RU2815339C1 - Набор олигонуклеотидов-праймеров, используемых для идентификации вируса болезни Ньюкасла - Google Patents
Набор олигонуклеотидов-праймеров, используемых для идентификации вируса болезни Ньюкасла Download PDFInfo
- Publication number
- RU2815339C1 RU2815339C1 RU2023127157A RU2023127157A RU2815339C1 RU 2815339 C1 RU2815339 C1 RU 2815339C1 RU 2023127157 A RU2023127157 A RU 2023127157A RU 2023127157 A RU2023127157 A RU 2023127157A RU 2815339 C1 RU2815339 C1 RU 2815339C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- ndv
- disease virus
- newcastle disease
- identify
- pcr
- Prior art date
Links
- 241000711404 Avian avulavirus 1 Species 0.000 title claims abstract description 41
- 239000013615 primer Substances 0.000 claims description 13
- 239000003155 DNA primer Substances 0.000 claims description 10
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 16
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 abstract description 13
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 abstract description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 16
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 12
- 108091093088 Amplicon Proteins 0.000 description 10
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 7
- 238000000034 method Methods 0.000 description 7
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 6
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 5
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 4
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 4
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 3
- OSBLTNPMIGYQGY-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;2-[2-[bis(carboxymethyl)amino]ethyl-(carboxymethyl)amino]acetic acid;boric acid Chemical compound OB(O)O.OCC(N)(CO)CO.OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O OSBLTNPMIGYQGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 2
- 239000008051 TBE buffer Substances 0.000 description 2
- 108010006785 Taq Polymerase Proteins 0.000 description 2
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 2
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 2
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 2
- 238000012070 whole genome sequencing analysis Methods 0.000 description 2
- 108010068327 4-hydroxyphenylpyruvate dioxygenase Proteins 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- 241000035315 Avulavirus Species 0.000 description 1
- 101150034814 F gene Proteins 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- 108060003393 Granulin Proteins 0.000 description 1
- 101710133291 Hemagglutinin-neuraminidase Proteins 0.000 description 1
- 208000008457 Neurologic Manifestations Diseases 0.000 description 1
- 102000007982 Phosphoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108010089430 Phosphoproteins Proteins 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 241001493065 dsRNA viruses Species 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 230000000869 mutational effect Effects 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 239000001226 triphosphate Substances 0.000 description 1
- 235000011178 triphosphate Nutrition 0.000 description 1
- 125000002264 triphosphate group Chemical class [H]OP(=O)(O[H])OP(=O)(O[H])OP(=O)(O[H])O* 0.000 description 1
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 238000012800 visualization Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Abstract
Изобретение относится к молекулярной биологии, биотехнологии, вирусологии и медицине. Предложен набор олигонуклеотидов-праймеров, используемых для идентификации вируса болезни Ньюкасла. Набор может быть использован для накопления генетического материала вируса болезни Ньюкасла и его последующей идентификации. 3 табл., 1 пр.
Description
Изобретение относится к молекулярной биологии, биотехнологии, вирусологии и медицине и может быть использовано для накопления генетического материала вируса болезни Ньюкасла (NDV или Newcastle Disease Virus) и его последующей идентификации.
Вирус болезни Ньюкасла относится к высокопатогенным возбудителям вирусных инфекций, вызывающих 100 % смертность диких птиц и птиц сельскохозяйственного значения с предшествующими респираторными и неврологическими проявлениями заболевания, способен вызывать заболеваемость человека. Данный РНК-содержащий вирус принадлежит к роду Avulavirus 1-го серотипа (Парамиксовирус-1).
Известны олигонуклеотиды-праймеры, модифицированные с учетом известных до 2010 года последовательностей NDV в Европе, и используемые для амплификации и секвенирования F гена NDV во время эпизоотий в Швеции [1].
Недостатком известного решения является специфичность указанного набора только для одного белка вируса болезни Ньюкасла, регионально принадлежащего Европейской части.
В качестве ближайшего аналога (прототипа) принят набор олигонуклеотидов-праймеров, используемых для идентификации вируса болезни Ньюкасла [2].
Однако олигонуклеотиды-праймеры, набор которых описан в прототипе, разработаны опять же только для гена F-белка вируса болезни Ньюкасла.
Проблемой, на решение которой направлено заявляемое изобретение, является разработка набора олигонуклеотидов-праймеров, специфичных в отношении вируса болезни Ньюкасла и позволяющих получить нуклеотидные последовательности всех белков и соответственно сделать полногеномное секвенирование.
Технический результат, проявляющийся при решении поставленной проблемой, выражается в создании набора олигонуклеотидов-праймеров, обладающих следующими свойствами:
- возможность накопления генетического материала вируса болезни Ньюкасла в результате проведения полимеразной цепной реакции (ПЦР) от 500 нуклеотидных пар и более, в зависимости от используемой полимеразы;
- возможность идентификации вируса болезни Ньюкасла путем секвенирования;
- возможность получения нуклеотидных последовательностей генов всех сегментов генома вируса болезни Ньюкасла.
Поставленная проблема решается тем, что набор олигонуклеотидов-праймеров, используемых для идентификации вируса болезни Ньюкасла, содержит прямые и обратные праймеры, характеристики которых приведены в таблице 1.
Таблица 1
Набор олигонуклеотидов-праймеров
| Сегмент генома вируса болезни Ньюкасла |
SEQ ID
и тип праймера |
Нуклеотидная последовательность праймера |
Температура отжига
праймера при ПЦР, °С |
| NP | NDV-1F | 5’-ACCAAACAGAGAATCKGTG-3' | 53-55 |
| NDV-11F | 5’-GAATCGGTGAGTTACGAT-3' | 52 | |
| NDV-513F | 5’-TMGCAGGRTCTCTCCCTCGG-3' | 62-66 | |
| NDV-532R | 5’-CCGAGGGAGAGAYCCTGCKA-3' | 62-66 | |
| NDV-1221F | 5’-CTCAGGCTCAGGGAAGTAG-3' | 60 | |
| NDV-1239R | 5’-CTACTTCCCTGAGCCTGAG-3' | 60 | |
| P | NDV-2494F | 5’-CAGGGCANAGCCAARAC-3' | 52-57 |
| NDV-2510R | 5’-GTYTTGGCTYTGCCCTG-3' | 52-57 | |
| NDV-3013F | 5’-TRGATGCAGCCAGGTCA-3' | 52-55 | |
| NDV-3029R | 5’-TGACCTGGCTGCATCYA-3' | 52-55 | |
| М | NDV-3538F | 5’-CARGCRCGAGCTACTCTC-3' | 56-60 |
| NDV-3554R | 5’-GAGAGTAGCTCGYGCYTG-3' | 56-62 | |
| NDV-4096F | 5’-GCTCAGTGAYGTGCTCG-3' | 55-57 | |
| NDV-4112R | 5’-CGAGCACRTCACTGAGC-3' | 55-57 | |
| F | NDV-4550F | 5’-ATGGGCTCCAAACCTTC-3' | 52 |
| NDV-4565R | 5’-GAAGGTTTGGAGCCCAT-3' | 52 | |
| NDV-4940F | 5’-CAGCGGCACAGATAACAGC-3' | 60 | |
| NDV-4959R | 5’-GCTGTTATCTGTGCCGCT-3' | 56 | |
| NDV-5492F | 5’-GCCTCAGCACTTGTCCCG-3' | 60 | |
| F | NDV-5975F | 5’-GCCTTGGATAGGTTGGCRG-3’ | 60-62 |
| NDV-5996R | 5’-CYGCCAACCTATCCAAGGC-3' | 60 | |
| HN | NDV-6325F | 5’-AYACGGGTAGAACGGTCA-3' | 52-54 |
| NDV-6342R | 5’-TGACCGTTCTACCCGTRT-3' | 54-56 | |
| NDV-6854F | 5’-AGTGATGTCACRTCATTY-3' | 46-52 | |
| NDV-6871R | 5’-RAATGAYGTGACATCACT-3' | 46-52 | |
| NDV-7624F | 5’-CTCACAGTAGGGACATCY-3' | 54-56 | |
| NDV-7641R | 5’-RGATGTCCCTACTGTGAG-3' | 54-56 | |
| NDV-8303F | 5’-RTCWCTTKATTAAGAAAAAATR-3' | 47-52 | |
| NDV-8324R | 5’-YATTTTTTCTTAATMAAGWGAY-3' | 47-52 | |
| L | NDV-8595F | 5’-TCGGRMGGGCAGTRCACCA-3' | 60-66 |
| NDV-8613R | 5’-TGGTGYACTGCCCKYCCGA-3' | 60-66 | |
| NDV-9632F | 5’-GATACRATATAYGGGAA-3' | 42-47 | |
| NDV-9648R | 5’-TTCCCRTATATYGTATC-3' | 42-47 | |
| NDV-10194F | 5’-ACAGCAATAAGAAACGTA-3' | 47 | |
| NDV-10211R | 5’-TACGTTTCTTATTGCTGT-3' | 47 | |
| NDV-10767F | 5’-TGAAGGATCGTGAAACYA-3' | 49-52 | |
| NDV-10784R | 5’-TRGTTTCACGATCCTTCA-3' | 49-52 | |
| NDV-11418F | 5’-CAGARGAYAATGAGGCAG-3' | 52-56 | |
| NDV-11435R | 5’-CTGCCTCATTRTCYTCTG-3' | 52-56 | |
| L | NDV-12042F | 5’-CATCATCYGTGTTRATCT-3' | 46-52 |
| NDV-12059R | 5’-AGATYAACACRGATGATG-3' | 46-52 | |
| NDV-12646F | 5’-GTTGATTGGCCARTCCGT-3' | 54-56 | |
| NDV-12663R | 5’-ACGGAYTGGCCAATCAAC-3' | 54-56 | |
| NDV-13234F | 5’-CTGAGTATTTACTGTCGG-3' | 52 | |
| NDV-13253R | 5’-CCGACAGTAAATACTCAG-3' | 52 | |
| NDV-13859F | 5’-TATAGGAATCTACARGCG-3' | 49-52 | |
| NDV-13876R | 5’-CGCYTGTAGATTCCTATA-3' | 49-52 | |
| NDV-14480F | 5’-GGRGGACAGCCCGTCCGT-3' | 63-65 | |
| NDV-14497R | 5’-ACGGACGGGCTGTCCYCC-3' | 63-65 | |
| NDV-15167F | 5’-TCACCAAATCTTTGTTTG-3' | 47 | |
| NDV-15184R | 5’-CAAACAAAGATTTGGTGA-3' | 47 |
Другие отличительные признаки и преимущества заявляемого изобретения ясно вытекают из описания, приведенного ниже для иллюстрации и не являющегося ограничительным со ссылками на прилагаемые рисунки, на которых:
на фиг.1 представлена схема сочетания пар прямых и обратных праймеров в отношении сегментов генома вируса болезни Ньюкасла;
на фиг.2 и 3 представлены результаты электрофореза ампликонов кДНК NDV, накопленных в результате проведения ПЦР, описание которых приведено в таблице 2.
На чертежах использованы следующие обозначения:
NP – нуклеотидный белок;
Р – фосфопротеин;
М – матриксный белок;
F – белок слияния;
HN – гемагглютинин-нейраминидаза;
L – полимераза;
kb – тысяч нуклеотидов.
Таблица 2
Описание фигур, на которых изображены результаты электрофореза ампликонов кДНК вируса болезни Ньюкасла
| № |
№ ампликона
кДНК вируса болезни Ньюкасла на рисунке |
Пара используемых праймеров (прямой и обратный) |
| Фиг.2 | 1 | NDV-1F и NDV-532R |
| 2 | NDV-2494F и NDV-3029R | |
| 3 | NDV-3013F и NDV-4112R | |
| 4 | NDV-513F и NDV-1239R | |
| 5 | NDV-3538F и NDV-4565R | |
| 6 | NDV-5492F и NDV-6342R | |
| 7 | NDV-6325F и NDV-6871R | |
| 8 | NDV-4940F и NDV-6342R | |
| 9 | NDV-4550F и NDV-4959R | |
| Фиг.2 | 10 | NDV-4940F и NDV-5996R |
| 11 | NDV-7624F и NDV-8324R | |
| 12 | NDV-9632F и NDV-10211R | |
| 13 | NDV-10194F и NDV-10784R | |
| 14 | NDV-10767F и NDV-11435R | |
| 15 | NDV-11418F и NDV-12059R | |
| 16 | NDV-12042F и NDV-12663R | |
| 17 | NDV-12646F и NDV-13253R | |
| 18 | NDV-13234F и NDV-13876R | |
| Фиг.3 | 19 | NDV-13234F и NDV-14497R |
| 20 | NDV-13859F и NDV-14497R | |
| 21 | NDV-14480F и NDV-15184R |
Заявляемый набор олигонуклеотидов-праймеров применяют в соответствии со стандартными методиками и с использованием известного оборудования, процесс состоит из нескольких этапов.
1. На предварительном этапе выделяют РНК вируса болезни Ньюкасла с помощью рекомендованных наборов (например, «Рибо-преп», АмплиСенс®, Россия) и очищают его, проводят реакцию обратной транскрипции (с набором «Реверта-L», АмплиСенс®, Россия) с получением кДНК вируса болезни Ньюкасла.
Методика работы с РНК вируса гриппа давно известна и широко применяется [3].
2. Подготовка к проведению ПЦР.
Методика проведения ПЦР является наиболее часто применяемой для идентификации генетического материала в образцах [4].
Согласно методике проведения полимеразной цепной реакции проводятся следующие подготовительные мероприятия:
- пару праймеров (прямой и обратный) из заявляемого набора берут в реакцию ПЦР учитывая, что разница между температурами их отжига (см. табл. 1) должна составлять не более 6°С;
- определяют значение температуры отжига для пары праймеров, которую берут в реакцию ПЦР.
- подготавливают реактивы для проведения ПЦР и смешивают их в соответствии с протоколом, описанным в таблице 3.
Таблица 3
Протокол смешивания реактивов для проведения ПЦР
| Название реактива |
Количество реактива
(из расчета на 1 пробирку) |
| Taq-полимераза | 0,5 µl |
| 10X буфер для Taq-полимеразы | 2,5 µl |
| Смесь dNTP (дезоксинуклеозидтрифосфаты) (2мМ) | 2,5 µl |
| MgCl2 (25мМ) | 2,5 µl |
| Вода (без РНКаз) | 6,5 µl |
| Праймер прямой (F) (1:10) | 1,0 µl |
| Праймер обратный (R) (1:10) | 1,0 µl |
| Вирусная кДНК | 2,5 µl |
1. Проведение ПЦР с целью накопления генетического материала вируса болезни Ньюкасла по следующей программе:
1). денатурация при температуре 95°С в течение 5 минут;
2). отжиг: при температуре 95°С в течение 30 секунд, далее при температуре отжига праймеров, определенной на этапе 2.1, в течение 20 секунд и затем при температуре 72°С в течение 1-1,5 минут – повторить 45 циклов;
3). элонгация при температуре 72°С в течение 5 минут.
По итогам ПЦР получают накопленный генетический материал (ампликоны кДНК вируса болезни Ньюкасла).
2. Визуализация накопленного генетического материала (ампликоны кДНК вируса болезни Ньюкасла) путем проведения электрофореза по известной методике [5] в агарозном геле (1,5 % в 10X TBE буфере) с последующей детекцией результатов на электрофореграмме [6].
3. Идентификация вируса болезни Ньюкасла путем секвенирования ампликонов кДНК вируса болезни Ньюкасла с использованием таких известных методов как Sanger, NGS, Nanopore [4].
Пример выполнения
На предварительном этапе выделяли РНК вируса болезни Ньюкасла из образца, выделенного от домашних куриц, погибших во время эпизоотической вспышки на одном из частных подворий города Уссурийск Приморского края в июле 2021 года.
Для этого использовали набор «Рибо-преп», (АмплиСенс®, Россия), выделяли и очищали РНК, затем проводили реакцию обратной транскрипции с набором «Реверта-L» (АмплиСенс®, Россия), с получением кДНК вируса болезни Ньюкасла.
Выбрали пару праймеров NDV-513F и NDV-1239R в соответствии с вышеописанными критериями (см. ампликон № 4 для фиг.2) и определили их температуру отжига – 62 °С.
Подготовили реактивы для проведения ПЦР и смешали их в соответствии с протоколом, описанным в таблице 3 [4].
Провели ПЦР по следующей программе:
1. денатурация при температуре 95°С в течение 5 минут;
2. отжиг: при температуре 95°С в течение 30 секунд, далее при температуре 62°С в течение 20 секунд и затем при температуре 72 °С в течение 1-1,5 минут – повторить 45 циклов;
3. элонгация при температуре 72°С в течение 5 минут.
По итогам ПЦР получили накопленный генетический материал в виде ампликона кДНК вируса болезни Ньюкасла длиной порядка 600 нуклеотидных пар.
Визуализировали указанный ампликон кДНК вируса болезни Ньюкасла путем проведения электрофореза по известной методике [6] в агарозном геле (1,5% агарозы (Диа-М, Россия) в 10X TBE буфере), соответствующая электрофореграмма приведена на фиг.2.
Идентифицировали вирус болезни Ньюкасла путем секвенирования ампликонов кДНК вируса болезни Ньюкасла путем технологии Nanopore (Oxford Nanopore Technologies®, Великобритания) и провели дальнейшую сборку генома с использованием программ Epi2Me Labs и CLC Genomics Workbench.
По итогам исследования было идентифицировано, что образец содержал вариант высокопатогенного штамма NDV, в дальнейшем идентифицированный штамм стал основой для создания заявляемого набора олигонуклеотидов-праймеров [7].
В связи с высокой мутационной изменчивостью NDV необходимо отметить, что заявляемое изобретение позволяет накопить и идентифицировать генетический материал вируса болезни Ньюкасла, близкородственные идентифицированному штамму и/или отдельные белки, гены которых содержит РНК вируса болезни Ньюкасла.
Источники информации
1. Munir M. et al. Whole genome sequencing and characterization of a virulent Newcastle disease virus isolated from an outbreak in Sweden. Virus Genes. 2011. 43:261-271.
2. Патент РФ № 2590718, МПК C12N 15/11, C12N 7/00, C12Q 1/68, дата публикации 10.07.2016 г.
3. Сергеева Е.И., Иванова Е.В., Швалова А.Н., и др. СТРУКТУРА ЗАБОЛЕВАЕМОСТИ РЕСПИРАТОРНЫМИ ВИРУСНЫМИ ИНФЕКЦИЯМИ В Г. НОВОСИБИРСКЕ И НОВОСИБИРСКОЙ ОБЛАСТИ В ЭПИДЕМИЧЕСКИЙ СЕЗОН 2011–2012 ГГ. // Вестник Российской академии медицинских наук. - 2013. - Т. 68. - №6. - C. 21-25. doi: 10.15690/vramn.v68i6.669.
4. Kary B. Mullis, Fred A. Faloona, Specific synthesis of DNA in vitro via a polymerase-catalyzed chain reaction// Methods in Enzymology, Academic Press, Volume 155, 1987, Pages 335-350, ISSN 0076-6879, ISBN 9780121820565, https://doi.org/10.1016/0076-6879(87)55023-6.
5. Patrick Wittmeier, Susanne Hummel. Agarose gel electrophoresis to assess PCR product yield: comparison with spectrophotometry, fluorometry and qPCR//BIOTECHNIQUES, March 2022, VOL. 72, NO. 4, Pages 155 – 158, ISSN0736-6205, eISSN1940-9818, https://doi.org/10.2144/btn-2021-0094.
6. Wittmeier P., Hummel S. Agarose gel electrophoresis to assess PCR product yield: comparison with spectrophotometry, fluorometry and qPCR//BIOTECHNIQUES, March 2022, VOL. 72, NO. 4, Pages 155 – 158, ISSN0736-6205, eISSN1940-9818, https://doi.org/10.2144/btn-2021-0094.
Claims (1)
- Набор олигонуклеотидов-праймеров, используемых для идентификации вируса болезни Ньюкасла, содержащий прямые и обратные праймеры, характеристики которых приведены в таблице 1.
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2815339C1 true RU2815339C1 (ru) | 2024-03-13 |
Family
ID=
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101413035A (zh) * | 2008-11-28 | 2009-04-22 | 中山大学 | 检测新城疫病毒的引物及其应用方法、试剂盒 |
| CN103602756A (zh) * | 2013-08-22 | 2014-02-26 | 江苏博爱生物科技有限公司 | 一种新城疫病毒的检测方法 |
| CN104293982A (zh) * | 2014-09-29 | 2015-01-21 | 四川农业大学 | 检测鸡新城疫病毒和鸡传染性支气管炎病毒的基因芯片以及试剂盒 |
| RU2590718C1 (ru) * | 2015-06-15 | 2016-07-10 | Общество с ограниченной ответственностью "Витагор" | Набор олигонуклеотидов-праймеров для получения первичной структуры f гена вирусов болезни ньюкасла класса i |
| RU2017118357A (ru) * | 2017-05-26 | 2018-11-26 | Общество с ограниченной ответственностью "Аполло вет" (ООО "Аполло вет") | Тест-система для обнаружения РНК вируса болезни Ньюкасла в режиме реального времени |
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101413035A (zh) * | 2008-11-28 | 2009-04-22 | 中山大学 | 检测新城疫病毒的引物及其应用方法、试剂盒 |
| CN101413035B (zh) * | 2008-11-28 | 2011-05-11 | 中山大学 | 检测新城疫病毒的引物及其应用方法、试剂盒 |
| CN103602756A (zh) * | 2013-08-22 | 2014-02-26 | 江苏博爱生物科技有限公司 | 一种新城疫病毒的检测方法 |
| CN104293982A (zh) * | 2014-09-29 | 2015-01-21 | 四川农业大学 | 检测鸡新城疫病毒和鸡传染性支气管炎病毒的基因芯片以及试剂盒 |
| RU2590718C1 (ru) * | 2015-06-15 | 2016-07-10 | Общество с ограниченной ответственностью "Витагор" | Набор олигонуклеотидов-праймеров для получения первичной структуры f гена вирусов болезни ньюкасла класса i |
| RU2017118357A (ru) * | 2017-05-26 | 2018-11-26 | Общество с ограниченной ответственностью "Аполло вет" (ООО "Аполло вет") | Тест-система для обнаружения РНК вируса болезни Ньюкасла в режиме реального времени |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US10704091B2 (en) | Genotyping by next-generation sequencing | |
| KR101243266B1 (ko) | 이중 특이성 올리고뉴클레오타이드를 사용한 방법 및 이중 특이성 올리고뉴클레오타이드 | |
| US20140106353A1 (en) | Methods And Kits For Multiplex Amplification Of Short Tandem Repeat Loci | |
| KR101440404B1 (ko) | 이중 특이성 올리고뉴클레오타이드를 사용한 방법 및 이중 특이성 올리고뉴클레오타이드 | |
| CN105339508B (zh) | Hla基因的多重dna分型方法和试剂盒 | |
| CN108192996B (zh) | 一种用于甲型流感病毒检测及h1和h3分型的多重rt-rpa引物组合及其应用 | |
| CN1703521A (zh) | 基因表达的定量 | |
| US20090291475A1 (en) | Sequence amplification with linear primers | |
| JP2008502362A (ja) | 鳥インフルエンザウイルスサブタイプｈ５及びｈ５ｎ１を検出するための診断用プライマー及び方法 | |
| WO2009098789A1 (ja) | Lamp法による甲殻類病原性ウイルスの検出方法及び検出試薬キット | |
| JP2011500063A (ja) | Ｄｎａ増幅方法 | |
| CA2692092A1 (en) | Method and compositions for nucleic acid amplification | |
| WO2011146942A1 (en) | Methods and kits to analyze microrna by nucleic acid sequencing | |
| US20130171630A1 (en) | Methods of using telomeres as markers for aging | |
| RU2815339C1 (ru) | Набор олигонуклеотидов-праймеров, используемых для идентификации вируса болезни Ньюкасла | |
| CN111004869B (zh) | 用于h1n1亚型流感病毒遗传进化谱系鉴别的荧光定量pcr引物和参考标准品 | |
| CA3177886A1 (en) | Diagnostic primers, kits and methods for viral detection | |
| WO2012032510A1 (en) | Primers for amplifying dna and methods of selecting same | |
| KR20120086028A (ko) | 웨스트나일바이러스와 일본뇌염바이러스의 감별 진단 | |
| RU2795017C1 (ru) | Олигонуклеотиды для определения мутации S:Ins214EPE SARS-CoV-2 | |
| RU2791958C1 (ru) | Олигонуклеотиды для определения мутации S:N501Y SARS-CoV-2 | |
| RU2761025C1 (ru) | Набор синтетических олигонуклеотидов для выявления рнк коронавируса | |
| JP2021505205A (ja) | ホスホリルグアニジンオリゴヌクレオチドを使用した鋳型に基づく酵素的ｄｎａ合成の方法、およびその方法を実施するための反応混合物 | |
| RU2795016C1 (ru) | Олигонуклеотиды для определения мутации S:delVYY143-145 SARS-CoV-2 | |
| US9512488B2 (en) | Method for multiplex-detecting chronic myelogenous leukemia gene using cleavable probe |