은 상당히 심각할 수 있고, 우울증, 환각, 조증, 망상, 동요, 및 과도한 수면과 같은 정신적 변화를 포함할 수 있다. L-도파의 투여는 또한 심혈관 또는 폐, 신장, 간 또는 내분비 질환을 갖는 환자에서 해로운 효과를 가질 수 있다. L-도파의 장기 투여와 관련된 부작용 중 일부는 L-도파를 도파민으로 탈카복실화시키는 효소인 방향족 아미노산 데카복실라제(AADC)의 억제제인 N-아미노-α-메틸-3-하이드록시-L-티로신 일수화물의 공동-투여에 의해 완화될 수 있다. 그러나, 이러한 약물 조합물은 여전히 메스꺼움, 운동이상증, 정신병 및 저혈압을 유발할 수 있다.

소분자 약물로 PD를 치료하는 주요 장벽 중 하나는 대부분의 전신 투여 약물이 혈액 뇌 장벽을 통과할 수 없다는 것이다. 한 가지 접근법은 혈액 뇌 장벽을 가로지르는 이들의 수송을 용이하게 하기 위해 폴리펩타이드의 지질 함량을 증가시키는 데 초점을 맞추었다. 또 다른 접근법은 뇌에서 모세혈관의 투과성을 향상시키는 데 집중하였다. 그러나, 이러한 접근법 중 어느 것도 혈액-뇌 장벽을 가로지르는 문제를 해결하지 못하였다. 도파민을 생산하는 조작된 세포를 뇌에 이식하는 것 및 뇌심부 자극과 같은, PD를 치료하는 다른 접근법은 높은 사망률, 중증 감염의 증가된 기회, 및 잠재적인 뇌 손상과 같은 심각한 부작용을 특징으로 한다. 더욱 중요하게는, 이용 가능한 약물 중 어느 것도 PD의 근본 원인을 다루지 않거나, 심각한 부작용 없이 PD 환자에게 더 많은 약효 개시 시간을 제공하지 못한다.

PD의 치료의 현재 한계를 고려하여, (1) 특히 현재의 치료 표준에 반응하지 않는 PD 환자에서, PD의 비-일시적 치료, (2) 상당한 부작용을 일으키지 않으면서 PD 환자에서 약효 개시 시간을 효과적으로 연장하는 일시적인 치료, 및 (3) PD의 비일시적인 치료에 가장 잘 수용할 환자 집단을 확인하기 위한 신뢰성 있는 방법에 대한 충족되지 않은 요구가 존재한다.

일 양태에서, 본 개시내용은 PD의 치료를 필요로 하는 대상체에서 PD를 치료하는 방법으로서, (a) 하루에 약 10시간 미만, 바람직하게는 약 8시간 미만의 약효 개시 시간을 갖는 대상체를 확인하는 단계; 및 (b) 대상체에게 치료학적 유효량의 하나 이상의 벡터를 포함하는 조성물을 환자의 시상하부 핵에 투여하는 단계를 포함하며, 여기서, 각각의 벡터는 글루탐산 데카복실라제(GAD)를 인코딩하는 핵산 서열을 포함하며, 대상체의 약효 개시 시간은 증가되는 방법을 제공한다. 일 실시형태에서, 하나 이상의 벡터는 환자의 시상하부 핵에 양측으로 도입된다.

일 실시형태에서, 본 개시내용은 PD의 치료를 필요로 하는 대상체에서 PD를 치료하는 방법으로서, 대상체는 치료전 10시간 미만, 9시간 미만, 8시간 미만, 7시간 미만, 6시간 미만, 5시간 미만, 또는 4시간 미만의 약효 개시 시간을 갖는 방법을 제공한다.

일 실시형태에서, 본 개시내용은 PD의 치료를 필요로 하는 대상체에서 PD를 치료하는 방법으로서, 하나 이상의 벡터는 GAD-65를 인코딩하는 핵산 서열 및/또는 GAD-67을 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는 방법을 제공한다. 실시형태에서, 2개의 벡터가 투여되며, 여기서 하나의 벡터는 GAD-65를 인코딩하는 핵산을 포함하며, 다른 벡터는 GAD-67을 인코딩하는 핵산을 포함한다. 추가 실시형태에서, GAD-65를 인코딩하는 핵산을 포함하는 벡터 및 GAD-67을 인코딩하는 핵산을 포함하는 벡터는 약 1:2 내지 약 2:1, 바람직하게는 약 1:1의 비로 투여된다.

일 실시형태에서, 본 개시내용은 PD의 치료를 필요로 하는 대상체에서 PD를 치료하는 방법으로서, 방법에 사용되는 하나 이상의 벡터는 GAD-65를 인코딩하고 GAD-67을 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는 방법을 제공한다. 일 실시형태에서, 인간 GAD-65의 아미노산 서열은 서열번호 1(유전자은행 수탁 번호 NM000818; M81882)로서 제공된다. 또 다른 실시형태에서, 인간 GAD-65의 아미노산 서열은 서열번호 3으로서 제공된다. 일부 실시형태에서, 핵산 서열은 서열번호 1 또는 서열번호 3의 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 단백질을 인코딩한다. 실시형태에서, GAD-65를 인코딩하는 핵산 서열은 서열번호 2 또는 서열번호 4를 포함한다. 일부 실시형태에서, GAD-65를 인코딩하는 핵산 서열은 서열번호 2 또는 서열번호 4의 서열과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 서열을 포함한다. 일 실시형태에서, 인간 GAD-67의 아미노산 서열은 서열번호 5(수탁 번호 M81883)로서 제공된다. 또 다른 실시형태에서, 인간 GAD-67의 아미노산 서열은 서열번호 7로서 제공된다. 일부 실시형태에서, 핵산 서열은 서열번호 5 또는 서열번호 7의 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 단백질을 인코딩한다. 실시형태에서, GAD-67을 인코딩하는 핵산 서열은 서열번호 6을 포함한다. 실시형태에서, GAD-67을 인코딩하는 핵산 서열은 서열번호 8을 포함한다. 일부 실시형태에서, GAD-67를 인코딩하는 핵산 서열은 서열번호 6 또는 서열번호 8의 서열과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 서열을 포함한다.

일 실시형태에서, 본 개시내용은 PD의 치료를 필요로 하는 대상체에서 PD를 치료하는 방법으로서, 방법에 사용되는 하나 이상의 벡터는 바이러스 벡터인 방법을 제공한다. 일 실시형태에서, 본 개시내용은 PD의 치료를 필요로 하는 대상체에서 PD를 치료하는 방법으로서, 개시된 바이러스 벡터는 아데노-관련 바이러스(AAV) 벡터인 방법을 제공한다.

일 실시형태에서, 본 개시내용은 PD의 치료를 필요로 하는 대상체에서 PD를 치료하는 방법으로서, 조성물은 적어도 1×10¹¹개의 벡터 게놈/㎖를 포함하는 방법을 제공한다. 일 실시형태에서, 본 개시내용은 PD의 치료를 필요로 하는 대상체에서 PD를 치료하는 방법으로서, 조성물은 적어도 3×10¹¹개의 벡터 게놈/㎖를 포함하는 방법을 제공한다. 일 실시형태에서, 본 개시내용은 PD의 치료를 필요로 하는 대상체에서 PD를 치료하는 방법으로서, 조성물은 적어도 1×10¹²개의 벡터 게놈/㎖를 포함하는 방법을 제공한다.

일 실시형태에서, 본 개시내용은 PD의 치료를 필요로 하는 대상체에서 PD를 치료하는 방법으로서, 대상체는 치료전과 비교하여 치료 후 12개월에 약효 개시 시간의 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%의 평균 증가를 나타내는 방법을 제공한다. 실시형태에서, 대상체는 치료 12개월 후 약 1, 1.5, 2, 2.5, 3, 3.5, 4, 4.5 또는 5시간의 약효 개시 시간의 증가를 갖는다.

도 1. AAV-GAD 유전자 요법 후 "약효 개시(ON)" 시간의 증가. STN 내로의 AAV-GAD(GAD) 또는 모의 수술(sham)을 받은 대상체는 나열된 각각의 시점(수술 후 1, 3, 6 및 12개월)에 2주 동안 매일 일지에 약효 개시 시간 및 약효 종료 시간을 기록하였다. 일지로부터 결정된 2주 기간 동안의 평균 일일 약효 개시 시간 및 약효 종료 시간은 수술 후 약효 개시 시간의 시간 수의 변화를 결정하기 위해 수술 전 30일 이내에 얻어진 베이스라인 일지와 비교하였다. 분산 분석에 의해 전체 12개월 연구 기간에 걸쳐 그룹들 간에 전반적인 차이가 있었다(ANOVA; p=0.44). 양측 t-검정은 수술 후 3 및 12개월에 약효 개시 시간의 유의미한 증가를 나타내었고(p<0.05), 1개월에 유의성에 대한 강한 경향을 나타내었다. 약효 개시 시간의 평균 증가는 AAV-GAD 그룹에서 연구에 걸쳐 1 내지 2.5 시간이었으며, 임의의 시점에서 모의 그룹에서 평균 변화가 최소 또는 전혀 없었다.
도 2. 기준선 약효 개시 시간과 AAV-GAD 유전자 요법 후 약효 개시 시간의 변화 사이의 상관관계. 수술 후 12개월에, AAV-GAD 치료 그룹에서 대상체당 기준선으로부터의 평균 일일 약효 개시 시간의 변화는 동일한 기간에 걸쳐 동일한 대상체에 대한 임상 점수의 변화와 상관관계가 있었다. 사용된 임상 점수는 파킨슨병 환자에 대한 운동 기능의 금-표준 등급인 통합 파킨슨병 등급 척도(UPDRS)의 파트 3이었다. 이는 기준선 약효 개시 시간과 시상하부 AAV-GAD 유전자 요법 후 12개월에서의 약효 개시 시간의 증가 사이의 강한 상관관계를 보여주며(r=-0.59), 기준선에서 더 적은 시간의 약효 개시 시간(더 심각한 환자)이 치료 후 약효 개시 시간의 시간 단위의 수의 더 큰 증가(더 큰 반응)를 예측하였음을 나타낸다. 더 낮은 기준선 약효 개시 시간을 갖는 대상체는 치료 후 약효 개시 시간의 증가된 이득을 나타내었다. 8시간 미만의 약효 개시 시간을 갖는 환자는 AAV-GAD 요법에 대해 가장 큰 반응을 가지며, 약효 개시 시간은 하루 평균 3.5시간 증가한다.

본 개시내용은 PD의 치료를 필요로 하는 대상체에서 PD를 치료하는 방법뿐만 아니라 PD를 치료하는 방법에 가장 수용적인 PD 환자를 확인하는 방법을 제공한다. 일 양태에서, 하루에 10시간 미만, 9시간 미만, 8시간 미만, 7시간 미만, 6시간 미만, 5시간 미만, 4시간 미만의 약효 개시 시간을 갖는 대상체를 확인하고, 약효 개시 시간을 증가시키기 위해 환자의 시상하부 핵에 치료학적 유효량의 GAD를 투여함으로써(예를 들어, GAD-65 및 GAD-67을 발현시킴으로써) PD를 치료하는 방법이 제공된다.

환자 선택

일 양태에서, 본 개시내용은 본 개시에서 제공되는 치료로부터 가장 이익을 얻을 수 있는 환자를 치료하는 방법을 제공한다. 일부 실시형태에서, 환자는 하루에 약 10시간 이하의 약효 개시 시간을 갖는다. 일부 실시형태에서, 환자는 하루에 약 9시간 이하, 약 8시간 이하, 약 7시간 이하, 약 6시간 이하 또는 약 5시간 이하의 약효 개시 시간을 갖는다. 질환의 시작 시에, 통상적으로 진단의 처음 3 내지 5년 이내에, L-도파의 단일 용량은 환자가 약 16시간의 약효 개시 시간을 가질 수 있게 한다. 질환이 진행됨에 따라, 약효 개시 시간의 기간은 L-도파 약물의 용량이 증가함에도 불구하고 점진적으로 짧아진다. 통상적으로 진단 후 약 5 내지 10년 후인, PD의 중간 단계의 환자의 50 내지 70%는 L-도파 유도된 운동 합병증을 겪는다. 이러한 단계에서, L-도파 이점은 약 4시간 이하 후에 사라지며, 환자는 약효 개시 시간 및 약효 종료 시간 운동 반응들 사이에서 변동하기 시작한다. 질환 진행이 증가함에 따라, L-도파의 단일 용량 후 반응 지속기간은 점진적으로 짧아지고, 궁극적으로 진행 단계 PD 환자(통상적으로 진단 후 10년 초과)에 대한 L-도파의 혈장 반감기(대략 60 내지 90분)를 반영할 수 있다. 일부 경우에, 환자는 제공된 용량의 L-도파에 반응하지 않을 수 있다. 가장 어려운 임상 상황은 진정한 "온-오프(on-off)" 또는 요요 현상(yo-yo phenomenon)으로서 기술되며, 여기서 환자는 L-도파 용량과의 관계가 외관상 상실되면서 약효 개시 시간 상태와 약효 종료 시간 상태 사이에서 빠르게 변동한다. 운동이상증 및 약효 종료 시간 기간은 이러한 단계에서 심각하며, 이용 가능한 요법으로 환자를 만족스럽게 제어하는 것이 어렵거나 불가능할 수 있다. 추가적으로, 중기 및 진행 단계 환자는 증가된 L-도파 약물로 인해 부작용을 겪는다.

단계 3 이상의 PD를 갖는 환자의 표준 치료는 L-도파와 AADC 억제제의 조합물이다. 이러한 요법은 PD 증상을 일시적으로 가라앉히고, 이에 따라 환자가 자신의 능력을 다시 제어할 수 있게 한다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, PD 환자가 PD 증상의 완화를 경험하는 기간은 "약효 개시 시간"으로 지칭된다. 약효 개시 시간 동안 완화된 PD 증상은 운동 조절 상실, 통증, 울렁거림, 떨림 및 균형 장애를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 약물의 효과가 사라짐에 따라, 떨림 및 다른 PD 증상이 다시 시작된다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 환자가 약물 사용 중단으로 인해 PD 증상의 재출현을 경험하는 기간은 "약효 종료 시간(off-time)"으로 지칭된다.

약효 개시 시간 및 약효 종료 시간의 측정은 환자가 보관하는 약물 일지에 의해 결정될 수 있다. 환자는 그들이 그들의 운동 시설을 제어할 수 있게 하는 약물이 효과가 있다고 느끼는 시간, 및 PD 증상이 다시 나타나게 하는 약물이 소진되고 있다고 느끼는 시간을 기록한다. 임상의는 특정 시점에서 PD 환자에 대한 약효 개시 시간 및 약효 종료 시간을 결정하기 위해 일지에 기록된 타이밍(timing)을 사용한다. 약효 개시 시간 및 약효 종료 시간은 또한, 예를 들어, PD와 관련된 저운동성 및 과다운동성 특징을 측정 및 추적함으로써 모션 센서, 가속도계 및 자세 검출 디바이스를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 웨어러블 디바이스를 사용하여 측정될 수 있다.

실시형태에서, 환자는 본 명세서에 기술된 요법을 받기 전에 적어도 3년 동안 PD를 가졌다. 일부 실시형태에서, 환자는 적어도 4년 또는 적어도 5년 동안 PD를 갖는다. 실시형태에서, 본 명세서에 기술된 요법을 받는 환자는 질환의 단계 2, 단계 3, 단계 4 또는 단계 5에 있다. PD의 진행은 단계 5로 나눌 수 있다. 단계 1의 PD는 얼굴 표정, 언어 및/또는 운동의 장애를 특징으로 한다. 증상은 처음에 신체의 한쪽에서만 나타나며(일측성 침범), 대개 기능 손상이 거의 없거나 전혀 없다. 단계 2의 PD 동안, 뇌의 양쪽 반구는 질환에 의해 영향을 받는다. 결과적으로, 떨림은 점차 양측이 되고, 환자의 정중선에 영향을 줄 수 있다. 단계 2에서 PD의 추가적인 증상은 얼굴 양쪽의 얼굴 표정 상실, 눈 깜박임 감소, 언어 이상, 부드러운 목소리, 단조로운 목소리, 불분명한 말, 목 통증 또는 요통을 유발할 수 있는 몸통 근육의 경직 또는 강직, 구부린 자세, 및 일상 생활 활동의 전반적인 느려짐을 포함할 수 있다. 단계 3은 균형 상실 및 느린 움직임을 특징으로 한다. 균형은 낙상을 방지하는 데 필요한 신속하고, 자동적이며, 비자발적인 조정의 불능에 의해 손상되며, 낙상은 이러한 기에서 통상적이다. 단계 4 환자는 중증 및 제한적인 증상을 나타낸다. 환자는 도움 없이 서 있을 수 있지만, 움직임에는 보행기가 필요할 수 있다. 단계 5는 PD의 가장 진행되고 쇠약해지는 단계이다. 다리의 뻣뻣함은 서거나 걷지 못하게 할 수 있습니다. 환자는 휠체어를 필요로 하거나 침대에 누워 있다. 이 기의 PD에서 환자에 대한 모든 활동을 위해 24시간 간호가 필요하다.

실시형태에서, 본 명세서에 개시된 요법을 위해 선택된 환자 또는 환자들은 복약 상태에서 UPDRS의 파트 III에 대해 약 20 이상, 약 30 이상 또는 약 40 이상의 점수를 갖고/갖거나, L-도파의 투여에 의해 야기되는 운동 합병증을 갖는다. PD의 기는 통합 파킨슨병 등급 척도(UPDRS)를 사용하여 측정될 수 있다(예를 들어, 문헌[Metman et al, Mov. Disord. 19:1079-1084 (2004)] 참조). UPDRS 척도는 전형적인 PD 증상에 대한 일련의 등급을 포함한다. 척도는 4개의 파트로 구성된다: 파트 I은 지적 감퇴, 환각, 및 우울증과 같은 행동 문제를 평가함; 파트 II는 옷 입기, 걷기, 및 식사를 포함하는 일상 생활의 활동을 수행하는 능력에 대한 환자의 인식을 평가함; 파트 III는 운동 장애의 평가를 다루고, 떨림, 느려짐(운동완만), 경직(강직), 및 균형에 대한 등급을 포함함; 파트 IV는 불수의 운동(운동이상증), 통증성 경련(긴장이상), 및 불규칙한 약물 반응(운동 변동)의 등급을 포함하는 다수의 치료 합병증을 다룸. 파트 III 또는 운동 검사는 임상의에 의한 구조화된 신경학적 검사를 통해 채점된다. 이는 0(정상) 내지 4(중증)의 점수를 가질 수 있는 14개의 항목으로 구성된다. 점수는 불수의 운동의 전체 점수를 제공하기 위해 추가된다. 임상의는 파트 III에 나열된 항목의 평가로부터 수득된 점수를 사용하여 PD의 중증도 및 적절한 치료를 결정한다.

PD를 치료하는 방법

실시형태에서, 본 개시내용은 PD의 치료를 필요로 하는 대상체에 치료학적 유효량의, GAD-65를 인코딩하는 핵산을 포함하는 하나 이상의 벡터 및/또는 GAD-67을 인코딩하는 핵산을 포함하는 벡터를 포함하는 조성물 또는 조성물들을 투여함으로써, PD를 치료하고/하거나, 예방하고/하거나, 이의 중증도 또는 정도를 감소시키는 방법을 제공한다. 실시형태에서, PD 환자를 치료하는 방법은 하나 이상의 조성물을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 하나 이상의 조성물은 GAD-65의 발현을 위한 벡터, 또는 벡터들 및/또는 GAD-67의 발현을 위한 벡터를 포함한다.

본 명세서에서 사용되는 "치료하는", "치료하다", "치료"는 질환 또는 장애의 증상들 중 적어도 하나를 늦추거나, 줄이거나, 개선하거나, 완화시키거나, 발병 후 질환 또는 장애의 하나 이상의 증상들을 반전시키는 것을 지칭한다. 치료의 목적은 요망되지 않는 신체 상태, 장애 또는 질환을 예방 또는 경감 또는 정지시키거나 유익한 임상 결과를 얻는 것이다.

용어 "예방하다", "예방" 등은 질환 또는 장애 발병을 예방하거나 질환 또는 장애의 정도를 최소화하거나 이의 발달 과정을 늦추기 위해 명백한 질병 또는 장애 발병 전에 작용하는 것을 지칭한다.

용어 "치유" 등은 치유하거나, 낫게 하거나, 좋은 건강으로 회복시키거나, 재발 위험이 작도록 질환의 재발 없는 시간을 허용하는 것을 의미한다.

"치료학적 유효량"이라는 어구는 본 명세서에서 대상체에서 임상적으로 유의미한 상태의 개선을 야기하거나, 질환 또는 장애와 관련된 하나 이상의 증상을 지연 또는 최소화 또는 완화시키거나, 대상체에서 생리학의 원하는 유익한 변화를 초래하기에 충분한 양을 의미하기 위해 사용된다.

실시형태에서, 본 명세서에 기술된 요법을 받는(예를 들어, GAD-65를 인코딩하는 핵산을 포함하는 하나 이상의 벡터 및/또는 GAD-67을 인코딩하는 핵산을 포함하는 벡터를 포함하는 치료학적 유효량의 조성물을 받는) 대상체는 요법을 받은 후 12개월에 약 1, 약 1.5, 약 2, 약 2.5, 약 3, 약 3.5 또는 약 4시간의 약효 개시 시간의 평균 증가를 갖는다. 실시형태에서, 대상체는 요법을 받은 후 12개월에 약 15%, 약 20%, 약 25%, 약 30%, 약 35%, 약 40%, 약 45% 또는 약 50%의 약효 개시 시간의 증가를 갖는다.

PD 표준 치료는 도파민을 보충하기 위해 도파민 전구체, L-도파의 투여를 포함한다. 그러나, GABA 수준의 증가는 또한 GABA의 더 높은 농도가 도파민 수준을 회복시키거나 증가시키게 함에 따라 이러한 제어되지 않은 움직임을 중단시킨다. 실시형태에서, 본 개시내용은 글루탐산 데카복실라제(GAD) 아이소형을 포함하는 하나 이상의 벡터를 투여함으로써 시상하부 핵에서 GABA 수준을 증가시키는 방법을 제공한다. GABA는 글루타메이트의 GABA 및 CO₂로의 탈카복실화를 촉매화하는 GAD에 의해 뇌에서 생산된다. 포유동물의 뇌는 각각 65 및 67 kDa의 분자량으로 명명된 2개의 상이한 GAD의 아이소형, GAD-65 및 GAD-67을 발현시킨다. 이러한 아이소형들은 조합하여 뉴런 GABA 농도를 제어하기 위한 이중 시스템을 제공한다. 인간에서, GAD-67 및 GAD-65에 대한 유전자는 상이한 염색체에 위치한다(GAD1 및 GAD2 유전자는 각각 염색체 4 및 10에 위치한다). GAD-65 및 GAD-67은 상이한 뇌 영역에서 이들의 발현 수준에서 유의미한 차이를 나타낸다. GAD-67은 뇌 전반에 걸쳐 균일하게 발현되는 반면, GAD-65 발현은 주로 축삭 말단에 집중된다. 함께, 이러한 2개의 효소는 포유동물에서 GABA의 대부분의 생리학적 공급을 유지한다. 인간 GAD-65 cDNA는 585개 아미노산 잔기의 폴리펩타이드를 인코딩한다(유전자은행 수탁 번호 NM000818; M81882). 일 실시형태에서, 인간 GAD-65의 아미노산 서열은 서열번호 1으로서 제공된다. 또 다른 실시형태에서, 인간 GAD-65의 아미노산 서열은 서열번호 3으로서 제공된다. 인간 GAD-67은 594개 아미노산 잔기의 폴리펩타이드를 인코딩한다(유전자은행 수탁 번호 M81883). 일 실시형태에서, 인간 GAD-67의 아미노산 서열은 서열번호 5(유전자은행 수탁 번호 M81883)로서 제공된다. 또 다른 실시형태에서, 인간 GAD-67의 아미노산 서열은 서열번호 7로서 제공된다.

실시형태에서, 벡터는 GAD 아이소형을 인코딩하는 핵산 서열을 포함한다. 일 실시형태에서, 핵산 서열은 GAD-65를 인코딩한다. 일 실시형태에서, 핵산 서열은 GAD-67를 인코딩한다. 실시형태에서, 벡터는 GAD-65를 인코딩하는 핵산 서열 및 GAD-67을 인코딩하는 핵산 서열을 포함한다. 실시형태에서, GAD-65를 인코딩하는 핵산 서열은 서열번호 1의 단백질을 인코딩하는 서열을 포함한다. 다른 실시형태에서, GAD-65를 인코딩하는 핵산 서열은 서열번호 3의 단백질을 인코딩하는 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 핵산 서열은 적어도 서열번호 1 또는 서열번호 3의 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일하다. 일 실시형태에서, GAD-65를 인코딩하는 핵산 서열은 서열번호 2 또는 서열번호 4를 포함한다. 일부 실시형태에서, GAD-65를 인코딩하는 핵산 서열은 서열번호 2 또는 서열번호 4의 서열과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 서열을 포함한다.

실시형태에서, GAD-67을 인코딩하는 핵산 서열은 서열번호 5 또는 서열번호 7의 단백질을 인코딩하는 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 핵산 서열은 서열번호 5 또는 서열번호 7의 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 단백질을 인코딩한다. 실시형태에서, GAD-67을 인코딩하는 핵산 서열은 서열번호 6을 포함한다. 실시형태에서, GAD-67을 인코딩하는 핵산 서열은 서열번호 8을 포함한다. 일부 실시형태에서, GAD-67를 인코딩하는 핵산 서열은 서열번호 6 또는 서열번호 8의 서열과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 서열을 포함한다.

본 명세서에서 사용되는 용어 "동일성(identity)"은 2개의 핵산 분자 또는 폴리펩타이드 사이의 서열 동일성을 지칭한다. 동일성은 비교 목적으로 정렬될 수 있는 각 서열의 위치를 비교함으로써 결정될 수 있다. 예를 들어, 비교된 뉴클레오타이드 서열의 위치가 동일한 염기에 의해 점유될 때, 분자는 그러한 위치에서 동일하다. 핵산 또는 아미노산 서열 사이의 동일성의 정도는 공유 위치에서 동일하거나 일치하는 뉴클레오타이드 또는 아미노산의 수의 함수이다. 예를 들어, 본 명세서에 기술된 특정 폴리펩타이드와 적어도 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99% 동일성을 갖고 바람직하게는 실질적으로 동일한 기능을 나타내는 폴리펩타이드뿐만 아니라 이러한 폴리펩타이드를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드가 고려된다. 서열 동일성 및 유사성 둘 모두를 결정하기 위한 방법 및 컴퓨터 프로그램은 공개적으로 이용 가능하며, 이는 GCG 프로그램 패키지, BLASTP, BLASTN, FASTA 및 ALIGN 프로그램(버전 2.0)을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 널리 공지된 Smith Waterman 알고리즘이 또한 유사성을 결정하는 데 사용될 수 있다. BLAST 프로그램은 NCBI 및 다른 출처로부터 공개적으로 이용 가능하다. 서열을 비교할 때, 이러한 방법은 다양한 치환, 결실, 및 다른 변형을 설명한다.

일부 실시형태에서, GAD-65를 인코딩하는 서열 및/또는 GAD-67을 인코딩하는 서열은 코돈-최적화된다.

본 개시내용은 PD 증상의 치료, 예방, 및/또는 이의 중증도 또는 정도의 감소를 필요로 하는 대상체에 치료학적 유효량의, GAD-65를 인코딩하는 핵산을 포함하는 제1 벡터 및 GAD-67을 인코딩하는 핵산을 포함하는 제2 벡터를 포함하는 조성물을 투여함으로써 PD 증상을 치료, 예방 및/또는 이의 중증도 또는 정도를 감소시키는 방법을 제공한다. 실시형태에서, 조성물 중 2개의 벡터(하나는 GAD-65를 인코딩하고 다른 하나는 GAD-67을 인코딩함)에 대한 비는 약 2:1 내지 약 1:2이다. 예를 들어, 벡터가 AAV 벡터일 때, GAD-65를 인코딩하는 핵산을 포함하는 바이러스 입자 대 GAD-67을 인코딩하는 핵산을 포함하는 바이러스 입자의 비는 약 2:1 내지 약 1:2, 및 특히 약 1:1이다.

일부 실시형태에서, 방법은 치료학적 유효량의, GAD-65를 인코딩하는 핵산을 포함하는 벡터를 포함하는 제1 조성물 및 치료학적 유효량의, GAD-67을 인코딩하는 핵산을 포함하는 벡터를 포함하는 제2 조성물을 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시형태에서, 제1 AAV 벡터 및 제2 AAV 벡터는 동시에 투여된다. 일부 실시형태에서, 제1 AAV 벡터는 제2 AAV 벡터 전에 투여된다. 일부 실시형태에서, 제2 AAV 벡터는 제3 AAV 벡터 전에 투여된다.

실시형태에서, 본 명세서에는 신경퇴행성 질환 또는 장애의 치료, 예방 및/또는 치유를 필요로 하는 대상체에서 신경퇴행성 질환 또는 장애를 치료, 예방 및/또는 치유하는 방법이 제공되며, 여기서 신경퇴행성 질환 또는 장애는 GABA 결핍에 의해 매개된다. 일 양태에서, 본 개시내용은 도파민성 저활성, 질환, 손상 또는 화학적 병변과 관련된 중추 신경계의 질환 또는 장애를 치료하기 위한 방법을 제공한다. 일 실시형태에서, 신경퇴행성 질환 또는 장애는 인지 장애이다. 일 실시형태에서, 신경퇴행성 질환 또는 장애는 PD이다.

벡터

일 양태에서, PD의 치료를 필요로 하는 대상체에서 PD의 치료를 위한 방법으로서, 대상체에 GAD를 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는 하나 이상의 벡터를 투여하는 단계를 포함하는 방법이 제공된다. 본 명세서에서 사용되는 벡터는 유전 물질을 세포로 전달하기 위한 비히클이다. 실시형태에서, 벡터는 플라스미드, 에피솜, RNA 분자, 또는 DNA 분자를 비제한적으로 포함하는 핵산이다. 실시형태에서, 핵산은 원형이다. 실시형태에서, 핵산은 선형이다. 실시형태에서, 벡터는 바이러스 벡터이다.

본 명세서에 개시된 방법 및 조성물에 유용한 벡터는 자율 복제가 가능한 벡터(에피솜 벡터) 및/또는 세포에서 유전자 발현을 위해 설계된 벡터(발현 벡터)를 포함한다. 특정 실시형태에서, 본 명세서에 기술된 벡터는 발현 벡터이다. 발현 벡터는 표적 세포에서 핵산의 발현을 가능하게 한다. 발현 벡터는 박테리아에서 벡터의 증식을 가능하게 하는 원핵생물 서열 및 진핵생물 세포에서 인코딩된 폴리펩타이드의 발현을 용이하게 하는 진핵생물 서열 둘 모두를 함유할 수 있다. 플라스미드의 제조 및 숙주 유기체의 형질전환에 사용되는 다양한 방법은 당업계에 공지되어 있다.

일부 실시형태에서, GAD 발현 벡터는 손실된 세포를 GAD를 발현하는 이식된 세포로 대체하는 생체외 유전자 요법을 통해 전달될 수 있다. 이러한 세포를 사용하는 장점은 환자 자신의 세포가 자가이식 절차에서 사용될 수 있기 때문에 감소된 면역내성의 가능성이다.

일부 실시형태에서, 벡터는, 예를 들어, 비-바이러스 전달 시스템을 사용하여, 예를 들어, 거대분자 복합체, 나노캡슐, 미소구체, 비드, 및 수중유 에멀션, 마이셀, 혼합 마이셀, 및 리포솜을 포함하는 지질-기반 시스템과 같은 콜로이드 분산 시스템을 사용하여 전달될 수 있다.

특정 실시형태에서, 본 명세서에 기술된 벡터는 바이러스 벡터이다. 바이러스 벡터의 예는 레트로바이러스, 아데노바이러스, 파보바이러스(예를 들어, 아데노 관련 바이러스, AAV), 코로나바이러스, 음성 가닥 RNA 바이러스, 예를 들어, 오르토믹소바이러스(예를 들어, 인플루엔자 바이러스), 랍도바이러스(예를 들어, 광견병 및 소포 구내염 바이러스), 파라믹소바이러스(예를 들어, 홍역 및 센다이), 양성 가닥 RNA 바이러스, 예를 들어, 피코르나바이러스 및 알파바이러스, 및 아데노바이러스, 헤르페스바이러스(예를 들어, 단순 포진 바이러스 타입 1 및 2, 엡스타인-바 바이러스, 사이토메갈로바이러스)를 포함하는 이중-가닥 DNA 바이러스, 및 폭스바이러스(예를 들어, 백시니아, 계두 및 카나리폭스)를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 다른 바이러스는, 예를 들어, 노워크(Norwalk) 바이러스, 토가바이러스, 플라비바이러스, 레오바이러스, 파포바바이러스, 헤파드나바이러스, 및 간염 바이러스를 포함한다. 레트로바이러스의 예는 조류 백혈병-육종, 포유동물 C-타입, B-타입 바이러스, D 타입 바이러스, HTLV-BLV 그룹, 렌티바이러스, 및 스푸마바이러스를 포함할 수 있다.

실시형태에서, GAD를 인코딩하는 핵산을 포함하는 벡터는 유전자 요법에서 사용되는 바이러스 벡터이다. GAD 이식 유전자는 유전자 요법에 사용되는 임의의 타입의 바이러스 벡터, 예컨대, 재조합 레트로바이러스, 아데노바이러스, 아데노-관련 바이러스(AAV), 및 단순 포진 바이러스-1에 도입될 수 있다.

일 실시형태에서, 재조합 AAV(rAAV)는 GAD 이식 유전자 전달에 사용되는 벡터(들)이다. AAV 입자는 AAV 캡시드 단백질 코트와 관련된 선형, 단일-가닥 AAV 핵산 게놈을 포함한다. AAV는 아데노바이러스, 백시니아 또는 헤르페스 바이러스일 수 있는 헬퍼 바이러스 없이는 복제할 수 없다. 헬퍼 바이러스의 부재 하에, AAV는 잠복 상태를 가정하여 숙주 세포 염색체에 이의 게놈을 삽입한다. 헬퍼 바이러스에 의한 후속 감염은 잠복 통합 카피를 구출하고, 이후에, 복제하여 감염성 바이러스 자손을 생산한다.

재조합 AAV(rAAV) 벡터는 재조합 바이러스 게놈 및 캡시드 단백질을 포함한다. GAD 이식 유전자(들)를 포함하는 rAAV 게놈은 이식 유전자(들), 적합한 조절 요소, 및 rAAV 게놈을 패키징하는 데 필요한 바이러스 요소를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드로부터 어셈블링될 수 있다. rAAV 게놈의 작제를 위한 일반적인 방법은 당업계에 공지되어 있다. AAV 기반 발현 벡터는 이용 가능한 제한 부위를 직접 사용하거나 제한 효소에 의한 이식 유전자의 절제 이후 선택적으로 링커를 사용하여 단부의 폴리싱 및 AAV 발현 벡터에 결찰에 의해 이식 유전자의 서브클로닝에 사용될 수 있는 제한 부위에 인접하는 AAV 역 말단 반복부(ITR)로 구성될 수 있다. GAD 이식 유전자는, 예를 들어, 인핸서, 프로모터, 및/또는 AAV ITR 측면에 있는 전사후 조절 서열(PRE)을 포함하는 하나 이상의 발현 조절 요소와 함께 AAV 기반 발현 벡터에 통합될 수 있다.

특정 캡시드 단백질을 갖는 rAAV 벡터를 제조하는 방법은 당업계에 공지되어 있다. 바이러스 입자는 캡시드에서 rAAV 게놈을 트랜스로 패키징하는 데 필요한 성분을 제공함으로써 제조될 수 있거나, 필요한 성분은 조작된 숙주 세포에 의해 제공될 수 있다. 두 방법 모두는 당업자에게 공지된 표준 분자 생물학 기술을 사용한다. 요구되는 요소의 일부 또는 모두는 유도성 또는 구성적 프로모터의 제어 하에 있을 수 있다. rAAV를 생산하기 위한 재조합 AAV 게놈, rep 서열, 캡 서열, 및 헬퍼 기능은 임의의 적절한 유전 요소(벡터)를 사용하여 패키징 숙주 세포에 전달될 수 있다. 통상적으로, 재조합 AAV는 AAV 입자, AAV 헬퍼 기능 벡터, 및 부속 기능 벡터로 패키징될 재조합 AAV 게놈(이식 유전자 포함)으로 숙주 세포를 형질감염시킴으로써 생산된다. AAV 헬퍼 기능 벡터는 생산적인 AAV 복제 및 캡시드화를 위해 트랜스로 기능하는 AAV 헬퍼 기능 서열(즉, rep 및 cap)을 인코딩한다. 부속 기능 벡터는 통상적으로 AAV 유전자 전사, 단계 특이적 AAV mRNA 스플라이싱, AAV DNA 복제, 캡 발현 생성물의 합성, 및 AAV 캡시드 어셈블리의 활성화에 관여하는 요소를 비제한적으로 포함하는 AAV 복제에 필요한 비-AAV 유래 바이러스 및/또는 세포 기능에 대한 뉴클레오타이드 서열을 인코딩한다.

본 명세서에서 사용되는 용어 "AAV1", "AAV2", "AAV3", "AAV4" 등은 또한 각각 AAV1, AAV2, AAV3 또는 AAV4로부터의 역 말단 반복부(ITR)뿐만 아니라 각각 AAV1, AAV2, AAV3 또는 AAV4로부터의 캡시드 단백질을 함유하는 AAV 벡터를 지칭한다. 용어 "AAV2/1", "AAV2/8", "AAV2/9" 등은 각각 AAV2로부터의 ITR 및 AAV1, AAV8, 또는 AAV9로부터의 캡시드 단백질을 함유하는 위형 AAV 벡터를 지칭한다.

본 명세서에 기술된 AAV 벡터는 일반적으로 표적 세포 또는 표적 조직에서 이식 유전자 전사, 번역, 및/또는 발현을 허용하고 5' 및 3' ITR의 측면에 있는 방식으로 하나 이상의 조절 요소에 작동 가능하게 연결된 하나 이상의 GAD 이식 유전자를 인코딩하는 rAAV 게놈을 포함한다. ITR 서열은 통상적으로 길이가 약 145 bp이다. AAV ITR 서열은, 예를 들어, 표준 분자 생물학 기술을 사용함으로써 하나 이상의 뉴클레오타이드의 삽입, 결실 또는 치환에 의해 변형될 수 있으나, 단, ITR 서열의 변형은 AAV 벡터 기능(예를 들어, rAAV 게놈의 효율적인 캡시드화)을 방해하지 않는다. AAV ITR은 임의의 여러 AAV 혈청형으로부터 유래될 수 있다. 3' 및 5'에서의 AAV ITR 서열은 동일하거나 상이한 AAV 혈청형으로부터 유래될 수 있다.

이식 유전자에 작동 가능하게 연결된 발현 제어 요소 또는 조절 요소는 본 명세서에 기재된 다른 것들 중에서, 닭 베타 액틴 프로모터 또는 시토메갈로바이러스 인핸서와 같은 프로모터 또는 인핸서를 포함할 수 있다. 재조합 AAV 게놈은 일반적으로 캡시드 단백질에 의해 캡시드화된다(예를 들어, ITR이 유래된 것과 동일한 AAV 혈청형 또는 ITR이 유래된 것과 상이한 AAV 혈청형으로부터). 일부 실시형태에서, 이식 유전자는 GAD-65 또는 GAD-67을 인코딩하는, 벡터 서열에 이종성인 핵산 서열이다. 본 개시내용의 조성물 및 방법과 함께 사용될 수 있는 예시적인 AAV 벡터의 성분이 본 명세서에 기술된다.

임의의 적절한 AAV 혈청형 또는 AAV 혈청형들의 조합은 본 개시내용의 방법 및 조성물에 사용될 수 있다. 본 개시내용의 방법 및 조성물이 신경퇴행성 질환 또는 장애의 치료 및 치유를 위한 것이기 때문에, 적어도 중추 신경계를 표적화하는 AAV 혈청형은 일부 실시형태에서 사용될 수 있고, AAV1, AAV2, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9 및 AAV10을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.

추가적으로, rAAV 게놈은 바이러스에 감염된 세포에서 이의 전사, 번역 및/또는 발현을 허용하는 방식으로 GAD 이식 유전자(들)에 작동 가능하게 연결된 발현 제어 요소를 포함한다. 본 명세서에서 사용되는 "작동 가능하게 연결된"은 특정 핵산 서열(예를 들어, 제어 요소)이 다른 뉴클레오타이드 서열의 특성에 영향을 미치는(예를 들어, 이식 유전자의 발현에 영향을 미치는) 2개 이상의 핵산 서열들 사이의 관계를 지칭한다. 작동 가능하게 연결된 서열은 GAD 이식 유전자에 포함되거나 이와 인접한 발현 제어 요소, 및 이식 유전자의 발현을 제어하기 위해 트랜스로 또는 소정 거리에서 작용하는 발현 제어 요소 둘 모두를 포함한다. 본 명세서에서 사용되는 발현 제어 요소는 적절한 전사 개시, 종결, 프로모터 및 인핸서 서열; 스플라이싱 및 폴리아데닐화(polyA) 신호와 같은 효율적인 RNA 처리 신호; 세포질 mRNA를 안정화시키는 서열; 번역 효율을 향상시키는 서열(즉, Kozak 컨센서스 서열); 단백질 안정성을 향상시키는 서열; 및 원하는 경우, 인코딩된 생성물의 분비를 향상시키는 서열을 포함한다. 예를 들어, 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 핵산 서열(예를 들어, GAD 코딩 서열) 및 조절 서열은 조절 서열의 영향 또는 제어 하에서 핵산 서열의 발현 또는 전사를 배치시키는 방식으로 공유 결합될 때 작동 가능하게 연결되는 것으로 고려된다. 일 실시형태에서, 인간 GAD-65 및/또는 GAD-67은 시토메갈로바이러스 인핸서-닭 β-액틴 프로모터 및 우드척 전사-후 조절 요소의 조절 하에 있다.

GAD 이식 유전자에 작동 가능하게 연결된 프로모터는 유도성이거나 구성적일 수 있다. 유도성 프로모터는 유전자 발현의 조절을 가능하게 하고, 외인성 환경 또는 화합물에 의해 조절될 수 있다. 외인성으로 공급된 프로모터에 의해 조절되는 유도성 프로모터의 예는 아연-유도성 양 메탈로티오닌(MT) 프로모터, 덱사메타손(Dex)-유도성 마우스 유방 종양 바이러스(MMTV) 프로모터, T7 폴리머라제 프로모터 시스템; 엑디손 곤충, 테트라사이클린-억제성 시스템을 포함한다. 구성적 프로모터는 이의 관련 유전자의 지속적인 전사를 가능하게 하는 조절되지 않는 프로모터이다. 구성적 프로모터의 예는 비제한적으로 닭 베타 액틴 프로모터, 레트로바이러스 라우스 육종 바이러스(RSV) LTR 프로모터(선택적으로, RSV 인핸서 포함), 시토메갈로바이러스(CMV) 프로모터(선택적으로, CMV 인핸서 포함), SV40 프로모터, 다이하이드로폴레이트 리덕타제 프로모터 및 β-액틴 프로모터를 포함한다.

실시형태에서, 천연 발현을 모방하는 이식 유전자의 발현이 바람직한 경우, GAD 이식 유전자에 대한 천연 프로모터 또는 이의 단편이 사용될 수 있다. 또 다른 실시형태에서, 조직 특이적 프로모터는 표적화된 유전자 요법을 위해 특정 조직에서 발현을 가능하게 하기 위해 사용된다. 뉴런-특이적 및 신경교-특이적 프로모터와 같은 조직 특이적 프로모터는 단백질이 요망되는 특정 조직에서 발현되도록 한다. 일 실시형태에서, 프로모터는 조직 특이적이고, 본질적으로 중추 신경계 내에서만 활성이거나 중추 신경계 내에서 더 높은 활성을 갖는다. 일 실시형태에서, 프로모터는 특정 세포 타입 또는 뉴런에 특이적일 수 있다. 또 다른 실시형태에서, 프로모터는 뇌의 특정 영역, 예를 들어, 피질, 시상하부 핵, 가닥(stranium), 흑질 및/또는 해마의 특정 영역에 위치한 세포에 특이적이다.

일부 적합한 뉴런 특이적 프로모터는 뉴런 특이적 에놀라제(NSE)(유전자은행 수탁 번호: X51956), 및 인간 신경필라멘트 경쇄 프로모터(NEFL)(유전자은행 수탁 번호: L04147)를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 신경교 특이적 프로모터는 신경교 원섬유 산성 단백질(GFAP) 프로모터(유전자은행 수탁 번호: M65210), S100 프로모터(유전자은행 수탁 번호: M65210) 및 글루타민 신타제 프로모터(유전자은행 수탁 번호: X59834)를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.

일부 실시형태에서, 바이러스 벡터는 rAAV 벡터, 예컨대, rAAV2-레트로, AAV10, AAV2/10, AAV9 또는 AAV2/9이다. 일부 실시형태에서, GAD-65 및/또는 GAD-67을 인코딩하는 핵산을 포함하는 조성물은 진행성 PD를 갖는 환자에게 투여된다. 일부 실시형태에서, 투여되는 조성물은 GAD-65 및 GAD-67을 인코딩하는 핵산을 포함한다. 일부 실시형태에서, 방법은 GAD-65를 인코딩하는 핵산 및 GAD-67을 인코딩하는 핵산을 포함하는 벡터를 포함하는 하나 이상의 조성물을 동시에 또는 순차적으로 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시형태에서, 방법은 GAD-65를 인코딩하는 핵산, GAD-67을 인코딩하는 핵산, 및 PD를 치료하는 데 사용되는 다른 약물을 포함하는 하나 이상의 조성물을 동시에 또는 순차적으로 투여하는 단계를 포함한다.

유효량의 rAAV는 rAAV가 투여되는 대상체에서 충분한 수의 표적 조직의 세포를 감염시키기에 충분한 양이다. rAAV의 유효량은 대상체에서 치료적 이점을 갖기에, 예를 들어, 대상체에서 질환의 하나 이상의 증상을 개선하기에 충분한 양으로 정의될 수 있다. 유효량은 대상체의 종, 연령, 체중, 건강 및 표적화될 CNS 조직에 따라 달라질 수 있다. 투여 모드에 따라, 유효량도 달라질 수 있다. 일부 경우에, 의도된 치료 이익을 위한 유효량을 달성하기 위해 다중 용량의 rAAV가 투여된다. 유효량은 rAAV의 혈청형에 따라 달라질 수 있다. 특정 경우에, rAAV의 유효량은 대상체당 10¹⁰, 10¹¹, 10¹², 10¹³, 10¹⁴ 또는 10¹⁵개의 게놈 카피이다. 일부 실시형태에서, 투여되는 GAD 이식 유전자(들)를 포함하는 AAV 벡터/벡터들의 농도는 약 1×10¹¹, 약 2×10¹¹, 약 3×10¹¹, 약 4×10¹¹, 약 5×10¹¹, 약 6×10¹¹, 약 7×10¹¹, 약 8×10¹¹, 약 9×10¹¹, 약 1×10¹², 또는 약 1×10¹³개의 벡터 게놈/㎖이다.

약제학적 조성물

일 실시형태에서, 본 개시내용은 GAD-65를 인코딩하는 핵산을 포함하는 하나 이상의 벡터 및 GAD-67을 인코딩하는 핵산을 포함하는 하나 이상의 벡터를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다. 이러한 조성물은 PD를 앓고 있는 대상체의 치료를 위해 단독으로 또는 다른 제제와 조합하여 투여될 수 있다. 약제학적 조성물은 벡터 또는 벡터들 및 약제학적으로 허용 가능한 담체 및 선택적으로, 다른 물질, 예를 들어, 하나 이상의 불활성 성분(예를 들어, 검출 가능한 제제 또는 표지) 또는 하나 이상의 활성 성분을 포함하는 조성물을 지칭할 수 있다. 약제학적으로 허용 가능한 담체는 생리학적으로 혼화 가능한 하나 이상의 용매, 분산 매질, 코팅, 항균제 및 항진균제, 등장제 및 흡수 지연제 등을 포함할 수 있다. 조성물은 애주번트, 희석제, 결합제, 안정화제, 완충제, 염, 친지성 용매, 보존제, 또는 이들의 혼합물과 같은 성분을 포함할 수 있다. 약제학적으로 허용 가능한 담체의 예는 물, 염수, 포스페이트 완충된 염수, 단백질, 펩타이드, 아미노산, 지질, 및 탄수화물(예를 들어, 단당류, 다이-, 트라이-, 테트라-, 및 올리고당류를 포함하는 당; 알디톨, 알돈산, 에스터화된 당 등과 같은 유도체화된 당; 및 다당류 또는 당 폴리머)을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 프럭토스, 말토스, 갈락토스, 글루코스, D-만노스, 소르보스 등과 같은 탄수화물; 락토스, 수크로스, 트레할로스, 셀로비오스 등과 같은 이당류; 라피노스, 멜레지토스, 말토덱스트린, 덱스트란, 전분 등과 같은 다당류; 및 알디톨, 예컨대, 만니톨, 자일리톨, 말티톨, 락티톨, 자일리톨 소르비톨(글루시톨) 및 미오이노시톨이 또한 부형제로서 사용될 수 있다.

담체는 또한 완충제 또는 pH 조절제, 예컨대, 유기 산 또는 염기로부터 제조된 염을 포함할 수 있다. 완충제의 예는 유기산 염, 예컨대, 시트르산, 아스코르브산, 글루콘산, 탄산, 타르타르산, 석신산, 아세트산, 또는 프탈산의 염, Tris, 트로메타민 하이드로클로라이드, 및 포스페이트 완충제를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 추가적인 담체는 폴리머 부형제 또는 첨가제, 예컨대, 폴리비닐피롤리돈, 피콜(폴리머 당), 덱스트레이트(예를 들어, 사이클로덱스트린, 예컨대, 2-하이드록시프로필-4차-사이클로덱스트린), 폴리에틸렌 글리콜, 착향제, 항균제, 감미제, 산화방지제, 대전방지제, 계면활성제(예를 들어, 폴리소르베이트, 예컨대, TWEEN 20® 및 TWEEN 80®), 지질(예를 들어, 인지질, 지방산), 스테로이드(예를 들어, 콜레스테롤), 및 킬레이트제(예를 들어, EDTA)를 포함할 수 있다.

투여 방법

대상체에게 하나 이상의 GAD 이식 유전자를 전달하는 방법은 단일 또는 다중 투여 경로에 의해 rAAV를 투여하는 것을 포함할 수 있다. 예를 들어, rAAV는 혈액-뇌 장벽을 횡단하는 유효량의 rAAV의 정맥내 주사에 의해 대상체에 투여될 수 있다. 척추강내 투여 또는 예를 들어, 뇌실내 주사에 의한 뇌내 투여는 또한 유효량의 rAAV를 CNS로 전달하기 위해 사용될 수 있다. 비제한적인 예에서, 유효량의 rAAV는 2개의 상이한 투여 경로에 의해, 예를 들어, 척추강내 투여 및 뇌내 투여에 의해 공동 투여될 수 있다. 공동-투여는 대략 동시에, 또는 상이한 시간에 수행될 수 있다.

용어 "척수강내 투여(intrathecal administration)"는 뇌척수액(CSF)에 도달하도록 척수관, 또는 지주막하 공간으로의 제제의 투여를 지칭한다. 용어 "뇌내 투여(intracerebral administration)"는 뇌 내부 및/또는 뇌 주위에 제제의 투여를 지칭한다. 뇌내 투여는 뇌, 뇌교, 소뇌, 두개강, 및 뇌를 둘러싼 수막에 제제의 투여를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 뇌내 투여는 뇌의 경질막, 거미막 물질 및 연막에서의 투여를 포함할 수 있다. 뇌내 투여는 일부 경우에, 뇌를 둘러싸는 지주막하 공간의 뇌척수액(CSF)에 제제의 투여를 포함할 수 있다. 뇌내 투여는, 일부 경우에, 뇌의 심실, 예를 들어, 우측 뇌실, 좌측 뇌실, 제3 뇌실, 제4 뇌실에의 제제의 투여를 포함할 수 있다.

뇌내 주사는 뇌 내로 및/또는 뇌 주위에 직접 주사를 포함할 수 있다. 일부 경우에, 뇌내 투여는 정밀한 전달을 위해 정위 절차(stereotactic procedure)를 이용한 주사를 포함한다. 정위 미세주사 기술은 당업계에 잘 알려져 있고, 뇌의 특정 부분으로 벡터의 정밀한 전달을 위해 당업계에서 사용되어 있다. 절차는 컴퓨터 및 3차원 스캐닝 디바이스의 사용을 포함한다. 이러한 방법에서, 치료되는 대상체는 정위 프레임 베이스(stereotactic frame base) 내에 배치되고 이후에 치료될 특정 영역의 3차원 정위화를 결정하기 위해 고해상도 MRI를 사용하여 영상화될 수 있다. MRI 이미지는 이후 조성물의 미세주사를 위한 정밀한 표적 부위를 결정하는 데 사용될 수 있다. 정위 컴퓨터 소프트웨어는 정위 프레임에 대해 정밀하게 등록된 3차원 좌표를 제공한다. 두개내 전달을 위해, 진입 부위 위에 천공 구멍을 뚫고, 정위 장치를 사용하여 바늘을 위치시키고 사전결정된 깊이에 이식을 보장한다. 양측 전달의 경우, 문서 관리자가 임의의 실수를 피하기 위해 외과의와 표적 부위를 수동으로 확인하는 냉각 기간(cooling period)이 구현될 수 있다. 정위 미세주사는 해마, 피질, 시상하부 핵 및/또는 흑질을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 뇌의 임의의 특정 부분에 벡터를 전달하는 데 사용될 수 있다. 일부 예에서, 미세주사 펌프는 본 명세서에 기술된 바와 같은 rAAV의 조성물을 전달하는 데 사용될 수 있다. 주입 속도는 대상체의 연령, 대상체의 체중/크기, AAV의 혈청형, 선택된 뇌내 영역 등과 같은 다양한 인자에 따라 1 ㎕/분 내지 100 ㎕/분으로 다양할 수 있다. 또 다른 실시형태에서, 벡터는 국소 전달에 적합한 다른 전달 방법, 예컨대, 혈액-뇌 장벽의 국소 투과를 이용하여 전달된다.

요법에 필요한 투여 요법은 최적의 요망되는 반응(예를 들어, 치료적 또는 예방적 반응)을 제공하도록 조정될 수 있다. 예를 들어, 단일 용량이 투여될 수 있거나, 여러 분할 용량이 시간에 따라 투여될 수 있거나, 용량은 요법에 대한 대상체의 반응성에 따라 비례적으로 감소 또는 증가될 수 있다.

본 명세서에 기술된 벡터는 GAD가 아닌 하나 이상의 치료제와 함께 사용될 수 있다. 예를 들어, 요법은 레보도파 또는 카르비도파와 같은 도파민 대체 요법, 프라미펙솔, 로피네롤 및 브로모크립틴과 같은 도파민 효능제, 셀레글린 및 라사길렌과 같은 MAO-억제제, 엔트라카폰 및 톨카폰과 같은 카테콜 O-메틸트랜스퍼라제(COMT) 억제제, 및 본 명세서에 기술된 바와 같은 PD와 관련된 하나 이상의 증상을 치료하기 위해 당업계에 공지된 임의의 제제를 비제한적으로 포함하는 다양한 다른 화합물과 조합하여 사용될 수 있다. 벡터 또는 벡터들은 질환을 치료하는 데 사용되는 다른 제제와 동시에 또는 별도로 PD를 앓고 있는 대상체에 투여될 수 있다.

본 명세서에 기술된 바와 같은 키트는 제제, 조성물, 성분, 시약, 투여 디바이스 또는 메커니즘, 또는 본 명세서에 제공된 다른 실체의 임의의 조합을 포함할 수 있다. 예를 들어, 본 명세서에 기술된 바와 같은 키트는 하나 이상의 AAV-GAD 벡터, 및 담체 조성물, 투여 디바이스, 및 병용 치료제 중 하나 이상을 포함할 수 있다. 키트는 주사용 시린지와 같은 전달을 용이하게 하는 디바이스 또는 뇌, 예를 들어, 흑색질로 치료 조성물의 전달을 용이하게 하는 도구를 추가로 포함할 수 있다. 본 명세서에 제공된 임의의 키트는 투여 설명서와 함께 용기, 팩 또는 디스펜서에 포함될 수 있다.

실시예

실시예 1: 연구 설계

개시된 치료 방법을 가장 잘 수용하는 PD 환자 집단의 확인.

환자 선택

진행성 PD를 갖는 66명의 환자를 STN AAV2-GAD 유전자 요법의 무작위, 이중-맹검, 모의 수술-대조 다기관 2상 시험에 참여할 적격성에 대해 스크리닝하였고, 45명을 무작위화하였다. 모든 환자는 UK 파킨슨병 학회(UK Parkinson's Disease Society) 기준에 의해 정의된 바와 같은 진행성 레보도파-반응성 PD를 가졌다. 레보도파 외에, 등록 전 4주 이상 동안 용량 또는 약물 타입에 변화가 없는 경우 이러한 장애에 대한 다른 약물을 허용하였다. 25 이상의 밤새 약물 중지 통합 파킨슨병 등급 척도(UPDRS) 파트 3 합산 하위 점수(운동 점수)가 필요하였다. 추가 포함 기준은 연령 30 내지 75세, 적어도 5년 동안의 PD의 증상 지속기간, 및 적어도 12개월 동안의 레보도파 반응성이었다. 환자는 이전에 뇌 수술을 받았거나, 도파민-수용체 차단 약물을 사용하거나, 국소 신경학적 결함이 있거나, 비정상적인 두개골 MRI를 가질 수 없었으며; ¹⁸F-플루오로데옥시글루코스 PET 스캔은 비정형 파킨슨병 또는 불확실한 패턴을 갖는 환자를 배제한 PD에 특이적인 대사성 뇌 패턴에 대한 기준에 따라 PD와 양립할 필요가 있었다. 환자는 또한 130 미만의 Mattis 치매 등급 척도 점수에 의해 정의된 인지 장애에 대해 제외되었다.

무작위화

PharmaNet Inc의 통계학자 및 프로그래머(각각 연구에서 추가 역할 없음)가 무작위화 코드를 생성하였다. 무작위화 전에, 모든 대상체는 FDG PET로 휴지 상태에서 대사성 뇌 영상화를 받았다. 비정형 파킨슨병 병태를 제거하기 위한 스크리닝 후, PD를 갖는 45명의 대상체를 1:1로 무작위화하여 STN AAV2-GAD 유전자 요법(n = 22) 또는 모의 수술(n=23)을 받았다. 환자가 수술실에 도착했을 때, 신경외과 의사는 AAV2-GAD 또는 모의 절차에 대한 컴퓨터 생성 무작위 치료 배정(비 1:1)으로 엔벨로프(envelope)를 열었다. 환자, 간병인, 및 조사자는 치료 할당에 대해 마스킹되었다. 모의-지정 환자의 경우, 수술실 팀은 AAV2-GAD 그룹에 대해 수행된 것과 동일한 양측 정위 절차를 시뮬레이션하기 위해 이전에 리허설된 계획을 제정하였다. 모의로 처리된 것들은 정위 프레임이 배치된 후 부분-두께 버 홀(burr hole)을 수용하였다. 시뮬레이션은 미세전극 전기생리학적 녹음의 소리를 포함하였으며; 버 홀 부위에 생리 식염수를 주입하는 주입 펌프 및 외부 카테터를 AAV2-GAD 주입을 받은 환자와 정확하게 동일하게 사용되었다. 치료 할당에 대한 모든 정보에 대해 마스킹이 신중하게 계획되었고, 임의의 부위에서 편차가 발생하지 않았다. 모든 평가자는 치료 할당에 대해 마스킹되었으며, 격리된 수술후 이미지 및 수술 기록에 접근할 수 없었다. 수술 3일 후 및 모든 후속 방문에서, 환자에게 치료 할당에 대한 의견을 질문하였다. 45명의 초기 대상체 중에서, 8명은 사전결정된 기준에 기초하여, 약물 전달 실패(펌프 고장, STN의 부정확한 표적화)로 인한 맹검 해제 전 데이터 분석에서 제외되었다.

분석을 위한 환자 집단의 치료 후 선택

대상체 및 조사자는 절차 후 적어도 6개월 동안 치료 상태에 대해 맹검되었으며; 치료 그룹의 6명의 대상체 및 모의 그룹의 2명의 대상체는 놓친 수술 표적 또는 카테터/펌프 오작동으로 인해 분석에서 제외되었다. 기준선에서, 연령, 성별, UPDRS 운동 등급, 또는 인지 시험에서 그룹 차이는 없었다(P > 0.07). 대상체를 수술 6개월 후(각 그룹에서 1명의 대상체 제외) 및 다시 12개월에 연구 종료 시에 맹검 하에서 재스캔하였다. 최종 참가자가 6개월의 맹검 후속 조치를 완료한 후 대상체를 동시에 맹검 해제하였다. 외과적 절차는 1년의 기간에 걸쳐 시차를 두었으며, 이에 따라 대부분의 참가자[모의 그룹의 22명 중 16명(73%); GAD 그룹의 20명 중 11명(55%)]는 맹검 해제 후 12개월에 영상촬영하였으며, 나머지 6명의 모의 및 9명의 GAD 대상체는 이러한 12개월 시점에 여전히 맹검 하에 있었다.

실시예 2: 바이러스 벡터 작제

시토메갈로바이러스 인핸서-닭 β-액틴 프로모터 및 우드척 전사-후 조절 요소의 조절 하에 인간 GAD-65 또는 GAD-67의 오픈 리딩 프레임을 인코딩하는 DNA를 함유하는 AAV-GAD 플라스미드를 생성하였다. 재조합 AAV 게놈을 인간 배아 신장(HEK) 293 세포에 패키징하고, 표준 절차에 따라 그리고 앞서 기재된 바와 같이 헤파린 친화성 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 최종 제형 완충제는 1× 포스페이트-완충된 염수 용액이었다. 게놈 벡터 역가를 ABI7000 Sequence Detection System(Applied Biosystems, 미국 캘리포니아 포스터 시티 소재)으로 절대 정량화에 의해 측정하였다.

실시예 3: 벡터 전달

GAD-65 또는 GAD-67을 인코딩하는 바이러스를 1:1 비로 혼합하고, 2× 포스페이트-완충된 염수 용액으로 1×10¹¹개의 바이러스 게놈(vg)/㎖(저용량), 3×10¹¹개의 vg/㎖(중간 용량), 및 1×10¹²개의 vg/㎖(고용량)까지 희석하였다. 벌크 수확물 및 최종 제형화된 생성물은 FDA 가이드라인에 따라 로트-방출 시험(lot-release testing)으로 엄격하게 시험하였다. 마이코플라스마, 내독소, 무균성, 및 외래성 바이러스에 대한 생물안전성 시험, 및 일반 안전성 시험을 수행하였다(AppTec Laboratory Services, 미국 필라델피아 소재). 염수 용액으로 모의 처리를 수행하였다.

시상하부 핵을 Leksell 정위 프레임 및 MRI 이미지 유도로 국소화하였다. 표준 수술 중 미세전극 기록을, 시상하부 핵의 정밀한 위치를 확인하기 위해, 깨어 있는 대상체에서 수행하였다. 이후에, 미세전극의 첨단을 시상하부 핵의 중심으로 여겨진 곳으로 빼내었다. 미세전극을 제거한 후, 가이드 튜브를 핵 중심에서 10㎜ 위로 삽입하였다. 200㎛ I 직경의 10㎜ 첨단을 갖는 카테터를 AAV2-GAD 주입액으로 플러싱하고, 핵의 추정 중심에 삽입하였다. 카테터를 침대 옆에서 시술 후 방출을 위해 카테터를 테더링하는 립-코드(rip-cord)를 함유하는 캡으로 적소에 고정시켰다. 카테터 폐색을 피하기 위해 제1 카테터의 배치 후 두피를 닫았다. 반구 당 AAV2-GAD의 용량(35㎕의 1×10¹²개의 게놈/㎖)을 PD 대상체의 시상하부 핵에 양측으로 제공하였다. 절차를 두피의 양 측면에서 수행하였다. 뇌의 각 측면 상에서 수술의 시작은 연구 조정자 또는 다른 외과 팀원이 외과의에 의해 기록된 좌표를 확인하고 뇌 침투 전에 서면으로 문서화될 때 타임-아웃(time-out)이 선행된다. PD 대상체의 또 다른 그룹은 시상하부 핵에 일측으로 반구당 AAV2-GAD의 용량(35㎕의 1×10¹¹개의 게놈/㎖)을 수용하였다. PD 대상체의 또 다른 그룹은 시상하부 핵에 일측으로 반구당 AAV2-GAD의 용량(35㎕의 3×10¹¹개의 게놈/㎖)을 수용하였다. PD 대상체의 또 다른 그룹은 시상하부 핵에 일측으로 반구당 AAV2-GAD의 용량(35㎕의 1×10¹²개의 게놈/㎖)을 수용하였다. 주입 완료 후, 카테터 첨단 위치들의 위치를 결정하기 위해 미세-절단 두부 CT 스캔을 수행하였다. 치료 후 24시간 및 48시간 간격으로 모든 대상체에 대해 카테터 후 CT 및 MRI 스캔을 수행하였다.

실시예 3: 치료 후 "약효 개시 시간"의 결정

시상하부 핵 내로의 AAV-GAD(GAD) 또는 모의 수술(sham)을 받은 대상체는 나열된 각각의 기간(수술 후 1, 3, 6 및 12개월)에 2주 동안 매일 일지에 시간 단위의 약효 개시 시간 및 약효 종료 시간을 기록하였다. 일지로부터 결정된 2주 기간 동안의 평균 일일 약효 개시 시간 및 약효 종료 시간은 양측 T 검정을 사용하여 수술 후 약효 개시 시간의 시간 수의 변화를 결정하기 위해 수술 전 30일 이내에 취해진 베이스라인 일지와 비교하였다. 수술 후 12개월에, AAV-GAD 치료 그룹에서 대상체당 기준선으로부터의 평균 일일 약효 개시 시간의 변화는 동일한 기간에 걸쳐 동일한 대상체에 대한 임상 점수의 변화와 상관관계가 있었다. 사용된 임상 점수는 UPDRS의 파트 3이었다.

서열

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SEQUENCE LISTING <110> MEIRAGTX UK II LIMITED <120> METHODS FOR TREATING PARKINSON'S DISEASE <130> WO/2021/119615 <140> PCT/US2020/064928 <141> 2020-12-14 <150> US 62/947418 <151> 2019-12-12 <160> 9 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 585 <212> PRT <213> HOMO SAPIENS <400> 1 Met Ala Ser Pro Gly Ser Gly Phe Trp Ser Phe Gly Ser Glu Asp Gly 1 5 10 15 Ser Gly Asp Ser Glu Asn Pro Gly Thr Ala Arg Ala Trp Cys Gln Val 20 25 30 Ala Gln Lys Phe Thr Gly Gly Ile Gly Asn Lys Leu Cys Ala Leu Leu 35 40 45 Tyr Gly Asp Ala Glu Lys Pro Ala Glu Ser Gly Gly Ser Gln Pro Pro 50 55 60 Arg Ala Ala Ala Arg Lys Ala Ala Cys Ala Cys Asp Gln Lys Pro Cys 65 70 75 80 Ser Cys Ser Lys Val Asp Val Asn Tyr Ala Phe Leu His Ala Thr Asp 85 90 95 Leu Leu Pro Ala Cys Asp Gly Glu Arg Pro Thr Leu Ala Phe Leu Gln 100 105 110 Asp Val Met Asn Ile Leu Leu Gln Tyr Val Val Lys Ser Phe Asp Arg 115 120 125 Ser Thr Lys Val Ile Asp Phe His Tyr Pro Asn Glu Leu Leu Gln Glu 130 135 140 Tyr Asn Trp Glu Leu Ala Asp Gln Pro Gln Asn Leu 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atgatgatcg cacgctttaa gatgttccca 780 gaagtcaagg agaaaggaat ggctgctctt cccaggctca ttgccttcac gtctgaacat 840 agtcattttt ctctcaagaa gggagctgca gccttaggga ttggaacaga cagcgtgatt 900 ctgattaaat gtgatgagag agggaaaatg attccatctg atcttgaaag aaggattctt 960 gaagccaaac agaaagggtt tgttcctttc ctcgtgagtg ccacagctgg aaccaccgtg 1020 tacggagcat ttgaccccct cttagctgtc gctgacattt gcaaaaagta taagatctgg 1080 atgcatgtgg atgcagcttg gggtggggga ttactgatgt cccgaaaaca caagtggaaa 1140 ctgagtggcg tggagagggc caactctgtg acgtggaatc cacacaagat gatgggagtc 1200 cctttgcagt gctctgctct cctggttaga gaagagggat tgatgcagaa ttgcaaccaa 1260 atgcatgcct cctacctctt tcagcaagat aaacattatg acctgtccta tgacactgga 1320 gacaaggcct tacagtgcgg acgccacgtt gatgttttta aactatggct gatgtggagg 1380 gcaaagggga ctaccgggtt tgaagcgcat gttgataaat gtttggagtt ggcagagtat 1440 ttatacaaca tcataaaaaa ccgagaagga tatgagatgg tgtttgatgg gaagcctcag 1500 cacacaaatg tctgcttctg gtacattcct ccaagcttgc gtactctgga agacaatgaa 1560 gagagaatga gtcgcctctc gaaggtggct ccagtgatta aagccagaat gatggagtat 1620 ggaaccacaa tggtcagcta ccaacccttg ggagacaagg tcaatttctt ccgcatggtc 1680 atctcaaacc cagcggcaac tcaccaagac attgacttcc tgattgaaga aatagaacgc 1740 cttggacaag atttataa 1758 <210> 3 <211> 600 <212> PRT <213> HOMO SAPIENS <400> 3 Met Ser Pro Ile His His His His His His Leu Val Pro Arg Gly Ser 1 5 10 15 Glu Ala Ser Asn Ser Gly Phe Trp Ser Phe Gly Ser Glu Asp Gly Ser 20 25 30 Gly Asp Ser Glu Asn Pro Gly Thr Ala Arg Ala Trp Cys Gln Val Ala 35 40 45 Gln Lys Phe Thr Gly Gly Ile Gly Asn Lys Leu Cys Ala Leu Leu Tyr 50 55 60 Gly Asp Ala Glu Lys Pro Ala Glu Ser Gly Gly Ser Gln Pro Pro Arg 65 70 75 80 Ala Ala Ala Arg Lys Ala Ala Cys Ala Cys Asp Gln Lys Pro Cys Ser 85 90 95 Cys Ser Lys Val Asp Val Asn Tyr Ala Phe Leu His Ala Thr Asp Leu 100 105 110 Leu Pro Ala Cys Asp Gly Glu Arg Pro Thr Leu Ala Phe Leu Gln Asp 115 120 125 Val Met Asn Ile Leu Leu Gln Tyr Val Val Lys Ser Phe Asp Arg Ser 130 135 140 Thr Lys Val Ile Asp Phe His Tyr Pro Asn Glu Leu Leu Gln Glu Tyr 145 150 155 160 Asn Trp Glu Leu Ala Asp Gln Pro Gln Asn Leu Glu Glu Ile Leu Met 165 170 175 His Cys Gln Thr Thr Leu Lys Tyr Ala Ile Lys Thr Gly His Pro Arg 180 185 190 Tyr Phe Asn Gln Leu Ser Thr Gly Leu Asp Met Val Gly Leu Ala Ala 195 200 205 Asp Trp Leu Thr Ser Thr Ala Asn Thr Asn Met Phe Thr Tyr Glu Ile 210 215 220 Ala Pro Val Phe Val Leu Leu Glu Tyr Val Thr Leu Lys Lys Met Arg 225 230 235 240 Glu Ile Ile Gly Trp Pro Gly Gly Ser Gly Asp Gly Ile Phe Ser Pro 245 250 255 Gly Gly Ala Ile Ser Asn Met Tyr Ala Met Met Ile Ala Arg Phe Lys 260 265 270 Met Phe Pro Glu Val Lys Glu Lys Gly Met Ala Ala Leu Pro Arg Leu 275 280 285 Ile Ala Phe Thr Ser Glu His Ser His Phe Ser Leu Lys Lys Gly Ala 290 295 300 Ala Ala Leu Gly Ile Gly Thr Asp Ser Val Ile Leu Ile Lys Cys Asp 305 310 315 320 Glu Arg Gly Lys Met Ile Pro Ser Asp Leu Glu Arg Arg Ile Leu Glu 325 330 335 Ala Lys Gln Lys Gly Phe Val Pro Phe Leu Val Ser Ala Thr Ala Gly 340 345 350 Thr Thr Val Tyr Gly Ala Phe Asp Pro Leu Leu Ala Val Ala Asp Ile 355 360 365 Cys Lys Lys Tyr Lys Ile Trp Met His Val Asp Ala Ala Trp Gly Gly 370 375 380 Gly Leu Leu Met Ser Arg Lys His Lys Trp Lys Leu Ser Gly Val Glu 385 390 395 400 Arg Ala Asn Ser Val Thr Trp Asn Pro His Lys Met Met Gly Val Pro 405 410 415 Leu Gln Cys Ser Ala Leu Leu Val Arg Glu Glu Gly Leu Met Gln Asn 420 425 430 Cys Asn Gln Met His Ala Ser Tyr Leu Phe Gln Gln Asp Lys His Tyr 435 440 445 Asp Leu Ser Tyr Asp Thr Gly Asp Lys Ala Leu Gln Cys Gly Arg His 450 455 460 Val Asp Val Phe Lys Leu Trp Leu Met Trp Arg Ala Lys Gly Thr Thr 465 470 475 480 Gly Phe Glu Ala His Val Asp Lys Cys Leu Glu Leu Ala Glu Tyr Leu 485 490 495 Tyr Asn Ile Ile Lys Asn Arg Glu Gly Tyr Glu Met Val Phe Asp Gly 500 505 510 Lys Pro Gln His Thr Asn Val Cys Phe Trp Tyr Ile Pro Pro Ser Leu 515 520 525 Arg Thr Leu Glu Asp Asn Glu Glu Arg Met Ser Arg Leu Ser Lys Val 530 535 540 Ala Pro Val Ile Lys Ala Arg Met Met Glu Tyr Gly Thr Thr Met Val 545 550 555 560 Ser Tyr Gln Pro Leu Gly Asp Lys Val Asn Phe Phe Arg Met Val Ile 565 570 575 Ser Asn Pro Ala Ala Thr His Gln Asp Ile Asp Phe Leu Ile Glu Glu 580 585 590 Ile Glu Arg Leu Gly Gln Asp Leu 595 600 <210> 4 <211> 1803 <212> DNA <213> HOMO SAPIENS <400> 4 atgtccccta tacatcacca tcaccatcac ctggttccgc gtggatccga agcttcgaat 60 tctggctttt ggtctttcgg gtcggaagat ggctctgggg attccgagaa tcccggcaca 120 gcgcgagcct ggtgccaagt ggctcagaag ttcacgggcg gcatcggaaa caaactgtgc 180 gccctgctct acggagacgc cgagaagccg gcggagagcg gcgggagcca acccccgcgg 240 gccgccgccc ggaaggccgc ctgcgcctgc gaccagaagc cctgcagctg ctccaaagtg 300 gatgtcaact acgcgtttct ccatgcaaca gacctgctgc cggcgtgtga tggagaaagg 360 cccactttgg cgtttctgca agatgttatg aacattttac ttcagtatgt ggtgaaaagt 420 ttcgatagat caaccaaagt gattgatttc cattatccta atgagcttct ccaagaatat 480 aattgggaat tggcagacca accacaaaat ttggaggaaa ttttgatgca ttgccaaaca 540 actctaaaat atgcaattaa aacagggcat cctagatact tcaatcaact ttctactggt 600 ttggatatgg ttggattagc agcagactgg ctgacatcaa cagcaaatac taacatgttc 660 acctatgaaa ttgctccagt atttgtgctt ttggaatatg tcacactaaa gaaaatgaga 720 gaaatcattg gctggccagg gggctctggc gatgggatat tttctcccgg tggcgccata 780 tctaacatgt atgccatgat gatcgcacgc tttaagatgt tcccagaagt caaggagaaa 840 ggaatggctg ctcttcccag gctcattgcc ttcacgtctg aacatagtca tttttctctc 900 aagaagggag ctgcagcctt agggattgga acagacagcg tgattctgat taaatgtgat 960 gagagaggga aaatgattcc atctgatctt gaaagaagga ttcttgaagc caaacagaaa 1020 gggtttgttc ctttcctcgt gagtgccaca gctggaacca ccgtgtacgg agcatttgac 1080 cccctcttag ctgtcgctga catttgcaaa aagtataaga tctggatgca tgtggatgca 1140 gcttggggtg ggggattact gatgtcccga aaacacaagt ggaaactgag tggcgtggag 1200 agggccaact ctgtgacgtg gaatccacac aagatgatgg gagtcccttt gcagtgctct 1260 gctctcctgg ttagagaaga gggattgatg cagaattgca accaaatgca tgcctcctac 1320 ctctttcagc aagataaaca ttatgacctg tcctatgaca ctggagacaa ggccttacag 1380 tgcggacgcc acgttgatgt ttttaaacta tggctgatgt ggagggcaaa ggggactacc 1440 gggtttgaag cgcatgttga taaatgtttg gagttggcag agtatttata caacatcata 1500 aaaaaccgag aaggatatga gatggtgttt gatgggaagc ctcagcacac aaatgtctgc 1560 ttctggtaca ttcctccaag cttgcgtact ctggaagaca atgaagagag aatgagtcgc 1620 ctctcgaagg tggctccagt gattaaagcc agaatgatgg agtatggaac cacaatggtc 1680 agctaccaac ccttgggaga caaggtcaat ttcttccgca tggtcatctc aaacccagcg 1740 gcaactcacc aagacattga cttcctgatt gaagaaatag aacgccttgg acaagattta 1800 taa 1803 <210> 5 <211> 594 <212> PRT <213> HOMO SAPIENS <400> 5 Met Ala Ser Ser Thr Pro Ser Ser Ser Ala Thr Ser Ser Asn Ala Gly 1 5 10 15 Ala Asp Pro Asn Thr Thr Asn Leu Arg Pro Thr Thr Tyr Asp Thr Trp 20 25 30 Cys Gly Val Ala His Gly Cys Thr Arg Lys Leu Gly Leu Lys Ile Cys 35 40 45 Gly Phe Leu Gln Arg Thr Asn Ser Leu Glu Glu Lys Ser Arg Leu Val 50 55 60 Ser Ala Phe Arg Glu Arg Gln Ser Ser Lys Asn Leu Leu Ser Cys Glu 65 70 75 80 Asn Ser Asp Arg Asp Ala Arg Phe Arg Arg Thr Glu Thr Asp Phe Ser 85 90 95 Asn Leu Phe Ala Arg Asp Leu Leu Pro Ala Lys Asn Gly Glu Glu Gln 100 105 110 Thr Val Gln Phe Leu Leu Glu Val Val Asp Ile Leu Leu Asn Tyr Val 115 120 125 Arg Lys Thr Phe Asp Arg Ser Thr Lys Val Leu Asp Phe His His Pro 130 135 140 His Gln Leu Leu Glu Gly Met Glu Gly Phe Asn Leu Glu Leu Ser Asp 145 150 155 160 His Pro Glu Ser Leu Glu Gln Ile Leu Val Asp Cys Arg Asp Thr Leu 165 170 175 Lys Tyr Gly Val Arg Thr Gly His Pro Arg Phe Phe Asn Gln Leu Ser 180 185 190 Thr Gly Leu Asp Ile Ile Gly Leu Ala Gly Glu Trp Leu Thr Ser Thr 195 200 205 Ala Asn Thr Asn Met Phe Thr Tyr Glu Ile Ala Pro Val Phe Val Leu 210 215 220 Met Glu Gln Ile Thr Leu Lys Lys Met Arg Glu Ile Val Gly Trp Ser 225 230 235 240 Ser Lys Asp Gly Asp Gly Ile Phe Ser Pro Gly Gly Ala Ile Ser Asn 245 250 255 Met Tyr Ser Ile Met Ala Ala Arg Tyr Lys Tyr Phe Pro Glu Val Lys 260 265 270 Thr Lys Gly Met Ala Ala Val Pro Lys Leu Val Leu Phe Thr Ser Glu 275 280 285 Gln Ser His Tyr Ser Ile Lys Lys Ala Gly Ala Ala Leu Gly Phe Gly 290 295 300 Thr Asp Asn Val Ile Leu Ile Lys Cys Asn Glu Arg Gly Lys Ile Ile 305 310 315 320 Pro Ala Asp Phe Glu Ala Lys Ile Leu Glu Ala Lys Gln Lys Gly Tyr 325 330 335 Val Pro Phe Tyr Val Asn Ala Thr Ala Gly Thr Thr Val Tyr Gly Ala 340 345 350 Phe Asp Pro Ile Gln Glu Ile Ala Asp Ile Cys Glu Lys Tyr Asn Leu 355 360 365 Trp Leu His Val Asp Ala Ala Trp Gly Gly Gly Leu Leu Met Ser Arg 370 375 380 Lys His Arg His Lys Leu Asn Gly Ile Glu Arg Ala Asn Ser Val Thr 385 390 395 400 Trp Asn Pro His Lys Met Met Gly Val Leu Leu Gln Cys Ser Ala Ile 405 410 415 Leu Val Lys Glu Lys Gly Ile Leu Gln Gly Cys Asn Gln Met Cys Ala 420 425 430 Gly Tyr Leu Phe Gln Pro Asp Lys Gln Tyr Asp Val Ser Tyr Asp Thr 435 440 445 Gly Asp Lys Ala Ile Gln Cys Gly Arg His Val Asp Ile Phe Lys Phe 450 455 460 Trp Leu Met Trp Lys Ala Lys Gly Thr Val Gly Phe Glu Asn Gln Ile 465 470 475 480 Asn Lys Cys Leu Glu Leu Ala Glu Tyr Leu Tyr Ala Lys Ile Lys Asn 485 490 495 Arg Glu Glu Phe Glu Met Val Phe Asn Gly Glu Pro Glu His Thr Asn 500 505 510 Val Cys Phe Trp Tyr Ile Pro Gln Ser Leu Arg Gly Val Pro Asp Ser 515 520 525 Pro Gln Arg Arg Glu Lys Leu His Lys Val Ala Pro Lys Ile Lys Ala 530 535 540 Leu Met Met Glu Ser Gly Thr Thr Met Val Gly Tyr Gln Pro Gln Gly 545 550 555 560 Asp Lys Ala Asn Phe Phe Arg Met Val Ile Ser Asn Pro Ala Ala Thr 565 570 575 Gln Ser Asp Ile Asp Phe Leu Ile Glu Glu Ile Glu Arg Leu Gly Gln 580 585 590 Asp Leu <210> 6 <211> 1785 <212> DNA <213> HOMO SAPIENS <400> 6 atggcgtctt cgaccccatc ttcgtccgca acctcctcga acgcgggagc ggaccccaat 60 accactaacc tgcgccccac aacgtacgat acctggtgcg gcgtggccca tggatgcacc 120 agaaaactgg ggctcaagat ctgcggcttc ttgcaaagga ccaacagcct ggaagagaag 180 agtcgccttg tgagtgcctt cagggagagg caatcctcca agaacctgct ttcctgtgaa 240 aacagcgacc gggatgcccg cttccggcgc acagagactg acttctctaa tctgtttgct 300 agagatctgc ttccggctaa gaacggtgag gagcaaaccg tgcaattcct cctggaagtg 360 gtggacatac tcctcaacta tgtccgcaag acatttgatc gctccaccaa ggtgctggac 420 tttcatcacc cacaccagtt gctggaaggc atggagggct tcaacttgga gctctctgac 480 caccccgagt ccctggagca gatcctggtt gactgcagag acaccttgaa gtatggggtt 540 cgcacaggtc atcctcgatt tttcaaccag ctctccactg gattggatat tattggccta 600 gctggagaat ggctgacatc aacggccaat accaacatgt ttacatatga aattgcacca 660 gtgtttgtcc tcatggaaca aataacactt aagaagatga gagagatagt tggatggtca 720 agtaaagatg gtgatgggat attttctcct gggggcgcca tatccaacat gtacagcatc 780 atggctgctc gctacaagta cttcccggaa gttaagacaa agggcatggc ggctgtgcct 840 aaactggtcc tcttcacctc agaacagagt cactattcca taaagaaagc tggggctgca 900 cttggctttg gaactgacaa tgtgattttg ataaagtgca atgaaagggg gaaaataatt 960 ccagctgatt ttgaggcaaa aattcttgaa gccaaacaga agggatatgt tcccttttat 1020 gtcaatgcaa ctgctggcac gactgtttat ggagcttttg atccgataca agagattgca 1080 gatatatgtg agaaatataa cctttggttg catgtcgatg ctgcctgggg aggtgggctg 1140 ctcatgtcca ggaagcaccg ccataaactc aacggcatag aaagggccaa ctcagtcacc 1200 tggaaccctc acaagatgat gggcgtgctg ttgcagtgct ctgccattct cgtcaaggaa 1260 aagggtatac tccaaggatg caaccagatg tgtgcaggat atctcttcca gccagacaag 1320 cagtatgatg tctcctacga caccggggac aaggcaattc agtgtggccg ccacgtggat 1380 atcttcaagt tctggctgat gtggaaagca aagggcacag tgggatttga aaaccagatc 1440 aacaaatgcc tggaactggc tgaatacctc tatgccaaga ttaaaaacag agaagaattt 1500 gagatggttt tcaatggcga gcctgagcac acaaacgtct gtttttggta tattccacaa 1560 agcctcaggg gtgtgccaga cagccctcaa cgacgggaaa agctacacaa ggtggctcca 1620 aaaatcaaag ccctgatgat ggagtcaggt acgaccatgg ttggctacca gccccaaggg 1680 gacaaggcca acttcttccg gatggtcatc tccaacccag ccgctaccca gtctgacatt 1740 gacttcctca ttgaggagat agaaagactg ggccaggatc tgtaa 1785 <210> 7 <211> 594 <212> PRT <213> HOMO SAPIENS <400> 7 Met Ala Ser Ser Thr Pro Ser Ser Ser Ala Thr Ser Ser Asn Ala Gly 1 5 10 15 Ala Asp Pro Asn Thr Thr Asn Leu Arg Pro Thr Thr Tyr Asp Thr Trp 20 25 30 Cys Gly Val Ala His Gly Cys Thr Arg Lys Leu Gly Leu Lys Ile Cys 35 40 45 Gly Phe Leu Gln Arg Thr Asn Ser Leu Glu Glu Lys Ser Arg Leu Val 50 55 60 Ser Ala Phe Lys Glu Arg Gln Ser Ser Lys Asn Leu Leu Ser Cys Glu 65 70 75 80 Asn Ser Asp Arg Asp Ala Arg Phe Arg Arg Thr Glu Thr Asp Phe Ser 85 90 95 Asn Leu Phe Ala Arg Asp Leu Leu Pro Ala Lys Asn Gly Glu Glu Gln 100 105 110 Thr Val Gln Phe Leu Leu Glu Val Val Asp Ile Leu Leu Asn Tyr Val 115 120 125 Arg Lys Thr Phe Asp Arg Ser Thr Lys Val Leu Asp Phe His His Pro 130 135 140 His Gln Leu Leu Glu Gly Met Glu Gly Phe Asn Leu Glu Leu Ser Asp 145 150 155 160 His Pro Glu Ser Leu Glu Gln Ile Leu Val Asp Cys Arg Asp Thr Leu 165 170 175 Lys Tyr Gly Val Arg Thr Gly His Pro Arg Phe Phe Asn Gln Leu Ser 180 185 190 Thr Gly Leu Asp Ile Ile Gly Leu Ala Gly Glu Trp Leu Thr Ser Thr 195 200 205 Ala Asn Thr Asn Met Phe Thr Tyr Glu Ile Ala Pro Val Phe Val Leu 210 215 220 Met Glu Gln Ile Thr Leu Lys Lys Met Arg Glu Ile Val Gly Trp Ser 225 230 235 240 Ser Lys Asp Gly Asp Gly Ile Phe Ser Pro Gly Gly Ala Ile Ser Asn 245 250 255 Met Tyr Ser Ile Met Ala Ala Arg Tyr Lys Tyr Phe Pro Glu Val Lys 260 265 270 Thr Lys Gly Met Ala Ala Val Pro Lys Leu Val Leu Phe Thr Ser Glu 275 280 285 Gln Ser His Tyr Ser Ile Lys Lys Ala Gly Ala Ala Leu Gly Phe Gly 290 295 300 Thr Asp Asn Val Ile Leu Ile Lys Cys Asn Glu Arg Gly Lys Ile Ile 305 310 315 320 Pro Ala Asp Phe Glu Ala Lys Ile Leu Glu Ala Lys Gln Lys Gly Tyr 325 330 335 Val Pro Phe Tyr Val Asn Ala Thr Ala Gly Thr Thr Val Tyr Gly Ala 340 345 350 Phe Asp Pro Ile Gln Glu Ile Ala Asp Ile Cys Glu Lys Tyr Asn Leu 355 360 365 Trp Leu His Val Asp Ala Ala Trp Gly Gly Gly Leu Leu Met Ser Arg 370 375 380 Lys His Arg His Lys Leu Asn Gly Ile Glu Arg Ala Asn Ser Val Thr 385 390 395 400 Trp Asn Pro His Lys Met Met Gly Val Leu Leu Gln Cys Ser Ala Ile 405 410 415 Leu Val Lys Glu Lys Gly Ile Leu Gln Gly Cys Asn Gln Met Cys Ala 420 425 430 Gly Tyr Leu Phe Gln Pro Asp Lys Gln Tyr Asp Val Ser Tyr Asp Thr 435 440 445 Gly Asp Lys Ala Ile Gln Cys Gly Arg His Val Asp Ile Phe Lys Phe 450 455 460 Trp Leu Met Trp Lys Ala Lys Gly Thr Val Gly Phe Glu Asn Gln Ile 465 470 475 480 Asn Lys Cys Leu Glu Leu Ala Glu Tyr Leu Tyr Ala Lys Ile Lys Asn 485 490 495 Arg Glu Glu Phe Glu Met Val Phe Asn Gly Glu Pro Glu His Thr Asn 500 505 510 Val Cys Phe Trp Tyr Ile Pro Gln Ser Leu Arg Gly Val Pro Asp Ser 515 520 525 Pro Gln Arg Arg Glu Lys Leu His Lys Val Ala Pro Lys Ile Lys Ala 530 535 540 Leu Met Met Glu Ser Gly Thr Thr Met Val Gly Tyr Gln Pro Gln Gly 545 550 555 560 Asp Lys Ala Asn Phe Phe Arg Met Val Ile Ser Asn Pro Ala Ala Thr 565 570 575 Gln Ser Asp Ile Asp Phe Leu Ile Glu Glu Ile Glu Arg Leu Gly Gln 580 585 590 Asp Leu <210> 8 <211> 1785 <212> DNA <213> HOMO SAPIENS <400> 8 atggcgtctt cgaccccatc ttcgtccgca acctcctcga acgcgggagc ggaccccaat 60 accactaacc tgcgccccac aacgtacgat acctggtgcg gcgtggccca tggatgcacc 120 agaaaactgg ggctcaagat ctgcggcttc ttgcaaagga ccaacagcct ggaagagaag 180 agtcgccttg tgagtgcctt caaggagagg caatcctcca agaacctgct ttcctgtgaa 240 aacagcgacc gggatgcccg cttccggcgc acagagactg acttctctaa tctgtttgct 300 agagatctgc ttccggctaa gaacggtgag gagcaaaccg tgcaattcct cctggaagtg 360 gtggacatac tcctcaacta tgtccgcaag acatttgatc gctccaccaa ggtgctggac 420 tttcatcacc cacaccagtt gctggaaggc atggagggct tcaacttgga gctctctgac 480 caccccgagt ccctggagca gatcctggtt gactgcagag acaccttgaa gtatggggtt 540 cgcacaggtc atcctcgatt tttcaaccag ctctccactg gattggatat tattggccta 600 gctggagaat ggctgacatc aacggccaat accaacatgt ttacatatga aattgcacca 660 gtgtttgtcc tcatggaaca aataacactt aagaagatga gagagatagt tggatggtca 720 agtaaagatg gtgatgggat attttctcct gggggcgcca tatccaacat gtacagcatc 780 atggctgctc gctacaagta cttcccggaa gttaagacaa agggcatggc ggctgtgcct 840 aaactggtcc tcttcacctc agaacagagt cactattcca taaagaaagc tggggctgca 900 cttggctttg gaactgacaa tgtgattttg ataaagtgca atgaaagggg gaaaataatt 960 ccagctgatt ttgaggcaaa aattcttgaa gccaaacaga agggatatgt tcccttttat 1020 gtcaatgcaa ctgctggcac gactgtttat ggagcttttg atccgataca agagattgca 1080 gatatatgtg agaaatataa cctttggttg catgtcgatg ctgcctgggg aggtgggctg 1140 ctcatgtcca ggaagcaccg ccataaactc aacggcatag aaagggccaa ctcagtcacc 1200 tggaaccctc acaagatgat gggcgtgctg ttgcagtgct ctgccattct cgtcaaggaa 1260 aagggtatac tccaaggatg caaccagatg tgtgcaggat acctcttcca gccagacaag 1320 cagtatgatg tctcctacga caccggggac aaggcaattc agtgtggccg ccacgtggat 1380 atcttcaagt tctggctgat gtggaaagca aagggcacag tgggatttga aaaccagatc 1440 aacaaatgcc tggaactggc tgaatacctc tatgccaaga ttaaaaacag agaagaattt 1500 gagatggttt tcaatggcga gcctgagcac acaaacgtct gtttttggta tattccacaa 1560 agcctcaggg gtgtgccaga cagccctcaa cgacgggaaa agctacacaa ggtggctcca 1620 aaaatcaaag ccctgatgat ggagtcaggt acgaccatgg ttggctacca gccccaaggg 1680 gacaaggcca acttcttccg gatggtcatc tccaacccag ccgctaccca gtctgacatt 1740 gacttcctca ttgaggagat agaaagactg ggccaggatc tgtaa 1785 <210> 9 <211> 224 <212> PRT <213> HOMO SAPIENS <400> 9 Met Ala Ser Ser Thr Pro Ser Ser Ser Ala Thr Ser Ser Asn Ala Gly 1 5 10 15 Ala Asp Pro Asn Thr Thr Asn Leu Arg Pro Thr Thr Tyr Asp Thr Trp 20 25 30 Cys Gly Val Ala His Gly Cys Thr Arg Lys Leu Gly Leu Lys Ile Cys 35 40 45 Gly Phe Leu Gln Arg Thr Asn Ser Leu Glu Glu Lys Ser Arg Leu Val 50 55 60 Ser Ala Phe Lys Glu Arg Gln Ser Ser Lys Asn Leu Leu Ser Cys Glu 65 70 75 80 Asn Ser Asp Arg Asp Ala Arg Phe Arg Arg Thr Glu Thr Asp Phe Ser 85 90 95 Asn Leu Phe Ala Arg Asp Leu Leu Pro Ala Lys Asn Gly Glu Glu Gln 100 105 110 Thr Val Gln Phe Leu Leu Glu Val Val Asp Ile Leu Leu Asn Tyr Val 115 120 125 Arg Lys Thr Phe Asp Arg Ser Thr Lys Val Leu Asp Phe His His Pro 130 135 140 His Gln Leu Leu Glu Gly Met Glu Gly Phe Asn Leu Glu Leu Ser Asp 145 150 155 160 His Pro Glu Ser Leu Glu Gln Ile Leu Val Asp Cys Arg Asp Thr Leu 165 170 175 Lys Tyr Gly Val Arg Thr Gly His Pro Arg Phe Phe Asn Gln Leu Ser 180 185 190 Thr Gly Leu Asp Ile Ile Gly Leu Ala Gly Glu Trp Leu Thr Ser Thr 195 200 205 Ala Asn Thr Asn Met Pro Ser Asp Met Arg Glu Cys Trp Leu Leu Arg 210 215 220

Claims (14)

1. 파킨슨병(PD)의 치료를 필요로 하는 대상체에서 파킨슨병(PD)을 치료하는 방법으로서,
   (a) 하루에 10시간 미만의 약효 개시 시간(on-time)을 갖는 대상체를 확인하는 단계; 및
   (b) 상기 대상체에게 치료학적 유효량의 하나 이상의 벡터를 포함하는 조성물을 환자의 시상하부 핵(subthalamic nucleus)에 투여하는 단계로서, 각각의 벡터는 글루탐산 데카복실라제(GAD)를 인코딩하는 핵산 서열을 포함하며, 상기 대상체의 약효 개시 시간은 증가되는, 상기 투여하는 단계
   를 포함하는, 방법.
2. 제1항에 있어서, 상기 대상체가 치료 전 하루에 8시간 미만의 약효 개시 시간을 갖는, 방법.
3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 대상체가 약물 중단 상태(off medication state)에서 UPDRS의 파트 III에서 30점 이상을 얻는, 방법.
4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 하나 이상의 상기 벡터가 상기 환자의 시상하부 핵에 양측으로 도입되는, 방법.
5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 하나 이상의 상기 벡터가 GAD-65를 인코딩하는 핵산 서열 및 GAD-67을 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는, 방법.
6. 제5항에 있어서, 상기 조성물이 약 1:1 비의 GAD-65를 인코딩하는 벡터 및 GAD-67을 인코딩하는 벡터를 포함하는, 방법.
7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 하나 이상의 상기 벡터가 바이러스 벡터인, 방법.
8. 제7항에 있어서, 상기 바이러스 벡터가 아데노-관련 바이러스(AAV) 벡터인, 방법.
9. 제7항 또는 제8항에 있어서, 상기 조성물이 적어도 1×10¹¹개의 벡터 게놈/㎖를 포함하는, 방법.
10. 제7항 또는 제8항에 있어서, 상기 조성물이 적어도 3×10¹¹개의 벡터 게놈/㎖를 포함하는, 방법.
11. 제7항 또는 제8항에 있어서, 상기 조성물이 적어도 1×10¹²개의 벡터 게놈/㎖를 포함하는, 방법.
12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체가 치료 후 12개월에 약효 개시 시간의 적어도 40% 증가를 나타내는, 방법.
13. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체가 치료 후 12개월에 약효 개시 시간의 적어도 30% 증가를 나타내는, 방법.
14. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체가 치료 후 12개월에 약효 개시 시간의 적어도 20% 증가를 나타내는, 방법.

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