RU2809635C1 - Конъюгаты монометил ауристатина е с лигандами асиалогликопротеинового рецептора для направленного транспорта в опухолевые клетки печени - Google Patents
Конъюгаты монометил ауристатина е с лигандами асиалогликопротеинового рецептора для направленного транспорта в опухолевые клетки печени Download PDFInfo
- Publication number
- RU2809635C1 RU2809635C1 RU2022126388A RU2022126388A RU2809635C1 RU 2809635 C1 RU2809635 C1 RU 2809635C1 RU 2022126388 A RU2022126388 A RU 2022126388A RU 2022126388 A RU2022126388 A RU 2022126388A RU 2809635 C1 RU2809635 C1 RU 2809635C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- methyl
- conjugates
- conjugate
- amino
- monomethyl auristatin
- Prior art date
Links
- IEDXPSOJFSVCKU-HOKPPMCLSA-N [4-[[(2S)-5-(carbamoylamino)-2-[[(2S)-2-[6-(2,5-dioxopyrrolidin-1-yl)hexanoylamino]-3-methylbutanoyl]amino]pentanoyl]amino]phenyl]methyl N-[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(3R,4S,5S)-1-[(2S)-2-[(1R,2R)-3-[[(1S,2R)-1-hydroxy-1-phenylpropan-2-yl]amino]-1-methoxy-2-methyl-3-oxopropyl]pyrrolidin-1-yl]-3-methoxy-5-methyl-1-oxoheptan-4-yl]-methylamino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]-N-methylcarbamate Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H]([C@@H](CC(=O)N1CCC[C@H]1[C@H](OC)[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C)[C@@H](O)c1ccccc1)OC)N(C)C(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)OCc1ccc(NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CCCCCN2C(=O)CCC2=O)C(C)C)cc1)C(C)C IEDXPSOJFSVCKU-HOKPPMCLSA-N 0.000 title claims abstract description 43
- 108010093470 monomethyl auristatin E Proteins 0.000 title claims abstract description 27
- 239000003446 ligand Substances 0.000 title claims description 21
- 102000005427 Asialoglycoprotein Receptor Human genes 0.000 title claims description 18
- 108010006523 asialoglycoprotein receptor Proteins 0.000 title claims description 18
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 title description 4
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 title 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 21
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 claims abstract description 15
- 231100000844 hepatocellular carcinoma Toxicity 0.000 claims abstract description 14
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 14
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 12
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 12
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 8
- OVRNDRQMDRJTHS-CBQIKETKSA-N N-Acetyl-D-Galactosamine Chemical group CC(=O)N[C@H]1[C@@H](O)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-CBQIKETKSA-N 0.000 claims abstract description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 7
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 30
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 15
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 15
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 claims description 11
- 229910021595 Copper(I) iodide Inorganic materials 0.000 claims description 10
- UAOMVDZJSHZZME-UHFFFAOYSA-N diisopropylamine Chemical compound CC(C)NC(C)C UAOMVDZJSHZZME-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 claims description 8
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 claims description 8
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 claims description 8
- 239000010949 copper Substances 0.000 claims description 7
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 7
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 claims description 4
- 239000007858 starting material Substances 0.000 claims description 4
- 239000005749 Copper compound Substances 0.000 claims description 3
- 229910021589 Copper(I) bromide Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 229910021591 Copper(I) chloride Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 125000000852 azido group Chemical group *N=[N+]=[N-] 0.000 claims description 3
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 claims description 3
- 150000001879 copper Chemical class 0.000 claims description 3
- 150000001880 copper compounds Chemical class 0.000 claims description 3
- 238000006352 cycloaddition reaction Methods 0.000 claims description 3
- 229940043279 diisopropylamine Drugs 0.000 claims description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 3
- 150000003512 tertiary amines Chemical class 0.000 claims description 3
- 150000002894 organic compounds Chemical class 0.000 claims description 2
- OXBLHERUFWYNTN-UHFFFAOYSA-M copper(I) chloride Chemical compound [Cu]Cl OXBLHERUFWYNTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims 1
- 230000009471 action Effects 0.000 abstract description 9
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 abstract description 7
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 abstract description 7
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 abstract description 6
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 abstract description 6
- 239000013543 active substance Substances 0.000 abstract description 5
- 108010059712 Pronase Proteins 0.000 abstract description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 3
- 108010016626 Dipeptides Proteins 0.000 abstract description 2
- 229940126601 medicinal product Drugs 0.000 abstract description 2
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 abstract description 2
- 101150075175 Asgr1 gene Proteins 0.000 abstract 1
- 102000004225 Cathepsin B Human genes 0.000 abstract 1
- 108090000712 Cathepsin B Proteins 0.000 abstract 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 abstract 1
- 229960002173 citrulline Drugs 0.000 abstract 1
- VPFMEXRVUOPYRG-UHFFFAOYSA-N hex-5-ynoic acid Chemical compound OC(=O)CCCC#C VPFMEXRVUOPYRG-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 42
- 239000000562 conjugate Substances 0.000 description 42
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 30
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 22
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 19
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N methyl cyanide Natural products CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 16
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 description 14
- 125000000325 methylidene group Chemical group [H]C([H])=* 0.000 description 12
- 239000000047 product Substances 0.000 description 11
- IAKHMKGGTNLKSZ-INIZCTEOSA-N (S)-colchicine Chemical compound C1([C@@H](NC(C)=O)CC2)=CC(=O)C(OC)=CC=C1C1=C2C=C(OC)C(OC)=C1OC IAKHMKGGTNLKSZ-INIZCTEOSA-N 0.000 description 10
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 10
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 9
- KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-M Carbamate Chemical compound NC([O-])=O KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 238000000589 high-performance liquid chromatography-mass spectrometry Methods 0.000 description 8
- VNWKTOKETHGBQD-UHFFFAOYSA-N methane Chemical compound C VNWKTOKETHGBQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N platinum Chemical compound [Pt] BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 8
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 7
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 7
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 7
- LSXDOTMGLUJQCM-UHFFFAOYSA-M copper(i) iodide Chemical compound I[Cu] LSXDOTMGLUJQCM-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 7
- 229960004679 doxorubicin Drugs 0.000 description 7
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 7
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 description 7
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 6
- IAZDPXIOMUYVGZ-WFGJKAKNSA-N Dimethyl sulfoxide Chemical compound [2H]C([2H])([2H])S(=O)C([2H])([2H])[2H] IAZDPXIOMUYVGZ-WFGJKAKNSA-N 0.000 description 6
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 6
- -1 for example Substances 0.000 description 6
- 229960001338 colchicine Drugs 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 5
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 5
- 239000005511 L01XE05 - Sorafenib Substances 0.000 description 4
- MBLBDJOUHNCFQT-UHFFFAOYSA-N N-acetyl-D-galactosamine Natural products CC(=O)NC(C=O)C(O)C(O)C(O)CO MBLBDJOUHNCFQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229960000455 brentuximab vedotin Drugs 0.000 description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 4
- 238000011161 development Methods 0.000 description 4
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 description 4
- 229910052697 platinum Inorganic materials 0.000 description 4
- 229960003787 sorafenib Drugs 0.000 description 4
- 229950004269 tisotumab vedotin Drugs 0.000 description 4
- MLDQJTXFUGDVEO-UHFFFAOYSA-N BAY-43-9006 Chemical compound C1=NC(C(=O)NC)=CC(OC=2C=CC(NC(=O)NC=3C=C(C(Cl)=CC=3)C(F)(F)F)=CC=2)=C1 MLDQJTXFUGDVEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000032004 Large-Cell Anaplastic Lymphoma Diseases 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000000611 antibody drug conjugate Substances 0.000 description 3
- 229940049595 antibody-drug conjugate Drugs 0.000 description 3
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 3
- 229950004930 enfortumab vedotin Drugs 0.000 description 3
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 3
- 239000003642 reactive oxygen metabolite Substances 0.000 description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 3
- 238000012876 topography Methods 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-SVZMEOIVSA-N (+)-Galactose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-SVZMEOIVSA-N 0.000 description 2
- MQLACMBJVPINKE-UHFFFAOYSA-N 10-[(3-hydroxy-4-methoxyphenyl)methylidene]anthracen-9-one Chemical compound C1=C(O)C(OC)=CC=C1C=C1C2=CC=CC=C2C(=O)C2=CC=CC=C21 MQLACMBJVPINKE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010073478 Anaplastic large-cell lymphoma Diseases 0.000 description 2
- HUGIRNGCRFFPQR-UHFFFAOYSA-N COC1=C(C(=C(C=C1)C=1N=NNC=1)OC)OC Chemical compound COC1=C(C(=C(C=C1)C=1N=NNC=1)OC)OC HUGIRNGCRFFPQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OKKJLVBELUTLKV-MZCSYVLQSA-N Deuterated methanol Chemical compound [2H]OC([2H])([2H])[2H] OKKJLVBELUTLKV-MZCSYVLQSA-N 0.000 description 2
- ZGTMUACCHSMWAC-UHFFFAOYSA-L EDTA disodium salt (anhydrous) Chemical compound [Na+].[Na+].OC(=O)CN(CC([O-])=O)CCN(CC(O)=O)CC([O-])=O ZGTMUACCHSMWAC-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010019695 Hepatic neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 208000017604 Hodgkin disease Diseases 0.000 description 2
- 208000021519 Hodgkin lymphoma Diseases 0.000 description 2
- 208000010747 Hodgkins lymphoma Diseases 0.000 description 2
- DHQJPCIPZHPDSL-HOTMZDKISA-N N-[(2R,3R,4R,5R,6R)-2-(2-azidoethoxy)-4,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-3-yl]acetamide Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OCCN=[N+]=[N-] DHQJPCIPZHPDSL-HOTMZDKISA-N 0.000 description 2
- JYDNKGUBLIKNAM-UHFFFAOYSA-N Oxyallobutulin Natural products C1CC(=O)C(C)(C)C2CCC3(C)C4(C)CCC5(CO)CCC(C(=C)C)C5C4CCC3C21C JYDNKGUBLIKNAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229930012538 Paclitaxel Natural products 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- FVWJYYTZTCVBKE-ROUWMTJPSA-N betulin Chemical compound C1C[C@H](O)C(C)(C)[C@@H]2CC[C@@]3(C)[C@]4(C)CC[C@@]5(CO)CC[C@@H](C(=C)C)[C@@H]5[C@H]4CC[C@@H]3[C@]21C FVWJYYTZTCVBKE-ROUWMTJPSA-N 0.000 description 2
- MVIRREHRVZLANQ-UHFFFAOYSA-N betulin Natural products CC(=O)OC1CCC2(C)C(CCC3(C)C2CC=C4C5C(CCC5(CO)CCC34C)C(=C)C)C1(C)C MVIRREHRVZLANQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012925 biological evaluation Methods 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 2
- 229960003082 galactose Drugs 0.000 description 2
- 150000002256 galaktoses Chemical class 0.000 description 2
- 125000001183 hydrocarbyl group Chemical group 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 229960001592 paclitaxel Drugs 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 229950009416 polatuzumab vedotin Drugs 0.000 description 2
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 2
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N taxol Chemical compound O([C@@H]1[C@@]2(C[C@@H](C(C)=C(C2(C)C)[C@H](C([C@]2(C)[C@@H](O)C[C@H]3OC[C@]3([C@H]21)OC(C)=O)=O)OC(=O)C)OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)C=1C=CC=CC=1)C=1C=CC=CC=1)O)C(=O)C1=CC=CC=C1 RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N 0.000 description 2
- 102000035160 transmembrane proteins Human genes 0.000 description 2
- 108091005703 transmembrane proteins Proteins 0.000 description 2
- 239000003744 tubulin modulator Substances 0.000 description 2
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 2
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- APRZHQXAAWPYHS-UHFFFAOYSA-N 4-[5-[3-(carboxymethoxy)phenyl]-3-(4,5-dimethyl-1,3-thiazol-2-yl)tetrazol-3-ium-2-yl]benzenesulfonate Chemical compound S1C(C)=C(C)N=C1[N+]1=NC(C=2C=C(OCC(O)=O)C=CC=2)=NN1C1=CC=C(S([O-])(=O)=O)C=C1 APRZHQXAAWPYHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100033350 ATP-dependent translocase ABCB1 Human genes 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 102000004400 Aminopeptidases Human genes 0.000 description 1
- 108090000915 Aminopeptidases Proteins 0.000 description 1
- 108020005544 Antisense RNA Proteins 0.000 description 1
- 108090000145 Bacillolysin Proteins 0.000 description 1
- GAGWJHPBXLXJQN-UORFTKCHSA-N Capecitabine Chemical compound C1=C(F)C(NC(=O)OCCCCC)=NC(=O)N1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](C)O1 GAGWJHPBXLXJQN-UORFTKCHSA-N 0.000 description 1
- GAGWJHPBXLXJQN-UHFFFAOYSA-N Capecitabine Natural products C1=C(F)C(NC(=O)OCCCCC)=NC(=O)N1C1C(O)C(O)C(C)O1 GAGWJHPBXLXJQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000005367 Carboxypeptidases Human genes 0.000 description 1
- 108010006303 Carboxypeptidases Proteins 0.000 description 1
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 108090000317 Chymotrypsin Proteins 0.000 description 1
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 1
- LVGKNOAMLMIIKO-UHFFFAOYSA-N Elaidinsaeure-aethylester Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(=O)OCC LVGKNOAMLMIIKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910002621 H2PtCl6 Inorganic materials 0.000 description 1
- 101000851376 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 8 Proteins 0.000 description 1
- 208000031671 Large B-Cell Diffuse Lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 description 1
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 description 1
- 108700041567 MDR Genes Proteins 0.000 description 1
- 108010047230 Member 1 Subfamily B ATP Binding Cassette Transporter Proteins 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 102000029749 Microtubule Human genes 0.000 description 1
- 108091022875 Microtubule Proteins 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-KEWYIRBNSA-N N-acetyl-D-galactosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-KEWYIRBNSA-N 0.000 description 1
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 102100035486 Nectin-4 Human genes 0.000 description 1
- 101710043865 Nectin-4 Proteins 0.000 description 1
- 102000035092 Neutral proteases Human genes 0.000 description 1
- 108091005507 Neutral proteases Proteins 0.000 description 1
- 208000015914 Non-Hodgkin lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 229910021607 Silver chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 102100036857 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 8 Human genes 0.000 description 1
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 125000000738 acetamido group Chemical group [H]C([H])([H])C(=O)N([H])[*] 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000002927 anti-mitotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 108010044540 auristatin Proteins 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 229960004117 capecitabine Drugs 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000022131 cell cycle Effects 0.000 description 1
- 230000025084 cell cycle arrest Effects 0.000 description 1
- 238000001516 cell proliferation assay Methods 0.000 description 1
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 229960002376 chymotrypsin Drugs 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 239000003184 complementary RNA Substances 0.000 description 1
- 230000001934 delay Effects 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 206010012818 diffuse large B-cell lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 108010045524 dolastatin 10 Proteins 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 238000002848 electrochemical method Methods 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000007071 enzymatic hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006047 enzymatic hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 238000005530 etching Methods 0.000 description 1
- LVGKNOAMLMIIKO-QXMHVHEDSA-N ethyl oleate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC LVGKNOAMLMIIKO-QXMHVHEDSA-N 0.000 description 1
- 229940093471 ethyl oleate Drugs 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 239000003205 fragrance Substances 0.000 description 1
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 1
- 229960005277 gemcitabine Drugs 0.000 description 1
- SDUQYLNIPVEERB-QPPQHZFASA-N gemcitabine Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1C(F)(F)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 SDUQYLNIPVEERB-QPPQHZFASA-N 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 230000002440 hepatic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000003906 humectant Substances 0.000 description 1
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 238000007373 indentation Methods 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 239000002523 lectin Substances 0.000 description 1
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 239000002122 magnetic nanoparticle Substances 0.000 description 1
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 238000002483 medication Methods 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 210000004688 microtubule Anatomy 0.000 description 1
- 230000009456 molecular mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 1
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 1
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 238000011275 oncology therapy Methods 0.000 description 1
- 150000002895 organic esters Chemical class 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 229940002612 prodrug Drugs 0.000 description 1
- 239000000651 prodrug Substances 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 239000010453 quartz Substances 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000004582 scanning ion conductance microscopy Methods 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N silicon dioxide Inorganic materials O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HKZLPVFGJNLROG-UHFFFAOYSA-M silver monochloride Chemical compound [Cl-].[Ag+] HKZLPVFGJNLROG-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- BHZOKUMUHVTPBX-UHFFFAOYSA-M sodium acetic acid acetate Chemical compound [Na+].CC(O)=O.CC([O-])=O BHZOKUMUHVTPBX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 150000005846 sugar alcohols Polymers 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000002562 thickening agent Substances 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000041 toxicology testing Toxicity 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- OGWKCGZFUXNPDA-XQKSVPLYSA-N vincristine Chemical compound C([N@]1C[C@@H](C[C@]2(C(=O)OC)C=3C(=CC4=C([C@]56[C@H]([C@@]([C@H](OC(C)=O)[C@]7(CC)C=CCN([C@H]67)CC5)(O)C(=O)OC)N4C=O)C=3)OC)C[C@@](C1)(O)CC)CC1=C2NC2=CC=CC=C12 OGWKCGZFUXNPDA-XQKSVPLYSA-N 0.000 description 1
- 229960004528 vincristine Drugs 0.000 description 1
- OGWKCGZFUXNPDA-UHFFFAOYSA-N vincristine Natural products C1C(CC)(O)CC(CC2(C(=O)OC)C=3C(=CC4=C(C56C(C(C(OC(C)=O)C7(CC)C=CCN(C67)CC5)(O)C(=O)OC)N4C=O)C=3)OC)CN1CCC1=C2NC2=CC=CC=C12 OGWKCGZFUXNPDA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Abstract
Изобретение относится к области медицинской химии, а именно к низкомолекулярным конъюгатам противоопухолевого препарата монометил ауристатин Е, в которых действующее вещество соединено с остатком N-ацетилгалактозамина с расщепляемым катепсином В дипептидным линкером валин-цитруллин или нерасщепляемым линкером на основе гекс-5-иновой кислоты. Также предложен способ получения конъюгата и его применение для приготовления фармацевтической композиции для лечения гепатоцеллюлярной карциномы. Конъюгаты характеризуются большей эффективностью по отношению к ASGPR-экспрессирующей клеточной линии (HepG2), а также обладают цитотоксичностью, находящейся на уровне с применяемыми в клинической практике препаратами аналогичного действия, и являются стабильными в условиях, имитирующих физиологические (pH 5.0 и 7.4), но подвергаются гидролизу под действием смеси ферментов Проназы. 3 н. и 9 з.п. ф-лы, 4 ил., 1 табл., 11 пр.
Description
Область техники
Настоящее изобретение относится к области медицинской химии, а именно к конъюгатам противоопухолевого препарата монометил ауристатина Е с низкомолекулярными органическими соединениями - лигандами асиалогликопротеинового рецептора для повышения селективности действия и эффективности препаратов путем создания систем для их направленного транспорта в целевые клетки. Предложенные соединения могут быть применены в медицине для лечения гепатоцеллюлярной карциномы.
Уровень техники
Гепатоцеллюлярная карцинома (ГЦК) является шестым по распространенности типом рака [Cancer today: [Электронный ресурс] // International Agency for Research on Cancer URL: https://gco.iarc.fr/today/online-analysis-map?v=2020&mode=population&mode_population=continents&population=900&populations=900&key=asr&sex=0&cancer=11&type=0&statistic=5&prevalence=0&population_group=0&ages_group%5B%5D=0&ages_group%5B%5D=17&nb_items=10&group_cancer=1&include_nmsc=0&include_nmsc_other=0&projection=natural-earth&color_palette=default&map_scale=quantile&map_nb_colors=5&continent=0&show_ranking=0&rotate=%255B10%252C0%255D (дата обращения: 7.07.2022)]. В основном болезнь протекает практически бессимптомно, в результате, постановка диагноза осуществляется на последней стадии, когда лечение уже малоэффективно. Одним из способов борьбы с ГЦК является курс химиотерапии. В клинической практике применяют такие препараты как доксорубицин, паклитаксел, капецитабин, гемцитабин и другие. Однако в 90% случаев данные препараты не проявляют желаемого терапевтического эффекта. Использование сорафениба бывает более успешным, однако гепатоцеллюлярная карцинома занимает четвертое место среди опухолевых заболеваний по частоте летальных исходов. Именно поэтому остро стоит задача разработки новых, более действенных средств для лечения пациентов, страдающих от ГЦК.
Монометил ауристатин Е (ММАЕ) - синтетический противоопухолевый препарат, который гораздо более активен (IC50 < 1 нмоль на клеточной линии HepG2), чем препараты аналогичного действия, применяемые в клинической практике (винкристин, калхецин и т.д.). Механизм действия ММАЕ заключается в ингибировании полимеризации тубулина и дестабилизировании структуры микротрубочек, что в конечном итоге приводит к остановке клеточного цикла и, как следствие, к апоптозу [Bai R., Pettit G.R., Hamel E. Structure-activity studies with chiral isomers and with segments of the antimitotic marine peptide dolastatin 10 // Biochem. Pharmacol. 1990. V. 40. P. 1859-1864.]. Однако, неизбирательность действия ММАЕ и, как следствие, высокая общая токсичность препарата [Doronina S.O., Toki B.E., Torgov M.Y., Mendelsohn B.A., Cerveny C.G., Chace D.F., DeBlanc R.L., Gearing R.P., Bovee T.D., Siegall C.B., Francisco J.A., Wahl A.F., Meyer D.L., Senter P.D. Development of potent monoclonal antibody auristatin conjugates for cancer therapy // Nat. Biotechnol. 2003. V. 21. P. 778-784.], делает его самостоятельное использование невозможным.
На сегодняшний день известно ограниченное число примеров использования пролекарств монометил ауристатина Е в клинической практике. Так, успешно применяются 4 конъюгата монометил ауристатина Е с антителами: Адцетрис (Adcetris®, Брентуксимаб ведотин), Падцев (Padcev®, Энфортумаб ведотин), Полайви (Polivy®, Полатузумаб ведотин) и Тивдак (Tivdak®, Тисотумаб ведотин) (общая структура конъюгатов (1)). Адцетрис - конъюгат, разработанный компанией Seattle Genetics, противоопухолевого препарата ММАЕ с моноклональным антителом сАС10, который нацелен на опухолевые клетки, экспрессирующие СD30, который является маркером лимфомы Ходжкина и анапластической крупноклеточной лимфомы (АККЛ) [Senter P.D., Sievers E.L. The discovery and development of brentuximab vedotin for use in relapsed Hodgkin lymphoma and systemic anaplastic large cell lymphoma // Nat. Biotechnol. 2012. V. 30. P. 631-637.]. Падцев - конъюгат ММАЕ с моноклональным антителом AGS-22C3, данный препарат применяется для лечения опухолевых заболеваний мочевого пузыря [Challita-Eid P.M., Satpayev D., Yang P., An Z., Morrison K., Shostak Y., Raitano A., Nadell R., Liu W., Lortie D.R., Capo L., Verlinsky A., Leavitt M., Malik F., Aviña H., Guevara C.I., Dinh N., Karki S., Anand B.S., Pereira D.S., Joseph I.B.J., Doñate F., Morrison K., Stover D.R. Enfortumab Vedotin Antibody-Drug Conjugate Targeting Nectin-4 Is a Highly Potent Therapeutic Agent in Multiple Preclinical Cancer Models // Cancer Res. 2016. V. 76. P. 3003-3013.]. Полайви - конъюгат противоопухолевого препарата монометил ауристатина Е с анти-CD79b антителом, применяется для лечения рецидивирующей или рефрактерной диффузной B-крупноклеточной лимфомы, агрессивного типа неходжкинской лимфомы. Тивдак - конъюгат антитело-препарат, который используют для лечения пациентов, страдающих от рака шейки матки [Markham A. Tisotumab Vedotin: First Approval //Drugs. 2021. V. 81. P. 2141-2147.].
Примеров использования препаратов ММАЕ с моноклональными антителами для терапии гепатоцеллюлярной карциномы в литературе не обнаружено, помимо этого, стоит отметить, что конъюгаты на основе моноклональных антител не лишены недостатков [Murali M., Kumar A.R., Nair B., Pavithran K., Devan A.R., Pradeep G.K., Nath L.R. Antibody-drug conjugate as targeted therapeutics against hepatocellular carcinoma: preclinical studies and clinical relevance // Clin. Transl. Oncol. 2022. V. 24. P. 407-431.]:
1) высокая стоимость конечного лекарственного средства;
2) не для каждой опухоли известно подходящее антитело, что сильно ограничивает сферу применения данного подхода;
3) при длительной циркуляции конъюгата в кровотоке в целевые клетки попадает лишь небольшое количество действующего вещества. Для преодоления данной проблемы, к одному антителу “пришивают” несколько молекул препарата. Однако, данный способ не всегда отличается высокой воспроизводимостью;
4) существует риск возникновения у пациента резистентности.
Из уровня техники известны препараты, которые используют в клинической практике для лечения гепатоцеллюлярной карциномы - сорафениб, доксорубицин и паклитаксел. Однако, активность данных соединений не превышает 12 мкмоль/л. IC50 на клеточной линии HepG2 для сорафениба составил 12.0 ± 3.1 мкмоль/л [Cervello M., Bachvarov, D., Lampiasi, N., Cusimano, A., Azzolina, A., McCubrey, J. A., Montalto, G. Molecular mechanisms of sorafenib action in liver cancer cells //Cell cycle. 2012. V. 15. P. 2843-2855.], для паклитаксела = 0.12 ± 0.01 мкмоль/л [Petrov R.A., Maklakova S.Y., Ivanenkov Y.A., Petrov S.A., Sergeeva O. v., Yamansarov E.Y., Saltykova I. v., Kireev I.I., Alieva I.B., Deyneka E. v., Sofronova A.A., Aladinskaia A. v., Trofimenko A. v., Yamidanov R.S., Kovalev S. v., Kotelianski V.E., Zatsepin T.S., Beloglazkina E.K., Majouga A.G. Synthesis and biological evaluation of novel mono- and bivalent ASGP-R-targeted drug-conjugates // Bioorg. Med. Chem. Lett. 2018. V. 28. P. 382- 387], для доксорубицина = 5 мкмоль/л [Chan J. Y. W., Chu A. C. Y., Fung K. P. Inhibition of P-glycoprotein expression and reversal of drug resistance of human hepatoma HepG2 cells by multidrug resistance gene (mdr1) antisense RNA // Life Sci. 2000. V. 67. №. 17. P. 2117-2124.].
Альтернативным подходом к адресной доставке ММАЕ в клетки печени является разработка систем направленного транспорта на основе низкомолекулярных лигандов трансмембранных белков. В данном случае отличной мишенью для создания системы направленной доставки в опухолевые клетки печени является асиалогликопротеиновый рецептор (ASGPR). Асиалогликопротеиновый рецептор минимально представлен на внепеченочных типах клеток. В литературе хорошо описаны вещества, способные эффективно связываться с рецептором - это молекулы, содержащие в своем составе один или несколько терминальных остатков галактозы и N-ацетилгалактозамина [Lee Y.C., Townsend R.R., Hardy M.R., Lönngren J., Arnarp J., Haraldsson M., Lönn H. Binding of synthetic oligosaccharides to the hepatic Gal/GalNAc lectin. Dependence on fine structural features. // J. Bio. Chem. 1983. V. 258. P. 199-202.].
Наиболее близким аналогом данного изобретения является конъюгаты лигандов асиалогликопротеинового рецептора с иными противоопухолевыми препаратами, такими как доксорубицин [Ivanenkov Y.A., Majouga A.G., Petrov R.A., Petrov S.A., Kovalev S. v., Maklakova S.Y., Yamansarov E.Y., Saltykova I. V., Deyneka E. V., Filkov G.I., Kotelianski V.E., Zatsepin T.S., Beloglazkina E.K. Synthesis and biological evaluation of novel doxorubicin-containing ASGP- R-targeted drug-conjugates // Bioorg. Med. Chem. Lett. 2018. V. 28. P. 503-508.], паклитаксел [Petrov R.A., Maklakova S.Y., Ivanenkov Y.A., Petrov S.A., Sergeeva O. v., Yamansarov E.Y., Saltykova I. v., Kireev I.I., Alieva I.B., Deyneka E. v., Sofronova A.A., Aladinskaia A. v., Trofimenko A. v., Yamidanov R.S., Kovalev S. v., Kotelianski V.E., Zatsepin T.S., Beloglazkina E.K., Majouga A.G. Synthesis and biological evaluation of novel mono- and bivalent ASGP-R-targeted drug-conjugates // Bioorg. Med. Chem. Lett. 2018. V. 28. P. 382- 387.], бетулин [Yamansarov E.Yu., Lopatukhina E. v., Evteev S.A., Skvortsov D.A., Lopukhov A. v., Kovalev S. v., Vaneev A.N., Shkil’ D.O., Akasov R.A., Lobov A.N., Naumenko V.A., Pavlova E.N., Ryabaya O.O., Burenina O.Yu., Ivanenkov Y.A., Klyachko N.L., Erofeev A.S., Gorelkin P. v., Beloglazkina E.K., Majouga A.G. Discovery of Bivalent GalNAc-Conjugated Betulin as a Potent ASGPR-Directed Agent against Hepatocellular Carcinoma // Bioconjug. Chem. 2021. V. 32. P. 763-781]. Однако, эффективность данных соединений невысока. Например, в случае конъюгатов с доксорубицином, все соединения показали низкие значения CC50 (в максимальной концентрации 100 мкМ достигается гибель лишь 30% клеток) [Ivanenkov Y.A., Majouga A.G., Petrov R.A., Petrov S.A., Kovalev S. V., Maklakova S.Y., Yamansarov E.Y., Saltykova I. V., Deyneka E. V., Filkov G.I., Kotelianski V.E., Zatsepin T.S., Beloglazkina E.K. Synthesis and biological evaluation of novel doxorubicin-containing ASGP- R-targeted drug-conjugates // Bioorg. Med. Chem. Lett. 2018. V. 28. P. 503-508].
Технической проблемой, на решение которой направлено заявляемое изобретение, является разработка конъюгатов монометил ауристатина Е с лигандами асиалогликопротеинового рецептора, эффективность которых сравнима или превосходит существующие противоопухолевые препараты. Так, цитотоксичность конъюгатов находится на уровне с используемым в клинической практике препаратом аналогичного действия колхицином. Например, IC50 конъюгата из примера 1 на клеточной линии HepG2 составил 0.11 ± 0.04 мкмоль/л, для колхицина = 4.6 ± 0.4 мкмоль/л [Fu D.J., Li P., Wu B.W., Cui X.X., Zhao C. bin, Zhang S.Y. Molecular diversity of trimethoxyphenyl-1,2,3-triazole hybrids as novel colchicine site tubulin polymerization inhibitors // Eur. J. Med. Chem. 2019. V. 165. P. 309-322]. Разработанные конъюгаты также обладают большей селективностью по отношению к ASGPR-экспрессирующей клеточной линии, чем немодифицированный монометил ауристатин Е.
Раскрытие изобретения
Заявляемое изобретение представляет собой низкомолекулярные конъюгаты монометил ауристатина Е общей формулы (I), в которых препарат соединен с остатком N-ацетилгалактозамина с помощью линкера. Линкер представляет собой дипептидный фрагмент или углеводородную цепь из нескольких метиленовых остатков (длина углеводородной цепи от 1 до 6 метиленовых звеньев). Молярная масса заявляемых конъюгатов составляет от 1080.6 до 1346.7 г/моль.
Техническим результатом заявляемого изобретения являются конъюгаты противоопухолевого препарата монометил ауристатина Е с лигандами асиалогликопротеинового рецептора, эффективность которых сравнима или превосходит существующие аналоги. Конъюгаты обладают цитотоксичностью, находящейся на уровне с используемыми в клинической практике препаратами. Также заявляемый конъюгат является стабильными в условиях, имитирующих физиологические (pH 5.0 и 7.4), но подвергается гидролизу под действием смеси ферментов Проназы.
Технический результат достигается конъюгатом общей формулы (I):
(I)
где
Лиганд это ,
,
где Х = NHAc или OH, l = от 0 до 2, m = от 1 до 10, o = от 1 до 3
Линкер это ,
где Y = Val, Phe, Ala, Z = Cit, Arg, n = от 1 до 6, p = от 0 до 1.
Технический результат также достигается способом получения заявляемого конъюгата, который получают с помощью Cu(I)-катализируемой реакции азидо-алкинового циклоприсоединения. В качестве исходных соединений используют производное монометил ауристатина Е, содержащее терминальную тройную связь и лиганд асиалогликопротеинового рецептора (производное галактозы или N-ацетилгалактозамина) содержащий азидо-группу. Растворы веществ смешивают в таких количествах, чтобы на 1.0 мольный эквивалент производного ММАЕ приходилось не менее 1.0 мольного эквивалента лиганда. В качестве растворителя используют любой органический растворитель, обеспечивающий растворение исходных соединений и инертный к компонентам смеси, например ДМФА, ДМСО или любой другой растворитель. Реакцию проводят в присутствии катализатора - соединения одновалентной меди, взятого в количестве не менее 0.5 мольных эквивалентов на 1.0 мольный эквивалент производного ММАЕ. В качестве катализатора используют любую соль одновалентой меди, обеспечивающую прохождение реакции - CuCl, CuI, CuBr и т.д. В качестве основания используют любой третичный амин, например, триэтиламин, диизопропиламин и т.д. Основание берут в количестве не менее 8.8 мольных эквивалентов на 1.0 мольный эквивалент производного ММАЕ. После проведения реакции в смесь добавляют ЭДТА или динатриевую соль ЭДТА в мольном соотношении 1:1 к добавленному катализатору для удаления Cu (I) из реакционной смеси. Полученный продукт выделяют с помощью обращенно-фазовой колоночной хроматографии (подвижная фаза А - вода, B - ацетонитрил, градиент 95:5 → 40:60, А:B, по объему)
Технический результат также достигается применением конъюгата общей формулы (I) по п.1 для приготовления фармацевтической композиции для лечения гепатоцеллюлярной карциномы.
Краткое описание чертежей
На фиг. 1 приведены результаты исследований наномеханических свойств клеток HepG2 и PC3. Слева представлены снимки топографии клеток, и карта отступов, полученная с помощью SICM. Справа представлены полученные данные измерения модуля Юнга [Па] для конъюгата, немодифицированного ММАЕ и необработанных клеток в качестве контроля (на рисунке данные, полученные для соединения из Примера 1).
На фиг. 2 представлены результаты измерения уровня активных форм кислорода для структуры из примера 1.
На фиг. 3 и 4 приведены результаты исследований кинетики гидролиза конъюгатов при выдерживании в модельных растворах.
Осуществление изобретения
Ниже приведены определения терминов, которые используются в описании настоящего изобретения.
«Линкер» - структурное звено, соединяющее действующее вещество и направляющий лиганд.
«Асиалогликопротеиновый рецептор (ASGPR)» - трансмембранный белок, преимущественно экспрессируемый гепатоцитами, распознающий производные D-галактозы и N-ацетилгалактозамина и участвующий в их транспорте в клетку.
«Конъюгат» - комплекс, формирующийся при помощи ковалентных связей между лекарственным соединением и лигандом-носителем.
«Лиганд» - химическое соединение, которое образует нековалентный комплекс с той или иной биомолекулой (чаще всего белком, например, клеточным рецептором, но иногда, например, с ДНК) и производит, вследствие такого связывания, те или иные биохимические, физиологические или фармакологические эффекты.
Конъюгаты получают с помощью Cu(I)-катализируемой реакции азидо-алкинового циклоприсоединения. В качестве исходных соединений используют производное монометил ауристатина Е, содержащее терминальную тройную связь и лиганд асиалогликопротеинового рецептора (производное галактозы или N-ацетилгалактозамина) содержащий азидо-группу. Растворы веществ смешивают в таких количествах, чтобы на 1.0 мольный эквивалент производного ММАЕ приходилось не менее 1.0 мольного эквивалента лиганда. В качестве растворителя используют ДМФА, ДМСО или любой другой растворитель, который будет обеспечивать растворение и инертным к компонентам смеси. Реакцию проводят в присутствии катализатора - соединения одновалентной меди, взятого в количестве не менее 0.5 мольных эквивалентов на 1.0 мольный эквивалент производного ММАЕ. В качестве катализатора используют любую соль одновалентой меди, обеспечивающую прохождение реакции - CuCl, CuI, CuBr и т.д. В качестве основания используют любой третичный амин, например, триэтиламин, диизопропиламин и т.д. Основание берут в количестве не менее 8.8 мольных эквивалентов на 1.0 мольный эквивалент производного ММАЕ. После проведения реакции в смесь добавляют ЭДТА или динатриевую соль ЭДТА в мольном соотношении 1:1 к добавленному катализатору для удаления Cu (I) из реакционной смеси. Полученный продукт выделяют с помощью обращенно-фазовой колоночной хроматографии (подвижная фаза А - вода, B - ацетонитрил, градиент 95:5 → 40:60, А:B, по объему).
Представленные ниже примеры иллюстрируют, но не ограничивают настоящее изобретение.
Пример 1. Получение 4-((S)-2-((R)-2-(4-(1-((2R,3R,4R,5R,6R)-3-ацетамидо-4,5-дигидрокси-6-(гидроксиметил)тетрагидро-2H-пиран-2-ил)-1H-1,2,3-триазол-4-ил)бутанамидо)-3-метилбутанамидо)-5-уреидопентанамидо)бензил ((S)-1-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((1S,2R)-1-гидрокси-1-фенилпропан-2-ил)амино)-1-метокси-2-метил-3-оксопропил)пирролидин-1-ил)-3-метокси-5-метил-1-оксогептан-4-ил)(метил)амино)-3-метил-1-оксобутан-2-ил)амино)-3-метил-1-оксобутан-2-ил)(метил)карбамата
Реакцию проводили в инертной атмосфере. К раствору 4-((S)-2-((R)-2-(гекс-5-инамидо)-3-метилбутанамидо)-5-уреидопентанамидо)бензил ((S)-1-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((1S,2R)-1-гидрокси-1-фенилпропан-2-ил)амино)-1-метокси-2-метил-3-оксопропил)пирролидин1-ил)-3-метокси-5-метил-1-оксогептан-4-ил)(метил)амино)-3-метил-1-оксобутан-2- ил)амино)-3- метил-1-оксобутан-2-ил)(метил)карбамата (50 мг, 0.04 ммоль) в 1 мл ДМФА добавляли раствор 1-Азидо-2-ацетамидо-2-дезокси-β-D-галактопиранозы (25 мг, 0,08 ммоль) в 1 мл ДМФА. В полученную смесь добавляли иодид меди (I) (4 мг, 0.02 ммоль) и триэтиламин (49 мкл, 0.35 ммоль), перемешивали в течение ночи. После чего к раствору добавляли ЭДТА (7 мг, 0.02 ммоль), концентрировали реакционную смесь при пониженном давлении. Продукт очищали с помощью обращенно-фазовой хроматографии на препаративном хроматографе (подвижная фаза А - вода, B - ацетонитрил, градиент 95:5 → 40:60, А:B, по объему).
Получили 21 мг (36%) желтого порошка.
1Н ЯМР (DMSO-d6, δ, м.д.): 10.02-9.97 (м, 1Н, NH), 8.36-8.32 и 8.23-8.06 (2м, всего 2H, 2хNH), 7.96-7.76 (м, 3H, 2хNH, CHtrz), 7.71-7.52 (м, 2H, ArH), 7.38- 7.22 (м, 6H, ArH), 7.17 (т, J=7.4 Гц, 1Н, ArH), 5.99 (с, 1H, NH), 5.54 (д, J=9.9 Гц, 1Н, H-1), 5.46-5.33 (м, 2Н, NH2), 5.14-4.93 (м, 2H, CH2), 4.84-4.69 (м, 2H, 2xCH), 4.53-4.33 (м, 3H, Н-3, 2xCH), 4.31-4.17 (м, 2H, 2xCH), 4.06-3.89 (м, 2H, Н- 2, CH), 3.82-3.72 (м, 1H, Н-4), 3.66 (т, J = 6.2 Гц, 1Н, СHAHB), 3.61-3.43 (м, 4H, СHAHB, CHAHB, СН), 3.35-3.28 (м, 1Н, Н-5), 3.28-3.09 (м, 8H, 2xCH3, CH2), 3.08-2.80 (м, 7H, 2xCH3, CHAHB), 2.69-2.52 (м, 2H, CH2), 2.45-2.37 (м, 1Н, CHAHB), 2.32-2.21 (м, 1H, CHAHB), 2.19-1.90 (м, 6H, 4xCH, CH2), 1.87-1.22 (м, 15H, CH, CHAHB, 5хCH2, NHC(O)CH3), 1.07-0.70 (м, 31H, CHAHB, 10xCH3).
ВЭЖХ-МС: чистота 100%, tR=12.19 мин
Масс-спектр высокого разрешения: вычислено для С72H114N14O18Na [M+Na]+ m/z 1485.8328, найдено - 1485.8329.
Пример 2. Получение 4-((S)-2-((S)-2-(4-(1-(2-(((2R,3R,4R,5R,6R)-3-ацетамидо-4,5-дигидрокси-6-(гидроксиметил)тетрагидро-2H-пиран-2-ил)окси)этил)-1H-1,2,3-триазол-4-ил)бутанамидо)-3-метилбутанамидо)-5-уреидопентанамидо)бензил ((S)-1-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((1S,2R)-1-гидрокси-1-фенилпропан-2-ил)амино)-1-метокси-2-метил-3-оксопропил)пирролидин-1-ил)-3-метокси-5-метил-1-оксогептан-4-ил)(метил) амино)-3-метил-1-оксобутан-2-ил)амино)-3-метил-1-оксобутан-2-ил)(метил)карбамата
Реакцию проводили в инертной атмосфере. К раствору 4-((S)-2-((R)-2-(гекс-5-инамидо)-3-метилбутанамидо)-5-уреидопентанамидо)бензил ((S)-1-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((1S,2R)-1- гидрокси-1-фенилпропан- 2-ил)амино)-1-метокси-2-метил-3-оксопропил)пирролидин1-ил)-3-метокси-5- метил-1-оксогептан-4-ил)(метил)амино)-3-метил-1-оксобутан-2- ил)амино)-3- метил-1-оксобутан-2-ил)(метил)карбамата (40 мг, 0.03 ммоль) в 1 мл ДМФА добавляли раствор 1-O-(2’-Азидоэтил)-2-ацетамидо-2-дезокси-β-D-галактопиранозы (19 мг, 0,06 ммоль) в 1 мл ДМФА . В полученную смесь добавляли иодид меди (I) (3 мг, 0.015 ммоль) и триэтиламин (37 мкл, 0.26 ммоль), перемешивали в течение ночи. После чего к раствору добавляли ЭДТА (5 мг, 0.015 ммоль), концентрировали реакционную смесь при пониженном давлении. Продукт очищали с помощью обращенно-фазовой хроматографии на препаративном хроматографе (подвижная фаза А - вода, B - ацетонитрил, градиент 95:5 → 40:60, А:B, по объему).
Получили 37 мг (75%) желтого порошка.
1Н ЯМР (CD3OD, δ, м.д.): 7.78 (с, 1H, СНtrz), 7.59 (д, J=7.8 Гц, 2H, ArH), 7.44-7.27 (м, 6H, ArH), 7.23-7.18 (м, 1H, ArH), 5.23-5.04 (м, 2H, СН2), 4.80-4.71 (м, 1H, СН), 4.68-4.59 (м, 2H, СН), 4.58-4.48 (м, 4H, 2xCH, CH2), 4.37 (д, J=8.3 Гц, 1H, Н-1), 4.25-4.15 (м, 4H, 3xCH, CH A HB), 3.98-3.65 (м, 7H, Н-2, CHA H B , CH, Н-4, 2хН-6, CH A HB), 3.59-3.48 (м, 2H, Н-3, Н-5), 3.45-3.34 (м, 8H, СН2, 2xCH3), 3.21-3.04 (м, 4H, CH3, CHA H B ), 3.01-2.84 (м, 4H, CH3, CH), 2.76-2.69 (м, 2H, CH2), 2.56-2.44 (м, 2H, CH2), 2.37-2.31 (м, 2H, СН2), 2.25-2.16 (м, 1H, СН), 2.14-1.70 (м, 13H, СН, NHC(O)CH 3 , 2хCH A HB, 2хCH2), 1.64-1.50 (м, 2H, 2xCHA H B ), 1.46-1.36 (м, 3H, CH2, CH A HB), 1.22-1.09 (м, 6H, 2хСН3), 1.04-0.73 (м, 25H, 8хСН3, СНА Н В ).
ВЭЖХ-МС: чистота 95%, tR=12.18 мин.
Масс-спектр высокого разрешения: вычислено для С74H119N14O19 [M+H]+ m/z 1507.8770, найдено - 1507.8762.
Пример 3. Получение 4-((S)-2-((R)-2-(4-(1-(11-((1,25-бис(((2R,3R,4R,5R,6R)-3-ацетамидо- 4,5-дигидрокси-6-(гидроксиметил)тетрагидро-2H-пиран-2-ил)окси)-13-((3-((6-(((2R,3R,4R,5R,6R)-3-ацетамидо-4,5-дигидрокси-6-(гидроксиметил)тетрагидро-2H-пиран-2-ил)окси)гексил)амино)-3-оксопропокси)метил)-8,18-диоксо-11,15-диокса-7,19-диазапентакозан-13-ил)амино)-11-оксоундецил)-1H-1,2,3-триазол-4-ил)бутанамидо)-3-метилбутанамидо)-5-уреидопентанамидо)бензил((S)-1-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((1S,2R)-1-гидрокси-1-фенилпропан-2-ил)амино)-1-метокси-2-метил-3-оксопропил)пирролидин-1-ил)-3-метокси-5-метил-1-оксогептан-4-ил)(метил)амино)-3-метил-1-оксобутан-2-ил)амино)-3-метил-1-оксобутан-2-ил)(метил)карбамат
Реакцию проводили в инертной атмосфере. К раствору 4-((S)-2-((R)-2-(гекс-5-инамидо)-3-метилбутанамидо)-5-уреидопентанамидо)бензил ((S)-1-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((1S,2R)-1-гидрокси-1-фенилпропан-2-ил)амино)-1-метокси-2-метил-3-оксопропил)пирролидин1-ил)-3-метокси-5-метил-1-оксогептан-4-ил)(метил)амино)-3-метил-1-оксобутан-2- ил)амино)-3- метил-1-оксобутан-2-ил)(метил)карбамата (15 мг, 0.012 ммоль) в 1 мл ДМФА добавляли раствор N-(11-Азидоундеканоил)амино-трис-[(1-(6-амидогексил)-2-ацетамидо-2-деокси-β-D-галактопиранозил)-карбоксиэтоксиметил]метана (20 мг, 0,013 ммоль) в 1 мл ДМФА . В полученную смесь добавляли иодид меди (I) (1 мг, 0.006 ммоль) и триэтиламин (15 мкл, 0.11 ммоль), перемешивали в течение ночи. После чего к раствору добавляли ЭДТА (2 мг, 0.006 ммоль), концентрировали реакционную смесь при пониженном давлении. Продукт очищали с помощью обращенно-фазовой хроматографии на препаративном хроматографе (подвижная фаза А - вода, B - ацетонитрил, градиент 95:5 → 40:60, А:B, по объему).
Получили 16 мг (50%) желтого порошка.
1Н ЯМР (DMSO-d6, δ, м.д.): 10.04-9.82 (м, 1H, NH), 8.36-8.27 и 8.17-8.00 (2м, всего 2H, 2хNH), 7.93-7.79 (м, 4H, NH, СНtrz), 7.68-7.53 (м, 4H, 2хNH, 2хArH), 7.36-7.22 (м, 4H, АrH), 7.20-7.11 (м, 1H, ArH), 7.00 (c, 1H, NH), 5.98 (с, 1H, NH), 5.42 (c, 2H, NH2), 5.19-4.89 (м, 2H, СН2), 4.80-4.33 (м, 13H, 4хСН, 9xOH), 4.31-4.16 (м, 6H, 3хН-1, СН2, 2хСН), 4.04-3.92 (м, 3H, 3хСН), 3.80-3.38 (м, 36H, 3xH-2, 3xH-3, 3xH-4, 6xH-6, 3xOСН2, 3xCH 2 OCH 2 , CH A HB, СН), 3.29-3.10 (м, 11H, 2хСН3, СН2), 3.08-2.90 (м, 10H, СН3, 3xO(CH2)5СH 2 NH, СНА Н В ), 2.89-2.80 (м, 3H, Н-5), 2.58 (т, J=7.7 Гц, 2H, СН2), 2.47-2.36 (м, 1H, СН А НВ), 2.33-2.18 (м, 9H, 3хС(О)СН 2 СН2О, СН2, СНА Н В ), 2.18-1.91 (м, 6H, 4хСН, СН2), 1.87-1.54 (м, 16Н, 3хNHC(O)CH 3 , 3xCH2, CH), 1.51-1.30 и 1.30-1.12 (2м, всего 45H, 3xOCH2(CH 2 )4CH2NH, N3CH2(CH 2 )8CH2C(O), 2хCH2, CH A HB), 1.05-0.95 (м, 6H, 2хСН3), 0.95-0.89 (м, 25H, 8хСН3, СНА Н В ).
ВЭЖХ-МС: чистота 90%, tR=12.30 мин.
Масс-спектр высокого разрешения: вычислено для С130H220N20O38Na [M+H+Na]2+ m/z 1346.7931, найдено - 1346.7896.
Пример 4. Получение 4-((S)-2-((R)-2-(4-(1-(2-((1,17-бис(((2R,3R,4R,5R,6R)-3-ацетамидо-4,5-дигидрокси-6-(гидроксиметил)тетрагидро-2H-пиран-2-ил)окси)-9-((3-((2-(((2R,3R,4R,5R,6R)-3- ацетамидо-4,5-дигидрокси-6-(гидроксиметил)тетрагидро-2H-пиран-2-ил)окси)этил)амино)-3-оксопропокси)метил)-4,14-диоксо-7,11-диокса-3 ,15-диазагептадекан-9-ил)амино)-2-оксоэтил)-1H-1,2,3-триазол-4-ил)бутанамидо)-3-метилбутанамидо)-5-уреидопентанамидо)бензил((S)-1 -(((S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((1S,2R)-1-гидрокси-1-фенилпропан-2-ил)амино)-1-метокси-2-метил-3-оксопропил)пирролидин-1-ил)-3-метокси-5-метил-1-оксогептан-4-ил)(метил)амино)-3-метил-1-оксобутан-2-ил)амино)-3-метил-1-оксобутан-2-ил)(метил)карбамат
Реакцию проводили в инертной атмосфере. К раствору 4-((S)-2-((R)-2-(гекс-5-инамидо)-3-метилбутанамидо)-5-уреидопентанамидо)бензил ((S)-1-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((1S,2R)-1- гидрокси-1-фенилпропан- 2-ил)амино)-1-метокси-2-метил-3-оксопропил)пирролидин1-ил)-3-метокси-5- метил-1-оксогептан-4-ил)(метил)амино)-3-метил-1-оксобутан-2- ил)амино)-3- метил-1-оксобутан-2-ил)(метил)карбамата (15 мг, 0.012 ммоль) в 1 мл ДМФА добавляли раствор N-(2-Азидоэтаноил)амино-трис-[(1-(2-амидоэтил)-2-ацетамидо-2-деокси-β-D-галактопиранозил)-карбоксиэтоксиметил]метана (16 мг, 0,014 ммоль) в 1 мл ДМФА. В полученную смесь добавляли иодид меди (I) (1 мг, 0.006 ммоль) и триэтиламин (15 мкл, 0.11 ммоль), перемешивали в течение ночи. После чего к раствору добавляли ЭДТА (2 мг, 0.006 ммоль), концентрировали реакционную смесь при пониженном давлении. Продукт очищали с помощью обращенно-фазовой хроматографии на препаративном хроматографе (подвижная фаза А - вода, B - ацетонитрил, градиент 95:5 → 40:60, А:B, по объему).
Получили 22 мг (71%) желтого порошка.
1Н ЯМР (CD3OD, δ, м.д.): 7.83 (c, 1H, СНtrz), 7.60 (д, J=7.9 Гц, 2H, ArH), 7.41-7.27 (м, 6H, ArH), 7.24-7.18 (м, 1H, СН), 5.25-5.11 (м, 4H, 2хСН2), 4.69-4.47 (м, 4H, 4хСН), 4.40 (д, J=8.4 Гц, 3H, 3хН-1), 4.26-4.14 (м, 4H, 4хСН), 3.96 (дд, J=10.7, 8.4 Гц, 3H, 3хН-2), 3.90-3.66 (м, 30H, 3хН-4, 6хН-6, 3хН-5, СН A HB, 3xССН 2 OCH 2 , 3xOCH A HB,, 2хСН), 3.60 (дд, J=10.8, 3.2 Гц, 3H, Н-3), 3.52 (т, J=6.2 Гц, 3H, 3xOCH2СH A HBNH), 3.48-3.33 (м, 14H, 3xOCHA H B , СН2, 3xOCH2СHA H B NH, 2хСН3), 3.23-3.04 (м, 4H, СН3, СН А НВ), 3.01-2.91 (м, 3H, СН3), 2.75 (т, J=7.5 Гц, 2H, CH2), 2.53-2.42 (м, 8H, 3хС(O)СH 2 CH2O, СН2), 2.33 (т, J=7.8 Гц, 2H, СН2), 2.28-1.70 (м, 20H, 4хСН, 3xNHC(O)CH 3 , 3хCH2, CH A HB), 1.66-1.51 (м, 2H, СН2), 1.47-1.35 (м, 1H, CHA H B ), 1.21-1.09 (м, 6H, 2хСН3), 1.06-0.73 (м, 26H, 8хСН3, CH2).
ВЭЖХ-МС: чистота 100%, tR=11.98 мин.
Масс-спектр высокого разрешения: вычислено для С109H179N20O38Na [M+H+Na]2+ m/z 1199.6288, найдено - 1199.6311.
Пример 5. Получение (S)-2-((S)-2-(4-(1-((2R,3R,4R,5R,6R)-3-ацетамидо-4,5-дигидрокси-6-(гидроксиметил)тетрагидро- 2H-пиран-2-ил)-1H-1,2,3-триазол-4-ил)-N-метилбутанамидо)-3-метилбутанамидо)-N-((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((1S,2R)-1-гидрокси-1-фенилпропан-2-ил)амино)-1-метокси-2-метил-3-оксопропил)пирролидин-1-ил)-3-метокси-5-метил-1-оксогептан-4-ил)-N,3-диметилбутанамид
Реакцию проводили в инертной атмосфере. К раствору N-((S)-1-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((1S,2R)-1-гидрокси-1-фенилпропан-2-ил)амино)-1-метокси-2-метил-3-оксопропил)пирролидин-1-ил)-3-метокси-5-метил-1-оксопентан-4-ил)(метил)амино)-3-метил-1-оксобутан-2-ил)амино)-3-метил-1-оксобутан-2-ил)-N-метилгекс-5-инамида (20 мг, 0.025 ммоль) в 1 мл ДМФА добавляли раствор 1-Азидо-2-ацетамидо-2-дезокси-β-D-галактопиранозы (12 мг, 0,049 ммоль) в 1 мл ДМФА . В полученную смесь добавляли иодид меди (I) (3 мг, 0.013 ммоль) и триэтиламин (31 мкл, 0.22 ммоль), перемешивали в течение ночи. После чего к раствору добавляли ЭДТА (4 мг, 0.013 ммоль), концентрировали реакционную смесь при пониженном давлении. Продукт очищали с помощью обращенно-фазовой хроматографии на препаративном хроматографе (подвижная фаза А - вода, B - ацетонитрил, градиент 95:5 → 40:60, А:B, по объему).
Получили 23 мг (87%) желтого порошка.
1Н ЯМР (DMSO-d6, δ, м.д.): 7.91-7.81 (м, 2H, NH, CHtrz), 7.81-7.71 (м, 1H, NH), 7.66-7.60 (м, 1Н, NH), 7.33-7.13 (м, 5H, ArH), 5.58-5.50 (м, 1H, H-1), 5.42 (д, J=8.3 Гц, 1H, ОН), 5.35 (д, J = 4.9 Гц, 1Н, ОН), 4.96-4.85 (м, 1H, CH), 4.78-4.69 (м, 2H, 2хCH), 4.68-4.59 (м, 1H, CH), 4.57-4.33 (м, 3H, 3хCH), 4.08-3.89 (м, 3H, Н-2, CH, CH A HB), 3.82-3.73 (м, 1H, H-4), 3.71-3.62 (м, 2H, Н-3, CHA H B ), 3.60-3.44 (м, 3H, 2хH-6, H-5), 3.29-3.08 (м, 6H, 2хCH3), 3.01-2.81 (м, 6H, 2хCH3), 2.70-2.56 (м, 4H, 2хCH2), 2.43-2.23 (м, 3H, CH2, CH), 2.18-2.09 (м, 2H, 2хCH), 1.86-1.66 (м, 5H, CH-20, 2хCH A HB, CH2), 1.65-1.42 (м, 5H, 2хСНА Н В , 3xNHC(O)CH 3 ), 1.36-1.18 (м, 1Н, СН А НВ), 1.07-0.94 (м, 6H, 2хCH3), 0.92-0.70 (м, 19H, 8xCH3, СНА Н В ).
ВЭЖХ-МС: чистота 100%, tR=11.89 мин
Масс-спектр высокого разрешения: вычислено для С53H87N9O13Na [M+Na]+ m/z 1080.6314, найдено - 1080.6316.
Пример 6. Получение (S)-2-((S)-2-(4-(1-(2-(((2R,3R,4R,5R,6R)-3-ацетамидо-4,5-дигидрокси-6-(гидроксиметил)тетрагидро-2H-пиран-2-ил)окси)этил)-1H-1,2,3-триазол-4-ил)-N-метилбутанамидо)-3-метилбутанамидо)-N-((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((1S,2R)-1-гидрокси-1-фенилпропан-2-ил)амино)-1-метокси-2-метил-3-оксопропил)пирролидин-1-ил)-3-метокси-5-метил-1-оксогептан-4-ил)-N,3-диметилбутанамид
Реакцию проводили в инертной атмосфере. К раствору N-((S)-1-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((1S,2R)-1-гидрокси-1-фенилпропан-2-ил)амино)-1-метокси-2-метил-3-оксопропил)пирролидин-1-ил)-3-метокси-5-метил-1-оксопентан-4-ил)(метил)амино)-3-метил-1-оксобутан-2-ил)амино)-3-метил-1-оксобутан-2-ил)-N-метилгекс-5-инамида (37 мг, 0.046 ммоль) в 1 мл ДМФА добавляли раствор 1-O-(2’-Азидоэтил)-2-ацетамидо-2-дезокси-β-D-галактопиранозы (26 мг, 0,091 ммоль) в 1 мл ДМФА . В полученную смесь добавляли иодид меди (I) (4 мг, 0.023 ммоль) и триэтиламин (56 мкл, 0.40 ммоль), перемешивали в течение ночи. После чего к раствору добавляли ЭДТА (8 мг, 0.023 ммоль), концентрировали реакционную смесь при пониженном давлении. Продукт очищали с помощью обращенно-фазовой хроматографии на препаративном хроматографе (подвижная фаза А - вода, B - ацетонитрил, градиент 95:5 → 40:60, А:B, по объему).
Получили 30 мг (59%) желтого порошка.
1Н ЯМР (CD3OD, δ, м.д.): 7.79 (д, J =2.6 Гц, 1Н, СH trz), 7.41-7.35 (м, 2H, ArH), 7.34-7.27 (м, 2H, ArH), 7.25-7.18 (м, 1H, ArH), 4.68-4.51 (м, 6H, 4xCH, CH2), 4.37 (д, J=8.4 Гц, 1Н, H-1), 4.28-4.17 (м, 3H, СН А НВ, 2хCH), 4.10-4.02 (м, 1H, CHA H B ), 3.99-3.85 (м, 2H, CH, H-2), 3.82 (д, J = 3.3 Гц, 1Н, Н-4), 3.80-3.64 (м, 4H, 2xH-6, СН, СН А НВ), 3.56 (дд, J=10.8, 3.4 Гц, 1Н, Н-3), 3.51-3.47 (м, 1H, Н-5), 3.45-3.38 (м, 1H, СНА Н В ), 3.37-3.33 (м, 6H, 2хСН3), 3.28 (с, 3H, СН3), 3.14-2.96 (м, 3H, СН3), 2.81-2.72 (м, 2H, СН2), 2.63-2.45 (м, 4H, 2хСН2), 2.32-2.18 (м, 1H, СН), 2.15-1.78 (м, 10H, 3хСН, СН2, NHC(O)CH 3 , 2хСН А НВ), 1.74-1.52 (м, 2H, 2хСНА Н В ), 1.47-1.36 (м, 1Н, СН А НВ), 1.21-1.09 (м, 6H, 2хСН3), 1.03-0.81 (м, 19Н, 6хСН3, СНА Н В ).
ВЭЖХ-МС: чистота 100%, tR=11.76 мин
Масс-спектр высокого разрешения: вычислено для С55H92N9O14 [M+H]+ m/z 1102.6758, найдено - 1102.6739
Пример 7. Получение конъюгата 3,3'-((2-((3-((6-(((2R,3R,6R)-3-ацетамидо-4,5-дигидрокси-6-(гидроксиметил)-3,6-дигидро-2H-пиран-2-ил)окси)гексил)амино)-3-оксопропокси) метил)-2-(11-(4-((3R,4S,7S,10S)-4-((S)-втор-бутил))-3-(2-((S)-2-((1R,2R)-3-(((1S,2R)-1-гидрокси-1-фенилпропан-2-ил)амино)-1-метокси-2-метил-3-оксопропил)пирролидин-1-ил)-2-оксоэтил)-7,10-диизопропил-5,11-диметил-6,9,12-триоксо-2-окса-5,8,11-триазапентадекан-15-ил)-1H-1,2,3-триазол-1-ил)ундеканамидо)пропан-1,3-диил)бис(окси))бис(N-(6-(((2R,3R,4R,5R,6R)-3-ацетамидо-4,5-дигидрокси-6-(гидроксиметил)тетрагидро-2H-пиран-2-ил)окси)гексил)пропанамид)
Реакцию проводили в инертной атмосфере. К раствору N-((S)-1-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((1S,2R)-1-гидрокси-1-фенилпропан-2-ил)амино)-1-метокси-2-метил-3-оксопропил)пирролидин-1-ил)-3-метокси-5-метил-1-оксопентан-4-ил)(метил)амино)-3-метил-1-оксобутан-2-ил)амино)-3-метил-1-оксобутан-2-ил)-N-метилгекс-5-инамида (30 мг, 0.037 ммоль) в 1 мл ДМФА добавляли раствор N-(11-Азидоундеканоил)амино-трис-[(1-(6-амидогексил)-2-ацетамидо-2-деокси-β-D-галактопиранозил)-карбоксиэтоксиметил]метана (54 мг, 0,037 ммоль) в 1 мл ДМФА . В полученную смесь добавляли иодид меди (I) (4 мг, 0.019 ммоль) и триэтиламин (45 мкл, 0.326 ммоль), перемешивали в течение ночи. После чего к раствору добавляли ЭДТА (7 мг, 0.019 ммоль), концентрировали реакционную смесь при пониженном давлении. Продукт очищали с помощью обращенно-фазовой хроматографии на препаративном хроматографе (подвижная фаза А - вода, B - ацетонитрил, градиент 95:5 → 40:60, А:B, по объему).
Получили 15 мг (18 %) желтого порошка.
1Н ЯМР (СD3OD, δ, м.д.): 7.79 (д, J=2.6 Гц, 1H, СH trz), 7.42-7.36 (м, 2H, ArH), 7.35 - 7.27 (м, 2H, ArH), 7.26-7.18 (м, 1H, ArH), 4.71-4.51 (м, 3H, 3хСН), 4.36 (д, J=8.4 Гц, 3H, 3хН-1), 4.28-4.13 (м, 2H, 2хСН), 3.97-3.86 (м, 6H, 3хСН2), 3.84 (д, J=3.2 Гц, 3H, 3хН-4), 3.80-3.71 (м, 6H, 3хH-6), 3.70-3.64 (м, 13H, 3хССН 2 ОСН 2 , СН А НВ), 3.60 (дд, J=10.7, 3.2 Гц, 3H, Н-3), 3.54-3.37 (м, 7H, 3хН-5, 3хН-2, СН), 3.37-3.33 (м, 6H, 2хСН3), 3.31-3.26 (м, 4H, СН3, СНА Н В ), 3.23-3.09 (м, 8H, 4хСН2), 3.08-2.96 (м, 3H, СН3), 2.80-2.73 (м, 2H, СН2), 2.64-2.45 (м, 4H, 2хСН2), 2.41 (т, J=6.0 Гц, 6H, 3хС(О)СН 2 СН2О), 2.32-2.20 (м, 1H, СН), 2.17 (т, J=7.5 Гц, 2H, СН2), 2.14-2.06 (м, 1H, СН), 1.98 (с, 9H, NHC(O)CH 3 ), 1.93-1.84 (м, 3H, СН2, СН А НВ), 1.84-1.75 (м, 1H, СН А НВ), 1.62-1.46 (м, 16H, N3CH2(CH 2 )8CH2C(O)), 1.43-1.27 (м, 26H, 3xOCH2(CH 2 )4CH2NH, 2хСНА Н В , СН А НВ), 1.23-1.10 (м, 6H, 2хСН3), 1.04-0.82 (м, 19H, 6хСН3, СНА Н В ).
ВЭЖХ-МС: чистота 100%, tR=10.00 мин.
Масс-спектр высокого разрешения: вычислено для С111H194N15O33Na [M+H+Na]2+ m/z 1144.1925, найдено - 1144.1908.
Пример 8. Методика эксперимента гидролиза
Образец (C =10 мг/мл, V = 50 мкл) разбавляли в 950 мкл буферного раствора состава 0.2 М Трис-HCl (pH 7.4) или 0.2 М AcONa-AcOH (pH 5.0). В случае ферментативного гидролиза дополнительно вводили препарат Проназы (10 мг/мл в dH2O, 50 мкл). Проназа содержит нейтральную протеазу, химотрипсин, трипсин, карбоксипептидазу, аминопептидазу, нейральную и щелочную фосфатазу. Смеси инкубировали при 37°C. Отбирали аликвоты с временными интервалами 0, 0.5, 1, 2, 4, 8 и 24 часов. Отобрав 100 мкл смеси, немеделенно добавляли 400 мкл холодного метанола (для подавления гидролиза). Далее хранили аликвоту при -20°C. Непосредственно перед анализом, образцы размораживали, центрифугировали при 13000 G и исследовали отобранный супернатант методом ВЭЖХ-МС.
В результате проведенных экспериментов, было показано, что конъюгаты из примеров 1 и 4 остаются стабильными при pH = 4.9 и 7.4 (фиг. 3 и 4), однако подвергаются гидролизу под действием смеси ферментов. Было также показано (на примере 4), что основным продуктом гидролиза является действующее вещество - монометил ауристатин Е (ММАЕ).
Пример 9. Электрохимическое измерение уровня активных форм кислорода
Измерение уровня АФК в клетках HepG2 и PC-3 проводили с помощью платинового наноэлектрода согласно методике [Erofeev A., Gorelkin P., Garanina A., Alova A., Efremova M., Vorobyeva N., Edwards C., Korchev Y., Majouga A. Novel method for rapid toxicity screening of magnetic nanoparticles // Sci. Rep. 2018. V. 8. P. 1-11.]. Для его изготовления были использованы коммерчески доступные дискообразные угольные наноэлектроды, изолированные в кварце (ICAPPIC Limited, Великобритания) диаметром 60-100 нм. Наноразмерные полости создавались электрохимическим травлением угольных электродов в растворе, содержащем 0.1М NaOH и 10мМ KCl. Затем наносили платину на наноэлектроды из 2мМ раствора H2PtCl6. Разность потенциалов между платиновым наноэлектродом и эталонным электродом регистрировали с помощью патч-клеммы усилителя модели 2400 (AM Systems). Измерения передавались на компьютер и записывались с помощью преобразователя USB-6211 (National Instruments) и программы WinWCP (John Dempster, University of Strathclyde, UK). Все манипуляции производили на столе оптического инвертированного микроскопа (Nikon, Япония).
Концентрацию АФК (пероксида водорода) оценивали при потенциале +800 мВ относительно Ag/AgCl. Перед измерениями каждый платиновый электрод калибровали с помощью стандартных растворов H2O2. При проникновении в клетку наблюдали резкое увеличение тока с последующим относительно медленным снижением до стационарного значения, превышающего измеренное в клеточной среде. Ток быстро возвращался к исходному уровню, если электрод удаляли из клетки. Измерения в 7-10 разных клетках с одним и тем же электродом показывали примерно одинаковые величины изменения сигнала. В качестве анализируемого значения тока использовали разность между токами внутри и снаружи клетки.
В результате эксперимента было выявлено что конъюгат из примера 1 вызывает продукцию большего количества активных форм кислорода в клетках HepG2, по сравнению с немодифицированным ММАЕ (фиг. 2).
Пример 10. Топография поверхности клеток и измерение модуля Юнга
Измерение проводили согласно методике [Kolmogorov, V. S., Erofeev, A. S., Woodcock, E., Efremov, Y. M., Iakovlev, A. P., Savin, N. A., Alova, A. V., Lavrushkina, S. V., Kireev, I. I., Prelovskaya, A. O., Sviderskaya, E. V., Scaini, D., Klyachko, N. L., Timashev, P. S., Takahashi, Y., Salikhov, S. V., Parkhomenko, Y. N., Majouga, A. G., Edwards, C. R. W., Novak, P., Korchev, Y. E., Gorelkin, P. V. Mapping Mechanical Properties of Living Cells at Nanoscale Using Intrinsic Nanopipette- Sample Force Interactions // Nanoscale. 2021.V. 13. P. 6558-6568.]. Сканирование проведено на сканирующем ион-проводящем микроскопе (ICAPPIC Limited, United Kingdom). Использовали нанокапилляры, изготовленные на лазерном пуллере P-2000 (Sutter Instruments), радиусом 40 - 50 нм. Скорость нагружения составляла 100 мкм/с. Топография поверхности соответствует падению ионного тока на 0.5 % от исходного значения, а деформация поверхности для последующего расчета модуля Юнга 1 и 2 % [Kolmogorov, V. S., Erofeev, A. S., Woodcock, E., Efremov, Y. M., Iakovlev, A. P., Savin, N. A., Alova, A. V., Lavrushkina, S. V., Kireev, I. I., Prelovskaya, A. O., Sviderskaya, E. V., Scaini, D., Klyachko, N. L., Timashev, P. S., Takahashi, Y., Salikhov, S. V., Parkhomenko, Y. N., Majouga, A. G., Edwards, C. R. W., Novak, P., Korchev, Y. E., Gorelkin, P. V. Mapping Mechanical Properties of Living Cells at Nanoscale Using Intrinsic Nanopipette- Sample Force Interactions // Nanoscale. 2021.V. 13. P. 6558-6568.]. Чашки с клетками омывали раствором Хенкса (Gibco), и в нем же проводили сканирование образцов. ММАЕ и конъюгат были добавлены в чашки Петри с клетками HepG2 и PC3, в концентрациях, соответствующих IC50. Клетки инкубировали в течение часа, затем проводили измерение.
Механизм ММАЕ заключается в ингибировании полимеризации тубулина. Поэтому, в ходе эксперимента под действием ММАЕ и конъюгата из примера 1 на обеих клеточных линиях наблюдали снижение жесткости клеточной мембраны. При этом, на клетках HepG2, наблюдали снижение модуля Юнга после инкубирования с конъюгатом в 1.6 раз более интенсивное, чем после обработки немодифицированным монометил ауристатином Е. В случае эксперимента на клетках PC3, такую значительную разницу в снижении жесткости клеточной мембраны для двух веществ не фиксировали (фиг. 1).
Пример 11. Измерение цитотоксичности
В данной работе использовали клеточную линию HepG2. Клетки культивировали в матрасиках T25 в CO2 инкубаторе при 5% СО2 и температуре 37°С. Клетки высаживали в 96-луночные планшеты. Для подсчета клеток использовали автоматический счетчик клеток EVE. Через 24 часа после посадки в среду к клеткам добавляли тестируемые конъюгаты в различных концентрациях и инкубировали их в течение 72 часов. После этого из лунок удаляли культуральную среду и добавляли к клеткам смесь среды с МТС реагентом (CellTiter 96 AQueous Non- Radioactive Cell Proliferation Assay, Promega) из расчета 20 мкл МТС на 100 мкл ростовой среды. Клетки инкубировали в течение 4 часов в темноте в СО2-инкубаторе. Оптическую плотность полученных растворов измеряли при длине волны 490 нм с помощью спектрофотометра Thermo Scientific Multiskan GO. В качестве отрицательного контроля использовали клетки, инкубировавшиеся в культуральной среде, в качестве положительного контроля - клетки, инкубировавшиеся в среде с добавлением 20% ДМСО. Выживаемость клеток, инкубировавшихся с конъюгатами, рассчитывали как процент относительно клеток, культивировавшихся в ростовой среде. Значение поглощения MTС реагента в культуральной среде без клеток принимали равным нулю.
По полученным данным (табл. 1) можно сделать вывод о том, что конъюгаты хоть и немного уступают по цитотоксичности немодифицированному ММАЕ, но находятся на уровне с используемым в клинической практике препаратом аналогичного действия Колхицином (IC50(HepG2)= 4.6 ± 0.4 [Fu D.J., Li P., Wu B.W., Cui X.X., Zhao C. bin, Zhang S.Y. Molecular diversity of trimethoxyphenyl-1,2,3-triazole hybrids as novel colchicine site tubulin polymerization inhibitors // Eur. J. Med. Chem. 2019. V. 165. P. 309-322.]).
| Таблица 1. Результаты измерения цитотоксичности соединений из примера 1 и 2 и ММАЕ на клеточной линии HepG2. | |
| Соединение | IC50, мкмоль/л |
| HepG2 | |
| MMAE | <1 нмоль/л |
| Пример 1 | 0.11 ± 0.04 |
| Пример 2 | 0.5 ± 0.2 |
Конъюгат монометил ауристатина Е с лигандами асиалогликопротеинового рецептора могут быть использованы для приготовления фармацевтических композиций, включающих заявляемый конъюгат и фармацевтически приемлемые носителя для направленного транспорта в опухолевые клетки печени. Для лечения гепатоцеллюлярной карциномы фармацевтическую композицию, включающую конъюгат монометил ауристатина Е с лигандами асиалогликопротеинового рецептора, вводят в терапевтически эффективном количестве. Частоту и длительность введения выбирают в зависимости от характера и степени выраженности заболевания.
«Фармацевтическая композиция» обозначает композицию, включающую в себя соединение формулы 1 и, по крайней мере, один из компонентов, выбранных из группы, состоящей из фармацевтически приемлемых и фармакологически совместимых наполнителей, растворителей, разбавителей, носителей, вспомогательных средств, средств доставки, консерванты, стабилизаторы, наполнители, измельчители, увлажнители, эмульгаторы, суспендирующие агенты, загустители, подсластители, отдушки, ароматизаторы. Примерами подходящих носителей, растворителей, разбавителей и средств доставки являются вода, этанол, полиспирты, а также их смеси, инъекционные органические сложные эфиры (такие, как этилолеат). Фармацевтическая композиция может быть использована для внутримышечного, внутривенного, подкожного, одного или в комбинации с другим активным началом, может быть введена животным и людям в стандартной форме введения, в виде смеси с традиционными фармацевтическими носителями. Пригодные стандартные формы введения включают порошки, гранулы, растворы или суспензии, имплантаты, подкожные, внутримышечные, внутривенные, интраназальные формы введения.
Термин «терапевтически эффективное количество» означает количество действующего вещества, которое (1) лечит или предупреждает конкретное заболевание, состояние или расстройство, (2) ослабляет, улучшает или устраняет один или более симптомов конкретного заболевания, состояния или расстройства, или (3) предупреждает или задерживает наступление одного или более симптомов конкретного заболевания, состояния или расстройства, изложенного в данном описании. Термин «терапевтически эффективное количество» означает такое количество соединения формулы (I), которое достаточно для того, чтобы обеспечить желаемый терапевтический эффект. При этом суточная доза у взрослых обычно составляет 1,0 ~ 500 мг, предпочтительно - 10 ~ 300 мг. Поэтому во время приготовления из фармацевтической композиции лекарственного средства по настоящему изобретению в виде единиц дозировки необходимо учитывать вышеназванную эффективную дозировку, при этом каждая единичная дозировка препарата должна содержать 10 ~ 500 мг соединения общей формулы I предпочтительно - 50 ~ 300 мг. В предпочтительном варианте, терапевтически эффективное количество составляет от 0,01 до 1 мг/кг веса тела субъекта. В соответствии с указаниями врача или фармацевта данные препараты могут приниматься несколько раз в течение определенных промежутков времени (предпочтительно - от одного до шести раз). При этом, дозировка средства, содержащего соединение общей формулы (I), у пациентов может корректироваться в зависимости от терапевтической эффективности и биодоступности заявляемого конъюгата в организме, скорости их обмена и выведения из организма, а также в зависимости от возраста, пола и стадии заболевания пациента.
Claims (18)
1. Конъюгат противоопухолевого препарата монометил ауристатина Е с низкомолекулярными органическими соединениями – лигандами асиалогликопротеинового рецептора, представленный общей формулой (I)
(I),
где Лиганд - это соединение формулы или
,
где l = от 0 до 2, m = от 1 до 10, o = от 1 до 3,
Линкер - это соединение формулы ,
где Y = Val, Phe, Ala, Z = Cit, Arg, n = от 1 до 6, p = от 0 до 1.
2. Способ получение конъюгата по п. 1, характеризующийся тем, что проводят Cu(I)-катализируемую реакцию азидо-алкинового циклоприсоединения, где в качестве исходных соединений используют производное монометил ауристатина Е, содержащее терминальную тройную связь и лиганд асиалогликопротеинового рецептора, содержащий азидо-группу, при этом растворы веществ смешивают в таких количествах, чтобы на 1.0 мольный эквивалент производного ММАЕ приходилось не менее 1.0 мольного эквивалента лиганда, после проведения реакции удаляют Cu (I) из реакционной смеси, полученный продукт выделяют с помощью обращенно-фазовой колоночной хроматографии.
3. Способ по п. 2, характеризующийся тем, что в качестве лиганда асиалогликопротеинового рецептора используют производное N-ацетилгалактозамина.
4. Способ по п. 2, характеризующийся тем, что для растворения исходных веществ используют растворители, обеспечивающие их растворение, и инертные к компонентам смеси.
5. Способ по п. 4, характеризующийся тем, что для растворения используют ДМФА, ДМСО.
6. Способ по п. 2, характеризующийся тем, что в качестве катализатора для проведения реакции используют соединения одновалентной меди, взятые в количестве не менее 0.5 мольных эквивалентов на 1.0 мольный эквивалент производного ММАЕ.
7. Способ по п. 6, характеризующийся тем, что в качестве соли одновалентой меди используют CuCl, CuI, CuBr.
8. Способ по п. 2, характеризующийся тем, что в качестве основания используют третичный амин, выбранный из группы, включающей триэтиламин, диизопропиламин.
9. Способ по п. 8, характеризующийся тем, что основание берут в количестве не менее 8.8 мольных эквивалентов на 1.0 мольный эквивалент производного ММАЕ.
10. Способ по п. 2, характеризующийся тем, что для удаления Cu (I) в реакционную смесь добавляют ЭДТА или динатриевую соль ЭДТА.
11. Способ по п. 10, характеризующийся тем, что ЭДТА или динатриевую соль ЭДТА добавляют в мольном соотношении 1:1 к добавленному катализатору.
12. Применение конъюгата общей формулы (I) по п.1 для приготовления фармацевтической композиции для лечения гепатоцеллюлярной карциномы.
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2809635C1 true RU2809635C1 (ru) | 2023-12-14 |
Family
ID=
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2623160C9 (ru) * | 2010-12-17 | 2018-02-26 | Эрроухэд Фармасьютикалз, Инк. | Композиция системы доставки на основе конъюгата для доставки полинуклеотида РНК-интерференции в клетку печени и способ ее получения |
| US20210220477A1 (en) * | 2020-01-09 | 2021-07-22 | Mersana Therapeutics, Inc. | Site specific antibody-drug conjugates with peptide-containing linkers |
| RU2769859C1 (ru) * | 2020-12-01 | 2022-04-07 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Московский государственный университет имени М.В.Ломоносова» (МГУ) | Низкомолекулярные лиганды асиалогликопротеинового рецептора на основе хинолин-4-карбоновой кислоты |
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2623160C9 (ru) * | 2010-12-17 | 2018-02-26 | Эрроухэд Фармасьютикалз, Инк. | Композиция системы доставки на основе конъюгата для доставки полинуклеотида РНК-интерференции в клетку печени и способ ее получения |
| US20210220477A1 (en) * | 2020-01-09 | 2021-07-22 | Mersana Therapeutics, Inc. | Site specific antibody-drug conjugates with peptide-containing linkers |
| RU2769859C1 (ru) * | 2020-12-01 | 2022-04-07 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Московский государственный университет имени М.В.Ломоносова» (МГУ) | Низкомолекулярные лиганды асиалогликопротеинового рецептора на основе хинолин-4-карбоновой кислоты |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Reshitko, G. S. et al "Synthesis and Evaluation of New Trivalent Ligands for Hepatocyte Targeting via the Asialoglycoprotein Receptor", 2020, Bioconjugate Chemistry, 31(5), 1313-1319. Petrov, R. A. et al "Synthesisand biological evaluation of novel mono- and bivalent ASGP-R-targeted drug-conjugates.", Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 2018, 28(3), 382-387. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US20210030886A1 (en) | Sulfamide linker, conjugates thereof, and methods of preparation | |
| RU2234322C2 (ru) | Препарат с улучшенной переносимостью in vivo | |
| JP3693340B2 (ja) | ポリマー結合型パクリタキセル誘導体 | |
| US6906182B2 (en) | Conjugates of glycosylated/galactosylated peptide, bifunctional linker, and nucleotidic monomers/polymers, and related compositions and method of use | |
| US6811996B1 (en) | DDS compounds and method for assaying the same | |
| Iyer et al. | Synthesis, in vitro anti-breast cancer activity, and intracellular decomposition of amino acid methyl ester and alkyl amide phosphoramidate monoesters of 3 ‘-azido-3 ‘-deoxythymidine (AZT) | |
| HRP20040850A2 (en) | Conjugates of biologically active compounds, methods for their preparation and use formulation and pharmaceutical applications thereof | |
| US20090062236A1 (en) | Programmable genotoxic agents and uses therefor | |
| EA003398B1 (ru) | Лекарственный комплекс c полимерным носителем | |
| Lee et al. | Development of a new type of protease inhibitors, efficacious against FIV and HIV variants | |
| PL189604B1 (pl) | Nowe prekursory leków, sposób ich wytwarzania, środek farmaceutyczny i zastosowanie prekursorów leków | |
| EP1140958B1 (en) | Anti-(retro)viral conjugates of saccharides and acetamidino or guanidino compounds | |
| HU210147B (en) | Process for producing antibody-drug conjugates and pharmaceutical compositions containing them | |
| KR20010006280A (ko) | 다수개의 활성 잔기를 제공하는 분자 | |
| Dessolin et al. | New Bicyclam− AZT Conjugates: Design, Synthesis, Anti-HIV Evaluation, and Their Interaction with CXCR-4 Coreceptor | |
| Sohma et al. | Development of water-soluble prodrugs of the HIV-1 protease inhibitor KNI-727: importance of the conversion time for higher gastrointestinal absorption of prodrugs based on spontaneous chemical cleavage | |
| RU2809635C1 (ru) | Конъюгаты монометил ауристатина е с лигандами асиалогликопротеинового рецептора для направленного транспорта в опухолевые клетки печени | |
| Glazer et al. | Cytokinetic and biochemical effects of 5-iminodaunorubicin in human colon carcinoma in culture | |
| JPH06509350A (ja) | 新規なガングリオシド誘導体 | |
| Das et al. | Enhanced potency of nucleotide− dendrimer conjugates as agonists of the P2Y14 receptor: multivalent effect in G protein-coupled receptor recognition | |
| US6500669B1 (en) | Programmable genotoxic agents and uses therefor | |
| Goerlach et al. | In vitro antitumor activity of 2'-deoxy-5-fluorouridine-monoclonal antibody conjugates | |
| CN111205350A (zh) | 作为组蛋白脱乙酰酶抑制剂的大环硫代酸酯前体药物 | |
| Chiba et al. | Novel immunosuppressant agents targeting activated lymphocytes by biocompatible MPC polymer conjugated with interleukin-2 | |
| CN100398554C (zh) | 链化合物和配体、及其制备方法 |