RU2807482C1 - Штамм бактерий Bacillus thuringiensis ssp. aizawai, проявляющий инсектицидную активность против вредителей - насекомых отряда Lepidoptera - Google Patents
Штамм бактерий Bacillus thuringiensis ssp. aizawai, проявляющий инсектицидную активность против вредителей - насекомых отряда Lepidoptera Download PDFInfo
- Publication number
- RU2807482C1 RU2807482C1 RU2023118503A RU2023118503A RU2807482C1 RU 2807482 C1 RU2807482 C1 RU 2807482C1 RU 2023118503 A RU2023118503 A RU 2023118503A RU 2023118503 A RU2023118503 A RU 2023118503A RU 2807482 C1 RU2807482 C1 RU 2807482C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- strain
- aizawai
- bacillus thuringiensis
- ssp
- thuringiensis ssp
- Prior art date
Links
- 241000193388 Bacillus thuringiensis Species 0.000 title claims abstract description 46
- 229940097012 bacillus thuringiensis Drugs 0.000 title claims abstract description 36
- 230000000749 insecticidal effect Effects 0.000 title claims abstract description 28
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 title claims abstract description 20
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 title claims abstract description 18
- 241000255777 Lepidoptera Species 0.000 title claims abstract description 11
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 title claims abstract description 8
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 title claims description 4
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims abstract description 4
- 238000009329 organic farming Methods 0.000 claims abstract description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 18
- 239000007788 liquid Substances 0.000 abstract description 14
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 abstract description 11
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 abstract description 10
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 abstract description 10
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 abstract description 8
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 abstract description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 3
- 230000009467 reduction Effects 0.000 abstract description 3
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 abstract description 2
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 16
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 16
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 12
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 10
- 241000500437 Plutella xylostella Species 0.000 description 10
- 235000010419 agar Nutrition 0.000 description 10
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 10
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- OTLLEIBWKHEHGU-UHFFFAOYSA-N 2-[5-[[5-(6-aminopurin-9-yl)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methoxy]-3,4-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-3,5-dihydroxy-4-phosphonooxyhexanedioic acid Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C(C(C1O)O)OC1COC1C(CO)OC(OC(C(O)C(OP(O)(O)=O)C(O)C(O)=O)C(O)=O)C(O)C1O OTLLEIBWKHEHGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 9
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 9
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 7
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 7
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000255896 Galleria mellonella Species 0.000 description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 6
- 108020004465 16S ribosomal RNA Proteins 0.000 description 5
- 240000007124 Brassica oleracea Species 0.000 description 5
- 235000003899 Brassica oleracea var acephala Nutrition 0.000 description 5
- 235000011301 Brassica oleracea var capitata Nutrition 0.000 description 5
- 235000001169 Brassica oleracea var oleracea Nutrition 0.000 description 5
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 5
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 5
- 239000002917 insecticide Substances 0.000 description 5
- 238000000034 method Methods 0.000 description 5
- 241000255967 Helicoverpa zea Species 0.000 description 4
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 4
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 4
- 101100497223 Bacillus thuringiensis cry1Ag gene Proteins 0.000 description 3
- 101100275685 Bacillus thuringiensis cry2Ad gene Proteins 0.000 description 3
- 241000289763 Dasygaster padockina Species 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 241000256259 Noctuidae Species 0.000 description 3
- 241000255893 Pyralidae Species 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 230000034994 death Effects 0.000 description 3
- 230000001666 entomocidal effect Effects 0.000 description 3
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 3
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 3
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 3
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 3
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 3
- 239000012224 working solution Substances 0.000 description 3
- ROWKJAVDOGWPAT-UHFFFAOYSA-N Acetoin Chemical compound CC(O)C(C)=O ROWKJAVDOGWPAT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 241000255789 Bombyx mori Species 0.000 description 2
- 240000000171 Crataegus monogyna Species 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- 235000019733 Fish meal Nutrition 0.000 description 2
- 241001147381 Helicoverpa armigera Species 0.000 description 2
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 241000555303 Mamestra brassicae Species 0.000 description 2
- 241000257159 Musca domestica Species 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- 235000009754 Vitis X bourquina Nutrition 0.000 description 2
- 235000012333 Vitis X labruscana Nutrition 0.000 description 2
- 240000006365 Vitis vinifera Species 0.000 description 2
- 235000014787 Vitis vinifera Nutrition 0.000 description 2
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 2
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 2
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 2
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 2
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 2
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 2
- 230000000967 entomopathogenic effect Effects 0.000 description 2
- 239000004467 fishmeal Substances 0.000 description 2
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 244000005706 microflora Species 0.000 description 2
- 102000042567 non-coding RNA Human genes 0.000 description 2
- 239000000575 pesticide Substances 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K tripotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 238000010792 warming Methods 0.000 description 2
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 239000004382 Amylase Substances 0.000 description 1
- 102000013142 Amylases Human genes 0.000 description 1
- 108010065511 Amylases Proteins 0.000 description 1
- 241000626569 Aporia crataegi Species 0.000 description 1
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 1
- 241000790486 Bacillus wiedmannii Species 0.000 description 1
- 108020000946 Bacterial DNA Proteins 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 235000009917 Crataegus X brevipes Nutrition 0.000 description 1
- 235000013204 Crataegus X haemacarpa Nutrition 0.000 description 1
- 235000009685 Crataegus X maligna Nutrition 0.000 description 1
- 235000009444 Crataegus X rubrocarnea Nutrition 0.000 description 1
- 235000009486 Crataegus bullatus Nutrition 0.000 description 1
- 235000017181 Crataegus chrysocarpa Nutrition 0.000 description 1
- 235000013175 Crataegus laevigata Nutrition 0.000 description 1
- 235000009682 Crataegus limnophila Nutrition 0.000 description 1
- 235000004423 Crataegus monogyna Nutrition 0.000 description 1
- 235000002313 Crataegus paludosa Nutrition 0.000 description 1
- 235000009840 Crataegus x incaedua Nutrition 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 1
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 description 1
- 241000206672 Gelidium Species 0.000 description 1
- 241000257303 Hymenoptera Species 0.000 description 1
- 108050001192 Insecticidal delta endotoxin Proteins 0.000 description 1
- 241001261104 Lobesia botrana Species 0.000 description 1
- 239000006142 Luria-Bertani Agar Substances 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 238000010222 PCR analysis Methods 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 241000255969 Pieris brassicae Species 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 108010009736 Protein Hydrolysates Proteins 0.000 description 1
- 230000006819 RNA synthesis Effects 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 1
- NGFMICBWJRZIBI-JZRPKSSGSA-N Salicin Natural products O([C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O1)c1c(CO)cccc1 NGFMICBWJRZIBI-JZRPKSSGSA-N 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 235000018639 Terminalia sericea Nutrition 0.000 description 1
- 241000844454 Terminalia sericea Species 0.000 description 1
- 241000209140 Triticum Species 0.000 description 1
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 1
- 108010046334 Urease Proteins 0.000 description 1
- INISTDXBRIBGOC-CGAIIQECSA-N [cyano-(3-phenoxyphenyl)methyl] (2s)-2-[2-chloro-4-(trifluoromethyl)anilino]-3-methylbutanoate Chemical compound N([C@@H](C(C)C)C(=O)OC(C#N)C=1C=C(OC=2C=CC=CC=2)C=CC=1)C1=CC=C(C(F)(F)F)C=C1Cl INISTDXBRIBGOC-CGAIIQECSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- NGFMICBWJRZIBI-UHFFFAOYSA-N alpha-salicin Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1=CC=CC=C1CO NGFMICBWJRZIBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 235000019418 amylase Nutrition 0.000 description 1
- 235000019789 appetite Nutrition 0.000 description 1
- 230000036528 appetite Effects 0.000 description 1
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 description 1
- 229940088623 biologically active substance Drugs 0.000 description 1
- 229940036811 bone meal Drugs 0.000 description 1
- 239000002374 bone meal Substances 0.000 description 1
- 239000012152 bradford reagent Substances 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 230000001332 colony forming effect Effects 0.000 description 1
- 238000010835 comparative analysis Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 230000002939 deleterious effect Effects 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 210000002969 egg yolk Anatomy 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000005183 environmental health Effects 0.000 description 1
- 231100000776 exotoxin Toxicity 0.000 description 1
- 239000002095 exotoxin Substances 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 235000019688 fish Nutrition 0.000 description 1
- 210000003495 flagella Anatomy 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 230000009545 invasion Effects 0.000 description 1
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000006249 magnetic particle Substances 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 230000037323 metabolic rate Effects 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N nitrate group Chemical group [N+](=O)([O-])[O-] NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100001184 nonphytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 1
- 239000000419 plant extract Substances 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 239000002728 pyrethroid Substances 0.000 description 1
- 210000003705 ribosome Anatomy 0.000 description 1
- NGFMICBWJRZIBI-UJPOAAIJSA-N salicin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CC=CC=C1CO NGFMICBWJRZIBI-UJPOAAIJSA-N 0.000 description 1
- 229940120668 salicin Drugs 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 238000009331 sowing Methods 0.000 description 1
- 230000028070 sporulation Effects 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000012137 tryptone Substances 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- 238000009369 viticulture Methods 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 235000015099 wheat brans Nutrition 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
Abstract
Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к штамму спорообразующих бактерий Bacillus thuringiensis ssp. aizawai, обладающему инсектицидным действием в отношении чешуекрылых насекомых-вредителей, и может быть использовано в биотехнологии для получения микробиологических средств защиты сельскохозяйственных, лекарственных и лесных культур от вредных насекомых, технологичного штамма бактерий Bacillus thuringiensis ssp. aizawai Bta54, отличающегося морфологической стабильностью при культивировании в жидких питательных средах, сокращением времени его культивирования до 48-50 часов с повышенным синтезом инсектицидного белка 1000 мкг/мл, обладающего активностью против широкого спектра насекомых-вредителей отряда Lepidoptera, созданием штамма бактерий Bacillus thuringiensis ssp. aizawai Bta 54, проявляющего инсектицидную активность против вредителей - насекомых отряда Lepidoptera, пригодного для органического земледелия и депонированного в Биоресурсном Центре Всероссийской Коллекции Промышленных Микроорганизмов (БРЦ ВКПМ) НИЦ «Курчатовский институт» - ГосНИИгенетика под регистрационным номером ВКПМ В-14026. 3 ил., 10 табл.
Description
Изобретение относится к штамму спорообразующих бактерий Bacillus thuringiensis ssp. aizawai, обладающему инсектицидным действием в отношении чешуекрылых насекомых-вредителей и может быть использовано в биотехнологии для получения микробиологических средств защиты сельскохозяйственных, лекарственных и лесных культур от вредных насекомых.
В связи с глобальным потеплением усугубляются проблемы с вредителями сельского и лесного хозяйства из-за роста популяций насекомых, увеличения частоты нашествий, свободы их перемещения на новые ареалы обитания. Глобальное потепление экспоненциально увеличивает скорость обмена веществ у насекомых, темпы их размножения. В итоге становится больше насекомых с хорошим аппетитом.
Химические инсектициды не обеспечивают полную защиту сельскохозяйственных культур. Вдобавок вредители начинают ускользать от химического контроля, вырабатывая устойчивость к указанным инсектицидам. Кроме того, химические пестициды накапливаясь в продуктах питания, окружающей среде оказывают негативное влияние на здоровье людей и животных.
Альтернатива химическим пестицидам - биологические инсектициды, которые избирательно действуют на вредителя, не фитотоксичны, безопасны для человека и домашних животных, в том числе, для пчел. Ассортимент биологических инсектицидов ограничен несколькими препаратами, которые не всегда справляются с новыми вызовами, возникающими из-за климатических изменений.
Против чешуекрылых насекомых в России зарегистрированы и выпускаются биологические инсектициды на основе бактерий Bacillus thuringiensis двух подвидов spp.thuringiensis и spp.kurstaki.
Известны штаммы Bacillus thuringiensis spp.thuringiensis 202, 98 и 620, применяемые как основа битоксибациллина, (Н.В. Кандыбин, Н.М. Барбашова, А.А. Стусь, Л.Н. Кузнецова. Сравнительная эффективность трех штаммов Bacillus thuringiensis ssp.thuringiensis / Бюл. ВНИИСХМ №53, Л., 1990, с. 44-46).
Известен также штамм Bacillus thuringiensis ssp.thuringiensis №800/15 (BtH1 800/15), обладающий энтомоцидной активностью против вредителей - насекомых-фитофагов. Депонирован в ГНУ ВНИИСХМ под регистрационным номером №611 (патент РФ №2514211, МПК C12N 1/20, опубл. 27.04.2014 г.)
Известен штамм Bacillus thuringiensis spp.kurstaki Z-52 (авторское свидетельство СССР №769787, МПК A01N 63/00, опубл. 23.01.1984 г.), продуцирующий токсин, состоящий из двух белков, синтез которых кодируется генами cry1 и сгу2 (Мокеева А.В., Калмыкова Г.В., Бурцева Л.И., Орешкова С.Ф., Андреева И.С., Репин В.Е. Сравнительный анализ штаммов энтомопатогенной бактерии Bacillus thuringiensis молекулярно-генетическими методами / Биотехнология, 2006, №3, с. 47-55).
Известен штамм бактерий Bacillus thuringiensis ssp.kurstaki для получения препарата лепидоцида (Бердский завод биопрепаратов), активного против гусениц шелкопрядов, в том числе против сибирского шелкопряда, депонированный в коллекции ВКПМ №В-5351 (авторское свидетельство СССР №1784156, МПК A01N 63/00, опубл. 30.12.1992 г.).
Указанные выше штаммы бактерий способны образовывать два энтомоцидных токсина: белковый дельта-эндотоксин (δ-эндотоксин), высокоспецифичный против насекомых-вредителей, и водорастворимый бета-экзотоксин (β-экзотоксин). Хотя β-экзотоксин высоко активен против насекомых, он также оказывает вредное воздействие на организмы, не являющиеся мишенями, включая млекопитающих, поскольку он является аналогом нуклеотида, который влияет на синтез РНК. Из-за угрозы для здоровья человека, животных, пчел и окружающей среды Всемирная организация здравоохранения запретила использование штаммов Bacillus thuringiensis, продуцирующих этот токсин, в составах биоинсектицидов, подходящих для органического земледелия.
Наиболее близким аналогом (прототипом) является штамм Bacillus thuringiensis ssp. aizawai B48 выделенный из смывов семян пшеницы в Новосибирской области в 2015 г. (Андреева И.В., Шаталова Е.И., Калмыкова Г.В., Акулова И.И., Ульянова Е.Г. Восприимчивость разных видов чешуекрылых насекомых к штамму Bacillus thuringiensis ssp. aizawai // Сибирский вестник сельскохозяйственной науки. 2019. Т. 49. №6. С. 44-52.). Колонии, выросшие на агаризованной среде «А» исследовали световой микроскопией для определения наличия параспоральных кристаллов. Таким образом был выделен штамм Bacillus thuringiensis ssp. aizawai B48 с бипирамидальными кристаллами. В лабораторных условиях штамм Bacillus thuringiensis ssp. aizawai B48 проявлял инсектицидную активность в отношении пяти видов чешуекрылых вредителей (Lepidoptera): боярышнице (Aporia crataegi L.), капустной белянке (Pieris brassicae L.), капустной совке (Mamestra brassicae L.), капустной моли (Plutella xylostella L.), большой вощинной огневке (Galleria melonella L.).
Однако этот штамм не обладает стабильностью синтеза параспоральных кристаллов и при культивировании в жидких питательных средах диссоциирует с образованием колоний с ровным и ворсинчатым краем, причем варианты с ровным краем полностью утратили инсектицидную активность. При культивировании штамма Bacillus thuringiensis ssp. aizawai B48 на питательной среде, содержащей пептон, соевую муку, фосфорнокислый калий, сернокислый магний, получают культуральную жидкость с титром спор 0,25-0,53 млрд/мл, концентрацией инсектицидного белка не более 200 мкг/мл.
Недостатком штамма Bacillus thuringiensis ssp. aizawai B48 является то, что он не отвечает важному для промышленного производства критерию морфологической стабильности, а это снижает инсектицидную активность культуральной жидкости. Длительность культивирования до высыпания спор и кристаллов составляла 67-88 часов, недостаточная концентрация инсектицидного белка, которая составляет не более 200 мкг/мл.
Техническим результатом заявляемого изобретения является получение более технологичного штамма бактерий Bacillus thuringiensis ssp. aizawai, отличающегося морфологической стабильностью при культивировании в жидких питательных средах, сокращением времени его культивирования до 48-50 часов, с повышенным синтезом инсектицидного белка до 1000 мкг/мл, обладающего активностью против широкого спектра насекомых-вредителей отряда Lepidoptera.
Указанный технический результат достигается созданием штамма бактерий Bacillus thuringiensis ssp. aizawai Bta 54, проявляющий инсектицидную активность против вредителей - насекомых отряда Lepidoptera с целью получения инсектицидного препарата, используемого в органическом земледелии и депонированный в Биоресурсном Центре Всероссийской Коллекции Промышленных Микроорганизмов (БРЦ ВКПМ) НИЦ «Курчатовский институт» - ГосНИИгенетика под регистрационным номером ВКПМ В-14026. Справка о депонировании прилагается.
Изобретение иллюстрируется следующими графическими материалами. На фиг. 1 представлен внешний вид штаммов: а) заявляемый штамм Bacillus thuringiensis ВКПМ -14026; б) штамм-прототип Bacillus thuringiensis ssp. aizawai B48; при рассеве на агаризованной среде. На фиг. 2 приведена световая микроскопия культуральных жидкостей штаммов Bt ssp. aizawai В48 (А) и заявляемого Bt ssp. aizawai ВКПМ В-14026 (Б) после 48 часов культивирования. На фиг. 3 представлен скриншот результатов идентификации заявляемого штамма бактерий Bacillus thuringiensis ssp. aizawai Bta 54.
Штамм Bacillus thuringiensis ssp .aizawai Bta 54 получен путем многоступенчатой селекции штамма Bacillus thuringiensis ssp. aizawai B48. Суспензию штамма Bacillus thuringiensis ssp. aizawai B48 в бульоне Луриа-Бертрани с добавлением 0,25М ацетата натрия инкубировали 4 ч при 30°С, постоянно перемешивая. Затем образцы прогревали при 80°С в течение 15 минут и точечно высевали на агаризованные среды с различным содержанием аминного азота и глюкозы. Выросшие колонии исследовали световой микроскопией для определения наличия и синхронности высыпания параспоральных кристаллов на всех средах. Отобранные варианты культивировали в жидких питательных средах для определения морфологической однородности и стабильности. Полученный штамм Bacillus thuringiensis ssp .aizawai Bta 54 обладал морфологической однородностью и образовывал крупные бипирамидальные кристаллы после культивирования в жидкой питательной среде через 48 часов. Штамм давал положительную реакцию жгутикового антигена с типовой сывороткой Н7, был депонирован во Всероссийскую коллекцию промышленных микроорганизмов, что подтверждается справкой о депонировании от 21 мая 2021 г. (Справка прилагается).
Результаты по идентификации заявляемого штамма бактерий Bacillus thuringiensis ssp. aizawai Bta 54 с помощью секвенирования нуклеотидных последовательностей гена 16S рРНК бактериальной ДНК.
Исходные условия: четыре образца геномной ДНК
Краткий протокол работы:
• Получена ДНК фрагмента гена 16S размером около 1500 н.п, с помощью ПЦР и специфических для гена 16S рРНК праймеров в препаративном количестве.
• Полученная ДНК очищена от компонентов реакции ПЦР (праймеры, dNTP, полимераза) с помощью сорбции на магнитных частицах.
• Фрагмент гена 16S рРНК для каждого образца секвенирован с двух сторон по методу Сэнгера и проанализирован на автоматическом генном анализаторе ABI3130XL.
• Секвенограммы всех исследуемых образцов ДНК проанализированы на предмет гомологии/идентичности с помощью программы BLAST базы данных ГенБанк и классификатора базы 16S рибосомальных последовательностей - RDB.
Результаты по образцу - Bac_thur_54_16S_1500
Ниже приведена сшитая из секвенограмм последовательность образца:
При сравнении с помощью программы BLAST указанная последовательность совпадает со структурой Bacillus wiedmannii strain NY-19 16S ribosomal RNA gene, partial sequence и Bacillus thuringiensis strain Xmb014 16S ribosomal RNA gene, partial sequence (см. фиг. 3).
Заявляемый штамм Bacillus thuringiensis ssp. aizawai Bta 54 ВКПМ B-14026 не продуцирует водорастворимый β-экзотоксин, синтезирует инсектицидный δ-эндотоксин, состоящий из белков, кодируемых cry1, cry2 и сгу9-генами.
Заявляемый штамм Bacillus thuringiensis ssp. aizawai Bta 54 ВКПМ -14026 имеет более широкий спектр энтомопатогенной активности, в том числе способен контролировать таких проблемных вредителей, как хлопковая совка. Кроме того, этот штамм проявляет инсектицидную активность в отношении популяции большой вощинной огневке (Galleria melonella L.) устойчивой к действию штаммов В. thuringiensis ssp.galleriae.
Паспортные характеристики штамма Bacillus thuringiensis ssp.aizawai Bta 54 ВКПМ -14026
1. Культивирование штамма.
В качестве питательных сред использовали LB, А, Б следующего состава, г/л:
среда LB:
триптон «Difco» - 10,0;
дрожжевой экстракт « Difco» - 5,0;
NaCl - 10,0;
вода - 1000 мл.
среда А:
пептон «Difco» - 7,0;
панкреатический гидролизат рыбной муки - 4,0;
NaCl - 5,0;
вода - 1000 мл.
среда Б:
пептон «Difco» - 7,0;
панкреатический гидролизат рыбной муки - 4,0;
NaCl - 5,0;
Д-глюкоза - 5,0;
вода - 1000 мл
Для приготовления агаризованных питательных сред в жидкие среды дополнительно добавляли агар-агар (1,2 мас. %).
2. Культурально-морфологические признаки.
Аэробные, грамположительные подвижные палочки размером 0,7-1,2 × 2,5-4,0 мкм, образующие жгутики. Через 96 ч роста в стационарной фазе на агаризованной среде «А» образуют овальные споры размером 0,6-0,8 × 1,2-2,0 мкм. Одновременно со спорой образуются параспоральные тельца бипирамидальной формы разных размеров. На среде «А» образует белые плотные колонии с матовой поверхностью. Оптимальная температура роста +28°С. Штамм хорошо растет в Луриа-Бертани (LB) среде. Через двое суток при температуре +28°С на LB агаре образует матовые белые колонии 5-7 мм в диаметре с ровным краем. Колонии имеют плоский профиль, мелкозернистую структуру. При суспендировании в 0,8% физиологическом растворе образует равномерную муть. Рост умеренный, осадок рыхлый.
3. Физиолого-биохимические признаки.
В качестве органического источника азота штамм использует пептон, мясные, рыбные и растительные экстракты, соевую, кукурузную и рыбо-костную муки, автолизаты дрожжей и казеина, гидролизаты соевой и кукурузной муки, кормовые дрожжи. Штамм усваивает аммонийные и нитратные формы азота, глюкозу и глицерин в виде углеводного питания. Культура клеток штамма продуцирует ацетилметилкарбинол, проявляет уреазную, амилазную, протеазную активности. Не сбраживает маннозу, сахарозу с образованием кислоты; не усваивает цитрат; не дает пленку на мясопептонном бульоне и не образует пигмент на желтковых средах. Выражена способность сбраживать салицин. Штамм не продуцирует β-экзотоксин. Дает положительную реакцию жгутикового антигена с типовой сывороткой Bacillus thuringiensis spp. aizawai H-7.
4. Молекулярно-генетические признаки.
Электрофорез споро-кристаллической смеси штамма в SDS-PAGE показал присутствие высокомолекулярного белка в области 130 кДа. Результаты ПЦР-анализа показали присутствие cry1, сгу2 и сгу9-генов в геномной и плазмидной ДНК штамма.
5. Инсектицидные свойства штамма.
Проявляет инсектицидную активность против гусениц чешуекрылых насекомых (Lepidoptera) разных видов: большой вощинной огневки (Galleria melonella) (ceM.Pyralidae), хлопковой совки (Helicoverpa armigera) (ceM.Noctuidae), гроздевой листовертки (Lobesia botrana) (сем. Microlepidoptera).
Ниже приведены примеры 1-7 исследования характеристик заявляемого штамма.
Пример 1. Культивирование штамма Bacillus thuringiensis ssp. aizawai Bta 54 ВКПМ B-14026.
Для культивирования штамма использовали стандартные стеклянные конические плоскодонные колбы Эрленмейера объемом 750 см3, которые заполняли 50 мл стерильной среды. Среду «А» готовили на дистиллированной воде, доводили значение рН до 7,0, разливали в колбы по 50 мл и стерилизовали в автоклаве при давлении 1,1 атм при температуре 121°С в течение 30 мин. После стерилизации колбы с содержащейся в них средой охлаждали до +20°С. Стерильность и рН контролировали путем отбора соответствующих проб. Затем в колбы вносили по 2 мл посевного материала, приготовленного следующим образом: в стандартную пробирку с 5 мл стерильного физиологического раствора, помещали бактериальную культуру, собранную петлей с агаризованной среды «А», и инкубировали в течение 16 часов при температуре 28°С со встряхиванием 220 об/мин. Содержимое пробирки после светооптического контроля на отсутствие посторонней микрофлоры использовали как посевной материал.
Штамм выращивали при температуре +28-30°С при встряхивании (220 об/мин) в течение 72 часов. В процессе культивирования осуществляли контроль на отсутствие посторонней микрофлоры светооптическим методом или путем визуального контроля за морфологией колоний, выросших после высева культуральной жидкости штамма на чашки с агаризованной питательной средой «А». Через 72 часа методом световой микроскопии оценивали наличие и размер кристаллов. А также определяли титр КОЕ (колонии образующих единиц - бактериальных клеток и спор), который на среде «А» составлял (6-8)×108 КОЕ/мл.
Пример 2. Оценка морфологической стабильности.
Штамм Bacillus thuringiensis ssp. aizawai Bta 54 ВКПМ-14026 при рассеве на агаризованных средах формировал однородные крупные желтовато-белые колонии с реснитчатым краем.
Штамм Bacillus thuringiensis ssp. aizawai B48 отличался морфологической неоднородностью: в рассевах присутствовали крупные колонии с реснитчатым краем - морфовар В и плотные белые колонии среднего размера с ровным краем - морфовар Р (см. фиг. 1). Известно, что такая морфологическая неоднородность способствует нестабильности синтеза целевого инсектицидного белка дельта-эндотоксина.
Пример 3. Оценка способности продуцировать β-экзотоксин.
Оценку способности штамма Bacillus thuringiensis ssp. aizawai Bta 54 ВКПМ-14026 продуцировать β-экзотоксин проводили в лабораторных условиях на личинках комнатной мухи.
Штамм Bacillus thuringiensis ssp. aizawai Bta 54 ВКПМ -14026 культивировали на средах «А» и «Б» в течение 72 часов при +28-30°С при встряхивании 220 об/мин, полученные культуральные жидкости центрифугировали 15 мин при 8000 об/мин, затем фугат автоклавировали при давлении 0,1 МПа и температуре 105°С в течение 20 мин. Для испытания в стеклянную банку вместимостью 200 мл вносили:
- 2 мл культуральной жидкости;
- 11 мл 2,5%-ной водной суспензии сухого молока;
- 7 г стерилизованных пшеничных отрубей.
В положительном контроле вместо культуральной жидкости использовали препарат Битоксибациллин на основе штамма Bacillus thuringiensis ssp. thuringiensis H1 98, в отрицательном контроле - воду. Корм с соответствующими образцами тщательно перемешивали и помещали в банку, куда добавляли по 25 личинок комнатной мухи. Отсутствие экзотоксина оценивали по количеству нормальных имаго на 14 день опыта (таблица!).
Результаты, представленные в таблице 1, свидетельствуют о том, что штамм Bacillus thuringiensis ssp. aizawai Bta 54 ВКПМ В-14026 не продуцирует β-экзотоксин.
Пример 4. Определение концентрации δ-эндотоксина.
Концентрацию δ-эндотоксина определяли с помощью реагента Брэдфорда. Для этого 1 мл отобранной культуральной жидкости центрифугировали, затем дважды промывали 1 М NaCl, осадок дважды промывал дистиллированной водой. Смесь кристаллов и спор растворяли в 50 мМ буфере гидроксида натрия NaOH при 30°С в течение 3 ч при встряхивании. Затем растворенные белки количественно определяли с помощью реагента Брэдфорда
Из данных, приведенных в таблице 2 видно, что концентрация дельта-эндотоксина, синтезируемого штаммом Bt ssp. aizawai ВКПМ В-14026, в 5 раз выше, чем у штамма Bt ssp. aizawai В48.
Пример 5. Длительность культивирования штамма Bt ssp. aizawai Bta 54 ВКПМ В-14026
Время культивирования штамма-продуцента биологически активного вещества - важный показатель, влияющий на себестоимость конечного продукта. Сравнение длительности процесса культивирования двух штаммов Bacillus thuringiensis spp. aizawai (прототипа и заявляемого) до высыпания спор и кристаллов представлено в таблице 3.
Данные, приведенные в таблице 3 и на фиг. 2, подтверждают, что время культивирования заявляемого штамма Bt 54 ssp. aizawai ВКПМ В-14026 до образования спор и кристаллов на 17-40 часа меньше времени культивирования штамма Bt ssp. aizawai В48. По достижении 48 часов культивирования у заявляемого штамма отмечался лизис клеточной стенки и выход свободных спор и кристаллов; в это же время (48 ч культивирования) штамм Bt ssp. aizawai В48 находился на начальной стадии спорообразования.
Пример 6. Оценка инсектицидной активности заявляемого штамма в лабораторных условиях. Оценку инсектицидной активности для гусениц 2-3 возраста большой вощинной огневки (Galleria melonella сем. Pyralidae) и гусениц 2-3 возраста хлопковой совки (Helicoverpa armigera сем. Noctuidae) проводили в лабораторных условиях стандартным методом путем внесения разведений споро-кристаллических суспензий штаммов Bt ssp. kurstaki и заявляемого штамма Bt ssp. aizawai ВКПМ В-14026 в соответствующую диету. Штаммы выращивали на агаризованной среде «А» до полного высыпания спор и кристаллов. Споры и кристаллы смывали физиологическим раствором, полученную суспензию разводили дистиллированной водой. Опыты проводили при комнатной температуре в трех повторностях.
Как следует из результатов, представленных в таблице 4, заявляемый штамм ВКПМ В-14026 обладает высокой инсектицидной активностью против личинок большой вощинной огневки (Galleria melonella), чем отличается от штамма Bt ssp.kurstaki, у которого активность против этого насекомого отсутствует.
Примечание - * - 3-й возраст гусениц
Приведенные в таблице 5 данные подтверждают более высокую энтомоцидную активность заявляемого штамма ВКПМ-14026 по сравнению со штаммом Bt ssp. kurstaki против гусениц хлопковой совки 2-3 возраста.
Результаты, представленные в таблице 6, свидетельствуют о высокой инсектицидной активности заявляемого штамма против популяции насекомых Galleria mellonella.
Оценку инсектицидной активности в отношении гусениц 2-3 возраста капустной моли (Plutella xylostella сем. Pyralidae) и гусениц 2-3 возраста капустной совки (Mamestra brassicae сем. Noctuidae) проводили в лабораторных условиях. Штамм ВКПМ В-14026 выращивали на агаризованной среде "А" до полного высыпания спор и кристаллов. Споры и кристаллы смывали физиологическим раствором, полученную суспензию разводили дистиллированной водой. Стандартные по размеру листья капусты обрабатывали споро-кристаллической суспензией штамма ВКПМ В-14026. В контроле корм обрабатывали водой. В качестве эталона использовали споро-кристаллическую суспензию штамма Bt ssp. kurstaki z-52 (основа препарата Лепидоцид). На поверхность листьев помещали по 10 гусениц. Опыты проводили при комнатной температуре в тех поверхностях. Гибель гусениц капустной моли учитывали на вторые сутки (таблица 7), гусениц капустной совки на 2, 3, 6 сутки (таблица 8).
Результаты, представленные в таблице 7, свидетельствует о высокой инсектицидной активности заявляемого штамма против гусениц капустной моли. Биологическая эффективность заявляемого штамма против гусениц капустной моли превосходила таковую штамма Bt ssp kurstaki z-52 (основа препарата Лепидоцид). Кроме биологической эффективности было определено ЛК50 заявляемого штамма ВКПМ В-14026 для гусениц капустной моли, которая уже на первые сутки составила 2,6×106 спор/мл.
Приведенные в таблице 8 данные подтверждают более высокую энтомоцидную активность заявляемого штамма ВКПМ -14026 по сравнению со штаммом Bt ssp. kurstaki. Гибель всех гусениц капустной совки при заражении споро-кристаллической суспензией заявляемого штамма ВКПМ В-14026 наблюдалась на 6 сутки, тогда как в контроле и опыте со штаммом Bt ssp.kurstaki инсектицидная активность против гусениц капустной совки полностью отсутствовала.
Примечание - *- 3-й возраст гусениц
Пример 7. Оценка инсектицидной активности заявляемого штамма в полевых условиях
Полевые испытания проводили в Юго-Западной зоне виноградорства Крыма на виноградниках АО «Агрофирмы «Черноморец» (с.Угловое, Бахчисарайского района). На популяции II генерации гроздевой листовертки провели три обработки с интервалом 12 и 7 дней из расчета 100 л рабочего раствора на 1 га. Для приготовления рабочего раствора 1 л споро-кристаллической суспензии (титр 1,0×109 спор/мл) разбавляли в 100 л воды, рабочий раствор наносили с помощью ранцевого опрыскивателя. В качестве эталона применяли пиретроид Маврик, контролем служили растения без обработки.
Проведенными учетами установлено существенно меньшие значения показателей поврежденности гроздей винограда гусеницами II генерации гроздевой листовертки на обработанных вариантах относительно контрольного (таблица 9).
В агроклиматических условиях Крыма на опытном винограднике проведение трех обработок споро-кристаллической суспензией заявляемого штамма Bt ssp. zawai ВКПМ В-14026 обеспечило высокий уровень защиты от вредителей: 1,2-2,2% поврежденных гроздьев на опытном варианте в сравнении с 7,2-13,4% поврежденных гроздьев на контроле. Биологическая эффективность заявляемого штамма составила 81,9-85,7% (таблица 10).
Таким образом примеры 1-7 и таблицы 1-10 подтверждают получение заявляемого технического результата, а именно: создан более технологичный штамм бактерий Bacillus thuringiensis ssp. aizawai Bta 54, отличающийся морфологической стабильностью при культивировании в жидких питательных средах, сокращением времени его культивирования до 48-50 часов, с повышенным синтезом инсектицидного белка до 1000 мкг/мл, обладающего активностью против широкого спектра насекомых-вредителей отряда Lepidoptera.
--->
<?xml version="1.0" encoding="UTF-8"?>
<!DOCTYPE ST26SequenceListing PUBLIC "-//WIPO//DTD Sequence Listing
1.3//EN" "ST26SequenceListing_V1_3.dtd">
<ST26SequenceListing dtdVersion="V1_3" fileName="Проект №3. Штамм
бактерий Bacillus thuringiensis ssp. aizawai.xml" softwareName="WIPO
Sequence" softwareVersion="2.3.0" productionDate="2023-08-18">
<ApplicationIdentification>
<IPOfficeCode>RU</IPOfficeCode>
<ApplicationNumberText>2023118503/20(039722)</ApplicationNumberText>
<FilingDate>2023-07-12</FilingDate>
</ApplicationIdentification>
<ApplicantFileReference>1234567</ApplicantFileReference>
<EarliestPriorityApplicationIdentification>
<IPOfficeCode>RU</IPOfficeCode>
<ApplicationNumberText>2023118503/20(039722)</ApplicationNumberText>
<FilingDate>2023-07-12</FilingDate>
</EarliestPriorityApplicationIdentification>
<ApplicantName languageCode="ru">Общество с ограниченной
отвественностью (ООО) «Микопро».</ApplicantName>
<ApplicantNameLatin>OOO "Mikopro"</ApplicantNameLatin>
<InventionTitle languageCode="ru">Штамм бактерий Bacillus
thuringiensis ssp. aizawai, проявляющий инсектицидную активность
против вредителей – насекомых отряда Lepidoptera</InventionTitle>
<SequenceTotalQuantity>1</SequenceTotalQuantity>
<SequenceData sequenceIDNumber="1">
<INSDSeq>
<INSDSeq_length>1425</INSDSeq_length>
<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>
<INSDSeq_division>PAT</INSDSeq_division>
<INSDSeq_feature-table>
<INSDFeature>
<INSDFeature_key>source</INSDFeature_key>
<INSDFeature_location>1..1425</INSDFeature_location>
<INSDFeature_quals>
<INSDQualifier>
<INSDQualifier_name>mol_type</INSDQualifier_name>
<INSDQualifier_value>other DNA</INSDQualifier_value>
</INSDQualifier>
<INSDQualifier id="q2">
<INSDQualifier_name>organism</INSDQualifier_name>
<INSDQualifier_value>synthetic construct</INSDQualifier_value>
</INSDQualifier>
</INSDFeature_quals>
</INSDFeature>
</INSDSeq_feature-table>
<INSDSeq_sequence>ttaggcggctggctccnaaaaggttaccccaccgacttcgggtgttaca
aactctcgtggtgtgacgggcggtgtgtacaaggcccgggaacgtattcaccgcggcatgctgatccgcg
attactagcgattccagcttcatgtaggcgagttgcagcctacaatccgaactgagaacggttttatgag
attagctccacctcgcggtcttgcagctctttgtaccgtccattgtagcacgtgtgtagcccaggtcata
aggggcatgatgatttgacgtcatccccaccttcctccggtttgtcaccggcagtcaccttagagtgccc
aacttaatgatggcaactaagatcaagggttgcgctcgttgcgggacttaacccaacatctcacgacacg
agctgacgacaaccatgcaccacctgtcactctgctcccgaaggagaagccctatctctagggttttcag
aggatgtcaagacctggtaaggttcttcgcgttgcttcgaattaaaccacatgctccaccgcttgtgcgg
gcccccgtcaattcctttgagtttcagccttgcggccgtactccccaggcggagtgcttaatgcgttaac
ttcagcactaaagggcggaaaccctctaacacttagcactcatcgtttacggcgtggactaccagggtat
ctaatcctgtttgctccccacgctttcgcgcctcagtgtcagttacagaccagaaagtcgccttcgccac
tggtgttcctccatatctctacgcatttcaccgctacacatggaattccactttcctcttctgcactcaa
gtctcccagtttccaatgaccctccacggttgagccgtgggctttcacatcagacttaagaaaccacctg
cgcgcgctttacgcccaataattccggataacgcttgccacctacgtattaccgcggctgctggcacgta
gttagccgtggctttctggttaggtaccgtcaaggtgccagcttattcaactagcacttgttcttcccta
acaacagagttttacgacccgaaagccttcatcactcacgcggcgttgctccgtcagactttcgtccatt
gcggaagattccctactgctgcctcccgtaggagtctgggccgtgtctcagtcccagtgtggccgatcac
cctctcaggtcggctacgcatcgttgccttggtgagccgttacctcaccaactagctaatgcgacgcggg
tccatccataagtgacagccgaagccgcctttcaatttcgaaccatgcagttcaaaatgttatccggtat
tagccccggtttcccggagttatcccagtcttatgggcaggttacccacgtgttactcacccgtccgccg
ctaacttcntnagagcaagctctctaatccattcgctcgacttgca</INSDSeq_sequence>
</INSDSeq>
</SequenceData>
</ST26SequenceListing>
<---
Claims (1)
- Штамм бактерий Bacillus thuringiensis ssp. aizawai Bta 54, проявляющий инсектицидную активность против вредителей - насекомых отряда Lepidoptera, пригодный для органического земледелия и депонированный в Биоресурсном Центре Всероссийской Коллекции Промышленных Микроорганизмов (БРЦ ВКПМ) НИЦ «Курчатовский институт» - ГосНИИгенетика под регистрационным номером ВКПМ В-14026.
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2807482C1 true RU2807482C1 (ru) | 2023-11-15 |
Family
ID=
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2514211C1 (ru) * | 2012-10-10 | 2014-04-27 | Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт сельскохозяйственной микробиологии Российской академии сельскохозяйственных наук | ШТАММ БАКТЕРИЙ Bacillus thuringiensis var.thuringiensis N800/15 В КАЧЕСТВЕ СРЕДСТВА ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ЭНТОМОЦИДНОГО БИОПРЕПАРАТА |
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2514211C1 (ru) * | 2012-10-10 | 2014-04-27 | Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт сельскохозяйственной микробиологии Российской академии сельскохозяйственных наук | ШТАММ БАКТЕРИЙ Bacillus thuringiensis var.thuringiensis N800/15 В КАЧЕСТВЕ СРЕДСТВА ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ЭНТОМОЦИДНОГО БИОПРЕПАРАТА |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| АНДРЕЕВА И.В. и др. Восприимчивость разных видов чешуекрылых насекомых к штамму Bacillus thuringiensis ssp. Aizawai, Сибирский вестник сельскохозяйственной науки. 2019. Т. 49. N 6. С. 44-52. * |
| МОКЕЕВА А.В. и др. Сравнительный анализ штаммов энтомопатогенной бактерии Bacillus thuringiensis молекулярно-генетическими методами / Биотехнология, 2006, N 3, с. 47-55. YUTAO XIAO, et al. Recent progress on the interaction between insects and Bacillus thuringiensis crops, Philosophical transactions of the royal society B: Biological sciences. 2019, Vol. 374. Published: 14 January 2019, DOI: org/10.1098/rstb.2018.0316. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| El-Kersh et al. | Isolation and characterization of native Bacillus thuringiensis strains from Saudi Arabia with enhanced larvicidal toxicity against the mosquito vector Anopheles gambiae (sl) | |
| CN101292035B (zh) | 编码苏云金芽胞杆菌的杀虫晶体蛋白的基因cry7Bal | |
| JPH0558833A (ja) | 新規な双翅類害虫に活性の新規なバシラス・チユーリンゲンシス単離体 | |
| Sezen et al. | Identification and pathogenicity of entomopathogenic bacteria from common cockchafer, Melolontha melolontha (Coleoptera: Scarabaeidae) | |
| CN101984045B (zh) | 苏云金芽孢杆菌cry8Na1基因，表达蛋白及其应用 | |
| CN102154171A (zh) | 一株对蚊子幼虫高效的苏云金芽孢杆菌 | |
| WO2007142543A2 (en) | Novel bacteria and uses thereof | |
| US20060083726A1 (en) | Method for controlling insects of the order diptera using a Bacillus thuringiensis strain | |
| CN104611260A (zh) | 苏云金芽胞杆菌LTS290、杀虫基因cry57Ab、表达蛋白及其应用 | |
| CN109929015B (zh) | 苏云金芽胞杆菌杀虫基因cry79Aa1、表达蛋白及其应用 | |
| RU2807482C1 (ru) | Штамм бактерий Bacillus thuringiensis ssp. aizawai, проявляющий инсектицидную активность против вредителей - насекомых отряда Lepidoptera | |
| KR101644338B1 (ko) | 살충 활성이 있는 바실러스 투린지엔시스 아종 쿠르스타키 cab565 균주 및 이의 용도 | |
| CN108486008B (zh) | 对鳞翅目害虫高毒力的苏云金杆菌yn108、培养方法及其应用 | |
| Alfazairy et al. | Microbial control of the cotton leafworm Spodoptera littoralis (Boisd.) by Egyptian Bacillus thuringiensis isolates | |
| TW490486B (en) | Bacillus thuringiensis's insecticidal protein and uses thereof | |
| KR100280380B1 (ko) | 바실러스투린지엔시스 엔티0423 균주의 내독소단백질 및 이를 이용한 미생물 살충제 | |
| CN104673706A (zh) | 苏云金芽胞杆菌fh21、杀虫基因,表达蛋白及其应用 | |
| KR101649139B1 (ko) | 살충 활성이 있는 바실러스 투린지엔시스 아종 아이자와이 cab566 균주 및 이의 용도 | |
| JP2620478B2 (ja) | 新規なバチルス・トリンジェンシス単離物 | |
| JPH0515364A (ja) | 新規なバシラス菌株及び害虫防除剤 | |
| KR101212020B1 (ko) | 살충 활성이 있는 바실러스 투린지엔시스 아종 아이자와이 ｋｂ098 균주 및 이의 용도 | |
| KR101295026B1 (ko) | 신규한 포토랍두스 템페라타 ｍ１０２１ 및 이를 이용한 해충의 방제방법 | |
| CN112574901A (zh) | 苏云金芽孢杆菌库斯塔克亚种Btk-KN-R8及其应用 | |
| Prabakaran et al. | Immobilization in alginate as a new technique for the separation of Bacillus thuringiensis var. israelensis spore crystal complex | |
| RU2815318C1 (ru) | Штамм спорообразующих бактерий Bacillus thuringiensis spp. morrisoni, обладающий инсектоакарицидной, фунгицидной и стимулирующей рост растений активностью |