RU2779551C2 - Штамм "bartha щбк-61" вируса болезни ауески для изготовления диагностических и вакцинных препаратов и способ получения вакцины против болезни ауески животных (варианты) - Google Patents
Штамм "bartha щбк-61" вируса болезни ауески для изготовления диагностических и вакцинных препаратов и способ получения вакцины против болезни ауески животных (варианты) Download PDFInfo
- Publication number
- RU2779551C2 RU2779551C2 RU2020130314A RU2020130314A RU2779551C2 RU 2779551 C2 RU2779551 C2 RU 2779551C2 RU 2020130314 A RU2020130314 A RU 2020130314A RU 2020130314 A RU2020130314 A RU 2020130314A RU 2779551 C2 RU2779551 C2 RU 2779551C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- virus
- aujeszky
- disease
- strain
- containing material
- Prior art date
Links
- 229960005486 vaccines Drugs 0.000 title claims abstract description 66
- 241000701093 Suid alphaherpesvirus 1 Species 0.000 title claims abstract description 45
- 208000009305 Pseudorabies Diseases 0.000 title claims abstract description 26
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract description 17
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title abstract description 7
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims abstract description 128
- 239000000463 material Substances 0.000 claims abstract description 72
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims abstract description 66
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 47
- 230000002458 infectious Effects 0.000 claims abstract description 46
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 claims abstract description 32
- 230000000240 adjuvant Effects 0.000 claims abstract description 18
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 claims abstract description 17
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 claims abstract description 9
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims abstract description 9
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 claims abstract description 3
- 230000000737 periodic Effects 0.000 claims abstract 3
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 claims description 48
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 claims description 48
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 25
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 16
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 claims description 5
- 230000000415 inactivating Effects 0.000 claims description 5
- 201000010099 disease Diseases 0.000 abstract description 24
- 241000700586 Herpesviridae Species 0.000 abstract description 4
- 238000003860 storage Methods 0.000 abstract description 4
- 241000700587 Alphaherpesvirinae Species 0.000 abstract description 3
- LSDGFGPIFBOTJI-UHFFFAOYSA-N 2-(aziridin-1-yl)ethanamine Chemical compound NCCN1CC1 LSDGFGPIFBOTJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 2
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 abstract 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 abstract 1
- 230000003449 preventive Effects 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 15
- 210000004544 DC2 Anatomy 0.000 description 7
- 230000002530 ischemic preconditioning Effects 0.000 description 7
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 6
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 5
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 4
- 102000004965 antibodies Human genes 0.000 description 3
- 108090001123 antibodies Proteins 0.000 description 3
- 201000009910 diseases by infectious agent Diseases 0.000 description 3
- 229940079593 drugs Drugs 0.000 description 3
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 2
- 210000002845 Virion Anatomy 0.000 description 2
- 229920003013 deoxyribonucleic acid Polymers 0.000 description 2
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 1
- 210000004369 Blood Anatomy 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 210000003743 Erythrocytes Anatomy 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 241000710198 Foot-and-mouth disease virus Species 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 210000003734 Kidney Anatomy 0.000 description 1
- 241000699673 Mesocricetus auratus Species 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 241000283898 Ovis Species 0.000 description 1
- 206010057343 Parvovirus infection Diseases 0.000 description 1
- 241000711798 Rabies lyssavirus Species 0.000 description 1
- 241000282941 Rangifer tarandus Species 0.000 description 1
- 210000002966 Serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic Effects 0.000 description 1
- 102000038129 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007172 antigens Proteins 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004027 cells Anatomy 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic Effects 0.000 description 1
- 244000144993 groups of animals Species 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic Effects 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000001681 protective Effects 0.000 description 1
- 230000017613 viral reproduction Effects 0.000 description 1
- 230000003612 virological Effects 0.000 description 1
- 230000001018 virulence Effects 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Abstract
Изобретение относится к области биотехнологии и касается производства профилактических и диагностических препаратов, используемых в научно-исследовательских институтах и предприятиях биологической промышленности при конструировании биопрепаратов, в частности вакцин против болезни Ауески животных. Для повышения качества целевого продукта за счет увеличения его иммуногенности при длительном его хранении получен штамм «Bartha ЩБК-61» вируса болезни Ауески для изготовления диагностических и вакцинных препаратов, относящийся к семейству Herpesviridae, подсемейству Alphaherpesvirinae, роду Varicellavirus, депонированного 24.02.2017 в Государственной коллекции вирусов Института вирусологии Федерального государственного бюджетного учреждения «Федеральный научно-исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи» под №2882, для изготовления диагностических и вакцинных препаратов. В способе получения вакцины против болезни Ауески животных, включающем получение вируссодержащего материала из штамма вируса болезни Ауески, выращенного в перевиваемой культуре клеток суспензионным способом, инактивацией его и смешивание с масляным адъювантом, в качестве вируссодержащего материала вакцина содержит вируссодержащий материал из делеционного по гликопротеину gE штамма вируса болезни Ауески с инфекционной активностью 8,0-10,0 lg ТЦД50/см3, который перед смешиванием с адъювантом инактивируют добавлением 4-5% раствора аминоэтилэтиленимина до конечной концентрации 0,001-0,005% при рН 7,6-7,8 и температуре 35-39°С в течение 20-22 часов с периодическим перемешиванием, при определенном соотношении компонентов. Также в способе получения вакцины против болезни Ауески животных, включающем получение вируссодержащего материала из штамма вируса болезни Ауески, выращенного в перевиваемой культуре клеток суспензионным способом, инактивацией его и смешивание с масляным адъювантом, в качестве вируссодержащего материала вакцина содержит вируссодержащий материал из делеционного по гликопротеину gE штамма вируса болезни Ауески с инфекционной активностью 8,0-10,0 lg ТЦИД50/см3, который перед смешиванием с адъювантом инактивируют добавлением 4-5% раствора аминоэтилэтиленимина до конечной концентрации 0,001-0,005% при рН 7,6-7,8 и температуре 35-39°С в течение 20-22 часов с периодическим перемешиванием, дополнительно содержит стабилизатор хитозан при определенном соотношении компонентов. Также в способе получения вакцины против болезни Ауески животных в качестве масляного адъюванта используют масляный адъювант ISA 201 VG или ISA 206 VG. Также в способе получения вакцины против болезни Ауески животных в качестве перевиваемой культуры клеток используют перевиваемую культуру клеток ВНК-21/13, или перевиваемую культуру клеток ВНК-21/13-13, или первичную культуру клеток почки поросенка СП. 3 н. и 2 з.п. ф-лы, 1 табл., 13 пр.
Description
Изобретение относится к области ветеринарии, ветеринарной биотехнологии для производства профилактических препаратов, используемых в научно-исследовательских институтах и предприятиях биологической промышленности при конструировании биопрепаратов, в частности вакцин против болезни Ауески.
Известен способ получения вакцины против болезни Ауески животных, включающий получение вируссодержащего материала из штамма вируса, выращенного в перевиваемой культуре клеток, и защитную среду [Патент РФ №2138289, Вирусвакцина против болезни Ауески, МПК А61К 39/245, А61К 39/12, опубликовано: 27.09.1999].
Недостаток этой вакцины заключается в недостаточной иммуногенности известной вакцины.
Известен штамм болезни Ауески и способ получения вакцины против болезни Ауески животных, включающем получение вируссодержащего материала из штамма вируса болезни Ауески, выращенного в перевиваемой культуре клеток суспензионным способом, инактивацией его и смешивание с масляным адъювантом [Патент РФ №1822345, Способ изготовления инактивированной концентрированной эмульгированной вакцины против болезни Ауески (вакцина "бак"), МПК А61К 39/295, опубликовано: 15.06.1993, Бюл. №22].
Однако известная вакцина не достаточно иммуногенна при более длительном сроке ее хранения.
Техническим решением предлагаемого изобретения является повышение иммуногенности целевого продукта при длительном хранении целевого продукта.
Предложена группа изобретений, объединенная единым изобретательским замыслом с достижением единого технического результата.
Поставленная задача достигается получением штамма «Bartha ЩБК-61» вируса болезни Ауэски для изготовления диагностических и вакцинных препаратов, относящийся к семейству Herpesviridae, подсемейству Alphaherpesvirinae, роду Varicellavirus, депонированного 24.02.2017 в Государственной коллекции вирусов Института вирусологии Федерального государственного бюджетного учреждения «Федеральный научно-исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи» под №2882, для изготовления диагностических и вакцинных препаратов (см. приложение - удостоверение)
Поставленная задача решается также в способе получения вакцины против болезни Ауески животных, включающем получение вируссодержащего материала из штамма вируса болезни Ауески, выращенного в перевиваемой культуре клеток суспензионным способом, инактивацией его и смешивание с масляным адъювантом, тем, что в качестве вируссодержащего материала вакцина содержит вируссодержащий материал из делеционного по гликопротеину gE штамма вируса болезни Ауески с инфекционной активностью 8,0-10,0 lg ТЦД50/см3, который перед смешиванием с адъювантом инактивируют добавлением 4-5% раствора аминоэтилэтиленимина до конечной концентрации 0,001-0,005% при рН 7,6-7,8 и температуре 35-39°С в течение 20-22 часов с периодическим перемешиванием, при следующем соотношении компонентов, мас. %:
| Инактивированный вируссодержащий материал и | |
| делеционного по гликопротеину gE штамма вируса болезни | |
| Ауески с инфекционной активностью 8,0-10,0 lg ТЦД50/см3 | 48,00 - 52,0 |
| Масляный адъювант | остальное |
Поставленная задача также решается в способе получения вакцины против болезни Ауески животных, включающем получение вируссодержащего материала из штамма вируса болезни Ауески, выращенного в перевиваемой культуре клеток суспензионным способом, инактивацией его и смешивание с масляным адъювантом, тем, что в качестве вируссодержащего материала вакцина содержит вируссодержащий материал из делеционного по гликопротеину gE штамма вируса болезни Ауески с инфекционной активностью 8,0-10,0 lg ТЦИД50/см3, который перед смешиванием с адъювантом инактивируют добавлением 4-5% раствора аминоэтилэтиленимина до конечной концентрации 0,001-0,005% при рН 7,6-7,8 и температуре 35-39°С в течение 20-22 часов с периодическим перемешиванием, дополнительно содержит стабилизатор хитозан, при следующем соотношении компонентов, мас. %:
Хитозан 5,0 -10,0
| Смесь инактивированного вируссодержащего материала из | |
| делеционного по гликопротеину gE штамма вируса | |
| болезни Ауески с инфекционной активностью 8,0-10,0 lg | |
| ТЦД50/см3 и масляного адъюванта, взятых в соотношении | |
| 1:0,8-1,2, соответственно | остальное. |
Поставленная задача также решается в способе получения вакцины против болезни Ауески животных тем, что в качестве масляного адъюванта используют масляный адъювант ISA 201 VG, или ISA 206 VG.
Поставленная задача также решается в способе получения вакцины против болезни Ауески животных тем, что в качестве перевиваемой культуры клеток используют перевиваемую культуру клеток ВНК-21/13, или перевиваемую культуру клеток ВНК-21/13-13 или первичную культуру клеток почки поросенка СП.
Известен делеционный по гликопротеину gE штамм вируса болезни Ауески, сем. Herpesviridae, подсем, Alphaherpesvirus, рода Varicellavirus, [Патент РФ №2242247, Вирусвакцина против болезни ауески, МПК А61К 39/245, C12N 7/00; А61Р 31/12, опубликовано: 20.12.2004, Бюл. №35].
Штамм «Bartha ЩБК-61» вируса болезни Ауэски - ДНК-содержащий вирус, относящимся к семейству Herpesviridae, подсемейству Alphaherpesvirinae, роду Varicellavirus.
Родословная штамма: ФКП «Щелковский биокомбинат», прототип штамма «Скиф», получен из музея штаммов Федерального государственного бюджетного научного учреждения Всероссийского государственного Центра качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов (ФГБНУ «ВГНКИ»). Депонирован штамм 24.02.2017 в Государственной коллекции вирусов Института вирусологии Федерального государственного бюджетного учреждения «Федеральный научно-исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи» под №2882, для изготовления диагностических и вакцинных препаратов.
Новый штамм «Bartha ЩБК-61» вируса болезни Ауэски характеризуется следующими признаками и свойствами.
Морфологические свойства. Вирион штамм «Bartha ЩБК-61» вируса болезни Ауэски содержит 2-спиральную линейную ДНК. Вирионы имеют форму икосаэдра с кубическим типом симметрии, включающим 162 капсомера. Имеется внешняя оболочка, диаметр колеблется от 120 до 150 нм.
Восприимчивые животные: кошки, кролики, овцы.
Вирулентность: Авирулентен для естественно восприимчивых животных при контактном, аэрозольном и парентеральном способах введения.
Способность вируса к распространению в естественных условиях: не распространяется.
Антигенные свойства: Активен в РН, РНГА, РДП, не агглютинирует эритроциты домашних животных, птиц и человека.
Иммуногенность: Иммуногенен в составе вакцины для поросят, свиней, крупного и мелкого рогатого скота, северных оленей, лошадей, собак, пушных зверей.
Стабильность генетических свойств: Имеет делецию гена, кодирующего гликопротеин gE.
Известен аминоэтилэтиленимин (АЭЭИ) [Патент РФ №2214276, Инактивированная эмульсионная вакцина против парвовирусной инфекции свиней, МПК А61К39/23, C12N7/00, опубликовано: 20.10.2003 Бюл. №29].
Известен также масляный адъювант ISA 201 VG и ISA 206 VG («The comparison of the efficacy of swine FMD vaccine emulsified with oil adjuvant of ISA 201 VG or ISA 206 VG", Journal of Biosciences and Medicines 01(03):22-25-January 2013 with 203 Rea).
Известна перевиваемая культура клеток ВНК-21/13 [Патент РФ №2614074, ВНК-21/13-02-перевиваемая монослойно-суспензионная сублиния клеток почки новорожденного сирийского хомячка, предназначенная для репродукции вируса ящура и вируса бешенства, МПК C12N 5/07, опубликовано: 22.03.2017, Бюл. №9].
Известна перевиваемая культура клеток ВНК-21/13-13 [Крюкова Е.Н. Параметры суспензионного культивирования культуры клеток внк-21/13-13 в масштабах биотехнологического производства / Крюкова Е.Н., Самуйленко А.Я., Мельник Р.Н. Ельников В.В., Красуткин С.Н., Литенкова И.Ю. Боровой В.Н. Мельник Н.В. Дресвянникова С.Г. // Ветеринария Кубани, - Краснодар, 2016 год, №3, с. 6-8].
Известна первичная культура клеток почки поросенка СП [Патент РФ №2646135, Способ хранения почки поросенка для получения монослоя первичнотрипсинизированных клеток и использования его в вирусологических исследованиях, МПК A01N 1/02, C12N 5/00, опубликовано: 01.03.2018, Бюл. №7]
В патентной и научно-технической литературе неизвестны технические решения аналогичные заявляемому, т.е. предложение соответствует критерию изобретения «новизна».
Заявленная композиция решает актуальную проблему ветеринарии -профилактики болезни Ауески, т.е. предложение «промышленно применимо».
В отечественной литературе не известно, что применение делеционного по гликопротеину gE штамма вируса болезни Ауески для получения вакцины и сочетанное использование выше указанных отличительных признаков, взятых в определенных соотношениях компонентов, увеличивает сроки хранения целевого продукта с сохранением его иммуногенности против болезни Ауески, что приводит к достижению технического результата. Следовательно, изобретение соответствует критерию «изобретательский уровень».
Изобретение иллюстрируется на следующих примерах:
Пример 1. Вируссодержащий материал готовят известным способом [Патент РФ №2242247, Маркированная вирусвакцина против болезни ауески, МПК А61К 39/245, C12N 7/00, опубликовано: 20.12.2004, Бюл. №35] путем размножения на 2-3-суточной перевиваемой культуре клеток ВНК-21/13, которую заражают лиофилизированным вирусом болезни Ауески из делеционного по гликопротеину gE штамма «Bartha ЩБК-61». Сбор вируса производят через 46-52 часа, когда вирус болезни Ауески накапливается с инфекционной активностью 8,0 lg ТЦД50/см3. Далее вируссодержащий материал перед смешиванием с адъювантом инактивируют добавлением 4% раствора аминоэтилэтиленимина до конечной концентрации 0,001% при рН 7,6 и температуре 35°С в течение 20 часов с периодическим перемешиванием. Затем к 48 кг инактивированного вируссодержащего материала из делеционного по гликопротеину gE штамма вируса болезни Ауески с инфекционной активностью 8,0 lg ТЦД50/см3 добавляют 52 кг масляного адъюванта ISA 201 VG, получая вакцину 1 при следующем соотношении компонентов, мас. %:
| Инактивированный вируссодержащий материал из | |
| делеционного по гликопротеину gE штамма вируса болезни | |
| Ауески с инфекционной активностью 8,0 lg ТЦД50/см3 | 48,00-52,0 |
| Масляный адъювант | остальное |
Пример 2. Вируссодержащий материал готовят известным способом, как и в примере 1, путем размножения на 2-3-суточной перевиваемой культуре клеток ВНК-21/13, которую заражают лиофилизированным вирусом болезни Ауески из делеционного по гликопротеину gE штамма «Bartha ЩБК-61». Сбор вируса производят через 46-52 часа, когда вирус болезни Ауески накапливается с инфекционной активностью 10,0 lg ТЦД50/см3. Далее вируссодержащий материал перед смешиванием с адъювантом инактивируют добавлением 5% раствора аминоэтилэтиленимина до конечной концентрации 0,005% при рН 7,8 и температуре 39°С в течение 22 часов с периодическим перемешиванием. Затем к 52 кг инактивированного вируссодержащего материала из делеционного по гликопротеину gE штамма вируса болезни Ауески с инфекционной активностью 10,0 lg ТЦД50/см3 добавляют 52 кг масляного адъюванта ISA 201 VG, получая вакцину 2 при следующем соотношении компонентов, мас. %:
| Инактивированный вируссодержащий материал из | |
| делеционного по гликопротеину gE штамма вируса болезни | |
| Ауески с инфекционной активностью 10,0 lg ТЦД50/см3 | 48,00-52,0 |
| Масляный адъювант | остальное |
Пример 3. Вируссодержащий материал готовят известным способом, как и в примере 1, путем размножения на 2-3-суточной перевиваемой культуре клеток ВНК-21/13-13, которую заражают лиофилизированным вирусом болезни Ауески из делеционного по гликопротеину gE штамма «Ваrthа ЩБК-61». Сбор вируса производят через 46-52 часа, когда вирус болезни Ауески накапливается с инфекционной активностью 8,0 lg ТЦД50/см3. Далее вируссодержащий материал перед смешиванием с адъювантом инактивируют добавлением 4% раствора аминоэтилэтиленимина до конечной концентрации 0,001% при рН 7,6 и температуре 35°С в течение 20 часов с периодическим перемешиванием. Затем к 48 кг инактивированного вируссодержащего материала из делеционного по гликопротеину gE штамма вируса болезни Ауески с инфекционной активностью 8,0 lg ТЦД50/см3 добавляют 52 кг масляного адъюванта ISA 206 VG, получая вакцину 3 при следующем соотношении компонентов, мас. %:
| Инактивированный вируссодержащий материал из | |
| делеционного по гликопротеину gE штамма вируса болезни | |
| Ауески с инфекционной активностью 8,0 lg ТЦД50/см3 | 48,00-52,0 |
| Масляный адъювант | остальное |
Пример 4. Вируссодержащий материал готовят известным способом, как и в примере 1, путем размножения на 2-3-суточной перевиваемой культуре клеток ВНК-21/13-13, которую заражают лиофилизированным вирусом болезни Ауески из делеционного по гликопротеину gE штамма «Ваrthа ЩБК-61». Сбор вируса производят через 46-52 часа, когда вирус болезни Ауески накапливается с инфекционной активностью 10,0 lg ТЦД50/см3. Далее вируссодержащий материал перед смешиванием с адъювантом инактивируют добавлением 5% раствора аминоэтилэтиленимина до конечной концентрации 0,005% при рН 7,8 и температуре 39°С в течение 22 часов с периодическим перемешиванием. Затем к 52 кг инактивированного вируссодержащего материала из делеционного по гликопротеину gE штамма вируса болезни Ауески с инфекционной активностью 10,0 lg ТЦД50/см3 добавляют 52 кг масляного адъюванта ISA 206 VG, получая вакцину 4 при следующем соотношении компонентов, мас. %:
| Инактивированный вируссодержащий материал из | |
| делеционного по гликопротеину gE штамма вируса | |
| болезни Ауески с инфекционной активностью 10,0 lg ТЦД50/см3 | 48,0-52,0 |
| Масляный адъювант | остальное |
Пример 5. Вируссодержащий материал готовят известным способом, как и в примере 1, путем размножения на 2-3-суточной культуре клеток почки поросенка СП, которую заражают лиофилизированным вирусом болезни Ауески из делеционного по гликопротеину gE штамма «Bartha ЩБК-61». Сбор вируса производят через 46-52 часа, когда вирус болезни Ауески накапливается с инфекционной активностью 8,0 lg ТЦД50/см3. Далее вируссодержащий материал перед смешиванием с адъювантом инактивируют добавлением 4% раствора аминоэтилэтиленимина до конечной концентрации 0,001% при рН 7,6 и температуре 35°С в течение 20 часов с периодическим перемешиванием. Затем к 48 кг инактивированного вируссодержащего материала из делеционного по гликопротеину gE штамма вируса болезни Ауески с инфекционной активностью 8,0 lg ТЦД50/см3 добавляют 52 кг масляного адъюванта ISA 206 VG, получая вакцину 5 при следующем соотношении компонентов, мас. %:
| Инактивированный вируссодержащий материал из | |
| делеционного по гликопротеину gE штамма вируса болезни | |
| Ауески с инфекционной активностью 8,0-10,0 lg ТЦД50/см3 | 48,00-52,0 |
| Масляный адъювант | остальное |
Пример 6. Вируссодержащий материал готовят известным способом, как и в примере 1, путем размножения на 2-3-суточной культуре клеток почки поросенка СП, которую заражают лиофилизированным вирусом болезни Ауески из делеционного по гликопротеину gE штамма «Bartha ЩБК-61». Сбор вируса производят через 46-52 часа, когда вирус болезни Ауески накапливается с инфекционной активностью 10,0lg ТЦД50/см3. Далее вируссодержащий материал перед смешиванием с адъювантом инактивируют добавлением 5% раствора аминоэтилэтиленимина до конечной концентрации 0,005% при рН 7,8 и температуре 39°С в течение 22 часов с периодическим перемешиванием. Затем к 52 кг инактивированного вируссодержащего материала из делеционного по гликопротеину gE штамма вируса болезни Ауески с инфекционной активностью 10,0 lg ТЦД50/см3 добавляют 52 кг масляного адъюванта ISA 206 VG, получая вакцину 6 при следующем соотношении компонентов, мас. %:
| Инактивированный вируссодержащий материал из | |
| делеционного по гликопротеину gE штамма вируса болезни | |
| Ауески с инфекционной активностью 10,0 lg ТЦД50/см3 | 48,00-52,0 |
| Масляный адъювант | остальное |
Пример 7. Вируссодержащий материал готовят известным способом, как и в примере 1, путем размножения на 2-3-суточной культуре клеток почки поросенка СП, которую заражают лиофилизированным вирусом болезни Ауески из делеционного по гликопротеину gE штамма «Bartha ЩБК-61». Сбор вируса производят через 46-52 часа, когда вирус болезни Ауески накапливается с инфекционной активностью 8,0 lg ТЦД50/см3. Далее вируссодержащий материал перед смешиванием с адъювантом инактивируют добавлением 4% раствора аминоэтилэтиленимина до конечной концентрации 0,001% при рН 7,6 и температуре 35°С в течение 20 часов с периодическим перемешиванием. Затем к 95 кг смеси инактивированного вируссодержащего материала из делеционного по гликопротеину gE штамма вируса болезни Ауески с инфекционной активностью 8,0 lg ТЦД50/см3 и масляного адъюванта ISA 206 VG, взятых в соотношении 1:0,8, соответственно, добавляют 5 кг хитозана, получая вакцину 7 при следующем соотношении компонентов, мас. %:
| Хитозан | 5,0 |
| Смесь инактивированного вируссодержащего материала из | |
| делеционного по гликопротеину gE штамма вируса болезни | |
| Ауески с инфекционной активностью 8,0 lg ТЦД50/см3 и | |
| масляного адъюванта, взятых в соотношении 1:0,8, соответственно | остальное. |
Пример 8. Вируссодержащий материал готовят известным способом, как и в примере 1, путем размножения на 2-3-суточной культуре клеток почки поросенка СП, которую заражают лиофилизированным вирусом болезни Ауески из делеционного по гликопротеину gE штамма «Bartha ЩБК-61». Сбор вируса производят через 46-52 часа, когда вирус болезни Ауески накапливается с инфекционной активностью 10,0 lg ТЦД50/см3. Далее вируссодержащий материал перед смешиванием с адъювантом инактивируют добавлением 5% раствора аминоэтилэтиленимина до конечной концентрации 0,005% при рН 7,8 и температуре 39°С в течение 22 часов с периодическим перемешиванием. Затем к 95 кг смеси инактивированного вируссодержащего материала из делеционного по гликопротеину gE штамма вируса болезни Ауески с инфекционной активностью 10,0 lg ТЦД50/см3 и масляного адъюванта ISA 206 VG, взятых в соотношении 1:1,2, соответственно, добавляют 10 кг хитозана, получая вакцину 8 при следующем соотношении компонентов, мас. %:
| Хитозан | 10,0 |
| Смесь инактивированного вируссодержащего материала из | |
| делеционного по гликопротеину gE штамма вируса болезни | |
| Ауески с инфекционной активностью 10,0 lg ТЦД50/см3 и | |
| масляного адъюванта, взятых в соотношении 1,2, соответственно | остальное. |
Пример 9. Вируссодержащий материал готовят известным способом, как и в примере 1, путем размножения на 2-3-суточной перевиваемой культуре клеток ВНК-21/13-13, которую заражают лиофилизированным вирусом болезни Ауески из делеционного по гликопротеину gE штамма «Bartha ЩБК-61». Сбор вируса производят через 46-52 часа, когда вирус болезни Ауески накапливается с инфекционной активностью 8,0 lg ТЦД50/см3. Далее вируссодержащий материал перед смешиванием с адъювантом инактивируют добавлением 4% раствора аминоэтилэтиленимина до конечной концентрации 0,001% при рН 7,6 и температуре 35°С в течение 20 часов с периодическим перемешиванием. Затем к 95 кг смеси инактивированного вируссодержащего материала из делеционного по гликопротеину gE штамма вируса болезни Ауески с инфекционной активностью 8,0 lg ТЦД50/см3 и масляного адъюванта ISA 206 VG, взятых в соотношении 1:0,8, соответственно, добавляют 5 кг хитозана, получая вакцину 9 при следующем соотношении компонентов, мас. %:
| Хитозан | 5,0 |
| Смесь инактивированного вируссодержащего материала из | |
| делеционного по гликопротеину gE штамма вируса болезни Ауески | |
| с инфекционной активностью 8,0 lg ТЦД50/см3 и масляного | |
| адъюванта, взятых в соотношении 1:0,8, соответственно | остальное. |
Пример 10. Вируссодержащий материал готовят известным способом, как и в примере 1, путем размножения на 2-3-суточной перевиваемой культуре клеток ВНК-21/13-13, которую заражают лиофилизированным вирусом болезни Ауески из делеционного по гликопротеину gE штамма «Bartha ЩБК-61». Сбор вируса производят через 46-52 часа, когда вирус болезни Ауески накапливается с инфекционной активностью 10,0 lg ТЦД50/см3. Далее вируссодержащий материал перед смешиванием с адъювантом инактивируют добавлением 5% раствора аминоэтилэтиленимина до конечной концентрации 0,005% при рН 7,8 и температуре 39°С в течение 22 часов с периодическим перемешиванием. Затем к 95 кг смеси инактивированного вируссодержащего материала из делеционного по гликопротеину gE штамма вируса болезни Ауески с инфекционной активностью 10,0 lg ТЦД50/см3 и масляного адъюванта ISA 206 VG, взятых в соотношении 1:1,2, соответственно, добавляют 10 кг хитозана, получая вакцину 10 при следующем соотношении компонентов, мас. %:
| Хитозан | 10,0 |
| Смесь инактивированного вируссодержащего материала из | |
| делеционного по гликопротеину gE штамма вируса болезни | |
| Ауески с инфекционной активностью 10,0 lg ТЦД50/см3 и масляного | |
| адъюванта, взятых в соотношении 1,2, соответственно | остальное. |
Пример 11. Вируссодержащий материал готовят известным способом, как и в примере 1, путем размножения на 2-3-суточной перевиваемой культуре клеток ВНК-21/13, которую заражают лиофилизированным вирусом болезни Ауески из делеционного по гликопротеину gE штамма «Bartha ЩБК-61». Сбор вируса производят через 46-52 часа, когда вирус болезни Ауески накапливается с инфекционной активностью 8,0 lg ТЦД50/см3. Далее вируссодержащий материал перед смешиванием с адъювантом инактивируют добавлением 4% раствора аминоэтилэтиленимина до конечной концентрации 0,001% при рН 7,6 и температуре 35°С в течение 20 часов с периодическим перемешиванием. Затем к 95 кг смеси инактивированного вируссодержащего материала из делеционного по гликопротеину gE штамма вируса болезни Ауески с инфекционной активностью 8,0 lg ТЦД50/см3 и масляного адъюванта ISA 201 VG, взятых в соотношении 1:0,8, соответственно, добавляют 5 кг хитозана, получая вакцину 11 при следующем соотношении компонентов, мас. %:
| Хитозан | 5,0 |
| Смесь инактивированного вируссодержащего материала из | |
| делеционного по гликопротеину gE штамма вируса болезни | |
| Ауески с инфекционной активностью 8,0 lg ТЦД50/см3 и масляного | |
| адъюванта, взятых в соотношении 1:0,8, соответственно | остальное. |
Пример 12. Вируссодержащий материал готовят известным способом, как и в примере 1, путем размножения на 2-3-суточной перевиваемой культуре клеток ВНК-21/13, которую заражают лиофилизированным вирусом болезни Ауески из делеционного по гликопротеину gE штамма «Bartha ЩБК-61». Сбор вируса производят через 46-52 часа, когда вирус болезни Ауески накапливается с инфекционной активностью 10,0 lg ТЦД50/см3. Далее вируссодержащий материал перед смешиванием с адъювантом инактивируют добавлением 5% раствора аминоэтилэтиленимина до конечной концентрации 0,005% при рН 7,8 и температуре 39°С в течение 22 часов с периодическим перемешиванием. Затем к 95 кг смеси инактивированного вируссодержащего материала из делеционного по гликопротеину gE штамма вируса болезни Ауески с инфекционной активностью 10,0 lg ТЦД50/см3 и масляного адъюванта ISA 201 VG, взятых в соотношении 1:1,2, соответственно, добавляют 10 кг хитозана, получая вакцину 12 при следующем соотношении компонентов, мас. %:
| Хитозан | 10,0 |
| Смесь инактивированного вируссодержащего материала из | |
| делеционного по гликопротеину gE штамма вируса болезни | |
| Ауески с инфекционной активностью 10,0 lg ТЦД50/см3 и | |
| масляного адъюванта, взятых в соотношении 1,2, | |
| соответственно | остальное. |
Пример 13. Испытание иммуногенной активности вакцины по изобретению, полученной по примерам 1-12, проводят на экспериментальных животных - на поросятах живой массой 15-20 кг 6-8 недельного возраста в сравнении с прототипом. Были сформированы 14 групп животных по 10 голов: из них опытных (с первого по двенадцатый номер) - 12 групп, которым вводили вакцины 1-12, полученные по примерам 1-12) и две группы контрольные (контрольная группа 1 - не вакцинированные животные, контрольная группа 2 - вакцинированные вакциной-прототипом). Животных опытных групп 1-12 иммунизируют вакцинами 1-12, приготовленными по примеру 1-12 после хранении вакцин при температуре 4°С в течение 24 месяцев из расчета 2,0 см3 внутримышечно в область шеи за ухом однократно; контрольную группу 2 - иммунизируют известной вакциной (прототипом) после хранении вакцин при температуре 4°С в течение 24 месяцев из расчета 2,0 см3 внутримышечно в область шеи за ухом однократно. Контрольную группу 1 не вакцинируют. У животных до вакцинации, через 7 и 21 день после вакцинации были отобраны пробы крови и исследованы в ИФА (набор IDEXX PRV/ADVgB США) на наличие специфических антител к антигену gB. Их оценка проводилась по значению величины S/N против вируса болезни Ауески (см. данные таблицы 1). Контрольное заражение животных проведено через 21 день после вакцинации. Иммуногенную активность вакцины оценивают по результатам контрольного заражения вакцинированных и контрольных животных (см. данные таблицы 1).
Таким образом, полученная вакцина против болезни Ауески животных из делеционного по гликопротеину gE штамма вируса болезни Ауески обладает более высокой иммуногенной активностью при длительном ее хранении в сравнении с известным техническим решением. Вакцинирование обеспечивает высокий уровень антител в сыворотке крови у привитых животных предлагаемой вакциной (уровень антител в группах опытных животных в 3,7-6,8 раз выше, чем в группе животных, которым вводили известную вакцину). Процент заражения после применения предлагаемой вакцины снижается на 46,7%.
Claims (7)
1. Штамм «BARTHA ЩБК-61» вируса болезни Ауески, депонированный в Государственной коллекции вирусов Института вирусологии Федерального государственного бюджетного учреждения «Федеральный научно-исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи» под №2882.
2. Способ получения вакцины против болезни Ауески животных, включающий получение вируссодержащего материала из штамма вируса болезни Ауески, выращенного в перевиваемой культуре клеток суспензионным способом, инактивацией его и смешивание с масляным адъювантом, отличающийся тем, что в качестве вируссодержащего материала вакцина содержит вируссодержащий материал из делеционного по гликопротеину gE штамма вируса болезни Ауески «BARTHA ЩБК-61» по п. 1 с инфекционной активностью 8,0-10,0 lg ТЦД50/см3, который перед смешиванием с адъювантом инактивируют добавлением 4-5% раствора аминоэтилэтиленимина до конечной концентрации 0,001-0,005% при рН 7,6-7.8 и температуре 35-39°С в течение 20-22 часов с периодическим перемешиванием при следующем соотношении компонентов, мас. %:
3. Способ получения вакцины против болезни Ауески животных, включающий получение вируссодержащего материала из штамма вируса болезни Ауески, выращенного в перевиваемой культуре клеток суспензионным способом, инактивацией его и смешивание с масляным адъювантом, отличающийся тем, что в качестве вируссодержащего материала вакцина содержит вируссодержащий материал из делеционного по гликопротеину gE штамма вируса болезни Ауески «BARTHA ЩБК-61» по п. 1 с инфекционной активностью 8,0-10,0 lg ТЦИД50/см3, который перед смешиванием с адъювантом инактивируют добавлением 4-5% раствора аминоэтилэтиленимина до конечной концентрации 0,001-0,005% при рН 7,6-7,8 и температуре 35-39°С в течение 20-22 часов с периодическим перемешиванием, дополнительно содержит стабилизатор хитозан при следующем соотношении компонентов, мас. %:
4. Способ получения вакцины против болезни Ауески животных по пп. 2 и 3, отличающийся тем, что в качестве масляного адъюванта используют масляный адъювант ISA 201 VG или ISA 206 VG.
5. Способ получения вакцины против болезни Ауески животных по пп. 2 и 3, отличающийся тем, что в качестве перевиваемой культуры клеток используют перевиваемую культуру клеток ВНК-21/13, или перевиваемую культуру клеток ВНК-21/13-13, или первичную культуру клеток почки поросенка СП.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2020130314A RU2779551C2 (ru) | 2020-09-15 | Штамм "bartha щбк-61" вируса болезни ауески для изготовления диагностических и вакцинных препаратов и способ получения вакцины против болезни ауески животных (варианты) |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2020130314A RU2779551C2 (ru) | 2020-09-15 | Штамм "bartha щбк-61" вируса болезни ауески для изготовления диагностических и вакцинных препаратов и способ получения вакцины против болезни ауески животных (варианты) |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2020130314A3 RU2020130314A3 (ru) | 2022-03-15 |
| RU2020130314A RU2020130314A (ru) | 2022-03-15 |
| RU2779551C2 true RU2779551C2 (ru) | 2022-09-08 |
Family
ID=
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2236254C2 (ru) * | 2002-10-17 | 2004-09-20 | Федеральное государственное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт защиты животных | Способ изготовления вакцины эмульсионной инактивированной против репродуктивно-респираторного синдрома свиней |
| RU2614074C1 (ru) * | 2005-05-31 | 2017-03-22 | Федеральное Казенное Предприятие " Щелковский Биокомбинат" | ВНК-21/13-02-перевиваемая монослойно-суспензионная сублиния клеток почки новорожденного сирийского хомячка, предназначенная для репродукции вируса ящура и вируса бешенства |
| RU2646135C1 (ru) * | 2016-10-14 | 2018-03-01 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") | Способ хранения почки поросенка для получения монослоя первичнотрипсинизированных клеток и использования его в вирусологических исследованиях |
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2236254C2 (ru) * | 2002-10-17 | 2004-09-20 | Федеральное государственное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт защиты животных | Способ изготовления вакцины эмульсионной инактивированной против репродуктивно-респираторного синдрома свиней |
| RU2614074C1 (ru) * | 2005-05-31 | 2017-03-22 | Федеральное Казенное Предприятие " Щелковский Биокомбинат" | ВНК-21/13-02-перевиваемая монослойно-суспензионная сублиния клеток почки новорожденного сирийского хомячка, предназначенная для репродукции вируса ящура и вируса бешенства |
| RU2646135C1 (ru) * | 2016-10-14 | 2018-03-01 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") | Способ хранения почки поросенка для получения монослоя первичнотрипсинизированных клеток и использования его в вирусологических исследованиях |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| BATZA H.-J., Eradication of Aujeszky’s disease in Germany. Proc. Inter-national Conference on the Control of Infectious Animal Diseases by Vaccina-tion. Buenos Aires; 2004: 81-82. * |
| АХМАТОВА Н.К. и др. Сравнительное изучение адъювантных свойств препаратов хитозана при парентеральной иммунизации инактивированной гриппозной вакциной, Эпидемиология и Вакцинопрофилактика N 3(58), 2011, с. 42-52. DONG LI et al. The comparison of the efficacy of swine FMD vaccine emulsified with oil adjuvant of ISA 201 VG or ISA 206 VG", Journal of Biosciences and Medicines 01(03):22-25-January 2013 with 203 Rea. * |
| ГУСЕВА М.Н. Разработка технологии изготовления инактивированной вакцины против болезни Ауески из штамма, делеционного по гликопротеину Е, автореферат диссертации, Владимир, 1999, разделы 1.3-1.5.1. ЯСНЕВА Е.А. Тест-системы на основе иммуноферментного анализа для определения антител к вирусу болезни Ауески, автореферат диссертации, Владимир, 2008, с. 8. * |
| КРЮКОВА Е.Н. Параметры суспензионного культивирования культуры клеток внк-21/13-13 в масштабах биотехнологического производства, Ветеринария Кубани, Краснодар, 2016 год, N3, с. 6-8. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN106399260B (zh) | 一种犬瘟热、细小病毒病二联活疫苗及其制备方法 | |
| CN106999567B (zh) | 用于即用型PCV2/M.hyo组合疫苗的方法 | |
| ES2962449T3 (es) | Expresión recombinante de la proteína ORF2 del PCV2b en células de insecto | |
| CN105018433A (zh) | 猪伪狂犬病病毒基因缺失株、疫苗组合物及其制备方法和应用 | |
| US3155589A (en) | Parenteral extravascular injectable vaccines for simultaneous immunization of canidae against rabies, canine distemper, and infectious canine hepatitis | |
| CN109609468B (zh) | 一种六基因缺失的猪伪狂犬病毒、猪伪狂犬病疫苗以及制备方法 | |
| RU2779551C2 (ru) | Штамм "bartha щбк-61" вируса болезни ауески для изготовления диагностических и вакцинных препаратов и способ получения вакцины против болезни ауески животных (варианты) | |
| CN107338227B (zh) | 牛副流感病毒pbiv3-b株及其应用 | |
| KR840001514B1 (ko) | 광견병 백신의 제조방법 | |
| RU2332234C1 (ru) | Способ изготовления вирусвакцины против классической чумы свиней | |
| RU2560569C2 (ru) | Штамм "алексеевский" вируса оспы свиней для вирусологических, молекулярно-генетических, мониторинговых исследований, изготовления вакцин и диагностических препаратов | |
| RU2825899C1 (ru) | Вакцина против репродуктивно-респираторного синдрома свиней живая культуральная сухая и способ изготовления вакцины | |
| RU2269361C2 (ru) | Вакцина ассоциированная эмульсионная инактивированная против репродуктивно-респираторного синдрома и парвовирусной инфекции свиней | |
| RU2747468C1 (ru) | Способ получения вакцины против цирковируса свиней (варианты) | |
| RU2297452C2 (ru) | Штамм азия-1/таджикистан/2004(1960) вируса ящура типа азия-1 для изготовления диагностических и/или вакцинных препаратов | |
| RU2372938C1 (ru) | Инактивированная бивалентная вакцина против вирусной диареи и аденовирусной инфекции крупного рогатого скота и способ профилактики вирусной диареи и аденовирусной инфекции крупного рогатого скота | |
| RU2504400C1 (ru) | Вакцина ассоциированная против парагриппа-3, инфекционного ринотрахеита и вирусной диареи крупного рогатого скота эмульсионная инактивированная | |
| RU2214276C1 (ru) | Инактивированная эмульсионная вакцина против парвовирусной инфекции свиней | |
| RU2399668C1 (ru) | Штамм "вн-96" вируса трансмиссивного гастроэнтерита свиней, используемый для производства диагностических и вакцинных препаратов | |
| RU2081912C1 (ru) | Штамм вируса краснухи "орлов-в" для получения вакцины | |
| RU2410117C1 (ru) | Вирусвакцина против болезни марека | |
| RU2242247C2 (ru) | Маркированная вирусвакцина против болезни ауески | |
| RU2279473C1 (ru) | Штамм вируса парагриппа-3 крупного рогатого скота для изготовления вакцинных и диагностических препаратов | |
| RU2515058C1 (ru) | Вакцина ассоциированная против вирусной диареи, ротавирусной и коронавирусной инфекций крупного рогатого скота эмульсионная инактивированная | |
| RU2032423C1 (ru) | Вакцина против вирусного энтерита, ботулизма и псевдомоноза норок |