RU2780859C2 - Cd47-антигенсвязывающая единица и ее применение - Google Patents

Cd47-антигенсвязывающая единица и ее применение Download PDF

Info

Publication number
RU2780859C2
RU2780859C2 RU2019126626A RU2019126626A RU2780859C2 RU 2780859 C2 RU2780859 C2 RU 2780859C2 RU 2019126626 A RU2019126626 A RU 2019126626A RU 2019126626 A RU2019126626 A RU 2019126626A RU 2780859 C2 RU2780859 C2 RU 2780859C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
seq
antibody
cell
antigen
cells
Prior art date
Application number
RU2019126626A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2019126626A3 (ru
RU2019126626A (ru
Inventor
Яншэн ЦЮ
Цзин Ли
Хунхай ГАО
Фэнлань У
Сюй ФАН
Шоу ЛИ
Хунтао ЛУ
Джеймс С. ЯНЬ
Лэй Ши
Original Assignee
Злип Холдинг Лимитед
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Злип Холдинг Лимитед filed Critical Злип Холдинг Лимитед
Priority claimed from PCT/CN2018/074318 external-priority patent/WO2018137705A1/en
Publication of RU2019126626A publication Critical patent/RU2019126626A/ru
Publication of RU2019126626A3 publication Critical patent/RU2019126626A3/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2780859C2 publication Critical patent/RU2780859C2/ru

Links

Images

Abstract

Изобретение относится к области биотехнологии. Предложено антитело, которое специфически связывается с CD47. Кроме того, предложены нуклеиновая кислота, кодирующая указанное антитело, вектор, содержащий указанную нуклеиновую кислоту, клетка–хозяин для получения антитела, содержащая указанный вектор. Кроме того, изобретение относится к способам индукции фагоцитоза клеток, экспрессирующих CD47, и к способам лечения злокачественного новообразования. Изобретение позволяет индуцировать фагоцитоз клеток, экспрессирующих CD47, не вызывая существенную гемагглютинацию. 10 н. и 26 з.п. ф-лы, 44 ил., 18 табл., 13 пр.

Description

ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА
Настоящая заявка испрашивает приоритет по международной заявке № PCT/CN2017/072738, поданной 26 января 2017 г., содержание которой настоящим включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
CD47 является ключевой молекулой, которая регулирует фагоцитоз макрофагов, которая действует путем передачи ингибирующих сигналов через SIRP α, трансмембранный рецептор, который экспрессируется на макрофагах и других миелоидных клетках. CD47 повсеместно экспрессируется и служит «аутоантигенным маркером» для предотвращения фагоцитоза макрофагов. Тот же механизм используется опухолевыми клетками, чтобы избежать иммунологической эрадикации. Фактически, экспрессия CD47 повышена при некоторых злокачественных новообразованиях человека, включая солидные опухоли, такие как рак молочной железы, толстой кишки, печени, мочевого пузыря, мозга, яичников, почек, рака предстательной железы, меланому и гемобластозы, такие как AML, ALL, CLL, CML, DLBL, FL, MCL, MM и другие. CD47 взаимодействует с SIRPα, ингибирующим трансмембранным рецептором на миелоидных клетках, таких как макрофаги. Взаимодействие CD47/SIRPα приводит к двунаправленной передаче сигналов, что приводит к различным ответам от клетки к клетке, включая ингибирование фагоцитоза макрофагами. Следовательно, нарушение этого взаимодействия может устранить это ингибирование, вызывая тем самым фагоцитоз. Существующие агенты, которые нарушают такое взаимодействие, имеют ряд недостатков. Среди них относительная более низкая аффинность и/или селективность по отношению к CD47, а также высокая склонность вызывать нежелательную гемагглютинацию.
ВКЛЮЧЕНИЕ С ПОМОЩЬЮ ССЫЛКИ
Все публикации и заявки на патенты, упомянутые в настоящей спецификации, включены в него посредством ссылки в той же степени, как если бы каждая независимая публикация или заявка на патент была специально и индивидуально указана для включения посредством ссылки.
СУЩНОСТЬ РАСКРЫТИЯ
Существует значительная потребность в альтернативных CD47–связывающих агентах. Настоящее изобретение удовлетворяет эту потребность и обеспечивает связанные с этим преимущества.
В настоящем описании раскрыта антигенсвязывающая единица, содержащая CDR легкой цепи и CDR тяжелой цепи, где антигенсвязывающая единица (a) специфически связывается с CD47; (b) индуцирует фагоцитоз клеток, экспрессирующих CD47, при связывании с CD47; и (c) не обладает способностью индуцировать существенную гемагглютинацию при смешивании с эритроцитами в диапазоне концентраций указанной антигенсвязывающей единицы от 1,5 нг/мл до 30 мкг/мл. В некоторых аспектах связывание антигенсвязывающей единицы с CD47 предотвращает связывание CD47 с SIRPα, который экспрессируется на клетке макрофагов. В некоторых аспектах антигенсвязывающая единица индуцирует фагоцитоз клеток, экспрессирующих CD47, в большей степени по сравнению с антигенсвязывающей единицей, имеющей аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 240–241. В некоторых аспектах антигенсвязывающая единица индуцирует фагоцитоз клеток, экспрессирующих CD47, в большей степени по сравнению с антигенсвязывающей единицей, имеющей аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 242–243. В некоторых аспектах антигенсвязывающая единица индуцирует фагоцитоз клеток, экспрессирующих CD47, в большей степени по сравнению с антигенсвязывающей единицей, имеющей аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 244–245. В некоторых аспектах антигенсвязывающая единица проявляет более высокую аффинность связывания с CD47 по сравнению с антигенсвязывающей единицей, имеющей аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 240–241, при оценке в анализе связывания in vitro с использованием клеток, экспрессирующих CD47. В некоторых аспектах антигенсвязывающая единица проявляет более высокую аффинность связывания с CD47 по сравнению с антигенсвязывающей единицей, имеющей аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 242–243, при оценке в анализе связывания in vitro с использованием клеток, экспрессирующих CD47. В некоторых аспектах антигенсвязывающая единица проявляет более высокую аффинность связывания с CD47 по сравнению с антигенсвязывающей единицей, имеющей аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 244–245, при оценке в анализе связывания in vitro с использованием клеток, экспрессирующих CD47. В некоторых аспектах гемагглютинация, индуцированная при контакте эритроцитов с антигенсвязывающей единицей, по меньшей мере в 1 раз меньше по сравнению с гемагглютинацией, индуцированной антигенсвязывающей единицей, имеющей аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 240–241. В некоторых аспектах гемагглютинация, индуцированная при контакте эритроцитов с антигенсвязывающей единицей, по меньшей мере в 1 раз меньше по сравнению с гемагглютинацией, индуцированной антигенсвязывающей единицей, имеющей аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 242–243. В некоторых аспектах гемагглютинация, индуцированная при контакте эритроцитов с антигенсвязывающей единицей, по меньшей мере в 1 раз меньше по сравнению с гемагглютинацией, индуцированной антигенсвязывающей единицей, имеющей аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 244–245. В некоторых аспектах CDR легкой цепи содержит LC–CDR1, LC–CDR2 и LC–CDR3; и CDR тяжелой цепи содержит HC–CDR1, HC–CDR2 и HC–CDR3; где указанные LC–CDR1, LC–CDR2 и LC –CDR3, каждая, имеют последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1–22 и 162–190; и где указанные HC–CDR1, HC–CDR2, HC–CDR3, каждая, имеют последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 23–44 и 191–237.В некоторых аспектах указанная CDR легкой цепи содержит аминокислотные последовательности, выбранные из следующих комбинаций последовательностей LC–CDR: a) SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 8 и SEQ ID NO: 21; b) SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 10 и SEQ ID NO: 16; c) SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 9 и SEQ ID NO: 17; d) SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 12 и SEQ ID NO: 20; e) SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 11 и SEQ ID NO: 15; f) SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 13 и SEQ ID NO: 22; g) SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 14 и SEQ ID NO: 19; h) SEQ ID NO: 169, SEQ ID NO: 173 и SEQ ID NO: 180; i) SEQ ID NO: 168, SEQ ID NO: 173 и SEQ ID NO: 181; k) SEQ ID NO: 165, SEQ ID NO: 177 и SEQ ID NO: 182; l) SEQ ID NO: 163, SEQ ID NO: 178 и SEQ ID NO: 183; m) SEQ ID NO: 163, SEQ ID NO: 172 и SEQ ID NO: 184; n) SEQ ID NO: 163, SEQ ID NO: 178 и SEQ ID NO: 185; o) SEQ ID NO: 163, SEQ ID NO: 178 и SEQ ID NO: 186; p) SEQ ID NO: 163, SEQ ID NO: 170 и SEQ ID NO: 187; q) SEQ ID NO: 163, SEQ ID NO: 174 и SEQ ID NO: 187; r) SEQ ID NO: 164, SEQ ID NO: 175 и SEQ ID NO: 187; s) SEQ ID NO: 162, SEQ ID NO: 178 и SEQ ID NO: 187; t) SEQ ID NO: 163, SEQ ID NO: 178 и SEQ ID NO: 187; u) SEQ ID NO: 164, SEQ ID NO: 178 и SEQ ID NO: 187; v) SEQ ID NO: 163, SEQ ID NO: 179 и SEQ ID NO: 187; w) SEQ ID NO: 166, SEQ ID NO: 176 и SEQ ID NO: 188; x) SEQ ID NO: 167, SEQ ID NO: 171 и SEQ ID NO: 189; и y) SEQ ID NO: 167, SEQ ID NO: 171 и SEQ ID NO: 190. В некоторых аспектах указанная CDR тяжелой цепи включает аминокислотные последовательности, выбранные из следующих комбинаций последовательностей HC–CDR: a) SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 32 и SEQ ID NO: 38; b) SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 35 и SEQ ID NO: 39; c) SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 34 и SEQ ID NO: 40; d) SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 33 и SEQ ID NO: 43; e) SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 30 и SEQ ID NO: 42; f) SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 36 и SEQ ID NO: 41; g) SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 31 и SEQ ID NO: 44; h) SEQ ID NO: 191, SEQ ID NO: 207 и SEQ ID NO: 226; i) SEQ ID NO: 192, SEQ ID NO: 222 и SEQ ID NO: 237; j) SEQ ID NO: 193, SEQ ID NO: 219 и SEQ ID NO: 233; k) SEQ ID NO: 194, SEQ ID NO: 220 и SEQ ID NO: 228; l) SEQ ID NO: 195, SEQ ID NO: 221 и SEQ ID NO: 229; m) SEQ ID NO: 196, SEQ ID NO: 214 и SEQ ID NO: 225; n) SEQ ID NO: 197, SEQ ID NO: 212 и SEQ ID NO: 232; o) SEQ ID NO: 197, SEQ ID NO: 213 и SEQ ID NO: 232; p) SEQ ID NO: 198, SEQ ID NO: 210 и SEQ ID NO: 224; q) SEQ ID NO: 198, SEQ ID NO: 208 и SEQ ID NO: 234; r) SEQ ID NO: 198, SEQ ID NO: 210 и SEQ ID NO: 234; s) SEQ ID NO: 199, SEQ ID NO: 210 и SEQ ID NO: 224; t) SEQ ID NO: 200, SEQ ID NO: 222 и SEQ ID NO: 230; u) SEQ ID NO: 201, SEQ ID NO: 210 и SEQ ID NO: 224; v) SEQ ID NO: 201, SEQ ID NO: 216 и SEQ ID NO: 224; w) SEQ ID NO: 202, SEQ ID NO: 210 и SEQ ID NO: 234; x) SEQ ID NO: 203, SEQ ID NO: 218 и SEQ ID NO: 227; y) SEQ ID NO: 204, SEQ ID NO: 211 и SEQ ID NO: 224; z) SEQ ID NO: 204, SEQ ID NO: 217 и SEQ ID NO: 224; аа) SEQ ID NO: 204, SEQ ID NO: 214 и SEQ ID NO: 225; bb) SEQ ID NO: 204, SEQ ID NO: 215 и SEQ ID NO: 235; cc) SEQ ID NO: 204, SEQ ID NO: 214 и SEQ ID NO: 236; dd) SEQ ID NO: 205, SEQ ID NO: 209 и SEQ ID NO: 224; ee) SEQ ID NO: 205, SEQ ID NO: 210 и SEQ ID NO: 224; ff) SEQ ID NO: 205, SEQ ID NO: 223 и SEQ ID NO: 231; и gg) SEQ ID NO: 206, SEQ ID NO: 210 и SEQ ID NO: 224. В некоторых аспектах антигенсвязывающая единица представляет собой моноклональное антитело, гуманизированное антитело или химерное антитело. В некоторых аспектах антигенсвязывающей единицей является sFc, Fv, Fab или (Fab)2. В некоторых аспектах антигенсвязывающая единица формулы изобретения конкурирует за связывание с эпитопом, распознаваемым антигенсвязывающей единицей, имеющей аминокислотные последовательности 1) SEQ ID NO: 240–241, 2) SEQ ID NO: 242–243 или 3) SEQ ID NO: 244–245.
В настоящем описании раскрыты антигенсвязывающие единицы, содержащие CDR легкой цепи и CDR тяжелой цепи, где антигенсвязывающая единица (а) специфически связывается с CD47 с более высокой аффинностью связывания, чем у эталонной антигенсвязывающей единицы, и предотвращает связывание CD47 с SIRPα; и (b) не обладает способностью индуцировать существенную гемагглютинацию при смешивании с эритроцитами в диапазоне концентраций антигенсвязывающей единицы от 1,5 нг/мл до 30 мкг/мл, где эталонная антигенсвязывающая единица имеет аминокислотные последовательности 1) SEQ ID NO: 240–241, 2) SEQ ID NO: 242–243 или 3) SEQ ID NO: 244–245. В некоторых аспектах CDR легкой цепи содержит LC–CDR1, LC–CDR2 и LC–CDR3; и CDR тяжелой цепи содержит HC–CDR1, HC–CDR2 и HC–CDR3; где указанные LC–CDR1, LC–CDR2 и LC–DR3, каждая, имеют последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1–22 и 162–190; и где указанные HC–CDR1, HC–CDR2, HC–CDR3, каждая, имеют последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 23–44 и 191–237. В некоторых аспектах указанная CDR легкой цепи содержит аминокислотные последовательности, выбранные из следующих комбинаций последовательностей LC–CDR: a) SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 8 и SEQ ID NO: 21; b) SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 10 и SEQ ID NO: 16; c) SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 9 и SEQ ID NO: 17; d) SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 12 и SEQ ID NO: 20; e) SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 11 и SEQ ID NO: 15; f) SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 13 и SEQ ID NO: 22; g) SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 14 и SEQ ID NO: 19; h) SEQ ID NO: 169, SEQ ID NO: 173 и SEQ ID NO: 180; i) SEQ ID NO: 168, SEQ ID NO: 173 и SEQ ID NO: 181; k) SEQ ID NO: 165, SEQ ID NO: 177 и SEQ ID NO: 182; l) SEQ ID NO: 163, SEQ ID NO: 178 и SEQ ID NO: 183; m) SEQ ID NO: 163, SEQ ID NO: 172 и SEQ ID NO: 184; n) SEQ ID NO: 163, SEQ ID NO: 178 и SEQ ID NO: 185; o) SEQ ID NO: 163, SEQ ID NO: 178 и SEQ ID NO: 186; p) SEQ ID NO: 163, SEQ ID NO: 170 и SEQ ID NO: 187; q) SEQ ID NO: 163, SEQ ID NO: 174 и SEQ ID NO: 187; r) SEQ ID NO: 164, SEQ ID NO: 175 и SEQ ID NO: 187; s) SEQ ID NO: 162, SEQ ID NO: 178 и SEQ ID NO: 187; t) SEQ ID NO: 163, SEQ ID NO: 178 и SEQ ID NO: 187; u) SEQ ID NO: 164, SEQ ID NO: 178 и SEQ ID NO: 187; v) SEQ ID NO: 163, SEQ ID NO: 179 и SEQ ID NO: 187; w) SEQ ID NO: 166, SEQ ID NO: 176 и SEQ ID NO: 188; x) SEQ ID NO: 167, SEQ ID NO: 171 и SEQ ID NO: 189; и y) SEQ ID NO: 167, SEQ ID NO: 171 и SEQ ID NO: 190. В некоторых аспектах указанная CDR тяжелой цепи включает аминокислотные последовательности, выбранные из следующих комбинаций последовательностей HC–CDR: a) SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 32 и SEQ ID NO: 38; b) SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 35 и SEQ ID NO: 39; c) SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 34 и SEQ ID NO: 40; d) SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 33 и SEQ ID NO: 43; e) SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 30 и SEQ ID NO: 42; f) SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 36 и SEQ ID NO: 41; g) SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 31 и SEQ ID NO: 44; h) SEQ ID NO: 191, SEQ ID NO: 207 и SEQ ID NO: 226; i) SEQ ID NO: 192, SEQ ID NO: 222 и SEQ ID NO: 237; j) SEQ ID NO: 193, SEQ ID NO: 219 и SEQ ID NO: 233; k) SEQ ID NO: 194, SEQ ID NO: 220 и SEQ ID NO: 228; l) SEQ ID NO: 195, SEQ ID NO: 221 и SEQ ID NO: 229; m) SEQ ID NO: 196, SEQ ID NO: 214 и SEQ ID NO: 225; n) SEQ ID NO: 197, SEQ ID NO: 212 и SEQ ID NO: 232; o) SEQ ID NO: 197, SEQ ID NO: 213 и SEQ ID NO: 232; p) SEQ ID NO: 198, SEQ ID NO: 210 и SEQ ID NO: 224; q) SEQ ID NO: 198, SEQ ID NO: 208 и SEQ ID NO: 234; r) SEQ ID NO: 198, SEQ ID NO: 210 и SEQ ID NO: 234; s) SEQ ID NO: 199, SEQ ID NO: 210 и SEQ ID NO: 224; t) SEQ ID NO: 200, SEQ ID NO: 222 и SEQ ID NO: 230; u) SEQ ID NO: 201, SEQ ID NO: 210 и SEQ ID NO: 224; v) SEQ ID NO: 201, SEQ ID NO: 216 и SEQ ID NO: 224; w) SEQ ID NO: 202, SEQ ID NO: 210 и SEQ ID NO: 234; x) SEQ ID NO: 203, SEQ ID NO: 218 и SEQ ID NO: 227; y) SEQ ID NO: 204, SEQ ID NO: 211 и SEQ ID NO: 224; z) SEQ ID NO: 204, SEQ ID NO: 217 и SEQ ID NO: 224; аа) SEQ ID NO: 204, SEQ ID NO: 214 и SEQ ID NO: 225; bb) SEQ ID NO: 204, SEQ ID NO: 215 и SEQ ID NO: 235; cc) SEQ ID NO: 204, SEQ ID NO: 214 и SEQ ID NO: 236; dd) SEQ ID NO: 205, SEQ ID NO: 209 и SEQ ID NO: 224; ee) SEQ ID NO: 205, SEQ ID NO: 210 и SEQ ID NO: 224; ff) SEQ ID NO: 205, SEQ ID NO: 223 и SEQ ID NO: 231; и gg) SEQ ID NO: 206, SEQ ID NO: 210 и SEQ ID NO: 224. В некоторых аспектах антигенсвязывающая единица представляет собой моноклональное антитело, гуманизированное антитело, химерное антитело или биспецифичное антитело. В некоторых аспектах антигенсвязывающая единица представляет собой sFc, Fv, Fab или (Fab)2.
В настоящем описании раскрыты антигенсвязывающие единицы, содержащие CDR легкой цепи и CDR тяжелой цепи, где антигенсвязывающая единица (а) специфически связывается с CD47; и (b) при связывании с CD47 в большей степени индуцирует фагоцитоз клеток, экспрессирующих CD47, по сравнению с эталонной антигенсвязывающей единицей, где эталонная антигенсвязывающая единица имеет аминокислотные последовательности 1) SEQ ID NO: 240–241, 2) SEQ ID NO: 242–243 или 3) SEQ ID NO: 244–245. В некоторых аспектах антигенсвязывающая единица индуцирует фагоцитоз клеток, экспрессирующих CD47, в большей степени по сравнению с антигенсвязывающей единицей, имеющей аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 240–241. В некоторых аспектах антигенсвязывающая единица индуцирует фагоцитоз клеток, экспрессирующих CD47, в большей степени по сравнению с антигенсвязывающей единицей, имеющей аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 242–243. В некоторых аспектах антигенсвязывающая единица индуцирует фагоцитоз клеток, экспрессирующих CD47, в большей степени по сравнению с антигенсвязывающей единицей, имеющей аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 244–245. В некоторых аспектах CDR легкой цепи содержит LC–CDR1, LC–CDR2 и LC–CDR3; и CDR тяжелой цепи содержит HC–CDR1, HC–CDR2 и HC–CDR3; где указанные LC–CDR1, LC–CDR2 и LC –CDR3, каждая, имеют последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1–22 и 162–190; и где указанные HC–CDR1, HC–CDR2, HC–CDR3, каждая, имеют последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 23–44 и 191–237. В некоторых аспектах указанная CDR легкой цепи содержит аминокислотные последовательности, выбранные из следующих комбинаций последовательностей LC–CDR: a) SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 8 и SEQ ID NO: 21; b) SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 10 и SEQ ID NO: 16; c) SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 9 и SEQ ID NO: 17; d) SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 12 и SEQ ID NO: 20; e) SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 11 и SEQ ID NO: 15; f) SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 13 и SEQ ID NO: 22; g) SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 14 и SEQ ID NO: 19; h) SEQ ID NO: 169, SEQ ID NO: 173 и SEQ ID NO: 180; i) SEQ ID NO: 168, SEQ ID NO: 173 и SEQ ID NO: 181; k) SEQ ID NO: 165, SEQ ID NO: 177 и SEQ ID NO: 182; l) SEQ ID NO: 163, SEQ ID NO: 178 и SEQ ID NO: 183; m) SEQ ID NO: 163, SEQ ID NO: 172 и SEQ ID NO: 184; n) SEQ ID NO: 163, SEQ ID NO: 178 и SEQ ID NO: 185; o) SEQ ID NO: 163, SEQ ID NO: 178 и SEQ ID NO: 186; p) SEQ ID NO: 163, SEQ ID NO: 170 и SEQ ID NO: 187; q) SEQ ID NO: 163, SEQ ID NO: 174 и SEQ ID NO: 187; r) SEQ ID NO: 164, SEQ ID NO: 175 и SEQ ID NO: 187; s) SEQ ID NO: 162, SEQ ID NO: 178 и SEQ ID NO: 187; t) SEQ ID NO: 163, SEQ ID NO: 178 и SEQ ID NO: 187; u) SEQ ID NO: 164, SEQ ID NO: 178 и SEQ ID NO: 187; v) SEQ ID NO: 163, SEQ ID NO: 179 и SEQ ID NO: 187; w) SEQ ID NO: 166, SEQ ID NO: 176 и SEQ ID NO: 188; x) SEQ ID NO: 167, SEQ ID NO: 171 и SEQ ID NO: 189; и y) SEQ ID NO: 167, SEQ ID NO: 171 и SEQ ID NO: 190. В некоторых аспектах указанная CDR тяжелой цепи содержит аминокислотные последовательности, выбранные из следующих комбинаций последовательностей HC–CDR: a) SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 32 и SEQ ID NO: 38; b) SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 35 и SEQ ID NO: 39; c) SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 34 и SEQ ID NO: 40; d) SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 33 и SEQ ID NO: 43; e) SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 30 и SEQ ID NO: 42; f) SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 36 и SEQ ID NO: 41; g) SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 31 и SEQ ID NO: 44; h) SEQ ID NO: 191, SEQ ID NO: 207 и SEQ ID NO: 226; i) SEQ ID NO: 192, SEQ ID NO: 222 и SEQ ID NO: 237; j) SEQ ID NO: 193, SEQ ID NO: 219 и SEQ ID NO: 233; k) SEQ ID NO: 194, SEQ ID NO: 220 и SEQ ID NO: 228; l) SEQ ID NO: 195, SEQ ID NO: 221 и SEQ ID NO: 229; m) SEQ ID NO: 196, SEQ ID NO: 214 и SEQ ID NO: 225; n) SEQ ID NO: 197, SEQ ID NO: 212 и SEQ ID NO: 232; o) SEQ ID NO: 197, SEQ ID NO: 213 и SEQ ID NO: 232; p) SEQ ID NO: 198, SEQ ID NO: 210 и SEQ ID NO: 224; q) SEQ ID NO: 198, SEQ ID NO: 208 и SEQ ID NO: 234; r) SEQ ID NO: 198, SEQ ID NO: 210 и SEQ ID NO: 234; s) SEQ ID NO: 199, SEQ ID NO: 210 и SEQ ID NO: 224; t) SEQ ID NO: 200, SEQ ID NO: 222 и SEQ ID NO: 230; u) SEQ ID NO: 201, SEQ ID NO: 210 и SEQ ID NO: 224; v) SEQ ID NO: 201, SEQ ID NO: 216 и SEQ ID NO: 224; w) SEQ ID NO: 202, SEQ ID NO: 210 и SEQ ID NO: 234; x) SEQ ID NO: 203, SEQ ID NO: 218 и SEQ ID NO: 227; y) SEQ ID NO: 204, SEQ ID NO: 211 и SEQ ID NO: 224; z) SEQ ID NO: 204, SEQ ID NO: 217 и SEQ ID NO: 224; аа) SEQ ID NO: 204, SEQ ID NO: 214 и SEQ ID NO: 225; bb) SEQ ID NO: 204, SEQ ID NO: 215 и SEQ ID NO: 235; cc) SEQ ID NO: 204, SEQ ID NO: 214 и SEQ ID NO: 236; dd) SEQ ID NO: 205, SEQ ID NO: 209 и SEQ ID NO: 224; ee) SEQ ID NO: 205, SEQ ID NO: 210 и SEQ ID NO: 224; ff) SEQ ID NO: 205, SEQ ID NO: 223 и SEQ ID NO: 231; и gg) SEQ ID NO: 206, SEQ ID NO: 210 и SEQ ID NO: 224. В некоторых аспектах антигенсвязывающая единица представляет собой моноклональное антитело, гуманизированное антитело, химерное антитело или биспецифичное антитело. В некоторых аспектах антигенсвязывающая единица представляет собой sFc, Fv, Fab или (Fab)2.
В настоящем описании раскрыты антигенсвязывающие единицы, содержащие CDR легкой цепи и CDR тяжелой цепи, где CDR легкой цепи содержит LC–CDR1, LC–CDR2 и LC–CDR3; и CDR тяжелой цепи содержит HC–CDR1, HC–CDR2 и HC–CDR3, где указанные LC–CDR1, LC–CDR2 и LC–CDR3, каждая, содержат последовательность, имеющую по меньшей мере 80% гомологии последовательности с последовательностью, выбранной из группы, состоящая из SEQ ID NO: 1–22 и 162–190, и где указанные HC–CDR1, HC–CDR2 и HC–CDR3, каждая, содержат последовательность, имеющую по меньшей мере 80% гомологию последовательности с последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 23–44 и 191–237. В некоторых аспектах указанная CDR легкой цепи и указанная CDR тяжелой цепи содержат, соответственно, LC–CDR и HC–CDR, выбранные из группы, состоящей из: a) SEQ ID NO: 54 и SEQ ID NO: 55; b) SEQ ID NO: 65 и SEQ ID NO: 63; c) SEQ ID NO: 58 и SEQ ID NO: 64; d) SEQ ID NO: 68 и SEQ ID NO: 60; e) SEQ ID NO: 66 и SEQ ID NO: 61; f) SEQ ID NO: 57 и SEQ ID NO: 62; g) SEQ ID NO: 56 и SEQ ID NO: 59; h) SEQ ID NO: 85 и SEQ ID NO: 86; i) SEQ ID NO: 87 и SEQ ID NO: 88; j) SEQ ID NO: 89 и SEQ ID NO: 90; k) SEQ ID NO: 91 и SEQ ID NO: 92; l) SEQ ID NO: 93 и SEQ ID NO: 94; m) SEQ ID NO: 95 и SEQ ID NO: 96; n) SEQ ID NO: 97 и SEQ ID NO: 98; o) SEQ ID NO: 99 и SEQ ID NO: 100; p) SEQ ID NO: 101 и SEQ ID NO: 102; q) SEQ ID NO: 103 и SEQ ID NO: 104; r) SEQ ID NO: 105 и SEQ ID NO: 106; s) SEQ ID NO: 107 и SEQ ID NO: 108; t) SEQ ID NO: 109 и SEQ ID NO: 110; u) SEQ ID NO: 111 и SEQ ID NO: 112; v) SEQ ID NO: 113 и SEQ ID NO: 114; w) SEQ ID NO: 115 и SEQ ID NO: 116; x) SEQ ID NO: 117 и SEQ ID NO: 118; y) SEQ ID NO: 119 и SEQ ID NO: 120; z) SEQ ID NO: 121 и SEQ ID NO: 122; аа) SEQ ID NO: 123 и SEQ ID NO: 124; bb) SEQ ID NO: 125 и SEQ ID NO: 126; cc) SEQ ID NO: 127 и SEQ ID NO: 128; dd) SEQ ID NO: 129 и SEQ ID NO: 130; ee) SEQ ID NO: 131 и SEQ ID NO: 132; ff) SEQ ID NO: 133 и SEQ ID NO: 134; gg) SEQ ID NO: 135 и SEQ ID NO: 136; hh) SEQ ID NO: 137 и SEQ ID NO: 138; ii) SEQ ID NO: 139 и SEQ ID NO: 140; jj) SEQ ID NO: 141 и SEQ ID NO: 142; kk) SEQ ID NO: 143 и SEQ ID NO: 144; ll) SEQ ID NO: 145 и SEQ ID NO: 146; mm) SEQ ID NO: 147 и SEQ ID NO: 148; nn) SEQ ID NO: 238 и SEQ ID NO: 239 oo) SEQ ID NO: 47 и SEQ ID NO: 70; pp) SEQ ID NO: 49 и SEQ ID NO: 73; qq) SEQ ID NO: 71 и SEQ ID NO: 51; rr) SEQ ID NO: 50 и SEQ ID NO: 74; ss) SEQ ID NO: 45 и SEQ ID NO: 53; tt) SEQ ID NO: 67 и SEQ ID NO: 72; uu) SEQ ID NO: 69 и SEQ ID NO: 52; vv) SEQ ID NO: 46 и SEQ ID NO: 77; ww) SEQ ID NO: 46 и SEQ ID NO: 78; xx) SEQ ID NO: 46 и SEQ ID NO: 79; yy) SEQ ID NO: 48 и SEQ ID NO: 75; zz) SEQ ID NO: 48 и SEQ ID NO: 76; ааа) SEQ ID NO: 48 и SEQ ID NO: 80 и bbb) любую пару последовательностей, перечисленных в Таблице 1. В некоторых аспектах антигенсвязывающая единица представляет собой моноклональное антитело, гуманизированное антитело, химерное антитело или биспецифичное антитело. В некоторых аспектах антигенсвязывающая единица представляет собой sFc, Fv, Fab или (Fab)2.
В настоящем описании раскрыты фармацевтические композиции, содержащие любую одну из антигенсвязывающих единиц, раскрытых в настоящем описании, и фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество.
В настоящем описании раскрыты выделенные нуклеиновые кислоты, кодирующие любую одну из антигенсвязывающих единиц, раскрытых в настоящем описании.
В настоящем описании раскрыты векторы, содержащие последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую любую из антигенсвязывающих единиц, раскрытых в настоящем описании.
В настоящем описании раскрыты клетки–хозяева, экспрессирующие любую из антигенсвязывающих единиц, раскрытых в настоящем описании.
В настоящем описании раскрыты клетки–хозяева, содержащие нуклеиновую кислоту, кодирующую любую из антигенсвязывающих единиц, раскрытых в настоящем описании.
В настоящем описании раскрыты способы получения любой из антигенсвязывающих единиц, раскрытых в настоящем описании, включающие: культивирование любой из клеток–хозяев, раскрытых в настоящем описании, при условиях, подходящих для экспрессии антигенсвязывающей единицы; и выделение указанной антигенсвязывающей единицы, экспрессируемой клеткой–хозяином.
В настоящем описании раскрыты способы индукции фагоцитоза клеток, экспрессирующих CD47, причем указанный способ включает контактирование клетки с любой из антигенсвязывающих единиц, раскрытых в настоящем описании. В некоторых аспектах фагоцитоз клеток, экспрессирующих CD47, происходит с эффективностью по меньшей мере 5%. В некоторых аспектах антигенсвязывающая единица не вызывает существенной гемагглютинации. В некоторых аспектах клетка представляет собой опухолевую клетку. В некоторых аспектах клетка представляет собой опухолевую клетку, отличную от клетки лимфомы и лейкоза.
В настоящем описании раскрыты способы индукции фагоцитоза клеток, экспрессирующих CD47, у человека, причем указанный способ включает введение человеку любой из фармацевтических композиций, раскрытых в настоящем описании. В некоторых аспектах фагоцитоз клеток, экспрессирующих CD47, происходит с эффективностью по меньшей мере 5%. В некоторых аспектах антигенсвязывающая единица не вызывает существенной гемагглютинации. В некоторых аспектах клетка представляет собой опухолевую клетку. В некоторых аспектах клетка представляет собой опухолевую клетку, отличную от клетки лимфомы и лейкоза. В некоторых аспектах клетка представляет собой гематологическую опухолевую клетку или клетку солидной опухоли.
В настоящем описании раскрыты способы лечения злокачественного новообразования у пациента, нуждающегося в этом, причем указанный способ включает введение пациенту эффективного количества любой из антигенсвязывающих единиц, раскрытых в настоящем описании. В некоторых аспектах способ дополнительно включает введение терапевтического антитела. В некоторых аспектах терапевтическое антитело представляет собой антитело против CD20. В некоторых аспектах лечение злокачественного новообразования включает уменьшение объема опухоли. В некоторых аспектах объем опухоли уменьшается в большей степени по сравнению с антигенсвязывающей единицей, имеющей аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 240 и 241, или SEQ ID NO: 242 и 243, или SEQ ID NO: 244, и 245.
В настоящем описании раскрыты способы лечения злокачественного новообразования у пациента, нуждающегося в этом, причем указанный способ включает введение пациенту эффективного количества любой одной из фармацевтических композиций, раскрытых в настоящем описании. В некоторых аспектах злокачественное новообразование представляет собой гемобластоз или солидную опухоль. В некоторых аспектах способ дополнительно включает введение терапевтического антитела. В некоторых аспектах терапевтическое антитело представляет собой антитело против CD20. В некоторых аспектах лечение злокачественного новообразования включает уменьшение объема опухоли. В некоторых аспектах объем опухоли уменьшается в большей степени по сравнению с антигенсвязывающей единицей, имеющей аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 240 и 241, или SEQ ID NO: 242 и 243, или SEQ ID NO: 244, и 245.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ
Фигура 1 изображает данные из примера эксперимента по фагоцитозу.
Фигуры 2А–2В изображают данные из примера эксперимента по фагоцитозу.
Фигуры 3А–3В изображают данные из примера эксперимента по связыванию антител.
Фигура 4 изображает данные из примера эксперимента по фагоцитозу.
Фигура 5 изображает данные из примера эксперимента по фагоцитозу.
Фигура 6 изображает данные из примера эксперимента по связыванию эритроцитов.
Фигуры 7А–7В изображают данные из примера эксперимента по гемагглютинации.
Фигура 8 изображает данные из примера эксперимента по гемагглютинации.
Фигура 9 изображает данные из примера эксперимента по связыванию антител.
Фиг.10 изображает данные из примера эксперимента по нейтрализации антител.
Фигура 11 изображает данные из примера эксперимента по фагоцитозу.
Фигуры 12А, 12В и 12С изображают данные из примера эксперимента по связыванию антител.
Фигуры 13А, 13В, 13С и 13D изображают данные из примера эксперимента по связыванию антител.
Фигуры 14А–14В изображают данные из примера эксперимента по связыванию антител.
Фигура 15А – показывает данные из примера эксперимента по связыванию антител.
Фигуры 15В и 15С изображают данные из примера эксперимента по блокировке.
Фигура 16А изображает данные из примера анализа связывания.
Фигура 16В изображает данные из примера анализа блокировки.
Фигура 17 изображает данные из примера анализа гемагглютинации.
Фигура 18 изображает данные из примера анализа связывания.
Фигуры 19А, 19В и 19С изображают данные из примеров анализа фагоцитоза.
Фигуры 20А, 20В, 20С и 20D изображают данные из примеров анализов связывания эритроцитов и тромбоцитов.
На рисунке 21 показаны данные из эксперимента по ксенотрансплантации.
Фигура 22А изображает данные из примера анализа блокировки.
Фигура 22В изображает данные из примера анализа связывания RBC.
Фигура 22С изображает данные из примера анализа связывания тромбоцитов.
Фигура 22D изображает данные из примера анализа гемагглютинации.
Рисунок 23 изображает данные из примера эксперимента по ксенотрансплантации.
Фигура 24 изображает данные из примера эксперимента по ксенотрансплантации.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ РАСКРЫТИЯ
Хотя предпочтительные варианты осуществления настоящего изобретения были показаны и описаны в настоящем документе, специалистам в данной области техники будет очевидно, что такие варианты осуществления представлены исключительно в качестве примера. Специалистам в данной области техники будут понятны многочисленные вариации, изменения и замены без отступления от изобретения. Следует понимать, что различные альтернативы вариантам осуществления изобретения, описанным в настоящем документе, могут быть использованы при практическом применении изобретения. Предполагается, что нижеследующая формула изобретения определяет объем изобретения и что таким образом охватываются способы и структуры в пределах объема этой формулы изобретения и их эквивалентов.
Когда предлагается диапазон значений, подразумевается, что каждое промежуточное значение, с точностью до десятой доли нижнего предела, если контекст явно не предписывает иное, между верхним и нижним пределом этого диапазона и любым другим установленным или промежуточным значением в указанном диапазоне находится в пределах изобретения. Верхний и нижний пределы этих меньших диапазонов могут быть независимо включены в меньшие диапазоны и также охватываются заявленным объектом с учетом любого специально исключенного предела в указанном диапазоне. Если указанный диапазон включает один или оба из пределов, диапазоны, исключающие один или оба из этих включенных пределов, также включены в изобретение.
Термины «полипептид», «пептид» и «белок» используются в настоящем описании взаимозаменяемо для обозначения полимеров аминокислот любой длины. Полимер может быть линейным, циклическим или разветвленным, он может содержать модифицированные аминокислоты, и он может прерываться не аминокислотами. Термины также охватывают аминокислотные полимеры, которые были модифицированы, например, посредством сульфатирования, гликозилирования, липидирования, ацетилирования, фосфорилирования, йодирования, метилирования, окисления, протеолитического процессинга, фосфорилирования, пренилирования, рацемизации, селеноилирования, опосредованного транспортной–РНК добавления аминокислот к белкам, такого как аргинилирование, убиквитинирование или любые другие манипуляции, такие как конъюгирование с метящим компонентом. Используемый в настоящем описании термин «аминокислота» относится к природным и/или неприродным или синтетическим аминокислотам, включая глицин и оптические изомеры D или L, а также аналоги аминокислот и пептидомиметики. Полипептидная или аминокислотная последовательность, «полученная из» указанного белка, относится к происхождению полипептида. Предпочтительно полипептид имеет аминокислотную последовательность, которая по существу идентична последовательности полипептида, кодируемого в последовательности, или ее части, где часть состоит, по меньшей мере, из 10–20 аминокислот или, по меньшей мере, из 20–30 аминокислот, или по меньшей мере 30–50 аминокислот или которые иммунологически идентифицируются с полипептидом, кодируемым в последовательности. Эта терминология также включает полипептид, экспрессируемый из обозначенной последовательности нуклеиновой кислоты.
Используемый в настоящем описании термин «антигенсвязывающая единица» относится к молекуле иммуноглобулина и иммунологически активным частям молекулы иммуноглобулина, то есть к молекуле, которая содержит антигенсвязывающий сайт, который специфически связывается («иммунореактивен») с антигеном. В термин «антигенсвязывающая единица» также включены молекулы иммуноглобулинов различного происхождения, включая беспозвоночных и позвоночных. Структурно самое простое встречающееся в природе антитело (например, IgG) содержит четыре полипептидные цепи, две тяжелые (Н) цепи и две легкие (L) цепи, связанные между собой дисульфидными связями. Иммуноглобулины представляют собой большое семейство молекул, которые включают несколько типов молекул, таких как IgD, IgG, IgA, IgM и IgE. Термин «молекула иммуноглобулина» включает, например, гибридные антитела или измененные антитела и их фрагменты. Было показано, что антигенсвязывающая функция антитела может выполняться фрагментами встречающегося в природе антитела. Эти фрагменты вместе называют «антигенсвязывающими единицами». Термин «антигенсвязывающая единица» также охватывает любую молекулярную структуру, содержащую полипептидную цепь, которая имеет специфическую форму, которая находит соответствие и распознает эпитоп, где одно или более нековалентных связывающих взаимодействий стабилизируют комплекс между молекулярной структурой и эпитопом.
Антигенсвязывающая единица «специфически связывается» или «иммунореактивна» с антигеном, если она связывается с большей аффинностью или авидностью, чем с другими эталонными антигенами, включая полипептиды или другие вещества.
«Антиген» в контексте настоящего описания означает вещество, которое распознается и связывается конкретно антигенсвязывающей единицей. Антигены могут включать пептиды, белки, гликопротеины, полисахариды и липиды; их части и их комбинации. Неограничивающий типичный антиген включал CD47 человека, мыши и другие его гомологи. Другим примером антигена является SIRPα человека, мыши и другие его гомологи.
«Химерный» белок содержит, по меньшей мере, один слитый полипептид, содержащий области в положении, отличном от того, что встречается в природе. Области обычно могут существовать в отдельных белках и объединяться в слитый полипептид; или они обычно могут существовать в одном и том же белке, но располагаются в новом расположении в слитом полипептиде. Химерный белок может быть создан, например, путем химического синтеза или путем создания и трансляции полинуклеотида, в котором пептидные области кодируются в желаемом соотношении.
«Домен» относится к части белка, которая физически или функционально отличается от других частей белка или пептида. Физически определенные домены включают те аминокислотные последовательности, которые являются исключительно гидрофобными или гидрофильными, такие как те последовательности, которые связаны с мембраной или цитоплазмой. Домены также могут быть определены внутренними гомологиями, которые возникают, например, в результате дупликации генов. Функционально определенные домены имеют отличную биологическую функцию(и). Например, лигандсвязывающий домен рецептора является тем доменом, который связывается с лигандом. Антигенсвязывающий домен относится к части антигенсвязывающей единицы или антитела, которая связывается с антигеном. Функционально определенные домены не должны кодироваться смежными аминокислотными последовательностями. Функционально определенные домены могут содержать один или более физически определенных доменов. Например, рецепторы обычно делятся на внеклеточный лигандсвязывающий домен, трансмембранный домен и внутриклеточный эффекторный домен.
«Клетка–хозяин» включает индивидуальную клетку или клеточную культуру, которая может быть или была реципиентом для рассматриваемых векторов. Клетки–хозяева включают потомство одной клетки–хозяина. Потомство необязательно может быть полностью идентичным (по морфологии или по комплементарности геномной ДНК) исходной родительской клетке из–за естественной, случайной или преднамеренной мутации. Клетка–хозяин включает клетки, трансфецированные in vivo вектором по настоящему изобретению. «Клетка–хозяин» может относиться к прокариотической клетке, эукариотической клетке или клеточной линии, культивируемой как одноклеточный объект, который может быть использован или использовался в качестве реципиента для рекомбинантного вектора или других полинуклеотидов для переноса и включает потомство исходной клетки, которая была трансфецирована. Понятно, что потомство отдельной клетки необязательно может быть полностью идентичным по морфологии или по геномной ДНК или по полной комплементарности ДНК как у исходного родителя вследствие естественной, случайной или преднамеренной мутации.
«Клеточная линия» или «клеточная культура» обозначает бактериальные, растительные, клетки насекомых или клетки высших эукариот, выращенные или поддерживаемые in vitro. Потомство клетки может быть не полностью идентично (морфологически, генотипически или фенотипически) родительской клетке.
Используемый в настоящем описании термин «выделенный» означает отделенный от компонентов, клеточных и других, с которыми полинуклеотид, пептид, полипептид, белок, антитело или их фрагменты обычно связаны в природе. Как очевидно специалистам в данной области техники, не встречающиеся в природе полинуклеотид, пептид, полипептид, белок, антитело или их фрагменты не требуют «выделения», чтобы отличать его от естественного аналога. Кроме того, «концентрированный», «отделенный» или «разбавленный» полинуклеотид, пептид, полипептид, белок, антитело или их фрагменты отличается от встречающегося в природе аналога тем, что концентрация или количество молекул на объем у «концентрированного» больше или у «разбавленного» меньше, чем у его естественного аналога. Обогащение может быть измерено на основе абсолютного значения, такого как масса на объем раствора, или оно может быть измерено по отношению ко второму, потенциально мешающему веществу, присутствующему в исходной смеси. Увеличение обогащений вариантов осуществления настоящего изобретения становится все более предпочтительным. Так, например, 2–кратное обогащение является предпочтительным, 10–кратное обогащение является более предпочтительным, 100–кратное обогащение является более предпочтительным, 1000–кратное обогащение является еще более предпочтительным. Вещество также может быть получено в выделенном состоянии в результате процесса искусственной сборки, такого как химический синтез или рекомбинантная экспрессия.
«Связанный» и «слитый» или «слияние» используются в настоящем описании взаимозаменяемо. Эти термины относятся к объединению еще двух химических элементов или компонентов любыми средствами, включая химическую конъюгацию или рекомбинантные способы. «Слияние в рамке» относится к объединению двух или более открытых рамок считывания (ORF), чтобы сформировать непрерывную более длинную ORF, таким образом, чтобы поддерживать правильную рамку считывания исходных ORF. Таким образом, полученный рекомбинантный слитый белок представляет собой один белок, содержащий два или более сегментов, которые соответствуют полипептидам, кодируемым исходными ORF (эти сегменты, как правило, не являются таковыми в природе). Хотя рамка считывания сделана таким образом непрерывной по всем слитым сегментам, сегменты могут быть физически или пространственно разделены, например, последовательностью линкера в рамке (например, «флексона»).
В контексте полипептидов «последовательность» представляет собой порядок аминокислот в полипептиде в направлении от амино– к карбоксильному концу, в котором остатки, которые соседствуют друг с другом в последовательности, являются смежными в первичной структуре полипептида. Последовательность также может представлять собой линейную последовательность части полипептида, которая, как известно, содержит дополнительные остатки в одном или обоих направлениях.
«Гетерологичный» означает полученный из сущности, генотипически отличной от остальной части сущности, с которой его сравнивают. Например, промотор, удаленный из его нативной кодирующей последовательности и функционально связанный с кодирующей последовательностью, отличной от нативной последовательности, является гетерологичным промотором. Термин «гетерологичный» применительно к полинуклеотиду, полипептиду, означает, что полинуклеотид или полипептид получен из сущности, генотипически отличной от остальной части сущности, с которой его сравнивают. Например, гетерологичный полинуклеотид или антиген может быть получен из вида другого происхождения, другого типа клеток и одного и того же типа клеток разных индивидуумов.
Термины «полинуклеотиды», «нуклеиновые кислоты», «нуклеотиды» и «олигонуклеотиды» используются взаимозаменяемо. Они относятся к полимерной форме нуклеотидов любой длины, либо дезоксирибонуклеотидов, либо рибонуклеотидов, либо их аналогов. Полинуклеотиды могут иметь любую трехмерную структуру и могут выполнять любую функцию, известную или неизвестную. Ниже приведены неограничивающие примеры полинуклеотидов: кодирующие или некодирующие области гена или фрагмента гена, локусы (локус), определенные из анализа сцепления, экзоны, интроны, матричная РНК (мРНК), транспортная РНК, рибосомная РНК, рибозимы, кДНК, рекомбинантные полинуклеотиды, разветвленные полинуклеотиды, плазмиды, векторы, выделенная ДНК любой последовательности, выделенная РНК любой последовательности, зонды нуклеиновых кислот, праймеры, олигонуклеотиды или синтезированная ДНК. Полинуклеотид может содержать модифицированные нуклеотиды, такие как метилированные нуклеотиды и аналоги нуклеотидов. Модификации нуклеотидной структуры, если они есть, то они могут быть переданы до или после сборки полимера. Последовательность нуклеотидов может прерываться ненуклеотидными компонентами. Полинуклеотид может быть дополнительно модифицирован после полимеризации, например, путем конъюгации с метящим компонентом.
«Рекомбинантный» применительно к полинуклеотиду означает, что полинуклеотид является продуктом различных комбинаций стадий клонирования, рестрикции и/или лигирования и других процедур, которые приводят к созданию конструкции, отличной от полинуклеотида, встречающегося в природе.
Термины «ген» или «фрагмент гена» используются в настоящем описании взаимозаменяемо. Они относятся к полинуклеотиду, содержащему по меньшей мере одну открытую рамку считывания, которая способна кодировать конкретный белок после транскрибирования и трансляции. Ген или фрагмент гена может быть геномным, кДНК или синтезированным, при условии, что полинуклеотид содержит по меньшей мере одну открытую рамку считывания, которая может охватывать всю кодирующую область или ее сегмент.
«Функционально связанный» относится к смежному расположению, в котором компоненты, описанные таким образом, находятся во взаимосвязи, позволяющей им функционировать по назначению. Например, промоторная последовательность функционально связана с кодирующей последовательностью, если промоторная последовательность способствует транскрипции кодирующей последовательности.
«Слитый ген» представляет собой ген, состоящий по меньшей мере из двух гетерологичных полинуклеотидов, которые связаны друг с другом.
Генная «база данных» обозначает набор хранимых данных, которые представляют собой совокупность последовательностей, включая нуклеотидные и пептидные последовательности, которые, в свою очередь, представляют собой совокупность биологических эталонных материалов.
Используемый в настоящем описании термин «экспрессия» относится к процессу, посредством которого полинуклеотид транскрибируется в мРНК, и/или к процессу, посредством которого транскрибированная мРНК (также называемая «транскриптом») впоследствии транслируется в пептиды, полипептиды или белки. Транскрипты и закодированные полипептиды вместе называют генным продуктом. Если полинуклеотид получен из геномной ДНК, экспрессия может включать сплайсинг мРНК в эукариотической клетке.
«Вектор» представляет собой молекулу нуклеиновой кислоты, предпочтительно самореплицирующуюся, которая переносит вставленную молекулу нуклеиновой кислоты в клетку–хозяин и/или между ними. Термин включает векторы, которые функционируют главным образом для встраивания ДНК или РНК в клетку, репликации векторов, которые функционируют главным образом для репликации ДНК или РНК, и экспрессирующие векторы, которые функционируют для транскрипции и/или трансляции ДНК или РНК. Также включены векторы, которые обеспечивают более одной из вышеуказанных функций. «Экспрессирующий вектор» представляет собой полинуклеотид, который при введении в соответствующую клетку–хозяина может транскрибироваться и транслироваться в полипептид(ы). «Экспрессирующая система» обычно означает подходящую клетку–хозяина, состоящую из экспрессирующего вектора, который может функционировать, чтобы получить желаемый продукт экспрессии.
Термин «биологический образец» охватывает множество типов образцов, полученных из организма, и может использоваться в диагностическом или мониторинговом анализе. Термин охватывает образцы крови и других жидкостей биологического происхождения, твердые образцы тканей, такие как образцы биопсии или культуры тканей или клеток, полученные из них, и их потомство. Термин охватывает образцы, с которыми проводили манипуляции любым способом после их получения, например путем обработки реагентами, солюбилизации или обогащения определенными компонентами. Термин охватывает клинический образец, а также включает клетки в клеточной культуре, клеточные супернатанты, клеточные лизаты, сыворотку, плазму, биологические жидкости и образцы тканей.
Термины «лечение», «лечить» и тому подобное используются в настоящем описании для общего обозначения получения желаемого фармакологического и/или физиологического эффекта. Эффект может быть профилактическим с точки зрения полного или частичного предотвращения заболевания или его симптома и/или может быть терапевтическим с точки зрения частичной или полной стабилизации или излечения от заболевания и/или неблагоприятного воздействия, связанного с заболеванием. Используемое в настоящем описании «лечение» охватывает любое лечение заболевания у млекопитающего, например мыши, крысы, кролика, свиньи, примата, включая людей и других человекообразных обезьян, в частности, человека, и включает: (a) предотвращение возникновения заболевания или симптома у пациента, который может быть предрасположен к заболеванию или симптому, но еще не был диагностирован как имеющий его; (b) подавление симптомов заболевания; (c) прекращение развития заболевания; (d) облегчение симптомов заболевания; (e) вызов регрессии заболевания или симптома; или любую их комбинацию.
Термины «реципиент», «индивидуум», «объект», «хозяин» и «пациент» могут использоваться в настоящем описании взаимозаменяемо и относятся к любому пациенту–млекопитающему, для которого требуется диагностика, лечение или терапия, особенно к людям.
Термины «злокачественное новообразование», «новообразование», «опухоль», и «карцинома» используются в настоящем описании взаимозаменяемо для обозначения клеток, которые демонстрируют относительно автономный рост, так что они проявляют фенотип абберантного роста, характеризующийся значительной потерей контроля клеточной пролиферации. В целом, клетки, представляющие интерес для обнаружения или лечения в настоящей заявке, включают предопухолевые (например, доброкачественные), злокачественные, предметастатические, метастатические и неметастатические клетки. Термин «нормальный», используемый в контексте «нормальная клетка», предназначен для обозначения клетки нетрансформированного фенотипа или демонстрирующей морфологию нетрансформированной клетки исследуемого типа ткани. «Опухолевый фенотип» обычно относится к любому из множества биологических явлений, характерных для опухолевой клетки, которые могут варьироваться в зависимости от типа злокачественного новообразования. Опухолевый фенотип обычно идентифицируется по аномалиям, например, в росте или пролиферации клеток (например, неконтролируемый рост или пролиферация), регуляции клеточного цикла, подвижности клеток, межклеточных взаимодействий или метастазирования и т. д.).
Фагоцитарные клетки или фагоциты являются взаимозаменяемыми терминами и относятся к клетке, способной к фагоцитозу. Неограничивающие категории фагоцитов включают макрофаги, мононуклеарные клетки (например, гистиоциты и моноциты), полиморфноядерные лейкоциты (например, нейтрофилы) и дендритные клетки.
Композиции
В одном варианте осуществления настоящее раскрытие относится к антигенсвязывающей единице, содержащей CDR легкой цепи и CDR тяжелой цепи, где антигенсвязывающая единица (а) специфически связывается с CD47; (b) индуцирует фагоцитоз клеток, экспрессирующих CD47 при связывании с CD47; и (c) не обладает способностью индуцировать существенную гемагглютинацию при смешивании с эритроцитами в диапазоне концентраций раскрытой в настоящем описании антигенсвязывающей единицы примерно от 1,5 нг/мл примерно до 30 мкг/мл.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к антигенсвязывающей единице, содержащей CDR легкой цепи и CDR тяжелой цепи, где антигенсвязывающая единица (а) специфически связывается с CD47 с более высокой аффинностью связывания, чем у эталонной антигенсвязывающей единицы, и предотвращает связывание CD47 с SIRPα; и (b) не обладает способностью вызывать существенную гемагглютинацию при смешивании с эритроцитами в диапазоне концентраций указанной антигенсвязывающей единицы примерно от 1,5 нг/мл примерно до 30 мкг/мл, где эталонная антигенсвязывающая единица имеет аминокислотные последовательности, представленные в 1) SEQ ID NO: 240–241, 2) SEQ ID NO: 242–243 или 3) SEQ ID NO: 244–245.
Еще в одном варианте осуществления настоящее раскрытие относится к антигенсвязывающей единице, содержащей CDR легкой цепи и CDR тяжелой цепи, где антигенсвязывающая единица (а) специфически связывается с CD47; и (b) индуцирует фагоцитоз клеток, экспрессирующих CD47, при связывании с CD47 в большей степени по сравнению с эталонной антигенсвязывающей единицей, где эталонная антигенсвязывающая единица имеет аминокислотные последовательности, представленные в 1) SEQ ID NO: 240–241, 2) SEQ ID NO: 242–243 или 3) SEQ ID NO: 244–245.
Еще в одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к антигенсвязывающей единице, содержащей CDR легкой цепи и CDR тяжелой цепи, где CDR легкой цепи содержит LC–CDR1, LC–CDR2 и LC–CDR3; и CDR тяжелой цепи содержит HC–CDR1, HC–CDR2 и HC–CDR3, где указанные LC–CDR1, LC–CDR2 и LC–CDR3, каждая, содержит последовательность, имеющую по меньшей мере 80% гомологии последовательности с последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1–22 и 162–190, и где указанные HC–CDR1, HC–CDR2 и HC–CDR3, каждая, содержит последовательность, имеющую по меньшей мере 80% гомологии последовательности с последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 23–44 и 191–237.
В некоторых аспектах антигенсвязывающая единица может конкурировать за связывание с эпитопом, распознаваемым контрольной антигенсвязывающей единицей. Например, антигенсвязывающая единица может конкурировать за связывание с эпитопом, распознаваемым эталонной антигенсвязывающей единицей, где аминокислотные последовательности представленыв 1) SEQ ID NO: 240–241, 2) SEQ ID NO: 242–243 или 3) SEQ ID NO: 244–245. Эпитопное связывание отобранных антител проводили с использованием CD47–экспрессирующих клеток СНО с коммерческими блокирующими антителами против CD47. Вкратце, семь нейтрализующих антител против CD47 и два контрольных антитела (положительный контроль 1 и положительный контроль 2) анализировали и группировали по их конкурентному связыванию с клеткой СНО, экспрессирующей CD47, с использованием проточной цитометрии. Сначала использовали биотинилированное антитело для расчета концентрации для 90%–ного связывания, затем 9 антител против CD47 последовательно разводили и смешивали с одним из биотинилированных антител в предварительно определенной 90%–ной концентрации связывания. SA–APC использовали для детектирования связывания биотинилированного антитела. Все антитела сравнивали друг с другом и с контролями. Антитела, которые не продемонстрировали изменений в связывании, были отнесены к той же группе. Антитела, которые продемонстрировали изменение в связывании клеточной поверхности, были отнесены к отдельным группам. Идентифицировали три профиля связывания на СНО, экспрессирующих CD47, и шесть положительных вариантов были отнесены к трем группам, как показано ниже. Одна группа состояла из ABU1, ABU6 и положительного контроля 1. Вторая группа состояла из ABU4, ABU5 и положительного контроля 1. Третья группа состояла из ABU2, ABU3, положительного контроля 1 и положительного контроля 2.
В некоторых аспектах любого из раскрытых в настоящем описании вариантов осуществления антигенсвязывающая единица содержит CDR легкой цепи. CDR легкой цепи может быть областью, определяющей комплементарность легкой цепи антигенсвязывающей единицы. CDR легкой цепи может содержать непрерывную последовательность аминокислотных остатков или две или более смежных последовательностей аминокислотных остатков, разделенных и необязательно фланкированных областями, не определяющими комплементарность, такими как каркасные области. В некоторых примерах CDR легкой цепи содержит две или более CDR легкой цепи, которые могут обозначаться как CDR–1 легкой цепи, CDR–2 и так далее. В предпочтительных примерах CDR легкой цепи содержит три CDR легкой цепи, которые можно обозначать как CDR–1 легкой цепи, CDR–2 легкой цепи и CDR–3 легкой цепи, соответственно. В некоторых примерах группу CDR, присутствующих на обычной легкой цепи, можно вместе обозначить как CDR легкой цепи.
В некоторых аспектах любого из раскрытых в настоящем описании вариантов осуществления антигенсвязывающая единица содержит CDR тяжелой цепи. CDR тяжелой цепи может быть областью, определяющей комплементарность тяжелой цепи антигенсвязывающей единицы. CDR тяжелой цепи может содержать непрерывную последовательность аминокислотных остатков или две или более смежных последовательностей аминокислотных остатков, разделенных и необязательно фланкированных областями, не определяющими комплементарность, такими как каркасные области. В некоторых примерах CDR тяжелой цепи включает две или более CDR тяжелой цепи, которые могут обозначаться как CDR–1 тяжелой цепи, CDR–2 и так далее. В предпочтительных примерах CDR тяжелой цепи содержит три CDR тяжелой цепи, которые могут обозначаться как CDR–1 тяжелой цепи, CDR–2 тяжелой цепи и CDR–3 тяжелой цепи, соответственно. В некоторых примерах группу CDR, присутствующих на обычной тяжелой цепи, можно вместе обозначить как CDR тяжелой цепи.
В некоторых аспектах любого из вариантов осуществления, раскрытых в настоящем описании, рассматриваемая антигенсвязывающая единица специфически связывается с CD47. Используемый в настоящем описании CD47 также может относиться к ортологам, гомологам, кодон–оптимизированным формам, укороченным формам, фрагментированным формам, мутированным формам или любой другой известной производной форме известной последовательности CD47. Например, CD47 может быть человеческим CD47, который представлен номером доступа GenBank CEJ95640 и содержит последовательность SEQ ID NO: 81. CD47 может быть мышиным CD47, который представлен номером доступа GenBank BAA25401.1 и содержит последовательность SEQ ID NO: 82. В некоторых контекстах CD47 обозначается как белок, связанный с интегрином (IAP). IAP человека представлен номером доступа GenBank CAA80977.1 и содержит последовательность SEQ ID NO: 83. IAP мыши представлен номером доступа GenBank ADQ12919.1 и содержит последовательность SEQ ID NO: 84. Кроме того, CD47 может содержать последовательность, имеющую по меньшей мере 50% идентичности с любой из SEQ ID NO: 81–84. CD47 может содержать последовательность, имеющую по меньшей мере 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99% или более чем 99% идентичности любой из SEQ ID NO: 81–84.
Специфичность связывания может быть определена областями, определяющими комплементарность, или CDR, такими как CDR легкой цепи или CDR тяжелой цепи. Во многих случаях специфичность связывания определяется CDR легкой цепи и CDR тяжелой цепи. Данная комбинация CDR тяжелой цепи и CDR легкой цепи обеспечивает определенный связывающий карман, который придает большую аффинность и/или специфичность к CD47 по сравнению с другими эталонными антигенами.
В некоторых аспектах варианта осуществления, раскрытого в настоящем описании, антигенсвязывающая единица специфически связывается с CD47 с более высокой аффинностью связывания, чем у эталонной антигенсвязывающей единицы. Такие эталонные антигенсвязывающие единицы включают, но не ограничиваются этим, антигенсвязывающую единицу, имеющую аминокислотные последовательности, представленные в 1) SEQ ID NO: 240–241, 2) SEQ ID NO: 242–243 или 3) SEQ ID NO: 244–245.
Связывание антигенсвязывающей единицы с CD47 можно охарактеризовать или выразить любым способом, известным в данной области. Например, связывание может характеризоваться аффинностью связывания, которая может быть силой взаимодействия между антигенсвязывающей единицей и антигеном. Аффинность связывания может быть определена любым способом, известным в данной области, таким как анализы связывания in vitro. Например, аффинность связывания антигенсвязывающих единиц, описанных в настоящем документе, может быть определена с помощью анализа связывания in vitro с использованием клеток, экспрессирующих CD47. Аффинность связывания рассматриваемой антигенсвязывающей единицы может быть выражена через Kd, которая является константой равновесной диссоциации между антителом и его соответствующим антигеном. В некоторых случаях антигенсвязывающие единицы, описанные в настоящем документе, специфически связываются с CD47 с Kd в диапазоне примерно от 10 мкМ примерно до 1 фМ. Например, антигенсвязывающая единица может специфически связываться с CD47 с Kd менее чем приблизительно 10 мкМ, 1 мкМ, 0,1 мкМ, 10 нМ, 1 нМ, 0,1 нМ, 10 пМ, 1 пМ, 0,1 пМ, 10 фМ, 1 фМ, 0,1 фМ или менее 0,1 фМ. В некоторых примерах рассматриваемая антигенсвязывающая единица проявляет более высокую аффинность связывания с CD47 по сравнению с эталонной антигенсвязывающей единицей, имеющей аминокислотные последовательности, представленные в 1) SEQ ID NO: 240–241, 2) SEQ ID NO: 242–243 или 3) SEQ ID NO: 244–245.
В некоторых аспектах варианта осуществления, раскрытого в настоящем описании, антигенсвязывающая единица уменьшает или даже предотвращает связывание CD47 с SIRPα и тем самым индуцирует фагоцитоз макрофагальной клеткой, которая экспрессирует SIRPα. Обычно такой фагоцитоз индуцируется при связывании антигенсвязывающей единицы с CD47.
В некоторых аспектах рассматриваемая антигенсвязывающая единица индуцирует фагоцитоз клетки, экспрессирующей CD47, в большей степени, чем эталонная антигенсвязывающая единица. Такая эталонная антигенсвязывающая единица может иметь аминокислотные последовательности, представленные в 1) SEQ ID NO: 240–241, 2) SEQ ID NO: 242–243 или 3) SEQ ID NO: 244–245. Фагоцитоз можно качественно оценить любым способом, известным в данной области. В некоторых случаях степень фагоцитоза определяется количеством макрофагов, которые осуществили фагоцитоз (обозначаемых фагоцитами), среди популяции макрофагов. Например, количество фагоцитов на 100 макрофагов может быть определено так, что степень фагоцитоза может быть выражена в процентах или фагоцитарном индексе.
Индуцирование фагоцитоза клеток, экспрессирующих CD47, может проявляться в повышении уровня фагоцитоза этих клеток в присутствии антигенсвязывающей единицы, раскрытой в настоящем описании. В некоторых примерах уровень фагоцитоза таких клеток увеличивается по меньшей мере на 1%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 100%, 200%, 500%, 1000% или более 1000% по сравнению с уровнем фагоцитоза, наблюдаемом при отсутствии композиции.
В некоторых аспектах любого из раскрытых в настоящем описании вариантов осуществления антигенсвязывающая единица не обладает способностью индуцировать существенную гемагглютинацию. В некоторых случаях антигенсвязывающая единица не обладает способностью вызывать существенную гемагглютинацию при смешивании с эритроцитами в диапазоне концентраций примерно от 1,5 нг/мл примерно до 30 мкг/мл указанной антигенсвязывающей единицы. Например, рассматриваемая антигенсвязывающая единица может не обладать способностью вызывать существенную гемагглютинацию при смешивании с эритроцитами, когда антигенсвязывающая единица находится в концентрации примерно 0,1 нг/мл, 1 нг/мл, 5 нг/мл, 10 нг/мл, 15 нг/мл, 20 нг/мл, 25 нг/мл, 30 нг/мл, 35 нг/мл, 40 нг/мл, 45 нг/мл, 50 нг/мл, 55 нг/мл, 60 нг/мл, 65 нг/мл, 70 нг/мл, 75 нг/мл, 80 нг/мл, 85 нг/мл, 90 нг/мл, 100 нг/мл, 150 нг/мл, 200 нг/мл, 250 нг/мл, 300 нг/мл, 350 нг/мл, 400 нг/мл, 450 нг/мл, 500 нг/мл, 550 нг/мл, 600 нг/мл, 650 нг/мл, 700 нг/мл, 750 нг/мл, 800 нг/мл, 850 нг/мл, 900 нг/мл, 950 нг/мл, 1 мкг/мл, 1,5 мкг/мл, 2 мкг/мл, 3 мкг/мл, 4 мкг/мл, 5 мкг/мл, 10 мкг/мл, 15 мкг/мл, 20 мкг/мл, 25 мкг/мл, 30 мкг/мл или более. В других примерах концентрация антигенсвязывающей единицы может составлять менее чем 1,5 нг/мл. В других примерах концентрация антигенсвязывающей единицы может составлять более чем 30 мкг/мл.
В некоторых случаях гемагглютинация, индуцированная при контакте эритроцитов с рассматриваемой антигенсвязывающей единицей, по меньшей мере в 1 раз меньше по сравнению с гемагглютинацией, индуцированной эталонной антигенсвязывающей единицей, имеющей аминокислотные последовательности, представленные в 1). SEQ ID NO: 240– 241, 2) SEQ ID NO: 242–243 или 3) SEQ ID NO: 244–245.В некоторых случаях гемагглютинация, индуцированная при контакте эритроцитов с рассматриваемой антигенсвязывающей единицей по меньшей мере в 1 раз меньше, по меньшей мере в 2 раза меньше, по меньшей мере в 3 раза меньше, по меньшей мере в 4 раза меньше, по меньшей мере в 5 раз меньше, по меньшей мере в 6 раз меньше, по меньшей мере в 7 раз меньше, по меньшей мере в 8 раз меньше, по меньшей мере в 9 раз меньше или по меньшей мере в 10 раз меньше по сравнению с гемагглютинацией, индуцированной эталонной антигенсвязывающей единицей, имеющей аминокислотные последовательности, представленные в 1) SEQ ID NO: 240–241, 2) SEQ ID NO: 242–243 или 3) SEQ ID NO: 244–245. В некоторых случаях гемагглютинация, индуцированная при контакте эритроцитов с рассматриваемой антигенсвязывающей единицей, по меньшей мере в 10 раз меньше, чем гемагглютинация, индуцированная эталонной антигенсвязывающей единицей, имеющей аминокислотные последовательности, представленные в 1). SEQ ID NO: 240–241, 2) SEQ ID NO: 242–243 или 3) SEQ ID NO: 244–245.
В некоторых случаях доказательство гемагглютинации демонстрируется присутствием не поддающихся подсчету эритроцитов. Если вместо помутнения появляется пунктат красных точек, это указывает на отсутствие существенной гемагглютинации.
В некоторых аспектах гемагглютинация может быть определена количественно и выражена в виде индекса гемагглютинации. Индекс гемагглютинации может быть количественно определен по площади осадка эритроцитов в присутствии или в отсутствие рассматриваемых антигенсвязывающих единиц. Например, диаметр гранул эритроцитов может быть определен либо вручную, либо с использованием компьютерного программного обеспечения, такого как Image J. При использовании компьютерного программного обеспечения площадь гранул эритроцитов может быть определена путем подсчета количества пикселей, составляющих гранулу. Площадь может быть рассчитана вручную или с помощью программного обеспечения, такого как Excel. В некоторых случаях площадь может быть нормализована к набору контрольных данных и выражена в процентах от максимального индекса гемагглютинации. В таких примерах рассматриваемые антигенсвязывающие единицы могут индуцировать примерно 0%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 100%, 110%, 120%, 130%, 140%, 150% или более от максимального индекса гемагглютинации. В некоторых примерах рассматриваемые антигенсвязывающие единицы индуцируют менее чем 100% максимального индекса гемагглютинации. Например, рассматриваемые антигенсвязывающие единицы могут индуцировать менее чем примерно 100%, 95%, 90%, 85%, 80%, 75%, 70%, 65%, 60%, 55%, 50%, 45%, 40% 35%, 30%, 25%, 20%, 15%, 10%, 5% или менее от максимального индекса гемагглютинации.
В некоторых аспектах у рассматриваемой антигенсвязывающей единицы отсутствует способность индуцировать существенную гемагглютинацию, когда антигенсвязывающую единицу добавляют к раствору эритроцитов (RBC), в котором эритроциты составляют более чем примерно 1%, 2%, 3%. 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19% или 20% эритроцитов в подходящем буфере, таком как PBS. В некоторых примерах раствор содержит более чем 20% эритроцитов в подходящем буфере, таком как PBS.
В некоторых аспектах у рассматриваемой антигенсвязывающей единицы отсутствует способность индуцировать существенную гемагглютинацию эритроцитов в растворе, содержащем эритроциты, где антигенсвязывающая единица присутствует в концентрации от примерно 100 мкг/мл до примерно 1 пг/мл. Например, отсутствие существенной гемагглютинации наблюдается, когда концентрация антигенсвязывающей единицы составляет, по меньшей мере, при 0,1 нг мерно/ мл, 0,2 нг/мл, 0,3 нг/мл, 0,4 нг/мл, 0,5 нг/мл, 0,6 нг/мл, 0,7 нг/мл, 0,8 нг/мл, 0,9 нг/мл, 1 нг/мл, 2 нг/мл, 3 нг/мл, 4 нг/мл, 5 нг/мл, 6 нг/мл, 7 нг/мл, 8 нг/мл, 9 нг/мл, 10 нг/мл, 20 нг/мл, 30 нг/мл, 40 нг/мл, 50 нг/мл, 60 нг/мл, 70 нг/мл, 80 нг/мл, 90 нг/мл, 100 нг/мл, 0,1 мкг/мл, 0,2 мкг/мл, 0,3 мкг/мл, 0,4 мкг/мл, 0,5 мкг/мл, 0,6 мкг/мл, 0,7 мкг/мл, 0,8 мкг/мл, 0,9 мкг/мл, 1 мкг/мл, 2 мкг/мл, 3 мкг/мл, 4 мкг/мл, 5 мкг/мл, 6 мкг/мл, 7 мкг/мл, 8 мкг/мл, 9 мкг/мл, 10 мкг/мл, 20 мкг/мл, 30 мкг/мл, 40 мкг/мл, 50 мкг/мл, 60 мкг/мл, 70 мкг/мл, 80 мкг/мл, 90 мкг/мл, 100 мкг/мл или выше.
В некоторых аспектах любого из раскрытых в настоящем описании вариантов осуществления антигенсвязывающая единица не обладает способностью индуцировать существенную гемагглютинацию после того, как антигенсвязывающая единица добавляется к эритроцитам и инкубируется в течение примерно от 10 минут примерно до 10 часов. Например, существенная гемагглютинация не наблюдается примерно через 10 минут, 15 минут, 30 минут, 45 минут, 1 часа, 1,5 часа, 2 часа, 2,5 часа, 3 часа, 3,5 часа, 4 часа, 4,5 часа, 5 часов, 5,5 час, 6 часов, 6,5 часов, 7 часов, 7,5 часов, 8 часов, 8,5 часов, 9 часов, 9,5 часов, 10 часов или более 10 часов времени инкубации.
В некоторых аспектах любого из раскрытых в настоящем описании вариантов осуществления антигенсвязывающая единица содержит CDR легкой цепи и CDR тяжелой цепи. Рассматриваемые антигенсвязывающие единицы могут содержать любые LC–CDR или HC–CDR, перечисленные в Таблице 1. Дополнительно или альтернативно, рассматриваемая антигенсвязывающая единица может содержать LC–CDR или HC–CDR, которые имеют по меньшей мере 60% идентичности с любыми из LC–CDR или HC–CDR, перечисленных в Таблице 1. В некоторых аспектах рассматриваемые LC–CDR или HC–CDR могут иметь, по меньшей мере, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99% или более идентичности последовательности с любым из SEQ ID NO, перечисленных в Таблице 1.
Таблица 1
Антигенсвязывающая единица LC–CDR HC–CDR
ABU1 SEQ ID NO:54 SEQ ID NO:55
ABU2 SEQ ID NO:65 SEQ ID NO:63
ABU3 SEQ ID NO:58 SEQ ID NO:64
ABU4 SEQ ID NO:68 SEQ ID NO:60
ABU5 SEQ ID NO:66 SEQ ID NO:61
ABU6 SEQ ID NO:57 SEQ ID NO:62
ABU7 SEQ ID NO:56 SEQ ID NO:59
ABU8 SEQ ID NO:85 SEQ ID NO:86
ABU9 SEQ ID NO:87 SEQ ID NO:88
ABU10 SEQ ID NO:89 SEQ ID NO:90
ABU11 SEQ ID NO:91 SEQ ID NO:92
ABU12 SEQ ID NO:93 SEQ ID NO:94
ABU13 SEQ ID NO:95 SEQ ID NO:96
ABU14 SEQ ID NO:97 SEQ ID NO:98
ABU15 SEQ ID NO:99 SEQ ID NO:100
ABU16 SEQ ID NO:101 SEQ ID NO:102
ABU17 SEQ ID NO:103 SEQ ID NO:104
ABU18 SEQ ID NO:105 SEQ ID NO:106
ABU19 SEQ ID NO:107 SEQ ID NO:108
ABU20 SEQ ID NO:109 SEQ ID NO:110
ABU21 SEQ ID NO:111 SEQ ID NO:112
ABU22 SEQ ID NO:113 SEQ ID NO:114
ABU23 SEQ ID NO:115 SEQ ID NO:116
ABU24 SEQ ID NO:117 SEQ ID NO:118
ABU25 SEQ ID NO:119 SEQ ID NO:120
ABU26 SEQ ID NO:121 SEQ ID NO:122
ABU27 SEQ ID NO:123 SEQ ID NO:124
ABU28 SEQ ID NO:125 SEQ ID NO:126
ABU29 SEQ ID NO:127 SEQ ID NO:128
ABU30 SEQ ID NO:129 SEQ ID NO:130
ABU31 SEQ ID NO:131 SEQ ID NO:132
ABU32 SEQ ID NO:133 SEQ ID NO:134
ABU33 SEQ ID NO:135 SEQ ID NO:136
ABU34 SEQ ID NO:137 SEQ ID NO:138
ABU35 SEQ ID NO:139 SEQ ID NO:140
ABU36 SEQ ID NO:141 SEQ ID NO:142
ABU37 SEQ ID NO:143 SEQ ID NO:144
ABU38 SEQ ID NO:145 SEQ ID NO:146
ABU39 SEQ ID NO:147 SEQ ID NO:148
ABU40 SEQ ID NO:238 SEQ ID NO:239
C–ABU1 SEQ ID NO:47 SEQ ID NO:70
C–ABU2 SEQ ID NO:49 SEQ ID NO:73
C–ABU3 SEQ ID NO:71 SEQ ID NO:51
C–ABU4 SEQ ID NO:50 SEQ ID NO:74
C–ABU4 SEQ ID NO: 309 SEQ ID NO: 310
C–ABU5 SEQ ID NO:45 SEQ ID NO:53
C–ABU6 SEQ ID NO:67 SEQ ID NO:72
C–ABU7 SEQ ID NO:69 SEQ ID NO:52
C–ABU8 SEQ ID NO:311 SEQ ID NO:312
H–ABU1a SEQ ID NO:46 SEQ ID NO:77
H–ABU1b SEQ ID NO:46 SEQ ID NO:78
H–ABU1c SEQ ID NO:46 SEQ ID NO:79
H–ABU2a SEQ ID NO:48 SEQ ID NO:75
H–ABU2b SEQ ID NO:48 SEQ ID NO:76
H–ABU2c SEQ ID NO:48 SEQ ID NO:80
H–ABU 3 SEQ ID NO:265 SEQ ID NO:246
H–ABU 4 SEQ ID NO:266 SEQ ID NO:247
H–ABU 5 SEQ ID NO:267 SEQ ID NO:248
H–ABU 6 SEQ ID NO:268 SEQ ID NO:249
H–ABU 7 SEQ ID NO:269 SEQ ID NO:250
H–ABU 8 SEQ ID NO:270 SEQ ID NO:251
H–ABU 9 SEQ ID NO:270 SEQ ID NO:252
H–ABU 10 SEQ ID NO:271 SEQ ID NO:253
H–ABU 11 SEQ ID NO:272 SEQ ID NO:249
H–ABU 12 SEQ ID NO:287 SEQ ID NO:292
H–ABU 13 SEQ ID NO:288 SEQ ID NO:292
H–ABU 14 SEQ ID NO:289 SEQ ID NO:292
H–ABU 15 SEQ ID NO:290 SEQ ID NO:292
H–ABU 16 SEQ ID NO:291 SEQ ID NO:292
H–ABU 17 SEQ ID NO:287 SEQ ID NO:293
H–ABU 18 SEQ ID NO:288 SEQ ID NO:293
H–ABU 19 SEQ ID NO:289 SEQ ID NO:293
H–ABU 20 SEQ ID NO:290 SEQ ID NO:293
H–ABU 21 SEQ ID NO:291 SEQ ID NO:293
H–ABU 22 SEQ ID NO:287 SEQ ID NO:294
H–ABU 23 SEQ ID NO:288 SEQ ID NO:294
H–ABU 24 SEQ ID NO:289 SEQ ID NO:294
H–ABU 25 SEQ ID NO:290 SEQ ID NO:294
H–ABU 26 SEQ ID NO:291 SEQ ID NO:294
H–ABU 27 SEQ ID NO:287 SEQ ID NO:295
H–ABU 28 SEQ ID NO:288 SEQ ID NO:295
H–ABU 29 SEQ ID NO:289 SEQ ID NO:295
H–ABU 30 SEQ ID NO:290 SEQ ID NO:295
H–ABU 31 SEQ ID NO:291 SEQ ID NO:295
H–ABU 32 SEQ ID NO:287 SEQ ID NO:296
H–ABU 33 SEQ ID NO:288 SEQ ID NO:296
H–ABU 34 SEQ ID NO:289 SEQ ID NO:296
H–ABU 35 SEQ ID NO:290 SEQ ID NO:296
H–ABU 36 SEQ ID NO:291 SEQ ID NO:296
H–ABU 37 SEQ ID NO:291 SEQ ID NO:292
H–ABU 38 SEQ ID NO:291 SEQ ID NO:294
H–ABU 39 SEQ ID NO:291 SEQ ID NO:295
H–ABU 40 SEQ ID NO:288 SEQ ID NO:296
H–ABU 41 SEQ ID NO:291 SEQ ID NO:296
H–ABU 42 SEQ ID NO:290 SEQ ID NO:292
H–ABU 43 SEQ ID NO:291 SEQ ID NO:293
H–ABU 44 SEQ ID NO:298 SEQ ID NO:302
H–ABU 45 SEQ ID NO:273 SEQ ID NO:254
H–ABU 46 SEQ ID NO:274 SEQ ID NO:255
H–ABU 47 SEQ ID NO:275 SEQ ID NO:256
H–ABU 48 SEQ ID NO:276 SEQ ID NO:257
H–ABU 49 SEQ ID NO:277 SEQ ID NO:258
H–ABU 50 SEQ ID NO:265 SEQ ID NO:259
H–ABU 51 SEQ ID NO:278 SEQ ID NO:260
H–ABU 52 SEQ ID NO:279 SEQ ID NO:261
H–ABU 53 SEQ ID NO:280 SEQ ID NO:262
H–ABU 54 SEQ ID NO:281 SEQ ID NO:263
H–ABU 55 SEQ ID NO:282 SEQ ID NO:246
H–ABU 56 SEQ ID NO:283 SEQ ID NO:264
H–ABU 57 SEQ ID NO:284 SEQ ID NO:249
H–ABU 58 SEQ ID NO:268 SEQ ID NO:249
H–ABU 59 SEQ ID NO:268 SEQ ID NO:249
H–ABU 60 SEQ ID NO:272 SEQ ID NO:249
H–ABU 61 SEQ ID NO:268 SEQ ID NO:249
H–ABU 62 SEQ ID NO:285 SEQ ID NO:249
H–ABU 63 SEQ ID NO:268 SEQ ID NO:249
H–ABU 64 SEQ ID NO:272 SEQ ID NO:249
H–ABU 65 SEQ ID NO:272 SEQ ID NO:249
H–ABU 66 SEQ ID NO:268 SEQ ID NO:249
H–ABU 67 SEQ ID NO:286 SEQ ID NO:249
H–ABU 68 SEQ ID NO:268 SEQ ID NO:249
H–ABU 69 SEQ ID NO:268 SEQ ID NO:249
H–ABU 70 SEQ ID NO:268 SEQ ID NO:249
H–ABU 71 SEQ ID NO:297 SEQ ID NO:300
H–ABU 72 SEQ ID NO:298 SEQ ID NO:300
H–ABU 73 SEQ ID NO:299 SEQ ID NO:300
H–ABU 74 SEQ ID NO:297 SEQ ID NO:301
H–ABU 75 SEQ ID NO:298 SEQ ID NO:301
H–ABU 76 SEQ ID NO:299 SEQ ID NO:301
H–ABU 77 SEQ ID NO:297 SEQ ID NO:302
H–ABU 78 SEQ ID NO:299 SEQ ID NO:302
H–ABU 79 SEQ ID NO:297 SEQ ID NO:303
H–ABU 80 SEQ ID NO:298 SEQ ID NO:303
H–ABU 81 SEQ ID NO:299 SEQ ID NO:303
H–ABU 82 SEQ ID NO:297 SEQ ID NO:304
H–ABU 83 SEQ ID NO:298 SEQ ID NO:304
H–ABU 84 SEQ ID NO:299 SEQ ID NO:304
В некоторых случаях CDR легкой цепи (LC) содержит LC–CDR1, LC–CDR2 и LC–CDR3 легкой цепи; и CDR тяжелой цепи (HC) содержит HC–CDR1, HC–CDR2 и HC–CDR3. В некоторых примерах указанные LC–CDR1, LC–CDR2 и LC –CDR3, каждая, имеют последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1–22 и 162–190. В некоторых примерах указанные HC–CDR1, HC–CDR2, HC–CDR3, каждая, имеет последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 23–44 и 191–237. В некоторых примерах указанные LC–CDR1, LC–CDR2 и LC–CDR3, каждая, имеет последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1–22 и 162–190, и указанные HC–CDR1, HC–CDR2, HC–CDR3, каждая имеет последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 23–44 и 191–237.
В некоторых аспектах любого из раскрытых в настоящем описании вариантов осуществления антигенсвязывающая единица содержит CDR легкой цепи, где указанная CDR легкой цепи (LC) содержит комбинацию трех LC–CDR, а именно LC–CDR1, LC–CDR2 и LC–CDR3. Комбинация трех LC–CDR может содержать любую комбинацию, указанную в Таблице 2.
Таблица 2
Пример LC–CDR LC–CDR1 LC–CDR2 LC–CDR3
Пример 1 SEQ ID NO:4 SEQ ID NO:8 SEQ ID NO:21
Пример 2 SEQ ID NO:5 SEQ ID NO:10 SEQ ID NO:16
Пример 3 SEQ ID NO:6 SEQ ID NO:9 SEQ ID NO:17
Пример 4 SEQ ID NO:2 SEQ ID NO:12 SEQ ID NO:20
Пример 5 SEQ ID NO:7 SEQ ID NO:11 SEQ ID NO:15
Пример 6 SEQ ID NO:1 SEQ ID NO:13 SEQ ID NO:22
Пример 7 SEQ ID NO:3 SEQ ID NO:14 SEQ ID NO:19
Пример 8 SEQ ID NO:169 SEQ ID NO:173 SEQ ID NO:180
Пример 9 SEQ ID NO:168 SEQ ID NO:173 SEQ ID NO:181
Пример 10 SEQ ID NO:165 SEQ ID NO:177 SEQ ID NO:182
Пример 11 SEQ ID NO:163 SEQ ID NO:178 SEQ ID NO:183
Пример 12 SEQ ID NO:163 SEQ ID NO:172 SEQ ID NO:184
Пример 13 SEQ ID NO:163 SEQ ID NO:178 SEQ ID NO:185
Пример 14 SEQ ID NO:163 SEQ ID NO:178 SEQ ID NO:186
Пример 15 SEQ ID NO:163 SEQ ID NO:170 SEQ ID NO:187
Пример 16 SEQ ID NO:163 SEQ ID NO:174 SEQ ID NO:187
Пример 17 SEQ ID NO:164 SEQ ID NO:175 SEQ ID NO:187
Пример 18 SEQ ID NO:162 SEQ ID NO:178 SEQ ID NO:187
Пример 19 SEQ ID NO:163 SEQ ID NO:178 SEQ ID NO:187
Пример 20 SEQ ID NO:164 SEQ ID NO:178 SEQ ID NO:187
Пример 21 SEQ ID NO:163 SEQ ID NO:179 SEQ ID NO:187
Пример 22 SEQ ID NO:166 SEQ ID NO:176 SEQ ID NO:188
Пример 23 SEQ ID NO:167 SEQ ID NO:171 SEQ ID NO:189
Пример 24 SEQ ID NO:167 SEQ ID NO:171 SEQ ID NO:190
В некоторых аспектах любого из раскрытых в настоящем описании вариантов осуществления антигенсвязывающая единица содержит CDR тяжелой цепи, где указанная CDR тяжелой цепи (HC) содержит комбинацию трех HC–CDR, а именно HC–CDR1, HC–CDR2 и HC–CDR3. Комбинация трех HC–CDR может содержать любую комбинацию, указанную в Таблице 3.
Таблица 3
Пример HC–CDR HC–CDR1 HC–CDR2 HC–CDR3
Пример 1 SEQ ID NO:25 SEQ ID NO:32 SEQ ID NO:38
Пример 2 SEQ ID NO:28 SEQ ID NO:35 SEQ ID NO:39
Пример 3 SEQ ID NO:24 SEQ ID NO:34 SEQ ID NO:40
Пример 4 SEQ ID NO:29 SEQ ID NO:33 SEQ ID NO:43
Пример 5 SEQ ID NO:27 SEQ ID NO:30 SEQ ID NO:42
Пример 6 SEQ ID NO:23 SEQ ID NO:36 SEQ ID NO:41
Пример 7 SEQ ID NO:26 SEQ ID NO:31 SEQ ID NO:44
Пример 8 SEQ ID NO:191 SEQ ID NO:207 SEQ ID NO:226
Пример 9 SEQ ID NO:192 SEQ ID NO:222 SEQ ID NO:237
Пример 10 SEQ ID NO:193 SEQ ID NO:219 SEQ ID NO:233
Пример 11 SEQ ID NO:194 SEQ ID NO:220 SEQ ID NO:228
Пример 12 SEQ ID NO:195 SEQ ID NO:221 SEQ ID NO:229
Пример 13 SEQ ID NO:196 SEQ ID NO:214 SEQ ID NO:225
Пример 14 SEQ ID NO:197 SEQ ID NO:212 SEQ ID NO:232
Пример 15 SEQ ID NO:197 SEQ ID NO:213 SEQ ID NO:232
Пример 16 SEQ ID NO:198 SEQ ID NO:210 SEQ ID NO:224
Пример 17 SEQ ID NO:198 SEQ ID NO:208 SEQ ID NO:234
Пример 18 SEQ ID NO:198 SEQ ID NO:210 SEQ ID NO:234
Пример 19 SEQ ID NO:199 SEQ ID NO:210 SEQ ID NO:224
Пример 20 SEQ ID NO:200 SEQ ID NO:222 SEQ ID NO:230
Пример 21 SEQ ID NO:201 SEQ ID NO:210 SEQ ID NO:224
Пример 22 SEQ ID NO:201 SEQ ID NO:216 SEQ ID NO:224
Пример 23 SEQ ID NO:202 SEQ ID NO:210 SEQ ID NO:234
Пример 24 SEQ ID NO:203 SEQ ID NO:218 SEQ ID NO:227
Пример 25 SEQ ID NO:204 SEQ ID NO:211 SEQ ID NO:224
Пример 26 SEQ ID NO:204 SEQ ID NO:217 SEQ ID NO:224
Пример 27 SEQ ID NO:204 SEQ ID NO:214 SEQ ID NO:225
Пример 28 SEQ ID NO:204 SEQ ID NO:215 SEQ ID NO:235
Пример 29 SEQ ID NO:204 SEQ ID NO:214 SEQ ID NO:236
Пример 30 SEQ ID NO:205 SEQ ID NO:209 SEQ ID NO:224
Пример 31 SEQ ID NO:205 SEQ ID NO:210 SEQ ID NO:224
Пример 32 SEQ ID NO:205 SEQ ID NO:223 SEQ ID NO:231
Пример 33 SEQ ID NO:206 SEQ ID NO:210 SEQ ID NO:224
В некоторых аспектах любого из раскрытых в настоящем описании вариантов осуществления антигенсвязывающая единица содержит CDR легкой цепи и CDR тяжелой цепи, где указанная CDR легкой цепи и указанная CDR тяжелой цепи содержат, соответственно, LC–CDR и HC–CDR, выбранные из группы, состоящей из любой комбинации LC–CDR, указанных в Таблице 2, и любую комбинацию HC–CDR, указанную в Таблице 3.
В некоторых аспектах рассматриваемая антигенсвязывающая единица представляет собой моноклональную антигенсвязывающую единицу, поликлональную антигенсвязывающую единицу, гуманизированную антигенсвязывающую единицу, химерную антигенсвязывающую единицу, одновалентную антигенсвязывающую единицу, поливалентную антигенсвязывающую единицу, биспецифическую антигенсвязывающую единицу или любую их комбинацию. Антигенсвязывающие единицы могут принимать различные форматы, включая, но не ограничиваясь этим, sFC, Fv, ccFv, Fab', F(ab')2 и Fd. Такие антигенсвязывающие единицы могут быть получены из цельных иммуноглобулинов с помощью рицина, пепсина, папаина или другого протеазного расщепления.
Кроме того, антигенсвязывающие единицы могут быть сконструированы с использованием рекомбинантных иммуноглобулинов. Например, «Fv» иммуноглобулины для применения в настоящем изобретении могут быть получены путем связывания вариабельной области легкой цепи с вариабельной областью тяжелой цепи через пептидный линкер. Например, пептидный линкер может представлять собой полиглицин или другую последовательность, которая не образует альфа–спираль или мотив бета–листа. Также могут быть получены Fv, которые содержат стабилизирующие дисульфидные связи между областями VH и VL, как описано в патенте США No. 6147203, который включен в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме. Любая из этих антигенсвязывающих единиц может быть использована в настоящем изобретении. В некоторых аспектах антигенсвязывающая единица может представлять собой цельный иммуноглобулин, имеющий две легкие цепи в паре с двумя тяжелыми цепями.
Антигенсвязывающие единицы могут представлять собой гетеромультимеры, содержащие полипептид легкой цепи и полипептид тяжелой цепи. Примеры антигенсвязывающей единицы включают, но не ограничиваются ими, (i) фрагмент ccFv, стабилизированный гетеродимеризационными последовательностями, раскрытыми в патенте США No. № 6833441, который включен в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме; (ii) любые другие одновалентные и поливалентные молекулы, содержащие по меньшей мере один фрагмент ccFv, как описано в настоящем документе; (iii) Fab–фрагмент, состоящий из доменов VL, VH, CL и CH1; (iv) Fd–фрагмент, состоящий из доменов VH и CH1; (v) Fv–фрагмент, состоящий из доменов VL и VH одного плеча антитела; (vi) F(ab')2–фрагмент, двухвалентный фрагмент, содержащий два Fab–фрагмента, связанных дисульфидным мостиком в шарнирной области; и (vii) диатело.
Поликлональные антитела могут быть получены по стандартному протоколу путем введения продуктивному животному антигенной композиции. См., например, Harlow and Lane, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, 1988. При использовании цельного белка или большей части белка антитела могут быть получены путем иммунизации продуктивного животного белком и подходящим адъювантом (например, адъювантом Фрейнда, полным адъювантом Фрейнда, эмульсиями масло–в–воде и т. д.). Когда используют меньший пептид, предпочтительно конъюгировать пептид с большей молекулой для получения иммуностимулирующего конъюгата. Обычно используемые конъюгатные белки, которые коммерчески доступны для такого применения, включают бычий сывороточный альбумин (BSA) и гемоцианин лимфы улитки (KLH). Для получения антител к конкретным эпитопам могут быть использованы пептиды, полученные из полноразмерной последовательности. Альтернативно, чтобы генерировать антитела к относительно коротким пептидным частям белка–мишени, может быть вызван превосходный иммунный ответ, если полипептид присоединен к белку–носителю, такому как овальбумин, BSA или KLH.
Поликлональные или моноклональные антигенсвязывающие единицы или антитела могут быть получены от животных, которые были генетически изменены для получения человеческих иммуноглобулинов. Трансгенное животное может быть получено путем первоначального получения «нокаутного» животного, которое не продуцирует естественные антитела животного, и путем стабильной трансформации животного с помощью локуса человеческого антитела (например, путем использования искусственной хромосомы человека). В таких случаях животным вырабатываются только человеческие антитела. Способы генерации таких животных и получения из них антител описаны в патенте США No. 6162963 и 6150584, которые включены в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме. Такие антитела можно назвать ксеногенными антителами человека.
Альтернативно, антигенсвязывающие единицы могут быть получены из фаговых библиотек, содержащих вариабельные области человека. Смотрите пат. США No. 6174708, который включен в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме.
В некоторых аспектах любого из раскрытых в настоящем описании вариантов осуществления антигенсвязывающая единица продуцируется гибридомой. Например, антигенсвязывающая единица, раскрытая в настоящем описании, может быть получена гибридомой, выбранной из группы, состоящей из гибридом, экспрессирующих одну из антигенсвязывающих единиц, перечисленных в Таблице 1. Например, гибридома может быть любой гибридомой, депонированной [дата] со ссылочным номером [вставить ссылочный номер].
Для моноклональных антигенсвязывающих единиц или моноклональных антител гибридомы могут быть образованы путем выделения стимулированных иммунных клеток, таких как клетки селезенки инокулированного животного. Затем эти клетки могут быть слиты с иммортализованными клетками, такими как клетки миеломы или трансформированные клетки, которые способны неограниченно реплицироваться в клеточной культуре, тем самым продуцируя иммортализованную, секретирующую иммуноглобулины клеточную линию. Используемая иммортализованная клеточная линия может быть выбрана так, чтобы иметь дефицит ферментов, необходимых для использования определенных питательных веществ. Многие такие клеточные линии (такие как миеломы) известны специалистам в данной области и включают, например, тимидинкиназу (ТК) или гипоксантин–гуанинфосфорибоксилтрансферазу (HGPRT). Этот дефицит позволяет осуществлять селекцию слитых клеток в соответствии с их способностью расти, например, на среде, содержащей гипоксантин–аминоптеринтимидин (HAT).
Кроме того, антигенсвязывающая единица может быть получена с помощью генетического конструирования. Гуманизированные, химерные или ксеногенные человеческие антигенсвязывающие единицы, которые вызывают меньше иммунного ответа при введении людям, используются в настоящем изобретении.
Описанные в настоящем документе антигенсвязывающие единицы могут иметь пониженную склонность вызывать нежелательный иммунный ответ у людей, например, анафилактический шок, и также могут проявлять пониженную склонность к праймированию иммунного ответа, что предотвращало бы повторное введение с терапевтическим или визуализирующим агентом для антител (например, ответ человеческого антимышиного антитела «HAMA»). Такие антигенсвязывающие единицы включают, но не ограничиваются ими, гуманизированные, химерные или ксеногенные антигенсвязывающие единицы человека.
Химерные антигенсвязывающие единицы или химерные антитела могут быть получены, например, рекомбинантными способами путем объединения вариабельных областей легкой и тяжелой цепей мыши (VK и VH), полученных из клона гибридомы мыши (или другого животного происхождения), с константными областями легкой и тяжелой цепи человека, чтобы получить антитело с преимущественно человеческими доменами. Получение таких химерных антител хорошо известно в данной области и может быть достигнуто стандартными способами (как описано, например, в патенте США № 5624659, который включен в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме).
Термин «гуманизированный» применительно к антителам, не относящимся к человеческим (например, антитела грызунов или приматов), представляет собой гибридные иммуноглобулины, цепи иммуноглобулинов или их фрагменты, которые содержат минимальную последовательность, полученную из иммуноглобулина, не являющегося человеческим. По большей части гуманизированные антитела представляют собой человеческие иммуноглобулины (антитело–реципиент), в которых остатки области, определяющей комплементарность, (CDR) реципиента заменены остатками из CDR вида, отличного от человека (донорское антитело), такого как мышь, крыса, кролик или примат, имеющей желаемую специфичность, аффинность и способность. В некоторых случаях остатки каркасной области Fv (FR) человеческого иммуноглобулина заменены соответствующими остатками, не являющимися человеческими. Кроме того, гуманизированное антитело может содержать остатки, которые не обнаружены ни в реципиентном антителе, ни в импортированных CDR или каркасных последовательностях. Эти модификации осуществлены для дальнейшего улучшения и оптимизации работы антител и минимизации иммуногенности при введении в организм человека. В некоторых примерах гуманизированное антитело будет включать, по существу, все, по меньшей мере, один, и, как правило, два вариабельных домена, в которых все или, по существу, все области CDR соответствуют областям иммуноглобулина, не являющегося человеческим, и все или по существу все FR–области представляют собой последовательности иммуноглобулина человека. Гуманизированное антитело также может содержать, по меньшей мере, часть константной области иммуноглобулина (Fc), обычно иммуноглобулина человека.
Гуманизированные антитела могут быть сконструированы так, чтобы они содержали человеческие иммуноглобулиновые домены и включали только области, определяющие комплементарность, антител животного происхождения. Это может быть достигнуто путем тщательного изучения последовательности гипервариабельных петель вариабельных областей моноклональной антигенсвязывающей единицы или моноклонального антитела и подгонки их к структуре человеческой антигенсвязывающей единицы или цепей человеческого антитела. См., например, Пат. США No. 6188787, который включен в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме.
Способы гуманизации антител, не являющихся человеческими, хорошо известны в данной области. «Гуманизированные» антитела представляют собой антитела, в которых по меньшей мере часть последовательности была изменена по сравнению с первоначальной формой, чтобы сделать ее более похожей на человеческие иммуноглобулины. В некоторых вариантах константные области (C) тяжелой (H) и легкой (L) цепей заменены человеческой последовательностью. Это может быть гибридный полипептид, содержащий вариабельную (V) область и гетерологичную область иммуноглобулина C. В некоторых вариантах области, определяющие комплементарность, (CDR) содержат последовательности антител, не являющихся человеческими, тогда как V–каркасные области также были преобразованы в человеческие последовательности. См., например, ЕР 0329400. В некоторых вариантах V–области гуманизируют путем конструирования консенсусных последовательностей V–областей человека и мыши и преобразования остатков вне CDR, которые отличаются между консенсусными последовательностями.
В принципе, каркасная последовательность из гуманизированного антитела может служить матрицей для трансплантации CDR; однако было продемонстрировано, что прямая замена CDR в такой структуре может привести к значительной потере аффинности связывания с антигеном. Glaser et al. (1992) J. Immunol. 149: 2606; Tempest et al. (1992) Biotechnology 9: 266; и Shalaby et al. (1992) J. Exp. Med. 17: 217. Чем более гомологично человеческое антитело (HuAb) по отношению к исходному мышиному антителу (muAb), тем менее вероятно, что человеческий каркас внесет искажения в CDR мыши, которые могут снизить аффинность. На основе поиска гомологии последовательностей в базе данных последовательностей антител, HuAb IC4 обеспечивает хорошую гомологию каркасной области для muM4TS.22, хотя также могут быть подходящими другие высоко гомологичные HuAb, особенно L–цепи каппа из человеческой подгруппы I или H–цепи из человеческой подгруппы III., Kabat et al. (1987). Различные компьютерные программы, такие как ENCAD (Levitt et al. (1983) J. Mol. Biol. 168: 595) доступны для прогнозирования идеальной последовательности для V–области. Таким образом, изобретение охватывает HuAb с различными вариабельными (V) областями. Специалист в данной области техники может определить подходящие последовательности V–области и оптимизировать эти последовательности. Способы получения антител с пониженной иммуногенностью также описаны в пат. США № 5270202 и ЕР 699755.
Гуманизированные антитела могут быть получены с помощью процесса анализа родительских последовательностей и различных концептуальных гуманизированных продуктов с использованием трехмерных моделей родительских и гуманизированных последовательностей. Трехмерные модели иммуноглобулинов знакомы специалистам в данной области. Доступны компьютерные программы, которые иллюстрируют и отображают возможные трехмерные конформационные структуры выбранных кандидатных последовательностей иммуноглобулина. Изучение этих изображений позволяет анализировать вероятную роль остатков в функционировании кандидатной последовательности иммуноглобулина, то есть анализ остатков, которые влияют на способность кандидатного иммуноглобулина связывать свой антиген. Таким образом, остатки FR могут быть выбраны и объединены из реципиентной и импортированной последовательностей, так что достигается целевая характеристика антитела, такая как повышенная аффинность к целевому антигену (антигенам).
Процесс гуманизации рассматриваемых антигенсвязывающих единиц может быть следующим. Наиболее подходящие зародышевые акцепторные вариабельные области тяжелой и легкой цепей выбирают на основе гомологии, канонической структуры и физических свойств зародышевых человеческих антител для трансплантации. Осуществляют компьютерное моделирование mVH/VL в сравнении с трансплантированными hVH/VL и генерируют прототип последовательности гуманизированного антитела. Если моделирование указывало на необходимость обратных мутаций каркасной области, то генерируется второй вариант с указанными изменениями FW. Синтезируют фрагменты ДНК, кодирующие выбранные зародышевые каркасные области и мышиные CDR. Синтезированные фрагменты ДНК субклонируют в экспрессирующие векторы для IgG, и последовательности подтверждают секвенированием ДНК. Гуманизированные антитела экспрессируются в клетках, таких как 293F, и белки тестируются, например, в анализах фагоцитоза MDM и анализах связывания антигена. Гуманизированные антигенсвязывающие единицы сравнивают с родительскими антигенсвязывающими единицами по антигенсвязывающей аффинности, например, с помощью FACS на клетках, экспрессирующих антиген–мишень. Если аффинность более чем в 2 раза ниже, чем у родительской антигенсвязывающей единицы, то можно создать и протестировать второй раунд гуманизированных вариантов, как описано выше.
Как отмечено выше, антигенсвязывающие единицы могут быть либо «одновалентными», либо «поливалентными». В то время как первые имеют один сайт связывания на антигенсвязывающую единицу, последние содержат несколько сайтов связывания, способных связываться более чем с одним антигеном одного или другого вида. В зависимости от количества сайтов связывания, антигенсвязывающие единицы могут быть двухвалентными (имеющими два антигенсвязывающих сайта), трехвалентными (имеющими три антигенсвязывающих сайта), четырехвалентными (имеющими четыре антигенсвязывающих сайта) и так далее.
Поливалентные антигенсвязывающие единицы могут быть дополнительно классифицированы на основе их специфичности связывания. «Моноспецифичной» антигенсвязывающей единицей является молекула, способная связываться с одним или более антигенами одного и того же типа. «Полиспецифичной» антигенсвязывающей единицей является молекула, обладающая специфичностью связывания по меньшей мере для двух разных антигенов. Хотя такие молекулы обычно связываются только с двумя разными антигенами (то есть биспецифичные антигенсвязывающие единицы), антитела с дополнительной специфичностью, такие как триспецифичные антитела, охватываются этим выражением при использовании в настоящем описании. Настоящее раскрытие дополнительно относится к полиспецифичным антигенсвязывающим единицам. Полиспецифичные антигенсвязывающие единицы представляют собой поливалентные молекулы, способные связываться по меньшей мере с двумя различными антигенами. Предпочтительными полиспецифичными антигенсвязывающими единицами являются биспецифичные и триспецифичные молекулы, проявляющие специфичность связывания с двумя и тремя различными антигенами, соответственно.
В некоторых аспектах варианта осуществления, раскрытого в настоящем описании, антигенсвязывающая единица представляет собой биспецифичную антигенсвязывающую единицу, где антигенсвязывающая единица специфически связывается с CD47 и вторым антигеном. В некоторых примерах второй антиген не является CD47. В некоторых примерах вторым антигеном является PD1 или PD–L1. В некоторых примерах второй антиген представляет собой другие молекулы иммунной контрольной точки, включая CTLA–4, OX40, OX40L, 4–1BB (CD137), CD40, CD40L, ICOS, CD70, CD27, GITR, GITRL, TL1A, TNFRSF25, VISTA, TIM– 3, LAG–3, TIGIT, CD112, CD112R, CD226, CD96, B7–H3, B7–H4, CD48, CD244, CD200R, CD200, HVEM, BTLA, CD160, LIGHT, HHLA2, TMIGD2, BTNL2, CD39, CD73, NKG2A, NKG2D, MICA/B, KIR2DL–1, KIR2DL–2, KIR2DL–3 и KIR3DL2. В некоторых примерах вторым антигеном является EGFR. В некоторых примерах вторым антигеном является CD19, CD20, CD22, CD33, CD44, CD52, CD79b, CD96, CD97, CD99, CD123, CD138, CD155, CD171, PTHR2, HAVCR2 или другой известный маркер опухолевых клеток. Дополнительные примеры подходящих вторых антигенов включают, но не ограничиваются ими, Fc γRI, CD 15, p185 HER2, HER3, FcγRIII (CD16), CD3, злокачественная B–клетка (1D10), p97, клаудин 18.2, OVCAR–3, глипикан–3, мезотелин, L–D1 (карцинома толстой кишки), Trop2, аналог гормона, стимулирующего меланоциты, ErbB2, CAMA1, MoV18, CAIX (карбоксиангидраза–IX), DCC, UNC5A, MET, TrkC, TrkA, RET, ALK, молекула адгезии нервных клеток (NCAM), фолат–связывающий белок (FBP), GD2, GD3, EpCAM, EGP–40, VEGFR2, MUC–1, MUC–16, STEAP1 (шести–трансмембранный эпителиальный антиген простаты), PSMA, PSCA (антиген стволовой клетки предстательной железы), GPC–3, LMP–1, DNAM–1 (вспомогательная молекула DNAX–1), антиген, ассоциированный с панкарциномой (AMOC–31), сапорин, Id–1, CD7, CD38, CD30, CD44v7/8, CEA, А–цепь рицина, интерферон–α (IFN–α), гибридомный идиотип, алкалоид барвинка, щелочную фосфатазу, фибрин, активатор тканевого плазминогена (tPA), активатор плазминогена урокиназного типа (uPA), липопротеин низкой плотности (LDL), Fc–рецептор (например, FcγRI, FcγRII или FcγRIII), вирус простого герпеса (HSV), Т–клеточный рецептор, грипп, FcγR, ВИЧ, EOTUBE, DPTA, гаптен, IgG кролика, ферритин, пероксидазу хрена (HRP), гормон, соматостатин, вещество P, FITC и бета–галактозидазу. Другие подходящие вторые антигены включают, но не ограничиваются ими, антиген опухолевых клеток, цитотоксическую триггерную молекулу, токсин, фибринолитический агент, рецептор клеточной поверхности, мишень инфекционного заболевания, вакцинные адъюванты, диагностический агент, детектирующую молекулу и репортерную молекулу.
Полинуклеотиды и векторы по настоящему изобретению
В некоторых вариантах осуществления настоящее раскрытие относится к выделенным нуклеиновым кислотам, кодирующим любые антигенсвязывающие единицы, раскрытые в настоящем описании. В другом варианте осуществления настоящее раскрытие относится к векторам, содержащим последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую любую антигенсвязывающую единицу, раскрытую в настоящем описании. В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к выделенным нуклеиновым кислотам, которые кодируют CDR легкой цепи и CDR тяжелой цепи антигенсвязывающей единицы, раскрытой в настоящем описании.
Указанные антигенсвязывающие единицы могут быть получены с помощью технологии рекомбинантной ДНК, методов синтетической химии или их комбинации. Например, последовательности, кодирующие целевые компоненты антигенсвязывающих единиц, включая CDR легкой цепи и CDR тяжелой цепи, обычно собирают, клонируют в экспрессирующий вектор с использованием стандартных молекулярных методик, известных в данной области техники. Эти последовательности могут быть собраны из других векторов, кодирующих целевую последовательность белка, из сгенерированных ПЦР фрагментов с использованием соответствующих матричных нуклеиновых кислот или путем сборки синтетических олигонуклеотидов, кодирующих целевые последовательности. Системы экспрессии могут быть созданы путем трансфекции подходящей клетки экспрессирующим вектором, содержащим интересующую антигенсвязывающую единицу.
Нуклеотидные последовательности, соответствующие различным областям легких или тяжелых цепей существующего антитела, могут быть легко получены и секвенированы с использованием общепринятых методов, включая, но не ограничиваясь ими, гибридизацию, ПЦР и секвенирование ДНК. Клетки гибридомы, которые продуцируют моноклональные антитела, служат предпочтительным источником нуклеотидных последовательностей антител. Огромное количество клеток гибридомы, продуцирующих множество моноклональных антител, может быть получено из общедоступных или частных репозиториев. Крупнейшим депозитарным агентом является Американская коллекция типовых культур (atcc.org), которая предлагает разнообразную коллекцию хорошо охарактеризованных линий гибридомных клеток. Альтернативно, нуклеотиды антител могут быть получены из иммунизированных или неиммунизированных грызунов или людей и из органов, таких как лимфоциты селезенки и периферической крови. Конкретные методики, применимые для выделения и синтеза нуклеотидов антител, описаны в Orlandi et al. (1989) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A 86: 3833–3837; Larrick et al. (1989) Biochem. Biophys. Res. Commun. 160:1250–1255; Sastry et al. (1989) Proc. Natl. Acad. Sci., U.S.A. 86: 5728–5732; и пат. США № 5969108.
Полинуклеотиды, кодирующие антигенсвязывающие единицы, также можно модифицировать, например, путем замены кодирующей последовательности для константных областей тяжелой и легкой цепи человека вместо гомологичных последовательностей, не являющихся человеческими. Таким образом, получают химерные антитела, которые сохраняют специфичность связывания исходного антигенсвязывающей единицы.
Также понятно, что полинуклеотиды, воплощенные в изобретении, включают те, которые кодируют функциональные эквиваленты и их фрагменты приведенных в качестве примера полипептидов. Функционально эквивалентные полипептиды включают те, которые усиливают, уменьшают или не оказывают значительного влияния на свойства полипептидов, кодируемых ими. Функциональными эквивалентами могут быть полипептиды, имеющие консервативные аминокислотные замены, аналоги, включающие слияния, и мутанты.
Из–за вырожденности генетического кода могут иметь место значительные различия в нуклеотидах последовательности, кодирующей антигенсвязывающую единицу, а также в последовательностях, подходящих для конструирования полинуклеотида и векторов по настоящему изобретению. Варианты последовательностей могут иметь модифицированные последовательности ДНК или аминокислот, одну или более замен, делеций или вставок, общий эффект которых заключается в сохранении желаемой антигенсвязывающей активности. Например, в кодирующей области могут быть сделаны различные замены, которые либо не изменяют кодируемые аминокислоты, либо приводят к консервативным изменениям. Эти замены охвачены настоящим изобретением. Консервативные аминокислотные замены включают замены в следующих группах: глицин, аланин; валин, изолейцин, лейцин; аспарагиновая кислота, глутаминовая кислота; аспарагин, глутамин; серин, треонин; лизин, аргинин; и фенилаланин, тирозин. В то время как консервативные замены эффективно изменяют один или более аминокислотных остатков, содержащихся в полученном полипептиде, ожидается, что замены не будут влиять на антигенсвязывающую активность получаемых в результате антигенсвязывающих единиц. Нуклеотидные замены, которые не изменяют кодируемые аминокислотные остатки, полезны для оптимизации экспрессии генов в различных системах. Подходящие замены известны специалистам в данной области техники и производятся, например, для отражения предпочтительного использования кодонов в системах экспрессии.
При желании рекомбинантные полинуклеотиды могут содержать гетерологичные последовательности, которые облегчают обнаружение экспрессии и очистку генного продукта. Примеры таких последовательностей известны в данной области и включают те, которые кодируют репортерные белки, такие как β–галактозидаза, β–лактамаза, хлорамфениколацетилтрансфераза (CAT), люцифераза, зеленый флуоресцентный белок (GFP) и их производные. Другие гетерологичные последовательности, которые облегчают очистку, могут кодировать эпитопы, такие как Myc, HA (полученный из гемагглютинина вируса гриппа), His–6, FLAG или Fc–часть иммуноглобулина, глутатион–S–трансфераза (GST) и мальтоза–связывающий белок (MBP).
Полинуклеотиды, раскрытые в настоящем описании, могут быть конъюгированы с различными химически функциональными фрагментами, описанными выше. Обычно используемые фрагменты включают метки, способные продуцировать детектируемый сигнал, сигнальные пептиды, агенты, которые повышают иммунологическую реактивность, агенты, которые облегчают связывание с твердой подложкой, носители вакцины, модификаторы биоответа, парамагнитные метки и лекарственные средства. Фрагменты могут быть ковалентно связанным полинуклеотидом, рекомбинантно связанным или другими способами, известными в данной области.
Полинуклеотиды по изобретению могут содержать дополнительные последовательности, такие как дополнительные кодирующие последовательности в одной и той же транскрипционной единице, контролирующие элементы, такие как промоторы, сайты связывания рибосом и сайты полиаденилирования, дополнительные транскрипционные единицы под контролем того же или другого промотора, последовательности, которые позволяют клонирование, экспрессию и трансформацию клетки–хозяина и любой такой конструкции, которая может быть желательна для обеспечения вариантов осуществления настоящего изобретения.
Полинуклеотиды, воплощенные в настоящем изобретении, могут быть получены с использованием химического синтеза, методов рекомбинантного клонирования, ПЦР или любой их комбинации. Способы химического синтеза полинуклеотидов хорошо известны в данной области и не требуют подробного описания в данном документе. Специалист в данной области может использовать данные последовательностей, представленные в настоящем документе, для получения желаемого полинуклеотида путем использования синтезатора ДНК или заказа в коммерческой службе.
Полинуклеотиды, содержащие желаемую последовательность, могут быть встроены в подходящий вектор, который, в свою очередь, может быть введен в подходящую клетку–хозяин для репликации и амплификации. Соответственно, изобретение охватывает множество векторов, содержащих один или более полинуклеотидов по настоящему изобретению. Также предоставлены селектируемые библиотеки экспрессирующих векторов, содержащие по меньшей мере один вектор, кодирующий антигенсвязывающие единицы, раскрытые в настоящем описании.
Векторы по настоящему изобретению обычно содержат транскрипционные или трансляционные контрольные последовательности, необходимые для экспрессии антигенсвязывающих единиц. Подходящие последовательности транскрипции или контроля трансляции включают, но не ограничиваются ими, области связывания точки начала репликации, промотора, энхансера, репрессора, сайты инициации транскрипции, сайты связывания рибосом, сайты инициации трансляции и сайты терминации для транскрипции и трансляции.
Выбор промоторов будет в значительной степени зависеть от клеток–хозяев, в которые вводится вектор. Также возможно использовать промоторы, обычно связанные с желаемым геном легкой или тяжелой цепи, при условии, что такие контрольные последовательности совместимы с системой клеток–хозяев. Также могут быть использованы клеточно–специфические или тканеспецифичные промоторы. Специалистами в данной области было описано и применялось огромное разнообразие тканеспецифичных промоторов. Типичные промоторы, действующие в селективных животных клетках, включают промоторы, специфичные для гепатоцитов, и промоторы, специфичные для сердечной мышцы. В зависимости от выбора типов клеток–реципиентов, специалистам в данной области техники известны другие подходящие клеточно–специфические или тканеспецифичные промоторы, применимые для конструирования экспрессирующих векторов по настоящему изобретению.
Используя известные методы молекулярного клонирования или генной инженерии, подходящие последовательности контроля транскрипции, энхансеры, терминаторы или любой другой генетический элемент, известный в данной области техники, могут быть интегрированы в функциональной связи, необязательно дополнительно с интактными селектируемыми слитыми генами, которые должны экспрессироваться в соответствии с настоящим изобретением. В дополнение к вышеописанным элементам векторы могут содержать маркер селекции (например, ген, кодирующий белок, необходимый для выживания или роста клетки–хозяина, трансформированной вектором), хотя такой маркерный ген может переноситься на другой полинуклеотидной последовательности, совместно вводимой в клетку–хозяин.
Полинуклеотиды и векторы по настоящему изобретению имеют несколько конкретных применений. Они полезны, например, в системах экспрессии для получения антигенсвязывающих единиц. Такие полинуклеотиды полезны в качестве праймеров для усиления амплификации желаемых полинуклеотидов. Кроме того, полинуклеотиды по настоящему изобретению также полезны в фармацевтических композициях, включая вакцины, средства диагностики и лекарственные средства.
Клетки–хозяева по настоящему изобретению могут быть использованы, среди прочего, в качестве репозиториев полинуклеотидов по настоящему изобретению, векторов или в качестве носителей для продуцирования и скрининга желаемых антигенсвязывающих единиц на основе их антигенсвязывающих специфичностей.
Соответственно, изобретение относится к способу идентификации антигенсвязывающей единицы, которая иммунореактивна с желаемым антигеном. Такой способ может включать следующие стадии: (a) получение генетически разнообразной библиотеки антигенсвязывающих единиц, где библиотека содержит, по меньшей мере, одну рассматриваемую антигенсвязывающую единицу; (b) контактирование библиотеки антигенсвязывающих единиц с желаемым антигеном; (c) обнаружение специфического связывания между антигенсвязывающими единицами и антигеном, тем самым идентифицируя антигенсвязывающую единицу, которая иммунореактивна с желаемым антигеном.
Способность антигенсвязывающей единицы специфически связываться с желаемым антигеном может быть проверена различными процедурами, хорошо известными в данной области. См. Harlow and Lane (1988) Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, New York; Gherardi et al. (1990) J. Immunol. Meth. 126: 61–68. Как правило, антигенсвязывающие единицы, проявляющие желаемую специфичность связывания, могут быть обнаружены непосредственно с помощью иммуноанализа, например, путем взаимодействия меченых антигенсвязывающих единиц с антигенами, которые иммобилизованы на твердой подложке или субстрате. Как правило, субстрат, к которому прикреплен антиген, изготовлен из материала, демонстрирующего низкий уровень неспецифического связывания во время иммуноанализа. Пример твердой подложки изготовлен из одного или более из следующих типов материалов: пластмассовые полимеры, стекло, целлюлоза, нитроцеллюлоза, полупроводниковый материал и металл. В некоторых примерах субстрат представляет собой чашку Петри, хроматографические гранулы, магнитные гранулы и тому подобное.
Для таких твердофазных анализов непрореагировавшие антигенсвязывающие единицы удаляют промывкой. Однако в жидкофазном анализе непрореагировавшие антигенсвязывающие единицы удаляются с помощью некоторых других методов разделения, таких как фильтрация или хроматография. После связывания антигена с мечеными антигенсвязывающими единицами определяют количество связанной метки. Разновидностью этого метода является конкурентный анализ, в котором антиген связан с насыщением исходной связывающей молекулой. Когда популяция рассматриваемой антигенсвязывающей единицы вводится в комплекс, то могут конкурировать только те, которые проявляют более высокую аффинность связывания, и, таким образом, остаются связанными с антигеном.
Альтернативно, специфическое связывание с данным антигеном можно оценить путем сортировки клеток, которая включает в себя презентирование желаемого антигена на сортируемых клетках, затем мечение клеток–мишеней антигенсвязывающими единицами, которые связаны с детектируемыми агентами, с последующим отделением меченых клеток от немеченых в сортере клеток. Сложным методом разделения клеток является сортировка клеток, активируемая флуоресценцией (FACS). Клетки, перемещающиеся в одном ряду в виде тонкого потока, пропускают через лазерный луч, после чего измеряют флуоресценцию каждой клетки, связанной флуоресцентно меченной антигенсвязывающей единицей.
Последующий анализ элюированных антигенсвязывающих единиц может включать секвенирование белка для определения аминокислотных последовательностей легких цепей и тяжелых цепей. На основе выведенных аминокислотных последовательностей кДНК, кодирующая полипептиды антител, затем может быть получена методами рекомбинантного клонирования, включая ПЦР, скрининг библиотек, поиск гомологии в существующих базах данных нуклеиновых кислот или любую их комбинацию. Обычно используемые базы данных включают, но не ограничиваются ими, GenBank, EMBL, DDBJ, PDB, SWISS–PROT, EST, STS, GSS и HTGS.
Когда библиотека антигенсвязывающих единиц представлена на фаговых или бактериальных частицах, селекцию предпочтительно осуществляют с использованием аффинной хроматографии. Способ обычно осуществляется путем связывания фаговой библиотеки антигенсвязывающих единиц с планшетами с покрытием в виде антигена, матрицами колонок, клетками или с биотинилированным антигеном в растворе с последующим захватом. Фаги или бактерии, связанные с твердой фазой, промывают и затем элюируют растворимым гаптеном, кислотой или щелочью. Альтернативно, повышающиеся концентрации антигена могут быть использованы для отделения антигенсвязывающих единиц от аффинной матрицы. Для определенных антигенсвязывающих единиц с чрезвычайно высокой аффинностью или авидностью к антигену для эффективного элюирования может потребоваться высокое pH или умеренный восстанавливающий раствор, как описано в WO 92/01047.
Эффективность селекции, вероятно, зависит от комбинации нескольких факторов, включая кинетику диссоциации во время отмывки и от того, может ли множество антигенсвязывающих единиц на одном фаге или бактерии одновременно связываться с антигенами на твердой подложке. Например, антитела с быстрой кинетикой диссоциации (и слабой аффинностью связывания) могут быть сохранены путем использования коротких промывок, многовалентного дисплея и высокой плотности покрытия антигена на твердой подложке. Наоборот, селекции антигенсвязывающих единиц с медленной кинетикой диссоциации (и хорошей аффинностью связывания) может способствовать использование продолжительных промывок, одновалентных фагов и низкой плотности покрытия антигена.
При желании библиотека антигенсвязывающих единиц может быть предварительно отселектирована против неродственного антигена для обратной селекции нежелательных антигенсвязывающих единиц. Библиотека также может быть предварительно отселектирована против родственного антигена для выделения, например, антиидиотипических антигенсвязывающих единиц.
Клетки–хозяева по настоящему изобретению
В некоторых вариантах осуществления настоящее раскрытие относится к клеткам–хозяевам, экспрессирующим любую из антигенсвязывающих единиц, раскрытых в настоящем описании. Рассматриваемая клетка–хозяин обычно содержит нуклеиновую кислоту, кодирующую любую из антигенсвязывающих единиц, описанных в настоящем документе.
Изобретение относится к клеткам–хозяевам, трансфецированным полинуклеотидами, векторами или библиотекой векторов, описанных выше. Векторы могут быть введены в подходящую прокариотическую или эукариотическую клетку любым из ряда подходящих способов, включая электропорацию, бомбардировку микрочастицами; липофекцию, инфекцию (где вектор связан с инфекционным агентом), трансфекцию с использованием хлорида кальция, хлорида рубидия, фосфата кальция, DEAE–декстрана или других веществ. Выбор средств для введения векторов часто будет зависеть от особенностей клетки–хозяина.
Для большинства животных клеток любой из вышеупомянутых способов подходит для доставки вектора. Предпочтительными животными клетками являются клетки позвоночных, предпочтительно клетки млекопитающих, способные экспрессировать экзогенно введенные генные продукты в большом количестве, например на уровне миллиграмма. Неограничивающими примерами предпочтительных клеток являются клетки NIH3T3, клетки COS, HeLa и CHO.
После введения в подходящую клетку–хозяин экспрессию антигенсвязывающих единиц можно определить с использованием любого анализа нуклеиновой кислоты или белка, известного в данной области. Например, присутствие транскрибированной мРНК CDR легкой цепи или CDR тяжелой цепи или антигенсвязывающей единицы может быть обнаружено и/или количественно определено с помощью обычных анализов гибридизации (например, Нозерн–блоттинг), процедур амплификации (например, ОТ–ПЦР), SAGE (Патент США № 5695937) и технологии на основе эррея (см., например, патенты США №№540583, 5412987 и 5445934) с использованием зондов, комплементарных любой области антигенсвязывающей единицы полинуклеотида.
Экспрессия вектора также может быть определена путем изучения экспрессии антигенсвязывающей единицы. В данной области доступны различные методики анализа белка. Они включают, но не ограничиваются ими, радиоиммуноанализ, ИФА (иммуноферментные радиометрические анализы), иммуноанализ «сэндвич», иммунорадиометрические анализы, иммуноанализ in situ (с использованием, например, коллоидного золота, ферментных или радиоизотопных меток), вестерн–блот–анализ, иммунопреципитационные анализы, иммунофлуоресцентные анализы и SDS–PAGE.
Приготовление антигенсвязывающих единиц
В некоторых вариантах осуществления настоящее раскрытие относится к способам получения любой антигенсвязывающей единицы, раскрытой в настоящем описании, где способ включает культивирование клеток–хозяев, экспрессирующих антигенсвязывающую единицу, в условиях, подходящих для экспрессии антигенсвязывающей единицы, и выделение антигенсвязывающей единицы, экспрессируемой клеткой–хозяином.
Экспрессированные антигенсвязывающие единицы могут быть выделены с использованием различных способов очистки белка, известных в данной области. Как правило, антигенсвязывающая единица выделяется из культуральной среды в виде секретируемых полипептидов, хотя они могут быть выделены из лизатов клеток–хозяев или периплазмы бактерий, если они непосредственно получены без сигнальных пептидов. Если антигенсвязывающие единицы связаны с мембраной, они могут быть растворены с помощью подходящих растворов детергентов, обычно используемых специалистами в данной области. Извлеченные антигенсвязывающие единицы могут быть дополнительно очищены с помощью осаждения солью (например, сульфатом аммония), ионообменной хроматографии (например, на катионнообменной или анионообменной колонке, работающей при нейтральном pH и элюированы в ступенчатом градиенте повышения ионной силы), гель–фильтрационной хроматографией (включая гель–фильтрационную ВЭЖХ) и хроматографии на колонке, аффинной к метке, или на аффинных смолах, таких как протеин А, протеин G, гидроксиапатит и антитело к иммуноглобулину.
Кроме того, дериватизированные иммуноглобулины с добавленными химическими линкерами, детектируемые фрагменты, такие как флуоресцентные красители, ферменты, субстраты, хемилюминесцентные фрагменты, специфические связывающие фрагменты, такие как стрептавидин, авидин или биотин, или лекарственные конъюгаты, могут быть использованы в способах и композициях по настоящему изобретению.
Кроме того, в настоящем описании раскрыты антигенсвязывающие единицы, конъюгированные с химически функциональным фрагментом. Как правило, фрагмент представляет собой метку, способную генерировать детектируемый сигнал. Эти конъюгированные антигенсвязывающие единицы полезны, например, в системах детектирования, таких как количественное определение опухолевой нагрузки и визуализация метастатических очагов и визуализация опухоли. Такие метки известны в данной области техники и включают, но не ограничиваются ими, радиоизотопы, ферменты, флуоресцентные соединения, хемилюминесцентные соединения, кофакторы и ингибиторы субстратов биолюминесцентных соединений. См. например патенты, описывающие использование таких меток, пат. США № 3817837; 3850752; 3939350; 3996345; 4277437; 4275149; и 4366241. Фрагменты могут быть ковалентно связаны с антигенсвязывающими единицами, рекомбинантно связаны или конъюгированы с антигенсвязывающими единицами через вторичный реагент, такой как второе антитело, протеин А или комплекс биотин–авидин.
Другие функциональные фрагменты включают сигнальные пептиды, агенты, которые повышают иммунологическую реактивность, агенты, которые облегчают связывание с твердой подложкой, вакцинные носители, модификаторы биоответа, парамагнитные метки и лекарственные средства. Сигнальные пептиды представляют собой короткие аминокислотные последовательности, которые направляют вновь синтезированный белок через клеточную мембрану, обычно через эндоплазматический ретикулум в эукариотических клетках, и либо через внутреннюю мембрану, либо и через внутреннюю и внешнюю мембраны бактерий. Сигнальные пептиды могут находиться в N–концевой части полипептида или в С–концевой части полипептида и могут ферментативно удаляться между биосинтезом и секрецией полипептида из клетки. Такой пептид может быть включен в антигенсвязывающие единицы для обеспечения секреции синтезированных молекул.
Агенты, которые усиливают иммунологическую реактивность, включают, но не ограничиваются ими, бактериальные суперантигены. Агенты, которые облегчают связывание с твердой подложкой, включают, но не ограничиваются ими, биотин или авидин. Иммуногенные носители включают, но не ограничиваются ими, любые физиологически приемлемые буферы. Модификаторы биологического ответа включают цитокины, в частности фактор некроза опухоли (TNF), интерлейкин–2, интерлейкин–4, гранулоцит–макрофаг–колониестимулирующий фактор и γ–интерфероны.
Подходящие лекарственные фрагменты включают противоопухолевые агенты. Неограничивающие примеры включают радиоизотопы, алкалоиды барвинка, такие как сульфаты винбластина, винкристина и виндезина, адриамицин, блеомицинсульфат, карбоплатин, цисплатин, циклофосфамид, цитарабин, дакарбазин, дактиномицин, даунорубицин гидрохлорид, доксорубицин гидрохлорид, этопосид, фторурацил, ломустин, мехлорэтамин гидрохлорид, мелфалан, меркаптопурин, метотрексат, митомицин, митотан, пентостатин, пипоброман, прокарбаз гидрохлорид, стрептозотоцин, таксол, тиогуанин и урамустин.
Иммунотоксины, включая антигенсвязывающие единицы, могут быть получены рекомбинантными способами. Производство различных иммунотоксинов хорошо известно в данной области, и способы можно найти, например, в «Monoclonal Antibody–toxin Conjugates: Aiming the Magic Bullet», Thorpe et al. (1982) Monoclonal Antibodies in Clinical Medicine, Academic Press, pp. 168–190; Vitatta (1987) Science 238:1098–1104; и Winter and Milstein (1991) Nature 349:293–299. Подходящие токсины включают, но не ограничиваются ими, рицин, радионуклиды, противовирусный белок лаконоса, экзотоксин A Pseudomonas, дифтерийный токсин, А–цепь рицина, грибковые токсины, такие как ферменты рестриктоцина и фосфолипазы. См., в целом, «Chimeric Toxins», Olsnes and Pihl, Pharmac.Ther. 15:355–381 (1981); и «Monoclonal Antibodies for Cancer Detection and Therapy», eds. Baldwin and Byers, pp. 159–179, 224–266, Academic Press (1985).
Химически функциональные фрагменты могут быть получены рекомбинантно, например, путем создания слитого гена, кодирующего антигенсвязывающую единицу и функциональный фрагмент. Альтернативно, антигенсвязывающая единица может быть химически связана с фрагментом с помощью любой из множества хорошо известных химических процедур. Например, когда фрагмент представляет собой белок, связь может быть с помощью гетеробифункциональных поперечных линкеров, например, SPDP, карбодиимид глутаральдегида или тому подобного. Фрагменты могут быть ковалентно связаны или конъюгированы через вторичный реагент, такой как второе антитело, протеин А или комплекс биотин–авидин. Парамагнитные фрагменты и их конъюгирование с антителами хорошо известны в данной области. Смотри, например, Miltenyi et al. (1990) Cytometry 11: 231–238.
Способы применения и лечения
CD47–специфические антигенсвязывающие единицы и фармацевтические композиции, содержащие их, могут найти широкое применение, включая, но не ограничиваясь этим, лечение и диагностику.
В одном варианте осуществления настоящее раскрытие относится к фармацевтическим композициям, содержащим фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество и любую из антигенсвязывающих единиц, раскрытых в настоящем описании.
В другом варианте осуществления настоящее раскрытие относится к способам индукции фагоцитоза клеток, экспрессирующих CD47, причем указанный способ включает контактирование клетки, экспрессирующей CD47, с любой антигенсвязывающей единицей, раскрытой в настоящем описании. В некоторых аспектах клетка является опухолевой клеткой. В некоторых аспектах клетка представляет собой опухолевую клетку, отличную от клетки лимфомы. В некоторых аспектах клетка представляет собой опухолевую клетку, отличную от клетки лейкоза. В некоторых аспектах клетка представляет собой опухолевую клетку, отличную от клетки лимфомы и лейкоза. В некоторых аспектах клетка представляет собой гематологическую опухолевую клетку. Гемобластоз включает, но не ограничиваются ими, лейкемию, лимфому и миелому. Некоторые формы лейкоза включают, в качестве неограничивающего примера, острый лимфоцитарный лейкоз (ALL); острый миелоидный лейкоз (AML); хронический лимфолейкоз (CLL); хронический миелогенный лейкоз (CML); миелопролиферативное расстройство/новообразование (MPDS); и миелодиспластический синдром. Некоторые формы лимфомы включают, в качестве неограничивающего примера, лимфому Ходжкина, как индолентную, так и агрессивную неходжкинскую лимфому, лимфому Беркитта и фолликулярную лимфому (мелкоклеточные и крупноклеточные). Некоторые формы миеломы включают, в качестве неограничивающего примера, множественную миелому (ММ), гигантоклеточную миелому, миелому тяжелой цепи и миелому легкой цепи или миелому Бенс–Джонса. Солидные опухоли включают, например, опухоли молочной железы, опухоли яичников, опухоли легких, опухоли поджелудочной железы, опухоли простаты, меланомы, колоректальные опухоли, опухоли легких, опухоли головы и шеи, опухоли мочевого пузыря, лейомиосаркому, глиому, глиобластому, опухоли головного мозга, опухоли пищевода, опухоли желудка, печени и почек.
Еще в одном варианте осуществления настоящее раскрытие относится к способам индукции фагоцитоза клеток, экспрессирующих CD47 у человека, причем указанный способ включает введение пациенту–человеку фармацевтической композиции, содержащей фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество и любую антигенсвязывающую единицу, раскрытую в настоящем описании. В некоторых аспектах клетка является опухолевой клеткой. В некоторых аспектах клетка представляет собой опухолевую клетку, отличную от клетки лимфомы. В некоторых аспектах клетка представляет собой опухолевую клетку, отличную от клетки лейкоза. В некоторых аспектах клетка представляет собой опухолевую клетку, отличную от клетки лимфомы и лейкоза. В некоторых аспектах клетка представляет собой гематологическую опухолевую клетку. Гемобластоз включает, но не ограничиваются ими, лейкемию, лимфому и миелому. Некоторые формы лейкоза включают, в качестве неограничивающего примера, острый лимфоцитарный лейкоз (ALL); острый миелоидный лейкоз (AML); хронический лимфолейкоз (CLL); хронический миелогенный лейкоз (CML); миелопролиферативное расстройство/новообразование (MPDS); и миелодиспластический синдром. Некоторые формы лимфомы включают, в качестве неограничивающего примера, лимфому Ходжкина, как индолентную, так и агрессивную неходжкинскую лимфому, лимфому Беркитта и фолликулярную лимфому (мелкоклеточные и крупноклеточные). Некоторые формы миеломы включают, в качестве неограничивающего примера, множественную миелому (ММ), гигантоклеточную миелому, миелому тяжелой цепи и миелому легкой цепи или миелому Бенс–Джонса. Солидные опухоли включают, например, опухоли молочной железы, опухоли яичников, опухоли легких, опухоли поджелудочной железы, опухоли простаты, меланомы, колоректальные опухоли, опухоли легких, опухоли головы и шеи, опухоли мочевого пузыря, лейомиосаркому, глиому, глиобластому, опухоли головного мозга, опухоли пищевода, опухоли желудка, печени и почек.
В некоторых аспектах способов индукции фагоцитоза, как описано в настоящем документе, фагоцитоз клеток, экспрессирующих CD47, происходит с эффективностью в диапазоне от 1% до 100%. В некоторых примерах фагоцитоз происходит с эффективностью примерно 1%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% или 100%. В некоторых примерах фагоцитоз происходит с эффективностью, по меньшей мере, 1%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% или 100%. В некоторых аспектах любого из раскрытых в настоящем описании вариантов осуществления антигенсвязывающая единица индуцирует фагоцитоз клеток, экспрессирующих CD47, в большей степени, чем эталонная антигенсвязывающая единица. Такая эталонная антигенсвязывающая единица может иметь аминокислотные последовательности, представленные в 1) SEQ ID NO: 240–241, 2) SEQ ID NO: 242–243 или 3) SEQ ID NO: 244–245. Степень фагоцитоза может быть определена любым способом, известным в данной области. В некоторых случаях степень фагоцитоза определяется количеством макрофагов, которые осуществили фагоцитоз (обозначаемых фагоцитами), среди популяции макрофагов. Например, количество фагоцитов на 100 макрофагов может быть определено так, что степень фагоцитоза может быть выражена в процентах или фагоцитарном индексе.
В некоторых аспектах способов индукции фагоцитоза, раскрытых в настоящем описании, антигенсвязывающая единица, используемая в указанном способе, не вызывает значительной гемагглютинации. В некоторых случаях гемагглютинация, индуцированная в указанном способе с использованием любой из антигенсвязывающих единиц, описанных в настоящем документе, по меньшей мере в 1 раз меньше по сравнению с гемагглютинацией, индуцированной эталонной антигенсвязывающей единицей, имеющей аминокислотные последовательности, представленные в 1). SEQ ID NO: 240– 241, 2) SEQ ID NO: 242–243 или 3) SEQ ID NO: 244–245. В некоторых случаях гемагглютинация, индуцированная при контакте эритроцитов с рассматриваемой антигенсвязывающей единицей по меньшей мере в 1 раз меньше, по меньшей мере в 2 раза меньше, по меньшей мере в 3 раза меньше, по меньшей мере в 4 раза меньше, по меньшей мере в 5 раз меньше, при по меньшей мере в 6 раз меньше, по меньшей мере в 7 раз меньше, по меньшей мере в 8 раз меньше, по меньшей мере в 9 раз меньше или по меньшей мере в 10 раз меньше по сравнению с гемагглютинацией, индуцированной эталонной антигенсвязывающей единицей, имеющей аминокислотные последовательности, представленные в 1) SEQ ID NO: 240–241, 2) SEQ ID NO: 242–243 или 3) SEQ ID NO: 244–245. В некоторых случаях гемагглютинация, индуцированная при контакте эритроцитов с рассматриваемой антигенсвязывающей единицей, по меньшей мере в 10 раз меньше, чем гемагглютинация, индуцированная эталонной антигенсвязывающей единицей, имеющей аминокислотные последовательности, представленные в 1). SEQ ID NO: 240–241, 2) SEQ ID NO: 242–243 или 3) SEQ ID NO: 244–245.
В некоторых вариантах осуществления настоящее раскрытие относится к способам лечения злокачественного новообразования у пациента, нуждающегося в этом. В некоторых аспектах способ включает введение пациенту, нуждающемуся в этом, эффективного количества любой из антигенсвязывающих единиц, описанных в настоящем документе. В некоторых аспектах злокачественное новообразование представляет собой злокачественное новообразование, отличное от лимфомы. В некоторых аспектах злокачественное новообразование представляет собой злокачественное новообразование, отличное от лейкоза. В некоторых аспектах злокачественное новообразование представляет собой злокачественное новообразование, отличное от лимфомы и лейкоза. В некоторых аспектах клетка представляет собой гематологическую опухолевую клетку. Гемобластоз включает, но не ограничиваются ими, лейкемию, лимфому и миелому. Некоторые формы лейкоза включают, в качестве неограничивающего примера, острый лимфоцитарный лейкоз (ALL); острый миелоидный лейкоз (AML); хронический лимфолейкоз (CLL); хронический миелогенный лейкоз (CML); миелопролиферативное расстройство/новообразование (MPDS); и миелодиспластический синдром. Некоторые формы лимфомы включают, в качестве неограничивающего примера, лимфому Ходжкина, как индолентную, так и агрессивную неходжкинскую лимфому, лимфому Беркитта и фолликулярную лимфому (мелкоклеточные и крупноклеточные). Некоторые формы миеломы включают, в качестве неограничивающего примера, множественную миелому (ММ), гигантоклеточную миелому, миелому тяжелой цепи и миелому легкой цепи или миелому Бенс–Джонса. Солидные опухоли включают, например, опухоли молочной железы, опухоли яичников, опухоли легких, опухоли поджелудочной железы, опухоли простаты, меланомы, колоректальные опухоли, опухоли легких, опухоли головы и шеи, опухоли мочевого пузыря, лейомиосаркому, глиому, глиобластому, опухоли головного мозга, опухоли пищевода, опухоли желудка, печени и почек. В большинстве случаев эффективное количество определяется эмпирически с помощью методов тестирования, хорошо известных в данной области.
В некоторых вариантах осуществления настоящее раскрытие относится к способам лечения злокачественного новообразования у пациента, нуждающегося в этом. В некоторых аспектах способ включает введение пациенту, нуждающемуся в этом, эффективного количества лекарственного средства, содержащего фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество и любую из антигенсвязывающих единиц, раскрытых в настоящем описании. В некоторых аспектах злокачественное новообразование представляет собой злокачественное новообразование, отличное от лимфомы. В некоторых аспектах злокачественное новообразование представляет собой злокачественное новообразование, отличное от лейкоза. В некоторых аспектах злокачественное новообразование представляет собой злокачественное новообразование, отличное от лимфомы и лейкоза. В некоторых аспектах клетка представляет собой гематологическую опухолевую клетку. Гемобластоз включает, но не ограничиваются ими, лейкоз, лимфому и миелому. Некоторые формы лейкоза включают, в качестве неограничивающего примера, острый лимфоцитарный лейкоз (ALL); острый миелоидный лейкоз (AML); хронический лимфолейкоз (CLL); хронический миелогенный лейкоз (CML); миелопролиферативное расстройство/новообразование (MPDS); и миелодиспластический синдром. Некоторые формы лимфомы включают, в качестве неограничивающего примера, лимфому Ходжкина, как индолентную, так и агрессивную неходжкинскую лимфому, лимфому Беркитта и фолликулярную лимфому (мелкоклеточные и крупноклеточные). Некоторые формы миеломы включают, в качестве неограничивающего примера, множественную миелому (ММ), гигантоклеточную миелому, миелому тяжелой цепи и миелому легкой цепи или миелому Бенс–Джонса. Солидные опухоли включают, например, опухоли молочной железы, опухоли яичников, опухоли легких, опухоли поджелудочной железы, опухоли простаты, меланомы, колоректальные опухоли, опухоли легких, опухоли головы и шеи, опухоли мочевого пузыря, лейомиосаркому, глиому, глиобластому, опухоли головного мозга, опухоли пищевода, опухоли желудка, печени и почек. В большинстве случаев эффективное количество определяется эмпирически с помощью методов тестирования, хорошо известных в данной области.
Злокачественные новообразования, представляющие интерес для лечения способами по изобретению, включают, но не ограничиваются ими, лейкозы; острые лейкозы, такие как T–ALL, B–ALL, AML и т. д.; лимфомы (ходжкинские и неходжкинские); саркомы; меланомы; аденомы; карциномы твердой ткани, включая рак яичника, рак молочной железы, рак поджелудочной железы, рак толстой кишки, плоскоклеточный рак, переходно–клеточный рак и т. д., гипоксические опухоли, плоскоклеточный рак полости рта, горла, гортани и легких, рак мочеполовой системы, такие как рак шейки матки и рак мочевого пузыря, гемобластоз, рак головы и шеи и рак нервной системы, такой как глиомы, астроцитомы, менингиомы и т. д., доброкачественные поражения, такие как папилломы и тому подобное.
Лечение злокачественного новообразования может быть подтверждено снижением роста опухолевых клеток, включая, но не ограничиваясь этим, уменьшение пролиферации опухолевых клеток и снижение частоты превращения неопухолевых клеток в опухолевые. Достигнуто ли снижение роста опухолевых клеток, можно легко определить с помощью любого известного анализа, включая, но не ограничиваясь этим, включение [3H]–тимидина; подсчет количества клеток за период времени; детектирование и/или измерение маркера, связанного с AML и т. д. Эффективность вещества или определенного количества вещества в лечении злокачественного новообразования можно оценить с использованием любого из множества известных диагностических тестов на злокачественное новообразование, включая, но не ограничиваясь этим, биопсию, контрастные рентгенографические исследования, компьютерную томографию и детектирование опухолевого маркера, ассоциированного со злокачественным новообразованием, в крови пациента. Вещество может вводиться системно или локально, обычно системно.
В некоторых аспектах лечение злокачественного новообразования может быть подтверждено уменьшением объема опухоли. Объем опухоли может быть определен с использованием любого известного в данной области метода. Например, объем опухоли можно определить путем измерения опухоли с помощью штангенциркуля. В таких случаях можно измерить опухоль в двух направлениях и определить объем опухоли, используя формулу V = 0,5 a x b2, где a и b представляют собой первый и второй диаметр. В некоторых случаях первый диаметр представляет собой длинный диаметр или больший из двух диаметров. В некоторых случаях второй диаметр представляет собой короткий диаметр или меньший из двух диаметров.
В некоторых аспектах лечение злокачественного новообразования может быть подтверждено уменьшением объема опухоли. В некоторых случаях объем опухоли уменьшается на процент в диапазоне от 1% до 100%. В некоторых примерах объем опухоли уменьшается примерно на 1%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% или 100%. В некоторых примерах объем опухоли уменьшается по меньшей мере примерно на 1%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%., 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% или 100%. В некоторых аспектах любого из раскрытых в настоящем описании вариантов осуществления антигенсвязывающая единица может уменьшать объем опухоли в большей степени, чем контрольная антигенсвязывающая единица. Такая эталонная антигенсвязывающая единица может иметь аминокислотные последовательности, представленные в 1) SEQ ID NO: 240–241, 2) SEQ ID NO: 242–243 или 3) SEQ ID NO: 244–245.
В некоторых аспектах сравнение эффекта рассматриваемой антигенсвязывающей единицы по сравнению с эталонной антигенсвязывающей единицей может быть определено путем расчета противоопухолевой эффективности. В таких случаях объем опухоли может быть измерен, как описано выше. Альтернативно, можно определить или измерить другой параметр размера опухоли или другую подходящую характеристику опухоли. При работе с количественными характеристиками, такими как объем опухоли, противоопухолевая эффективность может быть определена с использованием формулы: T/C, где T – это выбранное измерение (например, объем опухоли) для группы лечения, а C – выбранное измерение (например, объем опухоли) для контрольной группы. Противоопухолевая эффективность может быть определена в течение любого желаемого периода времени и может быть определена с использованием среднего значения из любого желаемого количества образцов. Противоопухолевая эффективность может быть выражена в виде числа или процента. В некоторых примерах противоопухолевая эффективность может составлять примерно 1%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% или 100%. В некоторых примерах противоопухолевая эффективность может составлять по большей мере 1%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%., 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% или 100%. В некоторых примерах противоопухолевая эффективность может составлять, по меньшей мере, 1%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%., 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% или 100%.
Композиции, например антигенсвязывающие единицы и фармацевтические композиции, раскрытые в настоящем описании, можно вводить с использованием любой подходящей с медицинской точки зрения процедуры, например, внутрисосудистого (внутривенного, внутриартериального, внутрикапиллярного) введения, инъекции в лимфатические узлы и т. д. Внутрисосудистая инъекция может быть внутривенной или внутриартериальной инъекцией. Эффективное количество композиции для конкретного пациента будет зависеть от множества факторов, некоторые из которых будут отличаться от пациента к пациенту и могут быть определены эмпирически. Дозировка композиции будет зависеть от определенной схемы лечения, пути введения, природы терапевтических средств, чувствительности опухоли к терапевтическим средствам и т. д. Используя LD50 данных о животных и другую информацию, доступную для антигенсвязывающей единицы, раскрытой в настоящем описание, клиницист может определить максимальную безопасную дозу для пациента в зависимости от пути введения. Например, доза, вводимая внутривенно, может быть больше, чем доза, вводимая местно, учитывая большую массу жидкости, в которой вводят терапевтическую композицию. Аналогично, композиции, которые быстро выводятся из организма, можно вводить в более высоких дозах или в повторных дозах для поддержания терапевтической концентрации. Используя обычные навыки, компетентный клиницист сможет оптимизировать дозировку определенной композиции.
В некоторых аспектах предложен способ лечения злокачественного новообразования, включающий введение эффективного количества любой из вышеупомянутых фармацевтических композиций, содержащих рассматриваемую антигенсвязывающую единицу, пациенту, нуждающемуся в этом. В некоторых вариантах осуществления злокачественное новообразование представляет собой лейкоз, рак молочной железы, рак простаты, рак поджелудочной железы, рак легкого, включая немелкоклеточный рак легкого или карциному, рак печени, рак яичников, рак мочевого пузыря, рак головы и шеи, колоректальный рак, рак кожи, опухоль головного мозга или гепатоцеллюлярную карциному (HCC). В определенных аспектах злокачественное новообразование представляет собой лейкоз. Злокачественное новообразование может представлять собой солидную опухоль. Злокачественное новообразование может представлять собой недифференцированный лейкоз (MLL), острый лимфобластный лейкозом (ALL), острый миелогенный лейкоз (AML), хронический лимфоцитарный лейкоз (CLL), мелкоклеточную лимфоцитарную лимфому (SLL), хронический миелогенный лейкоз (CML), острый моноцитарный лейкоз (AML), волосатоклеточный лейкоз и/или другие лейкозы; миелопролиферативное расстройство/новообразование (MPDS), гигантоклеточную миелому, миелому тяжелой цепи, миелому легкой цепи или Бенс–Джонса, миелодисплазический синдром, множественную миелому. Злокачественное новообразование может представлять собой лимфомы, такие как все подтипы лимфомы Ходжкина или неходжкинской лимфомы.
Настоящее раскрытие также относится к способам комбинированной терапии, в которых агент, о котором известно, что он модулирует другие пути, или другие компоненты того же пути, или даже перекрывающиеся группы ферментов–мишеней, используется в комбинации с рассматриваемой антигенсвязывающей единицей, или фармацевтической композицией, содержащей рассматриваемую антигенсвязывающую единицу. В одном аспекте такая терапия включает, но не ограничивается этим, комбинацию одной или более антигенсвязывающих единиц по изобретению с химиотерапевтическими агентами, терапевтическими антителами и лучевой терапией для обеспечения синергетического или аддитивного терапевтического эффекта.
При желании рассматриваемая антигенсвязывающая единица может использоваться в комбинации с ингибиторами Notch и/или ингибиторами c–Myb. Где желательно, антигенсвязывающая единица или фармацевтическая композиция по настоящему изобретению могут использоваться в комбинации с ингибиторами MLL–WDR5 и/или ингибиторами Dot11.
Многие химиотерапевтические средства в настоящее время известны в данной области и могут быть использованы в комбинации с рассматриваемой антигенсвязывающей единицей. В некоторых вариантах осуществления химиотерапевтическое средство выбрано из группы, состоящей из ингибиторов митоза, алкилирующих агентов, антиметаболитов, интеркалирующих антибиотиков, ингибиторов факторов роста, ингибиторов клеточного цикла, ферментов, ингибиторов топоизомеразы, модификаторов биологического ответа, антигормонов, ингибиторов ангиогенеза, и антиандрогенов.
Неограничивающими примерами являются химиотерапевтические агенты, цитотоксические агенты и непептидные низкомолекулярные вещества, такие как Gleevec® (иматиниб мезилат), Velcade® (бортезомиб), казодекс (бикалутамид), Iressa® (гефитиниб) и адриамицин, а также хозяин химиотерапевтических агентов. Неограничивающие примеры химиотерапевтических агентов включают алкилирующие агенты, такие как тиотепа и циклосфосфамид (CYTOXANTM); алкилсульфонаты, такие как бусульфан, импросульфан и пипосульфан; азиридины, такие как бензодопа, карбоквон, метуредопа и уредопа; этиленимины и метиламеламины, включая алтретамин, триэтиленмеламин, триэтиленфосфорамид, триэтилентиофосфорамид и триметилоломеламин; мустрагены, такие как хлорамбуцил, хлорнафазин, холофосфамид, эстрамустин, ифосфамид, мехлоретамин, гидрохлорид окисида мехлорэтамина, мелфалан, новембихин, фенестерин, преднимустин, трофосфамид, урамустин; нитрозомочевины, такие как кармустин, хлорозотоцин, фотемустин, ломустин, нимустин, ранимустин; антибиотики, такие как аклациномизины, актиномицин, аутрамицин, азаcерин, блеомицины, кактиномицин, калихеамицин, карабицин, карминомицин, карцинофилин, CasodexTM, хромомицины, дактиномицин, даунорубицин, деторубицин, 6–диазо–5–оксо–L–норлейцин, доксорубицин, эпирубицин, эзорубицин, идарубицин, марцеломицин, митомицины, микофеноловая кислота, ногаламицин, оливомицины, пепломицин, потфиромицин, пуромицин, келамицин, родорубицин, стрептонигрин, стрептозоцин, туберцидин, убенимекс, зиностатин, зорубицин; антиметаболиты, такие как метотрексат и 5–фторурацил (5–FU); аналоги фолиевой кислоты, такие как деноптерин, метотрексат, птероптерин, триметрексат; аналоги пурина, такие как флударабин, 6–меркаптопурин, тиамиприн, тиогуанин; аналоги пиримидина, такие как анцитабин, азацитидин, 6–азауридин, кармофур, цитарабин, дидезоксиуридин, доксифлуридин, эноцитабин, флоксуридин, андрогены, такие как калустерон, дромостанолон пропионат, эпитиостанол, мепитиостан, тестолактон; антиадреналиновые средства, такие как аминоглутетимид, митотан, трилостан; пополнитель фолиевой кислоты, такой как фролиновая кислота; ацеглатон; альдофосфамид гликозид; аминолевулиновая кислота; амсакрин; бестрабуцил; бизантрен; эдатраксат; дефофамин; демеколцин; диазиквон; элфомитин; ацетат эллиптиния; этоглюцид; нитрат галлия; гидроксимочевина; лентинан; лонидамин; митогуазон; митоксантрон; мопидамол; нитракрин; пентостатин; фенамет; пирарубицин; подофиллиновая кислота; 2–этилгидразид; прокарбазин; PSK.RTM.; разоксан; сизофиран; спирогерманий; тенуазоновая кислота; триазиквон; 2,2',2''–трихлортриэтиламин; уретан; виндезин; дакарбазин; манномустин; митобронитол; митолактол; пипоброман; гацитозин; арабинозид («Ара–С»); циклофосфамид; тиотеп; таксаны, например паклитаксел (TAXOLTM, Bristol–Myers Squibb Oncology, Принстон, Нью–Джерси) и доцетаксел (TAXOTERETM, Rhone–Poulenc Rorer, Antony, France); ретиноевая кислота; эсперамицины; капецитабин; и фармацевтически приемлемые соли, кислоты или производные любого из вышеперечисленного. В качестве подходящих химиотерапевтических кондиционеров для клеток также включены антигормональные агенты, которые действуют путем регуляции или ингибирования действия гормонов на опухоли, такие как антиэстрогены, включая, например, тамоксифен, (NolvadexTM), ралоксифен, ингибирующие ароматазу 4(5)–имидазолы, 4–гидрокситамоксифен, триоксифен, кеоксифен, LY 117018, онапристон и торемифен (Fareston); и антиандрогены, такие как флутамид, нилутамид, бикалутамид, лейпролид и гозерелин; хлорамбуцил; гемцитабин; 6–тиогуанин; меркаптопурин; метотрексат; аналоги платины, такие как цисплатин и карбоплатин; винбластин; платина; этопозид (VP–16); ифосфамид; митомицин С; митоксантрон; винкристин; винорелбин; навелбин; новантрон; тенипозид; дауномицин; аминоптерин; кселода; ибандронат; камптотецин–11 (СРТ–11); ингибитор топоизомеразы RFS 2000; дифторметилорнитин (DMFO). Если целесообразно, антигенсвязывающие единицы или фармацевтическая композиция по настоящему изобретению могут использоваться в комбинации с обычно назначаемыми противоопухолевыми лекарственными средствами, такими как Герцептин®, Авастин®, Эрбитукс®, Ритуксан®, Таксол®, Аримидекс®, Таксотер®, ABVD, АВИЦИН, Абаговомаб, Акридин карбоксамид, Адекатумамаб, 17–N–Аллиламино–17–деметоксигельданамицин, Альфарадин, Алвоцидиб, 3–Аминопиридин–2–карбоксальдегид, тиосемикарбазон, Амонафид, Антрацендион, анти–CD22 иммунотоксины, антибластомное средство, противоопухолевые травы, Апазиквон, Атипримод, Азатиоприн, Белотекан, Бендамустин, BIBW 2992, Бирикодар, Бросталлицин, Бриостатин, Бутионинсульфоксимин, CBV (химиотерапия), Каликулин, неспецифические противоопухолевые агенты клеточного цикла, Дихлоруксусная кислота, Дискодермолин, Эльзамитруцин, Эноцитабин, Эпотилон, Эрибулин, Эверолимус, Эксатекан, Эксисулинд, Ферругинол, Фородесин, Фосфестрол, ICE, схема химиотерапии, IT–101, Имексон, Имиквимод, Индолокарбазол, Ирофулвен, Ланиквидар, Ларотаксел, Леналидомид, Лукантон, Луртотекан, Мафосфамид, Митозоломид, Нафоксидин, Недаплатин, Олапариб, Ортатаксел, PAC–1, Паупау, Пиксантрон, Ингибитор протеасом, Ребеккамицин, Ресиквимод, Рубитекан, SN–38, Салиноспорамид А, Сапацитабин, Станфорд В, Свайнсонин, Талапорфин, Тариквидар, Тегафур–урацил, Темодар, Тезетаксел, Триплатин–тетранитрат, Трис(2–хлорэтил)амин, Троксацитабин, Урамустин, Вадимезан, Винфлунин, ZD6126 или Зосуквидар.
Настоящее раскрытие дополнительно относится к способу применения рассматриваемой антигенсвязывающей единицы или фармацевтической композиции, представленной в настоящем документе, в комбинации с лучевой терапией для ингибирования аномального роста клеток или лечения гиперпролиферативного расстройства у млекопитающего. Способы введения лучевой терапии известны в данной области техники, и эти способы можно использовать в комбинированной терапии, описанной в настоящем документе.
Лучевая терапия может водиться одним из нескольких методов или комбинацией методов, включая, без ограничения, лучевую терапию, внутреннюю лучевую терапию, имплантационное облучение, стереотаксическую радиохирургию, системную лучевую терапию, лучевую терапию и постоянную или временную интерстициальную брахитерапию. Используемый в настоящем описании термин «брахитерапия» относится к лучевой терапии, доставляемой пространственно ограниченным радиоактивным материалом, введенным в организм в опухолевый участок или рядом с ним или в другой пораженный участок пролиферативной ткани. Подразумевается, что термин включает без ограничения радиоактивные изотопы (например, At–211, I–131, I–125, Y–90, Re–186, Re–188, Sm–153, Bi–212, P–32 и радиоактивные изотопы Lu). Подходящие источники излучения для использования в качестве кондиционера для клеток по настоящему изобретению включают как твердые вещества, так и жидкости. В качестве неограничивающего примера, источником излучения может быть радионуклид, такой как I–125, I–131, Yb–169, Ir–192 в качестве твердого источника, I–125 в качестве твердого источника или другие радионуклиды, которые испускают фотоны, бета–частицы, гамма–излучение или другое терапевтическое излучение. Радиоактивный материал также может быть жидкостью, изготовленной из любого раствора радионуклидов, например раствора I–125 или I–131, или радиоактивной жидкостью, которая может быть получена с использованием суспензии подходящей жидкости, содержащей мелкие частицы твердых радионуклидов, таких как Au–198, Y–90. Кроме того, радионуклид(ы) может быть воплощен в виде геля или в виде радиоактивных микросфер.
Антигенсвязывающие единицы или фармацевтические композиции по настоящему изобретению могут использоваться в комбинации с количеством одного или более веществ, выбранных из антиангиогенных агентов, ингибиторов сигнальной трансдукции, антипролиферативных агентов, ингибиторов гликолиза или ингибиторов аутофагии.
Антиангиогенные агенты, такие как ингибиторы ММР–2 (матрикс–металлопротеиназа 2), ингибиторы ММР–9 (матрикс–металлопротиеназа 9) и ингибиторы COX–11 (циклооксигеназы 11), могут использоваться в комбинации с антигенсвязывающей единицей раскрытия и фармацевтической композицией, описанных в настоящем документе. Антиангиогенные агенты включают, например, рапамицин, темсиролимус (CCI–779), эверолимус (RAD001), сорафениб, сунитиниб и бевацизумаб. Примеры подходящих ингибиторов COX–II включают CELEBREXTM (алекоксиб), вальдекоксиб и рофекоксиб. Примеры подходящих ингибиторов матриксной металлопротеиназы описаны в WO 96/33172 (опубликовано 24 октября 1996 г.), WO 96/27583 (опубликовано 7 марта 1996 г.), европейской заявке на патент № 97304971.1 (подана 8 июля 1997 г.), европейской заявке на патент № 99308617.2 (подано 29 октября 1999 г.), WO 98/07697 (опубликовано 26 февраля 1998 г.), WO 98/03516 (опубликовано 29 января 1998 г.), WO 98/34918 (опубликовано 13 августа 1998 г.), WO 98/34915 (опубликовано 13 августа 1998 г.), WO 98/33768 (опубликовано 6 августа 1998 г.), WO 98/30566 (опубликовано 16 июля 1998 г.), Европейской патентной публикации 606046 (опубликовано 13 июля 1994 г.), Европейской патентной публикации 931788 (опубликовано 28 июля 1999 г.), WO 90/05719 (опубликовано 31 мая 1990 г.), WO 99/52910 (опубликовано 21 октября 1999 г.), WO 99/52889 (опубликовано 21 октября 1999 г.), WO 99/29667 (опубликовано 17 июня 1999 г.), международной заявке PCT № PCT/IB98/01113 (подана 21 июля 1998 г.), европейской патентной заявке № 99302232.1 (подана 25 марта 1999 г.), патентной заявке Великобритании № 9912961.1 (подана 3 июня, 1999), предварительной заявке США № 60/148 464 (подана 12 августа 1999 г.), патенте США 5863949 (выдан 26 января 1999 г.), патенте США 5861510 (выдан 19 января 1999 г.) и Европейской патентной публикации 780386 (опубликована 25 июня 1997 г.), каждая из которых включена в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме. Предпочтительными ингибиторами ММР–2 и ММР–9 являются те, которые обладают малой активностью ингибирования ММР–1 или совсем не ингибируют ММР–1. Более предпочтительными являются те, которые селективно ингибируют ММР–2 и/или АМР–9 относительно других матриксных металлопротеиназ (например, МАР–1, ММР–3, ММР–4, ММР–5, ММР–6, ММР–7, MMP–8, MMP–10, MMP–11, MMP–12 и MMP–13). Некоторыми конкретными примерами ингибиторов ММР, полезных в раскрытии, являются AG–3340, RO 32–3555 и RS 13–0830.
Ингибиторы аутофагии включают, но не ограничиваются ими, хлорохин, 3–метиладенин, гидроксихлорохин (Plaquenil™), бафиломицин А1, 5–амино–4–имидазолкарбоксамид рибозид (AICAR), окадаиновую кислоту, подавляющие аутофагию токсины водорослей, которые ингибируют протеинфосфатазы типа 2А или типа 1, аналоги cAMP и лекарственные средства, повышающие уровни cAMP, такие как аденозин, LY204002, рибозид N6–меркаптопурин и винбластин. Кроме того, антисмысловая или киРНК, которая ингибирует экспрессию белков, включая, но не ограничиваясь этим, ATG5 (которые участвуют в аутофагии), также может быть использована.
В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающие единицы и фармацевтические композиции, описанные в настоящем документе, приготовлены или вводятся в сочетании с жидкими или твердыми тканевыми барьерами, также известными как смазывающие вещества. Примеры тканевых барьеров включают, но не ограничиваются ими, полисахариды, полигликаны, сепрафильм, интерсид и гиалуроновую кислоту.
В некоторых вариантах осуществления лекарственные средства, которые вводят в сочетании с рассматриваемыми антигенсвязывающими единицами, включают любые подходящие лекарственные средства, полезные для доставки путем ингаляции, например, анальгетики, например кодеин, дигидроморфин, эрготамин, фентанил или морфин; оригинальные препараты, например дилтиазем; противоаллергические средства, например, хромогликат, кетотифен или недокромил; противоинфекционные средства, например цефалоспорины, пенициллины, стрептомицин, сульфонамиды, тетрациклины или пентамидин; антигистаминные препараты, например метапирилен; противовоспалительные средства, например беклометазон, флунизолид, будесонид, типредан, триамцинолона ацетонид или флутиказон; противокашлевые средства, например, носкапин; бронходилататоры, например, эфедрин, адреналин, фенотерол, формотерол, изопреналин, метапротеренол, фенилэфрин, фенилпропаноламин, пирбутерол, репротерол, римитерол, сальбутамол, сальметерол, тербуталин, изоэтарин, тулобутирол, орципреналин или (–)–4–амино–3,5–дихлор–α–[[[6–[2–(2–пиридинил)этокси]гексил]амино]метил]бензолметанол; диуретики, например амилорид; антихолинергические средства, например, ипратропий, атропин или окситропий; гормоны, например кортизон, гидрокортизон или преднизолон; ксантины, например аминофиллин, холин теофиллинат, лизин теофиллинат или теофиллин; и терапевтические белки и пептиды, например инсулин или глюкагон. Специалисту в данной области будет понятно, что при необходимости лекарственные средства используются в форме солей (например, в виде солей щелочных металлов или аминов или в виде кислотно–аддитивных солей) или в виде сложных эфиров (например, сложных эфиров низших алкилов) или в виде сольватов (например, гидратов) для оптимизации активности и/или стабильности лекарственного средства.
Другие иллюстративные терапевтические агенты, применимые для комбинированной терапии, включают, но не ограничиваются ими, агенты, как описано выше, лучевую терапию, антагонисты гормонов, гормоны и их высвобождающие факторы, препараты щитовидной железы и антитиреоидные препараты, эстрогены и прогестины, андрогены, адренокортикотропный гормон; адренокортикальные стероиды и их синтетические аналоги; ингибиторы синтеза и действия адренокортикальных гормонов, инсулин, пероральные гипогликемические агенты и фармакологию эндокринной поджелудочной железы, агенты, влияющие на кальцификацию и обмен костной ткани: кальций, фосфат, паратиреоидный гормон, витамин D, кальцитонин, витамины, такие как водорастворимые витамины, комплекс витаминов В, аскорбиновая кислота, жирорастворимые витамины, витамины А, К и Е, факторы роста, цитокины, хемокины, агонисты и антагонисты мускариновых рецепторов; антихолинэстеразные агенты; агенты, действующие на нервно–мышечное соединение и/или вегетативные ганглии; катехоламины, симпатомиметические препараты и агонисты или антагонисты адренергических рецепторов; и агонисты и антагонисты 5–гидрокситриптамин (5–НТ, серотонин) рецепторов.
Терапевтические агенты также могут включать обезболивающие и противовоспалительные агенты, такие как гистамин и антагонисты гистамина, брадикинин и антагонисты брадикинина, 5–гидрокситриптамин (серотонин), липидные вещества, которые образуются в результате биотрансформации продуктов селективного гидролиза мембранных фосфолипидов, эйкозаноиды, простагландины, тромбоксаны, лейкотриены, аспирин, нестероидные противовоспалительные агенты, аналгезирующие–жаропонижающие агенты, агенты, ингибирующие синтез простагландинов и тромбоксанов, селективные ингибиторы индуцируемой циклооксигеназы, селективные ингибиторы индуцируемой циклооксигеназы–2, физиологически активные вещества, паракринные гормоны, соматостатин, гастрин, цитокины, которые опосредуют взаимодействия, участвующие в гуморальных и клеточных иммунных реакциях, физиологически активные вещества, происходящие из липидов, эйкозаноиды, β–адренергические агонисты, ипратропий, глюкокортикоиды, метилксантины, блокаторы натриевых каналов, агонисты опиоидных рецепторов, блокаторы кальциевых каналов, стабилизаторы мембран и ингибиторы лейкотриена.
Дополнительные терапевтические агенты, рассматриваемые в настоящем описании, включают диуретики, вазопрессин, агенты, влияющие на почечную консервацию воды, ренин, ангиотензин, агенты, полезные для лечения ишемии миокарда, антигипертензивные агенты, ингибиторы ангиотензинпревращающего фермента, антагонисты β–адренергических рецепторов, агенты для лечения гиперхолестеринемии, и агенты для лечения дислипидемии.
Другие рассматриваемые терапевтические агенты включают лекарственные средства, используемые для контроля кислотности желудка, агенты для лечения пептической язвы, агенты для лечения гастроэзофагеальной рефлюксной болезни, прокинетические агенты, противорвотные средства, агенты, применяемые при синдроме раздраженного кишечника, агенты, используемые при диарее, агенты, используемые для запоры, агенты, применяемые при воспалительных заболеваниях кишечника, агенты, применяемые при заболеваниях желчевыводящих путей, агенты, применяемые при заболеваниях поджелудочной железы. Терапевтические агенты, применяемые для лечения протозойных инфекций, лекарственные средства, применяемые для лечения малярии, амебиаза, лямблиоза, трихомониаза, трипаносомоза и/или лейшманиоза, и/или лекарственные средства, применяемые в химиотерапии гельминтоза. Другие терапевтические агенты включают противомикробные агенты, сульфонамиды, триметоприм–сульфаметоксазол хинолоны и агенты для инфекций мочевыводящих путей, пенициллины, цефалоспорины и другие, β–лактамные антибиотики, агент, содержащий аминогликозид, ингибиторы синтеза белка, лекарственные средства, применяемые в химиотерапии туберкулеза, микобактериального комплексного заболевания и лепры, противогрибковые агенты, противовирусные средства, включая неретровирусные агенты и антиретровирусные агенты.
Примеры терапевтических антител, которые можно комбинировать с антигенсвязывающей единицей по изобретению, включают, но не ограничиваются ими, антитела против рецепторной тирозинкиназы (цетуксимаб, панитумумаб, трастузумаб), антитела против CD20 (ритуксимаб, тозитумомаб) и другие антитела, такие как алемтузумаб, бевацизумаб и гемтузумаб.
Кроме того, терапевтические агенты, применяемые для иммуномодуляции, такие как иммуномодуляторы, иммунодепрессанты, толерогены и иммуностимуляторы, предусмотрены способами, описанными в настоящем документе. Кроме того, терапевтические агенты, действующие на кровь и кроветворные органы, кроветворные агенты, факторы роста, минералы и витамины, антикоагулянтные, тромболитические и антитромбоцитарные лекарственные средства.
Для лечения почечной карциномы можно объединить антигенсвязывающую единицу по настоящему изобретению с сорафенибом и/или авастином. Для лечения расстройства эндометрия можно объединить антигенсвязывающую единицу по настоящему изобретению с доксорубинцином, таксотером (таксолом) и/или цисплатином (карбоплатином). Для лечения рака яичника можно объединить антигенсвязывающую единицу по настоящему изобретению с цисплатином (карбоплатином), таксотером, доксорубинцином, топотеканом и/или тамоксифеном. Для лечения рака молочной железы можно объединить антигенсвязывающую единицу по настоящему изобретению с таксотером (таксол), гемцитабином (капецитабин), тамоксифеном, летрозолом, тарцевой, лапатинибом, PD0325901, авастином, герцептином, OSI–906 и/или OSI–930. Для лечения рака легкого можно объединить антигенсвязывающую единицу настоящего изобретения с таксотером (таксолом), гемцитабином, цисплатином, пеметрекседом, Tarceva, PD0325901 и/или авастином.
Дополнительные терапевтические агенты, которые могут быть объединены с антигенсвязывающей единицей настоящего раскрытия, представлены в Goodman and Gilman's «The Pharmacological Basis of Therapeutics» Tenth Edition edited by Hardman, Limbird and Gilman or the Physician's Desk Reference, каждая из которых включена в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме.
Описанные в настоящем документе антигенсвязывающие единицы могут использоваться в комбинации с раскрытыми в настоящем документе агентами или другими подходящими агентами, в зависимости от состояния, которое подвергают лечению. Следовательно, в некоторых вариантах осуществления одна или более антигенсвязывающих единиц по изобретению будут вводиться совместно с другими агентами, как описано выше. При использовании в комбинированной терапии антигенсвязывающие единицы, описанные в настоящем документе, вводят со вторым агентом одновременно или отдельно. Такое введение в комбинации может включать одновременное введение двух агентов в одной и той же лекарственной форме, одновременное введение в отдельных лекарственных формах и раздельное введение. Таким образом, антигенсвязывающая единица, описанная в настоящем документе, и любой из агентов, описанных выше, могут быть приготовлены вместе в одной и той же лекарственной форме и могут вводиться одновременно. Альтернативно, антигенсвязывающая единица по изобретению и любой из агентов, описанных выше, могут вводиться одновременно, причем оба агента присутствуют в отдельных составах. В другом варианте антигенсвязывающая единица по настоящему изобретению может быть введена сразу после любого из агентов, описанных выше, или наоборот. В некоторых вариантах осуществления протокола раздельного введения антигенсвязывающую единицу по настоящему изобретению и любой из агентов, описанных выше, вводят с интервалом в несколько минут, или через несколько часов, или через несколько дней.
Дальнейшая иллюстрация разработки и использования антигенсвязывающих единиц, полинуклеотидов, векторов и клеток–хозяев по настоящему изобретению представлена в разделе «Примеры» ниже. Примеры приведены в качестве руководства для обычного специалиста в данной области техники и никоим образом не предназначены для ограничения.
ПРИМЕРЫ
Следующие примеры приведены с целью иллюстрации различных вариантов осуществления изобретения и никоим образом не предназначены для ограничения настоящего изобретения. Настоящие примеры вместе со способами, описанными в настоящем документе, настоящим представляют предпочтительные варианты осуществления, которые являются иллюстративными и не предназначены для ограничения объема изобретения. Изменения в нем и другие применения, которые охватываются рамками изобретения, как определено объемом формулы изобретения, будут понятны специалистам в данной области техники.
Пример 1. Генерация и скрининг антигенсвязывающих единиц
Две разных мышиных линии (Balb/c и C57/BL6) использовали для иммунизации для получения моноклональных антител против CD47. Рекомбинантный фрагмент CD47, SEQ ID NO: 161, экспрессировали в клетках 293F и использовали для иммунизации. Сыворотку из последовательных или конечных образцов крови анализировали на наличие специфических антител. Данные по титру сыворотки использовали для отбора мышей для гибридомных слияний.
Суспензии отдельных клеток готовили из селезенки лучших животных–респондеров и подвергали электрослиянию с клетками миеломы перед посевом и культивированием в 96–луночных планшетах. Затем гибридомы культивировали в селекционной среде в течение семи дней перед скринингом супернатантов.
Полученные антигенсвязывающие единицы охарактеризовывали путем комбинации связывания супернатантов гибридомы с белком CD47 с помощью ИФА, человеческого CD47, экспрессированного клетками Raji, с использованием проточной цитометрии и нейтрализующего ИФА. Антигенсвязывающие единицы дополнительно охарактеризовывали по их эффективности блокирования в анализах взаимодействия CD47–SIRPα. В качестве положительного контроля использовали коммерчески доступное mAb против CD47, обозначаемое как «Положительный контроль 1», а в качестве отрицательного контроля использовали разбавленную неиммунную сыворотку.
Проводили субклонирование для получения моноклональных гибридомных клеточных линий.
Пример 2. Анализ на макрофагальный фагоцитоз
Отселектированные положительные антитела оценивали в анализе макрофагального фагоцитоза для подтверждения функциональной активности in vitro. Макрофаг, полученный из моноцитов человека (MDM), культивировали вместе с опухолевыми клетками–мишенями HL–60, которые были помечены флуоресцентным красителем CSFE. Фагоцитоз анализировали с помощью Cellomics после двухчасовой инкубации. Процент макрофагов, содержащих опухолевые клетки, рассчитывали и выражали в виде индекса фагоцитоза. Результаты одного репрезентативного эксперимента показаны на Фигуре 1. На Фигуре 1 антитела присутствуют в концентрации 3 микрограмма на мл; белые стрелки указывают на примеры фагоцитированных клеток AML; клетки промиелоцитарного лейкоза человека HL–60 помечены зеленым цветом; и макрофаги человека помечены красным.
Для этого анализа человеческие моноциты очищали из PBMC человека с помощью микросфер для выделения клеток CD14 Miltenyi. Очищенные моноциты CD14+ культивировали в колбе T75 в присутствии M–CSF (100 нг/мл) в течение 7–10 дней. Макрофаги, полученные из моноцитов, собирали путем инкубации в буфере для диссоциации в течение 5 минут с последующей осторожной очисткой. Затем клетки М2 метили PKH26 (красный), 1×104 макрофагов высевали в 96–луночный планшет для тканевых культур с плоским дном в IMDM, содержащий 10% FBS, в течение 24 часов, среду заменяли бессывороточной средой на следующие 2 часа инкубации. Клетки HL–60, меченные 5×104 CFSE, добавляли в лунку в присутствии указанных антител в течение 2 часов. Лунки промывали 3 раза IMDM, и клетки фиксировали 2% PFA. Затем меченные флуоресценцией клетки анализировали на аппарате Cellomics.
Индекс фагоцитоза определяли путем расчета количества фагоцитов на 100 макрофагов, данные рассчитывали в Office Excel и графически отображали в Prism5, как показано на Фигурах 2А–2В. EC50 рассчитывали на основе процента максимума индекса фагоцитоза, как показано в Таблице 4.
Таблица 4
ABU EC50 (нМ)
ABU1 +++
ABU2 +++
ABU3 ++
ABU4 +++
ABU5 ++
ABU6 +++
ABU7 +
Положительный контроль 1 ++
Положительный контроль 2 ++
+++: <1 нМ; ++:> 1 нМ и <5 нМ; +:> 5 нМ
Пример 3. Анализ связывания CD47
Аффинность связывания антител для отселектированных антител (ABU– #) и химерных антител (C–ABU– #) измеряли с использованием как экспрессирующих CD47 клеток СНО, так и клеток Jurkat с использованием ИФА или проточной цитометрии. Кинетику связывания белков для антигенсвязывающих единиц изучали с помощью SPR с использованием Biacore T100 (GE Healthcare). Коммерчески доступное эталонное антитело использовали в качестве контроля.
Для анализа связывания на основе ИФА SIRPA человека (Novoprotein, кат. # C385) в концентрации 1 мкг/мл наносили в виде покрытия на дно 96–луночного планшета в течение ночи при 4°С. Блокирование проводили с 3% обезжиренным молоком в PBS (DOUBLE HELIX, кат. # P10033) в течение 1 часа при комнатной температуре после 3–кратной промывки PBST (PBS с 0,05% Твин–20 (Sangon, кат. # 9005–64–5). Последовательно разведенный белок CD47 человека (Novoprotein, кат. # CG18) добавляли в лунки и инкубировали при комнатной температуре в течение 1 часа; после промывки PBST 3 раза связанный белок CD47 детектировали с помощью HRP–конъюгированного вторичного поликлонального козьего антитела к человеческому IgG–Fc (Abcam, кат. # ab98624) и затем проявляли субстратом TMB (Biopanda, кат. # TMB–S–003) после 3–кратной промывки PBST с последующим измерением OD450. Кривую связывания (OD450 в зависимости от концентрации CD47) анализировали с помощью GraphPad Prism и EC90 рассчитывали для исследования нейтрализации CD47. Результаты связывания приведены ниже в Таблице 5.
Таблица 5
Клон ID Связывание на клетках CHO–CD47 (EC50, нМ) Связывание на клетках Jurkat (EC50, нМ) SIRPα блокирование на клетках (IC50, нМ) Аффинность SPR (nM)
ABU 1 +++ +++ ++ –
ABU 2 +++ +++ ++ +
ABU 3 ++++ ++++ ++ +
ABU 4 ++++ +++ +++ +
ABU 5 +++ +++ ++ +
ABU 6 ++++ ++++ +++ +
C–ABU 1 ++++ ++ ++ ND
Положительный контроль 1 +++ +++ ++ +
Положительный контроль 2 ++++ ++ ++ +
++++: <0,05 нМ; +++:> 0,05 нМ и <1 нМ; ++:> 1 нМ и <10 нМ
+:> 10 нМ и <40 нМ; –> 40 нМ; ND: не определено
Перекрестную реактивность антител изучали методом проточной цитометрии с использованием клеток, экспрессирующих CD47 разных видов. Эритроциты яванских макак использовали для перекрестной реактивности обезьян. CHO–клетки, экспрессирующие мышиный CD47, использовали для исследования перекрестной реактивности мыши. Для анализа связывания на основе проточной цитометрии получали клеточную линию CHO, экспрессирующую SIRPa человека, и оценивали экспрессию SIRPa по связыванию белка CD47–Fc (Novoprotein, кат. # CG18) или меченного биотином белка CD47, меченного полигистидином (Novoprotein, кат. # 321). Вкратце, клетки СНО, экспрессирующие SIRPα человека, диссоциировали с помощью буфера диссоциации трипсин–EDTA и промывали 3 раза буфером FACS (буфер PBS с 2% FBS). Клетки высевали в 96–луночный планшет и центрифугировали. Последовательно разведенный белок CD47 (меченный Fc белок для мышиного антитела и меченный биотином белок CD47, меченный полигистиндином, для химерного/гуманизированного антитела) использовали для ресуспендирования клеток и инкубации при 4°С в течение одного часа, а затем окрашивали меченным АРС антителом против человеческого Fc после отмывания этих несвязанных белков. После одного часа инкубации при 4 градусах и 3–кратной промывки клетки анализировали на аппарате Guava HL6T, и данные анализировали с использованием программного обеспечения FlowJo. в концентрации 1 мкг/мл наносили в виде покрытия на дно 96–луночного планшета в течение ночи при 4°С. Кривую связывания (средняя интенсивность флуоресценции по концентрации CD47) анализировали с помощью GraphPad Prism и рассчитывали EC90 для исследования нейтрализации CD47.Данные из примера эксперимента изображены на Фигурах 3А и 3В.
Пример 4. Нейтрализующий ИФА
Нейтрализующий эффект отобранных антител анализировали методом ИФА с использованием планшетов с покрытием SIRPα. Вкратце, белок SIRPα наносили в виде покрытия на планшеты для микротитрования, и белок CD47–hFc добавляли в последовательном разведении для установления соответствующей EC90. Отобранные антитела последовательно разводили и смешивали со слитым белком hCD47–hFc при его концентрации EC90, и их дозозависимый блокирующий эффект детектировали с помощью HRP–меченных антител против hIgG против CD47–hFc.
Вкратце, человеческий SIRPA (Novoprotein, кат. # C385) в концентрации 1 мкг/мл наносили в виде покрытия на дно половины 96–луночного планшета в течение ночи при 4°С. Блокирование осуществляли с помощью 3% обезжиренного молока в PBS (DOUBLE HELIX, кат. # P10033) в течение 1 часа при комнатной температуре. В то же время, предварительно инкубировали 12,5 мкл человеческого CD47 (Novoprotein, кат. # CG18) в концентрации 2,5 мкг/мл с градиентами супернатанта гибридомы или антитела против CD47 («Положительный контроль 1» (eBioscience, Cat # 14–0479) в качестве положительного контроля и «Отрицательный контроль 1» (eBioscience, кат. # 14–0478) в качестве отрицательного контроля) в течение 1 часа при комнатной температуре, которые затем наносили в каждую блокированную лунку в течение 1 часа при комнатной температуре. Блокирующий эффект детектировали с помощью HRP–конъюгированного вторичного поликлонального козьего антитела к человеческому IgG–Fc (Abcam, кат. # ab98624) и затем проявляли субстратом TMB (Biopanda, кат. # TMB–S–003) после 3–кратной промывки PBST с последующим измерение OD450. Нейтрализующую активность (концентрация антител против OD450) анализировали с помощью GraphPad Prism и рассчитывали IC50 для оценки.
Нейтрализующий эффект отобранных антител также анализировали с помощью проточной цитометрии. Генерировали клеточную линию CHO, экспрессирующую SIRPa человека, и экспрессию SIRPa оценивали путем связывания белка CD47. Вкратце, клетки CHO, экспрессирующие SIRPa человека, диссоциировали с помощью буфера диссоциации трипсин–EDTA и промывали 3 раза буфером FACS (буфер PBS с 2% FBS). Клетки высевали в 96–луночный планшет и центрифугировали. Предварительно инкубировали 25 мкл человеческого CD47–Fc в концентрации 2,5 мкг/мл или биотинилированного белка CD47 с градиентами супернатанта гибридомы или антител против CD47 (B6H12 (eBioscience, кат. # 14–0479) в качестве положительного контроля и 2D3 (eBioscience, кат. # 14–0478) в качестве отрицательного контроля) в течение 1 часа при комнатной температуре, а затем повторно суспендировали осадок клеток и инкубировали один час при 4 градусах, затем окрашивали АРС–меченным антителом против человеческого Fc или АРС–стрептавидином после отмывания этих несвязанных белков. После одного часа инкубации при 4 градусах и 3–кратной промывки клетки анализировали на аппарате Guava HL6T, и данные анализировали с использованием программного обеспечения Flowjo. Нейтрализующую активность (средняя интенсивность флуоресценции против концентрации антител) анализировали с помощью GraphPad Prism и рассчитывали IC50 для оценки. Результаты эксперимента нейтрализующего ИФА суммированы в Таблице 6.
Таблица 6
Антитело ABU 2 ABU 3 ABU 4 ABU 5 Abu 6 Пол. Контр.1
IC50 (нМ) ++++ ++ +++ ++++ + ++++
++++: <8 нМ; +++:> 8 нМ и <15 нМ; ++:> 15 нМ и <20 нМ; +:> 20 нМ
Пример 5. Фагоцитоз, зависимый от антитела против CD47
Дозозависимый эффект отселектированных антител на фагоцитоз in vitro проводили для получения ЕС50.
Человеческие моноциты очищали из PBMC человека с помощью микросфер для выделения клеток CD14 Miltenyi. Очищенные моноциты CD14+ культивировали в колбе T75 в присутствии M–CSF (100 нг/мл) в течение 7–10 дней. Макрофаги, полученные из моноцитов, собирали путем инкубации в буфере для диссоциации в течение 5 минут с последующей осторожной очисткой. Затем клетки М2 метили PKH26 (красный), 1×104 макрофагов высевали в 96–луночный планшет для тканевых культур с плоским дном в IMDM, содержащей 10% FBS, в течение 24 часов, среду заменяли бессывороточной средой на следующие 2 часа инкубации. Клетки HL–60, меченные 5×104 CFSE, добавляли в лунку в присутствии указанных антител в течение 2 часов. Лунки промывали 3 раза IMDM, и клетки фиксировали 2% PFA. Затем меченные флуоресценцией клетки анализировали на аппарате Cellomics.
Индекс фагоцитоза определяли путем расчета количества фагоцитов на 100 макрофагов, данные рассчитывали в Office Excel и графически отображали в Prism5. EC50 рассчитывали на основе процента максимума индекса фагоцитоза.
Данные из примеров экспериментов фагоцитоза с использованием клеток линии клеток HL60 изображены на Фигуре 4. EC50 рассчитывали и суммировали в Таблице 7. Данные из примеров экспериментов по фагоцитозу с использованием линии клеток рака толстой кишки человека DLD–1 изображены на Фигуре 5.
Таблица 7
Ab ID ABU 1 ABU 2 ABU 3 ABU 4 ABU 5 ABU 6 Пол. Контр.1 Пол. Контр. 2
IC50 (нМ) +++ ++ + ++ + ++ + +
+++: <0,6 нМ; ++:> 0,6 нМ и <1 нМ; +:> 1 нМ
Пример 6. Эпитопное связывание CD47–положительных антител
Эпитопное связывание этих положительных образцов проводили с использованием CD47–экспрессирующих клеток CHO с коммерческим блокирующим антителом против CD47 Положительный контроль 1, содержащим SEQ ID NO: 240 и SEQ ID NO: 241, с эталонным аналогичное антителом Положительный контроль 2, содержащим SEQ ID NO: 242 и SEQ. ID NO: 243, а также с аналогичным антителом Положительный контроль 3, содержащим SEQ ID NO: 244 и SEQ ID NO: 245. Положительный контроль 1 также содержал SEQ ID NO: 149–154. Положительный контроль 2 также содержал SEQ ID NO: 155–160. Вкратце, семь нейтрализующих антител против CD47 и 3 эталонных антитела анализированы и группировали в соответствии с их конкурентным связыванием с клеткой CHO, экспрессирующей CD47, с использованием проточной цитометрии. Сначала использовали биотинилированное антитело для расчета концентрации для 90%–ного связывания, затем антитела против CD47 последовательно разводили и смешивали с одним из биотинилированных антител в предварительно определенной концентрации 90%–ного связывания. SA–APC использовали для детектирования связывания биотинилированного антитела. В соответствии с планом эксперимента связывание меченых антител должно зависеть от Ab того же самого бина и классифицироваться как одна группа. Если на связывание меченых антител это не влияет, то эти тестируемые антитела не находятся в одном и том же бине и характеризуются как отдельная группа. Были идентифицированы три профиля связывания на СНО, экспрессирующих CD47, и шесть положительных результатов подразделяли на две группы, представленные ниже в Таблице 8. ABU4 и ABU5 принадлежат к одной группе связывания эпитопов, в то время как другие, включая положительный контроль 3, принадлежат к другой группе. Положительный контроль 1 мешал двум группам связывания на клетках.
Таблица 8
ABU Эпитопная группа
ABU4 A
ABU5 A
ABU1 B
ABU2 B
ABU3 B
ABU6 B
Положительный контроль 2 B
Положительный контроль 3 B
Положительный контроль 1 A/B
Пример 7. Анализ связывания эритроцитов и гемагглютинации
CD47 повсеместно экспрессируется с особенно высокой экспрессией на эритроцитах. Для оценки аффинности связывания на эритроцитах человека, анализ связывания эритроцитов проводили с использованием эритроцитов от нескольких доноров. Кривая связывания и EC50 из примера эксперимента изображены на Фигуре 6.
Отселектированные антитела также тестировали в анализе гемагглютинации для выявления антител, демонстрирующих сильный эффект гемагглютинации. Тестируемые антитела разводили в соответствии с указанной концентрацией в PBS, и 90 мкл антител с последовательным разведением добавляли в культуральный планшет с V–образным дном для инкубации при 37 °C в течение 1 часа. Затем добавляли 10 мкл эритроцитов человека (эритроцитов) с конечной концентрацией 10% в PBS. Эритроциты инкубировали с антителами при 37°С, и гемагглютинин будет наблюдаться через 2–4 часа. Доказательство присутствия гемагглютинина демонстрируется наличием неопределяемых эритроцитов, которые выглядят как помутнение по сравнению с пунктатом красных точек негемагглютинированных эритроцитов.
Индекс гемагглютинации количественно определяли по площади гранул эритроцитов в присутствии или отсутствии mAb, диаметр гранул эритроцитов определяли с помощью программного обеспечения ImageJ в пикселях, затем площадь рассчитывали в Excel. Расчетные данные нормализовали по изотипу IgG. Логарифмическую концентрацию от индекса наносили на график в Prism 5 и изображали на Фигурах 7А–7В.
Изображения из примера эксперимента изображены на Фигуре 8. Доказательством индукции значительной гемагглютинации эритроцитов человека является наличие помутнения в лунках. На Фигуре 8 изотип muIgG1 служит отрицательным контролем; пунктирная линия обозначает пустые контроли; положительный контроль гемагглютинации – кружки синего цвета; и отрицательный контроль гемагглютинации – кружки желтого цвета.
Пример 8. Характеристика химерных антител против CD47
Для генерации химерных антител отбирали и наращивали отселектированные антигенсвязывающие единицы и извлекали последовательности V–области. V–области синтезировали и субклонировали в векторы для получения химеры человеческого IgG4 (S228P). S228P относится к аминокислотному положению, где IgG4 расщепляется, как описано в Aalberse RC and Schuurman J (2002) IgG4 breaking the rules. Immunology 105: 9–19 (включена в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме). Последовательность IgG4 человека клонировали на С–конце последовательности вариабельной области легкой цепи и последовательности вариабельной области тяжелой цепи отселектированных антител. Химерные антитела hIgG4 экспрессировали в клетках 293F и очищали в формате человеческого IgG4 для функциональной проверки. Химерные антитела также генерировали с константной областью IgG1 вместо области IgG4.
Аффинности связывания химерных антител измеряли проточной цитометрией с CD47–экспрессирующими клеточными линиями. Результаты примера эксперимента изображены на Фигуре 9.
Нейтрализующий эффект отдельных химерных антител анализировали с использованием клеток, экспрессирующих CD47. Вкратце, химерное человеческое антитело IgG4 разбавляли и смешивали с биотинилированным человеческим белком CD47. Затем детектировали дозозависимые эффекты блокирования связывания SIRPα для C–ABU1, C–ABU2 и C–ABU 4. Результаты экспериментов приведены на Фигуре 10.
Отселектированные химерные антитела были дополнительно охарактеризованы в анализе фагоцитоза клеток DLD–1, который проводили, как описано выше. Результаты примеров экспериментов изображены на Фигуре 11, а звездочки обозначают статистическую значимость, основанную на значении p, рассчитанном с помощью одностороннего критерия ANOVA после теста Даннетта.
Пример 9. Фаговая селекция дополнительных Fab против CD47
Fab против CD47 получали с использованием следующего метода на основе фагов. Суммарную РНК получали из селезенки иммунизированных мышей. После обратной транскрипции, примированной олиго (dT), вариабельные области антитела, VL и VH, амплифицировали с помощью ПЦР. Области VL и VH мыши затем были слиты с константными областями человека, CL и CH1, легкой цепи и тяжелой цепи, соответственно. Комбинацию химерных легких цепей и фрагментов тяжелых цепей клонировали в фагмидный вектор pComb3X и получали в результате библиотеку Fab мыши/человека, представленную на фаге.
Полученную фаговую библиотеку затем подвергали скринингу на специфичные к CD47 Fab. Гранулы Dynabead, конъюгированные со стрептавидином, сначала блокировали инкубацией в течение 1 часа при комнатной температуре с PBS, содержащим 3% BSA. Приблизительно 1 мкл блокированных Dynabead инкубировали в течение 30 минут с уменьшающимся количеством биотинилированного CD47–Fc. (100 нМ, 50 нМ и 25 нМ для раундов 1, 2 и 3, соответственно) для захвата антигена. Фаговые библиотеки предварительно адсорбировали на других приблизительно 1 мкл блокированных Dynabead в PBS, содержащем 3% BSA, в течение 30 минут с последующим истощением с использованием приблизительно 1 мкг/мл человеческого Fc–фрагмента в PBS, содержащем 3% BSA. Затем истощенную фаговую библиотеку смешивали с покрытыми антигеном Dynabead в течение 1 часа при комнатной температуре с легким вращением с переворачиванием «через голову». Затем Dynabead промывали 1 мл PBS, содержащим 0,05% Твин–20 (5, 10 и 15 раз для раундов 1, 2 и 3, соответственно), используя магнитный сепаратор. Связанный фаг элюировали инкубацией при комнатной температуре в течение 10 минут с 500 мкл буфера для элюции с последующей нейтрализацией 50 мкл буфера для нейтрализации. Элюированный фаг восстанавливаи путем инфицирования клеток E.coli TG1 и готовили фаговую библиотеку для следующего раунда скрининга.
Отселектированные Fab были охарактеризованы с помощью различных анализов ИФА. Индуцировали растворимые фрагменты Fab и периплазматические фракции получали следующим способом. Индивидуальные клоны из третьего раунда скрининга отбирали из чашки с агаром и культивировали в течение ночи в микропланшете, содержащем 2YT. 5 мкл каждой ночной культуры переносили в микропланшет, содержащий 150 мкл 2YT, 2% глюкозы, 50 мкг/мл. карбенициллина, и выращивали при 37°С в течение 3 часов. Изопропилтиогалактозид (IPTG) добавляли в каждую лунку до конечной концентрации 1 мМ. После наращивания в течение ночи при встряхивании при 25°С планшеты центрифугировали и супернатант использовали непосредственно в связывающем ИФА. Для приготовления периплазматических фракций клеточные осадки ресуспендировали и инкубировали на льду в течение 20 минут. Эти периплазматические фракции затем использовали для тестирования специфичности с помощью проточной цитометрии и анализов блокирующего ИФА.
Крупномасштабную индукцию растворимых фрагментов Fab из индивидуальных клонов проводили в масштабе 50 мл в 2YT, содержащем 50 мкг/мл карбенициллина и 2% глюкозы. После наращивания при 37°С до значения 0,9 при OD600 добавляли IPTG до конечной концентрации 1 мМ. После наращивания в течение ночи при 25°С клеточные осадки собирали и периплазматические фракции готовили, как описано выше.
Описанные выше объединенные приготовленные в крупном масштабе периплазматические фракции пропускали через 1 мл Ni–смолы в соответствии с инструкциями производителя. Колонку промывали буфером и белок элюировали путем нанесения буфера. Элюированный белок фильтровали для замены буфера на PBS. Очищенные Fab затем анализировали с помощью SDS–PAGE в невосстанавливающих, а также восстанавливающих условиях и определяли концентрацию спектрофотометрически.
Отселектированные Fab скринировали с помощью ИФА. На микропланшет наносили покрытие в виде человеческого CD47–Fc в концентрации 1 мкг/мл в PBS в течение ночи при 4 градусах Цельсия, трижды промывали PBS/0,05% Tween 20, блокировали PBS/3% обезжиренным молоком в течение 1 часа при комнатной температуре и затем инкубировали с 50 мкл супернатанта индивидуального клона в течение 1 часа при комнатной температуре. После 3 промывок PBS/0,05% Tween 20 добавляли 50 мкл разведения 1:5000 конъюгированного с HRP антитела F(ab)2 против человеческого IgG, и инкубировали в течение 1 часа при комнатной температуре. После 3 промывок с PBS/0,05% Tween 20, для проявки окраски добавляли 50 мкл субстрата TMB. Реакции останавливали добавлением 50 мкл HCl и измеряли OD450 в ридере для микропланшетов.
Активность блокирования взаимодействия CD47 с SIRPa каждого клона осуществляли путем ингибирующего ИФА. На микропланшет наносили покрытие в виде SIRPa человека в концентрации 1 мкг/мл в PBS в течение ночи при 4°С, трижды промывали PBS/0,05% Tween 20, блокировали PBS/3% обезжиренным молоком в течение 1 часа при комнатной температуре. 50 мкл периплазматической фракции каждого клона смешивали с приблизительно 1 мкл человеческого CD47 и инкубировали в течение 1 часа при комнатной температуре с последующим добавлением 50 мкл смеси в блокированные лунки микропланшета. Инкубировали в течение 1 часа при комнатной температуре и следующие стадии были точно такими же, как указано выше.
Клетки СНО, которые были стабильно трансфецированы человеческим SIRPa, открепляли, используя буфер для диссоциации клеток. Аликвоты по 200 мкл, содержащие 10–5 клеток, распределяли в лунки 96–луночного планшета с U–образным дном. После трехкратной промывки буфером FACS (2% FBS в PBS) добавляли 0,07 мкг/мл биотинилированного CD47 в присутствии последовательно разведенных концентраций Fab в буфере FACS для ресуспендирования клеток и инкубировали при 4°С в течение 30 минут. Затем клетки трижды промывали буфером FACS с последующей инкубацией с разведенным 1:1000 APC–меченным SA (Invitrogen) при 4°С в течение 30 минут. После трехкратного промывки связывание измеряли на аппарате Guava HL6T. Данные из примера экспериментов показаны на Фигуре 12А и в Таблице 9.
Клетки СНО, которые были стабильно трансфецированы человеческим SIRPa, открепляли, используя буфер для диссоциации клеток. Аликвоты по 200 мкл, содержащие 10–4 клеток, распределяли в лунки 96–луночного планшета с U–образным дном. После трехкратной промывки буфером FACS (2% FBS в PBS) добавляли 0,07 мкг/мл His–меченного CD47 в присутствии последовательно разведенных концентраций Fab в буфере FACS для ресуспендирования клеток и инкубировали при 4°С в течение 30 минут. Затем клетки трижды промывали буфером FACS с последующей инкубацией с разведенным 1:1000 анти–His–APC (GenScript # A01802) при 4°С в течение 30 минут. После трехкратной промывки связывание измеряли на аппарате Guava HL6T.Данные из примера эксперимента показаны на Фигурах 12B– 12C и в Таблице 10.
Таблица 9
ABU8 ABU9 ABU11 ABU14 ABU16 ABU40 ABU20 ABU24 C–ABU1
IC50(нМ) ++ +++ ++ ++ + ++ ++ + +
+++: <10 нМ; ++:> 10 нМ и <65 нМ; +:> 65 нМ
Таблица 10
ABU9 ABU14 ABU40 Положительный контроль 3
IC50(нМ)
Частота		 ++ ++ + +
IC50(нМ)
MFI		 +++ +++ +++ +
+++: <2 нМ; ++:> 2 нМ и <2,7 нМ; +:> 2,7 нМ
Отселектированные Fab также охарактеризовывали анализом связывания клеток. Аликвоты по 200 мкл, содержащие 10–5 клеток HL60 или клеток DLD1, распределяли в лунки 96–луночного планшета с U–образным дном. После трехкратной промывки FACS буфером (2% FBS в PBS), клетки ресуспендировали в последовательно разбавленных концентрациях Fab или IgG в буфере FACS и инкубировали при 4°С в течение 30 минут. Затем клетки трижды промывали буфером FACS с последующей инкубацией с приблизительно трехкратным разведением АРС–меченого антитела против человеческого (Fab)2 или АРС–меченого козьего антитела против человеческого IgG, соответственно, при 4°С в течение 30 минут. После трехкратного промывки связывание измеряли на аппарате Guava HL6T. Данные из примера эксперимента с использованием клеток HL60 и Fabs представлены на Фигуре 13А и в Таблице 11. Данные из эксперимента примера с использованием клеток DLD1 и Fab представлены на Фигуре 13B и в Таблице 12. Дополнительные эксперименты с использованием клеток DLD1 и IgG представлены на Фигурах 13C и 13D и в Таблице 13.
Таблица 11
ABU8 ABU9 ABU11 ABU14 ABU16 ABU40 ABU20 ABU24 C–ABU1
EC50(нМ) +++ ++ +++ + +++ +++ +++ +++ +++
+++: <1 нМ; ++:> 1 нМ и <7 нМ; +:> 7 нМ
Таблица 12
ABU8 ABU9 ABU11 ABU14 ABU16 ABU40 ABU20 ABU24 C–ABU1
EC50(нМ) ++ +++ + +++ +++ ++ + ++ ++
+++: <5 нМ; ++:> 5 нМ и <60 нМ; +:> 60 нМ
Таблица 13
ABU9 ABU14 ABU16 ABU40 ABU24 Положительный контроль 3 Положительный контроль 2
IC50(нМ)
Частота		 +++ +++ +++ ++ ++ +++ ++
IC50(нМ)
MFI		 +++ +++ ++ + +++ +++ ++
+++: <2 нМ; ++:> 2 нМ и <20 нМ; +:> 20 нМ
Химерные варианты отселектированных Fab были получены и подвергнуты анализу ИФА. Блокированные FcRn клетки DLD1, экспрессирующие CD47, разделяли на аликвоты, распределяя таким образом приблизительно 104 клеток в лунки 96–луночного планшета с U–образным дном. После трехкратной промывки буфером FACS (2% FBS в PBS) добавляли 100 нМ биотинилированного SIRPα–Fc в присутствии последовательно разведенных концентраций Fab в буфере FACS для ресуспендирования клеток и инкубировали при 4°С в течение 30 минут. Затем клетки трижды промывали буфером FACS с последующей инкубацией с разбавленным меченным APC SA (Invitrogen) при 4°С в течение 30 минут. После трехкратной промывки связывание измеряли на аппарате Guava HL6T. Данные из эксперимента примера представлены на Фигурах 14А и 14В и в Таблице 14.
Таблица 14
ABU9 ABU14 ABU40 ABU24 Положительный контроль 3
IC50(нМ)
Частота		 +++ +++ +++ +++ ++
IC50(нМ)
MFI		 +++ +++ + + +++
+++: <1 нМ; ++:> 1 нМ и <20 нМ; +:> 20 нМ
Пример 10. Гуманизация антител против CD47
Последовательности антител подвергали профилированию с использованием структурного моделирования, чтобы идентифицировать наиболее подходящие участки зародышевой линии и сайты обратной мутации. Оптимизированные мутанты синтезировали, и рекомбинантные антитела получали для аффинности связывания, определенной с помощью ИФА. После трансплантации и обратной мутации аффинность гуманизированных антител либо сохранялась, либо улучшалась (Фигура 15А), H–ABU2 дополнительно подвергался аффинному созреванию с помощью FACS–скрининга библиотеки мутагенеза для селекции клонов, которые могли бы лучше связывать антиген, в некоторых случаях до в 10 раз, по сравнению с соответствующим химерным родительским антителом.
Отобранные аффинно–зрелые гуманизированные антитела дополнительно охарактеризовывали в эксперименте по блокированию, как описано ранее. Данные из экспериментов примеров с использованием клеток Raji изображены на Фигурах 15B– 15C и в Таблице 15.
Figure 00000001
Другой набор гуманизированных антител анализировали в анализе связывания, как описано ранее. Проведенные анализы связывания представляли собой исследования EC50 связывания с помощью ИФА, аналогичные исследованиям, описанным в Примере 3, с использованием планшетов с покрытием CD47. Данные из эксперимента примера изображены на Фигуре 16А и в Таблице 16. Группу из этих антител дополнительно охарактеризовывали в блокирующем эксперименте SIRP–альфа с использованием клеток Raji, как описано ранее. Анализы блокирования выполняли аналогично тем, которые описаны в Примере 4. Данные из эксперимента примера изображены на Фигуре 16B и в Таблице 17.
Таблица 16
C–ABU H–ABU12 H–ABU13 H–ABU14 H–ABU15 H–ABU16 H–ABU17 H–ABU18 H–ABU19
EC50 + + + + + + + + +
H–ABU20 H–ABU21 H–ABU22 H–ABU23 H–ABU24 H–ABU25 H–ABU26 H–ABU27 H–ABU28
EC50 + + + + + + + + +
H–ABU29 H–ABU30 H–ABU31 H–ABU32 H–ABU33 H–ABU34 H–ABU35 H–ABU36
EC50 + + + + + + + +
+: <0,06 мкг/мл
Таблица 17
C–ABU H–ABU37 H–ABU38 H–ABU39 H–ABU40 H–ABU41 H–ABU42 H–ABU43 Положительный контроль 3
IC50 (нМ) + + + + + + N.A. + +
+: <0,6 нМ
Отселектированные мышиные, химерные и гуманизированные антитела подвергали анализу гемагглютинации, как описано ранее. Вкратце, моноклональные антитела последовательно разводили и инкубировали в течение 1 часа перед добавлением цельной крови до конечной концентрации в крови 10%. Через 2–4 часа инкубации эффект гемагглютинации исследовали с помощью сканера.
Отселектированные мышиные, химерные и гуманизированные антитела также подвергали анализу связывания эритроцитов и тромбоцитов. Среди гуманизированных антител были H–ABU 2–G1, которые содержат константную область человеческого IgG1, и H–ABU 2–G4, которые содержат константную область человеческого IgG4. Кровь разводили 1:100 в DPBS. Моноклональные антитела, начиная с 10 мкг/мл, последовательно разводили и добавляли к разбавленной крови с объемным соотношением 1:2 (20 мкл антител и 40 мкл разведенной крови). Смесь инкубировали в течение 30 минут при 40 градусах Цельсия, а затем дважды промывали DPBS. Затем добавляли вторичные антитела, а именно моноклональные антитела к человеческому АРС или моноклональные антитела к мышиному АРВ (Jackson Immuno Research 315–606–046 или 109–605–088, соответственно) и FITC–меченные антитела к человеческому CD61 (BD, 555753) для связывания тромбоцитов. После добавления вторичных антител смесь инкубировали в течение 30 минут при 4 градусах Цельсия. Клетки дважды промывали DPBS, и аффинность связывания оценивали с использованием проточного цитометра.
Отселектированные гуманизированные антитела анализировали с использованием анализа гемагглютинации, как описано ранее. Данные из эксперимента примера с использованием образцов от двух разных доноров и указанных антител или контролей при указанной концентрации представлены на Фигуре 17. Анализы гемагглютинации проводили аналогично тем, которые описаны в Примере 7. Как описано выше, четкая пунктировка клеток крови с отсутствием мутного ореола указывает на то, что не произошло значительной гемагглютинации. Многие из гуманизированных антител не показали значительного эффекта гемагглютинации.
Затем отселектированные антитела тестировали с использованием анализа связывания с использованием эритроцитов яванской макаки, экспрессирующих CD47, для тестирования перекрестной реактивности обезьяны. Анализ проводили аналогично тому, как описано в Примере 3. Данные из эксперимента примера изображены на Фигуре 18. В этом примере тестировали антитела с двумя вариациями IgG. А именно, используемый IgG4 представлял собой один из двух различных вариантов Fc гамма–рецептора: либо IgG4 с мутацией S228P (SEQ ID NO: 37), либо IgG с мутациями как S228P, так и L235E (SEQ ID NO: 18). Антитело Положительный контроль 3–IgG4–PE содержит SEQ ID NO: 305 и SEQ ID NO: 306. Антитело Положительный контроль 3–IgG4–P содержит SEQ ID NO: 307 и SEQ ID NO: 308.
Отселектированные антитела тестировали с использованием анализа на фагоцитоз, как описано ранее. Эти анализы были выполнены аналогично тем, которые описаны в Примере 5. В этих экспериментах использовали либо клетки DLD–1, клетки CCRF–CEM, либо клетки Raji. Данные из экспериментов примера изображены на Фигурах 19А– 19С.
Отселектированные антитела дополнительно тестировали с использованием анализа связывания, как описано ранее. Антитела тестировали на уровень связывания с эритроцитами (Фигуры 20А и 20В) или с тромбоцитами (Фигуры 20С или 20D). В этом примере были протестированы антитела с двумя вариациями IgG. А именно, используемый IgG4 представлял собой один из двух различных вариантов Fc гамма–рецептора: либо IgG4 с мутацией S228P (SEQ ID NO: 37), либо IgG с мутациями как S228P, так и L235E (SEQ ID NO: 18).
Пример 11. In vivo CDX–модель и In vivo противоопухолевая активность гуманизированных антител
Клетки Raji поддерживали in vitro в виде культуры в среде RPMI–1640, дополненной 10% термоинактивированной фетальной бычьей сывороткой, 100 ед/мл пенициллина и 100 мкг/мл стрептомицина при 37°С в атмосфере 5% СО2 в воздухе. Опухолевые клетки обычно субкультивировали дважды в неделю. Клетки, растущие в фазе экспоненциального роста, собирали и подсчитывали для инокуляции опухоли. Каждой мыши вводили подкожно в правый бок опухолевые клетки Raji (3×106) в 0,1 мл PBS для развития опухоли. Обработки начинали на 8 день после инокуляции опухоли, когда средний размер опухоли достигал примерно 113 мм3. Каждая группа состояла из 7 или 8 мышей, несущих опухоли.
Во время обычного мониторинга животных ежедневно проверяли на любые эффекты роста опухоли и обработки в отношении нормального поведения, такого как подвижность, потребление пищи и воды (только визуально), прирост/потеря массы тела (массу тела измеряли два раза в неделю) матирование глаз/волос и любой другой аномальный эффект, как указано в протоколе. Смерть и наблюдаемые клинические признаки были зарегистрированы на основе количества животных в каждой подгруппе.
Размер опухоли измеряли два раза в неделю в двух измерениях, используя штангенциркуль, и объем выражали в мм3, используя формулу: V = 0,5 a x b2, где a и b представляют собой длинный и короткий диаметры опухоли, соответственно. Размер опухоли затем использовали для расчета значения T/C. Значение T/C (в процентах) является показателем противоопухолевой эффективности; Т и С – средние объемы обработанной и контрольной групп, соответственно, в данный день.
Для сравнения объема опухоли между группами проводили однофакторный ANOVA, и когда была получена значимая F–статистика (отношение дисперсии обработки к дисперсии ошибки), сравнения между группами проводили с помощью теста Games–Howell. Все данные анализировали с использованием Graphpad5.0. P <0,05 считалось статистически значимым.
Отобранные гуманизированные антитела тестировали in vivo, как описано выше, чтобы определить их влияние на размер опухоли. Вкратце, приблизительно 3 миллиона клеток Raji подкожно трансплантировали мышам NOD/SCID. Дозировка антител против CD47 составляла 10 мг/кг 3 раза в неделю. Дозирование антитела начинали, когда объем опухоли достигал 100 мм3. Данные для примера эксперимента изображены на Фигуре 21.
Пример 12. Сравнение формы IgG4P и IgG4PE.
Отселектированные гуманизированные антитела дополнительно охарактеризовывали путем тестирования вариантов, включающих любую из двух вариаций IgG. А именно, используемый IgG4 представлял собой один из двух различных вариантов Fc–гамма рецептора: либо IgG4 с мутацией S228P (SEQ ID NO: 37, вариант P), либо IgG с мутациями как S228P, так и L235E (SEQ ID NO: 18, PE вариант). На Фигуре 22А показаны данные из примера анализа блокирования с использованием клеток Raji, который в целом выполнялся, как описано ранее. Фигуры 22B и 23C изображают данные из иллюстративных анализов связывания RBC и тромбоцитов, соответственно, которые в целом выполняли, как описано ранее. На Фигуре 22D изображены данные из иллюстративного анализа гемагглютинации, который в целом выполнялся, как описано ранее. Как описано выше, четкая пунктировка клеток крови с отсутствием мутного ореола указывает на то, что не произошло значительной гемагглютинации.
Пример 13. Характеристика и противоопухолевая активность гуманизированных антител и комбинированная терапия
Отселектированные гуманизированные антитела тестировали in vivo, как описано выше, чтобы определить их влияние на размер опухоли. Данные формы примеров экспериментов изображены на Фигуре 23. Эксперименты с ксенотрансплантатом проводили, в целом, как описано в Примере 10. Вкратце, приблизительно 3 миллиона клеток Raji подкожно трансплантировали мышам NOD/SCID. Дозировка антител против CD47 составляла 10 мг/кг 3 раза в неделю. Анализ начинали, когда объем опухоли достигал 100 мм3. В этом примере тестировали антитела с двумя вариантами антител против CD47 с разными IgG. А именно, используемый IgG4 представлял собой один из двух различных вариантов Fc гамма–рецептора: либо IgG4 с мутацией S228P (SEQ ID NO: 37), либо IgG с мутациями как S228P, так и L235E (SEQ ID NO: 18).
Отселектированные антитела использовали в экспериментах с ксенотрансплантатом в комбинации с антителами против CD20 для определения их влияния на размер опухоли, как описано ранее выше. Вкратце, приблизительно 3 миллиона клеток Raji подкожно трансплантировали мышам NOD/SCID. Когда объем опухоли достигал 100 мм3, антитело C–ABU1, антитело против CD20 или их комбинацию вводили внутрибрюшинно в дозе 10 мг/кг через день, и регистрировали размеры опухоли. Комбинация с C–ABU 1 и антитела против CD20 значительно предотвращала прогрессирование опухоли. Данные из примеров экспериментов суммированы на Фигуре 24. Каждое антитело или контроль вводили, как суммировано в Таблице 18. Дозировка антитела против CD20 и антитела против CD47 составляла 10 мг/кг 3 раза в неделю. Анализ начинали, когда объем опухоли достигал 100 мм3. В этом примере тестировали антитела с двумя вариантами антител против CD47 с разными IgG. А именно, используемый IgG4 представлял собой один из двух различных вариантов Fc гамма–рецептора: либо IgG4 с мутацией S228P (SEQ ID NO: 37), либо IgG с мутациями как S228P, так и L235E (SEQ ID NO: 18). Антитело против CD20, используемое в этом анализе, было в формате человеческого IgG1.
Таблица 18.
Группа na Обработка Доза (мг/кг) Путь введения Схема
1 8 Контроль изотипа 10 внутрибрюшинно Три раза в неделю X 3 недели
2 8 Положительный контроль IgG4–PE 10 Внутрибрюшинно Три раза в неделю X 3 недели
3 8 H–ABU41–IgG4–PE 10 внутрибрюшинно Три раза в неделю X 3 недели
4 8 Контроль изотипа +анти–CD20 10 Внутрибрюшинно Три раза в неделю X 3 недели
5 8 Положительный контроль IgG4–PE +anti–CD20 10 Внутрибрюшинно Три раза в неделю X 3 недели
6 8 H–ABU41–IgG4–PE +анти–CD20 10 внутрибрюшинно Три раза в неделю X 3 недели
Хотя предпочтительные варианты осуществления настоящего изобретения были показаны и описаны в настоящем документе, специалистам в данной области техники будет очевидно, что такие варианты осуществления представлены только в качестве примера. Специалистам в данной области техники будут осуществлять многочисленные вариации, изменения и замены без отступления от изобретения. Следует понимать, что различные альтернативы вариантам осуществления изобретения, описанным в настоящем документе, могут быть использованы при практическом применении изобретения. Предполагается, что нижеследующая формула изобретения определяет объем изобретения и что таким образом охватываются способы и структуры в пределах объема этой формулы изобретения и их эквивалентов.
Список последовательностей
SEQ ID NO:1 KSSQSLLYSSNQKNYLA
SEQ ID NO:2 RASKNIGKYLA
SEQ ID NO:3 KASQDIKSYLS
SEQ ID NO:4 SASSSVSYMN
SEQ ID NO:5 RSSQSIVYSNGNTYLE
SEQ ID NO:6 KASENVGTYVS
SEQ ID NO:7 RSSQSIVHSNGNTYLE
SEQ ID NO:8 DTSKLAS
SEQ ID NO:9 GASNRYT
SEQ ID NO:10 KVSNRFS
SEQ ID NO:11 RVANRFS
SEQ ID NO:12 SGSTLQS
SEQ ID NO:13 WASTRDS
SEQ ID NO:14 YATSLAD
SEQ ID NO:15 FQGSHVPWT
SEQ ID NO:16 FQGSHVPYT
SEQ ID NO:17 GQSYSYPLT
SEQ ID NO:18 ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFEGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
SEQ ID NO:19 LQHGESPFT
SEQ ID NO:20 QQHNEYPYT
SEQ ID NO:21 QQWNSNPPT
SEQ ID NO:22 QQYYSYPLT
SEQ ID NO:23 DFYIN
SEQ ID NO:24 DTYMH
SEQ ID NO:25 DYGMA
SEQ ID NO:26 GYYMN
SEQ ID NO:27 NYWIA
SEQ ID NO:28 NYWMN
SEQ ID NO:29 NYWMQ
SEQ ID NO:30 DFYPGNTSTNYNEKFKT
SEQ ID NO:31 EINPSTGGTTYNQKFKA
SEQ ID NO:32 FISNLAKRIYYVDTVTG
SEQ ID NO:33 MIDPSDSESRLNQKFKD
SEQ ID NO:34 RIDPAKDNTKYDPKFQG
SEQ ID NO:35 RIDPYDSETLYNQKFKD
SEQ ID NO:36 WIYLGSGNTKYNEKFKG
SEQ ID NO:37 ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
SEQ ID NO:38 AYRYALDY
SEQ ID NO:39 GGKGGFGY
SEQ ID NO:40 GHYGSSYVVY
SEQ ID NO:41 REERGFAY
SEQ ID NO:42 RGRGGSSY
SEQ ID NO:43 RGSPMITSFAY
SEQ ID NO:44 YDGYEGFAY
SEQ ID NO:45 DIKMTQSPSSMYASLGERVTITCKASQDIKSYLSWYQQKPWKSPKTLIYYATSLADGVPSRFSGSGSGQHYSLTISSLESDDTATYYCLQHGESPFTFGSGTKLEIK
SEQ ID NO:46 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASKNIGKYLAWYQQKPGKAPKLLIYSGSTLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHNEYPYTFGQGTKVEIK
SEQ ID NO:47 DIVMSQSPSSLAVSVGEKVTMSCKSSQSLLYSSNQKNYLAWYQQKPGQSPKLLIYWASTRDSGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVKAEDLAVYYCQQYYSYPLTFGAGTKLELK
SEQ ID NO:48 DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLLYSSNQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRDSGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSYPLTFGQGTKVEIK
SEQ ID NO:49 DVLMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQSIVYSNGNTYLEWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCFQGSHVPYTFGGGTKLEIK
SEQ ID NO:50 DVQITQSPSFLAASPGETITINCRASKNIGKYLAWFQEKPGKTNKLLIYSGSTLQSGIPSRFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAIYYCQQHNEYPYTFGGGTKLEIK
SEQ ID NO:51 EVKLVESGGGLVQPGGSRKLSCAASGFTFSDYGMAWVRQAPGKGPECVAFISNLAKRIYYVDTVTGRFTISRENAKNTLYLEMSSLRSEDTAMYYCTRAYRYALDYWGQGTTLTVSS
SEQ ID NO:52 EVQLQQSGAELVKPGASVKLSCTASGFTIKDTYMHWVKQRPEQGLEWIGRIDPAKDNTKYDPKFQGKATITLDTSSNIAYLQLSSLTSEDTAVYFCARGHYGSSYVVYWGQGTLVTVSA
SEQ ID NO:53 EVQLQQSGPELVKPGASVKISCKASGYSFTGYYMNWVKQSPEKSLEWIGEINPSTGGTTYNQKFKAKATLTVDKSSSTAYMQLKSLTFEDSAVYYCAIYDGYEGFAYWGQGTLVTVSA
SEQ ID NO:54 QIVLTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSSVSYMNWYQQKSGTSPKRWIYDTSKLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISSMEAEDAATYYCQQWNSNPPTFGTGTKLELK
SEQ ID NO:55 EVKLVESGGGLVQPGGSRKLSCAASGFTFSDYGMAWVRQAPGKGPECVAFISNLAKRIYYVDTVTGRFTISRENAKNTLYLEMSSLRSEDTAMYYCTRAYRYALDYWGQGTTLTVSS
SEQ ID NO:56 DIKMTQSPSSMYASLGERVTITCKASQDIKSYLSWYQQKPWKSPKTLIYYATSLADGVPSRFSGSGSGQHYSLTISSLESDDTATYYCLQHGESPFTFGSGTKLEIK
SEQ ID NO:57 DIVMSQSPSSLAVSVGEKVTMSCKSSQSLLYSSNQKNYLAWYQQKPGQSPKLLIYWASTRDSGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVKAEDLAVYYCQQYYSYPLTFGAGTKLELK
SEQ ID NO:58 NILMTQSPKSMSMSVGERVTLSCKASENVGTYVSWYQQKPDQSPKLLIYGASNRYTGVPDRFTGSGSATDFTLTISSVQAEDLADYHCGQSYSYPLTFGAGTKLELK
SEQ ID NO:59 EVQLQQSGPELVKPGASVKISCKASGYSFTGYYMNWVKQSPEKSLEWIGEINPSTGGTTYNQKFKAKATLTVDKSSSTAYMQLKSLTFEDSAVYYCAIYDGYEGFAYWGQGTLVTVSA
SEQ ID NO:60 QVQLQQSGPQLVRPGASVKISCKTSGYSFTNYWMQWVKQRPGQGLEWIGMIDPSDSESRLNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMQLSSPTFEDSAVYYCARRGSPMITSFAYWGQGTLVTVSA
SEQ ID NO:61 QVQLQQPGAELVKPGASVKMSCKASGYTFTNYWIAWVKRRPGQGLEWIGDFYPGNTSTNYNEKFKTKATLTIDTSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARRGRGGSSYWGQGTTLTVSS
SEQ ID NO:62 QIQLQQSGPELVKPGASVKISCKVSGYIFTDFYINWVKQRPGQGLEWIGWIYLGSGNTKYNEKFKGKATLTVDTSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYFCARREERGFAYWGQGTLVTVSA
SEQ ID NO:63 QVQLQQPGAELVRPGASVKLSCKASGYTFTNYWMNWFKQRPEQGLEWIGRIDPYDSETLYNQKFKDKAILTVDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCAGGGKGGFGYWGQGTLVTVSA
SEQ ID NO:64 EVQLQQSGAELVKPGASVKLSCTASGFTIKDTYMHWVKQRPEQGLEWIGRIDPAKDNTKYDPKFQGKATITLDTSSNIAYLQLSSLTSEDTAVYFCARGHYGSSYVVYWGQGTLVTVSA
SEQ ID NO:65 DVLMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQSIVYSNGNTYLEWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCFQGSHVPYTFGGGTKLEIK
SEQ ID NO:66 DVLMTQTPLSLPVSLGEQASISCRSSQSIVHSNGNTYLEWYLQKPGQSPKLLIYRVANRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCFQGSHVPWTFGGGTKLEIK
SEQ ID NO:67 DVLMTQTPLSLPVSLGEQASISCRSSQSIVHSNGNTYLEWYLQKPGQSPKLLIYRVANRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCFQGSHVPWTFGGGTKLEIK
SEQ ID NO:68 DVQITQSPSFLAASPGETITINCRASKNIGKYLAWFQEKPGKTNKLLIYSGSTLQSGIPSRFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAIYYCQQHNEYPYTFGGGTKLEIK
SEQ ID NO:69 NILMTQSPKSMSMSVGERVTLSCKASENVGTYVSWYQQKPDQSPKLLIYGASNRYTGVPDRFTGSGSATDFTLTISSVQAEDLADYHCGQSYSYPLTFGAGTKLELK
SEQ ID NO:70 QIQLQQSGPELVKPGASVKISCKVSGYIFTDFYINWVKQRPGQGLEWIGWIYLGSGNTKYNEKFKGKATLTVDTSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYFCARREERGFAYWGQGTLVTVSA
SEQ ID NO:71 QIVLTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSSVSYMNWYQQKSGTSPKRWIYDTSKLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISSMEAEDAATYYCQQWNSNPPTFGTGTKLELK
SEQ ID NO:72 QVQLQQPGAELVKPGASVKMSCKASGYTFTNYWIAWVKRRPGQGLEWIGDFYPGNTSTNYNEKFKTKATLTIDTSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARRGRGGSSYWGQGTTLTVSS
SEQ ID NO:73 QVQLQQPGAELVRPGASVKLSCKASGYTFTNYWMNWFKQRPEQGLEWIGRIDPYDSETLYNQKFKDKAILTVDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCAGGGKGGFGYWGQGTLVTVSA
SEQ ID NO:74 QVQLQQSGPQLVRPGASVKISCKTSGYSFTNYWMQWVKQRPGQGLEWIGMIDPSDSESRLNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMQLSSPTFEDSAVYYCARRGSPMITSFAYWGQGTLVTVSA
SEQ ID NO:75 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDFYINWVRQAPGQRLEWMGWIYLGSGNTKYNEKFKGRVTITRDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARREERGFAYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:76 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDFYINWVRQAPGQRLEWMGWIYLGSGNTKYNEKFKGRVTITVDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARREERGFAYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:77 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYWMQWVRQAPGQGLEWMGMIDPSDSESRLNQKFKDRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARRGSPMITSFAYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:78 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYWMQWVRQAPGQGLEWMGMIDPSDSESRLNQKFKDRVTMTVDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARRGSPMITSFAYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:79 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKTSGYTFTNYWMQWVRQAPGQGLEWMGMIDPSDSESRLNQKFKDRVTMTVDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARRGSPMITSFAYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:80 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKVSGYTFTDFYINWVRQAPGQRLEWMGWIYLGSGNTKYNEKFKGRVTITVDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARREERGFAYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:81 MWPLVAALLLGSACCGSAQLLFNKTKSVEFTFCNDTVVIPCFVTNMEAQNTTEVYVKWKFKGRDIYTFDGALNKSTVPTDFSSAKIEVSQLLKGDASLKMDKSDAVSHTGNYTCEVTELTREGETIIELKYRVVSWFSPNENILIVIFPIFAILLFWGQFGIKTLKYRSGGMDEKTIALLVAGLVITVIVIVGAILFVPGEYSLKNATGLGLIVTSTGILILLHYYVFSTAIGLTSFVIAILVIQVIAYILAVVGLSLCIAACIPMHGPLLISGLSILALAQLLGLVYMKFVE
SEQ ID NO:82 MWPLAAALLLGSCCCGSAQLLFSNVNSIEFTSCNETVVIPCIVRNVEAQSTEEMFVKWKLNKSYIFIYDGNKNSTTTDQNFTSAKISVSDLINGIASLKMDKRDAMVGNYTCEVTELSREGKTVIELKNRTAFNTDQGSACSYEEEKGGCKLVSWFSPNEKILIVIFPILAILLFWGKFGILTLKYKSSHTNKRIILLLVAGLVLTVIVVVGAILLIPGEKPVKNASGLGLIVISTGILILLQYNVFMTAFGMTSFTIAILITQVLGYVLALVGLCLCIMACEPVHGPLLISGLGIIALAELLGLVYMKFVASNQRTIQPPRNR
SEQ ID NO:83 MWPLVAALLLGSACCGSAQLLFNKTKSVEFTFCNDTVVIPCFVTNMEAQNTTEVYVKWKFKGRDIYTFDGALNKSTVPTDFSSAKIEVSQLLKGDASLKMDKSDAVSHTGNYTCEVTELTREGETIIELKYRVVSWFSPNENILIVIFPIFAILLFWGQFGIKTLKYRSGGMDEKTIALLVAGLVITVIVIVGAILFVPGEYSLKNATGLGLIVTSTGILILLHYYVFSTAIGLTSFVIAILVIQVIAYILAVVGLSLCIAACIPMHGPLLISGLSILALAQLLGLVYMKFVASNQKTIQPPRNN
SEQ ID NO:84 MWPLAAALLLGSCCCGSAQLLFSNVNSIEFTSCNETVVIPCIVRNVEAQSTEEMFVKWKLNKSYIFIYDGNKNSTTTDQNFTSAKISVSDLINGIASLKMDKRDAMVGNYTCEVTELSREGKTVIELKNRTVSWFSPNEKILIVIFPILAILLFWGKFGILTLKYKSSHTNKRIILLLVAGLVLTVIVVVGAILLIPGEKPVKNASGLGLIVVSTGILILLQYNVFMTAFGMTSFTIAILITQVLGYVLALVGLCLCIMACEPVHGPLLISGLGIIALAELLGLVYMKFVASNQRTIQPPRNR
SEQ ID NO:85 DIQMTQSPASLSASVGETVTITCRASENIYSYLAWYQQKQGKSPQLLVYNAKTLAEGVPSRFSGSGSGTQFSLKIKSLQPEDFGSYYCQHHYGTPLTFGGGTKLELK
SEQ ID NO:86 EVQLQQSGTELVKPGASVKLSCKASGYTFISYWMHWVKQRPGQGLEWIGNINPSSGNTNYNEKFKTKATLTVDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCVRDYYGNYWGQGTTVTVSS
SEQ ID NO:87 DIKMNQSPSSLSASLGDTITITCHASQNINVWLSWYQQKPGNIPKLLIYKASNLHTGVPSRFSGSGSGTGFTLTISSLQPEDIATYYCQQGQSYPLTFGAGTKLELK
SEQ ID NO:88 EVQLQQSGPELVKPGASVKLSCKASGFTFTNYYIHWVKQRPGQGPEWIGWIYLGSGNTKYNEKFKGKATLTADTSSSTAYLQLSTLISEDSAVYYCARYDYDLYLDSWGQGTTVTVSS
SEQ ID NO:89 DIQMMQSPASLSASVGETVTITCRASENIYSYLAWYQQKQGKSPQLLVYNAKTLAEGVPSRFSGSGSGTQFSLKINSLQPEDFGNYYCQHHYGTPLAFGAGTKLEIK
SEQ ID NO:90 EVQLQQPGAELVKPGTSVKLSCKASGYSFTAYWMHWVKQRPGQGLEWIGNINPSSGDSHYNEKFKSKATLTVDKSSSTAYTQLNSLTSEDSAVYYCARDYYGAYWGHGTLVTVSA
SEQ ID NO:91 DIQMTQSPASLSASVGETVTITCRASENVYSYLAWYQQKQGKSPQLLVYKANTLAEGVPSRFSGSGSGTQFSLKINSLQPEDFGTYYCQHHYGTPLTFGSGTKLEIK
SEQ ID NO:92 EVQLQQPGAELVRPGSSVKLSCKASGYSFTTYWMHWVKQRPGQGLEWIGNINPSSGDSHYNEKFKSKATLTVDKSSSTAYLQLNSLTSEDSAVYYCARDYYGAYWGHGTLVTVSA
SEQ ID NO:93 DIQMIQSPASLSASVGETVTITCRASENIYSYLAWYQQKQGKSPQLLVYNAKTLAEGVPSRFSGSGSGTQFSLRINTLQPEDLGTYYCQHHYGAPLSFGGGTKLEIKR
SEQ ID NO:94 EVQLQQPGAELVRPGTSVKLSCKASGYTFTSYWMHWVKQRPGQGLEWIGNINPSSGDSHYNEKFKSKATLTVDKSSSTAYMQLNSLTSEDSAVYYCARDYYGAYWGHGTLVTVSA
SEQ ID NO:95 DIQMTQSPASLSASVGETVTITCRASENIYSYLAWYQQKQGKSPQLLVYNAKTLAEGVPSRFSGSGSGTQFSLKINSLQPEDFGSYYCQHHYGTPLTFGAGTKLEIK
SEQ ID NO:96 EVQLQQPGTELVKPGASVKLSCKASGYTFTSYWMHWVKQRPGQGLEWIGNINPSSGDAHYSEEFKSKATLTVDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARDYYGAYWGHGTLVTVSA
SEQ ID NO:97 DIQINQSPSSLSASLGDTITITCHASQNINVWLSWYQQKPGNIPKLLIYKASNLHTGVPSRFSGSGSGTGFTLTISSLQPEDIATYYCQQGQSYPLTFGAGTKLEIK
SEQ ID NO:98 EVQLQQSGPELVKPGASVKISCKASGYSFTNYHIHWVKQRPGQGLEWIGWIYPGSGNTKYNEKFKGMAILTADTSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARYDYDLYLHSWGQGTTVTVSS
SEQ ID NO:99 DIQMTQSPASLSASVGETVTITCRASENIYSYLAWYQQKQGKSPQLLVYNAKTLAEGVPSRFSGSGSGTQFSLKINSLQPEDFGSYYCQHHYGTPLTFGAGTKLEIK
SEQ ID NO:100 EVQLQQPGTEVVKPGASVKLSCKASGYSFTTYWMHWVKQRPGQGLEWIGNINPSSGDSHYNEKFKSKATLTVDKSSSTAYMQLNSLTSEDSAVYYCARDYYGAYWGHGTLVTVSA
SEQ ID NO:101 RHCFNQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSSVSYMHWYQQKSGTSPKRWIYDTSNLASGVPVRFSGSGSGTSYSLTISRMEAEDAATYYCQQWSNYPFTFGSGTKLELK
SEQ ID NO:102 RVQLQQSGAELVRPGTSVKVSCKASAYAFTNYLIEWVKKRPGQGLEWIGVINPGSGGTNYNEKFKGKATLTADKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYFCARGDGYGSLFAYWGQGTLVTVSA
SEQ ID NO:103 DIQMIQSPASLSASVGETVTITCRASENIYSYLAWYQQKQGKSPQLLVYGAKTLAEGVPSRFSGSGSGTQFSLKINSLQPEDFGSYYCQHHYGIPLTFGAGTKLEIK
SEQ ID NO:104 EVQLQQPGTELVKPGASVKLSCKASGYTFISYWMHWVKQRPGQGLEWIGNINPSSGNTNYNEKFKTKATLTVDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCVRDYYGNYWGQGTSVTVSS
SEQ ID NO:105 DIQMIQSPASLSASVGETVTITCRASENIYSYLAWYQQKLGKSPQLLVYNAKTLAEGVPSRFSGSGSGTHFSLKINSLQPEDFGTYYCQHHYGNSLTFGAGTKLELK
SEQ ID NO:106 EVQLQQSGTELVKPGASVKLSCKASGYPFTSYWMHWVKQRPGQGLEWIGNINPSSGGTNYNEKFKTKATLTVDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARDYYGNYWGQGTTVTVSS
SEQ ID NO:107 DIQMTQSPASLSASVGETVTITCRASENIYSYLAWYQQKQGKSPQLLVYNAKTLAEGVPSRFSGSGSGTQFSLKINSLQPEDFGSYYCQHHYGTPLTFGAGTKLEIK
SEQ ID NO:108 EVQLQQPGTELVKPGASVKLSCKTSGYSFVTYWMHWVKQRPGQGLEWIGNINPSSGDSHYSEKFKSKATLTVDKSSSTAYMQLKSLTSEDSAVYYCVRDYYGAYWGQGTLVTVSA
SEQ ID NO:109 DAVVTQESALTTSPGETVTLTCRSSTGAVTTNNYANWVQEKPDHLFTGLIGGTNNRAPGVPARFSGSLIGDKAALTITGAQTEDEAIYFCALWYSNHLVFGGGTKLTVL
SEQ ID NO:110 PRGKVQESGPGLVKPSQSLSLTCSVTGYSITSGYYWNWIRQFPGNKLEWMGYINYDGSNNYNPSLKNRISITRDTSKNQFFLKLNSVTTEDTATYYCARGYYYGSSYGYWYFDVWGTGTTVTVSS
SEQ ID NO:111 DIQMTQSPASLSASVGETVTITCRASENIYSYLAWYQQKQGKSPQLLVYAATNLADGVPSRFSGSRSGTQFSLKINSLQPEDFGSYYCQHHYGTPLTFGAGTKLEIK
SEQ ID NO:112 EVQLQQPGTELAKPGASVKLSCKASGYTFISYWMHWVKQRPGQGLEWIGNINPSSGGTNYNEKFKSKATLTVDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCVRDYYGSYWGQGTTVTVSS
SEQ ID NO:113 DIQMTQSPASLSASVGETVTITCRASENIYSYLAWYQQKQGKSPQLLVYKAKTLVEGVPSRFSGSGSGTQFSLKINSLQPEDFGSYYCQHHYGTPLTFGAGTKLEIK
SEQ ID NO:114 RGPTAATWTELVKPGTSVKLSCKASGYTFISYWMHWVKQRPGQGLEWIGNINPSSGDTSYNEKFKSKATLTVDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARDYYGAYWGQGTSVTVSA
SEQ ID NO:115 DIQMMQSPASLSASVGETVTITCRASENIYSYLAWYQQKQGKSPQLLVYNAKTLAEGVPSRFSGSGSGTQFSLKINSLQPEDFGNYYCQHHYGTPLTFGSGTKLELK
SEQ ID NO:116 EVQLQQPGTELVKPGASVKVSCKASGYTFTSYWMHWVKQRPGQGLEWIGNINPSSGDSHYSEKFRSKATLTVDKSSSTAYMQLNSLTSEDSAVYYCARDYYGAYWGHGTLVTVSA
SEQ ID NO:117 DAVVTQESALTTSPGETVTLTCRSSTGAVSTSNYANWVQEKPDHLFTGLIGGTNNRAPGVPARFSGSLIGDKAALTITGAQTEDEAIYFCALWYSNHWVFGGGTKLTVL
SEQ ID NO:118 EVQLQQPGTELVKPGASVKLSCKASGYTFTSYWMHWVKQRPGQGLEWIGNVVPNNDGTNYNEKFRNKATLTVDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCAVTYFAYWGQGTLVTVSA
SEQ ID NO:119 DIQMMQSPASLSASVGETVTITCRASENIYSYLAWYQQKQGKSPQLLVYNAKTLAEGVPSRFSGSGSGTQFSLKINSLQPEDFGSYYCQHHYGTPLTFGAGTKLELK
SEQ ID NO:120 EVQLQQSGAELVKPGASVKLSCKASGYSFTTYWMHWVKQRPGQGLEWIGNINPSSGSAHYNEKFKSKATLTVDKSSNTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARDYYGAYWGHGTLVTVSA
SEQ ID NO:121 DIQMTQSPASLSASVGETVTITCRASENIYSYLAWYQQKQGKSPQLLVYNAKTLAEGVPSRFSGSGSGTHFSLKINSLQPEDFGSYYCQHHYGTPLTFGAGTKLELK
SEQ ID NO:122 EVQLQQPGAELVRPGSSVKLSCKASGYTFISYWIHWVKQRPGQGLEWIGNINPSSGSSNYNEKFKNKATLTVDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARDYYGAYWGHGTLVTVSA
SEQ ID NO:123 DIQMTQSPASLSASVGETVTITCRASENIYSYLAWYQQKQGKSPQLLVYNAKTLAEGVPSRFSGSGSGTQFSLKINSLQPEDFGNYYCQHHYGTPLTFGAGTKLEIK
SEQ ID NO:124 EVQLQQPGTELVKPGASVKLSCKASGYSFITYWMHWVKQRPGQGLEWIGNINPSSGDSHYSEKFKSKATLTVDKSSSTAYMQLNSLTSEDSAVYYCVRDYYGAYWGHGTLVTVSA
SEQ ID NO:125 DIKINQSPASLSASVGETVTITCRASENIYSYLAWYQQKQGKSPQLLVYKAKTLVEGVPSRFSGSGSGTQFSLKISSLQPEDFGSYYCQHHYGTPLTFGAGTKLELK
SEQ ID NO:126 EVQLQQPGAELVKPGASVKLSCKASGYTFISYWMHWVRQRPGQGLEWIGNINPSSGNTNYNEKFKTKATLTVDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCVRDYYGNYWGQGTSVTVSS
SEQ ID NO:127 GIQMTQSPASLSASVGETVTITCRASENIYSYLAWYQQKQGKSPQLLVYKAKTLVEGVPSRFSGSGSGTQFSLKINSLQPEDFGSYYCQHHYGTPLTFGAGTKLELK
SEQ ID NO:128 EVQLQQPGTELVKPGASVKLSCKASGYTFISYWIHWVKQRPGQGLEWIGNINPSSGGTNYNEKFKSKATLTVDKSSSTAYMHLNSLTSEDSAVYYCARDYYGNYWGQGTTLTVSS
SEQ ID NO:129 DIQMTQSPASLSASVGETVTITCRASDNIYSYLAWYQQKQGKSPQLLVYNAKTSAEGVPSRFSGSGSGTQFSLKINSLQPEDFGSYYCQHHYGTPLTFGAGTKLELK
SEQ ID NO:130 EVQLQQPGTELVKPGASVKLSCKASGYSFTTYWMHWVKQRPGQGLEWIGNINPSSGDSHYNEKFKSKATLTVDKSSSTAYMQLNSLTSEDSAVYYCARDYYGAYWGHGTLVTVSA
SEQ ID NO:131 DIQMTQSPASLSASVGETVTITCRASENIYSYLAWYQQKQGKSPQLLVYNAKTLAEGVPSRFSGSGSGTQFSLKINNLQPEDFGSYYCQHHYGTPLTFGAGTKLEMK
SEQ ID NO:132 EVQLQQSGAEHVRPGSSVKLSCKASGYSFITYWMHWVKQRPGQGLEWIGNINPSSGDSHYNEKFKSKATLTVDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARDYYGAYWGQGTLVTVSA
SEQ ID NO:133 DIKMNQSPSSLSASLGDTITITCHASQNINVWLSWYQQKPGNIPKLLIYKASNLHTGVPSRFSGSGSGTGFTLTISSLQPEDIATYYCQQGQSYPLTFGTGTKLEIK
SEQ ID NO:134 EVQLQQSGPELVKPGASVKISCKASGDSFTSDHIHWVKQRPGQGLEWIGWIYPGSGNTKYNEKFKGKATLTADTSSSTAYMQLSRLTSEDSAVYYCVTYDYDLYFDNWGQGTTLTVSS
SEQ ID NO:135 STLMTQSPASLAVSLGQRATISCRASESVDSYGNSFMHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFILNIHPVEEEDAATYYCLHSRELPFTFGSGTKLELK
SEQ ID NO:136 EVKLMESGGGLVKPGGSLKLSCAASGFTFSDYGMHWVRQAPEKGLEWVAYISSGSSTIYYADTVKGRFTISRDNAKNTLFLQMTSLRSEDTAMYYCARPDDGYYGFAYWGQGTLVTVSA
SEQ ID NO:137 DIQMTQSPASLSASVGETVTITCRASENVYSYLAWYQQKQGKSPQLLVYNAKTLAEGVPSRFSGSGSGTQFSLKINSLQPEDFGSYYCQHHYGTPLTFGAGTKLELK
SEQ ID NO:138 EVQLQQPGTELVKPGASVKLSCKASGYSFTTYWMHWVKQRPGQGLEWIGNINPSSGDSHYNEKFKSKATLTVDKSSSTAYMHLSSLTSEDSAVYYCARDYYGAYWGHGTLVTVSA
SEQ ID NO:139 DIQMTQSPASLSASVGETVTITCRASENIYSYLAWYQQKQGKSPQLLVFNAKTLAEGVPSRFSGSGSGTHFSLKINNLQPEDFGTYYCQHHYGTPLTFGAGTKLEIK
SEQ ID NO:140 EVQLQQSGAELVKPGASVKLSCKASGYSFISYWIHWVKQRPGQGLEWIGNINPSSGGNTYNEKFKNKATLTVDKSSSTAYMQLSRLTSEDSAVYYCTRDYYGAYWGQGTLVTVSA
SEQ ID NO:141 DIQMTQSPASLSASVGETVTITCRASENIYSYLAWYQQKQGKSPQLLVYNAKTLAEGVPSRFSGSGSGTQFSLKINSLQPEDFGSYYCQHHYGTPLAFGSGTKLELK
SEQ ID NO:142 EVQLQQPGTELVKPGASVKLSCKASGYSFITYWMHWVKQRPGQGLEWIGNINPSGGDSHYSEKFKSKATLTVDKSSSTAYMQLNSLTSEDSAVYYCVRDYYGAYWGHGTLVTVSA
SEQ ID NO:143 DIQMIQSPASLSASVGETVTITCRASENIYSYLAWYQQKQGKSPQLLVFNAKTLAEGVPSRFSGSGSGTQFSLKINSLQPEDFGSYYCQHHYGTPLTFGAGTKLEIK
SEQ ID NO:144 EVQLQQSGAELVKPGASVKLSCKASGYSFISYWIHWVKQRPGQGLEWIGNINPSSGGSSYNEKFKSKATLTVDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCTRDYYGAYWGQGTLVTVSA
SEQ ID NO:145 DIVLSQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSSVSYMHWYQQKSGTSPKRWIYDTSKLASGVPARFSGSGSGTSYSLTLSSMAAEDAATYSCQQWSGNSPTFGAGTKLEIK
SEQ ID NO:146 EVQLVESGGGLVQPKGSLKLSCAASGFTFNTYAMHWVRQAPGKGLEWVARIRSKSSNYATYYADSVKDRFTISRDDSQSIVYLQMNNLKTEDTAMYYCVRAWDYGSSWDYFDYWGQGTSVTVSS
SEQ ID NO:147 DIQMMQSPASLSASVGETVTITCRASENIYSYLAWYQQKQGKSPQLLVYNAQTLAEGVPSRFSGSGSGTQFSLKINSLQSEDIGSYYCQHHYGTPLTFGAGTKLELK
SEQ ID NO:148 RGPTQQPGTELVKPGASVKLSRKASGYTFTTYWMHWVKQRPGQGLEWIGNINPSSGDSHYNEKFKSKATLTVDKSSSTAYMQLNSLTSEDSAVYYCARDYYGAYWGHGTLVTVSA
SEQ ID NO:149 GYGMS
SEQ ID NO:150 TITSGGTYTYYPDSVKG
SEQ ID NO:151 SLAGNAMDY
SEQ ID NO:152 RASQTISDYLH
SEQ ID NO:153 FASQSIS
SEQ ID NO:154 QNGHGFPRT
SEQ ID NO:155 NYNMH
SEQ ID NO:156 TIYPGNDDTSYNQKFKD
SEQ ID NO:157 GGYRAMDY
SEQ ID NO:158 RSSQSIVYSNGNTYLG
SEQ ID NO:159 KVSNRFS
SEQ ID NO:160 FQGSHVPYT
SEQ ID NO:161 MWPLVAALLLGSACCGSAQLLFNKTKSVEFTFCNDTVVIPCFVTNMEAQNTTEVYVKWKFKGRDIYTFDGALNKSTVPTDFSSAKIEVSQLLKGDASLKMDKSDAVSHTGNYTCEVTELTREGETIIELKYRVVSWFSP
SEQ ID NO:162 DNIYSY
SEQ ID NO:163 ENIYSY
SEQ ID NO:164 ENVYSY
SEQ ID NO:165 ESVDSYGNSF
SEQ ID NO:166 QNINVW
SEQ ID NO:167 SSVSY
SEQ ID NO:168 TGAVSTSNY
SEQ ID NO:169 TGAVTTNNY
SEQ ID NO:170 AAT
SEQ ID NO:171 DTS
SEQ ID NO:172 GAK
SEQ ID NO:173 GTN
SEQ ID NO:174 KAK
SEQ ID NO:175 KAN
SEQ ID NO:176 KAS
SEQ ID NO:177 LAS
SEQ ID NO:178 NAK
SEQ ID NO:179 NAQ
SEQ ID NO:180 ALWYSNHLV
SEQ ID NO:181 ALWYSNHWV
SEQ ID NO:182 LHSRELPFT
SEQ ID NO:183 QHHYGAPLS
SEQ ID NO:184 QHHYGIPLT
SEQ ID NO:185 QHHYGNSLT
SEQ ID NO:186 QHHYGTPLA
SEQ ID NO:187 QHHYGTPLT
SEQ ID NO:188 QQGQSYPLT
SEQ ID NO:189 QQWSGNSPT
SEQ ID NO:190 QQWSNYPFT
SEQ ID NO:191 AYAFTNYL
SEQ ID NO:192 GDSFTSDH
SEQ ID NO:193 GFTFNTYA
SEQ ID NO:194 GFTFSDYG
SEQ ID NO:195 GFTFTNYY
SEQ ID NO:196 GYPFTSYW
SEQ ID NO:197 GYSFISYW
SEQ ID NO:198 GYSFITYW
SEQ ID NO:199 GYSFTAYW
SEQ ID NO:200 GYSFTNYH
SEQ ID NO:201 GYSFTTYW
SEQ ID NO:202 GYSFVTYW
SEQ ID NO:203 GYSITSGYY
SEQ ID NO:204 GYTFISYW
SEQ ID NO:205 GYTFTSYW
SEQ ID NO:206 GYTFTTYW
SEQ ID NO:207 INPGSGGT
SEQ ID NO:208 INPSGGDS
SEQ ID NO:209 INPSSGDA
SEQ ID NO:210 INPSSGDS
SEQ ID NO:211 INPSSGDT
SEQ ID NO:212 INPSSGGN
SEQ ID NO:213 INPSSGGS
SEQ ID NO:214 INPSSGGT
SEQ ID NO:215 INPSSGNT
SEQ ID NO:216 INPSSGSA
SEQ ID NO:217 INPSSGSS
SEQ ID NO:218 INYDGSN
SEQ ID NO:219 IRSKSSNYAT
SEQ ID NO:220 ISSGSSTI
SEQ ID NO:221 IYLGSGNT
SEQ ID NO:222 IYPGSGNT
SEQ ID NO:223 VVPNNDGT
SEQ ID NO:224 ARDYYGAY
SEQ ID NO:225 ARDYYGNY
SEQ ID NO:226 ARGDGYGSLFAY
SEQ ID NO:227 ARGYYYGSSYGYWYFDV
SEQ ID NO:228 ARPDDGYYGFAY
SEQ ID NO:229 ARYDYDLYLDS
SEQ ID NO:230 ARYDYDLYLHS
SEQ ID NO:231 AVTYFAY
SEQ ID NO:232 TRDYYGAY
SEQ ID NO:233 VRAWDYGSSWDYFDY
SEQ ID NO:234 VRDYYGAY
SEQ ID NO:235 VRDYYGNY
SEQ ID NO:236 VRDYYGSY
SEQ ID NO:237 VTYDYDLYFDN
SEQ ID NO:238 DIQMTQSPASLSASVGETVTITCRASENIYSYLAWYQQKQGKSPQLLVYNAKTLAEGVPSRFSGSGSGTQFSLKINSLQPEDFGSYYCQHHYGTPLTFGAGTKLELK
SEQ ID NO:239 EVQLQQPGTELVKPGASVKLSCKASGYSFTTYWMHWVKQRPGQGLEWIGNINPSSGDSHYNEKFKSKATLTVDKSSSTAYMQLNSLTSEDSAVYYCARDYYGAYWGHGTLVTVSA
SEQ ID NO:240 EVQLVESGGDLVKPGGSLKLSCAASGFTFSGYGMSWVRQTPDKRLEWVATITSGGTYTYYPDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQIDSLKSEDTAIYFCARSLAGNAMDYWGQGTSVTVSS
SEQ ID NO:241 DIVMTQSPATLSVTPGDRVSLSCRASQTISDYLHWYQQKSHESPRLLIKFASQSISGIPSRFSGSGSGSDFTLSINSVEPEDVGVYYCQNGHGFPRTFGGGTKLEIK
SEQ ID NO:242 QVQLQQPGAELVKPGASVMMSCKASGYTFTNYNMHWVKQTPGQGLEWIGTIYPGNDDTSYNQKFKDKATLTADKSSSAAYMQLSSLTSEDSAVYYCARGGYRAMDYWGQTSVTVSS
SEQ ID NO:243 DVLMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQSIVYSNGNTYLGWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYHCFQGSHVPYTFGGGTKVEIK
SEQ ID NO:244 QMQLVQSGAEVKKTGSSVKVSCKASGFNIKDYYLHWVRQAPGQALEWMGWIDPDQGDTEYAQKFQDRVTITRDRSMSTAYMELSSLRSEDTAMYYCNAAYGSSSYPMDYWGQGTTVTV
SEQ ID NO:245 NIQMTQSPSAMSASVGDRVTITCKASQDIHRYLSWFQQKPGKVPKHLIYRANRLVSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCLQYDEFPYTFGGGTKVEIK
SEQ ID NO:246 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDSYINWVRQAPGQRLEWMGWIYTGSGNTKYNEKFKGRVTITRDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARREERGFAYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:247 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDIYINWVRQAPGQRLEWMGWIYLGSGNVKYNEKFKGRVTITRDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARREDRGFAYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:248 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDNYINWVRQAPGQRLEWMGWIYLGSGNTKYNEKFKGRVTITRDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARREERGFAVWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:249 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDFYINWVRQAPGQRLEWMGWIYLGSGNTKYNEKFKGRVTITRDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARREERGFAYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:250 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDHYINWVRQAPGQRLEWMGWIYLGSGNTKYNEKFKGRVTITRDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARREDRGFAYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:251 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDNYINWVRQAPGQRLEWMGWVYLGSGNTKYNEKFKGRVTITRDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARREERGFAYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:252 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDLYINWVRQAPGQRLEWMGWIYLGSGNTKYNEKFKGRVTITRDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARREERGFAYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:253 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDNYINWVRQAPGQRLEWMGWIYLGSGNTKYNEKFKGRVTITRDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARREERGFAPWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:254 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDSYINWVRQAPGQRLEWMGWIYPGSGNTKYNEKFKGRVTITRDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARREERGFAYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:255 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDFYIHWVRQAPGQRLEWMGWIYLGSGNTKYNEKFKGRVTITRDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARREEDGFAHWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:256 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDNYINWVRQAPGQRLEWMGWIYLGSGNTKYNEKFKGRVTITRDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARRKERGFAYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:257 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDTYINWVRQAPGQRLEWMGWIYLGSGNIKYNEKFKGRVTITRDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARREERGFAYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:258 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYYINWVRQAPGQRLEWMGWIYLGSGNTKYNEKFKGRVTITRDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARREDRGFAYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:259 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDTYINWVRQAPGQRLEWMGWIYLGSGNVKYNEKFKGRVTITRDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARREERGFAHWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:260 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDLYINWVRQAPGQRLEWMGWIYLGSGNVKYNEKFKGRVTITRDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARREERGFAYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:261 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDSYINWVRQAPGQRLEWMGWIYGGSGNTKYNEKFKGRVTITRDTSASTTYMELSSLRSEDTAVYYCARREEDGFAYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:262 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDSYINWVRQAPGQRLEWMGWIYGGSGNTKYNEKFKGRVTITRDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARREERGFAYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:263 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDSYINWVRQAPGQRLEWMGWIYLGSGNVKYNEKFKGRVTITRDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARRIERGFAYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:264 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDSYINWVRQAPGQRLEWMGWVYLGSGNTKYNEKFKGRVTITRDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARREERGFAVWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:265 DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSILYSSNQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASVRDSGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYHYPLTFGQGTKVEIK
SEQ ID NO:266 DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLLSSNQKYYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRDSGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQFYSYPLTFGQGTKVEIK
SEQ ID NO:267 DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLYSSNKKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASSRDSGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSYPLTFGQGTKVEIK
SEQ ID NO:268 DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLLSSNQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASVRDSGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQFYSYPLTFGQGTKVEIK
SEQ ID NO:269 DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLLSSSQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASVRDSGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSYPLTFGQGTKVEIK
SEQ ID NO:270 DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLLYSSNKKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASVRDSGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYHYPLTFGQGTKVEIK
SEQ ID NO:271 DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLVSSSQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASVRDSGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSYPLTFGQGTKVEIK
SEQ ID NO:272 DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLLSSSQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRDSGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQFYSYPLTFGQGTKVEIK
SEQ ID NO:273 DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLLYSSNQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASVRDSGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQFYSYPLTFGQGTKVEIK
SEQ ID NO:274 DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLLYKSNQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASVRDSGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQLYSYPLTFGQGTKVEIK
SEQ ID NO:275 DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASVRDSGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYHYPLTFGQGTKVEIK
SEQ ID NO:276 DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLLSSSQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASGRDSGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSYPLTFGQGTKVEIK
SEQ ID NO:277 DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLLTSNQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASIRDSGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSYPLTFGQGTKVEIK
SEQ ID NO:278 DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLLYSSNRKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASSRDSGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYHYPLTFGQGTKVEIK
SEQ ID NO:279 DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLLYSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASSRDSGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQFYSYPLTFGQGTKVEIK
SEQ ID NO:280 DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLLSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASVRDSGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSYPLTFGQGTKVEIK
SEQ ID NO:281 DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLYTSNQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRDSGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSYPLTFGQGTKVEIK
SEQ ID NO:282 DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLLYNSNQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRDSGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYHYPLTFGQGTKVEIK
SEQ ID NO:283 DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLLYKSNQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASVRDSGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQFYSYPLTFGQGTKVEIK
SEQ ID NO:284 DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLYSSSQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASVRDSGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSYPLTFGQGTKVEIK
SEQ ID NO:285 DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLLYNSNQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASVRDSGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYHYPLTFGQGTKVEIK
SEQ ID NO:286 DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLLYSSNQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASVRDSGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYHYPLTFGQGTKVEIK
SEQ ID NO:287 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASKNIGKYLAWFQQKPGKAPKSLIYSGSTLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHNEYPYTFGGGTKVEIK
SEQ ID NO:288 DVQITQSPSSLSASVGDRVTITCRASKNIGKYLAWFQQKPGKAPKSLIYSGSTLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHNEYPYTFGGGTKVEIK
SEQ ID NO:289 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASKNIGKYLAWFQQKPGKAPKSLIYSGSTLQSGIPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHNEYPYTFGGGTKVEIK
SEQ ID NO:290 DVQITQSPSSLSASVGDRVTITCRASKNIGKYLAWFQQKPGKAPKSLIYSGSTLQSGIPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHNEYPYTFGGGTKVEIK
SEQ ID NO:291 DVQITQSPSSLSASVGDRVTITCRASKNIGKYLAWFQQKPGKTNKLLIYSGSTLQSGIPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHNEYPYTFGGGTKVEIK
SEQ ID NO:292 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYWMQWVRQAPGQGLEWMGMIDPSDSESRLNQKFKDRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARRGSPMITSFAYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:293 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKTSGYSFTNYWMQWVRQAPGQGLEWMGMIDPSDSESRLNQKFKDRVTMTRDTSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARRGSPMITSFAYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:294 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYWMQWVRQAPGQGLEWIGMIDPSDSESRLNQKFKDRATLTVDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARRGSPMITSFAYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:295 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKTSGYSFTNYWMQWVRQAPGQGLEWIGMIDPSDSESRLNQKFKDRATLTVDTSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARRGSPMITSFAYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:296 QVQLQQSGAEVKKPGASVKVSCKTSGYSFTNYWMQWVRQAPGQGLEWIGMIDPSDSESRLNQKFKDKATLTVDKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARRGSPMITSFAYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:297 DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCHASQNINVWLSWYQQKPGKAPKLLIYKASNLHTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGQSYPLTFGQGTKLEIK
SEQ ID NO:298 DIQITQSPSSVSASVGDRVTITCHASQNINVWLSWYQQKPGKAPKLLIYKASNLHTGVPSRFSGSGSGTGFTLTISSLQPEDFATYYCQQGQSYPLTFGQGTKLEIK
SEQ ID NO:299 DIQITQSPSSVSASVGDRVTITCHASQNINVWLSWYQQKPGKIPKLLIYKASNLHTGVPSRFSGSGSGTGFTLTISSLQPEDFATYYCQQGQSYPLTFGQGTKLEIK
SEQ ID NO:300 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYHIHWVRQAPGQRLEWMGWIYPGSGNTKYNEKFKGRVTITRDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARYDYDLYLHSWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:301 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFTNYHIHWVRQAPGQRLEWIGWIYPGSGNTKYNEKFKGRVTITRDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARYDYDLYLHSWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:302 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFTNYHIHWVRQAPGQRLEWIGWIYPGSGNTKYNEKFKGRATLTADTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARYDYDLYLHSWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:303 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFTNYHIHWVRQAPGQRLEWIGWIYPGSGNTKYNEKFKGMATLTADTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARYDYDLYLHSWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:304 EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFTNYHIHWVKQAPGQRLEWIGWIYPGSGNTKYNEKFKGMATLTADTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARYDYDLYLHSWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:305 QMQLVQSGAEVKKTGSSVKVSCKASGFNIKDYYLHWVRQAPGQALEWMGWIDPDQGDTEYAQKFQDRVTITRDRSMSTAYMELSSLRSEDTAMYYCNAAYGSSSYPMDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFEGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
SEQ ID NO:306 "QMTQSPSAMSASVGDRVTITCKASQDIHRYLSWFQQKPGKVPKHLIYRANRLVSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCLQYDEFPYTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID NO:307 QMQLVQSGAEVKKTGSSVKVSCKASGFNIKDYYLHWVRQAPGQALEWMGWIDPDQGDTEYAQKFQDRVTITRDRSMSTAYMELSSLRSEDTAMYYCNAAYGSSSYPMDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
SEQ ID NO:308 "QMTQSPSAMSASVGDRVTITCKASQDIHRYLSWFQQKPGKVPKHLIYRANRLVSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCLQYDEFPYTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID NO:309 DVQITQSPSFLAASPGETITINCRASKNIGKYLAWFQEKPGKTNKLLIYSGSTLQSGIPSRFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAIYYCQQHNEYPYTFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID NO:310 QVQLQQSGPQLVRPGASVKISCKTSGYSFTNYWMQWVKQRPGQGLEWIGMIDPSDSESRLNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMQLSSPTFEDSAVYYCARRGSPMITSFAYWGQGTLVTVSAASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
SEQ ID NO:311 DIQINQSPSSLSASLGDTITITCHASQNINVWLSWYQQKPGNIPKLLIYKASNLHTGVPSRFSGSGSGTGFTLTISSLQPEDIATYYCQQGQSYPLTFGAGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID NO:312 EVQLQQSGPELVKPGASVKISCKASGYSFTNYHIHWVKQRPGQGLEWIGWIYPGSGNTKYNEKFKGMAILTADTSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARYDYDLYLHSWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
--->
СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
<110> ZAI LAB (SHANGHAI) CO., LTD.
ZLIP HOLDING LIMITED
<120> CD47-антигенсвязывающая единица и ее применение
<130> 51750-701.602
<140> PCT/CN2018/074318
<141> 2018-01-26
<150> PCT/CN2017/072738
<151> 2017-01-26
<160> 313
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 17
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 1
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser Ser Asn Gln Lys Asn Tyr Leu
1 5 10 15
Ala
<210> 2
<211> 11
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 2
Arg Ala Ser Lys Asn Ile Gly Lys Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 3
<211> 11
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 3
Lys Ala Ser Gln Asp Ile Lys Ser Tyr Leu Ser
1 5 10
<210> 4
<211> 10
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 4
Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met Asn
1 5 10
<210> 5
<211> 16
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 5
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val Tyr Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu
1 5 10 15
<210> 6
<211> 11
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 6
Lys Ala Ser Glu Asn Val Gly Thr Tyr Val Ser
1 5 10
<210> 7
<211> 16
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 7
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu
1 5 10 15
<210> 8
<211> 7
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 8
Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser
1 5
<210> 9
<211> 7
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 9
Gly Ala Ser Asn Arg Tyr Thr
1 5
<210> 10
<211> 7
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 10
Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser
1 5
<210> 11
<211> 7
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 11
Arg Val Ala Asn Arg Phe Ser
1 5
<210> 12
<211> 7
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 12
Ser Gly Ser Thr Leu Gln Ser
1 5
<210> 13
<211> 7
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 13
Trp Ala Ser Thr Arg Asp Ser
1 5
<210> 14
<211> 7
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 14
Tyr Ala Thr Ser Leu Ala Asp
1 5
<210> 15
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 15
Phe Gln Gly Ser His Val Pro Trp Thr
1 5
<210> 16
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 16
Phe Gln Gly Ser His Val Pro Tyr Thr
1 5
<210> 17
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 17
Gly Gln Ser Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr
1 5
<210> 18
<211> 327
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 18
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Glu Phe Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
115 120 125
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
130 135 140
Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp
145 150 155 160
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe
165 170 175
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
180 185 190
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu
195 200 205
Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
210 215 220
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys
225 230 235 240
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
245 250 255
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
260 265 270
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
275 280 285
Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser
290 295 300
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
305 310 315 320
Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
325
<210> 19
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 19
Leu Gln His Gly Glu Ser Pro Phe Thr
1 5
<210> 20
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 20
Gln Gln His Asn Glu Tyr Pro Tyr Thr
1 5
<210> 21
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 21
Gln Gln Trp Asn Ser Asn Pro Pro Thr
1 5
<210> 22
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 22
Gln Gln Tyr Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr
1 5
<210> 23
<211> 5
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 23
Asp Phe Tyr Ile Asn
1 5
<210> 24
<211> 5
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 24
Asp Thr Tyr Met His
1 5
<210> 25
<211> 5
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 25
Asp Tyr Gly Met Ala
1 5
<210> 26
<211> 5
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 26
Gly Tyr Tyr Met Asn
1 5
<210> 27
<211> 5
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 27
Asn Tyr Trp Ile Ala
1 5
<210> 28
<211> 5
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 28
Asn Tyr Trp Met Asn
1 5
<210> 29
<211> 5
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 29
Asn Tyr Trp Met Gln
1 5
<210> 30
<211> 17
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 30
Asp Phe Tyr Pro Gly Asn Thr Ser Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe Lys
1 5 10 15
Thr
<210> 31
<211> 17
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 31
Glu Ile Asn Pro Ser Thr Gly Gly Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Ala
<210> 32
<211> 17
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 32
Phe Ile Ser Asn Leu Ala Lys Arg Ile Tyr Tyr Val Asp Thr Val Thr
1 5 10 15
Gly
<210> 33
<211> 17
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 33
Met Ile Asp Pro Ser Asp Ser Glu Ser Arg Leu Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Asp
<210> 34
<211> 17
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 34
Arg Ile Asp Pro Ala Lys Asp Asn Thr Lys Tyr Asp Pro Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 35
<211> 17
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 35
Arg Ile Asp Pro Tyr Asp Ser Glu Thr Leu Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Asp
<210> 36
<211> 17
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 36
Trp Ile Tyr Leu Gly Ser Gly Asn Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 37
<211> 327
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 37
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
115 120 125
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
130 135 140
Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp
145 150 155 160
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe
165 170 175
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
180 185 190
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu
195 200 205
Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
210 215 220
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys
225 230 235 240
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
245 250 255
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
260 265 270
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
275 280 285
Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser
290 295 300
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
305 310 315 320
Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
325
<210> 38
<211> 8
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 38
Ala Tyr Arg Tyr Ala Leu Asp Tyr
1 5
<210> 39
<211> 8
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 39
Gly Gly Lys Gly Gly Phe Gly Tyr
1 5
<210> 40
<211> 10
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 40
Gly His Tyr Gly Ser Ser Tyr Val Val Tyr
1 5 10
<210> 41
<211> 8
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 41
Arg Glu Glu Arg Gly Phe Ala Tyr
1 5
<210> 42
<211> 8
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 42
Arg Gly Arg Gly Gly Ser Ser Tyr
1 5
<210> 43
<211> 11
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 43
Arg Gly Ser Pro Met Ile Thr Ser Phe Ala Tyr
1 5 10
<210> 44
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 44
Tyr Asp Gly Tyr Glu Gly Phe Ala Tyr
1 5
<210> 45
<211> 107
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 45
Asp Ile Lys Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Met Tyr Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Ile Lys Ser Tyr
20 25 30
Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Trp Lys Ser Pro Lys Thr Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Ala Thr Ser Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Gln His Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Ser
65 70 75 80
Asp Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Gly Glu Ser Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 46
<211> 107
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 46
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Lys Asn Ile Gly Lys Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Gly Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Asn Glu Tyr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 47
<211> 113
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 47
Asp Ile Val Met Ser Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ala Val Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser
20 25 30
Ser Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Asp Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Val Lys Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu
100 105 110
Lys
<210> 48
<211> 113
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 48
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser
20 25 30
Ser Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Asp Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 49
<211> 112
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 49
Asp Val Leu Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val Tyr Ser
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly
85 90 95
Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 50
<211> 107
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 50
Asp Val Gln Ile Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ala Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Thr Ile Thr Ile Asn Cys Arg Ala Ser Lys Asn Ile Gly Lys Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Phe Gln Glu Lys Pro Gly Lys Thr Asn Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Gly Ser Thr Leu Gln Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Ile Tyr Tyr Cys Gln Gln His Asn Glu Tyr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 51
<211> 117
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 51
Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Arg Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Gly Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Pro Glu Cys Val
35 40 45
Ala Phe Ile Ser Asn Leu Ala Lys Arg Ile Tyr Tyr Val Asp Thr Val
50 55 60
Thr Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Glu Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Glu Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Ala Tyr Arg Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr
100 105 110
Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 52
<211> 119
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 52
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Ile Lys Asp Thr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Ala Lys Asp Asn Thr Lys Tyr Asp Pro Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Lys Ala Thr Ile Thr Leu Asp Thr Ser Ser Asn Ile Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Gly His Tyr Gly Ser Ser Tyr Val Val Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
115
<210> 53
<211> 118
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 53
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Tyr Met Asn Trp Val Lys Gln Ser Pro Glu Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Asn Pro Ser Thr Gly Gly Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Ala Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Lys Ser Leu Thr Phe Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ile Tyr Asp Gly Tyr Glu Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ala
115
<210> 54
<211> 106
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 54
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met
20 25 30
Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser Pro Lys Arg Trp Ile Tyr
35 40 45
Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Asn Ser Asn Pro Pro Thr
85 90 95
Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 55
<211> 117
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 55
Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Arg Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Gly Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Pro Glu Cys Val
35 40 45
Ala Phe Ile Ser Asn Leu Ala Lys Arg Ile Tyr Tyr Val Asp Thr Val
50 55 60
Thr Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Glu Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Glu Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Ala Tyr Arg Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr
100 105 110
Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 56
<211> 107
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 56
Asp Ile Lys Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Met Tyr Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Ile Lys Ser Tyr
20 25 30
Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Trp Lys Ser Pro Lys Thr Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Ala Thr Ser Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Gln His Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Ser
65 70 75 80
Asp Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Gly Glu Ser Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 57
<211> 113
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 57
Asp Ile Val Met Ser Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ala Val Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser
20 25 30
Ser Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Asp Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Val Lys Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu
100 105 110
Lys
<210> 58
<211> 107
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 58
Asn Ile Leu Met Thr Gln Ser Pro Lys Ser Met Ser Met Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Thr Leu Ser Cys Lys Ala Ser Glu Asn Val Gly Thr Tyr
20 25 30
Val Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Asn Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Ala Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala
65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Asp Tyr His Cys Gly Gln Ser Tyr Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 59
<211> 118
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 59
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Tyr Met Asn Trp Val Lys Gln Ser Pro Glu Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Asn Pro Ser Thr Gly Gly Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Ala Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Lys Ser Leu Thr Phe Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ile Tyr Asp Gly Tyr Glu Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ala
115
<210> 60
<211> 120
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 60
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gln Leu Val Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Trp Met Gln Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Met Ile Asp Pro Ser Asp Ser Glu Ser Arg Leu Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Pro Thr Phe Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Gly Ser Pro Met Ile Thr Ser Phe Ala Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
115 120
<210> 61
<211> 117
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 61
Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Trp Ile Ala Trp Val Lys Arg Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asp Phe Tyr Pro Gly Asn Thr Ser Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Thr Lys Ala Thr Leu Thr Ile Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Gly Arg Gly Gly Ser Ser Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr
100 105 110
Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 62
<211> 117
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 62
Gln Ile Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Asp Phe
20 25 30
Tyr Ile Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Trp Ile Tyr Leu Gly Ser Gly Asn Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Glu Glu Arg Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ala
115
<210> 63
<211> 117
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 63
Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Trp Met Asn Trp Phe Lys Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Tyr Asp Ser Glu Thr Leu Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Ile Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Gly Gly Gly Lys Gly Gly Phe Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ala
115
<210> 64
<211> 119
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 64
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Ile Lys Asp Thr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Ala Lys Asp Asn Thr Lys Tyr Asp Pro Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Lys Ala Thr Ile Thr Leu Asp Thr Ser Ser Asn Ile Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Gly His Tyr Gly Ser Ser Tyr Val Val Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
115
<210> 65
<211> 112
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 65
Asp Val Leu Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val Tyr Ser
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly
85 90 95
Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 66
<211> 112
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 66
Asp Val Leu Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ala Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly
85 90 95
Ser His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 67
<211> 112
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 67
Asp Val Leu Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ala Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly
85 90 95
Ser His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 68
<211> 107
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 68
Asp Val Gln Ile Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ala Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Thr Ile Thr Ile Asn Cys Arg Ala Ser Lys Asn Ile Gly Lys Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Phe Gln Glu Lys Pro Gly Lys Thr Asn Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Gly Ser Thr Leu Gln Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Ile Tyr Tyr Cys Gln Gln His Asn Glu Tyr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 69
<211> 107
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 69
Asn Ile Leu Met Thr Gln Ser Pro Lys Ser Met Ser Met Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Thr Leu Ser Cys Lys Ala Ser Glu Asn Val Gly Thr Tyr
20 25 30
Val Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Asn Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Ala Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala
65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Asp Tyr His Cys Gly Gln Ser Tyr Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 70
<211> 117
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 70
Gln Ile Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Asp Phe
20 25 30
Tyr Ile Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Trp Ile Tyr Leu Gly Ser Gly Asn Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Glu Glu Arg Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ala
115
<210> 71
<211> 106
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 71
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met
20 25 30
Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser Pro Lys Arg Trp Ile Tyr
35 40 45
Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Asn Ser Asn Pro Pro Thr
85 90 95
Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 72
<211> 117
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 72
Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Trp Ile Ala Trp Val Lys Arg Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asp Phe Tyr Pro Gly Asn Thr Ser Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Thr Lys Ala Thr Leu Thr Ile Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Gly Arg Gly Gly Ser Ser Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr
100 105 110
Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 73
<211> 117
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 73
Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Trp Met Asn Trp Phe Lys Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Tyr Asp Ser Glu Thr Leu Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Ile Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Gly Gly Gly Lys Gly Gly Phe Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ala
115
<210> 74
<211> 120
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 74
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gln Leu Val Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Trp Met Gln Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Met Ile Asp Pro Ser Asp Ser Glu Ser Arg Leu Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Pro Thr Phe Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Gly Ser Pro Met Ile Thr Ser Phe Ala Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
115 120
<210> 75
<211> 117
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 75
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Phe
20 25 30
Tyr Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Tyr Leu Gly Ser Gly Asn Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Glu Glu Arg Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 76
<211> 117
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 76
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Phe
20 25 30
Tyr Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Tyr Leu Gly Ser Gly Asn Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Val Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Glu Glu Arg Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 77
<211> 120
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 77
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Trp Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Met Ile Asp Pro Ser Asp Ser Glu Ser Arg Leu Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Gly Ser Pro Met Ile Thr Ser Phe Ala Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 78
<211> 120
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 78
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Trp Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Met Ile Asp Pro Ser Asp Ser Glu Ser Arg Leu Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Val Thr Met Thr Val Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Gly Ser Pro Met Ile Thr Ser Phe Ala Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 79
<211> 120
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 79
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Trp Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Met Ile Asp Pro Ser Asp Ser Glu Ser Arg Leu Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Val Thr Met Thr Val Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Gly Ser Pro Met Ile Thr Ser Phe Ala Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 80
<211> 117
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 80
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Phe
20 25 30
Tyr Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Tyr Leu Gly Ser Gly Asn Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Val Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Glu Glu Arg Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 81
<211> 293
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 81
Met Trp Pro Leu Val Ala Ala Leu Leu Leu Gly Ser Ala Cys Cys Gly
1 5 10 15
Ser Ala Gln Leu Leu Phe Asn Lys Thr Lys Ser Val Glu Phe Thr Phe
20 25 30
Cys Asn Asp Thr Val Val Ile Pro Cys Phe Val Thr Asn Met Glu Ala
35 40 45
Gln Asn Thr Thr Glu Val Tyr Val Lys Trp Lys Phe Lys Gly Arg Asp
50 55 60
Ile Tyr Thr Phe Asp Gly Ala Leu Asn Lys Ser Thr Val Pro Thr Asp
65 70 75 80
Phe Ser Ser Ala Lys Ile Glu Val Ser Gln Leu Leu Lys Gly Asp Ala
85 90 95
Ser Leu Lys Met Asp Lys Ser Asp Ala Val Ser His Thr Gly Asn Tyr
100 105 110
Thr Cys Glu Val Thr Glu Leu Thr Arg Glu Gly Glu Thr Ile Ile Glu
115 120 125
Leu Lys Tyr Arg Val Val Ser Trp Phe Ser Pro Asn Glu Asn Ile Leu
130 135 140
Ile Val Ile Phe Pro Ile Phe Ala Ile Leu Leu Phe Trp Gly Gln Phe
145 150 155 160
Gly Ile Lys Thr Leu Lys Tyr Arg Ser Gly Gly Met Asp Glu Lys Thr
165 170 175
Ile Ala Leu Leu Val Ala Gly Leu Val Ile Thr Val Ile Val Ile Val
180 185 190
Gly Ala Ile Leu Phe Val Pro Gly Glu Tyr Ser Leu Lys Asn Ala Thr
195 200 205
Gly Leu Gly Leu Ile Val Thr Ser Thr Gly Ile Leu Ile Leu Leu His
210 215 220
Tyr Tyr Val Phe Ser Thr Ala Ile Gly Leu Thr Ser Phe Val Ile Ala
225 230 235 240
Ile Leu Val Ile Gln Val Ile Ala Tyr Ile Leu Ala Val Val Gly Leu
245 250 255
Ser Leu Cys Ile Ala Ala Cys Ile Pro Met His Gly Pro Leu Leu Ile
260 265 270
Ser Gly Leu Ser Ile Leu Ala Leu Ala Gln Leu Leu Gly Leu Val Tyr
275 280 285
Met Lys Phe Val Glu
290
<210> 82
<211> 324
<212> Белок
<213> Mus musculus
<400> 82
Met Trp Pro Leu Ala Ala Ala Leu Leu Leu Gly Ser Cys Cys Cys Gly
1 5 10 15
Ser Ala Gln Leu Leu Phe Ser Asn Val Asn Ser Ile Glu Phe Thr Ser
20 25 30
Cys Asn Glu Thr Val Val Ile Pro Cys Ile Val Arg Asn Val Glu Ala
35 40 45
Gln Ser Thr Glu Glu Met Phe Val Lys Trp Lys Leu Asn Lys Ser Tyr
50 55 60
Ile Phe Ile Tyr Asp Gly Asn Lys Asn Ser Thr Thr Thr Asp Gln Asn
65 70 75 80
Phe Thr Ser Ala Lys Ile Ser Val Ser Asp Leu Ile Asn Gly Ile Ala
85 90 95
Ser Leu Lys Met Asp Lys Arg Asp Ala Met Val Gly Asn Tyr Thr Cys
100 105 110
Glu Val Thr Glu Leu Ser Arg Glu Gly Lys Thr Val Ile Glu Leu Lys
115 120 125
Asn Arg Thr Ala Phe Asn Thr Asp Gln Gly Ser Ala Cys Ser Tyr Glu
130 135 140
Glu Glu Lys Gly Gly Cys Lys Leu Val Ser Trp Phe Ser Pro Asn Glu
145 150 155 160
Lys Ile Leu Ile Val Ile Phe Pro Ile Leu Ala Ile Leu Leu Phe Trp
165 170 175
Gly Lys Phe Gly Ile Leu Thr Leu Lys Tyr Lys Ser Ser His Thr Asn
180 185 190
Lys Arg Ile Ile Leu Leu Leu Val Ala Gly Leu Val Leu Thr Val Ile
195 200 205
Val Val Val Gly Ala Ile Leu Leu Ile Pro Gly Glu Lys Pro Val Lys
210 215 220
Asn Ala Ser Gly Leu Gly Leu Ile Val Ile Ser Thr Gly Ile Leu Ile
225 230 235 240
Leu Leu Gln Tyr Asn Val Phe Met Thr Ala Phe Gly Met Thr Ser Phe
245 250 255
Thr Ile Ala Ile Leu Ile Thr Gln Val Leu Gly Tyr Val Leu Ala Leu
260 265 270
Val Gly Leu Cys Leu Cys Ile Met Ala Cys Glu Pro Val His Gly Pro
275 280 285
Leu Leu Ile Ser Gly Leu Gly Ile Ile Ala Leu Ala Glu Leu Leu Gly
290 295 300
Leu Val Tyr Met Lys Phe Val Ala Ser Asn Gln Arg Thr Ile Gln Pro
305 310 315 320
Pro Arg Asn Arg
<210> 83
<211> 305
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 83
Met Trp Pro Leu Val Ala Ala Leu Leu Leu Gly Ser Ala Cys Cys Gly
1 5 10 15
Ser Ala Gln Leu Leu Phe Asn Lys Thr Lys Ser Val Glu Phe Thr Phe
20 25 30
Cys Asn Asp Thr Val Val Ile Pro Cys Phe Val Thr Asn Met Glu Ala
35 40 45
Gln Asn Thr Thr Glu Val Tyr Val Lys Trp Lys Phe Lys Gly Arg Asp
50 55 60
Ile Tyr Thr Phe Asp Gly Ala Leu Asn Lys Ser Thr Val Pro Thr Asp
65 70 75 80
Phe Ser Ser Ala Lys Ile Glu Val Ser Gln Leu Leu Lys Gly Asp Ala
85 90 95
Ser Leu Lys Met Asp Lys Ser Asp Ala Val Ser His Thr Gly Asn Tyr
100 105 110
Thr Cys Glu Val Thr Glu Leu Thr Arg Glu Gly Glu Thr Ile Ile Glu
115 120 125
Leu Lys Tyr Arg Val Val Ser Trp Phe Ser Pro Asn Glu Asn Ile Leu
130 135 140
Ile Val Ile Phe Pro Ile Phe Ala Ile Leu Leu Phe Trp Gly Gln Phe
145 150 155 160
Gly Ile Lys Thr Leu Lys Tyr Arg Ser Gly Gly Met Asp Glu Lys Thr
165 170 175
Ile Ala Leu Leu Val Ala Gly Leu Val Ile Thr Val Ile Val Ile Val
180 185 190
Gly Ala Ile Leu Phe Val Pro Gly Glu Tyr Ser Leu Lys Asn Ala Thr
195 200 205
Gly Leu Gly Leu Ile Val Thr Ser Thr Gly Ile Leu Ile Leu Leu His
210 215 220
Tyr Tyr Val Phe Ser Thr Ala Ile Gly Leu Thr Ser Phe Val Ile Ala
225 230 235 240
Ile Leu Val Ile Gln Val Ile Ala Tyr Ile Leu Ala Val Val Gly Leu
245 250 255
Ser Leu Cys Ile Ala Ala Cys Ile Pro Met His Gly Pro Leu Leu Ile
260 265 270
Ser Gly Leu Ser Ile Leu Ala Leu Ala Gln Leu Leu Gly Leu Val Tyr
275 280 285
Met Lys Phe Val Ala Ser Asn Gln Lys Thr Ile Gln Pro Pro Arg Asn
290 295 300
Asn
305
<210> 84
<211> 303
<212> Белок
<213> Mus musculus
<400> 84
Met Trp Pro Leu Ala Ala Ala Leu Leu Leu Gly Ser Cys Cys Cys Gly
1 5 10 15
Ser Ala Gln Leu Leu Phe Ser Asn Val Asn Ser Ile Glu Phe Thr Ser
20 25 30
Cys Asn Glu Thr Val Val Ile Pro Cys Ile Val Arg Asn Val Glu Ala
35 40 45
Gln Ser Thr Glu Glu Met Phe Val Lys Trp Lys Leu Asn Lys Ser Tyr
50 55 60
Ile Phe Ile Tyr Asp Gly Asn Lys Asn Ser Thr Thr Thr Asp Gln Asn
65 70 75 80
Phe Thr Ser Ala Lys Ile Ser Val Ser Asp Leu Ile Asn Gly Ile Ala
85 90 95
Ser Leu Lys Met Asp Lys Arg Asp Ala Met Val Gly Asn Tyr Thr Cys
100 105 110
Glu Val Thr Glu Leu Ser Arg Glu Gly Lys Thr Val Ile Glu Leu Lys
115 120 125
Asn Arg Thr Val Ser Trp Phe Ser Pro Asn Glu Lys Ile Leu Ile Val
130 135 140
Ile Phe Pro Ile Leu Ala Ile Leu Leu Phe Trp Gly Lys Phe Gly Ile
145 150 155 160
Leu Thr Leu Lys Tyr Lys Ser Ser His Thr Asn Lys Arg Ile Ile Leu
165 170 175
Leu Leu Val Ala Gly Leu Val Leu Thr Val Ile Val Val Val Gly Ala
180 185 190
Ile Leu Leu Ile Pro Gly Glu Lys Pro Val Lys Asn Ala Ser Gly Leu
195 200 205
Gly Leu Ile Val Val Ser Thr Gly Ile Leu Ile Leu Leu Gln Tyr Asn
210 215 220
Val Phe Met Thr Ala Phe Gly Met Thr Ser Phe Thr Ile Ala Ile Leu
225 230 235 240
Ile Thr Gln Val Leu Gly Tyr Val Leu Ala Leu Val Gly Leu Cys Leu
245 250 255
Cys Ile Met Ala Cys Glu Pro Val His Gly Pro Leu Leu Ile Ser Gly
260 265 270
Leu Gly Ile Ile Ala Leu Ala Glu Leu Leu Gly Leu Val Tyr Met Lys
275 280 285
Phe Val Ala Ser Asn Gln Arg Thr Ile Gln Pro Pro Arg Asn Arg
290 295 300
<210> 85
<211> 107
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 85
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val
35 40 45
Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Ser Leu Lys Ile Lys Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Gly Ser Tyr Tyr Cys Gln His His Tyr Gly Thr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 86
<211> 115
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 86
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Thr Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ile Ser Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asn Ile Asn Pro Ser Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Thr Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg Asp Tyr Tyr Gly Asn Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 87
<211> 107
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 87
Asp Ile Lys Met Asn Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Thr Ile Thr Ile Thr Cys His Ala Ser Gln Asn Ile Asn Val Trp
20 25 30
Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Asn Ile Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Lys Ala Ser Asn Leu His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Gly Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Gln Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 88
<211> 118
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 88
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Pro Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Trp Ile Tyr Leu Gly Ser Gly Asn Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Leu Ser Thr Leu Ile Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Tyr Asp Tyr Asp Leu Tyr Leu Asp Ser Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 89
<211> 107
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 89
Asp Ile Gln Met Met Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val
35 40 45
Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Ser Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Gly Asn Tyr Tyr Cys Gln His His Tyr Gly Thr Pro Leu
85 90 95
Ala Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 90
<211> 115
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 90
Glu Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ala Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asn Ile Asn Pro Ser Ser Gly Asp Ser His Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Ser Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Thr Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Tyr Tyr Gly Ala Tyr Trp Gly His Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ala
115
<210> 91
<211> 107
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 91
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Val Tyr Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val
35 40 45
Tyr Lys Ala Asn Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Ser Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Gly Thr Tyr Tyr Cys Gln His His Tyr Gly Thr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 92
<211> 115
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 92
Glu Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Thr Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asn Ile Asn Pro Ser Ser Gly Asp Ser His Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Ser Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Tyr Tyr Gly Ala Tyr Trp Gly His Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ala
115
<210> 93
<211> 108
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 93
Asp Ile Gln Met Ile Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val
35 40 45
Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Ser Leu Arg Ile Asn Thr Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Leu Gly Thr Tyr Tyr Cys Gln His His Tyr Gly Ala Pro Leu
85 90 95
Ser Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 94
<211> 115
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 94
Glu Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asn Ile Asn Pro Ser Ser Gly Asp Ser His Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Ser Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Tyr Tyr Gly Ala Tyr Trp Gly His Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ala
115
<210> 95
<211> 107
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 95
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val
35 40 45
Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Ser Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Gly Ser Tyr Tyr Cys Gln His His Tyr Gly Thr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 96
<211> 115
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 96
Glu Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Thr Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asn Ile Asn Pro Ser Ser Gly Asp Ala His Tyr Ser Glu Glu Phe
50 55 60
Lys Ser Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Tyr Tyr Gly Ala Tyr Trp Gly His Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ala
115
<210> 97
<211> 107
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 97
Asp Ile Gln Ile Asn Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Thr Ile Thr Ile Thr Cys His Ala Ser Gln Asn Ile Asn Val Trp
20 25 30
Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Asn Ile Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Lys Ala Ser Asn Leu His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Gly Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Gln Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 98
<211> 118
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 98
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
His Ile His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Asn Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Met Ala Ile Leu Thr Ala Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Tyr Asp Tyr Asp Leu Tyr Leu His Ser Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 99
<211> 107
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 99
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val
35 40 45
Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Ser Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Gly Ser Tyr Tyr Cys Gln His His Tyr Gly Thr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 100
<211> 115
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 100
Glu Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Thr Glu Val Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Thr Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asn Ile Asn Pro Ser Ser Gly Asp Ser His Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Ser Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Tyr Tyr Gly Ala Tyr Trp Gly His Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ala
115
<210> 101
<211> 106
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 101
Arg His Cys Phe Asn Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser Pro Lys Arg Trp Ile Tyr
35 40 45
Asp Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Val Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Arg Met Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Asn Tyr Pro Phe Thr
85 90 95
Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 102
<211> 119
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 102
Arg Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Ala Tyr Ala Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Leu Ile Glu Trp Val Lys Lys Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Val Ile Asn Pro Gly Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Asp Gly Tyr Gly Ser Leu Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
115
<210> 103
<211> 107
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 103
Asp Ile Gln Met Ile Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val
35 40 45
Tyr Gly Ala Lys Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Ser Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Gly Ser Tyr Tyr Cys Gln His His Tyr Gly Ile Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 104
<211> 115
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 104
Glu Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Thr Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ile Ser Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asn Ile Asn Pro Ser Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Thr Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg Asp Tyr Tyr Gly Asn Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 105
<211> 107
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 105
Asp Ile Gln Met Ile Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Leu Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val
35 40 45
Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr His Phe Ser Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Gly Thr Tyr Tyr Cys Gln His His Tyr Gly Asn Ser Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 106
<211> 115
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 106
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Thr Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Pro Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asn Ile Asn Pro Ser Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Thr Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Tyr Tyr Gly Asn Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 107
<211> 107
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 107
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val
35 40 45
Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Ser Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Gly Ser Tyr Tyr Cys Gln His His Tyr Gly Thr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 108
<211> 115
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 108
Glu Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Thr Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Ser Phe Val Thr Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asn Ile Asn Pro Ser Ser Gly Asp Ser His Tyr Ser Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Ser Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Lys Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg Asp Tyr Tyr Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ala
115
<210> 109
<211> 109
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 109
Asp Ala Val Val Thr Gln Glu Ser Ala Leu Thr Thr Ser Pro Gly Glu
1 5 10 15
Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Asn
20 25 30
Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Thr Gly
35 40 45
Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Leu Ile Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala
65 70 75 80
Gln Thr Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn
85 90 95
His Leu Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105
<210> 110
<211> 125
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 110
Pro Arg Gly Lys Val Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser
1 5 10 15
Gln Ser Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr Ser
20 25 30
Gly Tyr Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu
35 40 45
Trp Met Gly Tyr Ile Asn Tyr Asp Gly Ser Asn Asn Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Asn Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80
Phe Leu Lys Leu Asn Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Gly Tyr Tyr Tyr Gly Ser Ser Tyr Gly Tyr Trp Tyr Phe
100 105 110
Asp Val Trp Gly Thr Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 111
<211> 107
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 111
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val
35 40 45
Tyr Ala Ala Thr Asn Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Arg Ser Gly Thr Gln Phe Ser Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Gly Ser Tyr Tyr Cys Gln His His Tyr Gly Thr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 112
<211> 115
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 112
Glu Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Thr Glu Leu Ala Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ile Ser Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asn Ile Asn Pro Ser Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Ser Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg Asp Tyr Tyr Gly Ser Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 113
<211> 107
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 113
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val
35 40 45
Tyr Lys Ala Lys Thr Leu Val Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Ser Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Gly Ser Tyr Tyr Cys Gln His His Tyr Gly Thr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 114
<211> 115
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 114
Arg Gly Pro Thr Ala Ala Thr Trp Thr Glu Leu Val Lys Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ile Ser Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asn Ile Asn Pro Ser Ser Gly Asp Thr Ser Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Ser Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Tyr Tyr Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr
100 105 110
Val Ser Ala
115
<210> 115
<211> 107
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 115
Asp Ile Gln Met Met Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val
35 40 45
Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Ser Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Gly Asn Tyr Tyr Cys Gln His His Tyr Gly Thr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 116
<211> 115
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 116
Glu Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Thr Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asn Ile Asn Pro Ser Ser Gly Asp Ser His Tyr Ser Glu Lys Phe
50 55 60
Arg Ser Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Tyr Tyr Gly Ala Tyr Trp Gly His Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ala
115
<210> 117
<211> 109
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 117
Asp Ala Val Val Thr Gln Glu Ser Ala Leu Thr Thr Ser Pro Gly Glu
1 5 10 15
Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Ser Thr Ser
20 25 30
Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Thr Gly
35 40 45
Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Leu Ile Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala
65 70 75 80
Gln Thr Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn
85 90 95
His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105
<210> 118
<211> 114
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 118
Glu Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Thr Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asn Val Val Pro Asn Asn Asp Gly Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Arg Asn Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Val Thr Tyr Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val
100 105 110
Ser Ala
<210> 119
<211> 107
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 119
Asp Ile Gln Met Met Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val
35 40 45
Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Ser Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Gly Ser Tyr Tyr Cys Gln His His Tyr Gly Thr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 120
<211> 115
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 120
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Thr Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asn Ile Asn Pro Ser Ser Gly Ser Ala His Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Ser Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Tyr Tyr Gly Ala Tyr Trp Gly His Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ala
115
<210> 121
<211> 107
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 121
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val
35 40 45
Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr His Phe Ser Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Gly Ser Tyr Tyr Cys Gln His His Tyr Gly Thr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 122
<211> 115
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 122
Glu Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ile Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asn Ile Asn Pro Ser Ser Gly Ser Ser Asn Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Asn Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Tyr Tyr Gly Ala Tyr Trp Gly His Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ala
115
<210> 123
<211> 107
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 123
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val
35 40 45
Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Ser Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Gly Asn Tyr Tyr Cys Gln His His Tyr Gly Thr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 124
<211> 115
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 124
Glu Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Thr Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Ile Thr Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asn Ile Asn Pro Ser Ser Gly Asp Ser His Tyr Ser Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Ser Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg Asp Tyr Tyr Gly Ala Tyr Trp Gly His Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ala
115
<210> 125
<211> 107
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 125
Asp Ile Lys Ile Asn Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val
35 40 45
Tyr Lys Ala Lys Thr Leu Val Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Ser Leu Lys Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Gly Ser Tyr Tyr Cys Gln His His Tyr Gly Thr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 126
<211> 115
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 126
Glu Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ile Ser Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Arg Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asn Ile Asn Pro Ser Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Thr Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg Asp Tyr Tyr Gly Asn Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 127
<211> 107
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 127
Gly Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val
35 40 45
Tyr Lys Ala Lys Thr Leu Val Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Ser Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Gly Ser Tyr Tyr Cys Gln His His Tyr Gly Thr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 128
<211> 115
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 128
Glu Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Thr Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ile Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asn Ile Asn Pro Ser Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Ser Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met His Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Tyr Tyr Gly Asn Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 129
<211> 107
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 129
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Asp Asn Ile Tyr Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val
35 40 45
Tyr Asn Ala Lys Thr Ser Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Ser Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Gly Ser Tyr Tyr Cys Gln His His Tyr Gly Thr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 130
<211> 115
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 130
Glu Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Thr Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Thr Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asn Ile Asn Pro Ser Ser Gly Asp Ser His Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Ser Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Tyr Tyr Gly Ala Tyr Trp Gly His Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ala
115
<210> 131
<211> 107
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 131
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val
35 40 45
Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Ser Leu Lys Ile Asn Asn Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Gly Ser Tyr Tyr Cys Gln His His Tyr Gly Thr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Met Lys
100 105
<210> 132
<211> 115
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 132
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu His Val Arg Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Ile Thr Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asn Ile Asn Pro Ser Ser Gly Asp Ser His Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Ser Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Tyr Tyr Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ala
115
<210> 133
<211> 107
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 133
Asp Ile Lys Met Asn Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Thr Ile Thr Ile Thr Cys His Ala Ser Gln Asn Ile Asn Val Trp
20 25 30
Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Asn Ile Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Lys Ala Ser Asn Leu His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Gly Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Gln Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 134
<211> 118
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 134
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Asp Ser Phe Thr Ser Asp
20 25 30
His Ile His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Asn Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Arg Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Thr Tyr Asp Tyr Asp Leu Tyr Phe Asp Asn Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 135
<211> 111
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 135
Ser Thr Leu Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr
20 25 30
Gly Asn Ser Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ile Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu His Ser Arg
85 90 95
Glu Leu Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105 110
<210> 136
<211> 119
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 136
Glu Val Lys Leu Met Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Tyr Ile Ser Ser Gly Ser Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Thr Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Phe
65 70 75 80
Leu Gln Met Thr Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Pro Asp Asp Gly Tyr Tyr Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
115
<210> 137
<211> 107
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 137
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Val Tyr Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val
35 40 45
Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Ser Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Gly Ser Tyr Tyr Cys Gln His His Tyr Gly Thr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 138
<211> 115
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 138
Glu Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Thr Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Thr Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asn Ile Asn Pro Ser Ser Gly Asp Ser His Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Ser Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met His Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Tyr Tyr Gly Ala Tyr Trp Gly His Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ala
115
<210> 139
<211> 107
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 139
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val
35 40 45
Phe Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr His Phe Ser Leu Lys Ile Asn Asn Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Gly Thr Tyr Tyr Cys Gln His His Tyr Gly Thr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 140
<211> 115
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 140
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Ile Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asn Ile Asn Pro Ser Ser Gly Gly Asn Thr Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Asn Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Arg Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Asp Tyr Tyr Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ala
115
<210> 141
<211> 107
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 141
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val
35 40 45
Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Ser Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Gly Ser Tyr Tyr Cys Gln His His Tyr Gly Thr Pro Leu
85 90 95
Ala Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 142
<211> 115
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 142
Glu Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Thr Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Ile Thr Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asn Ile Asn Pro Ser Gly Gly Asp Ser His Tyr Ser Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Ser Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg Asp Tyr Tyr Gly Ala Tyr Trp Gly His Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ala
115
<210> 143
<211> 107
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 143
Asp Ile Gln Met Ile Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val
35 40 45
Phe Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Ser Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Gly Ser Tyr Tyr Cys Gln His His Tyr Gly Thr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 144
<211> 115
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 144
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Ile Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asn Ile Asn Pro Ser Ser Gly Gly Ser Ser Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Ser Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Asp Tyr Tyr Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ala
115
<210> 145
<211> 106
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 145
Asp Ile Val Leu Ser Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser Pro Lys Arg Trp Ile Tyr
35 40 45
Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Leu Ser Ser Met Ala Ala Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Thr Tyr Ser Cys Gln Gln Trp Ser Gly Asn Ser Pro Thr
85 90 95
Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 146
<211> 124
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 146
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Lys Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Arg Ser Lys Ser Ser Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Gln Ser Ile
65 70 75 80
Val Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Met Tyr
85 90 95
Tyr Cys Val Arg Ala Trp Asp Tyr Gly Ser Ser Trp Asp Tyr Phe Asp
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 147
<211> 107
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 147
Asp Ile Gln Met Met Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val
35 40 45
Tyr Asn Ala Gln Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Ser Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Ile Gly Ser Tyr Tyr Cys Gln His His Tyr Gly Thr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 148
<211> 115
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 148
Arg Gly Pro Thr Gln Gln Pro Gly Thr Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Arg Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asn Ile Asn Pro Ser Ser Gly Asp Ser His Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Ser Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Tyr Tyr Gly Ala Tyr Trp Gly His Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ala
115
<210> 149
<211> 5
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 149
Gly Tyr Gly Met Ser
1 5
<210> 150
<211> 17
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 150
Thr Ile Thr Ser Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 151
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 151
Ser Leu Ala Gly Asn Ala Met Asp Tyr
1 5
<210> 152
<211> 11
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 152
Arg Ala Ser Gln Thr Ile Ser Asp Tyr Leu His
1 5 10
<210> 153
<211> 7
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 153
Phe Ala Ser Gln Ser Ile Ser
1 5
<210> 154
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 154
Gln Asn Gly His Gly Phe Pro Arg Thr
1 5
<210> 155
<211> 5
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 155
Asn Tyr Asn Met His
1 5
<210> 156
<211> 17
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 156
Thr Ile Tyr Pro Gly Asn Asp Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Asp
<210> 157
<211> 8
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 157
Gly Gly Tyr Arg Ala Met Asp Tyr
1 5
<210> 158
<211> 16
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 158
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val Tyr Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Gly
1 5 10 15
<210> 159
<211> 7
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 159
Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser
1 5
<210> 160
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 160
Phe Gln Gly Ser His Val Pro Tyr Thr
1 5
<210> 161
<211> 139
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 161
Met Trp Pro Leu Val Ala Ala Leu Leu Leu Gly Ser Ala Cys Cys Gly
1 5 10 15
Ser Ala Gln Leu Leu Phe Asn Lys Thr Lys Ser Val Glu Phe Thr Phe
20 25 30
Cys Asn Asp Thr Val Val Ile Pro Cys Phe Val Thr Asn Met Glu Ala
35 40 45
Gln Asn Thr Thr Glu Val Tyr Val Lys Trp Lys Phe Lys Gly Arg Asp
50 55 60
Ile Tyr Thr Phe Asp Gly Ala Leu Asn Lys Ser Thr Val Pro Thr Asp
65 70 75 80
Phe Ser Ser Ala Lys Ile Glu Val Ser Gln Leu Leu Lys Gly Asp Ala
85 90 95
Ser Leu Lys Met Asp Lys Ser Asp Ala Val Ser His Thr Gly Asn Tyr
100 105 110
Thr Cys Glu Val Thr Glu Leu Thr Arg Glu Gly Glu Thr Ile Ile Glu
115 120 125
Leu Lys Tyr Arg Val Val Ser Trp Phe Ser Pro
130 135
<210> 162
<211> 6
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 162
Asp Asn Ile Tyr Ser Tyr
1 5
<210> 163
<211> 6
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 163
Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr
1 5
<210> 164
<211> 6
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 164
Glu Asn Val Tyr Ser Tyr
1 5
<210> 165
<211> 10
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 165
Glu Ser Val Asp Ser Tyr Gly Asn Ser Phe
1 5 10
<210> 166
<211> 6
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 166
Gln Asn Ile Asn Val Trp
1 5
<210> 167
<211> 5
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 167
Ser Ser Val Ser Tyr
1 5
<210> 168
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 168
Thr Gly Ala Val Ser Thr Ser Asn Tyr
1 5
<210> 169
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 169
Thr Gly Ala Val Thr Thr Asn Asn Tyr
1 5
<210> 170
<211> 3
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 170
Ala Ala Thr
1
<210> 171
<211> 3
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 171
Asp Thr Ser
1
<210> 172
<211> 3
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 172
Gly Ala Lys
1
<210> 173
<211> 3
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 173
Gly Thr Asn
1
<210> 174
<211> 3
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 174
Lys Ala Lys
1
<210> 175
<211> 3
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 175
Lys Ala Asn
1
<210> 176
<211> 3
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 176
Lys Ala Ser
1
<210> 177
<211> 3
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 177
Leu Ala Ser
1
<210> 178
<211> 3
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 178
Asn Ala Lys
1
<210> 179
<211> 3
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 179
Asn Ala Gln
1
<210> 180
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 180
Ala Leu Trp Tyr Ser Asn His Leu Val
1 5
<210> 181
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 181
Ala Leu Trp Tyr Ser Asn His Trp Val
1 5
<210> 182
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 182
Leu His Ser Arg Glu Leu Pro Phe Thr
1 5
<210> 183
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 183
Gln His His Tyr Gly Ala Pro Leu Ser
1 5
<210> 184
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 184
Gln His His Tyr Gly Ile Pro Leu Thr
1 5
<210> 185
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 185
Gln His His Tyr Gly Asn Ser Leu Thr
1 5
<210> 186
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 186
Gln His His Tyr Gly Thr Pro Leu Ala
1 5
<210> 187
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 187
Gln His His Tyr Gly Thr Pro Leu Thr
1 5
<210> 188
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 188
Gln Gln Gly Gln Ser Tyr Pro Leu Thr
1 5
<210> 189
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 189
Gln Gln Trp Ser Gly Asn Ser Pro Thr
1 5
<210> 190
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 190
Gln Gln Trp Ser Asn Tyr Pro Phe Thr
1 5
<210> 191
<211> 8
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 191
Ala Tyr Ala Phe Thr Asn Tyr Leu
1 5
<210> 192
<211> 8
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 192
Gly Asp Ser Phe Thr Ser Asp His
1 5
<210> 193
<211> 8
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 193
Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr Ala
1 5
<210> 194
<211> 8
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 194
Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Gly
1 5
<210> 195
<211> 8
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 195
Gly Phe Thr Phe Thr Asn Tyr Tyr
1 5
<210> 196
<211> 8
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 196
Gly Tyr Pro Phe Thr Ser Tyr Trp
1 5
<210> 197
<211> 8
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 197
Gly Tyr Ser Phe Ile Ser Tyr Trp
1 5
<210> 198
<211> 8
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 198
Gly Tyr Ser Phe Ile Thr Tyr Trp
1 5
<210> 199
<211> 8
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 199
Gly Tyr Ser Phe Thr Ala Tyr Trp
1 5
<210> 200
<211> 8
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 200
Gly Tyr Ser Phe Thr Asn Tyr His
1 5
<210> 201
<211> 8
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 201
Gly Tyr Ser Phe Thr Thr Tyr Trp
1 5
<210> 202
<211> 8
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 202
Gly Tyr Ser Phe Val Thr Tyr Trp
1 5
<210> 203
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 203
Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Gly Tyr Tyr
1 5
<210> 204
<211> 8
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 204
Gly Tyr Thr Phe Ile Ser Tyr Trp
1 5
<210> 205
<211> 8
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 205
Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Trp
1 5
<210> 206
<211> 8
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 206
Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr Trp
1 5
<210> 207
<211> 8
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 207
Ile Asn Pro Gly Ser Gly Gly Thr
1 5
<210> 208
<211> 8
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 208
Ile Asn Pro Ser Gly Gly Asp Ser
1 5
<210> 209
<211> 8
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 209
Ile Asn Pro Ser Ser Gly Asp Ala
1 5
<210> 210
<211> 8
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 210
Ile Asn Pro Ser Ser Gly Asp Ser
1 5
<210> 211
<211> 8
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 211
Ile Asn Pro Ser Ser Gly Asp Thr
1 5
<210> 212
<211> 8
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 212
Ile Asn Pro Ser Ser Gly Gly Asn
1 5
<210> 213
<211> 8
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 213
Ile Asn Pro Ser Ser Gly Gly Ser
1 5
<210> 214
<211> 8
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 214
Ile Asn Pro Ser Ser Gly Gly Thr
1 5
<210> 215
<211> 8
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 215
Ile Asn Pro Ser Ser Gly Asn Thr
1 5
<210> 216
<211> 8
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 216
Ile Asn Pro Ser Ser Gly Ser Ala
1 5
<210> 217
<211> 8
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 217
Ile Asn Pro Ser Ser Gly Ser Ser
1 5
<210> 218
<211> 7
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 218
Ile Asn Tyr Asp Gly Ser Asn
1 5
<210> 219
<211> 10
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 219
Ile Arg Ser Lys Ser Ser Asn Tyr Ala Thr
1 5 10
<210> 220
<211> 8
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 220
Ile Ser Ser Gly Ser Ser Thr Ile
1 5
<210> 221
<211> 8
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 221
Ile Tyr Leu Gly Ser Gly Asn Thr
1 5
<210> 222
<211> 8
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 222
Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Asn Thr
1 5
<210> 223
<211> 8
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 223
Val Val Pro Asn Asn Asp Gly Thr
1 5
<210> 224
<211> 8
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 224
Ala Arg Asp Tyr Tyr Gly Ala Tyr
1 5
<210> 225
<211> 8
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 225
Ala Arg Asp Tyr Tyr Gly Asn Tyr
1 5
<210> 226
<211> 12
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 226
Ala Arg Gly Asp Gly Tyr Gly Ser Leu Phe Ala Tyr
1 5 10
<210> 227
<211> 17
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 227
Ala Arg Gly Tyr Tyr Tyr Gly Ser Ser Tyr Gly Tyr Trp Tyr Phe Asp
1 5 10 15
Val
<210> 228
<211> 12
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 228
Ala Arg Pro Asp Asp Gly Tyr Tyr Gly Phe Ala Tyr
1 5 10
<210> 229
<211> 11
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 229
Ala Arg Tyr Asp Tyr Asp Leu Tyr Leu Asp Ser
1 5 10
<210> 230
<211> 11
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 230
Ala Arg Tyr Asp Tyr Asp Leu Tyr Leu His Ser
1 5 10
<210> 231
<211> 7
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 231
Ala Val Thr Tyr Phe Ala Tyr
1 5
<210> 232
<211> 8
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 232
Thr Arg Asp Tyr Tyr Gly Ala Tyr
1 5
<210> 233
<211> 15
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 233
Val Arg Ala Trp Asp Tyr Gly Ser Ser Trp Asp Tyr Phe Asp Tyr
1 5 10 15
<210> 234
<211> 8
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 234
Val Arg Asp Tyr Tyr Gly Ala Tyr
1 5
<210> 235
<211> 8
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 235
Val Arg Asp Tyr Tyr Gly Asn Tyr
1 5
<210> 236
<211> 8
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 236
Val Arg Asp Tyr Tyr Gly Ser Tyr
1 5
<210> 237
<211> 11
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 237
Val Thr Tyr Asp Tyr Asp Leu Tyr Phe Asp Asn
1 5 10
<210> 238
<211> 107
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 238
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val
35 40 45
Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Ser Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Gly Ser Tyr Tyr Cys Gln His His Tyr Gly Thr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 239
<211> 115
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 239
Glu Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Thr Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Thr Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asn Ile Asn Pro Ser Ser Gly Asp Ser His Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Ser Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Tyr Tyr Gly Ala Tyr Trp Gly His Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ala
115
<210> 240
<211> 118
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 240
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Gly Tyr
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Asp Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Thr Ser Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Ile Asp Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Leu Ala Gly Asn Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Ser Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 241
<211> 107
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 241
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Thr Ile Ser Asp Tyr
20 25 30
Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Lys Phe Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Ser Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Gly Phe Pro Arg
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 242
<211> 116
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 242
Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Met Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Asn Met His Trp Val Lys Gln Thr Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asn Asp Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Ala Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Tyr Arg Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Thr Ser Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 243
<211> 112
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 243
Asp Val Leu Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val Tyr Ser
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Gly Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr His Cys Phe Gln Gly
85 90 95
Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 244
<211> 118
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 244
Gln Met Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Thr Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr
20 25 30
Tyr Leu His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Ala Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asp Pro Asp Gln Gly Asp Thr Glu Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Asp Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Arg Ser Met Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Asn Ala Ala Tyr Gly Ser Ser Ser Tyr Pro Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val
115
<210> 245
<211> 107
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 245
Asn Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ala Met Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Ile His Arg Tyr
20 25 30
Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys His Leu Ile
35 40 45
Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Val Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 246
<211> 117
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 246
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Ser
20 25 30
Tyr Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Tyr Thr Gly Ser Gly Asn Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Glu Glu Arg Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 247
<211> 117
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 247
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Ile
20 25 30
Tyr Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Tyr Leu Gly Ser Gly Asn Val Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Glu Asp Arg Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 248
<211> 117
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 248
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Asn
20 25 30
Tyr Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Tyr Leu Gly Ser Gly Asn Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Glu Glu Arg Gly Phe Ala Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 249
<211> 117
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 249
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Phe
20 25 30
Tyr Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Tyr Leu Gly Ser Gly Asn Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Glu Glu Arg Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 250
<211> 117
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 250
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp His
20 25 30
Tyr Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Tyr Leu Gly Ser Gly Asn Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Glu Asp Arg Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 251
<211> 117
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 251
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Asn
20 25 30
Tyr Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Val Tyr Leu Gly Ser Gly Asn Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Glu Glu Arg Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 252
<211> 117
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 252
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Leu
20 25 30
Tyr Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Tyr Leu Gly Ser Gly Asn Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Glu Glu Arg Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 253
<211> 117
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 253
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Asn
20 25 30
Tyr Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Tyr Leu Gly Ser Gly Asn Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Glu Glu Arg Gly Phe Ala Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 254
<211> 117
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 254
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Ser
20 25 30
Tyr Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Asn Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Glu Glu Arg Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 255
<211> 117
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 255
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Phe
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Tyr Leu Gly Ser Gly Asn Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Glu Glu Asp Gly Phe Ala His Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 256
<211> 117
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 256
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Asn
20 25 30
Tyr Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Tyr Leu Gly Ser Gly Asn Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Lys Glu Arg Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 257
<211> 117
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 257
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Thr
20 25 30
Tyr Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Tyr Leu Gly Ser Gly Asn Ile Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Glu Glu Arg Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 258
<211> 117
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 258
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Tyr Leu Gly Ser Gly Asn Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Glu Asp Arg Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 259
<211> 117
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 259
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Thr
20 25 30
Tyr Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Tyr Leu Gly Ser Gly Asn Val Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Glu Glu Arg Gly Phe Ala His Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 260
<211> 117
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 260
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Leu
20 25 30
Tyr Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Tyr Leu Gly Ser Gly Asn Val Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Glu Glu Arg Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 261
<211> 117
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 261
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Ser
20 25 30
Tyr Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Tyr Gly Gly Ser Gly Asn Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Thr Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Glu Glu Asp Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 262
<211> 117
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 262
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Ser
20 25 30
Tyr Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Tyr Gly Gly Ser Gly Asn Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Glu Glu Arg Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 263
<211> 117
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 263
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Ser
20 25 30
Tyr Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Tyr Leu Gly Ser Gly Asn Val Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Ile Glu Arg Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 264
<211> 117
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 264
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Ser
20 25 30
Tyr Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Val Tyr Leu Gly Ser Gly Asn Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Glu Glu Arg Gly Phe Ala Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 265
<211> 113
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 265
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Ile Leu Tyr Ser
20 25 30
Ser Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Val Arg Asp Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr His Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 266
<211> 112
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 266
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ser Ser
20 25 30
Asn Gln Lys Tyr Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Asp Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile
65 70 75 80
Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe
85 90 95
Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 267
<211> 112
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 267
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Tyr Ser Ser
20 25 30
Asn Lys Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Ser Arg Asp Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile
65 70 75 80
Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr
85 90 95
Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 268
<211> 112
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 268
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ser Ser
20 25 30
Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Val Arg Asp Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile
65 70 75 80
Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe
85 90 95
Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 269
<211> 112
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 269
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ser Ser
20 25 30
Ser Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Val Arg Asp Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile
65 70 75 80
Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr
85 90 95
Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 270
<211> 113
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 270
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser
20 25 30
Ser Asn Lys Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Val Arg Asp Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr His Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 271
<211> 112
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 271
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Val Ser Ser
20 25 30
Ser Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Val Arg Asp Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile
65 70 75 80
Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr
85 90 95
Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 272
<211> 112
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 272
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ser Ser
20 25 30
Ser Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Asp Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile
65 70 75 80
Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe
85 90 95
Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 273
<211> 113
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 273
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser
20 25 30
Ser Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Val Arg Asp Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Phe Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 274
<211> 113
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 274
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Lys
20 25 30
Ser Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Val Arg Asp Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Leu Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 275
<211> 113
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 275
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser
20 25 30
Ser Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Val Arg Asp Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr His Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 276
<211> 112
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 276
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ser Ser
20 25 30
Ser Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Gly Arg Asp Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile
65 70 75 80
Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr
85 90 95
Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 277
<211> 112
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 277
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Thr Ser
20 25 30
Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Ile Arg Asp Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile
65 70 75 80
Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr
85 90 95
Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 278
<211> 113
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 278
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser
20 25 30
Ser Asn Arg Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Ser Arg Asp Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr His Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 279
<211> 113
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 279
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser
20 25 30
Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Ser Arg Asp Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Phe Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 280
<211> 112
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 280
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ser Ser
20 25 30
Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Val Arg Asp Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile
65 70 75 80
Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr
85 90 95
Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 281
<211> 112
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 281
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Tyr Thr Ser
20 25 30
Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Asp Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile
65 70 75 80
Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr
85 90 95
Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 282
<211> 113
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 282
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Asn
20 25 30
Ser Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Asp Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr His Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 283
<211> 113
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 283
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Lys
20 25 30
Ser Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Val Arg Asp Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Phe Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 284
<211> 112
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 284
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Tyr Ser Ser
20 25 30
Ser Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Val Arg Asp Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile
65 70 75 80
Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr
85 90 95
Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 285
<211> 113
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 285
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Asn
20 25 30
Ser Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Val Arg Asp Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr His Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 286
<211> 113
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 286
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser
20 25 30
Ser Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Val Arg Asp Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr His Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 287
<211> 107
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 287
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Lys Asn Ile Gly Lys Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Gly Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Asn Glu Tyr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 288
<211> 107
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 288
Asp Val Gln Ile Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Lys Asn Ile Gly Lys Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Gly Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Asn Glu Tyr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 289
<211> 107
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 289
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Lys Asn Ile Gly Lys Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Gly Ser Thr Leu Gln Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Asn Glu Tyr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 290
<211> 107
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 290
Asp Val Gln Ile Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Lys Asn Ile Gly Lys Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Gly Ser Thr Leu Gln Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Asn Glu Tyr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 291
<211> 107
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 291
Asp Val Gln Ile Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Lys Asn Ile Gly Lys Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Thr Asn Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Gly Ser Thr Leu Gln Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Asn Glu Tyr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 292
<211> 120
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 292
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Trp Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Met Ile Asp Pro Ser Asp Ser Glu Ser Arg Leu Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Gly Ser Pro Met Ile Thr Ser Phe Ala Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 293
<211> 120
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 293
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Trp Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Met Ile Asp Pro Ser Asp Ser Glu Ser Arg Leu Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Gly Ser Pro Met Ile Thr Ser Phe Ala Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 294
<211> 120
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 294
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Trp Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Met Ile Asp Pro Ser Asp Ser Glu Ser Arg Leu Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Gly Ser Pro Met Ile Thr Ser Phe Ala Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 295
<211> 120
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 295
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Trp Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Met Ile Asp Pro Ser Asp Ser Glu Ser Arg Leu Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Gly Ser Pro Met Ile Thr Ser Phe Ala Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 296
<211> 120
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 296
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Trp Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Met Ile Asp Pro Ser Asp Ser Glu Ser Arg Leu Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Gly Ser Pro Met Ile Thr Ser Phe Ala Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 297
<211> 107
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 297
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys His Ala Ser Gln Asn Ile Asn Val Trp
20 25 30
Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Lys Ala Ser Asn Leu His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Gln Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 298
<211> 107
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 298
Asp Ile Gln Ile Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys His Ala Ser Gln Asn Ile Asn Val Trp
20 25 30
Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Lys Ala Ser Asn Leu His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Gly Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Gln Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 299
<211> 107
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 299
Asp Ile Gln Ile Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys His Ala Ser Gln Asn Ile Asn Val Trp
20 25 30
Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ile Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Lys Ala Ser Asn Leu His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Gly Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Gln Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 300
<211> 118
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 300
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
His Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Asn Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Tyr Asp Tyr Asp Leu Tyr Leu His Ser Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 301
<211> 118
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 301
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
His Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Asn Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Tyr Asp Tyr Asp Leu Tyr Leu His Ser Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 302
<211> 118
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 302
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
His Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Asn Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Tyr Asp Tyr Asp Leu Tyr Leu His Ser Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 303
<211> 118
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 303
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
His Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Asn Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Met Ala Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Tyr Asp Tyr Asp Leu Tyr Leu His Ser Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 304
<211> 118
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 304
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
His Ile His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Asn Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Met Ala Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Tyr Asp Tyr Asp Leu Tyr Leu His Ser Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 305
<211> 447
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 305
Gln Met Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Thr Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr
20 25 30
Tyr Leu His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Ala Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asp Pro Asp Gln Gly Asp Thr Glu Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Asp Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Arg Ser Met Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Asn Ala Ala Tyr Gly Ser Ser Ser Tyr Pro Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro
210 215 220
Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Glu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
435 440 445
<210> 306
<211> 212
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 306
Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ala Met Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg
1 5 10 15
Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Ile His Arg Tyr Leu Ser
20 25 30
Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys His Leu Ile Tyr Arg
35 40 45
Ala Asn Arg Leu Val Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp
65 70 75 80
Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Tyr Thr Phe
85 90 95
Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser
100 105 110
Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala
115 120 125
Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val
130 135 140
Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser
145 150 155 160
Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr
165 170 175
Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys
180 185 190
Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn
195 200 205
Arg Gly Glu Cys
210
<210> 307
<211> 447
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 307
Gln Met Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Thr Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr
20 25 30
Tyr Leu His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Ala Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asp Pro Asp Gln Gly Asp Thr Glu Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Asp Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Arg Ser Met Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Asn Ala Ala Tyr Gly Ser Ser Ser Tyr Pro Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro
210 215 220
Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
435 440 445
<210> 308
<211> 212
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 308
Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ala Met Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg
1 5 10 15
Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Ile His Arg Tyr Leu Ser
20 25 30
Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys His Leu Ile Tyr Arg
35 40 45
Ala Asn Arg Leu Val Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp
65 70 75 80
Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Tyr Thr Phe
85 90 95
Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser
100 105 110
Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala
115 120 125
Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val
130 135 140
Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser
145 150 155 160
Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr
165 170 175
Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys
180 185 190
Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn
195 200 205
Arg Gly Glu Cys
210
<210> 309
<211> 214
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 309
Asp Val Gln Ile Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ala Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Thr Ile Thr Ile Asn Cys Arg Ala Ser Lys Asn Ile Gly Lys Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Phe Gln Glu Lys Pro Gly Lys Thr Asn Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Gly Ser Thr Leu Gln Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Ile Tyr Tyr Cys Gln Gln His Asn Glu Tyr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 310
<211> 447
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 310
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gln Leu Val Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Trp Met Gln Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Met Ile Asp Pro Ser Asp Ser Glu Ser Arg Leu Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Pro Thr Phe Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Gly Ser Pro Met Ile Thr Ser Phe Ala Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro
210 215 220
Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
435 440 445
<210> 311
<211> 214
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 311
Asp Ile Gln Ile Asn Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Thr Ile Thr Ile Thr Cys His Ala Ser Gln Asn Ile Asn Val Trp
20 25 30
Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Asn Ile Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Lys Ala Ser Asn Leu His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Gly Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Gln Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 312
<211> 445
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 312
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
His Ile His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Asn Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Met Ala Ile Leu Thr Ala Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Tyr Asp Tyr Asp Leu Tyr Leu His Ser Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly
130 135 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser
195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys
210 215 220
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
225 230 235 240
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
245 250 255
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln
260 265 270
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
275 280 285
Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
290 295 300
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
305 310 315 320
Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
325 330 335
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
340 345 350
Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
355 360 365
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
370 375 380
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
385 390 395 400
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
405 410 415
Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
420 425 430
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
435 440 445
<210> 313
<211> 6
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
6xHis фрагмент
<400> 313
His His His His His His
1 5
<---

Claims (41)

1. Антитело, содержащее вариабельную область легкой цепи и вариабельную область тяжелой цепи,
где антитело связывается с CD47;
где
вариабельная область легкой цепи содержит области, определяющие комплементарность, легкой цепи LC-CDR1, LC-CDR2 и LC-CDR3, и вариабельная область тяжелой цепи содержит области, определяющие комплементарность HC-CDR1, HC-CDR2 и HC-CDR3;
где LC-CDR1 имеет последовательность SEQ ID NO: 2, LC-CDR2 имеет последовательность SEQ ID NO: 12 и LC-CDR3 имеет последовательность SEQ ID NO: 20;
и где HC-CDR1 имеет последовательность SEQ ID NO: 29, HC-CDR имеет последовательность SEQ ID NO: 33 и HC-CDR3 имеют последовательность SEQ ID NO: 43.
2. Антитело по п. 1, отличающееся тем, что связывание антитела с CD47 предотвращает связывание CD47 с SIRPα, который экспрессируется на клетке макрофагов.
3. Антитело по п. 1, отличающееся тем, что антитело индуцирует фагоцитоз клеток, экспрессирующих CD47, в большей степени по сравнению с антителом, имеющим аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 240–241.
4. Антитело по п. 1, отличающееся тем, что антитело индуцирует фагоцитоз клеток, экспрессирующих CD47, в большей степени по сравнению с антителом, имеющим аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 242–243.
5. Антитело по п. 1, отличающееся тем, что антитело индуцирует фагоцитоз клеток, экспрессирующих CD47, в большей степени по сравнению с антителом, имеющим аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 244–245.
6. Антитело по п. 1, отличающееся тем, что антитело проявляет более высокую аффинность связывания с CD47 по сравнению с антителом, имеющим аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 240–241, при оценке в анализе связывания in vitro с использованием клеток, экспрессирующих CD47.
7. Антитело по п. 1, отличающееся тем, что антитело проявляет более высокую аффинность связывания с CD47 по сравнению с антителом, имеющим аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 242–243, при оценке в анализе связывания in vitro с использованием клеток, экспрессирующих CD47.
8. Антитело по п. 1, отличающееся тем, что антитело проявляет более высокую аффинность связывания с CD47 по сравнению с антителом, имеющим аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 244–245, при оценке в анализе связывания in vitro с использованием клеток, экспрессирующих CD47.
9. Антитело по п. 1, отличающееся тем, что гемагглютинация, индуцированная при контакте эритроцитов с антителом, по меньшей мере в 1 раз меньше по сравнению с гемагглютинацией, индуцированной антителом, имеющим аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 240–241.
10. Антитело по п. 1, отличающееся тем, что гемагглютинация, индуцированная при контакте эритроцитов с антителом, по меньшей мере в 1 раз меньше по сравнению с гемаглютинацией, индуцированной антителом, имеющим аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 242–243.
11. Антитело по п. 1, отличающееся тем, что гемагглютинация, индуцированная при контакте эритроцитов с антителом, по меньшей мере в 1 раз меньше по сравнению с гемаглютинацией, индуцированной антителом, имеющим аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 244–245.
12. Антитело по п. 1, отличающееся тем, что антитело представляет собой моноклональное антитело, гуманизированное антитело или химерное антитело.
13. Антитело по п. 1, отличающееся тем, что антитело представляет собой sFc, Fv, Fab или (Fab)2.
14. Антитело по п. 1, отличающееся тем, что антитело конкурирует за связывание с эпитопом, распознаваемым антителом, имеющим аминокислотные последовательности 1) SEQ ID NO: 240–241, 2) SEQ ID NO: 242–243 или 3) SEQ ID NO: 244–245.
15. Антитело по п. 1, где антитело содержит аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 291 и 296 или SEQ ID NOs: 291 и 293.
16. Антитело по любому из пп. 1-15, где антитело индуцирует фагоцитоз клеток, экспрессирующих CD47, при связывании с CD47.
17. Антитело по любому из пп. 1-16, где антитело не обладает способностью индуцировать существенную гемагглютинацию при смешивании с эритроцитами в диапазоне концентраций от 1,5 нг/мл до 30 мкг/мл указанного антитела.
18. Фармацевтическая композиция для индукции фагоцитоза клеток, экспрессирующих CD47, содержащая антитело по любому из пп. 1–17 и фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество.
19. Выделенная нуклеиновая кислота, кодирующая антитело по любому из пп. 1–17.
20. Экспрессирующий вектор, содержащий последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую антитело по любому из пп. 1–17.
21. Клетка–хозяин для получения антитела по любому из пп. 1-17, содержащая экспрессирующий вектор по п. 20.
22. Способ получения антитела по любому из пп. 1–17, включающий культивирование клетки–хозяина по п. 21 при условиях, подходящих для экспрессии антитела; и выделение указанного антитела, экспрессируемого клеткой–хозяином.
23. Способ индукции фагоцитоза клеток, экспрессирующих CD47, где указанный способ включает контактирование клетки с антителом по любому из пп. 1–17.
24. Способ индукции фагоцитоза клеток, экспрессирующих CD47, у человека, причем указанный способ включает введение человеку фармацевтической композиции по п. 18.
25. Способ по любому из пп. 23 или 24, отличающийся тем, что фагоцитоз клеток, экспрессирующих CD47, имеет эффективность 5%.
26. Способ по любому из пп. 23 или 24, отличающийся тем, что антитело не вызывает существенной гемагглютинации.
27. Способ по любому из пп. 23 или 24, отличающийся тем, что клетка представляет собой опухолевую клетку.
28. Способ по любому из пп. 23 или 24, отличающийся тем, что клетка представляет собой опухолевую клетку, отличную от клетки лимфомы и лейкоза.
29. Способ по любому из пп. 23 или 24, отличающийся тем, что клетка представляет собой гематологическую опухолевую клетку или клетку солидной опухоли.
30. Способ лечения злокачественного новообразования у пациента, нуждающегося в этом, причем указанный способ включает введение пациенту эффективного количества антитела по любому из пп. 1–17.
31. Способ лечения злокачественного новообразования у пациента, нуждающегося в этом, причем указанный способ включает введение пациенту эффективного количества фармацевтической композиции по п. 18.
32. Способ по любому из пп. 30, 31, отличающийся тем, что злокачественное новообразование представляет собой гемобластоз или солидную опухоль.
33. Способ по п. 32, отличающийся тем, что лечение злокачественного новообразования включает уменьшение объема опухоли.
34. Способ по п. 32 или 33, дополнительно включающий введение дополнительного терапевтического антитела.
35. Способ по п. 34, отличающийся тем, что дополнительное терапевтическое антитело представляет собой антитело против CD20.
36. Способ по любому из пп. 33-35, отличающийся тем, что объем опухоли уменьшается в большей степени по сравнению с антителом, имеющим аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 240 и 241, или SEQ ID NO: 242 и 243, или SEQ ID NO: 244 и 245.
RU2019126626A 2017-01-26 2018-01-26 Cd47-антигенсвязывающая единица и ее применение RU2780859C2 (ru)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CNPCT/CN2017/072738 2017-01-26
CN2017072738 2017-01-26
PCT/CN2018/074318 WO2018137705A1 (en) 2017-01-26 2018-01-26 Cd47 antigen binding unit and uses thereof

Publications (3)

Publication Number Publication Date
RU2019126626A RU2019126626A (ru) 2021-02-26
RU2019126626A3 RU2019126626A3 (ru) 2021-10-21
RU2780859C2 true RU2780859C2 (ru) 2022-10-04

Family

ID=

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2446170C2 (ru) * 2006-05-16 2012-03-27 Эгера Терапьютикс Инк. Соединения, связывающиеся с bir доменом iap
WO2013119714A1 (en) * 2012-02-06 2013-08-15 Inhibrx Llc Cd47 antibodies and methods of use thereof
WO2016141328A2 (en) * 2015-03-04 2016-09-09 Sorrento Therapeutics, Inc. Antibody therapeutics that bind cd47

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2446170C2 (ru) * 2006-05-16 2012-03-27 Эгера Терапьютикс Инк. Соединения, связывающиеся с bir доменом iap
WO2013119714A1 (en) * 2012-02-06 2013-08-15 Inhibrx Llc Cd47 antibodies and methods of use thereof
WO2016141328A2 (en) * 2015-03-04 2016-09-09 Sorrento Therapeutics, Inc. Antibody therapeutics that bind cd47

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CHAO M.P. et al. Anti-CD47 Antibody Synergizes with Rituximab to Promote Phagocytosis and Eradicate Non-Hodgkin Lymphoma, CELL, 2010, vol.142, no.5, pp.699-713. *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR102607101B1 (ko) Cd47 항원 결합 유닛 및 그것의 사용
CN110392694B (zh) 针对pd-1的抗体及其用途
KR102536145B1 (ko) 항-pd-1 항체 및 이의 용도
CN108368510B (zh) 特异性结合人cd40的激动性抗体和使用方法
KR101978757B1 (ko) 치료적 항체
KR20210086619A (ko) SIRPα 결합 단백질 및 이의 사용 방법
EP3753951A1 (en) Anti-b7-h4 antibody, antigen-binding fragment thereof and pharmaceutical use thereof
CN110997712A (zh) 特异性结合pd-1的抗体及其使用方法
JP2019506844A (ja) ＣＤ３２ｂを標的とする抗体およびその使用方法
CN113164780A (zh) 抗lap抗体变体及其用途
CN112243443A (zh) 抗trop-2抗体、其抗原结合片段及其医药用途
CA3203257A1 (en) Anti-b7-h3 antibody and uses thereof
JP2018534360A (ja) 抗−ｃｄ４３抗体およびその癌治療用途
CN114555640A (zh) 用于治疗claudin相关疾病的抗体和方法
CN115298216A (zh) 抗体或其抗原结合片段、其制备方法及医药用途
RU2780859C2 (ru) Cd47-антигенсвязывающая единица и ее применение
CN115996951A (zh) 抗cd103抗体
WO2022242663A1 (en) Anti-tigit antibodies and their use
WO2023098888A1 (en) Ccr8 antigen binding unit and uses thereof
WO2023040940A1 (zh) Pvrig/tigit结合蛋白联合免疫检查点抑制剂用于治疗癌症
WO2023057583A1 (en) Humanized hh1
CN116003604A (zh) 上皮钙黏素特异性抗体
Putelli Human antibody phage technology-isolation and characterization of monoclonal antibodies for the targeting of cancer and rheumatoid arthritis
NZ616809B2 (en) Anti-b7-h3 antibody
NZ616809A (en) Anti-b7-h3 antibody