RU2797511C2

RU2797511C2 - Новые полиморфы кальциевой соли в качестве противовоспалительных, иммуномодулирующих и антипролиферативных средств

Info

Publication number: RU2797511C2
Application number: RU2020133836A
Authority: RU
Inventors: Даниэль ФИТТ; Андреас МЮЛЕР; Манфред ГРЕППЕЛЬ; Хелла Кольхоф
Original assignee: Иммуник Аг
Priority date: 2018-03-16
Filing date: 2019-03-15
Publication date: 2023-06-06

Abstract

Изобретение относится к способам получения белого кристаллического полиморфа A гидрата Ca соли соединения в соответствии с формулой I

формула I

с молярным отношением указанного соединения в соответствии с формулой I к кальцию 2±0,3, который характеризуется рентгеновской порошковой дифрактограммой, имеющей характеристические пики, выраженные в градусах 2 тета, при показанных ниже значениях ±0,2:

2 тета=5,91°, 9,64°, 16,78°, 17,81°, 19,81°, 25,41°, который включает следующие стадии:

• промывка кальциевой соли Кальций-видофлудимуса или ее сольвата и/или гидрата, предпочтительно кристаллического полиморфа Ca соли видофлудимуса или ее сольвата и/или гидрата, апротонным органическим растворителем, предпочтительно выбранным из группы, включающей DMF, DMSO, NMP, THF, Ацетон, Диоксан, 2-Метил-THF или (Метанол/CH2Cl2 (1:3)), предпочтительно ацетоном, и

• суспендирование полученного выделенного Кальций-видофлудимуса или его сольвата и/или гидрата в спиртовом растворителе, выбранном из группы, включающей метанол, этанол или изопропанол, и добавление воды к суспензии при 15-80°C.

Технический результат: разработан новый способ получения соединения в соответствии с формулой I в виде белого кристаллического полиморфа A Ca соли, котрое может быть примененимо для лечения и профилактики заболеваний, где полезно ингибирование дигидрооротатдегидрогеназы (DHODH). 2 н. и 11 з.п. ф-лы, 6 ил., 3 табл., 8 пр.

Description

Объектом настоящего изобретения является белый кристаллический полиморф A Ca соли соединения в соответствии с формулой I или ее сольвата и/или гидрата с молярным отношением соединения в соответствии с формулой I или его сольвата и/или гидрата к кальцию, которое составляет 2±0,3. Объектом настоящего изобретения является, в частности, соединение в соответствии с формулой I или его сольват и/или гидрат, которое характеризуется рентгеновской порошковой дифрактограммой, имеющей характеристические пики, выраженные в градусах 2-тета, при показанных ниже значениях ±0,2: 2 тета=5,91°, 9,64°, 16,78°, 17,81°, 19,81°, 25,41°. В частности, изобретение относится к новым полиморфам кальциевых солей, Ca соли, соединения в соответствии с формулой I или их сольватов и/или гидратов, которые ингибируют дигидрооротатдегидрогеназу (DHODH), способу их получения, фармацевтическим композициям, содержащим их, и к их применению для лечения и профилактики заболеваний, в частности, их применению при заболеваниях где полезно ингибирование дигидрооротатдегидрогеназы (DHODH). Примеры соответствующих заболеваний представлены ниже.

Воспалительное заболевание кишечника (IBD) представляет собой группу воспалительных состояний толстого и тонкого кишечника. Основными его типами являются болезнь Крона и язвенный колит. Болезнь Крона может поражать тонкий кишечник и толстый кишечник, а также полость рта, пищевод, желудок и анус. Язвенный колит преимущественно поражает толстую кишку и прямую кишку.

Ревматоидный артрит (RA) представляет собой заболевание, которое является обычным, особенно у пожилых людей. Его лечение обычными лекарственными средствами, например нестероидными противовоспалительными средствами, не является удовлетворительным. В свете все большего старения населения, особенно в развитых западных странах или в Японии, крайне необходима разработка новых лекарственных средств для лечения RA.

WO 2003/006425 описывает некоторые конкретные соединения, которые указаны как полезные для лечения и профилактики заболеваний, где полезно ингибирование дигидрооротатдегидрогеназы (DHODH). Однако конкретные соли в соответствии с настоящим изобретением не раскрываются. WO 2012/001148 описывает кальциевые соли указанных соединений. Однако конкретные полиморфы в соответствии с настоящим изобретением не раскрываются.

WO 99/38846 и EP 0 646 578 раскрывают соединения, которые указаны как полезные для лечения RA.

Лекарственное средство против ревматоидного артрита с новым механизмом действия, лефлуномид, было выпущено на рынок компанией Aventis под торговым наименованием ARAVA [EP 780128, WO 97/34600]. Лефлуномид обладает иммуномодулирующими, а также противовоспалительными свойствами [EP 217206, DE 2524929]. Механизм действия основан на ингибировании дигидрооротатдегидрогеназы (DHODH), фермента биосинтеза пиримидинов.

De Julian-Ortiz (J. Med. Chem. 1999, 42, 3308-3314) описывает некоторые потенциальные соединения против герпеса с группами циклопентеновой кислоты.

DE 33 46 814 A1 описывает некоторые амидные производные карбоновых кислот для лечения, профилактики и облегчения заболеваний, связанных церебральной дисфункцией и вызываемыми ею симптомами.

В организме человека DHODH катализирует синтез пиримидинов, которые особенно необходимы для клеточного метаболизма. Ингибирование DHODH приводит к блокированию транскрипции чувствительных генов в метаболически активированных клетках, тогда как клетки с нормальной метаболической активностью получают необходимые им пиримидиновые структурные блоки из пути реутилизации пиримидинов и демонстрируют нормальную транскрипционную активность. Связанные с заболеванием активированные лимфоциты зависят от de novo синтеза пиримидинов и особенно чувствительно реагируют на ингибирование DHODH. Некоторые вещества, которые ингибируют DHODH, являются важными лекарственными средствами для лечения хронических воспалительных и аутоиммунных заболеваний.

Соединение под названием лефлуномид (ARAVA) было первым одобренным ингибитором DHODH и используется для лечения заболеваний человека, в частности для лечения ревматоидного артрита. WO 99/45926 является еще одним ссылочным документом, который раскрывает соединения, которые действуют как ингибиторы DHODH. Еще одним лекарственным средством, которое направленно действует на DHODH, является терифлуномид (AUBAGIO®), являющийся метаболитом лефлуномида. Терифлуномид одобрен для лечения рассеянного склероза в некоторых странах.

JP-A-50-121428 раскрывает моноамиды N-замещенных циклопентен-1,2-дикарбоновых кислот в качестве гербицидов и способы их синтеза. Например, моноамид N-(4-хлорфенил)-1-циклопентен-1,2-дикарбоновой кислоты получают путем взаимодействия 1-циклопентен-1,2-дикарбонового ангидрида с 4-хлоранилином.

В Journal of Med. Chemistry, 1999, Vol. 42, pages 3308-3314, описаны виртуальные комбинаторные методы синтеза и компьютерный скрининг новых потенциальных соединений против герпеса. В Таблице 3 на стр. 3313 представлены результаты экспериментов по определению IC₅₀ и цитотоксичности для 2-(2,3-дифторфенилкарбамоил)-1-циклопентен-1-карбоновой кислоты, 2-(2,6-дифторфенилкарбамоил)-1-циклопентен-1-карбоновой кислоты и 2-(2,3,4-трифторфенил-карбамоил)-1-циклопентен-1-карбоновой кислоты.

DE 3346814 и US 4661630 раскрывают амиды карбоновых кислот. Эти соединения являются полезными для заболеваний, сопровождаемых церебральной дисфункцией, а также обладают противоязвенной, противоастматической, противовоспалительной и гипохолестериемической активностью.

В EP 0097056, JP 55157547, DE 2851379 и DE 2921002 описаны производные тетрагидрофталамовой кислоты.

Целью настоящего изобретения является обеспечение эффективных средств, в частности в форме некоторых полиморфов их кальциевых солей, которые можно использовать для лечения заболеваний, при которых требуется ингибирование DHODH.

Также, целью настоящего изобретения является обеспечение соединений, которые ингибируют DHODH в диапазоне, аналогичном соединениям, раскрытым в WO2003/006425 и WO 2012/001148, и в то же время демонстрируют белый цвет для облегчения двойных слепых плацебо-контролируемых клинических исследований.

Также, целью настоящего изобретения является обеспечение соединений и композиции, включающей соединения, которые ингибируют DHODH в диапазоне, аналогичном соединениям, раскрытым в WO2003/006425 и WO 2012/001148, и характеризуются тем, что имеют содержание THF ниже 720 ч/млн, чтобы соответствовать рекомендациям European Medicines Agency (например, в редакции от 6 декабря 2016 года; EMA/CHMP/ICH/82260/2006)

В частности, ранее было обнаружено, что некоторые соединения общей формулы (I), показанной ниже, такие как 2-(3-фтор-3'-метокси-бифенил-4-илкарбамоил)-циклопент-1-енкарбоновая кислота (INN Видофлудимус), демонстрируют хорошую противовоспалительную активность, и была рассмотрена их применимость в пероральных лекарственных средствах для лечения аутоиммунных заболеваний, таких как, например, ревматоидный артрит или воспалительные заболевания кишечника.

Соответственно, был получен новый белый полиморф кальций-видофлудимуса, названный полиморфом A, с ингибирующим эффектом на DHODH, в частности, DHODH человека. Кроме того, была получена композиция, включающая указанный белый полиморф кальций-видофлудимуса, названный полиморфом A, характеризующаяся тем, что имеет содержание тетрагидрофурана (THF) ниже 720 ч/млн.

Изобретение относится к белой кристаллической кальциевой соли 2-({3-фтор-3'-метокси-[1,1'-бифенил]-4-ил}карбамоил)циклопент-1-ен-1-карбоновой кислоты) в соответствии с формулой (I) или ее сольвату и/или гидрату, CAS-No 717824-30-1

Таким образом, объектом настоящего изобретения является белая кристаллическая кальциевая соль видофлудимуса с молярным отношением видофлудимуса к кальцию 2±0,3 или ее сольват и/или гидрат. В отличие от бледно-желтого полиморфа, описанного в EP 2588446B1, например, в примере 4, объект настоящего изобретения имеет белый цвет.

Белый кристалл может быть определен как кристаллы чисто белого цвета, подобного RAL цветовому коду RAL9010, который эквивалентен или подобен цветовому коду US Federal “Белый 506”, #27885 в соответствии с Федеральным стандартом США 595.

Сольват для всех вариантов осуществления изобретения может быть выбран из группы, включающей этанол, пропанол, изопропанол, бутанол, THF, воду. В предпочтительном варианте осуществления для всех вариантов осуществления изобретения сольват представляет собой гидрат. В одном предпочтительном варианте осуществления сольват представляет собой дигидрат кальция для всех вариантов осуществления изобретения.

В частности, объектом настоящего изобретения является белый кристаллический полиморф A Ca соли соединения в соответствии с формулой I (видофлудимус) или ее сольватаи/или гидрата, который характеризуется рентгеновской порошковой дифрактограммой, имеющей характеристические пики, выраженные в градусах 2-тета, при показанных ниже значениях ±0,2:

2 тета=5,91°, 9,64°, 16,78°, 17,81°, 19,81°, 25,41°

В конкретном варианте осуществления объектом настоящего изобретения является белый кристаллический полиморф A Ca соли соединения в соответствии с формулой I (видофлудимус) (Кальций-видофлудимус) или ее сольвата и/или гидрата, где характеристические пики, имеющие 2-тета при показанных ниже значениях ±0,2, показаны ниже:

Все значения 2 тета, указанные в настоящей заявке, относятся к длине волны рентгеновского излучения от источника, которым является медный источник K-альфа. Таким образом, 2 тета значения получают с длиной волны излучения: Cu K-альфа; 0,15418 нм.

Таблица 1 Перечень пиков полиморфа A кальций-видофлудимуса
Угол 2-Тета °	D значение Ангстрем	Интенсивность
5,91	14,95	vs
6,83	12,93	vw
9,64	9,17	w
11,33	7,80	w
11,82	7,48	w
12,98	6,81	vw
13,70	6,46	vw
14,27	6,20	vw
15,04	5,89	w
15,44	5,73	vw
16,78	5,28	s
17,81	4,98	m
18,25	4,86	w
18,58	4,77	vw
19,39	4,57	w
19,81	4,48	w
20,53	4,32	vw
21,26	4,18	vw
22,63	3,93	vw
23,16	3,84	vw
23,96	3,71	w
24,73	3,60	vw
25,41	3,50	s
26,12	3,41	w
26,44	3,37	w
27,25	3,27	w
27,55	3,24	w
28,45	3,13	w
28,91	3,09	vw
29,29	3,05	w
29,89	2,99	w
30,77	2,90	w
31,22	2,86	vw
31,60	2,83	w
32,13	2,78	w
33,25	2,69	vw
33,98	2,64	w
34,48	2,60	w
35,12	2,55	vw

В конкретном варианте осуществления объектом настоящего изобретения является белый кристаллический полиморф A кальций-видофлудимуса или его сольвата и/или гидрата, характеризующийся рентгеновской порошковой дифрактограммой, показанной на Фиг. 1.

В конкретном варианте осуществления объектом настоящего изобретения является белый кристаллический полиморф A кальций-видофлудимуса или его сольвата и/или гидрата, который характеризуется рамановским спектром поглощения с Фурье-преобразованием, имеющим следующие характеристические пики, выраженные в см^-1: 1664, 1624, 1617, 1532, 1449, 1338, спектр показан на Фиг. 2.

В конкретном варианте осуществления объектом настоящего изобретения является белый кристаллический полиморф A кальций-видофлудимуса или его сольвата и/или гидрата, который характеризуется ИК-спектром поглощения, имеющим характеристические пики, выраженные в см^-1: 1980, 1659, 1584, 1335, 1145, спектр показан на Фиг. 3.

В конкретном варианте осуществления объектом настоящего изобретения является белый кристаллический полиморф A кальций-видофлудимуса или его сольвата и/или гидрата, который характеризуется спектром¹H-ЯМР, имеющим характеристические пики, выраженные в м.д.: 15,2, 8,3, 7,6, 7,5, 7,4, 7,2, 6,8, 3,8, 2,7, 1,6. Спектр показан на Фиг. 4.

В конкретном варианте осуществления объектом настоящего изобретения является белый кристаллический полиморф A кальций-видофлудимуса или его сольвата и/или гидрата, который представляет собой гидрат с молярным соотношением видофлудимуса и воды около 1:1.

В конкретном варианте осуществления объектом настоящего изобретения является фармацевтическая композиция, включающая белый кристаллический полиморф A кальций-видофлудимуса или получаемый из Ca-Видофлудимуса или его сольвата и/или гидрата, предпочтительно получаемый из кристаллического полиморфа Ca соли видофлудимуса или ее сольвата и/или гидрата, например, получаемый из кристаллического полиморфа B Ca соли видофлудимуса или ее сольвата и/или гидрата в способе, более подробно описанном ниже.

Это первый случай, когда стало возможным обеспечить фармацевтический состав или композицию, включающую полиморф Ca соли видофлудимуса, который содержал менее чем 720 ч/млн THF.

Таким образом, в конкретном варианте осуществления объектом настоящего изобретения является фармацевтический состав или композиция, включающая полиморф видофлудимуса, имеющая содержание THF менее чем 720 ч/млн THF, предпочтительно менее чем 650 ч/млн, предпочтительно менее чем 600 ч/млн, предпочтительно менее чем 500 ч/млн, предпочтительно менее чем 400 ч/млн, предпочтительно менее чем 300 ч/млн, предпочтительно менее чем 250 ч/млн, предпочтительно менее чем 200 ч/млн, предпочтительно менее чем 100 ч/млн.

В конкретном варианте осуществления объектом настоящего изобретения является фармацевтическая композиция, включающая белый кристаллический полиморф A кальций-видофлудимуса или его сольвата и/или гидрата, получаемый из Ca-Видофлудимуса или его сольвата и/или гидрата, предпочтительно получаемый из кристаллического полиморфа Ca соли видофлудимуса или ее сольвата и/или гидрата, например, получаемый из кристаллического полиморфа B Ca соли видофлудимуса или ее сольвата и/или гидрата в способе, более подробно описанном ниже, где указанная фармацевтическая композиция имеет содержание THF менее чем 720ч/млн, предпочтительно менее чем 650 ч/млн, предпочтительно менее чем 600 ч/млн, предпочтительно менее чем 500 ч/млн, предпочтительно менее чем 400 ч/млн, предпочтительно менее чем 300 ч/млн, предпочтительно менее чем 250 ч/млн, предпочтительно менее чем 200 ч/млн, предпочтительно менее чем 100 ч/млн.

Объектом настоящего изобретения является белый кристаллический полиморф A кальций-видофлудимуса в соответствии с настоящим изобретением или фармацевтическая композиция в соответствии с настоящим изобретением для применения в качестве лекарственного средства.

Объектом настоящего изобретения является кристаллический полиморф A кальций-видофлудимуса или его сольвата и/или гидрата в соответствии с настоящим изобретением или фармацевтическая композиция в соответствии с настоящим изобретением для применения в лечении заболевания, выбранного из группы, включающей ревматизм, острые иммунологические нарушения, аутоиммунные заболевания, заболевания, вызванные пролиферацией злокачественных клеток, воспалительные заболевания, заболевания, которые вызваны протозойными инвазиями у человека и животных, заболевания, которые вызваны вирусными инфекциями и Pneumocystis carinii, фиброз, увеит, ринит, астму или артропатию.

Объектом настоящего изобретения является кристаллический полиморф A кальций-видофлудимуса или его сольвата и/или гидрата в соответствии с настоящим изобретением или фармацевтическая композиция в соответствии с настоящим изобретением для применения в лечении заболевания, где заболевание или терапевтическое показание выбрано из группы, включающей реакции трансплантат против хозяина и хозяин против трансплантата, ревматоидный артрит, псориатический артрит, рассеянный склероз, амиотрофический боковой склероз, красную волчанку, волчаночный нефрит, воспалительное заболевание кишечника, диабет 1 типа, аутоиммунный гепатит, первичный склерозирующий холангит, первичный билиарный холангит и псориаз. В одном конкретном варианте осуществления изобретения указанный пациент страдает воспалительным заболеванием кишечника, в частности язвенным колитом и болезнью Крона.

Объектом настоящего изобретения является Способ получения белого кристаллического полиморфа A кальций-видофлудимуса или его сольвата и/или гидрата, определенного в любом из вариантов осуществления выше, где указанный способ представляет собой способ от суспензии-к-суспензии, исходя из Ca-видофлудимуса или его сольвата и/или гидрата, предпочтительно получаемого из кристаллического полиморфа Ca соли видофлудимуса или ее сольвата и/или гидрата, где указанный способ включает следующие стадии:

• промывка кальциевой соли видофлудимуса или ее сольвата и/или гидрата апротонным органическим растворителем, предпочтительно выбранным из группы, включающей DMF, DMSO, NMP, THF, Ацетон, Диоксан, 2-Метил-THF или (Метанол/CH2Cl2 (1:3)), предпочтительно ацетоном, и

• суспендирование полученного выделенного кальций-видофлудимуса или его сольвата и/или гидрата в спиртовом растворителе и добавление воды к суспензии.

При помощи способа по изобретению можно преобразовать Ca-Видофлудимус или его сольват и/или гидрат, предпочтительно кристаллический полиморф Ca соли видофлудимуса или ее сольвата и/или гидрата, например кристаллический полиморф B Ca соли видофлудимуса или ее сольвата и/или гидрата, в белый кристаллический полиморф A кальций-видофлудимуса или его сольвата и/или гидрата, имеющий содержание THF менее чем 720 ч/млн.

Объектом настоящего изобретения является Способ получения белого кристаллического полиморфа A кальций-видофлудимуса или его сольвата и/или гидрата, определенного в любом из вариантов осуществления выше,

при этом способ включает следующие стадии

a) добавление к смеси гидроксида кальция и свободной кислоты видофлудимуса органического растворителя и воды

b) добавление апротонного органического растворителя, полностью смешиваемого с водой, к указанной суспензии кальций-видофлудимуса или его сольвата и/или гидрата, полученной на стадии a),

c) выделение соли Кальций-видофлудимуса или его сольвата и/или гидрата из смеси, полученной на стадии b), и

d) промывка кальциевой соли Кальций-видофлудимуса или его сольвата и/или гидрата, полученного на стадии c), апротонным органическим растворителем, указанным на стадии b).

e) суспендирование выделенного Кальций-видофлудимуса или его сольвата и/или гидрата, полученного на стадии d), в спиртовом растворителе при 15-80°C для получения полиморфа B Кальций-видофлудимуса.

f) добавление воды к суспензии, полученной на стадии e), при 15-85°C для получения полиморфа A Кальций-видофлудимуса или его сольвата и/или гидрата также с уменьшенным количеством апротонного органического растворителя.

Органический растворитель в соответствии со стадией a) может быть выбран из группы, включающей THF, 2-Метил-THF, Диоксан или подобныхе растворители.

Упаривание в соответствии со стадией c) можно осуществить путем отгонки используемого органического растворителя методом вакуумной дистилляции или дистилляции при нормальном давлении.

Апротонный органический растворитель может быть выбран из группы, включающей DMF, DMSO, NMP, THF, Ацетон, Диоксан, 2-Метил-THF или (Метанол/CH2Cl2 (1:3)).

Суспензия/взвесь представляет собой смесь кристаллического твердого продукта в смеси используемых растворителей. Полученную смесь оценивают визуально, чтобы определить, находится ли она в форме взвеси или суспензии или раствора.

Выделение кальциевой соли видофлудимуса (4SC-101, SC12267) или ее сольвата и/или гидрата из смеси, полученной на стадии е), можно осуществить следующим образом: выделение продукта любым способом разделения твердой и жидкой фаз, таким как фильтрация, центрифугирование или т.п.

Спиртовой растворитель в соответствии со стадией е) может быть выбран из группы, включающей метанол, этанол или изопропанол.

В одном варианте осуществления выделение кальциевой соли видофлудимуса (4SC-101, SC12267) или ее сольвата и/или гидрата из смеси, полученной на стадии е), можно осуществить следующим образом: выделение продукта любым способом разделения твердой и жидкой фаз, таким как фильтрация, центрифугирование или т.п.

В конкретном варианте осуществления объектом изобретения является способ получения кристаллического полиморфа в соответствии со способом, описанным выше, в котором после стадии f) добавляют стадию сушки, а затем необязательно добавляют стадию измельчения, а затем, необязательно, добавляют стадию перекристаллизации.

В другом конкретном варианте осуществления объектом изобретения является Способ получения кристаллического полиморфа в соответствии со способом, описанным выше, где после стадии b) и перед стадией c) раствор фильтруют и затем фильтр промывают указанным органическим растворителем.

В другом конкретном варианте осуществления объектом изобретения является Способ получения кристаллического полиморфа в соответствии со способом, описанным выше, где суспензию стадии a) нагревают до 25-30°C.

В другом конкретном варианте осуществления объектом изобретения является Способ получения кристаллического полиморфа в соответствии со способом, описанным выше, где суспензию стадии e) нагревают до 15-25°C.

В другом конкретном варианте осуществления объектом изобретения является Способ получения кристаллического полиморфа в соответствии со способом, описанным выше, где указанный органический растворитель представляет собой THF.

В другом конкретном варианте осуществления объектом изобретения является Способ получения кристаллического полиморфа в соответствии со способом, описанным выше, где указанный апротонный органический растворитель представляет собой ацетон. В другом конкретном варианте осуществления объектом изобретения является Способ получения кристаллического полиморфа в соответствии со способом, описанным выше, где указанный спиртовой растворитель предпочтительно представляет собой этанол.

В другом конкретном варианте осуществления объектом изобретения является кристаллическая кальциевая соль видофлудимуса (4SC-101, SC12267) с молярным отношением видофлудимуса к кальцию, равным 2±0,3, получаемая способом, описанным выше.

Полиморфы в соответствии с настоящим изобретением можно вводить животным, в частности, млекопитающим, и в частности людям, собакам и цыплятам, в качестве терапевтических средств per se, в виде смесей друг с другом или в форме фармацевтических препаратов, которые можно вводить энтерально или парентерально и которые в качестве активного компонента содержат эффективную дозу по меньшей мере одного из вышеуказанных полиморфов по изобретению в дополнение к обычным фармацевтически безвредным эксципиентам и добавкам.

Терапевтические средства можно вводить перорально, например в форме пилюль, таблеток, таблеток с покрытием, таблеток с сахарным покрытием, твердых и мягких желатиновых капсул, растворов, сиропов, эмульсий или суспензий или в виде аэрозольных смесей. Однако введение можно также осуществлять ректально, например в форме суппозиториев, или парентерально, например в форме инъекций или инфузий, или чрескожно, например в форме мазей, кремов или настоек.

Для клинических испытаний огромным преимуществом является, когда композиция, включающая активное соединение, имеет белый цвет. Клинические испытания часто осуществляют двойным слепым методом, чтобы избежать “эффектов плацебо”, то есть избежать систематической ошибки, если врач или пациент могут распознать плацебо. В результате, несоответствие может привести к задержке испытания и увеличению затрат. Mandy Wan et al. Arch Dis Child September 2013, Vol 98 No. 9. Таким образом, если композиция, содержащая активный ингредиент, окрашена, необходимо принять меры, чтобы уравнять плацебо и активную композицию. Таким образом, огромным преимуществом является клиническая композиция, имеющая белый цвет.

В дополнение к вышеуказанным полиморфам по изобретению, фармацевтическая композиция может содержать другие традиционные, обычно инертные вещества-носители или эксципиенты. Таким образом, фармацевтические препараты могут также содержать добавки, такие как, например, наполнители, объемообразующие вещества, разрыхлители, связующие, глиданты, смачивающие вещества, стабилизаторы, эмульгаторы, консерванты, подсластители, красители, отдушки или ароматизаторы, буферные вещества и, кроме того, растворители или солюбилизаторы или агенты для достижения депо-эффекта, а также соли для изменения осмотического давления, агенты покрытия или антиоксиданты. Они также могут содержать вышеуказанные соли двух или более полиморфов по изобретению, а также другие терапевтически активные вещества.

Таким образом, полиморфы по изобретению можно использовать отдельно или в комбинации с другими активными соединениями, например, с лекарственными средствами, уже известными для лечения вышеуказанных заболеваний, благодаря чему в последнем случае отмечается благоприятный дополнительный усиливающий эффект. Подходящие количества для введения человеку составляют от 5 до 500 мг, в частности от 10 до 100 мг.

Для получения фармацевтических препаратов можно использовать фармацевтически инертные неорганические или органические эксципиенты. Для получения пилюль, таблеток, таблеток с покрытием и твердых желатиновых капсул, например, можно использовать лактозу, кукурузный крахмал или его производные, тальк, стеариновую кислоту или ее соли и т.д. Эксципиенты для мягких желатиновых капсул и суппозиториев представляют собой, например, жиры, воски, полутвердые и жидкие полиолы, натуральные или отвержденные масла и т.д. Подходящие эксципиенты для получения растворов и сиропов представляют собой, например, воду, сахарозу, инвертный сахар, глюкозу, полиолы и т.д. Подходящие эксципиенты для получения растворов для инъекций представляют собой, например, воду, спирты, глицерин, полиолы или растительные масла.

Доза может варьироваться в широких пределах и должна соответствовать индивидуальным условиям в каждом конкретном случае. Для указанных выше применений подходящая дозировка будет варьироваться в зависимости от способа введения, конкретного состояния, которое необходимо лечить, и желаемого эффекта. Однако, как правило, удовлетворительные результаты достигаются при дозах около 1-100 мг/кг массы тела животного, в частности 1-50 мг/кг. Подходящие дозы для более крупных млекопитающих, например людей, составляют примерно от 10 мг до 3 г/день, которые удобно вводить однократно или в разделенных дозах, например 2-4 раза в день или в форме с замедленным высвобождением.

Как правило, суточная доза приблизительно от 10 мг до 100 мг, в частности от 10 до 50 мг, на человека является подходящей в случае перорального введения. В случае других форм введения суточная доза находится в аналогичных пределах.

Варианты осуществления изобретения представляют собой следующие:

1. Белый кристаллический полиморф A Ca соли соединения в соответствии с формулой I или ее сольвата и/или гидрата

Формула I

с молярным отношением указанного соединения в соответствии с формулой I к кальцию 2±0,3.

2. Белый кристаллический полиморф A Ca соли соединения в соответствии с формулой I или ее сольвата и/или гидрата в соответствии с вариантом осуществления 1, который характеризуется рентгеновской порошковой дифрактограммой, имеющей характеристические пики, выраженные в градусах 2-тета, при следующих значениях ±0,2: 2 тета=5,91°, 9,64°, 16,78°, 17,81°, 19,81°, 25,41°

3. Белый кристаллический полиморф A Ca соли соединения в соответствии с формулой I или ее сольвата и/или гидрата в соответствии с вариантом осуществления 1 или 2, где характеристические пики, которые имеют 2 тета при указанных значениях ±0,2, показаны ниже:

Таблица 1 Перечень пиков Полиморфа A Ca соли видофлудимуса
Угол 2-Тета °	d значение Ангстрем	Интенсивность
5,91	14,95	vs
6,83	12,93	vw
9,64	9,17	w
11,33	7,80	w
11,82	7,48	w
12,98	6,81	vw
13,70	6,46	vw
14,27	6,20	vw
15,04	5,89	w
15,44	5,73	vw
16,78	5,28	s
17,81	4,98	m
18,25	4,86	w
18,58	4,77	vw
19,39	4,57	w
19,81	4,48	w
20,53	4,32	vw
21,26	4,18	vw
22,63	3,93	vw
23,16	3,84	vw
23,96	3,71	w
24,73	3,60	vw
25,41	3,50	s
26,12	3,41	w
26,44	3,37	w
27,25	3,27	w
27,55	3,24	w
28,45	3,13	w
28,91	3,09	vw
29,29	3,05	w
29,89	2,99	w
30,77	2,90	w
31,22	2,86	vw
31,60	2,83	w
32,13	2,78	w
33,25	2,69	vw
33,98	2,64	w
34,48	2,60	w
35,12	2,55	vw

4. Белый кристаллический полиморф A Ca соли соединения в соответствии с формулой I или ее сольвата и/или гидрата в соответствии с вариантом осуществления 1 или 2, характеризующийся рентгеновской порошковой дифрактограммой, показанной на Фиг. 1.

Фиг. 1: Рентгеновская порошковая дифрактограмма (PXRD) Полиморфа A Ca-видофлудимуса

5. Белый кристаллический полиморф A Ca соли соединения в соответствии с формулой I или ее сольвата и/или гидрата в соответствии с любым из вариантов осуществления 1-4, который характеризуется рамановским спектром поглощения с Фурье-преобразованием, имеющим следующие характеристические пики, выраженные в см^-1: 1664, 1624, 1617, 1532, 1449, 1338, спектр показан на Фиг. 2.

Фиг. 2: Рамановский спектр Полиморфа A Ca-видофлудимуса

6. Белый кристаллический полиморф A Ca соли соединения в соответствии с формулой I или ее сольвата и/или гидрата в соответствии с любым из вариантов осуществления 1-5, который характеризуется ИК-спектром поглощения, имеющим характеристические пики, выраженные в см^-1: 1980, 1659, 1584, 1335, 1145, спектр показан на Фиг. 3.

Фиг. 3a: ИК-спектр Полиморфа A Ca-видофлудимуса, полная область

Фиг. 3b: ИК-спектр Полиморфа A Ca-видофлудимуса, характеристическая область

7. Белый кристаллический полиморф A Ca соли соединения в соответствии с формулой I или ее сольвата и/или гидрата в соответствии с любым из вариантов осуществления 1-6, который характеризуется ¹H-ЯМР спектром, имеющим характеристические пики, выраженные в м.д.: 15,2, 8,3, 7,6, 7,5, 7,4, 7,2, 6,8, 3,8, 2,7, 1,6. Спектр показан на Фиг. 4.

Фиг. 4: ¹H-ЯМР спектр Полиморфа A Ca-видофлудимуса

8. Белый кристаллический полиморф A Ca соли соединения в соответствии с формулой I или ее сольвата и/или гидрата в соответствии с любым из вариантов осуществления 1-8, который представляет собой гидрат с молярным отношением соединения в соответствии с формулой I к воде около 1:1.

9. Фармацевтическая композиция, включающая белый кристаллический полиморф A Ca соли соединения в соответствии с формулой I или ее сольвата и/или гидрата в соответствии с любым из вариантов осуществления 1-8.

10. Фармацевтическая композиция в соответствии с вариантом осуществления 1, имеющая содержание THF менее чем 720 ч/млн.

11. Белый кристаллический полиморф A Ca соли соединения в соответствии с формулой I или ее сольвата и/или гидрата в соответствии с любым из вариантов осуществления 1-8 или фармацевтическая композиция в соответствии с вариантом осуществления 9 или 10 для применения в качестве лекарственного средства.

12. Белый кристаллический полиморф A Ca соли соединения в соответствии с формулой I или ее сольвата и/или гидрата в соответствии с любым из вариантов осуществления 1-8 или фармацевтическая композиция в соответствии с вариантом осуществления 9 или 10 для применения в лечении заболевания, выбранного из группы, включающей ревматизм, острые иммунологические нарушения, аутоиммунные заболевания, заболевания, вызванные пролиферацией злокачественных клеток, воспалительные заболевания, заболевания, которые вызваны протозойными инвазиями у человека и животных, заболевания, которые вызваны вирусными инфекциями и Pneumocystis carinii, фиброз, увеит, ринит, астму или артропатию.

13. Белый кристаллический полиморф A Ca соли соединения в соответствии с формулой I или ее сольвата и/или гидрата в соответствии с любым из вариантов осуществления 1-8 или фармацевтическая композиция в соответствии с вариантом осуществления 9 или 10 для применения в лечении заболевания, где заболевание или терапевтическое показание выбрано из группы, включающей реакции трансплантат против хозяина и хозяин против трансплантата, ревматоидный артрит, рассеянный склероз, амиотрофический боковой склероз, красную волчанку, воспалительное заболевание кишечника и псориаз.

14. Способ получения белого кристаллического полиморфа A Ca соли соединения в соответствии с формулой I или ее сольвата и/или гидрата, определенного в любом из вариантов осуществления 1-8, который включает следующие стадии

• Обеспечение Ca-Видофлудимуса или его сольвата и/или гидрата, предпочтительно кристаллического полиморфа Ca соли видофлудимуса или ее сольвата и/или гидрата,

• промывка кальциевой соли Кальций-видофлудимуса или ее сольвата и/или гидрата апротонным органическим растворителем, предпочтительно выбранным из группы, включающей DMF, DMSO, NMP, THF, Ацетон, Диоксан, 2-Метил-THF или (Метанол/CH2Cl2 (1:3)), предпочтительно ацетоном, и

15. Способ получения белого кристаллического полиморфа A Ca соли соединения в соответствии с формулой I или ее сольвата и/или гидрата, определенного в любом из вариантов осуществления 1-8, который включает следующие стадии

a) добавление к смеси гидроксида кальция и свободной кислоты соединения в соответствии с формулой I или его сольвата и/или гидрата органического растворителя и воды

b) перемешивание суспензии, полученной на стадии a), до получения раствора,

c) по меньшей мере частичное выпаривание указанного органического растворителя и воды с получением суспензии кальциевой соли соединения в соответствии с формулой I или ее сольвата и/или гидрата

d) добавление апротонного органического растворителя, полностью смешиваемого с водой, к указанной суспензии кальциевой соли соединения в соответствии с формулой I или ее сольвата и/или гидрата, полученной на стадии c),

e) перемешивание суспензии, полученной на стадии d),

f) выделение кальциевой соли соединения в соответствии с формулой I или ее сольвата и/или гидрата из смеси, полученной на стадии e), и

g) промывка кальциевой соли соединения в соответствии с формулой I или ее сольвата и/или гидрата, полученного на стадии f), апротонным органическим растворителем, указанным на стадии d).

h) суспендирование выделенной кальциевой соли соединения в соответствии с формулой I или ее сольвата и/или гидрата, полученного на стадии g), в спиртовом растворителе при 15-80°C.

i) добавление воды к суспензии, полученной на стадии h), при 15-85°C

j) выделение кальциевой соли соединения в соответствии с формулой I или ее сольвата и/или гидрата из смеси, полученной на стадии e), и

k) промывка кальциевой соли соединения в соответствии с формулой I или ее сольвата и/или гидрата, полученного на стадии j), апротонным органическим растворителем, указанным на стадии d).

16. Способ получения кристаллического полиморфа в соответствии с вариантом осуществления 14 или 15, где после стадии g) и стадии k) добавляют стадию сушки, и после этого, необязательно, добавляют стадию измельчения, а после этого, необязательно, добавляют стадию перекристаллизации.

17. Способ получения кристаллического полиморфа в соответствии с любым из вариантов осуществления 14-16, где после стадии b) и перед стадией c) раствор фильтруют и затем фильтр промывают указанным органическим растворителем.

18. Способ получения кристаллического полиморфа в соответствии с любым из вариантов осуществления 14-17, где суспензию стадии a) нагревают до 25-30°C.

19. Способ получения кристаллического полиморфа в соответствии с любым из вариантов осуществления 14-18, где суспензию стадии e) нагревают до 15-25°C.

20. Способ получения кристаллического полиморфа в соответствии с любым из вариантов осуществления 14-19, где указанный органический растворитель выбран из группы, включающей THF, 2-Метил-THF, Диоксан.

21. Способ получения кристаллического полиморфа в соответствии с любым из вариантов осуществления 14-20, где указанный апротонный органический растворитель выбран из группы, включающей DMF, DMSO, NMP, THF, Ацетон, Диоксан, 2-Метил-THF или (Метанол/CH2Cl2 (1:3)).

22. Белый кристаллический полиморф A Ca соли соединения в соответствии с формулой I или ее сольвата и/или гидрата с молярным отношением соединения в соответствии с формулой I к кальцию, равным 2±0,3, получаемый способом в соответствии с любым из вариантов осуществления 14-21.

Описание чертежей

Фиг. 1: PXRD Полиморфа A Ca-видофлудимуса

Фиг. 3a: ИК-спектр Полиморфа A Ca-видофлудимуса, полная область.

Фиг. 3b: ИК-спектр Полиморфа A Ca-видофлудимуса, характеристическая область.

Фиг. 4: ¹H-ЯМР спектр Полиморфа A Ca-видофлудимуса.

Фиг. 5: PXRD Полиморфа C Ca соли соединения в соответствии с формулой I.

Фиг. 6 PXRD Полиморфа B Ca соли соединения в соответствии с формулой I.

Примеры

Пример 1

Соединения формулы (I) можно получить различными способами, включая способ, описанный в JP-A-50-121428. В частности, используют два следующих способа синтеза.

Способ 1: на первой стадии циклоалкен-1,2-дикарбоновые кислоты можно получить из соответствующих α,α’-дибром алкандикарбоновых кислот, как описано R.N. Mc Donald and R.R. Reitz, J. Org. Chem. 37, (1972) 2418-2422. Циклопентен-1,2-дикарбоновую кислоту также можно получить в больших количествах из пимелиновой кислоты [D.C. Owsley und J.J. Bloomfield, Org. Prep. Proc. Int. 3, (1971) 61-70; R. Willstätter, J. Chem. Soc. (1926), 655-663].

Дикарбоновые кислоты, замещенные в или на кольцевой системе, как правило, можно синтезировать путем циангидринового синтеза [Shwu-Jiüan Lee et. al., Bull. Inst. Chem. Academia Sinica Number 40, (1993), 1-10 или B. R. Baker et al., J. Org. Chem. 13, 1948, 123-133; и B. R. Baker et al., J. Org. Chem. 12, 1947, 328-332; L. A. Paquette et. al., J. Am. Chem. Soc. 97, (1975), 6124-6134].

Дикарбоновые кислоты затем можно преобразовать в соответствующие ангидриды кислот путем их взаимодействия с ангидридом уксусной кислоты [P. Singh and S.M. Weinreb, Tetrahedron 32, (1976), 2379-2380].

Другие способы для получения других ангидридов кислот формулы (II) описаны в V. A. Montero et al., J. Org. Chem. 54, (1989), 3664-3667; P. ten Haken, J. Heterocycl. Chem. 7, (1970), 1211-1213; K. Alder, H. Holzrichter, J. Lieb. Annalen d. Chem. 524, (1936), 145-180; K. Alder, E. Windemuth, J. Lieb. Annalen d. Chem. 543, (1940), 56-78; и W. Flaig, J. Lieb. Annalen d. Chem. 568, (1950), 1-33.

Затем можно осуществить взаимодействие этих ангидридов с соответствующими аминами для получения желаемых амидов формулы (I). Эту реакцию можно осуществить либо с использованием реакционных условий, описанных в J.V. de Julian Ortiz et al., J. Med. Chem. 42, (1999), 3308 (указанный путь A в Примере 1), либо с использованием 4-диметиламинопиридина (указанный путь B в Примере 1).

Способ 2: Амиды формулы (I) также можно синтезировать путем взаимодействия амина формулы (IV) с арилбороновой кислотой общей формулы (V) [M. P. Winters, Tetrahedron Lett., 39, (1998), 2933-2936].

Биариланилин, как правило, можно синтезировать с использованием реакции сочетания с использованием палладия [G. W. Kabalka et al., Chem.Commun., (2001), 775; A. Demeter, Tetrahedron Lett. 38; (1997), 5219-5222; V. Snieckus, Chem.Commun. 22, (1999), 2259-2260].

Способ 3: Амиды формулы (I) также можно синтезировать путем взаимодействия галогенового производного формулы (VI) с арилбороновой кислотой общей формулы (VII) [N. E. Leadbeater, S. M. Resouly, Tetrahedron, 55, 1999, 11889-11894].

Пример 2

Экспериментальная часть/настройка измерительных приборов

¹H-ЯМР: ¹H-ЯМР спектры регистрировали с использованием спектрометра Bruker DPX300 с частотой протонов 300,13 МГц, 30° импульсом возбуждения и временем ожидания восстановления 1 сек. Было накоплено 16 сканов, D2O; MeOD или d6-DMSO использовали в качестве растворителя.

DSC: Дифференциальную сканирующую калориметрию осуществляли на устройстве Perkin Elmer DSC-7 (закрытая золотая чаша для образцов, в атмосфере N₂). Образец нагревали до температуры плавления со скоростью 10 К/мин), затем охлаждали (скорость охлаждения 200 К/мин) и затем снова нагревали со скоростью 10 К/мин.

DVS (SMS): Surface Measurement Systems Ltd. Анализатор сорбции водяного пара DVS-1. Образец помещали на платиновую чашу для образцов и давали уравновеситься при заданной относительной влажности (r.h.), обычно 50% r.h. Затем была запущена предварительно заданная программа влажности со скоростью сканирования 5% r.h. изменения в час. Первая стадия: от 50% r.h. до 0% r.h. (в случае возможного гидрата в качестве исходного вещества от 50 до 95% r.h.), вторая стадия: от 0% до 95% r.h. (в случае использования гидрата в качестве исходного вещества от 95 до 0% r.h.).

Рамановская спектроскопия с Фурье-преобразованием. Рамановские спектры с Фурье-преобразованием регистрировали на системе Bruker RFS 100 FT-Raman с Nd:YAG лазером в ближнем инфракрасном диапазоне, работающим на длине волны 1064 нм, и германиевым детектором, охлаждаемым жидким азотом. Для каждого образца было накоплено минимум 64 сканов с разрешением 2 см^-1. Использовали номинальную мощность лазера 300 мВт. Данные Фурье-рамановской спектроскопии показаны в диапазоне от 3500 до 100 см^-1. Ниже 100 см^-1 данные недостоверны из-за отсечки фильтра Рэлея.

Оптическая микроскопия: микроскоп Leitz Orthoplan 110680, оснащенный камерой Leica DFC280 и программным обеспечением для захвата изображений IM50 v.5. Изображения получали со скрещенными поляризаторами или без них и с увеличением 4x, 10x или 25x.

Рентгеновская порошковая дифракция: Bruker D8; Медное K_a-излучение, 40 кВ/40 мА; Детектор LynxEye, размер шага 0,02 °2Θ, время шага 37 сек. Подготовка образцов: Образцы обычно измеряли без какой-либо специальной обработки, кроме приложения небольшого давления для получения плоской поверхности. Использовали держатели образцов из монокристаллов кремния (глубина 0,1, 0,5 или 1 мм). Образцы вращали во время измерения.

Рамановская микроскопия: Рамановская система Renishaw inVia Reflex. Стабилизированный диодный лазер с возбуждением 785 нм и ПЗС-камера с охлаждением Пельтье в ближнем ИК-диапазоне в качестве детектора. Измерения осуществляли с длинным фокусным расстоянием объектива 20х. Диапазон волновых чисел 2000-100 см^-1, время детекции 10 сек, три накопления на спектр.

Растворители: Для всех экспериментов использовали растворители Fluka, Merck или ABCR аналитической степени чистоты.

TG-FTIR: Термогравиметрические измерения осуществляли с использованием термомикровесов TG 209 от Netzsch, соединенных со FTIR Спектрометром Vector 22 или IFS 28 от Bruker (чашы для образцов с небольшим отверстием, атмосфера N2, скорость нагрева 10°C/мин, диапазон 25°C - 350°C).

Пример 3

Анализ ингибирования DHODH активности

Стандартная смесь для анализа содержала 50 мкм дециклоубихинона, 100 мкм дигидрооротата, 60 мкм 2,6-дихлориндофенола, а также 20 мед. DHODH. Удельная активность используемого рекомбинантного фермента составляла 30 ед./мл. измерения осуществляли в 50 мм TRISHCL (150 мм kcl, 0,1% triton x-100, ph 8,0) при 30°с в конечном объеме 1 мл. Компоненты смешивали и реакцию начинали добавлением дигидрооротата. Ход реакции отслеживали спектрофотометрически, измеряя уменьшение абсорбции при 600 нм в течение 2 мин.

Испытания на ингибирование осуществляли с использованием стандартного анализа с дополнительными меняющимися количествами ингибитора. Для определения IC₅₀ значений (концентрация ингибитора, необходимая для 50% ингибирования) применяли по меньшей мере пять разных концентраций ингибитора.

Эти исследования осуществляли с рекомбинантным человеческим, а также с рекомбинантным мышиным DHODH, предоставленным Prof. M. Löffler, Marburg, Germany [M. Löffler, Chem. Biol. Interact. 124, (2000), 61-76].

В качестве эталона использовали активный метаболит лефлуномида A77-1726 (Соединение 12) [J. Jöckel et. al. Biochemical Pharmacology 56 (1998), 1053-1060].

Результаты анализа ингибирования показаны в Таблице 1 указанной публикации Jöckel et.al. Из сравнения IC₅₀-значений очевидно, что соединения, используемые для получения солей в соответствии с настоящим изобретением, не только обладают сопоставимой или даже лучшей ингибирующей активностью в отношении человеческого фермента, чем у активного метаболита лефлуномида, но также более высокой специфичностью в отношении человеческого фермента.

Пример 4

Анализ пролиферации человеческих T-клеток

Человеческие мононуклеарные клетки периферической крови (PBMC) получали от здоровых добровольцев и переносили в клеточную культуральную среду RPMI1640 с 10% диализованной фетальной телячьей сыворотки. 80000 клеток на лунку переносили при помощи пипетки в 96-луночный планшет и добавляли фитогемагглютинин (PHA) в фосфатно-солевом буферном растворе до конечной концентрации 20 мкг/мл для стимулирования T-клеточной пролиферации. Видофлудимус добавляли в диметилсульфоксиде (DMSO, конечная концентрация: 0,1% об.) до конечных концентраций в пределах от 20 нМ до 50 мкМ. После инкубации в течение 48 часов количественно определяли клеточную пролиферацию с использованием “ELISA BrdU для клеточной пролиферации” (Roche) в соответствии с инструкциями изготовителя. Полумаксимальное ингибирование (IC₅₀) рассчитывали с использованием подгонки 4-параметрической сигмоидальной кривой. T-клеточная пролиферация ингибировалась Видофлудимусом с IC₅₀ значением, равным 4,1 мкМ.

Пример 5

Получение кальциевых солей

Синтез кальциевых солей соединений формулы (I) подробно описан в WO 2012/001148, которая включена в настоящую заявку посредством ссылки.

Кроме того, рентгеновская порошковая дифракция, показанная на Фиг. 5, показывает, что было получено кристаллическое вещество, однако с дифрактограммой, отличной от дифрактограммы свободной кислоты (см. Фиг. 6). Кристаллы наблюдали при помощи световой микроскопии (Фиг. 4), DSC (дифференциальная сканирующая калориметрия) показала температуру плавления около 155°C (указывающую плавление сольвата и несольватированной формы), TG-FTIR (термогравиметрический анализ в сочетании с инфракрасной спектрометрией с Фурье-преобразованием) показал, что возможно были образованы метанольный сольват и гидрат, а динамическая сорбция паров показала десольватацию с последующим поглощением воды 0,3% при около 85% r.h. и поглощением воды 0,4% при 95% r.h. (необратимым).

Пример 6

Синтез полиморфа A

Полиморф A видофлудимуса получают следующим образом:

a) добавление к смеси гидроксида кальция и свободной кислоты соединения в соответствии с формулой I или ее сольвата и/или гидрата органического растворителя и воды,

c) по меньшей мере частичное выпаривание указанного органического растворителя и воды с получением суспензии кальциевой соли соединения в соответствии с формулой I или ее сольвата и/или гидрата),

d) добавление ацетона, полностью смешиваемого с водой, к указанной суспензии кальциевой соли соединения в соответствии с формулой I или ее сольвата и/или гидрата, полученной на стадии c),

g) промывка кальциевой соли соединения в соответствии с формулой I или ее сольвата и/или гидрата, полученного на стадии f), растворителем, указанным на стадии d).

Пример 7

Определение биодоступности

Пероральную биодоступность кальциевой соли и свободной кислоты видофлудимуса сравнивали на самцах крыс Вистар. Свободной кислотой или кальциевой солью заполняли желатиновые капсулы, и животные получали однократное введение при дозе на уровне приблизительно 10 мг эквивалентов свободной кислоты на килограмм массы тела.

Четырех самцов крыс Wistar (диапазон массы тела: 250-275 г) на группу обрабатывали либо свободной кислотой Видофлудимуса, либо его кальциевой солью. Капсулы вводили животным в пищевод, используя специальное устройство. Образцы венозной крови брали у животных под изофлурановой анестезией в следующие моменты времени после введения: 30 мин; 1 ч; 2 ч; 4 ч; 6 ч; 8 ч; 24 ч; 28 ч; 32 ч и 48 ч. Коагуляцию ингибировали с использованием Na-гепарина, и плазму получали центрифугированием образцов крови. Образцы плазмы анализировали на Видофлудимус методом ЖХ-МС/МС, и фармакокинетические параметры рассчитывали в соответствии со смешанным логарифмическим линейным методом трапеций.

Для исследования калиевой соли шести самкам крыс Lewis (масса тела примерно 200 г) вводили либо свободную кислоту Видофлудимуса, либо его калиевую соль при дозе на уровне 30 мг/кг (эквиваленты свободной кислоты). Соединения формулировали в 0,5% растворе метилцеллюлозы в фосфато-солевом буферном растворе, и животных обрабатывали через желудочный зонд. Образцы венозной крови брали у животных под изофлурановой анестезией в следующие моменты времени после введения: 30 мин; 1 ч; 2 ч; 4 ч; 8 ч; 26 ч; 33 ч; 48 ч и 72 ч. Коагуляцию ингибировали с использованием Na-гепарина, и плазму получали центрифугированием образцов крови. Образцы плазмы анализировали на Видофлудимус методом ЖХ-МС/МС, и фармакокинетические параметры (AUC) рассчитывали в соответствии с линейным методом трапеций.

Пероральную биодоступность солей оценивали путем сравнения площадей под кривыми концентрации в плазме в зависимости от времени (AUC) и максимально достижимых концентраций Видофлудимуса в плазме (Cmax значения) после введения соли с концентрациями, наблюдаемыми после введения свободной кислоты. Отношения показаны в Таблице 2.

Таблица 2 Сравнение PK параметров после перорального введения видофлудимуса крысам
Соединение	AUC_inf/AUC_inf,свободная кислота	C_max/C_max,свободная кислота
Видофлудимус, свободная кислота	1	1
Калиевая соль	0,96	1,09
Кальциевая соль	1,72	1,67

Пример 8

Предыдущая GMP-партия лекарственного вещества кальций- видофлудимуса (IM90838; партия RL01L156A1), используемая в исследованиях фазы I, была изготовлена из промежуточного видофлудимуса (VIDO-05; SC12267) на том же предприятии, что и текущая партия, т.е. Patheon DPx Fine Chemicals Regensburg GmbH - ResCom^®, Regensburg, Germany. Используемый промежуточный видофлудимус был произведен компанией Cambrex Karlskoga AB, Karlskoga, Sweden.

Поскольку лекарственное вещество кальций-видофлудимус обычно включает растворитель тетрагидрофуран (ТГФ) на уровне прибл. от 6000 до 10000 ч/млн, последний этап производственного процесса был оптимизирован с целью снижения уровня THF:

Неочищенный кальций-видофлудимус обрабатывали этанолом, получая промежуточный этанольный сольват, который после обработки водой дает требуемый полиморф кальций-видофлудимуса в виде дигидрата. В конечном лекарственном веществе этанол сохраняется на уровне прибл. от 2000 до 6000 ч/млн, что приемлемо. Этот способ описан в разделе 2.1.S.2.2.

Результаты, полученные в предварительном лабораторном способе, приведены ниже. Партии лабораторного масштаба прибл. 20 г видофлудимуса (VIDO-5) преобразовывали в кальций-видофлудимус способом, описанным в разделе 3.2.S.2.2. Аналитические результаты приведены в Таблице 1.

Таблица 1 Аналитические результаты для лабораторных партий кальций-видофлудимуса (IM90838)
Партия №		JC3794	JC3800	JC3803
Тест	Спецификации	Аналитические результаты
Внешний вид	Белое твердое вещество	Белое твердое вещество	Белое твердое вещество	Белое твердое вещество
Идентификация ¹H-ЯМР FTIR	Соответствует эталону	Соответствует Соответствует	Соответствует Соответствует	Соответствует Соответствует
Анализ VIDO-06 (IM90838; (ВЭЖХ)	98-102%	Не определяли	100%	100,5%
Анализ кальция (Титрование)	4,9-5,9% (масс/масс)	5,2%	5,1%	5,3%
Примеси (%масс/масс)
SC12219 ¹⁾ SC44107 ²⁾	≤ 0,004% ≤ 0,15%	n.d. n.d.	n.d. n.d.	n.d. n.d.
Отдельные неизвестные примеси ³⁾	≤ 0,1%	< 0,05% (RRT 0,92)	< 0,05% (RRT 0,68) < 0,05% (RRT 0,92)	< 0,05% (RRT 0,73) < 0,05% (RRT 0,92)
Общее количество примесей	≤ 0,5%	0,040%	0,045%	0,07%
Остаточные растворители
(HS-GC) THF Ацетон Этанол	≤ 720 ч/млн ≤ 5,000 ч/млн ≤ 5,000 ч/млн	210 ч/млн n.d. 4,777 ч/млн	42 ч/млн 117 ч/млн 2,361 ч/млн	89 ч/млн 14 ч/млн 4,038 ч/млн
Общее содержание тяжелых металлов ⁴⁾		n. det. ⁴⁾	n. det. ⁴⁾	n. det. ⁴⁾
Содержание воды (KF)	≤ 5% (масс/масс)	4,6%	5,1%	4,8%
Температура плавления (DSC)	Сообщаемые данные	171,5°C	168,3°C	166,2°C
n.d.: не определяли ¹⁾ SC12219 (VIDO-03; RRT 0,77, ²⁾ SC44107: RRT 0,13, ³⁾ сообщаемые данные > 0,05%, ⁴⁾ Не определяли (n. det.), поскольку не является актуальным; общее содержание тяжелых металлов определено как ≤ 20 ч/млн в видофлудимусе, и никаких дополнительных металлических примесей не ожидается в лабораторных партиях

Можно отметить, что лабораторные партии кальций-видофлудимуса содержат THF ниже рекомендованного уровня NMT 720 ч/млн; однако содержание этанола определено до прибл. 5000 ч/млн. Никакого изменения в анализе или в уровне примесей не наблюдается.

Claims

1. Способ получения белого кристаллического полиморфа A гидрата Ca соли соединения в соответствии с формулой I

формула I

с молярным отношением указанного соединения в соответствии с формулой I к кальцию 2±0,3, который характеризуется рентгеновской порошковой дифрактограммой, имеющей характеристические пики, выраженные в градусах 2-тета, при показанных ниже значениях ±0,2:

2. Способ получения белого кристаллического полиморфа A гидрата Ca соли соединения в соответствии с формулой I

формула I

a) добавление к смеси гидроксида кальция и свободной кислоты соединения в соответствии с формулой I или его сольвата и/или гидрата органического растворителя и воды,

c) по меньшей мере частичное выпаривание указанного органического растворителя и воды с получением суспензии кальциевой соли соединения в соответствии с формулой I или ее сольвата и/или гидрата,

d) добавление апротонного органического растворителя, полностью смешиваемого с водой, к указанной суспензии кальциевой соли соединения в соответствии с формулой I или ее сольвата и/или гидрата, полученного на стадии c),

f) выделение кальциевой соли соединения в соответствии с формулой I или ее сольвата и/или гидрата из смеси, полученной на стадии e),

g) промывка кальциевой соли соединения в соответствии с формулой I или ее сольвата и/или гидрата, полученного на стадии f), апротонным органическим растворителем, указанным на стадии d),

h) суспендирование выделенной кальциевой соли соединения в соответствии с формулой I или ее сольвата и/или гидрата, полученного на стадии g), в спиртовом растворителе, выбранном из группы, включающей метанол, этанол или изопропанол, при 15-80°C,

i) добавление воды к суспензии, полученной на стадии h), при 15-85°C,

j) выделение кристаллического полиморфа A гидрата кальциевой соли соединения в соответствии с формулой I из смеси, полученной на стадии e), и

k) промывка кристаллического полиморфа A гидрата кальциевой соли соединения в соответствии с формулой I, полученного на стадии j), апротонным органическим растворителем, указанным на стадии d).

3. Способ получения кристаллического полиморфа по п. 2, где после стадии g) и стадии k) добавляют стадию сушки и затем, необязательно, добавляют стадию измельчения, а затем, необязательно, добавляют стадию перекристаллизации.

4. Способ получения кристаллического полиморфа по любому из пп. 2, 3, где после стадии b) и перед стадией c) раствор фильтруют и затем фильтр промывают указанным органическим растворителем.

5. Способ получения кристаллического полиморфа по любому из пп. 2-4, где суспензию стадии a) нагревают до 25-30°C.

6. Способ получения кристаллического полиморфа по любому из пп. 2-5, где суспензию стадии e) нагревают до 15-25°C.

7. Способ получения кристаллического полиморфа по любому из пп. 2-6, где указанный органический растворитель выбран из группы, включающей DMF, DMSO, NMP, THF, Ацетон, Диоксан, 2-Метил-THF или (Метанол/CH2Cl2 (1:3)).

8. Способ получения кристаллического полиморфа по любому из пп. 2-7, где указанный апротонный органический растворитель выбран из группы, включающей DMF, DMSO, NMP, THF, Ацетон, Диоксан, 2-Метил-THF или (Метанол/CH2Cl2 (1:3)), предпочтительно ацетон.

9. Способ получения кристаллического полиморфа по п. 1 или 2, где характеристические пики, которые выражены в градусах 2 тета при следующих значениях ±0,2, показаны ниже:

Таблица 1
Перечень пиков полиморфа A Ca соли видофлудимуса Угол
2 тета ° d
значение
Ангстрем Интенсивность 5,91 14,95 vs 6,83 12,93 vw 9,64 9,17 w 11,33 7,80 w 11,82 7,48 w 12,98 6,81 vw 13,70 6,46 vw 14,27 6,20 vw 15,04 5,89 w 15,44 5,73 vw 16,78 5,28 s 17,81 4,98 m 18,25 4,86 w 18,58 4,77 vw 19,39 4,57 w 19,81 4,48 w 20,53 4,32 vw 21,26 4,18 vw 22,63 3,93 vw 23,16 3,84 vw 23,96 3,71 w 24,73 3,60 vw 25,41 3,50 s 26,12 3,41 w 26,44 3,37 w 27,25 3,27 w 27,55 3,24 w 28,45 3,13 w 28,91 3,09 vw 29,29 3,05 w 29,89 2,99 w 30,77 2,90 w 31,22 2,86 vw 31,60 2,83 w 32,13 2,78 w 33,25 2,69 vw 33,98 2,64 w 34,48 2,60 w 35,12 2,55 vw

10. Способ получения кристаллического полиморфа по п. 1 или 2, где белый кристаллический полиморф A гидрата Ca соли соединения в соответствии с формулой I характеризуется рамановским спектром поглощения с Фурье-преобразованием, имеющим следующие характеристические пики, выраженные в см^-1: 1664, 1624, 1617, 1532, 1449, 1338.

11. Способ получения кристаллического полиморфа по пп. 1, 2 или 10, где белый кристаллический полиморф A гидрата Ca соли соединения в соответствии с формулой I характеризуется ИК-спектром поглощения, имеющим характеристические пики, выраженные в см^-1: 1980, 1659, 1584, 1335, 1145.

12. Способ получения кристаллического полиморфа по пп. 1, 2, 10 или 11, где белый кристаллический полиморф A гидрата Ca соли соединения в соответствии с формулой I характеризуется ¹H-ЯМР спектром в ДМСО, имеющим характеристические пики, выраженные в м.д.: 15,2, 8,3, 7,6, 7,5, 7,4, 7,2, 6,8, 3,8, 2,7, 1,6.

13. Способ получения кристаллического полиморфа по пп.1, 2, 10 или 12, где молярное отношение соединения в соответствии с формулой I к воде 1:1.