RU2791737C1 - Лиофилизированная композиция ингибитора РНК полимеразы для лечения инфекционного перитонита кошек, вызываемого кошачьим коронавирусом - Google Patents

Abstract

Изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для лечения инфекционного перитонита кошек (FIP), вызываемого кошачьим коронавирусом (FCoV). Предложена лиофилизированная форма композиции для приготовления раствора для подкожного введения на основе аналога нуклеозида VS-121354 и аминокислоты Таурин в качестве активных ингредиентов с применением солюбилизаторабетадексасульфобутилата натрия и агента, регулирующего pH, при следующем соотношении компонентов % мас.: аналог нуклеозида VS-121354 или его аналог 2,8-3,8, таурин 6,9-8,5, бетадексасульфобутилат натрия 84,55-93,45. Технический результат заключается в увеличении срока хранения и улучшении потребительских свойств готовой лекарственной формы, снижении выраженности болевого синдрома и местно-раздражающей реакции поле введения, увеличении терапевтической эффективности синергизмом двух действующих веществ.

Description

Изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для лечения инфекционного перитонита кошек (FIP), вызываемого кошачьим коронавирусом (FCoV). Предложена лиофилизированная форма композиции для приготовления раствора для подкожного введения на основе аналога нуклеозида аденозина VS-121354 и аминокислоты Таурин в качестве активных ингредиентов с применением солюбилизатора бетадексасульфобутилата натрия и агента, регулирующего pH, при следующем соотношении компонентов % мас.: аналог нуклеозида VS-121354, таурин, бетадексасульфобутилат натрия.

Лиофилизированные формы лекарственных препаратов имеют преимущество перед жидкими (инъекционные растворы) в первую очередь из-за большего срока хранения и возможности использования в технологии получения вспомогательных компонентов, сочетающих свойства солюбилизатора для повышения растворимости активных комопонентов и криопротектора для сохранения свойств высушиваемых агентов. Лиофилизированная форма удерживает состав композиции или продукта в стабильном состоянии за счет удаления воды до 99,5%, что останавливает процессы деградации компонентов, например, из-за процессов окисления. Уменьшенный вес и объем, а также отсутствие в большинстве случаев специальных условий хранения (например, пониженная температура) делают лиофилизированныеформы идеальными для транспортировки. В технологии получения лиофильно высушенных продуктов возможно сохранение их стерильности, что немаловажно при получении инъекционных лекарственных композиций. Существует множество фармакологически активных молекул с низкой растворимость в водных растворах, для которых получение желаемых жидких инъекционных лекарственных форм сильно затруднено, что представляет проблему при разработке состава и часто делает невозможным получение стабильной жидкой формы безопасной для введения инъекционно или с перегруженным состав, что влияет на профиль безопасности будущего препарата. Для повышения растворимости существуют разные подходы как введение в состав будущей лекарственной формы нескольких вспомогательных веществдля создания условий растворения целевого компонента, так и изменение химико-физических свойств молекул (химическая модификация лекарственного соединения, образование солей, уменьшение размера частиц, комплексообразование). Среди всех методов повышения растворимости метод образования комплексов является наиболее доступным и эффективным.[1 - 4]

Циклодекстрины как вспомогательный компонент получил широкое распространение за счет большой солюбилизирующей способности и легкости применения для получения жидких лекарственных форм, включая пероральные и парентеральные растворы. Циклодекстрины - это невосстанавливающие, кристаллические, водорастворимые и циклические олигосахариды, состоящие из мономеров глюкозы, расположенных в форме кольца, имеющего гидрофобную полость и гидрофильную внешнюю поверхность. Поверхность молекул циклодекстрина делает их водорастворимыми, но гидрофобная полость обеспечивает микроокружение для неполярных молекул соответствующего размера. Применение циклодекстринов относится к комплексообразующим методам. При создании композиции с циклодекстриновым солюбилизатором комплексы образуются путем встраивания неполярной молекулы или ее области в полость молекулы солюбилизатора. Циклодекстрины представляют собой циклические олигосахариды, содержащие 6, 7 или 8 (α-1,4)-связанных D-глюкопиранозидных звеньев (образующие α-, β- и γ-циклодекстрины соответственно). Они имеют разную растворимость в воде, в связи с чем был разработан ряд производных, в частности β-циклодекстрина, с высокой растворимостью в воде. К этим производным относится натриевая соль сульфобутилового эфира β-циклодекстрина(бетадексасульфобутила натрия). Циклодекстрины обычно имеют довольно благоприятный токсикологический профиль, особенно по сравнению с другими фармацевтическими вспомогательными веществами, такими как поверхностно-активные вещества, водорастворимые полимеры и органические растворители. Гидрофильные по своим свойствам циклодекстрины при парентеральном введении в основном выводятся из организма в неизмененном виде посредством почечной экскреции с общим плазменным клиренсом, близким к скорости клубочковой фильтрации [5 - 9].

Из уровня техники известно применение бетадексасульфобутилата натрия в качестве солюбилизатора в фармацевтической композиции, содержащей GS-441524. В источнике WO 2021240543 02.12.2021 A1 представлена трансмукозальная композиция, содержащая в варианте аналог нуклеозида в качестве действующего вещества и бетадексасульфобутилат натрия в качестве солюбилизатора. В данном источнике описываются только «трансмукозальные» формы: сублингвальные, суббукальные таблетки и т.д. При этом решение, представленное в настоящей заявке предназначено для подкожного введения. Кроме того, решение по настоящей заявке содержит два ДВ.

Заявляемое изобретение, в свою очередь, предназначено для подкожного введения и содержит два действующих вещества - аналог нуклеозида аденозина и аминокислоту таурин.

Аналог нуклеозида VS-121354 ((2R,3R,4S,5R)-2-(4-Аминопиролло[2,1-f][1,2,4]триазин-7-ил)-3,4-дигидрокси-5-(гидроксиметил)оксолан-2-карбонитрил) и его аналоги являются низкомолекуляными соединениями с прямым противовирусным эффектом в отношении РНК-содержащих вирусов. VS-121354 является аналогом 1'-цианозамещенного аденина C-нуклеозида рибозы или (2R,3R,4S,5R)-3,4-дигидрокси-5-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-2-карбонитрил, замещенный 4-аминопирроло[2,1-f] [1,2,4]триазин-7-ильной группой в положении 2. Это молекулярный предшественник фармакологически активной молекулы нуклеозидтрифосфата для построения вирусной цепи РНК. Механизм действия заключается в остановке репликации вирусной РНК, путем ингибирования РНК-зависимой-РНК полимеразы. Это соединение активно исследуется и показало эффективность в отношении вирусов семейства Coronaviridae и, в частности, в отношении мутированной формы коронавируса кошек (FCoV), вызывающего в настоящее время практически неизлечимое заболевание инфекционный перитонит кошек (FIP). Механизм действия аналога нуклеозида VS-121354 реализуется исключительно внутриклеточно, однако обладает низкой биодоступностью и практически не растворимо в воде, что затрудняет получение лекарственных композиций, обеспечивающих достаточно терапевтическую концентрацию вещества в организме. В России и других странах не существует лицензированных лекарственных композиций, содержащих аналог нуклеозида VS-121354 и его аналоги/производные для лечения инфекционного перитонита кошек. Среди нелицензированных препаратов, эффективность и безопасность которых не может быть адекватно оценена из-за отсутствия централизованных исследований и адекватного сбора данных о клиническом применении, большую часть составляют растворы для инъекций с вариативным содержанием действующего компонента и более чем одного вспомогательного веществ, среди которых этанол, пропиленгликоль, ПЭГ и регулирующие pH агенты (чаще всего до значения pH1,5 - 1,8). Данные компоненты позволяют раствору быть стабильным в течение нескольких месяцев, однако некоторые эти вспомогательные вещества также ответственны за нежелательные реакции в местах введения (боль, абсцессы, язвы). Не смотря на жидкую форму этих композиций и возможность транспортировки и хранения в нормальных условиях, данные об их стабильности и активной концентрации не имеют достаточного подтверждения. Срок годности таких растворов составляет не более 12 месяцев. Из-за отсутствия крупных исследований эффективности и безопасности таких препаратов терапия инфекционного перитонита кошек в настоящее время не имеет утвержденной схемы лечения, а низкая доступность существующих композиций часто приводит к тому, что во время курса терапии животное вынуждено получать разные формы раствора. Все это приводит к необходимости создания лекарственной композиции с доказанной эффективностью и безопасностью, и адекватным профилем стабильности. [10 - 13].

Предшествующим данному изобретению является изобретение, представленное в патенте RU 2780097, описывающим противовирусную эффективность в отношении коронавируса кошек при разных формах проявления заболевания композиции (2R,3R,4S,5R)-2-(4-Аминопиролло[2,1-f][1,2,4]триазин-7-ил)-3,4-дигидрокси-5-(гидроксиметил)оксолан-2-карбонитрил (VS-121354) и таурина отдельно и в комбинации со вспомогательными компонентами в виде парентеральных и пероральных растворов и таблеток. Показано использование двух выбранных компонентов лекарственной композиции VS-121354 и таурина, отражающейся на повышении противовирусной активности, но без конечной готовой формы для применения. Одним из симптомов инфекционного перитонита кошек является почти полная потеря аппетита у животного. Таким образом, парентеральная лекарственная форма на ранней стадии терапии инфекционного перитонита будет предпочтительнее к применению.

Задачей настоящего изобретения является нахождение оптимального состава и способа получения лиофилизированной формы противовирусной фармацевтической композиции в удобной потребительской форме со сроком хранения без специальных условий не менее 2 лет, содержащей аналог нуклеозида VS-121354 и таурин в терапевтических концентрациях.

Технический результат заключается в получении лиофилизированной формы противовирусной композиции, содержащей аналог нуклеозида VS-121354 и таурин в терапевтических концентрациях, в удобной потребительской форме и со сроком хранения без специальных условий не менее 2 лет и низкой выраженности болевого синдрома и местно-раздражающей реакции поcле введения. Также технический результат заключается в увеличение срока хранения и улучшение потребительских свойств готовой лекарственной формы, снижении выраженности болевого синдрома и местно-раздражающей реакции поле введения, увеличении терапевтической эффективности синергизмом двух действующих веществ.

Разработан состав для получения лекарственного препарата в лиофилизированной форме, содержащей противовирусный агент прямого действия и аминокислоту, со следующим содержанием компонентов:

Действующие вещества:

аналог нуклеозида VS-121354 0,08 г

Таурин 0,18 г

Вспомогательные вещества:

Бетадексасульфобутилат натрия 2,16 г

Хлористоводородной кислоты 10М раствор q.s.

Вода очищенная, которая обеспечивает содержание VS-121354 не менее 16 мг/мл и таурина 36 мг/мл, q.s.

Описываемое в данной работе изобретение имеет удобную потребительскую форму, получаемую по воспроизводимой и масштабируемой технологии, что позволяет говорить о получении реализуемого ветеринарного лекарственного препарата. Согласно изобретению, предложенная лекарственная композиция представляет собой лиофильно высушенный порошок для получения раствора для подкожного введения, который при восстановлении нейтральным растворителем (вода для инъекций) образует прозрачный гомогенный раствор, дозируемый при введении по весу животного по концентрации действующих компонентов, что позволяет использовать одну единицу препарата для более чем одного введения. Получаемый восстановленный раствор полностью сохраняет соотношение компонентов и содержание действующих веществ VS-121354 и таурина в терапевтической концентрации. Создание композиции, согласно настоящему изобретению, позволило достигнуть технический результат, заключающийся в увеличение срока хранения и улучшение потребительских свойств готовой лекарственной формы, снижении выраженности болевого синдрома и местно-раздражающей реакции поле введения, увеличении терапевтической эффективностисинергизмом двух действующих веществ.

Способ получения композиции и методы ее контроля могут быть продемонстрированы на следующих примерах.

Пример 1. Получение лиофилизированной композиции

Для получения первичного раствора сначала растворяли таурин в воде очищенной с температурой 50°C и объеме не более 30% от конечного необходимого объема. Полученный раствор таурина использовали для растворения бетадексасульфобутилата натрия в соотношении 12:1 к таурину в гомогенизаторе или при помощи высокооборотной мешалки с порционным добавлением воды и поддержанием постоянной температуры для повышения скорости растворения бетадексасульфобутилата натрия до получения полностью гомогенного раствора. Получаемый общий объем смеси после полного растворения бетадексасульфобутилата натрия не должен был превышать 80% от конечного необходимого объема. В полученный раствор добавляли VS-121354 в соотношении 1:27 к бетадексусульфобутилату натрия и перемешивали до получения гомогенной суспензии при тех же условиях. Для активации комплексообразования к раствору добавляли 10М раствор хлористоводородной кислоты до установления значения pHв диапазоне 1,8 - 2,0. Полученный раствор доводили до необходимого конечного объема водой очищенной, контролировали значение pHи визуально прозрачность раствора. При данной технологической последовательности и соотношении компонентов состава успешно происходил процесс растворения VS-121354 путем комплексообразования и раствор был полностью прозрачным. Далее раствор фильтровали через стерилизующий фильтр 0,22 мкм и получали вторичный раствор. Контролировали значение pH и количественно содержание VS-121354 и Таурина методом ВЭЖХ.

Полученный вторичный раствор разливали в стеклянные флаконы для лиофилизации и помешали в вакуумно-сушильный аппарат для удаления воды. Каждый флакон представлял собой одну единицу готовой лекарственной формы с терапевтическим содержанием компонентов. После лиофилизации флаконы асептически укупоривали.

Альтернативным способом является розлив вторичного раствора в поддоны из нержавеющей стали, с последующим удалением воды в вакуумно-сушильном аппарате. Полученная лиофильно-высушенная масса затем подвергалась измельчению в шаровой мельнице и просеиванию через стандартизующее сито. Полученный порошок представлял собой альтернативную форму лиофильно-высушенной композиции для перорального применения.

Содержимое флакона разводили до конечного объема 5 мл. Было установлено, что при подобранных условиях лиофильного высушивания порции раствора в5 мл для получения восстановленного раствора того же объема требуется не менее 4 мл растворителя (вода для инъекции). Получаемые лиофилизированные формы и восстановленные растворы были охарактеризованы методами контроля качества согласно ГФ и проверены на стабильность.

Основные характеристики полученной указанным способом композиции представлены в таблице 1.

Таблица 1 Основные характеристикикомпозиции, полученной указанным способом
Параметр Форма	Описание	Вода остаточная	Растворимость	pH	Содержание VS-121354	Содержание таурина
Лиофилизированная композиция	Лиофилизированный порошок белого цвета	3,5%	Растворение в течение 10 мин	1,85	79 мг	177 мг
Восстановленный раствор	Прозрачный гомогенный раствор	-	-	2,0	78,5 мг	175 мг

Пример 2. Стабильность разработанной готовой лекарственной формы

Флаконы с лиофильно высушенным препаратом помещали в камеру с контролируемой температурой и влажностью для проведения оценки стабильности методом ускоренного старения. Для лиофилизированной композиции была выбрана температура хранения 40°C(влажность 65-75%)в течение 6 месяцев, что отражало хранение в течение 2 лет при комнатной температуре. Флаконы извлекали в контрольных точках, получали восстановленный раствор и анализировали. В образцах оценивалипараметры, определяющие стабильность, таких каквнешний вид, содержание действующих веществ, содержание воды, pH, примеси.Лиофилизированная композиция показала стабильность в течение 2 лет по результатам оценки методом ускоренного старения.

В таблице 2 представлены основные данные, на основании которых сделаны выводы о стабильности лиофилизированной композиции

Таблица 2 Показатели стабильности лиофилизированной композиции
Время Параметр	День 0	3 месяца	6 месяцев
Внешний вид	Белый порошок в форме таблетки	Белый порошок в форме таблетки	Белый порошок в форме таблетки
Содержание аналога нуклеозида VS-121354	80,2 мг	79,5 мг	79,3 мг
Содержание таурина	180 мг	178,4 мг	179 мг
Примеси	≤ 0,01%	≤ 0,01%	≤0,3%
Содержание воды	3,5%	3,0%	3,3%
pH	1,9	1,95	2,0

Восстановленный раствор был проверен на стабильность при двух температурных режимах: от +2 до +8°Cи при комнатной температуре (не выше +25°C). Восстановленный раствор показал стабильность 14 дней при хранении в условиях от +2 до +8°C и 7 дней при хранении в условиях не выше +25°C. Лимитирующим параметром являлось образование осадка в растворе. Данные результаты подтвердили возможность применения одной единицы лиофилизированной композиции в качестве ветеринарного лекарственного препарата в течение не менее 2 дней с момента приготовления раствора для подкожного введения.

В таблице 3 представленные основные данные, на основании которых сделаны выводы о стабильности восстановленного из лифоилизированной формы раствора

Таблиц 3 Показатели стабильности восстановленного из лифоилизированной формы раствора
Время Параметр	День 0	День 7	День 14
Восстановленный раствор (от +2 до +8°C)
Внешний вид	Прозрачный бесцветный раствор	Прозрачный бесцветный раствор	Прозрачный бесцветный раствор
Содержание аналога нуклеозида VS-121354	80,1 мг	80 мг	80,1 мг
Содержание таурина	179 мг	178,9 мг	178,7 мг
pH	1,89	2,0	2,0
Восстановленный раствор (не выше +25°C)
Внешний вид	Прозрачный бесцветный раствор	Прозрачный бесцветный раствор	Прозрачный бесцветный раствор с признаками образования осадка
Содержание аналога нуклеозида VS-121354	79,5 мг	79,8 мг	81 мг
Содержание таурина	181 мг	177 мг	173 мг
pH	1,9	2,0	2,1

Пример 3. Оценка острой токсичности лиофилизированной композиции

Острую токсичность оценивали на лабораторных животных (крысах, самцы и самки) при подкожном (целевом) способе введения. Для определения острой токсичности использовали двухэтапный метод, где первый этап (ориентировочный) заключался в установлении ориентировочной полулетальной дозы (на основе метода Дейхмана и Ле Бланка), второй этап (основной) - статистически достоверном определении ЛД50. В ориентировочном опыте крысам вводили подкожно от 2,8 до 18,6 мл восстановленного раствора одно-двукратно, в течение суток с интервалами 3 часа, что, при пересчете на среднюю живую массу и с учетом концентрации действующих веществ, составляло 1500 - 2200 - 3300 - 5000 (мг/кг). Контрольной группе животных вводили растворитель (воду для инъекций). Дозировки в 5000, 3300 и 2200 мг/кг, введенные подкожно, оказали токсическое действие и привели к гибели лабораторных животных. Основываясь на принципах метода Дейхмана и Ле Бланка, за ЛД50 можно принять минимальную дозу, вызвавшую летальный исход - доза в 2200 мг/кг живой массы, как у самок, так и у самцов. С учетом данных ориентировочного этапа была определена шкала доз основного этапа:1000 - 1500 - 2200 - 3300 - 5000 мг/кг живой массы. Была установлена ЛД50 лиофилизированной композиции при его подкожном введении, которая составила в среднем 1591,82 мг/кг живой массы, что в 27 раз превышает максимальную терапевтическую дозу для целевых животных.

Пример 4. Оценка место-раздражающего действия на здоровых целевых животных

Оценку болевого синдрома и нежелательного местно-раздражающего действия проводили на 7 клинически здоровых целевых животных (кошках) возрастом от 1 года до 3 лет, самцы и самки, которым в течение 14 дней вводили максимальную терапевтическую дозу 18 мг/кг (по аналога нуклеозида VS-121354) с интервалом не более 24 часов между введениями. Животные находились в одинаковых условиях при постоянном наблюдении специалиста или ветеринарного врача, получали одинаковый уход и питание. Допускалось введение рассчитанного вводимого объема на основании массы тела животного в 2 точки в области холки, вместо одной, если вводимый объем превышал 10 мл. После инъекции и перед следующим введением проводили осмотр места введения: наличие припухлости, ее размеры, признаки болезненности, местной гипертермии, местной воспалительной реакции и других возможных нежелательных явлений. Препарат готовили путем восстановления лиофильно высушенного порошка до раствора растворителем (вода для инъекции). Перед инъекцией препарат нагревали приблизительно до 37°C для облегчения введения.

В таблице 4 представлены данные регистрации нежелательных явлений в эксперименте переносимости лиофилизированной композиции

Таблица 4 Показатели переносимости лиофилизированной композиции

День Признак

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

13

14

Соотношение животных (есть признак/всего)

Припухлость*

7/7

7/7

7/7

7/7

7/7

7/7

7/7

7/7

7/7

7/7

7/7

7/7

7/7

7/7

Признаки болезненности

3/7

4/7

3/7

5/7

4/7

3/7

3/7

2/7

3/7

2/7

2/7

3/7

2/7

2/7

Признаки местной гипертермии

2/7

0/7

0/7

0/7

0/7

0/7

1/7

0/7

0/7

0/7

1/7

0/7

0/7

0/7

Признаки местной воспалительной реакции

0/7

0/7

0/7

0/7

0/7

0/7

1/7

0/7

0/7

0/7

1/7

0/7

0/7

0/7

Другое (образование эрозии, кровотечение, отек и др.)

0/7

0/7

0/7

0/7

0/7

0/7

0/7

0/7

0/7

0/7

0/7

0/7

0/7

0/7

* данный признак являлся временным явлением после введения у всех животных, был вызван умеренной вязкостью вводимого восстановленного раствора, его признаки исчезали в течение 12-18 часов после инъекции; у 2 животных наблюдался увеличенный интервал (более 24 часов) сохранения припухлости в месте введения

Было установлено, что животные нормально переносят введение восстановленного из лифоилизата раствора. Все реакции при введении были ожидаемы и в пределах допустимых отклонений. У менее, чем 30% животных в опыте наблюдались нежелательные признаки в метах введения после инъекции такие, как сохранение припухлости более 18 часов после инъекции и признаки её болезненности. Нежелательных явлений в виде абсцессов и возникновения эрозии в местах инъекций не зафиксировано. В течение всего наблюдения животные сохраняли нормальные активность, аппетит, нормальный стул и мочеиспускание. Известно, что при терапии инфекционного перитонита кошек нелицензированными препаратами, содержащими GS-441524, чаще всего возникают нежелательные местные реакции в виде абсцессов и изъязвлений области введения, а введение очень болезненное для животного [12]. В представленном примере ни у одного животного не возникло подобных реакций.

Пример 5. Оценка противовирусного действия композиции на животных с подтвержденным диагнозом инфекционный перитонит кошек (FIP)

Противовирусное действие, направленное на вирус инфекционного перитонита кошек (FCoV),было оценено на 6 котах и кошках весом не менее 0,5 кг и возрастом не менее 0,5 летлет и не более 5 лет с подтвержденным диагнозомFIP. Диагноз подтверждали при помощи ПЦР тестирования и/или цитологии, общего анализа крови и неинвазивного метода диагностики (УЗИ, осмотр). Отбор животных на исследование проходил последовательно, по мере поступления подходящего пациента к ветеринарному специалисту по инфекционным заболеваниям. В исследование включали только первичных пациентов, для которых лечение по данному диагнозу было впервые и еще не назначалось никакой противовирусной или иной терапии, кроме поддерживающей. После получения подтверждения диагноза от ветеринарного специалиста и получения данных общелабораторных исследований проводилась первая инъекция предложенной композиции. Доза для каждого отобранного животного (мг/кг) была рассчитана ветеринарным специалистоминдивидуально для каждого пациента на основании течения заболевания (Таблица 5).

Таблица 5 Рассчитанные дозы
№ животного	Возраст, пол (m/f)	Диагностика FIP	Форма FIP	Доза композиции мг/кг
1	5 мес., m	ПЦР RTасцитной жидкости	«Сухая» форма	10
2	7 мес., f	ПЦР RTасцитной жидкости	«Сухая» форма	12
3	1,5 г, m	Цитология выпота, АТ к FIPв крови	Экссудативная форма	12
4	6 мес., f	ПЦР RTасцитной жидкости	«Сухая» форма	10
5	3 г, m	Цитология выпота, ПЦР RTасцитной жидкости	Экссудативная форма	14
6	1 г, m	Цитология выпота, ПЦР RTасцитной жидкости	Экссудативная форма	13

В процессе лечения композицию в виде лиофильно высушенного порошкарастворяли водой для инъекций, нагревали до температуры тела животного или до 36⁰C, после чего отбиралась в шприц и вводилась подкожно в область холки животного с чередованием места введения. Животные получали препарат ежедневно с интервалом не менее 12 и не более 24 часов, длительность введения составляла 84 дня. В течение всего исследования животные проходили периодический осмотр и общеклиническое обследование и диагностику на нагрузку организма вирусом инфекционного перитонита кошек, особое внимание уделяли местно-раздражающему воздействию композиции. В таблице 6 представлены суммарные данные по результатам исследования предложенной противовирусной композиции на животных с подтвержденным диагнозом инфекционный перитонит кошек (FIP). Показано, что изменение клинической картины в сторону улучшения наступает к 20 дню терапии и далее ведет к выздоровлению. Было установлено, что при предложенной схеме применения лиофилизированной фармацевтической композиции наступает полное выздоровление животных, что отражено в виде отсутствия вируса инфекционного перитонита кошек в организме животных и клинической картине, характеризующей животных как здоровых. На повторном осмотре через 14-30 ней после завершения лечения животных предложенной композицией ни у одного пациента не было выявлено нежелательных признаков после отмены препарата и признаков рецидива заболевания, в отличие известных клинических случаев применения препаратов, содержащих GS-441524.

Таблица 6 Суммарные данные по итогу оценки противовирусного действия композиции на животных с подтвержденным диагнозом инфекционный перитонит кошек (FIP)
№ животного	1	2	3	4	5	6
Признак	День 0
Динамика по клиническому и биохимическому анализу крови (положительная/отрицательная)	-	-	-	-	-	-
Диагностика FIP(ПЦР выпота или кровь)	+	+	+	+	+	+
Местно-раздражающее действие (переносимость) (1-5 бал.*)	4	4	4	4	4	4
	День 7
Динамика по клиническому и биохимическому анализу крови (положительная/отрицательная)	-	-	-	-	-	-
Диагностика FIP(ПЦР выпота или кровь)	+	+	+	+	+	+
Местно-раздражающее действие (переносимость) (1-5 бал.*)	4	4	4	4	3	4
	День 20
Динамика по клиническому и биохимическому анализу крови (положительная/отрицательная)	-	-	-	-	+	+
Диагностика FIP(ПЦР выпота или кровь)	+	+	+	+	+	+
Местно-раздражающее действие (переносимость) (1-5 бал.*)	4	4	4	3	3	3
	День 40
Динамика по клиническому и биохимическому анализу крови (положительная/отрицательная)	-	+	+	-	+	+
Диагностика FIP(ПЦР выпота или кровь)	+	-	+	+	-	-
Местно-раздражающее действие (переносимость) (1-5 бал.*)	3	2	3	3	3	3
	День 60
Динамика по клиническому и биохимическому анализу крови (положительная/отрицательная)	+	+	+	+	+	+
Диагностика FIP(ПЦР выпота или кровь)	+	-	-	+	-	-
Местно-раздражающее действие (переносимость) (1-5 бал.*)	3	2	3	3	2	3
	День 84
Динамика по клиническому и биохимическому анализу крови (положительная/отрицательная)	+	+	+	+	+	+
Диагностика FIP(ПЦР выпота или кровь)	-	-	-	-	-	-
Местно-раздражающее действие (переносимость) (1-5 бал.*)	3	3	2	2	2	2
Общее клиническое состояние животного (здоров/не здоров)	Здоров	Здоров	Здоров	Здоров	Здоров	Здоров
* по шкале от 1 до 5 баллов, где 1 - очень хорошая переносимость, отсутствие болевого эффекта, 5 - очень плохая переносимость, сильный болевой эффект

Описанное изобретение лиофилизированная композиция ингибитора РНК полимеразы для лечения инфекционного перитонита кошек обладает простым составом и воспроизводимой технологией производства. Предложенная композиция является оригинальной на ветеринарном рынке. Ее внедрение в ветеринарную практику значительно повысит эффективность терапии инфекционного перитонита кошек и повысит выживаемость кошек с данным диагнозом.

Реализация композиции на ветеринарном фармацевтическом рынке предложена в виде комплекта из двух флаконов, состоящего из флакона с лиофилизатом для приготовления раствора для подкожно введения и флакона с растворителем в необходимом объеме, что обеспечивает удобное приготовление.

1. KhairnarS. etal. A Review on Freeze Drying Process of Pharmaceuticals //International Journal of Research in Pharmacy & Science. - 2014. - Т. 4. - №. 1.

2. Bhalani D. V. et al. Bioavailability Enhancement Techniques for Poorly Aqueous Soluble Drugs and Therapeutics //Biomedicines. - 2022. - Т. 10. - №. 9. - С. 2055.

3. Trivedi J. S., Yue Z. Solubilization using cosolvent approach //Water-insoluble drug formulation. - CRC Press, 2018. - С. 177-209.

4. Mantri R. V. et al. Solubility of pharmaceutical solids //Developing Solid Oral Dosage Forms. - Academic Press, 2017. - С. 3-22.

5. Savjani K. T., Gajjar A. K., Savjani J. K. Drug solubility: importance and enhancement techniques //International Scholarly Research Notices. - 2012. - Т. 2012.

6. Loftsson T., Brewster M. E. Cyclodextrins as functional excipients: methods to enhance complexation efficiency //Journal of pharmaceutical sciences. - 2012. - Т. 101. - №. 9. - С. 3019-3032.

7. Kurkov S. V., Loftsson T. Cyclodextrins //International journal of pharmaceutics. - 2013. - Т. 453. - №. 1. - С. 167-180.

8. Savjani K. T., Gajjar A. K., Savjani J. K. Drug solubility: importance and enhancement techniques //International Scholarly Research Notices. - 2012. - Т. 2012.

9. Loftsson T., Brewster M. E. Cyclodextrins as functional excipients: methods to enhance complexation efficiency //Journal of pharmaceutical sciences. - 2012. - Т. 101. - №. 9. - С. 3019-3032.

10. Pedersen N. C. et al. Efficacy and safety of the nucleoside analog GS-441524 for treatment of cats with naturally occurring feline infectious peritonitis //Journal of feline medicine and surgery. - 2019. - Т. 21. - №. 4. - С. 271-281.

11. Murphy B. G. et al. The nucleoside analog GS-441524 strongly inhibits feline infectious peritonitis (FIP) virus in tissue culture and experimental cat infection studies //Veterinary microbiology. - 2018. - Т. 219. - С. 226-233.

12. Jones S. et al. Unlicensed GS-441524-like antiviral therapy can be effective for at-home treatment of feline infectious peritonitis //Animals. - 2021. - Т. 11. - №. 8. - С. 2257.

13. Izes A. M. et al. Current status on treatment options for feline infectious peritonitis and SARS-CoV-2 positive cats //Veterinary Quarterly. - 2020. - Т. 40. - №. 1. - С. 322-330.

Claims (7)

1. Ветеринарная фармацевтическая композиция для лечения инфекционного перитонита кошек (FIP), представляющая собой лиофильно высушенный порошок для получения раствора для подкожного введения, полученный из следующего состава:

аналог нуклеозида VS-121354 0,08 г;

таурин 0,18 г;

бетадексасульфобутилат натрия 2,16 г;

агент, регулирующий pH, в количестве, обеспечивающем pH состава 1.85-2;

вода очищенная в количестве, обеспечивающем содержание VS-121354 не менее 16 мг/мл и таурина 36 мг/мл.

2. Ветеринарная фармацевтическая композиция по п.1, отличающаяся тем, что в качестве агента, регулирующего pH, используется хлористоводородной кислоты 10М раствор.