SA516370359B1

SA516370359B1 - مؤازرات مستقبل فاسوبريسين -2

Info

Publication number: SA516370359B1
Application number: SA516370359A
Authority: SA
Inventors: فارمر-كوبينول باولين; ريفير بييري; ويسنيوسكي كازيميرز; شتينجارت كلاودي
Original assignee: .فيرينج بي. في
Priority date: 2013-07-26
Filing date: 2016-01-06
Publication date: 2017-11-08

Abstract

يتعلق الاختراع بمؤازرات فاسوبريسين -2، وتركيباتها الدوائية، وطرق لاستخدامها في علاج البوال التفه الناتج عن مرض السكر، وسلس البول الليلي الأوليِّ، والبوال الليلي.

Description

— \ — مؤازرات مستقبل فاسوبريسين -؟ ‎Vasopressin-2 receptor agonists‏ الوصف الكامل خلفية الاختراع يتعلق الاختراع الحالي بمركبات جديدة ذات نشاط مؤازر عند مستقبل فاسوبريسين ‎Vasopressin‏ -؟ والتركيبات الدوائية المحتوية على تلك المركبات؛ واستخدام المركبات المذكورة في تصنيع أدوية لعلاج الأمراض. © هناك ‎١‏ أنواع فرعية معروفة من مستقبلات الفاسوبريسين ‎vasopressin receptors‏ وهي ‎Via‏ 15لا ‎V2‏ ويعرف مستقبل 1/15 أيضاً بمستقبل ‎V3‏ كما يعرف ‎Via‏ أيضاً بمستقبل 1. ولكل من تلك الأنواع ‎Lol‏ نمط خاص لإظهار الصيغة الوراثية في الأنسجة؛ حيث يوجد 2 بشكل أساسي في الكلى ويعمل كعامل وسيط في النشاط المضاد للتبول ‎antidiuretic‏ ‎activity‏ بالنسبة لمجموعة الفاسوبريسين ذاتية المنقاً ‎endogenous ligand vasopressin‏ ‎.(Favory et al, 2009( ٠‏ ويتوزع ‎VIb‏ على نطاق واسع في المخ ‎Hernando et ) brain‏ 1 ..81)؛ بينما يوجد ‎VIA‏ في أنواع مختلفة من الأنسجة بما في ذلك العضلات الملساء ‎smooth muscle‏ ؛ والكبد ‎liver‏ ؛ والكلى ‎kidney‏ ؛ والصفائح الدموية ‎platelets‏ ؛ والطحال ‎spleen‏ « والمخ )1994 ‎Ostrowski et al.,‏ ;1996 ,21099). ‎Pret xp‏ مؤزرات مستقبل ‎V2‏ مفيدة ‏ من الناحية السريرية؛ ‎Jad‏ ثم اعتماد الدسموبريسين ‎Desmopressin | ٠‏ (مؤازر مستقبل ‎(V2‏ في علاج البوال الكاذب الناتج عن مرض السكر ‎diabetes insipidus‏ ؛ وسلس البول الليلي الأولي ‎primary nocturnal enuresis‏ » والبوال الليلي ‎nocturia‏ ؛ واضطرابات تجلط الدم ‎Wy coagulation disorders‏ في ذلك اضطرابات النزاف الدموي ‎haemophilia‏ ومرض ‎Von Willebrand"‏ ويرتبط الدسموبريسين مع مستقبلات ‎V2‏ و15/ ويقوم بتنشيطها؛ ولكن يظهر نشاطاً أقل على مستقبل ‎Via‏

— اذ وقد تبين أنه يتم بشكل جزئي إفراز الدسموبريسين من خلال الكلى ‎e.g.

Fjellestad-Paulsen)‏ ‎(et al., 1993‏ وأن فترة نصف العمر بالنسبة للدسموبريسين تزيد لدى مرضى ‎Jal)‏ الكلوي ‎(Ruzicka, et al. 2003; Agersoe et al. 2004) renal impairment‏ وقد اقترح ‎Agersoe‏ وآخرين أن زيادة فترة نصف العمر قد تؤدي إلى إطالة التأثير المضاد للتبول وزيادة © مخاطر حدوث نقص الصوديوم في الدم ‎serum sodium levels‏ مما يؤدي بالتالي إلى مضاعفات ‎Jia‏ في الإصابة بنوبات الصرع ‎seizures‏ أو الغيبوبة ‎.coma‏ وقد ذكر الباحثون أيضاً أنه بالرغم من الاستخدام الآمن للدسموبريسين وتحمله بشكل جيد من قبل المرضى المصابين بالفشل الكلوي ‎renal function‏ « إل أنه من الواجب اتخاذ الاحتياطات اللازمة فيما يتعلق بنظام الجرعة في حال أن يتم بشكل كامل علاج مرضى الفشل الكلوي المعتدل أو الشديد ‎moderately‏ ‎OF severe renal function | ٠‏ باستخدام الدسموبريسين. لذلك؛ فهناك ‎dala‏ إلى مؤزرات إضافية لمستقبل ‎V2‏ تكون ذات نشاط منخفض عند مستقبل ‎Vb‏ واضافة إلى ذلك؛ فإنه من المرغوب أيضاً أن يتم توفير مؤزرات لمستقبل ‎V2‏ لا يعتمد تصريفها من الجسم على الكلى بشكل كامل. ‎ua olf‏ العام للاختراع ‎yo‏ في أحد التجسيدات؛ يعرض الاختراع مركب له الصيغة | أو ملح منه مقبول دوائياً: فج ‎HN”‏ ‎S 0‏ ندل ‎pe‏ ‎N 0‏ فج ‎N N v‏ ‎J N 1‏ 7 ‎Lo‏ ‎HN N‏ ‎Lak Ar‏ 3 0 2ج - 0 0(

_ _ 2 عبارة عن لاء أو ‎C1-C4‏ ألكيل ‎alkyl‏ ؛ أو هالوجين ‎halogen‏ « أو ‎«-OH‏ أو -0- ‎C1-C4‏ ألكيل؛ ‎R3‏ عبارة ع ‎«—CH2-OH JH‏ أر ‎¢C(0)-NR5R6‏ ‎R4 ©‏ عبارة عن ‎¢«~=C(=NH)-NH2 JH‏ و6 تمثل بشكل مستقل ‎(H‏ أو ‎(Jf C1-C6‏ أو ‎—CH2‏ سيكلو بروبيل ‎cyclopropyl‏ « أو سيكلو بروبيل» أو أريل ألكيل ‎arylalkyl‏ ؛ شريطة ألا تكون كل من 45 ‎R65‏ عبارة عن ‎tH‏ ‏7 تمثل بشكل مستقل -6012- أو -5-؛ شريطة أنه في حال أن تكون ‎X‏ عبارة عن - ‎CH2-‏ فإن 7 لا تمثل هنا -6012-؛ —OH ‏أو 61-64 ألكيل أو هالوجين أو‎ (H ‏عبارة عن‎ R7 ‏أو 5؛ حيث‎ CHR7 ‏عبارة عن‎ 27 ٠ ‏أو 4©-0-01- ألكيل؛‎ «CH3 ‏أو‎ H ‏عبارة عن‎ 8

Cl— ‏عبارة عن أريل غير متجانس أو فينيل به استبدال اختياري بواسطة واحدة من مجموعات‎ Ar ‏أو 0-01-64- ألكيل.‎ «—OH ‏ألكيل؛ أو هالوجين» أو‎ C4 5 في بعض التجسيدات؛ تمتل ‎RS‏ و6 بشكل مستقل مجموعة ‎H‏ أو 6©-61 ألكيل؛ أو أريل ألكيل. وفي بعض التجسيدات؛ تمتل 45 و6 بشكل مستقل مجموعة اا أو 6©-61 ‎«JH‏ أو أريل ألكيل. وفي بعض التجسيدات فإن كل من 45 و46+ا لا ‎HBS‏ ‎Yo‏ وفي بعض التجسيدات؛ تكون واحدة فقط من 7 و7 عبارة عن -5-. وفي بعض التجسيدات تكون ‎X‏ عبارة عن -112©-. وفي بعض التجسيدات تكون كل من 7 و7 عبارة عن -5-. ‏اح

‎Qo _‏ _ وفي بعض التجسيدات تكون ‎Ar‏ عبارة عن ثيوفين ‎thiophene‏ ‏وفي بعض التجسيدات؛ تكون ‎R‏ عبارة عن ‎—CH3‏ ‏وفي بعض التجسيدات؛ تكون ‎R3‏ عبارة عن ‎.—C(O)-NRSRO‏ وفي تجسيدات معينة؛ تكون ‎RS‏ عبارة عن ‎ROH‏ عبارة عن 01-04 ألكيل. وفي تجسيدات معينة تكون كل من ‎R5‏ ‎R65 ©‏ عبارة عن ‎.—CH2-CH3‏ ‏وفي بعض التجسيدات؛ تكون ‎RZ‏ عبارة عن هالوجين. وفي تجسيدات معينة؛ تكون 2+ عبارة عن ‎CL‏ وفي تجسيدات أخرى تكون ‎R2‏ عبارة عن ]-. ويعرض الاختراع أيضاً وفقاً لأحد التجسيدات طريقة لعلاج واحدة من حالات البوال الكاذب الناتج عن مرض السكرء وسلسل البول الليلي الأوليٌ؛ والبوال الليلي. وتشتمل هذه الطريقة على إعطاء ‎٠‏ المريض الذي بحاجة إلى العلاج كمية فعالة علاجياً من المركب وفق الصيغة ا. ويشتمل الاختراع أيضاً على استخدام المركبات التي جاء وصفها هنا في علاج الحالات المرضية المذكورة؛ مع استخدام تلك المركبات في تصنيع دواء لعلاج تلك الحالات. ووفقاً لأحد التجسيدات؛ يستخدم مركب الصيغة | كدواء لعلاج أي من البوال الكاذب الناتج عن مرض السكرء أو سلس البول الليلي الأولي؛ أو البوال الليلي. ‎Vo‏ الوصف ‎١‏ لتفصيلي: ما لم يذكر خلاف ذلك؛ فإن المصطلحات المستخدمة في هذا الطلب؛ بما في ذلك المصطلحات الواردة في المواصفة وفي عناصر الحماية؛ سوف تحمل المعاني المذكورة أدناه. ويجب الإشارة هنا إلى أن صيغ المفرد المذكورة في المواصفة وفي عناصر الحماية المرفقة تضم الإشارة إلى صيغ الجمع ما لم يتطلب السياق غير ذلك. ويمكن مطالعة تعريفات المصطلحات ‎٠‏ الكيميائية القياسية من خلال الأعمال المرجعية بما في ذلك المرجع: ‎Carey and Sundberg‏ ‎Advanced Organic Chemistry 5th Ed.

Vols.

A and 8, Plenum‏ )2007( ‎(Press, New York‏ وما لم يتطلب السياق غير ذلك؛ فإنه عند ممارسة الاختراع الحالي تستخدم هنا الطرق التقليدية في الكيمياء العضوية التخليقية ‎synthetic organic chemistry‏ «

-- وقياسات طيف الكتلة ‎mass spectroscopy‏ ؛ وطرق الكروماتوجراف التحضيري والتحليلي ‎preparative and analytical methods of chromatography‏ ؛ وكيمياء البروتين ‎protein chemistry‏ ؛ والكيمياء الحيوية ‎biochemistry‏ ؛ وعلوم الأدوية ضمن المهارات المعروفة في هذا المجال. © يعني اصطلاح ‎"Jl‏ سلسلة ألكيل مستقيمة ‎straight, or branched chain alkyl‏ أو متفرعة تحتوي على 01-12. ويشتمل الألكيل المتفرع على تشكيلات أيزو 150 ؛ وسيس ‎~t5 Sec‏ ألكيل. ويعني اصطلاح ‎Aryl Ju"‏ " نظام كربوني حلقي عطري ‎cyclic aromatic carbocyclic‏ ‎ring system‏ من النوع الأحادي ‎mono‏ الثنائي -أ5 المحتوي على ‎HY ١-8‏ كربون ‎٠‏ مستبدلة اختيارياً بواسطة ‎C1-C4‏ ألكيل؛ أو هالوجين» أو ‎—OH‏ أو 64©-0-01- ألكيل. وتشتمل تلك النظم القياسية على فينيل ‎phenyl‏ مستبدل اختيارياً ‎Jigs‏ مستبدل اختيارياً. ويعرف ال "أريل ألكيل ‎Arylalkyl‏ " بأنه مجموعة ألكيل تحتوي على مجموعة استبدال ممثلة في الأريل أو الأريل غير المتجانس ‎heteroaryl‏ ‏ويعرف ال "أريل غير المتجانس" بأنه عبارة عن حلقة عطرية غير متجانسة ‎aromatic‏ ‎heterocyclic ١٠‏ تحتوي على 7-5 ذرات وبها استبدال اختياري بواسطة 01-64 ألكيل؛ أو هالوجين؛ أو ‎—OH‏ أو ‎O-C1-C4‏ ألكيل. ويكون النظام الحلقي العطري غير المتجانس عبارة عن نظام عطري أحادي الحلقة يحتوي على © ذرات حلقية؛ وفيها تختار الذرة ‎١‏ أو 7 أو ؟ أو ؛ بشكل مستقل من !1 و0 و5؛ ومن الأمثلة على ذلك نذكر هنا الإيميدازوليل ‎imidazolyl‏ ‏والثيازوليل ‎thiazolyl‏ والثينيل ‎thienyl‏ والفوريل ‎furyl‏ والبيرازوليل ‎pyrazolyl‏ والترايازوليل ‎triazolyl ٠‏ المستبدل اختيارياً. وبالنسبة للنظام الحلقي العطري غير المتجانس المحتوي على + ذرات»؛ فهو عبارة عن نظام عطري أحادي الحلقة يحتوي على 7 ذرات حلقية؛ وفيها تكون الذرة ‎١‏ ‏أو ‎١‏ أو © أو ؛ مختارة بشكل مستقل من ‎(ON‏ 5؛ ومن الأمثلة على ذلك نذكر هنا البيريديل ‎«pyridyl‏ والبيريميديل ‎pyrimidyl‏ والبيرازينيل ‎pyrazinyl‏ المستبدل اختيارياً.

—y—

وفي أحد التجسيدات؛ يعرض الاختراع تركيبة دوائية تشتمل على مركبات الاختراع. وفي تجسيد ‎oJ‏ تشتمل التركيبة الدوائية ‎Load‏ على واحدة أو أكثر من السواغات المقبولة دوائياً أو المواد الناقلة المقبولة دوائياً مع مكونات أخرى اختيارية تستخدم للأغراض العلاجية و/أو الوقائية. وتعتبر السواغات من المواد المعروفة لدى المتمرسين في هذا المجال. وتشتمل مركبات الاختراع الحالي - © دون حصر - على مركبات قاعدية مثل القواعد الحرة. وهناك مناقشة مستفيضة حول السواغات المقبولة ‎oda itso‏ متاحة في المرجع: ‎Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th‏

‎.Edition (Easton, Pennsylvania: Mack Publishing Company, 1990)‏ وهناك أمثلة على الأملاح المقبولة دوائياً؛. وهذه تشتمل على أملاح إضافة الحامض» أي الأملاح التي تتكون من خلال التفاعل مع أحماض الهيدرو هالوجين ‎Jie « hydrohalogen acids‏ ‎٠‏ حامض الهيدروكلوريك ‎hydrochloric acid‏ ؛ والأحماض المعدنية ‎Jie mineral acids‏ حامض الكبيتيك ‎sulphuric acid‏ ؛ وحامض الفوسفوريك ‎phosphoric acid‏ ؛ وحامض النتريك ‎nitric acid‏ ؛ والأحماض الأليفاتية ‎aliphatic‏ أو الأليفاتية الحلقية ‎alicyclic‏ أو العطرية ‎aromatic‏ أو الحلقية غير المتجانسة ‎Jie heterocyclic‏ حامض السلفونيك ‎sulphonic‏ ؛ والأحماض الكربوكسيلية ‎Jie carboxylic‏ حامض الفورميك ‎formic‏ ؛ وحامض الأسيتيك ‎acetic Vo‏ ؛ وحامض البروبيونيك ‎propionic‏ ؛ وحامض السكسينيك ‎succinic‏ ¢ وحامض الجليكوليك ‎glycolic‏ ؛ وحامض اللاكتيك ‎clactic‏ وحامض الماليك ‎malic‏ ؛ وحامض الطرطريك ‎tartaric‏ ؛ وحامض الستريك ‎citric‏ ؛ وحامض البنزويك ‎benzoic‏ ؛ وحامض الأسكوربيك ‎jada, «ascorbic‏ المالييك ‎maleic‏ ؛ وحامض الهيدروكسي مالييك ‎hydroxymaleic‏ « وحامض البيرونيك ‎pyruvic‏ + وحامض م- هيدروكسي بنزويك ‎hydroxybenzoic |‏ ء وحامض الإمبونيك 60050016 ؛ وحامض الميثان سلفونيك ‎methanesulphonic‏ « وحامض الإيثان سلفونيك ‎ethanesulphonic‏ ؛ وحامض الهيدروكسي إيثان سلفونيك ‎ hydroxyethanesulphonic‏ ء وحامض الهالو بنزين سلفونيك ‎halobenzenesulphonic‏ ؛ وحامض التراي فلورو اسيتيك ‎«trifluoroacetic‏ وحامض التراي فلورو ميثان سلفونيك ‎trifluoromethanesulphonic‏ « وحامض التولوين سلفونيك ‎toluenesulphonic "©‏ » وحامض التفتالين سلفونيك ‎naphthalenesulphonic‏ (راجع على سبيل

—A—

Berge et al., J. Pharm. Sci. 66:1 19, 1977 and Wermuth, C.G. and ‏المثال‎ ‎P.H. Stahl, eds. Pharmaceutical Salts: Properties, Selection and Use. .(Zurich: Verlag Helvetica Chimica Acta, 2002 solid ‏واعتماداً على طريقة إعطاء التركيبة؛ فإن التركيبات الدوائية قد تكون في شكل جرعة صلبة‎ ‏؛ أي مثلاً في شكل أقراص؛ أو تحاميل‎ liquid ‏أو سائلة‎ semi-solid ‏أو شبه صلبة‎ 5 ‏؛ أو سوائل‎ powders ‏أو مساحيق‎ «NewS ‏؛ أو‎ pills ‏؛ أو حيبات صغيرة‎ Suppositories ‏أو غسولات‎ ointments ‏؛ أو كريمات» أو مراهم‎ suspensions ‏أو معلقات‎ «liquids ‏أو ما شابه؛ ويفضل أن تكون في شكل وحدة جرعة مناسبة للتناول مرة واحدة بجرعة‎ lotions ‏دقيقة. وتشتمل التركيبات على كمية فعالة من العقار المختار بالترافق مع مادة حاملة مقبولة دوائياً؛‎

Aas) ‏وقد تشتمل - إضافة إلى ذلك - على عوامل دوائية أخرى مثل المواد المساعدة؛ والمواد‎ ٠ ‏والمواد الدارثة؛ الخ.‎ ‏ويضم الاختراع تركيبة دوائية تحتوي على مركب الاختراع الحالي؛ بما في ذلك أيزومرات هذا‎ ‏المركب وخلائطها الراسيمية وغير الراسيمية؛ أو أملاح أو ذوابات منها مقبولة دوائياً» بالترافق مع‎ ‏واحدة أو أكثر من المواد الحاملة المقبولة دوائياً؛ واختيارياً مع مكونات أخرى علاجية و/أو وقائية.‎ ‏وفي التركيبات الصلبة؛ تشتمل المواد الحاملة الصلبة التقليدية غير السامة على درجات دواية من‎ Vo magnesium ‏؛ والنشاء وستيارات المغنسيوم‎ lactose ‏؛ واللاكتوز‎ mannitol ‏المانيتول‎ ‎cellulose ‏؛ والسيليلوز‎ talc ‏والتالك‎ « sodium saccharin ‏؛ وسكارين الصوديوم‎ stearate magnesium ‏؛ وكريونات المغنسيوم‎ sucrose ‏؛ والسكروز‎ glucose ‏والجلوكوز‎ ٠ ‏وما شابه.‎ ¢« carbonate ‏تكون التركيبة عادة في شكل قرصء أو كبسول؛ أو كبسول‎ «oral ‏وعند التناول عن طريق الفم‎ Yo ‏أو معلق‎ « nonaqueous solution jl ‏؛ أو محلول غير‎ softgel capsule ‏رخو‎ a ‏أو شراب؛ ويفضل هنا الأمراض والكبسولات في أشكال الجرعة التي تعطى عن‎ ¢ suspension ‏طريق الفم. وفي بعض التجسيدات؛ يكون القرص عبارة عن رقاقة سريعة الانصهار. وفي بعض‎ ‏التجسيدات؛ تعطى هذه الرقاقة تحت اللسان. وعند استخدام الأقراص والكبسولات عن طريق الفم؛‎

— q —

فإنها عادة ما تحتوي على واحدة أو أكثر من المواد الحاملة المعروفة ‎Jie‏ اللاكتوز ‎lactose‏ ونشا

الذرة. ونمطياًء قد تتم أيضاً إضافة عوامل مزلقة ‎Jie Lubricating agents‏ ستيارات المغنسيوم

‎magnesium stearate‏ . وعند استخدام المعلقات السائلة؛ قد يتم هنا دمج العامل الفعال مع

‏عوامل للاستحلاب ‎emulsifying‏ أو لتكوين المعلق. ويمكن أيضاً أن تتم عند الرغبة في ذلك

‏© إضافة عوامل منكهة ‎ifs flavoring‏ عوامل ‎Jf coloring disk‏ عوامل للتحلية

‎- ‏وهناك مكونات أخرى اختيارية يمكن دمجها في الصيغة الدوائية؛ وهذه تشتمل‎ sweetening

‏دون حصر - على المواد الحافظة ‎preservatives‏ ؛ والعوامل المكونة للمعلق ‎suspending‏ ؛

‏والعوامل المغلظة ‎thickening‏ ؛ وما شابه.

‏وتعتمد الجرعات العلاجية على معدلات امتصاص وتوزيع وأيض وإخراج مكونات التركيبة ‎٠‏ العلاجية؛ مع عوامل أخرى معروفة ‎al‏ المتمرسين في هذا المجال. وتختلف ‎af‏ الجرعة أيضا تبعا

‏لشدة الحالة المرضية المراد تخفيضها. ويجب أن ندرك هنا أن أي حالة معينة أو نظام جرعة محدد

‏قد يتم ضبطه وتعديله مع مرور الوقت تبعاً لحاجة المريض والشخص الذي يقوم بإعطاء العلاج

‏ومتابعته .

‏وفي بعض التجسيدات؛ تكون الجرعة التي تعطى عن طريق الوريد في حدود ‎٠٠١‏ نانوجرام. في - بعض التجسيدات؛ تتراوح الجرعة التي تعطى عن طريق الفم من ‎١‏ ميكروجرام إلى ‎١‏ مجم. وفي

‏بعض التجسيدات؛ تتراوح الجرعة التي تعطى عن طريق الأنف من مجم إلى ‎١‏ مجم.

‎Lad‏ يلي المختصرات المستخدمة:

‎Acetic acid ‏حامض أسيتيك‎

=« \ — ‎AVP‏ أرجينين فاسوبريسين ‎Arginine Vasopressin‏ ‎Cys—Tyr-Phe-GIn-Asn-Cys-Pro-Arg-Gly-NH2‏ مع قنطرة من ‎hall‏ سلفيدين ‎Cys disulfide‏ ‎NH‏ 0 ‎HoN SN‏ قبل 00 ‎ans‏ ‎١‏ ل 9 ل لهم[ ‎NH 5‏ 0 لاو ال رن 0 \ 0 ‎HO‏ ‎GN BTA‏ ©- بيس ‎Jie lf)‏ سيليل) أميتاميد ‎NO-‏ ‎Bis(trimethylsilyl)acetamide‏ ‏بيوتيل ‎butyl‏ — وحدات بنائية من الألكيل ‎alkyl residues‏ ؛ وهذه قد يعبر عنها أيضاً بالرمز "7" (عادي - غير متفرع)؛ و" (أيزو ‎«(iso‏ و5 ‎(Sec)‏ ‏و] (ثلاثي ‎(tertiary‏ ‎CH3CN‏ | أسيتو نتريل ‎Acetonitrile‏ ‎١‏ 7- داي كلورو إيثان ‎dichloroethane‏ ‏داي كلورو ميثان ‎Dichloromethane‏

_ \ \ —_ ‏أرجنين [ - فاسوبريسين‎ -D -A « ‏دسموبريسين؛ ] )= 2 اى أمينو‎ dDAVP

Desmopressin, [1 -deamino, 8-D-arginine]-vasopressin

HO,

NN

‏تج‎ ‎DS ~N : ‏ا‎ ‏يحص ل بخص ال‎

Ned ‏ب 1 ب‎ ‏ته اويا‎ MH 1 7 ‏حص‎ AN Hi Ne 02

HAS ‏أل‎ 0 8 0 ‏مض‎ ‎2 07 NH 0 ‏اثلا‎ H 1 ١0

BT HN Me ot ANS 1 I re

MHz 0 ‏داي أيزو بروبيل كربو داي إيميد‎ NN DIC

N,N’-Diisopropylcarbodiimide ‏أمين‎ Ja) ‏داى أيزو بروبيل‎ -N ‏يال‎ DIPEA

N,N—diisopropylethylamine ‏داى ميثيل فورماميد‎ -N ‏يال‎ DMF

N,N-dimethylformamide

— \ \ — ‎-١ dVP‏ داي أمينو - فاسوبريسين ‎deamino—vasopressin‏ ‏ل 0 2 لام اص لد لد ‎dF ae‏ ‎I‏ ال ‎Pah‏ ‏زب" 3 م 1 ‎ro)‏ ‎Hb‏ به ‎E‏ الله ل في ‎ad I‏ 8 3 0 9 ‎Ho!‏ ‏4- فلورينيل ‎oS dine‏ كربونيل ‎fluorenylmethoxycarbonyl‏ ‎ HBTU‏ ©- بنزو ترايازول ‎—N NN N=‏ تترا ميثيل - يورونيوم هكسا فلورو - فوسفات ‎O-Benzotriazole—N,N,N’,N’~tetramethyl-‏ ‎uronium,hexafluoro—phosphate‏ ‎=F «fF «fF ¢) 6٠ HFIP‏ هكسا فلورو ‎-Y-‏ بروبانول ‎1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2—propanol‏ ‏081 لا١-‏ هيدروكسي بنزو ترايازول ‎N-hydroxybenzotriazole‏ ‎HPLC‏ كروماتوجراف سائل ذو أداء عالي ‎high performance liquid‏ ‎chromatography‏ ‎oo‏ أيزو — بيوتيل ‎iso—butyl‏ yy

I

‎-١7 (1 of 7 »" Pbf‏ بنتا ميثيل داي هيدرو بنزو فيوران -5- سلفونيل ‎[ani‏ ‎ TMOF‏ ا تراي ميثيل أورثو فورمات ‎Trimethyl orthoformate‏ « تراي ميثوكسي ‎re‏ ‎trityl [triphenylmethyl, [(C6HS5)3C— ‏تريتيل [تراي فينيل ميثيل»‎ Trt ‏فح‎ >

_— ¢ \ _ وما لم يتحدد غير ذلك؛ فقد تم استخدام أحماض ‎—L‏ أمينو ‎L-amino‏ ومصطلحات الأحماض الأمينية8010 ‎amino‏ التقليدية. وفيما يلي أمثلة لأحماض أمينية أخرى خلاف الأحماض الأمينية العشرين التقليدية: : م- ‎(dss -Y)‏ ألانين-2)- 8 ‎Thi‏ ‎thienyl)alanine‏ ‏8- (© - كلورو فينيل) ألانين-4)- 8 ‎Cpa‏ ‎chlorophenyljalanine‏ ‏8- (4- فلورو فينيل) ألانين-4)- ‎B‏ ‎Fpa‏ ‎fluorophenyl)alanine‏ ‏4 — هيدروكسي برولين ‎Hyp‏ ‎e4-Hydroxyproline‏ ‎Gada‏ ١ء‏ ؟- _ثيازوليدين -؛- كربوكسيليك؛ ثيو برولين ‎Thz‏ ‎1,3-thiazolidine—4-carboxylic‏ ‎acid, thioproline‏ حامض | 7- ‎sid‏ بيوتيريك ‎Abu‏ ‎aminobutyric‏ ‏أجماتين؛ (4 - أمينو بيوتيل) جوانيدين ‎Agmatine, (4- Agm‏ ‎aminobutyl)guanidine‏

اج \ _ م- ( - ميثيل فينيل) ألانين ‎Phe(4-Me)‏ ‎B —(4-methylphenyl)alanine‏ م- (© - إيثيل فينيل) ألانين ‎Phe(4-Et)‏ ‎—(4-ethylphenyl)alanine‏ ع8 المركبات: يكون لمركبات الاختراع الصيغة ‎il‏ ‏فج ‎HN”‏ ‎S 0‏ 0 بر حجر ‎HN.___O‏ 0 , ‎Y‏ ‎T‏ 1 ‎HN “I‏ ‎Lak Ar‏ = 0 2ج - 0 وأملاح تلك المركبات المقبولة دوائياً» حيث: ‎R2 ©‏ عبارة عن ‎«JS 61-64 JH‏ أو هالوجين» أو ‎—OH‏ أو ‎—O-C1-C4‏ ألكيل؛ ‎R3‏ عبارة ع ‎«—CH2-OH JH‏ أر ‎¢C(0)-NR5R6‏ ‎R4‏ عبارة عن ‎H‏ أو ‎¢~C(=NH)-NH2‏ ‎R65 5‏ تمثتل بشكل مستقل ‎H‏ أو ‎C1-C6‏ ألكيل؛ أو ‎—CH2‏ سيكلو بروبيل؛ أو سيكلو بروبيل؛ أو أريل ألكيل» شريطة ألا تكون كل من ‎RS‏ و86 ‎be‏ عن ‎tH‏

_ أ \ _ 7 تمثل بشكل مستقل -6012- أو -5-؛ شريطة أنه في حال أن تكون ‎X‏ عبارة عن - ‎CH2-‏ فإن 7 لا تمثل هنا -0]12-؛ ‎Z‏ عبارة عن ‎CHRT‏ أو 5؛ حيث ‎RT‏ عبارة عن ‎(H‏ أو ‎C1-C4‏ ألكيل أو هالوجين أو ‎—OH‏ ‏أو 4©-0-61- ألكيل؛ ‎R§ ©‏ عبارة عن ‎«CH3 JH‏ ‎Ar‏ عبارة عن أريل غير متجانس أو فينيل به استبدال اختياري بواسطة واحدة من مجموعات ‎Cl‏ ‎C4‏ ألكيل؛ أو هالوجين» أو ‎«—OH‏ أو 0-01-64- ألكيل. جدول ‎:)١(‏ أمثلة لمركبات الاختراع: جدول ‎:)١(‏ أمثلة لمركبات الاختراع: لاه ارم مدي ‎CNA‏ >- تينيل ‎cHz| s|CH|‏ ‎thienyl NH2‏ 2 ‎oon Wel ©‏ 0000 ‎Cw CLO‏ ‎Gee oy‏ ‎I ©‏ 6-00 0200 8000-1 ؛- فلورو ‎C(=NH)-‏ ل ‎CH‏ ‎CNR) H| Cl‏ |فينيل 5 ‎CH2|‏ ‎fluoroph NH2‏ 2 7 ‎enyl‏ ~ ‎C(=NH)-‏ |؛- 5 ‎CH‏ ‎CH2| 8 2258 (NF H| OH‏ ‎NH2 A‏ فينيل 2

2 ‏فينيل‎ NH2

مستت ‎Ca‏ فا ‎CNH | CONE:‏ ‎CNH | CONE:‏ ‎ce | oe‏ ‎ce ceo‏ ‎oy‏ ى ‎s| s|CH| st —¢| C(=NH)-| C(=0)-NH-|‏ ‎NH2 CH2-2-‏ فينيل 2 ‎CN] Cor‏ ‎SL‏ ‎CN)‏ ‏: 0 أب ‎C(=NH)-‏ |؛- فلورو ‎sl sg CH|‏ ‎NH2‏ فينيل 2 بنية المركبات ‎YY‏ (المتواليات رقم ‎1-١‏ ‎a‏ ليات رقم لاو سحلي 0 5 ‎He HN” © HN 0‏ ‎APA‏ ‎N N -‏ > 80 5

7 يمي ‎Lat J‏ ‎H‏ ا

HoN nn

HN

0

HO

HL

N 2

NT

0 ‏مر(‎ ‎5 " 5 ‏رن‎ — J 2 NA

I

HoN nn

HN

5 0

HN

) pe : 0 ‏لال‎ ‎N T

N NTN

‏ب‎ TI 5 " 5

HN — J 3 EN 0 ‏و“‎ ‎0 ‏لاو‎ ‏ور‎ ‎HN ‎0 ‎lo} ‎HN ‏ل‎ HN © 0 mo 0

N : PN

NTS

0 HN_ _O 5 ‏ل‎ ‎5 ‎HN — 4 EN cl

_ \ «= ‏لاو‎ ‎= NH

HN

0 lo)

N 0 ‏ابن ضر‎

N H

6 HN_ _O " 5

HN “ry — 5 1 “Ae 0 ‏لاوا‎ ‎= NH

HN

J 0

HO 0

HN 0 ‏سيم‎ 0 5 YON : 6 HN 0 5 َ 5

H HN “uy — 6 N ‏ميم‎ ‎OH ‎H,N ‎= NH

HN

§ 1 0 ‏نعي‎ ‎N 2

ONY

06 HN_ _O 5 ‏ل‎ ‎0 — (+ 7 N “Ae 0 ‏الا‎

HoN ‏بور‎ ‎HN ‎§ i

HN? 0 ‏سيم‎ 0 7-0 0 HN_ _O 5 T

HN — ‏جل‎ ‎8 NEN

OH

HoN § i

HN?” 0 ‏سيم‎ 0

NT

0 HN. _O 5

Ts . LC

OH

HN pu

HN

§ 1

IL

N = 5 ONY 0 HN. _O 5 ‏م"‎ ‎10 ‏ان‎ —J ‏مجحب‎ ‎0 ‏الا‎

H,N oS 1 0

HN 0 J

HN © HN 5 0

A iA A

N N -

Ny > 5 11 ‏تا‎ —J - 0 ‏ل‎ ‎> ‎HoN ‎nn ‎HN ‎0 ‎0 ‎NAP 0 ‏سيم‎ 0 06 HN_ _O 5 7 5

HN — 12 EN 5 H a,

HoN

SN

0 0 5 LIL

N < 66 0 HN. _O i 7. 5

HN — 13 NEN ‏ل‎ ‎a,

لاوا ‎nn‏ ‎HN‏ ‎o‏ ‏0 ‎N‏ ‏0 لين 0 ياي محر 6 م0 0

‎Ts‏ ‎1a ON —‏ ‎cl‏ ‎HoN‏ ‎nn‏ ‎HN‏ ‏0 ‎x‏ ‎N pe 0 a 0‏ ‎N NTN‏ مر ‎HN.‏ ب" ب 5 ‎Ts‏ ‎Lp‏ . ‎A‏ ‏0 ‎HoN‏ ‎ni‏ ‎HN‏ ‎o‏ ‏0 ‎N‏ ‏0 ليم 0 لي ‎١‏ - 66 م 0 0 ‎Ss‏ 2 5 َم ‎HO‏ ‏اس 16 ‎NA‏ ‏0 ‏الا

HoN nn ; ~ 0

HO 0 ps i ‏نب‎ J

N =

N N ;

N TY

I

5

HN — 17 N ‏مم‎ ‎HoN ‎nn ‎HN ‎1 ‎0 ‎N ‏ابن ضر‎

N < ™C TS 0 HN_ _O

Ts 18 hol —J

N “No 0 ‏لاوا‎ ‏بر‎ ‎HN ‎0 ‏م‎ ‎> 0 ‏بحل‎ ‏ىر باب‎

N =

NTS

0 HN_ _O 5 T 5 ٠ Lr

N EN cl

_ \ ‏اج‎ ‏لاوا‎ ‎nn ‎HN 0 0

N pe 0 ‏سيم‎ 0

AN J

N NTN

N TY

‏م"‎ ‎20 0 J ‏مح‎ ‎cl ‎HoN ‎nn ‎HN ‎0 ‎0 ‎N ‎Do ‏انض‎ ‎N 4

NT

0 ‏ملا‎ ‎5 ‎Ts ‎21 Ho ‏ل+-”‎ ‏مجحب‎ ‎cl ‏لاوا‎ ‎=n ‎; ‎~ 0

HO o

CULL

N =

NYS

0 ‏مر لاي‎ 5 ‏م"‎ ‎22 Ho ‏ل+-”‎ ‎NA ‎Cl

_ \ ‏أ‎ _ ‏لاو‎ ‎nn ‎0 ‎~" 0

HO 0

UL

N =

NY

0 HN 0

Ts 23 Ho ‏ل+-”‎ ‏محلب‎ ‎OH ‏لاو‎ ‏بطر‎ ‎HN ‎J ‎HO ‎Sf LU

N H

‏م‎ 2770 0 HN 0 5 ‏ل‎ ‎24 ‏ل‎ “+ (7 ‏مح‎ ‎Cl ‏لاوا‎ ‏بر‎ ‎HN ‎3 i

HO 0

HN 0 ‏سيم‎ 0 ~ ON : 0 HN_ _O

Ts 2 mr ‏رحب‎ ‎cl

‏لاو‎ ‏بر‎ ‎HN ‎5 ‎0 ‎7 ‏سيم 0 راي‎ 0

N : JPN

Ae Tr 0 "ََ

NO

* Lad 0 1. 0

HoN nn

HN

0 0

N 0 > H HN 0 wo 0

N Re Ni N ; \ lo} HN 0

HO & T 5

H HN — J 0 2 cl ‏لاو‎ ‎Jn ‎HN ‎0 ‎lo) ‎HN 0 ) HN lo} ao 0

YON 8 lo) HN. _O 5 1 T

H HN — 28 N ‏يم‎ ‎cl

لاوا بير ‎HN‏ ‏5 ‏0 ‏انض 2 ‎THY‏ بنع ‎T‏ إٍّ ‎Lak —)‏ 29 ‎N v 0‏ ل يلها لاوا ‎enn‏ ‎HN‏ ‏5 ‎HN 0 0‏ الل ٍ لاود 0 ‎HN‏ ) د ‎Be TS‏ " 0 +“ بن 5 ‎ak‏ 30 8 د لاو حر ‎HN‏ ‏5 ‎HN 0 0‏ لال ٍ لاود 0 ‎HN‏ ) ع ‎HN 0‏ 0 \ ‎od | T .‏ ‎uo) —J‏ ‎Lak‏ 31 = 0 ‎AGN‏

_ \ q —_ ‏لاوا‎ ‏بور‎ ‎HN ‎0 ‎lo) ‎J) pe : 0 JPR

N =

N N - 6 TY I 8 5

HO T

HN™ = LLY yo cl

H,N ni

HN

0 0

HN

‏لبن‎ ‎N <

N N - ‏بحت‎ TY ‏م"‎ ‎33 Ho ‏ل+-”‎ ‏مح‎ ‎Cl ‏لاوا‎ ‎Jn ‎HN ‎0 ‎0 ‎PARE ‎N z

N N -

TY Hg

J. 24 HN —J ‏مب‎ ‎0 ‏الا‎

=« اذ لاو بر ‎HN‏ ‎lo)‏ ‏0 ‎HN‏ ‏لال . ‎١ : i‏ ( ‎N =‏ ‎TON‏ ‎HN_ _O‏ 0 لو 58 ‎Ts‏ ‎Lar‏ » محلب ‎cl‏ ‏لاو ‏بور ‎HN‏ ‏0 ‎fo)‏ ‎HN‏ ‏ابص ‎N R‏ = ‎N N -‏ م8 6 ‎NS‏ ‏"م" ‏ل+-” ‎ol‏ 36 مح ‎cl‏ ‎HN‏ ‏بور ‎HN‏ ‏0 ‏0 ‎HN‏ ‎SE Stel‏ ‎N R‏ = ‎N N ;‏ م48 1 بحت ‎NS‏ ‎T‏ 5 جل — ‎HN‏ ‎NSN‏ 37 ‎cl‏

HoN

Jn

HN fo) 0

HN o

HN 0 ‏سيم‎ 0

ON : 0 HN. _O 5 ‏مال‎ ‎38 H 0 ‏ل>+-»“‎ ‎N ‎“No ‎0 hg

OH

H,N pS

HN

0 0 ‏تل نا ىن‎

N H

N N Y

‏بحت‎ TY 5 ‏"م"‎ ‎39 0 ‏ل+-“‎ ‎Cl ‎H,N ‎nn ‎HN ‎§ i

HN” 0 mo 0 ‏لي‎ 0 HN 0 5 . 5 ‏ل+-” ال‎ ‏رحب‎ ‎Cl

لاوا ‎NH‏ = ‎HN‏ ‎J‏ ] 0 ‎HN © HN ~ 0‏ ‎H 3‏ ‎L EAL‏ ‎s © HN 7‏ ل 8 ‎F‏ ل — يمي ‎H‏ 41 واب ‎LU N‏ = 0 جدول (7): الخصائص الفيزيائية - الكيميائية للمركبات ١-؛‏ (المتواليات رقم ‎)41-١‏ ‏المتوالية درجة النقا حسب ‎١ (sad) M+H‏ 10+14 (المشاهدة) رقم تحليل ‎HPLC‏ ‏00 ‏اا

Cpe

يننا لا اذا ا

الا ‎rr‏ ‎EE‏ ‏جدول (4): مفاتيح تسمية الأحماض الأمينية ‎Thi‏ ؟ِّ ‎S ١‏ ‎CT‏ ‎er 7"‏ ‎Ar =‏

‎A —‏ اذ

‏الأمثلة

‏التخليق العام

‏تم شراء مشتقات الحامض الأميني من ‎dea‏ إمداد تجارية ( ‎Aapptec, EMD Millipore and‏

‎PCAS BioMatrix ( ‏كما تم شراء الراتتجات من موردين تجاريين‎ (Peptides International

‏الإضافية من ‎Sigma-Aldrich‏ ر+ا/طالا.

‏وقد تم تخليق المركبات التي جاء وصفها هنا باستخدام طرق قياسية في كيمياء ببتيد في طوره

‏الببتيد من نوع ‎(Protein Technologies Inc., Tucson, Arizona) "Tribute”‏ أو بواسطة ‎٠‏ توليفة من عمليات التخليق اليدوي والأوتوماتيكي.

‏وقد أجريت عملية كروماتوجرافية باستخدام كروماتوجراف ‎HPLC‏ التحضيري على نظام ‎Waers‏

‎(Prep LC‏ وتم هنا استخدام خرطوشة ‎PrepPact‏ (018-)080-قااونا ‎٠٠١‏ أنجستروم؛

‎Phenomenex) ase ‏مل/ دقيقة و/أو‎ ٠٠١ ‏بمعدل تدفق قدره‎ (ae 7060 X ‏ميكرومتر؛ 97؛‎ ٠

‎٠٠١ (Luna-C18‏ أنجستروم؛ ° ‎Yeo XY ¢ lg Sie‏ مم ‎Jara‏ تدفق قدره ‎[Se ta)‏ دقيقة. ‎Vo‏ وقد أجريت عملية تحلية باستخدام ‎HPLC‏ في الطور المنعكس على كروماتوجراف سائل

‎Agilent Zorbax-C18) ‏في وجود عمود من نوع‎ (Agilent Technologies 1200 rr)

‎flay Sie 4‏ ¢ 7,؛ ‎(ae ١١١ X‏ بمعدل تدفق قدره ‎٠,5‏ مل/ دقيقة. كما أجريت عمليات التحليل

‏النهائية على المركب باستخدام كروماتوجراف ‎HPLC‏ 4 الطور المنعكس ( ‎Agilent‏

‎1 ‏أنجستروم؛‎ ٠١١ «Phenomenex Gemni C18) ‏على عمود‎ (Technologies 1200 re ‏مل/ دقيقة. وقد تم تسجيل بيانات طيف الكتلة‎ ١,7 ‏مم) بمعدل تدفق قدره‎ ١٠5٠0 XY ‏ميكرومتر؛‎ ‏آها/ا. وما لم يشار إلى غير ذلك؛ فقد‎ Finningan LCQ ‏على جهاز لقياس الأطياف من نوع‎ ‏الغرفة. وتتناول المراجع الآتية إرشادات حول خطوات‎ sia ‏أجريت جميع التفاعلات تحت درجة‎ ates, S.A., Albericio, F., ‏التجارب ومدى توافر المواد البادئة والمواد الكاشفة اللازمة:‎

York, Basel, 2000; Greene, T.W., Wuts, P.G.M., Protective Groups in

Organic Synthesis, John Wiley Sons Inc., 2nd Edition, 1991; Stewart,

J.M., Young, J.D., Solid Phase Synthesis, Pierce Chemical Company, 1984; Bisello, et al., J. Biol. Chem. 1998, 273, 22498-22505; Merrifield,

J. Am. Chem. Soc. 1963, 85, 2149-2154; and Chang and White P.D., ٠ ‘Fmoc Solid Phase Peptide Synthesis: a Practical Approach’, Oxford

University Press, Oxford, 2000 ‏تم استخدام مجموعات الحماية التالية لحماية مجموعات وظيفية معينة في سلسلة أحماض أمينية‎ ‏داي هيدرو بنزو فيوران‎ Jie Wy =v 21 4 oY oY) 0567 ‏جانبية:‎ ‎—t) tBu, ¢Arg ‏بالنسبة ل‎ ) sulfonyl Jui sil —o— pentamethyldihydrobenzofuran ١٠

Asn (CLn (Cys ‏(تريتيل) بالنسبة لكل من‎ Trt eTyr ‏بيوتيل) بالنسبة ل‎ ‏كعامل وسيط في عمليات إقران الأحماض الأمينية‎ DMF ‏في‎ NMM/HBTU ‏وقد استخدم‎ ‏باستثناء مشتقات السستين التي تم إقرانها‎ (Tribute ‏على جهاز التخليق‎ FMoc ‏المجمعة بواسطة‎ —¥ ‏وفي أثناء عمليات التخليق استخدمت دورات منفردة مدتها‎ .DMF ‏في‎ HOBt/DIC ‏بواسطة‎ ‎FMOC ‏دقيقة مع كمية تزيد بمقدار © أضعاف الأحماض الأمينية النشطة المجمعة بواسطة‎ 10 Yo ultra violet rays ‏وتمت متابعة إزالة مجموعات الحماية ©7000 بواسطة الأشعة فوق البنفسجية‎ ‏ببريدين‎ 967٠0 ‏دقائق حسب الحاجة) باستخدام‎ ٠١( ‏راتنج الببتيد بشكل متعدد‎ Jue ‏وقد تم‎ ٠ .DMF ‏في‎ 086 ‏وذلك لجميع الأحماض‎ DMF ‏وقد استخدمت عمليات الاقتران التي يتوسطها 1051/1010 في‎ ‏الأمينية وفق نمط يدوي. وفي أثناء عمليات التخليق استخدمت دورات منفردة مدتها ساعتين على‎ Yo

=« _ الأقل مع ¥ أضعاف كمية الأحماض المينية المنشطة والمحمية بواسطة ‎JFMOC‏ وبعد ذلك تم تقييم اكتمال عمليات الاقتران من خلال اختبار النيهيدرين ‎(Kaiser) nihidrine‏ كما تمت إزالة مجموعات الحماية ©5000 عن طريق ‎Judd)‏ لمرة واحدة ولمدة ‎١‏ دقيقة بواسطة راتنج ببتيدي مع ‎9٠‏ ببريدين في ‎DMF‏ ‏© وبعد اكتمال تخليق ‎cal)‏ تم ‎Jue‏ الراتنجات الببتيدية بواسطة ‎DOM‏ وتم تجفيفها في وسط مفرغ الهواء. كما تمت معالجة الراتنجات بواسطة ‎diay TIS/H20/TFA‏ 7/71/97 بالحجم لمدة ساعتين» وذلك لإزالة مجموعات الحماية في السلسلة الجانبية عن طريق فصل الببتيد عن الراتنج. وقد تم ترشيح الببتيدات وترسيبها بواسطة إيثر الداي إيثيل ‎diethyl ether‏ ؛ وأجريت لها بعد ذلك عملية صفق أو ترويق . وللحصول على ببثيد ات تحتوي على قناطر من الد اي سلفيد ‎«disulfide ٠‏ تمت هنا إذابة نواتج الترسيب في ‎TFA‏ وبعد ذلك تم صب المحلول في ‎96٠١8‏ ‏أسيتو نيتريل 80810010116 .في ماء. وفي بعض الحالات؛ تمت إضافة كمية إضافية من الأسيتو نيتريل لإذابة مادة الأساس. وقد تمت أكسدة الببتيد الخطي ‎linear peptide was‏ 0 بواسطة ‎١١‏ مولار من خليط ‎(MeOH/I2‏ حيث تمت هنا إضافة قطرات من المحلول المؤكسد إلى أن استمر ظهور اللون الأصفر. وقد تم اختزال الفائض من اليود بواسطة حامض ‎١‏ أسكوربيك صلب؛ وبعد ذلك تم ضبط الرقم الهيدروجيني ‎(PH)‏ عند قيمة ؛ تقريباً باستخدام أمونيا مركزة؛ ثم ثم تحميل المحلول المتحصل عليه في عمود ‎HPLC‏ التحضيري وأجريت عملية الفصل التتابعي بدرجات من المكون ‎B=‏ (راجع الجدول أدناه). ولكي يتم تشكيل حلقات من الببتيدات عن طريق تشكيل رابطة من الأميد؛ تم هنا إذابة الببتيدات الخطية الخام في ‎DMF‏ كما تم أيضاً تحضير محلول ‎HBTU‏ في ‎.DMF‏ وقد أضيف محلول ‎٠‏ الببتيد ومحلول ‎sold)‏ المنشطة بشكل تبادلي إلى حجم معين من ‎DMF‏ المحتوي على ‎DIPEA‏ ‎dE Glad),‏ مع حفظ الرقم الهيدروجيني ‎(PH)‏ عند قيمة تتراوح من 4 إلى ‎٠١‏ عن طريق إضافة ‎.DIPEA‏ وقد تمت متابعة سير التفاعل بواسطة ‎HPLC‏ ولم يتم هنا الكشف عن أي ‎id‏ ‏لمادة الأساس بعد غضافة الأجزاء الأخيرة من محلول المادة المنشطة ومحلول الببتيد. وبعد ذلك تم تخفيف خليط التفاعل بواسطة ‎ACOH 960,١‏ وتم تحميل المحلول المتحصل عليه في عمود ‎HPLC Yo‏ التحضيري؛ مع إجراء عملية الفصل التتابعي بواسطة كميات متدرجة من المكون -8. اح

— \ ¢ — وقد تمت تنقية ‎JS‏ من الببتيدات الخام بواسطة نظام ‎TT"‏ لضبط الرقم الهيدروجيني. وقد تم صب الأجزاء التي تزيد درجة نقاؤها عن 9697 حسب تحليل ‎(HPLC‏ ثم أعيد تحميلها على العمود وأجريت لها عملية فصل تتابعي بواسطة المحلول المنظم "آ” للحصول على أملاح التراي فلورو أسيتات ‎trifluoroacetate‏ . وفي بعض الحالات؛ أجريت عملية تنقية إضافية بواسطة النظام "0" © لضبط الرقم الهيدروجيني. وللحصول على أملاح الأسيتات؛ أعيد تحميل الأجزاء الناتجة عن دورات المحلول المنظم "!” أو "©" على العمود؛ ثم تم غسل العمود بواسطة © أحجام من أسيتات الأمونيوم )+ مولار)؛ ثم أجريت عملية الفصل التتابعي للمنتج النهائي باستخدام المحلو المنظم ‎JAY‏ وبعد ذلك تم تجميع الأجزاء ثم جففت بالتجميد. جدول: مكونات المحلول المنظم 0 5 مولار من التراي ‎Ji)‏ أمونيوم | 967660 أسيتو نيتريل ‎acetonitrile‏ ‏بيركلورات ‎of Triethylammonium‏ 7460 مكون ‎JA"‏ ‎Y,Y =pH ¢ Perchlorate‏ 1" 966,1 من حامض تراي فلورو ‎96٠٠‏ أسيتو نيتريل ‎JFA ٠٠‏ أسيتيك ‎Trifluoroacetic acid‏ ‎(TFA)‏ ‎"A‏ 7 حامض أسيتيك ‎Acetic acid‏ :9660 أسيتو نيتريل» 967 ‎AcOH‏ ‎(AcOH)‏ ‎٠‏ ونمطياًء كانت درجة نقاء المركبات التي تم تحضيرها حوالي 9695 على الأقل. مثال ‎:)١(‏ المتوالية رقم: ‎YY‏ ‏تم تجميع عدد من الشظايا يتراوح من ‎١‏ إلى 7 بطريقة يدوية بدءاً من ‎VIA‏ جرام )1,8 مل مول) من راتنج ‎Pro —H‏ -؟- كلورو تريتيل ‎(EMD Millipore) AM chlorotrityl‏ رقم الكتالوج ‎AA 851 OY‏ ,+ مل مول/ جرام). وقد استخدمت هنا قارنات تتوسطها 1051/1016 في ‎«DMF‏

وه وفي أثناء عمليات التخليق تم استخدام دورات منفردة مدتها ساعتين على الأقل مع ؟ أمثال الكمية الزائدة من الأحماض الأمينية المنشطة والمجمعة بواسطة ‎FMOC‏ وقد تم تقييم اكتمال عمليات الاقتران من خلال اختبار ينهيدرين؛ كما تمت إزالة مجموعات الحماية ©0100 عن طريق غسل راتنج الببتيد لمرة واحدة مدتها ‎Foo‏ دقيقة باستخدام ‎967١‏ ببريدين في ‎DMF‏ واستخدمت هنا ‎oo‏ المشتقات الآتية للأحماض الأمينية لتجميع الوحدات البنائية ‎7-١‏ في الراتنج المرتبط بالببتيد: ‎«Fmoc-Val-OH (Fmoc-Asn(Trt)-OH Fmoc-Cys((CH2)3C(O)OtBu)-OH‏ ‎.Boc-Cpa-OH ;Fmoc-Thi-OH‏ وبعد تجميع ‎7-١‏ من الشظايا الببتيدية؛ تم غسل الراتنج بواسطة ‎DCM‏ ثم تمت معالجته بواسطة ‎HFIP/DCM‏ بنسبة ‎Y/Y‏ بالحجم ‎١ XY)‏ ساعة؛ ‎٠١‏ ‏مل في كل مرة). وقد تم تبخير المذيبات ‎solvents‏ وترسيب المادة الباقية بواسطة إيثر الإيثي ‎ethyl ether).‏ ¢ ثم أجريت عمليات الترشيح والتجفيف في وسط مفرغ الهواء؛ وتم بذلك الحصول على 4 جرام 9 1 مل مولء؛ ‎١7‏ %( من الببتيد الخام الخطي المحمي ‎crude protected‏ ‎linear peptide‏ ؛ واستخدم ما تبقى من هذا المنتج لتخليق مركبات أخرى تم وصفها في هذا الطلب. ‎:H-D-Arg-NEt2 x 2TFA‏ تمت إذابة ‎aha YAY‏ (5,4 مل مول) من -806-0 ‎(Arg(Pbf)-OH (Chem Impex, cat # 05282) ١٠‏ و ‎٠,‏ مل ‎١١,7(‏ مل مول) من ‎(DIPEA‏ و ‎7,١‏ جرام )0,71 مل مول) من ‎HBTU‏ في ‎٠١‏ مل من ‎DMF‏ ثم أضيفت إلى المحلول كمية من الداي ‎Jy)‏ أمين ‎diethylamine‏ قدرها ‎١17‏ مل )1 مل مول)؛ ولم يتم الكشف عن وجود أي ركيزة من خلال ‎HPLC‏ التحليلي بعد © دقائق. وقد صب خليط التفاعل في ‎٠٠‏ مل من الماء وتم فصل الراسب بقوى الطرد المركزية ثم جفف في وسط مفرغ الهواء. وبعد ‎٠‏ ذلك تمت معالجة المادة الباقية ب ‎٠١‏ مل من خليط ‎[TIS [TFA‏ 120 بنسبة 47[ ‎Y/Y‏ بالحجم لمدة ساعة واحدة؛ ثم بخرت المذيبات. كما تمت معالجة ‎sald)‏ الباقية بواسطة إيثر الإيثيل وأجريت لها بعد ذلك عملية صفق أو ترويق؛ وتم الحصول على 1,10 جرام )1,1 مل ‎(TY ese‏ من مشتق شبه صلب؛ وتم استخدام هذا المشتق في الخطوة التالية بدون تنقية إضافية. الاقتران مع ‎JH-D-Arg-NEt2‏ تمت إذابة 7,7 جرام ‎VAT)‏ مل مول) من الببتيد الخطي © المحمي» ول ‎Y) aba‏ مل مول) من ‎HBTU‏ في ‎٠١‏ مل ‎DMF‏ يحتوي على ‎VV‏ مل ‎£,Y)‏

ا مل ‎(Use‏ من ‎(DIPEA‏ ثم أضيف ‎٠,17‏ جرام )0+,¥ مل ‎(Use‏ من ‎H-D-Arg(Pbf)—OH x‏ ‎2TFA‏ في ‎١‏ مل من ‎DMF‏ إلى خليط التفاعل؛ ولم يتم هنا الكشف عن وجود أي من مواد الأساس بعد © دقائق بواسطة ‎HPLC‏ وقد تم ترسيب المنتج بواسطة ‎١‏ لتر ماء؛ وتم ترشيحه وتجفيفه في وسط مفرخ الهواء؛ وتم بذلك الحصول على 7,6 ‎V,YA) aba‏ مل ‎«se‏ 9647) من ‎oo‏ الببتيد الخام الخطي المحمي. وقد تمت معالجة الببتيد المحمي بشكل كامل بواسطة ‎7١‏ مل من ‎[TIS [TFA‏ 126 بنسبة 27[ ‎Y/Y‏ بالحجم ‎sad‏ ساعة واحدة؛ وبعدها تم تبخير المذيب. أما الببتيد الخطي غير المحمي فقد تم ترسيبه بواسطة إيثر الإيثيل؛ وتم بعد ذلك تجفيفه بالتجميد. المنتج- ‎VAY)‏ جرام» 9687). تمت إذابة كمية الببتيد الخطي بأكملها في ‎5٠‏ مل من ‎DMF‏ كما تم تحضير محلول يحتوي على ‎aba 240٠‏ )1,00 مل مول) من ‎HBTU‏ في ‎٠١‏ مل من ‎DMF‏ وقد تم بشكل متبادل إضافة محلول الببتيد ومحلول المادة المنشطة إلى ‎5٠‏ مل من ‎DMF‏ المقلب جيداً والمحتوي على ‎٠٠١‏ ‏ميكرولتر من ‎DIPEA‏ في ‎٠١‏ أجزاء كل منها © مل و١‏ مل على التوالي. وقد تم حفظ الرقم الهيدروجيني ‎(PH)‏ عند قيمة تتراوح من 4 إلى ‎٠١‏ عن طريق إضافة ‎oly (DIPEA‏ يتم هنا الكشف عن وجود ‎4d‏ لمادة الأساس من خلال تحليل ‎HPLC‏ بعد إضافة الأجزاء الأخيرة من ‎Vo‏ محاليل المادة المنشطة و الببتيد. وبعد ذلك تم تخفيف خليط التفاعل بواسطة ‎960.١‏ من ‎ACOH‏ ‏وصولاً إلى حجم ‎١‏ لترء وتم تحميل المحلول المتحصل عليه مباشرة في ‎HPLC spe‏ التحضيري؛ وتمت تنقيته بواسطة نظام ”آ” الخاص بتعديل الرقم الهيدروجيني؛ ثم أجريت عملية الفصل التتابعي بكميات متدرجة من المكون 8 (راجع الجدول أعلاه). وقد تم تجميع الأجزاء التي تزيد درجة نقاؤها عن 9697 حسب تحليل ‎HPLC‏ في الطور المنعكس؛ وأعيد تحميلها على ‎Yo‏ العمود. كما تم غسل العمود بواسطة © أحجام من 8001114 )),+ مولار)؛ ثم أجريت للمركب عملية فصل تتابعي باستخدام المحلول المنظم "©" للحصول بذلك على ملح الأسيتات. وقد تم تجميع الأجزاء وتجفيفها بالتجميد؛ وتم بذلك الحصول على 707:1 مجم )10+ مل مول؛ 9677 كمية كلية على أساس 9089,7 من محتوى الببتيد) من مسحوق ببتيدي أبيض اللون ‎white‏ ‎peptide‏ كما تم تحديد درجة نقاء المنتج باستخدام ‎HPLC‏ التحليلي؛ وكانت هذه الدرجة ‎Yo‏ 9095,7؛ مع قيمة ‎MAH‏ قدرها ‎٠١5,7‏ (القيمة المحسوبة- 9,5 ‎.)٠١‏

ده مثال (7): المتوالية رقم ‎٠١-‏ ‏تمت إذابة 7,77 ‎aba‏ (حوالي ‎٠,8‏ مل مول) من الببتيد الخطي ‎ead)‏ المحضّر في عملية تخليق المتوالية رقم ‎7٠١-‏ في 7 مل من ‎DMF‏ ثم أضيف 0,17 مل (7,1 مل مول؛ ؟ مكافئ) من ‎(NMM‏ وتبع ذلك إضافة ‎Y) aba +, VT‏ مل مول؛ ‎١,١‏ مكافئ) من ‎HBTU‏ وفي قنينة © منفصلة؛ تم تعليق ‎VA) aba +, TE‏ مل ‎٠,5 (Je‏ مكافئ) من كبريتات الإجماتين في ‎١‏ مل من ‎DMF‏ المحتوي على ‎١49‏ مل ‎VA)‏ مل ‎(Use‏ من 0105/8. وقد تمت إضافة !ا 0©- بيس (تراي ميثيل سيليل) أسيتاميد ‎(BTA) N,O-Bis(trimethylsilyl)acetamide‏ سيجما ألدريك - رقم الكتالوج # ‎(YVAN)‏ إلى المعلق بعد إخضاعه لمعالجة دوامية ومعالجة بالموجات الصوتية؛ وتم الحصول على محلول رائق بعد إضافة ؛ مكافئات من ‎BTA‏ إلى المعلق. وقد تم تجميع ‎٠‏ المحلولين ‎aly clea‏ يتم هنا الكشف عن وجود ‎agin‏ مادة الأساس من خلال تحليل ‎HPLC‏ بعد © دقائق. وقد تم ترسيب المنتج بواسطة ‎١‏ لتر من الماء؛ ثم رشح وتم تجفيفه في وسط مفرغ الهواء. كما تمت معالجة المسحوق الناتج بواسطة © مل من ‎[TIS [TFA‏ 120 بنسبة 15] ‎Y/Y‏ ‏بالحجم ‎add‏ ساعة ونصف؛ ثم بخر المذيب وتم ترسيب الببتيد الخطي بواسطة ‎A‏ الإيثيل؛ وأعيد حله في خليط من الماء والأسيتو نيتريل؛ ثم أجريت له عملية تجفيف بالتجميد ‎JIyophilized‏ ‎١‏ وقد تمت إذابة جميع كمية الببتيد ‎YT)‏ جرام»؛ ¥ مل مول) المتحصل عليها في الخطوة السابقة في ‎5٠0‏ مل من ‎DMF‏ وتم أيضاً تحضير محلول يحتوي على ‎VT‏ جرام ‎Y)‏ مل مول) من ‎HBTU‏ في ‎٠١‏ مل من ‎DMF‏ وقد تم بشكل متبادل إضافة محلول الببتيد ومحلول المادة المنشطة إلى ‎5٠‏ مل من ‎idl DMF‏ جيداً والمحتوي على ‎0٠0‏ ميكرولتر من 0106/8 في ‎٠١‏ ‏أجزاء بمقدار 7,5 مل 05+ مل على التوالي. وقد تم حفظ الرقم الهيدروجيني ‎(PH)‏ عند قيمة ‎٠‏ تتراوح من 9 إلى ‎٠١‏ عن طريق إضافة ‎(DIPEA‏ ولم يتم هنا الكشف عن قمة مادة الأساس بعد إضافة الأجزاء الأخيرة من محاليل المادة المنشطة والببتيد. وقد تم بعد ذلك تخفيف خليط التفاعل بواسطة ‎960,١‏ من ‎ACOH‏ وصيلاً إلى حجم ‎١‏ لترء وتم تحميل المحلول المتحصل عليه مباشرة على عمود ‎HPLC‏ التحضيري؛ ثم نقيئ بواسطة نظام ”آ”الخاص بتعديل الرقم الهيدروجيني باستخدام كمية متدرجة من المكوّن -8 (راجع الجدول أعلاه). وبالنسبة للأجزاء التي تزيد درجة ‎Yo‏ تقاؤها عن 9697 وفق تحليل ‎HPLC‏ في الطور المنعكس» فقد تم تجميعها وإعادة تحميلها على

هه العمود. وقد تم غسل العمود بواسطة © أحجام من 8001114 )),+ مولار) ثم أجريت للمركب عملية فصل تتابعي باستخدام المحلول المنظم "©" للحصول بذلك على ملح الأسيتات. وقد تم تجميع الأجزاء وتجفيفها بالتجميد؛ وأمكن بذلك الحصول على 157,7 مجم )77+ مل ‎(se‏ ‏677 من الكمية الكلية على أساس 9684,5 من محتوى الببتيد) من مسحوق ببتيدي أبيض اللون. © وبعد ذلك تم تحديد درجة نقاء المنتج؛ وكانت هذه الدرجة ‎96٠06‏ حسب تحليل ‎HPLC‏ التحليلي؛ وكانت قيمة ‎MAH‏ هي 147,6 (القيمة المحسوبة- 87,8( مثال (7): المتوالية رقم -5 تمت إضافة ‎١‏ جرام ‎١(‏ مل مول) من راتنج ‎«EMD Millipore) FMPB resin‏ كتالوج رقم # 8 ) إلى ‎٠١‏ مل من خليط ‎TMOF/ DCE‏ بنسبة ‎.١ :١‏ والى معلق الراتنج» تمت إضافة ‎٠‏ ايزو بيوتيل أمين ‎VO Je ),0) isobutyl amine‏ مل مول)؛ وتبع ذلك إضافة ‎oY‏ ؟- من تراي أسيتوكسي بورو هيدريد الصوديوم الصلب ‎solid sodium triacetoxyborohydride‏ « مع تقليب المعلق طوال الليل. وقد تم ‎Jue‏ الراتنج بواسطة ‎«(DCM (DMF (MeOH‏ وتمت معالجته بالأسيل باستخدام ‎Fmoc-D-Arg(pbf)-OH/DIC‏ )¢ مكافئ) في ‎DCM‏ كما تم ‎Jue‏ الراتنج بواسطة ‎DMF‏ وتم اختباره لمعرفة درجة اكتمال عملية الأسيلة 807181007 ؛ وذلك ‎Vo‏ باستخدام اختبار الكلورانيل ‎chloranil‏ (سلبي). وقد فصل الراتنج إلى ؟ أجزاء متساوية؛ واستمرت عملية التخليق عند مقياس ‎TT‏ ,+ مل مول في جهاز للتخليق من نوع ‎Tribute‏ وقد تم استخدام عمليات اقتران منفردة يتوسطها ‎NMM/HBTU‏ في ‎DMF‏ أو ‎HOBt/ DIC‏ (بالنسبة ل ‎(Cys‏ ‏مع كمية تزيد بمقدار © أضعاف من الأحماض الأمينية المجمعة بواسطة ‎Fmoc‏ وقد أزيلت مجموعة الحماية 0106 عن طريق الغسل عدة مرات مدة كل منها دقيقتان باستخدام ‎767٠‏ ‎cpap Ye‏ في ‎DMF‏ وتم استخدام مشتقات الأحماض الأمينية الآتية في عملية التخليق الأوتوماتيكية: ‎Fmoc-Cys((CH2)3C(0)OtBu)-OH, Fmoc-‏ ,0006-00-01 ‎Asn(Trt)-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Thi—-OH and Boc-Cpa-OH‏ وبعد تجميع متوالية الببتيد بأكملها ؛ تم فصل الببتيد عن الراتنج بواسطة ‎٠١‏ مل من ‎TIS [H20 [TFA‏ بنسبة ‎Y/Y 7‏ بالحجم لمدة ساعتين. وقد تمت إذابة الببتيد الخطي في ‎4٠0‏ مل من ‎DMF‏ المحتوي ‎Yo‏ .على ‎Yoo‏ ميكرولتر من ‎DIPEA‏ كما تم أيضاً تحضير محلول يحتوي على ‎VOY‏ مجم (4,؛

vo ‏وقد تم بشكل متبادل إضافة محلول الببتيد ومحلول‎ DMF ‏في © مل من‎ HBTU ‏مل مول) من‎ ‏أجزاء تحتوي على ؛ مل و5١ مل‎ ٠١ ‏جيداً في‎ Cd DMF ‏المنشطة إلى £0 مل من‎ sald)

Gob ‏عن‎ ٠١ ‏تتراوح من 9 إلى‎ ded ‏عند‎ (PH) ‏على التوالي. وقد تم حفظ الرقم الهيدروجيني‎ ‏بعد إضافة‎ HPLC ‏ولم يتم هنا الكشف عن قمة مادة الأساس من خلال تحليل‎ (DIPEA ‏إضافة‎ ‏المنشطة. وبعد ذلك تم تخفيف خليط التفاعل بواسطة 960,1 من‎ sald) ‏الجزء الأخير من محلول‎ 0

HPLC ‏لترء وتم تحميل المحلول المتحصل عليه مباشرة في عمود‎ ١ ‏وصولاً إلى حجم‎ ACOH ‏التحضيري؛ مع تنقية المركب في ؟ دورات متعاقبة في محلول "!” المنظم.‎ ‏وتم تجفيفها بالتجميد؛ وبذلك تم الحصول‎ AY ‏وقد تم تجميع الأجزاء التي تزيد درجة نقاؤها عن‎ ‏مل مولء 9617 كمية كلية على أساس 969 من محتوى الببتيد) من‎ vr £Y) ‏على £9 مجم‎ ‏التحليلي؛ وكانت‎ HPLC ‏مسحوق ببتيدي أبيض اللون. وقد تم تحديد درجة نقاء المنتج بواسطة‎ ٠ .)٠١ £0,0 ‏(القيمة المحسوبة-‎ ٠١ 5,7 ‏قدرها‎ MAH ‏هذه الدرجة %99,0 مع قيمة ل‎ :5- ‏مثال (4): المتوالية رقم‎ ‏؛- داي أمينو بيوتان‎ ١ resin ‏مل مول) من راتنج‎ +, F) ‏جرام‎ TY ‏تمت إضافة‎ ‏كتالوج رقم‎ «EMD Millipore) chlorotrityl ‏-؟- كلورو تريتيل‎ diaminobutane ‏ثم وضع الراتنج في وعاء تفاعل التخليق الأوتوماتيكي؛ وتم‎ (DMF ‏مل من‎ ٠١ ‏إلى‎ )856085 ١ ‏وقد استخدمت هنا عمليات اقتران منفردة‎ Tribute ‏تجميع الببتيد في جهاز للتخليق من نوع‎ ‏مع © أضعاف الكمية‎ (Cys ‏(بالنسبة ل‎ HOBt /016 ‏أو‎ DMF ‏في‎ NMM /HBTU ‏يتوسطها‎ ‎Fmoc ‏وقد أزيلت مجموعة الحماية‎ .FMoC ‏الفائضة من الأحماض الأمينية المجمعة بواسطة‎ ‏وقد تم‎ DMF ‏منها دقيقتان باستخدام 90780 ببريدين في‎ JS ‏بواسطة عمليات غسيل متعددة مدة‎ 0006-00-0١ ‏استخدام مشتقات الأحماض الأمينية الآتية في عملية التخليق الأوتوماتيكية:‎ ٠

Fmoc-Val-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH (Fmoc-Cys((CH2)3C(O)OtBu)-OH ‏وبعد تجميع المتوالية الببتيدية بأكملها ؛ تم فصل‎ .Fmoc—Thi—OH and ‏01-(نا15)لا806-1‎ ‏ساعتين. وقد تم‎ sad ‏بالحجم‎ ١7 iF ‏بنسبة‎ DCM HFIP ‏مل من‎ 7١0 ‏الببتيد عن الراتنج بواسطة‎ ‏المحمي بواسطة إيثر إيثيل لا مائي. كما‎ add) ‏ترشيح الراتنج وتبخير المذيبات؛ ثم رسب الببتيد‎ ‏مجم‎ ١١١ ‏مل أسيتو نيتريل؛ ثم أضيفت إلى المعلق كمية قدرها‎ ٠١ ‏تم ترويق الراسب وتعليقه في‎ Yo

ل )8+ مل ‎(Use‏ من ‎Z(2-C-OSU‏ مع ‎١376‏ مل ‎١,8(‏ مل مول) من ‎DIPEA‏ وبعد إذابة ‎sake‏ الأساس تم تبخير المذيب ومعالجة ‎sald)‏ الباقية بواسطة ‎٠١‏ مل من ‎H20 [TIS [TFA‏ بنسبة 40[ ‎Y/Y‏ بالحجم لمدة ‎١,5‏ ساعة. كما تم تبخير ‎TRA‏ وترسيب المادة الباقية بواسطة إيثر الداي إيثيل؛ ثم أذيب الببتيد الخطي الخام في ‎٠٠١‏ مل من ‎DMF‏ المحتوي على ‎Yoo‏ ميكرولتر © من 8/ع0ا0. وبعد ذلك تمت إضافة محلول يحتوي على ‎١7١‏ مجم ‎TY)‏ مل مول) من ‎HBTU‏ في © مل من ‎DMF‏ إلى خليط التفاعل ‎Gl)‏ جيداً. وبعد ‎To‏ دقيقة؛ تم تخفيف خليط التفاعل بواسطة ‎١‏ لتر من ‎ACOH‏ (960,1)؛ وتم تحميل المحلول المتحصل عليه على عمود ‎HPLC‏ التحضيري. كما تمت عملية الفصل التتابعي للببتيد الحلقي (967 من ‎[MeCN‏ دقيقة) في نظام ‎TY‏ الخاص بتعديل الرقم الهيدروجيني. وقد جمعت الأجزاء التي تزيد درجة نقاؤها عن 96917

‎Y‏ حسب تحليل ‎(HPLC‏ وتم تجفيف تلك الأجزاء بالتميد؛ ثم تمت معالجة نواتج التجفيف بالتجميد بواسطة © مل من خليط ‎[TMSBr‏ ثيو أنيسول/ ‎TFA‏ بنسبة ‎/١ /١‏ 1 بالحجم ‎sad‏ ساعة واحدة تحت درجة صفرم. وقد تم بعد ذلك تبخير ‎TRA‏ وتم ترسيب الببتيد بواسطة إيثر الإيثيل» مع تنقية المنتج النهائي بدورة واحدة في محلول ‎TT‏ المنظم. وقد تم تجميع الأجزاء التي تزيد درجة نقاؤها عن 9697؛ وتم تجفيف تلك الأجزاء بالتجميد. ومن

‎١‏ ذلك أمكن الحصول على 7,5لا مجم ‎VA)‏ 0 ,+ مل مولء 9677 كمية كلية على أساس 96460 من محتوى الببتيد) من مسحوق ببتيدي أبيض اللون؛ وتم تحديد درجة نقاء المنتج بواسطة ‎HPLC‏ ‏التحليلي» وكانت هذه الدرجة 9699,7؛ مع قيمة ل ‎MAH‏ قدرها 887,4 (القيمة المحسوبة = ‎(AAT ,€‏ مثال (*): المتوالية رقم -17:

‎EMD) ‏كلورو تريتيل‎ ~H-Arg (Pbf)=0-2 ‏من راتنج‎ (Use ‏مل‎ +,F) ‏ثمت إضافة 67 ,+ جرام‎ ٠ ‏تم وضع الراتتج في وعاء تفاعل‎ DMF ‏مل من‎ ٠١ ‏إلى‎ (MOTT ‏كتالوج رقم‎ (Millipore ‏وقد استخدمت هنا‎ Tribute ‏تخليق أوتوماتيكي؛ وتم تجميع الببتيد في جهاز للتخليق من نوع‎ (Cys ‏(بالنسبة ل‎ HOBt /DIC ‏أو‎ DMF ‏في‎ NMM ‏عمليات اقتران منفردة يتوسطها ل11871/‎ ‏وقد أزيلت‎ Fmoc ‏بواسطة‎ dread) ‏مع © أضعاف الكمية الفائضة من الأحماض الأمينية‎

ببريدين في ‎DMF‏ وقد تم استخدام مشتقات الأحماض الأمينية الآتية في عملية التخليق الأوتوماتيكية: ‎Fmoc- «Fmoc-Cys((CH2)3C(O)OtBu)-OH Fmoc-Pro—OH‏ ‎.Fmoc-Val-OH, Fmoc-Thi-OH and Boc-Tyr(tBu)-OH «Asn(Trt)-OH‏ وبعد تجميع 4-7 متواليات ببتيدية؛ تم إقران ‎Fmoc—Phe(4-Et)-OH‏ يدوياً باستخدام طريقة ‎[DIC‏ ‎٠‏ +1108 مع ضعف الكمية الفائضة من المواد الكاشفة. وبعد ذلك تم استبدال مجموعة ‎FMOC‏ ‏بمجموعة ‎BOC‏ عن طريق معالجة الراتنج بواسطة 9670 من ‎DMF [PIP‏ لمدة ‎T+‏ دقيقة؛ مع أسيلة مجموعة ‎—N‏ أمينو الطرفية ‎N-terminal amino‏ الوظيفية بواسطة 80020 في ‎DMF‏ ‏وقد تم فصل الببتيد الخطي عن الراتنج باستخدام ‎Fo‏ مل من خليط ‎DOM [HFIP‏ بنسبة ‎JT‏ ل بالحجم لمدة ساعتين؛» ثم رشح الراتنج وتم تبخير المذيبات. وقد رسب الببتيد الخطي المحمي - بواسطة إيثر إيثيل لا ‎Ale‏ وتم ترويق ناتج الترسيب وتجفيفه في وسط مفرغ الهواء؛ وتم بذلك الحصول على £00 مجم من الببتيد المحمي الخام. كما تمت إذابة جميع كمية الببتيد )0,7 مل مول) في ‎٠١‏ مل من ١؛ ‎=Y‏ داي كلورو إيثان ‎dichloroethane‏ المحتوي على ‎v0‏ مل من ‎DMF‏ و١1‏ ميكرولتر )£2 ,+ مل ‎(Use‏ من ‎NMM‏ وقد تم تبريد المحلول إلى درجة صفرم على حوض من الثلج؛ ثم أضيفت إليه كمية قدرها ‎6١‏ ميكرولتر )180+ مل مول) من الأيزو بيوتيل ‎١5‏ كلورو فورمات؛ مع تقليب خليط التفاعل مغناطيسياً لمدة ‎٠١‏ دقائق تحت درجة صفرم. وبعد ذلك تمت إضافة محلول يحتوي على ‎٠٠١‏ مجم )0,£ مل مول) بورو هيدريد صوديوم في © مل ماء؛ وتم تخفيف خليط التفاعل بواسطة ‎٠٠١‏ مل ماء مع فصل المنتج بالطرد المركزي ثم تجفيفه في وسط مفرخ الهواء. وبعد ذلك تمت معالجة المنتج بواسطة ‎Yo‏ مل من خليط ‎H2O TIS [TFA‏ بنسبة 30[ ‎Y,0 Y,0‏ لمدة ساعة ونصفء ثم بخر ‎TFA‏ وتم ترسيب المادة الباقية بواسطة إيثر ‎٠‏ الداي إيثيل. كما تمت إذابة الببتيد الخطي الخام في ‎Ar‏ مل من ‎DMF‏ المحتوي على ‎Vou‏ ‏ميكرولتر من ‎(DIPEA‏ ثم أضيف محلول يحتوي على ‎1١‏ مجم )0),+ مل ‎(se‏ من ‎HBTU‏ ‏في © مل من ‎DMF‏ إلى خليط التفاعل المقلّب جيداً. وبعد ‎Yo‏ دقيقة؛ تم تخفيف خليط التفاعل بواسطة ‎١‏ لتر من ‎ACOH‏ (960,1) وتم تحميل المحلول المتحصل عليه على عمود ‎HPLC‏

التحضيري؛ كما تمت تنقية الببتيد الحلقي في دورتين متتابعتين باستخدام محلول "!” المنظم.

_ q —_ وقد ثم تجميع الأجزاء التي تزيد درجة ‎sai‏ عن ‎YAY‏ ثم جففت تلك الأجزاء بالتجميد ؛ وثم يذلك الحصول على ‎£),Y‏ مجم )1079+ مل ‎(Use‏ 9617 كمية كلية على أساس 96560 من محتوى الببتيد) من مسحوق ببتيدي أبيض اللون. وقد تم تحديد ‎dap‏ نقاء المنتج بواسطة ‎HPLC‏ التحليلي» وكانت هذه الدرجة ١,9695؛‏ مع قيمة ل ‎MAH‏ قدرها 970,76 (القيمة المحسوبة = ‎Ye , lo) lo)‏ 06 التجارب (الاختبارات البيولوجية) الاختبارات التي أجريت على المستقبل معملياً نشاط مستقبل ‎V2‏ تم تحديد النشاط المؤازر للمركبات على مستقبل ‎V2‏ البشري ‎(h V2R)‏ في اختبار الجين

Sh V2 ‏لمستقبل‎ DNA ‏الانتساخي الناقل» وذلك عن طريق نقل العددي من الصيغة الوراثية‎ ٠

DNA ‏في الكلى بالمرحلة الجنينية لدى الإنسان) مع ناقل‎ YAY - ‏(السلالة الخلوية‎ HEK-293 ‏المحتوي على عناصر محفزة لاستجابة الكالسيوم داخل الخلية والتي تنظم التعبير وراثياً عن إنزيم‎

Boss, V., Talpade, D.J., Murphy, T.J. J. Biol. Chem. ‏اللوسيفراز (أنظر المرجع‎ ‏لمزيد من الإشارات حول هذا الاختبار). وقد تم‎ 1996, May 3: 271(18), 10429-10432 0 ‏أمثال لكل جرعة لمدة‎ ٠١ ‏هنا تعريض الخلايا لمجموعة من عمليات تخفيف المركبات بمقدار‎ ١ ‏ساعات؛ وتبع ذلك تحليل الخلايا لمعرفة نشاط إنزيم اللوسيفيراز وتحديد فعاليات المركب وقيم‎ ‏كعامل مقارنة‎ (ADAVP) ‏من خلال الانحدار غير الخطي. وقد استخدم الدسموبريسين‎ 0 (7) ‏داخلي في كل تجربة؛ وتظهر نتائج المركبات المختبرة في جدول‎ :/15 ‏نشاط مستقبل‎ ‎٠١‏ التحديد درجة الانتقائية تم اختبار المركبات في اختبار جين ناقل يعتمد على إنزيم اللوسيفيراز ‎luciferase‏ الانتساخي والذي يعبر وراثياً عن مستقبل ‎VID‏ البشري. وقد تم تحديد النشاط المؤازر للمركبات على ‎ah VIbR‏ اختبار الجين الناقل الانتساخي في السلالة الخلوية ‎(HEK—flpin)‏ ‎FLP In®-293‏ بعد أن تم بشكل ثابت نقل العدوى للتعبير وراثياً عن 1/1518 . وقد تم نقل العدوى إلى تلك الخلايا بواسطة ناقل ‎(NFAT-Luc)‏ المعتمد على إنزيم اللوسيفيراز والعناصر

ير - المستجيبة ل آ/-لا. الخلايا لمجموعة من عمليات تخفيف المركبات بمقدار ‎٠١‏ أمثال لكل جرعة لمدة © ساعات؛ وتبع ذلك تحليل الخلايا لمعرفة نشاط إنزيم اللوسيفيراز وتحديد فعاليات المركب ‎ads‏ 5050 من خلال الانحدار غير الخطي. وقد استخدم ‎AVP‏ كعامل مقارنة داخلي في كل تجربة؛ وتظهر نتائج المركبات المختبرة في جدول (7).

0 التصفية بالكلى:

تمت تصفية الدسموبريسين من الجسم عن طريق الكلى (التصفية بالكلى). وتتميز مركبات الاختراع بمعدل أعلى من حيث التصفية من خلال الآليات غير الكلوية. وقد أجريت تجارب الحركية الدوائية في جرذان أزيلت منها الكلى ولم تظهر في هذه الحالة تصفية غير كلوية التي تم حسابها من المعادلة: ‎.(CLnr/ CLsham)x100‏

‎٠‏ بالنسبة لدراسات الحركية الدوائية؛ تمت قسطرة جرذان من ذكور ‎Sprague Dawley‏ عن طريق الوريد الوداجي ‎jugular vein‏ (لإعطاء المركب) والشريان السباتي ‎carotid artery carotid‏ ‎artery‏ (لجمع الدم). وقد تم حقن محلول يحتوي على مركبات متعددة في قسطرة الوريد الوداجي ‎٠ ١ )‏ مجم من ‎FB‏ لكل من كل مركب 3 وآ ‎Je v,‏ لكل حيوان 3 ‎dem‏ إسمية قدرها ‎١‏ و* مجم من ‎[FB‏ كجم/ مركب). كما ثم جمع عينات الدم بعد تت نال قل ‎(Ye (Ye‏ 20( نت ‎Qe‏

‎١١ ١‏ دقيقة من إعطاء المركب باستخدام نظام أوتوماتيكي لجمع عينات الدم. وقد تم تحضير وحدة لجمع عينات الدم أوتوماتيكياً من مختبرات ‎Instech‏ (الجيل الثاني) ‎((ABS2)‏ وتم تحضير البلازما من الدم بأكمله باستخدام ‎K2EDTA‏ كعامل مضاد للتجلط؛ وبعد ذلك أجريت عملية التحليل الحيوي للعينات المحتوية على مستخلص المركب؛ وتم تحديد تركيز البلازما باستخدام طرق ‎LC/MS‏ القياسية. وقد تم أيضاً حساب تركيز نواتج التحليل من مناطق القمة؛ وذلك من

‎- SAN ‏عن طريق مطابقة خاصية‎ PK ‏خلال منحنيات المعايرة؛ وتم الحصول على بارامترات‎ ٠ ‏الزمن للمركب في كل حيوان من خلال طريقة التحليل غير الصندوقي؛ واستخدم في ذلك برنامج‎ .(pharsight ‏مؤسسة‎ x) WINNONLN®V6-3 ‏النشاط المضاد لإدرار البول‎

— \ جم ثم اختبار المركبات لمعرفة نشاطها المضاد لإدرار البول في ‎z J ga‏ جرذان . وباختصار ثم وضع جرذان ‎Sprague Dawley‏ بعد قسطرتها في أقفاص التمثيل الغذائي لقياس معدل إفراز البول عن طريق محول قوة موضوع أعلى زجاجات جمع البول لمتابعة وتسجيل زمن إفراز البول باستخدام برنامج ‎.NOTOCORD®‏ وقد تم تسريب المركبات أو المواد الناقلة في الجرذان عن © طريق الوريد لمدة ؟ ساعات باستخدام مضخة حاقنة؛ وتم جمع البيانات الخاصة بمخرجات البول أثناء إعطاء المركبات (صفر ‎Y=‏ ساعات)؛ ولمدة © ساعات بعد إعطاء المركب. وفي ‎ax‏ ‏الحالات؛ تم أيضاً تحديد أسموزية البول. وقد أظهرت مركبات الاختراع نشاطاً مضاد لإدرار البول. التركيبات الدوائية: يعرض الاختراع أيضاً استخدام مركب الصيغة | كدواء» كما يعرض الاختراع تركيبة دوائية تشتمل ‎٠‏ على المركب ‎١‏ كمكون فعال بالترافق مع ‎sale‏ مساعدة ‎adjuvant‏ أو مادة مخففة ‎diluent‏ أو مادة حاملة ‎carrier‏ مقبولة من الناحية الدوائية. وقد تعطى التركيبة الدوائية عبر مسارات مختلفة؛ أي مثلاً عن طريق الفم أو الأنف. وعلى ذلك؛ قد تكون التركيبة - مثلاً - في شكل أقراص أو كبسولات أو مساحيق أو جسيمات دقيقة ‎microparticles‏ أو حبيبات ‎granules‏ أو أشربة ‎syrups‏ أو معلقات ‎suspensions‏ أو ‎Vo‏ محاليل ‎.solutions‏ ‏واختيارياً؛ قد تشتمل التركيبة الدوائية - مثلاً - على ‎sale‏ مضافة أخرى تختار من عامل مفكك ‎disintegrating agent‏ ¢ ومادة رابطة ‎binder‏ ؛ ومادة مزلقة ‎lubricant‏ ¢ ومادة منكهة ‎flavouring agent‏ ؛ ومادة حافظة ‎preservative‏ « ومادة ملونةٌ ‎colourant‏ « وأي خليط من تلك المواد. ويمكن مطالعة أمثلة على تلك المضافات في المرجع: ‎‘Handbook of‏ ‎Pharmaceutical Excipients’; Ed.

A.H.

Kibbe, 3rd Ed., American ٠‏ ‎Pharmaceutical Association, USA and Pharmaceutical Press UK, 2000‏ طرق العلاج: في جانب آخرء يعرض الاختراع الحالي استخدام المركب المذكور أعلاه في تصنيع دواء لعلاج البوال الكاذب الناتج عن مرض السكرء؛ وسلس البول الليلي الأولي؛ والبوال الليلي. وفضلاً عن

_— \ جم

ذلك يعرض الاختراع أيضاً طرق لعلاج البوال الكاذب الناتج عن مرض السكرء؛ وسلس البول

الليلي الأولي؛ والبوال الليلي. وكما هو مستخدم هناء فإن اصطلاح "علاج” يعني تخفيف أعراض

المرض و/أو شفاء المرض عند إعطاء مركب الاختراع بجرعة مناسبة.

وتختلف الجرعة النمطية من مركبات الاختراع الحالي تبعاً لعوامل مختلفة ‎Jie‏ المريض الذي 0 بحاجة إلى العلاج؛ وطريقة إعطاء المركب. وقد تعطى الجرعة لمرة واحدة يومياً أو بتكرار أكثر

من مرةٌ واحدة يومياً بشكل متقطع. ويستطيع الطبيب أو الشخص ذو المهارة العادية في هذا المجال

ضبط الجرعة على النحو الأمثل تبعاً للحالة قيد العلاج.

وقد استخدمت جميع المنشورات وبراءات الاختراع الواردة هنا كمراجع فنية لهذا الاختراع كما لو

كان كل منها قد استخدم كمرجع في حد ذاته لهذا الغرض.

‎٠‏ ورغم وصف الاختراع ببعض الإيضاحات والأمثلة لعرض الفهم والتوضيح إاّ أن الشخص المتمرس في هذا المجال يدرك أن هناك تغييرات وتعديلات يمكن إدخالها هنا دون الحيد عن فحوى ومجال الاختراع وعناصر ‎Glad)‏ المرفقة.

Claims

-." جم عناصر الحمابة ‎-١‏ مركب الصيغة |: ‎RE‏ ‎HN‏ ‏0 5 ‎J‏ 0 ‎HN © HN > 0‏ ‎OW R‏ 0

‎HN.__O‏ 6 , ‎Lo‏ ‎X 0‏ ‎HN “|‏ ‎Lak Ar‏ 1 ‎QL,‏ ‏أو ملح منه مقبول صيدلانياً؛ حيث: 2 عبارة عن ‎(H‏ أو ‎C1-C4‏ ألكيل ‎calkyl‏ أو هالوجين ‎halogen‏ أو ‎«—-OH‏ أو -0-01- © 64 ألكيل ‎alkyl‏ ؛ ‎R3‏ عبارة عن ‎H‏ أو ‎¢C(0)-NR5R6 § -6112-0١‏ ‎R4‏ عبارة عن ‎H‏ أو ‎¢~C(=NH)-NH2‏ ‎RS‏ و86 ‎is‏ بشكل مستقل ‎H‏ أو 61-66 ألكيل ‎alkyl‏ ؛ أو 0112©- سيكلو بروبيل ‎cyclopropyl‏ « أو سيكلو بروبيل ‎cyclopropyl‏ » أو أريل ‎«arylalkyl Js‏ شريطة ألاّ تكون أ كل من ‎Ble R65 RS‏ عن ‎¢H‏ ‏ا تمثل بشكل مستقل -0112- أو -8-؛ شريطة أنه في حال أن تكون ‎X‏ عبارة عن - ‎CH2-‏ فإن 7 لا تمثل هنا -0)12-؛ ‎Z‏ عبارة عن 60447 أو 5؛ حيث 7 عبارة عن ‎(H‏ أو ‎C1-C4‏ ألكيل ‎alkyl‏ أو هالوجين ‎halogen‏ أو لاه أو ‎-O-C1-C4‏ ألكيل ‎alkyl‏ ¢ ‎٠‏ 88 عبارة عن ‎«CH3 JH‏ ‎Ar‏ عبارة عن أريل غير متجانس ‎heteroaryl‏ أو فينيل ‎phenyl‏ به استبدال اختياري بواسطة واحدة من مجموعات 61-64 ألكيل ‎alkyl‏ أو هالوجين ‎(halogen‏ أو ‎«—OH‏ أو -0-61- ‎C4‏ ألكيل ‎alkyl‏ .

_ جم "- المركب وفقاً لعنصر الحماية (١)؛‏ حيث تمثل ‎RE 5 RS‏ بشكل مستقل ‎H‏ أو ‎C1-C6‏ ألكيل ‎alkyl‏ أو أريل ألكيل ‎arylalkyl‏ . "- المركب وفقاً لعنصر الحماية (١)؛‏ حيث تكون واحدة فقط من مجموعتي ل وا عبارة عن - ‎oo‏ -5. ؛- المركب وفقاً لعنصر الحماية ‎)١(‏ حيث ‎X‏ عبار عن -6112-. ‎-٠5‏ المركب وفقاً لعنصر الحماية (١)؛‏ حيث تكون كل من )ل و عبارة عن -5-. ‎١٠‏ ‏+7- المركب وفقاً لأي من عناصر الحماية (١-5)؛‏ حيث ‎Ar‏ عبارة عن ثيوفين ‎thiophene‏ ‎-١‏ المركب وفقاً لأي من عناصر الحماية )1-1( حيث 88 عبارة عن ‎~CH3‏ ‎=A 0‏ المركب وفقاً لأي من عناصر الحماية ‎»)7-١(‏ حيث ‎R3‏ عبارة عن ‎.—C(0)-NR5R6‏ ‏4- المركب وفقاً لأي من عناصر الحماية ) ‎«(A= ١‏ حيث ‎RS‏ عبارة عن ١اء‏ و46 عبارة عن ‎C1-C4‏ ألكيل ‎alkyl‏ . ‎٠١ ٠‏ - المركب وفقاً لأي من عناصر الحماية ‎(AY)‏ حيث تكون كل من 485 و6 عبارة عن -

‎.CH2CH3‏ ‎-١‏ المركب وفقاً لأي من عناصر الحماية (١-0٠)؛‏ حيث ‎R2‏ عبارة عن هالوجين ‎halogen‏ ‎١١ YO‏ - المركب وفقاً لعنصر الحماية ‎»)١١(‏ حيث ‎R2‏ عبارة عن ا6-.

.-© ‏عبارة عن‎ R2 ‏حيث‎ (VY) ‏المركب وفقاً لعنصر الحماية‎ - VY : ‏المركب وفقاً لعنصر الحماية (١)؛ حيث يكون‎ - 4 © ‏المركب‎ ‏اللي‎ ‏بر‎ ‎HN ‎0 ‎0 ‎N 0 ~The ‏ا كو‎ N H NT 0 HN 0

‏ا‎ ‎5 H HN —J 0 10 Cl 0 ٠١ ‏المركب‎ ‏لاو‎ ‏ور‎ ‎HN ‎§ 1 0 HN fo} a 0 6 0 HN 0 5 ‏مل‎ ‎10 Ho — ‏رحب‎ ‎Cl ‎١؟بكرملا‎

- جم ‎HoN‏ ‏بطر ‎HN‏ ‏0 ‏0 ‎HN‏ ‎UL‏ ‎N =‏ 7770 ‎HN 0‏ 0

ال ‎Ho —‏ 13 مح ‎cl‏ ‏المركب ‎VE‏ ‎HsN‏ ‏) ‎HN‏ ‏0 ‏0 ‎N‏ ‏0 ليم 0 ياي مر 66 ‎HN 0‏ 0 5 ‎I‏ ‎Ho —‏ 14 ‎No‏ ‎cl‏ ‏المركب ‎YY‏ ‎YE!‏

— 7 جم ‎HN‏ ‎Jn‏ ‎HN‏ ‏0 ‏0 ‎N 0‏ انض 0 ‎N z‏ ‎NT‏

‎HN. _O‏ 0 مر ‎qo —‏ 21 ‎cl‏ ‏المركب ‎FY‏ ‏لاوا ‏بحر ‎HN‏ ‏0 ‏0 ‎HN 0‏ ‎pe 1 Jit 3 J‏ ) ‎N 0‏ ب ‎N NT‏ م81 1 ‎N‏ ل 5 5 إ: ل+-”“ ‎Ho‏ 33 ‎Cl‏ . ‎Vo 0‏ - تركيبة دوائية تشتمل على المركب وفقاً لأي من عناصر الحماية ‎(VEY)‏ للاستخدام في علاج البوال الكاذب الناتج عن مرض السكر ‎ctreating diabetes insipidus‏ أو سلس البول الليلي الأولي ‎«primary nocturnal enuresis‏ أو البوال الليلي ‎nocturia‏ .

م جم - المركب وفقاً لأي من عناصر الحماية ‎(VEY)‏ للاستخدام في تصنيع دواء لعلاج البوال الكاذب الناتج عن مرض السكر ‎«treating diabetes insipidus‏ أو سلس البول الليلي الأولي ‎«primary nocturnal enuresis‏ أو البوال الليلي ‎nocturia‏ .

مدة سريان هذه البراءة عشرون سنة من تاريخ إيداع الطلب وذلك بشرط تسديد المقابل المالي السنوي للبراءة وعدم بطلانها أو سقوطها لمخالفتها لأي من أحكام نظام براءات الاختراع والتصميمات التخطيطية للدارات المتكاملة والأصناف النباتية والنماذج الصناعية أو لائحته التنفيذية صادرة عن مدينة الملك عبدالعزيز للعلوم والتقنية ؛ مكتب البراءات السعودي ص ب ‎TAT‏ الرياض 57؟؟١١‏ ¢ المملكة العربية السعودية بريد الكتروني: ‎patents @kacst.edu.sa‏