RU2784803C1 - Тестикулярная вакцина как противоопухолевое профилактическое средство - Google Patents
Тестикулярная вакцина как противоопухолевое профилактическое средство Download PDFInfo
- Publication number
- RU2784803C1 RU2784803C1 RU2021139879A RU2021139879A RU2784803C1 RU 2784803 C1 RU2784803 C1 RU 2784803C1 RU 2021139879 A RU2021139879 A RU 2021139879A RU 2021139879 A RU2021139879 A RU 2021139879A RU 2784803 C1 RU2784803 C1 RU 2784803C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- vaccine
- testicular
- antigens
- cells
- tissue
- Prior art date
Links
- 229960005486 vaccines Drugs 0.000 title claims abstract description 64
- 230000002381 testicular Effects 0.000 title claims abstract description 32
- 230000000259 anti-tumor Effects 0.000 title claims abstract description 19
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 42
- 102000038129 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 42
- 108091007172 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 42
- 210000001519 tissues Anatomy 0.000 claims abstract description 18
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims abstract description 14
- 230000000920 spermatogeneic Effects 0.000 claims abstract description 12
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims abstract description 9
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims abstract description 7
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims abstract description 6
- 230000002435 cytoreductive Effects 0.000 claims abstract description 3
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 25
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 8
- 230000036039 immunity Effects 0.000 claims description 7
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 7
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 239000011521 glass Substances 0.000 claims description 4
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 3
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 3
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 claims description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 2
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 claims description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 abstract description 7
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 abstract description 6
- 210000001550 Testis Anatomy 0.000 abstract description 5
- 230000012010 growth Effects 0.000 abstract description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 3
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 abstract description 2
- 241000283898 Ovis Species 0.000 abstract description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 2
- 230000003211 malignant Effects 0.000 abstract description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 abstract 1
- 230000000771 oncological Effects 0.000 abstract 1
- 210000004027 cells Anatomy 0.000 description 20
- 230000004083 survival Effects 0.000 description 9
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 7
- 239000000047 product Substances 0.000 description 7
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- 206010025650 Malignant melanoma Diseases 0.000 description 4
- 201000009030 carcinoma Diseases 0.000 description 4
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 4
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 4
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 4
- 210000004881 tumor cells Anatomy 0.000 description 4
- 240000001987 Pyrus communis Species 0.000 description 3
- 230000003044 adaptive Effects 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 3
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 3
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 3
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 3
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N (3β)-Cholest-5-en-3-ol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 2
- 238000005755 formation reaction Methods 0.000 description 2
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 2
- 230000004936 stimulating Effects 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic Effects 0.000 description 2
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 230000003442 weekly Effects 0.000 description 2
- WSVLPVUVIUVCRA-RJMJUYIDSA-N (2R,3R,4S,5R,6S)-2-(hydroxymethyl)-6-[(2R,3S,4R,5R)-4,5,6-trihydroxy-2-(hydroxymethyl)oxan-3-yl]oxyoxane-3,4,5-triol;hydrate Chemical compound O.O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O WSVLPVUVIUVCRA-RJMJUYIDSA-N 0.000 description 1
- 229940064005 Antibiotic throat preparations Drugs 0.000 description 1
- 229940083879 Antibiotics FOR TREATMENT OF HEMORRHOIDS AND ANAL FISSURES FOR TOPICAL USE Drugs 0.000 description 1
- 229940042052 Antibiotics for systemic use Drugs 0.000 description 1
- 229940042786 Antitubercular Antibiotics Drugs 0.000 description 1
- 206010003816 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 102100004467 CT83 Human genes 0.000 description 1
- 101710023900 CT83 Proteins 0.000 description 1
- 102100001891 CTAG1A Human genes 0.000 description 1
- 101710004449 CTAG1A Proteins 0.000 description 1
- 229940107161 Cholesterol Drugs 0.000 description 1
- 210000000805 Cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 210000004544 DC2 Anatomy 0.000 description 1
- 229960002743 Glutamine Drugs 0.000 description 1
- 229940093922 Gynecological Antibiotics Drugs 0.000 description 1
- 210000000987 Immune System Anatomy 0.000 description 1
- 210000000936 Intestines Anatomy 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229960001021 Lactose Monohydrate Drugs 0.000 description 1
- 210000004185 Liver Anatomy 0.000 description 1
- 210000004072 Lung Anatomy 0.000 description 1
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 1
- 102100003018 MAGEA1 Human genes 0.000 description 1
- 101710027659 MAGEA1 Proteins 0.000 description 1
- 210000002264 Mammary Glands, Animal Anatomy 0.000 description 1
- 210000004293 Mammary Glands, Human Anatomy 0.000 description 1
- 102100006759 PRAME Human genes 0.000 description 1
- 108060006580 PRAME Proteins 0.000 description 1
- 210000000496 Pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 239000007759 RPMI Media 1640 Substances 0.000 description 1
- 102100004865 SSX2 Human genes 0.000 description 1
- 101700030927 SSX2 Proteins 0.000 description 1
- 210000000400 T-Lymphocytes, Cytotoxic Anatomy 0.000 description 1
- 229940024982 Topical Antifungal Antibiotics Drugs 0.000 description 1
- 206010047461 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 208000001756 Virus Disease Diseases 0.000 description 1
- 229940046009 Vitamin E Drugs 0.000 description 1
- 229930003427 Vitamin E Natural products 0.000 description 1
- 230000001058 adult Effects 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic Effects 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 238000004624 confocal microscopy Methods 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 description 1
- 229940079593 drugs Drugs 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing Effects 0.000 description 1
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 230000002068 genetic Effects 0.000 description 1
- 230000001571 immunoadjuvant Effects 0.000 description 1
- 239000000568 immunological adjuvant Substances 0.000 description 1
- 229940079866 intestinal antibiotics Drugs 0.000 description 1
- 230000002530 ischemic preconditioning Effects 0.000 description 1
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000008176 lyophilized powder Substances 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000002609 media Substances 0.000 description 1
- 230000001404 mediated Effects 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- 229940005935 ophthalmologic Antibiotics Drugs 0.000 description 1
- 230000000242 pagocytic Effects 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 230000003169 placental Effects 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000036647 reaction Effects 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 230000020382 suppression by virus of host antigen processing and presentation of peptide antigen via MHC class I Effects 0.000 description 1
- 238000004642 transportation engineering Methods 0.000 description 1
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 1
- 230000000381 tumorigenic Effects 0.000 description 1
- 230000017613 viral reproduction Effects 0.000 description 1
- 230000003612 virological Effects 0.000 description 1
- 235000019165 vitamin E Nutrition 0.000 description 1
- 239000011709 vitamin E Substances 0.000 description 1
- 150000003712 vitamin E derivatives Chemical class 0.000 description 1
Images
Abstract
Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к разработке противоопухолевых иммунобиологических препаратов. Разработана противоопухолевая вакцина, включающая в себя тестикулярные (cancer/testis) антигены, полученные из сперматогенной ткани млекопитающего, дискордантного по отношению к человеку (например, барана). Получены два вида вакцины: корпускулярный и липосомный. Использованные в виде инъекций обе вакцины способны останавливать или тормозить опухолевый рост, что подтверждено на экспериментах с мышами. Липосомная вакцина также показала свою эффективность при применении peros. Поскольку тестикулярные антигены экспрессируются на разных типах рака, описанная вакцина может быть использована для профилактики развития различных онкологических заболеваний. Вакцину можно использовать как для профилактики развития рака у людей и животных, не страдающих опухолевыми заболеваниями, так и для профилактики развития рецидива опухолевого заболевания после циторедуктивного лечения. Вакцину можно получать и хранить в лиофилизированном виде. Вакцину можно использовать инъекционно или перорально. Вакцина направлена на профилактику или торможение развития злокачественного заболевания. 7 з.п. ф-лы, 3 ил., 2 пр.
Description
Изобретение относится к медицине, а именно к разработке противоопухолевых вакцин, содержащих ксеногенные тестикулярные (cancer/testis) антигены. Поскольку тестикулярные антигены являются общими для разных типов рака, такая вакцина может быть использована для профилактики развития различных онкологических заболеваний.
Хорошо известно, что опухолевая клетка отличается от нормальной клетки своим поверхностным рельефом, который формируется потенциально иммуногенными структурами (антигенами). Твердо установлено, что индуцируемые этими структурами иммунные реакции способны вызывать деструкцию опухолевых клеток, и что реактивность иммунной системы во многом определяет исход заболевания (обзор Seledtsov V. and vonDelwig A, 2021). Все опухолеассоциированные антигены могут быть разделены на две группы. Первая включает в себя вирусные и мутантные антигены. Эти антигены трудно выявляемы и являются высокоспецифичными (уникальными) для каждой опухоли. Вторая группа включает в себя дифференцировочные антигены, которые экспрессируются как на опухолевых, так и на нормальных клетках. Особняком в ряду таких дифференцировочных антигенов стоят тестикулярные антигены (продукты MAGEA1, MAGE-A3, MAGE-A4, NY-ESO-1, PRAME, CT83, SSX2 и др). Тестикулярные (cancer/testis) антигены высоко экспрессируются в опухолях различного происхождения (печень, молочная железа поджелудочная железа, кишка, легкие и др.) и практически не экспрессируются нормальными клетками, за исключением клеток яичка и плаценты. Продукты тестикулярных генов придают опухоли туморогенность и высокую ростовую активность. В этой связи, представляется важным то, что клетки 5 наиболее распространенных раков, включая рак легкого и рак молочной железы, характеризуются высокой экспрессией тестикулярных антигенов. По сути, тестикулярные антигены являются универсальными, высокоспецифичными опухолевыми маркерами, наиболее подходящими для использования в качестве противоопухолевых вакцинальных препаратов (обзоры Salmaninejad et al., 2016; Meng et al., 2021). Дифференцировочные антигены, в том числе и тестикулярные, являются эволюционно консервативными молекулами. Следствием этого является высокая степень гомологии между дифференцировочными антигенами человека и животных. С другой стороны, небольшие межвидовые структурные отличия этих антигенов придают им высокую иммуногенность и способность индуцировать перекрестную иммунологическую реактивность по отношению к гомологичным антигенам. Эффективность использования ксеногенных дифференцировочных антигенов для прерывания иммунной толерантности к опухоли была продемонстрирована как в экспериментальных, так и клинических исследованиях. Убедительно показано, что в сравнении с гомологичными антигенами, ксеногенные опухолеассоциированные антигены намного более эффективны в индукции противоопухолевых иммунных реакций (обзор Strioga et al., 2014), и что в достижении противоопухолевого эффекта полиантигенная вакцинация более эффективна в сравнении с моноантигенной вакцинацией (обзор Seledtsov V. and vonDelwig A, 2021).
Известна вакцина для стимуляции противоопухолевого иммунитета, представленная ксеногенными клетками, способными индуцировать иммунные реакции, направленные против широкого спектра опухолеассоциированных антигенов (RU 2192884, МПК A61K 39/00, опубл. 20.11.2002 г.).
Иммуногенность и противоопухолевая активность ксеногенных дифференцировочных антигенов были продемонстрированы в экспериментальных терапевтических мышиных моделях (Селедцов и соавт., 2021, Евразийский патент WO 2016/046651 2016.03.31).Важным преимуществом ксеногенных вакцин, получаемых из здоровых тканей, является неограниченность, воспроизводимость и генетическая стабильность сырья, используемого для их производства.
Задачей изобретения является создание доступной, удобной в использовании тестикулярной вакцины, предназначенной для индукции устойчивого адаптивного противоопухолевого иммунитета.
Техническим результатом изобретения является профилактика или торможение развития злокачественного заболевания.
Технический результат изобретения достигается вакциной для индукции адаптивного противоопухолевого иммунитета, состоящей из тестикулярных антигенов, полученных из сперматогенной ткани млекопитающего, дискордантного по отношению к человеку.
Согласно изобретению вакцина может содержать тестикулярные антигены в корпускулярном виде.
Согласно изобретению вакцина может содержать тестикулярные антигены, заключенные в липосомы.
Согласно изобретению указанные антигены можно получать из сперматогенной ткани половозрелого барана.
Согласно изобретению вакцину можно использовать для профилактики развития рака у людей и животных, не страдающих опухолевыми заболеваниями.
Согласно изобретению вакцину можно использовать для профилактики развития рецидива опухолевого заболевания после циторедуктивного лечения.
Согласно изобретению вакцину можно получать и хранить в лиофилизированном виде.
Согласно изобретению вакцину можно использовать инъекционно.
Согласно изобретению вакцину можно использовать per os.
Ксеногенная тестикулярная полиантигенная вакцина имеет следующие очевидные достоинства и преимущества над ранее описанными противоопухолевыми вакцинами.
1. Вакцина содержит полный набор тестикулярных (cancer/testis) антигенов и способна индуцировать поликлональный иммунный ответ, направленный против различных опухолей. Это означает, что тестикулярная вакцина является универсальной противоопухолевой вакциной.
2. Вакцина не содержит в своем составе тканеспецифичных дифференцировочных антигенов, экспрессирующихся в нормальных клетках взрослого организма (исключение клетки яичка). Это исключает связанный с вакцинацией риск развития тяжелых аутоиммунных заболеваний и иммуноопосредованных расстройств.
3. Вакцина готовится из нормальной сперматогенной ткани, намного менее подверженной мутагенезу и вирусному заражению в сравнении с опухолевыми клеточными линиями, являющимися сырьевым материалом для приготовления большинства ранее описанных вакцин.
4. Вакцина высокоиммунногенна и способна индуцировать иммунный ответ без использования иммуноадъювантов.
5. Технология получения вакцины высокоэкономична и не ограничена количеством сырья (яички животных).
6. Вакцина не содержит опухолевый или генетически модифицированный материал. Это исключает риск туморогенного влияния вакцины на нормальные клетки.
7. Вакцина может быть стандартизована по физическим и биологическим свойствам в соответствии с международными требованиями.
8. Вакцина удобна для транспортировки и хранения. Препарат представляет собой лиофилизированный порошок, готовый к применению после его суспендирования в физиологическом растворе.
9. Липосомальная вакцина может быть использована в виде капель под язык или пищевой добавки.
Согласно современным представлениям, помещение антигенов в липосомы способствует их проникновению в цитоплазму клеток в обход фагоцитарного механизма и стимулирует, тем самым, их иммуногенную презентацию в комплексе с продуктами главного комплекса гистосовместимости I класса. Такая антигенная презентация эффективно индуцирует генерацию цитотоксических Т-лимфоцитов. Настоящее изобретение указывает на то, что помещение вакцинальных ксеногенных тестикулярных антигенов в липосомы значительно повышает их противоопухолевую активность.
Вакцину изготавливают следующим образом.
Для приготовления корпускулярного вакцинального препарата сперматогенную ткань половозрелого барана фрагментировали ножницами и затем суспендировали в холодном фосфатном буфере, мягко выдавливая клетки из фрагментов ткани при помощи стеклянного гомогенизатора. Суспензию клеток выдерживали в течение 7 мин для осаждения крупных агрегатов. Далее клетки переносили в пробирку, промывали холодным солевым раствором посредством центрифугирования. Отмытые клетки инкубировали в 0,1% глутаральдегиде (об./об.) при комнатной температуре в течение 30 мин. После фиксации клетки тщательно промывали и далее подвергали лиофилизации. После достижения вакуума 10-2 bar продукт выдерживали 2 часа при рабочем охлаждении полок. Затем доводили температуру продукта до минус 15°С (при температуре полок, примерно, 0°С), после чего подогревали полки со скоростью 3-5°С/час. При достижении температуры продукта 20°С проводили досушивание продукта в течение не менее 10 часов.
Для приготовления липосомальной вакцины сперматогенную ткань половозрелого барана тщательно гомогенизировали в стеклянном гомогенизаторе в охлажденной дистиллированной воде (из расчета 1 г ткани на 3-5 мл воды). Полученный гомогенат подвергали трехкратной процедуре замораживания-оттаивания, после чего гомогенат центрифугировали (1500 g, 40 мин при 4°C) для осаждения разрушенных клеток. Содержащую тестикулярные антигены надосадочную жидкость хранили в замороженном состоянии. Раствор липидов готовили следующим образом. Липоид С-100 (41,18±0,01 г) и витамин Е (0,56±0,01 г) добавляли в колбу с органическим растворителем (13,45 мл хлороформа + 28,76 мл этанола), содержащим с холестерол (4,5±0,01 г). После растворения веществ объем раствора доводили этиловым спиртом до 432 мл. Липидную пленку формировали в ротационном испарителе. В круглодонную колбу загружали липидный раствор. Колбу погружали в водяную баню (40±1°С), задавали скорость вращения колбы 142 об/мин. Удаление органического растворителя из раствора смеси липидов проводили при остаточном давлении 10-30 мм рт.ст. По мере испарения органического растворителя скорость вращения колбы снижали в диапазоне: 142-97 - 60-20 об/мин. В момент концентрирования смеси до гелеобразного состояния скорость вращения повышали до 100 об/мин. Для полного удаления растворителя из липидной пленки колбу присоединяли к вакуумному (водоструйному) насосу на 10-15 мин. Далее липидную пленку гидратировали в 500 мл солевого раствора (натрия хлорид - 8,01 г; лактоза моногидрат - 91,34 г; натрий фосфорнокислый двузамещенный 12-водный - 4,52 г; натрий фосфорнокислый однозамещенный 2-водный - 0,56 г), который смешивали с 500 мл водного раствора, содержащего тестикулярные антигены, при скорости вращения колбы 142 об/мин и при температуре водяной бани 40±1°С. Согласно данным конфокальной микроскопии размер сформированных липосом варьировался в диапазоне 50-200 нм. Полученный липосомальный раствор замораживали при -45±5°С и подвергали лиофилизации.
В экспериментах с изготовленными вакцинами использовали мышей C57BL/6(B6; H-2b), самцов в возрасте от 4 до 6 месяцев.
Опухолевые линии B16 (меланома, В6, Н-2b) и LLC (карциномы, В6, Н-2b) были получены из Российского онкологического центра им Н.Н. Блохина и сохранялись посредством культивирования в среде RPMI 1640, содержащей 10% фетальной бычьей сыворотки , 2 мМ L-глутамина и антибиотики.
Каждая экспериментальная группа состояла из 10 животных. В опытных группах мышей иммунизировали 3 раза (2 раза подкожно и 1 раз внутримышечно) с недельными интервалами ксеногенной корпускулярной или липосомальной вакциной в дозе 107 клеток/мышь или 10 мг/мышь, соответственно. Контрольным мышам инъецировали клетки гомологичной (мышиной) сперматогенной ткани или физиологический раствор. Через 14 дней после последней инъекции мышам имплантировали подкожно опухолевые клетки B16 или LLC (2 x105/мышь)
В других экспериментах мышей кормили пищевой пастой смешанной с липосомальным вакцинальным препаратом в соотношении 1:1 в течение 30 дней до имплантации им клеток LLC. Контрольные мыши получали пасту без добавления вакцины.
Каждый вариант опыта, включал в себя не менее 2 однотипных экспериментов. Выживаемость мышей отслеживали ежедневно. Мертвых животных вскрывали, чтобы удостовериться в том, что причиной смерти стал опухолевый процесс. Для статистической оценки общей выживаемости использовали метод Каплана-Мейера. Значение P<0,05 рассматривали как статистически значимое.
Результаты экспериментов проиллюстрированы графиками фиг.1-3.
На фиг.1 показана кривая выживаемости мышей-опухоленосителей, вакцинированных ксеногенными тестикулярными антигенами инъекционно. Мыши C57BL6 были иммунизированы ксеногенной корпускулярной (СV) или липосомальной (LV) вакциной 3 раза с недельными интервалами. Контрольная группа включала в себя животных, инъецированных гомологичными (мышиными) тестикулярными антигенами. На фиг.2 показана продолжительность жизни мышей, которым через 14 дней после последней инъекции имплантировали клетки меланомы B16 (А) или карциномы LLC (Б). Выживаемость мышей оценивали ежедневно.
На фиг.3 показана кривая выживаемости мышей-опухоленосителей, вакцинированных peros. Мыши C57BL6 получали заключенные в липосомы вакцинальные антигены peros в течение 1 месяца до имплантации им опухоли LLC. Контрольная группа мышей-опухоленосителей не получала вакцину. Выживаемость мышей оценивали ежедневно.
Пример 1.
Профилактическая вакцинация мышей корпускулярным препаратом приводила к заметному торможению роста как меланомы B16 (фиг.1), так и карциномы LLC (фиг.2). Опухоль LLC вообще не развилась у 50% вакцинированных животных (время наблюдения 6 месяцев). В сравнении с корпускулярной вакциной, липосомальная вакцина показала заметно большую противоопухолевую эффективность в обеих экспериментальных моделях. В частности, вакцинация липосомальным препаратом обеспечила выживаемость 80% мышей (фиг.2). Все выявленные различия в выживаемости между контрольными и опытными животными были высоко достоверны. Важно, что вакцинация мышей гомологичными (мышиными) тестикулярными антигенами не приводила к формированию противоопухолевого иммунитета и не оказывала влияние на выживаемость мышей-опухоленосителей. Следует отметить, что как меланома B16, так и карцинома LLC характеризуются агрессивным ростом и, как правило, трудно поддаются каким-либо терапевтическим воздействиям.
Пример 2.
В другой серии экспериментов мыши получали липосомальную тестикулярную вакцину peros в виде специальной пасты в течение 1 месяца до имплантации им опухоли LLC. Контрольные мыши получали пасту без вакцины. Как показано на фиг.3, поедание мышами вакцинальных антигенов приводило к очевидному торможению роста опухоли, формированию у них устойчивой противоопухолевой защиты. У половины вакцинированных таким образом мышей опухоль не сформировалась на протяжении всего периода наблюдения (6 месяцев). Эти данные ясно показывают возможность эффективного профилактического применения липосомальной тестикулярной вакцины в таблетированной или капельной формах.
Таким образом, предложенное изобретение позволяет получить из нормальной сперматогенной ткани животного доступную, удобную в использовании, универсальную тестикулярную вакцину для индукции адаптивного противоопухолевого иммунитета.
Claims (7)
1. Вакцина для индукции противоопухолевого иммунитета, состоящая из тестикулярных антигенов, полученных из сперматогенной ткани половозрелого барана, дискордантного по отношению к человеку, при этом для приготовления вакцины сперматогенную ткань половозрелого барана фрагментируют и затем суспендируют в холодном фосфатном буфере, мягко выдавливая клетки из фрагментов ткани при помощи стеклянного гомогенизатора, суспензию клеток выдерживают в течение 7 минут, далее клетки переносят в пробирку, промывают холодным солевым раствором посредством центрифугирования, отмытые клетки инкубируют в 1% глутаральдегиде (об./об.) при комнатной температуре в течение 30 мин, после фиксации клетки тщательно промывают и далее подвергают леофилизации.
2. Вакцина для индукции противоопухолевого иммунитета, состоящая из тестикулярных антигенов, полученных из сперматогенной ткани половозрелого барана, дискордантного по отношению к человеку, при этом для приготовления вакцины сперматогенную ткань половозрелого барана тщательно гомогенизируют в стеклянном гомогенизаторе в охлажденной дистиллированной воде из расчета 1 г ткани на 3-5 мл воды, полученный гомогенат подвергают трехкратной процедуре замораживания-оттаивания, после чего гомогенат центрифугируют при 1500 g, 40 мин при 40°С, содержащую тестикулярные антигены надосадочную жидкость хранят в замороженном состоянии.
3. Вакцина по пп. 1, 2, отличающаяся тем, что используется для профилактики развития рака у людей и животных, не страдающих опухолевыми заболеваниями.
4. Вакцина по пп. 1, 2, отличающаяся тем, что используется для профилактики развития рецидива опухолевого заболевания после циторедуктивного лечения.
5. Вакцина по пп. 1, 2, отличающаяся тем, что получена и хранится в лиофилизированном виде.
6. Вакцина по пп. 1, 2, отличающаяся тем, что используется инъекционно.
7. Вакцина по п. 2, отличающаяся тем, что используется перорально.
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2784803C1 true RU2784803C1 (ru) | 2022-11-29 |
Family
ID=
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2192884C2 (ru) * | 2000-11-09 | 2002-11-20 | Государственное учреждение Научно-исследовательский институт клинической иммунологии СО РАМН | Вакцина для стимуляции противоопухолевого иммунитета |
| WO2016046651A1 (en) * | 2014-09-26 | 2016-03-31 | Uab "Innovita Research" | Xenogenic normal tissue-derived vaccines for breaking the immune tolerance to tumor-associated, antigens |
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2192884C2 (ru) * | 2000-11-09 | 2002-11-20 | Государственное учреждение Научно-исследовательский институт клинической иммунологии СО РАМН | Вакцина для стимуляции противоопухолевого иммунитета |
| WO2016046651A1 (en) * | 2014-09-26 | 2016-03-31 | Uab "Innovita Research" | Xenogenic normal tissue-derived vaccines for breaking the immune tolerance to tumor-associated, antigens |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| МИХАЙЛОВА И.Н. и др. Раково-тестикулярные антигены как потенциальные мишени для вакцинотерапии опухолей, Российский биотерапевтический журнал, N4, том 9, 2010, с. 17-26. МЕЛЬНИКОВ В.Л. и др. Вакцины, вакцинопрофилактика, учебное пособие, Пенза, Издательство ПГУ, 2015, с. 21-22, 26-29. БЕЛЯКОВА О.В. Разработка и стандартизация лиофилизированной формы вакцины для профилактики инфекций, вызываемых haemophilus influenzae типа B, Пермский медицинский журнал, том XXXI, N 2, с.102-108. AgroXXI. Агропромышленный портал, Справочник по защите растений, обновлено 5 декабря, 2020, Найдено в интернете 05.07.2022, адрес сайта: https://www.agroxxi.ru/goshandbook/wiki/dictionary/Antigens.html. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Li et al. | An endogenous vaccine based on fluorophores and multivalent immunoadjuvants regulates tumor micro-environment for synergistic photothermal and immunotherapy | |
| Li et al. | Chitin, chitosan, and glycated chitosan regulate immune responses: the novel adjuvants for cancer vaccine | |
| ES2227863T3 (es) | Vesicula celular denominada "exosoma", preparacion y utilizacion en la estimulacion de una respuesta inmunitaria. | |
| JP5579586B2 (ja) | 腫瘍ワクチン | |
| Chang et al. | Targeting and specific activation of antigen‐presenting cells by endogenous antigen‐loaded nanoparticles elicits tumor‐specific immunity | |
| JP2002504136A (ja) | ワクチンのためのアジュバント組成物 | |
| EP2328617A2 (en) | Carrier system for biological agents containing organosilicon compounds and uses thereof | |
| Zheng et al. | Bacterium‐mimicking vector with enhanced adjuvanticity for cancer immunotherapy and minimized toxicity | |
| WO2014075631A1 (zh) | 一种自体肿瘤疫苗的制备方法及其应用 | |
| Su et al. | Co-delivery of anionic epitope/CpG vaccine and IDO inhibitor by self-assembled cationic liposomes for combination melanoma immunotherapy | |
| Zhang et al. | Astragalus saponins and liposome constitute an efficacious adjuvant formulation for cancer vaccines | |
| CN103961697A (zh) | 粘膜给予用疫苗组合物 | |
| JP2010507584A (ja) | 細胞外マトリックス癌ワクチンアジュバント | |
| Baral et al. | Immunostimulatory neem leaf preparation acts as an adjuvant to enhance the efficacy of poorly immunogenic B16 melanoma surface antigen vaccine | |
| White et al. | Immunogenicity of liposomes containing lipid core peptides and the adjuvant Quil A | |
| RU2784803C1 (ru) | Тестикулярная вакцина как противоопухолевое профилактическое средство | |
| KR20030017733A (ko) | 암치료 및 예방 제제 | |
| KR20090047289A (ko) | 엑소좀 및 이를 함유한 암 백신 조성물 | |
| JP7017011B2 (ja) | マイコバクテリウムパラゴルドネの抗癌免疫治療法用途 | |
| Hearnden et al. | Adjuvant strategies for vaccines: the use of adjuvants within the cancer vaccine setting | |
| TW577745B (en) | A pharmaceutical composition for inhibiting tumor-angiogenesis | |
| JP4688254B2 (ja) | 腫瘍ワクチン | |
| RU2694761C2 (ru) | Терапевтическая вакцина против рака на основе стрессовых белков в качестве иммуногенов | |
| AU2003277641B2 (en) | Remedy for cancer | |
| KR20040094635A (ko) | 항종양 활성의 유도를 위한 종양 백신의 제조방법 및그것을 함유하고 있는 약제 조성물 |