RU2784435C1 - Способ получения средства, обладающего нейропротективной, иммуномодулирующей активностью - Google Patents
Способ получения средства, обладающего нейропротективной, иммуномодулирующей активностью Download PDFInfo
- Publication number
- RU2784435C1 RU2784435C1 RU2022113385A RU2022113385A RU2784435C1 RU 2784435 C1 RU2784435 C1 RU 2784435C1 RU 2022113385 A RU2022113385 A RU 2022113385A RU 2022113385 A RU2022113385 A RU 2022113385A RU 2784435 C1 RU2784435 C1 RU 2784435C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- neuroprotective
- prickly
- immunomodulatory activity
- animals
- obtaining
- Prior art date
Links
- 230000002519 immonomodulatory Effects 0.000 title claims abstract description 11
- 230000000324 neuroprotective Effects 0.000 title claims abstract description 10
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims abstract description 43
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 23
- 240000000218 Cannabis sativa Species 0.000 claims abstract description 18
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims abstract description 18
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims abstract description 12
- 239000000463 material Substances 0.000 claims abstract description 11
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims abstract description 4
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims abstract description 3
- 240000004119 Melissa officinalis Species 0.000 claims 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 abstract description 22
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 13
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 12
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 11
- 229940079593 drugs Drugs 0.000 abstract description 10
- 241001165545 Orostachys spinosa Species 0.000 abstract description 4
- 241000411851 herbal medicine Species 0.000 abstract description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 25
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 22
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 13
- 229960002170 Azathioprine Drugs 0.000 description 12
- LMEKQMALGUDUQG-UHFFFAOYSA-N azathioprine Chemical compound CN1C=NC([N+]([O-])=O)=C1SC1=NC=NC2=C1NC=N2 LMEKQMALGUDUQG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 11
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 9
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 8
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 8
- 150000004676 glycans Polymers 0.000 description 8
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 8
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 8
- 150000004804 polysaccharides Polymers 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- 206010021143 Hypoxia Diseases 0.000 description 7
- 210000004027 cells Anatomy 0.000 description 7
- 230000001146 hypoxic Effects 0.000 description 7
- WHTVZRBIWZFKQO-UHFFFAOYSA-N Chloroquine Chemical compound ClC1=CC=C2C(NC(C)CCCN(CC)CC)=CC=NC2=C1 WHTVZRBIWZFKQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 206010062016 Immunosuppression Diseases 0.000 description 6
- 230000001506 immunosuppresive Effects 0.000 description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 description 6
- 210000003710 Cerebral Cortex Anatomy 0.000 description 5
- 102100003738 ENO2 Human genes 0.000 description 5
- 101700070897 ENO2 Proteins 0.000 description 5
- 229960002989 Glutamic Acid Drugs 0.000 description 5
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 5
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 5
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 5
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 5
- 210000002569 neurons Anatomy 0.000 description 5
- 230000003287 optical Effects 0.000 description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- 210000002540 Macrophages Anatomy 0.000 description 4
- 230000003078 antioxidant Effects 0.000 description 4
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 4
- 230000000242 pagocytic Effects 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 210000002683 Foot Anatomy 0.000 description 3
- 210000003024 Macrophages, Peritoneal Anatomy 0.000 description 3
- 210000002966 Serum Anatomy 0.000 description 3
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N acetic acid ethyl ester Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 3
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 3
- 230000001413 cellular Effects 0.000 description 3
- 230000001085 cytostatic Effects 0.000 description 3
- 239000000824 cytostatic agent Substances 0.000 description 3
- 230000000215 hyperchromic Effects 0.000 description 3
- 230000003859 lipid peroxidation Effects 0.000 description 3
- WSMYVTOQOOLQHP-UHFFFAOYSA-N malondialdehyde Chemical compound O=CCC=O WSMYVTOQOOLQHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000002829 reduced Effects 0.000 description 3
- 230000011514 reflex Effects 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 3
- 210000004556 Brain Anatomy 0.000 description 2
- 210000004958 Brain cells Anatomy 0.000 description 2
- 229940105657 CATALASE Drugs 0.000 description 2
- 241000220284 Crassulaceae Species 0.000 description 2
- 102000016938 EC 1.11.1.6 Human genes 0.000 description 2
- 108010053835 EC 1.11.1.6 Proteins 0.000 description 2
- 240000002883 Ginkgo biloba Species 0.000 description 2
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N Glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- 229960003180 Glutathione Drugs 0.000 description 2
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 description 2
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 description 2
- FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N Ninhydrin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(O)(O)C(=O)C2=C1 FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 2
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 2
- 206010053613 Type IV hypersensitivity reaction Diseases 0.000 description 2
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000004965 antibodies Human genes 0.000 description 2
- 108090001123 antibodies Proteins 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 230000003197 catalytic Effects 0.000 description 2
- 230000024881 catalytic activity Effects 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 238000005755 formation reaction Methods 0.000 description 2
- 238000009434 installation Methods 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 description 2
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 2
- 230000001373 regressive Effects 0.000 description 2
- 230000029058 respiratory gaseous exchange Effects 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 1
- 206010003550 Asthenic conditions Diseases 0.000 description 1
- 101700008176 CRPI Proteins 0.000 description 1
- 240000004385 Centaurea cyanus Species 0.000 description 1
- 235000005940 Centaurea cyanus Nutrition 0.000 description 1
- 206010012444 Dermatitis diaper Diseases 0.000 description 1
- 208000003105 Diaper Rash Diseases 0.000 description 1
- 240000004530 Echinacea purpurea Species 0.000 description 1
- 206010014623 Encephalopathy Diseases 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 206010015037 Epilepsy Diseases 0.000 description 1
- 210000003743 Erythrocytes Anatomy 0.000 description 1
- 208000010201 Exanthema Diseases 0.000 description 1
- 206010049796 Excoriation Diseases 0.000 description 1
- 210000000416 Exudates and Transudates Anatomy 0.000 description 1
- 235000008100 Ginkgo biloba Nutrition 0.000 description 1
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 description 1
- 208000002287 Hemorrhoids Diseases 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 206010020649 Hyperkeratosis Diseases 0.000 description 1
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M Monopotassium phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 210000000944 Nerve Tissue Anatomy 0.000 description 1
- 241000283898 Ovis Species 0.000 description 1
- 241000594009 Phoxinus phoxinus Species 0.000 description 1
- 240000004331 Plantago major Species 0.000 description 1
- 235000015266 Plantago major Nutrition 0.000 description 1
- 240000000650 Plantago ovata Species 0.000 description 1
- 235000003421 Plantago ovata Nutrition 0.000 description 1
- 229940070687 Psyllium Drugs 0.000 description 1
- 239000009223 Psyllium Substances 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- 206010037844 Rash Diseases 0.000 description 1
- 241000700157 Rattus norvegicus Species 0.000 description 1
- 208000010233 Scurvy Diseases 0.000 description 1
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 1
- 206010043431 Thinking abnormal Diseases 0.000 description 1
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 1
- 229940088594 Vitamin Drugs 0.000 description 1
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Vitamin C Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 1
- 206010047623 Vitamin C deficiency Diseases 0.000 description 1
- 230000001154 acute Effects 0.000 description 1
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 1
- 230000002168 angioprotective Effects 0.000 description 1
- 239000003674 animal food additive Substances 0.000 description 1
- 230000002744 anti-aggregatory Effects 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory Effects 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000038129 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007172 antigens Proteins 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L cacl2 Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000002490 cerebral Effects 0.000 description 1
- 230000003920 cognitive function Effects 0.000 description 1
- 230000001143 conditioned Effects 0.000 description 1
- DHRJOYDLBMLIFJ-UHFFFAOYSA-N cresyl violet Chemical compound C1=CC=C2C3=NC4=CC=C(N)C=C4[O+]=C3C=C(N)C2=C1 DHRJOYDLBMLIFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 235000000381 ginkgo Nutrition 0.000 description 1
- 244000144993 groups of animals Species 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 230000002949 hemolytic Effects 0.000 description 1
- 210000000548 hind-foot Anatomy 0.000 description 1
- 230000028996 humoral immune response Effects 0.000 description 1
- 230000004727 humoral immunity Effects 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 230000003308 immunostimulating Effects 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 230000021633 leukocyte mediated immunity Effects 0.000 description 1
- 230000000670 limiting Effects 0.000 description 1
- 239000008297 liquid dosage form Substances 0.000 description 1
- 201000007227 lymph node tuberculosis Diseases 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 230000003562 morphometric Effects 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N oxygen Chemical compound O=O MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003836 peripheral circulation Effects 0.000 description 1
- 238000005502 peroxidation Methods 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 229910052573 porcelain Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000001681 protective Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000001624 sedative Effects 0.000 description 1
- 239000000932 sedative agent Substances 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 231100000046 skin rash Toxicity 0.000 description 1
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 1
- 229910001220 stainless steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010935 stainless steel Substances 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating Effects 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 239000012085 test solution Substances 0.000 description 1
- 230000000451 tissue damage Effects 0.000 description 1
- 231100000827 tissue damage Toxicity 0.000 description 1
- 210000001519 tissues Anatomy 0.000 description 1
- 230000005951 type IV hypersensitivity Effects 0.000 description 1
- 244000045561 useful plants Species 0.000 description 1
- 230000001643 venotonic Effects 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 229930003231 vitamins Natural products 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 1
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 description 1
Abstract
Изобретение относится к области фармации, а именно к способу получения средства, обладающего нейропротективной, иммуномодулирующей активностью, на основе травы горноколосника колючего Orostachys spinosa (L.) в виде экстракта сухого. Способ получения средства, обладающего выраженной нейропротективной, иммуномодулирующей активностью, для этого растительный материал, состоящий из измельченных до размера частиц диаметром 1,0 мм травы горноколосника колючего, экстрагируют трехкратно при температуре 60°С при отношении 1 мас.ч. растительного материала : 12 об.ч. экстрагента 10% этиловым спиртом в течение 30 мин каждый контакт фаз, далее объединенные водно-спиртовые извлечения фильтруют, упаривают, очищают сепарированием, доупаривают, затем высушивают в вакуум-сушильном аппарате. Вышеописанный способ позволяет получить сухой экстракт с повышенным содержанием экстрактивных веществ, а также расширить ассортимент лекарственных средств растительного происхождения, обладающих нейропротективной, иммуномодулирующей активностью, за счет использования широко распространенного отечественного растительного сырья травы горноколосника колючего. 12 табл.
Description
Изобретение относится к области фармации, и касается способа получения средства, обладающего иммуномодулирующей, нейропротективной активностью на основе травы горноколосника колючего Orostachys spinosa (L.) в виде экстракта сухого.
Флора Восточной Сибири богата перспективными лекарственными растениями народной медицины, проявившие тот или иной фармакологический эффект. Особое внимание заслуживают лекарственные растения, известные в народной медицине, а также обеспеченные природными запасами. К таким лекарственным растениям относится многолетнее суккулентное растение из семейства толстянковых (сем. Crassulaceae) - горноколосник колючий (Orostachys spinosa (L.) Sweet.). Растение применялось в народной медицине в свежем виде, в виде отваров. Из-за мясистости стеблей и листьев известен свежий сок растения. Средства на основе горноколосника колючего применяли при эпилепсии и как успокаивающее при нервных расстройствах. Отвар или свежий сок принимали при лихорадке, золотухе [10]. Свежие листья оказывают стимулирующее ранозаживляющее действие при порезах, ссадинах, мозолях и геморроидальных узлах. Сок горноколосника колючего применяли для лечения ожогов, укусов насекомых, а также применяли при кожных сыпях, опрелостях. Свежие листья первого года жизни применяли как витаминное при цинге. Кроме этого растение применяли в пищу и использовали как кормовую добавку [8]. Известны экспериментальные данные, выявлена выраженная адаптогенная активность извлечений из травы горноколосника колючего [5].
Известны средства на основе эхинацеи пурпурной Echinacea purpurea, обладающие иммуностимулирующим, противовоспалительным действием, в том числе в виде жидкой лекарственной формы Иммунал [4]. Известно средство Танакан, которое предложено в качестве ангиопротекторного, венотонизирующего и антиагрегативного средства [4]. Его применяют при энцефалопатиях, нарушениях мозгового и периферического кровообращения, астенических состояниях. Его получают из растения гинкго билоба в виде стандартизированного экстракта. В природных условиях России гинкго билоба не встречается, но культивируется в Крыму и на Кавказе. В качестве прототипа данного изобретения приняты Танакан и Иммунал. Недостатками Иммунала являются слабо выраженные иммуномодулирующая активность по сравнению со средством, полученным по предлагаемому способу.
Технический результат изобретения - расширение ассортимента лекарственных средств растительного происхождения, обладающих нейропротективной, иммуномодулирующей активностью, за счет использования широко распространенного отечественного растительного сырья травы горноколосника колючего Orostachys spinosa (L.), имеющей надежную и обеспеченную сырьевую базу.
При производстве сухих экстрактов первостепенное значение имеет процесс экстрагирования лекарственного растительного сырья. Изучено влияние технологических факторов на процесс экстрагирования растительного материала - природы экстрагента, его соотношение с сырьем, температурного режима, степени измельчения сырья, продолжительности и кратности числа экстракций. Опыты выполняли в трехкратной повторности и использовали средние значения полученных данных. Эффективность экстракции оценивали по выходу экстрактивных веществ, полисахаридов, аминокслот.
Определение содержания экстрактивных веществ проводили согласно ОФС.1.5.3.0006.15 «Определение содержания экстрактивных веществ в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах» [6].
Определение содержания экстрактивных веществ проводят гравиметрическим методом 1. Метод 1 используется для определения содержания экстрактивных веществ в лекарственном сырье и лекарственных растительных препаратах, которые в последующем подвергаются процессу однократной экстракции.
25,0 мл извлечений из растительного сырья, полученных в опытах, пипеткой переносят в предварительно высушенную при температуре 100-105°С до постоянной массы и точно взвешенную фарфоровую чашку диаметром 7-9 см и выпаривают на водяной бане досуха. Чашку с остатком сушат при температуре 100-105°С до постоянной массы, затем охлаждают в течение 30 минут в эксикаторе, на дне которого находится кальция хлорид безводный, и немедленно взвешивают.
Содержание экстрактивных веществ в абсолютно сухом лекарственном растительном сырье (X, %) вычисляют по формуле:
Для оценки содержания полисахаридов в извлечениях использована методика количественного определения полисахаридов согласно ФС.2.5.0032.15 Подорожника большого листья [9].
К 5 мл извлечений, полученных в опытах, прибавляют 15 мл 95% этанола, перемешивают, подогревают на водяной бане до 30°С в течение 5 минут. Через час осадок количественно переносят на фильтр и последовательно промывают 15 мл раствора 95% спирта в воде (3:1), 10 мл ацетона, 10 мл этилацетата. Фильтр с осадком высушивают сначала на воздухе, затем при температуре 100-105°С до постоянной массы.
Содержание полисахаридов в пересчете на абсолютно сухое сырье в % (X) вычисляют по формуле:
Для количественного определения свободных аминокислот в извлечениях использовали спектрофотометрический метод, основанный на измерении оптической плотности окрашенного комплекса аминокислот с нингидрином.
В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 2 мл извлечения, полученного в опытах, прибавляют 4 мл фосфатного буферного раствора с рН=6,4; а также 2 мл 1% раствора нингидрина в 95% спирте этиловом и 2 мл 0,05% водного раствора аскорбиновой кислоты. Реакционную массу нагревают на кипящей водяной бане в течение 30 минут; быстро охлаждают, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают.
Параллельно проводят аналогичные опыты с 2 мл раствора рабочего стандартного образца (РСО) глутаминовой кислоты и 2 мл воды (контрольный опыт).
Измеряют оптическую плотность полученных растворов на спектрофотометре при длине волны 568 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм, используя в качестве сравнения воду.
Содержание суммы свободных аминокислот в пересчете на глутаминовую кислоту и абсолютно сухое сырье (X) вычисляют в % по формуле:
Приготовление раствора РСО глутаминовой кислоты. Около 0,05 г (точная навеска) глютаминовой кислоты (ФС 42-0229-07) помещают в мерную колбу вместимостью 200 мл, растворяют в 50 мл воды, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают.
Приготовление фосфатного буферного раствора с рН=6,4 по ОФС 42-0072-47 «Буферные растворы». 1,79 г динатриягидрофосфата, 1,36 г калия дигидрофосфата и 7,02 натрия хлорида растворяют в воде и доводят объем раствора водой до 1000,0 мл.
В качестве экстрагентов использовались вода холодная, вода горячая, спирт этиловый с различной концентрацией 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%. Полученные данные приведены в таблице 1. Как видно из таблицы, наиболее лучший выход экстрактивных веществ наблюдался при экстракции 10% раствором спиртом этиловым и составлял 35,17%.
В продолжении исследований изучено влияние степени измельчения травы на извлечение экстрактивных веществ. Растительное сырье измельчали до 0,5; 1,0; 2,0; 3,0; 5,0 мм. Результаты представлены в таблице 2. Экстрагирование выполняли 10% этанолом.
Наибольший выход экстрактивных веществ наблюдается при степени измельчения сырья 1 мм и составляет 36,22%.
Изучена зависимость извлечения экстрактивных веществ при экстракции травы горноколосника колючего от соотношения сырье-экстрагент. Экстрагирование выполняли 10% этанолом, степень измельчения сырья 1 мм. Результаты представлены в таблице 3. Наиболее оптимальное соотношение сырье-экстрагент 1:12. Дальнейшее увеличение объема экстрагента нерационально.
Изучено влияние температурного режима экстракции на выход суммы экстрактивных веществ (табл. 4). С увеличением температуры повышается выход БАВ. Для получение экстракта нами выбрана оптимальная температура 60°С.
Чтобы установить продолжительность и кратность числа экстракций изучали время наступления равновесной концентрации в системе «сырье:экстрагент». Для этого проводили 3-хкратную 2-хчасовую экстракцию измельченного сырья травы горноколосника колючего 10% этанолом на водяной бане при температуре 60°С при соотношении сырья и экстрагента 1:12 при постоянном перемешивании с обратным холодильником. После первого контакта фаз 10%-ым этанолом через заданные промежутки времени (15, 30, 45, 60, 75, 90 мин.) извлечения фильтровали, определяли содержание суммы экстрактивных веществ, полисахаридов и суммы свободных аминокислот. Результаты определения экстрактивных веществ, полисахаридов и аминокислот из травы горноколосника колючего при 1 контакте фаз представлены в таблице 5. В продолжении опыта проводили две последующие экстракции отжатого сырья при тех же промежутках времени, заливая во 2-ом и 3-ем контакте фаз 10% этанол в количестве, равном объему предыдущих слитых извлечений. Извлечения также анализировали на содержание суммы экстрактивных веществ, полисахаридов и суммы свободных аминокислот. Результаты определения экстрактивных веществ, полисахаридов и аминокислот из травы горноколосника колючего при 2 и 3 контакте фаз представлены в таблице 5. Экспериментальные данные свидетельствуют о том, что равновесное состояние в системе «сырье:экстрагент» для травы горноколосника колючего в I, II, III контакте фаз наступает через 30 минут каждый. Трехкратная экстракция обеспечивает максимальный выход как действующих, так и экстрактивных веществ.
В результате проведенных испытаний установлены оптимальные условия экстрагирования горноколосника колючего травы: экстрагент - 10% спирт, его соотношение к количеству сырья - 1:12, температурный режим - 60°С, степень измельчения сбора - 1 мм. Трехкратная экстракция. Продолжительность экстракции в системе «сырье:экстрагент» для травы горноколосника колючего составляет 30 минут в I, II, III контакте фаз.
Пример способа получения экстракта сухого: 1 кг травы горноколосника колючего измельчают на мельнице до размера частиц диаметром 1,0 мм. Измельченное сырье загружают в экстракционный аппарат с мешалкой и внешним паровым обогревом. Заливают 12 л 10%-ным спиртом этиловым в соотношении сырье : экстрагент 1:12. Первую экстракцию выполняют при температуре 60°С в течение 30 мин при постоянном перемешивании. Извлечение фильтруют через серошинельное сукно в сборник. Вторую и третью экстракцию выполняют в течение 30 мин при температуре 60°С, подавая в экстрактор 10%-ный спирт этиловый в количестве, равном слитому от предыдущей экстракций. Объединенное водно-спиртовое извлечение после экстракций последовательно порциями упаривают примерно до 1/3 первоначального объема. Объединенные кубовые остатки от трех извлечений подвергают очистке сепарированием. Очищенный экстракт доупаривают до 1/5 первоначального объема и сушат на нержавеющих противнях в вакуумной сушилке при 65-70°С 8 ч. Получают 260,0 г экстракта сухого. Сухой экстракт представляет собой аморфный порошок коричневого цвета со специфическим запахом, потеря в массе при высушивании не более 5%. Гигроскопичен.
Оценка нейропротекторных свойств сухого экстракта горноколосника колючего.
Содержание животных, участвующих в экспериментах, соответствовало «Правилам лабораторной практики» (GLP) и Приказу МЗ РФ №199Н от 01.04.2016 г. «Об утверждении Правил надлежащей лабораторной практики». Экспериментальную работу осуществляли в соответствии с «Правилами, принятыми в Европейской конвенции по защите позвоночных животных» (Страсбург, 1986 г.).
Исследования выполнены на белых крысах линии Wistar с исходной массой 160-180 г. В первой серии экспериментов животным I-III опытных групп внутрижелудочно вводили в течение 10 дней экстракт сухой горноколосника колючего в дозах 50, 100 и 200 мг/кг соответственно. Животные IV опытной группы получали в аналогичном режиме препарат сравнения - Танакан в дозе 100 мг/кг, контрольной группы - воду очищенную в эквивалентном объеме На 10 сутки, через 30 минут после последнего введения исследуемых средств, у животных вырабатывали условный рефлекс пассивного избегания (УРПИ). После выработки УРПИ животных помещали в герметическую емкость (объем 1 л) до атонального дыхания. О влиянии экстракта сухого горноколосника колючего на процессы памяти судили по количеству животных с сохранившимся рефлексом и латентному периоду (время захождения в темный отсек установки) через 1, 24 и 72 часа после гипоксического воздействия [7].
Во второй серии эксперимента животным I и II опытных групп внутрижелудочно вводили в течение 10 дней соответственно экстракт сухой горноколосника колючего и Танакан в дозе 100 мг/кг. Последнее введение осуществляли за 30 минут до воспроизведения гипобарической гипоксии. Острую гипобарическую гипоксию моделировали путем подъема лабораторных животных в барокамерной установке на «высоту» 9000 м со средней скоростью 50 м/с и нахождения их в этих условиях в течение 30 мин [7]. Через 3 ч после восстановления исходного режима кислородного обеспечения крыс декапитировали под эфирным наркозом. В сыворотке крови определяли содержание нейрон-специфической енолазы (NSE) с помощью набора «Can Ag NSE» на иммуноанализаторе «Multiskan Ascent». Интенсивность процессов свободнорадикального окисления, в гомогенате головного мозга, оценивали по содержанию вторичного продукта перекисного окисления липидов - малоновому диальдегиду (МДА) [2]. Состояние антиоксидантной системы характеризовали по каталитической активности каталазы [1] и содержанию восстановленного глутатиона [12] в ткани мозга. На гистологических срезах, окрашенных крезилвиолетом по Нисслю, проводили морфометрические исследования коры больших полушарий с помощью микроскопа «Axio LAB.A1» с программным обеспечением для анализа изображений Axio Vision SE64 Rel.4.8.3 и ZEN 2012. Во II-V слоях коры больших полушарий определяли процентное содержание нормохромных, резко гипохромных, резко гиперхромных (пикнотические) нейронов и «клеток-теней».
Статистическая обработка полученных результатов проводилась с помощью пакета программ Statistica for Windows 6.0. Достоверность различий между контрольной и опытными группами оценивали с помощью непараметрического критерия Манна-Уитни. Для сравнения процента животных с сохранившемся рефлексом применяли критерий Фишера. Различия считали достоверными при р≤0,05.
Результаты исследований показали, что помещение животных в герметический сосуд до появления атонального дыхания способствует снижению у них процессов консолидации и воспроизведение памятного следа (таблица 6).
На фоне введения экстракта горноколосника колючего в дозе 100 мг/кг и Танакана в аналогичной дозе УРПИ сохранился у всех животных во II и IV опытных группах через 1 час и 24 часа, тогда как в контрольной и I опытной группе только у 10 из 14 животных. Латентный период у животных данных опытных групп был в среднем выше на 20 и 25% (р≤0,05) контрольных показателей соответственно срокам наблюдения. На 3 сутки эксперимента условный рефлекс отмечался у 71% животных в III и IV опытных группах; латентный период у них был выше в 1,5 раза такового у контрольных животных. Наиболее значимое влияние на сохранность УРПИ в отдаленные сроки проявлял экстракт горноколочника колючего в дозе 100 мг/кг. Так, через 72 часа УРПИ сохранился у 86% (р≤0,05) животных во II опытной группе, и латентный период у них был в 1,8 раза выше такового в контроле.
Во второй серии экспериментов было установлено, что на фоне гипоксии развиваются структурные изменения в коре больших полушарий, характеризующиеся увеличением количества регрессивных форм нейронов - гиперхромных (в 2,8 раза), гипохромных (в 1,6 раза) и «клеток-теней» (в 2,5 раза) по сравнению с показателями у животных интактной группы (таблица 7).
На фоне введения животным экстракта сухого горноколосника колючего и Танакана наблюдались менее выраженные структурные изменения в коре больших полушарий (таблица 7): количество гипохромных нейронов снижалось на 23 и 31%, гиперхромных нейронов - на 49 и 42% и «клеток-теней» - на 37 и 33% соответственно по сравнению с показателями у контрольных животных.
Данные, представленные в таблице 8, показывают, что на фоне гипоксии/реокисгенации наблюдалось повышение содержания в сыворотке крови белых крыс маркера повреждения нервной ткани - NSE на 34% по сравнению с данными у интактных животных. Курсовое введение животным экстракта сухого горноколосника колючего и Танакана снижало уровень NSE в среднем на 20% относительно такового показателя у контрольных животных.
Экстракт сухой горноколосника колючего проявляет антиоксидантное действие, снижает интенсивность реакций перекисного окисления липидов, оказывая протективное влияние на эндогенную антиоксидантную систему клеток головного мозга при гипоксии/реоксигенации (таблица 9).
Так, отмечается снижение содержания МДА на 26%, при этом каталитическая активность каталазы повысилась на 28%, а содержание восстановленного глутатиона на 39% по сравнению с аналогичными показателями контрольной группы животных.
Таким образом, экстракт сухой горноколосника колючего оказывает нейропротективное действие на фоне гипоксических состояний различного генеза, улучшая когнитивные функции, ограничивая образование регрессивных форм нейронов в коре больших полушарий, снижая уровень NSE в сыворотке крови. Исследуемый экстракт способствует корригированию липид-липидных и белково-липидных взаимодействий в клетках головного мозга, посредством снижения интенсивности перекисного окисления липидов и повышения активности ферментов эндогенной антиоксидантной системы. Нейропротективное действие экстракта сухого горноколосника колючего соответствует таковому препарата сравнения - Танакана.
Оценка иммуномодулирующего свойства сухого экстракта горноколосника колючего выполнена на животных на модели иммунодепрессии, вызванной цитостатиком азатиоприном.
Определены иммуномодулирующие свойства сухого экстракта горноколосника колючего в отношении показателей клеточного, гуморального и макрофагального звеньев иммунного ответа. Эксперименты проведены на мышах-самцах линии F1 (СВАхС57 В1/6) массой 18-20 г, полученных из питомника РАМН «Столбовая». Иммунодепрессию вызвали цитостатиком азатиоприном, который вводили контрольной группе животных в дозе 50 мг/кг перорально 1 раз в сутки в течение 5 дней [3].
Сухой экстракт горноколосника колючего вводили 1-ой опытной группе мышей на фоне азатиоприна в дозе 100 мг/кг перорально 1 раз в сутки в течение 14 дней. В качестве препарата сравнения использовали Иммунал, который вводили 2-ой опытной группе мышей на фоне азатиоприна в изоэффективной дозе 5 мл/кг перорально 1 раз в сутки в течение 14 дней. Интактная и контрольная группы животных получали воду очищенную по аналогичной схеме. Исследования проводили на 20 день эксперимента.
Действие испытуемого средства на состояние клеточного звена иммунного ответа оценивали в реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) согласно стандартной методике [7]. Мышей сенсибилизировали внутрибрюшинным введением 0,1% взвеси эритроцитов барана (ЭБ) в физиологическом растворе. На 4 сутки под подошвенный апоневроз задней лапки вводили разрешающую дозу антигена - 50 мкл 50% взвеси ЭБ. В контрлатеральную лапку инъецировали физиологический раствор в том же объеме. Оценку реакции ГЗТ проводили спустя 24 часа по разнице масс опытной и контрольной лап. Индекс реакции ГЗТ (Ир) рассчитывали по формуле: Ир=[(Моп-Мк)/Мк]×100%, где Моп - масса опытной лапы, Мк - масса контрольной лапы.
Состояние гуморального иммунитета оценивали по количеству антителообразующих клеток (АОК), определяемых методом локального гемолиза по A.J.Cunningham (1965). Мышей иммунизировали внутрибрюшинно ЭБ в дозе 2×108 клеток на мышь. Реакцию ставили на 5-е сутки после иммунизации [11].
Состояние макрофагального звена иммунного ответа оценивали в реакции фагоцитоза перитонеальных макрофагов в отношении частиц коллоидной туши. Оптическую плотность лизата клеток перитонеального экссудата, отражающую количество туши, поглощенной перитонеальными макрофагами, определяли на спектрофотометре «CECIL-2011» при длине волны 620 нм [7].
Результаты обработаны статистическим методом с помощью критерия t-Стьюдента.
При исследовании влияния сухого экстракта горноколосника колючего в дозе 100 мг/кг на процессы антителообразования установлено, что средство восстанавливает показатели гуморального иммунного ответа в условиях азатиоприновой иммуносупрессии. Введение азатиоприна приводило к снижению как абсолютного числа АОК, так и числа АОК на 106 спленоцитов на 37% и 40%, соответственно, по сравнению с теми же показателями в интактной группе. При введении исследуемого средства на фоне иммуносупрессии наблюдали достоверное увеличение количества АОК как в абсолютных значениях, так и при расчете на 106 спленоцитов в среднем в 1,5 раза. При введении препарата сравнения Иммунал достоверно возросло абсолютное и относительное числа АОК в 1,4 и 1,5 раза соответственно по сравнению с данными в контрольной группе (Табл. 10).
При исследовании влияния сухого экстракта горноколосника колючего на клеточно-опосредованную реакцию ГЗТ установлено, что испытуемое средство восстанавливает индекс данной реакции (ИР ГЗТ) в условиях азатиоприновой иммуносупрессии. Введение азатиоприна приводило к снижению ИР ГЗТ на 38% по сравнению с тем же показателем в интактной группе. При введении испытуемого средства на фоне иммунодепрессии наблюдали увеличение ИР ГЗТ в 1,4 раза по сравнению с контролем, тогда как использование препарата сравнения «Иммунал» приводило к увеличению данного показателя в 1,3 раза (Таблица 11).
При исследовании влияния сухого экстракта горноколосника колючего на фагоцитарную активность перитонеальных макрофагов на фоне азатиоприна установлено, что данное средство восстанавливает фагоцитарный индекс. Введение азатиоприна приводило к снижению фагоцитарного индекса на 51% по сравнению с тем же показателем в интактной группе. При введении исследуемого средства животным с иммунодефицитом наблюдали увеличение фагоцитарного индекса в 1,9 раза по сравнению с данными в контрольной группе; препарат сравнения «Иммунал» увеличивал данный показатель в 1,7 раза (Таблица 12).
Таким образом, исследование иммуномодулирующих свойств сухого экстракта горноколосника колючего выявило его эффективность по отношению к реакциям клеточного, гуморального и макрофагального звеньев иммунного ответа при экспериментальном иммунодефиците, вызванном цитостатиком азатиоприном. Сухой экстракт горноколосника колючего в дозе 100 мг/кг способен ослаблять супрессивное действие азатиоприна на клеточно-опосредованную иммунную реакцию, антителогенез и фагоцитоз макрофагов. Эффективность исследуемого средства выражена в большей степени, чем действие препарата сравнения «Иммунала».
Литература
1. Гирин С.В. Модификация метода определения активности каталазы в биологических субстратах. Лабораторная диагностика. 1999; 4: 45-46.
2. Камышников B.C. Справочник по клинико-биохимическим исследованиям и лабораторной диагностике. М., 2009: 890.
3. Лазарева Д.Н., Алехин Е.К. Стимуляторы иммунитета. - М.,1985.- 256 с
4. Машковский М.Д. Лекарственные средства. - 16-е изд., перераб., испр. и доп.- М.: Новая волна, 2012. - 1216 с.
5. Одинец А.Д. Фармакологическое исследование экстракта Горноколосника колючего, произрастающего в Восточной Сибири: Автореф.дисс…к-та фарм.наук. Томск, 2012. - 21 с
6. ОФС.1.5.3.0006.15 Определение содержания экстрактивных веществ в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах.
7. Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. Часть первая / под ред. А.Н. Миронова, Н.Д. Бунятяна - М.: Гриф и К, 2012. - 944 с.
8. Телятьев, В.В. Полезные растения Центральной Сибири. - Иркутск: Восточно-Сибирское книжное издательство, 1985. - 384 с.
9. ФС.2.5.0032.15 Подорожника большого листья.
10. Шретер, А.И. Лекарственная флора Советского Дальнего Востока. - М.: Медицина, 1975. - 328 с.
11. Cunningham A.J. A method of increased sensitivity for detecting single antibodyforming cells //Nature. - 1965. - Vol. 207. - №5001. - P. 1106-1107.
12. Shaik I.H., Mehvar R. Rapid determination of reduced and oxidized glutathione levels using a new thiol-masking reagent and the enzymatic recycling method: Application to the rat liver and bile samples. Analytical and Bioanalytical Chemistry. 2006; 385 (1): 105-113.
Claims (1)
- Способ получения средства, обладающего выраженной нейропротективной, иммуномодулирующей активностью, для этого растительный материал, состоящий из измельченных до размера частиц диаметром 1,0 мм травы горноколосника колючего, экстрагируют трехкратно при температуре 60°С при отношении 1 мас.ч. растительного материала : 12 об.ч. экстрагента 10% этиловым спиртом в течение 30 мин каждый контакт фаз, далее объединенные водно-спиртовые извлечения фильтруют, упаривают, очищают сепарированием, доупаривают, затем высушивают в вакуум-сушильном аппарате.
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2784435C1 true RU2784435C1 (ru) | 2022-11-25 |
Family
ID=
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2826494C1 (ru) * | 2023-12-18 | 2024-09-11 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Бурятская государственная сельскохозяйственная академия имени В.Р. Филиппова" | Способ получения средства, обладающего нейропротективным, метаболическим действием |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2133620C1 (ru) * | 1997-07-16 | 1999-07-27 | Куркин Владимир Александрович | Способ получения средства, обладающего иммуномодулирующей активностью |
| RU2482860C2 (ru) * | 2011-07-27 | 2013-05-27 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Иркутский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации | Средство, повышающее работоспособность |
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2133620C1 (ru) * | 1997-07-16 | 1999-07-27 | Куркин Владимир Александрович | Способ получения средства, обладающего иммуномодулирующей активностью |
| RU2482860C2 (ru) * | 2011-07-27 | 2013-05-27 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Иркутский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации | Средство, повышающее работоспособность |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| ЛЕВЕНТА А.И. и др. Влияние извлечений из горноколосника и рододендрона Адамса на поведенческие реакции лабораторных животных // Сибирский медицинский журнал, 2010, N4. С.103-105. УСОВ Л.А. и др. Анксиолитические и мнемотропные эффекты извлечений из горноколосника и рододендрона Адамса в эксперименте на лабораторных животных // Сибирский медицинский журнал, 2010, N5. С.125-128. МАНЖИГЕЕВ П.Г. Фитохимическое изучение надземной части Orostachys spinosa L. // Вестник Бурятского государственного университета. Медицина и фармация. 2017. Вып. 2. С.30-33. ОДИНЕЦ А.Д. Фармакологическое исследование экстракта горноколосника колючего, произрастающего в Восточной Сибири : автореф. дис. кан. мед. наук. - Томск: 2012. - 21 с. MA C.J. et al. Calpain inhibitory flavonoids isolated from Orostachys japonicus // Journal of Enzyme Inhibition and Medicinal Chemistry, 2009; 24(3): 676-679. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2826494C1 (ru) * | 2023-12-18 | 2024-09-11 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Бурятская государственная сельскохозяйственная академия имени В.Р. Филиппова" | Способ получения средства, обладающего нейропротективным, метаболическим действием |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR100189144B1 (ko) | 신규 생리 활성 물질 | |
| TW561049B (en) | Crude drug extracts, and method for standardizing same | |
| CN100364554C (zh) | 灵芝咀嚼片的制备方法及产品 | |
| CN106036898A (zh) | 一种具有抗疲劳功效的组合物及制备方法和用途 | |
| RU2784435C1 (ru) | Способ получения средства, обладающего нейропротективной, иммуномодулирующей активностью | |
| Baby et al. | Phytochemical Screening and Invitro Anti-Inflamatory Activity Of Ethanolic Extract Of Centella Asiatica | |
| RU2543360C1 (ru) | Способ подготовки пробы для газохроматографического определения пестицидов в биоматериале | |
| CN110664860B (zh) | 一种增强免疫力的组合物及其制备方法 | |
| DE2234832C2 (de) | Proteinfreies Hormonkonzentrat von Säugetier-Nebenschilddrüsen, dessen Herstellung und dieses Hormonkonzentrat enthaltende pharmazeutische Präparate | |
| CN102272281B (zh) | 用于反应性研磨蓖麻种子的方法 | |
| RU2215532C2 (ru) | Способ комплексной переработки внутренностей голотурий с получением биологически активных добавок к пище и биологически активные пищевые добавки "тингол-2" и "эрогол" | |
| RU2707300C2 (ru) | Способ получения лекарственного средства, обладающего тиреотропной и антиоксидантной активностью | |
| RU2695328C1 (ru) | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СУБСТАНЦИЙ ИЗ ЗМЕЕГОЛОВНИКА МОЛДАВСКОГО (Dracocephalum moldavica L.) | |
| SHARIPOVA et al. | Development of an anti-inflammatory extract from leaves and immature fruits of walnuts. | |
| CH634854A5 (de) | Verfahren zur herstellung organopeptidhaltiger substanzen mit insulinaehnlicher wirksamkeit aus blut oder blutbestandteilen. | |
| Rakhimov et al. | Carbohydrate and protein components of Helianthus tuberosus and their biological activity | |
| Kruse et al. | Biochemical investigation of vitamin B | |
| RU2619863C1 (ru) | Способ получения средства, обладающего тиреотропной активностью | |
| US2202307A (en) | Vitamin concentration | |
| CN111480846A (zh) | 一种辅助降血脂、提高免疫力的保健品 | |
| CN117959246B (zh) | 蒙古莸的提取方法、蒙古莸抗炎软膏及其制备方法和应用 | |
| CN109528748A (zh) | 环磷酸腺苷盐在制备外用消脂减肥产品中的应用 | |
| US20070059388A1 (en) | Pharmaceutical composition containing a safe extracts of plants for the treating and preventing of diabetes and cardiovascular disease | |
| US20030118671A1 (en) | Formulation containing peanut leaf extract and its preparation | |
| RU2680528C1 (ru) | Фитосредство, обладающее мембраностабилизирующим действием при гипоксии головного мозга |