RU2754683C2 - Способы лечения с использованием анти-il-17a антител - Google Patents

Abstract

Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к способу лечения псориатического артрита у людей, включающему стадию введения человеку, по меньшей мере, одной дозы нейтрализующего антитела, которое связывается с человеческим IL-17A и человеческим IL-17F. Изобретение позволяет осуществлять лечение артрита с улучшенными показателями клинических эффектов. 16 з.п. ф-лы, 16 ил., 1 табл., 3 пр.

Description

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ НАСТОЯЩЕЕ ИЗОБРЕТЕНИЕ

Настоящая заявка относится к молекулам антител, обладающих специфичностью к антигенным детерминантам и IL-17A и IL-17F, а также терапевтическим применениям молекул антител.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ НАСТОЯЩЕГО ИЗОБРЕТЕНИЯ

Интерлейкин 17 (IL-17), также известный как CTLA-8 или IL-17A, представляет собой провоспалительный цитокин, который стимулирует секрецию большого набора других цитокинов из различных неиммунных клеток. IL-17A также способен стимулировать секрецию IL-6, IL-8, PGE2, MCP-1 и G-CSF адгезивными клетками, подобными фибробластам, кератоцитам, эпителиальным и эндотелиальным клеткам, и также способен стимулировать ICAM-1 поверхностную экспрессию, пролиферацию T клеток, и рост и дифференциацию CD34+ предшественников человека до нейтрофилов при совместном культивировании в присутствии облученных фибробластов (Fossiez et al., 1998, Int. Rev. Immunol. 16, 541-551). IL-17A преимущественно синтезируется активированными T-клетками памяти и действует связыванием с повсеместно распределенным рецептором клеточной поверхности (IL-17R) (Yao et al., 1997, Cytokine, 9, 794-800). Он может также действовать через связывание с комплексом IL-17RA и IL-17RC (Toy et al., 2006, J. Immunol. 177(11); 36-39). T-клетки, синтезирующие IL-17, называемые 'TH17 клетками', вовлечены в патогенез определенных типов рака (Weaver et al., 2006, Immunity, 24, 677-688; Langowski et al., 2006, 442, 461-465; Iwakura and Ishigame, 2006, J. Clin. Invest. 116, 5, 1218-1222).

Обнаружен ряд гомологов IL-17, которые обладают и одинаковыми и отличными ролями в регуляции воспалительных ответов. Относительно обзора семейств IL-17 цитокин/рецептор, смотри Dumont, 2003, Expert Opin. Ther. Patents, 13, 287-303. Один данный гомолог представляет собой IL-17F, также известный как IL-24 и ML-1, который, как сообщается, является приблизительно на 55% идентичным IL-17A и, предполагается, что он имеет те же рецепторы, что и IL-17A (Kolls and Linden 2004, Immunity, 21, 467-476; Hymowitz, et al., 2001, EMBO J. 20(19), 5332-5341; Kuestner et al., 2007, Journal of Immunology, 179, 5462-5473). Тогда как отдельные сигнальные молекулы IL-17A являются более активными, чем сигнальные молекулы IL-17F, IL-17F оказывает больший эффект в кооперации с другими молекулами. Например, когда IL-17F добавляют с TNFα к RA синовиоцитам, стимулирование мощного воспалительного пути является аналогичным реакции, наблюдаемой с IL-17A и TNFα. (Hot et al., 2011, Ann. Rheumatic Dis., 70,341-348).

IL-17A и IL-17F экспрессируются в виде гомодимеров, но также могут экспрессироваться в виде IL-17A/F гетеродимера (Wright et al. 2008, J. Immunol. 181: 2799-2805). IL-17A и F передают сигнал через рецепторы IL-17R, IL-17RC или IL-17RA/RC рецепторный комплекс (Gaffen 2008, Cytokine. 43: 402-407).

IL-17A и IL-17F связаны с дерматологическими и ревматологическими заболеваниями. Данные дерматологические заболевания включают, но не ограничиваются, псориаз, атопический дерматит, дискоидную красную волчанку, алопецию, аутоиммунную крапивницу, буллезный пемфигоид, герпетиформный дерматит, гнойный гидраденит, линейный IgA-дерматоз, очаговую склеродерму, обыкновенную пузырчатку и гангренозную пиодермию. Данные ревматологические заболевания включают псориатический артрит, аксиальный спондилоартрит, включая анкилозирующий спондилит, системную красную волчанку (SLE), ревматоидный артрит, васкулит, синдром Шегрена (экстрагландулярный), ювенильный идиопатический артрит, гранулематоз, болезнь Бехчета (кожно-слизистую), антифосфолипидный синдром, гигантоклеточный артрит, склеродерму, нодозный полиартрит, болезнь Бехчета (тромбоз) и артрит Такаясу.

Псориатический артрит представляет собой воспалительное заболевание, которое воздействует и на суставы и на кожу. Оно может приводить к значительному повреждению суставов и инвалидности с течением времени и может включать нарушения и кожи и ногтей, наблюдаемые при псориазе. (Schett et al., 2011, Arthritis Research and Therapy, 13 Suppl. 1: S4). Псориатический артрит может быть трудно отличить от других форм артрита, в частности, когда изменения кожи являются минимальными или отсутствуют. Пациенты с псориатическим артритом часто сталкиваются с рядом других заболеваний с большей частотой, чем общая популяция, включая аутоиммунные заболевания, такие как ирит/увеит (опухание и раздражение глаз) и воспалительное заболевание кишечника (IBD), а также сердечнососудистое заболевание и остеопороз.

Псориатический артрит может негативно сказываться на многих аспектах жизни пациента, налагая бремя боли, физического функционирования и усталости, а также снижение психологического, эмоционального и социального самочувствия и общего качества жизни, связанного со здоровьем. (Husted et al., 2001, Arthritis Care and Research, 45:151-8; Picchianti-Diamani et al., 2010, Qual. Life Res., 19:821-6). Исследования показывают, что многие аспекты качества жизни, связанные со здоровьем (HRQol), ухудшаются до аналогичной степени у пациентов с псориатическим артритом и ревматоидным артритом. (Husted et al., 2001, Arthritis Care and Research, 45:151-8). Псориатический артрит связан со значительным экономическим бременем, и с точки зрения прямых издержек (денег, затраченных на лекарственные средства, стационарный уход, неформальный уход и безрецептурные лекарственные средства), и с точки зрения косвенных издержек (издержки, связанные с потерей продуктивности на работе). (Ackermann & Kavanaugh, 2008, Pharmacoeconomics, 26 (2):121-9).

Псориатический артрит может развиваться у индивидов с псориазом, воспалительным заболеванием кожи (Shbeeb et al., 2000, J Rheumatol., 27: 1247-50). Псориатический артрит обычно развивается у пациентов после возникновения псориаза. (Gladman et al., 2006, Annuals of the Rheumatic Diseases, 65 (Suppl. III): iii12-iii24). Средний возраст, при котором пациентам ставят диагноз псориатического артрита, составляет 41 год, причем мужчинам часто ставят диагноз в более раннем возрасте (20-39 лет), чем женщинам (40-59 лет). (Shbeed et al., 2000, J Rheumatol., 27:1247-50). От 3 до 8 людям из 100000 впервые ставят диагноз псориатического артрита каждый год (Gladman et al., 2005, Annuals of the Rheumatic Diseases, 64(Suppl II): ii14-ii17).

Определенные гены связаны с псориатическим артритом, в частности HLA-B27 (человеческий лейкоцитарный антиген) ген, который присутствует у приблизительно 50% пациентов с псориатическим артритом, по сравнению только с 3-18% общей популяцией восточной Европы. (Gladman et al., 2005, Annuals of the Rheumatic Diseases, 64(Suppl II): ii14-ii17; Salvarani & Fries, 2009, World J. Gastroenterol., 15 (20): 2449-55).

Однако факторы окружающей среды могут также вызывать возникновение заболевания. Факторы риска, связанные с псориатическим артритом, включают: псориаз, включающий кожу черепа, межъягодичные области, более чем 3 поврежденных области, дистрофию ногтей, недавнее язвообразование в полости рта и травму, требующую медицинской помощи. (Ogdie & Gelfand, 2010, Arch. Dermatol. 146(7):785-8; Pattison et al., 2008, Ann. Rheum. Dis., 67(5):672-6).

Существует сильная взаимосвязь между псориазом, псориатическим артритом и ожирением. (Russolillo et al., 2013, J. Rheumatol., 52:62-67). В 80% случаев псориатического артрита, артрит развивается после возникновения псориаза.

Симптомы псориатического артрита включают, но не ограничиваются: окоченение, боль, слабость, отек и пульсирование в одном или нескольких суставах, обычно в руках или ногах, но иногда в запястьях, лодыжках, коленях или нижней части спины; опухшие пальцы рук или ног, которые могут привести к внешнему виду пальцев, напоминающему колбаски (дактилит); снижение способности двигаться; изменения ногтей, такие как симптом наперстка или отделение от ногтевого ложа, вызывающее функциональное нарушение, боль и эмоциональный стресс; покраснение и боль глаз (увеит); усталость и утренняя скованность (в пораженных суставах); слабость, боль и отек над сухожилиями (энтезит); псориатический артрит может влиять на небольшое количество суставов (олигоартрит) или на большое количество суставов (полиартрит) и/или позвоночник.

Людям с симптомами псориатического артрита, особенно людям с псориазом или семейной историей псориатического артрита, необходимо наблюдаться у специалиста (например, ревматолога), поскольку проблему с их суставами могут быть аналогичными проблемам, наблюдаемым при других формах артрита (например, ревматоидном артрите, подагре и реактивном артрите). (Conaghan & Coates, 2009, The Practioner, 253(1724):15-18). Диагноз основан на симптомах, медицинской истории, врачебном осмотре, результате анализа крови и рентгеновском снимке. (Conaghan & Coates, 2009, The Practioner, 253(1724);15-18).

Легкие случаи псориатического артрита обычно лечат нестероидными противовоспалительными лекарственными средствами (NSAID), низкими дозами пероральных стероидов или инъекцией стероидов в больные суставы. (Mease, 2011, Ann. Rheum. Dis., 70(Suppl 1):i77-i84). Более тяжелый псориатический артрит часто лечат модифицирующими болезнь антиревматическими препаратами (DMARD). (Weger, 2010, British Journal of Pharmacology, 160:810-20). В последнее время становятся доступны биологические агенты, включая антитела к фактору некроза опухолей альфа (TNFα блокаторы). (Weger, 2010, British Journal of Pharmacology, 160:810-20). Клинические данные показали, что минимальная активность заболевания была достигнута у 64% пациентов, получавших ингибиторы ФНО, а это означает, что значительная часть пациентов (36%) не достигла даже этой цели. (Haddad A et al, Arthritis Care Res. 2015; 67, 842-7).

Некоторые субъекты являются нечувствительными к ранее известным способам лечения, не сохраняют клинический ответ (определенный американской коллегией ревматологии как достижение 20% критерия ответа (ʺACR20ʺ), или имеют противопоказания или непереносимость данных агентов. Наличие эффективных лекарственных средств для псориатического артрита, которые имеют альтернативный механизм действия, улучшит лечение пациентов, особенно пациентов, которые не получили пользу от, потеряли эффективность, или не могут применять лекарственные средства на основе TNF-ингибиторов по соображениям безопасности или переносимости. (Mease P, Curr Opin Rheumatol. 2015, 27: 127-33). Поскольку ACR балл представляет собой шкалу, которая измеряет симптомы, такие как эффекты на суставы, связанные с псориатическим артритом и ревматоидным артритом, улучшение ACR балла связано с лечением и псориатического артрита и ревматоидного артрита.

Прорыв в понимании иммунопатогенеза псориатического артрита привел к новым терапиям, помимо TNF-ингибиторов. Данные терапии рассмотрены в Sritheran and Ying Leung, Ther. Adv. Musculoskel. Dis., 2015, 7(5), 173-186). В таблице 1 данной статьи приводятся ACR и PASI баллы для различных терапий.

Лекарственные средства, которые ингибируют IL-17 и IL-23, показали заметную пользу при псориазе, и новые исследования также показывают пользу при псориатическом артрите и анкилозирующем спондилите (Mease P, Curr Opin Rheumatol 2015, 27: 127-33). Разрабатываются биологические терапии, которые нацелены на IL-17A, включая анти-IL-17A антитела, секукинумаб и оксекизумаб, которые в настоящее время находятся на III фазе клинических исследований для псориатического артрита. Результаты II фазы клинических исследований секукинумаба при псориатическом артрите описаны в Mease et al., 2015, N Engl J Med, 373,14, 1329-1339 и при анкилозирующем спондилите в Baeten et al., N. Engl. J. Med, 2015, 373 (26), 2534-48. Результаты III фазы клинических исследований оксекизумаба при псориатическом артрите описаны в Mease et al¸ 2015, ACR Abstract number 977. Бродалумаб представляет собой анти IL-17RA моноклональное антитело, которое, нацеленное на IL-17RA, блокирует активность IL-17A, IL-17F и IL-17E (IL-25). Результаты II фазы клинических исследований бродалумаба при псориатическом артрите описаны в Mease et al., 2015, N Engl J Med, 370, 24, 2295-2306. Эффективность современных терапий на 24 неделю составляет приблизительно 60%, 40% и 20% для ACR20, ACR50 и ACR70 соответственно, вместе с PASI 75 приблизительно 65% (таблица 1 в Sritheran and Ying Leung, Ther. Adv. Musculoskel. Dis., 2015, 7(5), 173-186).

СУЩНОСТЬ НАСТОЯЩЕГО ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение относится к молекулам антитела, обладающим специфичностью к антигенным детерминантам и IL-17A и IL-17F, терапевтическому применению молекул антитела в лечении дерматологических и ревматологических заболеваний, таких как псориатический артрит, и способам получения указанных молекул антител. В одном примере, антитело настоящего изобретения можно применять в лечении дерматологических заболеваний (таких как, но не ограничиваясь, псориаз, атопический дерматит, дискоидная красная волчанка, алопеция, аутоиммунная крапивница, буллезный пемфигоид, герпетиформный дерматит, гнойный гидраденит, линейный IgA-дерматоз, очаговая склеродерма, обыкновенная пузырчатка и гангренозная пиодермия) и/или ревматологических заболеваний (таких как, но не ограничиваясь, псориатический артрит, аксиальный спондилоартрит, включая нерентгенографический аксиальный спондилоартрит и анкилозирующий спондилит, системная красная волчанка (SLE), ревматоидный артрит, васкулит, синдром Шегрена (экстрагландулярный), ювенильный идиопатический артрит, гранулематоз, болезнь Бехчета (кожно-слизистая), антифосфолипидный синдром, гигантоклеточный артрит, склеродерму, нодозный полиартрит, болезнь Бехчета (тромбоз) и артрит Такаясу). В одном примере, антитело настоящего изобретения можно применять в лечении псориатического артрита. Нейтрализующие антитела, которые связываются и с IL-17A и с IL-17F, такие как бимекизумаб, могут обеспечивать значительное улучшение по сравнению с имеющимися терапиями псориатического артрита, и по скорости и по величине клинического эффекта. Например, они могут обеспечивать эквивалентные или даже улучшенные клинические показатели к 8 неделе. Подходящие клинические показатели включают 20/50/70 ответ согласно американской коллегии ревматологии (ʺACRʺ) для суставов и, для кожи, клинические признаки псориаза, 50/75/90 ответ по индексу площади и тяжести псориаза (ʺPASIʺ). Например, данные антитела могут увеличивать количество пациентов, достигающих ACR20, ACR50, ACR70 и PASI75 на 8 неделе или 12 неделе, больше чем на 60%, 40%, 20% и 65%, соответственно (показатель среднего отклика). Они могут даже обладать потенциалом по увеличению количества пациентов, достигающих ACR20, ACR50, ACR70 и PASI75 на 8 неделе или 12 неделе, до 60-95%, 40-60%, 20-40% и 80-100%, соответственно. Например, они могут составлять 80%, 60%, 40% и близко к 90% или близко к 100%, соответственно. Скорость достижения лечебного ответа субъектами, которым вводят антитело, как описано в настоящем изобретении, также является значительной. Например, в различных вариантах осуществления, субъект достигает ACR20 или ACR50 (или PASI 20 или PASI50) в пределах четырех недель (например, в пределах трех недель или в пределах двух недель) первого введения. Кроме того, в различных вариантах осуществления, лечебный ответ на способы, описанные в настоящем изобретении, можно поддерживать в течение значительного периода времени. Например, субъекты, которым вводят три дозы анти-IL-17A/F антитела, описанного в настоящем изобретении, (например, в дни 0, 21 и 42) получают практически максимальный отклик к 20 неделе. Таким образом, в различных аспектах, способы, описанные в настоящем изобретении, могут обеспечивать биологический ответ у субъекта на 8 неделю или 12 неделю, который уменьшается не более чем на 10%, не более чем на 20%, не более чем на 30%, не более чем на 40% или не более чем на 50% на 20 неделю. В одном примере, антитело настоящего изобретения можно применять в лечении любого из симптомов псориатического артрита, перечисленных в настоящем изобретении ниже, включая, но не ограничиваясь, дактилит, энтезит, дистрофию ногтей, кожные проявления; признаки и симптомы периферического артрита; осевое заболевание и структурное развитие заболевания. В одном примере, антитело настоящего изобретения можно применять для предотвращения развития псориатического артрита или других заболеваний у пациентов с псориазом.

Кроме того, настоящее изобретение относится к применению молекулы антитела согласно настоящему изобретению в получении лекарственного средства для лечения или профилактики патологического расстройства, которое опосредовано IL-17A и/или IL-17F или связано с повышенной концентрацией IL-17A и/или IL-17F. Предпочтительно патологическое расстройство может представлять собой одно из медицинских показаний, описанных в настоящем изобретении. В одном варианте осуществления, патологическое расстройство может включать псориатический артрит. В других вариантах осуществления, патологическое расстройство может включать псориаз, ревматоидный артрит и/или артрит. В различных вариантах осуществления, патологическое расстройство представляет собой анкилозирующий спондилит. В различных вариантах осуществления, патологическое расстройство представляет собой аксиальный спондилоартрит или нерентгенографический аксиальный спондилоартрит.

Молекулу антитела настоящего изобретения можно применять в любой терапии, где желательно ослабить эффекты IL-17A и/или IL-17F в теле человека или животного. IL-17A и/или IL-17F могут циркулировать в теле или могут присутствовать в неприемлемо высокой концентрации, локализованной в конкретной области тела, например, в месте воспаления.

В одном варианте осуществления, настоящее изобретение относится к способу лечения человеческих или животных субъектов, страдающих от или имеющих риск возникновения заболевания, опосредованного IL-17A и/или IL-17F, причем способ включает введение субъекту эффективного количества молекулы антитела настоящего изобретения.

В одном варианте осуществления, настоящее изобретение также относится к молекуле антитела настоящего изобретения, в частности нейтрализующему антителу, которое связывается с человеческим IL-17A и человеческим IL-17F, для применения в лечении человеческих или животных субъектов, страдающих от или имеющих риск возникновения заболевания, опосредованного IL-17A и/или IL-17F. Предпочтительно патологическое расстройство может представлять собой одно из медицинских показаний, описанных в настоящем изобретении. В одном варианте осуществления, патологическое расстройство может включать псориатический артрит. В других вариантах осуществления, патологическое расстройство может включать псориаз, ревматоидный артрит и/или артрит. В одном варианте осуществления патологическое расстройство может включать анкилозирующий спондилит. В одном варианте осуществления патологическое расстройство может включать аксиальный спондилоартрит или нерентгенографический аксиальный спондилоартрит.

Следовательно, в одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к молекуле антитела настоящего изобретения, в частности нейтрализующему антителу, которое связывается с человеческим IL-17A и человеческим IL-17F, для применения в лечении псориатического артрита, псориаза, ревматоидного артрита, артрита, аксиального спондилоартрита, анкилозирующего спондилита или нерентгенографического аксиального спондилоартрита.

ʺПсориазʺ включает заболевания или компоненты, связанные с кожей (т.е., симптомы) заболеваний, такие как, но не ограничиваясь, пятнистый псориаз, пустулезный псориаз, генерализованный пустулезный псориаз, ладонно-подошвенный псориаз, псориаз кожи черепа, каплевидный псориаз, эритродермический псориаз, инверсивный псориаз, персистирующий акродерматит, SAPHO (синовит, акне, пустулез, гиперостоз и остезис) синдром, гнойный гидраденит и DITRA (дефицит антагониста IL-36 рецептора [IL-36R])/DIRA (дефицит антагониста рецептора интерлейкина 1 (IL-1)). Тяжесть псориаза может изменяться и может быть выбрана, например, из легкого, легкого-умеренного, умеренного, тяжелого и умеренного-тяжелого псориаза.

Молекулу антитела согласно настоящему изобретению можно также применять в диагностике, например, в in vivo диагностике и визуализации заболеваний, включающих IL-17A и/или IL-17F.

Настоящее изобретение относится к способу лечения псориатического артрита у людей, включающему стадию введения человеку нейтрализующего антитела, которое связывается с человеческим IL-17A и человеческим IL-17F. В одном варианте осуществления, антитело специфически связывается с эпитопом человеческого IL-17F, причем эпитоп содержит один или более остатков, выбранных из ARG47, ARG73, LEU75 и ILE86 SEQ ID NO: 27. В данном или отличном варианте осуществления, антитело специфически связывается с эпитопом человеческого IL-17A, причем эпитоп содержит один или более остатков, выбранных из TYR44, ASN45, ARG46, TRP51, ASN52, HIS54 и ASP84 SEQ ID NO: 28. В различных вариантах осуществления, антитело связывается с тем же эпитопом человеческого IL-17A, человеческого IL-17F или IL-17 A/F гетеродимера, как нейтрализующее антитело, которое содержит тяжелую цепь, содержащую последовательность, указанную в SEQ ID NO: 11, и легкую цепь, содержащую последовательность, указанную в SEQ ID NO: 10. Необязательно, антитело перекрестно блокируют нейтрализующее антитело, которое содержит тяжелую цепь, содержащую последовательность, указанную в SEQ ID NO: 11, и легкую цепь, содержащую последовательность, указанную в SEQ ID NO: 10, и связывается с человеческим IL-17A и человеческим IL-17F. В различных вариантах осуществления, антитело содержит вариабельный участок легкой цепи и вариабельный участок тяжелой цепи, где вариабельный участок легкой цепи содержит последовательность, указанную в SEQ ID NO:10. В одном аспекте, антитело представляет собой бимекизумаб. Необязательно, антитело вводят в виде фармацевтической композиции. В различных вариантах осуществления, антитело вводят подкожно или внутривенно.

В любом из вариантов осуществления способа лечения псориатического артрита у людей, включающего стадию введения человеку нейтрализующего антитела, которое связывается с человеческим IL-17A и человеческим IL-17F, человек необязательно имеет диагноз приобретенного псориатического артрита. Необязательно, человек имеет возраст, по меньшей мере, 18 лет, и/или ему поставлен диагноз, по меньшей мере, за шесть месяцев до введения антитела. Также необязательно, чтобы человеку был поставлен диагноз на основе CASPAR критерия. В любом из вариантов осуществления, описанных выше, человек имеет активный артрит. Это обычно определяют как ≥3 болезненных и ≥3 отекших суставов. Пациенты могут иметь присутствующий совместно или сопутствующий псориаз и/или историю псориаза. Например, человек необязательно имеет активные псориазные поражения или историю псориазных поражений.

В любом из вариантов осуществления способа лечения псориатического артрита, псориаза, ревматоидного артрита или аксиального спондилита, включая анкилозирующий спондилит и нерентгенографический спондилит у людей, включающего стадию введения человеку нейтрализующего антитела, которое связывается с человеческим IL-17A и человеческим IL-17F, описанными в настоящем изобретении, антитело можно вводить в виде монотерапии.

В любом из вариантов осуществления способа лечения псориатического артрита, псориаза, ревматоидного артрита или аксиального спондилита, включающего анкилозирующий спондилит и нерентгенографический спондилит у людей, включающего стадию введения человеку нейтрализующего антитела, которое связывается с человеческим IL-17A и человеческим IL-17F, описанными в настоящем изобретении, человек необязательно является биологически наивным, т.е. он ранее не подвергался лечению биологическим агентом, таким как TNF альфа ингибитор, таким как анти-TNF антитело.

В любом из вариантов осуществления способа лечения псориатического артрита у людей, включающего стадию введения человеку нейтрализующего антитела, которое связывается с человеческим IL-17A и человеческим IL-17F, описанными в настоящем изобретении, человек необязательно представляет собой пациента, неадекватно отвечающего на, по меньшей мере, одно небиологическое модифицирующее заболевание антиревматическое лекарственное средство (ʺDMARDʺ) и/или одно или более одобренных биологических DMARD (например, TNF ингибитор, такой как анти-TNF антитело, причем примеры включают инфликсумаб или адалимумаб, или растворимый TNF рецептор, такой как этанерцепт). Примеры небиологических DMARD включают сульфсалазин, метотрексат, циклоспорин, гидроксихлороквин, азатиоприн и лефлуномид. Необязательно, человек представляет собой пациента, неадекватно отвечающего, по меньшей мере, на одно нестероидное противовоспалительное лекарственное средство (NSAID). Примеры подходящего NSAID включают, но не ограничиваются, производное пропионовой кислоты, производное уксусной кислоты, производные еноловой кислоты, производные фенамовой кислоты, cox ингибиторы, ибупрофен, фенопрофен и аспирин.

Настоящее изобретение также относится к способу лечения псориатического артрита у людей, одновременно подвергающихся лечению метотрексатом или другим небиологическим DMARD (таким как лефлуномид) или нестероидным противовоспалительным лекарственным средством (NSAID) и/или стероидом, включающему стадию введения человеку нейтрализующего антитела, которое связывается с человеческим IL-17A и человеческим IL-17F. В различных вариантах осуществления, антитело специфически связывается с эпитопом человеческого IL-17F, причем эпитоп содержит один или более остатков, выбранных из ARG47, ARG73, LEU75 и ILE86 SEQ ID NO: 27. В том же или отличных вариантах осуществления, антитело специфически связывается с эпитопом человеческого IL-17A, причем эпитоп содержит один или более остатков, выбранных из TYR44, ASN45, ARG46, TRP51, ASN52, HIS54 и ASP84 SEQ ID NO: 28. Необязательно, антитело связывается с тем же эпитопом в человеческом IL-17A, человеческом IL-17F или IL-17 A/F гетеродимере, как нейтрализующее антитело, которое содержит тяжелую цепь, содержащую последовательность, указанную в SEQ ID NO: 11, и легкую цепь, содержащую последовательность, указанную в SEQ ID NO: 10. Также необязательно, чтобы антитело перекрестно блокировало нейтрализующее антитело, которое содержит тяжелую цепь, содержащую последовательность, указанную в SEQ ID NO: 11, и легкую цепь, содержащую последовательность, указанную в SEQ ID NO: 10, и связывалось с человеческим IL-17A и человеческим IL-17F. В различных аспектах способа, антитело содержит вариабельный участок легкой цепи и вариабельный участок тяжелой цепи, где вариабельный участок легкой цепи содержит последовательность, указанную в SEQ ID NO:10. В предпочтительном варианте осуществления, антитело представляет собой бимекизумаб. Антитело можно вводить в виде фармацевтической композиции. Антитело необязательно вводят подкожно или внутривенно.

Настоящее изобретение включает способ лечения псориатического артрита у людей, включающий стадию введения человеку терапевтически эффективного количества нейтрализующего антитела, которое связывается с человеческим IL-17A и человеческим IL-17F. В различных аспектах, антитело специфически связывается с эпитопом человеческого IL-17F, причем эпитоп содержит один или более остатков, выбранных из ARG47, ARG73, LEU75 и ILE86 SEQ ID NO: 27. В том же или отличных аспектах, антитело специфически связывается с эпитопом человеческого IL-17A, причем эпитоп содержит один или более остатков, выбранных из TYR44, ASN45, ARG46, TRP51, ASN52, HIS54 и ASP84 SEQ ID NO: 28. Необязательно, антитело связывается с тем же эпитопом в человеческом IL-17A, человеческом IL-17F или IL-17 A/F гетеродимере, как нейтрализующее антитело, которое содержит тяжелую цепь, содержащую последовательность, указанную в SEQ ID NO: 11, и легкую цепь, содержащую последовательность, указанную в SEQ ID NO: 10. В различных вариантах осуществления, антитело перекрестно блокирует нейтрализующее антитело, которое содержит тяжелую цепь, содержащую последовательность, указанную в SEQ ID NO: 11, и легкую цепь, содержащую последовательность, указанную в SEQ ID NO: 10, и связывается с человеческим IL-17A и человеческим IL-17F. Антитело, в различных вариантах осуществления, содержит вариабельный участок легкой цепи и вариабельный участок тяжелой цепи, где вариабельный участок легкой цепи содержит последовательность, указанную в SEQ ID NO:10. В предпочтительном варианте осуществления, антитело представляет собой бимекизумаб. Антитело необязательно вводят в виде фармацевтической композиции. Антитело можно вводить подкожно или внутривенно.

Один вариант настоящего изобретения включает способ лечения псориатического артрита у людей, включающий стадию введения пациенту нейтрализующего антитела, которое связывается с человеческим IL-17A и человеческим IL-17F, в количестве, которое является эффективным для обеспечения ACR20 ответа на 8 неделю или 12 неделю, ACR50 ответа на 8 неделю или 12 неделю, или ACR70 ответа на 8 неделю или 12 неделю в популяции пациентов, нуждающихся в лечении. Например, вводимое количество является эффективным для обеспечения ACR50 ответа на 8 неделю или 12 неделю, или ACR70 ответа на 8 неделю или 12 неделю в популяции пациентов. В предпочтительном аспекте, количество является эффективным для обеспечения ACR70 ответа на 8 неделю или 12 неделю в популяции пациентов. Альтернативно или в добавление, нейтрализующее антитело вводят в количестве, которое является эффективным для обеспечения PASI50 ответа на 8 неделю или 12 неделю, PASI75 ответа на 8 неделю или 12 неделю или PASI90 ответа на 8 неделю или 12 неделю, такое как количество, которое является эффективным для обеспечения PASI75 ответа на 8 неделю или 12 неделю или PASI90 ответа на 8 неделю или 12 неделю в популяции пациентов. В предпочтительном аспекте, нейтрализующее антитело вводят в количестве, которое является эффективным для обеспечения PASI90 ответа или PASI100 ответа на 8 неделю или 12 неделю в популяции пациентов. Обычно ответ поддерживают так, чтобы ACR50, ACR70 и/или PASI ответы сохранялись на 16, 20, 24 неделю или позже. В различных аспектах, антитело специфически связывается с эпитопом человеческого IL-17F, причем эпитоп содержит один или более остатков, выбранных из ARG47, ARG73, LEU75 и ILE86 SEQ ID NO: 27, и/или специфически связывается с эпитопом человеческого IL-17A, причем эпитоп содержит один или более остатков, выбранных из TYR44, ASN45, ARG46, TRP51, ASN52, HIS54 и ASP84 SEQ ID NO: 28. В различных аспектах, антитело связывается с тем же эпитопом в человеческом IL-17A, человеческом IL-17F или IL-17 A/F гетеродимере, как нейтрализующее антитело, которое содержит тяжелую цепь, содержащую последовательность, указанную в SEQ ID NO: 11, и легкую цепь, содержащую последовательность, указанную в SEQ ID NO: 10. В различных аспектах, антитело перекрестно блокирует нейтрализующее антитело, которое содержит тяжелую цепь, содержащую последовательность, указанную в SEQ ID NO: 11, и легкую цепь, содержащую последовательность, указанную в SEQ ID NO: 10, и связывается с человеческим IL-17A и человеческим IL-17F. Необязательно, антитело содержит вариабельный участок легкой цепи и вариабельный участок тяжелой цепи, где вариабельный участок легкой цепи содержит последовательность, указанную в SEQ ID NO:10. В предпочтительном аспекте, антитело представляет собой бимекизумаб. Антитело необязательно вводят в виде фармацевтической композиции. Антитело можно вводить подкожно или внутривенно.

Кроме того, настоящее изобретение относится к способу облегчения псориаза у людей, включающему стадию введения человеку нейтрализующего антитела, которое связывается с человеческим IL-17A и человеческим IL-17F. В различных вариантах осуществления, псориаз представляет собой пятнистый псориаз. В различных вариантах осуществления псориаз представляет собой легкий-умеренный пятнистый псориаз. В различных вариантах осуществления псориаз представляет собой умеренный-тяжелый пятнистый псориаз. Облегчение пятнистого псориаза необязательно измеряют PASI критерием. В различных вариантах осуществления, антитело специфически связывается с эпитопом человеческого IL-17F, причем эпитоп содержит один или более остатков, выбранных из ARG47, ARG73, LEU75 и ILE86 SEQ ID NO: 27. Альтернативно или в добавление, антитело специфически связывается с эпитопом человеческого IL-17A, причем эпитоп содержит один или более остатков, выбранных из TYR44, ASN45, ARG46, TRP51, ASN52, HIS54 и ASP84 SEQ ID NO: 28. В различных аспектах, антитело связывается с тем же эпитопом в человеческом IL-17A, человеческом IL-17F или IL-17 A/F гетеродимере, как нейтрализующее антитело, которое содержит тяжелую цепь, содержащую последовательность, указанную в SEQ ID NO: 11, и легкую цепь, содержащую последовательность, указанную в SEQ ID NO: 10. Необязательно, антитело перекрестно блокирует нейтрализующее антитело, которое содержит тяжелую цепь, содержащую последовательность, указанную в SEQ ID NO: 11, и легкую цепь, содержащую последовательность, указанную в SEQ ID NO: 10, и связывается с человеческим IL-17A и человеческим IL-17F. В различных вариантах осуществления, антитело содержит вариабельный участок легкой цепи и вариабельный участок тяжелой цепи, где вариабельный участок легкой цепи содержит последовательность, указанную в SEQ ID NO:10. В предпочтительном аспекте, антитело представляет собой бимекизумаб. Антитело можно вводить в виде фармацевтической композиции. Антитело необязательно вводят подкожно или внутривенно. В одном или более вариантах осуществления, псориаз, подвергаемый лечению, применяя способ настоящего изобретения, можно выбрать из пятнистого псориаза, пустулезного псориаза, генерализованного пустулезного псориаза, ладонно-подошвенного псориаза, псориаза ногтей, псориаза кожи черепа, каплевидного псориаза, эритродермического псориаза, инверсивного псориаза.

Настоящее изобретение также включает способ лечения псориаза у людей, включающий стадию введения человеку терапевтически эффективного количества нейтрализующего антитела, которое связывается с человеческим IL-17A и человеческим IL-17F.

Кроме того, настоящее изобретение относится к способу лечения псориаза у людей, включающему стадию введения пациенту нейтрализующего антитела, которое связывается с человеческим IL-17A и человеческим IL-17F, в количестве, которое является эффективным для обеспечения PASI75 ответа на 8 неделю или 12 неделю или PASI90 ответа на 8 неделю или 12 неделю. В предпочтительном аспекте, нейтрализующее антитело вводят в количестве, которое является эффективным для обеспечения PASI75 ответа или PASI90 ответа на 8 неделю или 12 неделю в популяции пациентов. В различных аспектах, антитело специфически связывается с эпитопом человеческого IL-17F, причем эпитоп содержит один или более остатков, выбранных из ARG47, ARG73, LEU75 и ILE86 SEQ ID NO: 27, и/или специфически связывается с эпитопом человеческого IL-17A, причем эпитоп содержит один или более остатков, выбранных из TYR44, ASN45, ARG46, TRP51, ASN52, HIS54 и ASP84 SEQ ID NO: 28. В различных аспектах, антитело связывается с тем же эпитопом в человеческом IL-17A, человеческом IL-17F или IL-17 A/F гетеродимере, как нейтрализующее антитело, которое содержит тяжелую цепь, содержащую последовательность, указанную в SEQ ID NO: 11, и легкую цепь, содержащую последовательность, указанную в SEQ ID NO: 10. В различных аспектах, антитело перекрестно блокирует нейтрализующее антитело, которое содержит тяжелую цепь, содержащую последовательность, указанную в SEQ ID NO: 11, и легкую цепь, содержащую последовательность, указанную в SEQ ID NO: 10, и связывается с человеческим IL-17A и человеческим IL-17F. Необязательно, антитело содержит вариабельный участок легкой цепи и вариабельный участок тяжелой цепи, где вариабельный участок легкой цепи содержит последовательность, указанную в SEQ ID NO:10. В предпочтительном аспекте, антитело представляет собой бимекизумаб. Антитело необязательно вводят в виде фармацевтической композиции. Антитело можно вводить подкожно или внутривенно.

Способ лечения псориаза необязательно включает введение человеку ударной дозы нейтрализующего антитела, с последующей, по меньшей мере, одной поддерживающей дозой антитела. В различных вариантах осуществления, ударная доза составляет 80-560 мг и, по меньшей мере, одна поддерживающая доза составляет 40-320 мг. В одном аспекте способа, ударная доза составляет 80 мг, и, по меньшей мере, одна поддерживающая доза составляет 40 мг. В другом аспекте способа, ударная доза составляет 160 мг, и, по меньшей мере, одна поддерживающая доза составляет 80 мг. В следующем аспекте, ударная доза составляет 240 мг, и, по меньшей мере, одна поддерживающая доза составляет 160 мг. В следующем аспекте, ударная доза составляет 320 мг, и, по меньшей мере, одна поддерживающая доза составляет 160 мг. В другом аспекте, ударная доза составляет 560 мг, и, по меньшей мере, одна поддерживающая доза составляет 320 мг. В различных вариантах осуществления, после ударной дозы вводят две поддерживающие дозы. Необязательно, после ударной дозы вводят, по меньшей мере, одну поддерживающую дозу с интервалом три недели или интервалом четыре недели.

В любом из вариантов осуществления способа лечения псориаза у людей, включающего стадию введения человеку нейтрализующего антитела, которое связывается с человеческим IL-17A и человеческим IL-17F, описанными в настоящем изобретении, человек необязательно представляет собой пациента, неадекватно отвечающего на, по меньшей мере, одно небиологическое модифицирующее заболевание антиревматическое лекарственное средство (ʺDMARDʺ) и/или одно или более одобренных биологических DMARD (например, TNF ингибитор, такой как анти-TNF антитело, причем примеры включают инфликсумаб или адалимумаб, или растворимый TNF рецептор, такой как этанерцепт). Примеры небиологических DMARD включают сульфсалазин, метотрексат, циклоспорин, гидроксихлороквин, азатиоприн и лефлуномид. Необязательно человек представляет собой пациента, неадекватно отвечающего на, по меньшей мере, одно нестероидное противовоспалительное лекарственное средство (NSAID). Примеры подходящих NSAID включают, но не ограничиваются, производное пропионовой кислоты, производное уксусной кислоты, производные еноловой кислоты, производные фенамовой кислоты, cox ингибиторы, ибупрофен, фенопрофен и аспирин.

Настоящее изобретение также относится к способу лечения псориаза у людей, одновременно подвергаемых лечению метотрексатом или другим небиологическим DMARD (таким как лефлуномид) или нестероидным противовоспалительным лекарственным средством (NSAID) и/или стероидом, включающему стадию введения человеку нейтрализующего антитела, которое связывается с человеческим IL-17A и человеческим IL-17F.

Настоящее изобретение также относится к способу ослабления поражения суставов у людей, включающему стадию введения человеку нейтрализующего антитела, которое связывается с человеческим IL-17A и человеческим IL-17F. Снижение поражений суставов необязательно измеряют ACR критерием. В различных аспектах, антитело специфически связывается с эпитопом человеческого IL-17F, причем эпитоп содержит один или более остатков, выбранных из ARG47, ARG73, LEU75 и ILE86 SEQ ID NO: 27. Альтернативно или в добавление, антитело специфически связывается с эпитопом человеческого IL-17A, причем эпитоп содержит один или более остатков, выбранных из TYR44, ASN45, ARG46, TRP51, ASN52, HIS54 и ASP84 SEQ ID NO: 28. В различных аспектах, антитело связывается с тем же эпитопом в человеческом IL-17A, человеческом IL-17F или IL-17 A/F гетеродимере, как нейтрализующее антитело, которое содержит тяжелую цепь, содержащую последовательность, указанную в SEQ ID NO: 11, и легкую цепь, содержащую последовательность, указанную в SEQ ID NO: 10. В различных аспектах, антитело перекрестно блокирует нейтрализующее антитело, которое содержит тяжелую цепь, содержащую последовательность, указанную в SEQ ID NO: 11, и легкую цепь, содержащую последовательность, указанную в SEQ ID NO: 10, и связывается с человеческим IL-17A и человеческим IL-17F. Необязательно, антитело содержит вариабельный участок легкой цепи и вариабельный участок тяжелой цепи, где вариабельный участок легкой цепи содержит последовательность, указанную в SEQ ID NO:10. В предпочтительном аспекте, антитело представляет собой бимекизумаб. Антитело можно вводить в виде фармацевтической композиции. Антитело необязательно вводят подкожно или внутривенно. Данные поражения суставов могут также включать поражение периферических суставов, включая синовит, энтезит и/или дактилит.

Настоящее изобретение относится к способу облегчения псориаза и ослабления поражения суставов у людей, включающему стадию введения человеку нейтрализующего антитела, которое связывается с человеческим IL-17A и человеческим IL-17F. В различных вариантах осуществления, псориаз представляет собой пятнистый псориаз. Ослабление пятнистого псориаза необязательно измеряют PASI критерием, и/или ослабление поражений суставов необязательно измеряют ACR критерием. Альтернативно или в добавление, ослабление поражений суставов, таких как структурное прогрессирование, можно измерить модифицированным общим счетом Шарпа (mTSS). При измерении ослабление энтезита или дактилита можно измерить снижением баллов лидского индекса энтезопатий (LEI) и лидского индекса дактилита (LDI), соответственно. В различных аспектах, антитело специфически связывается с эпитопом человеческого IL-17F, причем эпитоп содержит один или более остатков, выбранных из ARG47, ARG73, LEU75 и ILE86 SEQ ID NO: 27. Альтернативно или в добавление, антитело специфически связывается с эпитопом человеческого IL-17A, причем эпитоп содержит один или более остатков, выбранных из TYR44, ASN45, ARG46, TRP51, ASN52, HIS54 и ASP84 SEQ ID NO: 28. В различных аспектах, антитело связывается с тем же эпитопом в человеческом IL-17A, человеческом IL-17F или IL-17 A/F гетеродимере, как нейтрализующее антитело, которое содержит тяжелую цепь, содержащую последовательность, указанную в SEQ ID NO: 11, и легкую цепь, содержащую последовательность, указанную в SEQ ID NO: 10. В различных аспектах, антитело перекрестно блокирует нейтрализующее антитело, которое содержит тяжелую цепь, содержащую последовательность, указанную в SEQ ID NO: 11, и легкую цепь, содержащую последовательность, указанную в SEQ ID NO: 10, и связывается с человеческим IL-17A и человеческим IL-17F. Необязательно, антитело содержит вариабельный участок легкой цепи и вариабельный участок тяжелой цепи, где вариабельный участок легкой цепи содержит последовательность, указанную в SEQ ID NO:10. В предпочтительном аспекте, антитело представляет собой бимекизумаб. Антитело можно вводить в виде фармацевтической композиции. Антитело необязательно вводят подкожно или внутривенно.

Кроме того, настоящее изобретение относится к способу лечения псориатического артрита у людей, включающему стадию введения человеку ударной дозы нейтрализующего антитела, которое связывается с человеческим IL-17A и человеческим IL-17F, с последующим введением, по меньшей мере, одной поддерживающей дозы антитела. Необязательно, ударная доза составляет 80-560 мг, и, по меньшей мере, одна поддерживающая доза составляет 40-320 мг. В одном аспекте способа, ударная доза составляет 80 мг, и, по меньшей мере, одна поддерживающая доза составляет 40 мг. В другом аспекте способа, ударная доза составляет 160 мг, и, по меньшей мере, одна поддерживающая доза составляет 80 мг. В следующем аспекте, ударная доза составляет 240 мг, и, по меньшей мере, одна поддерживающая доза составляет 160 мг. В следующем аспекте, ударная доза составляет 320 мг, и, по меньшей мере, одна поддерживающая доза составляет 160 мг. В другом аспекте, ударная доза составляет 560 мг, и, по меньшей мере, одна поддерживающая доза составляет 320 мг. В различных вариантах осуществления, после ударной дозы вводят две поддерживающие дозы. Необязательно, после ударной дозы вводят, по меньшей мере, одну поддерживающую дозу через интервал в три недели или интервал в четыре недели. Антитело, в различных вариантах осуществления, специфически связывается с эпитопом человеческого IL-17F, причем эпитоп содержит один или более остатков, выбранных из ARG47, ARG73, LEU75 и ILE86 SEQ ID NO: 27. Альтернативно или в добавление, антитело специфически связывается с эпитопом человеческого IL-17A, причем эпитоп содержит один или более остатков, выбранных из TYR44, ASN45, ARG46, TRP51, ASN52, HIS54 и ASP84 SEQ ID NO: 28. В различных аспектах, антитело связывается с тем же эпитопом в человеческом IL-17A, человеческом IL-17F или IL-17 A/F гетеродимере, как нейтрализующее антитело, которое содержит тяжелую цепь, содержащую последовательность, указанную в SEQ ID NO: 11, и легкую цепь, содержащую последовательность, указанную в SEQ ID NO: 10. В различных аспектах, антитело перекрестно блокирует нейтрализующее антитело, которое содержит тяжелую цепь, содержащую последовательность, указанную в SEQ ID NO: 11, и легкую цепь, содержащую последовательность, указанную в SEQ ID NO: 10, и связывается с человеческим IL-17A и человеческим IL-17F. В различных аспектах, антитело содержит вариабельный участок легкой цепи и вариабельный участок тяжелой цепи, где вариабельный участок легкой цепи содержит последовательность, указанную в SEQ ID NO:10. В предпочтительном аспекте, антитело представляет собой бимекизумаб. Антитело можно вводить в виде фармацевтической композиции. Антитело необязательно вводят подкожно или внутривенно.

Один вариант настоящего изобретения настоящего изобретения может включать способ лечения псориатического артрита у людей, включающего стадию введения человеку, по меньшей мере, одной дозы нейтрализующего антитела, которое связывается с человеческим IL-17A и человеческим IL-17F. В различных вариантах осуществления, по меньшей мере, одна доза составляет 40-640 мг антитела. Например, в различных аспектах, по меньшей мере, одна доза составляет 40 мг антитела. В различных аспектах, по меньшей мере, одна доза составляет 80 мг антитела. В различных аспектах, по меньшей мере, одна доза составляет 160 мг антитела. В различных аспектах, по меньшей мере, одна доза составляет 240 мг антитела. В различных аспектах, по меньшей мере, одна доза составляет 320 мг антитела. В различных аспектах, по меньшей мере, одна доза составляет 480 мг антитела. В различных аспектах, по меньшей мере, одна доза составляет 560 мг антитела. В различных аспектах, по меньшей мере, одна доза составляет 640 мг антитела. В любом из данных аспектов, дозы необязательно вводят через интервал в три недели или интервал в четыре недели. В любом из данных аспектов, дозы необязательно вводят через интервал в шесть недель или интервал в двенадцать недель. В любом из данных аспектов, антитело специфически связывается с эпитопом человеческого IL-17F, причем эпитоп содержит один или более остатков, выбранных из ARG47, ARG73, LEU75 и ILE86 SEQ ID NO: 27. Альтернативно или в добавление, антитело специфически связывается с эпитопом человеческого IL-17A, причем эпитоп содержит один или более остатков, выбранных из TYR44, ASN45, ARG46, TRP51, ASN52, HIS54 и ASP84 SEQ ID NO: 28. В различных аспектах, антитело связывается с тем же эпитопом в человеческом IL-17A, человеческом IL-17F или IL-17 A/F гетеродимере, как нейтрализующее антитело, которое содержит тяжелую цепь, содержащую последовательность, указанную в SEQ ID NO: 11, и легкую цепь, содержащую последовательность, указанную в SEQ ID NO: 10. В различных аспектах, антитело перекрестно блокирует нейтрализующее антитело, которое содержит тяжелую цепь, содержащую последовательность, указанную в SEQ ID NO: 11, и легкую цепь, содержащую последовательность, указанную в SEQ ID NO: 10, и связывается с человеческим IL-17A и человеческим IL-17F. Необязательно, антитело содержит вариабельный участок легкой цепи и вариабельный участок тяжелой цепи, где вариабельный участок легкой цепи содержит последовательность, указанную в SEQ ID NO:10. В предпочтительном аспекте, антитело представляет собой бимекизумаб. Антитело можно вводить в виде фармацевтической композиции. Антитело необязательно вводят подкожно или внутривенно.

Настоящее изобретение также относится к способу лечения ревматоидного артрита у людей, включающему стадию введения человеку нейтрализующего антитела, которое связывается с человеческим IL-17A и человеческим IL-17F. В различных аспектах, антитело специфически связывается с эпитопом человеческого IL-17F, причем эпитоп содержит один или более остатков, выбранных из ARG47, ARG73, LEU75 и ILE86 SEQ ID NO: 27. Альтернативно или в добавление, антитело специфически связывается с эпитопом человеческого IL-17A, причем эпитоп содержит один или более остатков, выбранных из TYR44, ASN45, ARG46, TRP51, ASN52, HIS54 и ASP84 SEQ ID NO: 28. В различных вариантах осуществления, антитело связывается с тем же эпитопом в человеческом IL-17A, человеческом IL-17F или IL-17 A/F гетеродимере, как нейтрализующее антитело, которое содержит тяжелую цепь, содержащую последовательность, указанную в SEQ ID NO: 11, и легкую цепь, содержащую последовательность, указанную в SEQ ID NO: 10. Необязательно, антитело перекрестно блокирует нейтрализующее антитело, которое содержит тяжелую цепь, содержащую последовательность, указанную в SEQ ID NO: 11, и легкую цепь, содержащую последовательность, указанную в SEQ ID NO: 10, и связывается с человеческим IL-17A и человеческим IL-17F. В различных вариантах осуществления, антитело содержит вариабельный участок легкой цепи и вариабельный участок тяжелой цепи, где вариабельный участок легкой цепи содержит последовательность, указанную в SEQ ID NO:10. В предпочтительном аспекте, антитело представляет собой бимекизумаб. Антитело можно вводить в виде фармацевтической композиции. Антитело необязательно вводят подкожно или внутривенно.

В различных вариантах осуществления способа лечения ревматоидного артрита у людей, человек имеет диагноз приобретенного ревматоидного артрита; необязательно, человек имеет возраст, по меньшей мере, 18 лет. Также необязательно, чтобы человеку был поставлен диагноз, по меньшей мере, за шесть месяцев до введения антитела. В различных вариантах осуществления, человека классифицируют на основе ACR/EULAR 2010 критерия. В различных вариантах осуществления способа лечения ревматоидного артрита у людей, человек имеет активный артрит. В различных аспектах способа лечения ревматоидного артрита у людей, человек представляет собой пациента, неадекватно отвечающего, по меньшей мере, на одно небиологическое модифицирующее заболевание антиревматическое лекарственное средство (ʺDMARDʺ) и/или, по меньшей мере, одно одобренное биологическое DMARD. Альтернативно или в добавление, человек может представлять собой пациента, неадекватно отвечающего, по меньшей мере, на одно нестероидное противовоспалительное лекарственное средство (NSAID).

Настоящее изобретение относится к способу лечения ревматоидного артрита у людей, одновременно подвергаемых лечению метотрексатом или другим небиологическим DMARD (таким как лефлуномид) или нестероидным противовоспалительным лекарственным средством (NSAID) и/или стероидом, включающему стадию введения человеку нейтрализующего антитела, которое связывается с человеческим IL-17A и человеческим IL-17F. В различных аспектах, антитело специфически связывается с эпитопом человеческого IL-17F, причем эпитоп содержит один или более остатков, выбранных из ARG47, ARG73, LEU75 и ILE86 SEQ ID NO: 27. Альтернативно или в добавление, антитело специфически связывается с эпитопом человеческого IL-17A, причем эпитоп содержит один или более остатков, выбранных из TYR44, ASN45, ARG46, TRP51, ASN52, HIS54 и ASP84 SEQ ID NO: 28. Необязательно, антитело связывается с тем же эпитопом в человеческом IL-17A, человеческом IL-17F или IL-17 A/F гетеродимере, как нейтрализующее антитело, которое содержит тяжелую цепь, содержащую последовательность, указанную в SEQ ID NO: 11, и легкую цепь, содержащую последовательность, указанную в SEQ ID NO: 10. В различных аспектах, антитело перекрестно блокирует нейтрализующее антитело, которое содержит тяжелую цепь, содержащую последовательность, указанную в SEQ ID NO: 11, и легкую цепь, содержащую последовательность, указанную в SEQ ID NO: 10, и связывается с человеческим IL-17A и человеческим IL-17F. В различных аспектах, антитело содержит вариабельный участок легкой цепи и вариабельный участок тяжелой цепи, где вариабельный участок легкой цепи содержит последовательность, указанную в SEQ ID NO:10. В предпочтительном аспекте, антитело представляет собой бимекизумаб. Антитело можно вводить в виде фармацевтической композиции. Антитело необязательно вводят подкожно или внутривенно.

Настоящее изобретение включает способ лечения ревматоидного артрита у людей, включающий стадию введения человеку терапевтически эффективного количества нейтрализующего антитела, которое связывается с человеческим IL-17A и человеческим IL-17F. В различных аспектах, антитело специфически связывается с эпитопом человеческого IL-17F, причем эпитоп содержит один или более остатков, выбранных из ARG47, ARG73, LEU75 и ILE86 SEQ ID NO: 27. Альтернативно или в добавление, антитело специфически связывается с эпитопом человеческого IL-17A, причем эпитоп содержит один или более остатков, выбранных из TYR44, ASN45, ARG46, TRP51, ASN52, HIS54 и ASP84 SEQ ID NO: 28. В различных аспектах, антитело связывается с тем же эпитопом в человеческом IL-17A, человеческом IL-17F или IL-17 A/F гетеродимере, как нейтрализующее антитело, которое содержит тяжелую цепь, содержащую последовательность, указанную в SEQ ID NO: 11, и легкую цепь, содержащую последовательность, указанную в SEQ ID NO: 10. В различных аспектах, антитело перекрестно блокирует нейтрализующее антитело, которое содержит тяжелую цепь, содержащую последовательность, указанную в SEQ ID NO: 11, и легкую цепь, содержащую последовательность, указанную в SEQ ID NO: 10, и связывается с человеческим IL-17A и человеческим IL-17F. Необязательно, антитело содержит вариабельный участок легкой цепи и вариабельный участок тяжелой цепи, где вариабельный участок легкой цепи содержит последовательность, указанную в SEQ ID NO:10. В предпочтительном аспекте, антитело представляет собой бимекизумаб. Антитело можно вводить в виде фармацевтической композиции. Антитело необязательно вводят подкожно или внутривенно.

Кроме того, настоящее изобретение включает способ лечения ревматоидного артрита у пациента, являющегося человеком, включающий стадию введения пациенту нейтрализующего антитела, которое связывается с человеческим IL-17A и человеческим IL-17F, в количестве, которое является эффективным для обеспечения ACR20 ответа на 8 неделю или 12 неделю, ACR50 ответа на 8 неделю или 12 неделю, или ACR70 ответа на 8 неделю или 12 неделю в популяции пациентов, нуждающихся в лечении. Например, в различных аспектах, вводимое количество является эффективным для обеспечения ACR50 ответа на 8 неделю или 12 неделю, или ACR70 ответа на 8 неделю или 12 неделю в популяции пациентов. В предпочтительном аспекте, количество является эффективным для обеспечения ACR70 ответа на 8 неделю или 12 неделю в популяции пациентов, нуждающихся в лечении. В различных аспектах, антитело специфически связывается с эпитопом человеческого IL-17F, причем эпитоп содержит один или более остатков, выбранных из ARG47, ARG73, LEU75 и ILE86 SEQ ID NO: 27. Альтернативно или в добавление, антитело специфически связывается с эпитопом человеческого IL-17A, причем эпитоп содержит один или более остатков, выбранных из TYR44, ASN45, ARG46, TRP51, ASN52, HIS54 и ASP84 SEQ ID NO: 28. В различных вариантах осуществления, антитело связывается с тем же эпитопом в человеческом IL-17A, человеческом IL-17F или IL-17 A/F гетеродимере, как нейтрализующее антитело, которое содержит тяжелую цепь, содержащую последовательность, указанную в SEQ ID NO: 11, и легкую цепь, содержащую последовательность, указанную в SEQ ID NO: 10. В различных вариантах осуществления, антитело перекрестно блокирует нейтрализующее антитело, которое содержит тяжелую цепь, содержащую последовательность, указанную в SEQ ID NO: 11, и легкую цепь, содержащую последовательность, указанную в SEQ ID NO: 10, и связывается с человеческим IL-17A и человеческим IL-17F. Необязательно, антитело содержит вариабельный участок легкой цепи и вариабельный участок тяжелой цепи, где вариабельный участок легкой цепи содержит последовательность, указанную в SEQ ID NO:10. В предпочтительном аспекте настоящего изобретения, антитело представляет собой бимекизумаб. Антитело можно вводить в виде фармацевтической композиции. Антитело необязательно вводят подкожно или внутривенно.

Настоящее изобретение также относится к способу лечения ревматоидного артрита у людей, включающему стадию введения человеку ударной дозы нейтрализующего антитела, которое связывается с человеческим IL-17A и человеческим IL-17F, с последующим введением, по меньшей мере, одной поддерживающей дозы антитела. В различных аспектах, ударная доза составляет 80-560 мг, и, по меньшей мере, одна поддерживающая доза составляет 40-320 мг. Например, в различных вариантах осуществления, ударная доза составляет 80 мг, и, по меньшей мере, одна поддерживающая доза составляет 40 мг, ударная доза составляет 160 мг, и, по меньшей мере, одна поддерживающая доза составляет 80 мг, ударная доза составляет 240 мг, и, по меньшей мере, одна поддерживающая доза составляет 160 мг, ударная доза составляет 320 мг, и, по меньшей мере, одна поддерживающая доза составляет 160 мг, или ударная доза составляет 560 мг, и, по меньшей мере, одна поддерживающая доза составляет 320 мг. Необязательно, после ударной дозы вводят две поддерживающие дозы. Также необязательно, после ударной дозы вводят, по меньшей мере, одну поддерживающую дозу через интервал в три недели или интервал в четыре недели. В различных вариантах осуществления, антитело специфически связывается с эпитопом человеческого IL-17F, причем эпитоп содержит один или более остатков, выбранных из ARG47, ARG73, LEU75 и ILE86 SEQ ID NO: 27. Альтернативно или в добавление, антитело специфически связывается с эпитопом человеческого IL-17A, причем эпитоп содержит один или более остатков, выбранных из TYR44, ASN45, ARG46, TRP51, ASN52, HIS54 и ASP84 SEQ ID NO: 28. В различных аспектах, антитело связывается с тем же эпитопом в человеческом IL-17A, человеческом IL-17F или IL-17 A/F гетеродимере, как нейтрализующее антитело, которое содержит тяжелую цепь, содержащую последовательность, указанную в SEQ ID NO: 11, и легкую цепь, содержащую последовательность, указанную в SEQ ID NO: 10. В различных аспектах, антитело перекрестно блокирует нейтрализующее антитело, которое содержит тяжелую цепь, содержащую последовательность, указанную в SEQ ID NO: 11, и легкую цепь, содержащую последовательность, указанную в SEQ ID NO: 10, и связывается с человеческим IL-17A и человеческим IL-17F. Необязательно, антитело содержит вариабельный участок легкой цепи и вариабельный участок тяжелой цепи, где вариабельный участок легкой цепи содержит последовательность, указанную в SEQ ID NO:10. В предпочтительном аспекте, антитело представляет собой бимекизумаб. Антитело можно вводить в виде фармацевтической композиции. Антитело необязательно вводят подкожно или внутривенно.

Кроме того, настоящее изобретение относится к способу лечения ревматоидного артрита у людей, включающему стадию введения человеку, по меньшей мере, одной дозы нейтрализующего антитела, которое связывается с человеческим IL-17A и человеческим IL-17F. Необязательно, по меньшей мере, одна доза составляет 40-640 мг антитела. Например, по меньшей мере, одна доза составляет 40 мг антитела или 80 мг антитела или 160 мг антитела или 240 мг антитела или 320 мг антитела или 480 мг антитела или 560 мг антитела или 640 мг антитела. Также необязательно, дозы вводят через интервал в три недели или интервал в четыре недели. В различных аспектах, антитело специфически связывается с эпитопом человеческого IL-17F, причем эпитоп содержит один или более остатков, выбранных из ARG47, ARG73, LEU75 и ILE86 SEQ ID NO: 27. Альтернативно или в добавление, антитело специфически связывается с эпитопом человеческого IL-17A, причем эпитоп содержит один или более остатков, выбранных из TYR44, ASN45, ARG46, TRP51, ASN52, HIS54 и ASP84 SEQ ID NO: 28. В различных аспектах, антитело связывается с тем же эпитопом в человеческом IL-17A, человеческом IL-17F или IL-17 A/F гетеродимере, как нейтрализующее антитело, которое содержит тяжелую цепь, содержащую последовательность, указанную в SEQ ID NO: 11, и легкую цепь, содержащую последовательность, указанную в SEQ ID NO: 10. В различных аспектах, антитело перекрестно блокирует нейтрализующее антитело, которое содержит тяжелую цепь, содержащую последовательность, указанную в SEQ ID NO: 11, и легкую цепь, содержащую последовательность, указанную в SEQ ID NO: 10, и связывается с человеческим IL-17A и человеческим IL-17F. Необязательно, антитело содержит вариабельный участок легкой цепи и вариабельный участок тяжелой цепи, где вариабельный участок легкой цепи содержит последовательность, указанную в SEQ ID NO:10. В предпочтительном аспекте, антитело представляет собой бимекизумаб. Антитело можно вводить в виде фармацевтической композиции. Антитело необязательно вводят подкожно или внутривенно.

Настоящее изобретение также относится к способу лечения аксиального спондилоартрита (например, анкилозирующего спондилита), включающему стадию введения человеку нейтрализующего антитела, которое связывается с человеческим IL-17A и человеческим IL-17F. Аксиальный спондилоартрит относится к группе воспалительных артритных заболеваний, которые, в первую очередь, повреждают позвоночник и другие суставы, вызывая воспаление и хроническую боль в позвоночнике и крестцово-подвздошных суставах, что может, в конце концов, приводить к образованию синдемофита и которые включают и анкилозирующий спондилит и нерентгенографический спондилит. Таким образом, настоящее изобретение относится к способу лечения (например, облегчения симптомов, замедления прогрессирования) анкилозирующего спондилита и/или нерентгенографического аксиального спондилоартрита (nr-axSpA). В различных аспектах, антитело специфически связывается с эпитопом человеческого IL-17F, причем эпитоп содержит один или более остатков, выбранных из ARG47, ARG73, LEU75 и ILE86 SEQ ID NO: 27. Альтернативно или в добавление, антитело специфически связывается с эпитопом человеческого IL-17A, причем эпитоп содержит один или более остатков, выбранных из TYR44, ASN45, ARG46, TRP51, ASN52, HIS54 и ASP84 SEQ ID NO: 28. В различных аспектах, антитело связывается с тем же эпитопом в человеческом IL-17A, человеческом IL-17F или IL-17 A/F гетеродимере, как нейтрализующее антитело, которое содержит тяжелую цепь, содержащую последовательность, указанную в SEQ ID NO: 11, и легкую цепь, содержащую последовательность, указанную в SEQ ID NO: 10. В различных аспектах, антитело перекрестно блокирует нейтрализующее антитело, которое содержит тяжелую цепь, содержащую последовательность, указанную в SEQ ID NO: 11, и легкую цепь, содержащую последовательность, указанную в SEQ ID NO: 10, и связывается с человеческим IL-17A и человеческим IL-17F. Необязательно, антитело содержит вариабельный участок легкой цепи и вариабельный участок тяжелой цепи, где вариабельный участок легкой цепи содержит последовательность, указанную в SEQ ID NO:10. В предпочтительном аспекте, антитело представляет собой бимекизумаб. Антитело можно вводить в виде фармацевтической композиции. Антитело необязательно вводят подкожно или внутривенно. Предпочтительно антитело вводят в терапевтически эффективном количестве. Любой из режимов дозирования, описанных в настоящем изобретении, является пригодным для применения в контексте данного способа. Например, в различных вариантах осуществления, способ включает введение субъекту 16 мг, 64 мг, 160 мг или 320 мг антитела каждые четыре недели, необязательно в течение периода лечения 12 недель, 36 недель, 48 недель или 52 недель. Количество и продолжительность введения является предпочтительно достаточными для достижения, по меньшей мере, ASAS20 ответа (например, ASAS40) на 2 неделю, 4 неделю, 8 неделю или 12 неделю лечения. ASAS шкала оценки и способы оценки тяжести аксиального спондилита дополнительно описаны в Ann Rheum Dis 2009;68;ii1-ii44. В одном примере количество и продолжительность введения является достаточным для достижения ASAS40 на 12 неделю лечения. В одном примере количество и продолжительность введения является достаточным для обеспечения, по меньшей мере, 30% или, по меньшей мере, 40% или, по меньшей мере, 45% или, по меньшей мере, 50% субъектов, достигающих ASAS40 ответа на 12 неделю лечения. В различных вариантах осуществления, настоящее изобретение относится к способу ингибирования (например, замедления прогрессирования) образования перихондральной кости у людей, таких как люди, страдающие от спондилоартрита (например, анкилозирующего спондилита), введением нейтрализующего антитела, которое связывается с человеческим IL-17A и человеческим IL-17F, как описано в настоящем изобретении. Образование перихондральной кости оценивают, например, радиографией.

В любом из вариантов осуществления способа лечения аксиального спондилоартрита, включающего анкилозирующий спондилит и nr-axSpA, у людей, включающего стадию введения человеку нейтрализующего антитела, которое связывается с человеческим IL-17A и человеческим IL-17F, человек необязательно имеет диагноз приобретенного анкилозирующего спондилита или nr-axSpA. Необязательно, человек имеет возраст, по меньшей мере, 18 лет, и/или ему поставлен диагноз, по меньшей мере, за шесть месяцев до введения антитела. Также необязательно, человек классифицирован на основе модифицированного Нью-Йоркского критерия или ASAS критерия. В любом из вариантов осуществления, описанных выше, человек имеет активный аксиальный артрит.

В любом из вариантов осуществления способа лечения аксиального спондилоартрита, включающего анкилозирующий спондилит и/или nr-axSpA, у людей, включающего стадию введения человеку нейтрализующего антитела, которое связывается с человеческим IL-17A и человеческим IL-17F, описанными в настоящем изобретении, человек необязательно представляет собой пациента, неадекватно отвечающего, по меньшей мере, на одно нестероидное противовоспалительное лекарственное средство (ʺNSAIDʺ) и/или одно или более одобренных биологических DMARD (например, TNF ингибитор, такой как анти-TNF антитело, причем примеры включают инфликсумаб или адалимумаб, или растворимый TNF рецептор, такой как этанерцепт).

Настоящее изобретение также относится к способу лечения аксиального спондилоартрита, включающего анкилозирующий спондилит и/или nr-axSpA, у людей, одновременно подвергаемых лечению нестероидным противовоспалительным лекарственным средством (NSAID), включающему стадию введения человеку нейтрализующего антитела, которое связывается с человеческим IL-17A и человеческим IL-17F.

Также включенным в настоящее изобретение является способ лечения псориатического артрита, включающий стадию введения нейтрализующего антитела, которое связывается с человеческим IL-17A и человеческим IL-17F, в количестве, которое является эффективным для обеспечения, по меньшей мере, 50% субъектов, достигающих ACR20 ответа на 8 неделю или 12 неделю. Например, количество является эффективным для обеспечения, по меньшей мере, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64 или 65% субъектов, достигающих ACR20 ответа на 8 неделю или 12 неделю. В одном примере, количество является эффективным для обеспечения, по меньшей мере, 50-90% или 60-90% или 63-91% субъектов, достигающих ACR20 ответа на 8 неделю или 12 неделю. В одном примере, количество является эффективным для обеспечения, по меньшей мере, 40%, по меньшей мере, 45%, по меньшей мере, 50% или, по меньшей мере, 55% субъектов, достигающих ACR50 ответа на 8 неделю или 12 неделю или 20 неделю. Альтернативно или в добавление, количество нейтрализующего антитела является эффективным для обеспечения, по меньшей мере, 80% субъектов, достигающих PASI75 ответа на 8 неделю или 12 неделю. Например, количество является эффективным для обеспечения 80-100% субъектов, достигающих PASI75 ответа на 8 неделю или 12 неделю, такое как количество, эффективное для обеспечения, по меньшей мере, 80, 85, 90, 95 или 99% субъектов, достигающих PASI75 ответа на 8 неделю или 12 неделю. В различных вариантах осуществления, количество нейтрализующего антитела является эффективным для обеспечения, по меньшей мере, 60% субъектов, достигающих PASI90 ответа или PASI100 ответа на 8 неделю или 12 неделю, например, количество, эффективное для обеспечения 60-100% или 62-96% субъектов, достигающих PASI90 ответа на 8 неделю или 12 неделю (такое как количество, эффективное для обеспечения, по меньшей мере, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95 или 96% субъектов, достигающих PASI90 ответа на 8 неделю или 12 неделю).

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ

Фигура 1: нуклеотидные и аминокислотные последовательности

Фигура 2: CASPAR критерий

Фигура 3a: PASI 50/75/90 ответ на 8 неделю для групп 1-4, описанных в примере 1.

Фигура 3b: Зависимость от времени PASI 90-ответа (PA0007) с первой дозы (0 день) до 140 дня (20 неделя) в примере 1.

Фигура 4: результаты исследования Future 1 секукинумаба: PASI

Фигура 5a: ACR20/50/70 ответ на 8 неделю для групп 1-4, описанных в примере 1.

Фигуры 5(b)-5(d): Сводные графики ACR20/50/70 степеней ответа из PA0007 от начала исследования (0 день) до 140 дня (20 неделя) (пример 1).

Фигура 6: результаты исследования Future 1 секукинумаба и результаты исследования RAPID PSA симзии: ACR20

Фигура 7: сводная таблица байесовского анализа

Фигура 8: сводная таблица результатов ACR20 ответа на 8 неделю при псориатическом артрите для зарегистрированных анти-TNF или анти-TNF, находящихся на III фазе исследований. Ссылки 1. Mease PJ, Gladman DD, Ritchlin CT, Ruderman EM, Steinfeld SD, Choy EH, et al. Adalimumab for the treatment of patients with moderately to severely active psoriatic arthritis: results of a double-blind, randomized, placebo-controlled trial. Arthritis and rheumatism. 2005;52(10):3279-89. 2. Kavanaugh A, McInnes I, Mease P, Krueger GG, Gladman D, Gomez-Reino J, et al. Golimumab, a new human tumor necrosis factor alpha antibody, administered every four weeks as a subcutaneous injection in psoriatic arthritis: Twenty-four-week efficacy and safety results of a randomized, placebo-controlled study. Arthritis and rheumatism. 2009;60(4):976-86. 3. Mease PJ, Fleischmann R, Deodhar AA, Wollenhaupt J, Khraishi M, Kielar D, et al. Effect of certolizumab pegol on signs and symptoms in patients with psoriatic arthritis: 24-week results of a Phase 3 double-blind randomised placebo-controlled study (RAPID-PsA). Annals of the rheumatic diseases. 2014;73(1):48-55. 4. McInnes IB, Mease PJ, Kirkham B, Kavanaugh A, Ritchlin CT, Rahman P, et al. Secukinumab, a human anti-interleukin-17A monoclonal antibody, in patients with psoriatic arthritis (FUTURE 2): a randomised, double-blind, placebo-controlled, phase 3 trial. Lancet. 2015;386(9999):1137-46. 5. McInnes IB, Kavanaugh A, Gottlieb AB, Puig L, Rahman P, Ritchlin C, et al. Efficacy and safety of ustekinumab in patients with active psoriatic arthritis: 1 year results of the phase 3, multicentre, double-blind, placebo-controlled PSUMMIT 1 trial. Lancet. 2013;382(9894):780-9.

Фигура 9: направленные CA028_0496.g3 PK концентрации

Фигура 10: сводный PK график расчетного подкожного (SC) дозирования, показывающий, что загрузочная доза 320, с последующими 160 мг один раз в 4 недели или 160 мг один раз в 4 недели и более, способна достигать концентраций в плазме, исследуемых в PA0007 при 3 максимальных дозах.

Фигура 11: изменение в процентах относительно исходного значения по шкале оценки тяжести повреждений в исследовании UP0008

Фигура 12: изменение в процентах для исходного значения по PASI в исследовании UP0008

Фигура 13: сводная таблица PASI 90 ответа в исследовании UP0008

Фигуры 14A-14C: среднее изменение в процентах относительно исходного значения в (A) LSS, (B) PASI и (C) PGA в группах с плацебо и бимекизумабом. закрашенные круги=плацебо; ромбы=8 мг бимекизумаба; закрашенные квадраты=40 мг бимекизумаба; полые квадраты=160 мг бимекизумаба; полые ромбы=480 мг бимекизумаб; полые треугольники=640 мг бимекизумаба.

Фигуры 15A-15G: фигуры 15A-15E представляют собой гистограммы, показывающие остеогенную генную экспрессию в hPDSC после лечения GFC (смесь факторов роста; первый столбик слева), GFC (IL-6) (смесь факторов роста без IL-6; второй столбик), TH-17SN (TH-17 супернатант в (GFC-IL-6), третий столбик), TH-17SN+IL-17A mAb ((TH-17 супернатант в (GFC-IL-6) с лечением IL-17A моноклональным антителом; четвертый столбик), или IL-17F mAb ((TH-17 супернатант в (GFC-IL-6) с лечением IL-17F моноклональным антителом; пятый столбик), или IL-17A/F mAb ((TH-17 супернатант в (GFC-IL-6) с лечением IL-17A/F моноклональным антителом; шестой столбик). Фигура 15F представляет собой гистограмму, показывающую in vitro минерализацию (y-axis=поглощение при 595 нм; столбики слева направо: контроль, GFC, GFC-IL-6, TH-17SN, IL-17A mAb, IL-17F mAb, IL-17A/F mAb). Фигура 15G представляет собой гистограмму, показывающую IL-6 генную экспрессию после обработки GFC (смесь факторов роста; первый столбик слева), GFC (-IL-6) (смесь факторов роста без IL-6; второй столбик), TH-17SN (TH-17 супернатант в (GFC-IL-6), третий столбик), TH-17SN+IL-17A mAb ((TH-17 супернатант в (GFC-IL-6) с лечением IL-17A моноклональным антителом; четвертый столбик), или IL-17F mAb ((TH-17 супернатант в (GFC-IL-6) с лечением IL-17F моноклональным антителом; пятый столбик), или IL-17A/F mAb ((TH-17 супернатант в (GFC-IL-6) с лечением IL-17A/F моноклональным антителом; шестой столбик). Результаты приведены как среднее кратное изменение экспрессии по сравнению с GM ± SEM. ***p<0,001; **p<0,01; *p<0,05, как сравнено однофакторным ANOVA (n=3) между всеми группами обработки.

Фигуры 16A-16B: гистограммы, показывающие снижение экспрессии IL-6 (фигура 16A) и RUNX2 (фигура 16B) в трех образцах пациентов (SRSC04, SRSCO6 и SRSCO7). hPDSC, обработанные 10% сывороткой AS пациентов (CTRL, первый столбец слева) или сывороткой AS пациентов с предварительным выдерживанием с IgG mAb контролем (второй столбец), IL-17A mAb (третий столбец), IL-17F mAb (четвертый столбец), IL-17A/F mAb (пятый столбец). Результаты приведены как средняя относительная экспрессия ± SEM. (***p<0,001; **p<0,01; *p<0,05) p<0,01 (сравнения между группами с нейтрализацией, как сравнено однофакторным ANOVA (n=3) во всех случаях).

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ НАСТОЯЩЕГО ИЗОБРЕТЕНИЯ

Антитела

В одном варианте осуществления, антитела настоящего изобретения специфически связываются с IL-17A. Специфическое связывание обозначает то, что антитела имеют большее сродство к IL-17A полипептидам, чем к другим полипептидам.

В одном варианте осуществления, антитела настоящего изобретения специфически связываются с IL-17F. Специфическое связывание обозначает то, что антитела имеют большее сродство к IL-17F полипептидам, чем к другим полипептидам.

В предпочтительном варианте осуществления, антитела настоящего изобретения специфически связываются с IL-17A и IL-17F. Специфическое связывание обозначает то, что антитела имеют большее сродство к IL-17A и IL-17F полипептидам (включая IL-17A/IL-17F гетеродимер), чем к другим полипептидам.

Предпочтительно, IL-17A и IL-17F полипептиды являются человеческими. В одном варианте осуществления, антитело также связывается с IL-17A и/или IL-17F макак-крабоедов.

Ясно, что антитело настоящего изобретения, которое нейтрализует и IL-17A и IL-17F, можно получить в виде перекрестно-реагирующего антитела, как описано в настоящем изобретении ниже или комбинированием IL-17A связывающего домена с IL-17F связывающим доменом в биспецифическом антителе.

В одном варианте осуществления, антитело настоящего изобретения, которое способно связываться и с IL-17A и с IL-17F, способно нейтрализовать активность обеих изоформ IL-17. Предпочтительно, антитело настоящего изобретения нейтрализует активность и IL-17A и IL-17F. В одном варианте осуществления, антитело настоящего изобретения также нейтрализует активность IL-17A/IL-17F гетеродимера. Следовательно, антитела, обеспечиваемые данным аспектом настоящего изобретения, обладают полезными свойствами, поскольку они могут ингибировать биологическую активность и IL-17A и IL-17F. Соответственно, настоящее изобретение также относится к применению данных антител в лечении и/или профилактике заболевания, опосредованного любым или обоими IL-17A или IL-17F, такого как аутоиммунное или воспалительное заболевание.

Как применяют в настоящем изобретении, термин ʺнейтрализующее антителоʺ описывает антитело, которое способно нейтрализовать биологическую сигнальную активность IL-17A и/или IL17F и/или IL-17A/F гетеродимера, например блокированием связывания IL-17A и/или IL17F с одним или более их рецепторами и блокированием связывания IL-17A/IL-17F гетеродимера с одним или более его рецепторами. Ясно, что термин ʺнейтрализацияʺ, как применяют в настоящем изобретении, относится к снижению биологической сигнальной активности, которое может быть частичным или полным. Кроме того, ясно, что степень нейтрализации IL-17A и IL-17F активности антителом, которое связывается и с IL-17A и с IL-17F, может быть одинаковой или различной. В одном варианте осуществления, степень нейтрализации активности IL-17A/IL-17F гетеродимера может быть одинаковой или отличной от степени нейтрализации IL-17A или IL-17F активности.

IL-17A или IL-17F полипептиды, или смесь двух, или клетки, экспрессирующие один или оба из указанных полипептидов, можно применять для получения антител, которые специфически узнают один или оба полипептида. IL-17 полипептиды (IL-17A и IL-17F) могут быть ʺзрелымиʺ полипептидами или биологически активными фрагментами или их производными, которые предпочтительно содержат сайт связывания с рецептором. Предпочтительно IL-17 полипептиды представляют собой зрелые полипептиды, обеспечиваемые в SEQ ID NO: 27 и 28 для IL-17A и IL-17F, соответственно. IL-17 полипептиды можно получить способом, хорошо известным в данной области техники из генно-инженерных клеток-хозяев, содержащих экспрессирующие системы, или их можно извлекать из природных биологических источников.

В данной заявке, термин ʺполипептидыʺ включает пептиды, полипептиды и белки. Их применяют взаимозаменяемо, если не указано иначе.

IL-17 полипептид может, в некоторых случаях, быть частью большего белка, такого как гибридный белок, например, слитый с аффинной меткой. Антитела, генерируемые против данных полипептидов, можно получить, когда требуется иммунизация животного, введением полипептидов животному, предпочтительно, животному, отличному от человека, применяя хорошо известные и стандартные способы, смотри, например, Handbook of Experimental Immunology, D. M. Weir (ed.), т. 4, Blackwell Scientific Publishers, Oxford, England, 1986). Можно иммунизировать многих теплокровных животных, таких как кролики, мыши, крысы, овцы, коровы или свиньи. Мыши, кролики, свиньи и крысы являются предпочтительными.

Антитела для применения в настоящем изобретении включают цельные антитела и функционально активные фрагменты или их производные, и они могут быть, но не ограничиваются, моноклональными, мультивалентными, мультиспецифичными, биспецифичными, полностью человеческими, гуманизированными или химерными антителами, доменными антителами, например, VH, VL, VHH, одноцепочечными антителами, Fab фрагментами, Fab′ и F(ab′)₂ фрагментами и эпитоп-связывающими фрагментами любого из приведенных выше. Другие фрагменты антител включают фрагменты, описанные в международных патентных заявках WO2005003169, WO2005003170, WO2005003171, WO2009040562 и WO2010035012. Фрагменты антител и способы их получения являются хорошо известными в данной области техники, смотри, например, Verma et al., 1998, Journal of Immunological Methods, 216, 165-181; Adair and Lawson, 2005. Therapeutic antobodies. Drug Design Reviews-Online 2(3):209-217.

Антитела для применения в настоящем изобретении включают молекулы иммуноглобулина и иммунологически активные части молекул иммуноглобулина, т.е., молекулы, которые содержат сайт связывания антигена, который специфически связывается с антигеном. Молекулы иммуноглобулина настоящего изобретения могут быть любого класса (например, IgG, IgE, IgM, IgD и IgA) или подкласса молекул иммуноглобулина.

Моноклональные антитела можно получить любым способом, известным в данной области техники, таким как гибридомный способ (Kohler & Milstein, 1975, Nature, 256:495-497), триомный способ, человеческий B-клеточный гибридомный способ (Kozbor et al., 1983, Immunology Today, 4:72) и EBV-гибридомный способ (Cole et al., Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, стр. 77-96, Alan R Liss, Inc., 1985).

Антитела для применения в настоящем изобретении можно также получить, применяя способ получения антител путем отбора одного лимфоцита клонированием и экспрессией кДНК вариабельной области иммуноглобулина, генерируемой из одиночных лимфоцитов, отобранных для продуцирования специфических антител, например, способами, описанными Babcook, J. et al., 1996, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93(15):7843-78481; WO92/02551; WO2004/051268 и международной патентной заявкой номер WO2004/106377.

Гуманизированные антитела представляют собой молекулы антитела из видов, отличных от человека, содержащие один или более гипервариабельных участков (CDR) из видов, отличных от человека, и каркасную область из молекулы человеческого иммуноглобулина (смотри, например, патент США No. 5585089; WO91/09967).

Химерные антитела представляют собой антитела, кодируемые генами иммуноглобулина, которые генетически сконструированы так, что гены легкой и тяжелой цепи состоят из сегментов генов иммуноглобулина, принадлежащих к различным видам. Данные химерные антитела, вероятно, являются менее антигенными. Бивалентные антитела можно получить способами, известными в данной области техники (Milstein et al., 1983, Nature 305:537-539; WO 93/08829, Traunecker et al., 1991, EMBO J. 10:3655-3659). Мультивалентные антитела могут обладать несколькими специфичностями или могут быть моноспецифичными (смотри, например, WO 92/22853 и WO05/113605).

В одном варианте осуществления, антитело, обеспечиваемое настоящим изобретением, представляет собой моноклональное антитело. В одном варианте осуществления, антитело, обеспечиваемое настоящим изобретением, представляет собой гуманизированные антитело. В одном варианте осуществления, антитело, обеспечиваемое настоящим изобретением, представляет собой химерное антитело. Молекулы антитела настоящего изобретения предпочтительно содержат комплементарную легкую цепь или комплементарную тяжелую цепь, соответственно.

Антитела для применения в настоящем изобретении можно также получить, применяя различные способы с применением фагового дисплея, известные в данной области техники, и они включают способы, описанные Brinkman et al. (in J. Immunol. Methods, 1995, 182: 41-50), Ames et al. (J. Immunol. Methods, 1995, 184:177-186), Kettleborough et al. (Eur. J. Immunol. 1994, 24:952-958), Persic et al. (Gene, 1997 187 9-18), Burton et al. (Advances in Immunology, 1994, 57:191-280) и WO 90/02809; WO 91/10737; WO 92/01047; WO 92/18619; WO 93/11236; WO 95/15982; WO 95/20401; и патенты США No. 5698426; 5223409; 5403484; 5580717; 5427908; 5750753; 5821047; 5571698; 5427908; 5516637; 5780225; 5658727; 5733743 и 5969108. Способы получения одноцепочечных антител, таких как антитела, описанные в патенте США No. 4946778, можно также приспосабливать для получения одноцепочечных антител, которые связываются с IL-17A и IL-17F. Кроме того, трансгенные мыши или другие организмы, включая других млекопитающих, можно применять для экспрессии гуманизированных антител, включая антитела в пределах объема настоящего изобретения.

В одном варианте осуществления, антитело, обеспечиваемое настоящим изобретением, представляет собой молекулу CDR-привитого антитела. Как применяют в настоящем изобретении, термин 'молекула CDR-привитого антитела' относится к молекуле антитела, в которой тяжелая и/или легкую цепь содержит один или более CDR (включая, при необходимости, один или более модифицированных CDR) из донорного антитела (например, мышиного моноклонального антитела), привитых к остову вариабельного участка тяжелой и/или легкой цепи акцепторного антитела (например, человеческого антитела). Для обзора, смотри Vaughan et al., Nature Biotechnology, 16, 535-539, 1998. В одном варианте осуществления, вместо переноса всего CDR, только один или более остатков, определяющих специфичность, из любого одного CDR, описанных в настоящем изобретении выше, переносят в остов человеческого антитела (смотри, например, Kashmiri et al., 2005, Methods, 36, 25-34). В одном варианте осуществления, только остатки, определяющие специфичность, из одного или более CDR, описанных в настоящем изобретении выше, переносят в остов человеческого антитела. В другом варианте осуществления, только остатки, определяющие специфичность, из каждого из CDR, описанных в настоящем изобретении выше, переносят в остов человеческого антитела.

Когда прививают CDR или остатки, определяющие специфичность, можно применять любую подходящую последовательность остова акцепторного вариабельного участка, с учетом класса/типа донорного антитела, из которого получены CDR, включая каркасные области мыши, примата и человека. Предпочтительно, CDR-привитое антитело согласно настоящему изобретению содержит вариабельный участок, содержащий человеческие акцепторные каркасные области, а также один или более CDR или остатков, определяющих специфичность, описанных выше. Таким образом, в одном варианте осуществления обеспечивают нейтрализующее CDR-привитое антитело, где вариабельный участок содержит человеческие акцепторные каркасные области и нечеловеческие донорные CDR.

Примеры человеческих остовов, которые можно применять в настоящем изобретении, представляют собой KOL, NEWM, REI, EU, TUR, TEI, LAY и POM (Kabat et al., выше). Например, KOL и NEWM можно применять для тяжелой цепи, REI можно применять для легкой цепи, и EU, LAY и POM можно применять и для тяжелой цепи и для легкой цепи. Альтернативно, можно применять последовательность зародышевой линии человека; она доступна, например: http://vbase.mrc-cpe.cam.ac.uk/. В CDR-привитом антителе настоящего изобретения акцепторные тяжелые и легкие цепи необязательно необходимо получать из того же антитела, и они могут, при необходимости, содержат составные цепи, содержащие каркасные области, полученные из различных цепей.

Как описано в настоящем изобретении выше, молекула антитела настоящего изобретения может включать полную молекулу антитела, содержащую тяжелую и легкую цепи полной длины или их фрагмент, такой как доменное антитело, например, VH, VL, VHH, Fab, модифицированный Fab, Fab′, F(ab′)₂, Fv или scFv фрагмент.

Ясно, что антитела настоящего изобретения, в частности фрагменты антитела, описанные выше, можно вводить в другие форматы антител, в частности, мультиспецифические антитела, такие как би или триспецифические антитела, где специфичность определяется антителом настоящего изобретения, т.е., специфичность к IL-17A и IL-17F (включая IL-17A/F гетеродимер). Соответственно, в одном варианте осуществления, настоящее изобретение относится к мультиспецифичному антителу, содержащему один или более фрагментов антител, описанных в настоящем изобретении выше. Данные мультиспецифичные антитела могут содержать один или более дополнительных фрагментов антител со связывающей специфичностью к другим антигенам, таким как сывороточный альбумин, такой как человеческий сывороточный альбумин для того, чтобы продлить период полужизни мультиспецифичного антитела. Например, фрагменты антитела, описанного в WO2012/156219, и их комбинации или варианты, которые содержат и анти-IL-17A/F VHH связывающий домен и VHH связывающий домен сывороточного альбумина.

Примеры мультиспецифичных антител включают би, три или тетравалентные антитела, Bis-scFv, диатела, тритела, тетратела, битела и тритела (смотри, например Holliger and Hudson, 2005, Nature Biotech 23(9): 1126-1136; Schoonjans et al. 2001, Biomolecular Engineering, 17 (6), 193-202). Другие мультиспецифичние антитела включают Fab-Fv, Fab-dsFv, Fab-Fv-Fv. Fab-Fv-Fc и Fab-dsFv-PEG фрагменты, описанные в WO2009040562, WO2010035012, WO2011/08609, WO2011/030107 и WO2011/061492, соответственно.

Домены константных участков молекулы антитела настоящего изобретения, если они присутствуют, можно выбрать с учетом предлагаемой функции молекулы антитела, и в частности эффекторных функций, которые могут требоваться. Например, домены константных участков могут представлять собой человеческие IgA, IgD, IgE, IgG или IgM домены. В частности, можно применять домены константных участков человеческого IgG, особенно IgG1 и IgG3 изотипов, когда молекула антитела предполагается для терапевтических применений и требуются эффекторные функции антитела. Альтернативно, IgG2 и IgG4 изотипы можно применять, когда молекула антитела предполагается для терапевтических целей, и эффекторные функции антитела не требуются, например, просто для блокирования активности IL-17. Например, можно применять IgG4 молекулы, в которых серин в положении 241 заменен на пролин, как описано в Angal et al., Molecular Immunology, 1993, 30 (1), 105-108. Особенно предпочтительной является IgG4 константная область, которая содержит данное изменение.

Специалисту в данной области техники также ясно, что антитела могут подвергаться ряду посттрансляционных модификаций. Тип и степень данных модификаций часто зависит от клеточной линии хозяина, применяемой для экспрессии антитела, а также условий выращивания. Данные модификации могут включать варианты с гликозилированием, окислением метионина, образованием дикетопиперазина, изомеризацией аспартата и деаминирования аспарагина. Частая модификация представляет собой потерю основного остатка на карбоксильном конце (такого как лизин или аргинин) в результате действия карбоксипептидаз (как описано в Harris, R J. Journal of Chromatography 705:129-134, 1995). Соответственно, C-концевой лизин тяжелой цепи антитела, например, как показано на фигуре рисунке 1 SEQ ID NO: 16, может отсутствовать.

В одном варианте осуществления, тяжелая цепь антитела содержит CH1 домен, и легкая цепь антитела содержит CL домен, или каппа или лямбда.

Полностью человеческие антитела представляют собой антитела, в которых вариабельные участки и константные участки (при наличие) и тяжелой и легкой цепей являются человеческого происхождения, или по существу идентичными последовательностям человеческого происхождения, не обязательно из одного антитела. Примеры полностью человеческих антител могут включать антитела, полученные, например, способами фагового дисплея, описанными выше, и антитела, полученные мышами, в которых гены вариабельного и константного участков иммуноглобулина мыши заменены на их человеческие аналоги, например, как в общем описано в EP0546073 B1, патенте США No. 5545806, патенте США No. 5569825, патенте США No. 5625126, патенте США No. 5633425, патенте США No. 5661016, патенте США No. 5770429, EP 0438474 B1 и EP0463151 B1.

Антитела выше описывают с целью только ссылки и примера, и они не ограничивают объем настоящего изобретения.

Ингибиторы активности IL-17A и IL-17F являются известными в данной области техники, например, ингибиторы, описанные в настоящем изобретении. Антитела, которые связываются и с IL-17A и с IL-17F, описаны в WO2007/106769, WO2008/047134, WO2009/136286, WO2010/025400, и WO2012/156219. IL-17A и IL-17F активность можно также антогонизировать применением анти-IL-17RC антитела или IL-17RC гибридного белка, как описано в US2007196371A.

Патент США No. 8303953 (дата приоритета 18 октября 2006) описывает антитело с высоким сродством, CA028_00496, которое связывается с человеческим IL-17A, IL-17F и IL-17A/F гетеродимером, последовательность которого приведена в настоящем изобретении на фигуре [1]. CA028_0496 представляет собой гуманизированное нейтрализующее антитело, которое содержит привитые вариабельные участки gL7 и gH9, последовательность которого приведена в патенте США No. 8303953 (дата приоритета 18 октября 2006) и в настоящем изобретении на фигуре [1]. Акцепторный остов тяжелой цепи представляет собой последовательность зародышевой линии человека VH3 1-3 3-07 с остовом 4, начинающимся с данного положения JH-участка человеческой зародышевой линии JH4. Акцепторный остов легкой цепи представляет собой последовательность зародышевой линии человека VK1 2-1-(1) L4, с остовом 4, начинающимся с данного положения JK-участка человеческой зародышевой линии JK1. Примеры 2-4 патента США No. 8303953, а также принципы работы с ДНК и параграф с общими способами в нем, описывают характеризацию и испытание нейтрализующей активности и сродства CA028_0496.

Патент США No. 8580265 (дата приоритета 14 января 2011) описывает второе антитело с высоким сродством, CA028_00496.g3, также известное как UCB4940 или бимекизумаб, которое связывается с человеческим IL-17A, IL-17F и IL-17A/F гетеродимером, последовательность которого приведена в настоящем изобретении на фигуре [1]. Как описано в патенте США No. 8580265, антитело CA028_0496 было зрелым по сродству, увеличивая сродство антитела к IL-17F, сохраняя сродство к IL-17A. Данное антитело, зрелое по сродству, CA028_0496.g3 (кроме того, известное как UCB4940 или бимекизумаб), экспрессировали в виде IgG1. Конечная последовательность вариабельного участка, созревшего по сродству, CA028_0496.g3 показана на фигурах 1a и 1b патента США No. 8580265 и в настоящем изобретении на фигуре [1]. Патент США No. 8679494 (дата приоритета 23 апреля 2008) относится к новым нейтрализующим эпитопам в IL-17A и IL-17F и антителу, которые связываются с и/или взаимодействует с данными эпитопами, последовательность которого приведена в настоящем изобретении на фигуре [1]. Приведенные выше патенты введены с помощью ссылки, как если бы они были полностью приведены в настоящем изобретении.

В антителе CA028_0496.g3, последовательность вариабельного участка тяжелой цепи является такой же, как у исходного антитела CA028_0496. Напротив, вариабельный участок легкой цепи отличается 5 аминокислотами. Пять остатков, которыми отличается легкая цепь антитела CA028_0496 и антитела CA028_0496.g3, подчеркнуты на фигуре 1a патента США No. 8580265. Три остатка были в CDR и два в остове. Соответственно, в одном варианте осуществления, вариабельный участок легкой цепи содержит остаток аргинина в положении 30, остаток серина в положении 54, остаток изолейцина в положении 56, остаток аспарагиновой кислоты в положении 60 и остаток аргинина в положении 72.

Антитело CA028_0496.g3 селективно и эффективно ингибирует активность и IL-17A и IL-17F изоформ in-vitro. Антитело CA028_0496.g3 связывается с IL-17A, IL-17F и IL-17A/F гетеродимером и нейтрализует биоактивность каждого цитокина блокированием цитокинов от передачи сигнала через IL-17RA/RC комплекс.

Характеризация CA028_0496.g3 и CA028_0496 и их свойств описаны в примерах 2 и 3 патента США No. 8580265, как если бы он полностью был приведен в настоящем изобретении. Как подробно описано в патенте США No. 8580265, биомолекулярный анализ антитела CA028_0496.g3 проводили, применяя Biacore 3000 (Biacore AB). Формат анализа представлял собой захват антитела CA028_0496.g3 иммобилизрованным анти-человеческим IgG Fc-специфическим антителом, с последующим титрованием рекомбинантного человеческого IL-17A или человеческого IL-17F над захваченной поверхностью. Дополнительные детали, касающиеся анализов с помощью поверхностного плазмонного резонанса (Biacore), являются следующими; тогда как детали описаны со ссылкой на конкретное антитело, параметры, описанные в настоящем изобретении, являются пригодными для применения в характеризации любого антитела, описанного в настоящем изобретении. Анализы проводили при 25° C. Affinipure F(ab')₂ фрагмент козий анти-человеческий IgG Fc специфический (Jackson ImmunoResearch) иммобилизовали на CM5 сенсорный чип (Biacore AB) с помощью реакции конденсации через аминогруппу до концентрации приблизительно 6000 единиц ответа (RU). HBS-EP буфер (10 мМ HEPES pH 7,4, 0,15M NaCl, 3 мМ EDTA, 0,005% поверхностно-активное вещество P20, Biacore AB) применяли в качестве подвижного буфера со скорость потока 10 мкл/минута (мин). 10 мкл инъекцию CA028_00496.g3 при 0,5 мкг/мл применяли для захвата иммобилизованным анти-человеческим IgG Fc. Человеческий IL-17A титровали над захваченным CA028_00496.g3 с 5 нМ при скорости потока 30 мкл/мин в течение 3 минут, с последующей 20 минутной диссоциацией. Человеческий IL-17F (R&D systems) титровали над захваченным CA028_00496.g3 с 10 нМ при скорости потока 30 мкл/мин в течение 3 мин, с последующей 5 минутной диссоциацией. Поверхность регенерировали при скорости потока 10 мкл/мин 10 мкл инъекцией 40 мМ HCl, с последующей 5 мкл инъекцией 5 мМ NaOH. Кривые связывания с вычитанием фоновой величины с двойным стандартом анализировали, применяя программное обеспечение для оценки BIA (версия 4.1), следуя стандартным способам. Кинетические параметры определяли из алгоритма подгона.

Данные представлены в таблице 1, средние величины выделены серым.

Таблица 1. Cродство бимекизумаба к человеческому IL-17F и IL-17A.

	ka (М-1с-1)	kd (с-1)	KD (М)	KD (пМ)
hIL-17F	2,49E+06	8,74E-05	3,51E-11	35
	3,49E+06	5,08E-05	1,46E-11	15
	2,99E+06	6,91E-05	2,31E-11	23
hIL-17A	4,66E+06	2,04E-05	4,38E-12	4,4
	4,52E+06	8,66E-06	1,92E-12	1,9
	4,59E+06	1,45E-05	3,17E-12	3,2

Как описано в патенте США No. 8580265, предпочтительную каркасную область для тяжелой цепи CA028_0496.g3 получают из последовательности человеческой подгруппы VH3 1-3 3-07 вместе с JH4, как описано ранее в WO2008/047134. Соответственно, один вариант настоящего изобретения может представлять собой нейтрализующее CDR-привитое антитело, содержащее, по меньшей мере, один нечеловеческий донорный CDR, где каркасную область тяжелой цепи получают из последовательности человеческой подгруппы 1-3 3-07 вместе с JH4. Последовательность человеческого JH4 является следующей: (YFDY)WGQGTLVTVSS. YFDY мотив представляет собой часть CDR-H3 и не является частью остова 4 (Ravetch, J V. et al., 1981, Cell, 27, 583-591).

Как описано в патенте США No. 8580265, предпочтительную каркасную область для легкой цепи CA028_0496.g3 получают из последовательности зародышевой подгруппы человека VK1 2-1-(1) L4 вместе с JK1, как описано ранее в WO2008/047134. Соответственно, один вариант настоящего изобретения может представлять собой нейтрализующее CDR-привитое антитело, содержащее, по меньшей мере, один нечеловеческий донорный CDR, где каркасную область легкой цепи получают из последовательности человеческой подгруппы VK1 2-1-(1) L4 вместе с JK1. JK1 последовательность является следующей: (WT)FGQGTKVEIK. WT мотив является частью CDR-L3 и не является частью остова 4 (Hieter, P A., et al., 1982, J. Biol. Chem., 257, 1516-1522).

Кроме того, в CA028_0496.g3, необходимо, чтобы каркасные области не содержали точно такую же последовательность, как каркасные области акцепторного антитела. Например, нестандартные остатки можно заменять более часто встречающимися остатками для данного класса и типа акцепторной цепи. Альтернативно, отобранные остатки в акцепторных каркасных областях можно заменять так, чтобы они соответствовали остатку, обнаруживаемому в том же положении в донорном антителе (смотри Reichmann et al., 1998, Nature, 332, 323-324). Данные изменения следует сохранять минимально необходимыми для получения аффинности донорного антитела. Протоколы для отбора остатков в акцепторных каркасных областях, которые может быть необходимо заменять, приведены в WO 91/09967.

В одном варианте осуществления, в CA028_0496.g3, если акцепторная тяжелая цепь содержит человеческую VH3 последовательность 1-3 3-07 вместе с JH4, то акцепторные каркасные области тяжелой цепи содержат, в добавление к одному или более донорных CDR, донорный остаток, по меньшей мере, в положении 94 (согласно Kabat et al., (выше)). Соответственно, один вариант настоящего изобретения может представлять собой CDR-привитое антитело, в котором, по меньшей мере, остаток в положении 94 вариабельного домена тяжелой цепи представляет собой донорный остаток.

В одном варианте осуществления, в CA028_0496.g3, если акцепторная легкая цепь содержит последовательность человеческой подгруппы VK1 2-1-(1) L4 вместе с JK1, то донорные остатки не переносят, т.е. переносят только CDR. Соответственно, один вариант настоящего изобретения может представлять собой CDR-привитое антитело, в котором только CDR переносят в донорный остов.

Донорные остатки представляют собой остатки из донорного антитела, т.е. антитела, из которого первоначально получены CDR.

Антитело CA028_0496.g3 не является фармакологически активным у грызунов, поскольку оно не связывается с любым из IL-17A или IL-17F крыс или мышей. Было показано, что антитело CA028_0496.g3 связывается с IL-17A и IL-17F макак-крабоедов, и неклиническая оценка показывает, что оно является фармакологически активным in vivo у макак-крабоедов. У людей, антитело CA028_0496.g3 показывает длительный период полужизни зависящим от дозы способом, причем PK для доз от 8 мг до 640 мг находится в диапазоне от 17,00 дней до 25,55 дней (например, 23,6 дней) во всех группах обработки.

Антитела выше описывают только для целей ссылки и примера, и они не ограничивают объем настоящего изобретения. Например, как описано в настоящем изобретении, ясно, что сродство антитела, обеспечиваемого настоящим изобретением, можно изменять, применяя подходящий способ, известный в данной области техники. Настоящее изобретение, следовательно, также относится к вариантам молекул антитела настоящего изобретения, которые обладают повышенным сродством к IL-17A и/или IL-17F. Данные варианты можно получить рядом способов созревания аффинности, включая мутацию CDR (Yang et al., J. Mol. Biol., 254, 392-403, 1995), перестановку цепей (Marks et al., Bio/Technology, 10, 779-783, 1992), применение мутаторных штаммов E. coli (Low et al., J. Mol. Biol., 250, 359-368, 1996), ДНК перестановку (Patten et al., Curr. Opin. Biotechnol., 8, 724-733, 1997), фаговый дисплей (Thompson et al., J. Mol. Biol., 256, 77-88, 1996) и ПЦР с имитацией полового размножения (Crameri et al., Nature, 391, 288-291, 1998). Vaughan et al. (выше) обсуждает данные способы созревания аффинности.

Скрининг антител можно осуществлять, применяя анализы для измерения связывания с человеческим IL-17A и человеческим IL-17F, например BIAcore™ анализы. BIAcore™ (т.е., анализы с применением поверхностного плазмонного резонанса) описан в настоящем изобретении. Подходящие анализы нейтрализации являются известными в данной области техники, смотри, например WO2008/047134. В примерном клеточном анализе нейтрализации применяют HeLa клетки. Например, HeLa клетки выращивают в среде Игла в модификации Дульбекко (DMEM), дополненной 10% сывороткой эмбриона теленка, пенициллином, гентамицином и глютамином. 1×10⁴ клетки отделяют в 96 луночных плоскодонных планшетах для тканевых культур. Клетки выдерживают в течение ночи и промывают один раз буфером для анализа. HeLa клетки стимулируют комбинацией рекомбинантного человеческого IL-17F (125 нг/мл) или человеческого IL-17A (25 нг/мл) и фактора некроза опухоли-альфа (TNF-α) (1 нг/мл) в течение 48 часов в присутствии изменяющихся концентраций кандидатного антитела. В HeLa клеточной линии, IL-17A или IL-17F действуют синергически с TNF-альфа, вызывая продуцирование IL-6, который можно определить количественно, применяя набор для специфического MSD анализа. Полученное в результате количество секретированного IL-6 измеряют, применяя Meso Scale Discovery (MSD) способ анализа, и рассчитывают IC50 величины. Активность антитела можно выразить в виде дозы, требуемой для ингибирования 50% активности IL-17A или IL-17F (IC₅₀).

ʺИдентичностьʺ, как применяют в настоящем изобретении, показывает, что в любом конкретном положении в выровненных последовательностях, остаток аминокислоты является одинаковым в данных последовательностях. ʺПодобиеʺ, как применяют в настоящем изобретении, показывает, что в любом конкретном положении в выровненных последовательностях, остаток аминокислоты является аналогичного типа в данных последовательностях. Например, лейцин может замещать изолейцин или валин. Другие аминокислоты, которые можно часто замещать друг другом, включают, но не ограничиваются: фенилаланин, тирозин и триптофан (аминокислоты, содержащие ароматические боковые цепи); лизин, аргинин и гистидин (аминокислоты, содержащие основные боковые цепи); аспартат и глютамат (аминокислоты, содержащие кислотные боковые цепи); аспарагин и глютамин (аминокислоты, содержащие амидные боковые цепи); и цистеин и метионин (аминокислоты, содержащие серосодержащие боковые цепи).

Степени идентичности и подобия можно легко рассчитать (Computational Molecular Biology, Lesk, A. M., ed., Oxford University Press, New York, 1988; Biocomputing. Informatics and Genome Projects, Smith, D. W., ed., Academic Press, New York, 1993; Computer Analysis of Sequence Data, Part 1, Griffin, A. M., и Griffin, H. G., eds., Humana Press, New Jersey, 1994; Sequence Analysis in Molecular Biology, von Heinje, G., Academic Press, 1987; и Sequence Analysis Primer, Gribskov, M. and Devereux, J., eds., M Stockton Press, New York, 1991).

Остатки в вариабельных доменах антител общепринято нумеруют согласно системе, придуманной Kabat et al. Данная система приведена в Kabat et al., 1987, в Sequences of Proteins of Immunological Interest, US Department of Health and Human Services, NIH, USA (далее ʺKabat et al. (выше)ʺ). Данную систему нумерации применяют в настоящем описании, за исключением того, где указано иначе.

Обозначение остатков по Кэбату не всегда непосредственно соответствует линейной нумерации остатков аминокислот. Фактическая линейная аминокислотная последовательность может содержать меньше количество или дополнительные аминокислоты, чем в строгой нумерации Кэбата, соответствующей укорочению или вставке структурного компонента, в остов ли или гипервариабельный участок (CDR), основной структуры вариабельного домена. Правильную нумерацию по Кэбату остатков можно определить для указанного антитела выравниванием остатков гомолога в последовательности антитела со ʺстандартнойʺ последовательностью, пронумерованной согласно Кэбату.

CDR вариабельного домена тяжелой цепи расположены по остаткам 31-35 (CDR-H1), остаткам 50-65 (CDR-H2) и остаткам 95-102 (CDR-H3) согласно системе нумерации по Кэбату. Однако, согласно Чотиа (Chothia, C. and Lesk, A. M. J. Mol. Biol., 196, 901-917 (1987)), эквивалент петли CDR-H1 располагается от остатка 26 до остатка 32. Таким образом `CDR-H1`, как применяют в настоящем изобретении, содержит остатки 26-35, как описано комбинацией системы нумерации по Кэбату и топологического определения петли по Чотиа.

CDR вариабельного домена легкой цепи расположены по остаткам 24-34 (CDR-L1), остаткам 50-56 (CDR-L2) и остаткам 89-97 (CDR-L3) согласно системе нумерации по Кэбату.

В одном варианте осуществления, антитело, обеспечиваемое настоящим изобретением, представляет собой молекулу CDR-привитого антитела, содержащую один или более из CDR, обеспечиваемых в SEQ ID NO:1-8.

В одном варианте осуществления, настоящее изобретение относится к нейтрализующему антителу, обладающему специфичностью к человеческому IL-17A и человеческому IL-17F, содержащему тяжелую цепь, где вариабельный участок тяжелой цепи содержит последовательность, указанную в SEQ ID NO:1 для CDR-H1, последовательность, указанную в SEQ ID NO:2 для CDR-H2, и последовательность, указанную в SEQ ID NO:3 для CDR-H3.

В одном варианте осуществления, настоящее изобретение относится к нейтрализующему антителу, обладающему специфичностью к человеческому IL-17A и человеческому IL-17F, содержащему легкую цепь, где вариабельный участок легкой цепи содержит последовательность, указанную в SEQ ID NO:4 или SEQ ID NO:7 для CDR-L1, последовательность, указанную в SEQ ID NO:5 или SEQ ID NO:8 для CDR-L2, и последовательность, указанную в SEQ ID NO:6 для CDR-L3.

Ясно, что одно или более аминокислотных замещений можно вводить в CDR, обеспечиваемые настоящим изобретением, существенно не изменяя способность антитела связываться с IL-17A и IL-17F и нейтрализовать активность IL-17A и IL-17F. Эффект любого из аминокислотных замещений на связывание и нейтрализацию может легко протестировать специалист в данной области техники, например, применяя способы, описанные в настоящем изобретении. Соответственно, настоящее изобретение относится к антителу, содержащему один или более CDR, выбранных из CDR-H1 (SEQ ID NO:1), CDR-H2 (SEQ ID NO:2), CDR-H3 (SEQ ID NO:3), CDR-L1 (SEQ ID NO:4 или SEQ ID NO:7), CDR-L2 (SEQ ID NO:5 или SEQ ID NO:8) и CDR-L3 (SEQ ID NO:6), в которых одна или более аминокислот в одном или более из CDR замещена другой аминокислотой. Также ясно, что длину одного или более из CDR можно изменять без значительного изменения способности антитела связываться с IL-17A и IL-17F и нейтрализовать активность IL-17A и IL-17F.

В другом варианте осуществления, настоящее изобретение относится к нейтрализующему антителу, обладающему специфичностью к человеческому IL-17A и человеческому IL-17F, содержащему тяжелую цепь, в которой, по меньшей мере, два из CDR-H1, CDR-H2 и CDR-H3 вариабельного домена тяжелой цепи выбраны из следующих: последовательность, указанная в SEQ ID NO:1 для CDR-H1, последовательность, указанная в SEQ ID NO:2 для CDR-H2, и последовательность, указанная в SEQ ID NO:3 для CDR-H3. Например, антитело может содержать тяжелую цепь, в которой CDR-H1 имеет последовательность, указанную в SEQ ID NO:1, и CDR-H2 имеет последовательность, указанную в SEQ ID NO:2. Альтернативно, антитело может содержать тяжелую цепь, в которой CDR-H1 имеет последовательность, указанную в SEQ ID NO:1, и CDR-H3 имеет последовательность, указанную в SEQ ID NO:3, или антитело может содержать тяжелую цепь, в которой CDR-H2 имеет последовательность, указанную в SEQ ID NO:2, и CDR-H3 имеет последовательность, указанную в SEQ ID NO:3. Во избежание неопределенности, ясно, что все комбинации являются включенными.

В другом варианте осуществления, настоящее изобретение относится к нейтрализующему антителу, обладающему специфичностью к человеческому IL-17A и человеческому IL-17F, содержащему легкую цепь, в которой, по меньшей мере, два из CDR-L1, CDR-L2 и CDR-L3 вариабельного домена легкой цепи выбраны из следующих: последовательность, указанная в SEQ ID NO:4 или SEQ ID NO:7 для CDR-L1, последовательность, указанная в SEQ ID NO:5 или 8 для CDR-L2 и последовательность, указанная в SEQ ID NO:6 для CDR-L3. Например, антитело может содержать легкую цепь, в которой CDR-L1 имеет последовательность, указанную в SEQ ID NO:4, и CDR-L2 имеет последовательность, указанную в SEQ ID NO:5. Альтернативно, антитело может содержать легкую цепь, в которой CDR-L1 имеет последовательность, указанную в SEQ ID NO:4, и CDR-L3 имеет последовательность, указанную в SEQ ID NO:6, или антитело может содержать легкую цепь, в которой CDR-L2 имеет последовательность, указанную в SEQ ID NO:5, и CDR-L3 имеет последовательность, указанную в SEQ ID NO:6. Во избежание неопределенности, ясно, что все комбинации являются включенными.

В одном варианте осуществления, антитело согласно настоящему изобретению содержит тяжелую цепь, где вариабельный участок тяжелой цепи содержит последовательность, указанную в SEQ ID NO:1 для CDR-H1, последовательность, указанную в SEQ ID NO:2 для CDR-H2, и последовательность, указанную в SEQ ID NO:3 для CDR-H3, и легкую цепь, где вариабельный участок легкой цепи содержит последовательность, указанную в SEQ ID NO:4 для CDR-L1, последовательность, указанную в SEQ ID NO:5 для CDR-L2, и последовательность, указанную в SEQ ID NO:6 для CDR-L3.

В одном варианте осуществления, антитело согласно настоящему изобретению содержит тяжелую цепь, где вариабельный участок тяжелой цепи содержит последовательность, указанную в SEQ ID NO:1 для CDR-H1, последовательность, указанную в SEQ ID NO:2 для CDR-H2, и последовательность, указанную в SEQ ID NO:3 для CDR-H3, и легкую цепь, где вариабельный участок легкой цепи содержит последовательность, указанную в SEQ ID NO:7 для CDR-L1, последовательность, указанную в SEQ ID NO:8 для CDR-L2, и последовательность, указанную в SEQ ID NO:6 для CDR-L3.

В одном варианте осуществления, антитело настоящего изобретения содержит тяжелую цепь, где вариабельный участок тяжелой цепи содержит три CDR, где последовательность CDR-H1 имеет, по меньшей мере, 60% идентичность или подобие последовательности, указанной в SEQ ID NO:1, CDR-H2 имеет, по меньшей мере, 60% идентичность или подобие последовательности, указанной в SEQ ID NO:2, и/или CDR-H3 имеет, по меньшей мере, 60% идентичность или подобие последовательности, указанной в SEQ ID NO:3. В другом варианте осуществления, антитело настоящего изобретения содержит тяжелую цепь, где вариабельный участок тяжелой цепи содержит три CDR, где последовательность CDR-H1 имеет, по меньшей мере, 70%, 80%, 90%, 95% или 98% идентичность или подобие последовательности, указанной в SEQ ID NO:1, CDR-H2 имеет, по меньшей мере, 70%, 80%, 90%, 95% или 98% идентичность или подобие последовательности, указанной в SEQ ID NO:2, и/или CDR-H3 имеет, по меньшей мере, 70%, 80%, 90%, 95% или 98% идентичность или подобие последовательности, указанной в SEQ ID NO:3.

В другом варианте осуществления, антитело настоящего изобретения содержит легкую цепь, где вариабельный участок легкой цепи содержит три CDR, где последовательность CDR-L1 имеет, по меньшей мере, 60% идентичность или подобие последовательности, указанной в SEQ ID NO:4, CDR-L2 имеет, по меньшей мере, 60% идентичность или подобие последовательности, указанной в SEQ ID NO:5, и/или CDR-L3 имеет, по меньшей мере, 60% идентичность или подобие последовательности, указанной в SEQ ID NO:6. В другом варианте осуществления, антитело настоящего изобретения содержит легкую цепь, где вариабельный участок тяжелой цепи содержит три CDR, где последовательность CDR-L1 имеет, по меньшей мере, 70%, 80%, 90%, 95% или 98% идентичность или подобие последовательности, указанной в SEQ ID NO:4, CDR-L2 имеет, по меньшей мере, 70%, 80%, 90%, 95% или 98% идентичность или подобие последовательности, указанной в SEQ ID NO:5, и/или CDR-L3 имеет, по меньшей мере, 70%, 80%, 90%, 95% или 98% идентичность или подобие последовательности, указанной в SEQ ID NO:6.

В другом варианте осуществления, антитело настоящего изобретения содержит легкую цепь, где вариабельный участок легкой цепи содержит три CDR, где последовательность CDR-L1 имеет, по меньшей мере, 60% идентичность или подобие последовательности, указанной в SEQ ID NO:4, CDR-L2 имеет, по меньшей мере, 60% идентичность или подобие последовательности, указанной в SEQ ID NO:5 и/или CDR-L3 имеет, по меньшей мере, 60% идентичность или подобие последовательности, указанной в SEQ ID NO:6. В другом варианте осуществления, антитело настоящего изобретения содержит легкую цепь, где вариабельный участок тяжелой цепи содержит три CDR, где последовательность CDR-L1 имеет, по меньшей мере, 70%, 80%, 90%, 95% или 98% идентичность или подобие последовательности, указанной в SEQ ID NO:7, CDR-L2 имеет, по меньшей мере, 70%, 80%, 90%, 95% или 98% идентичность или подобие последовательности, указанной в SEQ ID NO:8, и/или CDR-L3 имеет, по меньшей мере, 70%, 80%, 90%, 95% или 98% идентичность или подобие последовательности, указанной в SEQ ID NO:6.

В одном варианте осуществления, антитело настоящего изобретения содержит легкую цепь, где вариабельный участок легкой цепи содержит последовательность, указанную в SEQ ID NO:9 (gL7).

В другом варианте осуществления, антитело настоящего изобретения содержит легкую цепь, где вариабельный участок легкой цепи содержит последовательность, имеющую, по меньшей мере, 60% идентичность или подобие последовательности, указанной в SEQ ID NO:9. В одном варианте осуществления, антитело настоящего изобретения содержит легкую цепь, где вариабельный участок легкой цепи содержит последовательность, имеющую, по меньшей мере, 70%, 80%, 90%, 95% или 98% идентичность или подобие последовательности, указанной в SEQ ID NO:9.

В одном варианте осуществления, антитело настоящего изобретения содержит легкую цепь, где вариабельный участок легкой цепи содержит последовательность, указанную в SEQ ID NO:10 (gL57).

В другом варианте осуществления, антитело настоящего изобретения содержит легкую цепь, где вариабельный участок легкой цепи содержит последовательность, имеющую, по меньшей мере, 60% идентичность или подобие последовательности, указанной в SEQ ID NO:10. В одном варианте осуществления, антитело настоящего изобретения содержит легкую цепь, где вариабельный участок легкой цепи содержит последовательность, имеющую, по меньшей мере, 70%, 80%, 90%, 95% или 98% идентичность или подобие последовательности, указанной в SEQ ID NO:10.

В одном варианте осуществления, антитело настоящего изобретения содержит тяжелую цепь, где вариабельный участок тяжелой цепи содержит последовательность, указанную в SEQ ID NO:11 (gH9).

В другом варианте осуществления, антитело настоящего изобретения содержит тяжелую цепь, где вариабельный участок тяжелой цепи содержит последовательность, имеющую, по меньшей мере, 60% идентичность или подобие последовательности, указанной в SEQ ID NO:11. В одном варианте осуществления, антитело настоящего изобретения содержит тяжелую цепь, где вариабельный участок тяжелой цепи содержит последовательность, имеющую, по меньшей мере, 70%, 80%, 90%, 95%, 96, 97, 98 или 99% идентичность или подобие последовательности, указанной в SEQ ID NO:11.

В одном варианте осуществления, антитело настоящего изобретения содержит тяжелую цепь, где вариабельный участок тяжелой цепи содержит последовательность, указанную в SEQ ID NO:11, и легкую цепь, где вариабельный участок легкой цепи содержит последовательность, указанную в SEQ ID NO:9.

В другом варианте осуществления настоящего изобретения, антитело содержит тяжелую цепь и легкую цепь, где вариабельный участок тяжелой цепи содержит последовательность, имеющую, по меньшей мере, 60% идентичность или подобие последовательности, указанной в SEQ ID NO:11, и вариабельный участок легкой цепи содержит последовательность, имеющую, по меньшей мере, 60% идентичность или подобие последовательности, указанной в SEQ ID NO:9. Предпочтительно, антитело содержит тяжелую цепь, где вариабельный участок тяжелой цепи содержит последовательность, имеющую, по меньшей мере, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98 или 99% идентичность или подобие последовательности, указанной в SEQ ID NO:11, и легкую цепь, где вариабельный участок легкой цепи содержит последовательность, имеющую, по меньшей мере, 70%, 80%, 90%, 95% 96, 97, 98 или 99% идентичность или подобие последовательности, указанной в SEQ ID NO:9.

В одном варианте осуществления, антитело настоящего изобретения содержит тяжелую цепь, где вариабельный участок тяжелой цепи содержит последовательность, указанную в SEQ ID NO:11, и легкую цепь, где вариабельный участок легкой цепи содержит последовательность, указанную в SEQ ID NO:10.

В другом варианте осуществления настоящего изобретения, антитело содержит тяжелую цепь и легкую цепь, где вариабельный участок тяжелой цепи содержит последовательность, имеющую, по меньшей мере, 60% идентичность или подобие последовательности, указанной в SEQ ID NO:11, и вариабельный участок легкой цепи содержит последовательность, имеющую, по меньшей мере, 60% идентичность или подобие последовательности, указанной в SEQ ID NO:10. Предпочтительно, антитело содержит тяжелую цепь, где вариабельный участок тяжелой цепи содержит последовательность, имеющую, по меньшей мере, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98 или 99% идентичность или подобие последовательности, указанной в SEQ ID NO:11, и легкую цепь, где вариабельный участок легкой цепи содержит последовательность, имеющую, по меньшей мере, 70%, 80%, 90%, 95% 96, 97, 98 или 99% идентичность или подобие последовательности, указанной в SEQ ID NO:10.

В предпочтительном варианте осуществления антитело, обеспечиваемое настоящим изобретением, представляет собой нейтрализующее антитело, обладающее специфичностью к человеческому IL-17A и человеческому IL-17F, где константный участок тяжелой цепи содержит человеческий IgG1 константный участок. Соответственно, настоящее изобретение относится к антителу, где тяжелая цепь содержит или состоит из последовательности, указанной в SEQ ID NO:15.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения, антитело содержит тяжелую цепь, где тяжелая цепь содержит последовательность, имеющую, по меньшей мере, 60% идентичность или подобие последовательности, указанной в SEQ ID NO:15. Предпочтительно, антитело содержит тяжелую цепь, где тяжелая цепь содержит последовательность, имеющую, по меньшей мере, 70%, 80%, 90%, 95%, 97%, 98%, или 99% идентичность или подобие последовательности, указанной в SEQ ID NO:15.

В одном варианте осуществления, молекула антитела согласно настоящему изобретению содержит легкую цепь, содержащую последовательность, указанную в SEQ ID NO:12.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения антитело содержит легкую цепь, где легкая цепь содержит последовательность, имеющую, по меньшей мере, 60% идентичность или подобие последовательности, указанной в SEQ ID NO:12. Предпочтительно, антитело содержит легкую цепь, где легкая цепь содержит последовательность, имеющую, по меньшей мере, 70%, 80%, 90%, 95% или 98% идентичность или подобие последовательности, указанной в SEQ ID NO:12.

В одном варианте осуществления, настоящее изобретение относится к антителу, где тяжелая цепь содержит или состоит из последовательности, указанной в SEQ ID NO:15, и легкая цепь содержит или состоит из последовательности, указанной в SEQ ID NO:12.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения, антитело содержит тяжелую цепь и легкую цепь, где тяжелая цепь содержит последовательность, имеющую, по меньшей мере, 60% идентичность или подобие последовательности, указанной в SEQ ID NO:15, и легкая цепь содержит последовательность, имеющую, по меньшей мере, 60% идентичность или подобие последовательности, указанной в SEQ ID NO:12. Предпочтительно, антитело содержит тяжелую цепь, где тяжелая цепь содержит последовательность, имеющую, по меньшей мере, 70%, 80%, 90%, 95% или 98% идентичность или подобие последовательности, указанной в SEQ ID NO:15, и легкую цепь, где легкая цепь содержит последовательность, имеющую, по меньшей мере, 70%, 80%, 90%, 95% или 98% идентичность или подобие последовательности, указанной в SEQ ID NO:12.

В предпочтительном варианте осуществления антитело, обеспечиваемое настоящим изобретением, представляет собой нейтрализующее антитело, обладающее специфичностью к человеческому IL-17A и человеческому IL-17F, где константный участок тяжелой цепи содержит человеческий IgG1 константный участок. Соответственно, настоящее изобретение относится к антителу, где тяжелая цепь содержит или состоит из последовательности, указанной в SEQ ID NO:16.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения, антитело содержит тяжелую цепь, где тяжелая цепь содержит последовательность, имеющую, по меньшей мере, 60% идентичность или подобие последовательности, указанной в SEQ ID NO:16. Предпочтительно, антитело содержит тяжелую цепь, где тяжелая цепь содержит последовательность, имеющую, по меньшей мере, 70%, 80%, 90%, 95%, 97%, 98%, или 99% идентичность или подобие последовательности, указанной в SEQ ID NO:16.

В одном варианте осуществления, молекула антитела согласно настоящему изобретению содержит легкую цепь, содержащую последовательность, указанную в SEQ ID NO:13.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения, антитело содержит легкую цепь, где легкая цепь содержит последовательность, имеющую, по меньшей мере, 60% идентичность или подобие последовательности, указанной в SEQ ID NO:13. Предпочтительно, антитело содержит легкую цепь, где легкая цепь содержит последовательность, имеющую, по меньшей мере, 70%, 80%, 90%, 95% или 98% идентичность или подобие последовательности, указанной в SEQ ID NO:13.

В одном варианте осуществления, настоящее изобретение относится к антителу, где тяжелая цепь содержит или состоит из последовательности, указанной в SEQ ID NO:16, и легкая цепь содержит или состоит из последовательности, указанной в SEQ ID NO:13.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения антитело содержит тяжелую цепь и легкую цепь, где тяжелая цепь содержит последовательность, имеющую, по меньшей мере, 60% идентичность или подобие последовательности, указанной в SEQ ID NO:16, и легкая цепь содержит последовательность, имеющую, по меньшей мере, 60% идентичность или подобие последовательности, указанной в SEQ ID NO:13. Предпочтительно, антитело содержит тяжелую цепь, где тяжелая цепь содержит последовательность, имеющую, по меньшей мере, 70%, 80%, 90%, 95% или 98% идентичность или подобие последовательности, указанной в SEQ ID NO:16, и легкую цепь, где легкая цепь содержит последовательность, имеющую, по меньшей мере, 70%, 80%, 90%, 95% или 98% идентичность или подобие последовательности, указанной в SEQ ID NO:13.

В одном варианте осуществления, настоящее изобретение относится к антителу, где тяжелая цепь содержит или состоит из последовательности, указанной в SEQ ID NO:15, и легкая цепь содержит или состоит из последовательности, указанной в SEQ ID NO:13.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения, антитело содержит тяжелую цепь и легкую цепь, где тяжелая цепь содержит последовательность, имеющую, по меньшей мере, 60% идентичность или подобие последовательности, указанной в SEQ ID NO:15, и легкая цепь содержит последовательность, имеющую, по меньшей мере, 60% идентичность или подобие последовательности, указанной в SEQ ID NO:13. Предпочтительно, антитело содержит тяжелую цепь, где тяжелая цепь содержит последовательность, имеющую, по меньшей мере, 70%, 80%, 90%, 95% или 98% идентичность или подобие последовательности, указанной в SEQ ID NO:15, и легкую цепь, где легкая цепь содержит последовательность, имеющую, по меньшей мере, 70%, 80%, 90%, 95% или 98% идентичность или подобие последовательности, указанной в SEQ ID NO:13.

В одном варианте осуществления, настоящее изобретение относится к антителу, где тяжелая цепь содержит или состоит из последовательности, указанной в SEQ ID NO:16, и легкая цепь содержит или состоит из последовательности, указанной в SEQ ID NO:12.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения антитело содержит тяжелую цепь и легкую цепь, где тяжелая цепь содержит последовательность, имеющую, по меньшей мере, 60% идентичность или подобие последовательности, указанной в SEQ ID NO:16, и легкая цепь содержит последовательность, имеющую, по меньшей мере, 60% идентичность или подобие последовательности, указанной в SEQ ID NO:12. Предпочтительно, антитело содержит тяжелую цепь, где тяжелая цепь содержит последовательность, имеющую, по меньшей мере, 70%, 80%, 90%, 95% или 98% идентичность или подобие последовательности, указанной в SEQ ID NO:16, и легкую цепь, где легкая цепь содержит последовательность, имеющую, по меньшей мере, 70%, 80%, 90%, 95% или 98% идентичность или подобие последовательности, указанной в SEQ ID NO:12.

Сродство связывания

Молекула нейтрализующего антитела любого аспекта настоящего изобретения предпочтительно имеет высокое сродство связывания, предпочтительно наномолярное, даже более предпочтительно пикомолярное. Ясно, что сродство связывания антитела согласно настоящему изобретению с человеческим IL-17A может быть отличным от сродства связывания того же антитела с человеческим IL-17F и/или IL-17A/F гетеродимером.

В одном примере, молекула антитела настоящего изобретения имеет сродство к IL-17A, которое является большим, чем его сродство к IL-17F. В одном примере, молекула антитела настоящего изобретения имеет сродство к IL-17A, которое является, по меньшей мере, в 10 раз большим, чем его сродство связывания с IL-17F. В одном примере, молекула антитела настоящего изобретения имеет сродство к IL-17A, которое является, по меньшей мере, в 50 раз большим, чем его сродство связывания с IL-17F. В одном примере, молекула антитела настоящего изобретения имеет сродство к IL-17A, которое является, по меньшей мере, в 100 раз большим, чем его сродство связывания с IL-17F. В одном примере, молекула антитела настоящего изобретения имеет наномолярное сродство к IL-17F и пикомолярное сродство к IL-17A.

В одном примере, молекула антитела настоящего изобретения имеет сродство к IL-17F, которое является большим, чем его сродство к IL-17A. В одном примере, молекула антитела настоящего изобретения имеет сродство к IL-17F, которое является, по меньшей мере, в 10 раз большим, чем его сродство связывания с IL-17A. В одном примере, молекула антитела настоящего изобретения имеет сродство к IL-17F, которое является, по меньшей мере, в 50 раз большим, чем его сродство связывания с IL-17A. В одном примере, молекула антитела настоящего изобретения имеет сродство к IL-17F, которое является, по меньшей мере, в 100 раз большим, чем его сродство связывания с IL-17A. В одном примере, молекула антитела настоящего изобретения имеет пикомолярное сродство к IL-17A и наномолярное сродство к IL-17F.

В одном примере, молекула антитела настоящего изобретения имеет сродство к IL-17A, которое является таким же, как его сродство к IL-17F. В одном примере, молекула антитела настоящего изобретения имеет наномолярное сродство и к IL-17A и к IL-17F. В одном примере, молекула антитела настоящего изобретения имеет пикомолярное сродство и к IL-17A и к IL-17F.

Сродство можно измерить, применяя любой подходящий способ, известный в данной области техники, включая BIAcore™, применяя выделенный природный или рекомбинантый IL-17A и IL-17F, оба из которых существуют в виде гомодимеров.

Предпочтительно молекула антитела настоящего изобретения имеет сродство связывания с IL-17A, меньшее чем 10 нМ. В одном варианте осуществления, молекула антитела настоящего изобретения имеет сродство связывания с IL-17A, меньшее чем 500 пМ. В одном варианте осуществления, молекула антитела настоящего изобретения имеет сродство связывания с IL-17A 100 пМ или меньше. В одном варианте осуществления, молекула антитела настоящего изобретения имеет сродство связывания с IL-17A 20 пМ или меньше. В одном варианте осуществления, антитело настоящего изобретения имеет сродство к IL-17A 16 пМ. В одном варианте осуществления, молекула антитела настоящего изобретения имеет сродство связывания с IL-17A 10 пМ или меньше. В одном варианте осуществления, молекула антитела настоящего изобретения имеет сродство связывания с IL-17A 5 пМ или меньше. В одном варианте осуществления, антитело настоящего изобретения имеет сродство к IL-17A 3,2 пМ.

Предпочтительно молекула антитела настоящего изобретения имеет сродство связывания с IL-17F, меньшее чем 10 нМ. В одном варианте осуществления, антитело настоящего изобретения имеет сродство к IL-17F, меньшее чем 2 нМ. В одном варианте осуществления, антитело настоящего изобретения имеет сродство к IL-17F 1,75 нМ. В одном варианте осуществления, антитело настоящего изобретения имеет сродство к IL-17F, меньшее чем 500 пМ. В одном варианте осуществления, молекула антитела настоящего изобретения имеет сродство связывания с IL-17F 100 пМ или меньше. В одном варианте осуществления, антитело настоящего изобретения имеет сродство к IL-17F 50 пМ или меньше. В одном варианте осуществления, антитело настоящего изобретения имеет сродство к IL-17F 23 пМ. В одном варианте осуществления, молекула антитела настоящего изобретения имеет сродство связывания с IL-17F 10 пМ или меньше. В одном варианте осуществления, молекула антитела настоящего изобретения имеет сродство связывания с IL-17F 5 пМ или меньше.

Предпочтительно молекула антитела настоящего изобретения имеет сродство связывания с IL-17A/F гетеродимером 10 нм или меньше. В одном варианте осуществления, молекула антитела настоящего изобретения имеет сродство связывания с IL-17A/F гетеродимером 500 пМ или меньше. В одном варианте осуществления, молекула антитела настоящего изобретения имеет сродство связывания с IL-17A/F гетеродимером 150 пМ или меньше. В одном варианте осуществления, молекула антитела настоящего изобретения имеет сродство связывания с IL-17A/F гетеродимером 116 пМ. В одном варианте осуществления, молекула антитела настоящего изобретения имеет сродство связывания с IL-17A/F гетеродимером, большее чем 100 пМ. В одном варианте осуществления, молекула антитела настоящего изобретения имеет сродство связывания с IL-17A/F гетеродимером 10 пМ или меньше. В одном варианте осуществления, молекула антитела настоящего изобретения имеет сродство связывания с IL-17A/F гетеродимером 5 пМ или меньше.

В одном варианте осуществления, молекула антитела настоящего изобретения имеет сродство связывания с IL-17F макаки-крабоеда, меньшее чем 2 нМ. В одном варианте осуществления, молекула антитела настоящего изобретения имеет сродство связывания с IL-17F макаки-крабоеда 1,03 нМ.

Перекрестно блокирующие антитела

Антитела, которые перекрестно блокируют связывание антитела согласно настоящему изобретению, в частности, антитело, содержащее последовательность тяжелой цепи gH9 (SEQ ID NO:11) и последовательность легкой цепи gL57 (SEQ ID NO:10) или последовательность легкой цепи gL7 (SEQ ID NO:9), является пригодным в нейтрализации активности IL-17A и IL-17F. Соответственно, настоящее изобретение также относится к нейтрализующему антителу, которое связывается с человеческим IL-17A и человеческим IL-17F, которое перекрестно блокирует связывание любого из антител, описанных выше, с человеческим IL-17A и/или человеческим IL-17F и/или человеческим IL-17A/F гетеродимером и/или перекрестно блокируется связывание с IL-17A и/или IL-17F и/или человеческим IL-17A/F гетеродимером любым одним из данных антител. В одном варианте осуществления, данное антитело связывается с тем же эпитопом, как антитело, описанное в настоящем изобретении выше. В другом варианте осуществления перекрестно блокирующее нейтрализующее антитело связывается с эпитопом, который граничит и/или перекрывается с эпитопом, связываемым антителом, описанным в настоящем изобретении выше. В другом варианте осуществления перекрестно блокирующее нейтрализующее антитело данного аспекта настоящего изобретения не связывается с тем же эпитопом, как антитело настоящего изобретения, или эпитопом, который граничит или перекрывается с указанным эпитопом.

Перекрестно блокирующие антитела можно идентифицировать, применяя любой подходящий способ в данной области техники, например, применяя конкурентный ELISA или BIAcore, где связывание перекрестно блокирующего антитела с человеческим IL-17A и/или человеческим IL-17F препятствует связыванию антитела настоящего изобретения или наоборот. Для поверхностного плазмонного резонанса (BIAcore), молекулы-мишени иммобилизуют на твердой фазе и подвергают воздействию лигандов в подвижной фазе, двигающейся вдоль измерительной ячейки. Если осуществляется связывание лиганда с иммобилизованной мишенью, локальный показатель преломления изменяется, приводя к изменению SPR угла, которое можно отслеживать в реальном времени, детектируя изменения интенсивности отраженного света. Скорость изменения SPR сигнала можно анализировать, получая наблюдаемые константы скорости фаз ассоциации и диссоциации реакции связывания. Отношения данных величин дают константу кажущегося равновесия (сродство) (смотри, например, Wolff et al., Cancer Res. 53:2560 65 (1993)). Условия, пригодные для анализов с применением поверхностного плазмонного резонанса (BIAcore), являются известными в данной области техники и описаны в другом месте в настоящем изобретении.

Способы на основе ELISA для определения перекрестного блокирования также являются хорошо известными в данной области техники. Неограничивающий примерный формат анализа, пригодный и для IL-17A и для IL-17F, является следующим, показанным с IL-17A. Анти-IL-17A/F антитело (Ab-1) наносят (например, 50 мкл 1 мкг/мл) на 96-луночный ELISA планшет [например, Corning 96-луночный EIA/RIA плоскодонный микропланшет (продукт # 3590), Corning Inc., Acton, MA], по меньшей мере, на один час. После данной стадии нанесения раствор антитела удаляют, планшет промывают один или два раза промывочным раствором (например, PBS и 0,05% Tween 20), и затем блокируют, применяя подходящий блокирующий раствор (например, PBS, 1% BSA, 1% козья сыворотка и 0,5% Tween 20) и способы, известные в данной области техники. Затем, блокирующий раствор удаляют с ELISA планшета, и второе анти-IL17A/F антитело (Ab-2), которое испытывают на его способность перекрестно блокировать нанесенное антитело, добавляют в избытке (например, 50 мкл 10 мкг/мл) в блокирующем растворе к подходящим лункам ELISA планшета. Затем, после этого, ограниченное количество (например, 50 мкл 10 нг/мл) IL-17A в блокирующем растворе добавляют в подходящие лунки, и планшет выдерживают в течение, по меньшей мере, одного часа при комнатной температуре при встряхивании. Затем, планшет промывают 2-4 раза промывочным раствором. Подходящее количество реагента для детекции IL-17A [например, биотинилированного анти-IL-17 поликлонального антитела, которое предварительно комплектовано с подходящим количеством конъюгата стрептавидина с пероксидазой хрена (HRP)] в блокирующем растворе добавляют к ELISA планшету и выдерживают в течение, по меньшей мере, одного часа при комнатной температуре. Затем, планшет промывают промывочным раствором и проявляют подходящим реагентом [например, HRP субстратами, такими как TMB (колориметрический) или различными HRP люминесцентными субстратами]. Фоновый сигнал для анализа определяют как сигнал, полученный в лунках с нанесенным антителом (в данном случае Ab-1), вторым антителом жидкой фазы (в данном случае Ab-2), только IL-17A буфером (т.е., без IL-17A) и реагентами для детекции IL-17A. Сигнал положительного контроля для анализа определяют как сигнал, полученный в лунках с нанесенным антителом (в данном случае Ab-1), только буфером для второго антитела жидкой фазы (т.е. без второго антитела жидкой фазы), реагентами для детекции IL-17A и IL-17A. Предпочтительно, ELISA анализ проводят таким способом, чтобы сигнал положительного контроля был, по меньшей мере, в шесть раз большим фонового сигнала.

В одном варианте осуществления, обеспечивают нейтрализующее антитело, которое связывается с человеческим IL-17A и человеческим IL-17F, которое перекрестно блокирует связывание антитела, чья тяжелая цепь содержит последовательность gH9 (SEQ ID NO:11) и чья легкая цепь содержит последовательность gL57 (SEQ ID NO:10), с человеческим IL-17A и человеческим IL-17F. В одном варианте осуществления, перекрестно блокирующие антитела, обеспечиваемые настоящим изобретением, ингибируют связывание антитела, содержащего последовательность тяжелой цепи gH9 (SEQ ID NO:11) и последовательность легкой цепи gL57 (SEQ ID NO:10) с IL-17A более чем на 80%, предпочтительно более чем на 85%, более предпочтительно более чем на 90%, даже более предпочтительно более чем на 95% и с IL-17F более чем на 80%, предпочтительно более чем на 85%, более предпочтительно более чем на 90%, даже более предпочтительно более чем на 95%.

В одном варианте осуществления, обеспечивают нейтрализующее антитело, которое связывается с человеческим IL-17A и человеческим IL-17F, которое перекрестно блокирует связывание антитела, чья тяжелая цепь содержит последовательность gH9 (SEQ ID NO:11) и чья легкая цепь содержит последовательность gL7 (SEQ ID NO:9), с человеческим IL-17A и человеческим IL-17F. В одном варианте осуществления, перекрестно блокирующие антитела, обеспечиваемые настоящим изобретением, ингибируют связывание антитела, содержащего последовательность тяжелой цепи gH9 (SEQ ID NO:11) и последовательность легкой цепи gL7 (SEQ ID NO:9), с IL-17A более чем на 80%, предпочтительно более чем на 85%, более предпочтительно более чем на 90%, даже более предпочтительно более чем на 95% и с IL-17F более чем на 80%, предпочтительно более чем на 85%, более предпочтительно более чем на 90%, даже более предпочтительно более чем на 95%.

В одном варианте осуществления, обеспечивают нейтрализующее антитело, которое связывается с человеческим IL-17A и человеческим IL-17F, которое перекрестно блокирует связывание антитела, чья тяжелая цепь содержит последовательность gH9 (SEQ ID NO:11) и чья легкая цепь содержит последовательность gL57 (SEQ ID NO:10), с человеческим IL-17A и с человеческим IL-17F и с человеческим IL-17A/F гетеродимером. В одном варианте осуществления, перекрестно блокирующие антитела, обеспечиваемые настоящим изобретением, ингибируют связывание антитела, содержащего последовательность тяжелой цепи gH9 (SEQ ID NO:11) и последовательность легкой цепи gL57 (SEQ ID NO:10), с IL-17A более чем на 80%, предпочтительно более чем на 85%, более предпочтительно более чем на 90%, даже более предпочтительно более чем на 95% и с IL-17F более чем на 80%, предпочтительно более чем на 85%, более предпочтительно более чем на 90%, даже более предпочтительно более чем на 95% и с IL-17A/F гетеродимером более чем на 80%, предпочтительно более чем на 85%, более предпочтительно более чем на 90%, даже более предпочтительно более чем на 95%.

В одном варианте осуществления, обеспечивают нейтрализующее антитело, которое связывается с человеческим IL-17A и человеческим IL-17F, которое перекрестно блокирует связывание антитела, чья тяжелая цепь содержит последовательность gH9 (SEQ ID NO:11) и чья легкая цепь содержит последовательность gL7 (SEQ ID NO:9), с человеческим IL-17A и человеческим IL-17F и человеческим IL-17A/F гетеродимером. В одном варианте осуществления, перекрестно блокирующие антитела, обеспечиваемые настоящим изобретением, ингибируют связывание антитела, содержащего последовательность тяжелой цепи gH9 (SEQ ID NO:11) и последовательность легкой цепи gL7 (SEQ ID NO:9), с IL-17A более чем на 80%, предпочтительно более чем на 85%, более предпочтительно более чем на 90%, даже более предпочтительно более чем на 95% и с IL-17F более чем на 80%, предпочтительно более чем на 85%, более предпочтительно более чем на 90%, даже более предпочтительно более чем на 95% и с IL-17A/F гетеродимером более чем на 80%, предпочтительно более чем на 85%, более предпочтительно более чем на 90%, даже более предпочтительно более чем на 95%.

В одном варианте осуществления, обеспечивают нейтрализующее антитело, которое связывается с человеческим IL-17A и человеческим IL-17F, которое перекрестно блокирует связывание антитела, чья тяжелая цепь содержит последовательность gH9 (SEQ ID NO:11) и чья легкая цепь содержит последовательность gL57 (SEQ ID NO:10), с человеческим IL-17A или с человеческим IL-17F или человеческим IL-17A/F гетеродимером. В одном варианте осуществления, перекрестно блокирующие антитела, обеспечиваемые настоящим изобретением, ингибируют связывание антитела, содержащего последовательность тяжелой цепи gH9 (SEQ ID NO:11) и последовательность легкой цепи gL57 (SEQ ID NO:10), с IL-17A или IL-17F или IL-17A/F более чем на 80%, предпочтительно более чем на 85%, более предпочтительно более чем на 90%, даже более предпочтительно более чем на 95%.

В одном варианте осуществления, обеспечивают нейтрализующее антитело, которое связывается с человеческим IL-17A и человеческим IL-17F, которое перекрестно блокирует связывание антитела, чья тяжелая цепь содержит последовательность gH9 (SEQ ID NO:11) и чья легкая цепь содержит последовательность gL7 (SEQ ID NO:9), с человеческим IL-17A или человеческим IL-17F или человеческим IL-17A/F гетеродимером. В одном варианте осуществления, перекрестно блокирующие антитела, обеспечиваемые настоящим изобретением, ингибируют связывание антитела, содержащего последовательность тяжелой цепи gH9 (SEQ ID NO:11) и последовательность легкой цепи gL7 (SEQ ID NO:9), с IL-17A или IL-17F или IL-17A/F более чем на 80%, предпочтительно более чем на 85%, более предпочтительно более чем на 90%, даже более предпочтительно более чем на 95%.

Альтернативно или в добавление, нейтрализующие антитела согласно данному аспекту настоящего изобретения могут перекрестно блокироваться от связывания с человеческим IL-17A и человеческим IL-17F антителом, содержащим последовательность тяжелой цепи gH9 (SEQ ID NO:11) и последовательность легкой цепи gL57 (SEQ ID NO:10). Следовательно, также обеспечивают молекулу нейтрализующего антитела, которое связывается с человеческим IL-17A и человеческим IL-17F, которое перекрестно блокируется от связывания с человеческим IL-17A и человеческим IL-17F антителом, содержащим последовательность тяжелой цепи gH9 (SEQ ID NO:11) и последовательность легкой цепи gL57 (SEQ ID NO:10). В одном варианте осуществления, нейтрализующие антитела, обеспечиваемые данным аспектом настоящего изобретения, ингибируются по связыванию с человеческим IL-17A и человеческим IL-17F антителом, содержащим последовательность тяжелой цепи gH9 (SEQ ID NO:11) и последовательность легкой цепи gL57 (SEQ ID NO:10) более чем на 80%, предпочтительно более чем на 85%, более предпочтительно более чем на 90%, даже более предпочтительно более чем на 95%.

Альтернативно или в добавление, нейтрализующие антитела согласно данному аспекту настоящего изобретения могут перекрестно блокироваться от связывания с человеческим IL-17A и человеческим IL-17F антителом, содержащим последовательность тяжелой цепи gH9 (SEQ ID NO:11) и последовательность легкой цепи gL7 (SEQ ID NO:9). Следовательно, также обеспечивают молекулу нейтрализующего антитела, которое связывается с человеческим IL-17A и человеческим IL-17F, которое перекрестно блокируется от связывания с человеческим IL-17A и человеческим IL-17F антителом, содержащим последовательность тяжелой цепи gH9 (SEQ ID NO:11) и последовательность легкой цепи gL7 (SEQ ID NO:9). В одном варианте осуществления, нейтрализующие антитела, обеспечиваемые данным аспектом настоящего изобретения, ингибируются от связывания с человеческим IL-17A и человеческим IL-17F антителом, содержащим последовательность тяжелой цепи gH9 (SEQ ID NO:11) и последовательность легкой цепи gL7 (SEQ ID NO:9) более чем на 80%, предпочтительно более чем на 85%, более предпочтительно более чем на 90%, даже более предпочтительно более чем на 95%.

В другом варианте осуществления обеспечивают молекулу нейтрализующего антитела, которое связывается с человеческим IL-17A и человеческим IL-17F, которое перекрестно блокируется от связывания с человеческим IL-17A и человеческим IL-17F и IL-17A/F гетеродимером антителом, содержащим последовательность тяжелой цепи gH9 (SEQ ID NO:11) и последовательность легкой цепи gL57 (SEQ ID NO:10). В одном варианте осуществления, нейтрализующие антитела, обеспечиваемые данным аспектом настоящего изобретения, ингибируются от связывания с человеческим IL-17A и человеческим IL-17F и человеческим IL-17A/F гетеродимером антителом, содержащим последовательность тяжелой цепи gH9 (SEQ ID NO:11) и последовательность легкой цепи gL57 (SEQ ID NO:10) более чем на 80%, предпочтительно более чем на 85%, более предпочтительно более чем на 90%, даже более предпочтительно более чем на 95%.

В другом варианте осуществления обеспечивают молекула нейтрализующего антитела, которое связывается с человеческим IL-17A и человеческим IL-17F, которое перекрестно блокируется от связывания с человеческим IL-17A и человеческим IL-17F и IL-17A/F гетеродимером антителом, содержащим последовательность тяжелой цепи gH9 (SEQ ID NO:11) и последовательность легкой цепи gL7 (SEQ ID NO:9). В одном варианте осуществления, нейтрализующие антитела, обеспечиваемые данным аспектом настоящего изобретения, ингибируются от связывания с человеческим IL-17A и человеческим IL-17F и человеческим IL-17A/F гетеродимером антителом, содержащим последовательность тяжелой цепи gH9 (SEQ ID NO:11) и последовательность легкой цепи gL7 (SEQ ID NO:9) более чем на 80%, предпочтительно более чем на 85%, более предпочтительно более чем на 90%, даже более предпочтительно более чем на 95%.

Следовательно, кроме того, обеспечивают молекулу нейтрализующего антитела, которое связывается с человеческим IL-17A и человеческим IL-17F, которое перекрестно блокируется от связывания с человеческим IL-17A или человеческим IL-17F или человеческим IL-17A/F антителом, содержащим последовательность тяжелой цепи gH9 (SEQ ID NO:11) и последовательность легкой цепи gL57 (SEQ ID NO:10). В одном варианте осуществления, нейтрализующие антитела, обеспечиваемые данным аспектом настоящего изобретения, ингибируются от связывания с человеческим IL-17A или человеческим IL-17F или человеческим IL-17A/F антителом, содержащим последовательность тяжелой цепи gH9 (SEQ ID NO:11) и последовательность легкой цепи gL57 (SEQ ID NO:10) более чем на 80%, предпочтительно более чем на 85%, более предпочтительно более чем на 90%, даже более предпочтительно более чем на 95%.

Следовательно, кроме того, обеспечивают молекулу нейтрализующего антитела, которое связывается с человеческим IL-17A и человеческим IL-17F, которое перекрестно блокируется от связывания с человеческим IL-17A или человеческим IL-17F или человеческим IL-17A/F антителом, содержащим последовательность тяжелой цепи gH9 (SEQ ID NO:11) и последовательность легкой цепи gL7 (SEQ ID NO:9). В одном варианте осуществления, нейтрализующие антитела, обеспечиваемые данным аспектом настоящего изобретения, ингибируются от связывания с человеческим IL-17A или человеческим IL-17F или человеческим IL-17A/F антителом, содержащим последовательность тяжелой цепи gH9 (SEQ ID NO:11) и последовательность легкой цепи gL7 (SEQ ID NO:9) более чем на 80%, предпочтительно более чем на 85%, более предпочтительно более чем на 90%, даже более предпочтительно более чем на 95%.

Эпитопы IL-17A/17-F

Кроме того, в настоящем изобретении обеспечивают специфический участок или эпитоп человеческого IL-17A и/или специфический участок или эпитоп человеческого IL-17F и/или специфический участок или эпитоп человеческого IL-17A/F гетеродимера, который связывается антителом, обеспечиваемым настоящим изобретением, в частности антителом, содержащим последовательность тяжелой цепи gH9 (SEQ ID NO:11) и/или последовательность легкой цепи gL7 (SEQ ID NO:9) и/или последовательность легкой цепи gL57 (SEQ ID NO:10). Последовательности для человеческого IL-17A и человеческого IL-17F приведены в настоящем изобретении на фигуре [1] (SEQ ID NOS: 27 и 28).

Примеры эпитопов настоящего изобретения и способов определения данных эпитопов приведены в примерах 5-7 патента США No. 8679494 (дата приоритета 23 апреля 2008).

Любой подходящий способ, известный в данной области техники, можно применять для определения остатков, связываемых антителом, обеспечиваемым настоящим изобретением, например, водородно-дейтериевым обменом, сайт-направленным мутагенезом, масс спектрометрией, ЯМР и рентгеноструктурным анализом. Смотри, например, способы, описанные в WO2007/149032.

Специфический участок или эпитопом человеческого IL-17A полипептида и/или специфический участок или эпитопом человеческого IL-17F полипептида и/или специфический участок или эпитопом человеческого IL-17A/F гетеродимера можно определить любым подходящим способом картирования эпитопов, известным в данной области техники, в комбинации с любым из антител, обеспечиваемых настоящим изобретением. Примеры данных способов включают скрининг пептидов изменяющейся длины, полученных из IL-17A и IL-17F, на связывание с антителом настоящего изобретения с наименьшим фрагментом, который может специфически связываться с антителом, содержащим последовательность эпитопа, узнаваемого антителом. IL-17 пептиды можно получить синтетически или протеолитическим расщеплением подходящего IL-17 полипептида. Пептиды, которые связываются с антителом, можно определить, например, масс спектрометрическим анализом. В другом примере, ЯМР спектроскопию можно применять для определения эпитопа, связываемого антителом настоящего изобретения. В другом примере, ЯМР спектроскопию можно применять для определения остатков, которые взаимодействуют с антителом настоящего изобретения. После определения, эпитопный фрагмент, который связывается с антитело настоящего изобретения, можно применять, при необходимости, в качестве иммуногена, получая дополнительные нейтрализующие антитела, которые связываются с тем же эпитопом.

В одном варианте осуществления, настоящее изобретение относится к нейтрализующему эпитопу IL-17A, который содержит или состоит из одного или более остатков, выбранных из группы, состоящей из TYR44, ASN45, TRP51, ASN52 и ASP84 человеческого IL-17A (SEQ ID NO:27).

В одном варианте осуществления, настоящее изобретение относится к нейтрализующему эпитопу IL-17A, который содержит или состоит из одного или более остатков, выбранных из группы, состоящей из SER41, TYR44, ASN45, TRP51, ASN52, HIS54, ARG72, HIS73 и ASP84 человеческого IL-17A (SEQ ID NO:27).

В одном варианте осуществления, настоящее изобретение относится к нейтрализующему эпитопу IL-17A, который содержит или состоит из одного или более остатков, выбранных из группы, состоящей из SER41, TYR44, ASN45, ARG46, TRP51, ASN52, HIS54, ARG72, HIS73, ASP84, HIS86, VAL128, HIS129 и VAL131 человеческого IL-17A (SEQ ID NO:27).

В одном варианте осуществления, настоящее изобретение относится к нейтрализующему эпитопу IL-17A, который содержит один или более остатков, выбранных из группы, состоящей из TYR44, ASN45, TRP51, ASN52 и ASP84 человеческого IL-17A (SEQ ID NO:27), и необязательно один или более остатков, выбранных из группы, состоящей из SER41, ARG46, HIS54, ARG72, HIS73, HIS86, VAL128, HIS129 и VAL131 человеческого IL-17A (SEQ ID NO:27).

В одном варианте осуществления, настоящее изобретение относится к нейтрализующему эпитопу IL-17A, который содержит остатки аминокислот TYR44, ASN45, TRP51, ASN52 и ASP84 человеческого IL-17A (SEQ ID NO:27) и необязательно один или более остатков, выбранных из группы, состоящей из SER41, ARG46, HIS54, ARG72, HIS73, HIS86, VAL128, HIS129 и VAL131 человеческого IL-17A (SEQ ID NO:27).

IL-17A представляет собой димер, и в различных вариантах осуществления, эпитоп, связываемый антителом, содержит один или более остатков, выбранных из группы, состоящей из Arg72, His73, Asp80, Gly81, Asn82, Asp84, His86, Val128, His129 и Val131 (SEQ ID NO: 27) из первой цепи димера, и один или более остатков, выбранных из группы, состоящей из Ser41, Tyr44, Asn45, Arg46, Trp51, Asn52 и His54 (например, выбранных из группы, состоящей из Ser41, Tyr44, Asn45 и Arg46) (SEQ ID NO: 27) из второй цепи димера.

В различных вариантах осуществления, нейтрализующее антитело специфически связывается с эпитопом человеческого IL-17A, содержащим или состоящим из одного или более остатков L74, Y85, H73, N82 и R72, предпочтительно L74 и Y85 SEQ ID NO:27.

В различных вариантах осуществления, нейтрализующее антитело специфически связывается с эпитопом человеческого IL-17A (например, последовательность которого показана в GenBank No. доступа Q16552), содержащим или состоящим из одного или более остатков L74 и G75.

Настоящее изобретение также относится к новому нейтрализующему эпитопу человеческого IL-17F (SEQ ID NO:28), который содержит или состоит из одного или более из следующих остатков: SER39, MET40, SER41, ARG42, ARG47, ASN53, ARG73, ASN74, LEU75, LYS83, GLU84, ASP85, ILE86, SER87, MET88, ASN89, VAL91, PRO92, GLN94, THR126, PRO127, VAL128.

Настоящее изобретение также относится к новому нейтрализующему эпитопу человеческого IL-17F (SEQ ID NO:28), который содержит или состоит из одного или более из следующих остатков: SER39, MET40, SER41, ARG42, ARG47, ASN53, CYS72, ARG73, ASN74, LEU75, LYS83, GLU84, ASP85, ILE86, SER87, MET88, ASN89, SER90, VAL91, PRO92, GLN94, THR119, CYS122, VAL125, THR126, PRO127, VAL128.

В одном варианте осуществления, нейтрализующий эпитоп человеческого IL-17F (SEQ ID NO:28) содержит или состоит из одного или более из следующих остатков: SER39, MET40, SER41, ARG42, ARG47, ASN53, ARG73, ASN74, LEU75, LYS83, GLU84, ASP85, ILE86, SER87, MET88, ASN89, VAL91, PRO92, GLN94, THR126, PRO127, VAL128.

В одном варианте осуществления, нейтрализующий эпитоп человеческого IL-17F (SEQ ID NO:28) содержит или состоит из (или дополнительно содержит или дополнительно состоит из) одного или более из следующих остатков: GLN71, CYS72, ILE86, ASN89, SER90 и VAL128, например, из первой цепи в IL17F димере.

В одном варианте осуществления, нейтрализующий эпитоп человеческого IL-17F (SEQ ID NO:28) содержит или состоит из (или дополнительно содержит или дополнительно состоит из) одного или более из следующих остатков: ARG47, например, из второй цепи в IL17F димере.

В одном варианте осуществления, нейтрализующий эпитоп человеческого IL-17F (SEQ ID NO:28) содержит или состоит из одного или более из следующих остатков: GLN71, CYS72, ASN74, LEU75, ILE86, ASN89, SER90, PRO92, VAL128, HIS131 и GLN133, например, из первой цепи в IL17F димере.

В одном варианте осуществления, нейтрализующий эпитоп человеческого IL-17F (SEQ ID NO:28) содержит или состоит из (или дополнительно содержит или дополнительно состоит из) одного или более из следующих остатков: ARG37, SER39, SER41 и ARG47, например, из второй цепи в IL17F димере.

В одном варианте осуществления, нейтрализующий эпитоп человеческого IL-17F (SEQ ID NO:28) содержит или состоит из одного или более из следующих остатков: GLN71, CYS72, ARG73, ASN74, LEU75, ILE86, SER87 ASN89, SER90, VAL91, PRO92, VAL128, HIS131 и GLN133, например, из первой цепи в IL17F димере.

В одном варианте осуществления, нейтрализующий эпитоп человеческого IL-17F (SEQ ID NO:28) содержит или состоит из (или дополнительно содержит или дополнительно состоит из) одного или более из следующих остатков: ASN33, GLN36, ARG37, SER39, SER41, ARG42, ILE44 и ARG47, например, из второй цепи в IL17F димере.

В одном варианте осуществления, нейтрализующий эпитоп человеческого IL-17F (SEQ ID NO:28) содержит или состоит из одного или более из следующих остатков: GLN12, LYS13, SER24, ISO32, ASN33 GLU34, ASN35, GLN36, VAL38, SER46, ASN53, TYR54, GLN69, ISO78, ASP85, SER87, MET88, ASM89, GLN94, LYS103 и THR126.

В одном варианте осуществления, нейтрализующий эпитоп человеческого IL-17F (SEQ ID NO:28) содержит или состоит из одного или более из следующих остатков: GLN12, SER24, ASN33, GLU34, GLN36, VAL38, ASN53, TYR54, ASP85, MET88, ASM89, и THR126.

В одном варианте осуществления, нейтрализующий эпитоп человеческого IL-17F (SEQ ID NO:28) содержит или состоит из одного или более из следующих остатков: GLN12, SER24, ASN33, GLU34, ASP85 и MET88.

В одном варианте осуществления, нейтрализующий эпитоп человеческого IL-17F (SEQ ID NO:28) содержит или состоит из аминокислот V33-V38, включительно.

В одном варианте осуществления, нейтрализующий эпитоп человеческого IL-17F (SEQ ID NO:28) содержит или состоит из аминокислот V87-Q94, включительно.

В одном варианте осуществления, нейтрализующий эпитоп IL-17F (SEQ ID NO:28) дополнительно содержит один или более из следующих остатков: ILE129, HIS130, H131, V132, Q133.

В одном варианте осуществления, обеспечивают один или более нейтрализующих эпитопов человеческого IL-17F (SEQ ID NO:28), каждый из которых независимо содержит или состоит из аминокислот V33-V38, включительно, и/или V87-Q94, включительно.

В различных вариантах осуществления, антитело специфически связывается с эпитопом человеческого IL-17F, содержащим или состоящим из R73, I86, N89, и R47 SEQ ID NO: 28.

В различных вариантах осуществления, нейтрализующее антитело специфически связывается с эпитопом человеческого IL-17F (например, последовательность которого приведена в GenBank No. доступа Q96PD4), содержащим или состоящим из одного или более остатков L75 и G76.

В различных вариантах осуществления, антитело специфически связывается с эпитопом человеческого IL-17F, содержащим или состоящим из S39, S41, N89, C72, N74, L75, S90, V91, P92, V198 SEQ ID NO: 28.

В различных вариантах осуществления, эпитоп, связываемый антителом, содержит один или более остатков, выбранных из группы, состоящей из Gln71, Cys72, Arg73, Asn74, Leu75, Ile86, Ser87, Asn89, Ser90, Val91, Pro92, Val128, His131, и Gln133 (SEQ ID NO: 28) из первой цепи димера, и один или более остатков, выбранных из группы, состоящей из Asn33, Gln36, Arg37, Ser39, Ser41, Arg42, Ile44, Arg47 (SEQ ID NO: 28) из второй цепи димера.

В одном варианте осуществления, эпитоп определяют как остатки аминокислот, расположенные в пределах 4 ангстрем, 3,5 ангстрем или 3,0 ангстрем от связывающей молекулы, такой как антитело или фрагмент.

Настоящее изобретение также относится к эпитопным фрагментам IL-17A, которые можно применять, при необходимости, в качестве иммуногена для получения нейтрализующих антител, которые связываются с нейтрализующим эпитопом IL-17A. Например, эпитопные фрагменты, содержащие один или более остатков аминокислот IL-17A, обеспечиваемые в настоящем изобретении выше, можно применять в качестве иммуногена.

Настоящее изобретение также относится к эпитопным фрагментам IL-17F, которые можно применять, при необходимости, в качестве иммуногена для получения нейтрализующих антител, которые связываются с нейтрализующим эпитопом IL-17F. Например, эпитопные фрагменты, содержащие один или более остатков аминокислот IL-17F, обеспечиваемые в настоящем изобретении выше, можно применять в качестве иммуногена.

Настоящее изобретение также относится к антителам, которые связываются с и/или взаимодействуют с нейтрализующим эпитопом, обеспечиваемым настоящим изобретением. Ясно, что антитело может взаимодействовать непосредственно или опосредованно с эпитопом настоящего изобретения, например, прямым связыванием или аллостерическим взаимодействием.

В одном варианте осуществления, настоящее изобретение относится к антителам, которые связываются с и/или взаимодействуют с нейтрализующим эпитопом IL-17A, обеспечиваемым настоящим изобретением.

Соответственно, в одном варианте осуществления, настоящее изобретение относится к нейтрализующему антителу, которое связывается с человеческим IL-17A и человеческим IL-17F, которое связывается с и/или взаимодействует с эпитопом человеческого IL-17A, содержащим или состоящим из одного или более остатков, выбранных из группы, состоящей из TYR44, ASN45, TRP51, ASN52 и ASP84 человеческого IL-17A (SEQ ID NO:27).

В одном варианте осуществления, настоящее изобретение относится к нейтрализующему антителу, которое связывается с человеческим IL-17A и человеческим IL-17F, которое связывается с эпитопом человеческого IL-17A, содержащим ASN52 человеческого IL-17A (SEQ ID NO:27).

В одном варианте осуществления, настоящее изобретение относится к нейтрализующему антителу, которое связывается с человеческим IL-17A и человеческим IL-17F, которое связывается с эпитопом человеческого IL-17A, содержащим ASN52 и ASP84 человеческого IL-17A (SEQ ID NO:27).

В одном варианте осуществления, настоящее изобретение относится к нейтрализующему антителу, которое связывается с человеческим IL-17A и человеческим IL-17F, которое связывается с эпитопом человеческого IL-17A, содержащим ARG46 и HIS54 человеческого IL-17A (SEQ ID NO:27).

В одном варианте осуществления, настоящее изобретение относится к нейтрализующему антителу, которое связывается с человеческим IL-17A и человеческим IL-17F, которое связывается с эпитопом человеческого IL-17A, который содержит или состоит из одного или более остатков, выбранных из группы, состоящей из SER41, ASN52, ARG72, HIS73 и ASP84 человеческого IL-17A (SEQ ID NO:27).

В одном варианте осуществления, настоящее изобретение относится к нейтрализующему антителу, которое связывается с человеческим IL-17A и человеческим IL-17F, которое связывается с эпитопом человеческого IL-17A, который содержит или состоит из одного или более остатков, выбранных из группы, состоящей из SER41, TYR44, ASN45, ARG46, TRP51, ASN52, HIS54, ARG72, HIS73, ASP84, HIS86, VAL128, HIS129 и VAL131 человеческого IL-17A (SEQ ID NO:27).

В одном варианте осуществления, настоящее изобретение относится к антителам, которые связываются с и/или взаимодействуют с нейтрализующим эпитопом IL-17F, обеспечиваемым настоящим изобретением.

Соответственно, в одном варианте осуществления, настоящее изобретение относится к нейтрализующему антителу, которое связывается с человеческим IL-17F, которое связывается с эпитопом человеческого IL-17F, содержащим один или более из следующих остатков: SER39, MET40, SER41, ARG42, ARG47, ASN53, ARG73, ASN74, LEU75, LYS83, GLU84, ASP85, ILE86, SER87, MET88, ASN89, SER90, VAL91, PRO92, GLN94, THR126, PRO127, VAL128 IL-17F (SEQ ID NO:28).

В одном варианте осуществления, настоящее изобретение относится к нейтрализующему антителу, которое связывается с человеческим IL-17F, которое связывается с эпитопом человеческого IL-17F в пределах одного или более из следующих участков: (i) 39-42 (SER39, MET40, SER41, ARG42) (ii) 47 (ARG47) (iii) 53 (ASN53) (iv) 72-75 (CYS72, ARG73, ASN74, LEU75) (v) 83-92 (LYS83, GLU84, ASP85, ILE86, SER87, MET88, ASN89, SER90, VAL91, PRO92) (vi) 94 (GLN94) (vii) 119 (THR119) (viii) 122 (CYS122) (ix) 125-128 (VAL125, THR126, PRO127, VAL128).

В одном варианте осуществления, антитело настоящего изобретения связывается с человеческим IL-17A и человеческим IL-17F. В одном варианте осуществления, антитело настоящего изобретения связывается с человеческим IL-17A/F гетеродимером. В одном варианте осуществления, антитело настоящего изобретения связывается с человеческим IL-17A и человеческим IL-17A/F гетеродимером. В одном варианте осуществления, антитело настоящего изобретения связывается с человеческим IL-17F и человеческим IL-17A/F гетеродимером. В предпочтительном варианте осуществления, антитело настоящего изобретения связывается с человеческим IL-17A, человеческим IL-17F и человеческим IL-17A/F гетеродимером.

В одном варианте осуществления, настоящее изобретение относится к нейтрализующему антителу, которое связывается с человеческим IL-17A и IL-17F, которое связывается с эпитопом человеческого IL-17F в пределах одного или более из следующих участков: (i) 39-42 (SER39, MET40, SER41, ARG42) (ii) 47 (ARG47) (iii) 53 (ASN53) (iv) 72-75 (CYS72, ARG73, ASN74, LEU75) (v) 83-92 (LYS83, GLU84, ASP85, ILE86, SER87, MET88, ASN89, SER90, VAL91, PRO92) (vi) 94 (GLN94) (vii) 119 (THR119) (viii) 122 (CYS 122) (ix) 125-128 (VAL125, THR126, PRO127, VAL128).

Соответственно, в одном варианте осуществления, настоящее изобретение относится к нейтрализующему антителу, которое связывается с человеческим IL-17A и человеческим IL-17F, которое связывается с и/или взаимодействует с эпитопом человеческого IL-17F, содержащим или состоящим из одного или более остатков, выбранных из группы, состоящей из SER39, MET40, SER41, ARG42, ARG47, ASN53, ARG73, ASN74, LEU75, LYS83, GLU84, ASP85, ILE86, SER87, MET88, ASN89, SER90, VAL91, PRO92, GLN94, THR126, PRO127, VAL128 SEQ ID NO:28 (IL-17F).

В одном варианте осуществления, настоящее изобретение относится к нейтрализующему антителу, которое связывается с человеческим IL-17A и человеческим IL-17F, которое связывается с и/или взаимодействует с эпитопом человеческого IL-17A, который содержит или состоит из одного или более остатков, выбранных из группы, состоящей из SER41, TYR44, ASN45, ARG46, TRP51, ASN52, HIS54, ARG72, HIS73, ASP84, HIS86, VAL128, HIS129 и VAL131 человеческого IL-17A (SEQ ID NO:27) и связывается с и/или взаимодействует с эпитопом человеческого IL-17F, содержащим или состоящим из одного или более остатков, выбранных из группы, состоящей из SER39, MET40, SER41, ARG42, ARG47, ASN53, ARG73, ASN74, LEU75, LYS83, GLU84, ASP85, ILE86, SER87, MET88, ASN89, SER90, VAL91, PRO92, GLN94, THR126, PRO127, VAL128 SEQ ID NO:28 (IL-17F).

В одном варианте осуществления, настоящее изобретение относится к нейтрализующему антителу, которое связывается с человеческим IL-17A и человеческим IL-17F, которое связывается с и/или взаимодействует с эпитопом человеческого IL-17F, содержащим или состоящим из одного или более остатков, выбранных из группы, состоящей из SER39, SER41, ASN74, LEU75, ASN89, SER90, VAL91, PRO92 и VAL128 SEQ ID NO:28 (IL-17F).

Соответственно, в одном варианте осуществления, настоящее изобретение относится к нейтрализующему антителу, которое связывается с человеческим IL-17A и человеческим IL-17F, которое связывается с и/или взаимодействует с эпитопом человеческого IL-17F, содержащим или состоящим из одного или более остатков, выбранных из группы, состоящей из ARG47, ARG73, LEU75 и ILE86 SEQ ID NO:28 (IL-17F).

Соответственно, в одном варианте осуществления, настоящее изобретение относится к нейтрализующему антителу, которое связывается с человеческим IL-17A и человеческим IL-17F, которое связывается с и/или взаимодействует с эпитопом человеческого IL-17F, содержащим LEU75 SEQ ID NO:28 (IL-17F).

Выделенные ДНК последовательности антител

Настоящее изобретение также относится к выделенной ДНК, содержащей нуклеотидную последовательность, кодирующую тяжелую и/или легкую цепь (цепи) молекулы антитела настоящего изобретения. Предпочтительно, ДНК последовательность кодирует тяжелую или легкую цепь молекулы антитела настоящего изобретения. ДНК настоящего изобретения может включать синтетическую ДНК, например, полученную химическим способом, кДНК, геномную ДНК или любую их комбинацию.

ДНК, содержащую нуклеотидные последовательности, которые кодируют молекулу антитела настоящего изобретения, можно получить способами, хорошо известными специалистам в данной области техники. Например, ДНК, содержащую нуклеотидные последовательности, кодирующие часть или всю тяжелую и легкую цепи антитела, можно получить, как требуется согласно определенным ДНК последовательностям или на основе соответствующих аминокислотных последовательностей.

ДНК, кодирующая последовательности акцепторного остова, широкодоступны специалисту в данной области техники, и их можно легко получить на основе их известных аминокислотных последовательностей.

Стандартные способы молекулярной биологии можно применять для получения ДНК последовательностей, кодирующих молекулы антитела настоящего изобретения. Требуемые ДНК последовательности можно получить полностью или частично, применяя способы олигонуклеотидного синтеза. Способы сайт-направленного мутагенеза и полимеразной цепной реакции (PCR) можно применять в случае необходимости.

Примеры подходящих последовательностей приведены в SEQ ID NO:18; SEQ ID NO:19; SEQ ID NO:20; SEQ ID NO:21; SEQ ID NO:22; SEQ ID NO:23; SEQ ID NO:24; SEQ ID NO:25; и SEQ ID NO:26. Настоящее изобретение также относится к клонирующему вектору или экспрессирующему вектору, содержащему одну или более ДНК последовательностей настоящего изобретения. Соответственно, настоящее изобретение относится к клонирующему или экспрессирующему вектору, содержащему одну или более ДНК последовательностей, кодирующих антитело настоящего изобретения. Предпочтительно, клонирующий или экспрессирующий вектор содержит две ДНК последовательности, кодирующие легкую цепь и тяжелую цепь молекулы антитела настоящего изобретения, соответственно, вместе с подходящими сигнальными последовательностями. Предпочтительно, вектор согласно настоящему изобретению содержит последовательности, указанные в SEQ ID NO:21 и SEQ ID NO:24. В одном варианте осуществления, вектор согласно настоящему изобретению содержит последовательности, указанные в SEQ ID NO:21 и SEQ ID NO:24.

Общие способы, которыми можно конструировать векторы, способы трансфекции и способы культивирования являются хорошо известными специалисту в данной области техники. В связи с этим, смотри ʺCurrent Protocols in Molecular Biologyʺ, 1999, F. M. Ausubel (ed), Wiley Interscience, New York и the Maniatis Manual produced by Cold Spring Harbor Publishing.

Кроме того, настоящее изобретение относится к клетке-хозяину, содержащей один или более клонирующих или экспрессирующих векторов, содержащих одну или более ДНК последовательностей, кодирующих антитело настоящего изобретения. Любую подходящую систему клетка-хозяин/вектор можно применять для экспрессии ДНК последовательностей, кодирующих молекулу антитела настоящего изобретения. Бактериальную, например E. coli, и другие системы микроорганизмов можно применять, или можно также применять эукариотические, например, относящиеся к млекопитающим, экспрессирующие системы клетка-хозяин. Подходящие клетки-хозяины млекопитающих включают CHO, миеломные или гибридомные клетки.

Настоящее изобретение также относится к способу получения молекул антитела согласно настоящему изобретению, включающему культивирование клетки-хозяина, содержащей вектор настоящего изобретения в условиях, подходящих для осуществления экспрессии белка с ДНК, кодирующей молекулу антитела настоящего изобретения, и выделение молекулы антитела.

Молекула антитела может содержать только полипептид тяжелой или легкой цепи, в данном случае только последовательность, кодирующую полипептид тяжелой цепи или легкой цепи, необходимо применять для трансфекции клеток-хозяев. Для получения продуктов, содержащих и тяжелую и легкую цепи, клеточную линию можно трансфецировать двумя векторами, причем первый вектор кодирует полипептид легкой цепи, и второй вектор кодирует полипептид тяжелой цепи. Альтернативно, можно применять один вектор, причем вектор содержит последовательности, кодирующие полипептиды легкой цепи и тяжелой цепи.

Конъюгирование с эффекторными молекулами

При необходимости, антитело для применения в настоящем изобретении можно конъюгировать с одной или более эффекторной молекулой (молекулами). Ясно, что эффекторная молекула может включать одну эффекторную молекулу или две или более данных молекул, соединенных так, чтобы образовывать одну молекулу, которую можно соединить с антителами настоящего изобретения. Когда требуется получить фрагмент антитела, соединенный с эффекторной молекулой, его можно получить стандартными химическими или рекомбинантными ДНК способами, в которых фрагмент антитела соединяют или непосредственно или с помощью конденсирующего реагента с эффекторной молекулой. Способы конъюгации данных эффекторных молекул с антителами являются хорошо известными в данной области техники (смотри Hellstrom et al., Controlled Drug Delivery, 2nd Ed., Robinson et al., eds., 1987, pp. 623-53; Thorpe et al., 1982, Immunol. Rev., 62:119-58 и Dubowchik et al., 1999, Pharmacology and Therapeutics, 83, 67-123). Конкретные химические способы включают, например, способы, описанные в WO 93/06231, WO 92/22583, WO 89/00195, WO 89/01476 и WO03031581. Альтернативно, когда эффекторная молекула представляет собой белок или полипептид, можно достигать соединения, применяя реакомбинатные ДНК способы, например, как описано в WO 86/01533 и EP0392745.

Термин эффекторная молекула, как применяют в настоящем изобретении, включает, например, антинеопластические агенты, лекарственные средства, токсины, биологически активные белки, например, ферменты, другое антитело или фрагменты антитела, синтетические или природные полимеры, нуклеиновые кислоты и их фрагменты, например, ДНК, РНК и их фрагменты, радионуклиды, в частности радиойодид, радиоизотопы, хелатированные металлы, наночастицы и репортерные группы, такие как флуоресцентные соединения или соединения, которые можно детектировать ЯМР или ESR спектроскопией.

Примеры эффекторных молекул могут включать цитотоксины или цитотоксические агенты, включая любой агент, который является губительным (например, убивает) для клеток. Примеры включают комбрестатины, доластатины, эпотилоны, стауроспорин, майтанзиноиды, спонгистатины, ризоксин, халикондрины, роридины, гемиастерлины, таксол, цитохалазин B, грамицидин D, бромистый этидий, эметин, митомицин, этопозид, тенопозид, винкристин, винбластин, колхицин, доксорубицин, даунорубицин, дигидроксиантрациндион, митоксантрон, митрамицин, актиномицин D,1-дигидротестостерон, глюкокортикоиды, новокаин, тетракаин, лидокаин, пропранолол и пуромицин и их аналоги или гомологи.

Эффекторные молекулы также включают, но не ограничиваясь, антиметаболиты (например, метотрексат, 6-меркаптопурин, 6-тиогуанин, цитарабин 5-фторурацилдекарбазин), алкилирующие агенты (например, мехлорэтамин, тиотепа, хлорамбуцил, мелфалан, кармустин (BSNU) и ломустин (CCNU), циклофосфамид, бусульфан, дибромманнитол, стрептозотоцин, митомицин C и цис-дихлордиаминплатина (II) (DDP) цисплатина), антрациклины (например, даунорубицин (первоначально дауномицин) и доксорубицин), антибиотики (например, дактиномицин (первоначально актиномицин), блеомицин, митрамицин, антрамицин (AMC), калихимицины или дуокармицины), и антимитотические агенты (например, винкристин и винбластин).

Другие эффекторные молекулы могут включать хелатированные радионуклиды, такие как ¹¹¹In и ⁹⁰Y, Lu¹⁷⁷, висмут²¹³, калифорний²⁵², иридий^{192 и} вольфрам¹⁸⁸/рений¹⁸⁸; или лекарственные средства, такие как, но не ограничиваясь, алкилфосфохолины, ингибиторы топоизомеразы I, таксоиды и сурамин.

Другие эффекторные молекулы включают белки, пептиды и ферменты. Требуемые ферменты включают, но не ограничиваясь, протеолитические ферменты, гидролазы, лиазы, изомеразы, трансферазы. Требуемые белки, полипептиды и пептиды включают, но не ограничиваясь, иммуноглобулины, токсины, такие как абрин, рицин A, экзотоксин синегнойной палочки или дифтерийный токсин, белок, такой как инсулин, фактор некроза опухоли, α-интерферон, β-интерферон, фактор роста нервов, фактор роста тромбоцитов или тканевый активатор плазминогена, тромботический агент или антиангиогенный агент, например, ангиостатин или эндостатин, или модификатор биологического ответа, такой как лимфокин, интерлейкин-1 (IL-1), интерлейкин-2 (IL-2), интерлейкин-6 (IL-6), гранулоцитарно-моноцитарный колониестимулирующий фактор (GM-CSF), гранулоцитарный колониестимулирующий фактор (G-CSF), фактор роста нервов (NGF) или другой фактор роста и иммуноглобулины.

Другие эффекторные молекулы могут включать детектируемые вещества, пригодные, например, в диагностике. Примеры детектируемых веществ включают различные ферменты, простетические группы, флуоресцентные материалы, люминесцентные материалы, биолюминесцентные материалы, радиоактивные нуклиды, позитронно-активные металлы (для применения в позитронно-эмиссионной томографии) и ионы нерадиоактивных парамагнитных металлов. В общем, смотри патент США No. 4741900 относительно ионов металлов, которые можно конъюгировать с антителами для применения в качестве диагностических инструментов. Подходящие ферменты включают пероксидазу хрена, щелочные фосфатазы, бета-галактозидазу или ацетилхолинэстеразу; подходящие простетические группы включают стрептавидин, авидин и биотин; подходящие флуоресцентные материалы включают умбеллиферон, флуоресцеин, изотиоцианат флуоресцеина, родамин, дихлортриазиниламинфлуоресцеин, дансилхлорид и фикоэритрин; подходящие люминесцентные материалы включают люминол; подходящие биолюминесцентные материалы включают люциферазу, люциферин и экворин; и подходящие радиоактивные нуклиды включают ¹²⁵I, ¹³¹I, ¹¹¹In и ⁹⁹Tc.

В другом примере эффекторная молекула может увеличивать период полужизни антитела in vivo, и/или снижать иммуногенность антитела и/или улучшать доставку антитела через эпителиальный барьер к иммунной системе. Примеры подходящих эффекторных молекул данного типа включают полимеры, альбумин, альбумин-связывающие белки или альбумин-связывающие соединения, такие как соединения, описанные в WO05/117984.

Когда эффекторная молекула представляет собой полимер, он может в общем представлять собой синтетический или природный полимер, например, необязательно замещенный полиалкилен с нормальной или разветвленной цепью, полиалкениленовый или полиоксиалкиленовый полимер или разветвленный или неразветвленный полисахарид, например, гомо- или гетерополисахарид.

Конкретные необязательные заместители, которые могут присутствовать в приведенных выше синтетических полимерах, включают одну или более гидрокси, метильных или метокси групп.

Конкретные примеры синтетических полимеров включают необязательно замещенный нормальный или разветвленный поли(этиленгликоль), поли(пропиленгликоль) поли(виниловый спирт) или их производные, особенно необязательно замещенный поли(этиленгликоль), такой как метоксиполи(этиленгликоль) или его производные.

Конкретные природные полимеры включают лактозу, амилозу, декстран, гликоген или их производные.

Предполагается, что ʺпроизводныеʺ, как применяют в настоящем изобретении, включают реакционноспособные производные, например, тиол-селективные реакционноспособные группы, такие как малеимиды и подобные. Реакционноспособную группу можно соединять непосредственно или через линкерный сегмент с полимером. Ясно, что остаток данной группы будет, в некоторых случаях, образовывать часть продукта в виде линкерной группы между фрагментом антитела и полимером.

Размер полимера можно изменять, при необходимости, но обычно он будет в диапазоне средней молекулярной массы от 500 Да до 50000 Да, предпочтительно от 5000 до 40000 Да и более предпочтительно от 20000 до 40000 Да. Размер полимера можно в частности выбрать, исходя из предполагаемого применения продукта, например, способности локализоваться в определенных тканях, таких как опухоли, или увеличивать время полужизни в кровотоке (для ознакомления смотри Chapman, 2002, Advanced Drug Delivery Reviews, 54, 531-545). Таким образом, например, когда предполагается, что продукт будет покидать кровоток и проникать в ткань, например, для применения в лечении опухоли, может быть предпочтительно применять низкомолекулярный полимер, например, с молекулярной массой в районе 5000 Да. Для применений, в которых продукт остается в кровотоке, может быть предпочтительно применять более высокомолекулярный полимер, например, имеющий молекулярную массу в диапазоне от 20000 Да до 40000 Да.

Особенно предпочтительные полимеры включают полиаклиленовый полимер, такой как поли(этиленгликоль) или, особенно, метоксиполи(этиленгликоль) или его производное, и особенно с молекулярной массой в диапазоне от приблизительно 15000 Да до приблизительно 40000 Да.

В одном примере, антитела для применения в настоящем изобретении соединяют с молекулами поли(этиленгликоля) (PEG). В одном конкретном примере антитело представляет собой фрагмент антитела, и PEG молекулы можно присоединить через любую имеющуюся аминокислотную боковую цепь или концевую функциональную группу аминокислоты, находящуюся во фрагменте антитела, например, любую свободную амино, имино, тиольную, гидроксильную или карбоксильную группу. Данные аминокислоты могут встречаться естественным образом во фрагменте антитела или могут быть встроены во фрагмент, применяя рекомбинантные ДНК способы (смотри, например, патент США No. 5219996; патент США No. 5667425; WO98/25971). В одном примере, молекула антитела настоящего изобретения представляет собой модифицированный Fab фрагмент, в котором модификация представляет собой присоединение к C-концу его тяжелой цепи одной или более аминокислот, обеспечивая присоединение эффекторной молекулы. Предпочтительно, присоединяемые аминокислоты образуют модифицированную шарнирную область, содержащую один или более остатков цистеина, к которым может быть присоединена эффекторная молекула. Несколько сайтов можно применять для присоединения двух или более молекул PEG.

Предпочтительно молекулы PEG ковалентно присоединены через тиольную группу, по меньшей мере, одного остатка цистеина, находящегося во фрагменте антитела. Каждая молекула полимера, присоединенная к модифицированному фрагменту антитела, может быть ковалентно соединена с атомом серы остатка цистеина, находящегося в данном фрагменте. Ковалентная связь будет обычно представлять собой дисульфидную связь или, в частности, связь серу-углерод. Когда применяют тиольную группу в качестве места присоединения, можно применять подходящим образом активированные эффекторные молекулы, например, тиол-селективные производные, такие как малеимиды и цистеиновые производные. Активированный полимер можно применять в качестве исходного соединения в получении модифицированных полимером фрагментов антител, как описано выше. Активированный полимер может представлять собой любой полимер, содержащий тиольную реакционноспособную группу, такую как α-галогенкарбоновая кислота или эфир, например, йодацетамид, имид, например, малеимид, винилсульфон или дисульфид. Данные исходные соединения можно приобрести (например, у Nektar, первоначально Shearwater Polymers Inc., Huntsville, Ala., USA) или можно получить из имеющихся в продаже исходных соединений, применяя общепринятые химические способы. Конкретные молекулы PEG включают 20K метокси-PEG-амин (который можно получить у Nektar, первоначально Shearwater; Rapp Polymere; и SunBio) и M-PEG-SPA (который можно получить у Nektar, первоначально Shearwater).

В одном варианте осуществления, антитело представляет собой модифицированный Fab фрагмент, который является пегилированным, т.е., содержит PEG (поли(этиленгликоль)), ковалентно присоединенный к нему, например, согласно способу, описанному в EP 0948544 [смотри также ʺPoly(ethylene glycol) Chemistry, Biotechnical and Biomedical Applicationsʺ, 1992, J. Milton Harris (ed), Plenum Press, New York, ʺPoly(ethylene glycol) Chemistry and Biological Applicationsʺ, 1997, J. Milton Harris и S. Zalipsky (eds), American Chemical Society, Washington D.C. и ʺBioconjugation Protein Coupling Techniques for the Biomedical Sciencesʺ, 1998, M. Aslam и A. Dent, Grove Publishers, New York; Chapman, A. 2002, Advanced Drug Delivery Reviews 2002, 54:531-545]. В одном примере, PEG присоединяют к цистеину в шарнирной области. В одном примере, модифицированный PEG Fab фрагмент содержит малеимидную группу, ковалентно соединенную с одной тиольной группой в модифицированной шарнирной области. Остаток лизина можно ковалентно соединять с малеимидной группой, и с каждой из аминогрупп остатка лизина можно соединять метоксиаполи(этиленгликольный) полимер, имеющий молекулярную массу приблизительно 20000 Да. Суммарная молекулярная масса PEG, соединенного с Fab фрагментом, может, следовательно, составлять приблизительно 40000 Да.

В одном варианте осуществления, молекула нейтрализующего антитела настоящего изобретения представляет собой модифицированный Fab фрагмент, содержащей на C-конце его тяжелой цепи модифицированную шарнирную область, содержащую, по меньшей мере, один остаток цистеина, к которому присоединяют эффекторную молекулу. В одном варианте осуществления, настоящее изобретение относится к молекуле нейтрализующего антитела, обладающей специфичностью к человеческому IL-17A и человеческому IL-17F, которая представляет собой модифицированный Fab фрагмент, содержащий тяжелую цепь, содержащую последовательность, указанную в SEQ ID NO:11, и легкую цепь, содержащую последовательность, указанную в SEQ ID NO:9, или последовательность, указанную в SEQ ID NO:10, и содержащий на C-конце его тяжелой цепи модифицированную шарнирную область, содержащую, по меньшей мере, один остаток цистеина, с которым соединена эффекторная молекула. Предпочтительно эффекторная молекула представляет собой PEG, и она присоединена, применяя способы, описанные в (WO98/25971 и WO2004072116), посредством этого лизил-малеимидную группу присоединяют к остатку цистеина на C-конце тяжелой цепи, и каждую аминогруппу лизильного остатка ковалентно соединяют с его метоксиполи(этиленгликольным) остатком, имеющим молекулярную массу приблизительно 20000 Да. Суммарная молекулярная масса PEG, присоединенного к антителу, следовательно, составляет приблизительно 40000 Да.

В другом примере эффекторные молекулы можно соединять с фрагментами антитела, применяя способы, описанные в международных патентных заявках WO2005/003169, WO2005/003170 и WO2005/003171.

Фармацевтические композиции, режимы введения

Поскольку антитела настоящего изобретения являются пригодными в лечении и/или профилактике патологических состояний, настоящее изобретение также относится к фармацевтической или диагностической композиции, содержащей молекулу антитела настоящего изобретения в комбинации с одним или более фармацевтически приемлемым вспомогательным веществом, разбавителем или носителем. Соответственно, обеспечивают применение антитела согласно настоящему изобретению в получении лекарственного средства. Композиция будет обычно поставляться как часть стерильной фармацевтической композиции, которая будет обычно содержать фармацевтически приемлемый носитель. Кроме того, фармацевтическая композиция настоящего изобретения может содержать фармацевтически приемлемый адъювант.

Настоящее изобретение также относится к способу получения фармацевтической или диагностической композиции, включающему добавление и смешение молекулы антитела настоящего изобретения вместе с одним или более фармацевтически приемлемым вспомогательным веществом, разбавителем или носителем.

Молекула антитела может быть единственным активным ингредиентом в фармацевтической или диагностической композиции или может сопровождаться другими активными ингредиентами, включая другие фрагменты антител, например, анти-TNF, анти-IL-1β, анти-T клеточные, анти-IFNγ или анти-LPS антитела, или ингредиенты, отличные от антител, такие как ксантины или низкомолекулярный ингибитор.

Фармацевтические композиции предпочтительно содержат терапевтически эффективное количество антитела настоящего изобретения. Термин ʺтерапевтически эффективное количествоʺ, как применяют в настоящем изобретении, относится к количеству терапевтического агента, требуемое для лечения, облегчения или предотвращения целевого заболевания или состояния, или проявления детектируемого терапевтического или превентативного эффекта.

Точное терапевтически эффективное количество для субъекта, являющегося человеком, будет зависеть от тяжести заболевания, общего состояния здоровья субъекта, возраста, веса и пола субъекта, рациона, продолжительности и частоты введения, лекарственной комбинации (комбинаций), реакционной чувствительности и переносимости/ответа на терапию. Данное количество можно определить стандартным экспериментированием, и оно определяется на усмотрение лечащего врача. Обычно, терапевтически эффективное количество будет составлять от 0,01 мг/кг до 50 мг/кг, предпочтительно от 0,1 мг/кг до 20 мг/кг (например, от 5 мг/кг до 10 мг/кг, такой как приблизительно 8 мг/кг). Фармацевтические композиции можно удобно предоставлять в виде однократных доз, содержащих предварительно определенное количество активного агента настоящего изобретения на дозу. Единичная доза может быть в диапазоне от 10 мг до 1000 мг (например, от 80 мг до 720 мг, от 100 мг до 680 мг или от 160 мг до 640 мг), предпочтительно 8 мг, 16 мг, 32 мг, 40 мг, 80 мг, 160 мг, 240 мг, 320 мг, 480 мг, 560 мг и 640 мг.

В различных вариантах осуществления способов лечения псориаза, такого как пятнистый псориаз, количество нейтрализующего антитела, вводимое субъекту, представляет собой количество, которое достигает, по меньшей мере, 50% изменения, по меньшей мере, 60% изменения, по меньшей мере, 75% изменения (например, по меньшей мере, 80% изменения, по меньшей мере, 85% изменения, по меньшей мере, 90% изменения, или, по меньшей мере, 95% изменения) по шкале оценки тяжести повреждений (LSS) по сравнению с предобработкой (т.е., LSS перед введением нейтрализующего антитела) через две, четыре, шесть или восемь недель после введения антитела. Альтернативно или в добавление, вводимое количество нейтрализующего антитела представляет собой количество, которое достигает, по меньшей мере, 50% изменения, по меньшей мере, 60% изменения, по меньшей мере, 75% изменения (например, по меньшей мере, 80% изменения, по меньшей мере, 85% изменения, по меньшей мере, 90% изменения, или, по меньшей мере, 95% изменения) по показателю площади и тяжести псориаза (PASI) по сравнению с предобработкой через две, четыре, шесть или восемь недель после введения антитела. Альтернативно или в добавление количество нейтрализующего антитела представляет собой количество, которое достигает, по меньшей мере, 50% изменения, 60% изменения, 75% изменения (например, 80% изменения, 85% изменения, 90% изменения или 95% изменения) PASI по сравнению с предобработкой через две, четыре, шесть или восемь недель после введения антитела и которое поддерживает или увеличивает изменение PASI ответа в течение дополнительных двух, четырех, шести, восьми, десяти, двенадцати, четырнадцати, шестнадцати, восемнадцати, двадцати или более недель после введения антитела. Необязательно, количество нейтрализующего антитела представляет собой количество, которое достигает, по меньшей мере, 50% изменения, 60% изменения, 75% изменения (например, 80% изменения, 85% изменения, 90% изменения или 95% изменения) PASI по сравнению с предобработкой через две, четыре, шесть или восемь недель после введения антитела, и балл по PASI не изменяется более чем на 5%, более чем на 10%, более чем на 20%, более чем на 25%, более чем на 30%, более чем на 35% или более чем на 40% относительно исходной величины (величина предобработки) в течение дополнительных двух, четырех, шести, восьми, десяти, двенадцати, четырнадцати, шестнадцати, восемнадцати, двадцати или более недель после введения антитела.

Альтернативные способы оценки лечения псориаза представляют собой балл по общей оценки врача. PGA балльная система основана на покраснении, уплотнении и размере поврежденных участков, с определением балла, который находится в диапазоне от чистых до тяжелых, обычно применяя 5 или 6-параметрическую шкалу Смотри, например, Langley et al., J Am Acad Dermatol. 2004;51(4):563-569. В различных аспектах, способ лечения псориаза, описанный в настоящем изобретении, приводит в результате к снижению балла по PGA, по меньшей мере, на 20%, по меньшей мере, на 50% или, по меньшей мере, на 70% относительно исходной величины на 2 неделю, 6 неделю, 8 неделю и/или 12 неделю после введения.

В различных вариантах осуществления, относящихся к лечению псориатического артрита, количество нейтрализующего антитела, вводимое субъекту, представляет собой количество, которое достигает (i), по меньшей мере, 50% изменения, по меньшей мере, 60% изменения, по меньшей мере, 75% изменения (например, по меньшей мере, 80% изменения, по меньшей мере, 85% изменения, по меньшей мере, 90% изменения или, по меньшей мере, 95% изменения) по шкале оценки тяжести повреждений (LSS) по сравнению с предобработкой (т.е., LSS перед введением нейтрализующего антитела) через две, четыре, шесть или восемь недель после введения антитела и/или (ii), по меньшей мере, 50% изменения, по меньшей мере, 60% изменения, по меньшей мере, 75% изменения (например, по меньшей мере, 80% изменения, по меньшей мере, 85% изменения, по меньшей мере, 90% изменения, или, по меньшей мере, 95% изменения) по показателю площади и тяжести псориаза (PASI) по сравнению с предобработкой через две, четыре, шесть или восемь недель после введения антитела и/или (iii), по меньшей мере, 20% изменения, по меньшей мере, 30%, по меньшей мере, 50%, по меньшей мере, 60% или, по меньшей мере, 70% изменения ответа согласно американской коллегии ревматологии (ʺACRʺ) по сравнению с предобработкой через две, четыре, шесть или восемь недель после введения антитела. Альтернативно или в добавление, количество нейтрализующего антитела представляет собой количество, которое достигает приведенных выше изменений LSS, PASI, и/или ACR баллов через две, четыре, шесть или восемь недель после введения антитела и поддерживает или увеличивает изменение LSS, PASI и/или ACR ответа в течение дополнительных двух, четырех, шести, восьми, десяти, двенадцати, четырнадцати, шестнадцати, восемнадцати, двадцати или более недель после введения антитела. Необязательно, количество нейтрализующего антитела представляет собой количество, которое достигает приведенного выше изменения LSS, PASI, и/или ACR балла через две, четыре, шесть или восемь недель после введения антитела, и LSS, PASI, и/или ACR балл не изменяется более чем на 5%, более чем на 10%, более чем на 20%, более чем на 25%%, более чем на 30%, более чем на 35% или более чем на 40% относительно исходной величины (величины предобработки) в течение дополнительных двух, четырех, шести, восьми, десяти, двенадцати, четырнадцати, шестнадцати, восемнадцати, двадцати или более недель после введения антитела.

CA028_0496.g3 испытывали на пациентах после одного внутривенного введения дозы в диапазоне доз от 8 мг до 640 мг. CA028_0496.g3 также испытывали при повторяющемся введении доз при различных режимах дозирования, включая ударную дозу, с последующими поддерживающими дозами на 3 и 6 неделю. Режим с введением нескольких доз без ударной дозы также предполагается как часть настоящего изобретения.

Ясно, что подходящий режим дозирования для любого указанного анти-IL-17A/F антитела можно разрабатывать, применяя PK и PD (эффективность) информацию, определенную для антитела, как описано в примерах настоящего изобретения для CA028_0496.g3 (бимекизумаб). Обычно режим дозирования для применения в настоящем изобретении будет обеспечивать среднюю минимальную концентрацию в районе 1-50 мкг/мл после единичной или множественной дозы (стационарный режим), например, среднюю минимальную концентрацию, большую чем 10 мкг/мл.

Потенциальные диапазоны и режимы дозирования для любого из вариантов осуществления, описанных в настоящем изобретении, включают, но не ограничиваясь, дозирование в диапазоне 10 мг-1000 мг единичных доз (например, 8 мг, 16 мг, 32 мг, 40 мг, 64 мг, 80 мг, 160 мг, 240 мг, 320 мг, 480 мг, 560 мг или 640 мг), вводимые каждую 1-10 неделю (любым путем введения, таким как подкожное или внутривенное введение). Необязательно, дозу нейтрализующего антитела вводят каждые 1-20 недель, например каждые 2 недели, каждые 3 недели, каждые 4 недели, каждые 5 недель, каждые 6 недель, каждые 7 недель или каждые 8-12 недель (например, каждые 8 недель, каждые 9 недель, каждые 10 недель, каждые 11 недель или каждые 12 недель). Период лечения (т.е., период времени, в течение которого одну или более доз антитела вводят субъекту) может включать, по меньшей мере, две недели, по меньшей мере, четыре недели, по меньшей мере, восемь недель, по меньшей мере, 12 недель, по меньшей мере, 16 недель, по меньшей мере, 20 недель, по меньшей мере, 24 недели, по меньшей мере, 30 недель, по меньшей мере, 36 недель, по меньшей мере, 40 недель, по меньшей мере, 44 недель, по меньшей мере, 48 недель, по меньшей мере, 52 недель, или более. Любое походящее число доз можно вводить в течение периода лечения, такие как дозы и продолжительность между введениями, описанные выше. Например, одну, две, три или четыре дозы антитела вводят субъекту в течение, например, 12 недельного периода лечения (необязательно на 0 неделю, 4 неделю, 8 неделю и 12 неделю). В одном примерном варианте осуществления, способ включает введение 320 мг антитела субъекту каждые четыре недели в течение, по меньшей мере, двенадцати недель. В одном примерном варианте осуществления, способ включает введение 160 мг антитела субъекту каждые четыре недели в течение, по меньшей мере, двенадцати недель. В одном примере способ включает введение 160 мг, 240 мг или 320 мг каждые четыре недели. В одном примере способ включает 320 мг ударную дозу, с последующей поддерживающей дозой 160 мг или 240 мг каждые четыре недели. Ясно, что дозы можно вводить через определенные интервалы в течение первого периода лечения, затем вводить через отличные интервалы в течение второго периода лечения (например, вводить каждые четыре или восемь недель в течение первого периода введения, например, из 12 или 16 или 20 недель, затем вводить каждую восьмую, 12 или 16 неделю в течение второго периода лечения, длящегося дополнительные, например, 24 или 36 недель или более).

В некоторых примерах настоящего изобретения режим дозирования, применяемый в первоначальный период лечения, такой как первые 12 или 16 или 24 недель лечения, можно считать 'индукционным периодом', после которого можно применять отличный режим, такой как поддерживающий режим, в котором обычно можно применять меньшие дозы или сниженную частоту дозирования.

В некоторых случаях, можно снизить частоту дозирования и/или дозу, когда достигнута некоторая степень эффективности. Например, в способе лечения псориаза настоящего изобретения, на 12 неделю или 16 неделю или 24 неделю частоту дозирования и/или дозу можно изменять, если субъект достигает PASI 75 или PASI 90. Например, в способе лечения псориатического артрита настоящего изобретения, на 12 неделю или 16 неделю или 24 неделю частоту дозирования и/или дозу можно изменять, если пациент достиг ACR50. Например, в способе лечения анкилозирующего спондилита или nr-axSpa настоящего изобретения, на 12 неделю или 16 неделю или 24 неделю частоту дозирования и/или дозу можно изменять, если пациент достиг ASAS40. Аналогично, в каждом из данных примеров, если на 12 неделю или 16 неделю или 20 неделю или 24 неделю субъект не достигнул требуемого клинического балла, дозу и/или частоту дозирования можно увеличить.

В различных вариантах осуществления, включая варианты осуществления, включающие лечение псориаза у субъекта, вводят первоначальную дозу антитела, затем последующую дозу нейтрализующего антитела (такого как CA028_0496.g3) вводят 8-20 недель (например, 8 недель, 12 недель, 16 недель или 20 недель) после первоначального введения. Последующая доза может быть такой же, как первоначальная доза, представлять собой повышенное количество нейтрализующего антитела или сниженное количество нейтрализующего антитела (т.е., поддерживающая доза). Дозирование нейтрализующего антитела, описанного в настоящем изобретении (например, CA028_0496.g3 (бимекизумаб)), показывает быстрое возникновение и значительный длительный полезный эффект на людях, таких как люди, страдающие от псориаза и псориатического артрита. Например, однократное введение доз 160 мг или более (например, 160 мг, 480 мг и 640 мг) достигало клинически и статистически значимых отличий от плацебо по шкале оценки тяжести повреждений (LSS) и индексу площади и тяжести псориаза (PASI) со 2 недели, с приблизительно максимальными улучшениями, достигаемыми приблизительно к четвертой-шестой неделе после введения, которые поддерживались до приблизительно 16-20 недель после введения. В группах с дозами 480 мг и 640 мг, в среднем 83% пациентов достигали PASI 90 с 6-12 недели и 90% на 12 неделю. У субъектов, страдающих от псориатического артрита, клинически значимые ответы при измерении активности заболевания наблюдали на 20 неделю после первоначального введения нейтрализующего антитела (с последующими двумя поддерживающими дозами, как описано в примере 1).

Примерный способ лечения псориатического артрита, обеспечиваемый настоящим изобретением, включает введение субъекту антитела, описанного в настоящем изобретении, применяя любой из следующих режимов дозирования: 16 мг каждые четыре недели, 160 мг каждые четыре недели, 320 мг ударной дозы на 0 неделю, с последующей поддерживающей дозой 160 мг каждые четыре недели и 320 мг каждые четыре недели. В одном примере, способ лечения псориатического артрита, обеспечиваемый настоящим изобретением, включает введение субъекту антитела, описанного в настоящем изобретении, применяя любой из следующих режимов дозирования: 160 мг каждые четыре недели, 320 мг каждые четыре недели, 320 мг ударной дозы на 0 неделю, с последующей поддерживающей дозой 160 мг каждые четыре недели, или ударная доза 320 мг на 0 неделю, с последующей поддерживающей дозой 240 мг каждые четыре недели. Период лечения может включать, например, 12 недель (в сумме, по меньшей мере, три или четыре введения антитела), 16 недель, 24 недели или 48 недель, или более. Ясно, что дозы можно вводить через указанные интервалы в течение первого периода лечения, затем вводить через отличные интервалы в течение второго периода введения (например, вводимые каждые четыре или восемь недель в течение первого периода лечения, например, 12 или 16 или 20 недель, затем введение каждую восьмую, 12 или 16 неделю в течение второго периода лечения, длящегося дополнительные, например, 24 или 36 недели или более). Например, режим дозирования, такой как частота дозирования, можно изменять после периода времени, так что в одном примере антитело вводят, применяя режим дозирования 160 мг каждые четыре недели до 12 недели, 16 недели или 24 недели, с последующими 160 мг каждую восьмую неделю, начиная с 20 недели, 24 недели или 32 недели, соответственно. В одном примере антитело вводят, применяя режим дозирования 320 мг каждые четыре недели до 12 недели, 16 недели или 24 недели, с последующими 320 мг каждую восьмую неделю, начиная с 20 недели, 24 недели или 32 недели, соответственно. Необязательно, режим дозирования, такой как дозируемое количество, можно изменять после периода времени, так что в одном примере антитело вводят, применяя режим дозирования 160 мг или 320 мг каждые четыре недели до 12 недели или 16 недели или 24 недели, с последующим режимом дозирования 320 мг или 160 мг каждые четыре недели, соответственно. Необязательно, и дозируемое количество и частоту дозирования можно изменять, так что в одном примере антитело вводят, применяя режим дозирования 160 мг каждые четыре недели до 12 недели или 16 недели или 24 недели, с последующим режимом дозирования 320 мг каждую восьмую неделю.

В случае псориатического артрита, ясно, что режим дозирования может отличаться, в зависимости от того, имеет ли субъект сопутствующий псориаз и/или историю псориаза или нет. Например, режим дозирования для пациентов с псориатическим артритом с сопутствующим умеренным-тяжелым пятнистым псориазом или историей псориаза может включать большие дозы и/или более частое дозирование, чем режим дозирования для субъектов, которые не имеют сопутствующего псориаза и/или истории псориаза.

Примерный способ лечения псориаза, обеспечиваемый настоящим изобретением, включает введение субъекту антитела, описанного в настоящем изобретении, применяя любой из следующих режимов дозирования: 64 мг каждые четыре недели, 160 мг каждые четыре недели или каждые 8 недель, 320 мг каждые четыре недели или каждые восемь недель, ударная доза 320 мг, вводимая на 0 неделю, с последующими поддерживающими дозами 160 мг каждые четыре недели, или 480 мг каждые четыре недели. Дозы можно вводить через данные интервалы в течение любого подходящего периода времени, такого как, по меньшей мере, четыре недели, по меньшей мере, восемь недель, по меньшей мере, 12 недель, по меньшей мере, 16 недель, по меньшей мере, 20 недель, по меньшей мере, 24 недели, по меньшей мере, 28 недель, по меньшей мере, 30 недель, по меньшей мере, 36 недель, по меньшей мере, 40 недель, по меньшей мере, 44 недель, по меньшей мере, 48 недель, по меньшей мере, 52 недель, или более. Ясно, что дозы можно вводить через данные интервалы времени в течение первого периода лечения, затем вводить через отличные интервалы времени в течение второго периода лечения (например, вводимые каждые четыре или восемь недель в течение первого периода лечения, например, 12 или 16 или 20 или 24 недель, затем вводимые каждые восемь, 12 или 16 недель в течение второго периода лечения, длящегося дополнительные, например, 24 или 36 недели). Например, режим дозирования, такой как частота дозирования, можно изменять после периода времени, так что в одном примере антитело вводят, применяя режим дозирования 160 мг каждые четыре недели до 8, 12 или 16 недели, с последующими 160 мг каждые восемь недель, начиная с 16, 20 или 24 недели, соответственно. В одном примере антитело вводят, применяя режим дозирования 320 мг каждые четыре недели до 8, 12 или 16 недели, с последующими 320 мг каждые восемь недель, начиная с 16, 20 или 24 недели, соответственно. В одном примере антитело вводят, применяя режим дозирования 320 мг или 160 мг каждые четыре недели до 8, 12 или 16 недели, с последующими 320 мг или 160 мг каждые двенадцать недель. Необязательно режим дозирования, такой как дозируемое количество, можно изменять после периода времени, так что в одном примере антитело вводят, применяя режим дозирования 320 мг каждые четыре недели до 8 недели или 12 недели, с последующим снижением до 160 мг каждые четыре недели, начиная с 12 недели или 16 недели, соответственно.

Примерный способ лечения анкилозирующего спондилита или nr-axSpa, обеспечиваемый настоящим изобретением, включает введение субъекту антитела, описанного в настоящем изобретении, применяя любой из следующих режимов дозирования: 16 мг каждые четыре недели, 160 мг каждые четыре недели, ударная доза 320 мг на 0 неделю, с последующей поддерживающей дозой 160 мг каждые четыре недели или 320 мг каждые четыре недели. Предпочтительно режим дозирования составляет 160 мг или 320 мг каждые четыре недели. Период лечения может включать, например, 12 недель (в сумме, по меньшей мере, три или четыре введения антитела), 16 недель, 24 недель или 48 недель, или более. Ясно, что дозы можно вводить через данные интервалы времени в течение первого периода лечения, затем вводить через отличный интервал времени в течение второго периода лечения (например, вводимые каждую четверную или восьмую неделю в течение первого периода лечения, например, 12 или 16, 20 или 24 недель, затем вводимые каждую восьмую, 12 или 16 неделю в течение второго периода лечения, длящегося дополнительные, например, 24 или 36 недели или более). Например, режим дозирования, такой как частота, можно изменять после периода времени, так что в одном примере антитело вводят, применяя режим дозирования 160 мг каждые четыре недели до 12, 16 или 24 недели, с последующими 160 мг каждые восемь недель. В одном примере антитело вводят, применяя режим дозирования 320 мг каждые четыре недели до 12, 16 или 24 недели, с последующими 320 мг каждые восемь недель. Необязательно, режим дозирования, такой как вводимое количество, можно изменять после некоторого периода времени, так что в одном примере антитело вводят, применяя режим дозирования 160 мг или 320 мг каждые четыре недели до 12 недели или 16 недели или 24 недели, с последующим режимом дозирования 320 мг или 160 мг каждые четыре недели, соответственно. Необязательно и вводимое количество и частоту дозирования можно изменять, так что в одном примере антитело вводят, применяя режим дозирования 160 мг каждые четыре недели до 12 недели или 16 недели или 24 недели, с последующим режимом дозирования 320 мг каждые восемь недель.

Композиции можно вводить отдельно пациенту или можно вводить в комбинации (например, одновременно, последовательно или раздельно) с другими агентами, лекарственными средствами или гормонами.

Доза, при которой вводят молекулу антитела настоящего изобретения, зависит от природы заболевания, которое лечат, степени присутствующего воспаления и применяют ли молекулу антитела профилактически или для лечения имеющегося заболевания.

Частота дозирования будет зависеть от периода полужизни молекулы антитела и продолжительности его эффекта. Если молекула антитела имеет короткий период полужизни (например, 2-10 часов) может быть необходимо вводить одну или более доз в день. Альтернативно, если молекула антитела имеет длительный период полужизни (например, 2-15 дней), может быть необходимо вводить только одну дозу в день, один раз в неделю или один раз каждые 1 или 2 месяца.

Может быть необходимо вводить ударную дозу, с последующими одной или более поддерживающими дозами. Ударная доза и поддерживающие дозы могут представлять собой одинаковое вводимое количество, или они могут быть отличными. В одном варианте осуществления, поддерживающие дозы могут представлять собой одну четвертую, одну третью, одну вторую, две трети, три четверти, равную, одну и одну четверть, одну и одну треть, одну и одну вторую, одну и две трети, одну и три четверти, две или более ударной дозы.

В одном варианте осуществления, поддерживающие дозы можно вводить через некоторый интервал после введения ударной дозы. Данный интервал может быть постоянным для каждой дозы или может изменяться. Данный интервал может составлять 1 день, 1 неделю, 2 недели, 3 недели, 4 недели, месяц, 6 недель, 8 недель, раз в два месяца или любой другой интервал. В одном варианте осуществления, две поддерживающие дозы вводят каждую третью неделю после ударной дозы в сумме для трех доз. В одном варианте осуществления, поддерживающие дозы вводят каждые четыре недели.

Фармацевтически приемлемый носитель не должен сам вызывать образование антител, вредных для индивида, получающего композицию, и не должен быть токсичным. Подходящие носители могут представлять собой большие медленно метаболизируемые макромолекулы, такие как белки, полипептиды, липосомы, полисахариды, полимолочные кислоты, полигликолевые кислоты, полимерные аминокислоты, аминокислотные сополимеры и инактивированные вирусные частицы.

Можно применять фармацевтически приемлемые соли, например, соли минеральных кислот, такие как гидрохлориды, гидробромиды, фосфаты и сульфаты, или соли органических кислот, такие как ацетаты, пропионаты, малонаты и бензоаты.

Кроме того, фармацевтически приемлемые носители в терапевтических композициях могут содержать жидкости, такие как воду, соляной раствор, глицерин и этанол. Кроме того, вспомогательные вещества, такие как смачивающие агенты или эмульгаторы или pH буферные вещества, могут присутствовать в данных композициях. Данные носители обеспечивают формулирование фармацевтических композиций в виде таблеток, пилюль, драже, капсул, жидкостей, гелей, сиропов, взвесей и суспензий, для приема внутрь пациентом.

Предпочтительные формы для введения включают формы, пригодные для парентерального введения, например, инъекцией или вливанием, например, болюсной инъекцией или непрерывным вливанием. Когда продукт предназначен для инъекции или вливания, он может быть в виде суспензии, раствора или эмульсии в масляной или водной среде, и он может содержать вспомогательные вещества, такие как суспендирующие агенты, консерванты, стабилизирующие и/или диспергирующие агенты. Альтернативно, молекула антитела может быть в сухой форме для растворения перед применением в подходящей стерильной жидкости.

После формулирования, композиции настоящего изобретения можно вводить непосредственно субъекту. Субъекты, которых будут лечить, могут представлять собой животных. Однако предпочтительно, чтобы композиции были приспособлены для введения субъектам, являющимся людьми.

Фармацевтические композиции настоящего изобретения можно вводить любым способом введения, включая, но не ограничиваясь, пероральный, внутривенный, внутримышечный, внутриартериальный, интрамедуллярный, интратекальный, интравентрикулярный, трансдермальный, чрезкожный (например, смотри WO 98/20734), подкожный, внутрибрюшинный, интраназальный, энтеральный, местный, сублингвальный, вагинальный или ректальный пути. Безигольные шприцы можно также применять для введения фармацевтических композиций настоящего изобретения. Обычно, терапевтические композиции можно получить в виде инъецируемых растворов, или в виде жидких растворов или суспензий. Можно также получить твердые формы, пригодные для растворения или суспендирования в жидких средах перед инъекцией.

Прямую доставку композиций будут обычно осуществлять инъекцией, подкожно, интраперитонеально, внутривенно или внутримышечно, или доставлять во внутреннее пространство ткани. Композиции можно также вводит в пораженный участок. Дозируемое лечение может представлять собой режим с введением однократной дозы или режим с введением нескольких доз. Предпочтительный вариант настоящего изобретения включает подкожное или внутривенное введение антитела.

Ясно, что активный ингредиент в композиции будет представлять собой молекулу антитела. Как таковая, она подвержена разрушение в желудочно-кишечном тракте. Таким образом, если композицию предполагается вводить путем, включающим желудочно-кишечный тракт, будет необходимо, чтобы композиция содержала агенты, которые защищают антитело от разрушения, но которые высвобождают антитело, когда оно поглотится из желудочно-кишечного тракта.

Всестороннее обсуждение фармацевтически приемлемых носителей имеется в Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Company, N.J. 1991).

Также предусмотрено, что антитело настоящего изобретения будут вводить применением генной терапии. Для того чтобы получить это, ДНК, содержащую нуклеотидные последовательности, кодирующие тяжелую и легкую цепи молекулы антитела под контролем подходящих компонентов ДНК, вводят пациенту так, что цепи антитела экспрессируются из ДНК последовательностей и собираются in situ.

В одном варианте осуществления, состав обеспечивают в виде состава для местных введений, включая ингаляцию. Подходящие препараты для ингаляции включают ингалируемые порошки, дозированные аэрозоли, содержащие газы-пропелленты или ингалируемые растворы, не содержащие газов-пропеллентов. Ингалируемые порошки согласно настоящему изобретению, содержащие активное вещество, могут состоять только из приведенных выше активных веществ или из смеси приведенных выше активных веществ с физиологически приемлемым вспомогательным веществом. Данные ингалируемые порошки могут содержать моносахариды (например, глюкозу или арабинозу), дисахариды (например, лактозу, сахарозу, мальтозу), олиго- и полисахариды (например, декстраны), полиспирты (например, сорбитол, маннитол, ксилитол), соли (например, хлорид натрия, карбонат кальция) или их смеси друг с другом. Удобно применять моно- или дисахариды, лактозу или глюкозу, в частности, но не исключительно, в виде их гидратов.

Частицы для проникновения в легкое требуют размера частиц меньше чем 10 микрон, такие как 1-9 микрон, например, 0,1-5 микрон, в частности 1-5 микрон. Размер частиц активного ингредиента (такого как антитело или фрагмент) имеет первостепенное значение.

Газы-пропелленты, которые можно применять для получения ингалируемых аэрозолей, являются известными в данной области техники. Подходящие газы-пропелленты выбирают из углеводородов, таких как н-пропан, н-бутан или изобутан, и галогенуглеводородов, таких как хлорированные и/или фторированные производные метана, этана, пропана, бутана, циклопропана или циклобутана. Приведенные выше газы-пропелленты можно применять сами по себе или в их смесях. Особенно подходящие газы-пропелленты представляют собой галогенированные алкановые производные, выбранные из TG 11, TG 12, TG 134a и TG227. Из приведенных выше галогенированных углеводородов, TG134a (1,1,1,2-тетрафторэтан) и TG227 (1,1,1,2,3,3,3-гептафторпропан) и их смеси являются особенно пригодными. Ингалируемые аэрозоли, содержащие газ-пропеллент, могут также содержать другие ингредиенты, такие как сорастворители, стабилизаторы, поверхностно-активные агенты (поверхностно-активные вещества), антиоксиданты, смазывающие агенты и агенты для регулирования pH. Все данные ингредиенты являются известными в данной области техники.

Ингалируемые аэрозоли, содержащие газ-пропеллент согласно настоящему изобретению, могут содержать вплоть до 5% по весу активного вещества. Аэрозоли согласно настоящему изобретению содержат, например, 0,002-5% по весу, 0,01-3% по весу, 0,015-2% по весу, 0,1-2% по весу, 0,5-2% по весу или 0,5-1% по весу активного ингредиента.

Альтернативно местное введение в легкое может также осуществляться введением жидкого раствора или суспензии, например, применяя устройство, такое как ингалятор, например, ингалятор, соединенный с компрессором (например, Pari LC-Jet Plus® ингалятор, соединенный с Pari Master® компрессором, изготовленным Pari Respiratory Equipment, Inc., Richmond, Va.).

Антитело настоящего изобретения можно доставлять диспергированным в растворителе, например, в виде раствора или суспензии. Его можно суспендировать в подходящем физиологическом растворе, например, соляном растворе или другом фармакологически приемлемом растворителе или буферном растворе. Буферные растворы, известные в данной области техники, могут содержать 0,05 мг-0,15 мг эдетата динатрия, 8,0 мг-9,0 мг NaCl, 0,15 мг-0,25 мг полисорбата, 0,25 мг-0,30 мг безводной лимонной кислоты и 0,45 мг-0,55 мг цитрата натрия на 1 мл воды так, чтобы получить pH приблизительно 4,0-5,0. В суспензии можно применять, например, лиофилизированное антитело.

Терапевтические составы в виде суспензий или растворов могут также содержать один или более вспомогательных веществ. Вспомогательные вещества являются хорошо известными в данной области техники и включают буферы (например, цитратный буфер, фосфатный буфер, ацетатный буфер и бикарбонатный буфер), аминокислоты, мочевину, спирты, аскорбиновую кислоту, фосфолипиды, белки (например, сывороточный альбумин), EDTA, хлорид натрия, липосомы, маннитол, сорбитол и глицерин. Растворы или суспензии можно инкапсулировать в липосомы или биоразлагаемые микросферы. Состав будут обычно обеспечивать в по существу стерильной форме, применяя стерильные способы получения.

Это может включать получение и стерилизацию фильтрованием забуференного растворителя/раствора, применяемого для формулирования, асептической суспензии антитела в стерильном забуференном растворе растворителя, и распределение состава в стерильные емкости способами, известными специалисту в данной области техники.

Распыляемый состав согласно настоящему изобретению можно обеспечивать, например, в виде упаковки однократной дозы (например, герметичные пластиковые контейнеры или ампулы), упакованной в обертку из фольги. Каждая ампула содержит единичную дозу в объеме, например, 2 мл растворителя/буферного раствора.

Настоящее изобретение описывается только на примере, который ни в коем случае не предполагается ограничивающим, и модификации деталей можно вносить в пределах объема формулы изобретения ниже. Предпочтительные признаки каждого варианта осуществления настоящего изобретения представлены как для каждого из других вариантов осуществления, внося соответствующие изменения. Все публикации, включая, но не ограничиваясь, патенты и патентные публикации, приводимые в настоящем изобретении, включены в настоящее изобретение с помощью ссылки, как если бы специально и отдельно указывали, что каждая публикация включена с помощью ссылки в настоящее изобретение, как будто она изложена полностью.

Примеры

Пример 1-Клиническое исследование CA028_0496.g3 (UCB4940 или бимекизумаба); ударная доза и поддерживающие дозы

В одном варианте осуществления, проводили предварительное подтверждающее концепцию, слепое для исследователей исследование с контролем плацебо, оценивающее безопасность, фармакокинетику и фармакодинамику нескольких доз CA028_0496.g3 на субъектах с псориатическим артритом. Его обозначали как UCB исследование PA0007.

Исследование включало четыре группы с дозами активного соединения и группу с плацебо, вводимые внутривенно вливанием трижды, вводимые каждые три недели: группа 1 (240 мг ударная доза на 0 неделю, с последующими 160 мг на 3 неделю и 6 неделю [N=20 (активные), 3 плацебо]; группа 2 (80 мг ударная доза на 0 неделю, с последующими 40 мг на 3 неделю и 6 неделю)[N=6 (активные), 3 плацебо]; группа 3 (160 мг ударная доза на 0 неделю, с последующими 80 мг на 3 неделю и 6 неделю), N=6 (активные), 3 плацебо; группа 4 (560 мг ударная доза на 0 неделю, с последующими 320 мг на 3 неделю и 6 неделю), N=6 (активные), 3 плацебо.

Цели настоящего исследования включали изучение безопасности, переносимости и фармакокинетики многодозового введения CA028_0496.g3 субъектам с псориатическим артритом. Цели также включали оценку эффекта многодозового введения CA028_0496.g3 на тяжесть псориатического артрита в суставах (20/50/70 ответ согласно американской коллегии ревматологии (ʺACRʺ)) и, для кожи, клинические признаки пятнистого псориаза (50/75/90 ответ согласно индексу площади и тяжести псориаза (ʺPASIʺ)). ACR балл представляет собой шкалу, которая измеряет улучшение поражения суставов, связанного с псориатическим артритом и ревматоидным артритом, и улучшение ACR балла также связано с лечением ревматоидного артрита.

Популяция пациентов: требовалось, чтобы все удовлетворяющие критериям пациенты были, по меньшей мере, 18 летнего возраста и имели диагноз приобретенного псориатического артрита, поставленный, по меньшей мере, за 6 месяцев до отбора для исследования, как определено критериями классификации для псориатического артрита (ʺCASPARʺ) (т.е., воспалительное заболевание суставов (сустав, позвоночник или энтезис) и ≥ 3 баллов 5 CASPAR категорий). Применяемый CASPAR критерий можно найти на фигуре [2]. Также требовалось, чтобы субъекты имели активные псориатические повреждения или историю псориатических повреждений. С точки зрения улучшения суставов, требовалось, чтобы субъекты имели активный артрит, как определено: ≥ 3 болезненных суставов при отборе и в начале исследования, ≥3 отекших суставов при отборе и в начале исследования, и удовлетворяли, по меньшей мере, одному из следующего при отборе (или ESR ≥ 28 мм/час или CRP≥ 3 мг/л). Все субъекты неудовлетворительно реагировали, по меньшей мере, на одно небиологическое модифицирующее заболевание антиревматическое лекарственное средство (ʺDMARDʺ) и/или 1 одобренный биологический DMARD. Субъекты обязаны принимать одновременно метотрексат в начале лечения в течение, по меньшей мере, 3 месяцев, и получать стабильную дозу, по меньшей мере, за 4 недели до начала исследования. Субъекты, которые не переносили метотрексат, могли быть допущены, если они получали нестероидные противовоспалительные лекарственные средства (NSAID) и/или стероиды, по меньшей мере, в течение 8 недель и получали стабильную дозу, по меньшей мере, за 4 недель до начала исследования.

Описание исследования: 50 субъектов получали все дозы исследования, из которых 38 субъектов получали, по меньшей мере, одну дозу исследуемого медицинского продукта, CA028_0496.g3. Включение субъектов, которые получали плацебо, в сумме 48 субъектов, образовывало общий набор анализируемых данных, поскольку двух субъектов исключали, поскольку они потенциально знали о рандомизационном коде.

Клинические результаты: клинически значимые эффекты наблюдали для обоих суставов и кожи на 8 неделю от начала лечения:

Эффекты на коже: 23 субъектов имели улучшение кожи на исходном уровне, с площадью поверхности тела (BSA) ≥ 3% и средним исходным PASI 15,9 (SD=14,6). Только 22 субъектов обеспечивали набор данных для анализа из-за пропуска дозирования одним субъектом. Результаты по эффектам на коже описаны на фигуре [3a] и фигуре [3b]. Возникновение ответа было быстрым и для кожи и для суставов. Из общего числа допущенных субъектов для оценки кожи, для объединенных 3 максимальных доз, PASI75 ответ 100% наблюдали на 8 неделю от начала лечения, и PASI90 ответ 87%, по-видимому, поддерживался до конца исследования на 20 неделю после начала лечения. Напротив, в исследовании Future 1 для секукинумаба при псориатическом артрите, наблюдаемый PASI75 ответ на неделю 24 составлял 64,8% и PASI 90 ответ на 24 неделю составлял 49%. (Glottieb AB et al. Arthritis Rheum. 2014, 66(Suppl 11):S233; Mease P et al. Ann Rheum Dis. 2014; 73(1):48-55). Это дополнительно показано на фигуре [4].

Поражения суставов: результаты по поражению суставов описаны на фигурах [5a]-[5d]. 80% ACR20 ответ, 40% ACR50 ответ и 23% ACR70 ответ наблюдали на 8 неделю от начала лечения, наблюдаемые для объединенных максимальных 3 доз группы. ACR20 ответ, по-видимому, поддерживался при данной концентрации до 20 недели (140 день), несмотря на повышенный ответ в группе с плацебо (смотри фигуры 5b-5d). После 8 недели (2 недель после последней дозы) фоновая терапия была неконтролируемой.

Продолжительность до максимального ACR50 и 70 ответов была длиннее (после 12 недели), с ответами 56,7% и 36,7% к 20 неделе, соответственно. Напротив, в исследовании Future 1 для секукинумаба при псориатическом артрите, наблюдаемый ACR20 ответ на неделю 24 составлял 50%. Mease P et al., 2014, Arthritis Rheum., 66(Suppl 11):S423-S424; Mease P et al., 2014, Ann Rheum Dis., 73(1):48-55. Это дополнительно показано на фигуре [6].

Байесовский анализ: байесовский анализ ACRn(tr) на 8 неделю от начала лечения проводили, применяя гауссову вероятностную модель с предварительной информацией для группы с плацебо. Проводили оценку единообразия размера эффекта лечения, а также гомогенность отклонений, и считали ее подходящей для объединения максимальных трех доз вместе для CA028_0496.g3. Предварительную информацию для группы с плацебо для ACRn(tr) оценивали, применяя данные из предшествующего Cimzia® исследования для псориатического артрита (PsA001, фаза 3, мультицентровое, рандомизированное, двойное слепое исследование в параллельных группах с контролем плацебо, оценивая эффективность и безопасность цертолизумаба пегола для субъектов с приобретенным активным и прогрессирующим псориатическим артритом).

Байесовский анализ показал сильные статистические доказательства (вероятность > 99%) того, что CA028_0496.g3 достигает большей величины ACRn(tr) по сравнению с плацебо. Более того, вероятность того, что средний показатель разницы в способах лечения ACRn(tr) по сравнению с плацебо является большим чем 0,31 (разница, наблюдаемая в предшествующих Cimzia® исследованиях), составляла более чем 99% в группе 3 объединенных максимальных доз CA028_0496.g3.

Для ACR20 ответа, байесовский анализ проводили на 8 неделю после начала дозирования, применяя логистическую модель с предварительной информацией для группы с плацебо. Предшествующую информацию для группы с плацебо для ACR20 оценивали, применяя данные из предшествующего Cimzia® исследования (PsA001).

Байесовский анализ показал, что вероятность того, что CA028_0496.g3 вызывает большие показатели ACR20 ответа, чем плацебо, составляла более 99% для групп с 3 объединенными максимальными дозами CA028_0496.g3. Кроме того, имелась > 99% вероятность того, что средний показатель разницы в способах лечения для ACR20 по сравнению с плацебо является большим чем 25% (разница, наблюдаемая по PsA001) для 3 объединенных максимальных доз CA028_0496.g3. Данные результаты представлены на фигуре [7].

Достоверность данных результатов с учетом сравнительного анализа с другими биологическим терапиями (анти-TNF и IL17A и анти-IL12/23) для псориатического артрита проверяли сравнением с литературными данными для ACR20 ответа на 8 неделю (адалимумаб, голимумаб, секукинумаб и устекинумаб, смотри фигуру [8]), обеспечивая общее соответствие результатов. В заключение, большая апостериорная вероятность (>99%) для наблюдаемых эффектов на ACR20 ответ является большей чем для анти-TNF или анти-IL-17A на 8 неделю в данном PA0007.

Определение фармакокинетики и фармакодинамики: для того чтобы достигнуть фармакологически активных уровней доз, достигающих требуемых клинических эффектов, отбирали четыре группы с дозами активного соединения. Цель заключалась в достижении минимальных концентраций в течение периода первых 8 недель 10 x Ec50 (полученных для ответа на умеренный псориаз в UP0008, описанном в примере 2) приблизительно 10 мкг/мл и более. Результаты данного исследования включены в фигуру [9]. В UP0008, бимекизумаб показал пропорциональную дозе PK (время полужизни приблизительно 22 дня).

Предварительное подкожное дозирование: исследование биодоступности (RA0124) проводили для CA028_0496.g3, оценивая фармакокинетику CA028_0496.g3 после подкожных введений доз 80 мг и 160 мг по сравнению с 160 мг, вводимыми внутривенно. Результаты показывают, что на основании принципов суперпозиции, возможно достижение целевых концентраций CA028_0496.g3, обобщенных на фигуре [9] (достигаемых в PA0007), посредством ежемесячных подкожных доз 160 мг или более, таких как 320 мг, применяя режим один раз в 4 недели (фигура [10]) или посредством режима с 320 мг ударной дозой, с последующими 160 мг один раз в 4 недели.

Пример 2-Клиническое исследование CA028_0496.g3 (UCB4940 или бимекизумаб); единичная доза

UP0008 представляет собой исследование 1 фазы с однократной нарастающей дозой (NCT02529956) безопасности вводимого внутривенно CA028_0496.g3 субъектам с легким-умеренным псориазом, поражающим ≤5% площади поверхности тела (BSA). Критерий включения включал, например, мужчин или женщин (возраст ≥18 и ≤70) с подтвержденным диагнозом легкого-умеренного пятнистого псориаза в течение ≥6 месяцев, поразившего ≤5% площади поверхности тела (исключая кожу черепа) и включающего ≥2 псориатических повреждений с ≥1 бляшек в подходящих местах биопсии. Критерии исключения включали, например, применение системной небиологической терапии псориаза (метотрексат, циклофосфамид) или фототерапию псорален+ультрафиолет A/ультрафиолет в пределах 4 недель перед отбором, лечение биологическим агентами ≤12 месяцев до исследования, и применение или запланированное применение живых аттенуированных вакцин ≤6 недель до отбора. В сумме 39 пациентов получали однократную внутривенную дозу бимекизумаба (8-640 мг) или плацебо (рандомизированный, двойной слепой). Применяли пять доз: 8 мг, 40 мг, 160, мг, 480 мг и 640 мг. После однократного введения, бимекизумаб (8-640 мг) хорошо переносился, и пациенты не прекращали терапию в результате побочных эффектов, появившихся во время лечения; не сообщалось о серьезных побочных эффектах. Действительно, дозы вплоть до 640 мг (приблизительно 8 мг/кг веса тела) хорошо переносились до настоящего времени в UP0008.

После введения, бимекизумаб обеспечивал улучшение для всех оцениваемых клинических признаков пятнистого псориаза, LSS, PASI и PGA (фигура 14). Быстрое возникновение ответа наблюдали со снижением >80% относительно исходной величины LSS в группах с двумя максимальными дозами на 2 неделю исследования. Для доз 160, 480 и 640 мг (N=6 каждая), клинически и статистически значимую разницу относительно плацебо (N=13) наблюдали по шкале оценки тяжести повреждений (LSS) (фигура [11]) и индексу площади и тяжести псориаза (PASI) со 2 недели (фигура [12]), с приблизительно максимальными улучшениями, наблюдаемыми к 4 неделе.

Специфически относительно LSS, величина ответа отражалась максимальным снижением среднего изменения относительно исходного значения LSS >90% в группе с 160 мг. Это достигалось к 8 неделе и показывало стойкость, поддерживаясь до 16 недели. В группе с 480 мг максимальную величину ответа, 100%, наблюдали уже на 4 неделе. Ответ также был стойким, поддерживаясь до 16 недели. В группе с 640 мг, максимальное снижение (100%) наблюдали к 8 недели, и оно было стойким, поддерживаясь между 12 и 20 неделями (фигура 14A). В добавление к группе 640 мг, не наблюдали перекрывание CI между другими группами с бимекизумабом (40-480 мг) на 2 неделю по сравнению с плацебо, показывая различие между двумя группами. Аналогичные результаты получали для переменной площади под кривой эффекта (0-4 неделя, [AUEC0-4w]) (не показана).

Что касается PASI, быстрое возникновение ответа наблюдали со снижением >65% относительно исходного PASI балла в двух максимальных группах на 2 неделю. Байесовский анализ показал, что апостериорная вероятность ≥60% улучшения по сравнению с плацебо в данный момент времени составляла >80%. Для группы с 160 мг бимекизумаба, величина ответа отражалась максимальным снижением среднего изменения относительно исходного значения PASI балла >85%, достигаемым к 6 неделе. Данный ответ был стойким, поддерживаясь до 12 недели исследования. В группах 480 мг и 640 мг наблюдали максимальную величину ответ ≥94%. Это достигалось к 6 неделе в группе с 480 мг и 4 неделе в группе с 640 мг. В обеих группах ответ был стойким, поддерживаясь до 12 недели (фигура 5b). Кроме того, для групп с 40-640 мг бимекизумаба на 2 неделю, апостериорная вероятность >0% улучшения PASI балла по сравнению с плацебо составляла 99%.

Значительная степень улучшения (как показано LSS процентным изменением и PASI процентным изменением относительно исходного значения) поддерживалась до конечного измеренного момента времени - 20 недели. В группах с двумя максимальными дозами, 83% пациентов имели PASI 90 (90% улучшение PASI балла), с 6-12 недели и 90% на 12 неделю (фигура [13]). При трех максимальных дозах, 100% пациентов достигали PASI75, и 53% достигали PASI100.

PGA (общая оценка врача) также оценивали, применяя семибальную шкалу (0=чистый, 6=тяжелый). Смотри фигуру [14]. Снижение >50% относительно исходного значения PGA наблюдали при наибольших оцениваемых дозах бимекизумаба (480 мг и 640 мг). Максимальные снижения среднего изменения относительно исходного значения PGA балла >75% наблюдали в группе с 160 мг бимекизумаба. Данное снижение достигали к 6 неделе, и оно было стойким, поддерживаясь до 12 недели. Максимальные снижения среднего изменения относительно исходного значения PGA балла составляли 100% и 94%, соответственно для групп с 480 мг и 640 мг бимекизумаба (фигура 5c). Данные снижения достигали к 8 неделе, и они были стойкими, поддерживаясь до 12 недели в группе с 480 мг, и достигали к 4 недели и поддерживались до 12 недели в группе с 640 мг.

Пример 3 - Анти-IL17A/F антитело подавляет процесс образования костей

Прототипные фенотипические подмножества спондилоартрита представляют собой анкилозирующий спондилит (AS) для аксиального заболевания и псориатического артрита (PsA) для комбинации периферического артрита с псориазом. Отдельные пациенты часто показывают системное заболевание; значительная часть пациентов с AS страдают от кожного псориаза, и у значительной части пациентов с PsA развивается аксиальное заболевание. AS и PsA имеют общий генетический фон, семейное накопление различных субформ, разделяют гистопатологические результаты, и аналогичный ответ на терапию (например, эффективность TNF блокады и IL-17A блокады и при AS и при PsA и неудачу терапии по обеднению B клетками и IL-6 блокады при AS, а также PsA). Результаты, описанные в настоящем изобретении относительно псориатического артрита, следовательно, предполагают, что анти-IL-17A/F антитела могут также быть эффективными в лечении анкилозирующего спондилита.

Патологическое образование костей, связанное с спондилоартритом (SpA), представляет собой основную причину структурного повреждения ткани, приводящего в результате к долговременной потери работоспособности пациентом. Пациенты с AS страдают от избыточного образования костей на надкостной поверхности вблизи суставов и межпозвоночных промежутков, что приводит в результате к костным шпорам, которые соединяют суставы и соединяют вместе сухожилия и места прикрепления связок, вызывая боль и ограничение подвижности, связанные с данным заболеванием. Предшествующие исследования, применяя рекомбинантные IL-17A и IL-17F, показали отличные эффекты при остеогенной дифференциации. Osta et al., Frontiers in Immunology 5, (2014), показали, что IL-17 положительно влияет на остеогенную дифференциацию в человеческих мезенхимальных стволовых клетках (hMSC). Согласно с этим, Huang et al, Cell Death Differ. 16, 1332-43 (2009) сообщали, что IL-17 стимулирует пролиферацию и остеогенную дифференциацию hMSC. Кроме того, Croes et al. Bone 84, 262-270 (2016), показали остеогенную стимуляцию hMSC IL-17A и IL-17F в некотором диапазоне концентраций. Наоборот, другие показали, что IL-17 ингибирует остеогенную дифференциацию клеток черепа крыс, мышиных MSC и MSC взрослых людей, и заключили, что IL-17 был проостеогенным. Смотри, например, Chang et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 110, 9469-74 (2013); Nam et al., PLoS One 7, e40044 (2012).

Данный пример показывает, что анти-IL-17A/F моноклональное антитело (CA028_0496.g3 (бимекизумаб)) снижает биомаркеры, связанные с остеогенной дифференциацией надкостничных стволовых клеток in vitro, снижает минерализацию матрикса и ослабляет образование наростов из костей in vitro, показывая, что анти-IL-17A/F моноклональное антитело (CA028_0496.g3 (бимекизумаб)), вероятно, является эффективным при лечении (например, замедлении прогрессирования, ослаблении симптомов) AS.

Способ: поскольку надкостница обеспечивает восстанавливающиеся ткани для восстановления трещин, модель человеческих стволовых клеток надкостницы (Eyckmans et al., Biomaterials 34, 4612-21 (2013)) применяли для изучения IL-17 оси в контексте патологического образования костей. Надкостницу собирали у пациентов, подвергающихся ортопедической операции нижней конечности, как описано ранее. Roberts et al., Biomaterials 32, 4393-4405 (2011); Roberts et al., Stem Cell Res. 7, 137-144 (2011). Сращенную человеческую надкостницу, полученную из стволовых клеток (hPDSC), ферментативно высвобождали от матрикса и выращивали в ростовой среде (DMEM среда, дополненная 10% фетальной бычьей сывороткой, 1% пируватом натрия, 1% антибиотиками и противогрибковыми препаратами). Для in vitro анализа остеогенной дифференциации, hPDSC 6 пассажа высевали при 3000 клеток/см² в 24-луночном планшете, обеспечивая количественное определение генной экспрессии и минерализации в ответ на воздействие TH-17 супернатанта. Данные культуры выдерживали с TH-17 супернатантом (1:50 разбавление), содержащим среду (PBS) или анти-IL-17A, анти-IL-17F или анти-IL-17A/F антитело (10 мкг/мл) в комбинации со смесью остеогенных факторов роста (GFC); 10 нг/мл TGF-β1 (Peprotech), 20 нг/мл EGF (Invitrogen), 10 нг/мл IL-6 (Peprotech), 3 мМ Ca²⁺ ионы и 2 мМ PO₄ ^- (полученные в HEPES забуференном физиологическом растворе), как описано ранее. Chai et al., Tissue Eng. Part A 17, 1083-1097 (2011). IL-6 заменяли (GFC-IL-6) на TH-17 супернатанты в условиях испытания в качестве триггерного фактора воспаления для дифференциации. Смеси выдерживали во встряхиваемой бане с водой в течение 1 часа при 37^oC, обеспечивая эффективную нейтрализацию IL-17 изоформ. Каждые условия применяли на подходящем hPDSC монослое через день до завершения периода выращивания на 8 день. Монослои или фиксировали в 10% нейтральном буферном формалине или прокрашивали 1% ализариновым красным, измеряя отложенное минеральное вещество, или лизировали для выделения суммарной РНК для анализа генной экспрессии остеогенного маркера. Перед фиксацией, монослои визуализировали, применяя стандартные способы с применением микроскопа, и визуально оценивали внеший вид костных утолщений.

Для исследования эффекта человеческой сыворотки AS пациентов на hPDSC IL-17 опосредованную передачу сигнала, 10000 клеток/см² высевали в 24 луночные планшеты. На следующий день среду удаляли, и монослои промывали стерильным нагретым PBS, после чего среду заменяли DMEM, содержащей или 10% сыворотку здоровых людей (HS) или сыворотку AS пациентов (SRSC01, SRSC03, SRSC04, SRSC05, SRSC06 и SRSC07) с 1% пируватом натрия и 1% антибиотиками/противогрибковыми препаратами. Монослои выдерживали в течение 48 часов, после чего среду выбрасывали, и монослои уничтожали для выделения суммарной РНК. Затем, оценивали экспрессию целевого гена IL-6 ниже по ходу транскрипции и остеогенного маркера RUNX2.

Выделение суммарной РНК, кДНК синтез и кПЦР: монослои лизировали, применяя RNeasy мининабор согласно инструкции набора (Qiagen). Комплементарную ДНК (кДНК) синтезировали обратной транскрипцией 500 нг суммарной РНК, применяя набор для высокопроизводительной обратной транскрипции кДНК (Applied Biosciences) в следующих условиях термоциклирования; 25°C в течение 10 минут, 37°C в течение 120 минут и 85°C в течение 5минут. Для количественного определения концентрации генных транскриптов в каждом образце, праймеры (разработанные, применяя Primer3 Plus, NCBI) смешивали с iTaq универсальныи SYBR green супермиксом (Biorad) и 10 нг кДНК, затем 10 мкл аликвоты наносили на Hard-Shell® 96-луночные ПЦР планшеты (Biorad). Условия термоциклирования были следующими: 10 минут при 95°C, с 40 циклами 15 с при 95° C, 30 с при 60° C, и 20 с при 72° C, на Bio-Rad CFX1000 системе, работающей в реальном времени. Каждый прогон состоял из анализ кривой плавления и контролей без матрицы, подтверждая специфическую амплификация одного продукта. Все пары праймеров давали единичные ампликоны, и реакции имели одинаковую эффективность (95-100%), как установлено кривой стандартного разведения и анализом. Количественное определение целевого гена получали, применяя 2-ΔΔCT способ, описанный Livak et al, относительно HPRT1.

IL-17A и IL-17F измерение ELISA: IL-17A и IL-17F белки измеряли в сыворотке AS пациентов, применяя сэндвичевый ELISA (Peprotech, London, UK). Кровь AS пациентов выделяли в BD Vacutainer SST пробирках в равматологической клиники при королевской национальной ортопедической больнице (Stanmore, UK). NHS комитет по этике в научных исследованиях одобрил все способы. После сбора, кровь центрифугировали при 1000g в течение 10 минут при комнатной температуре. Затем, отделенную сыворотку фильтровали через 0,2-мкм мембрану. Аликвоты сыворотки хранили при -80°C до анализа. Разбавление 1:2 каждой сыворотки AS пациента проводили в буфере для разбавления, обеспечиваемом в ABTS наборах для человеческого IL-17A и IL-17F (Peprotech, London, UK) перед анализом, снижая эффекты сывороточного матрикса. Измерение IL-17A и IL-17F проводили, как в инструкциях к наборам.

Результаты: применяя биомиметический остеогенный анализ (описанный в международной патентной публикации WO2013189975), TH-17 супернатант (TH-17SN) обрабатывали или нет включением моноклональных антител, направленных на IL-17A, IL-17F или IL-17A/F. Остеогенные транскрипты, такие как RUNX2, SP7 и BMP2, анализировали вместе с маркерами образования остеогенного матрикса (BGLAP) и минерализации (PHOSPHO1), в добавление к оценке степени минерализации прокрашиванием ализариновым красным и оценке внешнего вида костных утолщений. TH-17 клеточный супернатант эффективно усиливал hPDSC остеогенную дифференциацию и минерализацию (p<0,01). И IL-6 экспрессия и in vitro образование костей блокировались нейтрализацией IL-17A, IL-17F и IL-17A/F в воспаленной области, причем нейтрализация IL-17A/F показала наибольший эффект. Фигуры 15A-G. Кроме того, внешний вид костных утолщений был визуально меньшим в образцах, обработанных анти-IL-17A/F, по сравнению с обработкой только анти-IL-17A или анти-IL-17F.

Наличие IL-17A и IL-17F в сыворотке пациентов, презентирующих AS, количественно оценивали ELISA. И IL-17A и IL-17F белки измеряли у шести пациентов и по сравнению с количеством в сыворотке здоровых людей (HS). Изменяющиеся концентрации IL-17A и IL-17F обнаруживали среди различных пациентов со значительно большими количествами и IL-17A и IL-17F у трех пациентов (P<0,01) по сравнению с контрольной группой с сывороткой здоровых людей. Сыворотка образцов оставшихся трех пациентов, по-видимому, давала одинаковую IL-17A, однако большую IL-17F экспрессию у одного пациента по сравнению с HAS контролем. Для исследования значимости этого, hPDSC обрабатывали сывороткой AS пациентов и выдерживали в течение 48 часов. Оценивали находящийся ниже по ходу транскрипции целевой IL-6 и остеогенный маркер RUNX2. Для определения важности IL-17A и IL-17F в экспрессии данных маркеров, hPDSC обрабатывали сывороткой AS пациентов (образцы сыворотки, которые показывали значительно большие количества и IL-17A и IL-17F и стимулировали экспрессию мРНК IL-6 и RUNX2) после предварительного выдерживания или с контрольным IgG антителом или антителами, специфическими к IL-17A, IL-17F или IL-17A/F. Результаты показали, что блокирование и IL-17A и IL-17F приводило в результате к эффективному и значительному снижению экспрессии мРНК IL-6 и RUNX2. Данный эффект был наибольшим с антителом, которое имело большое сродство к IL-17A/F. Фигуры 16A и 16B.

Обсуждение: воспалительные и дегенеративные заболевания суставов часто вызывают пролиферативные реакции периартикулярной перихондральной кости, приводя в результате к образованию костных наростов (остеофитов). При воспалительных заболеваниях, таких как AS, энтезофиты возникают в месте прикрепления сухожилий (энтезис) в периферическом суставе и теле позвонков. Предполагается, что клетки-предшественники в надкостнице непосредственно вовлечены в данный процесс образования костей и могут приводить к анкилозу с нарушением движения и дисфункцией суставов. Результаты, описанные в настоящем изобретении, показывают, что и IL-17A и IL-17F усиливают in vitro остеогенную дифференциацию и образование костей из hPDSC. Нейтрализация IL-17A и IL-17F моноклональным антителом, который связывается с IL-17A/F (CA028_0496.g3 (бимекизумаб)), ингибирует IL-6 генную экспрессию и нейтрализует экспрессию остеогенных генов (RUNX2, SP7 и BMP2). CA028_0496.g3 также в значительной степени опосредует эффекторы минерализации костного матрикса (BGLAP и PHOSPHO1), приводя в результате к наблюдаемому снижению минерализации матрикса и образования костных наростов. Нейтрализация IL-17A/F приводила в результате к наибольшему ингибированию маркеров остеогенной дифференциации и минерализации матрикса по сравнению с нейтрализацией только IL-17A или IL-17F). Современные терапевтические средства показывают ограниченную эффективность блокирования образования энтезофитов; следовательно, материалы и способы, описанные в настоящем изобретении, предоставляют значительное техническое преимущество для блокирования клинических проявлений данного тяжело протекающего заболевания.

--->

СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> UCB BIOPHARMA SPRL

<120> СПОСОБЫ ЛЕЧЕНИЯ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ АНТИ-IL-17A/F АНТИТЕЛ

<130> PF0044WO

<160> 28

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 10

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический пептид

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> CDRH1

<400> 1

Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Asn Met Ala

1 5 10

<210> 2

<211> 17

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический пептид

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> CDRH2

<400> 2

Thr Ile Thr Tyr Glu Gly Arg Asn Thr Tyr Tyr Arg Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 3

<211> 16

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический пептид

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> CDRH3

<400> 3

Pro Pro Gln Tyr Tyr Glu Gly Ser Ile Tyr Arg Leu Trp Phe Ala His

1 5 10 15

<210> 4

<211> 11

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический пептид

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> CDRL1

<400> 4

Arg Ala Asp Glu Ser Val Thr Thr Leu Met His

1 5 10

<210> 5

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический пептид

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> CDRL2

<400> 5

Leu Val Ser Asn Arg Glu Ser

1 5

<210> 6

<211> 9

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический пептид

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> CDRL3

<400> 6

Gln Gln Thr Trp Ser Asp Pro Trp Thr

1 5

<210> 7

<211> 11

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический пептид

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> CDRL1 for CA028_496.g3

<400> 7

Arg Ala Asp Glu Ser Val Arg Thr Leu His Met

1 5 10

<210> 8

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический пептид

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> CDRL2 for CA028_496.g3

<400> 8

Leu Val Ser Asn Ser Glu Ile

1 5

<210> 9

<211> 108

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический пептид

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> Вариабельный участок легкой цепи - CA028_496 (gL7)

<400> 9

Ala Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Asp Glu Ser Val Thr Thr Leu

20 25 30

Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Leu Val Ser Asn Arg Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Trp Ser Asp Pro Trp

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg

100 105

<210> 10

<211> 107

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический пептид

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> Вариабельный участок легкой цепи - CA028_496.g3 (gL57)

<400> 10

Ala Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Asp Glu Ser Val Arg Thr Leu

20 25 30

Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Leu Val Ser Asn Ser Glu Ile Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Arg Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Trp Ser Asp Pro Trp

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 11

<211> 125

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический пептид

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> Вариабельный участок тяжелой цепи - CA028_496 and CA028_496.g3 (gH9)

<400> 11

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Asn Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Thr Ile Thr Tyr Glu Gly Arg Asn Thr Tyr Tyr Arg Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ser Pro Pro Gln Tyr Tyr Glu Gly Ser Ile Tyr Arg Leu Trp Phe

100 105 110

Ala His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 12

<211> 214

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический пептид

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> Легкая цепь - CA028_496 (без сигнала)

<400> 12

Ala Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Asp Glu Ser Val Thr Thr Leu

20 25 30

Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Leu Val Ser Asn Arg Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Trp Ser Asp Pro Trp

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 13

<211> 214

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический пептид

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> Легкая цепь - CA028_496.g3 (без сигнала)

<400> 13

Ala Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Asp Glu Ser Val Arg Thr Leu

20 25 30

Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Leu Val Ser Asn Ser Glu Ile Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Arg Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Trp Ser Asp Pro Trp

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 14

<211> 234

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический пептид

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> Легкая цепь - CA028_496.g3 (с сигналом)

<400> 14

Met Ser Val Pro Thr Gln Val Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp Leu Thr

1 5 10 15

Asp Ala Arg Cys Ala Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser

20 25 30

Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Asp Glu Ser

35 40 45

Val Arg Thr Leu Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro

50 55 60

Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Val Ser Asn Ser Glu Ile Gly Val Pro Asp

65 70 75 80

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Arg Leu Thr Ile Ser

85 90 95

Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Trp

100 105 110

Ser Asp Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg

115 120 125

Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln

130 135 140

Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr

145 150 155 160

Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser

165 170 175

Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr

180 185 190

Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys

195 200 205

His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro

210 215 220

Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

225 230

<210> 15

<211> 452

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический пептид

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> Тяжелая цепь - CA028_496

<400> 15

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Asn Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Thr Ile Thr Tyr Glu Gly Arg Asn Thr Tyr Tyr Arg Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ser Pro Pro Gln Tyr Tyr Glu Gly Ser Ile Tyr Arg Leu Trp Phe

100 105 110

Ala His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr

115 120 125

Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser

130 135 140

Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu

145 150 155 160

Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His

165 170 175

Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser

180 185 190

Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys

195 200 205

Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu

210 215 220

Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu

225 230 235 240

Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu

245 250 255

Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser

260 265 270

Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu

275 280 285

Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr

290 295 300

Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn

305 310 315 320

Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser

325 330 335

Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln

340 345 350

Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val

355 360 365

Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val

370 375 380

Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro

385 390 395 400

Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr

405 410 415

Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val

420 425 430

Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu

435 440 445

Ser Leu Gly Lys

450

<210> 16

<211> 455

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический пептид

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> Тяжелая цепь CA028_496.g3 (без сигнала)

<400> 16

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Asn Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Thr Ile Thr Tyr Glu Gly Arg Asn Thr Tyr Tyr Arg Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ser Pro Pro Gln Tyr Tyr Glu Gly Ser Ile Tyr Arg Leu Trp Phe

100 105 110

Ala His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr

115 120 125

Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser

130 135 140

Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu

145 150 155 160

Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His

165 170 175

Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser

180 185 190

Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys

195 200 205

Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu

210 215 220

Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro

225 230 235 240

Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

245 250 255

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

260 265 270

Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp

275 280 285

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr

290 295 300

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

305 310 315 320

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu

325 330 335

Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

340 345 350

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys

355 360 365

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

370 375 380

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

385 390 395 400

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

405 410 415

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser

420 425 430

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

435 440 445

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

450 455

<210> 17

<211> 474

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический пептид

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> Тяжелая цепь - CA8_496.g3 (с сигналом)

<400> 17

Met Glu Trp Ser Trp Val Phe Leu Phe Phe Leu Ser Val Thr Thr Gly

1 5 10 15

Val His Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln

20 25 30

Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe

35 40 45

Ser Asp Tyr Asn Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu

50 55 60

Glu Trp Val Ala Thr Ile Thr Tyr Glu Gly Arg Asn Thr Tyr Tyr Arg

65 70 75 80

Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn

85 90 95

Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val

100 105 110

Tyr Tyr Cys Ala Ser Pro Pro Gln Tyr Tyr Glu Gly Ser Ile Tyr Arg

115 120 125

Leu Trp Phe Ala His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

130 135 140

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys

145 150 155 160

Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

165 170 175

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

180 185 190

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

195 200 205

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr

210 215 220

Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

225 230 235 240

Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys

245 250 255

Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro

260 265 270

Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys

275 280 285

Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp

290 295 300

Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu

305 310 315 320

Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu

325 330 335

His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn

340 345 350

Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly

355 360 365

Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu

370 375 380

Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr

385 390 395 400

Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn

405 410 415

Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe

420 425 430

Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn

435 440 445

Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr

450 455 460

Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

465 470

<210> 18

<211> 321

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический пептид

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> Вариабельный участок легкой цепи - CA028_496.g3

<400> 18

Gly Cys Cys Ala Thr Cys Cys Ala Gly Cys Thr Gly Ala Cys Cys Cys

1 5 10 15

Ala Gly Ala Gly Cys Cys Cys Thr Thr Cys Cys Thr Cys Thr Cys Thr

20 25 30

Cys Ala Gly Cys Gly Cys Cys Ala Gly Thr Gly Thr Cys Gly Gly Ala

35 40 45

Gly Ala Cys Ala Gly Ala Gly Thr Gly Ala Cys Thr Ala Thr Thr Ala

50 55 60

Cys Cys Thr Gly Cys Ala Gly Gly Gly Cys Thr Gly Ala Cys Gly Ala

65 70 75 80

Ala Ala Gly Cys Gly Thr Gly Ala Gly Ala Ala Cys Ala Thr Thr Gly

85 90 95

Ala Thr Gly Cys Ala Cys Thr Gly Gly Thr Ala Cys Cys Ala Ala Cys

100 105 110

Ala Gly Ala Ala Gly Cys Cys Thr Gly Gly Cys Ala Ala Ala Gly Cys

115 120 125

Cys Cys Cys Cys Ala Ala Gly Cys Thr Cys Cys Thr Gly Ala Thr Cys

130 135 140

Thr Ala Thr Cys Thr Gly Gly Thr Thr Thr Cys Cys Ala Ala Thr Thr

145 150 155 160

Cys Gly Gly Ala Gly Ala Thr Thr Gly Gly Ala Gly Thr Cys Cys Cys

165 170 175

Cys Gly Ala Cys Ala Gly Gly Thr Thr Cys Ala Gly Cys Gly Gly Cys

180 185 190

Ala Gly Thr Gly Gly Gly Thr Cys Thr Gly Gly Ala Ala Cys Thr Gly

195 200 205

Ala Cys Thr Thr Thr Cys Gly Cys Cys Thr Gly Ala Cys Ala Ala Thr

210 215 220

Cys Thr Cys Cys Thr Cys Ala Cys Thr Cys Cys Ala Gly Cys Cys Cys

225 230 235 240

Gly Ala Ala Gly Ala Thr Thr Thr Cys Gly Cys Cys Ala Cys Cys Thr

245 250 255

Ala Cys Thr Ala Thr Thr Gly Cys Cys Ala Gly Cys Ala Gly Ala Cys

260 265 270

Thr Thr Gly Gly Ala Gly Cys Gly Ala Cys Cys Cys Thr Thr Gly Gly

275 280 285

Ala Cys Ala Thr Thr Thr Gly Gly Ala Cys Ala Gly Gly Gly Cys Ala

290 295 300

Cys Ala Ala Ala Ala Gly Thr Gly Gly Ala Gly Ala Thr Cys Ala Ala

305 310 315 320

Gly

<210> 19

<211> 375

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический пептид

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> Вариабельный участок тяжелой цепи - CA028_496.g3

<400> 19

Gly Ala Gly Gly Thr Thr Cys Ala Gly Cys Thr Cys Gly Thr Thr Gly

1 5 10 15

Ala Ala Thr Cys Cys Gly Gly Ala Gly Gly Cys Gly Gly Ala Cys Thr

20 25 30

Cys Gly Thr Gly Cys Ala Gly Cys Cys Thr Gly Gly Gly Gly Gly Cys

35 40 45

Thr Cys Cys Thr Thr Gly Cys Gly Gly Cys Thr Gly Ala Gly Cys Thr

50 55 60

Gly Cys Gly Cys Thr Gly Cys Cys Ala Gly Thr Gly Gly Cys Thr Thr

65 70 75 80

Cys Ala Cys Thr Thr Thr Cys Ala Gly Cys Gly Ala Thr Thr Ala Cys

85 90 95

Ala Ala Thr Ala Thr Gly Gly Cys Cys Thr Gly Gly Gly Thr Gly Cys

100 105 110

Gly Cys Cys Ala Gly Gly Cys Cys Cys Cys Ala Gly Gly Cys Ala Ala

115 120 125

Gly Gly Gly Thr Cys Thr Gly Gly Ala Gly Thr Gly Gly Gly Thr Gly

130 135 140

Gly Cys Cys Ala Cys Ala Ala Thr Thr Ala Cys Cys Thr Ala Thr Gly

145 150 155 160

Ala Gly Gly Gly Cys Ala Gly Ala Ala Ala Cys Ala Cys Thr Thr Ala

165 170 175

Thr Thr Ala Cys Cys Gly Gly Gly Ala Thr Thr Cys Ala Gly Thr Gly

180 185 190

Ala Ala Ala Gly Gly Gly Cys Gly Ala Thr Thr Thr Ala Cys Cys Ala

195 200 205

Thr Cys Ala Gly Cys Ala Gly Gly Gly Ala Thr Ala Ala Thr Gly Cys

210 215 220

Ala Ala Ala Gly Ala Ala Cys Ala Gly Thr Cys Thr Gly Thr Ala Cys

225 230 235 240

Cys Thr Gly Cys Ala Gly Ala Thr Gly Ala Ala Cys Thr Cys Thr Cys

245 250 255

Thr Gly Ala Gly Ala Gly Cys Thr Gly Ala Gly Gly Ala Cys Ala Cys

260 265 270

Cys Gly Cys Thr Gly Thr Cys Thr Ala Cys Thr Ala Thr Thr Gly Thr

275 280 285

Gly Cys Ala Ala Gly Cys Cys Cys Ala Cys Cys Cys Cys Ala Gly Thr

290 295 300

Ala Cys Thr Ala Thr Gly Ala Gly Gly Gly Cys Thr Cys Ala Ala Thr

305 310 315 320

Cys Thr Ala Cys Ala Gly Ala Thr Thr Gly Thr Gly Gly Thr Thr Thr

325 330 335

Gly Cys Cys Cys Ala Thr Thr Gly Gly Gly Gly Cys Cys Ala Gly Gly

340 345 350

Gly Ala Ala Cys Ala Cys Thr Gly Gly Thr Gly Ala Cys Cys Gly Thr

355 360 365

Cys Thr Cys Gly Ala Gly Cys

370 375

<210> 20

<211> 705

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический пептид

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> Легкая цепь - CA028_496 (с сигналом)

<400> 20

Ala Thr Gly Thr Cys Ala Gly Thr Thr Cys Cys Cys Ala Cys Ala Cys

1 5 10 15

Ala Gly Gly Thr Gly Cys Thr Gly Gly Gly Cys Cys Thr Gly Cys Thr

20 25 30

Thr Cys Thr Gly Thr Thr Gly Thr Gly Gly Cys Thr Cys Ala Cys Cys

35 40 45

Gly Ala Thr Gly Cys Thr Ala Gly Gly Thr Gly Thr Gly Cys Cys Ala

50 55 60

Thr Cys Cys Ala Gly Cys Thr Gly Ala Cys Cys Cys Ala Gly Ala Gly

65 70 75 80

Cys Cys Cys Thr Thr Cys Cys Thr Cys Thr Cys Thr Cys Ala Gly Cys

85 90 95

Gly Cys Cys Ala Gly Thr Gly Thr Cys Gly Gly Ala Gly Ala Cys Ala

100 105 110

Gly Ala Gly Thr Gly Ala Cys Thr Ala Thr Thr Ala Cys Cys Thr Gly

115 120 125

Cys Ala Gly Gly Gly Cys Thr Gly Ala Cys Gly Ala Ala Ala Gly Cys

130 135 140

Gly Thr Gly Ala Cys Cys Ala Cys Ala Thr Thr Gly Ala Thr Gly Cys

145 150 155 160

Ala Cys Thr Gly Gly Thr Ala Cys Cys Ala Ala Cys Ala Gly Ala Ala

165 170 175

Gly Cys Cys Thr Gly Gly Cys Ala Ala Ala Gly Cys Cys Cys Cys Cys

180 185 190

Ala Ala Gly Cys Thr Cys Cys Thr Gly Ala Thr Cys Thr Ala Thr Cys

195 200 205

Thr Gly Gly Thr Thr Thr Cys Cys Ala Ala Thr Cys Gly Gly Gly Ala

210 215 220

Gly Thr Cys Thr Gly Gly Ala Gly Thr Cys Cys Cys Cys Ala Gly Cys

225 230 235 240

Ala Gly Gly Thr Thr Cys Ala Gly Cys Gly Gly Cys Ala Gly Thr Gly

245 250 255

Gly Gly Thr Cys Thr Gly Gly Ala Ala Cys Thr Gly Ala Cys Thr Thr

260 265 270

Thr Ala Cys Cys Cys Thr Gly Ala Cys Ala Ala Thr Cys Thr Cys Cys

275 280 285

Thr Cys Ala Cys Thr Cys Cys Ala Gly Cys Cys Cys Gly Ala Ala Gly

290 295 300

Ala Thr Thr Thr Cys Gly Cys Cys Ala Cys Cys Thr Ala Cys Thr Ala

305 310 315 320

Thr Thr Gly Cys Cys Ala Gly Cys Ala Gly Ala Cys Thr Thr Gly Gly

325 330 335

Ala Gly Cys Gly Ala Cys Cys Cys Thr Thr Gly Gly Ala Cys Ala Thr

340 345 350

Thr Thr Gly Gly Ala Cys Ala Gly Gly Gly Cys Ala Cys Ala Ala Ala

355 360 365

Ala Gly Thr Gly Gly Ala Gly Ala Thr Cys Ala Ala Gly Cys Gly Thr

370 375 380

Ala Cys Gly Gly Thr Ala Gly Cys Gly Gly Cys Cys Cys Cys Ala Thr

385 390 395 400

Cys Thr Gly Thr Cys Thr Thr Cys Ala Thr Cys Thr Thr Cys Cys Cys

405 410 415

Gly Cys Cys Ala Thr Cys Thr Gly Ala Thr Gly Ala Gly Cys Ala Gly

420 425 430

Thr Thr Gly Ala Ala Ala Thr Cys Thr Gly Gly Ala Ala Cys Thr Gly

435 440 445

Cys Cys Thr Cys Thr Gly Thr Thr Gly Thr Gly Thr Gly Cys Cys Thr

450 455 460

Gly Cys Thr Gly Ala Ala Thr Ala Ala Cys Thr Thr Cys Thr Ala Thr

465 470 475 480

Cys Cys Cys Ala Gly Ala Gly Ala Gly Gly Cys Cys Ala Ala Ala Gly

485 490 495

Thr Ala Cys Ala Gly Thr Gly Gly Ala Ala Gly Gly Thr Gly Gly Ala

500 505 510

Thr Ala Ala Cys Gly Cys Cys Cys Thr Cys Cys Ala Ala Thr Cys Gly

515 520 525

Gly Gly Thr Ala Ala Cys Thr Cys Cys Cys Ala Gly Gly Ala Gly Ala

530 535 540

Gly Thr Gly Thr Cys Ala Cys Ala Gly Ala Gly Cys Ala Gly Gly Ala

545 550 555 560

Cys Ala Gly Cys Ala Ala Gly Gly Ala Cys Ala Gly Cys Ala Cys Cys

565 570 575

Thr Ala Cys Ala Gly Cys Cys Thr Cys Ala Gly Cys Ala Gly Cys Ala

580 585 590

Cys Cys Cys Thr Gly Ala Cys Gly Cys Thr Gly Ala Gly Cys Ala Ala

595 600 605

Ala Gly Cys Ala Gly Ala Cys Thr Ala Cys Gly Ala Gly Ala Ala Ala

610 615 620

Cys Ala Cys Ala Ala Ala Gly Thr Cys Thr Ala Cys Gly Cys Cys Thr

625 630 635 640

Gly Cys Gly Ala Ala Gly Thr Cys Ala Cys Cys Cys Ala Thr Cys Ala

645 650 655

Gly Gly Gly Cys Cys Thr Gly Ala Gly Cys Thr Cys Gly Cys Cys Cys

660 665 670

Gly Thr Cys Ala Cys Ala Ala Ala Gly Ala Gly Cys Thr Thr Cys Ala

675 680 685

Ala Cys Ala Gly Gly Gly Gly Ala Gly Ala Gly Thr Gly Thr Thr Ala

690 695 700

Gly

705

<210> 21

<211> 645

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический пептид

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> Легкая цепь - CA028_496.g3 (без сигнала)

<400> 21

Gly Cys Cys Ala Thr Cys Cys Ala Gly Cys Thr Gly Ala Cys Cys Cys

1 5 10 15

Ala Gly Ala Gly Cys Cys Cys Thr Thr Cys Cys Thr Cys Thr Cys Thr

20 25 30

Cys Ala Gly Cys Gly Cys Cys Ala Gly Thr Gly Thr Cys Gly Gly Ala

35 40 45

Gly Ala Cys Ala Gly Ala Gly Thr Gly Ala Cys Thr Ala Thr Thr Ala

50 55 60

Cys Cys Thr Gly Cys Ala Gly Gly Gly Cys Thr Gly Ala Cys Gly Ala

65 70 75 80

Ala Ala Gly Cys Gly Thr Gly Ala Gly Ala Ala Cys Ala Thr Thr Gly

85 90 95

Ala Thr Gly Cys Ala Cys Thr Gly Gly Thr Ala Cys Cys Ala Ala Cys

100 105 110

Ala Gly Ala Ala Gly Cys Cys Thr Gly Gly Cys Ala Ala Ala Gly Cys

115 120 125

Cys Cys Cys Cys Ala Ala Gly Cys Thr Cys Cys Thr Gly Ala Thr Cys

130 135 140

Thr Ala Thr Cys Thr Gly Gly Thr Thr Thr Cys Cys Ala Ala Thr Thr

145 150 155 160

Cys Gly Gly Ala Gly Ala Thr Thr Gly Gly Ala Gly Thr Cys Cys Cys

165 170 175

Cys Gly Ala Cys Ala Gly Gly Thr Thr Cys Ala Gly Cys Gly Gly Cys

180 185 190

Ala Gly Thr Gly Gly Gly Thr Cys Thr Gly Gly Ala Ala Cys Thr Gly

195 200 205

Ala Cys Thr Thr Thr Cys Gly Cys Cys Thr Gly Ala Cys Ala Ala Thr

210 215 220

Cys Thr Cys Cys Thr Cys Ala Cys Thr Cys Cys Ala Gly Cys Cys Cys

225 230 235 240

Gly Ala Ala Gly Ala Thr Thr Thr Cys Gly Cys Cys Ala Cys Cys Thr

245 250 255

Ala Cys Thr Ala Thr Thr Gly Cys Cys Ala Gly Cys Ala Gly Ala Cys

260 265 270

Thr Thr Gly Gly Ala Gly Cys Gly Ala Cys Cys Cys Thr Thr Gly Gly

275 280 285

Ala Cys Ala Thr Thr Thr Gly Gly Ala Cys Ala Gly Gly Gly Cys Ala

290 295 300

Cys Ala Ala Ala Ala Gly Thr Gly Gly Ala Gly Ala Thr Cys Ala Ala

305 310 315 320

Gly Cys Gly Thr Ala Cys Gly Gly Thr Ala Gly Cys Gly Gly Cys Cys

325 330 335

Cys Cys Ala Thr Cys Thr Gly Thr Cys Thr Thr Cys Ala Thr Cys Thr

340 345 350

Thr Cys Cys Cys Gly Cys Cys Ala Thr Cys Thr Gly Ala Thr Gly Ala

355 360 365

Gly Cys Ala Gly Thr Thr Gly Ala Ala Ala Thr Cys Thr Gly Gly Ala

370 375 380

Ala Cys Thr Gly Cys Cys Thr Cys Thr Gly Thr Thr Gly Thr Gly Thr

385 390 395 400

Gly Cys Cys Thr Gly Cys Thr Gly Ala Ala Thr Ala Ala Cys Thr Thr

405 410 415

Cys Thr Ala Thr Cys Cys Cys Ala Gly Ala Gly Ala Gly Gly Cys Cys

420 425 430

Ala Ala Ala Gly Thr Ala Cys Ala Gly Thr Gly Gly Ala Ala Gly Gly

435 440 445

Thr Gly Gly Ala Thr Ala Ala Cys Gly Cys Cys Cys Thr Cys Cys Ala

450 455 460

Ala Thr Cys Gly Gly Gly Thr Ala Ala Cys Thr Cys Cys Cys Ala Gly

465 470 475 480

Gly Ala Gly Ala Gly Thr Gly Thr Cys Ala Cys Ala Gly Ala Gly Cys

485 490 495

Ala Gly Gly Ala Cys Ala Gly Cys Ala Ala Gly Gly Ala Cys Ala Gly

500 505 510

Cys Ala Cys Cys Thr Ala Cys Ala Gly Cys Cys Thr Cys Ala Gly Cys

515 520 525

Ala Gly Cys Ala Cys Cys Cys Thr Gly Ala Cys Gly Cys Thr Gly Ala

530 535 540

Gly Cys Ala Ala Ala Gly Cys Ala Gly Ala Cys Thr Ala Cys Gly Ala

545 550 555 560

Gly Ala Ala Ala Cys Ala Cys Ala Ala Ala Gly Thr Cys Thr Ala Cys

565 570 575

Gly Cys Cys Thr Gly Cys Gly Ala Ala Gly Thr Cys Ala Cys Cys Cys

580 585 590

Ala Thr Cys Ala Gly Gly Gly Cys Cys Thr Gly Ala Gly Cys Thr Cys

595 600 605

Gly Cys Cys Cys Gly Thr Cys Ala Cys Ala Ala Ala Gly Ala Gly Cys

610 615 620

Thr Thr Cys Ala Ala Cys Ala Gly Gly Gly Gly Ala Gly Ala Gly Thr

625 630 635 640

Gly Thr Thr Ala Gly

645

<210> 22

<211> 705

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический пептид

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> Легкая цепь - CA028_496.g3 (с сигналом)

<400> 22

Ala Thr Gly Thr Cys Ala Gly Thr Thr Cys Cys Cys Ala Cys Ala Cys

1 5 10 15

Ala Gly Gly Thr Gly Cys Thr Gly Gly Gly Cys Cys Thr Gly Cys Thr

20 25 30

Thr Cys Thr Gly Thr Thr Gly Thr Gly Gly Cys Thr Cys Ala Cys Cys

35 40 45

Gly Ala Thr Gly Cys Thr Ala Gly Gly Thr Gly Thr Gly Cys Cys Ala

50 55 60

Thr Cys Cys Ala Gly Cys Thr Gly Ala Cys Cys Cys Ala Gly Ala Gly

65 70 75 80

Cys Cys Cys Thr Thr Cys Cys Thr Cys Thr Cys Thr Cys Ala Gly Cys

85 90 95

Gly Cys Cys Ala Gly Thr Gly Thr Cys Gly Gly Ala Gly Ala Cys Ala

100 105 110

Gly Ala Gly Thr Gly Ala Cys Thr Ala Thr Thr Ala Cys Cys Thr Gly

115 120 125

Cys Ala Gly Gly Gly Cys Thr Gly Ala Cys Gly Ala Ala Ala Gly Cys

130 135 140

Gly Thr Gly Ala Gly Ala Ala Cys Ala Thr Thr Gly Ala Thr Gly Cys

145 150 155 160

Ala Cys Thr Gly Gly Thr Ala Cys Cys Ala Ala Cys Ala Gly Ala Ala

165 170 175

Gly Cys Cys Thr Gly Gly Cys Ala Ala Ala Gly Cys Cys Cys Cys Cys

180 185 190

Ala Ala Gly Cys Thr Cys Cys Thr Gly Ala Thr Cys Thr Ala Thr Cys

195 200 205

Thr Gly Gly Thr Thr Thr Cys Cys Ala Ala Thr Thr Cys Gly Gly Ala

210 215 220

Gly Ala Thr Thr Gly Gly Ala Gly Thr Cys Cys Cys Cys Gly Ala Cys

225 230 235 240

Ala Gly Gly Thr Thr Cys Ala Gly Cys Gly Gly Cys Ala Gly Thr Gly

245 250 255

Gly Gly Thr Cys Thr Gly Gly Ala Ala Cys Thr Gly Ala Cys Thr Thr

260 265 270

Thr Cys Gly Cys Cys Thr Gly Ala Cys Ala Ala Thr Cys Thr Cys Cys

275 280 285

Thr Cys Ala Cys Thr Cys Cys Ala Gly Cys Cys Cys Gly Ala Ala Gly

290 295 300

Ala Thr Thr Thr Cys Gly Cys Cys Ala Cys Cys Thr Ala Cys Thr Ala

305 310 315 320

Thr Thr Gly Cys Cys Ala Gly Cys Ala Gly Ala Cys Thr Thr Gly Gly

325 330 335

Ala Gly Cys Gly Ala Cys Cys Cys Thr Thr Gly Gly Ala Cys Ala Thr

340 345 350

Thr Thr Gly Gly Ala Cys Ala Gly Gly Gly Cys Ala Cys Ala Ala Ala

355 360 365

Ala Gly Thr Gly Gly Ala Gly Ala Thr Cys Ala Ala Gly Cys Gly Thr

370 375 380

Ala Cys Gly Gly Thr Ala Gly Cys Gly Gly Cys Cys Cys Cys Ala Thr

385 390 395 400

Cys Thr Gly Thr Cys Thr Thr Cys Ala Thr Cys Thr Thr Cys Cys Cys

405 410 415

Gly Cys Cys Ala Thr Cys Thr Gly Ala Thr Gly Ala Gly Cys Ala Gly

420 425 430

Thr Thr Gly Ala Ala Ala Thr Cys Thr Gly Gly Ala Ala Cys Thr Gly

435 440 445

Cys Cys Thr Cys Thr Gly Thr Thr Gly Thr Gly Thr Gly Cys Cys Thr

450 455 460

Gly Cys Thr Gly Ala Ala Thr Ala Ala Cys Thr Thr Cys Thr Ala Thr

465 470 475 480

Cys Cys Cys Ala Gly Ala Gly Ala Gly Gly Cys Cys Ala Ala Ala Gly

485 490 495

Thr Ala Cys Ala Gly Thr Gly Gly Ala Ala Gly Gly Thr Gly Gly Ala

500 505 510

Thr Ala Ala Cys Gly Cys Cys Cys Thr Cys Cys Ala Ala Thr Cys Gly

515 520 525

Gly Gly Thr Ala Ala Cys Thr Cys Cys Cys Ala Gly Gly Ala Gly Ala

530 535 540

Gly Thr Gly Thr Cys Ala Cys Ala Gly Ala Gly Cys Ala Gly Gly Ala

545 550 555 560

Cys Ala Gly Cys Ala Ala Gly Gly Ala Cys Ala Gly Cys Ala Cys Cys

565 570 575

Thr Ala Cys Ala Gly Cys Cys Thr Cys Ala Gly Cys Ala Gly Cys Ala

580 585 590

Cys Cys Cys Thr Gly Ala Cys Gly Cys Thr Gly Ala Gly Cys Ala Ala

595 600 605

Ala Gly Cys Ala Gly Ala Cys Thr Ala Cys Gly Ala Gly Ala Ala Ala

610 615 620

Cys Ala Cys Ala Ala Ala Gly Thr Cys Thr Ala Cys Gly Cys Cys Thr

625 630 635 640

Gly Cys Gly Ala Ala Gly Thr Cys Ala Cys Cys Cys Ala Thr Cys Ala

645 650 655

Gly Gly Gly Cys Cys Thr Gly Ala Gly Cys Thr Cys Gly Cys Cys Cys

660 665 670

Gly Thr Cys Ala Cys Ala Ala Ala Gly Ala Gly Cys Thr Thr Cys Ala

675 680 685

Ala Cys Ala Gly Gly Gly Gly Ala Gly Ala Gly Thr Gly Thr Thr Ala

690 695 700

Gly

705

<210> 23

<211> 2020

<212> DNA

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<223> Тяжелая цепь CA028_496 (с сигналом)

<400> 23

atggaatggt cctgggtctt cctgtttttc ctttctgtca caaccggggt gcacagcgag 60

gttcagctcg ttgaatccgg aggcggactc gtgcagcctg ggggctcctt gcggctgagc 120

tgcgctgcca gtggcttcac tttcagcgat tacaatatgg cctgggtgcg ccaggcccca 180

ggcaagggtc tggagtgggt ggccacaatt acctatgagg gcagaaacac ttattaccgg 240

gattcagtga aagggcgatt taccatcagc agggataatg caaagaacag tctgtacctg 300

cagatgaact ctctgagagc tgaggacacc gctgtctact attgtgcaag cccaccccag 360

tactatgagg gctcaatcta cagattgtgg tttgcccatt ggggccaggg aacactggtg 420

accgtctcga gcgcttctac aaagggccca tccgtcttcc ccctggcgcc ctgctccagg 480

agcacctccg agagcacagc cgccctgggc tgcctggtca aggactactt ccccgaaccg 540

gtgacggtgt cgtggaactc aggcgccctg accagcggcg tgcacacctt cccggctgtc 600

ctacagtcct caggactcta ctccctcagc agcgtggtga ccgtgccctc cagcagcttg 660

ggcacgaaga cctacacctg caacgtagat cacaagccca gcaacaccaa ggtggacaag 720

agagttggtg agaggccagc acagggaggg agggtgtctg ctggaagcca ggctcagccc 780

tcctgcctgg acgcaccccg gctgtgcagc cccagcccag ggcagcaagg catgccccat 840

ctgtctcctc acccggaggc ctctgaccac cccactcatg cccagggaga gggtcttctg 900

gatttttcca ccaggctccg ggcagccaca ggctggatgc ccctacccca ggccctgcgc 960

atacaggggc aggtgctgcg ctcagacctg ccaagagcca tatccgggag gaccctgccc 1020

ctgacctaag cccaccccaa aggccaaact ctccactccc tcagctcaga caccttctct 1080

cctcccagat ctgagtaact cccaatcttc tctctgcaga gtccaaatat ggtcccccat 1140

gcccaccatg cccaggtaag ccaacccagg cctcgccctc cagctcaagg cgggacaggt 1200

gccctagagt agcctgcatc cagggacagg ccccagccgg gtgctgacgc atccacctcc 1260

atctcttcct cagcacctga gttcctgggg ggaccatcag tcttcctgtt ccccccaaaa 1320

cccaaggaca ctctcatgat ctcccggacc cctgaggtca cgtgcgtggt ggtggacgtg 1380

agccaggaag accccgaggt ccagttcaac tggtacgtgg atggcgtgga ggtgcataat 1440

gccaagacaa agccgcggga ggagcagttc aacagcacgt accgtgtggt cagcgtcctc 1500

accgtcctgc accaggactg gctgaacggc aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa 1560

ggcctcccgt cctccatcga gaaaaccatc tccaaagcca aaggtgggac ccacggggtg 1620

cgagggccac atggacagag gtcagctcgg cccaccctct gccctgggag tgaccgctgt 1680

gccaacctct gtccctacag ggcagccccg agagccacag gtgtacaccc tgcccccatc 1740

ccaggaggag atgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctaccc 1800

cagcgacatc gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac 1860

gcctcccgtg ctggactccg acggctcctt cttcctctac agcaggctaa ccgtggacaa 1920

gagcaggtgg caggagggga atgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa 1980

ccactacaca cagaagagcc tctccctgtc tctgggtaaa 2020

<210> 24

<211> 1365

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<223> Тяжелая цепь - CA028_496.g3 (с экзонами, без сигнала)

<400> 24

gaggttcagc tcgttgaatc cggaggcgga ctcgtgcagc ctgggggctc cttgcggctg 60

agctgcgctg ccagtggctt cactttcagc gattacaata tggcctgggt gcgccaggcc 120

ccaggcaagg gtctggagtg ggtggccaca attacctatg agggcagaaa cacttattac 180

cgggattcag tgaaagggcg atttaccatc agcagggata atgcaaagaa cagtctgtac 240

ctgcagatga actctctgag agctgaggac accgctgtct actattgtgc aagcccaccc 300

cagtactatg agggctcaat ctacagattg tggtttgccc attggggcca gggaacactg 360

gtgaccgtct cgagcgcttc tacaaagggc ccatcggtct tccccctggc accctcctcc 420

aagagcacct ctgggggcac agcggccctg ggctgcctgg tcaaggacta cttccccgaa 480

ccggtgacgg tgtcgtggaa ctcaggcgcc ctgaccagcg gcgtgcacac cttcccggct 540

gtcctacagt cctcaggact ctactccctc agcagcgtgg tgaccgtgcc ctccagcagc 600

ttgggcaccc agacctacat ctgcaacgtg aatcacaagc ccagcaacac caaggtcgac 660

aagaaagttg agcccaaatc ttgtgacaaa actcacacat gcccaccgtg cccagcacct 720

gaactcctgg ggggaccgtc agtcttcctc ttccccccaa aacccaagga caccctcatg 780

atctcccgga cccctgaggt cacatgcgtg gtggtggacg tgagccacga agaccctgag 840

gtcaagttca actggtacgt ggacggcgtg gaggtgcata atgccaagac aaagccgcgg 900

gaggagcagt acaacagcac gtaccgtgtg gtcagcgtcc tcaccgtcct gcaccaggac 960

tggctgaatg gcaaggagta caagtgcaag gtctccaaca aagccctccc agcccccatc 1020

gagaaaacca tctccaaagc caaagcgcag ccccgagaac cacaggtgta caccctgccc 1080

ccatcccggg atgagctgac caagaaccag gtcagcctga cctgcctggt caaaggcttc 1140

tatcccagcg acatcgccgt ggagtgggag agcaatgggc agccggagaa caactacaag 1200

accacgcctc ccgtgctgga ctccgacggc tccttcttcc tctacagcaa gctcaccgtg 1260

gacaagagca ggtggcagca ggggaacgtc ttctcatgct ccgtgatgca tgaggctctg 1320

cacaaccact acacgcagaa gagcctctcc ctgtctccgg gtaaa 1365

<210> 25

<211> 1422

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<223> Тяжелая цепь - CA028_496.g3 (без сигнала и экзонов)

<400> 25

atggaatggt cctgggtctt cctgtttttc ctttctgtca caaccggggt gcacagcgag 60

gttcagctcg ttgaatccgg aggcggactc gtgcagcctg ggggctcctt gcggctgagc 120

tgcgctgcca gtggcttcac tttcagcgat tacaatatgg cctgggtgcg ccaggcccca 180

ggcaagggtc tggagtgggt ggccacaatt acctatgagg gcagaaacac ttattaccgg 240

gattcagtga aagggcgatt taccatcagc agggataatg caaagaacag tctgtacctg 300

cagatgaact ctctgagagc tgaggacacc gctgtctact attgtgcaag cccaccccag 360

tactatgagg gctcaatcta cagattgtgg tttgcccatt ggggccaggg aacactggtg 420

accgtctcga gcgcttctac aaagggccca tcggtcttcc ccctggcacc ctcctccaag 480

agcacctctg ggggcacagc ggccctgggc tgcctggtca aggactactt ccccgaaccg 540

gtgacggtgt cgtggaactc aggcgccctg accagcggcg tgcacacctt cccggctgtc 600

ctacagtcct caggactcta ctccctcagc agcgtggtga ccgtgccctc cagcagcttg 660

ggcacccaga cctacatctg caacgtgaat cacaagccca gcaacaccaa ggtcgacaag 720

aaagttgagc ccaaatcttg tgacaaaact cacacatgcc caccgtgccc agcacctgaa 780

ctcctggggg gaccgtcagt cttcctcttc cccccaaaac ccaaggacac cctcatgatc 840

tcccggaccc ctgaggtcac atgcgtggtg gtggacgtga gccacgaaga ccctgaggtc 900

aagttcaact ggtacgtgga cggcgtggag gtgcataatg ccaagacaaa gccgcgggag 960

gagcagtaca acagcacgta ccgtgtggtc agcgtcctca ccgtcctgca ccaggactgg 1020

ctgaatggca aggagtacaa gtgcaaggtc tccaacaaag ccctcccagc ccccatcgag 1080

aaaaccatct ccaaagccaa agcgcagccc cgagaaccac aggtgtacac cctgccccca 1140

tcccgggatg agctgaccaa gaaccaggtc agcctgacct gcctggtcaa aggcttctat 1200

cccagcgaca tcgccgtgga gtgggagagc aatgggcagc cggagaacaa ctacaagacc 1260

acgcctcccg tgctggactc cgacggctcc ttcttcctct acagcaagct caccgtggac 1320

aagagcaggt ggcagcaggg gaacgtcttc tcatgctccg tgatgcatga ggctctgcac 1380

aaccactaca cgcagaagag cctctccctg tctccgggta aa 1422

<210> 26

<211> 1422

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический полинуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<223> Тяжелая цепь - CA028_496.g3 (с сигналом)

<400> 26

atggaatggt cctgggtctt cctgtttttc ctttctgtca caaccggggt gcacagcgag 60

gttcagctcg ttgaatccgg aggcggactc gtgcagcctg ggggctcctt gcggctgagc 120

tgcgctgcca gtggcttcac tttcagcgat tacaatatgg cctgggtgcg ccaggcccca 180

ggcaagggtc tggagtgggt ggccacaatt acctatgagg gcagaaacac ttattaccgg 240

gattcagtga aagggcgatt taccatcagc agggataatg caaagaacag tctgtacctg 300

cagatgaact ctctgagagc tgaggacacc gctgtctact attgtgcaag cccaccccag 360

tactatgagg gctcaatcta cagattgtgg tttgcccatt ggggccaggg aacactggtg 420

accgtctcga gcgcttctac aaagggccca tcggtcttcc ccctggcacc ctcctccaag 480

agcacctctg ggggcacagc ggccctgggc tgcctggtca aggactactt ccccgaaccg 540

gtgacggtgt cgtggaactc aggcgccctg accagcggcg tgcacacctt cccggctgtc 600

ctacagtcct caggactcta ctccctcagc agcgtggtga ccgtgccctc cagcagcttg 660

ggcacccaga cctacatctg caacgtgaat cacaagccca gcaacaccaa ggtcgacaag 720

aaagttgagc ccaaatcttg tgacaaaact cacacatgcc caccgtgccc agcacctgaa 780

ctcctggggg gaccgtcagt cttcctcttc cccccaaaac ccaaggacac cctcatgatc 840

tcccggaccc ctgaggtcac atgcgtggtg gtggacgtga gccacgaaga ccctgaggtc 900

aagttcaact ggtacgtgga cggcgtggag gtgcataatg ccaagacaaa gccgcgggag 960

gagcagtaca acagcacgta ccgtgtggtc agcgtcctca ccgtcctgca ccaggactgg 1020

ctgaatggca aggagtacaa gtgcaaggtc tccaacaaag ccctcccagc ccccatcgag 1080

aaaaccatct ccaaagccaa agcgcagccc cgagaaccac aggtgtacac cctgccccca 1140

tcccgggatg agctgaccaa gaaccaggtc agcctgacct gcctggtcaa aggcttctat 1200

cccagcgaca tcgccgtgga gtgggagagc aatgggcagc cggagaacaa ctacaagacc 1260

acgcctcccg tgctggactc cgacggctcc ttcttcctct acagcaagct caccgtggac 1320

aagagcaggt ggcagcaggg gaacgtcttc tcatgctccg tgatgcatga ggctctgcac 1380

aaccactaca cgcagaagag cctctccctg tctccgggta aa 1422

<210> 27

<211> 132

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 27

Gly Ile Thr Ile Pro Arg Asn Pro Gly Cys Pro Asn Ser Glu Asp Lys

1 5 10 15

Asn Phe Pro Arg Thr Val Met Val Asn Leu Asn Ile His Asn Arg Asn

20 25 30

Thr Asn Thr Asn Pro Lys Arg Ser Ser Asp Tyr Tyr Asn Arg Ser Thr

35 40 45

Ser Pro Trp Asn Leu His Arg Asn Glu Asp Pro Glu Arg Tyr Pro Ser

50 55 60

Val Ile Trp Glu Ala Lys Cys Arg His Leu Gly Cys Ile Asn Ala Asp

65 70 75 80

Gly Asn Val Asp Tyr His Met Asn Ser Val Pro Ile Gln Gln Glu Ile

85 90 95

Leu Val Leu Arg Arg Glu Pro Pro His Cys Pro Asn Ser Phe Arg Leu

100 105 110

Glu Lys Ile Leu Val Ser Val Gly Cys Thr Cys Val Thr Pro Ile Val

115 120 125

His His Val Ala

130

<210> 28

<211> 133

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 28

Arg Lys Ile Pro Lys Val Gly His Thr Phe Phe Gln Lys Pro Glu Ser

1 5 10 15

Cys Pro Pro Val Pro Gly Gly Ser Met Lys Leu Asp Ile Gly Ile Ile

20 25 30

Asn Glu Asn Gln Arg Val Ser Met Ser Arg Asn Ile Glu Ser Arg Ser

35 40 45

Thr Ser Pro Trp Asn Tyr Thr Val Thr Trp Asp Pro Asn Arg Tyr Pro

50 55 60

Ser Glu Val Val Gln Ala Gln Cys Arg Asn Leu Gly Cys Ile Asn Ala

65 70 75 80

Gln Gly Lys Glu Asp Ile Ser Met Asn Ser Val Pro Ile Gln Gln Glu

85 90 95

Thr Leu Val Val Arg Arg Lys His Gln Gly Cys Ser Val Ser Phe Gln

100 105 110

Leu Glu Lys Val Leu Val Thr Val Gly Cys Thr Cys Val Thr Pro Val

115 120 125

Ile His His Val Gln

130

<---

Claims (19)

1. Способ лечения псориатического артрита у людей, включающий стадию введения человеку, по меньшей мере, одной дозы нейтрализующего антитела, которое связывается с человеческим IL-17A и человеческим IL-17F,

где антитело содержит вариабельный участок легкой цепи и вариабельный участок тяжелой цепи, где вариабельный участок легкой цепи содержит последовательность, указанную в SEQ ID NO: 10 и вариабельный участок тяжелой цепи содержит последовательность, указанную в SEQ ID NO: 11, и

где способ включает введение (a) 160 мг антитела каждые четыре недели, (b) 320 мг ударной дозы антитела с последующим введением поддерживающей дозы 160 мг антитела каждые четыре недели или (c) 320 мг антитела каждые четыре недели.

2. Способ по п. 1, где антитело представляет собой бимекизумаб.

3. Способ по п. 1 или 2, где антитело вводят в виде фармацевтической композиции.

4. Способ по любому из пп. 1-3, где антитело вводят подкожно.

5. Способ по любому из пп. 1-3, где антитело вводят внутривенно.

6. Способ по любому из пп. 1-5, где человек имеет диагноз приобретенного псориатического артрита.

7. Способ по п. 6, где человек имеет возраст, по меньшей мере, 18 лет.

8. Способ по п. 6, где человеку поставлен диагноз, по меньшей мере, за шесть месяцев до введения антитела.

9. Способ по п. 6, где человеку поставлен диагноз на основе критериев CASPAR.

10. Способ по любому из пп. 1-9, где человек имеет активный артрит.

11. Способ по любому из пп. 1-10, где человек имеет активные псориатические повреждения или историю псориатических повреждений.

12. Способ по любому из пп. 1-11, где человек представляет собой пациента, неадекватно отвечающего на, по меньшей мере, одно небиологическое модифицирующее заболевание антиревматическое лекарственное средство (ʺDMARDʺ) и/или одно одобренное биологическое DMARD.

13. Способ по любому из пп. 1-12, где указанный человек одновременно проходит лечение метотрексатом.

14. Способ по любому из пп. 1-13, где способ включает введение нескольких доз в течение периода лечения, по меньшей мере, 12 недель.

15. Способ по п. 14, где способ включает введение нескольких доз в течение периода лечения, по меньшей мере, 24 недель.

16. Способ по п. 14, где способ включает введение нескольких доз в течение периода лечения, по меньшей мере, 48 недель.

17. Способ по п. 14, где способ включает введение нескольких доз в течение периода лечения, по меньшей мере, 52 недель.

Images