RU2746950C1 - Способ криоконсервации микровезикул плазмы крови - Google Patents
Способ криоконсервации микровезикул плазмы крови Download PDFInfo
- Publication number
- RU2746950C1 RU2746950C1 RU2020131189A RU2020131189A RU2746950C1 RU 2746950 C1 RU2746950 C1 RU 2746950C1 RU 2020131189 A RU2020131189 A RU 2020131189A RU 2020131189 A RU2020131189 A RU 2020131189A RU 2746950 C1 RU2746950 C1 RU 2746950C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- plasma
- microvesicles
- cryopreservation
- dmso
- dextrose
- Prior art date
Links
- 238000005138 cryopreservation Methods 0.000 title claims abstract description 38
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 36
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 58
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 claims abstract description 52
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims abstract description 24
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 22
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 claims abstract description 18
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims abstract description 15
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 claims abstract description 15
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims abstract description 13
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims abstract description 13
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 claims abstract description 11
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 11
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims abstract description 11
- 238000007710 freezing Methods 0.000 claims abstract description 8
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 claims abstract description 7
- 230000008014 freezing Effects 0.000 claims abstract description 7
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical group OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 claims abstract description 6
- ZFGMDIBRIDKWMY-PASTXAENSA-N heparin Chemical compound CC(O)=N[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](COS(O)(=O)=O)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](C(O)=O)O[C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](OS(O)(=O)=O)[C@@H](O[C@@H]3[C@@H](OC(O)[C@H](OS(O)(=O)=O)[C@H]3O)C(O)=O)O[C@@H]2O)CS(O)(=O)=O)[C@H](O)[C@H]1O ZFGMDIBRIDKWMY-PASTXAENSA-N 0.000 claims abstract description 5
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 claims abstract description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 claims description 8
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 3
- 230000007774 longterm Effects 0.000 claims description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 abstract description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 abstract description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 abstract description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- 238000004321 preservation Methods 0.000 abstract 1
- 229960001031 glucose Drugs 0.000 description 15
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- 239000002577 cryoprotective agent Substances 0.000 description 6
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 4
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 4
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 3
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 3
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 3
- 102000009123 Fibrin Human genes 0.000 description 2
- 108010073385 Fibrin Proteins 0.000 description 2
- BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N Fibrin monomer Chemical compound CNC(=O)CNC(=O)CN BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 229950003499 fibrin Drugs 0.000 description 2
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- 239000003507 refrigerant Substances 0.000 description 2
- OSNSWKAZFASRNG-WNFIKIDCSA-N (2s,3r,4s,5s,6r)-6-(hydroxymethyl)oxane-2,3,4,5-tetrol;hydrate Chemical compound O.OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O OSNSWKAZFASRNG-WNFIKIDCSA-N 0.000 description 1
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 210000002583 cell-derived microparticle Anatomy 0.000 description 1
- 239000013065 commercial product Substances 0.000 description 1
- 238000004891 communication Methods 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 230000000779 depleting effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 210000001723 extracellular space Anatomy 0.000 description 1
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 1
- 229960001008 heparin sodium Drugs 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 238000000491 multivariate analysis Methods 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 210000002536 stromal cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 239000000107 tumor biomarker Substances 0.000 description 1
- 210000003954 umbilical cord Anatomy 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N1/00—Preservation of bodies of humans or animals, or parts thereof
- A01N1/10—Preservation of living parts
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Dentistry (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Изобретение относится к медицинской биотехнологии, а именно к способам криоконсервации, и может быть использовано для криоконсервации микровезикул плазмы крови. С этой целью венозную кровь забирают в пробирки с цитратом натрия, добавляют раствор декстрозы и раствор гепарина натрия в соотношении 3,8% цитрата натрия, 3,68 мг декстрозы, 30 ЕД гепарина на 1 мл венозной крови, центрифугируют, затем плазму, обедненную от тромбоцитов, смешивают с ДМСО и фильтрованной эмбриональной телячьей сывороткой (ЭТС) в соотношении 40% ЭТС, 10% ДМСО, 50% плазмы и замораживают в жидком азоте. Способ позволяет повысить качество заморозки микровезикул, увеличить сохранность микровезикул после криозаморозки, снизить расходы и обеспечить доступность необходимых средств для исследования. 1 ил., 1 табл.
Description
Изобретение относится к лабораторной медицине, а именно к способам криоконсервации, и может быть использовано для криоконсервации микровезикул плазмы крови.
Микровезикулы - субклеточные везикулы, размером 150-1000 нм, выделяемые клетками во внеклеточное пространство как в норме, так и при патологии [Mause, S.F. and С.Weber, Microparticles: protagonists of a novel communication network for intercellular information exchange. Circ Res, 2010. 107(9): p.1047-57.]. Интерес к ним обусловлен тем, что предполагается их использование в качестве диагностических маркеров различных заболеваний [D'Souza-Schorey, С.and J.W. Clancy, Tumor-derived microvesicles: shedding light on novel microenvironment modulators and prospective cancer biomarkers. Genes Dev, 2012. 26(12): p. 1287-99.], так как показано, что при наличии патологии, уровень микровезикул в биологических жидкостях возрастает [Chironi, G., et al, Circulating leukocyte-derived microparticles predict subclinical atherosclerosis burden in asymptomatic subjects. Arterioscler Thromb Vase Biol, 2006. 26(12): p. 2775-80.3].
По данным мировой литературы в настоящее время проводится множество исследований микровезикул. Однако работа с микровезикулами достаточно трудоемка и требует большого количества времени, также исследование микровезикул пациентов предполагает сбор значительного количества материала для набора исследуемых групп пациентов. В связи с этим разработка протоколов и методов криоконсервации микровезикул является актуальной задачей.
В настоящее время существуют протоколы по заморозке клеток, они хорошо отработаны. Но микровезикулы более чувствительный объект, нежели клетки, поэтому стандартные протоколы криоконсервации клеток не подходят для криоконсервации микровезикул.
Известен способ криоконсервации микровезикул плазмы крови, заключающийся в том, что производится забор венозной крови в специальные пробирки, содержащие цитрат натрия и декстрозу (пробирки - коммерческий продукт), затем производится серия центрифугирований плазмы, обеднение ее от тромбоцитов и быстрая заморозка нескольких миллилитров полученной обедненной от тромбоцитов плазмы в жидком азоте с возможностью хранения образцов в жидком азоте в течение продолжительного срока [Gelderman, М.Р. and J. Simak, Flow cytometric analysis of cell membrane microparticles. Methods Mol Biol. 2008. 484: p. 79-931.
Недостатком способа является частичная гибель микровезикул по сравнению с исходным материалом, а также выпадение в осадок фибрина после размораживания. Кроме того, в России в стандартных медицинских учреждениях не используют готовые пробирки, предлагаемые исследователями из США, поэтому для проведения исследования их нужно приобретать за рубежом.
Известен способ заморозки микровезикул из культуральной среды, заключающийся в том, что после культивирования ткани в качестве криопротектора используют вещество диметилсульфоксид (ДМСО), при этом исследуют концентрации ДМСО, необходимые для сохранения микровезикул на уровне исходной культуральной среды, а также сравнивают протоколы криоконсервации при различных температурных режимах. Анализ микровезикул производили при помощи проточного цитофлюориметра [Романов Ю.А., Волгина Н.Е., Дугина Т.Н., Кабаева Н.В., Сухих Г.Т., Влияние условий хранения на сохранность микровезикул мультипотентных мезаенхимальных стромальных клеток пупочного канатика человека Клеточные технологии в биологии и медицине, 2019. 1: р. 12-16].
Недостатком способа является то, что в способе не рассматриваются микровезикулы плазмы крови, то есть способ применим к другой культуральной среде.
Технический результат изобретения заключается в увеличении сохранности микровезикул плазмы крови после криозаморозки, снижении расходов, в доступности необходимых средств для исследования.
Указанный технический результат достигается в способе криоконсервации микровезикул плазмы крови, включающем забор венозной крови с добавлением цитрата натрия и декстрозы, центрифугирование с целью обеднения тромбоцитами в режиме 9900g при температуре 10°С в течение 5 минут и быструю заморозку в жидком азоте для длительного хранения, в котором венозную кровь забирают в пробирки с цитратом натрия, добавляют раствор декстрозы и раствор гепарина в соотношении 3,8% цитрата натрия, 3,68 мг декстрозы, 30 ЕД гепарина на 1 мл венозной крови, центрифугируют, затем плазму, обедненную от тромбоцитов, смешивают с ДМСО и фильтрованной эмбриональной телячьей сывороткой (ЭТС) в соотношении: 40% ЭТС, 10% ДМСО, 50% плазмы, замораживают в жидком азоте.
Соотношение 3,8% цитрата натрия, 3,68 мг декстрозы, 30 ЕД гепарина на 1 мл венозной крови определено экспериментально. Могут быть использованы стандартные пробирки с цитратом натрия.
Добавление гепарина в плазму на этапе криконсервации позволяет избежать выпадения в осадок фибрина после разморозки плазмы.
Смешивание плазмы, обедненной от тромбоцитов, с ДМСО и ЭТС в соотношении 40% ЭТС, 10% ДМСО, 50% плазмы позволяет сохранить микровезикулы различных клеточных популяций, в том числе минорных популяций.
Таким образом, основные отличительные признаки заявляемого способа позволяют улучшить качество криоконсервации плазмы крови, повысить сохранность микровезикул после разморозки, а также удешевить способ и сделать его более доступным.
Анализ микровезикул проводили на проточном цитофлюориметре.
Для анализа микровезикул образцы плазмы быстро размораживали на водяной бане при 37°С, центрифугировали ее, проводили серию отмывок специальными буферами (коммерческие реагенты) полученного осадка микровезикул, далее микровезикулы окрашивали антителами и исследовали при помощи проточного цитофлюориметра.
Производилась криоконсервация плазмы доноров, в отсутствии каких-либо криопротекторов, так и присутствии отдельных криопротекторов и их смесей, а также произведено сравнение с нативной свежей плазмой. Исследуемые способы криоконсервации (соотношения реагентов везде одинаковые):
1. Криоконсервация плазмы в отсутствии криопротекторов;
2. Криоконсервация плазмы с добавлением только декстрозы;
3. Криоконсервация плазмы с добавлением только ДМСО;
4. Криоконсервация плазмы с добавлением только ЭТС;
5. Криоконсервация плазмы с добавлением ЭТС и ДМСО;
6. Криоконсервация плазмы с добавлением декстрозы, ДМСО и ЭТС (заявляемый способ);
В табл. 1 представлены результаты сравнения способов криоконсервации. Показано количество событий, собранных в результате анализа содержания микровезикул после разморозки плазмы на проточном цитофлюориметре.
Данные представлены в виде «медиана {нижний квартиль; верхний квартиль}». Достоверность различий между группами: ## - р<0.01 - отличие от способа криоконсервации с добавлением декстрозы, ДМСО и ЭТС (заявляемый способ); && - р<0.01, &&& - р<0.001 - отличие от свежей плазмы.
Сравнение способов криоконсервации плазмы иллюстрируется также фиг 1, где:
П-плазма, Плазма_крио - способ криоконсервации плазмы в отсутствии криопротекторов; П+декстроза - способ криоконсервации плазмы с добавлением только декстрозы; П+ДМСО - способ криоконсервации плазмы с добавлением только ДМСО; П+ЭТС - способ криоконсервации плазмы с добавлением только ЭТС; П+ДМСО+ЭТС - способ криоконсервации плазмы с добавлением ЭТС и ДМСО; П+декстроза+ДМСО+ЭТС - способ криоконсервации плазмы с добавлением декстрозы, ДМСО и ЭТС (заявляемый способ); Плазма_свежая - нативная свежая плазма. Данные представлены в виде «медиана {нижний квартиль; верхний квартиль}». Достоверность различий между группами: ## - р<0.01 -отличие способа криоконсервации с добавлением декстрозы, ДМСО и ЭТС отличие способа криоконсервации с добавлением декстрозы, ДМСО и ЭТС (заявляемый способ); && - р<0.01,&&& - р<0.001 - отличие от свежей плазмы.
Полученные данные были статистически обработаны с помощью программы Graph Prism 8.0. Для сравнение полученных данных использовался многофакторный дисперсионный анализ Anova. Статистически значимыми признавались различия при р<0,05, р<0,01, р<0,001. Эксперименты проводили четыре раза, в каждом эксперименте для каждого способа криоконсервации использовали по 3 повтора.
Выявлено, что заявляемый способ криоконсервации позволяет сохранить популяцию лейкоцитарных микровезикул - минорную популяцию микровезикул плазмы крови, на уровне сопоставимом со свежей нативной плазмой.
Способ осуществляют, например, следующим образом.
Материалы и растворы, необходимые для криоконсервации микровезикул из периферической крови:
1. Декстроза (моногидрат D-глюкозы).
2. Раствор Хенкса без Са2+ и Mg2+ или эквивалентный раствор.
3. Эмбриональная телячья сыворотка (ЭТС).
4. Диметилсульфоксид (ДМСО).
5. Гепарин натрия (раствор для инъекций).
6. Пробирки для забора крови, содержащие 3.8% цитрата натрия или эквивалентные пробирки с содержанием цитрата натрия, достаточным для ингибирования свертывания крови.
7. Мембранные фильтры с диаметром пор 0,2 мкм.
8. Пробирки эппендорф.
9. Криопробирки.
10. Одноразовые наконечники для дозаторов переменного объема до 10 мкл, до 300 мкл, до 1000 мкл.
Необходимое оборудование:
1. Вертикальный ламинарно-потоковый шкаф.
2. Набор механических дозаторов переменного объема.
3. Центрифуга.
4. Холодильник 6+2°С.
5. Жидкий азот и сосуд Дьюара для жидкого азота.
6. Аккумуляторы холода (хладагенты) лабораторные.
Перед криоконсервацией микровезикул необходимо:
1. Сделать стерильный раствор декстрозы в растворе Хенкса без Са2+ и Mg2+ или эквивалентном растворе, профильтровать его через фильтры с диаметром пор не более 0,2 мкм.
2. Инактивировать ЭТС, и профильтровать ее через фильтры с диаметром пор не более 0,2 мкм.
Затем осуществляют криоконсервацию микровезикул.
Это можно делать как в стерильных условия, работая в ламинарно-потоковом шкафу, так и в нестерильных условиях. В обоих случаях необходимо работать с использованием лабораторных хладагентов.
1. Произвести забор крови из локтевой вены в пробирку с голубой крышкой, содержащей 3.8% цитрата натрия или эквивалентную пробирку с содержанием цитрата натрия, достаточным для ингибирования свертывания крови.
2. Пробирки со свежей кровью хранить не более 1 часа при +4°С.
3. В пробирку со свежей кровью добавляют раствор декстрозы, приготовленный в растворе Хенкса без Са2+ и Mg2+ или эквивалентном растворе из расчета 3,68 мг декстрозы на 1 мл периферической крови.
4. Аккуратно перемешивают содержимое пробирки, переворачивая ее несколько раз.
5. Центрифугируют пробирку с периферической кровью и раствором декстрозы при +10°С, 2600g 15 минут (стадия обеднения плазмы от клеточной массы);
6. Переносят плазму, обедненную от клеточной массы в пробирки эппендорф.
7. Добавляют гепарин натрия в пробирки эппендорф с отобранной плазмой из расчета 30 ЕД гепарина натрия на 1 мл плазмы.
8. Центрифугируют пробирки эппендорф с плазмой при +10°С, 9900g 5 минут (стадия обеднения плазмы от тромбоцитов).
9. Маркируют криопробирки, переносят в них плазму, обедненную от тромбоцитов, добавляют ЭТС и ДМСО. Конечный раствор плазмы в криопротекторах должен содержать: 40% ЭТС, 10% ДМСО и 50% плазмы.
10. Аккуратно перемешивают содержимое, переворачивая криопробирку несколько раз.
11. Криопробирки с содержимым быстро замораживают в жидком азоте. Для этого помещают криопробирки в резервуар для хранения в жидком азоте (сосуд Дьюара), хранят до проведения дальнейшего анализа.
Способ позволяет повысить качество заморозки микровезикул, увеличить сохранности микровезикул плазмы крови после криозаморозки, снизить расходы на исследование, обеспечить доступность необходимых средств для исследования.
Список литературы
1. Mause, S.F. and С.Weber, Microparticles: protagonists of a novel communication network for intercellular information exchange. Circ Res, 2010. 107(9): p. 1047-57.
2. D'Souza-Schorey, C. and J.W. Clancy, Tumor-derived micro vesicles: shedding light on novel microenvironment modulators and prospective cancer biomarkers. Genes Dev, 2012. 26(12): p. 1287-99.
3. Chironi, G., et al., Circulating leukocyte-derived microparticles predict subclinical atherosclerosis burden in asymptomatic subjects. Arterioscler Thromb Vase Biol, 2006. 26(12): p. 2775-80.
4. Federici, C, et al., Natural-Killer-Derived Extracellular Vesicles: Immune Sensors and Interactors. Front Immunol, 2020. 11: p. 262.
5. Mikhailova, V.A., et al., Detection of microparticles of leukocytic origin in the peripheral blood in normal pregnancy and preeclampsia. Bull Exp Biol Med, 2014.157(6): p. 751-6.
6. Khalaj, K., et al., Extracellular vesicles from endometriosis patients are characterized by a unique miRNA-lncRNA signature. JCI Insight, 2019. 4(18).
7. Gelderman, M.P. and J. Simak, Flow cytometric analysis of cell membrane microparticles. Methods Mol Biol, 2008. 484: p. 79-93.
8. Романов Ю.А., Волгина Н.Е., Дугина Т.Н., Кабаева Н.В., Сухих Г.Т., Влияние условий хранения на сохранность микровезикул мультипотентных мезаенхимальных стромальных клеток пупочного канатика человека Клеточные технологии в биологии и медицине, 2019. 1: р. 12-16.
Claims (1)
- Способ криоконсервации микровезикул плазмы крови, включающий забор венозной крови с добавлением цитрата натрия и декстрозы, центрифугирование с целью обеднения тромбоцитами в режиме 9900 g при температуре 10°С в течение 5 минут и быструю заморозку в жидком азоте для длительного хранения, отличающийся тем, что венозную кровь забирают в пробирки с цитратом натрия, добавляют раствор декстрозы и раствор гепарина натрия в соотношении 3,8% цитрата натрия, 3,68 мг декстрозы, 30 ЕД гепарина на 1 мл венозной крови центрифугируют, затем плазму, обедненную от тромбоцитов, смешивают с ДМСО и фильтрованной эмбриональной телячьей сывороткой (ЭТС) в соотношении 40% ЭТС, 10% ДМСО, 50% плазмы и замораживают в жидком азоте.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2020131189A RU2746950C1 (ru) | 2020-09-21 | 2020-09-21 | Способ криоконсервации микровезикул плазмы крови |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2020131189A RU2746950C1 (ru) | 2020-09-21 | 2020-09-21 | Способ криоконсервации микровезикул плазмы крови |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2746950C1 true RU2746950C1 (ru) | 2021-04-22 |
Family
ID=75584891
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2020131189A RU2746950C1 (ru) | 2020-09-21 | 2020-09-21 | Способ криоконсервации микровезикул плазмы крови |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2746950C1 (ru) |
-
2020
- 2020-09-21 RU RU2020131189A patent/RU2746950C1/ru active
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| GELDERMAN, M.P, et al, Flow cytometric analysis of cell membrane microparticles. Methods Mol Biol, 2008. 484: p. 79-93. * |
| GELDERMAN, M.P, et al, Flow cytometric analysis of cell membrane microparticles. Methods Mol Biol, 2008. 484: p. 79-93. РОМАНОВ Ю.А., Волгина Н.Е., Дугина Т.Н., Кабаева Н.В., Сухих Г.Т. Влияние условий хранения на сохранность микровезикул мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток пупочного канатика человека Клеточные технологии в биологии и медицине, 2019. 1: р. 12-16. MAUSE, S.F., et al, Microparticles: protagonists of a novel communication network for intercellular information exchange. Circ Res, 2010. 107(9): p. 1047-57. * |
| MAUSE, S.F., et al, Microparticles: protagonists of a novel communication network for intercellular information exchange. Circ Res, 2010. 107(9): p. 1047-57. * |
| РОМАНОВ Ю.А., Волгина Н.Е., Дугина Т.Н., Кабаева Н.В., Сухих Г.Т. Влияние условий хранения на сохранность микровезикул мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток пупочного канатика человека Клеточные технологии в биологии и медицине, 2019. 1: р. 12-16. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Gilmore et al. | Effect of cryoprotectant solutes on water permeability of human spermatozoa | |
| Horan et al. | Fluorescent cell labeling for in vivo and in vitro cell tracking | |
| US9095798B2 (en) | Centrifuge separation method and apparatus using a medium density fluid | |
| US10750739B2 (en) | Stabilization of whole blood samples | |
| WO2012026970A2 (en) | Centrifuge and separation vessel therefore | |
| CN103627638A (zh) | 一种用于裂解红细胞的组合物、红细胞裂解试剂及应用 | |
| US20150328260A1 (en) | Blood cell preparations and related methods (gen 8) | |
| Greening et al. | Preparation of platelet concentrates for research and transfusion purposes | |
| Hubel | Preservation of cells: a practical manual | |
| Sputtek | Cryopreservation of red blood cells and platelets | |
| Chandra et al. | Extended shelf life of random donor platelets stored for 7 days in platelet additive solution at different temperatures | |
| CN105238756A (zh) | 一种脐带血单核细胞的制备方法 | |
| RU2746950C1 (ru) | Способ криоконсервации микровезикул плазмы крови | |
| Beddall et al. | A simple tube adapter to expedite and automate thawing of viably frozen cells | |
| Contreras et al. | Preservation of Human Granulocytes: III. Liquid Preservation Studied by Electronic Sizing | |
| RU2623081C1 (ru) | Способ криоконсервирования тромбоцитов | |
| Scott et al. | Use of liquid patient ascites fluids as a preclinical model for oncolytic virus activity | |
| Thébault et al. | Blood sample processing and banking for functional and molecular analyses | |
| Pegg | Cytology of human bone marrow subjected to prolonged storage at-79 C | |
| Calvert et al. | Optimal sperm selection in the ICSI era | |
| Garcia-Flores et al. | Dissociation of Placental Tissues for Single-Cell Techniques | |
| JP7368678B1 (ja) | Ｃｄ４＋ｔ細胞集団中の特定の細胞亜集団の相対量の測定方法 | |
| TWI782492B (zh) | 一種血液中之微小幹細胞取得方法 | |
| Raval | Basic Instrumentation required for blood sample | |
| Hill et al. | Improved functional recovery of human granulocytes after cryopreservation |