RU2745506C2 - Кодирующие фактор viii варианты с пониженным содержанием cpg, композиции и способы и применение в лечении нарушений гемостаза - Google Patents

Кодирующие фактор viii варианты с пониженным содержанием cpg, композиции и способы и применение в лечении нарушений гемостаза Download PDF

Info

Publication number
RU2745506C2
RU2745506C2 RU2018119710A RU2018119710A RU2745506C2 RU 2745506 C2 RU2745506 C2 RU 2745506C2 RU 2018119710 A RU2018119710 A RU 2018119710A RU 2018119710 A RU2018119710 A RU 2018119710A RU 2745506 C2 RU2745506 C2 RU 2745506C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
aav
nucleic acid
vector
fviii
paragraphs
Prior art date
Application number
RU2018119710A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2018119710A3 (ru
RU2018119710A (ru
Inventor
Хавьер АНГЕЛА
Сам Хсиен-и СЕН
Original Assignee
Спарк Терапьютикс, Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Спарк Терапьютикс, Инк. filed Critical Спарк Терапьютикс, Инк.
Publication of RU2018119710A publication Critical patent/RU2018119710A/ru
Publication of RU2018119710A3 publication Critical patent/RU2018119710A3/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2745506C2 publication Critical patent/RU2745506C2/ru

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/745—Blood coagulation or fibrinolysis factors
    • C07K14/755—Factors VIII, e.g. factor VIII C (AHF), factor VIII Ag (VWF)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/36—Blood coagulation or fibrinolysis factors
    • A61K38/37—Factors VIII
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A61K48/005—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'active' part of the composition delivered, i.e. the nucleic acid delivered
    • A61K48/0066—Manipulation of the nucleic acid to modify its expression pattern, e.g. enhance its duration of expression, achieved by the presence of particular introns in the delivered nucleic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C12N15/86—Viral vectors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C12N15/86—Viral vectors
    • C12N15/864—Parvoviral vectors, e.g. parvovirus, densovirus
    • C12N15/8645—Adeno-associated virus
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/10011—Adenoviridae
    • C12N2710/10311—Mastadenovirus, e.g. human or simian adenoviruses
    • C12N2710/10341—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C12N2710/10342—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector virus or viral particle as vehicle, e.g. encapsulating small organic molecule
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/10011—Adenoviridae
    • C12N2710/10311—Mastadenovirus, e.g. human or simian adenoviruses
    • C12N2710/10341—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C12N2710/10343—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
    • C12N2750/00011—Details
    • C12N2750/14011—Parvoviridae
    • C12N2750/14111—Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
    • C12N2750/14122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
    • C12N2750/00011—Details
    • C12N2750/14011—Parvoviridae
    • C12N2750/14111—Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
    • C12N2750/14141—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
    • C12N2750/00011—Details
    • C12N2750/14011—Parvoviridae
    • C12N2750/14111—Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
    • C12N2750/14141—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C12N2750/14143—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
    • C12N2750/00011—Details
    • C12N2750/14011—Parvoviridae
    • C12N2750/14111—Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
    • C12N2750/14141—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C12N2750/14145—Special targeting system for viral vectors

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой вариант нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG, кодирующих белок FVIII, и способы их применения. Варианты нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG, кодирующие FVIII, более эффективно экспрессируются клетками, секретируются на повышенных уровнях клетками по сравнению с белком фактором VIII дикого типа, демонстрируют повышенную экспрессию и/или активность по сравнению с белком фактором VIII дикого типа или более эффективно упаковываются в вирусные векторы. 12 н. и 93 з.п. ф-лы, 15 ил., 6 табл., 10 пр.

Description

Родственные заявки
Данная патентная заявка испрашивает приоритет патентной заявки США № 62/249001, поданной 30 октября 2015 года, заявки № 62/331872, поданной 4 мая 2016 года, заявки № 62/349532, поданной 13 июня 2016 года, и заявки № 62/357874, поданной 1 июля 2016 года, все эти заявки явным образом включены в настоящее описание посредством ссылки во всей своей полноте.
Область техники, к которой относится Настоящее Изобретение
Настоящее изобретение относится к областям получения рекомбинантного фактора свертывания крови и лечения медицинских расстройств, связанных с нарушенным гемостазом. Более конкретно, настоящее изобретение относится к вариантам (последовательностям) нуклеиновых кислот, кодирующим белок Фактор VIII (FVIII), при этом варианты необязательно обеспечивают повышенную транскрипцию и/или экспрессию, и/или активность, чем у белков FVIII дикого типа.
Введение
По всему описанию цитируются несколько публикаций и патентных документов, чтобы описать состояние уровня техники, к которому относится настоящее изобретение. Каждая из этих ссылок включена в настоящее описание посредством ссылки, как если бы она была изложена полностью.
Гемофилия представляет собой Х-сцепленное нарушение свертываемости крови, имеющееся у 1 из 5000 мужчин по всему миру. Терапия, направленная на повышение уровней факторов свертывания крови чуть более 1% от нормы, связана с существенным улучшением фенотипа тяжелого заболевания. Недавние клинические испытания AAV-опосредованного переноса гена для гемофилии B (HB) продемонстрировали стойкую долгосрочную экспрессию терапевтических уровней фактора IX (FIX), но установили, что доза AAV-вектора может быть ограничена вследствие анти-AAV иммунных ответов на капсид AAV. Хотя эти данные относятся к гемофилии В, 80% всей гемофилии обусловлены дефицитом FVIII, гемофилией A (HA).
Современное лечение этого заболевания состоит в заместительной белковой терапии, которая требует частых инфузий белка Фактора VIII. Имеется насущная потребность в обеспечении устойчивых терапевтических уровней экспрессии фактора VIII, чтобы пациенты больше не нуждались в такой частой терапии белками. Действительно, непрерывная экспрессия фактора VIII могла бы предотвратить эпизоды кровотечения и может обеспечить возникновение иммунной толерантности к белку.
В кратком изложении, генная терапия HA представляет 3 отдельные проблемы: (1) внутренние свойства человеческого FVIII (hFVIII) затрудняют экспрессию по сравнению с другими белками аналогичного размера (2) большие размеры кДНК FVIII и сиквенс-специфическое действие коррелируют с реаранжировками, которые препятствуют выработке AAV, и (3) высокие показатели образования антител против FVIII (ингибиторов) в ответ на терапию белками, что происходит у 25-30% пациентов с тяжелой (<1% FVIII) HA.
Краткое изложение
Согласно настоящему изобретению, предоставлены варианты нуклеиновых кислот с пониженным содержанием динуклеотида цитозин-гуанин (CpG), кодирующие белок Фактор VIII (FVIII). Такие варианты нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG отличаются от нуклеиновых кислот дикого типа, кодирующих FVIII, и могут кодировать, например, человеческий белок FVIII, необязательно отсутствующий полностью или частично в B-домене FVIII. Такие варианты нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG включают варианты, которые при переносе в клетки демонстрируют повышенную экспрессию (напр., 1-5-кратно повышенную экспрессию) по сравнению с кодон-оптимизированными нуклеиновыми кислотами FVIII, такими как FVIII-CO3 (SEQ ID NO:21), приводя к увеличенной секреции белка FVIII и вследствие этого повышенной активности.
В некоторых вариантах осуществления варианты нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG, которые кодируют FVIII, с делецией или без делеции, целиком или частично, B-домена FVIII, могут предусматривать повышенную экспрессию FVIII, повышенную выработку белка FVIII у млекопитающих, а также обеспечивают повышенную эффективность в контексте переноса генов посредством повышения уровней циркулирующего белка FVIII, и достижения гемостаза для благоприятных терапевтических эффектов.
В некоторых вариантах осуществления вариант нуклеиновой кислоты, кодирующей FVIII, имеет пониженное содержание CpG по сравнению с нуклеиновыми кислотами дикого типа, кодирующими FVIII. В некоторых вариантах осуществления вариант нуклеиновой кислоты имеет по меньшей мере на 10 CpG меньше, чем нуклеиновые кислоты дикого типа, кодирующие FVIII (SEQ ID NO:19). В некоторых вариантах осуществления вариант нуклеиновой кислоты имеет не более 4 CpG; имеет не более 3 CpG; имеет не более 2 CpG; или имеет не более 1 CpG. В некоторых вариантах осуществления вариант нуклеиновой кислоты имеет не более 4 CpG; 3 CpG; 2 CpG; или 1 CpG. В некоторых вариантах осуществления вариант нуклеиновой кислоты не имеет CpG.
В некоторых вариантах осуществления вариант нуклеиновой кислоты, кодирующей FVIII, имеет пониженное содержание CpG по сравнению с нуклеиновыми кислотами дикого типа, кодирующими FVIII, и такие варианты нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG имеют идентичность последовательностей с любой из SEQ ID NOs:1-18 90% или более. В некоторых вариантах осуществления варианты нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG имеют идентичность последовательностей с любой из SEQ ID NO:1-18 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% или более. В некоторых вариантах осуществления варианты нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG имеют 90-95% идентичность последовательностей с любой из SEQ ID NO:1-18. В некоторых вариантах осуществления варианты нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG имеют 95%-100% идентичность последовательностей с любой из SEQ ID NO:1-18. В некоторых вариантах осуществления варианты нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG, кодирующих FVIII, изложены в любой из SEQ ID NO:1-18.
В некоторых вариантах осуществления варианты нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG отличаются от варианта V3 FVIII (SEQ ID NO:20) и/или отличаются от варианта CO3 FVIII (SEQ ID NO:21).
В некоторых вариантах осуществления варианты нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG, кодирующих белок FVIII, обеспечивают более высокую экспрессию и/или демонстрируют превосходную биологическую активность по сравнению с FVIII дикого типа или по сравнению с FVIII дикого типа, содержащего делецию B-домена (напр., что определено по уровням в плазме или по анализу свертывания крови или по уменьшению кровотечения в анализе FVIII или модели дефицита FVIII).
В некоторых вариантах осуществления варианты нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG, кодирующих белок FVIII, по меньшей мере на 75% идентичны нуклеиновым кислотам FVIII человека дикого типа или нуклеиновым кислотам FVIII человека дикого типа, содержащих делецию B-домена. В некоторых вариантах осуществления варианты нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG, кодирующих белок FVIII, приблизительно на 75-95% идентичны (напр., приблизительно на 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95% идентичны) нуклеиновым кислотам FVIII человека дикого типа или нуклеиновым кислотам FVIII человека дикого типа, содержащим делецию B-домена.
В некоторых вариантах осуществления варианты нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG, кодирующих белок FVIII, принадлежат млекопитающему, такому как человек. Такие варианты нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG млекопитающего, кодирующих белок FVIII, включают человеческие формы, которые могут быть основаны на человеческом FVIII дикого типа или человеческом FVIII дикого типа, содержащем делецию B-домена.
Согласно настоящему изобретению, также предоставлены векторы и экспрессионные векторы, которые содержат варианты нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG, кодирующих белок FVIII, согласно настоящему описанию. В конкретных вариантах осуществления вектор или экспрессионный вектор представляет собой аденовирус-ассоциированный вирусный (AAV) вектор, пертовирусный вектор, аденовирусный вектор, плазмиду или лентивирусный вектор. В некоторых вариантах осуществления вектор AAV содержит серотип AAV или псевдотип AAV, такие как AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, Rh10, Rh74 или AAV-2i8 AAV. В некоторых вариантах осуществления экспрессионный вектор включает любую из любой SEQ ID No:1-18, или содержит SEQ ID NO: 23 или 24.
В некоторых вариантах осуществления контролирующий экспрессию элемент, представляет собой конститутивный или регулируемый контролирующий элемент, или тканеспецифический контролирующий экспрессию элемент, или промотор. В некоторых вариантах осуществления контролирующий экспрессию элемент, представляет собой элемент, который обеспечивает экспрессию в печени. В некоторых вариантах осуществления контролирующий экспрессию элемент содержит промотор TTR или мутантный промотор TTR, такой как SEQ ID NO:22. В дополнительных конкретных аспектах контролирующий экспрессию элемент содержит промотор, приведенный в PCT публикации WO 2016/168728 (USSN 62/148696; 62/202133 и 62/212634), которые включены в настоящее описание посредством ссылки во всей своей полноте.
Согласно настоящему изобретению, дополнительно предоставлены вирусные векторы, которые содержат вариант нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей белок FVIII, или векторы или экспрессионные векторы, содержащие вариант нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей белок FVIII. В конкретных вариантах осуществления вирусный вектор представляет собой вектор AAV, пертовирусный вектор, аденовирусный вектор, плазмиду или лентивирусный вектор.
В некоторых вариантах осуществления вектор AAV представляет собой серотип AAV или псевдотип AAV, включая серотип капсида AAV, отличающийся от серотипа ITR. В дополнительных конкретных аспектах вектор AAV содержит последовательность капсида VP1, VP2 и/или VP3, имеющую идентичность последовательностей 75% или более (напр., 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,1%, 99,2%, 99,3%, 99,4%, 99,5%, 99,6%, 99,7%, 99,8% и т.д.) с любым из AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, Rh10, Rh74 или AAV-2i8 серотипов AAV.
Экспрессионные векторы могут включать дополнительные компоненты или элементы. В конкретных вариантах осуществления экспрессионный вектор, такой как вектор AAV, дополнительно содержит интрон, контролирующий экспрессию элемент, один или более инвертированных концевых повторов AAV (ITR) (напр., любой из: серотипов AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, Rh10, Rh74 или AAV-2i8 AAV или их комбинацию), полинуклеотидную последовательность-филлер и/или поли-А-сигнал. В некоторых вариантах осуществления интрон находится внутри или фланкирует вариант нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII, и/или контролирующий экспрессию элемент, функционально связан с вариантом нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII, и/или ITR AAV фланкирует 5'- или 3'-конец варианта нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII, и/или наполняющая полинуклеотидная последовательность фланкирует 5'- или 3'-конец варианта нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII.
В конкретных вариантах осуществления контролирующий экспрессию элемент представляет собой конститутивный или регулируемый контролирующий элемент, или тканеспецифический контролирующий экспрессию элемент или промотор. В некоторых вариантах осуществления контролирующий экспрессию элемент представляет собой элемент, который обеспечивает экспрессию в печени (напр., промотор TTR или мутантный промотор TTR).
Согласно настоящему изобретению, дополнительно предоставлены клетки-хозяева, которые содержат варианты нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG, кодирующих белок FVIII, согласно настоящему описанию. В конкретных вариантах осуществления клетка-хозяин содержит вариант нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей белок FVIII, или экспрессионный вектор, содержащий вариант нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей белок FVIII. В некоторых вариантах осуществления такие клетки-хозяева продуцируют белок FVIII, кодируемый вариантами нуклеиновых кислот, при этом полученный белок FVIII извлекают. Такой белок FVIII, продуцируемый клетками, необязательно выделенный и/или очищенный, можно вводить субъекту.
Согласно настоящему изобретению, дополнительно предоставлены композиции, содержащие вариант нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII, векторы и экспрессионные векторы, приведенные в настоящем описании. В конкретных вариантах осуществления фармацевтические композиции содержат вектор, экспрессионный вектор или вирусный вектор или вектор AAV, в биологически совместимом носителе или эксципиенте. Такие фармацевтические композиции необязательно включают пустой капсид AAV (напр., не содержащий геном вектора, содержащий вариант нуклеиновой кислоты, кодирующей FVIII). В дополнительных конкретных вариантах осуществления вариант нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей белок FVIII, векторы, экспрессионные векторы или вирусные векторы или векторы AAV заключены в липосому или смешаны с фосфолипидами или мицеллами.
Согласно настоящему изобретению, дополнительно предоставлены способы доставки или переноса варианта нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей белок FVIII, в клетку млекопитающего. В одном варианте осуществления способ включает введение или контакт варианта нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII, вектора, содержащего вариант нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей белок FVIII, экспрессионного вектора, содержащего вариант нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей белок FVIII, или вирусного вектора или вектора AAV, содержащего вариант нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей белок FVIII, в клетку млекопитающего, тем самым доставляя или перенося в клетку млекопитающего последовательность нуклеиновых кислот. С помощью таких способов вариант нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей белок FVIII, вводят в клетку млекопитающего в культуре или у субъекта (напр., больного).
Способы согласно настоящему изобретению также включают лечение субъектов-млекопитающих (напр., больных), таких как люди, нуждающихся в FVIII (у человека вырабатывается недостаточное количество белка FVIII или дефектный или аберрантный белок FVIII). В одном варианте осуществления способ лечения млекопитающего, нуждающихся в FVIII, включает: предоставление варианта нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII, или вектора, содержащего вариант нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII; или экспрессионного вектора, содержащего вариант нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII, или вирусного вектора или вектора AAV, содержащего вариант нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII; и введение некоторого количества варианта нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII, или вектора, содержащего вариант нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII, или экспрессионного вектора, содержащего вариант нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII, или вирусного вектора или вектора AAV, содержащего вариант нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII, субъекту-млекопитающему таким образом, чтобы экспрессировать у субъекта-млекопитающего FVIII, кодируемый вариантом нуклеиновой кислоты.
В другом варианте осуществления способ лечения нарушения гемостаза у нуждающегося в этом больного (напр., у больного вырабатывается недостаточное количество белка FVIII или дефектный или аберрантный белок FVIII) включает введение больному терапевтически эффективного количества варианта нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII, или вектора, содержащего вариант нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII, или экспрессионного вектора, содержащего вариант нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII, или вирусного вектора или вектора AAV, содержащего вариант нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII, в биологически совместимых носителе.
В некоторых вариантах осуществления способов согласно настоящему изобретению FVIII экспрессируется на уровнях, оказывающих благотворное или терапевтическое действие на млекопитающее; и/или FVIII экспрессируется в клетке, ткани или органе млекопитающего. Такие варианты осуществления включают введение варианта нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII, в ткань или орган, такой как печень. Такие варианты осуществления также включают введение варианта нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII, в секреторную клетку. Такие варианты осуществления дополнительно включают введение варианта нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII, в эндокринную клетку или эндотелиальную клетку. Такие варианты осуществления дополнительно включают введение варианта нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII, в гепатоцит, синусоидальную эндотелиальную клетку, мегакариоцит, тромбоцит или гемопоэтическую стволовую клетку.
Субъекты (напр., больной) и млекопитающие (напр., люди), подходящие для введения (напр., доставки) варианта нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII, или вектора, содержащего вариант нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII, или экспрессионного вектора, содержащего вариант нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII, или вирусного вектора или вектора AAV, содержащего вариант нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII, включают субъекты, имеющие такое расстройство, как: гемофилия A, болезнь фон Виллебранда и кровотечения, связанные с травмой, повреждением, тромбозом, тромбоцитопенией, инсультом, коагулопатией, диссеминированным внутрисосудистым свертыванием (ДВС) или заболевание с чрезмерной антикоагулянтной терапией, или субъекты с риском его наличия.
Субъекты (напр., больной) и млекопитающие (напр., люди), подходящие для введения (напр., доставки) варианта нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII, или вектора, содержащего вариант нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII, или экспрессионного вектора, содержащего вариант нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII, или вирусного вектора или вектора AAV, содержащего вариант нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII, включают субъекты серонегативные на AAV антитела, а также субъекты, у которых вырабатываются антитела к AAV, или субъекты с таким риском. Такие субъекты (напр., больной) и млекопитающие (напр., люди) могут быть серонегативными или серопозитивными на серотип AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, AAV-Rh10 или AAV-Rh74.
Вследствие этого, композиции и способы согласно настоящему изобретению дополнительно включают введение указанному млекопитающему или указанному больному пустого капсида AAV. В конкретных вариантах осуществления млекопитающему или больному дополнительно вводят пустой капсид серотипа AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, AAV-12, AAV-Rh10 и/или AAV-Rh74.
Способы введения (напр., доставки) согласно настоящему изобретению включают любой режим контакта или доставки, ex vivo или in vivo. В конкретных вариантах осуществления введение (напр., доставка) происходит: внутривенно, внутриартериально, внутримышечно, подкожно, внутрь полости, интубационно или через катетер.
Изобретение также относится к способам тестирования вариантов нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG, кодирующих FVIII, в моделях небольших и крупных животных, которые толерантны к человеческому FVIII, с целью оценки вводимых доз и мониторинга иммуногенности вариантов. Использование животных моделей обеспечивает параметр, который делает возможным оценку людей, получающих на текущий момент заместительную белковую терапию hFVIII-BDD без доказанного иммунного ответа анти-hFVIII, у которых, вероятно, разовьется иммунный ответ на такие варианты.
Описание фигур
На фигуре 1 показаны уровни человеческого FVIII (hFVIII) через 24 ч после гидродинамической инъекции в хвостовую вену (HTV) 50 мкг плазмиды для 18 различных клонов (X01-X18, соответствующих SEQ ID No:1-18, соответственно) и FVIII-CO3 (SEQ ID NO:21).
На фигурах 2A-2C показаны уровни FVIII у мышей с гемофилией A/CD4-/- после введения вектора AAV FVIII (A) CO3 (SEQ ID NO:21), X09 (SEQ ID NO:9), X12 (SEQ ID NO:12) и X16 (SEQ ID NO:16); (B) CO3 (SEQ ID NO:21), X01 (SEQ ID NO:1) и X11 (SEQ ID NO:11); или (C) CO3 (SEQ ID NO:21), X07 (SEQ ID NO:7) и X10 (SEQ ID NO:10).
На фигурах 3A-3B показаны уровни антигена hFVIII в нг/мл (B) или % общего антигена (C) в плазме мышей NOD/SCID после внутривенного введения носителя (круг), либо 4×1010 (квадрат), 8×1010 (треугольник), либо 1,6×1011 вг/мышь (перевернутый треугольник) AAV-SPK-8005-hFVIII на протяжении курса 87 дней. Линии представляют средние значения hFVIII±СО в каждой когорте. Уровни человеческого FVIII в плазме оценивали посредством ELISA, и нг/мл FVIII переводили в нормальные уровни FVIII в %, предполагая, что 150 нг/мл эквивалентно 100% активности.
На фигуре 3C показаны уровни D-димеров в плазме мышей NOD/SCID после внутривенного введения носителя, либо 4×1010, 8×1010, либо 1,6×1011 вг/мышь AAV-SPK-8005-hFVIII, как проиллюстрировано, слева направо в каждый момент времени, ось x. Столбцы представляют средние значения±СО мышей в каждой когорте. Уровни D-димера оценивали посредством ELISA.
На фигуре 4 показан дизайн исследования NHP.
На фигурах 5A-5D показаны уровни антигена hFVIII у NHP после внутривенного введения либо 2×1012 (A), 5×1012 (B), либо 1×1013 вг/кг (C) AAV-SPK-8005. Линии представляют отдельных животных. Уровни человеческого FVIII в плазме оценивали посредством ELISA и представляли собой повторные измерения, полученные при серии кровотечений, у одной и той же группы животных в ходе исследования (n=2-3 животных на когорту). Уровни человеческого FVIII, измеренные у обработанных носителем животных, показаны в открытых квадратах на всех трех графиках.
ε=Разработка ингибиторов против FVIII.
На фигурах 6A-6C показаны уровни ALT у NHP при 2×1012 (A), 5×1012 (B) или 1×1013 вг/кг (C) AAV-SPK-8005.
На фигурах 7A-7C показаны уровни D-димера у NHP. Концентрация антигена D-димера в плазме NHP после внутривенного введения либо 2×1012 (A), 5×1012 (B), либо 1×1013 вг/кг (C) AAV-SPK-8005. Пунктирная линия показывает 500 нг/мл, верхний предел нормы D-димеров у людей.
На фигуре 8 показаны сводные данные уровней FVIII при трех дозах AAV-SPK-8005.
На фигурах 9A-9D показаны уровни hFVIII в плазме яванских макак после внутривенного введения либо 2×1012 (A), 6×1012 (B), либо 2×1013 (вг/кг) (C) AAV-SPK-8011(капсид LK03)-hFVIII. Линии представляют отдельных животных. Уровни hFVIII в плазме оценивали посредством ELISA и представляли собой повторные измерения, полученные при серии кровотечений, у той же группы животных в ходе исследования (n=3 животных на когорту). Уровни человеческого FVIII, измеренные у обработанных носителем животных, показаны в открытых квадратах (n=2). ε=Время, когда выработка ингибиторов против FVIII было обнаружено у каждого отдельного животного.
На фигуре 10 показано сравнение уровней FVIII, достигнутых с AAV-SPK-8011 (капсид LK03)-hFVIII для описанных уровней FVIII, доставленных с помощью векторов AAV с капсидами AAV5 и AAV8. AAV5:http://www.biomarin.com/pdf/BioMarin_R&D_Day_4_20_2016.pdf, slide 16. AAV8: McIntosh J et al. Blood 2013; 121(17):3335-44.
На фигуре 11 показано биораспределение в тканях AAV-SPK (SEQ ID NO:28) и AAV-LK03 (SEQ ID NO:27) у приматов, не являющихся человеком, преимущественно в почках, селезенке и печени (3ий столбец для каждой ткани).
На фигуре 12 показана экспрессия FVIII в печени и селезенке после системного введения мышам AAV-SPK-8005.
На фигуре 13 показана эффективность трансдукции AAV-капсида LK03, проанализированная in vitro. Ось х, яванский макак (левый вертикальный столбец), человек (правый вертикальный столбец).
На фигурах 14A-14B показана концентрация hFIX в плазме у кроликов после введения AAV. Кролики получили внутривенную инъекцию векторов hFIX AAV-SPK или AAV-LK03 в дозах, составивших (A) 1×1012 вг/кг (малая доза, n=4) или (B) 1×1013 вг/кг (высокая доза, n=3-5). Уровни человеческого FIX между группами сравнивали с применением двухвыборочного критерия Манна-Уитни. Никаких существенных различий не наблюдалось. Животные 5 и 15 в когортах малых доз были исключены из анализа вследствие неправильной инъекции. Животные 9 и 10 также были исключены из графика вследствие выработки у них нейтрализующих антител против человеческого FIX.
На фигурах 15A-15B представлена динамика образования антител к человеческому FIX (анти-FIX). Кролики получили внутривенную инъекцию векторов hFIX AAV-SPK или AAV-LK03 в дозах, составивших (A) 1×1012 вг/кг (малая доза, n=4) или (B) 1×1013 вг/кг (высокая доза, n=3-5). Данные показаны для каждого отдельного животного.
Подробное описание настоящего раскрытия
В настоящем описании раскрыты варианты нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG, кодирующих FVIII, отличающиеся от нуклеиновых кислот дикого типа, которые кодируют FVIII. Такие варианты нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG, кодирующих FVIII, могут демонстрировать в клетках и/или у животных повышенные уровни экспрессии, которые, в свою очередь, могут обеспечивать повышенные уровни белка FVIII in vivo. Также раскрыты варианты нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующее FVIII, которые могут обеспечивать большую биологическую активность in vitro и/или in vivo. Иллюстративный вариант нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII, может демонстрировать одно или более из следующего: 1) повышенную экспрессию в клетках и/или у животных; 2) повышенную активность; и 3) терапевтическое действие при более низких дозах AAV, чем hFVIII дикого типа.
Термины «полинуклеотид» и «нуклеиновая кислота» используются в настоящем описании взаимозаменяемо для ссылки на все формы нуклеиновой кислоты, олигонуклеотидов, включая дезоксирибонуклеиновую кислоту (ДНК) и рибонуклеиновую кислоту (РНК). Полинуклеотиды включают геномную ДНК, кДНК и антисмысловую ДНК, и сплайсированную или несплайсированную мРНК, рНК, тРНК и ингибирующую ДНК или РНК (RNAi, напр., малую или короткую шпилечную (кш)РНК, микроРНК (миРНК), малую или короткую интерферирующую (si)RNA, РНК транс-спллайсинга или антисмысловую РНК). Полинуклеотиды включают природные, синтетические и целенаправленно модифицированные или измененные полинуклеотиды (напр., вариантную нуклеиновую кислоту). Полинуклеотиды могут быть одиночными, двойными или тройными, линейными или кольцевыми и могут иметь любую длину. В обсуждаемых полинуклеотидах последовательность или структура конкретного полинуклеотида может быть описана в настоящем описании в соответствии с соглашением о предоставлении последовательности в направлении от 5' к 3'.
В рамках изобретения, термины «модифицировать» или «вариант» и их грамматические варианты означают, что нуклеиновая кислота, полипептид или их субпоследовательность отличается от эталонной последовательности. Модифицированные и вариантные последовательности вследствие этого могут иметь по существу такую же, большую или меньшую экспрессию, активность или функцию, чем эталонная последовательность, но по меньшей мере сохраняют активность или функцию эталонной последовательности. Конкретным примером модификации или варианта является вариант нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII.
Вариант «нуклеиновой кислоты» или «полинуклеотида» относится к модифицированной последовательности, которая была генетически изменена по сравнению с диким типом. Последовательность может быть генетически модифицирована без изменения последовательности кодируемого белка. В качестве альтернативы, последовательность может быть генетически модифицирована, чтобы кодировать вариантный белок. Вариант нуклеиновой кислоты или полинуклеотида может также относиться к комбинированной последовательности, которая была кодон-модифицирована, чтобы кодировать белок, который по-прежнему сохраняет по меньшей мере частичную идентичность последовательности с эталонной последовательностью, такой как последовательность белка дикого типа, а также была кодон-модифицирована для кодирования вариантного белка. Например, некоторые кодоны такого варианта нуклеиновой кислоты будут изменены без изменения аминокислот кодируемого ими белка (FVIII), и некоторые кодоны варианта нуклеиновой кислоты будут изменены, что, в свою очередь, изменит аминокислоты кодируемого ими белка (FVIII).
Термин «вариантный Фактор VIII (FVIII)» относится к модифицированному FVIII, который был генетически изменен по сравнению с немодифицированным FVIII дикого типа (напр., SEQ ID NO:19) или FVIII-BDD. Такой вариант может называться «вариант нуклеиновой кислоты, кодирующей Фактор VIII (FVIII)». Конкретным примером варианта является нуклеиновая кислота с пониженным содержанием CpG, кодирующая FVIII или белок FVIII-BDD. Термин «вариант» не должен появляться в каждом примере ссылки, на нуклеиновую кислоту с пониженным содержанием CpG, кодирующую FVIII. Подобным образом, термин «нуклеиновая кислота с пониженным содержанием CpG» или т.п. может не включать термин «вариант», но предполагается, что ссылка на «нуклеиновую кислоту с пониженным содержанием CpG» включает варианты на генетическом уровне.
Конструкты FVIII, имеющие пониженное содержание CpG, могут демонстрировать улучшения по сравнению с FVIII дикого типа или FVIII-BDD, в которых содержание CpG не было понижено, и делают это без модификаций нуклеиновой кислоты, которые приводят к изменениям аминокислот в кодированном FVIII или белке FVIII-BDD. При сравнении экспрессии, если нуклеиновая кислота с пониженным содержанием CpG кодирует белок FVIII, который сохраняет B-домен, целесообразно сравнить ее с экспрессией FVIII дикого типа; и если нуклеиновая кислота с пониженным содержанием CpG кодирует белок FVIII без В-домена, ее сравнивают с экспрессией FVIII дикого типа, который также имеет делецию B-домена.
«Вариантный Фактор VIII (FVIII)» может также означать модифицированный белок FVIII, так что модифицированный белок имеет изменение аминокислотного состава по сравнению с FVIII дикого типа. Опять же, при сравнении активности и/или стабильности, если кодируемый вариантный белок FVIII сохраняет B-домен, целесообразно сравнить его с FVIII дикого типа; и если кодированный вариантный белок FVIII имеет делецию B-домена, его сравнивают с FVIII дикого типа, который также имеет делецию B-домена.
Вариантный FVIII может содержать участок B-домена. Таким образом, FVIII-BDD содержит участок B-домена. Как правило, в FVIII-BDD наибольшая часть B-домена удалена.
Вариантный FVIII может содержать «SQ» последовательность, изложенную как SFSQNPPVLKRHQR (SEQ ID NO:29). Как правило, такой вариантный FVIII с SQ (FVIII/SQ) имеет BDD, причем, напр., по меньшей мере весь или часть BD удалена. Вариантный FVIII, такой как FVIII-BDD, может иметь всю или часть «SQ» последовательности, т.е. всю или часть SEQ ID NO:29. Таким образом, например, вариантный FVIII-BDD с SQ последовательностью (SFSQNPPVLKRHQR, SEQ ID NO:29) может иметь всю или только участок аминокислотной последовательности SFSQNPPVLKRHQR. Например, FVIII-BDD может иметь 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 или 13 аминокислотных остатков содержащейся SFSQNPPVLKRHQR. Таким образом, SFSQNPPVLKRHQR с 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 или 13 внутренними делециями, а также 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 или 13 делециями на амино- или карбоксильном конце включены в вариантные FVIII белки, приведенные в настоящем описании.
«Полипептиды», «белки» и «пептиды», кодируемые «последовательностями нуклеиновых кислот» или «полинуклеотидами», включают полноразмерные нативные (FVIII) последовательности, как и в случае природных белков дикого типа, а также функциональные субпоследовательности, модифицированные формы или варианты последовательности, при условии, что субпоследовательность, модифицированная форма или вариант сохраняют некоторую степень функциональности природного полноразмерного белка. Например, нуклеиновая кислота с пониженным содержанием CpG, кодирующая белок FVIII, может иметь делецию B-домена, согласно настоящему описанию, и сохраняет функцию свертывания крови. В способах и применении согласно настоящему изобретению такие полипептиды, белки и пептиды, кодируемые последовательностями нуклеиновых кислот, могут быть, но не обязательно идентичны эндогенному белку, который является дефектным или экспрессия которого недостаточна или дефицитная у получающего лечение млекопитающего.
Неограничивающие примеры модификации включают замещение одного или более нуклеотида или аминокислоты (напр., 1-3, 3-5, 5-10, 10-15, 15-20, 20-25, 25-30, 30-40, 40-50, 50-100, 100-150, 150-200, 200-250, 250-500, 500-750, 750-850 или более нуклеотидов или остатков). Примером модификации нуклеиновой кислоты является уменьшение CpG. В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота с пониженным содержанием CpG, кодирующая FVIII, такой как человеческий белок FVIII, имеет 10 или меньше CpG по сравнению с последовательностью дикого типа, кодирующей человеческий фактор FVIII; или имеет 5 или меньше CpG по сравнению с последовательностью дикого типа, кодирующей человеческий фактор FVIII; или имеет не более 5 CpG в нуклеиновой кислоте с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII.
Примером модификации аминокислот является консервативное замещение или делеция аминокислот (напр., субпоследовательностей или фрагментов) эталонной последовательности, напр. FVIII, такого как FVIII с делецией B-домена. В конкретных вариантах осуществления модифицированная или вариантная последовательность сохраняет по меньшей мере часть функции или активности немодифицированной последовательности.
Все известные или неизвестные формы нуклеиновой кислоты млекопитающих и немлекопитающих, кодирующей белки, включая другие формы нуклеиновой кислоты млекопитающих с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII и белки FVIII, раскрытые в настоящем описании, включены явным образом. Таким образом, изобретение включает гены и белки от немлекопитающих, млекопитающих, не являющихся людьми, и людей, гены и белки которых функционируют по существу таким же образом, что и гены и белки FVIII (напр., человеческого), описанные в настоящем описании.
Термин «вектор» относится к небольшой молекуле нуклеиновой кислоты-носителю, плазмиде, вирусу (напр., вектору AAV) или другому носителю, которым можно манипулировать посредством вставки или встраивания нуклеиновой кислоты. Такие векторы можно использовать для манипуляции с генами (т.е. «клонирующие векторы»), для введения/переноса в клетки полинуклеотидов и для транскрипции или трансляции в клетках вставленного полинуклеотида. «Экспрессионный вектор» представляет собой специальный вектор, который содержит ген или последовательность нуклеиновых кислот с необходимыми регуляторными областями, необходимыми для экспрессии в клетке-хозяине. Последовательность нуклеиновой кислоты вектора обычно содержит по меньшей мере точку начала репликации для размножения в клетке и необязательно дополнительные элементы, такие как гетерологичная полинуклеотидная последовательность, контролирующий экспрессию элемент (напр., промотор, энхансер), интрон, ITR(s), селектируемый маркер (напр., антибиотикорезистентность), сигнал полиаденилирования.
Вирусный вектор получают из или на основе одного или нескольких элементов нуклеиновой кислоты, которые содержат вирусный геном. Конкретные вирусные векторы включают лентивирусные, псевдотипированные лентивирусные и парвовирусные векторы, такие как аденоассоциированные вирусные (AAV) векторы. Также предоставлены векторы, содержащие нуклеиновую кислоту с пониженным содержанием CpG, кодирующую FVIII.
Термин «рекомбинантный», в качестве модификатора вектора, такого как рекомбинантный вирусный, напр., ленти- или парвовирусный (напр., AAV) векторы, а также модификатор последовательностей, таких как рекомбинантные полинуклеотиды и полипептиды, означает, что композициями манипулировали (т.е., конструировали) таким способом, который обычно не встречается в природе. Конкретным примером рекомбинантного вектора, такого как вектор AAV, может быть пример, когда полинуклеотид, который обычно не присутствует в геноме вируса дикого типа (например, AAV), вводят в вирусный геном. Примером рекомбинантного полинуклеотида может быть пример, когда нуклеиновую кислоту с пониженным содержанием CpG, кодирующую белок FVIII, клонируют в вектор, с или без 5', 3' и/или интронных областей, где ген обычно ассоциирован в вирусном (например, AAV) геноме. Хотя термин «рекомбинантный» не всегда используется в настоящем описании со ссылкой на векторы, такие как вирусный и AAV векторы, а также последовательности, такие как полинуклеотиды, рекомбинантные формы, включая полинуклеотиды, они включены явным образом, несмотря на любое такое упущение.
Рекомбинантный вирусный «вектор» или «AAV вектор» получен из генома дикого типа вируса, такого как AAV, посредством применения молекулярных методов для удаления генома дикого типа из вируса (напр., AAV), и замены ненативной нуклеиновой кислотой, такой как нуклеиновая кислота с пониженным содержанием CpG, кодирующая FVIII. Как правило, для AAV последовательности одного или обоих инвертированных концевых повторов (ITR) генома AAV сохранены в AAV векторе. «Рекомбинантный» вирусный вектор (напр., AAV) отличается от вирусного (напр., AAV) генома, поскольку весь или часть вирусного генома были заменены ненативной последовательностью по отношению к вирусной (напр., AAV) геномной нуклеиновой кислоте, такой как нуклеиновая кислота с пониженным содержанием CpG, кодирующая FVIII. Вот почему встраивание ненативной последовательности определяет вирусный вектор (напр., AAV) как «рекомбинантный» вектор, который в случае AAV может называться «rAAV вектор».
Последовательность рекомбинантного вектора (напр., ленти-, парво-, AAV) может быть упакованной - в настоящем документе называется «частица» для последующего инфицирования (трансдукции) клетки, ex vivo, in vitro или in vivo. Когда рекомбинантную векторную последовательность инкапсулируют или упаковывают в AAV частицу, частица также может называться «rAAV». Такие частицы содержат белки, которые инкапсулируют или упаковывают векторный геном. Конкретные примеры включают белки оболочки вируса, а в случае AAV, белки капсида.
Векторный «геном» относится к участку последовательности рекомбинантной плазмиды, которая в конечном счете упакована или инкапсидирована с образованием вирусной (напр., AAV) частицы. В случаях, когда для конструирования или получения рекомбинантных векторов используют рекомбинантные плазмиды, векторный геном не содержит участок «плазмиды», который не соответствует векторной геномной последовательности рекомбинантной плазмиды. Эта невекторная часть генома рекомбинантной плазмиды называется «остов плазмиды», который является важным для клонирования и амплификации плазмиды, процесса, который необходим для размножения и получения рекомбинантного вируса, но сам не упакован или инкапсулирован в вирусные (напр., AAV) частицы. Таким образом, векторный «геном» относится к нуклеиновой кислоте, которую упаковывают или инкапсулируют с помощью вируса (напр., AAV).
В настоящем описании «трансген» используется для удобного обращения к нуклеиновой кислоте, которая предназначена или была введена в клетку или организм. Трансгены содержат любую нуклеиновую кислоту, такую как ген, которая кодирует полипептид или белок (напр., нуклеиновую кислоту с пониженным содержанием CpG, кодирующую Фактор VIII).
В клетке, имеющей трансген, трансген был введен/перенесен с помощью вектора, такого как AAV, «трансдукции» или «трансфекции» клетки. Термины «трансдукция» и «трансфекция» относиться к введению в клетку или организм-хозяин молекулы, такой как нуклеиновая кислота. Трансген может быть интегрирован или не интегрирован в геномную нуклеиновую кислоту клетки-реципиента. Если введенная нуклеиновая кислота становится интегрированной в нуклеиновую кислоту (геномную ДНК) клетки или организма-реципиента, она может стабильно сохраняться в этой клетке или организме и далее передаваться или унаследоваться дочерними клетками или организмами клетки или организма-реципиента. В итоге, введенная нуклеиновая кислота может существовать в клетке-реципиенте или организме-хозяине внехромосомно, или только временно.
«Трансдуцированная клетка» представляет собой клетку, в которую был введен трансген. Соответственно, «трансдуцированная» клетка (напр., у млекопитающих, такая как клетка или клетка ткани или органа), означает генетическое изменение в клетке после встраивания экзогенной молекулы, например, нуклеиновой кислоты (напр., трансгена) в клетку. Таким образом, «трансдуцированная» клетка представляет собой клетку или ее дочернюю клетку, в которую была введена экзогенная нуклеиновая кислота. Клетка (клетки) могут воспроизводиться, а введенный белок экспрессироваться, или нуклеиновая кислота транскрибироваться. Для применения и способов генной терапии трансдуцированная клетка должна быть в субъекте.
«Контролирующий экспрессию элемент» относится к последовательности (последовательностям) нуклеиновых кислот, которые влияют на экспрессию функционально связанной нуклеиновой кислоты. Контролирующие элементы, включая контролирующие экспрессию элементы, согласно настоящему описанию, такие как промоторы и энхансеры, векторные последовательности, включая векторы AAV, могут включать один или более «контролирующих экспрессию элементов». Как правило, такие элементы включают для содействия надлежащей транскрипции гетерологичных полинуклеотидов и, при необходимости, трансляции (напр., промотора, энхансера, сигнала сплайсинга для интронов, сохранения правильной рамки считывания гена для обеспечения трансляции внутри рамки мРНК и стоп-кодонов и т.д.). Такие элементы, как правило, действуют в cis, называются «действующий в цис-положении» элемент, но также могут действовать в транс-положении.
Контроль экспрессии может быть на уровне транскрипции, трансляции, сплайсинга, стабильности транскрипта и т.д. Как правило, контролирующий экспрессию элемент, который модулирует транскрипцию, расположен рядом с 5'-концом (т.е., «перед 5'-концом») транскрибированной нуклеиновой кислоты. Контролирующие экспрессию элементы могут также располагаться на 3'-конце (т.е., «после 3'-конца») транскрибированной последовательности или внутри транскрипта (напр., в интроне). Контролирующие экспрессию элементы могут располагаться рядом или на расстоянии от транскрибированной последовательности (напр., 1-10, 10-25, 25-50, 50-100, 100-500 или более нуклеотидов от полинуклеотида), даже на значительном удалении. Тем не менее, вследствие ограничений длины некоторых векторов, таких как векторы AAV, Контролирующие экспрессию элементы будут, как правило, находиться в пределах 1-1000 нуклеотидов от транскрибированной нуклеиновой кислоты.
Функционально, элемент (напр., промотор) по меньшей мере частично контролирует экспрессию функционально связанной нуклеиновой кислоты таким образом, что элемент модулирует транскрипцию нуклеиновой кислоты и, при необходимости, трансляцию транскрипта. Конкретным примером контролирующего экспрессию элемента, является промотор, который обычно расположен на 5'-конце транскрибированной последовательности, напр., нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII. Как правило, промотор увеличивает количество, экспрессируемое из функционально связанной нуклеиновой кислоты по сравнению с количеством, экспрессируемым в отсутствие промотора.
В рамках изобретения, «энхансер» может относиться к последовательности, которая расположена рядом с гетерологичным полинуклеотидом. Как правило, энхансерные элементы, располагаются перед 5'-концом элемента промотора, но также функционируют и могут располагаться после 3'-конца или в пределах последовательности (напр., нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII). Следовательно, энхансерный элемент может располагаться на 100 пар оснований, 200 пар оснований или 300 или более пар оснований перед 5'-концом или после 3'-конца нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII. Как правило, энхансерные элементы увеличивают экспрессию функционально связанной нуклеиновой кислоты выше экспрессии, обеспеченной промоторным элементом.
Экспрессионный конструкт может содержать регуляторные элементы, которые служат для управления экспрессией в конкретном типе клеток или тканей. Контролирующие экспрессию элементы (напр., промоторы) включают элементы, активные в конкретном типе клеток или тканей, именуемые в настоящем документе «тканеспецифические контролирующие экспрессию элементы/промоторы». Тканеспецифические Контролирующие экспрессию элементы как правило, активны в конкретной клетке или ткани (напр., печени). Контролирующие экспрессию элементы как правило, активны в конкретных клетках, тканях или органах, поскольку они распознаются белками-активаторами транскрипции, или другими регуляторами транскрипции, которые уникальны для конкретного типа клетки, ткани или органа. Такие регуляторные элементы известны специалистам в данной области (см., напр., Sambrook et al. (1989) и Ausubel et al. (1992)).
Встраивание тканеспецифических регуляторных элементов в экспрессионные конструкты согласно настоящему изобретению обеспечивает по меньшей мере частичный тропизм к ткани для экспрессии нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII. Примерами промоторов, которые активны в печени, наряду с другими являются промотор TTR, промотор человеческий альфа 1-антитрипсин (hAAT); альбумин, Miyatake, et al. J. Virol., 71:5124-32 (1997); основной промотор вируса гепатита В, Sandig, et al., Gene Ther. 3:1002-9 (1996); альфа-фетопротеин (AFP), Arbuthnot, et al., Hum. Gene. Ther., 7:1503-14 (1996)]. Примером энхансера, активного в печени, является аполипопротеин E (apoE) HCR-1 и HCR-2 (Allan et al., J. Biol. Chem., 272:29113-19 (1997)).
Контролирующие экспрессию элементы также включают общераспространенные или неизбирательные промоторы/энхансеры, которые способны управлять экспрессией полинуклеотидов во многих различных типах клеток. Такие элементы включают, без ограничения, последовательности немедленно-раннего промотора/энхансера цитомегаловируса (CMV), последовательности промотора/энхансера вируса саркомы Рауса (RSV) и промоторы/энхансеры других вирусов, активные во многих типах клеток млекопитающих, или синтетические элементы, которые не представлены в природе (см., напр., Boshart et al, Cell, 41:521-530 (1985)), промотор SV40, промотор дигидрофолатредуктазы, промотор цитоплазматического β-актина и промотор фосфоглицеринкиназы (PGK).
Контролирующие экспрессию элементы также могут обеспечивать экспрессию способом, который является регулируемым, то есть сигнал или стимулы увеличивает или уменьшает экспрессию функционально связанного гетерологичного полинуклеотида. Регулируемый элемент, который увеличивает экспрессию функционально связанного полинуклеотида в ответ на сигнал или стимулы, также называется «индуцибельный элемент» (т.е., индуцируемый сигналом). Конкретные примеры включают, без ограничения, индуцируемый гормоном (напр., стероидом) промотор. Как правило, величина увеличения или уменьшения, получаемая с помощью таких элементов, пропорциональна количеству присутствующих сигналов или стимулов; чем больше количество сигналов или стимулов, тем больше увеличение или уменьшение экспрессии. Конкретные неограничивающие примеры включают промотор индуцируемого цинком металлотионина овец (MT); промотор индуцируемого стероидными гормонами вируса рака молочных желез мышей (MMTV); систему промоторов T7 полимеразы (WO 98/10088); репрессируемую тетрациклином систему (Gossen, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:5547-5551 (1992)); индуцируемую тетрациклином систему (Gossen, et al., Science. 268:1766-1769 (1995); см. также Harvey, et al., Curr. Opin. Chem. Biol. 2:512-518 (1998)); индуцируемую RU486 систему (Wang, et al., Nat. Biotech. 15:239-243 (1997) и Wang, et al., Gene Ther. 4:432-441 (1997)]; и индуцируемую рапамицином систему (Magari, et al., J. Clin. Invest. 100:2865-2872 (1997); Rivera, et al., Nat. Medicine. 2:1028-1032 (1996)). Другими регулируемыми контролирующими элементами, которые можно использовать в этом контексте, являются элементы, которые регулируются конкретным физиологическим состоянием, напр., температурой, острой фазой, развитием.
Контролирующие экспрессию элементы также включают нативный элемент (элементы) для гетерологичного полинуклеотида. Нативный контролирующий элемент (напр., промотор) при необходимости можно использовать, чтобы экспрессия гетерологичного полинуклеотида имитировала бы нативную экспрессию. Нативный элемент можно использовать, когда экспрессию гетерологичного полинуклеотида нужно регулировать временно или в процессе развития, тканеспецифическим образом, или в ответ на специфические транскрипционные стимулы. Также можно использовать другие нативные контролирующие экспрессию элементы, такие как интроны, сайты полиаденилирования или консенсусные последовательности Козак.
Термин «функционально связанная» означает, что регуляторные последовательности, необходимые для экспрессии кодирующей последовательности, помещены в соответствующие положения относительно кодирующей последовательности, чтобы влиять на экспрессию кодирующей последовательности. Это же определение иногда применяется для расположения кодирующих последовательностей и контролирующих транскрипцию элементов, (например, промоторов, усилителей и терминальных элементов) в экспрессионном векторе. Это определение также иногда применяется к расположению последовательностей нуклеиновых кислот первой и второй молекулы нуклеиновой кислоты, при этом генерируется молекула гибридной нуклеиновой кислоты.
В примере контролирующего экспрессию элемента в функциональной связи с нуклеиновой кислотой эта взаимное расположение такое, что контрольный элемент модулирует экспрессию нуклеиновой кислоты. Более конкретно, например, две функционально связанные последовательности ДНК означают, что две ДНК расположены (цис или транс) с таким взаимным расположением, что по меньшей мере одна из последовательностей ДНК способна оказывать физиологическое воздействие на другую последовательность.
Соответственно, дополнительные элементы для векторов включают, без ограничений, контролирующий экспрессию элемент (напр., промотор/энхансер), сигнал терминации транскрипции или стоп-кодон, 5' или 3' нетранслируемые области (напр., последовательности полиаденилирования (полиA)), которые фланкируют последовательность, например, одну или более копий AAV последовательности ITR, или интрон.
Кроме того, элементы включают, например, филлерную или спейсерную полинуклеотидные последовательности, например, для улучшения упаковки и уменьшения присутствия загрязняющей нуклеиновой кислоты. Как правило, принимают вставки ДНК, имеющей диапазон размеров, который обычно составляет от примерно 4 до примерно 5,2 т.п.о. или немного более. Таким образом, для упаковки AAV вектора в вирусную частицу для более коротких последовательностей приемлемо включение спейсера или филлера для корректировки длины до почти или нормального размера последовательности вирусного генома. В различных вариантах осуществления филлерная/спейсерная последовательность нуклеиновых кислот представляет собой нетранслируемый (не кодирующий белок) сегмент нуклеиновой кислоты. Для последовательности нуклеиновых кислот менее чем 4.7 т.п.о. филлерная или спейсерная полинуклеотидная последовательность имеет длину, которая при объединении с последовательностью (напр., вставке в вектор) имеет общую длину между приблизительно 3,0 и 5,5 т.п.о., или между приблизительно 4,0-5,0 т.п.о., или между приблизительно 4,3-4,8 т.п.о.
Интрон также может функционировать в качестве филлерной или спейсерной полинуклеотидной последовательности с целью достижения длины для упаковки AAV вектора в вирусную частицу. Интроны и фрагменты интронов, которые функционируют в качестве филлерной или спейсерной полинуклеотидной последовательности, также могут усиливать экспрессию.
Фраза «нарушение гемостаза» относится к кровоточащим расстройствам, таким как гемофилия A, гемофилия А у больных с ингибиторными антителами, дефицит факторов свертывания крови, VII, VIII, IX и X, XI, V, XII, II, фактора фон Виллебрандта, сочетанный дефицит FV/FVIII, дефицит витамин К-эпоксид-редуктазы C1, дефицит гамма-карбоксилазы; кровотечения, связанные с травмой, повреждением, тромбозом, тромбоцитопенией, инсультом, коагулопатией, диссеминированным внутрисосудистым свертыванием (ДВС); чрезмерное угнетение свертывания, связанное с гепарином, низкомолекулярным гепарином, пентасахаридом, варфарином, низкомолекулярными антитромботическими средствами (т.е. ингибиторами FXa); и тромбоцитарным расстройствам, таким как синдром Бернара-Сулье, тромбастения Гланцмана и дефицит пула тромбоцитов.
Термин «выделенный» при использовании в качестве модификатора композиции означает, что человек получает композиции вручную или отделяет их полностью или по меньшей мере частично от их естественной среды in vivo. Обычно выделенные композиции по существу не содержат один или более материал, с которыми они обычно связаны в природе, например, один или более белок, нуклеиновую кислоту, липид, углевод, клеточную мембрану.
Со ссылкой на нуклеиновые кислоты согласно настоящему изобретению, термин «выделенный» относится к молекуле нуклеиновой кислоты, которая отделена от одной или более последовательности, к которой она непосредственно прилежит (в 5'- и 3'-направлениях) в подходящем геноме (геномная ДНК) организма, из которого она происходит. Например, «выделенная нуклеиновая кислота» может содержать молекулу ДНК или кДНК, вставленную в вектор, такой как плазмида или вирусный вектор, или интегрированную в ДНК прокариот или эукариот.
В отношении молекул РНК согласно настоящему изобретению, термин «выделенный» прежде всего относится к молекуле РНК, кодируемой выделенной молекулой ДНК по определению выше. В качестве альтернативы, термин может относиться к молекуле РНК, которая была в достаточной степени отделена от молекул РНК, с которыми она была бы связана в ее естественном состоянии (т.е., в клетках или тканях), так что она существует в «по существу чистой» форме (термин «по существу чистая» определен ниже).
В отношении белка в настоящем описании иногда используют термин «выделенный белок» или «выделенный и очищенный белок». Этот термин в первую очередь относится к белку, полученному посредством экспрессии молекулы выделенной нуклеиновой кислоты. В качестве альтернативы, этот термин может относиться к белку, который в достаточной степени отделен от других белков, с которыми он был бы естественно связан, так чтобы существовать в «по существу чистой» форме.
Термин «выделенный» не исключает комбинаций, полученных человеком вручную, например, последовательность рекомбинантного вектора (напр., rAAV) или вирусную частицу, которая упаковывает или инкапсулирует векторный геном и фармацевтическую готовую форму. Термин «выделенный» также не исключает альтернативные физические формы композиции, такие как гибриды/химеры, мультимеры/олигомеры, модификации (напр., фосфорилирование, гликозилирование, липидизацию) или производные формы, или формы, экспрессируемые в клетках-хозяевах, полученных вручную человеком.
Термин «по существу чистый» относится к препарату, содержащему по меньшей мере 50-60% по массе исследуемого соединения (напр., нуклеиновой кислоты, олигонуклеотида, белка и т.д.). Препарат может содержать по меньшей мере 75% по массе, или приблизительно 90-99% по массе исследуемого соединения. Чистота измеряется способами, подходящими для исследуемого соединения (напр. хроматографическими способами, электрофорезом на геле агарозы или на полиакриламидном геле, анализом методом ВЭЖХ и т.п.).
Фраза «по существу состоящая из» при ссылке на конкретную нуклеотидную последовательность или аминокислотную последовательность означает последовательность, имеющую свойства данной SEQ ID NO. Например, при использовании в отношении аминокислотной последовательности фраза включает в себя последовательность как таковую и молекулярные модификации, которые не влияют на основные и новые характеристики последовательности.
Термин «олигонуклеотид» в рамках изобретения относится к праймерам и зондам, и определяется как молекула нуклеиновой кислоты, содержащая два или более рибо- или дезоксирибонуклеотидов, например, более трех. Точный размер олигонуклеотида будет зависеть от различных факторов и от конкретного применения, для которого используется олигонуклеотид.
Термин «зонд» в рамках изобретения относится к олигонуклеотиду, полинуклеотиду или нуклеиновой кислоте, РНК или ДНК, независимо от того, являются ли они природными в виде очищенного посредством расщепления рестрикционным ферментом или получены синтетически, которые способны к ренатурации или специфической гибридизации с нуклеиновой кислотой с последовательностями, комплементарными зонду. Зонд может быть одноцепочечным или двухцепочечным. Точная длина зонда будет зависеть от многих факторов, включая температуру, источник зонда и способ применения. Например, для применения в диагностике, в зависимости от сложности целевой последовательности, олигонуклеотидный зонд, как правило, содержит 15-25 или более нуклеотидов, хотя он может содержать меньше нуклеотидов.
Зонды в настоящем изобретении выбирают так, чтобы они были «по существу» комплементарны различным цепям конкретной последовательности целевой нуклеиновой кислоты. Это означает, что зонды должны быть достаточно комплементарными, чтобы допускать «специфичную гибридизацию» или ренатурацию с их соответствующими целевыми нитями в соответствии с набором заранее определенных условий. Вследствие этого, последовательность зонда не должна отражать точную комплементарную последовательность мишени. Например, фрагмент некомплементарного нуклеотида может быть прикреплен к 5'- или 3'-концу зонда, причем остальная часть последовательности зонда является комплементарной целевой цепи. В качестве альтернативы, некомплементарные основания или более длинные последовательности могут быть вставлены в зонд, при условии, что последовательность зонда имеет достаточную комплементарность с последовательностью нуклеиновой кислоты-мишени для ренатурации конкретно с ней.
Термин «специфически гибридизированный» относится к ассоциации между двумя молекулами одноцепочечной нуклеиновой кислоты достаточно комплементарной последовательности, чтобы сделать возможной такую гибридизацию в заранее определенных условиях, обычно используемых в данной области (иногда именуемый «по существу комплементарной»). В частности, термин относится к гибридизации олигонуклеотида с по существу комплементарной последовательностью, содержащейся в одноцепочечной молекуле ДНК или РНК согласно настоящему изобретению, для существенного исключения гибридизации олигонуклеотида с одноцепочечными нуклеиновыми кислотами не комплементарной последовательности.
Термин «праймер» в рамках изобретения относится к олигонуклеотиду, РНК или ДНК, одноцепочечному или двухцепочечному, либо полученному из биологической системы, полученному посредством расщепления рестрикционным ферментом или полученному синтетически, который при помещении в надлежащую среду способен действовать функционально в качестве инициатора зависимого от матрицы синтеза нуклеиновой кислоты. При презентировании с подходящей матрицей нуклеиновой кислоты, подходящими предшественниками нуклеозидтрифосфата нуклеиновых кислот, ферментом полимеразы, подходящими кофакторами и такими условиями, как подходящая температура и рН, праймер может быть продлен на своем 3'-конце путем добавления нуклеотидов посредством действия полимеразы или подобной активности с получением продукта удлинения праймера.
Праймер может варьировать по длине в зависимости от конкретных условий и требований варианта применения. Например, при применении в диагностике олигонуклеотидный праймер имеет в длину, как правило, 15-25 или более нуклеотидов. Праймер должен иметь достаточную комплементарность с требуемой матрицей, чтобы запускать синтез требуемого продукта удлинения, то есть допускать ренатурацию с требуемой матричной нитью таким образом, чтобы обеспечить 3'-гидроксильный фрагмент праймера в подходящем смежном расположении для использования при инициировании синтеза полимеразой или аналогичным ферментом. Не обязательно, чтобы праймерная последовательность являлась точно комплементарной требуемому шаблону. Например, не комплементарная нуклеотидная последовательность может быть присоединена к 5'-концу иного комплементарного праймера. В качестве альтернативы, в олигонуклеотидную праймерную последовательность можно вставить некомплементарные основания, обеспечивая, чтобы праймерная последовательность была достаточно комплементарной последовательности требуемой матричной цепи для функционального обеспечения комплекса матрица-праймер для синтеза продукта удлинения.
Термин «идентичность», «гомологичность» и их грамматические варианты означают, что два или более эталонных фрагмента являются одинаковыми, когда они представляют собой «выравненные» последовательности. Таким образом, с помощью примера, когда две полипептидные последовательности идентичны, они имеют одинаковую аминокислотную последовательность, по меньшей мере в эталонной области или участке. Когда две полинуклеотидные последовательности идентичны, они имеют одинаковую полинуклеотидную последовательность, по меньшей мере в эталонной области или участке. Идентичность может быть на протяжении определенной зоны (области или домена) последовательности. «Зона» или «область» идентичности относится к участку двух или более эталонных фрагмента, которые являются одинаковыми. Таким образом, когда последовательности белков или нуклеиновых кислот идентичны на протяжении одной или более зон или областей последовательности, они имеют общую идентичность в пределах этой области. «Выравненная» последовательность относится к последовательности множественных полинуклеотидов или белков (аминокислот), часто содержащих коррекции для недостающих или дополнительных оснований или аминокислот (пробелов) по сравнению с эталонной последовательностью.
Идентичность может распространяться на всю длину или часть последовательности. В некоторых вариантах осуществления длина последовательности, имеющей одинаковый процент идентичности, составляет 2, 3, 4, 5 или более смежных нуклеиновых кислот или аминокислот, напр., 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, и т.д. Смежных нуклеиновых кислот или аминокислот. В дополнительных вариантах осуществления длина последовательности, имеющей одинаковую идентичность, составляет 21 или более смежных нуклеиновых кислот или аминокислот, напр., 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, и т.д. Смежных нуклеиновых кислот или аминокислот. В дополнительных вариантах осуществления длина последовательности имеющей одинаковую идентичность, составляет 41 или более смежных нуклеиновых кислот или аминокислот, напр.42, 43, 44, 45, 45, 47, 48, 49, 50, и т.д., смежных нуклеиновых кислот или аминокислот. В дополнительных вариантах осуществления длина последовательности, имеющей одинаковую идентичность, составляет 50 или более смежных нуклеиновых кислот или аминокислот, напр., 50-55, 55-60, 60-65, 65-70, 70-75, 75-80, 80-85, 85-90, 90-95, 95-100, 100-150, 150-200, 200-250, 250-300, 300-500, 500-1000 и т.д. Смежных нуклеиновых кислот или аминокислот.
Согласно настоящему описанию, варианты нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG, кодирующих FVIII, будут отличаться от дикого типа, но могут демонстрировать идентичность последовательностей с белком FVIII дикого типа с B-доменом или без него. В вариантах нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG, кодирующих FVIII, на уровне нуклеотидной последовательности, нуклеиновая кислота с пониженным содержанием CpG, кодирующая FVIII, как правило, будет по меньшей мере приблизительно на 70% идентична, более типично, приблизительно на 75% идентична, еще более типично, приблизительно на 80%-85% идентична кодирующей FVIII нуклеиновой кислоте дикого типа. Таким образом, например, нуклеиновая кислота с пониженным содержанием CpG, кодирующая FVIII, может иметь 75%-85% идентичность с кодирующим FVIII геном дикого типа, или друг другу, т.е., X01 и X02, X03 и X04 и т.д., согласно настоящему описанию.
На уровне аминокислотной последовательности, вариант, такой как вариантный белок FVIII, будет по меньшей мере приблизительно на 70% идентичен, более типично приблизительно на 75% идентичен, или на 80% идентичен, еще более типично приблизительно на 85% идентичен или идентичен на 90% или более. В других вариантах осуществления вариант, такой как вариантный белок FVIII, имеет идентичность по меньшей мере 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более с эталонной последовательностью, напр., белок FVIII дикого типа с В-доменом или без него.
Для определения идентичности, если FVIII (нуклеиновая кислота с пониженным содержанием CpG, кодирующая FVIII) сохраняет B-домен, целесообразно сравнить идентичность с FVIII дикого типа. Если FVIII (нуклеиновая кислота с пониженным содержанием CpG, кодирующая FVIII) имеет делецию B-домена, целесообразно сравнивать идентичность с FVIII дикого типа, который также имеет делецию B-домена.
Термины «гомологичный» или «гомологичность» означают, что два или более эталонных фрагмента имеют общую по меньшей мере частичную идентичность на протяжении заданной области или участка. «Зоны, области или домены» гомологичности или идентичности означают, что участок двух или более эталонных фрагментов имеют общую гомологичность или являются одинаковыми. Таким образом, когда две последовательности идентичны на протяжении одной или более областей последовательности, они имеют общую идентичность в данных областях. «По существу гомологичность» означает, что молекула структурно или функционально консервативна, так что она имеет или, как предполагается, имеет по меньшей мере частичную структуру или функцию одной или нескольких структур или функций (например, биологической функции или активности) эталонной молекулы или релевантной/соответствующей области или части эталонной молекулы, с которой она имеет гомологию.
Степень идентичности (гомологичности) или «процент идентичности» между двумя последовательностями может быть установлена с применением компьютерной программы и/или математического алгоритма. Для целей настоящего изобретения сравнение последовательностей нуклеиновых кислот осуществляется с использованием пакета GCG Wisconsin Package версии 9.1, доступного в Genetics Computer Group в Madison, Wisconsin. Для удобства параметры по умолчанию (штраф за создание гэпа=12, штраф за сокращение гэпа=4), указанные в этой программе, предназначены для использования в данной заявке для сравнения идентичности последовательностей. В качестве альтернативы, программа Blastn 2.0, предоставленная Национальным центром биотехнологической информации (найденная в мировой сети по адресу ncbi.nlm.nih.gov/blast/; Altschul et al., 1990, J Mol Biol 215:403-410), использующая выравнивание с гэпами с параметрами по умолчанию, может использоваться для определения уровня идентичности и схожести между последовательностями нуклеиновых кислот и аминокислотными последовательностями. Для сравнения полипептидных последовательностей алгоритм BLASTP, как правило, используют в комбинации с матрицей замен, такой как PAM100, PAM 250, BLOSUM 62 или BLOSUM 50. Программы сравнения последовательностей FASTA (напр., FASTA2 и FASTA3) и SSEARCH также используют для количественной оценки степени идентичности (Pearson et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:2444 (1988); Pearson, Methods Mol Biol. 132:185 (2000); и Smith et al., J. Mol. Biol. 147:195 (1981)). Были также разработаны программы для количественного определения структурного сходства белков с использованием топологического картирования Делоне. (Bostick et al., Biochem Biophys Res Commun. 304:320 (2003)).
Молекулы нуклеиновой кислоты, экспрессионные векторы (напр., векторные геномы), плазмиды, включая варианты нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG, кодирующих FVIII, согласно настоящему изобретению могут быть получены посредством применения методов технологии рекомбинантной ДНК. Доступность информации о нуклеотидной последовательности позволяет получать выделенные молекулы нуклеиновой кислоты изобретения различными способами. Например, варианты нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG, кодирующих FVIII, могут быть получены с использованием разнообразного стандартного клонирования, технологии рекомбинантной ДНК, посредством экспрессии клеток или методик трансляции in vitro и химического синтеза. Чистота полинуклеотидов может быть определена посредством секвенирования, гель-электрофореза и т.п. Например, нуклеиновые кислоты могут быть выделены с использованием методик гибридизации или скрининга компьютерной базы данных. Такие методики включают, без ограничения: (1) гибридизацию библиотек геномной ДНК или кДНК с зондами для обнаружения гомологичных нуклеотидных последовательностей; (2) скрининг антител для обнаружения полипептидов, имеющих общие структурные свойства, например, с применением экспрессионной библиотеки; (3) полимеразную цепную реакцию (ПЦР) на геномной ДНК или кДНК с применением праймеров, способных к ренатурации с исследуемой последовательностью нуклеиновых кислот; (4) компьютерный поиск баз данных последовательностей для соответствующих последовательностей; и (5) дифференциальный скрининг библиотеки вычитаемых нуклеиновых кислот.
Нуклеиновые кислоты согласно изобретению можно сохранять в виде ДНК в любом удобном клонирующем векторе. В одном варианте осуществления клоны сохраняют в плазмиде клонирования/экспрессионном векторе, таком как pBluescript (Stratagene, La Jolla, CA), который размножается в подходящей клетке-хозяине E. coli. В качестве альтернативы, нуклеиновые кислоты можно сохранять в векторе, подходящем для экспрессии в клетках млекопитающих. В случаях, когда на функцию свертывания влияет посттрансляционная модификация, молекула нуклеиновой кислоты может быть экспрессирована в клетках млекопитающих.
Варианты нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG, кодирующих FVIII, согласно настоящему изобретению, включают кДНК, геномную ДНК, РНК и их фрагменты, которые могут быть одно- или двухцепочечными. Таким образом, это изобретение относится к олигонуклеотидам (смысловым или антисмысловым цепям ДНК или РНК), имеющим последовательности, допускающие гибридизацию по меньшей мере с одной последовательностью нуклеиновой кислоты согласно настоящему изобретению. Такие олигонуклеотиды пригодны в качестве зондов для определения экспрессии FVIII.
С удаленным B-доменом, вариант нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII, согласно настоящему изобретению, необязательно имеющий замещения, делеции или добавления аминокислот, может быть получен с помощью множества путей в соответствии с известными способами. Белок может быть выделен из соответствующих источников, например, трансформированных бактериальных или животных культивируемых клеток или тканей, которые экспрессируют FVIII, с помощью иммуноаффинной очистки.
Доступность вариантов нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG, кодирующих FVIII, делает возможным получение FVIII с применением способов экспрессии in vitro, известных в данной области. Например, кДНК или ген может быть клонирован в подходящий in vitro транскрипционный вектор, такой как pSP64 или pSP65 для транскрипции in vitro, с последующей трансляцией в бесклеточной системе в подходящей системе трансляции в бесклеточной системе, такой как зародыши пшеницы или лизат ретикулоцитов кролика. Транскрипционные и трансляционные системы in vitro поставляются, напр., Promega Biotech, Madison, Wisconsin или BRL, Rockville, Maryland.
В качестве альтернативы, более крупные количества FVIII могут быть получены путем экспрессии в подходящей прокариотической или эукариотической экспрессирующей системе. Например, вариант нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII, например, может быть вставлен в плазмидный вектор, приспособленный для экспрессии в бактериальной клетке, такой как E. Coli, или в клеточной линии млекопитающих, таких как почка новорожденного хомяка (BHK), CHO или клетки Hela. В качестве альтернативы, могут быть получены маркированные белки слияния, содержащие FVIII. Такие FVIII-маркированные белки слияния кодируются частью или всей молекулой ДНК, лигированной в корректной рамке считывания кодонов с нуклеотидной последовательностью, кодирующей участок или всю требуемую полипептидную метку, которая вставляется в плазмидный вектор, приспособленный для экспрессии в бактериальной клетке, такой как E. coli, или эукариотической клетке, такой как, без ограничения, дрожжевые клетки и клетки млекопитающих.
Векторы, такие как векторы, описанные в настоящем описании, необязательно содержат регуляторные элементы, необходимые для экспрессии ДНК в клетке-хозяине, расположенные таким образом, чтобы обеспечить экспрессию кодируемого белка в клетке-хозяине. Такие регуляторные элементы, необходимые для экспрессии, включают, без ограничения, промоторные последовательности, энхансерные последовательности и инициирующие транскрипцию последовательности, согласно настоящему описанию, и известные специалисту в данной области.
FVIII, кодируемый вариантом нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, полученный посредством экспрессии генов в рекомбинантной прокариотической или эукариотической системе, может быть очищен согласно способам, известным в данной области. В варианте осуществления можно использовать коммерчески доступную систему экспрессии/секреции, посредством которой рекомбинантный белок экспрессируют и затем секретируют из клетки-хозяина для легкой очистки от окружающей среды. Если векторы экспрессии/секреции не используются, альтернативный подход включает очищение рекомбинантного белка путем аффинной сепарации, например, посредством иммунологического взаимодействия с антителами, которые специфично связываются с рекомбинантным белком, или с помощью колонки для никель-хелатной хроматографии для выделения рекомбинантных белков, меченных 6-8 гистидиновыми остатками на их N-конце или C-конце. Альтернативные метки могут включать FLAG эпитоп, GST или эпитоп гемагглютинина. Такие способы наиболее часто применяются квалифицированными практиками.
Белки FVIII, полученные вышеуказанными способами, можно анализировать в соответствии со стандартными процедурами. Например, такие белки можно оценить на измененные свойства свертывания в соответствии с известными способами.
Соответственно, изобретение также предоставляет способы получения полипептида (как раскрыто), при этом способ включает экспрессию из нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид (обычно нуклеиновой кислоты). Этого можно удобно добиться путем культивирования клетки-хозяина, содержащей такой вектор, в соответствующих условиях, которые вызывают или делают возможной выработку полипептида. Полипептиды также могут быть получены в системах in vitro.
Способы и применение согласно настоящему изобретению включают доставку (трансдукцию) нуклеиновой кислоты (трансгена) в клетки-хозяева, включая делящиеся и/или неделящиеся клетки. Кроме того, в способе доставки, введения или предоставления белка нуждающемуся в этом субъекту, в качестве способа лечения, используются нуклеиновые кислоты, рекомбинантный вектор (напр., rAAV), способы, применение и фармацевтические готовые формы согласно настоящему изобретению. Таким образом, транскрибируют нуклеиновую кислоту, и у субъекта можно получить белок in vivo. В качестве способа лечения или с другой целью, субъекту может быть полезен или необходим белок, поскольку субъект имеет дефицит белка, или поскольку выработка белка у субъекта может вызывать некоторое терапевтическое действие.
Векторы, включая последовательности ленти- или парвовирусного вектора (напр., AAV), рекомбинантные вирусные частицы, способы и применение можно использовать для доставки варианта нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII, с биологическим действием для лечения или улучшения одного или более симптомов, связанных с дефицитом или патологией FVIII. Последовательности рекомбинантных ленти- или парвовирусного вектора (напр., AAV), плазмиды, рекомбинантные вирусные частицы, способы и применение можно использовать для предоставления терапии для различных патологических состояний, охватывающих или возникающих вследствие дефицита или патологии FVIII.
Нуклеиновые кислоты, векторы, экспрессионные векторы (напр., rAAV) и рекомбинантные вирусные частицы, способы и применение изобретения делают возможным лечение генетических заболеваний, напр., дефицит FVIII. Для заболеваний с дефицитными состояниями перенос гена можно использовать для введения нормального гена в пораженные ткани для заместительной терапии, а также для создания животных моделей с использованием антисмысловых мутаций. Для несбалансированных патологических состояний перенос гена можно использовать для создания патологического состояния в модельной системе, которую затем можно было бы использовать для борьбы с патологическим состоянием. Также возможно использование сайт-специфической интеграции последовательностей нуклеиновых кислот для коррекции дефектов.
В конкретных вариантах осуществления варианты нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG, кодирующих FVIII, можно использовать, например, в качестве терапевтических и/или профилактических агентов (белок или нуклеиновая кислота), которые модулируют каскад свертывания крови или в качестве трансгена в гене. Например, варианты нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG, кодирующих FVIII, могут иметь свертывающую активность, сходную с FVIII дикого типа, или измененную свертывающую активность по сравнению с FVIII дикого типа. Клеточные стратегии позволяют проводить у пациентов с гемофилией A непрерывную экспрессию вариантов нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG, кодирующих FVIII. Как раскрыто в настоящем описании, некоторые модификации молекул FVIII (нуклеиновая кислота и белок) приводят к повышенной экспрессии на уровне нуклеиновой кислоты, повышенной свертывающей активности, тем самым эффективно улучшая гемостаз.
Варианты нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG, кодирующих FVIII, можно использовать для ряда целей согласно настоящему изобретению. В одном варианте осуществления предоставлено средство доставки нуклеиновой кислоты (т.е., экспрессионный вектор) для модулирования свертывания крови, при этом экспрессионный вектор содержит варианты нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG, кодирующих FVIII, согласно описанию. Введение кодирующих FVIII экспрессионных векторов больному приводит к экспрессии белка FVIII, который служит для изменения каскада свертывания. Согласно настоящему изобретению, экспрессия вариантов нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG, кодирующих белок FVIII, согласно описанию, или функционального фрагмента увеличивает гемостаз.
В дополнительных вариантах осуществления согласно настоящему изобретению предоставлены композиции и способы введения вирусного вектора, содержащего вариант нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII. В одном варианте осуществления экспрессионный вектор, содержащий вариант нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII, представляет собой вирусный вектор.
Экспрессионные векторы, содержащие варианты нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG, кодирующих FVIII, можно вводить отдельно или в комбинации с другими молекулами, подходящими для модулирования гемостаза. Согласно настоящему изобретению, векторы, экспрессионные векторы или комбинации терапевтических агентов можно вводить больному отдельно или в фармацевтически приемлемых или биологически совместимых композициях.
Вирусные векторы, такие как ленти- и парвовирусные векторы, включая AAV серотипы и их варианты, предоставляют средство доставки в клетки ex vivo, in vitro и in vivo нуклеиновой кислоты, которая кодирует белки, так что клетки экспрессируют кодируемый белок. AAV представляют собой вирусы, подходящие в качестве геннотерапевтических векторов, поскольку они могут проникать внутрь клеток и вводить нуклеиновую кислоту/генетический материал, так чтобы нуклеиновая кислота/генетический материал могли стабильно сохраняться в клетках. Кроме того, эти вирусы могут вводить нуклеиновую кислота/генетический материал, например, в конкретные сайты. Поскольку AAV не связаны с патогенными заболеваниями у людей, AAV векторы делают возможной доставку гетерологичных полинуклеотидных последовательностей (напр., терапевтических белков и агентов) пациентам-людям, не вызывая по существу AAV патогенеза или заболевания.
Вирусные векторы, которые можно использовать в изобретении включают, без ограничения, векторы на основе аденоассоциированных вирусов (AAV) множественных серотипов (напр., от AAV-1 до AAV-12, и другие) и гибридные/химерные AAV векторы, лентивирусные векторы и псевдотипированные лентивирусные векторы (напр., вирус Эбола, вирус везикулярного стоматита (VSV) и вирус иммунодефицита кошек (FIV)), векторы на основе вируса простого герпеса, аденовирусные векторы (с тканеспецифическими промоторами/энхансерами или без них), векторы на основе вируса коровьей оспы, пертовирусные векторы, лентивирусные векторы, невирусные векторы и другие.
AAV и лентивирусные частицы можно использовать для преимущества в качестве носителей для эффективной доставки гена. Такие вирионы обладают рядом желательных особенностей для такого применения, включая тропизм для делящихся и неделящихся клеток. Ранний клинический опыт с этими векторами также не показал устойчивой токсичности, и иммунные ответы были минимальными или неопределяемыми. Известно, что AAV инфицирует большое разнообразие типов клеток in vivo и in vitro посредством рецептор-опосредованного эндоцитоза или трансцитоза. Эти векторные системы были протестированы у людей с выделенными в качестве мишени эпителием сетчатки, печенью, скелетными мышцами, дыхательными путями, головным мозгом, суставами и гемопоэтическими стволовыми клетками. Невирусные векторы, например, на основе плазмидной ДНК или миниколец, также являются подходящими векторами для переноса генов для крупных генов, таких как гены, кодирующие FVIII.
Может потребоваться ввести вектор, который может обеспечить, например, множественные копии требуемого гена и, следовательно, большее количество продукта этого гена. Улучшенные AAV и лентивирусный векторы и способы получения этих векторов подробно описаны в ряде ссылок, патентов и патентных заявок, включая: Wright J.F. (Hum Gene Ther 20:698-706, 2009), методику, используемую для получения вектора для клинического применения в детской больнице в Филадельфии. В CHOP также можно получать лентивирусный вектор, а другие векторы доступны через ведущую лабораторию по производству векторов посредством NHLBI Gene Therapy Resource Program (GTRP) - Lentivirus Vector Production Core Laboratory.
Соответственно, в различных вариантах осуществления согласно настоящему изобретению вектор включает ленти- или парвовирусный вектор, такой как аденовирусный вектор. В конкретных вариантах осуществления рекомбинантный вектор представляет собой парвовирусный вектор. Парвовирусы представляют собой мелкие вирусы с геном в виде одноцепочечной ДНК. «Аденоассоциированные вирусы» (AAV) входят в семейство парвовирусов.
Соответственно, в изобретении представлены вирусные векторы, которые содержат варианты нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG, кодирующих FVIII. Например, рекомбинантный вектор AAV может содержать варианты нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG, кодирующих FVIII, при этом кодируемый белок FVIII необязательно имеет делецию B-домена. Векторная доставка или введение субъекту (напр., млекопитающему) вследствие этого предоставляет FVIII субъекту, такому как млекопитающее (напр., человек).
Прямая доставка векторов или трансдукция ex-vivo клеток человека с последующей инфузией в организм приведет к экспрессии FVIII, тем самым оказывая благотворное терапевтическое действие на гемостаз. В контексте фактора VIII изобретения согласно настоящему описанию такое введение усиливает способствующую свертыванию активность.
Как правило, AAV векторы и лентивирусные векторы не содержат вирусные гены, связанные с патогенезом. Такие векторы, как правило, имеют один или более AAV генов дикого типа, удаленных целиком или частично, например, гены rep и/или cap, но сохраняют по меньшей мере одну функциональную фланкирующую ITR последовательность, что необходимо для спасения, репликации и упаковки рекомбинантного вектора в AAV векторную частицу. Например, включены только необходимые части вектора, напр., элементы ITR и LTR, соответственно. Геном AAV вектора вследствие этого может содержать последовательности, требуемые в cis для репликации и упаковки (напр., функциональные последовательности ITR)
Рекомбинантный AAV вектор, а также способы и виды его применение, включают любой вирусный штамм или серотип. В качестве неограничивающего примера, рекомбинантный AAV вектор может быть на основе любого генома AAV, например, такого как AAV-1, -2, -3, -4, -5, -6, -7, -8, -9, -10, -11, -12, -rh74, -rh10 или AAV-2i8. Такие векторы могут быть на основе одинакового штамма или серотипа (или подгруппы или варианта), или отличаться друг от друга. В качестве неограничивающего примера, рекомбинантный вектор AAV на основе генома одного серотипа может быть идентичен одному или более капсидным белкам, которые упаковывают вектор. Кроме того, геном рекомбинантного AAV вектора может быть на основе генома AAV (напр., AAV2) серотипа, отличающегося от одного или более AAV капсидных белков, которые упаковывают вектор. Например, геном AAV вектора может быть на основе AAV2, тогда как по меньшей мере один из трех капсидных белков может представлять собой, например, AAV1, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, AAV12, Rh10, Rh74 или AAV-2i8 или их вариант.
В конкретных вариантах осуществления векторы на основе аденоассоциированного вируса (AAV) включают AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, AAV12, Rh10, Rh74 и AAV-2i8, а также его варианты (напр., капсидные варианты, такие как вставки, добавления, замещения и делеции аминокислот), например, как изложено в WO 2013/158879 (международная заявка PCT/US2013/037170), WO 2015/013313 (международная заявка PCT/US2014/047670) и US 2013/0059732 (Патент США № 9169299 раскрывает LK01, LK02, LK03 и т.д.).
Варианты AAV включают варианты и химеры AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, AAV12, Rh10, Rh74 и AAV-2i8 капсида. Соответственно, предоставлены AAV векторы и AAV варианты (напр., варианты капсида), которые включают (инкапсулируют или упаковывают) варианты нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG, кодирующих FVIII.
Серотипы вариантов AAV и AAV (напр., вариантов капсид) (напр., VP1, VP2, и/или VP3 последовательности) могут отличаться или не отличаться от других AAV серотипов, включая, например, AAV1-AAV12, Rh74 или Rh10 (напр., отличающиеся от VP1, VP2, и/или VP3 последовательностей любого из AAV1-AAV12, Rh74 или Rh10 серотипов).
В рамках изобретения, термин «серотип» представляет собой отличительную особенность, используемую для обозначения AAV, имеющего капсид, который серологически отличается от других серотипов AAV. Серологическое своеобразие определяется на основании отсутствия перекрестной реактивности между антителами к одному AAV по сравнению с другим AAV. Такие различия в перекрестной реактивности обычно обусловлены различиями в последовательностях капсидных белков/антигенных детерминантах (напр., вследствие разницы в последовательности VP1, VP2 и/или VP3 серотипов AAV). Несмотря на возможность, что варианты AAV, включая варианты капсидов, не могут серологически отличаться от эталонного AAV или другого серотипа AAV, они отличаются по меньшей мере одним нуклеотидным или аминокислотным остатком по сравнению с эталонным или другим серотипом AAV.
Согласно традиционному определению, серотип означает, что исследуемый вирус был протестирован против сыворотки, специфичной для всех существующих и охарактеризованных серотипов для нейтрализующей активности, и не было обнаружено антител, которые нейтрализуют исследуемый вирус. Поскольку больше открыто встречающихся в природе вирусных изолятов и/или получено капсидных мутантов, с любым из существующих в настоящее время серотипов могут быть или могут не быть серологические различия. Таким образом, в случаях, когда новый вирус (напр., AAV) не имеет серологических отличий, этот новый вирус (напр., AAV) может представлять собой подгруппу или вариант соответствующего серотипа. Во многих случаях серологическое тестирование на нейтрализующую активность также следует провести на мутантных вирусах с модификациями последовательности капсидов, чтобы определить, являются ли они другим серотипом в соответствии с традиционным определением серотипа. Соответственно, для удобства и во избежание повторения термин «серотип» в целом относится к обоим серологически различным вирусам (напр., AAV), а также к вирусам (напр., AAV), которые не являются серологически различными, которые могут находиться в подгруппе или варианте данного серотипа.
Вследствие этого AAV векторы включают генные/белковые последовательности, идентичные генным/белковым последовательностям, характерным для конкретного серотипа. В рамках изобретения, «AAV вектор, относящийся к AAV1» относится к одному или более AAV белкам (напр., VP1, VP2 и/или VP3 последовательностям), которые имеют последовательность, по существу идентичную с одним или более полинуклеотидами или полипептидными последовательностями, которые содержат AAV1. Аналогично, «AAV вектор, относящийся к AAV8» относится к одному или более AAV белкам (напр., VP1, VP2 и/или VP3 последовательностям), которые имеют последовательность, по существу идентичную с одним или более полинуклеотидами или полипептидными последовательностями, которые содержат AAV8. «AAV вектор, относящийся к AAV-Rh74» относится к одному или более AAV белкам (напр., VP1, VP2 и/или VP3 последовательностям), которые имеют последовательность, по существу идентичную с одним или более полинуклеотидами или полипептидными последовательностями, которые содержат AAV-Rh74. Такие AAV векторы, относящиеся к другому серотипу, напр., AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, AAV12, Rh10, Rh74 или AAV-2i8, вследствие этого могут иметь одну или более последовательностей, отличающихся от AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, AAV12, Rh10, Rh74 и AAV-2i8, но могут демонстрировать по существу идентичность последовательности с одним или более генами и/или белками, и/или имеют одну или более функциональных характеристик AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, AAV12, Rh10, Rh74 или AAV-2i8 (напр., таких как клеточный/тканевой тропизм). Иллюстративные неограничивающие AAV варианты включают капсидные варианты любого из VP1, VP2, и/или VP3.
В различных иллюстративных вариантах осуществления AAV вектор, относящийся к эталонному серотипу, имеет полинуклеотид, полипептид или их субпоследовательность, которая включает или состоит из последовательности, по меньшей мере на 80% или более (напр., 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,1%, 99,2%, 99,3%, 99,4%, 99,5% и т.д.) идентичной одному или более AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, AAV12, Rh10, Rh74 или AAV-2i8 (напр., например, последовательностям ITR или VP1, VP2 и/или VP3).
Композиции, способы и применение согласно настоящему изобретению включают AAV последовательности (полипептиды и нуклеотиды) и их субпоследовательности, которые демонстрируют менее чем 100% идентичность последовательности с эталонным AAV серотипом, таким как AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, AAV12, Rh10 или AAV-2i8, но отличаются и не идентичны известным AAV генам или белкам, таким как гены или белки AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, AAV12, Rh10, Rh74 или AAV-2i8 и т.д. В одном варианте осуществления AAV полипептид или его субпоследовательность включает или состоит из последовательности, по меньшей мере на 75% или более идентичной, напр., на 80%, 85%, 85%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,1%, 99,2%, 99,3%, 99,4%, 99,5% и т.д., вплоть до 100% идентичной любой эталонной AAV последовательности или ее субпоследовательности, такой как AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, AAV12, Rh10, Rh74 или AAV-2i8 (напр., VP1, VP2 и/или VP3 капсид или ITR). В некоторых вариантах осуществления AAV вариант имеет 1, 2, 3, 4, 5, 5-10, 10-15, 15-20 или более замещений аминокислот.
Чтобы включить одну или более последовательностей нуклеиновых кислот (трансгенов), фланкированных одной или более функциональными AAV ITR последовательностями, с применением рекомбинантных методик, известных специалисту в данной области, можно сконструировать рекомбинантные векторы AAV, включая AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, AAV12, Rh10, Rh74 или AAV-2i8 и вариантные, родственные, гибридные и химерные последовательности.
В одном варианте осуществления согласно настоящему изобретению, варианты нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG, кодирующих FVIII, вектор или экспрессионный вектор, можно вводить больному посредством инфузии в биологически совместимом носителе, например, посредством внутривенной инъекции. Варианты нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG, кодирующих FVIII, векторы и экспрессионные векторы согласно настоящему изобретению для повышения стабильности молекулы можно необязательно инкапсулировать в липосомы или смешать с другими фосфолипидами или мицеллами. Варианты нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG, кодирующих FVIII, векторы и экспрессионные векторы согласно настоящему изобретению можно вводить отдельно или в комбинации с другими агентами, о которых известно, что они модулируют гемостаз (напр., фактор V, фактор Va или их производные).
Подходящую композицию для доставки FVIII может определять практикующий врач после рассмотрения множества физиологических переменных, включая, без ограничения, состояние больного и состояние гемодинамики. Ряд композиций, хорошо подходящих для различных видов применения и путей введения, известны в данной области и описаны в настоящем документе ниже.
Препарат, содержащий очищенный белок FVIII, полученный посредством экспрессии вариантов нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG, кодирующих FVIII, векторов и экспрессионных векторов согласно настоящему изобретению, содержит физиологически приемлемую матрицу и может быть получен в виде фармацевтического препарата. Препарат может быть получен с использованием по существу известных способов предшествующего уровня техники, его можно смешать с буфером, содержащим соли, такие как NaCl, CaCl2, и аминокислотами, такими как глицин и/или лизин, и в диапазоне рН от 6 до 8. При необходимости очищенный препарат, содержащий FVIII, можно хранить в форме готового раствора или в лиофилизированной или замороженной при низкой температуре форме.
Препарат можно хранить в лиофилизированной форме и растворять в визуально прозрачном растворе с использованием подходящего раствора для восстановления. В качестве альтернативы, препарат согласно настоящему изобретению может быть также доступен в виде жидкого препарата или в виде замороженной при низкой температуре жидкости. Препарат согласно настоящему изобретению необязательно может быть особенно стабильным, т. е. ему можно позволить отстаиваться в растворенной форме в течение длительного времени до введения или доставки.
Препарат согласно настоящему изобретению может быть доступен в виде фармацевтического препарата с активностью FVIII в форме однокомпонентного препарата или в комбинации с другими факторами в форме многокомпонентного препарата. Перед переработкой очищенного белка в фармацевтический препарат очищенный белок подвергают обычному контролю качества и придают вид выпускаемой терапевтической формы. В частности, во время рекомбинантного получения очищенный препарат тестируют на отсутствие клеточных нуклеиновых кислот, а также нуклеиновых кислот, которые получены из вектора экспрессии, как описано в EP 0 714 987.
Препарат фармацевтического белка можно использовать в дозах от 30 до 100 МЕ/кг (одна МЕ составляет 100 нг/мл) в виде однократной ежедневной инъекции или до 3 раз/сутки в течение нескольких дней. Пациентов можно лечить сразу после проявления клинической картины кровотечения. В качестве альтернативы, пациенты могут получать болюсную инфузию каждые восемь-двенадцать часов или если наблюдается достаточное улучшение, однократную ежедневную инфузию FVIII.
Соответственно, в фармацевтические композиции можно включать нуклеиновые кислоты изобретения, векторы, рекомбинантные векторы (например, rAAV) и рекомбинантные вирусные частицы и другие композиции, агенты, лекарственные средства, биологические вещества (белки). Такие фармацевтические композиции полезны, среди прочего, для введения и доставки субъекту in vivo или ex vivo.
В конкретных вариантах осуществления фармацевтические композиции также содержат фармацевтически приемлемый носитель или эксципиент. Такие эксципиенты включают любой фармацевтический агент, который сам не индуцирует иммунный ответ, вредный для индивида, получающего композицию, и который можно вводить без неспецифической токсичности.
В рамках изобретения, термин «фармацевтически приемлемый» и «физиологически приемлемый» означает биологически приемлемую готовую форму, газообразную, жидкую или твердую, или их смесь, которая подходит для одного или нескольких путей введения, доставки in vivo или контакта. «Фармацевтически приемлемая» или «физиологически приемлемая» композиция представляет собой материал, который не является биологически или иным образом нежелательным, напр., материал можно вводить субъекту, не вызывая существенных нежелательных биологических эффектов. Таким образом, такая фармацевтическая композиция может использоваться, например, при введении субъекту нуклеиновой кислоты, вектора, вирусной частицы или белка.
Фармацевтически приемлемые эксципиенты включают, без ограничения, такие жидкости, как вода, физиологический раствор, глицерин, сахара и этанол. В них также можно включать фармацевтически приемлемые соли, например, соли минеральных кислот, такие как гидрохлориды, гидробромиды, фосфаты, сульфаты и тому подобное; и соли органических кислот, такие как ацетаты, пропионаты, малонаты, бензоаты и т.п. Дополнительно в таких наполнителях могут присутствовать вспомогательные материалы, такие как смачивающие или эмульгирующие агенты, регулирующие рН буферные вещества и тому подобное.
Фармацевтическая композиция может быть представлена в виде соли и может быть образована со многими кислотами, включая, без ограничения, соляную, серную, уксусную, молочную, винную, яблочную, янтарную и т.д. Соли, как правило, более растворимы в водных или других протонных растворителях, чем соответствующие свободные формы оснований. В других случаях препарат может представлять собой лиофилизированный порошок, который может содержать любое или все из следующего: 1-50 мМ гистидина, 0,1%-2% сахарозы и 2-7% маннита с диапазоном рН от 4,5 до 5,5, которое перед использованием объединяют с буфером.
Фармацевтические композиции включают растворители (водные или неводные), растворы (водные или неводные), эмульсии (например, масло-в-воде или вода-в-масле), суспензии, сиропы, эликсиры, дисперсионные и суспензионные среды, покрытия, изотонические и способствующие или замедляющие всасывание агенты, совместимые с фармацевтическим введением или контактом или доставкой in vivo. Водные и неводные растворители, растворы и суспензии могут включать суспендирующие агенты и загустители. Такие фармацевтически приемлемые носители включают таблетки (с покрытием или без покрытия), капсулы (твердые или мягкие), микрошарики, порошок, гранулы и кристаллы. В композиции также можно включать дополнительные активные соединения (например, консерванты, антибактериальные, противовирусные и противогрибковые средства).
Фармацевтические композиции можно составлять так, чтобы они были совместимым с конкретным способом введения или доставки, который изложен в данном документе или известен специалисту в данной области. Таким образом, фармацевтические композиции содержат носители, разбавители или эксципиенты, подходящие для введения различными путями.
Композиции, подходящие для парентерального введения, включают водные и неводные растворы, суспензии или эмульсии активного соединения, причем эти препараты обычно являются стерильными и могут быть изотоническими по отношению к крови предполагаемого реципиента. Неограничивающие иллюстративные примеры включают воду, забуференный физиологический раствор, раствор Хэнкса, раствор Рингера, декстрозу, фруктозу, этанол, животные, растительные или синтетические масла. Водные инъекционные суспензии могут содержать вещества, которые увеличивают вязкость суспензии, такой как натрийкарбоксиметилцеллюлоза, сорбит или декстран.
Кроме того, суспензии активных соединений могут быть получены в виде подходящих масляных суспензий для инъекций. Подходящие липофильные растворители или наполнители включают жирные масла, такие как кунжутное масло, или сложные эфиры синтетических жирных кислот, такие как этилолеат или триглицериды, или липосомы. Необязательно, суспензия также может содержать подходящие стабилизаторы или агенты, которые повышают растворимость соединений, чтобы обеспечить получение высококонцентрированных растворов.
К композиции могут быть добавлены сорастворители и адъюванты. Неограничивающие примеры сорастворителей включают гидроксильные группы или другие полярные группы, например спирты, такие как изопропиловый спирт; гликоли, такие как пропиленгликоль, полиэтиленгликоль, полипропиленгликоль, гликолевый эфир; глицерин; полиоксиэтиленовые спирты и полиоксиэтиленовые сложные эфиры жирных кислот. Адъюванты включают, например, поверхностно-активные вещества, такие как соевый лецитин и олеиновая кислота; сорбитановые сложные эфиры, такие как сорбитан атриолеат; и поливинилпирролидон.
После получения фармацевтических композиций их можно помещать в соответствующий контейнер и маркировать для лечения. Для введения содержащих FVIII векторов или полипептидов такая маркировка будет включать количество, частоту и способ введения.
В данной области известны фармацевтические композиции и системы доставки, подходящие для композиции, способы и применение согласно настоящему изобретению (см., напр., Remington: The Science и Practice of Pharmacy (2003) 20th ed., Mack Publishing Co., Easton, PA; Remington's Pharmaceutical Sciences (1990) 18th ed., Mack Publishing Co., Easton, PA; The Merck Index (1996) 12th ed., Merck Publishing Группа, Whitehouse, NJ; Pharmaceutical Principles of Solid Dosage Forms (1993), Technonic Publishing Co., Inc., Lancaster, Pa.; Ansel и Stoklosa, Pharmaceutical Calculations (2001) 11th ed., Lippincott Williams & Wilkins, Baltimore, MD; и Poznansky et al., Drug Delivery Systems (1980), R. L. Juliano, ed., Oxford, N.Y., pp. 253-315).
Изобретение также предоставляет способы введения в клетку или животному вариантов нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG, кодирующих FVIII. В конкретном варианте осуществления изобретение относится к способам модулирования гемостаза. В одном варианте осуществления способ включает контакт или введение индивиду (больному или субъекту, такому как млекопитающее) средства доставки нуклеиновой кислоты (напр., AAV вектора), содержащего вариант нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII, в условиях, в которых у индивида экспрессируется полипептид FVIII. В другом варианте осуществления способ включает предоставление в клети индивида (больного или субъекта, такого как млекопитающее) средства доставки нуклеиновой кислоты (напр., AAV вектора), содержащего вариант нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII, в условиях, в которых у индивида экспрессируется полипептид FVIII.
Из вышеуказанного можно видеть, что варианты нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG, кодирующих FVIII, можно использовать при лечении расстройств, связанных с дефицитной, недостаточной или нарушенной свертываемостью крови.
Композиции вариантов нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG, кодирующих FVIII, включая векторы, рекомбинантные векторы (напр., rAAV), и рекомбинантные вирусные частицы можно вводить, а способы и применение изобретения могут быть предоставлены нуждающемуся в этом субъекту в достаточном или эффективном количестве. «Эффективное количество» или «достаточное количество» относится к количеству, которое обеспечивает в виде разовой или множественной дозы, отдельно или в сочетании, одну или более других композиций (терапевтических или иммуносупрессивных средств, таких как лекарственное средство), виды лечения, протоколы или средства лечебной схемы, определяемый ответ любой продолжительности времени (длительный или кратковременный), ожидаемый или требуемый результат или полезность для субъекта любой измеряемой или определяемой степени или на любой продолжительности (например, в течение минут, часов, дней, месяцев, лет или до излечения).
Дозы могут варьировать и зависят от типа, начала, прогрессирования, тяжести, частоты, продолжительности или вероятности заболевания, на которое направлено лечение, требуемой клинической конечной точки, предшествующего или одновременно проводимого лечения, общего состояния здоровья, возраста, пола, расы или иммунологической компетентности субъекта и других факторов, которые будут оценены квалифицированным специалистом. Величина дозы, число, частота или продолжительность могут быть пропорционально увеличены или уменьшены, что показано при любых неблагоприятных побочных эффектах, осложнениях или других факторах риска лечения или терапии и состояние субъекта. Специалист в данной области оценит факторы, которые могут влиять на дозировку и сроки, необходимые для обеспечения количества, достаточного для предоставления терапевтической или профилактической пользы.
Доза для достижения терапевтического эффекта, напр., доза в векторных геномах/на килограмм массы тела (мкг/кг), будет варьировать в зависимости от нескольких факторов, включая, без ограничения: путь введения, уровень экспрессии гетерологичного полинуклеотида, необходимый для достижения терапевтического эффекта, конкретного заболевания, подлежащего лечению, любого иммунного ответа хозяина на вирусный вектор, иммунного ответа хозяина на гетерологичный полинуклеотид или продукт экспрессии (белок) и стабильности экспрессированного белка. Специалист в данной области может определить диапазон дозы генома rAAV/вектора для лечения пациента, имеющего конкретное заболевание или расстройство, на основе вышеупомянутых факторов, а также других факторов. Обычно дозы будут варьировать от по меньшей мере 1×108 или более, например, 1×109, 1×1010, 1×1011, 1×1012, 1×1013 или 1×1014 или более векторных геномов на килограмм (вг/кг) массы субъекта, чтобы достичь терапевтического эффекта. Эффективной была доза AAV в диапазоне 1×1010-1×1011 у мышей и 1×1012-1×1013 у собак.
Вообще говоря, при использовании в качестве примера гемофилии B, считается, что с целью достижения терапевтического эффекта для изменения тяжелого фенотипа болезни на умеренный, необходима концентрация фактора свертывания в крови, которая составляет более 1% от концентрации фактора, имеющейся у нормального индивида. Тяжелый фенотип характеризуется поражением суставов и угрожающими жизни кровотечениями. Считается, что для перевода умеренного фенотипа болезни в мягкий необходима концентрация фактора свертывания крови выше 5% от нормального. Уровни FVIII у нормальных людей составляют приблизительно 150-200 нг/мл плазмы, но могут быть меньше (напр., диапазон, составляющий приблизительно 100-150 нг/мл) или выше (например, диапазон, составляющий приблизительно 200-300 нг/мл) и все еще считаются нормальными вследствие функционирования свертывания, что определяется, например, методом одностадийного анализа свертываемости активированного частичного тромбопластинового времени (aPTT). Таким образом, терапевтический эффект может быть достигнут посредством экспрессии FVIII, так чтобы общее количество FVIII у субъекта/человека превышало 1% FVIII, присутствующего у нормальных субъектов/людей, например 1% от 100-300 нг/мл.
В отношении лечения такого субъекта с гемофилией, для достижения требуемого терапевтического эффекта типичная доза составляет по меньшей мере 1×1010 векторных геномов (вг) на килограмм (вг/кг) массы субъекта, или между приблизительно 1×1010 и 1×1011 вг/кг массы субъекта, или между приблизительно 1×1011 и 1×1012 вг/кг массы субъекта, или между приблизительно 1×1012 и 1×1013 вг/кг массы субъекта. Дозы AAV вектора могут быть на уровне, обычно в нижнем конце спектра доз, так что против FVIII или AAV вектора не возникает существенного иммунного ответа.
Дозы «эффективного количества» или «достаточного количества» для лечения (напр., для улучшения или обеспечения терапевтического эффекта или улучшения) обычно эффективны для ответа на один, множество или все неблагоприятные симптомы, последствия или осложнения болезни, один или несколько неблагоприятных симптомов, расстройств, заболеваний, патологий или осложнений, например, вызванных или ассоциированных с заболеванием, в измеримой степени, хотя и уменьшение, снижение, ингибирование, подавление, ограничение или контроль прогрессирования или ухудшения болезни является удовлетворительным результатом.
Эффективное количество или достаточное количество можно, но не обязательно, вводить за одно введение, может потребоваться многократное введение, и можно, но не обязательно, вводить отдельно или в сочетании с другой композицией (например, средством), видом лечения, протоколом или схемой лечения. Например, количество можно пропорционально увеличить, что диктуется потребностью субъекта, типом, состоянием и степенью тяжести заболевания или побочными эффектами лечения (при наличии). Кроме того, нет необходимости, чтобы эффективное количество или достаточное количество было эффективным или достаточным, если его вводят в виде одной или множества доз без второй композиции (напр., другого лекарственного средства или агента), вида лечения, протокола или схемы лечения, поскольку для того, чтобы считаться эффективными или достаточными для данного субъекта, можно включать дополнительные дозы, количества или продолжительность выше и за пределами таких доз или дополнительные композиции (напр., лекарственные средства или агенты), виды лечения, протоколы или схемы лечения. Эффективные количества также включают количества, которые приводят к уменьшению использования другого вида лечения, схемы лечения или протокола, такого как введение рекомбинантного белка фактора свертывания (например, FVIII) для лечения расстройства свертывания крови (напр., гемофилии A).
Соответственно, способы и виды применения изобретения также включают, среди прочего, способы и виды применения, которые приводят к уменьшению потребности или использования другого соединения, агента, лекарственного препарата, схемы лечения, протокола лечения, процесса или лечебного средства. Например, для лечения болезней свертывания крови способ или использование изобретения имеет терапевтическое преимущество, если у данного субъекта менее частая или уменьшенная доза или элиминация введения рекомбинантного белка фактора свертывания для восполнения дефицитного или дефектного (аномального или мутантного) эндогенного фактора свертывания крови у субъекта. Таким образом, согласно настоящему изобретению предоставлены способы и виды снижения потребности или использования другого лечения или терапии.
Эффективное количество или достаточное количество не должно быть эффективным ни для каждого повергающегося лечению субъекта, ни для большинства пролеченных субъектов в данной группе или популяции. Эффективное количество или достаточное количество означает эффективность или достаточность у конкретного субъекта, а не группы или общей популяции. Как это типично для таких методов, у некоторых субъектов будет наблюдаться больший или меньший ответ или отсутствие ответа на данный метод лечения или его использование.
Термин «улучшение» означает обнаруживаемое или измеряемое улучшение болезни субъекта или ее симптома или лежащий в основе клеточный ответ. Обнаруженное или измеримое улучшение включает в себя субъективное или субъективное уменьшение, снижение, ингибирование, подавление, ограничение или контроль возникновения, частоты, тяжести, прогрессирования или продолжительности заболевания или осложнений, вызванных или ассоциированных с этим заболеванием, или улучшение симптома или основной причины или последствий заболевания, или обратное развитие болезни. Для HemA эффективное количество будет представлять собой количество, которое, например, уменьшает частоту или тяжесть эпизодов острого кровотечения у субъекта, или количество, которое уменьшает время свертывания, которое измеряют, например, с помощью анализа свертывания крови.
Соответственно, фармацевтические композиции изобретения включают композиции, в которых активные ингредиенты содержатся в эффективном количестве для достижения намеченной терапевтической цели. Определение терапевтически эффективной дозы находится в пределах возможностей квалифицированного врача-практика, использующего методики и рекомендации, предоставленные в изобретении.
Терапевтические дозы будут зависеть, помимо прочего, от возраста и общего состояния субъекта, от тяжести аберрантного фенотипа свертывания крови и от силы контрольных последовательностей, регулирующих уровни экспрессии вариантов нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG, кодирующих FVIII. Таким образом, терапевтически эффективное количество у людей будет уменьшаться в относительно широком диапазоне, который может быть определен врачом-практиком на основе ответа отдельного пациента на лечение FVIII на основе вектора. Такие дозы могут быть отдельными или в сочетании с иммунодепрессантом или лекарственным средством.
Композиции, такие как фармацевтические композиции, можно доставлять субъекту, чтобы обеспечить выработку биологически активного белка (например, фактора VIII (FVIII), кодируемого вариантом нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG) или путем индуцирования непрерывной экспрессии трансгена FVIII in vivo методами генной или клеточной терапии или посредством модификации клеток пациента или донора ex-vivo. В конкретном варианте осуществления фармацевтические композиции, содержащие достаточный генетический материал, чтобы реципиент мог получить терапевтически эффективное количество полипептида FVIII, могут влиять на гемостаз у субъекта.
Композиции можно вводить отдельно. В некоторых вариантах осуществления вариант нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII, вектор, экспрессионный вектор/рекомбинантный вектор (напр., rAAV) или рекомбинантная вирусная частица обеспечивает терапевтическое действие без иммуносупрессивного средства. Терапевтическое действие FVIII необязательно пролонгируется в течение некоторого периода времени, напр., 2-4, 4-6, 6-8, 8-10, 10-14, 14-20, 20-25, 25-30 или 30-50 дней или более, например, 50-75, 75-100, 100-150, 150-200 дней или более без введения иммуносупрессивного средства. Соответственно, в некоторых вариантах осуществления вариант нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII, вектор, экспрессионный вектор/рекомбинантный вектор (напр., rAAV), или рекомбинантная вирусная частица обеспечивают терапевтическое действие без введения иммуносупрессивного средства на протяжении некоторого периода времени.
Композиции можно вводить в комбинации по меньшей мере с одним другим средством. В некоторых вариантах осуществления вариант нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII, вектор, экспрессионный вектор/рекомбинантный вектор (напр., rAAV) или рекомбинантную вирусную частицу вводят в сочетании с одним или более иммуносупрессивными средствами перед, по существу в одно время или после введения варианта нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII, вектора, экспрессионного вектора/рекомбинантного вектора (напр., rAAV) или рекомбинантной вирусной частицы. В некоторых вариантах осуществления вариант нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII, вектор, экспрессионный вектор/рекомбинантный вектор (напр., rAAV) или рекомбинантную вирусную частицу вводят в сочетании с одним или более иммуносупрессивными средствами спустя некоторый период времени после введения варианта нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII, вектора, экспрессионного вектора/рекомбинантного вектора (напр., rAAV) или рекомбинантной вирусной частицы, напр., спустя 1-12, 12-24 или 24-48 часов или спустя 2-4, 4-6, 6-8, 8-10, 10-14, 14-20, 20-25, 25-30, 30-50 или более 50 дней после введения варианта нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII, вектора, экспрессионного вектора/рекомбинантного вектора (напр., rAAV) или рекомбинантной вирусной частицы. Такое введение иммуносупрессивных средств спустя некоторый период времени после введения варианта нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII, вектора, экспрессионного вектора/рекомбинантного вектора (напр., rAAV) или рекомбинантной вирусной частицы, если имеется снижение FVIII после первоначальных уровней экспрессии в течение некоторого периода времени, напр., 20-25, 25-30, 30-50, 50-75, 75-100, 100-150, 150-200 или более 200 дней после введения варианта нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII, вектора, экспрессионного вектора/рекомбинантного вектора (напр., rAAV) или рекомбинантной вирусной частицы.
В некоторых вариантах осуществления иммуносупрессивным средством является противовоспалительное средство. В некоторых вариантах осуществления иммуносупрессивным средством является стероид. В некоторых вариантах осуществления иммуносупрессивным средством является циклоспорин (напр., циклоспорин A), микофенолат, Ритуксимаб или его производное. Дополнительные конкретные средства включают стабилизирующее соединение.
Композиции можно вводить в любом стерильном биосовместимом фармацевтическом носителе, включая, без ограничения, физиологический раствор, забуференный физиологический раствор, декстрозу и воду. Композиции можно вводить пациенту отдельно или в комбинации с другими средствами (например, кофакторами), которые влияют на гемостаз.
Фактор VIII, отдельно или в комбинации с другими агентами, можно вводить или приводить в контакт или непосредственно вводить пациенту в виде инфузии в надлежащем биологическом носителе согласно описанию. Векторы и экспрессионные векторы изобретения, содержащие вариант нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII, можно вводить больному с помощью ряда средств для достижения и необязательно поддержания в течение некоторого периода времени профилактически и/или терапевтически эффективного уровня полипептида FVIII. Специалист в данной области может легко определить конкретные протоколы для использования векторов экспрессии, кодирующих FVIII, изобретения для терапевтического воздействия на конкретного больного.
Протоколы для выработки аденовирусных векторов и введения пациентам описаны в патентах США №№ 5998205; 6228646; 6093699; 6100242; и международных патентных заявках №№ WO 94/17810 и WO 94/23744, которые включены в настоящее описание посредством ссылки во всей своей полноте. В частности, например, AAV векторы используются для доставки нуждающемуся в этом пациенту фактора VIII (FVIII), кодируемого вариантами нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG.
Фактор VIII (FVIII), кодируемый вариантами нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG, доставляемый посредством AAV векторов изобретения, можно вводить пациенту любыми известными способами.
Способы и виды применения изобретения включают доставку и введение системно, регионально или локально или любым путем, например, посредством инъекции или инфузии. Доставку фармацевтических композиций in vivo обычно можно осуществлять посредством инъекции с использованием обычного шприца, хотя предусмотрены другие способы доставки, такие как конвекционная доставка (см. напр., патент США № 5720720). Например, композиции можно доставлять подкожно, эпидермально, внутрикожно, интратекально, интраорбитально, интрамукозально, внутрибрюшинно, внутривенно, внутриплеврально, внутриартериально, перорально, внутрипеченочно, через воротную вену или внутримышечно. Другие способы введения включают пероральное и пульмональное введение, суппозитории и трансдермальное применение. Клиницист, специализирующийся на лечении пациентов с нарушениями свертывания крови, может определить оптимальный путь для введения аденовирус-ассоциированных векторов, содержащих варианты нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG, кодирующих FVIII, на основе ряда критериев, включая, без ограничения: состояние пациента и цели лечения (например, повышение или снижение свертываемости крови).
Способы и виды применения изобретения можно комбинировать с любым соединением, средством, лекарственным препаратом, видом лечения или другой схемой лечения или протоколом, имеющим требуемую терапевтическую, благотворную, аддитивную, синергическую или комплементарную активность или эффект. Примеры комбинированных композиций и видов лечения включают вторичные активные вещества, такие как биологические вещества (белки), средства (например, иммунодепрессанты) и лекарственные средства. Такие биологические вещества (белки), агенты, лекарственные средства, методы лечения и терапии можно вводить или проводить перед, по существу одновременно или после любого другого способа или вида использования изобретения, например, терапевтического способа лечения субъекта при патологии свертывания крови, такой как HemA.
Соединение, агент, лекарственное средство, вид лечения или другую схему лечения или протокол можно применять в виде комбинированной композиции или вводить отдельно, например, одновременно или по очереди или последовательно (до или после) доставки или введения нуклеиновой кислоты, вектора, рекомбинантного вектора (напр., rAAV) или рекомбинантной вирусной частицы. Таким образом, изобретение предоставляет комбинации, в которых способ или вид применения изобретения находится в сочетании с любым соединением, агентом, лекарственным средством, схемой лечения, протоколом лечения, процессом, лекарством или композицией, изложенным в данном описании или известным специалисту в данной области. Соединение, агент, лекарственное средство, схема лечения, протокол лечения, способ, лечебное средство или композицию можно вводить субъекту или проводить перед, по существу одновременно или после введения нуклеиновой кислоты, вектора, рекомбинантного вектора (напр., rAAV) или рекомбинантной вирусной частицы согласно настоящему изобретению.
Изобретение полезно для животных, включая человека и медицинские и ветеринарные способы применения. Таким образом, подходящие субъекты включают млекопитающих, таких как люди, а также млекопитающих, не являющихся человеком. Термин «объект» относится к животному, как правило млекопитающему, такому как люди, не являющиеся человеком приматы (человекообразные обезьяны, гиббоны, гориллы, шимпанзе, орангутаны, макаки), домашние животные (собаки и кошки), сельскохозяйственные животные (домашняя птица, такая как куры и утки, лошади, коровы, козы, овцы, свиньи) и экспериментальные животные (мышь, крыса, кролик, морская свинка). Субъекты-люди включают эмбриональных, новорожденных, грудных, несовершеннолетних и взрослых субъектов. Субъекты включают животные модели заболеваний, например, мышиные и другие животные модели заболеваний свертывания крови, такие как HemA и другие, известные специалистам в данной области.
Субъекты, подходящие для лечения согласно настоящему изобретению, включают субъектов с выработкой недостаточного количества или с дефицитом продукта функционирующего гена (напр., белка FVIII) или с выработкой продукта (напр., белка FVIII) аберантного, частично функционирующего или нефункционирующего гена, что может привести к заболеванию, или субъектов с таким риском. Субъекты, подходящие для лечения согласно настоящему изобретению, также включают субъектов с выработкой продукта (белка) аберантного или дефектного (мутантного) гена, которая приводит к заболеванию, так что снижение количества, экспрессии или функции продукта (белка) аберантного или дефектного (мутантного) гена могло бы привести к лечению заболевания или к уменьшению одного или более симптомов или к ослаблению заболевания, или субъектов с таким риском. Таким образом, целевые субъекты включают субъектов, имеющих нарушенную, недостаточную или отсутствующую выработку факторов свертывания крови, таких как гемофилии (напр., гемофилия A).
Субъектов можно протестировать на иммунный ответ, например, на антитела против AAV. Таким образом, субъектов-кандидатов с гемофилией перед лечением согласно способу изобретения можно подвергнуть скринингу. Субъектов также можно протестировать на антитела против AAV после лечения и необязательно контролировать в течение некоторого периода времени после лечения. Субъектов, у которых вырабатываются антитела, можно лечить иммунодепрессантом, или им можно вводить одно или несколько дополнительных количеств AAV вектора.
Субъекты, подходящие для лечения согласно настоящему изобретению, также включают субъектов с выработкой антител против AAV или с таким риском. Векторы AAV можно вводить или доставлять таким субъектам, используя нескольких методик. Например, пустой капсид AAV (т.е., AAV с отсутствующей нуклеиновой кислотой FVIII) можно доставить для связывания у субъекта AAV антител, тем самым позволяя AAV вектору, несущему вариант нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII, трансформировать клетки субъекта. Количества пустого капсида AAV для введения можно регулировать, исходя из количества AAV-антител, выработанных у конкретного субъекта. Пустой капсид может быть любого серотипа AAV, например, AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, AAV12, Rh10, Rh74 или AAV-2i8.
В качестве альтернативы или в дополнение AAV вектор можно доставлять путем прямой внутримышечной инъекции (напр., в одно или более медленносокращающихся мышечных волокон). В другом альтернативном варианте катетер, вводимый в бедренную артерию, можно использовать для доставки AAV векторов в печень через печеночную артерию. Также для доставки AAV векторов непосредственно в печень можно использовать нехирургические средства, такие как эндоскопическая ретроградная холангиопанкреатография (ЭРХПГ), тем самым минуя кровь и AAV-антитела. В качестве ворот для доставки AAV векторов субъекту, у которого вырабатываются или имеются существующие ранее антитела против AAV, также можно использовать другие протоковые системы, такие как протоки подчелюстной железы.
Введение или доставку in vivo субъекту можно выполнять до развития неблагоприятного симптома, состояния, осложнения и т. д., вызванных или ассоциированным с этим заболеванием. Например, для идентификации таких субъектов в качестве кандидатов на композиции, способы и виды применения изобретения можно использовать скрининг (например, генетический). Таким образом, такие субъекты включают субъектов с положительным результатом при скрининге на недостаточное количество или дефицит продукта функционирующего гена (напр., белка FVIII), или у которых вырабатывается продукт (напр., белок FVIII) аберрантного, частично функционирующего или нефункционирующего гена.
Введение или доставку субъекту in vivo в соответствии со способами и видами применения изобретения, как раскрыто в настоящем описании, можно осуществлять в течение 1-2, 2-4, 4-12, 12-24 или 24-72 часов после того, как было идентифицировано, что субъект имеет заболевание, намеченное для лечения, имеет один или более симптомов заболевания или был подвергнут скринингу и идентифицирован как положительный согласно настоящему описанию, даже если субъект не имеет одного или более симптомов заболевания. Конечно, способы и виды применения изобретения могут быть осуществлены в течение 1-7, 7-14, 14-21, 21-48 или более дней, месяцев или лет после того, как было идентифицировано, что субъект имеет заболевание, намеченное для лечения, имеет один или более симптомов заболевания или был подвергнут скринингу и идентифицирован как положительный, согласно настоящему описанию.
В рамках изобретения, «стандартная лекарственная форма» относится к физически дискретным единицам, подходящим в качестве разовых доз для субъекта, подлежащего лечению; причем каждая единица содержит заданное количество, необязательно в сочетании с фармацевтическим носителем (эксципиентом, разбавителем, наполнителем или наполняющей средой), которое при введении в одной или нескольких дозах рассчитывают для достижения требуемого эффекта (напр., профилактического или терапевтического эффекта). Стандартные лекарственные формы могут находиться внутри, например, ампул и флаконов, которые могут содержать жидкую композицию или композицию в состоянии после сублимационной сушки или в лиофилизированном состоянии; например, перед введением или доставкой in vivo можно добавить стерильный жидкий носитель. В многодозовые наборы или контейнеры можно включать отдельные стандартные лекарственные формы. Для удобства введения и единообразия дозировки рекомбинантные векторы (напр., rAAV), рекомбинантные вирусные частицы и их фармацевтические композиции могут быть упакованы в виде одной или нескольких стандартных лекарственных форм.
[0191] Субъектов можно тестировать на количество FVIII или активность FVIII, чтобы определить, подходят ли такие субъекты для лечения согласно способу изобретения. Претендующих на лечение субъектов с гемофилией, таким образом, можно подвергнуть скринингу на количество или активность FVIII до лечения согласно способу изобретения. Субъектов также можно тестировать на количество FVIII или активность FVIII после лечения согласно способу изобретения. После лечения таких пролеченных субъектов можно периодически подвергать мониторингу на количество FVIII или активность FVIII, напр., каждые 1-4 недели или 1-6 месяцев.
Субъектов можно тестировать на один или несколько ферментов печени в рамках неблагоприятного ответа или для определения того, подходят ли такие субъекты для лечения согласно способу изобретения. Таким образом, претендующих на лечение субъектов с гемофилией можно подвергать скринингу на количество одного или более печеночных ферментов до лечения согласно способу изобретения. Субъектов также можно тестировать на количество одного или более печеночных ферментов после лечения согласно способу изобретения. Таких пролеченных субъектов можно периодически подвергать мониторингу после лечения на повышение печеночных ферментов, напр., каждые 1-4 недели или 1-6 месяцев.
Иллюстративные печеночные ферменты включают аланинаминотрансферазу (АЛТ), аспартатаминотрансферазу (АСТ) и лактатдегидрогеназу (ЛДГ), но также можно проводить мониторинг на другие ферменты, указывающие на поражение печени. Нормальный уровень данных ферментов в кровотоке, как правило, определяется в виде диапазона, который имеет верхний уровень, выше которого уровень ферментов считается повышенным и вследствие этого указывает на поражение печени. Нормальный диапазон частично зависит от стандартов, используемых клинической лабораторией, проводящей анализ.
Можно проводить мониторинг субъектов на эпизоды кровотечения, чтобы определить, подходят ли такие субъекты для лечения или отвечают ли на лечение, и/или величину или продолжительность ответной реакции. Можно проводить мониторинг субъектов на эпизоды кровотечения, чтобы определить, нуждаются ли такие субъекты в дополнительном лечении, напр., в последующем введении AAV вектора или введении иммуносупрессивного средства, или в более частом мониторинге. Вследствие этого можно проводить мониторинг субъектов с гемофилией на эпизоды кровотечения перед лечением и после лечения согласно способу изобретения. Субъектов также можно тестировать на частоту и тяжесть эпизодов кровотечения во время или после лечения согласно способу изобретения.
В изобретении предоставлены наборы с упаковочным материалом и одним или несколькими компонентами в них. Набор обычно включает этикетку или упаковочный вкладыш, содержащий описание компонентов или инструкции для использования его компонентов in vitro, in vivo или ex vivo. Набор может содержать набор таких компонентов, как, напр., нуклеиновая кислота, рекомбинантный вектор, вирусный (например, AAV) вектор или вирусная частица и необязательно второе активное вещество, такое как соединение, агент, лекарственное средство или композиция.
Набор относится к физической структуре, содержащей один или несколько компонентов набора. Упаковочный материал может сохранять компоненты стерильными и может быть изготовлен из материала, обычно используемого для таких целей (например, из бумаги, гофрированного волокна, стекла, пластика, фольги, ампул, флаконов, пробирок и т. д.).
Этикетки или вкладыши могут содержать идентифицирующую информацию об одном или нескольких его компонентов, количестве доз, клинической фармакологии активного ингредиента (ингредиентов), включая механизм действия, фармакокинетику и фармакодинамику. Этикетки или вкладыши могут содержать информацию, идентифицирующую производителя, номера партий, местоположение и дату производства, даты истечения срока годности. Этикетки или вкладыши могут содержать информацию о заболевании, для которого может быть использован компонент набора. Этикетки или вкладыши могут содержать инструкции для врача или субъекта по использованию одного или нескольких компонентов набора в способе, использовании или протоколе лечения или схеме лечения. Инструкции могут включать количество доз, частоту или продолжительность, и инструкции по практическому применению любого из методов, видам применения, протоколам лечения или профилактических или терапевтических режимов, описанных в настоящем описании.
Этикетки или вкладыши могут содержать информацию о любом преимуществе, предоставляемом компонентом, таком как профилактическая или терапевтическая польза. Этикетки или вкладыши могут содержать информацию о потенциальных неблагоприятных побочных эффектах, осложнениях или реакциях, такую как предупреждения для субъекта или клинициста относительно ситуаций, когда было бы нецелесообразно использовать конкретную композицию. Неблагоприятные побочные эффекты или осложнения могут также возникать, когда субъект принимал, будет принимать или принимает в настоящее время одно или несколько других лекарств, которые могут быть несовместимы с композицией, или субъекта подвергали, будут подвергать или в настоящее время подвергают другому протоколу лечения или схеме лечения, которая может быть несовместима с композицией, и, таким образом, инструкции могут содержать информацию о такой несовместимости.
Этикетки или вкладыши содержат «печатный материал», например, бумагу или картон, отдельные или прикрепленные к компоненту, набору или упаковочному материалу (например, коробке) или прикрепленные к ампуле, пробирке или флакону, содержащему компонент набора. Этикетки или вкладыши могут дополнительно содержать машиночитаемый носитель, такой как печатная этикетка со штрих-кодом, диск, оптический диск, такой как CD- или DVD-ROM/RAM, DVD, MP3, магнитная лента или электрический носитель хранения, такой как RAM и ROM или их гибриды, такие как магнитные/оптические носители данных, FLASH-носители или карты памяти.
Если не указано иное, все технические и научные термины, используемые в настоящем описании, имеют такое же значение, которое обычно понятно специалисту в области техники, к которой относится настоящее изобретение. Хотя в настоящем документе описаны подходящие способы и материалы, при практической реализации или тестировании настоящего изобретения можно использовать способы и материалы, аналогичные или эквивалентные описанным в настоящем документе.
Все патенты, патентные заявки, публикации и другие ссылки, цитаты GenBank и цитаты ATCC, приведенные в настоящем описании, включены посредством ссылки во всей своей полноте. В случае конфликта приоритет будет иметь настоящее описание, включающее определения.
Различные термины, относящиеся к биологическим молекулам изобретения, используются в настоящем описании выше, а также по всему описанию и формуле изобретения.
Все признаки, раскрытые в настоящем описании, можно комбинировать в любом сочетании. Каждый признак, раскрытый в описании, может быть заменен альтернативным признаком, служащим той же, эквивалентной или аналогичной цели. Таким образом, если явно не указано иное, раскрытые признаки (напр., варианты нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG, кодирующие FVIII, вектор, плазмида, экспрессионная/рекомбинантная векторная (напр., rAAV) последовательность или рекомбинантная вирусная частица) являются примером семейства эквивалентных или сходных признаков.
В рамках изобретения, единственные формы включают ссылки на множественные формы, если в контексте явно не указано иное. Так, например, ссылка на «нуклеиновую кислоту» включает в себя множество таких нуклеиновых кислот, ссылка на «вектор» включает в себя множество таких векторов, а ссылка на «вирус» или «частицу» включает в себя множество таких вирусов/частиц.
В рамках изобретения, все числовые значения или числовые диапазоны включают целые числа в пределах таких диапазонов и доли значений или целых чисел в пределах диапазонов, если в контексте явно не указано иное. Таким образом, для иллюстрации, ссылка на 80% или большую идентичность включает 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94% и т.д., а также 81,1%, 81,2%, 81,3%, 81,4%, 81,5% и т.д., 82,1%, 82,2%, 82,3%, 82,4%, 82,5% и т. д. и т. п.
Ссылка на целое число с больше (более) или менее включает любое число больше или меньше чем ссылочное число, соответственно. Так, например, ссылка на менее 100 включает 99, 98, 97 и т. д. вплоть до числа один (1); а менее 10 включает 9, 8, 7 и т. д. вплоть до числа один (1).
В рамках изобретения все числовые значения или диапазоны включают в себя доли значений и целых чисел в пределах таких диапазонов и доли целых чисел в пределах таких диапазонов, если в контексте явно не указано иное. Таким образом, для иллюстрации, ссылка на числовой диапазон, такой как 1-10, включает в себя 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, а также 1,1, 1,2, 1,3, 1,4, 1,5 и т.д. и т.п. Ссылка на диапазон, такой как 1-50, таким образом, включает 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 и т.д., вплоть до и включая 50, а также 1,1, 1,2, 1,3, 1,4, 1,5 и т.д., 2,1, 2,2, 2,3, 2,4, 2,5, и т.д. и т.п.
Ссылка на множество диапазонов включает диапазоны, которые объединяют значения границ разных диапазонов внутри множества. Таким образом, для иллюстрации, ссылка на множество диапазонов, например, 1-10, 10-20, 20-30, 30-40, 40-50, 50-60, 60-75, 75-100, 100-150, 150-200, 200-250, 250-300, 300-400, 400-500, 500-750, 750-850, включает диапазоны, составляющие 1-20, 1-30, 1-40, 1-50, 1-60, 10-30, 10-40, 10-50, 10-60, 10-70, 10-80, 20-40, 20-50, 20-60, 20-70, 20-80, 20-90, 50-75, 50-100, 50-150, 50-200, 50-250, 100-200, 100-250, 100-300, 100-350, 100-400, 100-500, 150-250, 150-300, 150-350, 150-400, 150-450, 150-500 и т.д.
Как правило, изобретение раскрыто в настоящем описании с применением утвердительного языка для описания многочисленных вариантов осуществления и аспектов. Изобретение также конкретно включает варианты осуществления, в которых конкретный объект исключен полностью или частично, например, вещества или материалы, этапы и условия способа, протоколы или процедуры. Например, в некоторых вариантах осуществления или аспектах изобретения исключены материалы и/или этапы способа. Таким образом, хотя изобретение в целом выражено в настоящем описании не в терминах, которые изобретение не включает, тем не менее в настоящем описании раскрыты аспекты, которые явно не исключены в изобретении.
Описан ряд вариантов осуществления изобретения. Тем не менее, специалист в данной области, не отступая от сущности и объема изобретения, может вносить различные изменения и модификации изобретения, чтобы адаптировать его к различным вариантам использования и условиям. Соответственно, следующие примеры предназначены для иллюстрации, но никоим образом не ограничивают объем заявленного изобретения.
ПРИМЕР 1
В настоящем описании раскрыты генные конструкты для использования в методах генной терапии для лечения гемофилии. Кроме того, эти генные конструкты, кодирующие фактор VIII (FVIII), могут быть полезны in vitro при наладке систем экспрессии белка для получения рекомбинантного белка FVIII для введения. Каждый генный конструкт необязательно может содержать один или более контролирующих экспрессию элементов (напр., промотор), ген фактора VIII и другие регуляторные признаки, необходимые для экспрессии гена, такие как интроны, ITR, стоп-кодоны, поли-А-сигналы и т.д.
ПРИМЕР 2
Последовательности ДНК с пониженным содержанием CpG, кодирующие фактор VIII, и некоторые векторные конструкты, плазмидные конструкты и клеточные линии, продуцирующие AAV вектор.
18 различных вариантов нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG, кодирующих FVIII (SEQ ID NO:1-18), получали и оценивали в анализах экспрессии. Конструкты кДНК с пониженным содержанием CpG, кодирующие человеческий FVIII, получали с помощью промотора мутантного транстиретина (TTRmut) (SEQ ID NO:22).
Экспрессионная кассета AAV-SPK-8011 имеет последовательность нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG FVIII-X07 и капсид LK03 для упаковки. Капсид LK03 по существу гомологичен AAV3, непатогенному, одноцепочечному ДНК-вирусу с дефицитом естественной репликации.
Упаковывающая плазмида pLK03 представляет собой плазмидный конструкт из 7484 пар нуклеотидных оснований, который переносит гены AAV2 Rep и AAV-LK03 Cap под контролем промотора AAV2 p5, репликации бактериального происхождения, и ген устойчивости к канамицину в бактериальных клетках. В этом конструкте промотор p5 rep был перемещен на 3'-конец гена cap, чтобы уменьшить возможность образования видов AAV дикого типа или псевдодикого типа и увеличить выход вектора.
Клонированная ДНК для переноса гена представляет собой кассету генной экспрессии, упакованную в капсид AAV-LK03 в виде одноцепочечного гена, кодирующего человеческий фактор свертывания крови VIII (hFVIII) под контролем печень-специфичного промотора. Экспрессионная плазмида называется pAAV-TTRmut-hFVIII-X07. Она была модифицирована путем введения 4 точечных мутаций в промотор TTR, и кодирующей области, оптимизированной для увеличения экспрессии человеческого FVIII. Экспрессионная AAV кассета содержит следующие элементы:
ITR AAV2
Промотор транстиретина (TTR): Печень-специфичный промотор транстиретина (TTR) с 4 точечными мутациями, которые повышают экспрессию гена по сравнению с промотором дикого типа (Costa et al. 1991)
Синтетический интрон: полученный из гена человеческого фактора элонгации EF-1 альфа
Последовательность, кодирующая FVIII: с удаленным B-доменом, кодон-оптимизированная последовательность, кодирующая человеческий FVIII.
Поли-А-сигнальная последовательность бета-глобина кролика (Levitt et al. 1989).
ITR AAV2
Три конструкта из ДНК плазмид используют для трансфекции клеток 293 почки эмбриона человека для выработки вектора SPK-8011 посредством процесса без участия вирусов-хелперов(Matsushitaetal.1998):
Генная кассета (последовательность, кодирующая hFVIII, и ассоциированные регуляторные элементы) клонируют в плазмиду, чтобы получить векторную плазмиду, pAAV-TTRmut-hFVIII-X07.
Геном AAV вируса(rep и cap) с отсутствующими вирусными ITR клонируют в плазмиду, чтобы получить плазмиду для упаковки AAV, pLK03, предоставляющую требуемые гены AAV2 rep и AAV-LK03 cap in trans для упаковки AAV вектора. Вирусный промотор (p5) для гена rep был перемещен в плазмиде, чтобы предотвратить образование репликационно-компетентного AAV путем негомологичной рекомбинации.
Три гена из аденовируса-2 клонировали в третью плазмиду (pCCVC-AD2HP), обеспечивая необходимые гены вируса-хелпера для получения вектора. Плазмида pCCVC-AD2HPv2 представляет собой плазмидный конструкт из 11832 пар нуклеотидных оснований, который переносит три аденовирусных гена, РНК E2A, E4 и VA, для предоставления «хелперных» функций, необходимых для репликации и инкапсидации AAV вектора. Плазмида pCCVC-AD2HPv2 является производным pCCVC-AD2HP, в которой рестрикционный фрагмент DrdI-DrdI из 1882 пар нуклеотидных оснований, содержащий ген AmpR и часть последовательности pUC ori, был удален и заменен на фрагмент DrdI- DrdI из плазмиды pAAV2-hRPE65v2, содержащий целый ген KanR и часть последовательности pUC ori.
Клеточный субстрат, используемый для получения AAV вектора, является производным клеток первичных почек эмбриона человека (HEK) 293. Клеточная линия HEK293 представляет собой постоянную линию, трансформированную отрезанной ДНК аденовируса человека типа 5 (Ad5)(Grahametal.1977). Рабочий банк клеток происходит из главного банка клеток с охарактеризованными HEK293 из Центра клеточной и молекулярной терапии (CCMT) в Детской больнице Филадельфии (CHOP).
ПРИМЕР 3
Оценка AAV-hFVIII векторов на мышах.
Трансгенные конструкты FVIII (hFVIII) упаковали в аденоассоциированные вирусные (AAV) векторы и доставлены мышам. Кратко, в группах из 4 мышей с гемофилией A/CD4-/- в возрасте 8-10 недель выполняли инъекции 4×1012 вг/кг AAV-hFVIII векторов. Для количественного определения уровней FVIII в плазме использовали иммунодефицитных мышей, поскольку ингибирующие антитела к FVIII, которые вырабатываются у нормальных мышей, препятствуют долгосрочному анализу экспрессии FVIII.
Определяли уровни экспрессии FVIII, и в нескольких случаях они были выше, чем экспрессия, обеспечиваемая последовательностью CO3 (SEQ ID NO:21), кодирующей hFVIII. Как показано на Фигуре 2, векторы, содержащие AAV-SPK-8005, экспрессировали более высокие уровни hFVIII по сравнению с эталонным AAV-CO3-вектором. Неожиданно данные показали, что некоторые последовательности ДНК экспрессировали более высокие уровни FVIII, чем кодон-оптимизированная последовательность (CO3, SEQ ID NO:21), кодирующая FVIII.
В этом исследовании для обеспечения эффективной трансдукции (т.е. экспрессии трансгена hFVIII) гепатоцитов мыши использовали AAV-Spark8005 (также обозначенный SPK-8005), а не AAV-LK03-hFVIII (также обозначенный AAV-LK03-hFVIII и SPK-8011). Таким образом, это исследование предназначалось для оценки безопасности устойчивой экспрессии hFVIII, а не безопасности капсида AAV-LK03.
Выбрали три дозы используемой AAV-SPK-8005-hFVIII (4×1010, 8×1010, 1,6×1011 вг/мышь; приблизительно 1,6×1012, 3,2×1012, 6,4×1012 вг/кг, исходя из того, что масса мыши составляет 25 г) для получения уровней антигена hFVIII приблизительно 5-25, 25-75 и 50-150%, соответственно. Исследование задействовало 350 самцов мышей NOD/SCID (таблица 1) и было разделено на два субисследования: основное исследование (n=270) и биоаналитическое исследование (n=80). В основном исследовании 60 мышей обрабатывали либо наполнителем, либо одной из трех доз вектора (4×1010, 8×1010, 1,6×1011 вг/мышь). Десять мышей использовали для оценки клинических химических веществ на день 29/30, 10 - для гематологии, и оставшимся 10 животным была проведена оценка свертываемости. Эти 30 мышей были умерщвлены на 29 или 30 день. Другую группу из 30 мышей, которые были обработаны либо наполнителем, либо одной из трех доз вектора, аналогично обрабатывали в момент времени 87 день, и их умерщвляли на 87 день. По завершении в основном исследовании проводили наблюдение за всеми животными на предмет грубой патологии, а 10 животным/когорта в момент времени выполнялась комплексное гистопатологическое исследование (гематологическое подмножество). Еще одну когорту из 30 ранее не подвергавшихся экспериментам мышей использовали для проведения контрольных клинико-патологических исследований на исходном уровне.
В биоаналитическом исследовании 20 мышам инъекционно вводили наполнитель или одну из трех доз вектора. Этих животных подвергали кровотечению перед инъекцией испытуемого продукта и серийно в дни 15, 30, 60 и 87. Предполагаемый объем плазмы, собранный для каждого образца, должен был быть достаточным для определения как уровня антигена hFVIII, так и уровня D-димера. Однако, вследствие недостаточного объема собранной плазмы, во все моменты времени, за исключением конечного момента времени, проводили только один анализ плазмы отдельных мышей. Таким образом, некоторых мышей оценивали на уровни циркулирующего антигена hFVIII, а других на уровни D-димера. Поскольку для выполнения ELISA hFVIII требуется больше плазмы (минимум 50 мкл), чем для ELISA D-димера (минимум 20 мкл), выбор анализа определялся объемом собранной плазмы.
Таблица 1: Дизайн исследования на мышах
Группа № Тестируемый материал Уровень дозы (вг/мышь) Объем дозы (мкл/мышь) Концентрация дозы (вг/мл) Количество мышей
Основное исследование Биоаналитическое исследованиеa
Подмножество на день 29/30 Подмножество на день 87
Ранее не подвергавшиеся экспериментамb отсутствует Na na na na na na
1 контрольный препарат 0 200 0 30 30 20
2 AAV-SPK-8005c 4×1010 200 2×1011 30 30 20
3 AAV-SPK-8005c 8×1010 200 4×1011 30 30 20
4 AAV-SPK-8005c 1,6×1011 200 8×1011 30 30 20
а. Кровь собирали у всех мышей перед использованием препарата и на 15, 30, 60 и 87 дни исследования.
b. Кровь собрали всего у 30 мышей (10 ранее не подвергавшихся экспериментам мышей на оценку клинической патологии). Клинико-патологическое - основное исследование исходных контрольных уровней.
с. AAV-SPK-8005-hFVIII также обозначается SPK-8005
na=Не определено
Уровни антигена FVIII в плазме: Как показано на Фигурах 3A-3B, дозозависимый эффект наблюдался в циркулирующих уровнях антигена hFVIII в течение 87 дней. При малой дозе вектора (4×1010 вг/мышь) средние уровни hFVIII, составляющие 64+/-49 нг/мл, наблюдались на 60 день после инъекции, а при средних и высоких дозах наблюдались 115+/-60 нг/мл и 273+/58 нг/мл, соответственно. Эти уровни антигена представляют 43, 77 и 182% нормального антигена hFVIII (150 нг/мл эквивалентны 100%). Вследствие этого, у гемостатически нормальных мышей NOD/SCID при трех уровнях дозы можно было бы ожидать общие (мышиные+человеческие) уровни FVIII, составляющие 143%, 177% и 282%, соответственно. Таким образом, при использовании AAV-SPK-8005-hFVIII в плазме иммунодефицитных мышей наблюдались устойчивые и супрафизиологические уровни hFVIII, что сделало это исследование подходящим для оценки безопасности долговременной экспрессии hFVIII.
Уровни D-димера: Чтобы оценить возможности тромбообразования вследствие длительной экспрессии hFVIII у гемостатически нормальных, но иммунодефицитных мышей, измеряли уровни антигена D-димера. Средний уровень D-димеров до введения препарата среди 50 ранее не подвергавшихся экспериментам мышей составил 8,8+/-2,9 нг/мл. Данные на Фигуре 3C представляют средние уровни D-димера в четырех дозовых когортах. Не было статистического различия в уровнях D-димера между когортами во все пять моментов времени (однофакторный дисперсионный анализ p=0,46). Был сделан вывод, что уровень устойчивой экспрессии hFVIII составляет 194% от нормального (30 день) и в течение по меньшей мере 87 дней не связана с повышенным уровнем D-димеров в этом штамме мышей.
Клиническая и анатомическая патология: девять животных (6 основного исследования и 3 биоаналитического исследования) либо рано умертвили, либо обнаружили мертвыми во время хода исследования.
Провели гистопатологический анализ шести животных основного исследования, и у четырех из этих шести мышей обнаружили злокачественные лимфомы, включая одну мышь с инъецированным контролем в виде наполнителя. (Группа 1 животное 7729, Группа 3 животное 7871, Группа 3 животное 7880 и Группа 3 животное 7874). Биологическое значение неопластических находок считалось сомнительным. Статистическая значимость отдельных групповых сравнений с контрольной группой считалась маловероятной. Известно, что в этом штамме происходят высокая спонтанная частота лимфом тимуса, а также неопластическое увеличение селезенки и лимфатических узлов (Prochazka, Gaskins, Shultz, & Leiter, 1992).
У этих шести мышей не было находок, не являющихся неопластическими, связанных с тестируемым препаратом. Наблюдаемые микроскопические данные считались случайными и по своей природе обычно наблюдались в этом штамме и возрасте мышей и/или имели сходную частоту и тяжесть у контрольных и обработанных животных и поэтому считались не связанными с введением AAV-SPK-8005-hFVIII.
Оставшиеся 234 мыши, включенные в основное исследование, выжили до запланированных моментов времени. На протяжении всего исследования неблагоприятных или связанных с AAV-SPK-8005-hFVIII клинических наблюдений у мышей не возникло. Все клинические наблюдения в виде образования струпа, потери меха или тонкого покрова и изогнутого хвоста считались не связанными с введением AAV-SPK-8005-hFVIII, поскольку эти наблюдения являются общими для этого вида мышей и/или возникают во всех группах. Масса тела и увеличение массы тела были сопоставимы между группами доз и не зависели от введения AAV-SPK-8005-hFVIII. Очевидное значительное (p <0,05 или p <0,01) снижение в группе 4 средней массы тела с 32 дня до завершения исследования было связано с перераспределением массы в группе (некоторые более тяжелые животные были подвергнуты эвтаназии в группе 4 по сравнению с группой 1) после 29/30 дня и не было связано с введением AAV-SPK-8005-hFVIII. Мыши группы 4 набрали массу сопоставимым образом с другими группами на протяжении всего исследования. Все другие значимые (p <0,05 или p <0,01) различия в средних массах тела или прироста массы тела не считались связанными с AAV-SPK-8005-hFVIII, поскольку увеличение и уменьшение были единичными независимо от дозы и считались связанными с нормальными колебаниям массы тела мыши.
Клиническую патологию исследовали на животных основного исследования. Клинические химические параметры проанализировали у 10 мышей/когорта на момент времени (29/30 день и 87 день). Оценку свертываемости проводили в другой группе из 10 мышей/когорта, а гематологические измерения проводились в другой группе из 10 мышей/когорта. За всеми животными проводили наблюдение на предмет грубой патологии, а в группе из 10 мышей выполнялось патогистологическое исследование для гематологической оценки. В моменты времени либо на 29/30 день, либо на 87 день эвтаназии в гематологических или клинических химических параметрах у мышей не было изменений, связанных с AAV-SPK-8005-hFVIII. В целом, когда существовала значительная (p <0,05 или p <0,01) разница в гематологических или клинических химических параметрах по сравнению с контрольными значениями, различия не были связаны с AAV-SPK-8005-hFVIII, поскольку не были затронуты соответствующие параметры, и наблюдения не были дозозависимыми. Все изменения гематологических или клинических химических параметров были единичными, относились к одному животному, были такой величины изменений, которая обычно наблюдается у лабораторных животных и/или в пределах параметров клинической патологии, оцененных для ранее не участвовавших в экспериментах животных.
Изменения в параметрах свертываемости наблюдались у мышей, которым вводили AAV-SPK-8005-hFVIII. Дозозависимое снижение среднего aPTT наблюдалось в момент времени 29/30 дня, причем значения группы 3 и 4 значительно (p <0,05 или p <0,01) отличались от контрольных значений. Значительное (p <0,01) снижение средних значений aPTT наблюдалось также во всех группах AAV-SPK-8005-hFVIII по сравнению с контрольной группой в момент времени 87 дня. Уменьшение среднего протромбинового времени также наблюдалось в группах AAV-SPK-8005-hFVIII по сравнению с контрольной группой в 29/30 и 87 дни, однако снижение было статистически значимым (p <0,05 или p <0,01) для групп 2 и 3 на 29/30 день и 4 группы на 87 день. Средние значения фибриногена были сопоставимы между группами различных доза на всем протяжении исследования. Эти эффекты считаются связанными с фармакологическим эффектом AAV-SPK-8005-hFVIII и не считаются неблагоприятными. Как показано на Фигурах 3A-3C и обсуждалось выше, все мыши, которым инъецировали AAV-SPK-8005-hFVIII, экспрессировали антиген hFVIII и, таким образом, прогнозируют, что супрафизиологические уровни общего FVIII циркулируют в плазме этих гемостатически нормальных мышей. Ожидается, что эти уровни будут влиять на параметры свертываемости, такие как снижение aPTT и протромбиновое время.
Группу из 120 мышей основного исследования (30/когорта) умертвили на 29 или 30 день исследования. У этих мышей не наблюдалось грубой патологии, связанной с AAV-SPK-8005-hFVIII. Анализ массы органов показал, что абсолютные массы сердца и почек различались между 10 животными и контрольными и животными, инъецированными вектором, умерщвленными на 29 день; однако этого не наблюдалось между 10 контрольными животными и животными, инъецированными вектором, умерщвленными на 30 день, поэтому значение этого открытия неясно. Не было микроскопических сопоставлений со статистически значимым увеличением абсолютной массы сердца и почек (и этой массы в процентах от массы мозга), наблюдавшихся на 29 день. Кроме того, масса сердца и почек в процентах от массы тела существенно не отличалась от контрольных. Наблюдалось значительное увеличение средней абсолютной массы легкого у животных группы 2, но это считалось случайным и не связанным с AAV-SPK-8005-hFVIII, поскольку не было зависимости от дозы. Никаких других изменений массы тела в 29/30 день отмечено не было.
При патогистологическом анализе на 29/30 день было пять животных с неопластическими находками. Бронхиолоальвеолярная аденома наблюдалась у одного животного группы 2 (7824). Злокачественную лимфому наблюдали у одного животного группы 2 (7838), у одного животного из группы 3 (7885) и у одного животного из группы 4 (7941). Аденому наблюдали в желудке у одного животного группы 4 (7942). В первой группе неопластических находок не наблюдалось. Биологическая значимость неопластических находок считается сомнительной. Статистическая значимость отдельных групповых сравнений с контрольной группой маловероятна. Однако следует отметить, что неопластические находки наблюдались только у обработанных животных на 29/30 день. В отсутствие данных ретроспективного контроля для мышей NOD SCID в сопоставимом возрасте эти неопластические находки неубедительны.
Микроскопических находок, связанных с продуктом, не отмечено. Наблюдаемые микроскопические находки считались случайными, по своей природе обычно наблюдались в этом штамме и возрасте мышей, и/или имели сходную частоту и тяжесть у контрольных и обработанных животных и поэтому считались не связанными с введением AAV-SPK-8005 -hFVIII.
Другую группу из 120 мышей основного исследования (30/когорта) умертвили через 87 дней после инъекции и подвергли анализу аналогичным образом. Несмотря на то, что не наблюдалось грубой патологии, считающейся связанной с AAV-SPK-8005-hFVIII, поражения наблюдали у четырех мышей (один увеличенный тимус, не исследованный гистологически, один увеличенный тимус коррелировавший со злокачественной лимфомой, одна увеличенная селезенка, не исследованная гистологически, одно обесцвеченное яичко). В отличие от того, что наблюдалось на 29/30 день, наблюдалось уменьшение массы сердца, увеличение массы не наблюдалось. Кроме того, наблюдалось снижение массы печени. Статистически значимые изменения в массе сердца были небольшими и явно не связаными с дозой. Статистически значимое изменение абсолютной массы печени было небольшим, а соотношение массы печени к массе тела была сопоставима между группами. Поэтому небольшие изменения были интерпретированы как случайные и не связанные с введением AAV-SPK-8005-hFVIII. Никакие другие изменения веса тела на 87 день отмечены не были.
Патогистологический анализ, проведенный на мышах на 87 день после инъекции, выявил четырех животных с неопластическими находками. Злокачественную лимфому наблюдали у одного животного группы 2 (7808) и трех животных группы 3 (7868, 7869 и 7870). В 1 группе неопластических находок не наблюдалось. Статистическую значимость сравнений отдельных групп с контрольной группой считали сомнительной. Однако следует отметить, что неопластические находки наблюдались только у обработанных животных на 87 день. В отсутствие данных ретроспективного контроля для мышей NOD SCID в сопоставимом возрасте эти неопластические находки неубедительны.
В отношении изменений, не являющихся неопластическими, не было отмечено никаких микроскопических данных, связанных с тестируемым продуктом. Наблюдаемые микроскопические находки считались случайными, обычно наблюдаемыми в этом штамме и возрасте мышей, и/или имели сходную частоту и тяжесть у контрольных и обработанных животных и поэтому считались не связанными с введением AAV-SPK-8005 -hFVIII.
Заключение: Однократное введение AAV-SPK-8005-hFVIII в дозах, составивших 4×1010, 8×1010 или 1,6×1011 вг/мышь или контрольного изделия путем внутривенной инъекции самцам мышей NOD/SCID переносилось хорошо. AAV-SPK-8005-hFVIII не приводил к связанной с тестируемым продуктом смертности, неблагоприятным клиническим наблюдениям или изменениям в массе тела. Не было токсикологически важных различий в массе органов, гематологических параметрах или параметрах свертываемости, а также связанной с обработкой грубой патологии или патогистологических находок у самцов мышей на 29/30 дни или на 87 день. Уменьшение среднего aPTT и протромбинового времени, которое наблюдалось в оба момента времени эвтаназии, считались связанными с супрафизиологическими уровнями FVIII, которые экспрессировались у этих гемостатически нормальных мышей и не были неблагоприятными. В рамках основного исследования (окончательные оценки) злокачественные новообразования наблюдались у девяти из 60 мышей, инъецированных вектором, или у 15% животных. У семи из этих девяти мышей были лимфомы, которые чаще всего обнаруживались в лимфатических узлах. Известно, что этот иммунодефицитный штамм мышей обладает высокой спонтанной частотой лимфом (Prochazka et al., 1992) и продолжительностью жизни всего 8,5 месяцев. Таким образом, частота опухолей, наблюдаемых в этом исследовании, вряд ли связана с введением AAV-SPK-8005-hFVIII. Целью этого исследования было оценить безопасность устойчивой экспрессии hFVIII в течение приблизительно трех месяцев. Оно не был предназначено для оценки капсида AAV-SPK. Для обеспечения высокого уровня экспрессии hFVIII использовали AAV-SPK и штамм иммунодефицитных мышей. Введение AAV-SPK-8005-hFVIII мышам NOD/SCID привело к стойким и высоким уровням hFVIII. Таким образом, это исследование было подходящим для оценки безопасности долгосрочной экспрессии hFVIII.
ПРИМЕР 4
Оценка AAV-SPK-8005 и AAV-SPK-8011 (капсида LK03, FVIII-X07 (SEQ ID NO:7)) векторов у приматов, не являющихся людьми (NHP).
На основании результатов, полученных на мышах, трансгенные конструкты FVIII, упакованные в аденоассоциированные вирусные (AAV) векторы, доставляли приматам, не являющимся людьми (NHP).
Кратко, при исследовании с целью определения оптимальной дозы у самцов яванских макак проводили однократную внутривенную инфузию AAV-SPK-8005 или AAV-SPK-8011 (капсида LK03). Экспрессию hFVIII оценивали в течение 8 недель. Группы животных и уровни дозы для каждой из них показаны на Фигуре 4.
NHP получали внутривенную инфузию в подкожную вену с применением градуированного инфузионного насоса на протяжении приблизительно 30 минут. Предварительно макак подвергали скринингу на нейтрализующие антитела против капсида AAV. Первоначально у всех обработанных животных определяли наличие титра <1:3 перед введением вектора. Это было сделано для обеспечения успешной трансдукции печени, поскольку даже низкие титры ингибируют поглощение вектора клетками печени после системной доставки (Jiang et al., 2006). Все животные также были отрицательными на наличие нейтрализующих антител против FVIII до переноса гена.
Уровни hFVIII в плазме измеряли посредством специфического для человека ELISA, который не обнаруживает эндогенный FVIII макак. Все животные в исследовании, за исключением одной макаки в когорте средней дозы, экспрессировали hFVIII после доставки вектора. Уровень антигена человеческого фактора VIII достиг пика примерно через 1-2 недели после введения вектора. Через одну неделю после переноса гена NHP, трансдуцированные 2×1012 вг/кг AAV-SPK-8005, экспрессировали уровни антигена hFVIII, составляющие 13,2±3% (средняя ± стандартная ошибка среднего). Через неделю после переноса гена средние уровни hFVIII у двух из трех животных в следующей когорте лечения (5×1012 вг/кг) составили 27±0,2%. Человеческий FVIII не смогли обнаружить у третьей макаки в этой когорте в любой момент времени. При повторном тестировании образцов плазмы исходного уровня было установлено, что это животное было фактически положительным на наличие антител против AAV, и что изначально определенный титр <1:3 был неверным. Наконец, при самой высокой тестируемой дозе, составившей 1×1013 вг/кг, пиковые уровни антигена hFVIII, составившие 54,1±15,6%, наблюдали после инфузии AAV.
Как и ожидалось в исследованиях на NHP, экспрессирующих человеческий FIX, экспрессия человеческого FVIII снижалась примерно у одной трети животных в течение 4 недели, что сопровождалось появлением ингибирующих антител к hFVIII у этих 3 макак (помеченных символом ε на Фигуре 5). Развитие видоспецифичных антител к hFVIII ранее было зарегистрировано у приматов, не являющихся людьми и, вероятно, связано с различиями в нескольких аминокислотных остатках между человеческим трансгенным продуктом и эндогенным FVIII яванских макак (McIntosh, J. et al., Blood 121:3335-44 (2013)).
Для оценки возможного тромбообразования вследствие продолжительной экспрессии человеческого FVIII в этом исследовании были измерены уровни антигена D-димера. Следует отметить, что отчеты о клинической значимости или даже нормальных значениях уровней антигена D-димера у яванских макак скудны; в качестве эталонного нормальный диапазон для D-димеров у людей составляет ниже 500 нг/мл. Поскольку животные экспрессируют эндогенный FVIII яванских макак, выработка hFVIII в результате переноса печеночного гена приведет к супрафизиологическим уровням активности FVIII.
Животное, которому вводили дозу 5×1012 вг/кг, но которое не экспрессировало человеческий FVIII, имело пик 863 нг/мл через две недели после инфузии AAV. Остальные животные не показали значительного увеличения уровней антигена D-димера по сравнению с исходными значениями. В совокупности эти результаты показывают, что экспрессия человеческого FVIII на уровнях, нацеленных в этом исследовании, не связана с повышенным риском тромбоза.
Через четыре недели после введения вектора не было очевидных изменений, связанных с векторами. Функциональные печеноченые тесты показали нормальные значения с незначительными колебаниями, которые, по-видимому, не были связаны с дозой вектора, поскольку в большинстве случаев они присутствовали до введения дозы (Фигура 6).
Уровни D-димера вплоть до 5 недели показаны на Фигуре 7. У одного животного в когорте с высокой дозой было небольшое (577 нг/мл) преходящее повышение уровня D-димера через одну неделю после введения вектора, когда циркулирующий человеческий FVIII достиг пика около 100%; после этого единственного измерения подъема уровни D-димера быстро возвратились к норме. Примечательно, что не было корреляции между уровнями D-димера и уровнями антигена hFVIII (Фигура 7, нижние панели).
Для вектора AAV-SPK-8011 (капсид LK03) три когорты яванских макак (n=3) обрабатывали повышающимися дозами AAV-SPK-8011 (капсида LK03) (2×1012, 6×1012 и 2×1013 (вг/кг); Фигура 4). Животным проводили мониторинг на предмет клинических наблюдений, клинической патологии массы тела (клинический химический, гематологический, коагулографический анализ, анализ мочи). Кроме того, на протяжении всего исследования оценивали уровни антигена hFVIII, ингибирующих FVIII антител и уровни D-димера.
Данные антигена hFVIII показаны на Фигуре 9. Средние уровни антигена hFVIII достигли пика приблизительно через 2-3 недели с 22,3±6,2% hFVIII, наблюдаемых в когорте с малой дозой, и 61,6±15,7% и 153±58,1% наблюдаемых в когортах со средней и высокой дозой, соответственно, с применением 150 нг/мл в качестве 100% нормального уровня антигена hFVIII (Фигуры 9A-9D). Таким образом, серотип LK03 AAV капсида эффективно трансдуцирует гепатоциты NHP in vivo в отличие от мышиной печени.
Уровни экспрессии FVIII, достигнутые с использованием AAV-SPK-8011 (капсид LK03), сравнивали с описанными уровнями FVIII, полученными с помощью капсидов AAV5 и AAV8 на основе AAV векторов для доставки FVIII. Сравнительный анализ показал, что уровни FVIII, достигнутые с использованием AAV-SPK-8011 (капсид LK03), были выше, чем описанные уровни FVIII, доставленные с помощью AAV векторов с капсидами AAV5 и AAV8 (Фигура 10).
Гуморальный ответ на hFVIII в плазме яванских макак измеряли после введения либо 2×1012, 6×1012, либо 2×1013 вг/кг AAV-SPK-8011 (капсида LK03). Животных оценивали на антитела IgG против hFVIII с помощью ELISA в начале и в указанные моменты времени.
Несмотря на терапевтические уровни hFVIII, наблюдаемые вскоре после переноса генов, у большинства животных уровни начали снижаться примерно на 4 неделе. Это согласуется с предыдущими исследованиями с использованием другого вектора AAV-hFVIII и коррелирует с увеличением антител против hFVIII. Выработка антител против FVIII также наблюдалась другими после переноса печеночного гена AAV-hFVIII у NHP (McIntosh, J. et al., Blood 121:3335-44 (2013)).
ПРИМЕР 5
Биораспределение капсида AAV-LK03 у приматов, не являющихся людьми (NHP).
Биораспределение капсида AAV-LK03 у приматов, не являющихся людьми, оценивали в исследовании, не являющемся GLP. Внутривенное введение AAP-LK03-инкапсидированного вектора, кодирующего человеческий фактор IX свертывания крови (AAV-LK03-hFIX), показало, что двумя основными тканями-мишенями являются печень и селезенка (Фигура 11). Тропизм к селезенке не является уникальной характеристикой AAV-LK03. Например, капсид AAV5, который использовали в нескольких испытаниях генной терапии, направленной на печень (напр. NCT02396342, NCT02082860, NCT02576795) с показателями высокой безопасности, нацеливает селезенку с такой же, если не более высокой, эффективностью, чем он нацеливает печень приматов, не являющихся людьми (Paneda et al. 2013). Экспрессионная кассета SPK-8011 использует мышиный транстиретин или промотор TTR, который считается печень-специфичным (Costa, 1991). Для дополнительной поддержки печень-специфичной природы промотора анализ экспрессии на основе ПЦР измерял экспрессию полученного из вектора FVIII в печени и селезенке мышей после введения другого AAV вектора, упакованного в такую же экспрессионную кассету, как и SPK-8011 (т.е. AAV-SPK-8005). Как показано на Фигуре 12, экспрессия человеческого FVIII в селезенке на несколько порядков ниже, чем в гепатоцитах.
Это первое клиническое исследование для использования AAV-LK03, хотя и проводили исследования с использованием других AAV векторов, включая некоторые для гемофилии B (NCT02396342, NCT01620801 NCT00076557, NCT02484092, NCT02618915, NCT00979238, NCT01687608) и один для гемофилии A (NCT02576795). В исследовании, проведенном Детской исследовательской больницей Св. Иуды в сотрудничестве с университетским колледжем Лондона, использовался вектор AAV8, несущий самокомплементарный геном, кодирующий кодон-оптимизированную кДНК человеческого фактора IX, scAAV2/8-LP1-hFIXco. Десять субъектов, получивших вектор, имели стабильные уровни IX фактора, составившие 1-6% через медианную 3,2 года, и все участники либо прекратили, либо уменьшили использование профилактического заместительного фактора(Nathwanietal.2014). В клиническом исследовании при гемофилии A использовался вектор AAV5, кодирующий человеческий FVIII (NCT02576795). Предварительные данные, представленные в 2016 году, демонстрируют увеличение активности FVIII после переноса гена у нескольких субъектов, варьирующей от 2 до 60% с последующим наблюдением вплоть до 16 недель (BioMarin, April 2016).
ПРИМЕР 6
Эффективность трансдукции капсида AAV-LK03, проанализированная в условиях in vitro.
Первичные гепатоциты происхождения от яванских макак и от человека трансдуцировали вектором AAV-LK03, экспрессирующим люциферазу, с четырьмя различными множественностями заражения (MOI), варьирующими от 500 до 62500 векторных геномов на клетку. Через семьдесят два часа после трансдукции анализировали экспрессию люциферазы.
Капсид AAV-LK03 однозначно продемонстрировал значительно более высокую эффективность трансдукции человеческих гепатоцитов в культуре. В типичном примере, показанном на Фигуре 13, LK03 продемонстрировал примерно в 5 раз более высокую эффективность трансдукции гепатоцитов человека по сравнению с гепатоцитами приматов, не являющихся людьми, in vitro. Важно отметить, что эти результаты согласуются между несколькими MOI и исследованиями с повторяющимся дизайном.
ПРИМЕР 7
Оценка трансмиссии зародышевой линии кодируемых вектором последовательностей.
Оценка возможности трансмиссии зародышевой линии кодируемых вектором последовательностей является крайне важной для перехода к клиническому применению стратегий переноса генов. Это исследование было разработано со следующими целями: (1) оценить попадание AAV-SPK и AAV-LK03 в сперму и определить кинетику векторного клиренса; и (2) обеспечить, чтобы введение AAV кроликам было успешным, что было бы подтверждено анализом антигена человеческого фактора IX и антител против FIX в плазме.
В этом исследовании использовали кроличью модель для анализа попадания в сперму вектора из двух векторных капсидов, а именно AAV-SPK и AAV-LK03 (Таблица 2). Попадание AAV-SPK в сперму показало как зависимую от дозы, так и зависимую от времени кинетику, причем более высокая доза показала повышенные уровни векторных последовательностей в сперме в течение более длительного времени. Кинетика была очень похожа на кинетику, которую наблюдали ранее с векторами AAV8 (Favaro P, et al., Molecular Therapy 17:1022-1030 (2009)). Напротив, ограниченное попадание в сперму происходило с вектором AAV-LK03. Это маловероятно вследствие более низкого общего воздействия вектора на мышей, инъецированных AAV-LK03, так как уровни hFIX, экспрессируемые из AAV-LK03, были сходны или выше, чем наблюдаемые с AAV-SPK-вектором, и способность опосредовать экспрессию полученного из печени hFIX может использоваться как суррогат для переноса генов.
Таблица 2: Дизайн исследования
Группа № Тестируемый материал Уровень дозы (вг/кг) Число животных
1 AAV-SPK-hFIX.C16 1×1012 5
2A AAV-SPK-hFIX.C16 1×1013 3
2B* AAV-SPK-hFIX.C19-PD 1×1013 2
3 AAV-LK03-hFIX.C16 1×1012 5
4 AAV-LK03-hFIX.C16 1×1013 5
5 Носитель н/о 2
* В когортах AAV-SPK использовали две различные последовательности, кодирующие hFIX, т. е. три животных получали AAV-SPK-hFIX.C16, и два животных были обработаны AAV-SPK-hFIX.C19-Padua (PD). Поскольку основная цель этого исследования заключалась в оценке передачи зародышевой линии двух новых AAV капсидов, это считалось приемлемым. Основными отличиями между трансгенами hFIX.C16 и hFIX.C19-Padua являются то, что последний является кодон-оптимизированным и вариант hFIX с высокой специфической активностью.
Способы
Животные и векторы: Новозеландских белых кроликов получили из Covance Research Products (Денвер, штат Пенсильвания) и обрабатывали в возрасте 6 месяцев AAV векторами, произведенными в Детской больнице Philadelphia Vector Core. Тестируемые и контрольные продукты вводили через краевую ушную вену.
Сбор спермы: для сбора спермы использовалось искусственное влагалище (AV), разработанное исследователями Argus Research Lab, Inc. (Horsham, PA). В AV поместили презерватив, у которого удалили наконечник, и присоединили пробирку для сбора образцов, а AV заполнили теплой водой (55°C). Образцы спермы получали от матерого кролика-самца, стимулированного самкой животного-раздражителя. Образцы собирали перед инъекцией и через 1, 2, 4, 6, 8 и 10 недель и 3-8 месяцев после инъекции. Образцы спермы отправляли в Charles River Laboratories (Reno, NV) для анализа количества копий вектора с использованием проверенного количественного ПЦР-анализа в реальном времени.
Сбор образцов крови: Кровь собирали посредством пункции медиальной ушной артерии или краевой ушной вены перед введением AAV и в несколько моментов времени (до, через 1 неделю и 1-6 месяцев после инъекции). После сбора каждый образец помещали на лед, обрабатывали с получением плазмы и хранили в морозильнике при -80°C до момента отправки спонсору клинического исследования, где он также содержался в морозильнике при -80°C до тех пор, пока не будет проведен анализ.
Уровни человеческого фактора IX: Уровни белка человеческого FIX (hFIXв плазме кроликов измеряли количественно с использованием сэндвич-анализа FIX ELISA kit (Affinity Biologicals, FIX:EIA) определяли следующим образом: во-первых, лунки микротитровального планшета покрыли захватывающим антителом, которое распознает hFIX и которое не реагирует перекрестно с эндогенным кроличьим FIX (разведение 1:1000). Эталонную плазму с известной концентрацией человеческого hFIX разбавляли для получения стандартной кривой (самый высокий стандарт [500 нг/мл] серийно разводили до 7,8 нг/мл). Образцы плазмы разводили в зависимости от ожидаемой концентрации, чтобы значения поглощения попали в пределы стандартной кривой. После добавления образцов в лунки планшет инкубировали при комнатной температуре в течение 90 минут и затем промывали три раза. В планшет добавляли конъюгированное с пероксидазой хрена (HRP) вторичное антитело к hFIX для связывания с захватывающим FIX (разведение 1:100). После промывания планшета для удаления несвязанного конъюгированного антитела активность пероксидазы измеряли после инкубации с 1-Step Ultra TMB Substrate (Thermo Scientific, номер по каталогу 34028). Реакцию останавливали 1 М серной кислотой и считывали на считывателе микропланшетов SpectraMax M2e при значении оптической плотности 450 нм. Полученное значение поглощения пропорционально концентрации hFIX, присутствующей в образце.
Уровни антител против hFIX: Анализ анти-hFIX концептуально и методологически подобен описанному выше ELISA hFIX. Кратко, планшеты покрывали 1 мкг/мл рекомбинантного hFIX (Benefix, Wyeth). После инкубации образцов плазмы для обнаружения использовали козьи противокроличьи антитела IgG против HRP-конъюгированного антитела (SIGMA, A4914). Образцы с уровнем IgG в два раза выше, чем исходные показатели, считались положительными.
Результаты
Попадание вектора в сперму
Новозеландским кроликам инъецировали векторы AAV-SPK или AAV-LK03 (n=5 на группу), экспрессирующие hFIX под контролем печень-специфического промотора ApoE/hAAT в двух дозах: 1×1012 вг/кг (малая доза) или 1×1013 вг/кг (высокая доза). Образцы спермы от всех кроликов были получены до инъекции и через 1, 2, 4, 6, 8 и 10 недель и 3-8 месяцев после инъекции. Из образцов спермы выделили геномную ДНК и анализировали на наличие последовательностей hFIX с применением анализа количественной полимеразной цепной реакции (кПЦР). Валидированный анализ был разработан Charles River Laboratories (Reno, NV). Образцы спермы считали позитивными, если в них определяли уровни hFIX выше нижнего предела количественного определения (LLOQ) (10 копий/реакция или 50 копий/мкг при приблизительно 200 нг/реакция). Образцы спермы от кроликов, которые были негативными по последовательностям вектора hFIX по меньшей мере в течение трех последовательных моментов времени, в дальнейшем не анализировали.
ДНК предварительно обработанной спермы от всех животных, инъецированных вектором и наполнителем, была отрицательной на последовательности hFIX. Сперма от кроликов, инъецированных малой дозой AAV-SPK-hFIX (1×1012 вг/кг) в целом была негативной на последовательности hFIX, за исключением трех животных, у которых были низкие уровни на 1-4 неделях (максимально 3151 копий/мкг ДНК или ~ 1×10-2 копий/гаплоидный геном). Ни один из образцов, собранных не на 4 неделе, не был положительным на векторные последовательности (Таблица 3). При высокой дозе AAV-SPK-hFIX (1×1013 вг/кг) присутствовали более высокие уровни вектора (максимум 178 352 копий/мкг ДНК или 0,59 копий/гаплоидный геном), и потребовалось больше времени для очистки вплоть до 5 месяца у пяти животных (Таблица 3). За исключением одного животного (1 неделя), кролики, обработанные малой дозой AAV-LK03-hFIX, не показали попадания последовательностей hFIX в сперму (Таблица 3). Кроме того, очень небольшое попапдание вектора в сперму наблюдалось при десятикратно более высокой дозе, причем у трех животных не было никаких последовательностей hFIX во все моменты времени, а у двух животных были низкие уровни на 2 неделе (максимально: 392 копий/мкг ДНК или 1,3×10-3 копий/гаплоидный геном), но не в более поздние моменты времени (Таблица 3). Среди двух животных, инъецированных наполнителем, у одного был ложный результат на 1 неделе (56 копий/мкг ДНК) и на 5 месяц (96 копий/мкг ДНК). Эти значения близки к LLOQ и, скорее всего, представляют собой контаминацию на стадии сбора спермы или стадии получения ДНК.
Таблица 3: Выявление последовательностей ДНК hFIX в сперме кроликов после введения AAV-SPK и AAV-LK03 в виде функции времени.
Вектор Доза Перед W1 W2 W4 W6 W8 W10 M3 M4 M5 M6 M7 M8
SPK малая 0/5 3/5 3/5 1/5 0/5 0/5 0/5 0/5 0/5 0/5 Ndt Ndt Ndt
SPK высокая 0/5 5/5 4/5 4/5 3/5 1/5 2/5 0/5 1/5 0/5 0/5 0/5 0/5
LK03 малая 0/5 1/5 0/5 0/5 0/5 0/5 0/5 0/5 0/5 0/5 Ndt Ndt Ndt
LK03 высокая 0/5 2/5 2/5 0/5 0/5 0/5 0/5 0/5 0/5 0/5 Ndt Ndt Ndt
Количество животных из 5 с положительными образцами спермы.
W=неделя; M=месяц; Ndt=не определяли
Уровни человеческого FIX антигена в плазме
Циркулирующие уровни hFIX измеряли в образцах плазмы у животных, описанных выше в указанные моменты времени (Фигуры 14A-14B и Таблица 4).
Таблица 4: уровни экспрессии человеческого FIX (нг/мл) после введения вектора
День после инъекции
Животное Капсид Трансген вг/кг 0 7 28 56 94 112 147 175
1 SPK FIX.C16 1E+12 ND ND 49,0 39,7 70,6 126,1 147,9 102,4
2 SPK FIX.C16 1E+12 ND ND 50,0 104,9 139,5 147,0 171,8 198,4
3 SPK FIX.C16 1E+12 ND ND 36,4 76,5 95,0 114,8 114,7 78,9
4 SPK FIX.C16 1E+12 ND ND 148,2 254,4 214,5 291,5 236,7 274,9
5 SPK FIX.C16 1E+12 ND ND ND ND 31,3 10,5 13,4 ND
6 SPK FIX.C16 1E+13 ND 347,9 2341,0 1224,5 1102,2 1031,6 959,0 830,7
7 SPK FIX.C16 1E+13 ND 1564,1 14174,2 5311,2 3281,9 3300,9 2405,9 2640,8
8 SPK FIX.C16 1E+13 ND 2344,8 756,5 1515,0 8305,2 10907,0 5838,9 4352,8
9 SPK FIX.C19-PD 1E+13 ND 103,3 234,4 ND 40,4 83,4 316,6 381,9
10 SPK FIX.C19-PD 1E+13 ND 642,2 2873,5 ND 31,6 14,1 14,1 ND
11 LK03 FIX.C16 1E+12 ND 333,1 604,9 1659,2 2151,8 1914,7 1358,4 1120,9
12 LK03 FIX.C16 1E+12 ND 2138,4 532,4 3199,8 1306,6 985,3 732,0 593,4
13 LK03 FIX.C16 1E+12 ND 2465,9 45,3 84,9 134,4 168,6 127,0 84,9
14 LK03 FIX.C16 1E+12 ND 886,1 289,0 636,4 551,7 547,4 582,3 410,4
15 LK03 FIX.C16 1E+12 ND ND ND 35,0 109,0 30,2 24,8 ND
16 LK03 FIX.C16 1E+13 ND 90,7 404,6 2228,9 1265,4 899,5 715,6 693,2
17 LK03 FIX.C16 1E+13 ND 424,7 546,6 490,2 695,9 437,0 964,4 821,4
18 LK03 FIX.C16 1E+13 ND 1255,6 1787,2 6079,2 4628,5 1874,0 1576,0 2226,4
19 LK03 FIX.C16 1E+13 ND 518,4 8917,2 2772,7 2905,7 1195,0 1877,0 1899,3
20 LK03 FIX.C16 1E+13 ND 2615,0 10782,8 8075,5 6908,0 6630,8 6226,0 5489,2
21 Носитель FIX.C16 N/A ND ND ND 28,9 31,1 16,1 ND ND
22 Носитель FIX.C16 N/A ND ND ND 29,2 30,6 11,9 ND ND
ND=Не определено
В когортах малых доз AAV-LK03 вектор оказался более мощным вектором по сравнению с AAV-SPK, как измерено уровнями циркулирующего hFIX. Через шесть месяцев после обработки AAV-LK03 или AAV-SPK средние уровни hFIX составляли 552±217 нг/мл против 164±45 нг/мл, соответственно (Фигура 14A). Однако эта разница не достигла статистической значимости, вероятно, из-за ограниченного числа животных. Интересно, что через семь дней после введения вектора AAV-SPK экспрессия hFIX не была обнаружена, тогда как в тот же момент времени наблюдали стойкую экспрессию, полученную из AAV-LK03. Низкие уровни hFIX у двух животных (кролики #5 и #15), едва определяемые выше исходного, могут быть связаны с неудачно выполненными инъекциями. Устранение этих животных из анализа не изменило отсутствие статистической значимости.
Эти два капсида оказались одинаково мощными при тестировании в высоких дозах. В частности, через шесть месяцев после обработки 1×1013 вг/кг AAV-LK03 или AAV-SPK средние уровни hFIX составили 2226±868 нг/мл против 2052±909 нг/мл, соответственно (Фигура 14B). Примечательно, что две последовательности, кодирующие hFIX, использовались в группе AAV-SPK, т. е. трое животных получали AAV-SPK-hFIX.C16, а двух животных обрабатывали AAV-SPK-hFIX.C19-Padua (PD). Основные различия между трансгенами hFIX.C16 и hFIX.C19-PD заключаются в том, что последний является кодон-оптимизированным и кодирует вариант hFIX с высокой специфической активностью, который влияет на биологическую активность белка, но не на уровни антигена, как измерено с помощью ELISA.
Антитела против FIX
Исходя из сообщений других авторов, предполагалось, что примерно у 20-40% животных будут вырабатываться антитела против человеческих векторов FIX. (Favaro P, et al., Molecular Therapy 17:1022-1030 (2009)). Фигуры 15A-15B и Таблицы 5A и 5B обобщили уровни IgG против AAV в этом исследовании. Интересно, что три из пяти животных, получавших низкую дозу AAV-LK03, были положительными на антитела к человеческому FIX через один месяц после введения вектора, но уровни IgG со временем снижались, и только у одного животного были почти в два раза выше исходных уровней в конце исследования (Таблица 5B). Кинетика появления анти-FIX IgG и невыраженного клиренса в этой группе кроликов хорошо коррелирует с резким снижением уровней hFIX, наблюдаемых на 28 день, после чего последовал «рикошет» циркулирующего hFIX (Фигура 14A). Кроме того, высокие титры антител против hFIX у двух животных, получавших AAV-SPK-hFIX.C19-Padua, могут объяснить низкие уровни экспрессии у этих двух кроликов.
Таблица 5A: Краткий обзор образования антител (IgG, нг/мл) к человеческому FIX у отдельных кроликов, инъецированных AAV
День после инъекцию
Животное Капсид Трансген вг/кг 0 7 28 56 94 112 147 175
1 SPK FIX.C16 1,00E+12 1390 1134 2864 8627 1631 1261 1210 1088
2 SPK FIX.C16 1,00E+12 1706 1143 4670 7132 2834 2733 3294 3180
3 SPK FIX.C16 1,00E+12 1904 1128 2919 2394 1964 1792 1753 1688
4 SPK FIX.C16 1,00E+12 1256 1084 789 1692 1463 1034 1367 1457
5 SPK FIX.C16 1,00E+12 1086 1004 701 664 834 956 774 785
6 SPK FIX.C16 1,00E+13 565 836 940 814 1246 721 1326 1592
7 SPK FIX.C16 1,00E+13 792 721 666 709 960 829 909 1084
8 SPK FIX.C16 1,00E+13 1016 863 1729 1705 2539 1619 1406 2143
9 SPK FIX.C19-PD 1,00E+13 768 783 1330 1076 11241 893 37141 12634
10 SPK FIX.C19-PD 1,00E+13 566 541 4556 1398 9356 1270 20050 9167
11 LK03 FIX.C16 1,00E+12 1606 1821 2150 2283 1973 1788 1561 1580
12 LK03 FIX.C16 1,00E+12 813 1391 7993 1603 1087 - - 1505 1702
13 LK03 FIX.C16 1,00E+12 699 N/A 8153 610 680 903 871 1040
14 LK03 FIX.C16 1,00E+12 776 756 534 760 699 709 636 769
15 LK03 FIX.C16 1,00E+12 890 891 2320 693 561 843 972 1102
16 LK03 FIX.C16 1,00E+13 1479 2050 2579 1501 1487 1622 1526 1768
17 LK03 FIX.C16 1,00E+13 1979 1801 1506 1087 1196 837 1025 876
18 LK03 FIX.C16 1,00E+13 2074 1968 1368 1236 1284 1247 1107 1067
19 LK03 FIX.C16 1,00E+13 1131 1270 792 1237 2415 2463 1529 1597
20 LK03 FIX.C16 1,00E+13 967 2065 1250 2537 1927 1459 1343 1603
21 Носитель FIX.C16 N/A 899 1074 1124 844 853 916 1017 961
22 Носитель FIX.C16 N/A 477 702 891 471 460 541 536 597
N/A, не установлено
Таблица 5B: количество кроликов на группу, положительных на анти-hFIX антитела с течением времени
1×1012 вг/кг 1×1013 вг/кг
AAV-SPK AAV-LK03 AAV-SPK AAV-LK03
День 28 2/5 3/5 1/5 0/5
День 175 0/5 1/5 4/5 0/5
Заключение
Попадание векторов AAV-SPK и AAV-LK03 в сперму количественно определяли с использованием валидированного анализа в течение курса до восьми месяцев. Последовательность векторов AAV-SPK была обнаружена в сперме всех пяти кроликов через неделю после введения высокой дозы вектора. Большинство животных очистились от последовательностей на 10 неделе, а последний обнаруженный положительный образец имел место на 5 месяце. Это аналогично динамике во времени вектора AAV8, вводимого кроликам в тех же дозах вектора (Favaro P, et al., Molecular Therapy 17:1022-1030 (2009)). Напротив, очень ограниченное попадание AAV-LK03 наблюдалось после высокой дозы этого вектора, причем три из пяти животных продемонстрировали отсутствие векторных последовательностей в сперме в любой момент времени. Более низкое попадание вектора в сперму было маловероятным вследствие меньшего общего воздействия AAV-LK03 на кроликов. Подтверждение того, что кроликов успешно инъецировали каждым AAV вектором, было продемонстрировано путем измерения уровней hFIX в плазме, суррогата для переноса генов. При высокой дозе в этом исследовании (1×1013 вг/кг) аналогичные уровни циркулирующего hFIX наблюдались у животных, инъецированных AAV-LK03 и AAV-SPK, демонстрируя, что векторы одинаково эффективны при опосредовании переноса печеночного гена.
В соответствии с исследованиями, оценивающими передачу зародышевой линии векторов AAV2 и AAV8, экспрессирующих трансген hFIX, у некоторых из животных вырабатывались антитела против hFIX, вероятно, вследствие различий в аминокислотах между кроличьим и человеческим фактором IX.
Эти результаты добавляются к имеющемуся на настоящий момент объему данных о возможности передачи зародышевой линии AAV векторов. AAV-SPK имеет структуру, аналогичную ранее исследованным серотипам, векторов AAV2 и AAV8 (Favaro P, et al., Molecular Therapy 17:1022-1030 (2009)). То есть существует дозозависимое попадание AAV векторных последовательностей в сперму с полным клиренсом с течением времени. Однако AAV-LK03 отличается от AAV2, AAV8 и AAV-SPK тем, что очень маленький вектор попадает в сперму, что потенциально делает этот векторный капсид более безопасным, чем другие, с точки зрения генотоксичности.
ПРИМЕР 8
Клиническое исследование необходимо провести для определения безопасности и кинетики однократной в/в инфузии AAV-FVIII. В доклинических исследованиях будет показано, что AAV капсид, который будет использоваться для AAV вектора, имеет хорошую безопасность и эффективность, способность достигать клинически значимых уровней активности FVIII в дозе, составляющей приблизительно 1×1012 вг/кг или более, необязательно после 1-3 месяцев после инфузии вектора; и что перекрестно реагирующие нейтрализующие антитела (Ab) на капсид AAV приблизительно на 10% менее распространены, чем AAV8. Дизайн репрезентативного клинического исследования может быть таким, как показано в Таблице 6.
Таблица 6: Дизайн клинического исследования AAV-FVIII
Безопасность и переносимость AAV-FVIII Клинически значимые по жизненно важным признакам лабораторные значения и клинические оценки (включая количество кровотечений и QoL) от исходного уровня
Кинетика AAV-FVIII Уровни активности трансгена FVIII и уровни антигена на пике и
стационарная
Вводимые дозы Когорты стартовых, средних и высших доз будут включать в себя 2-5 субъектов
Дизайн Открытое, нерандомизированное, с повышением дозы
Участвующие страны США и возможно Европа, Япония и Канада
Размер образца Вплоть до 15 субъектов
Соответствие требованиям Возраст, удовлетворяющий критериям включения в исследование: 18 лет и старше
Пол, удовлетворяющий критериям включения в исследование: мужской
Прием здоровых добровольцев: нет
Критерии включения Способность предоставлять информированное согласие и соответствие требованиям исследования
Мужчины ≥18 л. С подтвержденным диагнозом гемофилии A (≤2 МЕ/дл или ≤2% эндогенного фактора VIII)
Получившие ≥50 дней экспозиции продуктов фактора VIII
Минимум в среднем 4 случая кровотечения в год, требующих эпизодического лечения инфузиями фактора VIII или профилактическими инфузиями фактора VIII
Отсутствие измеримого ингибитора фактора VIII, что оценивается центральной лабораторией, и отсутствие ингибиторов белка фактора VIII в анамнезе
Соглашение использовать надежную барьерную контрацепцию, пока 3 последовательных образца не будут отрицательными на векторные последовательности
Критерии исключения Доказательства активного гепатита B или C
В настоящее время на противовирусный терапии гепатита B или C
Наличие серьезного основного заболевание печени
Наличие серологического доказательства* ВИЧ-1 или ВИЧ-2 с количеством CD4 ≤200/мм3 (*субъекты, которые ВИЧ+ и имеют стабильное количество CD4> 200/мм3 и необнаруживаемую вирусную нагрузку, удовлетворяют требованиям включения)
Наличие обнаруживаемых антител, взаимодействующих с вариантным AAV капсидом
Участие в исследовании переноса гена в течение последних 52 недель или изучаемого препарата течение последних 12 недель
Неспособность или нежелание выполнять методы оценки исследования
Скрининговый визит Оценка соответствия требованиям
Титр AAV NAb является основным отсевом по результатам скрининга
Визит в День 0 Нарастающее извлечение продукта FVIII, затем вливание вектора
Визит контрольного наблюдения (~17 визитов) Оценка безопасности и кинетики
Визит окончания исследования (приблизительно на 52 неделе) Итоговая оценка безопасности
ПРИМЕР 9
Промотор TTR
Характеристика промотора транстиретина (ТТР) была первоначально описана у Costa и Grayson 1991, Nucleic Acids Research 19 (15):4139-4145. Последовательность промотора TTR представляла собой модифицированную последовательность, от TATTTGTGTAG до TATTGACTTAG.
Промотор TTR с 4 нуклеотидными мутациями (TTRmut), SEQ ID NO:22
GTCTGTCTGCACATTTCGTAGAGCGAGTGTTCCGATACTCTAATCTCCCTAGGCAAGGTTCATATTGACTTAGGTTACTTATTCTCCTTTTGTTGACTAAGTCAATAATCAGAATCAGCAGGTTTGGAGTCAGCTTGGCAGGGATCAGCAGCCTGGGTTGGAAGGAGGGGGTATAAAAGCCCCTTCACCAGGAGAAGCCGTCACACAGATCCACAAGCTCCT
ПРИМЕР 10
Трансгенные конструкты с пониженным содержанием CpG, кодирующие FVIII, и иллюстративные AAV капсиды.
Вариант X01 нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII (SEQ ID NO:1)
atgcagattg agctgtctac ctgcttcttc ctgtgcctgc tgaggttctg cttctctgct
accaggaggt actacctggg ggctgtggag ctgagctggg attacatgca gtctgacctg
ggggagctgc ctgtggatgc caggtttccc cccagggtgc ccaagagctt ccccttcaat
acctctgtgg tgtataagaa gaccctgttt gtggagttca ctgatcatct gttcaacatt
gctaaaccca ggcccccctg gatggggctg ctgggcccta ccatccaggc tgaggtgtat
gacactgtgg tgatcactct gaagaacatg gctagccatc ctgtgtctct gcatgctgtg
ggggtgagct actggaaggc ttctgagggg gctgagtatg atgatcagac tagccagagg
gagaaggagg atgacaaggt gttccctggg ggctctcaca cctatgtctg gcaggtgctg
aaggagaatg gccccatggc ctctgatcct ctgtgtctga cctatagcta cctgagccat
gtggacctgg tgaaggacct gaactctggc ctgattgggg ccctgctggt gtgtagggag
gggagcctgg ccaaggagaa gacccagacc ctgcacaagt tcattctgct gtttgctgtg
tttgatgagg gcaagagctg gcattctgaa accaagaaca gcctgatgca ggacagggat
gctgcctctg ctagggcctg gcccaagatg cacactgtga atgggtatgt caataggtct
ctgcctggcc tgattggctg ccacaggaag tctgtgtact ggcatgtgat tgggatgggc
accacccctg aggtgcacag catctttctg gagggccaca ccttcctggt gaggaatcac
agacaggcca gcctggagat cagccccatc accttcctga ctgcccagac cctgctgatg
gacctgggcc agtttctgct gttctgccac atctctagcc accagcatga tggcatggag
gcctatgtga aggtggactc ctgccctgag gagccccagc tgaggatgaa gaataatgag
gaggctgagg actatgatga tgacctgact gactctgaga tggatgtggt gagatttgat
gatgacaatt ctcccagctt cattcagatc aggtctgtgg ccaagaagca tcccaagacc
tgggtgcact acattgctgc tgaggaggag gactgggact atgcccccct ggtgctggcc
cctgatgaca ggagctataa gagccagtac ctgaataatg gcccccagag gattgggagg
aagtataaga aggtgaggtt catggcctat actgatgaaa ccttcaagac cagagaggcc
atccagcatg agtctgggat cctggggccc ctgctgtatg gggaggtggg ggacaccctg
ctgatcatct tcaagaacca ggccagcagg ccctacaaca tctaccctca tggcatcact
gatgtgaggc ctctgtacag cagaaggctg cccaaggggg tgaagcatct gaaggacttc
cccattctgc ctggggagat tttcaagtac aagtggactg tgactgtgga ggatggccca
accaagtctg accctaggtg cctgactagg tactacagca gctttgtgaa tatggagagg
gacctggcct ctggcctgat tggccccctg ctgatctgct acaaggagtc tgtggatcag
aggggcaacc agatcatgtc tgacaagagg aatgtgatcc tgttctctgt gtttgatgag
aacaggagct ggtacctgac tgagaacatt cagaggtttc tgcccaaccc tgctggggtg
cagctggagg accctgaatt ccaggcctct aacatcatgc acagcattaa tggctatgtg
tttgacagcc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cctactggta cattctgagc
attggggccc agactgactt cctgtctgtg ttcttctctg gctacacctt taagcacaag
atggtgtatg aggataccct gaccctgttt cctttctctg gggagactgt gttcatgagc
atggagaacc ctggcctgtg gatcctgggc tgccacaact ctgacttcag gaacaggggg
atgactgctc tgctgaaggt gagcagctgt gataagaaca ctggggacta ctatgaggac
agctatgagg acatctctgc ctatctgctg agcaagaata atgctattga gcccaggagc
ttctctcaga acccccctgt gctgaagagg caccagaggg agatcaccag aactactctg
cagtctgacc aggaggagat tgactatgat gacaccatct ctgtggagat gaagaaggag
gattttgata tttatgatga ggatgaaaac cagagcccca ggagctttca gaagaagact
aggcactatt tcattgctgc tgtggagagg ctgtgggact atggcatgtc ttctagcccc
catgtgctga ggaacagggc ccagtctggc tctgtgcccc agttcaagaa ggtggtgttc
caggagttca ctgatggcag cttcactcag cccctgtaca ggggggagct gaatgagcac
ctggggctgc tgggccctta tatcagggct gaggtggagg ataacatcat ggtgaccttc
aggaaccagg ccagcaggcc ctacagcttc tactctagcc tgatcagcta tgaggaggac
cagaggcagg gggctgagcc caggaagaac tttgtgaagc ccaatgagac caagacttat
ttctggaagg tgcagcacca tatggccccc accaaggatg agtttgattg caaagcctgg
gcctacttct ctgatgtgga cctggagaag gatgtgcact ctgggctgat tggccccctg
ctggtgtgcc acaccaacac tctgaaccct gcccatggca ggcaggtgac tgtgcaggag
tttgccctgt tcttcaccat ctttgatgag actaagagct ggtacttcac tgagaacatg
gagaggaact gcagggcccc ctgcaatatc cagatggagg accccacctt taaggaaaat
tataggtttc atgccattaa tggctacatc atggacaccc tgcctggcct ggtgatggcc
caggaccaga ggatcaggtg gtacctgctg agcatgggca gcaatgagaa cattcacagc
atccacttct ctggccatgt gttcactgtg aggaagaagg aggagtacaa gatggccctg
tataatctgt accctggggt gtttgagact gtggagatgc tgcccagcaa ggctggcatc
tggagggtgg agtgcctgat tggggagcac ctgcatgctg gcatgagcac cctgttcctg
gtgtattcta acaagtgtca gacccccctg ggcatggcct ctggccatat cagggacttc
cagatcactg cctctggcca gtatgggcag tgggccccca agctggccag gctgcattac
tctggcagca tcaatgcctg gagcaccaag gagccattca gctggattaa ggtggacctg
ctggctccaa tgattatcca tggcatcaag acccaggggg ccaggcagaa gtttagcagc
ctgtacatct ctcagtttat catcatgtac tctctggatg gcaaaaagtg gcagacctac
aggggcaatt ctactggcac tctgatggtg ttctttggca atgtggacag ctctgggatc
aagcacaaca tctttaaccc ccctatcatt gccaggtaca ttaggctgca ccccacccat
tacagcatca ggagcaccct gaggatggag ctgatgggct gtgatctgaa cagctgcagc
atgcccctgg gcatggagag caaggctatc tctgatgccc agattactgc cagcagctac
ttcaccaata tgtttgccac ctggagcccc agcaaggcca ggctgcacct gcagggcagg
tctaatgcct ggaggcccca ggtgaacaac cccaaggagt ggctgcaggt ggacttccag
aagaccatga aggtgactgg ggtgaccacc cagggggtga agagcctgct gactagcatg
tatgtgaagg agttcctgat cagcagcagc caggatggcc atcagtggac cctgttcttc
cagaatggca aggtgaaggt gttccagggc aatcaggaca gcttcacccc tgtggtgaac
agcctggacc cccccctgct gaccagatac ctgaggatcc acccccagag ctgggtgcat
cagattgccc tgaggatgga ggtgctgggg tgtgaggccc aggacctgta ctga
Вариант X02 нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующий FVIII (SEQ ID NO:2)
atgcagattg agctgtctac ctgctttttc ctgtgtctgc tgaggttctg cttctctgcc
actaggaggt actacctggg ggctgtggag ctgtcttggg attacatgca gtctgatctg
ggggagctgc ctgtggatgc caggtttcct cccagggtgc ccaagtcttt ccccttcaat
acctctgtgg tgtataagaa gaccctgttt gtggagttta ctgatcacct gttcaacatt
gccaagccca ggcccccttg gatgggcctg ctggggccca ccatccaggc tgaggtgtat
gacactgtgg tgatcaccct gaagaacatg gcctctcacc ctgtgagcct gcatgctgtg
ggggtgagct actggaaggc ctctgagggg gctgagtatg atgaccagac cagccagagg
gagaaggagg atgataaggt gttccctggg gggagccaca cttatgtgtg gcaggtgctg
aaggagaatg gcccaatggc ctctgatccc ctgtgcctga cctattctta cctgagccat
gtggacctgg tgaaggacct gaactctggc ctgattgggg ccctgctggt gtgcagggag
ggctctctgg ctaaggagaa gacccagacc ctgcacaagt tcatcctgct gtttgctgtg
tttgatgagg ggaagagctg gcactctgag accaagaaca gcctgatgca ggacagggat
gctgcctctg ccagggcctg gcccaaaatg cacactgtga atggctatgt gaataggagc
ctgcctggcc tgattggctg ccacaggaag tctgtgtatt ggcatgtgat tggcatgggc
accacccctg aggtgcactc tatcttcctg gagggccata ctttcctggt gaggaatcat
aggcaggcca gcctggagat tagccccatt acctttctga ctgcccagac cctgctgatg
gacctgggcc agttcctgct gttttgccac atcagctctc accagcatga tggcatggag
gcctatgtga aggtggatag ctgccctgag gagccccagc tgaggatgaa gaacaatgag
gaggctgagg attatgatga tgatctgact gattctgaaa tggatgtggt gaggtttgat
gatgacaata gcccctcttt catccagatc aggtctgtgg ccaagaagca tcctaagacc
tgggtgcact acattgctgc tgaggaggag gactgggact atgctcccct ggtgctggcc
cctgatgaca ggtcttacaa gagccagtac ctgaacaatg gcccccagag aattgggagg
aagtataaga aggtgagatt catggcttac actgatgaga ccttcaagac tagggaggcc
atccagcatg agtctggcat tctgggcccc ctgctgtatg gggaggtggg ggacaccctg
ctgatcatct tcaagaacca ggcctctagg ccctacaata tttaccccca tgggatcact
gatgtgaggc ccctgtacag caggaggctg cctaaggggg tgaagcatct gaaggacttc
cccatcctgc ctggggagat cttcaagtat aagtggactg tgactgtgga agatggcccc
accaagtctg accctaggtg cctgaccagg tactactctt cttttgtgaa catggagagg
gacctggcct ctggcctgat tggccccctg ctgatctgct acaaggagtc tgtggaccag
agggggaacc agattatgtc tgacaagagg aatgtgattc tgttctctgt gtttgatgag
aacaggagct ggtatctgac tgagaacatc cagaggttcc tgcccaatcc tgctggggtg
cagctggagg accctgagtt ccaggccagc aacatcatgc acagcatcaa tgggtatgtg
tttgattctc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cctactggta catcctgagc
attggggctc agactgattt cctgtctgtg ttcttttctg gctacacctt taagcataag
atggtgtatg aggacactct gaccctgttt cccttctctg gggagactgt gtttatgagc
atggagaacc ctggcctgtg gatcctgggc tgccacaact ctgatttcag gaacaggggc
atgactgctc tgctgaaggt gtcttcttgt gacaagaaca ctggggacta ttatgaggac
agctatgagg acatctctgc ctacctgctg agcaagaaca atgctattga gcccagatct
ttcagccaga acccccctgt gctgaagagg caccagaggg agatcactag gaccaccctg
cagtctgacc aggaggagat tgactatgat gacactatct ctgtggagat gaagaaggag
gactttgata tctatgatga ggatgagaac cagtctccca ggagcttcca gaaaaagacc
aggcactact tcattgctgc tgtggagagg ctgtgggact atggcatgtc ttctagcccc
catgtgctga ggaacagggc ccagtctggg tctgtgcccc agttcaagaa ggtggtgttc
caggagttca ctgatgggag cttcacccag cctctgtaca ggggggagct gaatgagcac
ctggggctgc tgggccctta tattagggct gaggtggagg acaacatcat ggtgactttc
aggaatcagg cctctaggcc ctatagcttc tacagctctc tgatcagcta tgaggaggat
cagaggcagg gggctgagcc caggaagaac tttgtgaagc ccaatgagac caagacctac
ttctggaagg tgcagcacca catggctcct accaaggatg agtttgactg caaggcctgg
gcctactttt ctgatgtgga cctggagaag gatgtgcact ctggcctgat tggccccctg
ctggtgtgtc ataccaacac cctgaaccct gcccatggca ggcaggtgac tgtgcaggag
tttgccctgt tcttcaccat ctttgatgag accaagagct ggtactttac tgagaacatg
gagaggaatt gcagagcccc ttgcaacatc cagatggagg acccaacctt caaagagaac
tacaggttcc atgccatcaa tgggtacatc atggacaccc tgcctggcct ggtgatggct
caggaccaga ggatcaggtg gtatctgctg agcatgggca gcaatgagaa tatccatagc
attcacttct ctggccatgt gttcactgtg aggaagaagg aggagtacaa gatggccctg
tataacctgt accctggggt gtttgagact gtggagatgc tgccaagcaa ggctgggatt
tggagggtgg agtgcctgat tggggagcac ctgcatgctg gcatgtctac cctgttcctg
gtgtactcca ataagtgcca gacccccctg ggcatggcct ctggccacat cagggacttc
cagatcactg cctctggcca gtatgggcag tgggccccaa agctggccag gctgcactat
tctgggagca tcaatgcttg gagcaccaag gagcctttca gctggattaa ggtggatctg
ctggccccca tgatcattca tggcatcaaa acccaggggg ctagacagaa gttttctagc
ctgtacatca gccagttcat catcatgtac agcctggatg gcaagaagtg gcagacttac
aggggcaata gcactggcac cctgatggtg ttttttggca atgtggacag ctctggcatc
aagcacaaca tctttaaccc ccccattatt gccaggtata tcaggctgca tcccacccac
tattctatta ggtctactct gagaatggag ctgatgggct gtgacctgaa cagctgtagc
atgcccctgg ggatggagag caaggctatc tctgatgccc agatcactgc cagctcttat
ttcaccaata tgtttgccac ctggtctccc tctaaggcca ggctgcacct gcagggcagg
agcaatgctt ggaggcccca ggtgaataac cccaaggagt ggctgcaggt ggacttccag
aagaccatga aggtgactgg ggtgactacc cagggggtga agtctctgct gactagcatg
tatgtgaagg agttcctgat cagcagcagc caggatgggc atcagtggac tctgttcttc
cagaatggca aggtgaaggt cttccagggg aaccaggata gcttcactcc tgtggtgaac
tctctggacc cccccctgct gactaggtat ctgaggatcc acccccagag ctgggtgcac
cagattgccc tgaggatgga ggtgctgggc tgtgaggccc aggacctgta ttga
Вариант X03 нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующий FVIII (SEQ ID NO:3)
atgcagattg aactgtctac ttgtttcttc ctgtgcctgc tgaggttttg cttctctgct
actaggaggt actatctggg ggctgtggag ctgtcttggg actatatgca gtctgacctg
ggggagctgc ctgtggatgc taggtttccc cccagggtgc ccaagagctt cccctttaac
acctctgtgg tgtataagaa gactctgttt gtggagttca ctgaccatct gttcaacatt
gccaagccaa ggcccccctg gatgggcctg ctgggcccca ccatccaggc tgaggtgtat
gacactgtgg tgattactct gaagaacatg gccagccatc ctgtgagcct gcatgctgtg
ggggtgtctt actggaaggc ctctgagggg gctgagtatg atgaccagac ctctcagagg
gagaaggagg atgacaaggt gttccctggg ggctctcata cctatgtgtg gcaggtcctg
aaggagaatg ggcccatggc ctctgacccc ctgtgcctga cctactctta tctgtctcat
gtggacctgg tgaaggacct gaactctggc ctgattgggg ccctgctggt gtgcagggag
ggcagcctgg ctaaggagaa gacccagact ctgcacaagt tcatcctgct gtttgctgtg
tttgatgagg gcaagagctg gcactctgag accaagaaca gcctgatgca ggacagggat
gctgcctctg ctagggcctg gcccaagatg cacactgtga atgggtatgt gaacaggagc
ctgccaggcc tgattggctg ccataggaag tctgtgtatt ggcatgtgat tgggatgggg
actacccctg aggtccacag cattttcctg gaggggcata cctttctggt gaggaaccac
aggcaggcct ctctggagat ctctcccatt actttcctga ctgcccagac cctgctgatg
gacctgggcc agttcctgct gttctgccac atcagcagcc accagcatga tggcatggag
gcctatgtga aggtggatag ctgccctgag gagccccagc tgaggatgaa aaacaatgag
gaggctgagg attatgatga tgacctgact gattctgaga tggatgtggt gaggtttgat
gatgataaca gccccagctt catccagatt aggtctgtgg ccaagaagca tcccaagacc
tgggtgcact acattgctgc tgaggaggag gattgggact atgctcctct ggtgctggcc
cctgatgaca ggagctacaa gagccagtac ctgaataatg gcccccagag gattggcagg
aagtataaga aggtgaggtt catggcctac actgatgaga cctttaagac cagggaggcc
atccagcatg aatctgggat cctgggcccc ctgctgtatg gggaggtggg ggacaccctg
ctgattatct ttaagaacca ggctagcagg ccctacaaca tttaccccca tggcattact
gatgtgaggc ccctgtacag caggaggctg cccaaggggg tgaagcacct gaaggatttc
cccattctgc ctggggagat ctttaagtac aaatggactg tgactgtgga ggatggccct
actaagtctg atcccaggtg tctgaccaga tactacagca gctttgtgaa tatggagagg
gacctggctt ctggcctgat tggccccctg ctgatctgct acaaggagtc tgtggaccag
aggggcaatc agattatgtc tgacaagagg aatgtgatcc tgttctctgt gtttgatgag
aacagaagct ggtacctgac tgagaacatc cagaggttcc tgcccaaccc tgctggggtg
cagctggagg accctgagtt ccaggctagc aatatcatgc acagcattaa tggctatgtg
tttgacagcc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cctattggta cattctgagc
attggggccc agactgattt cctgtctgtg ttcttttctg gctacacctt caagcacaag
atggtgtatg aggatactct gaccctgttt cccttctctg gggagactgt gttcatgagc
atggagaacc ctggcctgtg gatcctgggc tgtcacaact ctgacttcag gaacaggggc
atgactgccc tgctgaaggt gagctcttgt gataagaaca ctggggacta ctatgaggac
tcttatgagg acatctctgc ctacctgctg agcaagaaca atgctattga gcccaggagc
ttctctcaga atccccctgt gctgaagagg catcagaggg agatcactag gactaccctg
cagtctgacc aggaagagat tgactatgat gacaccatct ctgtggaaat gaagaaggag
gactttgata tctatgatga ggatgaaaac cagagcccca ggagcttcca gaagaagacc
aggcattact tcattgctgc tgtggagagg ctgtgggact atgggatgag ctcttctccc
catgtgctga ggaatagggc tcagtctggc tctgtcccac agttcaagaa ggtggtgttt
caggagttca ctgatggcag cttcactcag cccctgtaca ggggggagct gaatgagcat
ctgggcctgc tggggcccta catcagggct gaggtggagg ataacattat ggtgactttc
aggaaccagg cctctaggcc ctacagcttc tacagcagcc tgatcagcta tgaggaggac
cagaggcagg gggctgagcc caggaagaac tttgtgaagc ccaatgagac taagacctat
ttctggaagg tgcagcatca catggctccc actaaagatg agtttgactg caaggcctgg
gcctacttct ctgatgtgga tctggagaag gatgtgcatt ctgggctgat tggccctctg
ctggtctgcc atactaacac cctgaatcct gcccatggca ggcaggtgac tgtgcaggag
tttgccctgt tctttaccat ctttgatgag accaagtctt ggtacttcac tgagaacatg
gagaggaact gcagggcccc ctgtaacatc cagatggagg accccacctt taaggagaac
tacaggttcc atgccatcaa tggctacatc atggacactc tgcctggcct ggtgatggcc
caggaccaga ggatcaggtg gtacctgctg tctatgggct ctaatgagaa cattcattct
atccacttct ctggccatgt gtttactgtg aggaagaagg aggagtacaa gatggccctg
tacaatctgt accctggggt gtttgaaact gtggagatgc tgccctctaa ggctggcatc
tggagggtgg agtgcctgat tggggaacac ctgcatgctg gcatgagcac cctgttcctg
gtctatagca ataagtgcca gacccccctg gggatggcct ctgggcatat cagagacttc
cagatcactg cctctggcca gtatggccag tgggccccca agctggccag gctgcactac
tctggcagca ttaatgcctg gagcaccaag gagcccttct cttggatcaa ggtggacctg
ctggctccca tgatcatcca tgggatcaag acccaggggg ccaggcagaa gttcagcagc
ctgtacatct ctcagttcat catcatgtac tctctggatg gcaagaagtg gcagacctac
aggggcaata gcactgggac cctgatggtg ttctttggga atgtggacag ctctggcatc
aagcacaata tcttcaaccc ccccatcatt gccaggtaca tcagactgca ccccactcat
tacagcatca ggagcactct gaggatggag ctgatgggct gtgacctgaa tagctgctct
atgcccctgg gcatggagag caaggccatt tctgatgccc agattactgc ctcttcttac
ttcactaata tgtttgccac ctggagcccc agcaaggcca ggctgcatct gcaggggagg
agcaatgcct ggaggcccca ggtgaacaac cccaaggagt ggctgcaggt ggacttccag
aagactatga aggtgactgg ggtgaccact cagggggtga agagcctgct gaccagcatg
tatgtgaagg agttcctgat ctcttctagc caggatgggc accagtggac cctgtttttc
cagaatggga aggtgaaggt gtttcagggc aatcaggaca gctttactcc tgtggtgaac
agcctggacc cccccctgct gactaggtac ctgaggattc acccccagag ctgggtgcac
cagattgccc tgaggatgga ggtgctgggc tgtgaggccc aggatctgta ctga
Вариант X04 нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII (SEQ ID NO:4)
atgcagattg agctgtctac ctgcttcttt ctgtgcctgc tgaggttctg tttctctgcc
actaggaggt attatctggg ggctgtggag ctgtcctggg actacatgca gtctgatctg
ggggagctgc ctgtggatgc caggttccct cccagggtgc ccaagtcttt ccctttcaat
acctctgtgg tgtacaagaa gactctgttt gtggagttta ctgatcacct gtttaacatt
gccaagccca ggcccccctg gatggggctg ctgggcccca ccatccaggc tgaggtgtat
gacactgtgg tgattactct gaagaatatg gcttctcacc ctgtgagcct gcatgctgtg
ggggtgagct actggaaggc ctctgagggg gctgagtatg atgaccagac cagccagagg
gagaaggagg atgacaaggt gttccctggg ggcagccaca cttatgtgtg gcaggtgctg
aaggagaatg gcccaatggc ctctgacccc ctgtgcctga cctacagcta tctgagccat
gtggatctgg tgaaggatct gaactctggc ctgattgggg ccctgctggt gtgcagggag
ggctctctgg ccaaggagaa gactcagact ctgcacaagt tcatcctgct gtttgctgtg
tttgatgagg gcaagagctg gcactctgag accaagaact ctctgatgca ggatagggat
gctgcttctg ccagggcctg gcccaagatg cacactgtga atgggtatgt gaataggagc
ctgcctgggc tgattgggtg tcacaggaag tctgtgtact ggcatgtgat tggcatgggc
accactcctg aggtgcacag catctttctg gagggccaca cttttctggt gaggaatcac
aggcaggcca gcctggagat cagccccatc accttcctga ctgcccagac cctgctgatg
gatctgggcc agttcctgct gttttgccat atcagcagcc atcagcatga tgggatggag
gcttatgtga aggtggactc ttgccctgag gagcctcagc tgaggatgaa gaataatgaa
gaggctgagg actatgatga tgatctgact gactctgaga tggatgtggt gaggtttgat
gatgacaaca gccccagctt tatccagatt aggtctgtgg ccaagaagca ccccaagacc
tgggtgcatt acattgctgc tgaggaagag gattgggact atgcccccct ggtgctggcc
cctgatgaca ggagctacaa gtctcagtac ctgaacaatg gccctcagag gattggcagg
aagtacaaga aggtgaggtt catggcttac actgatgaga ccttcaagac cagggaggcc
attcagcatg aatctgggat cctgggcccc ctgctgtatg gggaggtggg ggacaccctg
ctgattattt tcaagaacca ggccagcagg ccctacaaca tttatcctca tggcattact
gatgtgagac ccctgtacag caggaggctg cctaaggggg tgaagcacct gaaggacttc
cccatcctgc ctggggagat cttcaagtac aagtggactg tgactgtgga ggatggcccc
actaagtctg accccaggtg cctgactagg tactactcca gctttgtgaa catggagagg
gacctggcct ctggcctgat tggccccctg ctgatctgct acaaggagtc tgtggatcag
aggggcaacc agatcatgtc tgacaagaga aatgtgatcc tgttctctgt gtttgatgag
aataggtctt ggtacctgac tgagaacatc cagaggtttc tgcctaatcc tgctggggtg
cagctggagg atcctgagtt ccaggcctct aacattatgc acagcatcaa tgggtatgtg
tttgacagcc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cctactggta catcctgagc
attggggccc agactgactt tctgtctgtg ttcttctctg gctacacctt taagcataag
atggtgtatg aggacaccct gactctgttc cccttctctg gggagactgt gttcatgagc
atggagaacc caggcctgtg gatcctgggc tgccacaact ctgatttcag gaataggggc
atgactgccc tgctgaaggt gagcagctgt gataagaaca ctggggacta ttatgaggat
agctatgagg acatctctgc ctacctgctg agcaagaaca atgccattga gcccaggagc
ttcagccaga atcctcctgt gctgaagagg caccagaggg agatcaccag gaccaccctg
cagtctgatc aggaggagat tgactatgat gacactatct ctgtggagat gaagaaggag
gactttgaca tctatgatga ggatgagaat cagagcccca ggagcttcca gaagaagact
agacactact ttattgctgc tgtggagagg ctgtgggact atggcatgag ctcttctccc
catgtgctga gaaacagggc ccagtctggc tctgtgcccc agttcaagaa ggtggtcttc
caggagttca ctgatggctc tttcacccag cctctgtata gaggggagct gaatgagcac
ctgggcctgc tgggccctta catcagggct gaggtggagg acaatatcat ggtgaccttc
aggaaccagg ctagcaggcc ctactctttc tacagcagcc tgatcagcta tgaggaggac
cagaggcagg gggctgagcc taggaagaat tttgtgaagc ccaatgagac caagacctac
ttctggaagg tgcagcacca catggctccc actaaggatg agtttgactg caaggcctgg
gcctactttt ctgatgtgga cctggagaag gatgtgcatt ctggcctgat tggccccctg
ctggtctgcc acaccaatac tctgaaccct gctcatggga gacaggtgac tgtgcaggag
tttgccctgt tcttcaccat ctttgatgag accaagtcct ggtactttac tgagaacatg
gagaggaatt gcagggcccc ttgcaacatc cagatggagg accccacctt caaggaaaat
tataggttcc atgccatcaa tggctacatc atggacaccc tgcctggcct ggtgatggcc
caggaccaga ggatcaggtg gtatctgctg tctatgggct ctaatgagaa catccacagc
atccatttct ctggccatgt gttcactgtg aggaagaagg aggagtataa gatggctctg
tacaacctgt accctggggt ctttgagact gtggagatgc tgcccagcaa ggctggcatt
tggagggtgg agtgcctgat tggggaacac ctgcatgctg ggatgagcac cctgttcctg
gtgtactcta acaagtgcca gaccccactg ggcatggctt ctggccacat cagggatttc
cagattactg cctctggcca gtatggccag tgggctccca agctggctag gctgcactac
tctgggagca tcaatgcctg gtctactaag gagcctttct cttggatcaa agtggacctg
ctggccccta tgatcatcca tgggatcaag actcaggggg ccaggcagaa gttcagcagc
ctgtacatct ctcagttcat cattatgtac agcctggatg gcaagaagtg gcagacctac
aggggcaaca gcactggcac cctgatggtg ttctttggga atgtggacag ctctgggatt
aagcacaaca tctttaaccc ccccatcatt gccaggtata tcaggctgca ccctacccac
tacagcatta ggagcaccct gaggatggag ctgatgggct gtgacctgaa cagctgcagc
atgcccctgg ggatggagag caaggccatt tctgatgctc agatcactgc ttctagctac
ttcactaaca tgtttgccac ctggtctccc agcaaggcta gactgcacct gcaggggagg
agcaatgcct ggaggcccca ggtgaataat cccaaggagt ggctgcaggt ggatttccag
aaaaccatga aggtgactgg ggtgactacc cagggggtga agtctctgct gaccagcatg
tatgtgaagg agttcctgat cagcagcagc caggatgggc atcagtggac cctgttcttt
cagaatggga aggtgaaggt gtttcagggc aatcaggaca gcttcacccc tgtggtgaac
agcctggacc cccccctgct gaccaggtac ctgaggatcc acccccagag ctgggtgcat
cagattgccc tgaggatgga ggtgctgggc tgtgaggccc aggacctgta ctga
Вариант X05 нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII (SEQ ID NO:5)
atgcagattg agctgtctac ttgcttcttc ctgtgcctgc tgaggttctg cttctctgcc
actaggaggt attacctggg ggctgtggag ctgagctggg actatatgca gtctgacctg
ggggagctgc ctgtggatgc caggtttcct cccagggtgc ctaagagctt ccccttcaac
acctctgtgg tgtacaagaa gactctgttt gtggagttta ctgatcatct gttcaacatt
gccaagccca ggcctccttg gatggggctg ctgggcccca ccatccaggc tgaggtgtat
gacactgtgg tgattaccct gaagaatatg gccagccatc ctgtgagcct gcatgctgtg
ggggtgagct attggaaggc ctctgagggg gctgagtatg atgatcagac tagccagagg
gagaaggagg atgacaaggt gttccctggg gggagccata cctatgtgtg gcaggtgctg
aaggagaatg gccccatggc ctctgaccct ctgtgcctga cttatagcta cctgagccat
gtggatctgg tgaaggacct gaactctggc ctgattgggg ccctgctggt gtgcagggag
ggcagcctgg ccaaggagaa gactcagacc ctgcacaagt tcatcctgct gtttgctgtg
tttgatgagg ggaagtcctg gcactctgag actaagaaca gcctgatgca ggatagggat
gctgcttctg ccagggcctg gcctaagatg cacactgtga atggctatgt gaataggagc
ctgcctggcc tgattggctg ccataggaag tctgtgtact ggcatgtgat tgggatgggc
accacccctg aggtgcactc tattttcctg gagggccata ctttcctggt gaggaaccat
aggcaggcca gcctggagat cagccccatc actttcctga ctgcccagac tctgctgatg
gacctgggcc agttcctgct gttctgccac atcagcagcc atcagcatga tggcatggag
gcttatgtga aggtggacag ctgccctgag gagcctcagc tgaggatgaa gaataatgag
gaggctgagg actatgatga tgacctgact gactctgaga tggatgtggt gaggtttgat
gatgacaact ctccctcttt catccagatc aggtctgtgg ccaagaagca ccctaagacc
tgggtgcact acattgctgc tgaggaggag gattgggact atgcccccct ggtgctggcc
ccagatgaca ggagctacaa gtcccagtac ctgaacaatg gcccccagag gattggcagg
aagtacaaga aggtgaggtt catggcttat actgatgaga ctttcaagac cagggaggcc
atccagcatg agtctggcat cctgggccct ctgctgtatg gggaggtggg ggacaccctg
ctgattatct tcaagaacca ggcttctagg ccctacaata tctaccctca tggcatcact
gatgtgaggc ccctgtacag caggaggctg cccaaggggg tgaagcatct gaaggatttc
cccatcctgc ctggggagat ctttaagtat aagtggactg tgactgtgga ggatggcccc
actaagtctg accccaggtg cctgaccagg tattacagca gctttgtgaa catggagagg
gatctggctt ctgggctgat tggccccctg ctgatctgct acaaggagtc tgtggaccag
aggggcaacc agatcatgtc tgacaagagg aatgtgatcc tgttctctgt gtttgatgag
aataggagct ggtacctgac tgagaacatc cagaggtttc tgcccaatcc tgctggggtg
cagctggagg atcctgagtt tcaggcctct aatatcatgc acagcatcaa tggctatgtg
tttgactctc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cctattggta catcctgagc
attggggccc agactgactt tctgtctgtg tttttttctg gctacacctt caagcacaag
atggtgtatg aggatactct gactctgttc cctttttctg gggagactgt gttcatgtct
atggagaacc ctgggctgtg gattctgggc tgccacaatt ctgacttcag gaacagaggc
atgactgctc tgctgaaggt gagcagctgt gacaagaaca ctggggacta ctatgaggac
tcttatgagg acatttctgc ctacctgctg agcaagaaca atgccattga gcccagaagc
ttttctcaga acccccctgt gctgaagagg caccagaggg agatcaccag gaccaccctg
cagtctgacc aggaggagat tgactatgat gatactattt ctgtggagat gaagaaggag
gactttgaca tctatgatga ggatgagaac cagagcccca ggtctttcca gaagaagact
aggcactact ttattgctgc tgtggagagg ctgtgggact atgggatgtc tagctctcct
catgtgctga ggaacagggc ccagtctggc tctgtgcccc agtttaaaaa ggtggtgttc
caggaattca ctgatggcag ctttacccag cctctgtaca ggggggagct gaatgagcac
ctggggctgc tggggcctta cattagggct gaggtggagg acaacatcat ggtgaccttc
aggaatcagg ccagcaggcc ctactctttc tacagcagcc tgatctctta tgaggaggac
cagaggcagg gggctgaacc caggaagaac tttgtgaagc ccaatgagac caagacctac
ttctggaagg tgcagcacca catggctccc accaaggatg agtttgattg caaggcctgg
gcttacttct ctgatgtgga tctggagaag gatgtgcact ctgggctgat tggccccctg
ctggtgtgcc acaccaacac tctgaaccct gcccatggca gacaggtgac tgtgcaggag
tttgccctgt tcttcactat ctttgatgag actaagagct ggtacttcac tgagaacatg
gagaggaatt gcagggcccc ttgcaacatc cagatggagg accccacctt taaggagaac
tacaggtttc atgccattaa tggctacatc atggacaccc tgcctggcct ggtgatggcc
caggaccaga ggatcaggtg gtacctgctg tctatgggga gcaatgagaa catccacagc
attcacttct ctggccatgt gttcactgtg aggaagaagg aggagtacaa gatggccctg
tacaacctgt accctggggt gtttgagact gtggagatgc tgcccagcaa ggctgggatc
tggagggtgg agtgcctgat tggggagcac ctgcatgctg ggatgagcac cctgttcctg
gtgtatagca acaagtgcca gacccccctg ggcatggcct ctggccacat cagagacttt
cagattactg cctctggcca gtatgggcag tgggccccca agctggccag gctgcactat
tctggctcta ttaatgcctg gagcactaag gagcccttca gctggattaa ggtggacctg
ctggctccca tgatcatcca tggcatcaag actcaggggg ccaggcagaa gttctcttct
ctgtacatca gccagttcat tatcatgtac tccctggatg gcaagaagtg gcagacctat
aggggcaaca gcactggcac cctgatggtg ttctttggga atgtggacag ctctggcatc
aagcataata tcttcaatcc ccccatcatt gctaggtaca tcaggctgca ccccacccac
tactctatta ggtctaccct gaggatggag ctgatgggct gtgacctgaa cagctgcagc
atgcctctgg gcatggagag caaagccatc tctgatgccc agatcactgc cagcagctac
tttaccaaca tgtttgctac ttggagcccc agcaaggcca ggctgcacct gcaggggagg
tctaatgcct ggaggcccca ggtgaacaac cccaaggagt ggctgcaggt ggacttccag
aagactatga aggtgactgg ggtgaccacc cagggggtga agagcctgct gacctctatg
tatgtgaagg agttcctgat tagcagcagc caggatggcc accagtggac cctgtttttc
cagaatggga aggtgaaggt gtttcagggg aaccaggaca gcttcactcc tgtggtgaac
tctctggacc cccccctgct gaccaggtat ctgaggatcc accctcagag ctgggtgcac
cagattgccc tgaggatgga ggtgctgggc tgtgaggccc aggacctgta ctga
Вариант X06 нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующей FVIII (SEQ ID NO:6)
atgcagattg agctgagcac ctgcttcttc ctgtgcctgc tgaggttttg cttctctgcc
accaggaggt actacctggg ggctgtggag ctgagctggg attacatgca gtctgacctg
ggggagctgc ctgtggatgc caggttccct cccagggtgc ccaagtcttt ccccttcaac
acttctgtgg tgtacaagaa gaccctgttt gtggagttta ctgaccacct gttcaacatt
gccaagccca ggcctccctg gatgggcctg ctgggcccca ccattcaggc tgaggtgtat
gacactgtgg tcatcaccct gaaaaatatg gctagccacc ctgtgtctct gcatgctgtg
ggggtgagct actggaaggc ctctgagggg gctgagtatg atgaccagac tagccagagg
gagaaggagg atgacaaggt gttccctggg ggcagccaca cttatgtgtg gcaggtgctg
aaagagaatg gccccatggc ttctgatccc ctgtgtctga cctatagcta cctgagccat
gtggatctgg tgaaggacct gaactctggc ctgattgggg ccctgctggt gtgcagggag
ggcagcctgg ctaaggagaa gacccagacc ctgcataagt tcatcctgct gtttgctgtg
tttgatgagg gcaagagctg gcactctgag actaagaaca gcctgatgca ggatagggat
gctgcttctg ccagggcctg gcccaagatg cacactgtga atgggtatgt gaacaggagc
ctgcctggcc tgattggctg ccataggaag tctgtctatt ggcatgtgat tggcatgggc
actactcctg aggtgcacag catctttctg gagggccaca ccttcctggt gaggaaccac
aggcaggcca gcctggagat ctctcccatc actttcctga ctgctcagac cctgctgatg
gacctgggcc agttcctgct gttctgtcac atctctagcc accagcatga tggcatggag
gcctatgtga aggtggatag ctgccctgag gaaccccagc tgaggatgaa gaacaatgag
gaggctgagg attatgatga tgatctgact gattctgaga tggatgtggt gaggtttgat
gatgacaatt ctcctagctt cattcagatc agatctgtgg ccaaaaagca tcctaagact
tgggtgcatt atattgctgc tgaggaggag gattgggatt atgcccccct ggtgctggct
cctgatgata ggagctacaa gtctcagtac ctgaataatg ggccccagag gattggcagg
aagtacaaga aggtgaggtt catggcctac actgatgaga ccttcaagac cagggaggcc
attcagcatg agtctgggat tctggggccc ctgctgtatg gggaggtggg ggataccctg
ctgatcattt tcaagaacca ggccagcagg ccctacaaca tctaccccca tgggattact
gatgtgaggc ccctgtactc taggaggctg cctaaggggg tgaagcacct gaaggatttt
cctatcctgc ctggggaaat cttcaagtac aagtggactg tgactgtgga ggatggcccc
actaagtctg atcccaggtg tctgaccagg tattatagct cttttgtgaa catggagagg
gatctggcct ctgggctgat tggccctctg ctgatctgct acaaggagtc tgtggaccag
aggggcaacc agatcatgtc tgacaagagg aatgtgatcc tgttctctgt gtttgatgag
aacaggagct ggtatctgac tgagaacatc cagaggtttc tgcccaatcc tgctggggtg
cagctggagg atcctgagtt ccaggctagc aacatcatgc acagcatcaa tgggtatgtg
tttgacagcc tgcagctgtc tgtgtgtctg catgaggtgg cctactggta tatcctgtct
attggggccc agactgactt cctgtctgtg tttttttctg ggtatacttt taagcacaag
atggtgtatg aggacaccct gactctgttc cccttctctg gggagactgt gtttatgagc
atggagaacc ctggcctgtg gatcctgggc tgccacaatt ctgacttcag gaataggggg
atgactgccc tgctgaaggt gagcagctgt gataagaata ctggggacta ctatgaggac
tcttatgagg acatttctgc ctatctgctg tctaagaaca atgccattga acccaggagc
ttctctcaga acccccctgt gctgaagagg caccagaggg aaatcaccag aactactctg
cagtctgatc aggaggaaat tgactatgat gacactattt ctgtggagat gaagaaggag
gactttgaca tctatgatga ggatgagaac cagagcccaa ggagcttcca gaagaagact
aggcactact tcattgctgc tgtggagagg ctgtgggact atggcatgag cagcagcccc
catgtgctga gaaacagggc ccagtctggg tctgtgcccc agttcaagaa ggtggtgttc
caggagttca ctgatgggag cttcacccag cccctgtata ggggggagct gaatgagcac
ctgggcctgc tgggccccta tattagggct gaggtggagg acaacatcat ggtgaccttc
aggaatcagg cctctaggcc ctacagcttc tacagcagcc tgattagcta tgaggaggat
cagaggcagg gggctgaacc caggaagaac tttgtgaagc ccaatgagac caagacctat
ttctggaagg tgcagcatca catggccccc accaaggatg agtttgactg caaggcctgg
gcctacttct ctgatgtgga tctggagaag gatgtgcact ctggcctgat tggccccctg
ctggtgtgcc acaccaacac cctgaaccct gctcatggca ggcaggtgac tgtgcaggag
tttgccctgt tcttcaccat ctttgatgag actaagtctt ggtacttcac tgagaatatg
gagaggaatt gcagggcccc ctgcaatatt cagatggaag accccacctt caaggagaat
tacaggttcc atgccattaa tggctacatc atggataccc tgcctggcct ggtgatggcc
caggatcaga ggatcaggtg gtacctgctg agcatgggca gcaatgagaa catccactct
atccacttct ctggccatgt gtttactgtg aggaagaagg aggagtataa gatggccctg
tacaacctgt accctggggt ctttgagact gtggagatgc tgccttctaa ggctggcatt
tggagggtgg agtgcctgat tggggaacac ctgcatgctg gcatgtctac cctgttcctg
gtgtacagca ataagtgcca gacccccctg ggcatggcct ctgggcatat cagggatttc
cagatcactg cctctggcca gtatggccag tgggccccaa agctggctag gctgcactac
tctgggagca tcaatgcctg gagcactaag gagcccttca gctggatcaa ggtggacctg
ctggccccca tgattatcca tgggattaag actcaggggg ccaggcagaa gttcagcagc
ctgtacatca gccagttcat tatcatgtac agcctggatg gcaagaagtg gcagacctat
aggggcaact ctactgggac cctgatggtg ttctttggga atgtggatag ctctgggatc
aagcacaata tcttcaaccc ccccatcatt gccaggtata tcaggctgca ccccacccac
tacagcatta ggtctaccct gaggatggag ctgatgggct gtgatctgaa cagctgtagc
atgcctctgg gcatggagtc taaggccatt tctgatgccc agattactgc tagcagctac
ttcaccaaca tgtttgccac ctggtctccc agcaaggcca ggctgcatct gcagggcagg
tctaatgctt ggaggcccca ggtgaacaac ccaaaggagt ggctgcaggt ggatttccag
aagactatga aggtgactgg ggtgaccact cagggggtga agtctctgct gacctctatg
tatgtgaagg agttcctgat ctctagcagc caggatggcc atcagtggac cctgttcttc
cagaatggca aggtgaaagt gttccagggc aatcaggata gcttcactcc agtggtgaac
agcctggatc cccctctgct gactaggtac ctgaggatcc acccccagag ctgggtgcac
cagattgccc tgaggatgga ggtgctgggc tgtgaggccc aggacctgta ctga
Вариант X07 нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующий FVIII (SEQ ID NO:7)
atgcagattg agctgagcac ctgcttcttc ctgtgtctgc tgaggttctg cttctctgcc
accaggaggt attacctggg ggctgtggag ctgagctggg actatatgca gtctgacctg
ggggagctgc ctgtggatgc taggttcccc cccagggtgc ccaagagctt cccctttaac
acttctgtgg tgtacaagaa gaccctgttt gtggagttca ctgaccacct gttcaacatt
gccaagccca ggcccccctg gatggggctg ctggggccca ccatccaggc tgaggtgtat
gacactgtgg tgatcaccct gaagaacatg gccagccacc ctgtgagcct gcatgctgtg
ggggtgagct actggaaggc ttctgagggg gctgagtatg atgaccagac tagccagagg
gagaaggagg atgacaaggt gtttcctggg ggcagccata cctatgtgtg gcaggtgctg
aaggagaatg gccccatggc ctctgacccc ctgtgcctga cctacagcta cctgtctcat
gtggacctgg tgaaggacct gaactctggc ctgattgggg ctctgctggt gtgtagggag
ggcagcctgg ctaaggaaaa gacccagacc ctgcataagt ttatcctgct gtttgctgtg
tttgatgagg gcaagagctg gcactctgag accaagaaca gcctgatgca ggatagggat
gctgcctctg ccagggcttg gcctaagatg cacactgtga atgggtatgt gaataggagc
ctgcctggcc tgattggctg ccacaggaag tctgtgtact ggcatgtgat tgggatgggc
accacccctg aggtccatag catcttcctg gagggccaca ctttcctggt gaggaaccac
agacaggcct ctctggagat ctctcccatc accttcctga ctgctcagac tctgctgatg
gacctgggcc agttcctgct gttttgccat attagcagcc accagcatga tgggatggag
gcctatgtga aggtggatag ctgccctgag gagcctcagc tgaggatgaa gaacaatgag
gaggctgaag actatgatga tgacctgact gattctgaga tggatgtggt gaggtttgat
gatgacaata gccccagctt cattcagatc aggtctgtgg ccaagaaaca ccccaagacc
tgggtgcact acattgctgc tgaggaagag gactgggact atgctcccct ggtgctggcc
cctgatgata ggtcttataa gagccagtac ctgaacaatg ggccccagag gattggcagg
aagtacaaga aggtgaggtt catggcctac actgatgaaa ccttcaaaac cagggaggcc
attcagcatg agtctggcat cctgggccct ctgctgtatg gggaggtggg ggacaccctg
ctgatcatct tcaagaacca ggccagcagg ccctacaaca tctatcctca tggcatcact
gatgtgaggc ccctgtacag caggaggctg cccaaggggg tgaagcacct gaaagacttc
cccatcctgc ctggggagat ctttaagtat aagtggactg tgactgtgga ggatggccct
accaagtctg accccaggtg tctgaccagg tactattcta gctttgtgaa catggagagg
gacctggcct ctggcctgat tgggcccctg ctgatctgct acaaggagtc tgtggaccag
aggggcaacc agatcatgtc tgacaagagg aatgtgatcc tgttttctgt gtttgatgag
aataggagct ggtacctgac tgagaacatc cagaggtttc tgcccaatcc tgctggggtg
cagctggagg atcctgagtt ccaggccagc aatatcatgc atagcatcaa tggctatgtg
tttgacagcc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cctactggta catcctgagc
attggggccc agactgactt tctgtctgtg ttcttttctg gctatacctt caagcacaag
atggtgtatg aggataccct gaccctgttc cccttctctg gggagactgt gttcatgagc
atggagaatc ctgggctgtg gatcctgggg tgccacaact ctgattttag gaacaggggg
atgactgccc tgctgaaggt gtctagctgt gataagaaca ctggggacta ctatgaggac
agctatgagg acatttctgc ttatctgctg tctaagaata atgccattga gcccagaagc
ttcagccaga atccccctgt gctgaagaga catcagaggg agatcaccag aactaccctg
cagtctgatc aggaggagat tgactatgat gacactatct ctgtggagat gaagaaggag
gactttgaca tctatgatga ggatgagaat cagtctccca ggagctttca gaagaagacc
agacattact tcattgctgc tgtggagagg ctgtgggact atggcatgag ctctagccct
catgtgctga ggaacagggc ccagtctggc tctgtgcccc agttcaagaa ggtggtgttc
caggaattca ctgatggcag cttcacccag cccctgtaca ggggggagct gaatgagcac
ctgggcctgc tggggcctta tatcagggct gaggtggagg ataatattat ggtgactttc
aggaaccagg ccagcaggcc ctactctttc tatagcagcc tgatctctta tgaggaggat
cagaggcagg gggctgagcc taggaagaac tttgtgaagc ccaatgagac taagacctac
ttctggaagg tccagcacca catggcccct accaaggatg agtttgactg caaggcctgg
gcctatttct ctgatgtgga tctggagaag gatgtccatt ctgggctgat tggccccctg
ctggtgtgcc acactaacac tctgaatcct gcccatggca ggcaggtgac tgtccaggag
tttgccctgt tcttcactat ctttgatgag accaagagct ggtactttac tgagaacatg
gagaggaact gcagagctcc ttgcaatatt cagatggagg accccacctt caaggagaat
tacaggttcc atgccattaa tgggtacatc atggacaccc tgcctggcct ggtgatggct
caggaccaga ggatcaggtg gtacctgctg agcatgggct ctaatgagaa tatccacagc
atccacttct ctgggcatgt gttcactgtg aggaagaagg aggagtacaa gatggctctg
tataatctgt accctggggt gtttgaaact gtggagatgc tgccctctaa ggctggcatc
tggagggtgg agtgcctgat tggggagcac ctgcatgctg gcatgagcac cctgttcctg
gtgtacagca acaagtgcca gacccccctg ggcatggcct ctggccacat cagggacttc
cagatcactg cctctggcca gtatggccag tgggccccca agctggccag gctgcactat
tctggcagca tcaatgcctg gagcaccaag gagcccttca gctggatcaa ggtggacctg
ctggccccca tgatcattca tggcatcaag acccaggggg ccaggcagaa gttcagctct
ctgtacatct ctcagttcat catcatgtac tctctggatg ggaagaagtg gcagacctac
aggggcaaca gcactggcac cctgatggtg ttctttggga atgtggactc ttctggcatc
aagcacaaca tcttcaatcc ccccatcatt gctaggtata ttaggctgca tcccacccac
tacagcatca ggtctaccct gaggatggag ctgatgggct gtgacctgaa ctcttgcagc
atgcccctgg gcatggagtc taaggccatc tctgatgccc agattactgc cagcagctac
ttcaccaaca tgtttgccac ctggagcccc tctaaggcca ggctgcatct gcaggggagg
agcaatgcct ggaggcctca ggtgaacaac cccaaggagt ggctgcaggt ggatttccag
aagaccatga aggtgactgg ggtgaccacc cagggggtca agagcctgct gaccagcatg
tatgtgaagg agttcctgat cagcagcagc caggatggcc accagtggac tctgttcttt
cagaatggga aggtgaaggt gtttcagggc aatcaggact ctttcacccc tgtggtgaac
agcctggacc cccccctgct gaccagatac ctgaggatcc acccccagtc ttgggtgcat
cagattgccc tgaggatgga ggtgctgggc tgtgaggctc aggatctgta ctga
Вариант X08 нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующий FVIII (SEQ ID NO:8)
atgcagattg agctgagcac ttgctttttt ctgtgcctgc tgaggttttg tttttctgcc
accaggaggt actacctggg ggctgtggag ctgagctggg actatatgca gtctgatctg
ggggagctgc ctgtggatgc caggttcccc cccagggtgc ccaagtcttt tcccttcaac
acctctgtgg tgtataagaa gaccctgttt gtggagttca ctgaccacct gttcaacatt
gctaagccta ggcccccctg gatgggcctg ctgggcccta ccattcaggc tgaggtgtat
gacactgtgg tgatcaccct gaagaacatg gccagccatc ctgtgagcct gcatgctgtg
ggggtctctt actggaaggc ctctgagggg gctgagtatg atgaccagac cagccagaga
gagaaggagg atgacaaggt cttccctggg ggctctcaca cctatgtgtg gcaggtgctg
aaggaaaatg gccccatggc ctctgacccc ctgtgcctga cctacagcta tctgagccat
gtggatctgg tgaaggacct gaattctggc ctgattgggg ccctgctggt gtgcagggag
ggcagcctgg ccaaggagaa gacccagacc ctgcacaagt ttatcctgct gtttgctgtg
tttgatgagg gcaagtcttg gcactctgag actaagaaca gcctgatgca ggacagggat
gctgcctctg ccagggcctg gcccaagatg cacactgtga atggctatgt gaacaggagc
ctgcctgggc tgattggctg ccacaggaag tctgtgtact ggcatgtgat tggcatgggc
accacccctg aggtgcacag catcttcctg gaaggccaca ctttcctggt gaggaaccat
aggcaggcca gcctggagat cagccctatc accttcctga ctgcccagac cctgctgatg
gatctggggc agttcctgct gttctgccac atctctagcc accagcatga tgggatggag
gcctatgtga aggtggacag ctgcccagag gagcctcagc tgaggatgaa aaacaatgaa
gaggctgagg attatgatga tgatctgact gactctgaga tggatgtggt gagatttgat
gatgacaata gccctagctt tattcagatc aggtctgtgg ctaagaagca ccccaagacc
tgggtgcatt acattgctgc tgaggaggag gactgggatt atgctcctct ggtgctggcc
cctgatgata ggagctacaa gagccagtac ctgaataatg gccctcagag gattggcagg
aagtacaaga aggtgaggtt catggcttac actgatgaga ccttcaagac tagggaggcc
atccagcatg agtctgggat cctggggccc ctgctgtatg gggaggtggg ggacaccctg
ctgatcatct tcaagaacca ggctagcagg ccttacaaca tctatcccca tgggatcact
gatgtgagac ctctgtacag caggaggctg cccaaggggg tcaagcatct gaaagacttc
cccatcctgc ctggggagat ctttaagtat aagtggactg tgactgtgga ggatgggccc
accaagtctg accccaggtg cctgaccagg tattacagca gctttgtgaa catggagagg
gatctggcct ctgggctgat tggccccctg ctgatctgtt acaaggaatc tgtggatcag
aggggcaatc agatcatgtc tgacaagagg aatgtgatcc tgttctctgt gtttgatgag
aataggtctt ggtacctgac tgaaaacatc cagaggttcc tgcccaaccc tgctggggtc
cagctggagg atcctgagtt ccaggctagc aacatcatgc acagcatcaa tgggtatgtg
tttgatagcc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cctactggta catcctgtct
attggggccc agactgactt cctgtctgtg ttcttttctg gctacacctt caagcacaag
atggtgtatg aggacaccct gaccctgttc cccttctctg gggagactgt ctttatgagc
atggagaacc ctgggctgtg gatcctgggc tgccacaact ctgatttcag gaataggggc
atgactgctc tgctgaaggt gagctcttgt gacaagaaca ctggggatta ctatgaggac
agctatgagg acatttctgc ctacctgctg agcaagaaca atgccattga gcctaggagc
tttagccaga atcctcctgt cctgaagagg caccagaggg agatcaccag gaccaccctg
cagtctgacc aggaggagat tgactatgat gataccatct ctgtggagat gaagaaggag
gactttgaca tctatgatga ggatgagaat cagtctccca ggagcttcca gaagaagacc
aggcactatt tcattgctgc tgtggagagg ctgtgggact atggcatgag cagctctcct
catgtgctga ggaatagggc tcagtctggc tctgtgcccc agttcaagaa agtggtgttt
caggagttca ctgatggctc tttcacccag cctctgtata ggggggagct gaatgagcac
ctggggctgc tgggccccta tatcagggct gaggtggagg ataacatcat ggtgaccttc
aggaaccagg cctctaggcc ctacagcttc tatagcagcc tgatcagcta tgaggaggac
cagaggcagg gggctgagcc caggaagaac tttgtgaagc ccaatgagac caagacttac
ttctggaagg tgcagcatca catggccccc accaaggatg agtttgactg taaggcctgg
gcctacttct ctgatgtgga tctggagaag gatgtgcact ctggcctgat tggccccctg
ctggtgtgcc ataccaatac tctgaaccct gctcatggca ggcaggtgac tgtgcaggag
tttgctctgt tcttcactat ctttgatgag accaagtctt ggtatttcac tgagaatatg
gagaggaact gcagggcccc ctgcaacatc cagatggagg accccacctt taaggagaac
tataggtttc atgccatcaa tggctacatc atggacaccc tgcctggcct ggtgatggcc
caggatcaga ggatcaggtg gtacctgctg agcatggggt ctaatgagaa catccacagc
atccacttct ctggccatgt gtttactgtg agaaagaagg aggagtacaa gatggctctg
tacaatctgt accctggggt ctttgagact gtggagatgc tgcctagcaa ggctgggatc
tggagggtgg agtgcctgat tggggaacat ctgcatgctg ggatgtctac tctgttcctg
gtgtacagca acaagtgcca gacccccctg ggcatggctt ctggccatat cagggacttt
cagattactg cctctgggca gtatggccag tgggccccca agctggctag gctgcattat
tctggcagca tcaatgcctg gtctactaag gagcccttca gctggatcaa ggtggatctg
ctggccccca tgatcatcca tggcatcaag acccaggggg ccaggcagaa gtttagctct
ctgtacatta gccagttcat catcatgtac agcctggatg ggaagaagtg gcagacctac
aggggcaatt ctactggcac cctgatggtg ttctttggca atgtggacag ctctggcatc
aagcacaaca tctttaaccc ccctatcatt gctaggtaca tcaggctgca tcccacccat
tacagcatca ggagcaccct gaggatggag ctgatgggct gtgacctgaa ctcttgcagc
atgcccctgg gcatggagag caaggccatt tctgatgccc agattactgc cagcagctac
ttcactaaca tgtttgccac ctggtctccc agcaaggcca ggctgcacct gcagggcagg
agcaatgcct ggaggcccca ggtgaacaac cccaaggagt ggctgcaggt ggatttccag
aagaccatga aggtgactgg ggtgaccacc cagggggtga agagcctgct gactagcatg
tatgtgaagg agttcctgat cagctctagc caggatggcc accagtggac tctgtttttc
cagaatggca aggtgaaggt gttccagggc aaccaggact ctttcactcc tgtggtgaac
agcctggacc cccccctgct gaccaggtat ctgaggattc acccccagtc ttgggtgcat
cagattgccc tgaggatgga ggtgctgggc tgtgaggccc aggatctgta ctga
Вариант X09 нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующий FVIII (SEQ ID NO:9)
atgcagattg agctgagcac ctgcttcttc ctgtgtctgc tgagattttg cttttctgcc
actaggaggt attacctggg ggctgtggag ctgtcttggg actacatgca gtctgatctg
ggggagctgc ctgtggatgc caggttccca cctagggtgc ctaagagctt tcccttcaat
acctctgtgg tgtacaagaa gaccctgttt gtggagttca ctgaccacct gttcaacatt
gccaagccta ggcccccctg gatgggcctg ctgggcccta ccatccaggc tgaagtgtat
gacactgtgg tgatcaccct gaagaacatg gccagccacc ctgtgagcct gcatgctgtg
ggggtgtctt actggaaggc ctctgagggg gctgagtatg atgatcagac cagccagagg
gagaaggaag atgacaaggt gttccctggg ggcagccaca cctatgtctg gcaggtgctg
aaggagaatg gccccatggc ctctgatccc ctgtgcctga cctactctta cctgagccat
gtggacctgg tgaaggatct gaattctggc ctgattgggg ccctgctggt gtgcagggag
ggcagcctgg ccaaggagaa gacccagacc ctgcataagt tcatcctgct gtttgctgtg
tttgatgaag ggaagagctg gcactctgag actaagaaca gcctgatgca ggacagggat
gctgcttctg ccagggcctg gcccaagatg cacactgtga atggctatgt gaatagaagc
ctgcctggcc tgattgggtg ccacaggaag tctgtgtact ggcatgtgat tgggatgggc
actacccctg aggtgcatag catcttcctg gaaggccata ccttcctggt gaggaatcat
aggcaggctt ctctggaaat ttctcccatc actttcctga ctgctcagac cctgctgatg
gacctgggcc agttcctgct gttctgccac atcagctctc accagcatga tgggatggag
gcctatgtga aggtggacag ctgtcctgag gagccccagc tgaggatgaa gaacaatgag
gaggctgagg actatgatga tgacctgact gactctgaga tggatgtggt caggtttgat
gatgacaata gcccctcttt catccagatc aggtctgtgg ccaagaagca ccccaagact
tgggtgcact acattgctgc tgaggaggag gattgggatt atgcccctct ggtgctggcc
cctgatgaca ggagctataa gtctcagtac ctgaataatg gcccccagag gattgggagg
aagtataaga aggtgaggtt tatggcctac actgatgaga ccttcaagac cagggaggcc
atccagcatg agtctggcat cctgggcccc ctgctgtatg gggaggtggg ggataccctg
ctgatcatct tcaagaacca ggcctctagg ccctacaata tctaccctca tggcatcact
gatgtgagac ccctgtatag caggaggctg cctaaggggg tgaagcacct gaaggacttc
cccatcctgc ctggggagat cttcaagtat aagtggactg tgactgtgga ggatggcccc
accaagtctg accccaggtg cctgaccagg tattacagct cttttgtgaa catggagagg
gatctggcct ctgggctgat tggcccactg ctgatctgct acaaggagtc tgtggatcag
aggggcaatc agatcatgtc tgacaagagg aatgtgatcc tgttttctgt gtttgatgaa
aataggtctt ggtatctgac tgagaacatc cagaggtttc tgcccaatcc tgctggggtg
cagctggagg atcctgagtt tcaggcctct aatatcatgc attctatcaa tggctatgtg
tttgacagcc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cctactggta catcctgagc
attggggctc agactgactt cctgtctgtg ttcttttctg gctatacttt caagcacaag
atggtgtatg aggacactct gaccctgttc cccttctctg gggagactgt gttcatgtct
atggaaaatc ctgggctgtg gattctgggc tgccacaatt ctgacttcag gaataggggg
atgactgccc tgctgaaggt gtctagctgt gataagaaca ctggggatta ctatgaggac
tcttatgaag atatctctgc ctatctgctg agcaagaaca atgccattga gcccaggagc
ttcagccaga acccccctgt gctgaagagg caccagaggg agatcaccag gaccactctg
cagtctgatc aggaggagat tgactatgat gacactatct ctgtggagat gaagaaggag
gattttgaca tttatgatga ggatgagaac cagtctccca ggagcttcca gaagaagacc
aggcattact ttattgctgc tgtggagagg ctgtgggact atgggatgag cagctctcct
catgtgctga ggaacagggc ccagtctggg tctgtgcccc agttcaagaa ggtggtgttc
caggagttca ctgatgggag cttcacccag cccctgtata ggggggagct gaatgagcac
ctgggcctgc tgggccccta catcagggct gaggtggagg ataatatcat ggtgaccttc
aggaaccagg ctagcaggcc ttacagcttt tacagcagcc tgatctctta tgaagaagac
cagaggcagg gggctgagcc caggaagaat tttgtgaagc ctaatgagac caagacttat
ttttggaagg tgcagcatca catggctcct accaaggatg agtttgactg caaggcctgg
gcctactttt ctgatgtgga tctggagaag gatgtgcact ctggcctgat tggccctctg
ctggtgtgcc atactaacac tctgaaccct gcccatggga ggcaggtgac tgtgcaggag
tttgccctgt tcttcactat ttttgatgag accaagtctt ggtatttcac tgagaacatg
gagaggaact gcagggctcc ctgcaacatc cagatggaag accccacctt caaggagaac
tataggttcc atgccatcaa tgggtacatc atggataccc tgcctggcct ggtgatggcc
caggatcaga ggattaggtg gtatctgctg agcatgggct ctaatgagaa catccacagc
atccatttct ctggccatgt gttcactgtg aggaagaagg aggagtacaa gatggctctg
tacaacctgt atcctggggt gtttgagact gtggagatgc tgcccagcaa ggctggcatc
tggagggtgg aatgcctgat tggggagcac ctgcatgctg gcatgagcac tctgttcctg
gtgtatagca acaagtgcca gacccccctg ggcatggcct ctggccatat cagggatttc
cagatcactg cttctggcca gtatggccag tgggccccca agctggccag gctgcactat
tctggcagca tcaatgcctg gagcactaag gagccttttt cttggatcaa ggtggacctg
ctggccccta tgattattca tggcatcaag acccaggggg ccaggcagaa gttctctagc
ctgtacatct ctcagttcat cattatgtat agcctggatg gcaagaagtg gcagacctac
aggggcaata gcactggcac cctgatggtg ttttttggga atgtggactc ttctgggatc
aagcacaaca tctttaaccc ccccatcatt gccaggtata ttaggctgca ccccacccac
tacagcatca ggagcaccct gaggatggag ctgatgggct gtgatctgaa ttcttgctct
atgcccctgg gcatggagag caaggccatc tctgatgccc agatcactgc cagctcttac
ttcaccaaca tgtttgccac ctggtctcct agcaaggcca ggctgcatct gcagggcagg
agcaatgcct ggaggcccca ggtgaacaac cccaaggagt ggctgcaggt ggacttccag
aagaccatga aggtgactgg ggtgaccact cagggggtga agagcctgct gacctctatg
tatgtgaagg agttcctgat cagcagcagc caggatggcc accagtggac tctgttcttc
cagaatggga aggtgaaggt gttccagggc aaccaggata gctttacccc tgtggtgaac
agcctggacc ctcctctgct gaccagatac ctgaggatcc atcctcagag ctgggtgcac
cagattgccc tgaggatgga ggtgctgggc tgtgaggccc aggatctgta ctga
Вариант X10 нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующий FVIII (SEQ ID NO:10)
atgcagattg agctgagcac ttgcttcttc ctgtgcctgc tgaggttctg cttttctgct
actaggaggt actacctggg ggctgtggag ctgagctggg attacatgca gtctgacctg
ggggagctgc cagtggatgc caggttcccc cccagggtgc ccaagtcttt tcctttcaac
acctctgtgg tgtacaagaa gaccctgttt gtggagttca ctgaccacct gttcaacatt
gccaagccca ggcccccctg gatggggctg ctggggccca ccatccaggc tgaggtgtat
gacactgtgg tgattaccct gaagaacatg gctagccacc ctgtgagcct gcatgctgtg
ggggtgagct attggaaggc ctctgagggg gctgagtatg atgatcagac cagccagagg
gaaaaggagg atgacaaggt gttccctggg ggcagccata cttatgtgtg gcaggtgctg
aaggagaatg ggcccatggc ctctgacccc ctgtgcctga cttacagcta tctgagccat
gtggacctgg tgaaggatct gaactctggc ctgattgggg ctctgctggt gtgcagggag
ggcagcctgg ctaaggagaa gactcagact ctgcataagt tcatcctgct gtttgctgtg
tttgatgaag gcaagagctg gcactctgag accaagaact ctctgatgca ggatagggat
gctgcctctg ccagggcttg gcccaagatg cacactgtga atggctatgt gaacaggagc
ctgcctggcc tgattgggtg ccacaggaag tctgtgtact ggcatgtgat tggcatgggc
accacccctg aggtgcacag cattttcctg gagggccaca ccttcctggt gaggaatcac
aggcaggcca gcctggagat cagccccatc accttcctga ctgcccagac cctgctgatg
gacctggggc agtttctgct gttctgccac atcagcagcc atcagcatga tggcatggag
gcctatgtga aggtggactc ttgccctgag gagccccagc tgaggatgaa gaacaatgag
gaggctgagg attatgatga tgacctgact gactctgaga tggatgtggt gaggtttgat
gatgacaata gccccagctt catccagatt aggtctgtgg ccaagaagca ccctaagacc
tgggtgcact acattgctgc tgaggaggag gattgggatt atgcccccct ggtgctggct
cctgatgaca ggtcttataa gagccagtac ctgaacaatg ggccccagag gattggcagg
aagtacaaga aggtgaggtt catggcttac actgatgaga ccttcaagac tagggaggcc
atccagcatg agtctggcat cctgggcccc ctgctgtatg gggaggtggg ggataccctg
ctgatcatct tcaagaacca ggccagcagg ccctacaaca tttaccctca tggcatcact
gatgtgaggc ccctgtacag caggagactg cccaaggggg tgaagcacct gaaggatttt
cccattctgc ctggggagat cttcaagtac aagtggactg tgactgtgga ggatggcccc
accaagtctg atcccaggtg cctgactagg tactactctt cttttgtgaa tatggagagg
gatctggcct ctggcctgat tggccccctg ctgatctgct acaaggagtc tgtggaccag
aggggcaacc agatcatgtc tgacaagagg aatgtgatcc tgttctctgt gtttgatgag
aataggagct ggtacctgac tgagaatatc cagaggttcc tgcctaatcc tgctggggtc
cagctggagg atcctgagtt ccaggctagc aacattatgc acagcatcaa tggctatgtg
tttgattctc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cttactggta catcctgtct
attggggccc agactgattt cctgtctgtg ttcttctctg gctacacttt caagcataag
atggtgtatg aggataccct gaccctgttc cccttctctg gggagactgt gttcatgtct
atggagaacc ctggcctgtg gatcctgggc tgtcataact ctgacttcag aaacaggggc
atgactgccc tgctgaaggt gagcagctgt gacaagaaca ctggggacta ctatgaggac
agctatgagg atatctctgc ttatctgctg agcaagaata atgccattga gcccaggagc
ttcagccaga acccccctgt gctgaagagg caccagaggg agatcactag gactaccctg
cagtctgatc aggaggagat tgactatgat gacaccatct ctgtggagat gaagaaggag
gactttgaca tctatgatga ggatgagaac cagtccccca ggtctttcca gaagaagacc
aggcactact tcattgctgc tgtggagagg ctgtgggact atggcatgag ctctagcccc
catgtgctga ggaacagggc tcagtctggc tctgtgcccc agttcaagaa ggtggtcttc
caggagttca ctgatggctc ttttacccag cctctgtaca gaggggagct gaatgagcac
ctgggcctgc tgggccccta catcagggct gaggtggagg ataatatcat ggtgaccttc
agaaaccagg cctctaggcc ctacagcttc tacagcagcc tgatctctta tgaggaggat
cagaggcagg gggctgagcc caggaagaac tttgtgaagc ccaatgagac caagacctac
ttctggaagg tgcagcacca tatggcccct actaaggatg agtttgactg caaggcctgg
gcttattttt ctgatgtgga cctggagaag gatgtgcact ctgggctgat tggccccctg
ctggtgtgcc acaccaacac cctgaaccct gcccatggca ggcaggtgac tgtgcaggag
tttgccctgt tcttcactat ctttgatgag accaagagct ggtacttcac tgagaacatg
gagagaaatt gtagggctcc ctgcaatatc cagatggagg accccacctt caaagaaaat
tacagattcc atgccatcaa tgggtacatc atggataccc tgcctgggct ggtgatggct
caggaccaga ggatcaggtg gtacctgctg agcatggggt ctaatgagaa catccactct
atccatttct ctggccatgt gttcactgtg agaaagaagg aggagtataa gatggctctg
tacaacctgt acccaggggt gtttgagact gtggaaatgc tgcccagcaa agctgggatc
tggagggtgg agtgcctgat tggggagcac ctgcatgctg gcatgtctac cctgttcctg
gtgtacagca acaagtgcca gactcccctg ggcatggcct ctgggcacat cagggatttt
cagatcactg cctctggcca gtatggccag tgggccccca agctggccag gctgcactac
tctggcagca ttaatgcttg gagcactaag gagcccttca gctggatcaa ggtggatctg
ctggccccca tgatcatcca tggcatcaag acccaggggg ccaggcagaa gttctctagc
ctgtacattt ctcagttcat catcatgtac agcctggatg ggaagaagtg gcagacctac
agggggaaca gcactgggac cctgatggtg ttctttggca atgtggatag ctctggcatc
aagcacaata tcttcaatcc ccccattatt gccaggtaca ttaggctgca tcctactcac
tactctatta ggagcaccct gaggatggag ctgatggggt gtgacctgaa cagctgttct
atgcccctgg gcatggagtc taaggctatc tctgatgccc agatcactgc cagcagctac
ttcactaata tgtttgccac ctggagccct agcaaggcca gactgcacct gcagggcagg
agcaatgcct ggaggcccca ggtgaacaac cccaaggagt ggctgcaggt ggacttccag
aagaccatga aggtgactgg ggtgaccact cagggggtga agagcctgct gaccagcatg
tatgtgaagg agttcctgat cagcagcagc caggatggcc accagtggac cctgttcttc
cagaatggga aggtgaaggt gttccagggc aaccaggact ctttcacccc tgtggtgaac
agcctggatc ctcccctgct gaccaggtac ctgaggatcc acccccagag ctgggtgcac
cagattgctc tgaggatgga agtgctgggc tgtgaggccc aggatctgta ctga
Вариант X11 нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующий FVIII (SEQ ID NO:11)
atgcagattg agctgagcac ctgcttcttc ctgtgcctgc tgaggttttg cttctctgct
accaggaggt actacctggg ggctgtggag ctgagctggg actatatgca gtctgacctg
ggggagctgc ctgtggatgc taggttccct cccagggtgc ccaagagctt cccctttaat
acctctgtgg tgtacaagaa aaccctgttt gtggagttca ctgaccatct gttcaacatt
gccaagccca ggcccccttg gatgggcctg ctgggcccca ccattcaggc tgaggtgtat
gacactgtgg tcattaccct gaagaacatg gcttctcacc ctgtgagcct gcatgctgtg
ggggtgagct actggaaggc ctctgagggg gctgagtatg atgaccagac cagccagagg
gagaaggagg atgataaggt gttccctggg ggcagccaca cctatgtgtg gcaggtgctg
aaggagaatg gccccatggc ctctgatccc ctgtgcctga cctactctta tctgtctcat
gtggacctgg tgaaggacct gaactctggc ctgattgggg ctctgctggt gtgcagggag
ggctctctgg ccaaggagaa gacccagacc ctgcacaagt ttattctgct gtttgctgtc
tttgatgagg gcaagagctg gcattctgag accaagaaca gcctgatgca ggacagggat
gctgcctctg ccagggcctg gcccaaaatg cacactgtga atggctatgt gaacaggagc
ctgcctggcc tgattggctg ccacaggaag tctgtgtact ggcatgtgat tggcatgggc
accacccctg aggtgcacag catcttcctg gagggccaca cctttctggt gaggaatcac
aggcaggcca gcctggagat tagccccatc accttcctga ctgcccagac cctgctgatg
gacctgggcc agttcctgct gttctgccac atcagcagcc accagcatga tggcatggag
gcctatgtga aggtggatag ctgccctgag gagccccagc tgaggatgaa aaacaatgag
gaggctgagg attatgatga tgacctgact gactctgaga tggatgtggt gaggtttgat
gatgacaata gccccagctt tattcagatt aggtctgtgg ctaagaagca ccccaagact
tgggtgcact acattgctgc tgaggaggag gattgggact atgcccctct ggtcctggcc
cctgatgata ggtcttacaa gagccagtat ctgaacaatg gcccccagag gattggcagg
aagtacaaga aggtgaggtt catggcctac actgatgaga cctttaagac cagggaggcc
attcagcatg agtctgggat cctgggcccc ctgctgtatg gggaggtggg ggacactctg
ctgatcatct tcaagaacca ggccagcagg ccttataaca tctaccctca tgggatcact
gatgtgaggc ccctgtactc tagaaggctg cccaaggggg tcaagcacct gaaggatttt
cccatcctgc ctggggagat tttcaagtac aagtggactg tgactgtgga ggatggcccc
accaagtctg accctaggtg cctgaccagg tactacagct cttttgtgaa catggagagg
gacctggcct ctggcctgat tggccctctg ctgatttgct acaaggagtc tgtggaccag
aggggcaacc agatcatgtc tgacaagagg aatgtgatcc tgttttctgt gtttgatgag
aacaggtctt ggtacctgac tgagaacatc cagaggttcc tgcctaaccc agctggggtg
cagctggagg atcctgagtt ccaggccagc aatattatgc atagcattaa tggctatgtg
tttgatagcc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cctactggta catcctgagc
attggggccc agactgactt tctgtctgtg ttcttctctg gctacacctt caagcataag
atggtgtatg aggacaccct gactctgttc cctttttctg gggagactgt gtttatgagc
atggagaatc ctggcctgtg gatcctgggc tgccataatt ctgacttcag gaacaggggc
atgactgccc tgctgaaagt gagcagctgt gacaagaata ctggggacta ctatgaagac
agctatgagg acatctctgc ctacctgctg agcaagaaca atgccattga gcccaggagc
ttcagccaga accccccagt gctgaagagg caccagagag agatcaccag gactaccctg
cagtctgacc aggaggagat tgactatgat gacaccattt ctgtggagat gaagaaggag
gactttgaca tttatgatga ggatgagaat cagagcccca ggagcttcca gaagaagact
aggcactatt ttattgctgc tgtggagagg ctgtgggact atggcatgag cagctctccc
catgtgctga ggaatagggc ccagtctggc tctgtgcctc agttcaagaa ggtggtgttc
caggagttca ctgatggcag ctttacccag cccctgtata ggggggagct gaatgagcac
ctgggcctgc tgggccccta tatcagggct gaggtggagg acaatattat ggtgaccttt
aggaaccagg ccagcaggcc ctactctttc tatagcagcc tgatcagcta tgaggaggac
cagaggcagg gggctgagcc caggaagaat tttgtgaagc ctaatgagac caagacctac
ttctggaagg tgcagcatca catggccccc accaaggatg agtttgactg caaggcttgg
gcctatttct ctgatgtgga cctggagaag gatgtgcact ctggcctgat tggccccctg
ctggtgtgcc acactaacac tctgaatcct gcccatggca ggcaggtgac tgtgcaggag
tttgccctgt tcttcaccat ctttgatgag accaagagct ggtacttcac tgagaacatg
gagaggaact gcagggcccc ctgcaacatc cagatggagg atcccacctt caaggagaac
tacaggtttc atgccatcaa tggctacatc atggacactc tgcctggcct ggtgatggcc
caggatcaga ggatcaggtg gtacctgctg agcatgggct ctaatgagaa tatccatagc
atccacttct ctggccatgt gttcactgtc aggaagaagg aggagtacaa gatggctctg
tataatctgt accctggggt gtttgagact gtggagatgc tgcccagcaa ggctggcatc
tggagggtgg agtgcctgat tggggagcac ctgcatgctg ggatgagcac cctgtttctg
gtgtactcta acaagtgcca gacccccctg ggcatggcct ctgggcacat cagggatttc
cagatcactg cttctggcca gtatggccag tgggccccca agctggccag gctgcactac
tctggcagca tcaatgcctg gtctaccaag gagccctttt cttggattaa ggtggacctg
ctggccccca tgatcatcca tggcatcaag acccaggggg ccaggcagaa gttcagcagc
ctgtacatca gccagttcat catcatgtac agcctggatg gcaaaaagtg gcagacctac
aggggcaata gcactgggac tctgatggtg ttctttggca atgtggacag ctctgggatc
aagcacaata tcttcaaccc tcccatcatt gctaggtaca tcaggctgca ccccacccac
tatagcatca ggtctaccct gaggatggag ctgatgggct gtgacctgaa ctcttgcagc
atgcccctgg gcatggagtc caaagctatc tctgatgccc agattactgc cagcagctac
ttcaccaaca tgtttgccac ctggtctccc tctaaggcca ggctgcacct gcagggcagg
agcaatgcct ggaggcccca ggtgaacaat cccaaggagt ggctgcaggt ggatttccag
aaaactatga aggtgactgg ggtgaccacc cagggggtga agtctctgct gaccagcatg
tatgtgaagg agttcctgat ctcttctagc caggatggcc accagtggac tctgttcttc
cagaatggca aggtgaaggt gttccagggc aaccaggaca gcttcacccc tgtggtgaac
tctctggatc cccccctgct gaccaggtac ctgaggattc atccccagag ctgggtgcac
cagattgctc tgagaatgga ggtgctgggg tgtgaggctc aggacctgta ttga
Вариант X12 нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующий FVIII (SEQ ID NO:12)
atgcagattg agctgtctac ttgttttttt ctgtgcctgc tgaggttctg cttctctgcc
accaggaggt attacctggg ggctgtggag ctgagctggg attacatgca gtctgatctg
ggggagctgc ctgtggatgc caggttcccc cccagggtgc ccaagagctt ccccttcaac
acctctgtgg tgtataagaa gaccctgttt gtggagttca ctgatcatct gtttaacatt
gccaagccca ggcccccctg gatgggcctg ctgggcccaa ctatccaggc tgaggtgtat
gacactgtgg tcatcaccct gaagaatatg gccagccatc ctgtgagcct gcatgctgtg
ggggtgagct actggaaggc ctctgagggg gctgagtatg atgaccagac cagccagagg
gagaaggagg atgacaaggt gttccctggg ggcagccaca cctatgtgtg gcaggtgctg
aaggagaatg gccccatggc ctctgacccc ctgtgcctga cttatagcta cctgtctcat
gtggacctgg tgaaggacct gaactctggc ctgattgggg ccctgctggt ctgtagggaa
ggcagcctgg ccaaggagaa gacccagacc ctgcacaagt ttattctgct gtttgctgtg
tttgatgaag gcaagagctg gcactctgag accaagaatt ctctgatgca ggatagggat
gctgcctctg ccagggcctg gcccaagatg catactgtga atggctatgt gaacagaagc
ctgcctggcc tgattggctg ccataggaag tctgtgtatt ggcatgtgat tgggatgggc
actacccctg aagtgcacag cattttcctg gagggccaca ctttcctggt gaggaaccac
aggcaggcct ctctggagat cagccccatt actttcctga ctgcccagac cctgctgatg
gatctgggcc agttcctgct gttctgccac atctctagcc accagcatga tggcatggag
gcctatgtga aggtggacag ctgccctgag gagccccagc tgaggatgaa gaataatgag
gaggctgagg attatgatga tgacctgact gactctgaga tggatgtggt gaggtttgat
gatgataata gccccagctt catccagatc aggtctgtgg ccaagaagca tcccaagacc
tgggtgcact atattgctgc tgaagaggag gactgggact atgcccctct ggtgctggct
cctgatgaca ggagctataa gagccagtat ctgaacaatg ggccccagag gattgggagg
aagtacaaga aggtgaggtt catggcctac actgatgaga cctttaagac cagggaggcc
atccagcatg agtctggcat tctggggccc ctgctgtatg gggaggtggg ggacactctg
ctgatcattt tcaagaacca ggccagcagg ccctacaata tttaccccca tggcatcact
gatgtgaggc ccctgtacag caggaggctg cccaaggggg tgaagcacct gaaggacttc
cccatcctgc ctggggagat cttcaagtac aagtggactg tgactgtgga ggatggccct
accaagtctg accctaggtg tctgactagg tactacagca gctttgtgaa catggagaga
gacctggctt ctggcctgat tggccccctg ctgatctgct acaaggagtc tgtggatcag
aggggcaacc agattatgtc tgataagagg aatgtcatcc tgttctctgt gtttgatgag
aacaggagct ggtatctgac tgagaacatt cagaggttcc tgcccaaccc tgctggggtg
cagctggagg accctgagtt ccaggccagc aacatcatgc attctattaa tggctatgtg
tttgacagcc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cctactggta catcctgagc
attggggccc agactgactt tctgtctgtg tttttctctg ggtacacctt caagcacaag
atggtctatg aggacaccct gaccctgttc cccttttctg gggaaactgt gtttatgagc
atggagaacc ctgggctgtg gatcctgggc tgccacaact ctgactttag gaataggggc
atgactgccc tgctgaaggt gagcagctgt gacaagaata ctggggatta ctatgaggac
agctatgagg atatctctgc ctacctgctg agcaagaaca atgccattga gcctaggagc
ttcagccaga acccccctgt gctgaagagg caccagaggg agatcaccag gaccaccctg
cagtctgatc aggaggagat tgactatgat gacaccatct ctgtggagat gaagaaggag
gactttgata tttatgatga ggatgagaac cagagcccca ggagcttcca gaagaagacc
aggcactatt tcattgctgc tgtggagagg ctgtgggact atggcatgag ctctagcccc
catgtgctga ggaacagggc ccagtctggc tctgtgcccc agttcaagaa ggtggtgttc
caggaattta ctgatggcag ctttacccag cccctgtaca gaggggagct gaatgagcac
ctgggcctgc tgggccccta catcagggct gaggtggagg ataatatcat ggtgaccttt
aggaaccagg cctctaggcc ctattctttt tacagcagcc tgatcagcta tgaggaggac
cagaggcagg gggctgagcc taggaagaac tttgtgaagc ccaatgagac caagacctac
ttttggaaag tgcagcacca catggccccc actaaggatg agtttgattg caaggcctgg
gcctatttct ctgatgtgga cctggagaag gatgtgcact ctggcctgat tggccccctg
ctggtgtgcc acaccaacac tctgaaccct gcccatggca ggcaggtgac tgtgcaggag
tttgccctgt tctttaccat ctttgatgag actaagagct ggtatttcac tgagaacatg
gagaggaact gcagagcccc ttgcaacatc cagatggagg accctacctt caaggagaac
tataggttcc atgccatcaa tgggtacatc atggataccc tgcctggcct ggtgatggct
caggaccaga ggatcaggtg gtacctgctg agcatgggga gcaatgagaa cattcatagc
atccacttct ctgggcatgt gttcactgtg aggaagaagg aggagtataa gatggccctg
tacaacctgt accctggggt gtttgagact gtggagatgc tgcccagcaa ggctggcatc
tggagggtgg agtgcctgat tggggagcac ctgcatgctg gcatgagcac tctgttcctg
gtgtacagca acaagtgcca gacccccctg ggcatggcct ctggccacat cagggacttc
cagattactg cctctgggca gtatgggcag tgggccccca agctggccag gctgcactac
tctgggtcta tcaatgcttg gagcaccaag gagcctttca gctggatcaa ggtggatctg
ctggccccca tgatcattca tgggatcaag acccaggggg ccaggcagaa gttcagcagc
ctgtatattt ctcagttcat catcatgtat tctctggatg gcaaaaagtg gcagacctat
agagggaaca gcactgggac cctgatggtg ttttttggca atgtggatag ctctggcatc
aagcacaata tcttcaaccc ccccattatt gccaggtaca tcaggctgca ccccacccac
tactctatca ggagcaccct gaggatggag ctgatgggct gtgatctgaa cagctgctct
atgcctctgg ggatggaaag caaggccatc tctgatgccc agatcactgc cagcagctat
ttcaccaata tgtttgccac ttggagccct agcaaggcta ggctgcatct gcagggcagg
tctaatgcct ggaggcccca ggtgaacaac cccaaggagt ggctgcaggt ggacttccag
aagactatga aagtgactgg ggtgaccacc cagggggtga aaagcctgct gaccagcatg
tatgtgaagg agttcctgat tagcagcagc caggatggcc accagtggac cctgttcttc
cagaatggga aggtgaaggt gtttcagggc aatcaggata gcttcacccc agtggtgaac
agcctggacc cccccctgct gaccaggtac ctgaggatcc acccccagag ctgggtgcac
cagattgccc tgaggatgga ggtgctgggc tgtgaggccc aggatctgta ctga
Вариант X13 нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующий FVIII (SEQ ID NO:13)
atgcagattg agctgagcac ctgctttttc ctgtgcctgc tgaggttctg cttctctgct
accaggaggt actacctggg ggctgtggag ctgtcttggg attacatgca gtctgacctg
ggggagctgc ctgtggatgc caggtttccc cccagggtgc ccaagtcttt cccctttaac
acctctgtgg tgtataagaa gactctgttt gtggagttca ctgatcacct gttcaatatt
gccaagccca ggcccccttg gatgggcctg ctgggcccca ctatccaggc tgaggtgtat
gacactgtgg tcatcaccct gaagaacatg gccagccacc ctgtgagcct gcatgctgtg
ggggtgagct actggaaggc ctctgagggg gctgagtatg atgaccagac cagccagagg
gagaaggagg atgacaaggt gttcccaggg gggtctcaca cttatgtgtg gcaggtgctg
aaggagaatg ggcccatggc ctctgaccct ctgtgcctga cttatagcta cctgtctcat
gtggatctgg tgaaggacct gaactctggc ctgattgggg ccctgctggt gtgcagggag
gggagcctgg ccaaggagaa gacccagacc ctgcacaagt tcatcctgct gtttgctgtg
tttgatgagg ggaagagctg gcactctgag accaagaata gcctgatgca ggacagggat
gctgcttctg ctagggcctg gcctaagatg cacactgtga atggctatgt gaacaggagc
ctgcctggcc tgattgggtg tcacaggaag tctgtgtact ggcatgtgat tggcatgggg
actactccag aagtgcacag catcttcctg gaggggcaca ccttcctggt gaggaatcac
aggcaggcca gcctggagat ttctcccatc actttcctga ctgcccagac cctgctgatg
gatctggggc agttcctgct gttctgccac atcagcagcc atcagcatga tgggatggag
gcctatgtga aggtggacag ctgccctgag gagcctcagc tgaggatgaa gaacaatgag
gaggctgagg actatgatga tgatctgact gactctgaga tggatgtggt gaggtttgat
gatgacaact ctcccagctt catccagatc aggtctgtgg ccaagaagca ccccaagacc
tgggtgcact acattgctgc tgaggaggag gattgggatt atgctcccct ggtgctggct
cctgatgata ggagctacaa gagccagtat ctgaataatg ggccccagag gattggcagg
aagtataaga aggtgaggtt catggcctac actgatgaga cctttaagac cagggaggct
attcagcatg agtctggcat cctgggcccc ctgctgtatg gggaggtggg ggacaccctg
ctgatcattt tcaagaacca ggccagcagg ccctataaca tctatcccca tgggatcact
gatgtgaggc ccctgtactc taggaggctg cccaaggggg tcaagcacct gaaggacttc
cccatcctgc ctggggagat cttcaagtac aagtggactg tgactgtgga ggatggcccc
actaagtctg accccaggtg cctgactagg tactacagca gctttgtgaa catggagaga
gatctggcct ctggcctgat tggccccctg ctgatctgct acaaagagtc tgtggatcag
aggggcaacc agatcatgtc tgacaagagg aatgtgatcc tgttctctgt gtttgatgag
aacagaagct ggtacctgac tgagaacatt cagaggtttc tgcccaaccc tgctggggtc
cagctggagg accctgagtt tcaggccagc aacatcatgc acagcatcaa tgggtatgtg
tttgacagcc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cctactggta tatcctgagc
attggggccc agactgattt cctgtctgtg ttcttctctg gctacacttt caagcacaag
atggtgtatg aggataccct gaccctgttc cctttctctg gggaaactgt gttcatgagc
atggagaacc ctgggctgtg gatcctgggg tgccacaatt ctgatttcag gaacagaggc
atgactgctc tgctgaaggt gtctagctgt gacaagaaca ctggggacta ctatgaggac
agctatgagg acatctctgc ctacctgctg agcaagaaca atgctattga acccaggtct
ttcagccaga acccccctgt gctgaagagg caccagaggg agatcactag gaccaccctg
cagtctgatc aggaggagat tgactatgat gacaccatct ctgtggagat gaagaaggag
gactttgaca tctatgatga ggatgagaat cagtctccca ggagcttcca gaagaagact
aggcattact tcattgctgc tgtggagagg ctgtgggact atggcatgag ctctagccct
catgtgctga ggaacagggc ccagtctggc tctgtgcccc agttcaagaa ggtggtgttt
caggagttca ctgatggcag cttcacccag cccctgtaca ggggggagct gaatgagcat
ctgggcctgc tgggccccta catcagggct gaggtggagg acaacatcat ggtgaccttc
agaaatcagg ctagcaggcc ctacagcttc tacagcagcc tgatctctta tgaggaggac
cagaggcagg gggctgagcc caggaagaac tttgtgaagc ccaatgagac caagacctat
ttctggaagg tgcagcacca catggccccc accaaggatg agtttgattg caaggcctgg
gcctacttct ctgatgtgga cctggagaag gatgtgcatt ctgggctgat tggccctctg
ctggtgtgcc acaccaacac cctgaatcct gcccatggca ggcaggtgac tgtgcaggag
tttgccctgt tctttactat ctttgatgag accaagtctt ggtattttac tgagaacatg
gagaggaact gcagggcccc ctgcaacatc cagatggagg accccacctt caaggagaac
tacagattcc atgccatcaa tggctacatt atggacactc tgcctggcct ggtgatggcc
caggaccaga ggatcaggtg gtacctgctg tctatgggca gcaatgagaa cattcactct
atccacttct ctgggcatgt gttcactgtg aggaagaagg aggagtacaa gatggccctg
tacaacctgt accctggggt gtttgagact gtggagatgc tgcctagcaa ggctgggatc
tggagggtgg agtgcctgat tggggagcac ctgcatgctg gcatgtctac cctgttcctg
gtgtacagca acaagtgcca gacccccctg ggcatggcct ctggccacat cagagatttt
cagatcactg cctctggcca gtatggccag tgggctccta agctggccag gctgcactac
tctggcagca tcaatgcctg gagcaccaag gagcccttta gctggatcaa ggtggacctg
ctggccccca tgatcatcca tggcatcaag actcaggggg ccaggcagaa gttctctagc
ctgtacatta gccagttcat catcatgtat agcctggatg gcaagaagtg gcagacctac
aggggcaaca gcactgggac cctgatggtg ttctttggga atgtggacag ctctgggatc
aagcacaata tcttcaaccc ccccattatt gccaggtata ttaggctgca ccccactcac
tacagcatta ggagcaccct gaggatggag ctgatgggct gtgatctgaa cagctgcagc
atgcccctgg gcatggagtc taaggccatc tctgatgccc agatcactgc cagctcttac
ttcaccaaca tgtttgccac ttggagcccc agcaaggcca ggctgcacct gcagggcagg
agcaatgcct ggaggcccca ggtgaacaac cccaaggagt ggctgcaggt ggatttccag
aagactatga aggtgactgg ggtgaccact cagggggtga agagcctgct gactagcatg
tatgtgaagg agttcctgat cagctctagc caggatggcc accagtggac cctgttcttt
cagaatggca aggtgaaggt gttccagggc aaccaggact ctttcacccc tgtggtgaat
tctctggacc ctcccctgct gactaggtat ctgaggattc atccccagag ctgggtgcat
cagattgccc tgaggatgga ggtgctgggc tgtgaggccc aggacctgta ttga
Вариант X14 нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующий FVIII (SEQ ID NO:14)
atgcagattg agctgagcac ctgcttcttc ctgtgcctgc tgaggttttg cttttctgcc
actaggaggt actacctggg ggctgtggag ctgtcttggg attacatgca gtctgacctg
ggggagctgc cagtggatgc caggttcccc ccaagggtgc ccaagtcttt tcccttcaat
acctctgtgg tgtacaagaa gaccctgttt gtggagttta ctgatcatct gtttaacatt
gccaagccca ggcccccctg gatggggctg ctgggcccca ccatccaggc tgaggtgtat
gatactgtgg tgattaccct gaagaatatg gccagccatc ctgtgtctct gcatgctgtg
ggggtgtctt attggaaggc ctctgagggg gctgagtatg atgatcagac cagccagagg
gagaaggagg atgataaggt gttccctggg ggctctcaca cctatgtgtg gcaggtgctg
aaggagaatg ggcctatggc ctctgaccca ctgtgcctga cttacagcta tctgagccat
gtggacctgg tgaaggacct gaactctggg ctgattgggg ccctgctggt gtgcagggag
ggcagcctgg ccaaggagaa gactcagacc ctgcacaagt tcatcctgct gtttgctgtg
tttgatgagg gcaagtcttg gcactctgag accaagaaca gcctgatgca ggatagggat
gctgcctctg ccagggcctg gcccaagatg cacactgtga atggctatgt gaacaggtct
ctgcctggcc tgattggctg ccacaggaag tctgtgtact ggcatgtgat tggcatgggc
accacccctg aggtgcatag cattttcctg gagggccaca ccttcctggt gaggaaccac
aggcaggcta gcctggagat cagccccatc actttcctga ctgcccagac cctgctgatg
gacctgggcc agttcctgct gttctgccac atctctagcc accagcatga tggcatggag
gcctatgtga aggtggactc ttgtcctgag gagccccagc tgaggatgaa gaacaatgag
gaggctgagg attatgatga tgatctgact gattctgaga tggatgtggt gaggtttgat
gatgacaaca gcccctcttt catccagatc aggtctgtgg ccaagaagca ccccaagacc
tgggtgcact acattgctgc tgaggaggag gattgggatt atgcccccct ggtgctggcc
cctgatgaca ggagctataa gtctcagtac ctgaacaatg gcccccagag aattggcagg
aagtacaaga aggtgaggtt catggcctat actgatgaga ccttcaaaac cagggaggcc
attcagcatg agtctggcat cctggggccc ctgctgtatg gggaggtggg ggacaccctg
ctgatcatct tcaagaacca ggctagcagg ccttacaaca tctaccccca tgggatcact
gatgtgaggc ccctgtacag caggaggctg cctaaggggg tgaagcacct gaaggacttt
cccattctgc ctggggagat cttcaagtat aagtggactg tgactgtgga ggatgggccc
accaagtctg accccaggtg cctgactagg tactactcta gctttgtgaa catggagagg
gacctggcct ctgggctgat tggccccctg ctgatctgtt acaaggagtc tgtggaccag
aggggcaacc agatcatgtc tgataagagg aatgtgatcc tgttctctgt gtttgatgag
aacaggagct ggtacctgac tgagaacatc cagagattcc tgcccaaccc tgctggggtg
cagctggagg atcctgagtt ccaggccagc aacatcatgc attctatcaa tgggtatgtg
tttgatagcc tgcagctgtc tgtgtgtctg catgaggtgg cctactggta cattctgagc
attggggccc agactgactt cctgtctgtg ttcttctctg gctacacttt caaacacaag
atggtgtatg aggacaccct gaccctgttc cccttctctg gggagactgt gtttatgagc
atggagaacc ctgggctgtg gattctgggc tgccacaact ctgacttcag aaacaggggc
atgactgccc tgctgaaggt gtcttcttgt gataagaaca ctggggacta ttatgaagac
agctatgagg acatctctgc ctacctgctg agcaagaata atgctattga gcccaggtct
ttctctcaga acccccctgt gctgaagagg caccagaggg agatcaccag gaccaccctg
cagtctgatc aggaggagat tgactatgat gacactattt ctgtggagat gaagaaggaa
gactttgata tctatgatga ggatgagaac cagagcccta ggagcttcca gaagaagact
aggcattact tcattgctgc tgtggagagg ctgtgggact atggcatgag cagcagcccc
catgtgctga ggaatagggc tcagtctggc tctgtgcctc agttcaagaa ggtggtgttc
caggaattca ctgatggcag cttcactcag cccctgtaca ggggggagct gaatgagcac
ctggggctgc tgggccctta catcagggct gaggtggagg acaatatcat ggtgaccttt
aggaaccagg cctctaggcc ttacagcttc tactctagcc tgatctctta tgaagaggac
cagaggcagg gggctgagcc caggaagaac tttgtgaagc ccaatgagac taagacttac
ttctggaagg tgcagcacca catggctccc accaaggatg agtttgactg caaggcttgg
gcctacttct ctgatgtgga cctggagaag gatgtgcact ctgggctgat tgggcccctg
ctggtgtgcc acactaacac tctgaatcct gcccatggca gacaggtgac tgtgcaggag
tttgccctgt tttttaccat ctttgatgag actaagtctt ggtacttcac tgagaacatg
gagaggaact gcagggcccc ctgcaacatc cagatggagg atcccacctt caaggagaac
tacaggtttc atgccatcaa tggctacatc atggacaccc tgcctggcct ggtgatggct
caggaccaga ggattaggtg gtatctgctg agcatgggca gcaatgagaa tatccactct
atccacttct ctgggcatgt gttcactgtg aggaagaagg aggagtacaa gatggccctg
tataacctgt atcctggggt gtttgagact gtggagatgc tgcccagcaa ggctggcatc
tggagagtgg agtgcctgat tggggagcac ctgcatgctg gcatgagcac tctgtttctg
gtgtatagca acaagtgtca gacccctctg ggcatggcct ctgggcacat tagggacttt
cagatcactg cttctggcca gtatgggcag tgggctccca agctggccag gctgcactat
tctggcagca ttaatgcctg gagcaccaag gagcctttca gctggatcaa ggtggacctg
ctggccccca tgatcatcca tgggatcaag acccaggggg ctaggcagaa gttcagcagc
ctgtacatca gccagtttat catcatgtat tctctggatg gcaagaagtg gcagacctac
aggggcaatt ctactggcac tctgatggtg ttctttggga atgtggatag ctctgggatc
aagcataata tcttcaatcc ccccattatt gctaggtata tcaggctgca ccccacccac
tatagcatca ggagcaccct gaggatggag ctgatggggt gtgacctgaa cagctgcagc
atgcccctgg gcatggagag caaggctatt tctgatgccc agatcactgc cagcagctac
tttactaata tgtttgccac ctggagcccc agcaaggcca gactgcacct gcagggcagg
tctaatgcct ggaggcctca ggtgaataac cccaaggagt ggctgcaggt ggacttccag
aaaaccatga aggtgactgg ggtgactacc cagggggtga agtctctgct gaccagcatg
tatgtgaagg agttcctgat ctcttctagc caggatggcc accagtggac cctgttcttt
cagaatggga aggtgaaggt cttccagggc aaccaggata gcttcacccc tgtggtgaat
agcctggatc ctcctctgct gaccaggtat ctgaggatcc acccccagag ctgggtgcat
cagattgccc tgaggatgga ggtgctgggc tgtgaggctc aggacctgta ctga
Вариант X15 нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующий FVIII (SEQ ID NO:15)
atgcagattg agctgagcac ctgtttcttc ctgtgcctgc tgaggttctg tttctctgcc
actaggaggt actacctggg ggctgtggag ctgagctggg actatatgca gtctgacctg
ggggagctgc ctgtggatgc caggttcccc cccagggtgc ctaagagctt ccccttcaat
acttctgtgg tgtacaagaa gactctgttt gtggagttta ctgaccacct gttcaacatt
gctaagccca ggcctccctg gatggggctg ctgggcccca ccatccaggc tgaggtgtat
gatactgtgg tgattaccct gaagaacatg gcctctcatc cagtgagcct gcatgctgtg
ggggtgagct actggaaggc ctctgaaggg gctgagtatg atgaccagac cagccagagg
gagaaggagg atgacaaggt gttccctggg ggcagccaca cctatgtgtg gcaggtgctg
aaggagaatg gcccaatggc ctctgacccc ctgtgcctga cttatagcta cctgagccat
gtggatctgg tgaaggacct gaattctggc ctgattgggg ccctgctggt gtgcagagag
ggctctctgg ctaaggagaa gacccagact ctgcacaagt tcatcctgct gtttgctgtg
tttgatgagg gcaagagctg gcactctgag actaagaata gcctgatgca ggacagggat
gctgcttctg ccagggcctg gcccaagatg catactgtga atggctatgt gaacaggagc
ctgcctggcc tgattggctg tcacaggaaa tctgtctact ggcatgtgat tgggatgggc
actacccctg aggtgcactc tatcttcctg gagggccata ccttcctggt gaggaaccac
aggcaggcca gcctggagat ctctcccatt accttcctga ctgcccagac cctgctgatg
gatctgggcc agttcctgct gttctgccac atcagcagcc accagcatga tgggatggag
gcttatgtga aggtggatag ctgccctgag gagccccagc tgaggatgaa gaacaatgag
gaggctgagg actatgatga tgacctgact gactctgaga tggatgtggt gaggtttgat
gatgacaact ctcccagctt tattcagatc aggtctgtgg ctaagaagca ccccaagact
tgggtgcact acattgctgc tgaggaggag gactgggact atgcccctct ggtgctggct
cctgatgaca ggtcttacaa gtctcagtac ctgaataatg gccctcagag gattggcagg
aagtacaaga aggtgaggtt catggcctac actgatgaga ccttcaagac cagggaggcc
atccagcatg agtctggcat cctgggcccc ctgctgtatg gggaggtggg ggataccctg
ctgatcatct tcaagaatca ggccagcagg ccctacaaca tctaccccca tggcatcact
gatgtgaggc cactgtacag caggaggctg cccaaggggg tgaagcatct gaaggacttc
cccattctgc ctggggagat cttcaagtac aaatggactg tgactgtgga ggatggccct
accaagtctg accccaggtg tctgaccagg tactacagca gctttgtgaa tatggagagg
gacctggcct ctggcctgat tggccccctg ctgatctgct acaaggagtc tgtggaccag
aggggcaatc agatcatgtc tgataagagg aatgtgattc tgttctctgt gtttgatgag
aacaggagct ggtacctgac tgagaacatc cagaggttcc tgcccaatcc tgctggggtg
cagctggagg accctgagtt ccaggccagc aatatcatgc acagcatcaa tggctatgtc
tttgacagcc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cttactggta tattctgagc
attggggccc agactgattt cctgtctgtg ttcttttctg gctatacctt taagcacaag
atggtgtatg aggacaccct gaccctgttc cccttctctg gggagactgt gttcatgtct
atggagaacc ctgggctgtg gatcctgggc tgccacaact ctgacttcag gaacaggggg
atgactgccc tgctgaaggt gtctagctgt gataagaaca ctggggacta ttatgaggac
agctatgagg acatctctgc ttacctgctg agcaagaaca atgccattga gcccaggtct
ttcagccaga atccccctgt gctgaagagg catcagaggg agatcaccag gaccaccctg
cagtctgatc aggaggagat tgattatgat gacactatct ctgtggaaat gaagaaggag
gactttgaca tctatgatga ggatgagaac cagagcccca ggagcttcca gaagaagacc
aggcactact tcattgctgc tgtggagagg ctgtgggatt atggcatgag cagctctccc
catgtgctga ggaacagagc ccagtctggc tctgtgcctc agttcaagaa ggtggtcttc
caggagttca ctgatggctc tttcacccag cccctgtaca ggggggagct gaatgagcac
ctgggcctgc tggggcccta cattagggct gaggtggagg ataacatcat ggtgactttc
agaaaccagg ccagcaggcc ttacagcttt tactcttctc tgattagcta tgaggaggat
cagaggcagg gggctgagcc taggaagaac tttgtgaagc ccaatgagac caagacctat
ttctggaagg tgcagcacca catggctccc actaaggatg agtttgactg caaggcttgg
gcctacttct ctgatgtgga cctggagaag gatgtgcact ctggcctgat tgggcccctg
ctggtgtgcc acaccaacac cctgaaccct gcccatggca ggcaggtgac tgtgcaggag
tttgccctgt tcttcaccat ctttgatgag actaagagct ggtacttcac tgagaacatg
gagaggaact gcagggcccc ctgcaacatc cagatggagg accccacctt caaggagaat
tacaggttcc atgccatcaa tggctacatt atggacaccc tgcctggcct ggtgatggcc
caggatcaga ggatcaggtg gtatctgctg agcatgggct ctaatgagaa catccacagc
atccacttct ctggccatgt gtttactgtg aggaagaagg aggaatacaa gatggctctg
tataacctgt accctggggt gtttgagact gtggagatgc tgcccagcaa ggctgggatc
tggagggtgg agtgcctgat tggggagcac ctgcatgctg ggatgagcac cctgttcctg
gtgtatagca ataagtgcca gacccccctg ggcatggctt ctggccacat cagggatttc
cagatcactg cttctggcca gtatggccag tgggctccca agctggctag gctgcattac
tctgggtcta tcaatgcctg gagcactaag gagcccttca gctggatcaa ggtggacctg
ctggccccca tgatcattca tggcatcaag acccaggggg ctaggcagaa gttcagcagc
ctgtacatca gccagttcat cattatgtac agcctggatg gcaagaagtg gcagacttac
aggggcaata gcactgggac tctgatggtg ttctttggca atgtggactc ttctggcatc
aagcacaaca tcttcaaccc tcccatcatt gccaggtaca ttaggctgca ccctacccac
tactctatca ggagcaccct gaggatggag ctgatggggt gtgatctgaa ctcttgcagc
atgcctctgg gcatggaaag caaagccatc tctgatgccc agatcactgc ctctagctat
ttcaccaata tgtttgccac ctggagccct agcaaggcca ggctgcacct gcagggcaga
tctaatgcct ggaggcccca ggtgaacaat cccaaggagt ggctgcaggt ggacttccag
aagaccatga aggtgactgg ggtgaccact cagggggtga agagcctgct gactagcatg
tatgtgaagg agttcctgat ctcttctagc caggatggcc accagtggac cctgttcttc
cagaatggca aggtgaaagt gttccagggc aaccaggata gcttcactcc tgtggtgaac
tctctggacc ctcccctgct gactaggtac ctgaggattc atccccagag ctgggtgcac
cagattgccc tgaggatgga ggtgctgggc tgtgaggccc aggatctgta ctga
Вариант X16 нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующий FVIII (SEQ ID NO:16)
atgcagattg agctgagcac ctgcttcttc ctgtgcctgc tgaggttctg cttctctgcc
accaggaggt actacctggg ggctgtggag ctgtcttggg actatatgca gtctgacctg
ggggagctgc cagtggatgc caggttcccc cccagggtgc ccaagagctt tcctttcaac
acttctgtgg tgtacaagaa gaccctgttt gtggagttca ctgaccacct gttcaatatt
gctaagccca ggccaccctg gatgggcctg ctgggcccta ccattcaggc tgaggtgtat
gacactgtgg tgattactct gaagaatatg gccagccacc ctgtgagcct gcatgctgtg
ggggtgtctt actggaaggc ctctgagggg gctgagtatg atgatcagac ttctcagagg
gagaaggagg atgataaggt gttccctggg ggctctcaca cttatgtgtg gcaggtgctg
aaggagaatg gccccatggc ttctgatcca ctgtgcctga cctactctta cctgagccat
gtggacctgg tgaaggacct gaactctggc ctgattgggg ccctgctggt gtgcagggag
ggcagcctgg ccaaggagaa gacccagacc ctgcataagt tcatcctgct gtttgctgtg
tttgatgagg ggaagagctg gcactctgag accaagaatt ctctgatgca ggacagggat
gctgcctctg ccagggcctg gcctaagatg cacactgtga atggctatgt gaacaggtct
ctgcctggcc tgattggctg ccacaggaag tctgtgtact ggcatgtgat tggcatgggc
actacccctg aggtgcacag cattttcctg gagggccaca ccttcctggt caggaaccat
aggcaggcct ctctggagat cagccccatc actttcctga ctgcccagac cctgctgatg
gacctgggcc agttcctgct gttctgccac attagcagcc accagcatga tggcatggag
gcctatgtga aggtggactc ttgccctgag gagccccagc tgaggatgaa gaacaatgag
gaagctgagg attatgatga tgacctgact gactctgaga tggatgtggt gaggtttgat
gatgacaaca gccccagctt catccagatc aggtctgtgg ccaagaagca ccccaagacc
tgggtgcact acattgctgc tgaggaggag gattgggact atgctcccct ggtgctggct
cctgatgata ggagctacaa gtctcagtac ctgaataatg gcccccagag gattggcagg
aagtacaaga aggtgaggtt catggcctac actgatgaga ccttcaagac cagagaggct
atccagcatg agtctgggat cctggggccc ctgctgtatg gggaggtggg ggacaccctg
ctgatcatct tcaagaacca ggccagcaga ccctacaaca tctaccccca tgggatcact
gatgtgaggc ccctgtacag caggaggctg cctaaggggg tgaagcacct gaaggacttc
cccatcctgc ctggggagat cttcaagtat aagtggactg tgactgtgga ggatgggccc
accaagtctg accctaggtg cctgactagg tactactcta gctttgtgaa catggagagg
gacctggcct ctggcctgat tggccccctg ctgatttgct acaaggagtc tgtggatcag
aggggcaatc agatcatgtc tgacaagagg aatgtgatcc tgttctctgt gtttgatgag
aataggtctt ggtacctgac tgagaacatc cagaggttcc tgcctaatcc tgctggggtg
cagctggagg accctgagtt tcaggccagc aacatcatgc acagcatcaa tggctatgtg
tttgactctc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cttactggta tatcctgagc
attggggctc agactgactt cctgtctgtg ttcttttctg gctacacttt taagcacaag
atggtgtatg aggacaccct gaccctgttc cccttttctg gggagactgt gttcatgtct
atggagaacc ctgggctgtg gattctgggc tgtcacaact ctgacttcag aaacaggggc
atgactgccc tgctgaaggt gtctagctgt gacaagaata ctggggacta ctatgaggac
agctatgagg acatttctgc ctatctgctg agcaagaaca atgccattga gcccaggagc
ttttctcaga atccccctgt gctgaagagg caccagagag agatcaccag gaccactctg
cagtctgatc aggaggagat tgattatgat gacactatct ctgtggagat gaagaaagag
gactttgata tctatgatga ggatgagaat cagtctccca ggagcttcca gaagaagact
agacactact tcattgctgc tgtggagagg ctgtgggact atggcatgag ctctagccct
catgtgctga ggaacagggc ccagtctggg tctgtgcccc agttcaagaa ggtggtgttc
caggagttca ctgatggcag ctttacccag cccctgtata ggggggagct gaatgagcat
ctgggcctgc tgggccccta tattagggct gaagtggagg acaacatcat ggtgaccttt
aggaaccagg ccagcaggcc ctacagcttt tacagcagcc tgattagcta tgaggaggat
cagagacagg gggctgagcc caggaagaac tttgtgaagc ccaatgagac caagacctac
ttctggaagg tgcagcacca catggcccct accaaggatg agtttgactg caaggcctgg
gcttacttct ctgatgtgga cctggagaaa gatgtgcact ctggcctgat tgggcccctg
ctggtgtgcc acaccaacac cctgaaccct gcccatggga ggcaggtgac tgtgcaggag
tttgccctgt ttttcaccat ctttgatgag accaagagct ggtacttcac tgagaacatg
gagaggaact gcagggcccc ctgtaacatc cagatggagg atcctacttt caaggagaac
tacaggttcc atgccattaa tgggtacatc atggacaccc tgcctgggct ggtgatggcc
caggatcaga ggattaggtg gtatctgctg tctatgggct ctaatgagaa catccactct
atccacttct ctggccatgt gttcactgtg aggaagaagg aggagtacaa gatggccctg
tacaacctgt accctggggt gtttgaaact gtggagatgc tgccctctaa agctgggatc
tggagggtgg agtgcctgat tggggagcac ctgcatgctg gcatgagcac cctgttcctg
gtgtacagca ataagtgcca gactcccctg ggcatggctt ctgggcacat cagggatttc
cagatcactg cctctggcca gtatggccag tgggccccca agctggctag gctgcactac
tctggcagca tcaatgcctg gagcaccaag gagcccttct cttggattaa ggtggacctg
ctggctccca tgatcattca tggcatcaag acccaggggg ccaggcagaa gttttctagc
ctgtatatta gccagttcat catcatgtat agcctggatg ggaagaagtg gcagacctac
agggggaata gcactggcac cctgatggtg ttttttggca atgtggattc ttctggcatc
aagcataaca tcttcaatcc ccctatcatt gccaggtaca ttaggctgca tcccacccat
tactctatca ggagcaccct gaggatggag ctgatggggt gtgatctgaa cagctgtagc
atgcccctgg gcatggagtc caaggctatc tctgatgccc agatcactgc cagcagctac
ttcaccaaca tgtttgccac ctggagcccc agcaaggcca ggctgcacct gcagggcagg
tctaatgcct ggaggcccca ggtgaacaat cccaaggagt ggctgcaggt ggacttccag
aagactatga aggtgactgg ggtgaccact cagggggtga agagcctgct gaccagcatg
tatgtgaagg agttcctgat ctcttctagc caggatgggc atcagtggac cctgtttttt
cagaatggca aagtgaaggt gtttcagggg aatcaggaca gctttacccc tgtggtgaac
agcctggatc ctcctctgct gactagatac ctgaggatcc acccccagag ctgggtccac
cagattgctc tgaggatgga ggtgctgggg tgtgaggctc aggacctgta ctga
Вариант X17 нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующий FVIII (SEQ ID NO:17)
atgcagattg agctgagcac ctgcttcttt ctgtgcctgc tgaggttctg cttctctgcc
accaggaggt actacctggg ggctgtggaa ctgagctggg actatatgca gtctgacctg
ggggagctgc ctgtggatgc caggttcccc cccagggtgc ccaagtcttt cccctttaac
acttctgtgg tgtacaagaa gaccctgttt gtggagttta ctgaccacct gttcaatatt
gccaagccca ggcccccctg gatgggcctg ctgggcccaa ccatccaggc tgaggtgtat
gatactgtgg tgatcaccct gaagaacatg gccagccacc ctgtgagcct gcatgctgtg
ggggtgagct attggaaggc ttctgagggg gctgagtatg atgaccagac tagccagagg
gagaaggagg atgacaaggt gttccctggg gggtctcata cctatgtgtg gcaggtgctg
aaggagaatg gccccatggc ctctgacccc ctgtgcctga cctattctta cctgagccat
gtggacctgg tcaaggacct gaactctggc ctgattgggg ctctgctggt gtgcagggag
ggcagcctgg ccaaggagaa gactcagact ctgcataagt tcatcctgct gtttgctgtg
tttgatgagg gcaagagctg gcactctgag accaagaact ctctgatgca ggatagggat
gctgcctctg ccagggcctg gcccaagatg cacactgtga atggctatgt gaataggtct
ctgcctggcc tgattggctg ccataggaag tctgtgtact ggcatgtgat tggcatgggc
actacccctg aggtgcactc tatcttcctg gaggggcaca ccttcctggt gaggaaccac
aggcaggcca gcctggagat ctctcccatc accttcctga ctgcccagac tctgctgatg
gacctgggcc agttcctgct gttctgccat atcagcagcc accagcatga tggcatggag
gcctatgtga aggtggacag ctgcccagag gaaccccagc tgaggatgaa gaacaatgag
gaggctgagg actatgatga tgacctgact gactctgaga tggatgtggt gaggtttgat
gatgacaaca gccccagctt tattcagatc aggtctgtgg ccaagaagca ccccaagacc
tgggtgcact acattgctgc tgaggaggag gactgggatt atgcccccct ggtgctggcc
cctgatgaca ggtcttacaa gtctcagtac ctgaacaatg gcccccagag gattgggagg
aagtacaaga aggtgaggtt catggcctac actgatgaga ccttcaagac cagggaggcc
atccagcatg agtctggcat cctggggccc ctgctgtatg gggaggtggg ggataccctg
ctgattatct tcaagaacca ggctagcagg ccctataaca tctaccccca tggcattact
gatgtgaggc ccctgtactc taggagactg cccaaggggg tgaagcacct gaaagacttc
cccatcctgc ctggggagat cttcaagtat aagtggactg tgactgtgga ggatggcccc
actaagtctg accccaggtg cctgaccagg tattacagca gctttgtgaa tatggagagg
gatctggctt ctggcctgat tgggcctctg ctgatttgct acaaggagtc tgtggatcag
agggggaacc agattatgtc tgacaagagg aatgtgattc tgttctctgt gtttgatgag
aacaggagct ggtacctgac tgagaatatc cagaggttcc tgcctaatcc tgctggggtg
cagctggagg accctgagtt ccaggctagc aacattatgc acagcatcaa tggctatgtg
tttgacagcc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cttactggta cattctgtct
attggggccc agactgactt cctgtctgtg ttcttctctg gctacacctt caagcacaag
atggtgtatg aggacactct gaccctgttc cccttctctg gggagactgt gttcatgagc
atggagaatc ctgggctgtg gattctgggg tgccacaact ctgatttcag gaacaggggc
atgactgccc tgctgaaggt gagcagctgt gacaagaaca ctggggatta ttatgaggac
agctatgagg acatttctgc ctacctgctg agcaagaaca atgccattga gcctaggagc
ttcagccaga atccccctgt gctgaagaga caccagaggg agatcactag gaccactctg
cagtctgatc aggaggagat tgactatgat gacaccattt ctgtggagat gaagaaggag
gactttgata tttatgatga ggatgagaac cagagcccca gaagcttcca gaagaagacc
aggcactact tcattgctgc tgtggagagg ctgtgggatt atggcatgtc ttctagcccc
catgtgctga ggaacagggc tcagtctggc tctgtgcctc agttcaagaa ggtggtgttc
caggagttca ctgatgggag cttcacccag cctctgtaca ggggggagct gaatgaacat
ctgggcctgc tggggcccta catcagggct gaggtggagg ataatatcat ggtgactttc
aggaatcagg cctctaggcc ctacagcttc tactctagcc tgatcagcta tgaggaggac
cagaggcagg gggctgagcc taggaagaat tttgtgaaac ccaatgagac caagacctac
ttttggaagg tgcagcacca catggcccct accaaggatg agtttgactg taaggcctgg
gcctacttct ctgatgtgga cctggagaag gatgtgcatt ctgggctgat tggccccctg
ctggtgtgcc acaccaacac cctgaaccct gcccatggca ggcaggtgac tgtgcaggag
tttgccctgt tcttcaccat ctttgatgag actaagagct ggtatttcac tgagaacatg
gagaggaact gtagggctcc ctgcaacatc cagatggagg atccaacttt caaggagaac
tacaggttcc atgccatcaa tggctacatc atggacaccc tgcctggcct ggtgatggcc
caggaccaga ggattaggtg gtacctgctg agcatgggct ctaatgagaa catccactct
atccacttct ctggccatgt gtttactgtg aggaagaagg aggagtacaa gatggctctg
tacaacctgt accctggggt gtttgagact gtggagatgc tgcctagcaa ggctggcatt
tggagagtgg agtgtctgat tggggagcac ctgcatgctg ggatgtctac cctgttcctg
gtgtactcta acaagtgcca gacccccctg gggatggctt ctgggcacat cagagatttt
cagattactg cttctgggca gtatggccag tgggctccca agctggccag actgcattac
tctggctcta ttaatgcttg gagcaccaag gagcctttca gctggatcaa ggtggacctg
ctggctccca tgatcatcca tggcattaag actcaggggg ctaggcagaa gttcagcagc
ctgtatattt ctcagtttat tatcatgtat tctctggatg gcaagaagtg gcagacttac
aggggcaaca gcactggcac cctgatggtg ttctttggca atgtggacag ctctgggatc
aagcataaca tcttcaaccc ccccattatt gccaggtaca tcaggctgca ccccacccac
tattctatca ggagcactct gaggatggag ctgatggggt gtgacctgaa cagctgctct
atgcccctgg gcatggagag caaggccatc tctgatgccc agatcactgc cagctcttat
ttcaccaaca tgtttgccac ctggagcccc agcaaggcca ggctgcacct gcagggcaga
agcaatgcct ggaggcccca ggtgaacaat cctaaggagt ggctgcaggt ggacttccag
aagactatga aggtgactgg ggtgactacc cagggggtga agagcctgct gaccagcatg
tatgtgaagg agttcctgat tagcagcagc caggatgggc atcagtggac cctgttcttc
cagaatggga aggtgaaggt gttccagggc aatcaggaca gcttcacccc tgtggtgaac
agcctggacc cccccctgct gaccaggtac ctgaggatcc atccccagag ctgggtgcac
cagattgctc tgagaatgga ggtgctgggc tgtgaggccc aggacctgta ttga
Вариант X18 нуклеиновой кислоты с пониженным содержанием CpG, кодирующий FVIII (SEQ ID NO:18)
atgcagattg agctgtctac ctgttttttt ctgtgcctgc tgaggttctg cttctctgct
accaggaggt attatctggg ggctgtggag ctgagctggg actacatgca gtctgacctg
ggggagctgc ctgtggatgc caggtttcct cccagggtgc ctaagagctt ccccttcaac
acctctgtgg tgtacaagaa gactctgttt gtggagttca ctgaccacct gttcaacatt
gccaagccca ggcccccctg gatggggctg ctgggcccca ctatccaggc tgaggtgtat
gatactgtgg tgattaccct gaagaacatg gcctctcacc ctgtgtctct gcatgctgtg
ggggtgagct actggaaggc ttctgagggg gctgaatatg atgatcagac ctctcagagg
gagaaggagg atgacaaggt gtttcctggg ggcagccaca cctatgtgtg gcaggtgctg
aaggagaatg ggcccatggc ctctgatccc ctgtgcctga cctacagcta cctgagccat
gtggacctgg tgaaggacct gaactctggc ctgattgggg ccctgctggt gtgcagggag
ggcagcctgg ccaaggaaaa gacccagacc ctgcataagt tcatcctgct gtttgctgtg
tttgatgagg gcaagtcttg gcactctgag accaagaaca gcctgatgca ggacagggat
gctgcctctg ctagggcctg gcccaagatg cacactgtga atgggtatgt gaacagatct
ctgcctggcc tgattggctg ccacaggaag tctgtgtact ggcatgtgat tggcatgggg
accacccctg aggtgcatag catcttcctg gaggggcaca ccttcctggt gagaaatcat
aggcaggcca gcctggagat tagccccatc accttcctga ctgcccagac cctgctgatg
gacctgggcc agttcctgct gttctgccac atttctagcc accagcatga tggcatggag
gcctatgtga aggtggatag ctgccctgaa gagccccagc tgaggatgaa gaacaatgag
gaggctgagg attatgatga tgatctgact gactctgaga tggatgtggt gaggtttgat
gatgacaaca gccccagctt catccagatc aggtctgtgg ccaagaagca ccctaagacc
tgggtgcact acattgctgc tgaagaggag gactgggact atgcccccct ggtgctggcc
ccagatgaca ggtcttacaa gagccagtac ctgaataatg gcccccagag gattgggagg
aagtataaga aagtgaggtt catggcttac actgatgaga cctttaagac tagggaggcc
attcagcatg agtctgggat tctgggccct ctgctgtatg gggaggtggg ggacaccctg
ctgatcattt tcaagaacca ggccagcagg ccctataata tttatcccca tgggattact
gatgtcaggc ccctgtacag caggaggctg cctaaggggg tgaagcacct gaaggacttc
cccattctgc ctggggagat cttcaagtat aagtggactg tgactgtgga ggatggcccc
accaagtctg atcctaggtg cctgaccagg tactatagca gctttgtgaa catggagagg
gacctggctt ctggcctgat tggccccctg ctgatctgct acaaggaatc tgtggaccag
aggggcaacc agattatgtc tgacaagagg aatgtgatcc tgttttctgt gtttgatgag
aataggagct ggtatctgac tgagaacatc cagaggttcc tgcccaatcc tgctggggtg
cagctggagg accctgagtt ccaggcttct aacatcatgc atagcatcaa tgggtatgtg
tttgactctc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cctattggta catcctgagc
attggggccc agactgactt cctgtctgtg ttcttctctg gctacacctt caagcacaag
atggtgtatg aggacaccct gaccctgttc cctttctctg gggagactgt gttcatgagc
atggagaacc ctggcctgtg gattctgggc tgccataatt ctgacttcag aaacaggggc
atgactgctc tgctgaaggt gagcagctgt gacaagaata ctggggacta ctatgaggac
tcttatgagg atatttctgc ctacctgctg agcaagaaca atgctattga gcccaggagc
ttcagccaga acccccctgt cctgaagagg catcagaggg agatcactag gaccaccctg
cagtctgatc aggaggagat tgactatgat gacactatct ctgtggaaat gaagaaggag
gactttgata tctatgatga ggatgagaac cagagcccca ggtctttcca gaagaagacc
aggcactact tcattgctgc tgtggagagg ctgtgggact atggcatgtc tagcagcccc
catgtgctga ggaacagagc ccagtctggc tctgtgcccc agttcaagaa ggtggtgttt
caggagttca ctgatgggag cttcactcag cccctgtata ggggggagct gaatgagcat
ctgggcctgc tggggcccta catcagggct gaggtggagg ataacatcat ggtgaccttc
aggaaccagg ccagcaggcc ctactctttc tactcttctc tgatcagcta tgaggaggat
cagaggcagg gggctgagcc taggaagaac tttgtcaagc ctaatgagac taagacctac
ttttggaagg tgcagcacca catggctccc actaaggatg agtttgattg caaggcctgg
gcctacttct ctgatgtgga cctggagaag gatgtgcact ctggcctgat tggccccctg
ctggtgtgtc acaccaatac cctgaaccct gcccatggca ggcaggtcac tgtgcaggag
tttgccctgt ttttcactat ctttgatgag actaagtctt ggtacttcac tgagaacatg
gaaaggaatt gcagggctcc ctgcaacatc cagatggagg accccacctt caaggagaac
tacaggtttc atgccatcaa tggctacatc atggacaccc tgcctggcct ggtgatggct
caggatcaga ggattaggtg gtatctgctg agcatgggca gcaatgagaa catccacagc
atccactttt ctggccatgt gttcactgtg aggaagaagg aggagtacaa gatggctctg
tacaatctgt accctggggt gtttgagact gtggagatgc tgcccagcaa ggctgggatc
tggagggtgg agtgcctgat tggggaacac ctgcatgctg gcatgtctac cctgttcctg
gtgtactcta acaagtgcca gactcccctg ggcatggcct ctgggcacat cagggacttc
cagatcactg cctctgggca gtatggccag tgggccccta agctggctag gctgcattac
tctggcagca tcaatgcctg gagcaccaag gagcccttca gctggatcaa ggtggacctg
ctggccccta tgatcatcca tggcatcaag acccaggggg ccagacagaa gttctcttct
ctgtacatct ctcagttcat catcatgtac tctctggatg gcaagaagtg gcagacctac
agggggaatt ctactggcac tctgatggtg ttctttggga atgtggatag ctctgggatc
aagcataata ttttcaaccc ccccattatt gctaggtaca tcaggctgca cccaacccac
tactctatta ggtctaccct gaggatggag ctgatgggct gtgacctgaa ctcttgtagc
atgcccctgg gcatggagag caaggctatc tctgatgccc agatcactgc cagcagctac
tttaccaaca tgtttgctac ttggagcccc agcaaggcca ggctgcacct gcagggcagg
agcaatgcct ggaggcccca ggtgaacaac cccaaggagt ggctgcaggt ggattttcag
aagaccatga aggtgactgg ggtgaccact cagggggtga aaagcctgct gactagcatg
tatgtgaagg agtttctgat cagcagctct caggatggcc atcagtggac cctgttcttc
cagaatggca aggtgaaggt gttccagggc aaccaggata gcttcacccc tgtggtgaat
agcctggacc cccccctgct gaccaggtac ctgaggatcc atccccagag ctgggtgcac
cagattgccc tgaggatgga ggtgctgggc tgtgaagccc aggacctgta ctga
кДНК дикого типа фактора VIII-BDD (SEQ ID NO:19)
ATGCAAATAG AGCTCTCCAC CTGCTTCTTT CTGTGCCTTT TGCGATTCTG CTTTAGTGCC
ACCAGAAGAT ACTACCTGGG TGCAGTGGAA CTGTCATGGG ACTATATGCA AAGTGATCTC
GGTGAGCTGC CTGTGGACGC AAGATTTCCT CCTAGAGTGC CAAAATCTTT TCCATTCAAC
ACCTCAGTCG TGTACAAAAA GACTCTGTTT GTAGAATTCA CGGATCACCT TTTCAACATC
GCTAAGCCAA GGCCACCCTG GATGGGTCTG CTAGGTCCTA CCATCCAGGC TGAGGTTTAT
GATACAGTGG TCATTACACT TAAGAACATG GCTTCCCATC CTGTCAGTCT TCATGCTGTT
GGTGTATCCT ACTGGAAAGC TTCTGAGGGA GCTGAATATG ATGATCAGAC CAGTCAAAGG
GAGAAAGAAG ATGATAAAGT CTTCCCTGGT GGAAGCCATA CATATGTCTG GCAGGTCCTG
AAAGAGAATG GTCCAATGGC CTCTGACCCA CTGTGCCTTA CCTACTCATA TCTTTCTCAT
GTGGACCTGG TAAAAGACTT GAATTCAGGC CTCATTGGAG CCCTACTAGT ATGTAGAGAA
GGGAGTCTGG CCAAGGAAAA GACACAGACC TTGCACAAAT TTATACTACT TTTTGCTGTA
TTTGATGAAG GGAAAAGTTG GCACTCAGAA ACAAAGAACT CCTTGATGCA GGATAGGGAT
GCTGCATCTG CTCGGGCCTG GCCTAAAATG CACACAGTCA ATGGTTATGT AAACAGGTCT
CTGCCAGGTC TGATTGGATG CCACAGGAAA TCAGTCTATT GGCATGTGAT TGGAATGGGC
ACCACTCCTG AAGTGCACTC AATATTCCTC GAAGGTCACA CATTTCTTGT GAGGAACCAT
CGCCAGGCGT CCTTGGAAAT CTCGCCAATA ACTTTCCTTA CTGCTCAAAC ACTCTTGATG
GACCTTGGAC AGTTTCTACT GTTTTGTCAT ATCTCTTCCC ACCAACATGA TGGCATGGAA
GCTTATGTCA AAGTAGACAG CTGTCCAGAG GAACCCCAAC TACGAATGAA AAATAATGAA
GAAGCGGAAG ACTATGATGA TGATCTTACT GATTCTGAAA TGGATGTGGT CAGGTTTGAT
GATGACAACT CTCCTTCCTT TATCCAAATT CGCTCAGTTG CCAAGAAGCA TCCTAAAACT
TGGGTACATT ACATTGCTGC TGAAGAGGAG GACTGGGACT ATGCTCCCTT AGTCCTCGCC
CCCGATGACA GAAGTTATAA AAGTCAATAT TTGAACAATG GCCCTCAGCG GATTGGTAGG
AAGTACAAAA AAGTCCGATT TATGGCATAC ACAGATGAAA CCTTTAAGAC TCGTGAAGCT
ATTCAGCATG AATCAGGAAT CTTGGGACCT TTACTTTATG GGGAAGTTGG AGACACACTG
TTGATTATAT TTAAGAATCA AGCAAGCAGA CCATATAACA TCTACCCTCA CGGAATCACT
GATGTCCGTC CTTTGTATTC AAGGAGATTA CCAAAAGGTG TAAAACATTT GAAGGATTTT
CCAATTCTGC CAGGAGAAAT ATTCAAATAT AAATGGACAG TGACTGTAGA AGATGGGCCA
ACTAAATCAG ATCCTCGGTG CCTGACCCGC TATTACTCTA GTTTCGTTAA TATGGAGAGA
GATCTAGCTT CAGGACTCAT TGGCCCTCTC CTCATCTGCT ACAAAGAATC TGTAGATCAA
AGAGGAAACC AGATAATGTC AGACAAGAGG AATGTCATCC TGTTTTCTGT ATTTGATGAG
AACCGAAGCT GGTACCTCAC AGAGAATATA CAACGCTTTC TCCCCAATCC AGCTGGAGTG
CAGCTTGAGG ATCCAGAGTT CCAAGCCTCC AACATCATGC ACAGCATCAA TGGCTATGTT
TTTGATAGTT TGCAGTTGTC AGTTTGTTTG CATGAGGTGG CATACTGGTA CATTCTAAGC
ATTGGAGCAC AGACTGACTT CCTTTCTGTC TTCTTCTCTG GATATACCTT CAAACACAAA
ATGGTCTATG AAGACACACT CACCCTATTC CCATTCTCAG GAGAAACTGT CTTCATGTCG
ATGGAAAACC CAGGTCTATG GATTCTGGGG TGCCACAACT CAGACTTTCG GAACAGAGGC
ATGACCGCCT TACTGAAGGT TTCTAGTTGT GACAAGAACA CTGGTGATTA TTACGAGGAC
AGTTATGAAG ATATTTCAGC ATACTTGCTG AGTAAAAACA ATGCCATTGA ACCAAGAAGC
TTCTCCCAAA ACCCACCAGT CTTGAAACGC CATCAACGGG AAATAACTCG TACTACTCTT
CAGTCAGATC AAGAGGAAAT TGACTATGAT GATACCATAT CAGTTGAAAT GAAGAAGGAA
GATTTTGACA TTTATGATGA GGATGAAAAT CAGAGCCCCC GCAGCTTTCA AAAGAAAACA
CGACACTATT TTATTGCTGC AGTGGAGAGG CTCTGGGATT ATGGGATGAG TAGCTCCCCA
CATGTTCTAA GAAACAGGGC TCAGAGTGGC AGTGTCCCTC AGTTCAAGAA AGTTGTTTTC
CAGGAATTTA CTGATGGCTC CTTTACTCAG CCCTTATACC GTGGAGAACT AAATGAACAT
TTGGGACTCC TGGGGCCATA TATAAGAGCA GAAGTTGAAG ATAATATCAT GGTAACTTTC
AGAAATCAGG CCTCTCGTCC CTATTCCTTC TATTCTAGCC TTATTTCTTA TGAGGAAGAT
CAGAGGCAAG GAGCAGAACC TAGAAAAAAC TTTGTCAAGC CTAATGAAAC CAAAACTTAC
TTTTGGAAAG TGCAACATCA TATGGCACCC ACTAAAGATG AGTTTGACTG CAAAGCCTGG
GCTTATTTCT CTGATGTTGA CCTGGAAAAA GATGTGCACT CAGGCCTGAT TGGACCCCTT
CTGGTCTGCC ACACTAACAC ACTGAACCCT GCTCATGGGA GACAAGTGAC AGTACAGGAA
TTTGCTCTGT TTTTCACCAT CTTTGATGAG ACCAAAAGCT GGTACTTCAC TGAAAATATG
GAAAGAAACT GCAGGGCTCC CTGCAATATC CAGATGGAAG ATCCCACTTT TAAAGAGAAT
TATCGCTTCC ATGCAATCAA TGGCTACATA ATGGATACAC TACCTGGCTT AGTAATGGCT
CAGGATCAAA GGATTCGATG GTATCTGCTC AGCATGGGCA GCAATGAAAA CATCCATTCT
ATTCATTTCA GTGGACATGT GTTCACCGTA CGAAAAAAAG AGGAGTATAA AATGGCACTG
TACAATCTCT ATCCAGGTGT TTTTGAGACA GTGGAAATGT TACCATCCAA AGCTGGAATT
TGGCGGGTGG AATGCCTTAT TGGCGAGCAT CTACATGCTG GGATGAGCAC ACTTTTTCTG
GTGTACAGCA ATAAGTGTCA GACTCCCCTG GGAATGGCTT CTGGACACAT TAGAGATTTT
CAGATTACAG CTTCAGGACA ATATGGACAG TGGGCCCCAA AGCTGGCCAG ACTTCATTAT
TCCGGATCAA TCAATGCCTG GAGCACCAAG GAGCCCTTTT CTTGGATCAA GGTGGATCTG
TTGGCACCAA TGATTATTCA CGGCATCAAG ACCCAGGGTG CCCGTCAGAA GTTCTCCAGC
CTCTACATCT CTCAGTTTAT CATCATGTAT AGTCTTGATG GGAAGAAGTG GCAGACTTAT
CGAGGAAATT CCACTGGAAC CTTAATGGTC TTCTTTGGCA ATGTGGATTC ATCTGGGATA
AAACACAATA TTTTTAACCC TCCAATTATT GCTCGATACA TCCGTTTGCA CCCAACTCAT
TATAGCATTC GCAGCACTCT TCGCATGGAG TTGATGGGCT GTGATTTAAA TAGTTGCAGC
ATGCCATTGG GAATGGAGAG TAAAGCAATA TCAGATGCAC AGATTACTGC TTCATCCTAC
TTTACCAATA TGTTTGCCAC CTGGTCTCCT TCAAAAGCTC GACTTCACCT CCAAGGGAGG
AGTAATGCCT GGAGACCTCA GGTGAATAAT CCAAAAGAGT GGCTGCAAGT GGACTTCCAG
AAGACAATGA AAGTCACAGG AGTAACTACT CAGGGAGTAA AATCTCTGCT TACCAGCATG
TATGTGAAGG AGTTCCTCAT CTCCAGCAGT CAAGATGGCC ATCAGTGGAC TCTCTTTTTT
CAGAATGGCA AAGTAAAGGT TTTTCAGGGA AATCAAGACT CCTTCACACC TGTGGTGAAC
TCTCTAGACC CACCGTTACT GACTCGCTAC CTTCGAATTC ACCCCCAGAG TTGGGTGCAC
CAGATTGCCC TGAGGATGGA GGTTCTGGGC TGCGAGGCAC AGGACCTCTA CTGA
кДНК V3 фактора VIII (SEQ ID NO:20)
ATGCAGATTGAGCTGAGCACCTGCTTCTTCCTGTGCCTGCTGAGGTTCTGCTTCTCTGCCACCAGGAGATACTACCTGGGGGCTGTGGAGCTGAGCTGGGACTACATGCAGTCTGACCTGGGGGAGCTGCCTGTGGATGCCAGGTTCCCCCCCAGAGTGCCCAAGAGCTTCCCCTTCAACACCTCTGTGGTGTACAAGAAGACCCTGTTTGTGGAGTTCACTGACCACCTGTTCAACATTGCCAAGCCCAGGCCCCCCTGGATGGGCCTGCTGGGCCCCACCATCCAGGCTGAGGTGTATGACACTGTGGTGATCACCCTGAAGAACATGGCCAGCCACCCTGTGAGCCTGCATGCTGTGGGGGTGAGCTACTGGAAGGCCTCTGAGGGGGCTGAGTATGATGACCAGACCAGCCAGAGGGAGAAGGAGGATGACAAGGTGTTCCCTGGGGGCAGCCACACCTATGTGTGGCAGGTGCTGAAGGAGAATGGCCCCATGGCCTCTGACCCCCTGTGCCTGACCTACAGCTACCTGAGCCATGTGGACCTGGTGAAGGACCTGAACTCTGGCCTGATTGGGGCCCTGCTGGTGTGCAGGGAGGGCAGCCTGGCCAAGGAGAAGACCCAGACCCTGCACAAGTTCATCCTGCTGTTTGCTGTGTTTGATGAGGGCAAGAGCTGGCACTCTGAAACCAAGAACAGCCTGATGCAGGACAGGGATGCTGCCTCTGCCAGGGCCTGGCCCAAGATGCACACTGTGAATGGCTATGTGAACAGGAGCCTGCCTGGCCTGATTGGCTGCCACAGGAAGTCTGTGTACTGGCATGTGATTGGCATGGGCACCACCCCTGAGGTGCACAGCATCTTCCTGGAGGGCCACACCTTCCTGGTCAGGAACCACAGGCAGGCCAGCCTGGAGATCAGCCCCATCACCTTCCTGACTGCCCAGACCCTGCTGATGGACCTGGGCCAGTTCCTGCTGTTCTGCCACATCAGCAGCCACCAGCATGATGGCATGGAGGCCTATGTGAAGGTGGACAGCTGCCCTGAGGAGCCCCAGCTGAGGATGAAGAACAATGAGGAGGCTGAGGACTATGATGATGACCTGACTGACTCTGAGATGGATGTGGTGAGGTTTGATGATGACAACAGCCCCAGCTTCATCCAGATCAGGTCTGTGGCCAAGAAGCACCCCAAGACCTGGGTGCACTACATTGCTGCTGAGGAGGAGGACTGGGACTATGCCCCCCTGGTGCTGGCCCCTGATGACAGGAGCTACAAGAGCCAGTACCTGAACAATGGCCCCCAGAGGATTGGCAGGAAGTACAAGAAGGTCAGGTTCATGGCCTACACTGATGAAACCTTCAAGACCAGGGAGGCCATCCAGCATGAGTCTGGCATCCTGGGCCCCCTGCTGTATGGGGAGGTGGGGGACACCCTGCTGATCATCTTCAAGAACCAGGCCAGCAGGCCCTACAACATCTACCCCCATGGCATCACTGATGTGAGGCCCCTGTACAGCAGGAGGCTGCCCAAGGGGGTGAAGCACCTGAAGGACTTCCCCATCCTGCCTGGGGAGATCTTCAAGTACAAGTGGACTGTGACTGTGGAGGATGGCCCCACCAAGTCTGACCCCAGGTGCCTGACCAGATACTACAGCAGCTTTGTGAACATGGAGAGGGACCTGGCCTCTGGCCTGATTGGCCCCCTGCTGATCTGCTACAAGGAGTCTGTGGACCAGAGGGGCAACCAGATCATGTCTGACAAGAGGAATGTGATCCTGTTCTCTGTGTTTGATGAGAACAGGAGCTGGTACCTGACTGAGAACATCCAGAGGTTCCTGCCCAACCCTGCTGGGGTGCAGCTGGAGGACCCTGAGTTCCAGGCCAGCAACATCATGCACAGCATCAATGGCTATGTGTTTGACAGCCTGCAGCTGTCTGTGTGCCTGCATGAGGTGGCCTACTGGTACATCCTGAGCATTGGGGCCCAGACTGACTTCCTGTCTGTGTTCTTCTCTGGCTACACCTTCAAGCACAAGATGGTGTATGAGGACACCCTGACCCTGTTCCCCTTCTCTGGGGAGACTGTGTTCATGAGCATGGAGAACCCTGGCCTGTGGATTCTGGGCTGCCACAACTCTGACTTCAGGAACAGGGGCATGACTGCCCTGCTGAAAGTCTCCAGCTGTGACAAGAACACTGGGGACTACTATGAGGACAGCTATGAGGACATCTCTGCCTACCTGCTGAGCAAGAACAATGCCATTGAGCCCAGGAGCTTCAGCCAGAACAGCAGGCACCCCAGCACCAGGCAGAAGCAGTTCAATGCCACCACCATCCCTGAGAATGACATAGAGAAGACAGACCCATGGTTTGCCCACCGGACCCCCATGCCCAAGATCCAGAATGTGAGCAGCTCTGACCTGCTGATGCTGCTGAGGCAGAGCCCCACCCCCCATGGCCTGAGCCTGTCTGACCTGCAGGAGGCCAAGTATGAAACCTTCTCTGATGACCCCAGCCCTGGGGCCATTGACAGCAACAACAGCCTGTCTGAGATGACCCACTTCAGGCCCCAGCTGCACCACTCTGGGGACATGGTGTTCACCCCTGAGTCTGGCCTGCAGCTGAGGCTGAATGAGAAGCTGGGCACCACTGCTGCCACTGAGCTGAAGAAGCTGGACTTCAAAGTCTCCAGCACCAGCAACAACCTGATCAGCACCATCCCCTCTGACAACCTGGCTGCTGGCACTGACAACACCAGCAGCCTGGGCCCCCCCAGCATGCCTGTGCACTATGACAGCCAGCTGGACACCACCCTGTTTGGCAAGAAGAGCAGCCCCCTGACTGAGTCTGGGGGCCCCCTGAGCCTGTCTGAGGAGAACAATGACAGCAAGCTGCTGGAGTCTGGCCTGATGAACAGCCAGGAGAGCAGCTGGGGCAAGAATGTGAGCACCAGGAGCTTCCAGAAGAAGACCAGGCACTACTTCATTGCTGCTGTGGAGAGGCTGTGGGACTATGGCATGAGCAGCAGCCCCCATGTGCTGAGGAACAGGGCCCAGTCTGGCTCTGTGCCCCAGTTCAAGAAGGTGGTGTTCCAGGAGTTCACTGATGGCAGCTTCACCCAGCCCCTGTACAGAGGGGAGCTGAATGAGCACCTGGGCCTGCTGGGCCCCTACATCAGGGCTGAGGTGGAGGACAACATCATGGTGACCTTCAGGAACCAGGCCAGCAGGCCCTACAGCTTCTACAGCAGCCTGATCAGCTATGAGGAGGACCAGAGGCAGGGGGCTGAGCCCAGGAAGAACTTTGTGAAGCCCAATGAAACCAAGACCTACTTCTGGAAGGTGCAGCACCACATGGCCCCCACCAAGGATGAGTTTGACTGCAAGGCCTGGGCCTACTTCTCTGATGTGGACCTGGAGAAGGATGTGCACTCTGGCCTGATTGGCCCCCTGCTGGTGTGCCACACCAACACCCTGAACCCTGCCCATGGCAGGCAGGTGACTGTGCAGGAGTTTGCCCTGTTCTTCACCATCTTTGATGAAACCAAGAGCTGGTACTTCACTGAGAACATGGAGAGGAACTGCAGGGCCCCCTGCAACATCCAGATGGAGGACCCCACCTTCAAGGAGAACTACAGGTTCCATGCCATCAATGGCTACATCATGGACACCCTGCCTGGCCTGGTGATGGCCCAGGACCAGAGGATCAGGTGGTACCTGCTGAGCATGGGCAGCAATGAGAACATCCACAGCATCCACTTCTCTGGCCATGTGTTCACTGTGAGGAAGAAGGAGGAGTACAAGATGGCCCTGTACAACCTGTACCCTGGGGTGTTTGAGACTGTGGAGATGCTGCCCAGCAAGGCTGGCATCTGGAGGGTGGAGTGCCTGATTGGGGAGCACCTGCATGCTGGCATGAGCACCCTGTTCCTGGTGTACAGCAACAAGTGCCAGACCCCCCTGGGCATGGCCTCTGGCCACATCAGGGACTTCCAGATCACTGCCTCTGGCCAGTATGGCCAGTGGGCCCCCAAGCTGGCCAGGCTGCACTACTCTGGCAGCATCAATGCCTGGAGCACCAAGGAGCCCTTCAGCTGGATCAAGGTGGACCTGCTGGCCCCCATGATCATCCATGGCATCAAGACCCAGGGGGCCAGGCAGAAGTTCAGCAGCCTGTACATCAGCCAGTTCATCATCATGTACAGCCTGGATGGCAAGAAGTGGCAGACCTACAGGGGCAACAGCACTGGCACCCTGATGGTGTTCTTTGGCAATGTGGACAGCTCTGGCATCAAGCACAACATCTTCAACCCCCCCATCATTGCCAGATACATCAGGCTGCACCCCACCCACTACAGCATCAGGAGCACCCTGAGGATGGAGCTGATGGGCTGTGACCTGAACAGCTGCAGCATGCCCCTGGGCATGGAGAGCAAGGCCATCTCTGATGCCCAGATCACTGCCAGCAGCTACTTCACCAACATGTTTGCCACCTGGAGCCCCAGCAAGGCCAGGCTGCACCTGCAGGGCAGGAGCAATGCCTGGAGGCCCCAGGTCAACAACCCCAAGGAGTGGCTGCAGGTGGACTTCCAGAAGACCATGAAGGTGACTGGGGTGACCACCCAGGGGGTGAAGAGCCTGCTGACCAGCATGTATGTGAAGGAGTTCCTGATCAGCAGCAGCCAGGATGGCCACCAGTGGACCCTGTTCTTCCAGAATGGCAAGGTGAAGGTGTTCCAGGGCAACCAGGACAGCTTCACCCCTGTGGTGAACAGCCTGGACCCCCCCCTGCTGACCAGATACCTGAGGATTCACCCCCAGAGCTGGGTGCACCAGATTGCCCTGAGGATGGAGGTGCTGGGCTGTGAGGCCCAGGACCTGTACTGA
кДНК CO3 фактора VIII (SEQ ID NO:21)
atgcagattg agctgtcaac ttgctttttc ctgtgcctgc tgagattttg tttttccgct
actagaagat actacctggg ggctgtggaa ctgtcttggg attacatgca gagtgacctg
ggagagctgc cagtggacgc acgatttcca cctagagtcc ctaaatcatt ccccttcaac
accagcgtgg tctataagaa aacactgttc gtggagttta ctgatcacct gttcaacatc
gctaagcctc ggccaccctg gatgggactg ctgggaccaa caatccaggc agaggtgtac
gacaccgtgg tcattacact gaaaaacatg gcctcacacc ccgtgagcct gcatgctgtg
ggcgtcagct actggaaggc ttccgaaggg gcagagtatg acgatcagac ttcccagaga
gaaaaagagg acgataaggt gtttcctggc gggtctcata cctatgtgtg gcaggtcctg
aaagagaatg gccccatggc ttccgaccct ctgtgcctga cctactctta tctgagtcac
gtggacctgg tcaaggatct gaacagcgga ctgatcggag cactgctggt gtgtagggaa
gggagcctgg ctaaggagaa aacccagaca ctgcataagt tcattctgct gttcgccgtg
tttgacgaag gaaaatcatg gcacagcgag acaaagaata gtctgatgca ggaccgggat
gccgcttcag ccagagcttg gcccaaaatg cacactgtga acggctacgt caatcgctca
ctgcctggac tgatcggctg ccaccgaaag agcgtgtatt ggcatgtcat cggaatgggc
accacacctg aagtgcactc cattttcctg gaggggcata cctttctggt ccgcaaccac
cgacaggcct ccctggagat ctctccaatt accttcctga cagctcagac tctgctgatg
gatctgggac agttcctgct gttttgccac atcagctccc accagcatga tggcatggag
gcctacgtga aagtggacag ctgtcccgag gaacctcagc tgaggatgaa gaacaatgag
gaagctgaag actatgacga tgacctgacc gactccgaga tggatgtggt ccgattcgat
gacgataaca gcccctcctt tatccagatt agatctgtgg ccaagaaaca ccctaagaca
tgggtccatt acatcgcagc cgaggaagag gactgggatt atgcaccact ggtgctggca
ccagacgatc gatcctacaa atctcagtat ctgaacaatg gaccacagcg gattggcaga
aagtacaaga aagtgaggtt catggcttat accgatgaaa ccttcaagac tcgcgaagca
atccagcacg agagcgggat tctgggacca ctgctgtacg gagaagtggg ggacaccctg
ctgatcattt ttaagaacca ggccagcagg ccttacaata tctatccaca tggaattaca
gatgtgcgcc ctctgtacag ccggagactg ccaaagggcg tcaaacacct gaaggacttc
ccaatcctgc ccggggaaat ttttaagtat aaatggactg tcaccgtcga ggatggcccc
actaagagcg accctaggtg cctgacccgc tactattcta gtttcgtgaa tatggaaagg
gatctggcca gcggactgat cggcccactg ctgatttgtt acaaagagag cgtggatcag
agaggcaacc agatcatgtc cgacaagagg aatgtgattc tgttcagtgt ctttgacgaa
aaccggtcat ggtatctgac cgagaacatc cagagattcc tgcctaatcc agccggagtg
cagctggaag atcctgagtt tcaggcttct aacatcatgc atagtattaa tggctacgtg
ttcgacagtc tgcagctgtc agtgtgtctg cacgaggtcg cttactggta tatcctgagc
attggagcac agacagattt cctgagcgtg ttcttttccg gctacacttt taagcataaa
atggtgtatg aggacacact gactctgttc cccttcagcg gcgaaaccgt gtttatgtcc
atggagaatc ccgggctgtg gatcctggga tgccacaaca gcgatttcag gaatcgcggg
atgactgccc tgctgaaagt gtcaagctgt gacaagaaca ccggagacta ctatgaagat
tcatacgagg acatcagcgc atatctgctg tccaaaaaca atgccattga acccaggtct
tttagtcaga atcctccagt gctgaagagg caccagcgcg agatcacccg cactaccctg
cagagtgatc aggaagagat cgactacgac gatacaattt ctgtggaaat gaagaaagag
gacttcgata tctatgacga agatgagaac cagagtcctc gatcattcca gaagaaaacc
cggcattact ttattgctgc agtggagcgc ctgtgggatt atggcatgtc ctctagtcct
cacgtgctgc gaaatcgggc ccagtcaggg agcgtcccac agttcaagaa agtggtcttc
caggagttta cagacggatc ctttactcag ccactgtacc ggggcgaact gaacgagcac
ctggggctgc tgggacccta tatcagagct gaagtggagg ataacattat ggtcaccttc
agaaatcagg catctaggcc ttacagtttt tattcaagcc tgatctctta cgaagaggac
cagaggcagg gagcagaacc acgaaaaaac ttcgtgaagc ctaatgagac caaaacatac
ttttggaagg tgcagcacca tatggcccca acaaaagacg aattcgattg caaggcatgg
gcctattttt ctgacgtgga tctggagaag gacgtccaca gtggcctgat cgggccactg
ctggtgtgtc atactaacac cctgaatccc gcacacggca ggcaggtcac tgtccaggaa
ttcgccctgt tctttaccat ctttgatgag acaaaaagct ggtacttcac cgaaaacatg
gagcgaaatt gccgggctcc atgtaatatt cagatggaag accccacatt caaggagaac
taccgctttc atgccatcaa tgggtatatt atggatactc tgcccggact ggtcatggct
caggaccaga gaatcaggtg gtacctgctg agcatggggt ccaacgagaa tatccactca
attcatttca gcggacacgt gtttactgtc cggaagaaag aagagtataa aatggccctg
tacaacctgt atcccggcgt gttcgaaacc gtcgagatgc tgcctagcaa ggcagggatc
tggagagtgg aatgcctgat tggggagcac ctgcatgccg gaatgtctac cctgtttctg
gtgtacagta ataagtgtca gacacccctg gggatggctt ccggacatat ccgggatttc
cagattaccg catctggaca gtacggccag tgggccccta agctggctag actgcactat
tccgggtcta tcaacgcttg gtccacaaaa gagcctttct cttggattaa ggtggacctg
ctggcaccaa tgatcattca tggcatcaaa actcaggggg ccaggcagaa gttctcctct
ctgtacatct cacagtttat catcatgtac agcctggatg gcaagaaatg gcagacatac
cgcggcaata gcacagggac tctgatggtg ttctttggca acgtggacag ttcagggatc
aagcacaaca ttttcaatcc ccctatcatt gctagataca tcaggctgca cccaacccat
tattctattc gaagtacact gcggatggaa ctgatggggt gcgatctgaa cagttgttca
atgcccctgg gaatggagtc caaggcaatc tctgacgccc agattaccgc tagctcctac
ttcactaata tgtttgctac ctggagcccc tccaaagcac gactgcatct gcagggacga
agcaacgcat ggcgaccaca ggtgaacaat cccaaggagt ggctgcaggt cgattttcag
aaaactatga aggtgaccgg agtcacaact cagggcgtga aaagtctgct gacctcaatg
tacgtcaagg agttcctgat ctctagttca caggacggcc accagtggac actgttcttt
cagaacggaa aggtgaaagt cttccagggc aatcaggatt cctttacacc tgtggtcaac
tctctggacc cacccctgct gactcgctac ctgcgaatcc acccacagtc ctgggtgcat
cagattgcac tgagaatgga agtcctgggc tgcgaggccc aggacctgta ttga
Полноразмерная кассета, содержащая мутированный промотор TTR (TTRmut), синтетический интрон, кДНК фактора VIII с пониженным содержанием CpG, поли-A и ITR (SEQ ID NO:23)
cctgcaggca gctgcgcgct cgctcgctca ctgaggccgc ccgggcaaag cccgggcgtc
gggcgacctt tggtcgcccg gcctcagtga gcgagcgagc gcgcagagag ggagtggcca
actccatcac taggggttcc tacgcgtgtc tgtctgcaca tttcgtagag cgagtgttcc
gatactctaa tctccctagg caaggttcat attgacttag gttacttatt ctccttttgt
tgactaagtc aataatcaga atcagcaggt ttggagtcag cttggcaggg atcagcagcc
tgggttggaa ggagggggta taaaagcccc ttcaccagga gaagccgtca cacagatcca
caagctcctg ctagcaggta agtgccgtgt gtggttcccg cgggcctggc ctctttacgg
gttatggccc ttgcgtgcct tgaattactg acactgacat ccactttttc tttttctcca
caggtttaaa cgccaccatg cagattgagc tgagcacctg cttcttcctg tgtctgctga
ggttctgctt ctctgccacc aggaggtatt acctgggggc tgtggagctg agctgggact
atatgcagtc tgacctgggg gagctgcctg tggatgctag gttccccccc agggtgccca
agagcttccc ctttaacact tctgtggtgt acaagaagac cctgtttgtg gagttcactg
accacctgtt caacattgcc aagcccaggc ccccctggat ggggctgctg gggcccacca
tccaggctga ggtgtatgac actgtggtga tcaccctgaa gaacatggcc agccaccctg
tgagcctgca tgctgtgggg gtgagctact ggaaggcttc tgagggggct gagtatgatg
accagactag ccagagggag aaggaggatg acaaggtgtt tcctgggggc agccatacct
atgtgtggca ggtgctgaag gagaatggcc ccatggcctc tgaccccctg tgcctgacct
acagctacct gtctcatgtg gacctggtga aggacctgaa ctctggcctg attggggctc
tgctggtgtg tagggagggc agcctggcta aggaaaagac ccagaccctg cataagttta
tcctgctgtt tgctgtgttt gatgagggca agagctggca ctctgagacc aagaacagcc
tgatgcagga tagggatgct gcctctgcca gggcttggcc taagatgcac actgtgaatg
ggtatgtgaa taggagcctg cctggcctga ttggctgcca caggaagtct gtgtactggc
atgtgattgg gatgggcacc acccctgagg tccatagcat cttcctggag ggccacactt
tcctggtgag gaaccacaga caggcctctc tggagatctc tcccatcacc ttcctgactg
ctcagactct gctgatggac ctgggccagt tcctgctgtt ttgccatatt agcagccacc
agcatgatgg gatggaggcc tatgtgaagg tggatagctg ccctgaggag cctcagctga
ggatgaagaa caatgaggag gctgaagact atgatgatga cctgactgat tctgagatgg
atgtggtgag gtttgatgat gacaatagcc ccagcttcat tcagatcagg tctgtggcca
agaaacaccc caagacctgg gtgcactaca ttgctgctga ggaagaggac tgggactatg
ctcccctggt gctggcccct gatgataggt cttataagag ccagtacctg aacaatgggc
cccagaggat tggcaggaag tacaagaagg tgaggttcat ggcctacact gatgaaacct
tcaaaaccag ggaggccatt cagcatgagt ctggcatcct gggccctctg ctgtatgggg
aggtggggga caccctgctg atcatcttca agaaccaggc cagcaggccc tacaacatct
atcctcatgg catcactgat gtgaggcccc tgtacagcag gaggctgccc aagggggtga
agcacctgaa agacttcccc atcctgcctg gggagatctt taagtataag tggactgtga
ctgtggagga tggccctacc aagtctgacc ccaggtgtct gaccaggtac tattctagct
ttgtgaacat ggagagggac ctggcctctg gcctgattgg gcccctgctg atctgctaca
aggagtctgt ggaccagagg ggcaaccaga tcatgtctga caagaggaat gtgatcctgt
tttctgtgtt tgatgagaat aggagctggt acctgactga gaacatccag aggtttctgc
ccaatcctgc tggggtgcag ctggaggatc ctgagttcca ggccagcaat atcatgcata
gcatcaatgg ctatgtgttt gacagcctgc agctgtctgt gtgcctgcat gaggtggcct
actggtacat cctgagcatt ggggcccaga ctgactttct gtctgtgttc ttttctggct
ataccttcaa gcacaagatg gtgtatgagg ataccctgac cctgttcccc ttctctgggg
agactgtgtt catgagcatg gagaatcctg ggctgtggat cctggggtgc cacaactctg
attttaggaa cagggggatg actgccctgc tgaaggtgtc tagctgtgat aagaacactg
gggactacta tgaggacagc tatgaggaca tttctgctta tctgctgtct aagaataatg
ccattgagcc cagaagcttc agccagaatc cccctgtgct gaagagacat cagagggaga
tcaccagaac taccctgcag tctgatcagg aggagattga ctatgatgac actatctctg
tggagatgaa gaaggaggac tttgacatct atgatgagga tgagaatcag tctcccagga
gctttcagaa gaagaccaga cattacttca ttgctgctgt ggagaggctg tgggactatg
gcatgagctc tagccctcat gtgctgagga acagggccca gtctggctct gtgccccagt
tcaagaaggt ggtgttccag gaattcactg atggcagctt cacccagccc ctgtacaggg
gggagctgaa tgagcacctg ggcctgctgg ggccttatat cagggctgag gtggaggata
atattatggt gactttcagg aaccaggcca gcaggcccta ctctttctat agcagcctga
tctcttatga ggaggatcag aggcaggggg ctgagcctag gaagaacttt gtgaagccca
atgagactaa gacctacttc tggaaggtcc agcaccacat ggcccctacc aaggatgagt
ttgactgcaa ggcctgggcc tatttctctg atgtggatct ggagaaggat gtccattctg
ggctgattgg ccccctgctg gtgtgccaca ctaacactct gaatcctgcc catggcaggc
aggtgactgt ccaggagttt gccctgttct tcactatctt tgatgagacc aagagctggt
actttactga gaacatggag aggaactgca gagctccttg caatattcag atggaggacc
ccaccttcaa ggagaattac aggttccatg ccattaatgg gtacatcatg gacaccctgc
ctggcctggt gatggctcag gaccagagga tcaggtggta cctgctgagc atgggctcta
atgagaatat ccacagcatc cacttctctg ggcatgtgtt cactgtgagg aagaaggagg
agtacaagat ggctctgtat aatctgtacc ctggggtgtt tgaaactgtg gagatgctgc
cctctaaggc tggcatctgg agggtggagt gcctgattgg ggagcacctg catgctggca
tgagcaccct gttcctggtg tacagcaaca agtgccagac ccccctgggc atggcctctg
gccacatcag ggacttccag atcactgcct ctggccagta tggccagtgg gcccccaagc
tggccaggct gcactattct ggcagcatca atgcctggag caccaaggag cccttcagct
ggatcaaggt ggacctgctg gcccccatga tcattcatgg catcaagacc cagggggcca
ggcagaagtt cagctctctg tacatctctc agttcatcat catgtactct ctggatggga
agaagtggca gacctacagg ggcaacagca ctggcaccct gatggtgttc tttgggaatg
tggactcttc tggcatcaag cacaacatct tcaatccccc catcattgct aggtatatta
ggctgcatcc cacccactac agcatcaggt ctaccctgag gatggagctg atgggctgtg
acctgaactc ttgcagcatg cccctgggca tggagtctaa ggccatctct gatgcccaga
ttactgccag cagctacttc accaacatgt ttgccacctg gagcccctct aaggccaggc
tgcatctgca ggggaggagc aatgcctgga ggcctcaggt gaacaacccc aaggagtggc
tgcaggtgga tttccagaag accatgaagg tgactggggt gaccacccag ggggtcaaga
gcctgctgac cagcatgtat gtgaaggagt tcctgatcag cagcagccag gatggccacc
agtggactct gttctttcag aatgggaagg tgaaggtgtt tcagggcaat caggactctt
tcacccctgt ggtgaacagc ctggaccccc ccctgctgac cagatacctg aggatccacc
cccagtcttg ggtgcatcag attgccctga ggatggaggt gctgggctgt gaggctcagg
atctgtactg agcggccgca ataaaagatc agagctctag agatctgtgt gttggttttt
tgtgtaggaa cccctagtga tggagttggc cactccctct ctgcgcgctc gctcgctcac
tgaggccggg cgaccaaagg tcgcccgacg cccgggcttt gcccgggcgg cctcagtgag
cgagcgagcg cgcagctgcc tgcagg
Полноразмерная плазмида, содержащая мутированный промотор TTR (TTRmut), синтетический интрон, кДНК с пониженным содержанием CpG, кодирующая фактор VIII, поли-A и ITR (SEQ ID NO:24)
cctgcaggca gctgcgcgct cgctcgctca ctgaggccgc ccgggcaaag cccgggcgtc
gggcgacctt tggtcgcccg gcctcagtga gcgagcgagc gcgcagagag ggagtggcca
actccatcac taggggttcc tacgcgtgtc tgtctgcaca tttcgtagag cgagtgttcc
gatactctaa tctccctagg caaggttcat attgacttag gttacttatt ctccttttgt
tgactaagtc aataatcaga atcagcaggt ttggagtcag cttggcaggg atcagcagcc
tgggttggaa ggagggggta taaaagcccc ttcaccagga gaagccgtca cacagatcca
caagctcctg ctagcaggta agtgccgtgt gtggttcccg cgggcctggc ctctttacgg
gttatggccc ttgcgtgcct tgaattactg acactgacat ccactttttc tttttctcca
caggtttaaa cgccaccatg cagattgagc tgagcacctg cttcttcctg tgtctgctga
ggttctgctt ctctgccacc aggaggtatt acctgggggc tgtggagctg agctgggact
atatgcagtc tgacctgggg gagctgcctg tggatgctag gttccccccc agggtgccca
agagcttccc ctttaacact tctgtggtgt acaagaagac cctgtttgtg gagttcactg
accacctgtt caacattgcc aagcccaggc ccccctggat ggggctgctg gggcccacca
tccaggctga ggtgtatgac actgtggtga tcaccctgaa gaacatggcc agccaccctg
tgagcctgca tgctgtgggg gtgagctact ggaaggcttc tgagggggct gagtatgatg
accagactag ccagagggag aaggaggatg acaaggtgtt tcctgggggc agccatacct
atgtgtggca ggtgctgaag gagaatggcc ccatggcctc tgaccccctg tgcctgacct
acagctacct gtctcatgtg gacctggtga aggacctgaa ctctggcctg attggggctc
tgctggtgtg tagggagggc agcctggcta aggaaaagac ccagaccctg cataagttta
tcctgctgtt tgctgtgttt gatgagggca agagctggca ctctgagacc aagaacagcc
tgatgcagga tagggatgct gcctctgcca gggcttggcc taagatgcac actgtgaatg
ggtatgtgaa taggagcctg cctggcctga ttggctgcca caggaagtct gtgtactggc
atgtgattgg gatgggcacc acccctgagg tccatagcat cttcctggag ggccacactt
tcctggtgag gaaccacaga caggcctctc tggagatctc tcccatcacc ttcctgactg
ctcagactct gctgatggac ctgggccagt tcctgctgtt ttgccatatt agcagccacc
agcatgatgg gatggaggcc tatgtgaagg tggatagctg ccctgaggag cctcagctga
ggatgaagaa caatgaggag gctgaagact atgatgatga cctgactgat tctgagatgg
atgtggtgag gtttgatgat gacaatagcc ccagcttcat tcagatcagg tctgtggcca
agaaacaccc caagacctgg gtgcactaca ttgctgctga ggaagaggac tgggactatg
ctcccctggt gctggcccct gatgataggt cttataagag ccagtacctg aacaatgggc
cccagaggat tggcaggaag tacaagaagg tgaggttcat ggcctacact gatgaaacct
tcaaaaccag ggaggccatt cagcatgagt ctggcatcct gggccctctg ctgtatgggg
aggtggggga caccctgctg atcatcttca agaaccaggc cagcaggccc tacaacatct
atcctcatgg catcactgat gtgaggcccc tgtacagcag gaggctgccc aagggggtga
agcacctgaa agacttcccc atcctgcctg gggagatctt taagtataag tggactgtga
ctgtggagga tggccctacc aagtctgacc ccaggtgtct gaccaggtac tattctagct
ttgtgaacat ggagagggac ctggcctctg gcctgattgg gcccctgctg atctgctaca
aggagtctgt ggaccagagg ggcaaccaga tcatgtctga caagaggaat gtgatcctgt
tttctgtgtt tgatgagaat aggagctggt acctgactga gaacatccag aggtttctgc
ccaatcctgc tggggtgcag ctggaggatc ctgagttcca ggccagcaat atcatgcata
gcatcaatgg ctatgtgttt gacagcctgc agctgtctgt gtgcctgcat gaggtggcct
actggtacat cctgagcatt ggggcccaga ctgactttct gtctgtgttc ttttctggct
ataccttcaa gcacaagatg gtgtatgagg ataccctgac cctgttcccc ttctctgggg
agactgtgtt catgagcatg gagaatcctg ggctgtggat cctggggtgc cacaactctg
attttaggaa cagggggatg actgccctgc tgaaggtgtc tagctgtgat aagaacactg
gggactacta tgaggacagc tatgaggaca tttctgctta tctgctgtct aagaataatg
ccattgagcc cagaagcttc agccagaatc cccctgtgct gaagagacat cagagggaga
tcaccagaac taccctgcag tctgatcagg aggagattga ctatgatgac actatctctg
tggagatgaa gaaggaggac tttgacatct atgatgagga tgagaatcag tctcccagga
gctttcagaa gaagaccaga cattacttca ttgctgctgt ggagaggctg tgggactatg
gcatgagctc tagccctcat gtgctgagga acagggccca gtctggctct gtgccccagt
tcaagaaggt ggtgttccag gaattcactg atggcagctt cacccagccc ctgtacaggg
gggagctgaa tgagcacctg ggcctgctgg ggccttatat cagggctgag gtggaggata
atattatggt gactttcagg aaccaggcca gcaggcccta ctctttctat agcagcctga
tctcttatga ggaggatcag aggcaggggg ctgagcctag gaagaacttt gtgaagccca
atgagactaa gacctacttc tggaaggtcc agcaccacat ggcccctacc aaggatgagt
ttgactgcaa ggcctgggcc tatttctctg atgtggatct ggagaaggat gtccattctg
ggctgattgg ccccctgctg gtgtgccaca ctaacactct gaatcctgcc catggcaggc
aggtgactgt ccaggagttt gccctgttct tcactatctt tgatgagacc aagagctggt
actttactga gaacatggag aggaactgca gagctccttg caatattcag atggaggacc
ccaccttcaa ggagaattac aggttccatg ccattaatgg gtacatcatg gacaccctgc
ctggcctggt gatggctcag gaccagagga tcaggtggta cctgctgagc atgggctcta
atgagaatat ccacagcatc cacttctctg ggcatgtgtt cactgtgagg aagaaggagg
agtacaagat ggctctgtat aatctgtacc ctggggtgtt tgaaactgtg gagatgctgc
cctctaaggc tggcatctgg agggtggagt gcctgattgg ggagcacctg catgctggca
tgagcaccct gttcctggtg tacagcaaca agtgccagac ccccctgggc atggcctctg
gccacatcag ggacttccag atcactgcct ctggccagta tggccagtgg gcccccaagc
tggccaggct gcactattct ggcagcatca atgcctggag caccaaggag cccttcagct
ggatcaaggt ggacctgctg gcccccatga tcattcatgg catcaagacc cagggggcca
ggcagaagtt cagctctctg tacatctctc agttcatcat catgtactct ctggatggga
agaagtggca gacctacagg ggcaacagca ctggcaccct gatggtgttc tttgggaatg
tggactcttc tggcatcaag cacaacatct tcaatccccc catcattgct aggtatatta
ggctgcatcc cacccactac agcatcaggt ctaccctgag gatggagctg atgggctgtg
acctgaactc ttgcagcatg cccctgggca tggagtctaa ggccatctct gatgcccaga
ttactgccag cagctacttc accaacatgt ttgccacctg gagcccctct aaggccaggc
tgcatctgca ggggaggagc aatgcctgga ggcctcaggt gaacaacccc aaggagtggc
tgcaggtgga tttccagaag accatgaagg tgactggggt gaccacccag ggggtcaaga
gcctgctgac cagcatgtat gtgaaggagt tcctgatcag cagcagccag gatggccacc
agtggactct gttctttcag aatgggaagg tgaaggtgtt tcagggcaat caggactctt
tcacccctgt ggtgaacagc ctggaccccc ccctgctgac cagatacctg aggatccacc
cccagtcttg ggtgcatcag attgccctga ggatggaggt gctgggctgt gaggctcagg
atctgtactg agcggccgca ataaaagatc agagctctag agatctgtgt gttggttttt
tgtgtaggaa cccctagtga tggagttggc cactccctct ctgcgcgctc gctcgctcac
tgaggccggg cgaccaaagg tcgcccgacg cccgggcttt gcccgggcgg cctcagtgag
cgagcgagcg cgcagctgcc tgcaggggca gcttgaagga aatactaagg caaaggtact
gcaagtgctc gcaacattcg cttatgcgga ttattgccgt agtgccgcga cgccgggggc
aagatgcaga gattgccatg gtacaggccg tgcggttgat attgccaaaa cagagctgtg
ggggagagtt gtcgagaaag agtgcggaag atgcaaaggc gtcggctatt caaggatgcc
agcaagcgca gcatatcgcg ctgtgacgat gctaatccca aaccttaccc aacccacctg
gtcacgcact gttaagccgc tgtatgacgc tctggtggtg caatgccaca aagaagagtc
aatcgcagac aacattttga atgcggtcac acgttagcag catgattgcc acggatggca
acatattaac ggcatgatat tgacttattg aataaaattg ggtaaatttg actcaacgat
gggttaattc gctcgttgtg gtagtgagat gaaaagaggc ggcgcttact accgattccg
cctagttggt cacttcgacg tatcgtctgg aactccaacc atcgcaggca gagaggtctg
caaaatgcaa tcccgaaaca gttcgcaggt aatagttaga gcctgcataa cggtttcggg
attttttata tctgcacaac aggtaagagc attgagtcga taatcgtgaa gagtcggcga
gcctggttag ccagtgctct ttccgttgtg ctgaattaag cgaataccgg aagcagaacc
ggatcaccaa atgcgtacag gcgtcatcgc cgcccagcaa cagcacaacc caaactgagc
cgtagccact gtctgtcctg aattcattag taatagttac gctgcggcct tttacacatg
accttcgtga aagcgggtgg caggaggtcg cgctaacaac ctcctgccgt tttgcccgtg
catatcggtc acgaacaaat ctgattacta aacacagtag cctggatttg ttctatcagt
aatcgacctt attcctaatt aaatagagca aatcccctta ttgggggtaa gacatgaaga
tgccagaaaa acatgacctg ttggccgcca ttctcgcggc aaaggaacaa ggcatcgggg
caatccttgc gtttgcaatg gcgtaccttc gcggcagata taatggcggt gcgtttacaa
aaacagtaat cgacgcaacg atgtgcgcca ttatcgccta gttcattcgt gaccttctcg
acttcgccgg actaagtagc aatctcgctt atataacgag cgtgtttatc ggctacatcg
gtactgactc gattggttcg cttatcaaac gcttcgctgc taaaaaagcc ggagtagaag
atggtagaaa tcaataatca acgtaaggcg ttcctcgata tgctggcgtg gtcggaggga
actgataacg gacgtcagaa aaccagaaat catggttatg acgtcattgt aggcggagag
ctatttactg attactccga tcaccctcgc aaacttgtca cgctaaaccc aaaactcaaa
tcaacaggcg ccggacgcta ccagcttctt tcccgttggt gggatgccta ccgcaagcag
cttggcctga aagacttctc tccgaaaagt caggacgctg tggcattgca gcagattaag
gagcgtggcg ctttacctat gattgatcgt ggtgatatcc gtcaggcaat cgaccgttgc
agcaatatct gggcttcact gccgggcgct ggttatggtc agttcgagca taaggctgac
agcctgattg caaaattcaa agaagcgggc ggaacggtca gagagattga tgtatgagca
gagtcaccgc gattatctcc gctctggtta tctgcatcat cgtctgcctg tcatgggctg
ttaatcatta ccgtgataac gccattacct acaaagccca gcgcgacaaa aatgccagag
aactgaagct ggcgaacgcg gcaattactg acatgcagat gcgtcagcgt gatgttgctg
cgctcgatgc aaaatacacg aaggagttag ctgatgctaa agctgaaaat gatgctctgc
gtgatgatgt tgccgctggt cgtcgtcggt tgcacatcaa agcagtctgt cagtcagtgc
gtgaagccac caccgcctcc ggcgtggata atgcagcctc cccccgactg gcagacaccg
ctgaacggga ttatttcacc ctcagagaga ggctgatcac tatgcaaaaa caactggaag
gaacccagaa gtatattaat gagcagtgca gatagagttg cccatatcga tgggcaactc
atgcaattat tgtgagcaat acacacgcgc ttccagcgga gtataaatgc ctaaagtaat
aaaaccgagc aatccattta cgaatgtttg ctgggtttct gttttaacaa cattttctgc
gccgccacaa attttggctg catcgacagt tttcttctgc ccaattccag aaacgaagaa
atgatgggtg atggtttcct ttggtgctac tgctgccggt ttgttttgaa cagtaaacgt
ctgttgagca catcctgtaa taagcagggc cagcgcagta gcgagtagca tttttttcat
ggtgttattc ccgatgcttt ttgaagttcg cagaatcgta tgtgtagaaa attaaacaaa
ccctaaacaa tgagttgaaa tttcatattg ttaatattta ttaatgtatg tcaggtgcga
tgaatcgtca ttgtattccc ggattaacta tgtccacagc cctgacgggg aacttctctg
cgggagtgtc cgggaataat taaaacgatg cacacagggt ttagcgcgta cacgtattgc
attatgccaa cgccccggtg ctgacacgga agaaaccgga cgttatgatt tagcgtggaa
agatttgtgt agtgttctga atgctctcag taaatagtaa tgaattatca aaggtatagt
aatatctttt atgttcatgg atatttgtaa cccatcggaa aactcctgct ttagcaagat
tttccctgta ttgctgaaat gtgatttctc ttgatttcaa cctatcatag gacgtttcta
taagatgcgt gtttcttgag aatttaacat ttacaacctt tttaagtcct tttattaaca
cggtgttatc gttttctaac acgatgtgaa tattatctgt ggctagatag taaatataat
gtgagacgtt gtgacgtttt agttcagaat aaaacaattc acagtctaaa tcttttcgca
cttgatcgaa tatttcttta aaaatggcaa cctgagccat tggtaaaacc ttccatgtga
tacgagggcg cgtagtttgc attatcgttt ttatcgtttc aatctggtct gacctccttg
tgttttgttg atgatttatg tcaaatatta ggaatgtttt cacttaatag tattggttgc
gtaacaaagt gcggtcctgc tggcattctg gagggaaata caaccgacag atgtatgtaa
ggccaacgtg ctcaaatctt catacagaaa gatttgaagt aatattttaa ccgctagatg
aagagcaagc gcatggagcg acaaaatgaa taaagaacaa tctgctgatg atccctccgt
ggatctgatt cgtgtaaaaa atatgcttaa tagcaccatt tctatgagtt accctgatgt
tgtaattgca tgtatagaac ataaggtgtc tctggaagca ttcagagcaa ttgaggcagc
gttggtgaag cacgataata atatgaagga ttattccctg gtggttgact gatcaccata
actgctaatc attcaaacta tttagtctgt gacagagcca acacgcagtc tgtcactgtc
aggaaagtgg taaaactgca actcaattac tgcaatgccc tcgtaattaa gtgaatttac
aatatcgtcc tgttcggagg gaagaacgcg ggatgttcat tcttcatcac ttttaattga
tgtatatgct ctcttttctg acgttagtct ccgacggcag gcttcaatga cccaggctga
gaaattcccg gacccttttt gctcaagagc gatgttaatt tgttcaatca tttggttagg
aaagcggatg ttgcgggttg ttgttctgcg ggttctgttc ttcgttgaca tgaggttgcc
ccgtattcag tgtcgctgat ttgtattgtc tgaagttgtt tttacgttaa gttgatgcag
atcaattaat acgatacctg cgtcataatt gattatttga cgtggtttga tggcctccac
gcacgttgtg atatgtagat gataatcatt atcactttac gggtcctttc cggtgatccg
acaggttacg gggcggcgac ctgcctgatg cggtattttc tccttacgca tctgtgcggt
atttcacacc gcatacgtca aagcaaccat agtacgcgcc ctgtagcggc gcattaagcg
cggcgggtgt ggtggttacg cgcagcgtga ccgctacact tgccagcgcc ttagcgcccg
ctcctttcgc tttcttccct tcctttctcg ccacgttcgc cggctttccc cgtcaagctc
taaatcgggg gctcccttta gggttccgat ttagtgcttt acggcacctc gaccccaaaa
aacttgattt gggtgatggt tcacgtagtg ggccatcgcc ctgatagacg gtttttcgcc
ctttgacgtt ggagtccacg ttctttaata gtggactctt gttccaaact ggaacaacac
tcaactctat ctcgggctat tcttttgatt tagacctgca ggcatgcaag cttggcactg
gccgtcgttt tacaacgtcg tgactgggaa aaccctggcg ttacccaact taatcgcctt
gcagcacatc cccctttcgc cagctggcgt aatagcgaag aggcccgcac cgatcgccct
tcccaacagt tgcgcagcct gaatggcgaa tgcgatttat tcaacaaagc cgccgtcccg
tcaagtcagc gtaatgctct gccagtgtta caaccaatta accaattctg attagaaaaa
ctcatcgagc atcaaatgaa actgcaattt attcatatca ggattatcaa taccatattt
ttgaaaaagc cgtttctgta atgaaggaga aaactcaccg aggcagttcc ataggatggc
aagatcctgg tatcggtctg cgattccgac tcgtccaaca tcaatacaac ctattaattt
cccctcgtca aaaataaggt tatcaagtga gaaatcacca tgagtgacga ctgaatccgg
tgagaatggc aaaagcttat gcatttcttt ccagacttgt tcaacaggcc agccattacg
ctcgtcatca aaatcactcg catcaaccaa accgttattc attcgtgatt gcgcctgagc
gagacgaaat acgcgatcgc tgttaaaagg acaattacaa acaggaatcg aatgcaaccg
gcgcaggaac actgccagcg catcaacaat attttcacct gaatcaggat attcttctaa
tacctggaat gctgttttcc cggggatcgc agtggtgagt aaccatgcat catcaggagt
acggataaaa tgcttgatgg tcggaagagg cataaattcc gtcagccagt ttagtctgac
catctcatct gtaacatcat tggcaacgct acctttgcca tgtttcagaa acaactctgg
cgcatcgggc ttcccataca atcgatagat tgtcgcacct gattgcccga cattatcgcg
agcccattta tacccatata aatcagcatc catgttggaa tttaatcgcg gcttcgagca
agacgtttcc cgttgaatat ggctcataac accccttgta ttactgttta tgtaagcaga
cagttttatt gttcatgatg atatattttt atcttgtgca atgtaacatc agagattttg
agacacaacg tggctttgtt gaataaatcg aacttttgct gagttgaagg atcagatcac
gcatcttccc gacaacgcag accgttccgt ggcaaagcaa aagttcaaaa tcaccaactg
gtccacctac aacaaagctc tcatcaaccg tggctccctc actttctggc tggatgatgg
ggcgattcag gcctggtatg agtcagcaac accttcttca cgaggcagac ctctcgacgg
agttccactg agcgtcagac cccgtagaaa agatcaaagg atcttcttga gatccttttt
ttctgcgcgt aatctgctgc ttgcaaacaa aaaaaccacc gctaccagcg gtggtttgtt
tgccggatca agagctacca actctttttc cgaaggtaac tggcttcagc agagcgcaga
taccaaatac tgttcttcta gtgtagccgt agttaggcca ccacttcaag aactctgtag
caccgcctac atacctcgct ctgctaatcc tgttaccagt ggctgctgcc agtggcgata
agtcgtgtct taccgggttg gactcaagac gatagttacc ggataaggcg cagcggtcgg
gctgaacggg gggttcgtgc acacagccca gcttggagcg aacgacctac accgaactga
gatacctaca gcgtgagcta tgagaaagcg ccacgcttcc cgaagggaga aaggcggaca
ggtatccggt aagcggcagg gtcggaacag gagagcgcac gagggagctt ccagggggaa
acgcctggta tctttatagt cctgtcgggt ttcgccacct ctgacttgag cgtcgatttt
tgtgatgctc gtcagggggg cggagcctat ggaaaaacgc cagcaacgcg gcctttttac
ggttcctggc cttttgctgg ccttttgctc acatgt
FVIII-BDD, кодируемый X01-X18 последовательностями нуклеиновых кислот. SQ последовательность выделена жирным/подчеркнута (SEQ ID NO:25)
MQIELSTCFFLCLLRFCFSATRRYYLGAVELSWDYMQSDLGELPVDARFPPRVPKSFPFNTSVVYKKTLFVEFTDHLFNIAKPRPPWMGLLGPTIQAEVYDTVVITLKNMASHPVSLHAVGVSYWKASEGAEYDDQTSQREKEDDKVFPGGSHTYVWQVLKENGPMASDPLCLTYSYLSHVDLVKDLNSGLIGALLVCREGSLAKEKTQTLHKFILLFAVFDEGKSWHSETKNSLMQDRDAASARAWPKMHTVNGYVNRSLPGLIGCHRKSVYWHVIGMGTTPEVHSIFLEGHTFLVRNHRQASLEISPITFLTAQTLLMDLGQFLLFCHISSHQHDGMEAYVKVDSCPEEPQLRMKNNEEAEDYDDDLTDSEMDVVRFDDDNSPSFIQIRSVAKKHPKTWVHYIAAEEEDWDYAPLVLAPDDRSYKSQYLNNGPQRIGRKYKKVRFMAYTDETFKTREAIQHESGILGPLLYGEVGDTLLIIFKNQASRPYNIYPHGITDVRPLYSRRLPKGVKHLKDFPILPGEIFKYKWTVTVEDGPTKSDPRCLTRYYSSFVNMERDLASGLIGPLLICYKESVDQRGNQIMSDKRNVILFSVFDENRSWYLTENIQRFLPNPAGVQLEDPEFQASNIMHSINGYVFDSLQLSVCLHEVAYWYILSIGAQTDFLSVFFSGYTFKHKMVYEDTLTLFPFSGETVFMSMENPGLWILGCHNSDFRNRGMTALLKVSSCDKNTGDYYEDSYEDISAYLLSKNNAIEPRSFSQNPPVLKRHQREITRTTLQSDQEEIDYDDTISVEMKKEDFDIYDEDENQSPRSFQKKTRHYFIAAVERLWDYGMSSSPHVLRNRAQSGSVPQFKKVVFQEFTDGSFTQPLYRGELNEHLGLLGPYIRAEVEDNIMVTFRNQASRPYSFYSSLISYEEDQRQGAEPRKNFVKPNETKTYFWKVQHHMAPTKDEFDCKAWAYFSDVDLEKDVHSGLIGPLLVCHTNTLNPAHGRQVTVQEFALFFTIFDETKSWYFTENMERNCRAPCNIQMEDPTFKENYRFHAINGYIMDTLPGLVMAQDQRIRWYLLSMGSNENIHSIHFSGHVFTVRKKEEYKMALYNLYPGVFETVEMLPSKAGIWRVECLIGEHLHAGMSTLFLVYSNKCQTPLGMASGHIRDFQITASGQYGQWAPKLARLHYSGSINAWSTKEPFSWIKVDLLAPMIIHGIKTQGARQKFSSLYISQFIIMYSLDGKKWQTYRGNSTGTLMVFFGNVDSSGIKHNIFNPPIIARYIRLHPTHYSIRSTLRMELMGCDLNSCSMPLGMESKAISDAQITASSYFTNMFATWSPSKARLHLQGRSNAWRPQVNNPKEWLQVDFQKTMKVTGVTTQGVKSLLTSMYVKEFLISSSQDGHQWTLFFQNGKVKVFQGNQDSFTPVVNSLDPPLLTRYLRIHPQSWVHQIALRMEVLGCEAQDLY
FVIII дикого типа с BDD (SEQ ID NO:26)
MQIELSTCFFLCLLRFCFSATRRYYLGAVELSWDYMQSDLGELPVDARFPPRVPKSFPFNTSVVYKKTLFVEFTDHLFNIAKPRPPWMGLLGPTIQAEVYDTVVITLKNMASHPVSLHAVGVSYWKASEGAEYDDQTSQREKEDDKVFPGGSHTYVWQVLKENGPMASDPLCLTYSYLSHVDLVKDLNSGLIGALLVCREGSLAKEKTQTLHKFILLFAVFDEGKSWHSETKNSLMQDRDAASARAWPKMHTVNGYVNRSLPGLIGCHRKSVYWHVIGMGTTPEVHSIFLEGHTFLVRNHRQASLEISPITFLTAQTLLMDLGQFLLFCHISSHQHDGMEAYVKVDSCPEEPQLRMKNNEEAEDYDDDLTDSEMDVVRFDDDNSPSFIQIRSVAKKHPKTWVHYIAAEEEDWDYAPLVLAPDDRSYKSQYLNNGPQRIGRKYKKVRFMAYTDETFKTREAIQHESGILGPLLYGEVGDTLLIIFKNQASRPYNIYPHGITDVRPLYSRRLPKGVKHLKDFPILPGEIFKYKWTVTVEDGPTKSDPRCLTRYYSSFVNMERDLASGLIGPLLICYKESVDQRGNQIMSDKRNVILFSVFDENRSWYLTENIQRFLPNPAGVQLEDPEFQASNIMHSINGYVFDSLQLSVCLHEVAYWYILSIGAQTDFLSVFFSGYTFKHKMVYEDTLTLFPFSGETVFMSMENPGLWILGCHNSDFRNRGMTALLKVSSCDKNTGDYYEDSYEDISAYLLSKNNAIEPRSFSQNSRHPSTRQKQFNATTIPENDIEKTDPWFAHRTPMPKIQNVSSSDLLMLLRQSPTPHGLSLSDLQEAKYETFSDDPSPGAIDSNNSLSEMTHFRPQLHHSGDMVFTPESGLQLRLNEKLGTTAATELKKLDFKVSSTSNNLISTIPSDNLAAGTDNTSSLGPPSMPVHYDSQLDTTLFGKKSSPLTESGGPLSLSEENNDSKLLESGLMNSQESSWGKNVSSTESGRLFKGKRAHGPALLTKDNALFKVSISLLKTNKTSNNSATNRKTHIDGPSLLIENSPSVWQNILESDTEFKKVTPLIHDRMLMDKNATALRLNHMSNKTTSSKNMEMVQQKKEGPIPPDAQNPDMSFFKMLFLPESARWIQRTHGKNSLNSGQGPSPKQLVSLGPEKSVEGQNFLSEKNKVVVGKGEFTKDVGLKEMVFPSSRNLFLTNLDNLHENNTHNQEKKIQEEIEKKETLIQENVVLPQIHTVTGTKNFMKNLFLLSTRQNVEGSYDGAYAPVLQDFRSLNDSTNRTKKHTAHFSKKGEEENLEGLGNQTKQIVEKYACTTRISPNTSQQNFVTQRSKRALKQFRLPLEETELEKRIIVDDTSTQWSKNMKHLTPSTLTQIDYNEKEKGAITQSPLSDCLTRSHSIPQANRSPLPIAKVSSFPSIRPIYLTRVLFQDNSSHLPAASYRKKDSGVQESSHFLQGAKKNNLSLAILTLEMTGDQREVGSLGTSATNSVTYKKVENTVLPKPDLPKTSGKVELLPKVHIYQKDLFPTETSNGSPGHLDLVEGSLLQGTEGAIKWNEANRPGKVPFLRVATESSAKTPSKLLDPLAWDNHYGTQIPKEEWKSQEKSPEKTAFKKKDTILSLNACESNHAIAAINEGQNKPEIEVTWAKQGRTERLCSQNPPVLKRHQREITRTTLQSDQEEIDYDDTISVEMKKEDFDIYDEDENQSPRSFQKKTRHYFIAAVERLWDYGMSSSPHVLRNRAQSGSVPQFKKVVFQEFTDGSFTQPLYRGELNEHLGLLGPYIRAEVEDNIMVTFRNQASRPYSFYSSLISYEEDQRQGAEPRKNFVKPNETKTYFWKVQHHMAPTKDEFDCKAWAYFSDVDLEKDVHSGLIGPLLVCHTNTLNPAHGRQVTVQEFALFFTIFDETKSWYFTENMERNCRAPCNIQMEDPTFKENYRFHAINGYIMDTLPGLVMAQDQRIRWYLLSMGSNENIHSIHFSGHVFTVRKKEEYKMALYNLYPGVFETVEMLPSKAGIWRVECLIGEHLHAGMSTLFLVYSNKCQTPLGMASGHIRDFQITASGQYGQWAPKLARLHYSGSINAWSTKEPFSWIKVDLLAPMIIHGIKTQGARQKFSSLYISQFIIMYSLDGKKWQTYRGNSTGTLMVFFGNVDSSGIKHNIFNPPIIARYIRLHPTHYSIRSTLRMELMGCDLNSCSMPLGMESKAISDAQITASSYFTNMFATWSPSKARLHLQGRSNAWRPQVNNPKEWLQVDFQKTMKVTGVTTQGVKSLLTSMYVKEFLISSSQDGHQWTLFFQNGKVKVFQGNQDSFTPVVNSLDPPLLTRYLRIHPQSWVHQIALRMEVLGCEAQDLY
Капсид AAV-LK03 VP1 (SEQ ID NO:27)
MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWALQPGAPKPKANQQHQDNARGLVLPGYKYLGPGNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLKYNHADAEFQERLKEDTSFGGNLGRAVFQAKKRLLEPLGLVEEAAKTAPGKKRPVDQSPQEPDSSSGVGKSGKQPARKRLNFGQTGDSESVPDPQPLGEPPAAPTSLGSNTMASGGGAPMADNNEGADGVGNSSGNWHCDSQWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISSQSGASNDNHYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKKLSFKLFNIQVKEVTQNDGTTTIANNLTSTVQVFTDSEYQLPYVLGSAHQGCLPPFPADVFMVPQYGYLTLNNGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFQFSYTFEDVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLNRTQGTTSGTTNQSRLLFSQAGPQSMSLQARNWLPGPCYRQQRLSKTANDNNNSNFPWTAASKYHLNGRDSLVNPGPAMASHKDDEEKFFPMHGNLIFGKEGTTASNAELDNVMITDEEEIRTTNPVATEQYGTVANNLQSSNTAPTTRTVNDQGALPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGHFHPSPLMGGFGLKHPPPQIMIKNTPVPANPPTTFSPAKFASFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYNKSVNVDFTVDTNGVYSEPRPIGTRYLTRPL
Капсид AAV-SPK VP1 (SEQ ID NO:28), используемый в AAV-SPK-8005 и AAV-SPK-hFIX
MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWDLKPGAPKPKANQQKQDNGRGLVLPGYKYLGPFNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLQAGDNPYLRYNHADAEFQERLQEDTSFGGNLGRAVFQAKKRVLEPLGLVESPVKTAPGKKRPVEPSPQRSPDSSTGIGKKGQQPAKKRLNFGQTGDSESVPDPQPIGEPPAAPSGVGPNTMAAGGGAPMADNNEGADGVGSSSGNWHCDSTWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISNGTSGGSTNDNTYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTQNEGTKTIANNLTSTIQVFTDSEYQLPYVLGSAHQGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNNGSQAV GRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFEFSYNFEDVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSRTQSTGGTAGTQQLLFSQAGPNNMSAQAKNWLPGPCYRQQRVSTTLSQNNNSNFAWTGATKYHLNGRDSLVNPGVAMATHKDDEERFFPSSGVLMFGKQGAGKDNVDYSSVMLTSEEEIKTTNPVATEQYGVVADNLQQQNAAPIVGAVNSQGALPGMVWQNRDVYLQGPIWAKIPHTDGNFHPSPLMGGFGLKHPPPQILIKNTPVPADPPTTFNQAKLASFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYYKSTNVDFAVNTEGTYSEPRPIGTRYLTRNL
Процентная идентификационная матрица векторов hFVIII (WT, CO3, x09, X02, X06, X08, X15, X05, X18, X14, X01, X12, X04, X11, X07, X03, X16, X13, X17 и X10)
hFVIII WT hFVIII CO3 hFVIII X09 hFVIII X02 hFVIII X06 hFVIII X08 hFVIII X15 hFVIII X05 hFVIII X18 hFVIII X14 hFVIII X01 hFVIII X12 hFVIII X04 hFVIII X11 hFVIII X07 hFVIII X03 hFVIII X16 hFVIII X13 hFVIII X17 hFVIII X10
hFVIII WT 77,2 79,5 79,1 79,3 79,2 79,3 79,1 79 79,6 79,6 79,4 79,4 79,4 79,2 79,4 79,1 79 79,6 79,3
hFVIII CO3 77,2 81,9 81,9 81,5 81,3 81,6 81,6 81,2 81,4 81,1 81,1 81,3 81,7 81,8 81,6 81,9 81,8 82,1 82,2
hFVIII X09 79,5 81,9 91,5 91,4 91,8 92 91,8 91 91,4 91,5 91,5 91,7 91,7 92,2 91,5 92,1 91,8 91,1 91,6
hFVIII X02 79,1 81,9 91,5 91,4 91,3 92 92,1 92,2 91,7 92 91,9 91,9 92 91,5 91 91,5 92,3 91,9 92,1
hFVIII X06 79,3 81,5 91,4 91,4 91,8 91,9 91,8 91,5 91,8 92,3 91,7 91,8 92 91,5 91,4 91,7 92,4 91,6 91,8
hFVIII X08 79,2 81,3 91,8 91,3 91,8 91,8 91,5 91,5 91,8 92,2 91,5 92,3 92,5 92 91,7 91,4 92,3 91,6 91,9
hFVIII X15 79,3 81,6 92 92 91,9 91,8 92,2 91,6 91,7 92,3 92,1 92,2 92,5 92 92,1 92,2 92,3 92,5 92
hFVIII X05 79,1 81,6 91,8 92,1 91,8 91,5 92,2 92,5 91,9 92,7 92,4 92,1 91,5 92,1 91,6 91,7 92,3 91,9 92
hFVIII X18 79 81,2 91 92,2 91,5 91,5 91,6 92,5 91,6 93 92,1 91,5 91,8 91,7 91,4 91,1 91,8 91,8 92
hFVIII X14 79,6 81,4 91,4 91,7 91,8 91,8 91,7 91,9 91,6 93 92 91,6 91,8 91,3 91,8 92,3 92,2 91,8 92
hFVIII X01 79,6 81,1 91,5 92 92,3 92,2 92,3 92,7 93 93 93,4 92,3 92,5 92,6 92,5 92,2 92,6 92,4 92,1
hFVIII X12 79,4 81,1 91,5 91,9 91,7 91,5 92,1 92,4 92,1 92 93,4 92 92 92,4 92,4 91,7 92,4 92,6 92,6
hFVIII X04 79,4 81,3 91,7 91,9 91,8 92,3 92,2 92,1 91,5 91,6 92,3 92 92,6 92 91,5 91,5 92 91,9 92,5
hFVIII X11 79,4 81,7 91,7 92 92 92,5 92,5 91,5 91,8 91,8 92,5 92 92,6 92,6 92 91,9 92,3 91,8 91,9
hFVIII X07 79,2 81,8 92,2 91,5 91,5 92 92 92,1 91,7 91,3 92,6 92,4 92 92,6 92,1 92 92,4 91,9 92,7
hFVIII X03 79,4 81,6 91,5 91 91,4 91,7 92,1 91,6 91,4 91,8 92,5 92,4 91,5 92 92,1 92 92,7 92,1 91,6
hFVIII X16 79,1 81,9 92,1 91,5 91,7 91,4 92,2 91,7 91,1 92,3 92,2 91,7 91,5 91,9 92 92 92,4 92 92,8
hFVIII X13 79 81,8 91,8 92,3 92,4 92,3 92,3 92,3 91,8 92,2 92,6 92,4 92 92,3 92,4 92,7 92,4 92,4 92,8
hFVIII X17 79,6 82,1 91,1 91,9 91,6 91,6 92,5 91,9 91,8 91,8 92,4 92,6 91,9 91,8 91,9 92,1 92 92,4 92,9
hFVIII X10 79,3 82,2 91,6 92,1 91,8 91,9 92 92 92 92 92,1 92,6 92,5 91,9 92,7 91,6 92,8 92,8 92,9
Некоторые используемые определения/сокращения:
BDD: весь или по меньшей мере часть удаленного B-домена (BD)
FVIII-BDD: FVIII с делецией B-домена
SQ: SFSQNPPVLKRHQR (SEQ ID NO:29)
FVIII/SQ: FVIII с SQ
FVIIIX01-X18: варианты нуклеиновых кислот с пониженным содержанием CpG, кодирующих FVIII, изложенные в виде SEQ ID Nos:1-18, соответственно.
TTRmut: промотор TTR с 4 мутациями, от TAmGTGTAG до TATTGACTTAG
CO3: кодон-оптимизированный вариант нуклеиновой кислоты FVIII, изложенный в виде SEQ ID NO:21
NHP: примат, не являющийся человеком
ALT: Аланинаминотрансфераза
D-димер: фрагмент белка от разрушения кровяного сгустка
SPK-8005: AAV капсид (SEQ ID NO:28)+TTRmut-hFVIII-X07; также называемый АAV-SPK-8005
SPK-8011: AAV LK03 капсид (SEQ ID NO:27)+TTRmut-hFVIII-X07; также называемый АAV-SPK-8011
Хотя некоторые из вариантов осуществления изобретения были описаны и конкретно проиллюстрированы выше, не предполагается, что изобретение ограничивается такими вариантами осуществления. Могут быть сделаны различные модификации без отхода от объема и сущности изобретения, как изложено в следующей формуле изобретения.
--->
СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
<110> SPARK THERAPEUTICS, INC.
ANGUELA, Xavier
<120> КОДИРУЮЩИЕ ФАКТОР VIII ВАРИАНТЫ С ПОНИЖЕННЫМ СОДЕРЖАНИЕМ CPG,
КОМПОЗИЦИИ И СПОСОБЫ И ПРИМЕНЕНИЕ В ЛЕЧЕНИИ НАРУШЕНИЙ ГЕМОСТАЗ
<130> 23637-449036
<140> PCT/US2016/59793
<141> 2016-10-31
<150> 62/249,001
<151> 2016-10-30
<150> 62/331,872
<151> 2016-05-04
<150> 62/349,532
<151> 2016-06-13
<150> 62/357,874
<151> 2016-07-01
<160> 29
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 4374
<212> ДНК
<213> Искуственная последовательность
<220>
<223> Описание искуственной последовательности: Нуклеиновая кислота FVIII
<400> 1
atgcagattg agctgtctac ctgcttcttc ctgtgcctgc tgaggttctg cttctctgct 60
accaggaggt actacctggg ggctgtggag ctgagctggg attacatgca gtctgacctg 120
ggggagctgc ctgtggatgc caggtttccc cccagggtgc ccaagagctt ccccttcaat 180
acctctgtgg tgtataagaa gaccctgttt gtggagttca ctgatcatct gttcaacatt 240
gctaaaccca ggcccccctg gatggggctg ctgggcccta ccatccaggc tgaggtgtat 300
gacactgtgg tgatcactct gaagaacatg gctagccatc ctgtgtctct gcatgctgtg 360
ggggtgagct actggaaggc ttctgagggg gctgagtatg atgatcagac tagccagagg 420
gagaaggagg atgacaaggt gttccctggg ggctctcaca cctatgtctg gcaggtgctg 480
aaggagaatg gccccatggc ctctgatcct ctgtgtctga cctatagcta cctgagccat 540
gtggacctgg tgaaggacct gaactctggc ctgattgggg ccctgctggt gtgtagggag 600
gggagcctgg ccaaggagaa gacccagacc ctgcacaagt tcattctgct gtttgctgtg 660
tttgatgagg gcaagagctg gcattctgaa accaagaaca gcctgatgca ggacagggat 720
gctgcctctg ctagggcctg gcccaagatg cacactgtga atgggtatgt caataggtct 780
ctgcctggcc tgattggctg ccacaggaag tctgtgtact ggcatgtgat tgggatgggc 840
accacccctg aggtgcacag catctttctg gagggccaca ccttcctggt gaggaatcac 900
agacaggcca gcctggagat cagccccatc accttcctga ctgcccagac cctgctgatg 960
gacctgggcc agtttctgct gttctgccac atctctagcc accagcatga tggcatggag 1020
gcctatgtga aggtggactc ctgccctgag gagccccagc tgaggatgaa gaataatgag 1080
gaggctgagg actatgatga tgacctgact gactctgaga tggatgtggt gagatttgat 1140
gatgacaatt ctcccagctt cattcagatc aggtctgtgg ccaagaagca tcccaagacc 1200
tgggtgcact acattgctgc tgaggaggag gactgggact atgcccccct ggtgctggcc 1260
cctgatgaca ggagctataa gagccagtac ctgaataatg gcccccagag gattgggagg 1320
aagtataaga aggtgaggtt catggcctat actgatgaaa ccttcaagac cagagaggcc 1380
atccagcatg agtctgggat cctggggccc ctgctgtatg gggaggtggg ggacaccctg 1440
ctgatcatct tcaagaacca ggccagcagg ccctacaaca tctaccctca tggcatcact 1500
gatgtgaggc ctctgtacag cagaaggctg cccaaggggg tgaagcatct gaaggacttc 1560
cccattctgc ctggggagat tttcaagtac aagtggactg tgactgtgga ggatggccca 1620
accaagtctg accctaggtg cctgactagg tactacagca gctttgtgaa tatggagagg 1680
gacctggcct ctggcctgat tggccccctg ctgatctgct acaaggagtc tgtggatcag 1740
aggggcaacc agatcatgtc tgacaagagg aatgtgatcc tgttctctgt gtttgatgag 1800
aacaggagct ggtacctgac tgagaacatt cagaggtttc tgcccaaccc tgctggggtg 1860
cagctggagg accctgaatt ccaggcctct aacatcatgc acagcattaa tggctatgtg 1920
tttgacagcc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cctactggta cattctgagc 1980
attggggccc agactgactt cctgtctgtg ttcttctctg gctacacctt taagcacaag 2040
atggtgtatg aggataccct gaccctgttt cctttctctg gggagactgt gttcatgagc 2100
atggagaacc ctggcctgtg gatcctgggc tgccacaact ctgacttcag gaacaggggg 2160
atgactgctc tgctgaaggt gagcagctgt gataagaaca ctggggacta ctatgaggac 2220
agctatgagg acatctctgc ctatctgctg agcaagaata atgctattga gcccaggagc 2280
ttctctcaga acccccctgt gctgaagagg caccagaggg agatcaccag aactactctg 2340
cagtctgacc aggaggagat tgactatgat gacaccatct ctgtggagat gaagaaggag 2400
gattttgata tttatgatga ggatgaaaac cagagcccca ggagctttca gaagaagact 2460
aggcactatt tcattgctgc tgtggagagg ctgtgggact atggcatgtc ttctagcccc 2520
catgtgctga ggaacagggc ccagtctggc tctgtgcccc agttcaagaa ggtggtgttc 2580
caggagttca ctgatggcag cttcactcag cccctgtaca ggggggagct gaatgagcac 2640
ctggggctgc tgggccctta tatcagggct gaggtggagg ataacatcat ggtgaccttc 2700
aggaaccagg ccagcaggcc ctacagcttc tactctagcc tgatcagcta tgaggaggac 2760
cagaggcagg gggctgagcc caggaagaac tttgtgaagc ccaatgagac caagacttat 2820
ttctggaagg tgcagcacca tatggccccc accaaggatg agtttgattg caaagcctgg 2880
gcctacttct ctgatgtgga cctggagaag gatgtgcact ctgggctgat tggccccctg 2940
ctggtgtgcc acaccaacac tctgaaccct gcccatggca ggcaggtgac tgtgcaggag 3000
tttgccctgt tcttcaccat ctttgatgag actaagagct ggtacttcac tgagaacatg 3060
gagaggaact gcagggcccc ctgcaatatc cagatggagg accccacctt taaggaaaat 3120
tataggtttc atgccattaa tggctacatc atggacaccc tgcctggcct ggtgatggcc 3180
caggaccaga ggatcaggtg gtacctgctg agcatgggca gcaatgagaa cattcacagc 3240
atccacttct ctggccatgt gttcactgtg aggaagaagg aggagtacaa gatggccctg 3300
tataatctgt accctggggt gtttgagact gtggagatgc tgcccagcaa ggctggcatc 3360
tggagggtgg agtgcctgat tggggagcac ctgcatgctg gcatgagcac cctgttcctg 3420
gtgtattcta acaagtgtca gacccccctg ggcatggcct ctggccatat cagggacttc 3480
cagatcactg cctctggcca gtatgggcag tgggccccca agctggccag gctgcattac 3540
tctggcagca tcaatgcctg gagcaccaag gagccattca gctggattaa ggtggacctg 3600
ctggctccaa tgattatcca tggcatcaag acccaggggg ccaggcagaa gtttagcagc 3660
ctgtacatct ctcagtttat catcatgtac tctctggatg gcaaaaagtg gcagacctac 3720
aggggcaatt ctactggcac tctgatggtg ttctttggca atgtggacag ctctgggatc 3780
aagcacaaca tctttaaccc ccctatcatt gccaggtaca ttaggctgca ccccacccat 3840
tacagcatca ggagcaccct gaggatggag ctgatgggct gtgatctgaa cagctgcagc 3900
atgcccctgg gcatggagag caaggctatc tctgatgccc agattactgc cagcagctac 3960
ttcaccaata tgtttgccac ctggagcccc agcaaggcca ggctgcacct gcagggcagg 4020
tctaatgcct ggaggcccca ggtgaacaac cccaaggagt ggctgcaggt ggacttccag 4080
aagaccatga aggtgactgg ggtgaccacc cagggggtga agagcctgct gactagcatg 4140
tatgtgaagg agttcctgat cagcagcagc caggatggcc atcagtggac cctgttcttc 4200
cagaatggca aggtgaaggt gttccagggc aatcaggaca gcttcacccc tgtggtgaac 4260
agcctggacc cccccctgct gaccagatac ctgaggatcc acccccagag ctgggtgcat 4320
cagattgccc tgaggatgga ggtgctgggg tgtgaggccc aggacctgta ctga 4374
<210> 2
<211> 4374
<212> ДНК
<213> Искуственная последовательность
<220>
<223> Описание искуственной последовательности: Нуклеиновая кислота FVIII
<400> 2
atgcagattg agctgtctac ctgctttttc ctgtgtctgc tgaggttctg cttctctgcc 60
actaggaggt actacctggg ggctgtggag ctgtcttggg attacatgca gtctgatctg 120
ggggagctgc ctgtggatgc caggtttcct cccagggtgc ccaagtcttt ccccttcaat 180
acctctgtgg tgtataagaa gaccctgttt gtggagttta ctgatcacct gttcaacatt 240
gccaagccca ggcccccttg gatgggcctg ctggggccca ccatccaggc tgaggtgtat 300
gacactgtgg tgatcaccct gaagaacatg gcctctcacc ctgtgagcct gcatgctgtg 360
ggggtgagct actggaaggc ctctgagggg gctgagtatg atgaccagac cagccagagg 420
gagaaggagg atgataaggt gttccctggg gggagccaca cttatgtgtg gcaggtgctg 480
aaggagaatg gcccaatggc ctctgatccc ctgtgcctga cctattctta cctgagccat 540
gtggacctgg tgaaggacct gaactctggc ctgattgggg ccctgctggt gtgcagggag 600
ggctctctgg ctaaggagaa gacccagacc ctgcacaagt tcatcctgct gtttgctgtg 660
tttgatgagg ggaagagctg gcactctgag accaagaaca gcctgatgca ggacagggat 720
gctgcctctg ccagggcctg gcccaaaatg cacactgtga atggctatgt gaataggagc 780
ctgcctggcc tgattggctg ccacaggaag tctgtgtatt ggcatgtgat tggcatgggc 840
accacccctg aggtgcactc tatcttcctg gagggccata ctttcctggt gaggaatcat 900
aggcaggcca gcctggagat tagccccatt acctttctga ctgcccagac cctgctgatg 960
gacctgggcc agttcctgct gttttgccac atcagctctc accagcatga tggcatggag 1020
gcctatgtga aggtggatag ctgccctgag gagccccagc tgaggatgaa gaacaatgag 1080
gaggctgagg attatgatga tgatctgact gattctgaaa tggatgtggt gaggtttgat 1140
gatgacaata gcccctcttt catccagatc aggtctgtgg ccaagaagca tcctaagacc 1200
tgggtgcact acattgctgc tgaggaggag gactgggact atgctcccct ggtgctggcc 1260
cctgatgaca ggtcttacaa gagccagtac ctgaacaatg gcccccagag aattgggagg 1320
aagtataaga aggtgagatt catggcttac actgatgaga ccttcaagac tagggaggcc 1380
atccagcatg agtctggcat tctgggcccc ctgctgtatg gggaggtggg ggacaccctg 1440
ctgatcatct tcaagaacca ggcctctagg ccctacaata tttaccccca tgggatcact 1500
gatgtgaggc ccctgtacag caggaggctg cctaaggggg tgaagcatct gaaggacttc 1560
cccatcctgc ctggggagat cttcaagtat aagtggactg tgactgtgga agatggcccc 1620
accaagtctg accctaggtg cctgaccagg tactactctt cttttgtgaa catggagagg 1680
gacctggcct ctggcctgat tggccccctg ctgatctgct acaaggagtc tgtggaccag 1740
agggggaacc agattatgtc tgacaagagg aatgtgattc tgttctctgt gtttgatgag 1800
aacaggagct ggtatctgac tgagaacatc cagaggttcc tgcccaatcc tgctggggtg 1860
cagctggagg accctgagtt ccaggccagc aacatcatgc acagcatcaa tgggtatgtg 1920
tttgattctc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cctactggta catcctgagc 1980
attggggctc agactgattt cctgtctgtg ttcttttctg gctacacctt taagcataag 2040
atggtgtatg aggacactct gaccctgttt cccttctctg gggagactgt gtttatgagc 2100
atggagaacc ctggcctgtg gatcctgggc tgccacaact ctgatttcag gaacaggggc 2160
atgactgctc tgctgaaggt gtcttcttgt gacaagaaca ctggggacta ttatgaggac 2220
agctatgagg acatctctgc ctacctgctg agcaagaaca atgctattga gcccagatct 2280
ttcagccaga acccccctgt gctgaagagg caccagaggg agatcactag gaccaccctg 2340
cagtctgacc aggaggagat tgactatgat gacactatct ctgtggagat gaagaaggag 2400
gactttgata tctatgatga ggatgagaac cagtctccca ggagcttcca gaaaaagacc 2460
aggcactact tcattgctgc tgtggagagg ctgtgggact atggcatgtc ttctagcccc 2520
catgtgctga ggaacagggc ccagtctggg tctgtgcccc agttcaagaa ggtggtgttc 2580
caggagttca ctgatgggag cttcacccag cctctgtaca ggggggagct gaatgagcac 2640
ctggggctgc tgggccctta tattagggct gaggtggagg acaacatcat ggtgactttc 2700
aggaatcagg cctctaggcc ctatagcttc tacagctctc tgatcagcta tgaggaggat 2760
cagaggcagg gggctgagcc caggaagaac tttgtgaagc ccaatgagac caagacctac 2820
ttctggaagg tgcagcacca catggctcct accaaggatg agtttgactg caaggcctgg 2880
gcctactttt ctgatgtgga cctggagaag gatgtgcact ctggcctgat tggccccctg 2940
ctggtgtgtc ataccaacac cctgaaccct gcccatggca ggcaggtgac tgtgcaggag 3000
tttgccctgt tcttcaccat ctttgatgag accaagagct ggtactttac tgagaacatg 3060
gagaggaatt gcagagcccc ttgcaacatc cagatggagg acccaacctt caaagagaac 3120
tacaggttcc atgccatcaa tgggtacatc atggacaccc tgcctggcct ggtgatggct 3180
caggaccaga ggatcaggtg gtatctgctg agcatgggca gcaatgagaa tatccatagc 3240
attcacttct ctggccatgt gttcactgtg aggaagaagg aggagtacaa gatggccctg 3300
tataacctgt accctggggt gtttgagact gtggagatgc tgccaagcaa ggctgggatt 3360
tggagggtgg agtgcctgat tggggagcac ctgcatgctg gcatgtctac cctgttcctg 3420
gtgtactcca ataagtgcca gacccccctg ggcatggcct ctggccacat cagggacttc 3480
cagatcactg cctctggcca gtatgggcag tgggccccaa agctggccag gctgcactat 3540
tctgggagca tcaatgcttg gagcaccaag gagcctttca gctggattaa ggtggatctg 3600
ctggccccca tgatcattca tggcatcaaa acccaggggg ctagacagaa gttttctagc 3660
ctgtacatca gccagttcat catcatgtac agcctggatg gcaagaagtg gcagacttac 3720
aggggcaata gcactggcac cctgatggtg ttttttggca atgtggacag ctctggcatc 3780
aagcacaaca tctttaaccc ccccattatt gccaggtata tcaggctgca tcccacccac 3840
tattctatta ggtctactct gagaatggag ctgatgggct gtgacctgaa cagctgtagc 3900
atgcccctgg ggatggagag caaggctatc tctgatgccc agatcactgc cagctcttat 3960
ttcaccaata tgtttgccac ctggtctccc tctaaggcca ggctgcacct gcagggcagg 4020
agcaatgctt ggaggcccca ggtgaataac cccaaggagt ggctgcaggt ggacttccag 4080
aagaccatga aggtgactgg ggtgactacc cagggggtga agtctctgct gactagcatg 4140
tatgtgaagg agttcctgat cagcagcagc caggatgggc atcagtggac tctgttcttc 4200
cagaatggca aggtgaaggt cttccagggg aaccaggata gcttcactcc tgtggtgaac 4260
tctctggacc cccccctgct gactaggtat ctgaggatcc acccccagag ctgggtgcac 4320
cagattgccc tgaggatgga ggtgctgggc tgtgaggccc aggacctgta ttga 4374
<210> 3
<211> 4374
<212> ДНК
<213> Искуственная последовательность
<220>
<223> Описание искуственной последовательности: Нуклеиновая кислота FVIII
<400> 3
atgcagattg aactgtctac ttgtttcttc ctgtgcctgc tgaggttttg cttctctgct 60
actaggaggt actatctggg ggctgtggag ctgtcttggg actatatgca gtctgacctg 120
ggggagctgc ctgtggatgc taggtttccc cccagggtgc ccaagagctt cccctttaac 180
acctctgtgg tgtataagaa gactctgttt gtggagttca ctgaccatct gttcaacatt 240
gccaagccaa ggcccccctg gatgggcctg ctgggcccca ccatccaggc tgaggtgtat 300
gacactgtgg tgattactct gaagaacatg gccagccatc ctgtgagcct gcatgctgtg 360
ggggtgtctt actggaaggc ctctgagggg gctgagtatg atgaccagac ctctcagagg 420
gagaaggagg atgacaaggt gttccctggg ggctctcata cctatgtgtg gcaggtcctg 480
aaggagaatg ggcccatggc ctctgacccc ctgtgcctga cctactctta tctgtctcat 540
gtggacctgg tgaaggacct gaactctggc ctgattgggg ccctgctggt gtgcagggag 600
ggcagcctgg ctaaggagaa gacccagact ctgcacaagt tcatcctgct gtttgctgtg 660
tttgatgagg gcaagagctg gcactctgag accaagaaca gcctgatgca ggacagggat 720
gctgcctctg ctagggcctg gcccaagatg cacactgtga atgggtatgt gaacaggagc 780
ctgccaggcc tgattggctg ccataggaag tctgtgtatt ggcatgtgat tgggatgggg 840
actacccctg aggtccacag cattttcctg gaggggcata cctttctggt gaggaaccac 900
aggcaggcct ctctggagat ctctcccatt actttcctga ctgcccagac cctgctgatg 960
gacctgggcc agttcctgct gttctgccac atcagcagcc accagcatga tggcatggag 1020
gcctatgtga aggtggatag ctgccctgag gagccccagc tgaggatgaa aaacaatgag 1080
gaggctgagg attatgatga tgacctgact gattctgaga tggatgtggt gaggtttgat 1140
gatgataaca gccccagctt catccagatt aggtctgtgg ccaagaagca tcccaagacc 1200
tgggtgcact acattgctgc tgaggaggag gattgggact atgctcctct ggtgctggcc 1260
cctgatgaca ggagctacaa gagccagtac ctgaataatg gcccccagag gattggcagg 1320
aagtataaga aggtgaggtt catggcctac actgatgaga cctttaagac cagggaggcc 1380
atccagcatg aatctgggat cctgggcccc ctgctgtatg gggaggtggg ggacaccctg 1440
ctgattatct ttaagaacca ggctagcagg ccctacaaca tttaccccca tggcattact 1500
gatgtgaggc ccctgtacag caggaggctg cccaaggggg tgaagcacct gaaggatttc 1560
cccattctgc ctggggagat ctttaagtac aaatggactg tgactgtgga ggatggccct 1620
actaagtctg atcccaggtg tctgaccaga tactacagca gctttgtgaa tatggagagg 1680
gacctggctt ctggcctgat tggccccctg ctgatctgct acaaggagtc tgtggaccag 1740
aggggcaatc agattatgtc tgacaagagg aatgtgatcc tgttctctgt gtttgatgag 1800
aacagaagct ggtacctgac tgagaacatc cagaggttcc tgcccaaccc tgctggggtg 1860
cagctggagg accctgagtt ccaggctagc aatatcatgc acagcattaa tggctatgtg 1920
tttgacagcc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cctattggta cattctgagc 1980
attggggccc agactgattt cctgtctgtg ttcttttctg gctacacctt caagcacaag 2040
atggtgtatg aggatactct gaccctgttt cccttctctg gggagactgt gttcatgagc 2100
atggagaacc ctggcctgtg gatcctgggc tgtcacaact ctgacttcag gaacaggggc 2160
atgactgccc tgctgaaggt gagctcttgt gataagaaca ctggggacta ctatgaggac 2220
tcttatgagg acatctctgc ctacctgctg agcaagaaca atgctattga gcccaggagc 2280
ttctctcaga atccccctgt gctgaagagg catcagaggg agatcactag gactaccctg 2340
cagtctgacc aggaagagat tgactatgat gacaccatct ctgtggaaat gaagaaggag 2400
gactttgata tctatgatga ggatgaaaac cagagcccca ggagcttcca gaagaagacc 2460
aggcattact tcattgctgc tgtggagagg ctgtgggact atgggatgag ctcttctccc 2520
catgtgctga ggaatagggc tcagtctggc tctgtcccac agttcaagaa ggtggtgttt 2580
caggagttca ctgatggcag cttcactcag cccctgtaca ggggggagct gaatgagcat 2640
ctgggcctgc tggggcccta catcagggct gaggtggagg ataacattat ggtgactttc 2700
aggaaccagg cctctaggcc ctacagcttc tacagcagcc tgatcagcta tgaggaggac 2760
cagaggcagg gggctgagcc caggaagaac tttgtgaagc ccaatgagac taagacctat 2820
ttctggaagg tgcagcatca catggctccc actaaagatg agtttgactg caaggcctgg 2880
gcctacttct ctgatgtgga tctggagaag gatgtgcatt ctgggctgat tggccctctg 2940
ctggtctgcc atactaacac cctgaatcct gcccatggca ggcaggtgac tgtgcaggag 3000
tttgccctgt tctttaccat ctttgatgag accaagtctt ggtacttcac tgagaacatg 3060
gagaggaact gcagggcccc ctgtaacatc cagatggagg accccacctt taaggagaac 3120
tacaggttcc atgccatcaa tggctacatc atggacactc tgcctggcct ggtgatggcc 3180
caggaccaga ggatcaggtg gtacctgctg tctatgggct ctaatgagaa cattcattct 3240
atccacttct ctggccatgt gtttactgtg aggaagaagg aggagtacaa gatggccctg 3300
tacaatctgt accctggggt gtttgaaact gtggagatgc tgccctctaa ggctggcatc 3360
tggagggtgg agtgcctgat tggggaacac ctgcatgctg gcatgagcac cctgttcctg 3420
gtctatagca ataagtgcca gacccccctg gggatggcct ctgggcatat cagagacttc 3480
cagatcactg cctctggcca gtatggccag tgggccccca agctggccag gctgcactac 3540
tctggcagca ttaatgcctg gagcaccaag gagcccttct cttggatcaa ggtggacctg 3600
ctggctccca tgatcatcca tgggatcaag acccaggggg ccaggcagaa gttcagcagc 3660
ctgtacatct ctcagttcat catcatgtac tctctggatg gcaagaagtg gcagacctac 3720
aggggcaata gcactgggac cctgatggtg ttctttggga atgtggacag ctctggcatc 3780
aagcacaata tcttcaaccc ccccatcatt gccaggtaca tcagactgca ccccactcat 3840
tacagcatca ggagcactct gaggatggag ctgatgggct gtgacctgaa tagctgctct 3900
atgcccctgg gcatggagag caaggccatt tctgatgccc agattactgc ctcttcttac 3960
ttcactaata tgtttgccac ctggagcccc agcaaggcca ggctgcatct gcaggggagg 4020
agcaatgcct ggaggcccca ggtgaacaac cccaaggagt ggctgcaggt ggacttccag 4080
aagactatga aggtgactgg ggtgaccact cagggggtga agagcctgct gaccagcatg 4140
tatgtgaagg agttcctgat ctcttctagc caggatgggc accagtggac cctgtttttc 4200
cagaatggga aggtgaaggt gtttcagggc aatcaggaca gctttactcc tgtggtgaac 4260
agcctggacc cccccctgct gactaggtac ctgaggattc acccccagag ctgggtgcac 4320
cagattgccc tgaggatgga ggtgctgggc tgtgaggccc aggatctgta ctga 4374
<210> 4
<211> 4374
<212> ДНК
<213> Искуственная последовательность
<220>
<223> Описание искуственной последовательности: Нуклеиновая кислота FVIII
<400> 4
atgcagattg agctgtctac ctgcttcttt ctgtgcctgc tgaggttctg tttctctgcc 60
actaggaggt attatctggg ggctgtggag ctgtcctggg actacatgca gtctgatctg 120
ggggagctgc ctgtggatgc caggttccct cccagggtgc ccaagtcttt ccctttcaat 180
acctctgtgg tgtacaagaa gactctgttt gtggagttta ctgatcacct gtttaacatt 240
gccaagccca ggcccccctg gatggggctg ctgggcccca ccatccaggc tgaggtgtat 300
gacactgtgg tgattactct gaagaatatg gcttctcacc ctgtgagcct gcatgctgtg 360
ggggtgagct actggaaggc ctctgagggg gctgagtatg atgaccagac cagccagagg 420
gagaaggagg atgacaaggt gttccctggg ggcagccaca cttatgtgtg gcaggtgctg 480
aaggagaatg gcccaatggc ctctgacccc ctgtgcctga cctacagcta tctgagccat 540
gtggatctgg tgaaggatct gaactctggc ctgattgggg ccctgctggt gtgcagggag 600
ggctctctgg ccaaggagaa gactcagact ctgcacaagt tcatcctgct gtttgctgtg 660
tttgatgagg gcaagagctg gcactctgag accaagaact ctctgatgca ggatagggat 720
gctgcttctg ccagggcctg gcccaagatg cacactgtga atgggtatgt gaataggagc 780
ctgcctgggc tgattgggtg tcacaggaag tctgtgtact ggcatgtgat tggcatgggc 840
accactcctg aggtgcacag catctttctg gagggccaca cttttctggt gaggaatcac 900
aggcaggcca gcctggagat cagccccatc accttcctga ctgcccagac cctgctgatg 960
gatctgggcc agttcctgct gttttgccat atcagcagcc atcagcatga tgggatggag 1020
gcttatgtga aggtggactc ttgccctgag gagcctcagc tgaggatgaa gaataatgaa 1080
gaggctgagg actatgatga tgatctgact gactctgaga tggatgtggt gaggtttgat 1140
gatgacaaca gccccagctt tatccagatt aggtctgtgg ccaagaagca ccccaagacc 1200
tgggtgcatt acattgctgc tgaggaagag gattgggact atgcccccct ggtgctggcc 1260
cctgatgaca ggagctacaa gtctcagtac ctgaacaatg gccctcagag gattggcagg 1320
aagtacaaga aggtgaggtt catggcttac actgatgaga ccttcaagac cagggaggcc 1380
attcagcatg aatctgggat cctgggcccc ctgctgtatg gggaggtggg ggacaccctg 1440
ctgattattt tcaagaacca ggccagcagg ccctacaaca tttatcctca tggcattact 1500
gatgtgagac ccctgtacag caggaggctg cctaaggggg tgaagcacct gaaggacttc 1560
cccatcctgc ctggggagat cttcaagtac aagtggactg tgactgtgga ggatggcccc 1620
actaagtctg accccaggtg cctgactagg tactactcca gctttgtgaa catggagagg 1680
gacctggcct ctggcctgat tggccccctg ctgatctgct acaaggagtc tgtggatcag 1740
aggggcaacc agatcatgtc tgacaagaga aatgtgatcc tgttctctgt gtttgatgag 1800
aataggtctt ggtacctgac tgagaacatc cagaggtttc tgcctaatcc tgctggggtg 1860
cagctggagg atcctgagtt ccaggcctct aacattatgc acagcatcaa tgggtatgtg 1920
tttgacagcc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cctactggta catcctgagc 1980
attggggccc agactgactt tctgtctgtg ttcttctctg gctacacctt taagcataag 2040
atggtgtatg aggacaccct gactctgttc cccttctctg gggagactgt gttcatgagc 2100
atggagaacc caggcctgtg gatcctgggc tgccacaact ctgatttcag gaataggggc 2160
atgactgccc tgctgaaggt gagcagctgt gataagaaca ctggggacta ttatgaggat 2220
agctatgagg acatctctgc ctacctgctg agcaagaaca atgccattga gcccaggagc 2280
ttcagccaga atcctcctgt gctgaagagg caccagaggg agatcaccag gaccaccctg 2340
cagtctgatc aggaggagat tgactatgat gacactatct ctgtggagat gaagaaggag 2400
gactttgaca tctatgatga ggatgagaat cagagcccca ggagcttcca gaagaagact 2460
agacactact ttattgctgc tgtggagagg ctgtgggact atggcatgag ctcttctccc 2520
catgtgctga gaaacagggc ccagtctggc tctgtgcccc agttcaagaa ggtggtcttc 2580
caggagttca ctgatggctc tttcacccag cctctgtata gaggggagct gaatgagcac 2640
ctgggcctgc tgggccctta catcagggct gaggtggagg acaatatcat ggtgaccttc 2700
aggaaccagg ctagcaggcc ctactctttc tacagcagcc tgatcagcta tgaggaggac 2760
cagaggcagg gggctgagcc taggaagaat tttgtgaagc ccaatgagac caagacctac 2820
ttctggaagg tgcagcacca catggctccc actaaggatg agtttgactg caaggcctgg 2880
gcctactttt ctgatgtgga cctggagaag gatgtgcatt ctggcctgat tggccccctg 2940
ctggtctgcc acaccaatac tctgaaccct gctcatggga gacaggtgac tgtgcaggag 3000
tttgccctgt tcttcaccat ctttgatgag accaagtcct ggtactttac tgagaacatg 3060
gagaggaatt gcagggcccc ttgcaacatc cagatggagg accccacctt caaggaaaat 3120
tataggttcc atgccatcaa tggctacatc atggacaccc tgcctggcct ggtgatggcc 3180
caggaccaga ggatcaggtg gtatctgctg tctatgggct ctaatgagaa catccacagc 3240
atccatttct ctggccatgt gttcactgtg aggaagaagg aggagtataa gatggctctg 3300
tacaacctgt accctggggt ctttgagact gtggagatgc tgcccagcaa ggctggcatt 3360
tggagggtgg agtgcctgat tggggaacac ctgcatgctg ggatgagcac cctgttcctg 3420
gtgtactcta acaagtgcca gaccccactg ggcatggctt ctggccacat cagggatttc 3480
cagattactg cctctggcca gtatggccag tgggctccca agctggctag gctgcactac 3540
tctgggagca tcaatgcctg gtctactaag gagcctttct cttggatcaa agtggacctg 3600
ctggccccta tgatcatcca tgggatcaag actcaggggg ccaggcagaa gttcagcagc 3660
ctgtacatct ctcagttcat cattatgtac agcctggatg gcaagaagtg gcagacctac 3720
aggggcaaca gcactggcac cctgatggtg ttctttggga atgtggacag ctctgggatt 3780
aagcacaaca tctttaaccc ccccatcatt gccaggtata tcaggctgca ccctacccac 3840
tacagcatta ggagcaccct gaggatggag ctgatgggct gtgacctgaa cagctgcagc 3900
atgcccctgg ggatggagag caaggccatt tctgatgctc agatcactgc ttctagctac 3960
ttcactaaca tgtttgccac ctggtctccc agcaaggcta gactgcacct gcaggggagg 4020
agcaatgcct ggaggcccca ggtgaataat cccaaggagt ggctgcaggt ggatttccag 4080
aaaaccatga aggtgactgg ggtgactacc cagggggtga agtctctgct gaccagcatg 4140
tatgtgaagg agttcctgat cagcagcagc caggatgggc atcagtggac cctgttcttt 4200
cagaatggga aggtgaaggt gtttcagggc aatcaggaca gcttcacccc tgtggtgaac 4260
agcctggacc cccccctgct gaccaggtac ctgaggatcc acccccagag ctgggtgcat 4320
cagattgccc tgaggatgga ggtgctgggc tgtgaggccc aggacctgta ctga 4374
<210> 5
<211> 4374
<212> ДНК
<213> Искуственная последовательность
<220>
<223> Описание искуственной последовательности: Нуклеиновая кислота FVIII
<400> 5
atgcagattg agctgtctac ttgcttcttc ctgtgcctgc tgaggttctg cttctctgcc 60
actaggaggt attacctggg ggctgtggag ctgagctggg actatatgca gtctgacctg 120
ggggagctgc ctgtggatgc caggtttcct cccagggtgc ctaagagctt ccccttcaac 180
acctctgtgg tgtacaagaa gactctgttt gtggagttta ctgatcatct gttcaacatt 240
gccaagccca ggcctccttg gatggggctg ctgggcccca ccatccaggc tgaggtgtat 300
gacactgtgg tgattaccct gaagaatatg gccagccatc ctgtgagcct gcatgctgtg 360
ggggtgagct attggaaggc ctctgagggg gctgagtatg atgatcagac tagccagagg 420
gagaaggagg atgacaaggt gttccctggg gggagccata cctatgtgtg gcaggtgctg 480
aaggagaatg gccccatggc ctctgaccct ctgtgcctga cttatagcta cctgagccat 540
gtggatctgg tgaaggacct gaactctggc ctgattgggg ccctgctggt gtgcagggag 600
ggcagcctgg ccaaggagaa gactcagacc ctgcacaagt tcatcctgct gtttgctgtg 660
tttgatgagg ggaagtcctg gcactctgag actaagaaca gcctgatgca ggatagggat 720
gctgcttctg ccagggcctg gcctaagatg cacactgtga atggctatgt gaataggagc 780
ctgcctggcc tgattggctg ccataggaag tctgtgtact ggcatgtgat tgggatgggc 840
accacccctg aggtgcactc tattttcctg gagggccata ctttcctggt gaggaaccat 900
aggcaggcca gcctggagat cagccccatc actttcctga ctgcccagac tctgctgatg 960
gacctgggcc agttcctgct gttctgccac atcagcagcc atcagcatga tggcatggag 1020
gcttatgtga aggtggacag ctgccctgag gagcctcagc tgaggatgaa gaataatgag 1080
gaggctgagg actatgatga tgacctgact gactctgaga tggatgtggt gaggtttgat 1140
gatgacaact ctccctcttt catccagatc aggtctgtgg ccaagaagca ccctaagacc 1200
tgggtgcact acattgctgc tgaggaggag gattgggact atgcccccct ggtgctggcc 1260
ccagatgaca ggagctacaa gtcccagtac ctgaacaatg gcccccagag gattggcagg 1320
aagtacaaga aggtgaggtt catggcttat actgatgaga ctttcaagac cagggaggcc 1380
atccagcatg agtctggcat cctgggccct ctgctgtatg gggaggtggg ggacaccctg 1440
ctgattatct tcaagaacca ggcttctagg ccctacaata tctaccctca tggcatcact 1500
gatgtgaggc ccctgtacag caggaggctg cccaaggggg tgaagcatct gaaggatttc 1560
cccatcctgc ctggggagat ctttaagtat aagtggactg tgactgtgga ggatggcccc 1620
actaagtctg accccaggtg cctgaccagg tattacagca gctttgtgaa catggagagg 1680
gatctggctt ctgggctgat tggccccctg ctgatctgct acaaggagtc tgtggaccag 1740
aggggcaacc agatcatgtc tgacaagagg aatgtgatcc tgttctctgt gtttgatgag 1800
aataggagct ggtacctgac tgagaacatc cagaggtttc tgcccaatcc tgctggggtg 1860
cagctggagg atcctgagtt tcaggcctct aatatcatgc acagcatcaa tggctatgtg 1920
tttgactctc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cctattggta catcctgagc 1980
attggggccc agactgactt tctgtctgtg tttttttctg gctacacctt caagcacaag 2040
atggtgtatg aggatactct gactctgttc cctttttctg gggagactgt gttcatgtct 2100
atggagaacc ctgggctgtg gattctgggc tgccacaatt ctgacttcag gaacagaggc 2160
atgactgctc tgctgaaggt gagcagctgt gacaagaaca ctggggacta ctatgaggac 2220
tcttatgagg acatttctgc ctacctgctg agcaagaaca atgccattga gcccagaagc 2280
ttttctcaga acccccctgt gctgaagagg caccagaggg agatcaccag gaccaccctg 2340
cagtctgacc aggaggagat tgactatgat gatactattt ctgtggagat gaagaaggag 2400
gactttgaca tctatgatga ggatgagaac cagagcccca ggtctttcca gaagaagact 2460
aggcactact ttattgctgc tgtggagagg ctgtgggact atgggatgtc tagctctcct 2520
catgtgctga ggaacagggc ccagtctggc tctgtgcccc agtttaaaaa ggtggtgttc 2580
caggaattca ctgatggcag ctttacccag cctctgtaca ggggggagct gaatgagcac 2640
ctggggctgc tggggcctta cattagggct gaggtggagg acaacatcat ggtgaccttc 2700
aggaatcagg ccagcaggcc ctactctttc tacagcagcc tgatctctta tgaggaggac 2760
cagaggcagg gggctgaacc caggaagaac tttgtgaagc ccaatgagac caagacctac 2820
ttctggaagg tgcagcacca catggctccc accaaggatg agtttgattg caaggcctgg 2880
gcttacttct ctgatgtgga tctggagaag gatgtgcact ctgggctgat tggccccctg 2940
ctggtgtgcc acaccaacac tctgaaccct gcccatggca gacaggtgac tgtgcaggag 3000
tttgccctgt tcttcactat ctttgatgag actaagagct ggtacttcac tgagaacatg 3060
gagaggaatt gcagggcccc ttgcaacatc cagatggagg accccacctt taaggagaac 3120
tacaggtttc atgccattaa tggctacatc atggacaccc tgcctggcct ggtgatggcc 3180
caggaccaga ggatcaggtg gtacctgctg tctatgggga gcaatgagaa catccacagc 3240
attcacttct ctggccatgt gttcactgtg aggaagaagg aggagtacaa gatggccctg 3300
tacaacctgt accctggggt gtttgagact gtggagatgc tgcccagcaa ggctgggatc 3360
tggagggtgg agtgcctgat tggggagcac ctgcatgctg ggatgagcac cctgttcctg 3420
gtgtatagca acaagtgcca gacccccctg ggcatggcct ctggccacat cagagacttt 3480
cagattactg cctctggcca gtatgggcag tgggccccca agctggccag gctgcactat 3540
tctggctcta ttaatgcctg gagcactaag gagcccttca gctggattaa ggtggacctg 3600
ctggctccca tgatcatcca tggcatcaag actcaggggg ccaggcagaa gttctcttct 3660
ctgtacatca gccagttcat tatcatgtac tccctggatg gcaagaagtg gcagacctat 3720
aggggcaaca gcactggcac cctgatggtg ttctttggga atgtggacag ctctggcatc 3780
aagcataata tcttcaatcc ccccatcatt gctaggtaca tcaggctgca ccccacccac 3840
tactctatta ggtctaccct gaggatggag ctgatgggct gtgacctgaa cagctgcagc 3900
atgcctctgg gcatggagag caaagccatc tctgatgccc agatcactgc cagcagctac 3960
tttaccaaca tgtttgctac ttggagcccc agcaaggcca ggctgcacct gcaggggagg 4020
tctaatgcct ggaggcccca ggtgaacaac cccaaggagt ggctgcaggt ggacttccag 4080
aagactatga aggtgactgg ggtgaccacc cagggggtga agagcctgct gacctctatg 4140
tatgtgaagg agttcctgat tagcagcagc caggatggcc accagtggac cctgtttttc 4200
cagaatggga aggtgaaggt gtttcagggg aaccaggaca gcttcactcc tgtggtgaac 4260
tctctggacc cccccctgct gaccaggtat ctgaggatcc accctcagag ctgggtgcac 4320
cagattgccc tgaggatgga ggtgctgggc tgtgaggccc aggacctgta ctga 4374
<210> 6
<211> 4374
<212> ДНК
<213> Искуственная последовательность
<220>
<223> Описание искуственной последовательности: Нуклеиновая кислота FVIII
<400> 6
atgcagattg agctgagcac ctgcttcttc ctgtgcctgc tgaggttttg cttctctgcc 60
accaggaggt actacctggg ggctgtggag ctgagctggg attacatgca gtctgacctg 120
ggggagctgc ctgtggatgc caggttccct cccagggtgc ccaagtcttt ccccttcaac 180
acttctgtgg tgtacaagaa gaccctgttt gtggagttta ctgaccacct gttcaacatt 240
gccaagccca ggcctccctg gatgggcctg ctgggcccca ccattcaggc tgaggtgtat 300
gacactgtgg tcatcaccct gaaaaatatg gctagccacc ctgtgtctct gcatgctgtg 360
ggggtgagct actggaaggc ctctgagggg gctgagtatg atgaccagac tagccagagg 420
gagaaggagg atgacaaggt gttccctggg ggcagccaca cttatgtgtg gcaggtgctg 480
aaagagaatg gccccatggc ttctgatccc ctgtgtctga cctatagcta cctgagccat 540
gtggatctgg tgaaggacct gaactctggc ctgattgggg ccctgctggt gtgcagggag 600
ggcagcctgg ctaaggagaa gacccagacc ctgcataagt tcatcctgct gtttgctgtg 660
tttgatgagg gcaagagctg gcactctgag actaagaaca gcctgatgca ggatagggat 720
gctgcttctg ccagggcctg gcccaagatg cacactgtga atgggtatgt gaacaggagc 780
ctgcctggcc tgattggctg ccataggaag tctgtctatt ggcatgtgat tggcatgggc 840
actactcctg aggtgcacag catctttctg gagggccaca ccttcctggt gaggaaccac 900
aggcaggcca gcctggagat ctctcccatc actttcctga ctgctcagac cctgctgatg 960
gacctgggcc agttcctgct gttctgtcac atctctagcc accagcatga tggcatggag 1020
gcctatgtga aggtggatag ctgccctgag gaaccccagc tgaggatgaa gaacaatgag 1080
gaggctgagg attatgatga tgatctgact gattctgaga tggatgtggt gaggtttgat 1140
gatgacaatt ctcctagctt cattcagatc agatctgtgg ccaaaaagca tcctaagact 1200
tgggtgcatt atattgctgc tgaggaggag gattgggatt atgcccccct ggtgctggct 1260
cctgatgata ggagctacaa gtctcagtac ctgaataatg ggccccagag gattggcagg 1320
aagtacaaga aggtgaggtt catggcctac actgatgaga ccttcaagac cagggaggcc 1380
attcagcatg agtctgggat tctggggccc ctgctgtatg gggaggtggg ggataccctg 1440
ctgatcattt tcaagaacca ggccagcagg ccctacaaca tctaccccca tgggattact 1500
gatgtgaggc ccctgtactc taggaggctg cctaaggggg tgaagcacct gaaggatttt 1560
cctatcctgc ctggggaaat cttcaagtac aagtggactg tgactgtgga ggatggcccc 1620
actaagtctg atcccaggtg tctgaccagg tattatagct cttttgtgaa catggagagg 1680
gatctggcct ctgggctgat tggccctctg ctgatctgct acaaggagtc tgtggaccag 1740
aggggcaacc agatcatgtc tgacaagagg aatgtgatcc tgttctctgt gtttgatgag 1800
aacaggagct ggtatctgac tgagaacatc cagaggtttc tgcccaatcc tgctggggtg 1860
cagctggagg atcctgagtt ccaggctagc aacatcatgc acagcatcaa tgggtatgtg 1920
tttgacagcc tgcagctgtc tgtgtgtctg catgaggtgg cctactggta tatcctgtct 1980
attggggccc agactgactt cctgtctgtg tttttttctg ggtatacttt taagcacaag 2040
atggtgtatg aggacaccct gactctgttc cccttctctg gggagactgt gtttatgagc 2100
atggagaacc ctggcctgtg gatcctgggc tgccacaatt ctgacttcag gaataggggg 2160
atgactgccc tgctgaaggt gagcagctgt gataagaata ctggggacta ctatgaggac 2220
tcttatgagg acatttctgc ctatctgctg tctaagaaca atgccattga acccaggagc 2280
ttctctcaga acccccctgt gctgaagagg caccagaggg aaatcaccag aactactctg 2340
cagtctgatc aggaggaaat tgactatgat gacactattt ctgtggagat gaagaaggag 2400
gactttgaca tctatgatga ggatgagaac cagagcccaa ggagcttcca gaagaagact 2460
aggcactact tcattgctgc tgtggagagg ctgtgggact atggcatgag cagcagcccc 2520
catgtgctga gaaacagggc ccagtctggg tctgtgcccc agttcaagaa ggtggtgttc 2580
caggagttca ctgatgggag cttcacccag cccctgtata ggggggagct gaatgagcac 2640
ctgggcctgc tgggccccta tattagggct gaggtggagg acaacatcat ggtgaccttc 2700
aggaatcagg cctctaggcc ctacagcttc tacagcagcc tgattagcta tgaggaggat 2760
cagaggcagg gggctgaacc caggaagaac tttgtgaagc ccaatgagac caagacctat 2820
ttctggaagg tgcagcatca catggccccc accaaggatg agtttgactg caaggcctgg 2880
gcctacttct ctgatgtgga tctggagaag gatgtgcact ctggcctgat tggccccctg 2940
ctggtgtgcc acaccaacac cctgaaccct gctcatggca ggcaggtgac tgtgcaggag 3000
tttgccctgt tcttcaccat ctttgatgag actaagtctt ggtacttcac tgagaatatg 3060
gagaggaatt gcagggcccc ctgcaatatt cagatggaag accccacctt caaggagaat 3120
tacaggttcc atgccattaa tggctacatc atggataccc tgcctggcct ggtgatggcc 3180
caggatcaga ggatcaggtg gtacctgctg agcatgggca gcaatgagaa catccactct 3240
atccacttct ctggccatgt gtttactgtg aggaagaagg aggagtataa gatggccctg 3300
tacaacctgt accctggggt ctttgagact gtggagatgc tgccttctaa ggctggcatt 3360
tggagggtgg agtgcctgat tggggaacac ctgcatgctg gcatgtctac cctgttcctg 3420
gtgtacagca ataagtgcca gacccccctg ggcatggcct ctgggcatat cagggatttc 3480
cagatcactg cctctggcca gtatggccag tgggccccaa agctggctag gctgcactac 3540
tctgggagca tcaatgcctg gagcactaag gagcccttca gctggatcaa ggtggacctg 3600
ctggccccca tgattatcca tgggattaag actcaggggg ccaggcagaa gttcagcagc 3660
ctgtacatca gccagttcat tatcatgtac agcctggatg gcaagaagtg gcagacctat 3720
aggggcaact ctactgggac cctgatggtg ttctttggga atgtggatag ctctgggatc 3780
aagcacaata tcttcaaccc ccccatcatt gccaggtata tcaggctgca ccccacccac 3840
tacagcatta ggtctaccct gaggatggag ctgatgggct gtgatctgaa cagctgtagc 3900
atgcctctgg gcatggagtc taaggccatt tctgatgccc agattactgc tagcagctac 3960
ttcaccaaca tgtttgccac ctggtctccc agcaaggcca ggctgcatct gcagggcagg 4020
tctaatgctt ggaggcccca ggtgaacaac ccaaaggagt ggctgcaggt ggatttccag 4080
aagactatga aggtgactgg ggtgaccact cagggggtga agtctctgct gacctctatg 4140
tatgtgaagg agttcctgat ctctagcagc caggatggcc atcagtggac cctgttcttc 4200
cagaatggca aggtgaaagt gttccagggc aatcaggata gcttcactcc agtggtgaac 4260
agcctggatc cccctctgct gactaggtac ctgaggatcc acccccagag ctgggtgcac 4320
cagattgccc tgaggatgga ggtgctgggc tgtgaggccc aggacctgta ctga 4374
<210> 7
<211> 4374
<212> ДНК
<213> Искуственная последовательность
<220>
<223> Описание искуственной последовательности: Нуклеиновая кислота FVIII
<400> 7
atgcagattg agctgagcac ctgcttcttc ctgtgtctgc tgaggttctg cttctctgcc 60
accaggaggt attacctggg ggctgtggag ctgagctggg actatatgca gtctgacctg 120
ggggagctgc ctgtggatgc taggttcccc cccagggtgc ccaagagctt cccctttaac 180
acttctgtgg tgtacaagaa gaccctgttt gtggagttca ctgaccacct gttcaacatt 240
gccaagccca ggcccccctg gatggggctg ctggggccca ccatccaggc tgaggtgtat 300
gacactgtgg tgatcaccct gaagaacatg gccagccacc ctgtgagcct gcatgctgtg 360
ggggtgagct actggaaggc ttctgagggg gctgagtatg atgaccagac tagccagagg 420
gagaaggagg atgacaaggt gtttcctggg ggcagccata cctatgtgtg gcaggtgctg 480
aaggagaatg gccccatggc ctctgacccc ctgtgcctga cctacagcta cctgtctcat 540
gtggacctgg tgaaggacct gaactctggc ctgattgggg ctctgctggt gtgtagggag 600
ggcagcctgg ctaaggaaaa gacccagacc ctgcataagt ttatcctgct gtttgctgtg 660
tttgatgagg gcaagagctg gcactctgag accaagaaca gcctgatgca ggatagggat 720
gctgcctctg ccagggcttg gcctaagatg cacactgtga atgggtatgt gaataggagc 780
ctgcctggcc tgattggctg ccacaggaag tctgtgtact ggcatgtgat tgggatgggc 840
accacccctg aggtccatag catcttcctg gagggccaca ctttcctggt gaggaaccac 900
agacaggcct ctctggagat ctctcccatc accttcctga ctgctcagac tctgctgatg 960
gacctgggcc agttcctgct gttttgccat attagcagcc accagcatga tgggatggag 1020
gcctatgtga aggtggatag ctgccctgag gagcctcagc tgaggatgaa gaacaatgag 1080
gaggctgaag actatgatga tgacctgact gattctgaga tggatgtggt gaggtttgat 1140
gatgacaata gccccagctt cattcagatc aggtctgtgg ccaagaaaca ccccaagacc 1200
tgggtgcact acattgctgc tgaggaagag gactgggact atgctcccct ggtgctggcc 1260
cctgatgata ggtcttataa gagccagtac ctgaacaatg ggccccagag gattggcagg 1320
aagtacaaga aggtgaggtt catggcctac actgatgaaa ccttcaaaac cagggaggcc 1380
attcagcatg agtctggcat cctgggccct ctgctgtatg gggaggtggg ggacaccctg 1440
ctgatcatct tcaagaacca ggccagcagg ccctacaaca tctatcctca tggcatcact 1500
gatgtgaggc ccctgtacag caggaggctg cccaaggggg tgaagcacct gaaagacttc 1560
cccatcctgc ctggggagat ctttaagtat aagtggactg tgactgtgga ggatggccct 1620
accaagtctg accccaggtg tctgaccagg tactattcta gctttgtgaa catggagagg 1680
gacctggcct ctggcctgat tgggcccctg ctgatctgct acaaggagtc tgtggaccag 1740
aggggcaacc agatcatgtc tgacaagagg aatgtgatcc tgttttctgt gtttgatgag 1800
aataggagct ggtacctgac tgagaacatc cagaggtttc tgcccaatcc tgctggggtg 1860
cagctggagg atcctgagtt ccaggccagc aatatcatgc atagcatcaa tggctatgtg 1920
tttgacagcc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cctactggta catcctgagc 1980
attggggccc agactgactt tctgtctgtg ttcttttctg gctatacctt caagcacaag 2040
atggtgtatg aggataccct gaccctgttc cccttctctg gggagactgt gttcatgagc 2100
atggagaatc ctgggctgtg gatcctgggg tgccacaact ctgattttag gaacaggggg 2160
atgactgccc tgctgaaggt gtctagctgt gataagaaca ctggggacta ctatgaggac 2220
agctatgagg acatttctgc ttatctgctg tctaagaata atgccattga gcccagaagc 2280
ttcagccaga atccccctgt gctgaagaga catcagaggg agatcaccag aactaccctg 2340
cagtctgatc aggaggagat tgactatgat gacactatct ctgtggagat gaagaaggag 2400
gactttgaca tctatgatga ggatgagaat cagtctccca ggagctttca gaagaagacc 2460
agacattact tcattgctgc tgtggagagg ctgtgggact atggcatgag ctctagccct 2520
catgtgctga ggaacagggc ccagtctggc tctgtgcccc agttcaagaa ggtggtgttc 2580
caggaattca ctgatggcag cttcacccag cccctgtaca ggggggagct gaatgagcac 2640
ctgggcctgc tggggcctta tatcagggct gaggtggagg ataatattat ggtgactttc 2700
aggaaccagg ccagcaggcc ctactctttc tatagcagcc tgatctctta tgaggaggat 2760
cagaggcagg gggctgagcc taggaagaac tttgtgaagc ccaatgagac taagacctac 2820
ttctggaagg tccagcacca catggcccct accaaggatg agtttgactg caaggcctgg 2880
gcctatttct ctgatgtgga tctggagaag gatgtccatt ctgggctgat tggccccctg 2940
ctggtgtgcc acactaacac tctgaatcct gcccatggca ggcaggtgac tgtccaggag 3000
tttgccctgt tcttcactat ctttgatgag accaagagct ggtactttac tgagaacatg 3060
gagaggaact gcagagctcc ttgcaatatt cagatggagg accccacctt caaggagaat 3120
tacaggttcc atgccattaa tgggtacatc atggacaccc tgcctggcct ggtgatggct 3180
caggaccaga ggatcaggtg gtacctgctg agcatgggct ctaatgagaa tatccacagc 3240
atccacttct ctgggcatgt gttcactgtg aggaagaagg aggagtacaa gatggctctg 3300
tataatctgt accctggggt gtttgaaact gtggagatgc tgccctctaa ggctggcatc 3360
tggagggtgg agtgcctgat tggggagcac ctgcatgctg gcatgagcac cctgttcctg 3420
gtgtacagca acaagtgcca gacccccctg ggcatggcct ctggccacat cagggacttc 3480
cagatcactg cctctggcca gtatggccag tgggccccca agctggccag gctgcactat 3540
tctggcagca tcaatgcctg gagcaccaag gagcccttca gctggatcaa ggtggacctg 3600
ctggccccca tgatcattca tggcatcaag acccaggggg ccaggcagaa gttcagctct 3660
ctgtacatct ctcagttcat catcatgtac tctctggatg ggaagaagtg gcagacctac 3720
aggggcaaca gcactggcac cctgatggtg ttctttggga atgtggactc ttctggcatc 3780
aagcacaaca tcttcaatcc ccccatcatt gctaggtata ttaggctgca tcccacccac 3840
tacagcatca ggtctaccct gaggatggag ctgatgggct gtgacctgaa ctcttgcagc 3900
atgcccctgg gcatggagtc taaggccatc tctgatgccc agattactgc cagcagctac 3960
ttcaccaaca tgtttgccac ctggagcccc tctaaggcca ggctgcatct gcaggggagg 4020
agcaatgcct ggaggcctca ggtgaacaac cccaaggagt ggctgcaggt ggatttccag 4080
aagaccatga aggtgactgg ggtgaccacc cagggggtca agagcctgct gaccagcatg 4140
tatgtgaagg agttcctgat cagcagcagc caggatggcc accagtggac tctgttcttt 4200
cagaatggga aggtgaaggt gtttcagggc aatcaggact ctttcacccc tgtggtgaac 4260
agcctggacc cccccctgct gaccagatac ctgaggatcc acccccagtc ttgggtgcat 4320
cagattgccc tgaggatgga ggtgctgggc tgtgaggctc aggatctgta ctga 4374
<210> 8
<211> 4374
<212> ДНК
<213> Искуственная последовательность
<220>
<223> Описание искуственной последовательности: Нуклеиновая кислота FVIII
<400> 8
atgcagattg agctgagcac ttgctttttt ctgtgcctgc tgaggttttg tttttctgcc 60
accaggaggt actacctggg ggctgtggag ctgagctggg actatatgca gtctgatctg 120
ggggagctgc ctgtggatgc caggttcccc cccagggtgc ccaagtcttt tcccttcaac 180
acctctgtgg tgtataagaa gaccctgttt gtggagttca ctgaccacct gttcaacatt 240
gctaagccta ggcccccctg gatgggcctg ctgggcccta ccattcaggc tgaggtgtat 300
gacactgtgg tgatcaccct gaagaacatg gccagccatc ctgtgagcct gcatgctgtg 360
ggggtctctt actggaaggc ctctgagggg gctgagtatg atgaccagac cagccagaga 420
gagaaggagg atgacaaggt cttccctggg ggctctcaca cctatgtgtg gcaggtgctg 480
aaggaaaatg gccccatggc ctctgacccc ctgtgcctga cctacagcta tctgagccat 540
gtggatctgg tgaaggacct gaattctggc ctgattgggg ccctgctggt gtgcagggag 600
ggcagcctgg ccaaggagaa gacccagacc ctgcacaagt ttatcctgct gtttgctgtg 660
tttgatgagg gcaagtcttg gcactctgag actaagaaca gcctgatgca ggacagggat 720
gctgcctctg ccagggcctg gcccaagatg cacactgtga atggctatgt gaacaggagc 780
ctgcctgggc tgattggctg ccacaggaag tctgtgtact ggcatgtgat tggcatgggc 840
accacccctg aggtgcacag catcttcctg gaaggccaca ctttcctggt gaggaaccat 900
aggcaggcca gcctggagat cagccctatc accttcctga ctgcccagac cctgctgatg 960
gatctggggc agttcctgct gttctgccac atctctagcc accagcatga tgggatggag 1020
gcctatgtga aggtggacag ctgcccagag gagcctcagc tgaggatgaa aaacaatgaa 1080
gaggctgagg attatgatga tgatctgact gactctgaga tggatgtggt gagatttgat 1140
gatgacaata gccctagctt tattcagatc aggtctgtgg ctaagaagca ccccaagacc 1200
tgggtgcatt acattgctgc tgaggaggag gactgggatt atgctcctct ggtgctggcc 1260
cctgatgata ggagctacaa gagccagtac ctgaataatg gccctcagag gattggcagg 1320
aagtacaaga aggtgaggtt catggcttac actgatgaga ccttcaagac tagggaggcc 1380
atccagcatg agtctgggat cctggggccc ctgctgtatg gggaggtggg ggacaccctg 1440
ctgatcatct tcaagaacca ggctagcagg ccttacaaca tctatcccca tgggatcact 1500
gatgtgagac ctctgtacag caggaggctg cccaaggggg tcaagcatct gaaagacttc 1560
cccatcctgc ctggggagat ctttaagtat aagtggactg tgactgtgga ggatgggccc 1620
accaagtctg accccaggtg cctgaccagg tattacagca gctttgtgaa catggagagg 1680
gatctggcct ctgggctgat tggccccctg ctgatctgtt acaaggaatc tgtggatcag 1740
aggggcaatc agatcatgtc tgacaagagg aatgtgatcc tgttctctgt gtttgatgag 1800
aataggtctt ggtacctgac tgaaaacatc cagaggttcc tgcccaaccc tgctggggtc 1860
cagctggagg atcctgagtt ccaggctagc aacatcatgc acagcatcaa tgggtatgtg 1920
tttgatagcc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cctactggta catcctgtct 1980
attggggccc agactgactt cctgtctgtg ttcttttctg gctacacctt caagcacaag 2040
atggtgtatg aggacaccct gaccctgttc cccttctctg gggagactgt ctttatgagc 2100
atggagaacc ctgggctgtg gatcctgggc tgccacaact ctgatttcag gaataggggc 2160
atgactgctc tgctgaaggt gagctcttgt gacaagaaca ctggggatta ctatgaggac 2220
agctatgagg acatttctgc ctacctgctg agcaagaaca atgccattga gcctaggagc 2280
tttagccaga atcctcctgt cctgaagagg caccagaggg agatcaccag gaccaccctg 2340
cagtctgacc aggaggagat tgactatgat gataccatct ctgtggagat gaagaaggag 2400
gactttgaca tctatgatga ggatgagaat cagtctccca ggagcttcca gaagaagacc 2460
aggcactatt tcattgctgc tgtggagagg ctgtgggact atggcatgag cagctctcct 2520
catgtgctga ggaatagggc tcagtctggc tctgtgcccc agttcaagaa agtggtgttt 2580
caggagttca ctgatggctc tttcacccag cctctgtata ggggggagct gaatgagcac 2640
ctggggctgc tgggccccta tatcagggct gaggtggagg ataacatcat ggtgaccttc 2700
aggaaccagg cctctaggcc ctacagcttc tatagcagcc tgatcagcta tgaggaggac 2760
cagaggcagg gggctgagcc caggaagaac tttgtgaagc ccaatgagac caagacttac 2820
ttctggaagg tgcagcatca catggccccc accaaggatg agtttgactg taaggcctgg 2880
gcctacttct ctgatgtgga tctggagaag gatgtgcact ctggcctgat tggccccctg 2940
ctggtgtgcc ataccaatac tctgaaccct gctcatggca ggcaggtgac tgtgcaggag 3000
tttgctctgt tcttcactat ctttgatgag accaagtctt ggtatttcac tgagaatatg 3060
gagaggaact gcagggcccc ctgcaacatc cagatggagg accccacctt taaggagaac 3120
tataggtttc atgccatcaa tggctacatc atggacaccc tgcctggcct ggtgatggcc 3180
caggatcaga ggatcaggtg gtacctgctg agcatggggt ctaatgagaa catccacagc 3240
atccacttct ctggccatgt gtttactgtg agaaagaagg aggagtacaa gatggctctg 3300
tacaatctgt accctggggt ctttgagact gtggagatgc tgcctagcaa ggctgggatc 3360
tggagggtgg agtgcctgat tggggaacat ctgcatgctg ggatgtctac tctgttcctg 3420
gtgtacagca acaagtgcca gacccccctg ggcatggctt ctggccatat cagggacttt 3480
cagattactg cctctgggca gtatggccag tgggccccca agctggctag gctgcattat 3540
tctggcagca tcaatgcctg gtctactaag gagcccttca gctggatcaa ggtggatctg 3600
ctggccccca tgatcatcca tggcatcaag acccaggggg ccaggcagaa gtttagctct 3660
ctgtacatta gccagttcat catcatgtac agcctggatg ggaagaagtg gcagacctac 3720
aggggcaatt ctactggcac cctgatggtg ttctttggca atgtggacag ctctggcatc 3780
aagcacaaca tctttaaccc ccctatcatt gctaggtaca tcaggctgca tcccacccat 3840
tacagcatca ggagcaccct gaggatggag ctgatgggct gtgacctgaa ctcttgcagc 3900
atgcccctgg gcatggagag caaggccatt tctgatgccc agattactgc cagcagctac 3960
ttcactaaca tgtttgccac ctggtctccc agcaaggcca ggctgcacct gcagggcagg 4020
agcaatgcct ggaggcccca ggtgaacaac cccaaggagt ggctgcaggt ggatttccag 4080
aagaccatga aggtgactgg ggtgaccacc cagggggtga agagcctgct gactagcatg 4140
tatgtgaagg agttcctgat cagctctagc caggatggcc accagtggac tctgtttttc 4200
cagaatggca aggtgaaggt gttccagggc aaccaggact ctttcactcc tgtggtgaac 4260
agcctggacc cccccctgct gaccaggtat ctgaggattc acccccagtc ttgggtgcat 4320
cagattgccc tgaggatgga ggtgctgggc tgtgaggccc aggatctgta ctga 4374
<210> 9
<211> 4374
<212> ДНК
<213> Искуственная последовательность
<220>
<223> Описание искуственной последовательности: Нуклеиновая кислота FVIII
<400> 9
atgcagattg agctgagcac ctgcttcttc ctgtgtctgc tgagattttg cttttctgcc 60
actaggaggt attacctggg ggctgtggag ctgtcttggg actacatgca gtctgatctg 120
ggggagctgc ctgtggatgc caggttccca cctagggtgc ctaagagctt tcccttcaat 180
acctctgtgg tgtacaagaa gaccctgttt gtggagttca ctgaccacct gttcaacatt 240
gccaagccta ggcccccctg gatgggcctg ctgggcccta ccatccaggc tgaagtgtat 300
gacactgtgg tgatcaccct gaagaacatg gccagccacc ctgtgagcct gcatgctgtg 360
ggggtgtctt actggaaggc ctctgagggg gctgagtatg atgatcagac cagccagagg 420
gagaaggaag atgacaaggt gttccctggg ggcagccaca cctatgtctg gcaggtgctg 480
aaggagaatg gccccatggc ctctgatccc ctgtgcctga cctactctta cctgagccat 540
gtggacctgg tgaaggatct gaattctggc ctgattgggg ccctgctggt gtgcagggag 600
ggcagcctgg ccaaggagaa gacccagacc ctgcataagt tcatcctgct gtttgctgtg 660
tttgatgaag ggaagagctg gcactctgag actaagaaca gcctgatgca ggacagggat 720
gctgcttctg ccagggcctg gcccaagatg cacactgtga atggctatgt gaatagaagc 780
ctgcctggcc tgattgggtg ccacaggaag tctgtgtact ggcatgtgat tgggatgggc 840
actacccctg aggtgcatag catcttcctg gaaggccata ccttcctggt gaggaatcat 900
aggcaggctt ctctggaaat ttctcccatc actttcctga ctgctcagac cctgctgatg 960
gacctgggcc agttcctgct gttctgccac atcagctctc accagcatga tgggatggag 1020
gcctatgtga aggtggacag ctgtcctgag gagccccagc tgaggatgaa gaacaatgag 1080
gaggctgagg actatgatga tgacctgact gactctgaga tggatgtggt caggtttgat 1140
gatgacaata gcccctcttt catccagatc aggtctgtgg ccaagaagca ccccaagact 1200
tgggtgcact acattgctgc tgaggaggag gattgggatt atgcccctct ggtgctggcc 1260
cctgatgaca ggagctataa gtctcagtac ctgaataatg gcccccagag gattgggagg 1320
aagtataaga aggtgaggtt tatggcctac actgatgaga ccttcaagac cagggaggcc 1380
atccagcatg agtctggcat cctgggcccc ctgctgtatg gggaggtggg ggataccctg 1440
ctgatcatct tcaagaacca ggcctctagg ccctacaata tctaccctca tggcatcact 1500
gatgtgagac ccctgtatag caggaggctg cctaaggggg tgaagcacct gaaggacttc 1560
cccatcctgc ctggggagat cttcaagtat aagtggactg tgactgtgga ggatggcccc 1620
accaagtctg accccaggtg cctgaccagg tattacagct cttttgtgaa catggagagg 1680
gatctggcct ctgggctgat tggcccactg ctgatctgct acaaggagtc tgtggatcag 1740
aggggcaatc agatcatgtc tgacaagagg aatgtgatcc tgttttctgt gtttgatgaa 1800
aataggtctt ggtatctgac tgagaacatc cagaggtttc tgcccaatcc tgctggggtg 1860
cagctggagg atcctgagtt tcaggcctct aatatcatgc attctatcaa tggctatgtg 1920
tttgacagcc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cctactggta catcctgagc 1980
attggggctc agactgactt cctgtctgtg ttcttttctg gctatacttt caagcacaag 2040
atggtgtatg aggacactct gaccctgttc cccttctctg gggagactgt gttcatgtct 2100
atggaaaatc ctgggctgtg gattctgggc tgccacaatt ctgacttcag gaataggggg 2160
atgactgccc tgctgaaggt gtctagctgt gataagaaca ctggggatta ctatgaggac 2220
tcttatgaag atatctctgc ctatctgctg agcaagaaca atgccattga gcccaggagc 2280
ttcagccaga acccccctgt gctgaagagg caccagaggg agatcaccag gaccactctg 2340
cagtctgatc aggaggagat tgactatgat gacactatct ctgtggagat gaagaaggag 2400
gattttgaca tttatgatga ggatgagaac cagtctccca ggagcttcca gaagaagacc 2460
aggcattact ttattgctgc tgtggagagg ctgtgggact atgggatgag cagctctcct 2520
catgtgctga ggaacagggc ccagtctggg tctgtgcccc agttcaagaa ggtggtgttc 2580
caggagttca ctgatgggag cttcacccag cccctgtata ggggggagct gaatgagcac 2640
ctgggcctgc tgggccccta catcagggct gaggtggagg ataatatcat ggtgaccttc 2700
aggaaccagg ctagcaggcc ttacagcttt tacagcagcc tgatctctta tgaagaagac 2760
cagaggcagg gggctgagcc caggaagaat tttgtgaagc ctaatgagac caagacttat 2820
ttttggaagg tgcagcatca catggctcct accaaggatg agtttgactg caaggcctgg 2880
gcctactttt ctgatgtgga tctggagaag gatgtgcact ctggcctgat tggccctctg 2940
ctggtgtgcc atactaacac tctgaaccct gcccatggga ggcaggtgac tgtgcaggag 3000
tttgccctgt tcttcactat ttttgatgag accaagtctt ggtatttcac tgagaacatg 3060
gagaggaact gcagggctcc ctgcaacatc cagatggaag accccacctt caaggagaac 3120
tataggttcc atgccatcaa tgggtacatc atggataccc tgcctggcct ggtgatggcc 3180
caggatcaga ggattaggtg gtatctgctg agcatgggct ctaatgagaa catccacagc 3240
atccatttct ctggccatgt gttcactgtg aggaagaagg aggagtacaa gatggctctg 3300
tacaacctgt atcctggggt gtttgagact gtggagatgc tgcccagcaa ggctggcatc 3360
tggagggtgg aatgcctgat tggggagcac ctgcatgctg gcatgagcac tctgttcctg 3420
gtgtatagca acaagtgcca gacccccctg ggcatggcct ctggccatat cagggatttc 3480
cagatcactg cttctggcca gtatggccag tgggccccca agctggccag gctgcactat 3540
tctggcagca tcaatgcctg gagcactaag gagccttttt cttggatcaa ggtggacctg 3600
ctggccccta tgattattca tggcatcaag acccaggggg ccaggcagaa gttctctagc 3660
ctgtacatct ctcagttcat cattatgtat agcctggatg gcaagaagtg gcagacctac 3720
aggggcaata gcactggcac cctgatggtg ttttttggga atgtggactc ttctgggatc 3780
aagcacaaca tctttaaccc ccccatcatt gccaggtata ttaggctgca ccccacccac 3840
tacagcatca ggagcaccct gaggatggag ctgatgggct gtgatctgaa ttcttgctct 3900
atgcccctgg gcatggagag caaggccatc tctgatgccc agatcactgc cagctcttac 3960
ttcaccaaca tgtttgccac ctggtctcct agcaaggcca ggctgcatct gcagggcagg 4020
agcaatgcct ggaggcccca ggtgaacaac cccaaggagt ggctgcaggt ggacttccag 4080
aagaccatga aggtgactgg ggtgaccact cagggggtga agagcctgct gacctctatg 4140
tatgtgaagg agttcctgat cagcagcagc caggatggcc accagtggac tctgttcttc 4200
cagaatggga aggtgaaggt gttccagggc aaccaggata gctttacccc tgtggtgaac 4260
agcctggacc ctcctctgct gaccagatac ctgaggatcc atcctcagag ctgggtgcac 4320
cagattgccc tgaggatgga ggtgctgggc tgtgaggccc aggatctgta ctga 4374
<210> 10
<211> 4374
<212> ДНК
<213> Искуственная последовательность
<220>
<223> Описание искуственной последовательности: Нуклеиновая кислота FVIII
<400> 10
atgcagattg agctgagcac ttgcttcttc ctgtgcctgc tgaggttctg cttttctgct 60
actaggaggt actacctggg ggctgtggag ctgagctggg attacatgca gtctgacctg 120
ggggagctgc cagtggatgc caggttcccc cccagggtgc ccaagtcttt tcctttcaac 180
acctctgtgg tgtacaagaa gaccctgttt gtggagttca ctgaccacct gttcaacatt 240
gccaagccca ggcccccctg gatggggctg ctggggccca ccatccaggc tgaggtgtat 300
gacactgtgg tgattaccct gaagaacatg gctagccacc ctgtgagcct gcatgctgtg 360
ggggtgagct attggaaggc ctctgagggg gctgagtatg atgatcagac cagccagagg 420
gaaaaggagg atgacaaggt gttccctggg ggcagccata cttatgtgtg gcaggtgctg 480
aaggagaatg ggcccatggc ctctgacccc ctgtgcctga cttacagcta tctgagccat 540
gtggacctgg tgaaggatct gaactctggc ctgattgggg ctctgctggt gtgcagggag 600
ggcagcctgg ctaaggagaa gactcagact ctgcataagt tcatcctgct gtttgctgtg 660
tttgatgaag gcaagagctg gcactctgag accaagaact ctctgatgca ggatagggat 720
gctgcctctg ccagggcttg gcccaagatg cacactgtga atggctatgt gaacaggagc 780
ctgcctggcc tgattgggtg ccacaggaag tctgtgtact ggcatgtgat tggcatgggc 840
accacccctg aggtgcacag cattttcctg gagggccaca ccttcctggt gaggaatcac 900
aggcaggcca gcctggagat cagccccatc accttcctga ctgcccagac cctgctgatg 960
gacctggggc agtttctgct gttctgccac atcagcagcc atcagcatga tggcatggag 1020
gcctatgtga aggtggactc ttgccctgag gagccccagc tgaggatgaa gaacaatgag 1080
gaggctgagg attatgatga tgacctgact gactctgaga tggatgtggt gaggtttgat 1140
gatgacaata gccccagctt catccagatt aggtctgtgg ccaagaagca ccctaagacc 1200
tgggtgcact acattgctgc tgaggaggag gattgggatt atgcccccct ggtgctggct 1260
cctgatgaca ggtcttataa gagccagtac ctgaacaatg ggccccagag gattggcagg 1320
aagtacaaga aggtgaggtt catggcttac actgatgaga ccttcaagac tagggaggcc 1380
atccagcatg agtctggcat cctgggcccc ctgctgtatg gggaggtggg ggataccctg 1440
ctgatcatct tcaagaacca ggccagcagg ccctacaaca tttaccctca tggcatcact 1500
gatgtgaggc ccctgtacag caggagactg cccaaggggg tgaagcacct gaaggatttt 1560
cccattctgc ctggggagat cttcaagtac aagtggactg tgactgtgga ggatggcccc 1620
accaagtctg atcccaggtg cctgactagg tactactctt cttttgtgaa tatggagagg 1680
gatctggcct ctggcctgat tggccccctg ctgatctgct acaaggagtc tgtggaccag 1740
aggggcaacc agatcatgtc tgacaagagg aatgtgatcc tgttctctgt gtttgatgag 1800
aataggagct ggtacctgac tgagaatatc cagaggttcc tgcctaatcc tgctggggtc 1860
cagctggagg atcctgagtt ccaggctagc aacattatgc acagcatcaa tggctatgtg 1920
tttgattctc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cttactggta catcctgtct 1980
attggggccc agactgattt cctgtctgtg ttcttctctg gctacacttt caagcataag 2040
atggtgtatg aggataccct gaccctgttc cccttctctg gggagactgt gttcatgtct 2100
atggagaacc ctggcctgtg gatcctgggc tgtcataact ctgacttcag aaacaggggc 2160
atgactgccc tgctgaaggt gagcagctgt gacaagaaca ctggggacta ctatgaggac 2220
agctatgagg atatctctgc ttatctgctg agcaagaata atgccattga gcccaggagc 2280
ttcagccaga acccccctgt gctgaagagg caccagaggg agatcactag gactaccctg 2340
cagtctgatc aggaggagat tgactatgat gacaccatct ctgtggagat gaagaaggag 2400
gactttgaca tctatgatga ggatgagaac cagtccccca ggtctttcca gaagaagacc 2460
aggcactact tcattgctgc tgtggagagg ctgtgggact atggcatgag ctctagcccc 2520
catgtgctga ggaacagggc tcagtctggc tctgtgcccc agttcaagaa ggtggtcttc 2580
caggagttca ctgatggctc ttttacccag cctctgtaca gaggggagct gaatgagcac 2640
ctgggcctgc tgggccccta catcagggct gaggtggagg ataatatcat ggtgaccttc 2700
agaaaccagg cctctaggcc ctacagcttc tacagcagcc tgatctctta tgaggaggat 2760
cagaggcagg gggctgagcc caggaagaac tttgtgaagc ccaatgagac caagacctac 2820
ttctggaagg tgcagcacca tatggcccct actaaggatg agtttgactg caaggcctgg 2880
gcttattttt ctgatgtgga cctggagaag gatgtgcact ctgggctgat tggccccctg 2940
ctggtgtgcc acaccaacac cctgaaccct gcccatggca ggcaggtgac tgtgcaggag 3000
tttgccctgt tcttcactat ctttgatgag accaagagct ggtacttcac tgagaacatg 3060
gagagaaatt gtagggctcc ctgcaatatc cagatggagg accccacctt caaagaaaat 3120
tacagattcc atgccatcaa tgggtacatc atggataccc tgcctgggct ggtgatggct 3180
caggaccaga ggatcaggtg gtacctgctg agcatggggt ctaatgagaa catccactct 3240
atccatttct ctggccatgt gttcactgtg agaaagaagg aggagtataa gatggctctg 3300
tacaacctgt acccaggggt gtttgagact gtggaaatgc tgcccagcaa agctgggatc 3360
tggagggtgg agtgcctgat tggggagcac ctgcatgctg gcatgtctac cctgttcctg 3420
gtgtacagca acaagtgcca gactcccctg ggcatggcct ctgggcacat cagggatttt 3480
cagatcactg cctctggcca gtatggccag tgggccccca agctggccag gctgcactac 3540
tctggcagca ttaatgcttg gagcactaag gagcccttca gctggatcaa ggtggatctg 3600
ctggccccca tgatcatcca tggcatcaag acccaggggg ccaggcagaa gttctctagc 3660
ctgtacattt ctcagttcat catcatgtac agcctggatg ggaagaagtg gcagacctac 3720
agggggaaca gcactgggac cctgatggtg ttctttggca atgtggatag ctctggcatc 3780
aagcacaata tcttcaatcc ccccattatt gccaggtaca ttaggctgca tcctactcac 3840
tactctatta ggagcaccct gaggatggag ctgatggggt gtgacctgaa cagctgttct 3900
atgcccctgg gcatggagtc taaggctatc tctgatgccc agatcactgc cagcagctac 3960
ttcactaata tgtttgccac ctggagccct agcaaggcca gactgcacct gcagggcagg 4020
agcaatgcct ggaggcccca ggtgaacaac cccaaggagt ggctgcaggt ggacttccag 4080
aagaccatga aggtgactgg ggtgaccact cagggggtga agagcctgct gaccagcatg 4140
tatgtgaagg agttcctgat cagcagcagc caggatggcc accagtggac cctgttcttc 4200
cagaatggga aggtgaaggt gttccagggc aaccaggact ctttcacccc tgtggtgaac 4260
agcctggatc ctcccctgct gaccaggtac ctgaggatcc acccccagag ctgggtgcac 4320
cagattgctc tgaggatgga agtgctgggc tgtgaggccc aggatctgta ctga 4374
<210> 11
<211> 4374
<212> ДНК
<213> Искуственная последовательность
<220>
<223> Описание искуственной последовательности: Нуклеиновая кислота FVIII
<400> 11
atgcagattg agctgagcac ctgcttcttc ctgtgcctgc tgaggttttg cttctctgct 60
accaggaggt actacctggg ggctgtggag ctgagctggg actatatgca gtctgacctg 120
ggggagctgc ctgtggatgc taggttccct cccagggtgc ccaagagctt cccctttaat 180
acctctgtgg tgtacaagaa aaccctgttt gtggagttca ctgaccatct gttcaacatt 240
gccaagccca ggcccccttg gatgggcctg ctgggcccca ccattcaggc tgaggtgtat 300
gacactgtgg tcattaccct gaagaacatg gcttctcacc ctgtgagcct gcatgctgtg 360
ggggtgagct actggaaggc ctctgagggg gctgagtatg atgaccagac cagccagagg 420
gagaaggagg atgataaggt gttccctggg ggcagccaca cctatgtgtg gcaggtgctg 480
aaggagaatg gccccatggc ctctgatccc ctgtgcctga cctactctta tctgtctcat 540
gtggacctgg tgaaggacct gaactctggc ctgattgggg ctctgctggt gtgcagggag 600
ggctctctgg ccaaggagaa gacccagacc ctgcacaagt ttattctgct gtttgctgtc 660
tttgatgagg gcaagagctg gcattctgag accaagaaca gcctgatgca ggacagggat 720
gctgcctctg ccagggcctg gcccaaaatg cacactgtga atggctatgt gaacaggagc 780
ctgcctggcc tgattggctg ccacaggaag tctgtgtact ggcatgtgat tggcatgggc 840
accacccctg aggtgcacag catcttcctg gagggccaca cctttctggt gaggaatcac 900
aggcaggcca gcctggagat tagccccatc accttcctga ctgcccagac cctgctgatg 960
gacctgggcc agttcctgct gttctgccac atcagcagcc accagcatga tggcatggag 1020
gcctatgtga aggtggatag ctgccctgag gagccccagc tgaggatgaa aaacaatgag 1080
gaggctgagg attatgatga tgacctgact gactctgaga tggatgtggt gaggtttgat 1140
gatgacaata gccccagctt tattcagatt aggtctgtgg ctaagaagca ccccaagact 1200
tgggtgcact acattgctgc tgaggaggag gattgggact atgcccctct ggtcctggcc 1260
cctgatgata ggtcttacaa gagccagtat ctgaacaatg gcccccagag gattggcagg 1320
aagtacaaga aggtgaggtt catggcctac actgatgaga cctttaagac cagggaggcc 1380
attcagcatg agtctgggat cctgggcccc ctgctgtatg gggaggtggg ggacactctg 1440
ctgatcatct tcaagaacca ggccagcagg ccttataaca tctaccctca tgggatcact 1500
gatgtgaggc ccctgtactc tagaaggctg cccaaggggg tcaagcacct gaaggatttt 1560
cccatcctgc ctggggagat tttcaagtac aagtggactg tgactgtgga ggatggcccc 1620
accaagtctg accctaggtg cctgaccagg tactacagct cttttgtgaa catggagagg 1680
gacctggcct ctggcctgat tggccctctg ctgatttgct acaaggagtc tgtggaccag 1740
aggggcaacc agatcatgtc tgacaagagg aatgtgatcc tgttttctgt gtttgatgag 1800
aacaggtctt ggtacctgac tgagaacatc cagaggttcc tgcctaaccc agctggggtg 1860
cagctggagg atcctgagtt ccaggccagc aatattatgc atagcattaa tggctatgtg 1920
tttgatagcc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cctactggta catcctgagc 1980
attggggccc agactgactt tctgtctgtg ttcttctctg gctacacctt caagcataag 2040
atggtgtatg aggacaccct gactctgttc cctttttctg gggagactgt gtttatgagc 2100
atggagaatc ctggcctgtg gatcctgggc tgccataatt ctgacttcag gaacaggggc 2160
atgactgccc tgctgaaagt gagcagctgt gacaagaata ctggggacta ctatgaagac 2220
agctatgagg acatctctgc ctacctgctg agcaagaaca atgccattga gcccaggagc 2280
ttcagccaga accccccagt gctgaagagg caccagagag agatcaccag gactaccctg 2340
cagtctgacc aggaggagat tgactatgat gacaccattt ctgtggagat gaagaaggag 2400
gactttgaca tttatgatga ggatgagaat cagagcccca ggagcttcca gaagaagact 2460
aggcactatt ttattgctgc tgtggagagg ctgtgggact atggcatgag cagctctccc 2520
catgtgctga ggaatagggc ccagtctggc tctgtgcctc agttcaagaa ggtggtgttc 2580
caggagttca ctgatggcag ctttacccag cccctgtata ggggggagct gaatgagcac 2640
ctgggcctgc tgggccccta tatcagggct gaggtggagg acaatattat ggtgaccttt 2700
aggaaccagg ccagcaggcc ctactctttc tatagcagcc tgatcagcta tgaggaggac 2760
cagaggcagg gggctgagcc caggaagaat tttgtgaagc ctaatgagac caagacctac 2820
ttctggaagg tgcagcatca catggccccc accaaggatg agtttgactg caaggcttgg 2880
gcctatttct ctgatgtgga cctggagaag gatgtgcact ctggcctgat tggccccctg 2940
ctggtgtgcc acactaacac tctgaatcct gcccatggca ggcaggtgac tgtgcaggag 3000
tttgccctgt tcttcaccat ctttgatgag accaagagct ggtacttcac tgagaacatg 3060
gagaggaact gcagggcccc ctgcaacatc cagatggagg atcccacctt caaggagaac 3120
tacaggtttc atgccatcaa tggctacatc atggacactc tgcctggcct ggtgatggcc 3180
caggatcaga ggatcaggtg gtacctgctg agcatgggct ctaatgagaa tatccatagc 3240
atccacttct ctggccatgt gttcactgtc aggaagaagg aggagtacaa gatggctctg 3300
tataatctgt accctggggt gtttgagact gtggagatgc tgcccagcaa ggctggcatc 3360
tggagggtgg agtgcctgat tggggagcac ctgcatgctg ggatgagcac cctgtttctg 3420
gtgtactcta acaagtgcca gacccccctg ggcatggcct ctgggcacat cagggatttc 3480
cagatcactg cttctggcca gtatggccag tgggccccca agctggccag gctgcactac 3540
tctggcagca tcaatgcctg gtctaccaag gagccctttt cttggattaa ggtggacctg 3600
ctggccccca tgatcatcca tggcatcaag acccaggggg ccaggcagaa gttcagcagc 3660
ctgtacatca gccagttcat catcatgtac agcctggatg gcaaaaagtg gcagacctac 3720
aggggcaata gcactgggac tctgatggtg ttctttggca atgtggacag ctctgggatc 3780
aagcacaata tcttcaaccc tcccatcatt gctaggtaca tcaggctgca ccccacccac 3840
tatagcatca ggtctaccct gaggatggag ctgatgggct gtgacctgaa ctcttgcagc 3900
atgcccctgg gcatggagtc caaagctatc tctgatgccc agattactgc cagcagctac 3960
ttcaccaaca tgtttgccac ctggtctccc tctaaggcca ggctgcacct gcagggcagg 4020
agcaatgcct ggaggcccca ggtgaacaat cccaaggagt ggctgcaggt ggatttccag 4080
aaaactatga aggtgactgg ggtgaccacc cagggggtga agtctctgct gaccagcatg 4140
tatgtgaagg agttcctgat ctcttctagc caggatggcc accagtggac tctgttcttc 4200
cagaatggca aggtgaaggt gttccagggc aaccaggaca gcttcacccc tgtggtgaac 4260
tctctggatc cccccctgct gaccaggtac ctgaggattc atccccagag ctgggtgcac 4320
cagattgctc tgagaatgga ggtgctgggg tgtgaggctc aggacctgta ttga 4374
<210> 12
<211> 4374
<212> ДНК
<213> Искуственная последовательность
<220>
<223> Описание искуственной последовательности: Нуклеиновая кислота FVIII
<400> 12
atgcagattg agctgtctac ttgttttttt ctgtgcctgc tgaggttctg cttctctgcc 60
accaggaggt attacctggg ggctgtggag ctgagctggg attacatgca gtctgatctg 120
ggggagctgc ctgtggatgc caggttcccc cccagggtgc ccaagagctt ccccttcaac 180
acctctgtgg tgtataagaa gaccctgttt gtggagttca ctgatcatct gtttaacatt 240
gccaagccca ggcccccctg gatgggcctg ctgggcccaa ctatccaggc tgaggtgtat 300
gacactgtgg tcatcaccct gaagaatatg gccagccatc ctgtgagcct gcatgctgtg 360
ggggtgagct actggaaggc ctctgagggg gctgagtatg atgaccagac cagccagagg 420
gagaaggagg atgacaaggt gttccctggg ggcagccaca cctatgtgtg gcaggtgctg 480
aaggagaatg gccccatggc ctctgacccc ctgtgcctga cttatagcta cctgtctcat 540
gtggacctgg tgaaggacct gaactctggc ctgattgggg ccctgctggt ctgtagggaa 600
ggcagcctgg ccaaggagaa gacccagacc ctgcacaagt ttattctgct gtttgctgtg 660
tttgatgaag gcaagagctg gcactctgag accaagaatt ctctgatgca ggatagggat 720
gctgcctctg ccagggcctg gcccaagatg catactgtga atggctatgt gaacagaagc 780
ctgcctggcc tgattggctg ccataggaag tctgtgtatt ggcatgtgat tgggatgggc 840
actacccctg aagtgcacag cattttcctg gagggccaca ctttcctggt gaggaaccac 900
aggcaggcct ctctggagat cagccccatt actttcctga ctgcccagac cctgctgatg 960
gatctgggcc agttcctgct gttctgccac atctctagcc accagcatga tggcatggag 1020
gcctatgtga aggtggacag ctgccctgag gagccccagc tgaggatgaa gaataatgag 1080
gaggctgagg attatgatga tgacctgact gactctgaga tggatgtggt gaggtttgat 1140
gatgataata gccccagctt catccagatc aggtctgtgg ccaagaagca tcccaagacc 1200
tgggtgcact atattgctgc tgaagaggag gactgggact atgcccctct ggtgctggct 1260
cctgatgaca ggagctataa gagccagtat ctgaacaatg ggccccagag gattgggagg 1320
aagtacaaga aggtgaggtt catggcctac actgatgaga cctttaagac cagggaggcc 1380
atccagcatg agtctggcat tctggggccc ctgctgtatg gggaggtggg ggacactctg 1440
ctgatcattt tcaagaacca ggccagcagg ccctacaata tttaccccca tggcatcact 1500
gatgtgaggc ccctgtacag caggaggctg cccaaggggg tgaagcacct gaaggacttc 1560
cccatcctgc ctggggagat cttcaagtac aagtggactg tgactgtgga ggatggccct 1620
accaagtctg accctaggtg tctgactagg tactacagca gctttgtgaa catggagaga 1680
gacctggctt ctggcctgat tggccccctg ctgatctgct acaaggagtc tgtggatcag 1740
aggggcaacc agattatgtc tgataagagg aatgtcatcc tgttctctgt gtttgatgag 1800
aacaggagct ggtatctgac tgagaacatt cagaggttcc tgcccaaccc tgctggggtg 1860
cagctggagg accctgagtt ccaggccagc aacatcatgc attctattaa tggctatgtg 1920
tttgacagcc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cctactggta catcctgagc 1980
attggggccc agactgactt tctgtctgtg tttttctctg ggtacacctt caagcacaag 2040
atggtctatg aggacaccct gaccctgttc cccttttctg gggaaactgt gtttatgagc 2100
atggagaacc ctgggctgtg gatcctgggc tgccacaact ctgactttag gaataggggc 2160
atgactgccc tgctgaaggt gagcagctgt gacaagaata ctggggatta ctatgaggac 2220
agctatgagg atatctctgc ctacctgctg agcaagaaca atgccattga gcctaggagc 2280
ttcagccaga acccccctgt gctgaagagg caccagaggg agatcaccag gaccaccctg 2340
cagtctgatc aggaggagat tgactatgat gacaccatct ctgtggagat gaagaaggag 2400
gactttgata tttatgatga ggatgagaac cagagcccca ggagcttcca gaagaagacc 2460
aggcactatt tcattgctgc tgtggagagg ctgtgggact atggcatgag ctctagcccc 2520
catgtgctga ggaacagggc ccagtctggc tctgtgcccc agttcaagaa ggtggtgttc 2580
caggaattta ctgatggcag ctttacccag cccctgtaca gaggggagct gaatgagcac 2640
ctgggcctgc tgggccccta catcagggct gaggtggagg ataatatcat ggtgaccttt 2700
aggaaccagg cctctaggcc ctattctttt tacagcagcc tgatcagcta tgaggaggac 2760
cagaggcagg gggctgagcc taggaagaac tttgtgaagc ccaatgagac caagacctac 2820
ttttggaaag tgcagcacca catggccccc actaaggatg agtttgattg caaggcctgg 2880
gcctatttct ctgatgtgga cctggagaag gatgtgcact ctggcctgat tggccccctg 2940
ctggtgtgcc acaccaacac tctgaaccct gcccatggca ggcaggtgac tgtgcaggag 3000
tttgccctgt tctttaccat ctttgatgag actaagagct ggtatttcac tgagaacatg 3060
gagaggaact gcagagcccc ttgcaacatc cagatggagg accctacctt caaggagaac 3120
tataggttcc atgccatcaa tgggtacatc atggataccc tgcctggcct ggtgatggct 3180
caggaccaga ggatcaggtg gtacctgctg agcatgggga gcaatgagaa cattcatagc 3240
atccacttct ctgggcatgt gttcactgtg aggaagaagg aggagtataa gatggccctg 3300
tacaacctgt accctggggt gtttgagact gtggagatgc tgcccagcaa ggctggcatc 3360
tggagggtgg agtgcctgat tggggagcac ctgcatgctg gcatgagcac tctgttcctg 3420
gtgtacagca acaagtgcca gacccccctg ggcatggcct ctggccacat cagggacttc 3480
cagattactg cctctgggca gtatgggcag tgggccccca agctggccag gctgcactac 3540
tctgggtcta tcaatgcttg gagcaccaag gagcctttca gctggatcaa ggtggatctg 3600
ctggccccca tgatcattca tgggatcaag acccaggggg ccaggcagaa gttcagcagc 3660
ctgtatattt ctcagttcat catcatgtat tctctggatg gcaaaaagtg gcagacctat 3720
agagggaaca gcactgggac cctgatggtg ttttttggca atgtggatag ctctggcatc 3780
aagcacaata tcttcaaccc ccccattatt gccaggtaca tcaggctgca ccccacccac 3840
tactctatca ggagcaccct gaggatggag ctgatgggct gtgatctgaa cagctgctct 3900
atgcctctgg ggatggaaag caaggccatc tctgatgccc agatcactgc cagcagctat 3960
ttcaccaata tgtttgccac ttggagccct agcaaggcta ggctgcatct gcagggcagg 4020
tctaatgcct ggaggcccca ggtgaacaac cccaaggagt ggctgcaggt ggacttccag 4080
aagactatga aagtgactgg ggtgaccacc cagggggtga aaagcctgct gaccagcatg 4140
tatgtgaagg agttcctgat tagcagcagc caggatggcc accagtggac cctgttcttc 4200
cagaatggga aggtgaaggt gtttcagggc aatcaggata gcttcacccc agtggtgaac 4260
agcctggacc cccccctgct gaccaggtac ctgaggatcc acccccagag ctgggtgcac 4320
cagattgccc tgaggatgga ggtgctgggc tgtgaggccc aggatctgta ctga 4374
<210> 13
<211> 4374
<212> ДНК
<213> Искуственная последовательность
<220>
<223> Описание искуственной последовательности: Нуклеиновая кислота FVIII
<400> 13
atgcagattg agctgagcac ctgctttttc ctgtgcctgc tgaggttctg cttctctgct 60
accaggaggt actacctggg ggctgtggag ctgtcttggg attacatgca gtctgacctg 120
ggggagctgc ctgtggatgc caggtttccc cccagggtgc ccaagtcttt cccctttaac 180
acctctgtgg tgtataagaa gactctgttt gtggagttca ctgatcacct gttcaatatt 240
gccaagccca ggcccccttg gatgggcctg ctgggcccca ctatccaggc tgaggtgtat 300
gacactgtgg tcatcaccct gaagaacatg gccagccacc ctgtgagcct gcatgctgtg 360
ggggtgagct actggaaggc ctctgagggg gctgagtatg atgaccagac cagccagagg 420
gagaaggagg atgacaaggt gttcccaggg gggtctcaca cttatgtgtg gcaggtgctg 480
aaggagaatg ggcccatggc ctctgaccct ctgtgcctga cttatagcta cctgtctcat 540
gtggatctgg tgaaggacct gaactctggc ctgattgggg ccctgctggt gtgcagggag 600
gggagcctgg ccaaggagaa gacccagacc ctgcacaagt tcatcctgct gtttgctgtg 660
tttgatgagg ggaagagctg gcactctgag accaagaata gcctgatgca ggacagggat 720
gctgcttctg ctagggcctg gcctaagatg cacactgtga atggctatgt gaacaggagc 780
ctgcctggcc tgattgggtg tcacaggaag tctgtgtact ggcatgtgat tggcatgggg 840
actactccag aagtgcacag catcttcctg gaggggcaca ccttcctggt gaggaatcac 900
aggcaggcca gcctggagat ttctcccatc actttcctga ctgcccagac cctgctgatg 960
gatctggggc agttcctgct gttctgccac atcagcagcc atcagcatga tgggatggag 1020
gcctatgtga aggtggacag ctgccctgag gagcctcagc tgaggatgaa gaacaatgag 1080
gaggctgagg actatgatga tgatctgact gactctgaga tggatgtggt gaggtttgat 1140
gatgacaact ctcccagctt catccagatc aggtctgtgg ccaagaagca ccccaagacc 1200
tgggtgcact acattgctgc tgaggaggag gattgggatt atgctcccct ggtgctggct 1260
cctgatgata ggagctacaa gagccagtat ctgaataatg ggccccagag gattggcagg 1320
aagtataaga aggtgaggtt catggcctac actgatgaga cctttaagac cagggaggct 1380
attcagcatg agtctggcat cctgggcccc ctgctgtatg gggaggtggg ggacaccctg 1440
ctgatcattt tcaagaacca ggccagcagg ccctataaca tctatcccca tgggatcact 1500
gatgtgaggc ccctgtactc taggaggctg cccaaggggg tcaagcacct gaaggacttc 1560
cccatcctgc ctggggagat cttcaagtac aagtggactg tgactgtgga ggatggcccc 1620
actaagtctg accccaggtg cctgactagg tactacagca gctttgtgaa catggagaga 1680
gatctggcct ctggcctgat tggccccctg ctgatctgct acaaagagtc tgtggatcag 1740
aggggcaacc agatcatgtc tgacaagagg aatgtgatcc tgttctctgt gtttgatgag 1800
aacagaagct ggtacctgac tgagaacatt cagaggtttc tgcccaaccc tgctggggtc 1860
cagctggagg accctgagtt tcaggccagc aacatcatgc acagcatcaa tgggtatgtg 1920
tttgacagcc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cctactggta tatcctgagc 1980
attggggccc agactgattt cctgtctgtg ttcttctctg gctacacttt caagcacaag 2040
atggtgtatg aggataccct gaccctgttc cctttctctg gggaaactgt gttcatgagc 2100
atggagaacc ctgggctgtg gatcctgggg tgccacaatt ctgatttcag gaacagaggc 2160
atgactgctc tgctgaaggt gtctagctgt gacaagaaca ctggggacta ctatgaggac 2220
agctatgagg acatctctgc ctacctgctg agcaagaaca atgctattga acccaggtct 2280
ttcagccaga acccccctgt gctgaagagg caccagaggg agatcactag gaccaccctg 2340
cagtctgatc aggaggagat tgactatgat gacaccatct ctgtggagat gaagaaggag 2400
gactttgaca tctatgatga ggatgagaat cagtctccca ggagcttcca gaagaagact 2460
aggcattact tcattgctgc tgtggagagg ctgtgggact atggcatgag ctctagccct 2520
catgtgctga ggaacagggc ccagtctggc tctgtgcccc agttcaagaa ggtggtgttt 2580
caggagttca ctgatggcag cttcacccag cccctgtaca ggggggagct gaatgagcat 2640
ctgggcctgc tgggccccta catcagggct gaggtggagg acaacatcat ggtgaccttc 2700
agaaatcagg ctagcaggcc ctacagcttc tacagcagcc tgatctctta tgaggaggac 2760
cagaggcagg gggctgagcc caggaagaac tttgtgaagc ccaatgagac caagacctat 2820
ttctggaagg tgcagcacca catggccccc accaaggatg agtttgattg caaggcctgg 2880
gcctacttct ctgatgtgga cctggagaag gatgtgcatt ctgggctgat tggccctctg 2940
ctggtgtgcc acaccaacac cctgaatcct gcccatggca ggcaggtgac tgtgcaggag 3000
tttgccctgt tctttactat ctttgatgag accaagtctt ggtattttac tgagaacatg 3060
gagaggaact gcagggcccc ctgcaacatc cagatggagg accccacctt caaggagaac 3120
tacagattcc atgccatcaa tggctacatt atggacactc tgcctggcct ggtgatggcc 3180
caggaccaga ggatcaggtg gtacctgctg tctatgggca gcaatgagaa cattcactct 3240
atccacttct ctgggcatgt gttcactgtg aggaagaagg aggagtacaa gatggccctg 3300
tacaacctgt accctggggt gtttgagact gtggagatgc tgcctagcaa ggctgggatc 3360
tggagggtgg agtgcctgat tggggagcac ctgcatgctg gcatgtctac cctgttcctg 3420
gtgtacagca acaagtgcca gacccccctg ggcatggcct ctggccacat cagagatttt 3480
cagatcactg cctctggcca gtatggccag tgggctccta agctggccag gctgcactac 3540
tctggcagca tcaatgcctg gagcaccaag gagcccttta gctggatcaa ggtggacctg 3600
ctggccccca tgatcatcca tggcatcaag actcaggggg ccaggcagaa gttctctagc 3660
ctgtacatta gccagttcat catcatgtat agcctggatg gcaagaagtg gcagacctac 3720
aggggcaaca gcactgggac cctgatggtg ttctttggga atgtggacag ctctgggatc 3780
aagcacaata tcttcaaccc ccccattatt gccaggtata ttaggctgca ccccactcac 3840
tacagcatta ggagcaccct gaggatggag ctgatgggct gtgatctgaa cagctgcagc 3900
atgcccctgg gcatggagtc taaggccatc tctgatgccc agatcactgc cagctcttac 3960
ttcaccaaca tgtttgccac ttggagcccc agcaaggcca ggctgcacct gcagggcagg 4020
agcaatgcct ggaggcccca ggtgaacaac cccaaggagt ggctgcaggt ggatttccag 4080
aagactatga aggtgactgg ggtgaccact cagggggtga agagcctgct gactagcatg 4140
tatgtgaagg agttcctgat cagctctagc caggatggcc accagtggac cctgttcttt 4200
cagaatggca aggtgaaggt gttccagggc aaccaggact ctttcacccc tgtggtgaat 4260
tctctggacc ctcccctgct gactaggtat ctgaggattc atccccagag ctgggtgcat 4320
cagattgccc tgaggatgga ggtgctgggc tgtgaggccc aggacctgta ttga 4374
<210> 14
<211> 4374
<212> ДНК
<213> Искуственная последовательность
<220>
<223> Описание искуственной последовательности: Нуклеиновая кислота FVIII
<400> 14
atgcagattg agctgagcac ctgcttcttc ctgtgcctgc tgaggttttg cttttctgcc 60
actaggaggt actacctggg ggctgtggag ctgtcttggg attacatgca gtctgacctg 120
ggggagctgc cagtggatgc caggttcccc ccaagggtgc ccaagtcttt tcccttcaat 180
acctctgtgg tgtacaagaa gaccctgttt gtggagttta ctgatcatct gtttaacatt 240
gccaagccca ggcccccctg gatggggctg ctgggcccca ccatccaggc tgaggtgtat 300
gatactgtgg tgattaccct gaagaatatg gccagccatc ctgtgtctct gcatgctgtg 360
ggggtgtctt attggaaggc ctctgagggg gctgagtatg atgatcagac cagccagagg 420
gagaaggagg atgataaggt gttccctggg ggctctcaca cctatgtgtg gcaggtgctg 480
aaggagaatg ggcctatggc ctctgaccca ctgtgcctga cttacagcta tctgagccat 540
gtggacctgg tgaaggacct gaactctggg ctgattgggg ccctgctggt gtgcagggag 600
ggcagcctgg ccaaggagaa gactcagacc ctgcacaagt tcatcctgct gtttgctgtg 660
tttgatgagg gcaagtcttg gcactctgag accaagaaca gcctgatgca ggatagggat 720
gctgcctctg ccagggcctg gcccaagatg cacactgtga atggctatgt gaacaggtct 780
ctgcctggcc tgattggctg ccacaggaag tctgtgtact ggcatgtgat tggcatgggc 840
accacccctg aggtgcatag cattttcctg gagggccaca ccttcctggt gaggaaccac 900
aggcaggcta gcctggagat cagccccatc actttcctga ctgcccagac cctgctgatg 960
gacctgggcc agttcctgct gttctgccac atctctagcc accagcatga tggcatggag 1020
gcctatgtga aggtggactc ttgtcctgag gagccccagc tgaggatgaa gaacaatgag 1080
gaggctgagg attatgatga tgatctgact gattctgaga tggatgtggt gaggtttgat 1140
gatgacaaca gcccctcttt catccagatc aggtctgtgg ccaagaagca ccccaagacc 1200
tgggtgcact acattgctgc tgaggaggag gattgggatt atgcccccct ggtgctggcc 1260
cctgatgaca ggagctataa gtctcagtac ctgaacaatg gcccccagag aattggcagg 1320
aagtacaaga aggtgaggtt catggcctat actgatgaga ccttcaaaac cagggaggcc 1380
attcagcatg agtctggcat cctggggccc ctgctgtatg gggaggtggg ggacaccctg 1440
ctgatcatct tcaagaacca ggctagcagg ccttacaaca tctaccccca tgggatcact 1500
gatgtgaggc ccctgtacag caggaggctg cctaaggggg tgaagcacct gaaggacttt 1560
cccattctgc ctggggagat cttcaagtat aagtggactg tgactgtgga ggatgggccc 1620
accaagtctg accccaggtg cctgactagg tactactcta gctttgtgaa catggagagg 1680
gacctggcct ctgggctgat tggccccctg ctgatctgtt acaaggagtc tgtggaccag 1740
aggggcaacc agatcatgtc tgataagagg aatgtgatcc tgttctctgt gtttgatgag 1800
aacaggagct ggtacctgac tgagaacatc cagagattcc tgcccaaccc tgctggggtg 1860
cagctggagg atcctgagtt ccaggccagc aacatcatgc attctatcaa tgggtatgtg 1920
tttgatagcc tgcagctgtc tgtgtgtctg catgaggtgg cctactggta cattctgagc 1980
attggggccc agactgactt cctgtctgtg ttcttctctg gctacacttt caaacacaag 2040
atggtgtatg aggacaccct gaccctgttc cccttctctg gggagactgt gtttatgagc 2100
atggagaacc ctgggctgtg gattctgggc tgccacaact ctgacttcag aaacaggggc 2160
atgactgccc tgctgaaggt gtcttcttgt gataagaaca ctggggacta ttatgaagac 2220
agctatgagg acatctctgc ctacctgctg agcaagaata atgctattga gcccaggtct 2280
ttctctcaga acccccctgt gctgaagagg caccagaggg agatcaccag gaccaccctg 2340
cagtctgatc aggaggagat tgactatgat gacactattt ctgtggagat gaagaaggaa 2400
gactttgata tctatgatga ggatgagaac cagagcccta ggagcttcca gaagaagact 2460
aggcattact tcattgctgc tgtggagagg ctgtgggact atggcatgag cagcagcccc 2520
catgtgctga ggaatagggc tcagtctggc tctgtgcctc agttcaagaa ggtggtgttc 2580
caggaattca ctgatggcag cttcactcag cccctgtaca ggggggagct gaatgagcac 2640
ctggggctgc tgggccctta catcagggct gaggtggagg acaatatcat ggtgaccttt 2700
aggaaccagg cctctaggcc ttacagcttc tactctagcc tgatctctta tgaagaggac 2760
cagaggcagg gggctgagcc caggaagaac tttgtgaagc ccaatgagac taagacttac 2820
ttctggaagg tgcagcacca catggctccc accaaggatg agtttgactg caaggcttgg 2880
gcctacttct ctgatgtgga cctggagaag gatgtgcact ctgggctgat tgggcccctg 2940
ctggtgtgcc acactaacac tctgaatcct gcccatggca gacaggtgac tgtgcaggag 3000
tttgccctgt tttttaccat ctttgatgag actaagtctt ggtacttcac tgagaacatg 3060
gagaggaact gcagggcccc ctgcaacatc cagatggagg atcccacctt caaggagaac 3120
tacaggtttc atgccatcaa tggctacatc atggacaccc tgcctggcct ggtgatggct 3180
caggaccaga ggattaggtg gtatctgctg agcatgggca gcaatgagaa tatccactct 3240
atccacttct ctgggcatgt gttcactgtg aggaagaagg aggagtacaa gatggccctg 3300
tataacctgt atcctggggt gtttgagact gtggagatgc tgcccagcaa ggctggcatc 3360
tggagagtgg agtgcctgat tggggagcac ctgcatgctg gcatgagcac tctgtttctg 3420
gtgtatagca acaagtgtca gacccctctg ggcatggcct ctgggcacat tagggacttt 3480
cagatcactg cttctggcca gtatgggcag tgggctccca agctggccag gctgcactat 3540
tctggcagca ttaatgcctg gagcaccaag gagcctttca gctggatcaa ggtggacctg 3600
ctggccccca tgatcatcca tgggatcaag acccaggggg ctaggcagaa gttcagcagc 3660
ctgtacatca gccagtttat catcatgtat tctctggatg gcaagaagtg gcagacctac 3720
aggggcaatt ctactggcac tctgatggtg ttctttggga atgtggatag ctctgggatc 3780
aagcataata tcttcaatcc ccccattatt gctaggtata tcaggctgca ccccacccac 3840
tatagcatca ggagcaccct gaggatggag ctgatggggt gtgacctgaa cagctgcagc 3900
atgcccctgg gcatggagag caaggctatt tctgatgccc agatcactgc cagcagctac 3960
tttactaata tgtttgccac ctggagcccc agcaaggcca gactgcacct gcagggcagg 4020
tctaatgcct ggaggcctca ggtgaataac cccaaggagt ggctgcaggt ggacttccag 4080
aaaaccatga aggtgactgg ggtgactacc cagggggtga agtctctgct gaccagcatg 4140
tatgtgaagg agttcctgat ctcttctagc caggatggcc accagtggac cctgttcttt 4200
cagaatggga aggtgaaggt cttccagggc aaccaggata gcttcacccc tgtggtgaat 4260
agcctggatc ctcctctgct gaccaggtat ctgaggatcc acccccagag ctgggtgcat 4320
cagattgccc tgaggatgga ggtgctgggc tgtgaggctc aggacctgta ctga 4374
<210> 15
<211> 4374
<212> ДНК
<213> Искуственная последовательность
<220>
<223> Описание искуственной последовательности: Нуклеиновая кислота FVIII
<400> 15
atgcagattg agctgagcac ctgtttcttc ctgtgcctgc tgaggttctg tttctctgcc 60
actaggaggt actacctggg ggctgtggag ctgagctggg actatatgca gtctgacctg 120
ggggagctgc ctgtggatgc caggttcccc cccagggtgc ctaagagctt ccccttcaat 180
acttctgtgg tgtacaagaa gactctgttt gtggagttta ctgaccacct gttcaacatt 240
gctaagccca ggcctccctg gatggggctg ctgggcccca ccatccaggc tgaggtgtat 300
gatactgtgg tgattaccct gaagaacatg gcctctcatc cagtgagcct gcatgctgtg 360
ggggtgagct actggaaggc ctctgaaggg gctgagtatg atgaccagac cagccagagg 420
gagaaggagg atgacaaggt gttccctggg ggcagccaca cctatgtgtg gcaggtgctg 480
aaggagaatg gcccaatggc ctctgacccc ctgtgcctga cttatagcta cctgagccat 540
gtggatctgg tgaaggacct gaattctggc ctgattgggg ccctgctggt gtgcagagag 600
ggctctctgg ctaaggagaa gacccagact ctgcacaagt tcatcctgct gtttgctgtg 660
tttgatgagg gcaagagctg gcactctgag actaagaata gcctgatgca ggacagggat 720
gctgcttctg ccagggcctg gcccaagatg catactgtga atggctatgt gaacaggagc 780
ctgcctggcc tgattggctg tcacaggaaa tctgtctact ggcatgtgat tgggatgggc 840
actacccctg aggtgcactc tatcttcctg gagggccata ccttcctggt gaggaaccac 900
aggcaggcca gcctggagat ctctcccatt accttcctga ctgcccagac cctgctgatg 960
gatctgggcc agttcctgct gttctgccac atcagcagcc accagcatga tgggatggag 1020
gcttatgtga aggtggatag ctgccctgag gagccccagc tgaggatgaa gaacaatgag 1080
gaggctgagg actatgatga tgacctgact gactctgaga tggatgtggt gaggtttgat 1140
gatgacaact ctcccagctt tattcagatc aggtctgtgg ctaagaagca ccccaagact 1200
tgggtgcact acattgctgc tgaggaggag gactgggact atgcccctct ggtgctggct 1260
cctgatgaca ggtcttacaa gtctcagtac ctgaataatg gccctcagag gattggcagg 1320
aagtacaaga aggtgaggtt catggcctac actgatgaga ccttcaagac cagggaggcc 1380
atccagcatg agtctggcat cctgggcccc ctgctgtatg gggaggtggg ggataccctg 1440
ctgatcatct tcaagaatca ggccagcagg ccctacaaca tctaccccca tggcatcact 1500
gatgtgaggc cactgtacag caggaggctg cccaaggggg tgaagcatct gaaggacttc 1560
cccattctgc ctggggagat cttcaagtac aaatggactg tgactgtgga ggatggccct 1620
accaagtctg accccaggtg tctgaccagg tactacagca gctttgtgaa tatggagagg 1680
gacctggcct ctggcctgat tggccccctg ctgatctgct acaaggagtc tgtggaccag 1740
aggggcaatc agatcatgtc tgataagagg aatgtgattc tgttctctgt gtttgatgag 1800
aacaggagct ggtacctgac tgagaacatc cagaggttcc tgcccaatcc tgctggggtg 1860
cagctggagg accctgagtt ccaggccagc aatatcatgc acagcatcaa tggctatgtc 1920
tttgacagcc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cttactggta tattctgagc 1980
attggggccc agactgattt cctgtctgtg ttcttttctg gctatacctt taagcacaag 2040
atggtgtatg aggacaccct gaccctgttc cccttctctg gggagactgt gttcatgtct 2100
atggagaacc ctgggctgtg gatcctgggc tgccacaact ctgacttcag gaacaggggg 2160
atgactgccc tgctgaaggt gtctagctgt gataagaaca ctggggacta ttatgaggac 2220
agctatgagg acatctctgc ttacctgctg agcaagaaca atgccattga gcccaggtct 2280
ttcagccaga atccccctgt gctgaagagg catcagaggg agatcaccag gaccaccctg 2340
cagtctgatc aggaggagat tgattatgat gacactatct ctgtggaaat gaagaaggag 2400
gactttgaca tctatgatga ggatgagaac cagagcccca ggagcttcca gaagaagacc 2460
aggcactact tcattgctgc tgtggagagg ctgtgggatt atggcatgag cagctctccc 2520
catgtgctga ggaacagagc ccagtctggc tctgtgcctc agttcaagaa ggtggtcttc 2580
caggagttca ctgatggctc tttcacccag cccctgtaca ggggggagct gaatgagcac 2640
ctgggcctgc tggggcccta cattagggct gaggtggagg ataacatcat ggtgactttc 2700
agaaaccagg ccagcaggcc ttacagcttt tactcttctc tgattagcta tgaggaggat 2760
cagaggcagg gggctgagcc taggaagaac tttgtgaagc ccaatgagac caagacctat 2820
ttctggaagg tgcagcacca catggctccc actaaggatg agtttgactg caaggcttgg 2880
gcctacttct ctgatgtgga cctggagaag gatgtgcact ctggcctgat tgggcccctg 2940
ctggtgtgcc acaccaacac cctgaaccct gcccatggca ggcaggtgac tgtgcaggag 3000
tttgccctgt tcttcaccat ctttgatgag actaagagct ggtacttcac tgagaacatg 3060
gagaggaact gcagggcccc ctgcaacatc cagatggagg accccacctt caaggagaat 3120
tacaggttcc atgccatcaa tggctacatt atggacaccc tgcctggcct ggtgatggcc 3180
caggatcaga ggatcaggtg gtatctgctg agcatgggct ctaatgagaa catccacagc 3240
atccacttct ctggccatgt gtttactgtg aggaagaagg aggaatacaa gatggctctg 3300
tataacctgt accctggggt gtttgagact gtggagatgc tgcccagcaa ggctgggatc 3360
tggagggtgg agtgcctgat tggggagcac ctgcatgctg ggatgagcac cctgttcctg 3420
gtgtatagca ataagtgcca gacccccctg ggcatggctt ctggccacat cagggatttc 3480
cagatcactg cttctggcca gtatggccag tgggctccca agctggctag gctgcattac 3540
tctgggtcta tcaatgcctg gagcactaag gagcccttca gctggatcaa ggtggacctg 3600
ctggccccca tgatcattca tggcatcaag acccaggggg ctaggcagaa gttcagcagc 3660
ctgtacatca gccagttcat cattatgtac agcctggatg gcaagaagtg gcagacttac 3720
aggggcaata gcactgggac tctgatggtg ttctttggca atgtggactc ttctggcatc 3780
aagcacaaca tcttcaaccc tcccatcatt gccaggtaca ttaggctgca ccctacccac 3840
tactctatca ggagcaccct gaggatggag ctgatggggt gtgatctgaa ctcttgcagc 3900
atgcctctgg gcatggaaag caaagccatc tctgatgccc agatcactgc ctctagctat 3960
ttcaccaata tgtttgccac ctggagccct agcaaggcca ggctgcacct gcagggcaga 4020
tctaatgcct ggaggcccca ggtgaacaat cccaaggagt ggctgcaggt ggacttccag 4080
aagaccatga aggtgactgg ggtgaccact cagggggtga agagcctgct gactagcatg 4140
tatgtgaagg agttcctgat ctcttctagc caggatggcc accagtggac cctgttcttc 4200
cagaatggca aggtgaaagt gttccagggc aaccaggata gcttcactcc tgtggtgaac 4260
tctctggacc ctcccctgct gactaggtac ctgaggattc atccccagag ctgggtgcac 4320
cagattgccc tgaggatgga ggtgctgggc tgtgaggccc aggatctgta ctga 4374
<210> 16
<211> 4374
<212> ДНК
<213> Искуственная последовательность
<220>
<223> Описание искуственной последовательности: Нуклеиновая кислота FVIII
<400> 16
atgcagattg agctgagcac ctgcttcttc ctgtgcctgc tgaggttctg cttctctgcc 60
accaggaggt actacctggg ggctgtggag ctgtcttggg actatatgca gtctgacctg 120
ggggagctgc cagtggatgc caggttcccc cccagggtgc ccaagagctt tcctttcaac 180
acttctgtgg tgtacaagaa gaccctgttt gtggagttca ctgaccacct gttcaatatt 240
gctaagccca ggccaccctg gatgggcctg ctgggcccta ccattcaggc tgaggtgtat 300
gacactgtgg tgattactct gaagaatatg gccagccacc ctgtgagcct gcatgctgtg 360
ggggtgtctt actggaaggc ctctgagggg gctgagtatg atgatcagac ttctcagagg 420
gagaaggagg atgataaggt gttccctggg ggctctcaca cttatgtgtg gcaggtgctg 480
aaggagaatg gccccatggc ttctgatcca ctgtgcctga cctactctta cctgagccat 540
gtggacctgg tgaaggacct gaactctggc ctgattgggg ccctgctggt gtgcagggag 600
ggcagcctgg ccaaggagaa gacccagacc ctgcataagt tcatcctgct gtttgctgtg 660
tttgatgagg ggaagagctg gcactctgag accaagaatt ctctgatgca ggacagggat 720
gctgcctctg ccagggcctg gcctaagatg cacactgtga atggctatgt gaacaggtct 780
ctgcctggcc tgattggctg ccacaggaag tctgtgtact ggcatgtgat tggcatgggc 840
actacccctg aggtgcacag cattttcctg gagggccaca ccttcctggt caggaaccat 900
aggcaggcct ctctggagat cagccccatc actttcctga ctgcccagac cctgctgatg 960
gacctgggcc agttcctgct gttctgccac attagcagcc accagcatga tggcatggag 1020
gcctatgtga aggtggactc ttgccctgag gagccccagc tgaggatgaa gaacaatgag 1080
gaagctgagg attatgatga tgacctgact gactctgaga tggatgtggt gaggtttgat 1140
gatgacaaca gccccagctt catccagatc aggtctgtgg ccaagaagca ccccaagacc 1200
tgggtgcact acattgctgc tgaggaggag gattgggact atgctcccct ggtgctggct 1260
cctgatgata ggagctacaa gtctcagtac ctgaataatg gcccccagag gattggcagg 1320
aagtacaaga aggtgaggtt catggcctac actgatgaga ccttcaagac cagagaggct 1380
atccagcatg agtctgggat cctggggccc ctgctgtatg gggaggtggg ggacaccctg 1440
ctgatcatct tcaagaacca ggccagcaga ccctacaaca tctaccccca tgggatcact 1500
gatgtgaggc ccctgtacag caggaggctg cctaaggggg tgaagcacct gaaggacttc 1560
cccatcctgc ctggggagat cttcaagtat aagtggactg tgactgtgga ggatgggccc 1620
accaagtctg accctaggtg cctgactagg tactactcta gctttgtgaa catggagagg 1680
gacctggcct ctggcctgat tggccccctg ctgatttgct acaaggagtc tgtggatcag 1740
aggggcaatc agatcatgtc tgacaagagg aatgtgatcc tgttctctgt gtttgatgag 1800
aataggtctt ggtacctgac tgagaacatc cagaggttcc tgcctaatcc tgctggggtg 1860
cagctggagg accctgagtt tcaggccagc aacatcatgc acagcatcaa tggctatgtg 1920
tttgactctc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cttactggta tatcctgagc 1980
attggggctc agactgactt cctgtctgtg ttcttttctg gctacacttt taagcacaag 2040
atggtgtatg aggacaccct gaccctgttc cccttttctg gggagactgt gttcatgtct 2100
atggagaacc ctgggctgtg gattctgggc tgtcacaact ctgacttcag aaacaggggc 2160
atgactgccc tgctgaaggt gtctagctgt gacaagaata ctggggacta ctatgaggac 2220
agctatgagg acatttctgc ctatctgctg agcaagaaca atgccattga gcccaggagc 2280
ttttctcaga atccccctgt gctgaagagg caccagagag agatcaccag gaccactctg 2340
cagtctgatc aggaggagat tgattatgat gacactatct ctgtggagat gaagaaagag 2400
gactttgata tctatgatga ggatgagaat cagtctccca ggagcttcca gaagaagact 2460
agacactact tcattgctgc tgtggagagg ctgtgggact atggcatgag ctctagccct 2520
catgtgctga ggaacagggc ccagtctggg tctgtgcccc agttcaagaa ggtggtgttc 2580
caggagttca ctgatggcag ctttacccag cccctgtata ggggggagct gaatgagcat 2640
ctgggcctgc tgggccccta tattagggct gaagtggagg acaacatcat ggtgaccttt 2700
aggaaccagg ccagcaggcc ctacagcttt tacagcagcc tgattagcta tgaggaggat 2760
cagagacagg gggctgagcc caggaagaac tttgtgaagc ccaatgagac caagacctac 2820
ttctggaagg tgcagcacca catggcccct accaaggatg agtttgactg caaggcctgg 2880
gcttacttct ctgatgtgga cctggagaaa gatgtgcact ctggcctgat tgggcccctg 2940
ctggtgtgcc acaccaacac cctgaaccct gcccatggga ggcaggtgac tgtgcaggag 3000
tttgccctgt ttttcaccat ctttgatgag accaagagct ggtacttcac tgagaacatg 3060
gagaggaact gcagggcccc ctgtaacatc cagatggagg atcctacttt caaggagaac 3120
tacaggttcc atgccattaa tgggtacatc atggacaccc tgcctgggct ggtgatggcc 3180
caggatcaga ggattaggtg gtatctgctg tctatgggct ctaatgagaa catccactct 3240
atccacttct ctggccatgt gttcactgtg aggaagaagg aggagtacaa gatggccctg 3300
tacaacctgt accctggggt gtttgaaact gtggagatgc tgccctctaa agctgggatc 3360
tggagggtgg agtgcctgat tggggagcac ctgcatgctg gcatgagcac cctgttcctg 3420
gtgtacagca ataagtgcca gactcccctg ggcatggctt ctgggcacat cagggatttc 3480
cagatcactg cctctggcca gtatggccag tgggccccca agctggctag gctgcactac 3540
tctggcagca tcaatgcctg gagcaccaag gagcccttct cttggattaa ggtggacctg 3600
ctggctccca tgatcattca tggcatcaag acccaggggg ccaggcagaa gttttctagc 3660
ctgtatatta gccagttcat catcatgtat agcctggatg ggaagaagtg gcagacctac 3720
agggggaata gcactggcac cctgatggtg ttttttggca atgtggattc ttctggcatc 3780
aagcataaca tcttcaatcc ccctatcatt gccaggtaca ttaggctgca tcccacccat 3840
tactctatca ggagcaccct gaggatggag ctgatggggt gtgatctgaa cagctgtagc 3900
atgcccctgg gcatggagtc caaggctatc tctgatgccc agatcactgc cagcagctac 3960
ttcaccaaca tgtttgccac ctggagcccc agcaaggcca ggctgcacct gcagggcagg 4020
tctaatgcct ggaggcccca ggtgaacaat cccaaggagt ggctgcaggt ggacttccag 4080
aagactatga aggtgactgg ggtgaccact cagggggtga agagcctgct gaccagcatg 4140
tatgtgaagg agttcctgat ctcttctagc caggatgggc atcagtggac cctgtttttt 4200
cagaatggca aagtgaaggt gtttcagggg aatcaggaca gctttacccc tgtggtgaac 4260
agcctggatc ctcctctgct gactagatac ctgaggatcc acccccagag ctgggtccac 4320
cagattgctc tgaggatgga ggtgctgggg tgtgaggctc aggacctgta ctga 4374
<210> 17
<211> 4374
<212> ДНК
<213> Искуственная последовательность
<220>
<223> Описание искуственной последовательности: Нуклеиновая кислота FVIII
<400> 17
atgcagattg agctgagcac ctgcttcttt ctgtgcctgc tgaggttctg cttctctgcc 60
accaggaggt actacctggg ggctgtggaa ctgagctggg actatatgca gtctgacctg 120
ggggagctgc ctgtggatgc caggttcccc cccagggtgc ccaagtcttt cccctttaac 180
acttctgtgg tgtacaagaa gaccctgttt gtggagttta ctgaccacct gttcaatatt 240
gccaagccca ggcccccctg gatgggcctg ctgggcccaa ccatccaggc tgaggtgtat 300
gatactgtgg tgatcaccct gaagaacatg gccagccacc ctgtgagcct gcatgctgtg 360
ggggtgagct attggaaggc ttctgagggg gctgagtatg atgaccagac tagccagagg 420
gagaaggagg atgacaaggt gttccctggg gggtctcata cctatgtgtg gcaggtgctg 480
aaggagaatg gccccatggc ctctgacccc ctgtgcctga cctattctta cctgagccat 540
gtggacctgg tcaaggacct gaactctggc ctgattgggg ctctgctggt gtgcagggag 600
ggcagcctgg ccaaggagaa gactcagact ctgcataagt tcatcctgct gtttgctgtg 660
tttgatgagg gcaagagctg gcactctgag accaagaact ctctgatgca ggatagggat 720
gctgcctctg ccagggcctg gcccaagatg cacactgtga atggctatgt gaataggtct 780
ctgcctggcc tgattggctg ccataggaag tctgtgtact ggcatgtgat tggcatgggc 840
actacccctg aggtgcactc tatcttcctg gaggggcaca ccttcctggt gaggaaccac 900
aggcaggcca gcctggagat ctctcccatc accttcctga ctgcccagac tctgctgatg 960
gacctgggcc agttcctgct gttctgccat atcagcagcc accagcatga tggcatggag 1020
gcctatgtga aggtggacag ctgcccagag gaaccccagc tgaggatgaa gaacaatgag 1080
gaggctgagg actatgatga tgacctgact gactctgaga tggatgtggt gaggtttgat 1140
gatgacaaca gccccagctt tattcagatc aggtctgtgg ccaagaagca ccccaagacc 1200
tgggtgcact acattgctgc tgaggaggag gactgggatt atgcccccct ggtgctggcc 1260
cctgatgaca ggtcttacaa gtctcagtac ctgaacaatg gcccccagag gattgggagg 1320
aagtacaaga aggtgaggtt catggcctac actgatgaga ccttcaagac cagggaggcc 1380
atccagcatg agtctggcat cctggggccc ctgctgtatg gggaggtggg ggataccctg 1440
ctgattatct tcaagaacca ggctagcagg ccctataaca tctaccccca tggcattact 1500
gatgtgaggc ccctgtactc taggagactg cccaaggggg tgaagcacct gaaagacttc 1560
cccatcctgc ctggggagat cttcaagtat aagtggactg tgactgtgga ggatggcccc 1620
actaagtctg accccaggtg cctgaccagg tattacagca gctttgtgaa tatggagagg 1680
gatctggctt ctggcctgat tgggcctctg ctgatttgct acaaggagtc tgtggatcag 1740
agggggaacc agattatgtc tgacaagagg aatgtgattc tgttctctgt gtttgatgag 1800
aacaggagct ggtacctgac tgagaatatc cagaggttcc tgcctaatcc tgctggggtg 1860
cagctggagg accctgagtt ccaggctagc aacattatgc acagcatcaa tggctatgtg 1920
tttgacagcc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cttactggta cattctgtct 1980
attggggccc agactgactt cctgtctgtg ttcttctctg gctacacctt caagcacaag 2040
atggtgtatg aggacactct gaccctgttc cccttctctg gggagactgt gttcatgagc 2100
atggagaatc ctgggctgtg gattctgggg tgccacaact ctgatttcag gaacaggggc 2160
atgactgccc tgctgaaggt gagcagctgt gacaagaaca ctggggatta ttatgaggac 2220
agctatgagg acatttctgc ctacctgctg agcaagaaca atgccattga gcctaggagc 2280
ttcagccaga atccccctgt gctgaagaga caccagaggg agatcactag gaccactctg 2340
cagtctgatc aggaggagat tgactatgat gacaccattt ctgtggagat gaagaaggag 2400
gactttgata tttatgatga ggatgagaac cagagcccca gaagcttcca gaagaagacc 2460
aggcactact tcattgctgc tgtggagagg ctgtgggatt atggcatgtc ttctagcccc 2520
catgtgctga ggaacagggc tcagtctggc tctgtgcctc agttcaagaa ggtggtgttc 2580
caggagttca ctgatgggag cttcacccag cctctgtaca ggggggagct gaatgaacat 2640
ctgggcctgc tggggcccta catcagggct gaggtggagg ataatatcat ggtgactttc 2700
aggaatcagg cctctaggcc ctacagcttc tactctagcc tgatcagcta tgaggaggac 2760
cagaggcagg gggctgagcc taggaagaat tttgtgaaac ccaatgagac caagacctac 2820
ttttggaagg tgcagcacca catggcccct accaaggatg agtttgactg taaggcctgg 2880
gcctacttct ctgatgtgga cctggagaag gatgtgcatt ctgggctgat tggccccctg 2940
ctggtgtgcc acaccaacac cctgaaccct gcccatggca ggcaggtgac tgtgcaggag 3000
tttgccctgt tcttcaccat ctttgatgag actaagagct ggtatttcac tgagaacatg 3060
gagaggaact gtagggctcc ctgcaacatc cagatggagg atccaacttt caaggagaac 3120
tacaggttcc atgccatcaa tggctacatc atggacaccc tgcctggcct ggtgatggcc 3180
caggaccaga ggattaggtg gtacctgctg agcatgggct ctaatgagaa catccactct 3240
atccacttct ctggccatgt gtttactgtg aggaagaagg aggagtacaa gatggctctg 3300
tacaacctgt accctggggt gtttgagact gtggagatgc tgcctagcaa ggctggcatt 3360
tggagagtgg agtgtctgat tggggagcac ctgcatgctg ggatgtctac cctgttcctg 3420
gtgtactcta acaagtgcca gacccccctg gggatggctt ctgggcacat cagagatttt 3480
cagattactg cttctgggca gtatggccag tgggctccca agctggccag actgcattac 3540
tctggctcta ttaatgcttg gagcaccaag gagcctttca gctggatcaa ggtggacctg 3600
ctggctccca tgatcatcca tggcattaag actcaggggg ctaggcagaa gttcagcagc 3660
ctgtatattt ctcagtttat tatcatgtat tctctggatg gcaagaagtg gcagacttac 3720
aggggcaaca gcactggcac cctgatggtg ttctttggca atgtggacag ctctgggatc 3780
aagcataaca tcttcaaccc ccccattatt gccaggtaca tcaggctgca ccccacccac 3840
tattctatca ggagcactct gaggatggag ctgatggggt gtgacctgaa cagctgctct 3900
atgcccctgg gcatggagag caaggccatc tctgatgccc agatcactgc cagctcttat 3960
ttcaccaaca tgtttgccac ctggagcccc agcaaggcca ggctgcacct gcagggcaga 4020
agcaatgcct ggaggcccca ggtgaacaat cctaaggagt ggctgcaggt ggacttccag 4080
aagactatga aggtgactgg ggtgactacc cagggggtga agagcctgct gaccagcatg 4140
tatgtgaagg agttcctgat tagcagcagc caggatgggc atcagtggac cctgttcttc 4200
cagaatggga aggtgaaggt gttccagggc aatcaggaca gcttcacccc tgtggtgaac 4260
agcctggacc cccccctgct gaccaggtac ctgaggatcc atccccagag ctgggtgcac 4320
cagattgctc tgagaatgga ggtgctgggc tgtgaggccc aggacctgta ttga 4374
<210> 18
<211> 4374
<212> ДНК
<213> Искуственная последовательность
<220>
<223> Описание искуственной последовательности: Нуклеиновая кислота FVIII
<400> 18
atgcagattg agctgtctac ctgttttttt ctgtgcctgc tgaggttctg cttctctgct 60
accaggaggt attatctggg ggctgtggag ctgagctggg actacatgca gtctgacctg 120
ggggagctgc ctgtggatgc caggtttcct cccagggtgc ctaagagctt ccccttcaac 180
acctctgtgg tgtacaagaa gactctgttt gtggagttca ctgaccacct gttcaacatt 240
gccaagccca ggcccccctg gatggggctg ctgggcccca ctatccaggc tgaggtgtat 300
gatactgtgg tgattaccct gaagaacatg gcctctcacc ctgtgtctct gcatgctgtg 360
ggggtgagct actggaaggc ttctgagggg gctgaatatg atgatcagac ctctcagagg 420
gagaaggagg atgacaaggt gtttcctggg ggcagccaca cctatgtgtg gcaggtgctg 480
aaggagaatg ggcccatggc ctctgatccc ctgtgcctga cctacagcta cctgagccat 540
gtggacctgg tgaaggacct gaactctggc ctgattgggg ccctgctggt gtgcagggag 600
ggcagcctgg ccaaggaaaa gacccagacc ctgcataagt tcatcctgct gtttgctgtg 660
tttgatgagg gcaagtcttg gcactctgag accaagaaca gcctgatgca ggacagggat 720
gctgcctctg ctagggcctg gcccaagatg cacactgtga atgggtatgt gaacagatct 780
ctgcctggcc tgattggctg ccacaggaag tctgtgtact ggcatgtgat tggcatgggg 840
accacccctg aggtgcatag catcttcctg gaggggcaca ccttcctggt gagaaatcat 900
aggcaggcca gcctggagat tagccccatc accttcctga ctgcccagac cctgctgatg 960
gacctgggcc agttcctgct gttctgccac atttctagcc accagcatga tggcatggag 1020
gcctatgtga aggtggatag ctgccctgaa gagccccagc tgaggatgaa gaacaatgag 1080
gaggctgagg attatgatga tgatctgact gactctgaga tggatgtggt gaggtttgat 1140
gatgacaaca gccccagctt catccagatc aggtctgtgg ccaagaagca ccctaagacc 1200
tgggtgcact acattgctgc tgaagaggag gactgggact atgcccccct ggtgctggcc 1260
ccagatgaca ggtcttacaa gagccagtac ctgaataatg gcccccagag gattgggagg 1320
aagtataaga aagtgaggtt catggcttac actgatgaga cctttaagac tagggaggcc 1380
attcagcatg agtctgggat tctgggccct ctgctgtatg gggaggtggg ggacaccctg 1440
ctgatcattt tcaagaacca ggccagcagg ccctataata tttatcccca tgggattact 1500
gatgtcaggc ccctgtacag caggaggctg cctaaggggg tgaagcacct gaaggacttc 1560
cccattctgc ctggggagat cttcaagtat aagtggactg tgactgtgga ggatggcccc 1620
accaagtctg atcctaggtg cctgaccagg tactatagca gctttgtgaa catggagagg 1680
gacctggctt ctggcctgat tggccccctg ctgatctgct acaaggaatc tgtggaccag 1740
aggggcaacc agattatgtc tgacaagagg aatgtgatcc tgttttctgt gtttgatgag 1800
aataggagct ggtatctgac tgagaacatc cagaggttcc tgcccaatcc tgctggggtg 1860
cagctggagg accctgagtt ccaggcttct aacatcatgc atagcatcaa tgggtatgtg 1920
tttgactctc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cctattggta catcctgagc 1980
attggggccc agactgactt cctgtctgtg ttcttctctg gctacacctt caagcacaag 2040
atggtgtatg aggacaccct gaccctgttc cctttctctg gggagactgt gttcatgagc 2100
atggagaacc ctggcctgtg gattctgggc tgccataatt ctgacttcag aaacaggggc 2160
atgactgctc tgctgaaggt gagcagctgt gacaagaata ctggggacta ctatgaggac 2220
tcttatgagg atatttctgc ctacctgctg agcaagaaca atgctattga gcccaggagc 2280
ttcagccaga acccccctgt cctgaagagg catcagaggg agatcactag gaccaccctg 2340
cagtctgatc aggaggagat tgactatgat gacactatct ctgtggaaat gaagaaggag 2400
gactttgata tctatgatga ggatgagaac cagagcccca ggtctttcca gaagaagacc 2460
aggcactact tcattgctgc tgtggagagg ctgtgggact atggcatgtc tagcagcccc 2520
catgtgctga ggaacagagc ccagtctggc tctgtgcccc agttcaagaa ggtggtgttt 2580
caggagttca ctgatgggag cttcactcag cccctgtata ggggggagct gaatgagcat 2640
ctgggcctgc tggggcccta catcagggct gaggtggagg ataacatcat ggtgaccttc 2700
aggaaccagg ccagcaggcc ctactctttc tactcttctc tgatcagcta tgaggaggat 2760
cagaggcagg gggctgagcc taggaagaac tttgtcaagc ctaatgagac taagacctac 2820
ttttggaagg tgcagcacca catggctccc actaaggatg agtttgattg caaggcctgg 2880
gcctacttct ctgatgtgga cctggagaag gatgtgcact ctggcctgat tggccccctg 2940
ctggtgtgtc acaccaatac cctgaaccct gcccatggca ggcaggtcac tgtgcaggag 3000
tttgccctgt ttttcactat ctttgatgag actaagtctt ggtacttcac tgagaacatg 3060
gaaaggaatt gcagggctcc ctgcaacatc cagatggagg accccacctt caaggagaac 3120
tacaggtttc atgccatcaa tggctacatc atggacaccc tgcctggcct ggtgatggct 3180
caggatcaga ggattaggtg gtatctgctg agcatgggca gcaatgagaa catccacagc 3240
atccactttt ctggccatgt gttcactgtg aggaagaagg aggagtacaa gatggctctg 3300
tacaatctgt accctggggt gtttgagact gtggagatgc tgcccagcaa ggctgggatc 3360
tggagggtgg agtgcctgat tggggaacac ctgcatgctg gcatgtctac cctgttcctg 3420
gtgtactcta acaagtgcca gactcccctg ggcatggcct ctgggcacat cagggacttc 3480
cagatcactg cctctgggca gtatggccag tgggccccta agctggctag gctgcattac 3540
tctggcagca tcaatgcctg gagcaccaag gagcccttca gctggatcaa ggtggacctg 3600
ctggccccta tgatcatcca tggcatcaag acccaggggg ccagacagaa gttctcttct 3660
ctgtacatct ctcagttcat catcatgtac tctctggatg gcaagaagtg gcagacctac 3720
agggggaatt ctactggcac tctgatggtg ttctttggga atgtggatag ctctgggatc 3780
aagcataata ttttcaaccc ccccattatt gctaggtaca tcaggctgca cccaacccac 3840
tactctatta ggtctaccct gaggatggag ctgatgggct gtgacctgaa ctcttgtagc 3900
atgcccctgg gcatggagag caaggctatc tctgatgccc agatcactgc cagcagctac 3960
tttaccaaca tgtttgctac ttggagcccc agcaaggcca ggctgcacct gcagggcagg 4020
agcaatgcct ggaggcccca ggtgaacaac cccaaggagt ggctgcaggt ggattttcag 4080
aagaccatga aggtgactgg ggtgaccact cagggggtga aaagcctgct gactagcatg 4140
tatgtgaagg agtttctgat cagcagctct caggatggcc atcagtggac cctgttcttc 4200
cagaatggca aggtgaaggt gttccagggc aaccaggata gcttcacccc tgtggtgaat 4260
agcctggacc cccccctgct gaccaggtac ctgaggatcc atccccagag ctgggtgcac 4320
cagattgccc tgaggatgga ggtgctgggc tgtgaagccc aggacctgta ctga 4374
<210> 19
<211> 4374
<212> ДНК
<213> Искуственная последовательность
<220>
<223> Описание искуственной последовательности: Нуклеиновая кислота FVIII
<400> 19
atgcaaatag agctctccac ctgcttcttt ctgtgccttt tgcgattctg ctttagtgcc 60
accagaagat actacctggg tgcagtggaa ctgtcatggg actatatgca aagtgatctc 120
ggtgagctgc ctgtggacgc aagatttcct cctagagtgc caaaatcttt tccattcaac 180
acctcagtcg tgtacaaaaa gactctgttt gtagaattca cggatcacct tttcaacatc 240
gctaagccaa ggccaccctg gatgggtctg ctaggtccta ccatccaggc tgaggtttat 300
gatacagtgg tcattacact taagaacatg gcttcccatc ctgtcagtct tcatgctgtt 360
ggtgtatcct actggaaagc ttctgaggga gctgaatatg atgatcagac cagtcaaagg 420
gagaaagaag atgataaagt cttccctggt ggaagccata catatgtctg gcaggtcctg 480
aaagagaatg gtccaatggc ctctgaccca ctgtgcctta cctactcata tctttctcat 540
gtggacctgg taaaagactt gaattcaggc ctcattggag ccctactagt atgtagagaa 600
gggagtctgg ccaaggaaaa gacacagacc ttgcacaaat ttatactact ttttgctgta 660
tttgatgaag ggaaaagttg gcactcagaa acaaagaact ccttgatgca ggatagggat 720
gctgcatctg ctcgggcctg gcctaaaatg cacacagtca atggttatgt aaacaggtct 780
ctgccaggtc tgattggatg ccacaggaaa tcagtctatt ggcatgtgat tggaatgggc 840
accactcctg aagtgcactc aatattcctc gaaggtcaca catttcttgt gaggaaccat 900
cgccaggcgt ccttggaaat ctcgccaata actttcctta ctgctcaaac actcttgatg 960
gaccttggac agtttctact gttttgtcat atctcttccc accaacatga tggcatggaa 1020
gcttatgtca aagtagacag ctgtccagag gaaccccaac tacgaatgaa aaataatgaa 1080
gaagcggaag actatgatga tgatcttact gattctgaaa tggatgtggt caggtttgat 1140
gatgacaact ctccttcctt tatccaaatt cgctcagttg ccaagaagca tcctaaaact 1200
tgggtacatt acattgctgc tgaagaggag gactgggact atgctccctt agtcctcgcc 1260
cccgatgaca gaagttataa aagtcaatat ttgaacaatg gccctcagcg gattggtagg 1320
aagtacaaaa aagtccgatt tatggcatac acagatgaaa cctttaagac tcgtgaagct 1380
attcagcatg aatcaggaat cttgggacct ttactttatg gggaagttgg agacacactg 1440
ttgattatat ttaagaatca agcaagcaga ccatataaca tctaccctca cggaatcact 1500
gatgtccgtc ctttgtattc aaggagatta ccaaaaggtg taaaacattt gaaggatttt 1560
ccaattctgc caggagaaat attcaaatat aaatggacag tgactgtaga agatgggcca 1620
actaaatcag atcctcggtg cctgacccgc tattactcta gtttcgttaa tatggagaga 1680
gatctagctt caggactcat tggccctctc ctcatctgct acaaagaatc tgtagatcaa 1740
agaggaaacc agataatgtc agacaagagg aatgtcatcc tgttttctgt atttgatgag 1800
aaccgaagct ggtacctcac agagaatata caacgctttc tccccaatcc agctggagtg 1860
cagcttgagg atccagagtt ccaagcctcc aacatcatgc acagcatcaa tggctatgtt 1920
tttgatagtt tgcagttgtc agtttgtttg catgaggtgg catactggta cattctaagc 1980
attggagcac agactgactt cctttctgtc ttcttctctg gatatacctt caaacacaaa 2040
atggtctatg aagacacact caccctattc ccattctcag gagaaactgt cttcatgtcg 2100
atggaaaacc caggtctatg gattctgggg tgccacaact cagactttcg gaacagaggc 2160
atgaccgcct tactgaaggt ttctagttgt gacaagaaca ctggtgatta ttacgaggac 2220
agttatgaag atatttcagc atacttgctg agtaaaaaca atgccattga accaagaagc 2280
ttctcccaaa acccaccagt cttgaaacgc catcaacggg aaataactcg tactactctt 2340
cagtcagatc aagaggaaat tgactatgat gataccatat cagttgaaat gaagaaggaa 2400
gattttgaca tttatgatga ggatgaaaat cagagccccc gcagctttca aaagaaaaca 2460
cgacactatt ttattgctgc agtggagagg ctctgggatt atgggatgag tagctcccca 2520
catgttctaa gaaacagggc tcagagtggc agtgtccctc agttcaagaa agttgttttc 2580
caggaattta ctgatggctc ctttactcag cccttatacc gtggagaact aaatgaacat 2640
ttgggactcc tggggccata tataagagca gaagttgaag ataatatcat ggtaactttc 2700
agaaatcagg cctctcgtcc ctattccttc tattctagcc ttatttctta tgaggaagat 2760
cagaggcaag gagcagaacc tagaaaaaac tttgtcaagc ctaatgaaac caaaacttac 2820
ttttggaaag tgcaacatca tatggcaccc actaaagatg agtttgactg caaagcctgg 2880
gcttatttct ctgatgttga cctggaaaaa gatgtgcact caggcctgat tggacccctt 2940
ctggtctgcc acactaacac actgaaccct gctcatggga gacaagtgac agtacaggaa 3000
tttgctctgt ttttcaccat ctttgatgag accaaaagct ggtacttcac tgaaaatatg 3060
gaaagaaact gcagggctcc ctgcaatatc cagatggaag atcccacttt taaagagaat 3120
tatcgcttcc atgcaatcaa tggctacata atggatacac tacctggctt agtaatggct 3180
caggatcaaa ggattcgatg gtatctgctc agcatgggca gcaatgaaaa catccattct 3240
attcatttca gtggacatgt gttcaccgta cgaaaaaaag aggagtataa aatggcactg 3300
tacaatctct atccaggtgt ttttgagaca gtggaaatgt taccatccaa agctggaatt 3360
tggcgggtgg aatgccttat tggcgagcat ctacatgctg ggatgagcac actttttctg 3420
gtgtacagca ataagtgtca gactcccctg ggaatggctt ctggacacat tagagatttt 3480
cagattacag cttcaggaca atatggacag tgggccccaa agctggccag acttcattat 3540
tccggatcaa tcaatgcctg gagcaccaag gagccctttt cttggatcaa ggtggatctg 3600
ttggcaccaa tgattattca cggcatcaag acccagggtg cccgtcagaa gttctccagc 3660
ctctacatct ctcagtttat catcatgtat agtcttgatg ggaagaagtg gcagacttat 3720
cgaggaaatt ccactggaac cttaatggtc ttctttggca atgtggattc atctgggata 3780
aaacacaata tttttaaccc tccaattatt gctcgataca tccgtttgca cccaactcat 3840
tatagcattc gcagcactct tcgcatggag ttgatgggct gtgatttaaa tagttgcagc 3900
atgccattgg gaatggagag taaagcaata tcagatgcac agattactgc ttcatcctac 3960
tttaccaata tgtttgccac ctggtctcct tcaaaagctc gacttcacct ccaagggagg 4020
agtaatgcct ggagacctca ggtgaataat ccaaaagagt ggctgcaagt ggacttccag 4080
aagacaatga aagtcacagg agtaactact cagggagtaa aatctctgct taccagcatg 4140
tatgtgaagg agttcctcat ctccagcagt caagatggcc atcagtggac tctctttttt 4200
cagaatggca aagtaaaggt ttttcaggga aatcaagact ccttcacacc tgtggtgaac 4260
tctctagacc caccgttact gactcgctac cttcgaattc acccccagag ttgggtgcac 4320
cagattgccc tgaggatgga ggttctgggc tgcgaggcac aggacctcta ctga 4374
<210> 20
<211> 4890
<212> ДНК
<213> Искуственная последовательность
<220>
<223> Описание искуственной последовательности: Нуклеиновая кислота FVIII
<400> 20
atgcagattg agctgagcac ctgcttcttc ctgtgcctgc tgaggttctg cttctctgcc 60
accaggagat actacctggg ggctgtggag ctgagctggg actacatgca gtctgacctg 120
ggggagctgc ctgtggatgc caggttcccc cccagagtgc ccaagagctt ccccttcaac 180
acctctgtgg tgtacaagaa gaccctgttt gtggagttca ctgaccacct gttcaacatt 240
gccaagccca ggcccccctg gatgggcctg ctgggcccca ccatccaggc tgaggtgtat 300
gacactgtgg tgatcaccct gaagaacatg gccagccacc ctgtgagcct gcatgctgtg 360
ggggtgagct actggaaggc ctctgagggg gctgagtatg atgaccagac cagccagagg 420
gagaaggagg atgacaaggt gttccctggg ggcagccaca cctatgtgtg gcaggtgctg 480
aaggagaatg gccccatggc ctctgacccc ctgtgcctga cctacagcta cctgagccat 540
gtggacctgg tgaaggacct gaactctggc ctgattgggg ccctgctggt gtgcagggag 600
ggcagcctgg ccaaggagaa gacccagacc ctgcacaagt tcatcctgct gtttgctgtg 660
tttgatgagg gcaagagctg gcactctgaa accaagaaca gcctgatgca ggacagggat 720
gctgcctctg ccagggcctg gcccaagatg cacactgtga atggctatgt gaacaggagc 780
ctgcctggcc tgattggctg ccacaggaag tctgtgtact ggcatgtgat tggcatgggc 840
accacccctg aggtgcacag catcttcctg gagggccaca ccttcctggt caggaaccac 900
aggcaggcca gcctggagat cagccccatc accttcctga ctgcccagac cctgctgatg 960
gacctgggcc agttcctgct gttctgccac atcagcagcc accagcatga tggcatggag 1020
gcctatgtga aggtggacag ctgccctgag gagccccagc tgaggatgaa gaacaatgag 1080
gaggctgagg actatgatga tgacctgact gactctgaga tggatgtggt gaggtttgat 1140
gatgacaaca gccccagctt catccagatc aggtctgtgg ccaagaagca ccccaagacc 1200
tgggtgcact acattgctgc tgaggaggag gactgggact atgcccccct ggtgctggcc 1260
cctgatgaca ggagctacaa gagccagtac ctgaacaatg gcccccagag gattggcagg 1320
aagtacaaga aggtcaggtt catggcctac actgatgaaa ccttcaagac cagggaggcc 1380
atccagcatg agtctggcat cctgggcccc ctgctgtatg gggaggtggg ggacaccctg 1440
ctgatcatct tcaagaacca ggccagcagg ccctacaaca tctaccccca tggcatcact 1500
gatgtgaggc ccctgtacag caggaggctg cccaaggggg tgaagcacct gaaggacttc 1560
cccatcctgc ctggggagat cttcaagtac aagtggactg tgactgtgga ggatggcccc 1620
accaagtctg accccaggtg cctgaccaga tactacagca gctttgtgaa catggagagg 1680
gacctggcct ctggcctgat tggccccctg ctgatctgct acaaggagtc tgtggaccag 1740
aggggcaacc agatcatgtc tgacaagagg aatgtgatcc tgttctctgt gtttgatgag 1800
aacaggagct ggtacctgac tgagaacatc cagaggttcc tgcccaaccc tgctggggtg 1860
cagctggagg accctgagtt ccaggccagc aacatcatgc acagcatcaa tggctatgtg 1920
tttgacagcc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cctactggta catcctgagc 1980
attggggccc agactgactt cctgtctgtg ttcttctctg gctacacctt caagcacaag 2040
atggtgtatg aggacaccct gaccctgttc cccttctctg gggagactgt gttcatgagc 2100
atggagaacc ctggcctgtg gattctgggc tgccacaact ctgacttcag gaacaggggc 2160
atgactgccc tgctgaaagt ctccagctgt gacaagaaca ctggggacta ctatgaggac 2220
agctatgagg acatctctgc ctacctgctg agcaagaaca atgccattga gcccaggagc 2280
ttcagccaga acagcaggca ccccagcacc aggcagaagc agttcaatgc caccaccatc 2340
cctgagaatg acatagagaa gacagaccca tggtttgccc accggacccc catgcccaag 2400
atccagaatg tgagcagctc tgacctgctg atgctgctga ggcagagccc caccccccat 2460
ggcctgagcc tgtctgacct gcaggaggcc aagtatgaaa ccttctctga tgaccccagc 2520
cctggggcca ttgacagcaa caacagcctg tctgagatga cccacttcag gccccagctg 2580
caccactctg gggacatggt gttcacccct gagtctggcc tgcagctgag gctgaatgag 2640
aagctgggca ccactgctgc cactgagctg aagaagctgg acttcaaagt ctccagcacc 2700
agcaacaacc tgatcagcac catcccctct gacaacctgg ctgctggcac tgacaacacc 2760
agcagcctgg gcccccccag catgcctgtg cactatgaca gccagctgga caccaccctg 2820
tttggcaaga agagcagccc cctgactgag tctgggggcc ccctgagcct gtctgaggag 2880
aacaatgaca gcaagctgct ggagtctggc ctgatgaaca gccaggagag cagctggggc 2940
aagaatgtga gcaccaggag cttccagaag aagaccaggc actacttcat tgctgctgtg 3000
gagaggctgt gggactatgg catgagcagc agcccccatg tgctgaggaa cagggcccag 3060
tctggctctg tgccccagtt caagaaggtg gtgttccagg agttcactga tggcagcttc 3120
acccagcccc tgtacagagg ggagctgaat gagcacctgg gcctgctggg cccctacatc 3180
agggctgagg tggaggacaa catcatggtg accttcagga accaggccag caggccctac 3240
agcttctaca gcagcctgat cagctatgag gaggaccaga ggcagggggc tgagcccagg 3300
aagaactttg tgaagcccaa tgaaaccaag acctacttct ggaaggtgca gcaccacatg 3360
gcccccacca aggatgagtt tgactgcaag gcctgggcct acttctctga tgtggacctg 3420
gagaaggatg tgcactctgg cctgattggc cccctgctgg tgtgccacac caacaccctg 3480
aaccctgccc atggcaggca ggtgactgtg caggagtttg ccctgttctt caccatcttt 3540
gatgaaacca agagctggta cttcactgag aacatggaga ggaactgcag ggccccctgc 3600
aacatccaga tggaggaccc caccttcaag gagaactaca ggttccatgc catcaatggc 3660
tacatcatgg acaccctgcc tggcctggtg atggcccagg accagaggat caggtggtac 3720
ctgctgagca tgggcagcaa tgagaacatc cacagcatcc acttctctgg ccatgtgttc 3780
actgtgagga agaaggagga gtacaagatg gccctgtaca acctgtaccc tggggtgttt 3840
gagactgtgg agatgctgcc cagcaaggct ggcatctgga gggtggagtg cctgattggg 3900
gagcacctgc atgctggcat gagcaccctg ttcctggtgt acagcaacaa gtgccagacc 3960
cccctgggca tggcctctgg ccacatcagg gacttccaga tcactgcctc tggccagtat 4020
ggccagtggg cccccaagct ggccaggctg cactactctg gcagcatcaa tgcctggagc 4080
accaaggagc ccttcagctg gatcaaggtg gacctgctgg cccccatgat catccatggc 4140
atcaagaccc agggggccag gcagaagttc agcagcctgt acatcagcca gttcatcatc 4200
atgtacagcc tggatggcaa gaagtggcag acctacaggg gcaacagcac tggcaccctg 4260
atggtgttct ttggcaatgt ggacagctct ggcatcaagc acaacatctt caaccccccc 4320
atcattgcca gatacatcag gctgcacccc acccactaca gcatcaggag caccctgagg 4380
atggagctga tgggctgtga cctgaacagc tgcagcatgc ccctgggcat ggagagcaag 4440
gccatctctg atgcccagat cactgccagc agctacttca ccaacatgtt tgccacctgg 4500
agccccagca aggccaggct gcacctgcag ggcaggagca atgcctggag gccccaggtc 4560
aacaacccca aggagtggct gcaggtggac ttccagaaga ccatgaaggt gactggggtg 4620
accacccagg gggtgaagag cctgctgacc agcatgtatg tgaaggagtt cctgatcagc 4680
agcagccagg atggccacca gtggaccctg ttcttccaga atggcaaggt gaaggtgttc 4740
cagggcaacc aggacagctt cacccctgtg gtgaacagcc tggacccccc cctgctgacc 4800
agatacctga ggattcaccc ccagagctgg gtgcaccaga ttgccctgag gatggaggtg 4860
ctgggctgtg aggcccagga cctgtactga 4890
<210> 21
<211> 4374
<212> ДНК
<213> Искуственная последовательность
<220>
<223> Описание искуственной последовательности: Нуклеиновая кислота FVIII
<400> 21
atgcagattg agctgtcaac ttgctttttc ctgtgcctgc tgagattttg tttttccgct 60
actagaagat actacctggg ggctgtggaa ctgtcttggg attacatgca gagtgacctg 120
ggagagctgc cagtggacgc acgatttcca cctagagtcc ctaaatcatt ccccttcaac 180
accagcgtgg tctataagaa aacactgttc gtggagttta ctgatcacct gttcaacatc 240
gctaagcctc ggccaccctg gatgggactg ctgggaccaa caatccaggc agaggtgtac 300
gacaccgtgg tcattacact gaaaaacatg gcctcacacc ccgtgagcct gcatgctgtg 360
ggcgtcagct actggaaggc ttccgaaggg gcagagtatg acgatcagac ttcccagaga 420
gaaaaagagg acgataaggt gtttcctggc gggtctcata cctatgtgtg gcaggtcctg 480
aaagagaatg gccccatggc ttccgaccct ctgtgcctga cctactctta tctgagtcac 540
gtggacctgg tcaaggatct gaacagcgga ctgatcggag cactgctggt gtgtagggaa 600
gggagcctgg ctaaggagaa aacccagaca ctgcataagt tcattctgct gttcgccgtg 660
tttgacgaag gaaaatcatg gcacagcgag acaaagaata gtctgatgca ggaccgggat 720
gccgcttcag ccagagcttg gcccaaaatg cacactgtga acggctacgt caatcgctca 780
ctgcctggac tgatcggctg ccaccgaaag agcgtgtatt ggcatgtcat cggaatgggc 840
accacacctg aagtgcactc cattttcctg gaggggcata cctttctggt ccgcaaccac 900
cgacaggcct ccctggagat ctctccaatt accttcctga cagctcagac tctgctgatg 960
gatctgggac agttcctgct gttttgccac atcagctccc accagcatga tggcatggag 1020
gcctacgtga aagtggacag ctgtcccgag gaacctcagc tgaggatgaa gaacaatgag 1080
gaagctgaag actatgacga tgacctgacc gactccgaga tggatgtggt ccgattcgat 1140
gacgataaca gcccctcctt tatccagatt agatctgtgg ccaagaaaca ccctaagaca 1200
tgggtccatt acatcgcagc cgaggaagag gactgggatt atgcaccact ggtgctggca 1260
ccagacgatc gatcctacaa atctcagtat ctgaacaatg gaccacagcg gattggcaga 1320
aagtacaaga aagtgaggtt catggcttat accgatgaaa ccttcaagac tcgcgaagca 1380
atccagcacg agagcgggat tctgggacca ctgctgtacg gagaagtggg ggacaccctg 1440
ctgatcattt ttaagaacca ggccagcagg ccttacaata tctatccaca tggaattaca 1500
gatgtgcgcc ctctgtacag ccggagactg ccaaagggcg tcaaacacct gaaggacttc 1560
ccaatcctgc ccggggaaat ttttaagtat aaatggactg tcaccgtcga ggatggcccc 1620
actaagagcg accctaggtg cctgacccgc tactattcta gtttcgtgaa tatggaaagg 1680
gatctggcca gcggactgat cggcccactg ctgatttgtt acaaagagag cgtggatcag 1740
agaggcaacc agatcatgtc cgacaagagg aatgtgattc tgttcagtgt ctttgacgaa 1800
aaccggtcat ggtatctgac cgagaacatc cagagattcc tgcctaatcc agccggagtg 1860
cagctggaag atcctgagtt tcaggcttct aacatcatgc atagtattaa tggctacgtg 1920
ttcgacagtc tgcagctgtc agtgtgtctg cacgaggtcg cttactggta tatcctgagc 1980
attggagcac agacagattt cctgagcgtg ttcttttccg gctacacttt taagcataaa 2040
atggtgtatg aggacacact gactctgttc cccttcagcg gcgaaaccgt gtttatgtcc 2100
atggagaatc ccgggctgtg gatcctggga tgccacaaca gcgatttcag gaatcgcggg 2160
atgactgccc tgctgaaagt gtcaagctgt gacaagaaca ccggagacta ctatgaagat 2220
tcatacgagg acatcagcgc atatctgctg tccaaaaaca atgccattga acccaggtct 2280
tttagtcaga atcctccagt gctgaagagg caccagcgcg agatcacccg cactaccctg 2340
cagagtgatc aggaagagat cgactacgac gatacaattt ctgtggaaat gaagaaagag 2400
gacttcgata tctatgacga agatgagaac cagagtcctc gatcattcca gaagaaaacc 2460
cggcattact ttattgctgc agtggagcgc ctgtgggatt atggcatgtc ctctagtcct 2520
cacgtgctgc gaaatcgggc ccagtcaggg agcgtcccac agttcaagaa agtggtcttc 2580
caggagttta cagacggatc ctttactcag ccactgtacc ggggcgaact gaacgagcac 2640
ctggggctgc tgggacccta tatcagagct gaagtggagg ataacattat ggtcaccttc 2700
agaaatcagg catctaggcc ttacagtttt tattcaagcc tgatctctta cgaagaggac 2760
cagaggcagg gagcagaacc acgaaaaaac ttcgtgaagc ctaatgagac caaaacatac 2820
ttttggaagg tgcagcacca tatggcccca acaaaagacg aattcgattg caaggcatgg 2880
gcctattttt ctgacgtgga tctggagaag gacgtccaca gtggcctgat cgggccactg 2940
ctggtgtgtc atactaacac cctgaatccc gcacacggca ggcaggtcac tgtccaggaa 3000
ttcgccctgt tctttaccat ctttgatgag acaaaaagct ggtacttcac cgaaaacatg 3060
gagcgaaatt gccgggctcc atgtaatatt cagatggaag accccacatt caaggagaac 3120
taccgctttc atgccatcaa tgggtatatt atggatactc tgcccggact ggtcatggct 3180
caggaccaga gaatcaggtg gtacctgctg agcatggggt ccaacgagaa tatccactca 3240
attcatttca gcggacacgt gtttactgtc cggaagaaag aagagtataa aatggccctg 3300
tacaacctgt atcccggcgt gttcgaaacc gtcgagatgc tgcctagcaa ggcagggatc 3360
tggagagtgg aatgcctgat tggggagcac ctgcatgccg gaatgtctac cctgtttctg 3420
gtgtacagta ataagtgtca gacacccctg gggatggctt ccggacatat ccgggatttc 3480
cagattaccg catctggaca gtacggccag tgggccccta agctggctag actgcactat 3540
tccgggtcta tcaacgcttg gtccacaaaa gagcctttct cttggattaa ggtggacctg 3600
ctggcaccaa tgatcattca tggcatcaaa actcaggggg ccaggcagaa gttctcctct 3660
ctgtacatct cacagtttat catcatgtac agcctggatg gcaagaaatg gcagacatac 3720
cgcggcaata gcacagggac tctgatggtg ttctttggca acgtggacag ttcagggatc 3780
aagcacaaca ttttcaatcc ccctatcatt gctagataca tcaggctgca cccaacccat 3840
tattctattc gaagtacact gcggatggaa ctgatggggt gcgatctgaa cagttgttca 3900
atgcccctgg gaatggagtc caaggcaatc tctgacgccc agattaccgc tagctcctac 3960
ttcactaata tgtttgctac ctggagcccc tccaaagcac gactgcatct gcagggacga 4020
agcaacgcat ggcgaccaca ggtgaacaat cccaaggagt ggctgcaggt cgattttcag 4080
aaaactatga aggtgaccgg agtcacaact cagggcgtga aaagtctgct gacctcaatg 4140
tacgtcaagg agttcctgat ctctagttca caggacggcc accagtggac actgttcttt 4200
cagaacggaa aggtgaaagt cttccagggc aatcaggatt cctttacacc tgtggtcaac 4260
tctctggacc cacccctgct gactcgctac ctgcgaatcc acccacagtc ctgggtgcat 4320
cagattgcac tgagaatgga agtcctgggc tgcgaggccc aggacctgta ttga 4374
<210> 22
<211> 222
<212> ДНК
<213> Искуственная последовательность
<220>
<223> Описание искуственной последовательности: Промотор TTR
<400> 22
gtctgtctgc acatttcgta gagcgagtgt tccgatactc taatctccct aggcaaggtt 60
catattgact taggttactt attctccttt tgttgactaa gtcaataatc agaatcagca 120
ggtttggagt cagcttggca gggatcagca gcctgggttg gaaggagggg gtataaaagc 180
cccttcacca ggagaagccg tcacacagat ccacaagctc ct 222
<210> 23
<211> 5066
<212> ДНК
<213> Искуственная последовательность
<220>
<223> Описание искуственной последовательности: экспрессионная кассета
<400> 23
cctgcaggca gctgcgcgct cgctcgctca ctgaggccgc ccgggcaaag cccgggcgtc 60
gggcgacctt tggtcgcccg gcctcagtga gcgagcgagc gcgcagagag ggagtggcca 120
actccatcac taggggttcc tacgcgtgtc tgtctgcaca tttcgtagag cgagtgttcc 180
gatactctaa tctccctagg caaggttcat attgacttag gttacttatt ctccttttgt 240
tgactaagtc aataatcaga atcagcaggt ttggagtcag cttggcaggg atcagcagcc 300
tgggttggaa ggagggggta taaaagcccc ttcaccagga gaagccgtca cacagatcca 360
caagctcctg ctagcaggta agtgccgtgt gtggttcccg cgggcctggc ctctttacgg 420
gttatggccc ttgcgtgcct tgaattactg acactgacat ccactttttc tttttctcca 480
caggtttaaa cgccaccatg cagattgagc tgagcacctg cttcttcctg tgtctgctga 540
ggttctgctt ctctgccacc aggaggtatt acctgggggc tgtggagctg agctgggact 600
atatgcagtc tgacctgggg gagctgcctg tggatgctag gttccccccc agggtgccca 660
agagcttccc ctttaacact tctgtggtgt acaagaagac cctgtttgtg gagttcactg 720
accacctgtt caacattgcc aagcccaggc ccccctggat ggggctgctg gggcccacca 780
tccaggctga ggtgtatgac actgtggtga tcaccctgaa gaacatggcc agccaccctg 840
tgagcctgca tgctgtgggg gtgagctact ggaaggcttc tgagggggct gagtatgatg 900
accagactag ccagagggag aaggaggatg acaaggtgtt tcctgggggc agccatacct 960
atgtgtggca ggtgctgaag gagaatggcc ccatggcctc tgaccccctg tgcctgacct 1020
acagctacct gtctcatgtg gacctggtga aggacctgaa ctctggcctg attggggctc 1080
tgctggtgtg tagggagggc agcctggcta aggaaaagac ccagaccctg cataagttta 1140
tcctgctgtt tgctgtgttt gatgagggca agagctggca ctctgagacc aagaacagcc 1200
tgatgcagga tagggatgct gcctctgcca gggcttggcc taagatgcac actgtgaatg 1260
ggtatgtgaa taggagcctg cctggcctga ttggctgcca caggaagtct gtgtactggc 1320
atgtgattgg gatgggcacc acccctgagg tccatagcat cttcctggag ggccacactt 1380
tcctggtgag gaaccacaga caggcctctc tggagatctc tcccatcacc ttcctgactg 1440
ctcagactct gctgatggac ctgggccagt tcctgctgtt ttgccatatt agcagccacc 1500
agcatgatgg gatggaggcc tatgtgaagg tggatagctg ccctgaggag cctcagctga 1560
ggatgaagaa caatgaggag gctgaagact atgatgatga cctgactgat tctgagatgg 1620
atgtggtgag gtttgatgat gacaatagcc ccagcttcat tcagatcagg tctgtggcca 1680
agaaacaccc caagacctgg gtgcactaca ttgctgctga ggaagaggac tgggactatg 1740
ctcccctggt gctggcccct gatgataggt cttataagag ccagtacctg aacaatgggc 1800
cccagaggat tggcaggaag tacaagaagg tgaggttcat ggcctacact gatgaaacct 1860
tcaaaaccag ggaggccatt cagcatgagt ctggcatcct gggccctctg ctgtatgggg 1920
aggtggggga caccctgctg atcatcttca agaaccaggc cagcaggccc tacaacatct 1980
atcctcatgg catcactgat gtgaggcccc tgtacagcag gaggctgccc aagggggtga 2040
agcacctgaa agacttcccc atcctgcctg gggagatctt taagtataag tggactgtga 2100
ctgtggagga tggccctacc aagtctgacc ccaggtgtct gaccaggtac tattctagct 2160
ttgtgaacat ggagagggac ctggcctctg gcctgattgg gcccctgctg atctgctaca 2220
aggagtctgt ggaccagagg ggcaaccaga tcatgtctga caagaggaat gtgatcctgt 2280
tttctgtgtt tgatgagaat aggagctggt acctgactga gaacatccag aggtttctgc 2340
ccaatcctgc tggggtgcag ctggaggatc ctgagttcca ggccagcaat atcatgcata 2400
gcatcaatgg ctatgtgttt gacagcctgc agctgtctgt gtgcctgcat gaggtggcct 2460
actggtacat cctgagcatt ggggcccaga ctgactttct gtctgtgttc ttttctggct 2520
ataccttcaa gcacaagatg gtgtatgagg ataccctgac cctgttcccc ttctctgggg 2580
agactgtgtt catgagcatg gagaatcctg ggctgtggat cctggggtgc cacaactctg 2640
attttaggaa cagggggatg actgccctgc tgaaggtgtc tagctgtgat aagaacactg 2700
gggactacta tgaggacagc tatgaggaca tttctgctta tctgctgtct aagaataatg 2760
ccattgagcc cagaagcttc agccagaatc cccctgtgct gaagagacat cagagggaga 2820
tcaccagaac taccctgcag tctgatcagg aggagattga ctatgatgac actatctctg 2880
tggagatgaa gaaggaggac tttgacatct atgatgagga tgagaatcag tctcccagga 2940
gctttcagaa gaagaccaga cattacttca ttgctgctgt ggagaggctg tgggactatg 3000
gcatgagctc tagccctcat gtgctgagga acagggccca gtctggctct gtgccccagt 3060
tcaagaaggt ggtgttccag gaattcactg atggcagctt cacccagccc ctgtacaggg 3120
gggagctgaa tgagcacctg ggcctgctgg ggccttatat cagggctgag gtggaggata 3180
atattatggt gactttcagg aaccaggcca gcaggcccta ctctttctat agcagcctga 3240
tctcttatga ggaggatcag aggcaggggg ctgagcctag gaagaacttt gtgaagccca 3300
atgagactaa gacctacttc tggaaggtcc agcaccacat ggcccctacc aaggatgagt 3360
ttgactgcaa ggcctgggcc tatttctctg atgtggatct ggagaaggat gtccattctg 3420
ggctgattgg ccccctgctg gtgtgccaca ctaacactct gaatcctgcc catggcaggc 3480
aggtgactgt ccaggagttt gccctgttct tcactatctt tgatgagacc aagagctggt 3540
actttactga gaacatggag aggaactgca gagctccttg caatattcag atggaggacc 3600
ccaccttcaa ggagaattac aggttccatg ccattaatgg gtacatcatg gacaccctgc 3660
ctggcctggt gatggctcag gaccagagga tcaggtggta cctgctgagc atgggctcta 3720
atgagaatat ccacagcatc cacttctctg ggcatgtgtt cactgtgagg aagaaggagg 3780
agtacaagat ggctctgtat aatctgtacc ctggggtgtt tgaaactgtg gagatgctgc 3840
cctctaaggc tggcatctgg agggtggagt gcctgattgg ggagcacctg catgctggca 3900
tgagcaccct gttcctggtg tacagcaaca agtgccagac ccccctgggc atggcctctg 3960
gccacatcag ggacttccag atcactgcct ctggccagta tggccagtgg gcccccaagc 4020
tggccaggct gcactattct ggcagcatca atgcctggag caccaaggag cccttcagct 4080
ggatcaaggt ggacctgctg gcccccatga tcattcatgg catcaagacc cagggggcca 4140
ggcagaagtt cagctctctg tacatctctc agttcatcat catgtactct ctggatggga 4200
agaagtggca gacctacagg ggcaacagca ctggcaccct gatggtgttc tttgggaatg 4260
tggactcttc tggcatcaag cacaacatct tcaatccccc catcattgct aggtatatta 4320
ggctgcatcc cacccactac agcatcaggt ctaccctgag gatggagctg atgggctgtg 4380
acctgaactc ttgcagcatg cccctgggca tggagtctaa ggccatctct gatgcccaga 4440
ttactgccag cagctacttc accaacatgt ttgccacctg gagcccctct aaggccaggc 4500
tgcatctgca ggggaggagc aatgcctgga ggcctcaggt gaacaacccc aaggagtggc 4560
tgcaggtgga tttccagaag accatgaagg tgactggggt gaccacccag ggggtcaaga 4620
gcctgctgac cagcatgtat gtgaaggagt tcctgatcag cagcagccag gatggccacc 4680
agtggactct gttctttcag aatgggaagg tgaaggtgtt tcagggcaat caggactctt 4740
tcacccctgt ggtgaacagc ctggaccccc ccctgctgac cagatacctg aggatccacc 4800
cccagtcttg ggtgcatcag attgccctga ggatggaggt gctgggctgt gaggctcagg 4860
atctgtactg agcggccgca ataaaagatc agagctctag agatctgtgt gttggttttt 4920
tgtgtaggaa cccctagtga tggagttggc cactccctct ctgcgcgctc gctcgctcac 4980
tgaggccggg cgaccaaagg tcgcccgacg cccgggcttt gcccgggcgg cctcagtgag 5040
cgagcgagcg cgcagctgcc tgcagg 5066
<210> 24
<211> 11976
<212> ДНК
<213> Искуственная последовательность
<220>
<223> Описание искуственной последовательности: плазмида
<400> 24
cctgcaggca gctgcgcgct cgctcgctca ctgaggccgc ccgggcaaag cccgggcgtc 60
gggcgacctt tggtcgcccg gcctcagtga gcgagcgagc gcgcagagag ggagtggcca 120
actccatcac taggggttcc tacgcgtgtc tgtctgcaca tttcgtagag cgagtgttcc 180
gatactctaa tctccctagg caaggttcat attgacttag gttacttatt ctccttttgt 240
tgactaagtc aataatcaga atcagcaggt ttggagtcag cttggcaggg atcagcagcc 300
tgggttggaa ggagggggta taaaagcccc ttcaccagga gaagccgtca cacagatcca 360
caagctcctg ctagcaggta agtgccgtgt gtggttcccg cgggcctggc ctctttacgg 420
gttatggccc ttgcgtgcct tgaattactg acactgacat ccactttttc tttttctcca 480
caggtttaaa cgccaccatg cagattgagc tgagcacctg cttcttcctg tgtctgctga 540
ggttctgctt ctctgccacc aggaggtatt acctgggggc tgtggagctg agctgggact 600
atatgcagtc tgacctgggg gagctgcctg tggatgctag gttccccccc agggtgccca 660
agagcttccc ctttaacact tctgtggtgt acaagaagac cctgtttgtg gagttcactg 720
accacctgtt caacattgcc aagcccaggc ccccctggat ggggctgctg gggcccacca 780
tccaggctga ggtgtatgac actgtggtga tcaccctgaa gaacatggcc agccaccctg 840
tgagcctgca tgctgtgggg gtgagctact ggaaggcttc tgagggggct gagtatgatg 900
accagactag ccagagggag aaggaggatg acaaggtgtt tcctgggggc agccatacct 960
atgtgtggca ggtgctgaag gagaatggcc ccatggcctc tgaccccctg tgcctgacct 1020
acagctacct gtctcatgtg gacctggtga aggacctgaa ctctggcctg attggggctc 1080
tgctggtgtg tagggagggc agcctggcta aggaaaagac ccagaccctg cataagttta 1140
tcctgctgtt tgctgtgttt gatgagggca agagctggca ctctgagacc aagaacagcc 1200
tgatgcagga tagggatgct gcctctgcca gggcttggcc taagatgcac actgtgaatg 1260
ggtatgtgaa taggagcctg cctggcctga ttggctgcca caggaagtct gtgtactggc 1320
atgtgattgg gatgggcacc acccctgagg tccatagcat cttcctggag ggccacactt 1380
tcctggtgag gaaccacaga caggcctctc tggagatctc tcccatcacc ttcctgactg 1440
ctcagactct gctgatggac ctgggccagt tcctgctgtt ttgccatatt agcagccacc 1500
agcatgatgg gatggaggcc tatgtgaagg tggatagctg ccctgaggag cctcagctga 1560
ggatgaagaa caatgaggag gctgaagact atgatgatga cctgactgat tctgagatgg 1620
atgtggtgag gtttgatgat gacaatagcc ccagcttcat tcagatcagg tctgtggcca 1680
agaaacaccc caagacctgg gtgcactaca ttgctgctga ggaagaggac tgggactatg 1740
ctcccctggt gctggcccct gatgataggt cttataagag ccagtacctg aacaatgggc 1800
cccagaggat tggcaggaag tacaagaagg tgaggttcat ggcctacact gatgaaacct 1860
tcaaaaccag ggaggccatt cagcatgagt ctggcatcct gggccctctg ctgtatgggg 1920
aggtggggga caccctgctg atcatcttca agaaccaggc cagcaggccc tacaacatct 1980
atcctcatgg catcactgat gtgaggcccc tgtacagcag gaggctgccc aagggggtga 2040
agcacctgaa agacttcccc atcctgcctg gggagatctt taagtataag tggactgtga 2100
ctgtggagga tggccctacc aagtctgacc ccaggtgtct gaccaggtac tattctagct 2160
ttgtgaacat ggagagggac ctggcctctg gcctgattgg gcccctgctg atctgctaca 2220
aggagtctgt ggaccagagg ggcaaccaga tcatgtctga caagaggaat gtgatcctgt 2280
tttctgtgtt tgatgagaat aggagctggt acctgactga gaacatccag aggtttctgc 2340
ccaatcctgc tggggtgcag ctggaggatc ctgagttcca ggccagcaat atcatgcata 2400
gcatcaatgg ctatgtgttt gacagcctgc agctgtctgt gtgcctgcat gaggtggcct 2460
actggtacat cctgagcatt ggggcccaga ctgactttct gtctgtgttc ttttctggct 2520
ataccttcaa gcacaagatg gtgtatgagg ataccctgac cctgttcccc ttctctgggg 2580
agactgtgtt catgagcatg gagaatcctg ggctgtggat cctggggtgc cacaactctg 2640
attttaggaa cagggggatg actgccctgc tgaaggtgtc tagctgtgat aagaacactg 2700
gggactacta tgaggacagc tatgaggaca tttctgctta tctgctgtct aagaataatg 2760
ccattgagcc cagaagcttc agccagaatc cccctgtgct gaagagacat cagagggaga 2820
tcaccagaac taccctgcag tctgatcagg aggagattga ctatgatgac actatctctg 2880
tggagatgaa gaaggaggac tttgacatct atgatgagga tgagaatcag tctcccagga 2940
gctttcagaa gaagaccaga cattacttca ttgctgctgt ggagaggctg tgggactatg 3000
gcatgagctc tagccctcat gtgctgagga acagggccca gtctggctct gtgccccagt 3060
tcaagaaggt ggtgttccag gaattcactg atggcagctt cacccagccc ctgtacaggg 3120
gggagctgaa tgagcacctg ggcctgctgg ggccttatat cagggctgag gtggaggata 3180
atattatggt gactttcagg aaccaggcca gcaggcccta ctctttctat agcagcctga 3240
tctcttatga ggaggatcag aggcaggggg ctgagcctag gaagaacttt gtgaagccca 3300
atgagactaa gacctacttc tggaaggtcc agcaccacat ggcccctacc aaggatgagt 3360
ttgactgcaa ggcctgggcc tatttctctg atgtggatct ggagaaggat gtccattctg 3420
ggctgattgg ccccctgctg gtgtgccaca ctaacactct gaatcctgcc catggcaggc 3480
aggtgactgt ccaggagttt gccctgttct tcactatctt tgatgagacc aagagctggt 3540
actttactga gaacatggag aggaactgca gagctccttg caatattcag atggaggacc 3600
ccaccttcaa ggagaattac aggttccatg ccattaatgg gtacatcatg gacaccctgc 3660
ctggcctggt gatggctcag gaccagagga tcaggtggta cctgctgagc atgggctcta 3720
atgagaatat ccacagcatc cacttctctg ggcatgtgtt cactgtgagg aagaaggagg 3780
agtacaagat ggctctgtat aatctgtacc ctggggtgtt tgaaactgtg gagatgctgc 3840
cctctaaggc tggcatctgg agggtggagt gcctgattgg ggagcacctg catgctggca 3900
tgagcaccct gttcctggtg tacagcaaca agtgccagac ccccctgggc atggcctctg 3960
gccacatcag ggacttccag atcactgcct ctggccagta tggccagtgg gcccccaagc 4020
tggccaggct gcactattct ggcagcatca atgcctggag caccaaggag cccttcagct 4080
ggatcaaggt ggacctgctg gcccccatga tcattcatgg catcaagacc cagggggcca 4140
ggcagaagtt cagctctctg tacatctctc agttcatcat catgtactct ctggatggga 4200
agaagtggca gacctacagg ggcaacagca ctggcaccct gatggtgttc tttgggaatg 4260
tggactcttc tggcatcaag cacaacatct tcaatccccc catcattgct aggtatatta 4320
ggctgcatcc cacccactac agcatcaggt ctaccctgag gatggagctg atgggctgtg 4380
acctgaactc ttgcagcatg cccctgggca tggagtctaa ggccatctct gatgcccaga 4440
ttactgccag cagctacttc accaacatgt ttgccacctg gagcccctct aaggccaggc 4500
tgcatctgca ggggaggagc aatgcctgga ggcctcaggt gaacaacccc aaggagtggc 4560
tgcaggtgga tttccagaag accatgaagg tgactggggt gaccacccag ggggtcaaga 4620
gcctgctgac cagcatgtat gtgaaggagt tcctgatcag cagcagccag gatggccacc 4680
agtggactct gttctttcag aatgggaagg tgaaggtgtt tcagggcaat caggactctt 4740
tcacccctgt ggtgaacagc ctggaccccc ccctgctgac cagatacctg aggatccacc 4800
cccagtcttg ggtgcatcag attgccctga ggatggaggt gctgggctgt gaggctcagg 4860
atctgtactg agcggccgca ataaaagatc agagctctag agatctgtgt gttggttttt 4920
tgtgtaggaa cccctagtga tggagttggc cactccctct ctgcgcgctc gctcgctcac 4980
tgaggccggg cgaccaaagg tcgcccgacg cccgggcttt gcccgggcgg cctcagtgag 5040
cgagcgagcg cgcagctgcc tgcaggggca gcttgaagga aatactaagg caaaggtact 5100
gcaagtgctc gcaacattcg cttatgcgga ttattgccgt agtgccgcga cgccgggggc 5160
aagatgcaga gattgccatg gtacaggccg tgcggttgat attgccaaaa cagagctgtg 5220
ggggagagtt gtcgagaaag agtgcggaag atgcaaaggc gtcggctatt caaggatgcc 5280
agcaagcgca gcatatcgcg ctgtgacgat gctaatccca aaccttaccc aacccacctg 5340
gtcacgcact gttaagccgc tgtatgacgc tctggtggtg caatgccaca aagaagagtc 5400
aatcgcagac aacattttga atgcggtcac acgttagcag catgattgcc acggatggca 5460
acatattaac ggcatgatat tgacttattg aataaaattg ggtaaatttg actcaacgat 5520
gggttaattc gctcgttgtg gtagtgagat gaaaagaggc ggcgcttact accgattccg 5580
cctagttggt cacttcgacg tatcgtctgg aactccaacc atcgcaggca gagaggtctg 5640
caaaatgcaa tcccgaaaca gttcgcaggt aatagttaga gcctgcataa cggtttcggg 5700
attttttata tctgcacaac aggtaagagc attgagtcga taatcgtgaa gagtcggcga 5760
gcctggttag ccagtgctct ttccgttgtg ctgaattaag cgaataccgg aagcagaacc 5820
ggatcaccaa atgcgtacag gcgtcatcgc cgcccagcaa cagcacaacc caaactgagc 5880
cgtagccact gtctgtcctg aattcattag taatagttac gctgcggcct tttacacatg 5940
accttcgtga aagcgggtgg caggaggtcg cgctaacaac ctcctgccgt tttgcccgtg 6000
catatcggtc acgaacaaat ctgattacta aacacagtag cctggatttg ttctatcagt 6060
aatcgacctt attcctaatt aaatagagca aatcccctta ttgggggtaa gacatgaaga 6120
tgccagaaaa acatgacctg ttggccgcca ttctcgcggc aaaggaacaa ggcatcgggg 6180
caatccttgc gtttgcaatg gcgtaccttc gcggcagata taatggcggt gcgtttacaa 6240
aaacagtaat cgacgcaacg atgtgcgcca ttatcgccta gttcattcgt gaccttctcg 6300
acttcgccgg actaagtagc aatctcgctt atataacgag cgtgtttatc ggctacatcg 6360
gtactgactc gattggttcg cttatcaaac gcttcgctgc taaaaaagcc ggagtagaag 6420
atggtagaaa tcaataatca acgtaaggcg ttcctcgata tgctggcgtg gtcggaggga 6480
actgataacg gacgtcagaa aaccagaaat catggttatg acgtcattgt aggcggagag 6540
ctatttactg attactccga tcaccctcgc aaacttgtca cgctaaaccc aaaactcaaa 6600
tcaacaggcg ccggacgcta ccagcttctt tcccgttggt gggatgccta ccgcaagcag 6660
cttggcctga aagacttctc tccgaaaagt caggacgctg tggcattgca gcagattaag 6720
gagcgtggcg ctttacctat gattgatcgt ggtgatatcc gtcaggcaat cgaccgttgc 6780
agcaatatct gggcttcact gccgggcgct ggttatggtc agttcgagca taaggctgac 6840
agcctgattg caaaattcaa agaagcgggc ggaacggtca gagagattga tgtatgagca 6900
gagtcaccgc gattatctcc gctctggtta tctgcatcat cgtctgcctg tcatgggctg 6960
ttaatcatta ccgtgataac gccattacct acaaagccca gcgcgacaaa aatgccagag 7020
aactgaagct ggcgaacgcg gcaattactg acatgcagat gcgtcagcgt gatgttgctg 7080
cgctcgatgc aaaatacacg aaggagttag ctgatgctaa agctgaaaat gatgctctgc 7140
gtgatgatgt tgccgctggt cgtcgtcggt tgcacatcaa agcagtctgt cagtcagtgc 7200
gtgaagccac caccgcctcc ggcgtggata atgcagcctc cccccgactg gcagacaccg 7260
ctgaacggga ttatttcacc ctcagagaga ggctgatcac tatgcaaaaa caactggaag 7320
gaacccagaa gtatattaat gagcagtgca gatagagttg cccatatcga tgggcaactc 7380
atgcaattat tgtgagcaat acacacgcgc ttccagcgga gtataaatgc ctaaagtaat 7440
aaaaccgagc aatccattta cgaatgtttg ctgggtttct gttttaacaa cattttctgc 7500
gccgccacaa attttggctg catcgacagt tttcttctgc ccaattccag aaacgaagaa 7560
atgatgggtg atggtttcct ttggtgctac tgctgccggt ttgttttgaa cagtaaacgt 7620
ctgttgagca catcctgtaa taagcagggc cagcgcagta gcgagtagca tttttttcat 7680
ggtgttattc ccgatgcttt ttgaagttcg cagaatcgta tgtgtagaaa attaaacaaa 7740
ccctaaacaa tgagttgaaa tttcatattg ttaatattta ttaatgtatg tcaggtgcga 7800
tgaatcgtca ttgtattccc ggattaacta tgtccacagc cctgacgggg aacttctctg 7860
cgggagtgtc cgggaataat taaaacgatg cacacagggt ttagcgcgta cacgtattgc 7920
attatgccaa cgccccggtg ctgacacgga agaaaccgga cgttatgatt tagcgtggaa 7980
agatttgtgt agtgttctga atgctctcag taaatagtaa tgaattatca aaggtatagt 8040
aatatctttt atgttcatgg atatttgtaa cccatcggaa aactcctgct ttagcaagat 8100
tttccctgta ttgctgaaat gtgatttctc ttgatttcaa cctatcatag gacgtttcta 8160
taagatgcgt gtttcttgag aatttaacat ttacaacctt tttaagtcct tttattaaca 8220
cggtgttatc gttttctaac acgatgtgaa tattatctgt ggctagatag taaatataat 8280
gtgagacgtt gtgacgtttt agttcagaat aaaacaattc acagtctaaa tcttttcgca 8340
cttgatcgaa tatttcttta aaaatggcaa cctgagccat tggtaaaacc ttccatgtga 8400
tacgagggcg cgtagtttgc attatcgttt ttatcgtttc aatctggtct gacctccttg 8460
tgttttgttg atgatttatg tcaaatatta ggaatgtttt cacttaatag tattggttgc 8520
gtaacaaagt gcggtcctgc tggcattctg gagggaaata caaccgacag atgtatgtaa 8580
ggccaacgtg ctcaaatctt catacagaaa gatttgaagt aatattttaa ccgctagatg 8640
aagagcaagc gcatggagcg acaaaatgaa taaagaacaa tctgctgatg atccctccgt 8700
ggatctgatt cgtgtaaaaa atatgcttaa tagcaccatt tctatgagtt accctgatgt 8760
tgtaattgca tgtatagaac ataaggtgtc tctggaagca ttcagagcaa ttgaggcagc 8820
gttggtgaag cacgataata atatgaagga ttattccctg gtggttgact gatcaccata 8880
actgctaatc attcaaacta tttagtctgt gacagagcca acacgcagtc tgtcactgtc 8940
aggaaagtgg taaaactgca actcaattac tgcaatgccc tcgtaattaa gtgaatttac 9000
aatatcgtcc tgttcggagg gaagaacgcg ggatgttcat tcttcatcac ttttaattga 9060
tgtatatgct ctcttttctg acgttagtct ccgacggcag gcttcaatga cccaggctga 9120
gaaattcccg gacccttttt gctcaagagc gatgttaatt tgttcaatca tttggttagg 9180
aaagcggatg ttgcgggttg ttgttctgcg ggttctgttc ttcgttgaca tgaggttgcc 9240
ccgtattcag tgtcgctgat ttgtattgtc tgaagttgtt tttacgttaa gttgatgcag 9300
atcaattaat acgatacctg cgtcataatt gattatttga cgtggtttga tggcctccac 9360
gcacgttgtg atatgtagat gataatcatt atcactttac gggtcctttc cggtgatccg 9420
acaggttacg gggcggcgac ctgcctgatg cggtattttc tccttacgca tctgtgcggt 9480
atttcacacc gcatacgtca aagcaaccat agtacgcgcc ctgtagcggc gcattaagcg 9540
cggcgggtgt ggtggttacg cgcagcgtga ccgctacact tgccagcgcc ttagcgcccg 9600
ctcctttcgc tttcttccct tcctttctcg ccacgttcgc cggctttccc cgtcaagctc 9660
taaatcgggg gctcccttta gggttccgat ttagtgcttt acggcacctc gaccccaaaa 9720
aacttgattt gggtgatggt tcacgtagtg ggccatcgcc ctgatagacg gtttttcgcc 9780
ctttgacgtt ggagtccacg ttctttaata gtggactctt gttccaaact ggaacaacac 9840
tcaactctat ctcgggctat tcttttgatt tagacctgca ggcatgcaag cttggcactg 9900
gccgtcgttt tacaacgtcg tgactgggaa aaccctggcg ttacccaact taatcgcctt 9960
gcagcacatc cccctttcgc cagctggcgt aatagcgaag aggcccgcac cgatcgccct 10020
tcccaacagt tgcgcagcct gaatggcgaa tgcgatttat tcaacaaagc cgccgtcccg 10080
tcaagtcagc gtaatgctct gccagtgtta caaccaatta accaattctg attagaaaaa 10140
ctcatcgagc atcaaatgaa actgcaattt attcatatca ggattatcaa taccatattt 10200
ttgaaaaagc cgtttctgta atgaaggaga aaactcaccg aggcagttcc ataggatggc 10260
aagatcctgg tatcggtctg cgattccgac tcgtccaaca tcaatacaac ctattaattt 10320
cccctcgtca aaaataaggt tatcaagtga gaaatcacca tgagtgacga ctgaatccgg 10380
tgagaatggc aaaagcttat gcatttcttt ccagacttgt tcaacaggcc agccattacg 10440
ctcgtcatca aaatcactcg catcaaccaa accgttattc attcgtgatt gcgcctgagc 10500
gagacgaaat acgcgatcgc tgttaaaagg acaattacaa acaggaatcg aatgcaaccg 10560
gcgcaggaac actgccagcg catcaacaat attttcacct gaatcaggat attcttctaa 10620
tacctggaat gctgttttcc cggggatcgc agtggtgagt aaccatgcat catcaggagt 10680
acggataaaa tgcttgatgg tcggaagagg cataaattcc gtcagccagt ttagtctgac 10740
catctcatct gtaacatcat tggcaacgct acctttgcca tgtttcagaa acaactctgg 10800
cgcatcgggc ttcccataca atcgatagat tgtcgcacct gattgcccga cattatcgcg 10860
agcccattta tacccatata aatcagcatc catgttggaa tttaatcgcg gcttcgagca 10920
agacgtttcc cgttgaatat ggctcataac accccttgta ttactgttta tgtaagcaga 10980
cagttttatt gttcatgatg atatattttt atcttgtgca atgtaacatc agagattttg 11040
agacacaacg tggctttgtt gaataaatcg aacttttgct gagttgaagg atcagatcac 11100
gcatcttccc gacaacgcag accgttccgt ggcaaagcaa aagttcaaaa tcaccaactg 11160
gtccacctac aacaaagctc tcatcaaccg tggctccctc actttctggc tggatgatgg 11220
ggcgattcag gcctggtatg agtcagcaac accttcttca cgaggcagac ctctcgacgg 11280
agttccactg agcgtcagac cccgtagaaa agatcaaagg atcttcttga gatccttttt 11340
ttctgcgcgt aatctgctgc ttgcaaacaa aaaaaccacc gctaccagcg gtggtttgtt 11400
tgccggatca agagctacca actctttttc cgaaggtaac tggcttcagc agagcgcaga 11460
taccaaatac tgttcttcta gtgtagccgt agttaggcca ccacttcaag aactctgtag 11520
caccgcctac atacctcgct ctgctaatcc tgttaccagt ggctgctgcc agtggcgata 11580
agtcgtgtct taccgggttg gactcaagac gatagttacc ggataaggcg cagcggtcgg 11640
gctgaacggg gggttcgtgc acacagccca gcttggagcg aacgacctac accgaactga 11700
gatacctaca gcgtgagcta tgagaaagcg ccacgcttcc cgaagggaga aaggcggaca 11760
ggtatccggt aagcggcagg gtcggaacag gagagcgcac gagggagctt ccagggggaa 11820
acgcctggta tctttatagt cctgtcgggt ttcgccacct ctgacttgag cgtcgatttt 11880
tgtgatgctc gtcagggggg cggagcctat ggaaaaacgc cagcaacgcg gcctttttac 11940
ggttcctggc cttttgctgg ccttttgctc acatgt 11976
<210> 25
<211> 1457
<212> PRT
<213> Искуственная последовательность
<220>
<223> Описание искуственной последовательности: Пептид FVIII
<400> 25
Met Gln Ile Glu Leu Ser Thr Cys Phe Phe Leu Cys Leu Leu Arg Phe
1 5 10 15
Cys Phe Ser Ala Thr Arg Arg Tyr Tyr Leu Gly Ala Val Glu Leu Ser
20 25 30
Trp Asp Tyr Met Gln Ser Asp Leu Gly Glu Leu Pro Val Asp Ala Arg
35 40 45
Phe Pro Pro Arg Val Pro Lys Ser Phe Pro Phe Asn Thr Ser Val Val
50 55 60
Tyr Lys Lys Thr Leu Phe Val Glu Phe Thr Asp His Leu Phe Asn Ile
65 70 75 80
Ala Lys Pro Arg Pro Pro Trp Met Gly Leu Leu Gly Pro Thr Ile Gln
85 90 95
Ala Glu Val Tyr Asp Thr Val Val Ile Thr Leu Lys Asn Met Ala Ser
100 105 110
His Pro Val Ser Leu His Ala Val Gly Val Ser Tyr Trp Lys Ala Ser
115 120 125
Glu Gly Ala Glu Tyr Asp Asp Gln Thr Ser Gln Arg Glu Lys Glu Asp
130 135 140
Asp Lys Val Phe Pro Gly Gly Ser His Thr Tyr Val Trp Gln Val Leu
145 150 155 160
Lys Glu Asn Gly Pro Met Ala Ser Asp Pro Leu Cys Leu Thr Tyr Ser
165 170 175
Tyr Leu Ser His Val Asp Leu Val Lys Asp Leu Asn Ser Gly Leu Ile
180 185 190
Gly Ala Leu Leu Val Cys Arg Glu Gly Ser Leu Ala Lys Glu Lys Thr
195 200 205
Gln Thr Leu His Lys Phe Ile Leu Leu Phe Ala Val Phe Asp Glu Gly
210 215 220
Lys Ser Trp His Ser Glu Thr Lys Asn Ser Leu Met Gln Asp Arg Asp
225 230 235 240
Ala Ala Ser Ala Arg Ala Trp Pro Lys Met His Thr Val Asn Gly Tyr
245 250 255
Val Asn Arg Ser Leu Pro Gly Leu Ile Gly Cys His Arg Lys Ser Val
260 265 270
Tyr Trp His Val Ile Gly Met Gly Thr Thr Pro Glu Val His Ser Ile
275 280 285
Phe Leu Glu Gly His Thr Phe Leu Val Arg Asn His Arg Gln Ala Ser
290 295 300
Leu Glu Ile Ser Pro Ile Thr Phe Leu Thr Ala Gln Thr Leu Leu Met
305 310 315 320
Asp Leu Gly Gln Phe Leu Leu Phe Cys His Ile Ser Ser His Gln His
325 330 335
Asp Gly Met Glu Ala Tyr Val Lys Val Asp Ser Cys Pro Glu Glu Pro
340 345 350
Gln Leu Arg Met Lys Asn Asn Glu Glu Ala Glu Asp Tyr Asp Asp Asp
355 360 365
Leu Thr Asp Ser Glu Met Asp Val Val Arg Phe Asp Asp Asp Asn Ser
370 375 380
Pro Ser Phe Ile Gln Ile Arg Ser Val Ala Lys Lys His Pro Lys Thr
385 390 395 400
Trp Val His Tyr Ile Ala Ala Glu Glu Glu Asp Trp Asp Tyr Ala Pro
405 410 415
Leu Val Leu Ala Pro Asp Asp Arg Ser Tyr Lys Ser Gln Tyr Leu Asn
420 425 430
Asn Gly Pro Gln Arg Ile Gly Arg Lys Tyr Lys Lys Val Arg Phe Met
435 440 445
Ala Tyr Thr Asp Glu Thr Phe Lys Thr Arg Glu Ala Ile Gln His Glu
450 455 460
Ser Gly Ile Leu Gly Pro Leu Leu Tyr Gly Glu Val Gly Asp Thr Leu
465 470 475 480
Leu Ile Ile Phe Lys Asn Gln Ala Ser Arg Pro Tyr Asn Ile Tyr Pro
485 490 495
His Gly Ile Thr Asp Val Arg Pro Leu Tyr Ser Arg Arg Leu Pro Lys
500 505 510
Gly Val Lys His Leu Lys Asp Phe Pro Ile Leu Pro Gly Glu Ile Phe
515 520 525
Lys Tyr Lys Trp Thr Val Thr Val Glu Asp Gly Pro Thr Lys Ser Asp
530 535 540
Pro Arg Cys Leu Thr Arg Tyr Tyr Ser Ser Phe Val Asn Met Glu Arg
545 550 555 560
Asp Leu Ala Ser Gly Leu Ile Gly Pro Leu Leu Ile Cys Tyr Lys Glu
565 570 575
Ser Val Asp Gln Arg Gly Asn Gln Ile Met Ser Asp Lys Arg Asn Val
580 585 590
Ile Leu Phe Ser Val Phe Asp Glu Asn Arg Ser Trp Tyr Leu Thr Glu
595 600 605
Asn Ile Gln Arg Phe Leu Pro Asn Pro Ala Gly Val Gln Leu Glu Asp
610 615 620
Pro Glu Phe Gln Ala Ser Asn Ile Met His Ser Ile Asn Gly Tyr Val
625 630 635 640
Phe Asp Ser Leu Gln Leu Ser Val Cys Leu His Glu Val Ala Tyr Trp
645 650 655
Tyr Ile Leu Ser Ile Gly Ala Gln Thr Asp Phe Leu Ser Val Phe Phe
660 665 670
Ser Gly Tyr Thr Phe Lys His Lys Met Val Tyr Glu Asp Thr Leu Thr
675 680 685
Leu Phe Pro Phe Ser Gly Glu Thr Val Phe Met Ser Met Glu Asn Pro
690 695 700
Gly Leu Trp Ile Leu Gly Cys His Asn Ser Asp Phe Arg Asn Arg Gly
705 710 715 720
Met Thr Ala Leu Leu Lys Val Ser Ser Cys Asp Lys Asn Thr Gly Asp
725 730 735
Tyr Tyr Glu Asp Ser Tyr Glu Asp Ile Ser Ala Tyr Leu Leu Ser Lys
740 745 750
Asn Asn Ala Ile Glu Pro Arg Ser Phe Ser Gln Asn Pro Pro Val Leu
755 760 765
Lys Arg His Gln Arg Glu Ile Thr Arg Thr Thr Leu Gln Ser Asp Gln
770 775 780
Glu Glu Ile Asp Tyr Asp Asp Thr Ile Ser Val Glu Met Lys Lys Glu
785 790 795 800
Asp Phe Asp Ile Tyr Asp Glu Asp Glu Asn Gln Ser Pro Arg Ser Phe
805 810 815
Gln Lys Lys Thr Arg His Tyr Phe Ile Ala Ala Val Glu Arg Leu Trp
820 825 830
Asp Tyr Gly Met Ser Ser Ser Pro His Val Leu Arg Asn Arg Ala Gln
835 840 845
Ser Gly Ser Val Pro Gln Phe Lys Lys Val Val Phe Gln Glu Phe Thr
850 855 860
Asp Gly Ser Phe Thr Gln Pro Leu Tyr Arg Gly Glu Leu Asn Glu His
865 870 875 880
Leu Gly Leu Leu Gly Pro Tyr Ile Arg Ala Glu Val Glu Asp Asn Ile
885 890 895
Met Val Thr Phe Arg Asn Gln Ala Ser Arg Pro Tyr Ser Phe Tyr Ser
900 905 910
Ser Leu Ile Ser Tyr Glu Glu Asp Gln Arg Gln Gly Ala Glu Pro Arg
915 920 925
Lys Asn Phe Val Lys Pro Asn Glu Thr Lys Thr Tyr Phe Trp Lys Val
930 935 940
Gln His His Met Ala Pro Thr Lys Asp Glu Phe Asp Cys Lys Ala Trp
945 950 955 960
Ala Tyr Phe Ser Asp Val Asp Leu Glu Lys Asp Val His Ser Gly Leu
965 970 975
Ile Gly Pro Leu Leu Val Cys His Thr Asn Thr Leu Asn Pro Ala His
980 985 990
Gly Arg Gln Val Thr Val Gln Glu Phe Ala Leu Phe Phe Thr Ile Phe
995 1000 1005
Asp Glu Thr Lys Ser Trp Tyr Phe Thr Glu Asn Met Glu Arg Asn
1010 1015 1020
Cys Arg Ala Pro Cys Asn Ile Gln Met Glu Asp Pro Thr Phe Lys
1025 1030 1035
Glu Asn Tyr Arg Phe His Ala Ile Asn Gly Tyr Ile Met Asp Thr
1040 1045 1050
Leu Pro Gly Leu Val Met Ala Gln Asp Gln Arg Ile Arg Trp Tyr
1055 1060 1065
Leu Leu Ser Met Gly Ser Asn Glu Asn Ile His Ser Ile His Phe
1070 1075 1080
Ser Gly His Val Phe Thr Val Arg Lys Lys Glu Glu Tyr Lys Met
1085 1090 1095
Ala Leu Tyr Asn Leu Tyr Pro Gly Val Phe Glu Thr Val Glu Met
1100 1105 1110
Leu Pro Ser Lys Ala Gly Ile Trp Arg Val Glu Cys Leu Ile Gly
1115 1120 1125
Glu His Leu His Ala Gly Met Ser Thr Leu Phe Leu Val Tyr Ser
1130 1135 1140
Asn Lys Cys Gln Thr Pro Leu Gly Met Ala Ser Gly His Ile Arg
1145 1150 1155
Asp Phe Gln Ile Thr Ala Ser Gly Gln Tyr Gly Gln Trp Ala Pro
1160 1165 1170
Lys Leu Ala Arg Leu His Tyr Ser Gly Ser Ile Asn Ala Trp Ser
1175 1180 1185
Thr Lys Glu Pro Phe Ser Trp Ile Lys Val Asp Leu Leu Ala Pro
1190 1195 1200
Met Ile Ile His Gly Ile Lys Thr Gln Gly Ala Arg Gln Lys Phe
1205 1210 1215
Ser Ser Leu Tyr Ile Ser Gln Phe Ile Ile Met Tyr Ser Leu Asp
1220 1225 1230
Gly Lys Lys Trp Gln Thr Tyr Arg Gly Asn Ser Thr Gly Thr Leu
1235 1240 1245
Met Val Phe Phe Gly Asn Val Asp Ser Ser Gly Ile Lys His Asn
1250 1255 1260
Ile Phe Asn Pro Pro Ile Ile Ala Arg Tyr Ile Arg Leu His Pro
1265 1270 1275
Thr His Tyr Ser Ile Arg Ser Thr Leu Arg Met Glu Leu Met Gly
1280 1285 1290
Cys Asp Leu Asn Ser Cys Ser Met Pro Leu Gly Met Glu Ser Lys
1295 1300 1305
Ala Ile Ser Asp Ala Gln Ile Thr Ala Ser Ser Tyr Phe Thr Asn
1310 1315 1320
Met Phe Ala Thr Trp Ser Pro Ser Lys Ala Arg Leu His Leu Gln
1325 1330 1335
Gly Arg Ser Asn Ala Trp Arg Pro Gln Val Asn Asn Pro Lys Glu
1340 1345 1350
Trp Leu Gln Val Asp Phe Gln Lys Thr Met Lys Val Thr Gly Val
1355 1360 1365
Thr Thr Gln Gly Val Lys Ser Leu Leu Thr Ser Met Tyr Val Lys
1370 1375 1380
Glu Phe Leu Ile Ser Ser Ser Gln Asp Gly His Gln Trp Thr Leu
1385 1390 1395
Phe Phe Gln Asn Gly Lys Val Lys Val Phe Gln Gly Asn Gln Asp
1400 1405 1410
Ser Phe Thr Pro Val Val Asn Ser Leu Asp Pro Pro Leu Leu Thr
1415 1420 1425
Arg Tyr Leu Arg Ile His Pro Gln Ser Trp Val His Gln Ile Ala
1430 1435 1440
Leu Arg Met Glu Val Leu Gly Cys Glu Ala Gln Asp Leu Tyr
1445 1450 1455
<210> 26
<211> 2351
<212> PRT
<213> Искуственная последовательность
<220>
<223> Описание искуственной последовательности: Пептид FVIII
<400> 26
Met Gln Ile Glu Leu Ser Thr Cys Phe Phe Leu Cys Leu Leu Arg Phe
1 5 10 15
Cys Phe Ser Ala Thr Arg Arg Tyr Tyr Leu Gly Ala Val Glu Leu Ser
20 25 30
Trp Asp Tyr Met Gln Ser Asp Leu Gly Glu Leu Pro Val Asp Ala Arg
35 40 45
Phe Pro Pro Arg Val Pro Lys Ser Phe Pro Phe Asn Thr Ser Val Val
50 55 60
Tyr Lys Lys Thr Leu Phe Val Glu Phe Thr Asp His Leu Phe Asn Ile
65 70 75 80
Ala Lys Pro Arg Pro Pro Trp Met Gly Leu Leu Gly Pro Thr Ile Gln
85 90 95
Ala Glu Val Tyr Asp Thr Val Val Ile Thr Leu Lys Asn Met Ala Ser
100 105 110
His Pro Val Ser Leu His Ala Val Gly Val Ser Tyr Trp Lys Ala Ser
115 120 125
Glu Gly Ala Glu Tyr Asp Asp Gln Thr Ser Gln Arg Glu Lys Glu Asp
130 135 140
Asp Lys Val Phe Pro Gly Gly Ser His Thr Tyr Val Trp Gln Val Leu
145 150 155 160
Lys Glu Asn Gly Pro Met Ala Ser Asp Pro Leu Cys Leu Thr Tyr Ser
165 170 175
Tyr Leu Ser His Val Asp Leu Val Lys Asp Leu Asn Ser Gly Leu Ile
180 185 190
Gly Ala Leu Leu Val Cys Arg Glu Gly Ser Leu Ala Lys Glu Lys Thr
195 200 205
Gln Thr Leu His Lys Phe Ile Leu Leu Phe Ala Val Phe Asp Glu Gly
210 215 220
Lys Ser Trp His Ser Glu Thr Lys Asn Ser Leu Met Gln Asp Arg Asp
225 230 235 240
Ala Ala Ser Ala Arg Ala Trp Pro Lys Met His Thr Val Asn Gly Tyr
245 250 255
Val Asn Arg Ser Leu Pro Gly Leu Ile Gly Cys His Arg Lys Ser Val
260 265 270
Tyr Trp His Val Ile Gly Met Gly Thr Thr Pro Glu Val His Ser Ile
275 280 285
Phe Leu Glu Gly His Thr Phe Leu Val Arg Asn His Arg Gln Ala Ser
290 295 300
Leu Glu Ile Ser Pro Ile Thr Phe Leu Thr Ala Gln Thr Leu Leu Met
305 310 315 320
Asp Leu Gly Gln Phe Leu Leu Phe Cys His Ile Ser Ser His Gln His
325 330 335
Asp Gly Met Glu Ala Tyr Val Lys Val Asp Ser Cys Pro Glu Glu Pro
340 345 350
Gln Leu Arg Met Lys Asn Asn Glu Glu Ala Glu Asp Tyr Asp Asp Asp
355 360 365
Leu Thr Asp Ser Glu Met Asp Val Val Arg Phe Asp Asp Asp Asn Ser
370 375 380
Pro Ser Phe Ile Gln Ile Arg Ser Val Ala Lys Lys His Pro Lys Thr
385 390 395 400
Trp Val His Tyr Ile Ala Ala Glu Glu Glu Asp Trp Asp Tyr Ala Pro
405 410 415
Leu Val Leu Ala Pro Asp Asp Arg Ser Tyr Lys Ser Gln Tyr Leu Asn
420 425 430
Asn Gly Pro Gln Arg Ile Gly Arg Lys Tyr Lys Lys Val Arg Phe Met
435 440 445
Ala Tyr Thr Asp Glu Thr Phe Lys Thr Arg Glu Ala Ile Gln His Glu
450 455 460
Ser Gly Ile Leu Gly Pro Leu Leu Tyr Gly Glu Val Gly Asp Thr Leu
465 470 475 480
Leu Ile Ile Phe Lys Asn Gln Ala Ser Arg Pro Tyr Asn Ile Tyr Pro
485 490 495
His Gly Ile Thr Asp Val Arg Pro Leu Tyr Ser Arg Arg Leu Pro Lys
500 505 510
Gly Val Lys His Leu Lys Asp Phe Pro Ile Leu Pro Gly Glu Ile Phe
515 520 525
Lys Tyr Lys Trp Thr Val Thr Val Glu Asp Gly Pro Thr Lys Ser Asp
530 535 540
Pro Arg Cys Leu Thr Arg Tyr Tyr Ser Ser Phe Val Asn Met Glu Arg
545 550 555 560
Asp Leu Ala Ser Gly Leu Ile Gly Pro Leu Leu Ile Cys Tyr Lys Glu
565 570 575
Ser Val Asp Gln Arg Gly Asn Gln Ile Met Ser Asp Lys Arg Asn Val
580 585 590
Ile Leu Phe Ser Val Phe Asp Glu Asn Arg Ser Trp Tyr Leu Thr Glu
595 600 605
Asn Ile Gln Arg Phe Leu Pro Asn Pro Ala Gly Val Gln Leu Glu Asp
610 615 620
Pro Glu Phe Gln Ala Ser Asn Ile Met His Ser Ile Asn Gly Tyr Val
625 630 635 640
Phe Asp Ser Leu Gln Leu Ser Val Cys Leu His Glu Val Ala Tyr Trp
645 650 655
Tyr Ile Leu Ser Ile Gly Ala Gln Thr Asp Phe Leu Ser Val Phe Phe
660 665 670
Ser Gly Tyr Thr Phe Lys His Lys Met Val Tyr Glu Asp Thr Leu Thr
675 680 685
Leu Phe Pro Phe Ser Gly Glu Thr Val Phe Met Ser Met Glu Asn Pro
690 695 700
Gly Leu Trp Ile Leu Gly Cys His Asn Ser Asp Phe Arg Asn Arg Gly
705 710 715 720
Met Thr Ala Leu Leu Lys Val Ser Ser Cys Asp Lys Asn Thr Gly Asp
725 730 735
Tyr Tyr Glu Asp Ser Tyr Glu Asp Ile Ser Ala Tyr Leu Leu Ser Lys
740 745 750
Asn Asn Ala Ile Glu Pro Arg Ser Phe Ser Gln Asn Ser Arg His Pro
755 760 765
Ser Thr Arg Gln Lys Gln Phe Asn Ala Thr Thr Ile Pro Glu Asn Asp
770 775 780
Ile Glu Lys Thr Asp Pro Trp Phe Ala His Arg Thr Pro Met Pro Lys
785 790 795 800
Ile Gln Asn Val Ser Ser Ser Asp Leu Leu Met Leu Leu Arg Gln Ser
805 810 815
Pro Thr Pro His Gly Leu Ser Leu Ser Asp Leu Gln Glu Ala Lys Tyr
820 825 830
Glu Thr Phe Ser Asp Asp Pro Ser Pro Gly Ala Ile Asp Ser Asn Asn
835 840 845
Ser Leu Ser Glu Met Thr His Phe Arg Pro Gln Leu His His Ser Gly
850 855 860
Asp Met Val Phe Thr Pro Glu Ser Gly Leu Gln Leu Arg Leu Asn Glu
865 870 875 880
Lys Leu Gly Thr Thr Ala Ala Thr Glu Leu Lys Lys Leu Asp Phe Lys
885 890 895
Val Ser Ser Thr Ser Asn Asn Leu Ile Ser Thr Ile Pro Ser Asp Asn
900 905 910
Leu Ala Ala Gly Thr Asp Asn Thr Ser Ser Leu Gly Pro Pro Ser Met
915 920 925
Pro Val His Tyr Asp Ser Gln Leu Asp Thr Thr Leu Phe Gly Lys Lys
930 935 940
Ser Ser Pro Leu Thr Glu Ser Gly Gly Pro Leu Ser Leu Ser Glu Glu
945 950 955 960
Asn Asn Asp Ser Lys Leu Leu Glu Ser Gly Leu Met Asn Ser Gln Glu
965 970 975
Ser Ser Trp Gly Lys Asn Val Ser Ser Thr Glu Ser Gly Arg Leu Phe
980 985 990
Lys Gly Lys Arg Ala His Gly Pro Ala Leu Leu Thr Lys Asp Asn Ala
995 1000 1005
Leu Phe Lys Val Ser Ile Ser Leu Leu Lys Thr Asn Lys Thr Ser
1010 1015 1020
Asn Asn Ser Ala Thr Asn Arg Lys Thr His Ile Asp Gly Pro Ser
1025 1030 1035
Leu Leu Ile Glu Asn Ser Pro Ser Val Trp Gln Asn Ile Leu Glu
1040 1045 1050
Ser Asp Thr Glu Phe Lys Lys Val Thr Pro Leu Ile His Asp Arg
1055 1060 1065
Met Leu Met Asp Lys Asn Ala Thr Ala Leu Arg Leu Asn His Met
1070 1075 1080
Ser Asn Lys Thr Thr Ser Ser Lys Asn Met Glu Met Val Gln Gln
1085 1090 1095
Lys Lys Glu Gly Pro Ile Pro Pro Asp Ala Gln Asn Pro Asp Met
1100 1105 1110
Ser Phe Phe Lys Met Leu Phe Leu Pro Glu Ser Ala Arg Trp Ile
1115 1120 1125
Gln Arg Thr His Gly Lys Asn Ser Leu Asn Ser Gly Gln Gly Pro
1130 1135 1140
Ser Pro Lys Gln Leu Val Ser Leu Gly Pro Glu Lys Ser Val Glu
1145 1150 1155
Gly Gln Asn Phe Leu Ser Glu Lys Asn Lys Val Val Val Gly Lys
1160 1165 1170
Gly Glu Phe Thr Lys Asp Val Gly Leu Lys Glu Met Val Phe Pro
1175 1180 1185
Ser Ser Arg Asn Leu Phe Leu Thr Asn Leu Asp Asn Leu His Glu
1190 1195 1200
Asn Asn Thr His Asn Gln Glu Lys Lys Ile Gln Glu Glu Ile Glu
1205 1210 1215
Lys Lys Glu Thr Leu Ile Gln Glu Asn Val Val Leu Pro Gln Ile
1220 1225 1230
His Thr Val Thr Gly Thr Lys Asn Phe Met Lys Asn Leu Phe Leu
1235 1240 1245
Leu Ser Thr Arg Gln Asn Val Glu Gly Ser Tyr Asp Gly Ala Tyr
1250 1255 1260
Ala Pro Val Leu Gln Asp Phe Arg Ser Leu Asn Asp Ser Thr Asn
1265 1270 1275
Arg Thr Lys Lys His Thr Ala His Phe Ser Lys Lys Gly Glu Glu
1280 1285 1290
Glu Asn Leu Glu Gly Leu Gly Asn Gln Thr Lys Gln Ile Val Glu
1295 1300 1305
Lys Tyr Ala Cys Thr Thr Arg Ile Ser Pro Asn Thr Ser Gln Gln
1310 1315 1320
Asn Phe Val Thr Gln Arg Ser Lys Arg Ala Leu Lys Gln Phe Arg
1325 1330 1335
Leu Pro Leu Glu Glu Thr Glu Leu Glu Lys Arg Ile Ile Val Asp
1340 1345 1350
Asp Thr Ser Thr Gln Trp Ser Lys Asn Met Lys His Leu Thr Pro
1355 1360 1365
Ser Thr Leu Thr Gln Ile Asp Tyr Asn Glu Lys Glu Lys Gly Ala
1370 1375 1380
Ile Thr Gln Ser Pro Leu Ser Asp Cys Leu Thr Arg Ser His Ser
1385 1390 1395
Ile Pro Gln Ala Asn Arg Ser Pro Leu Pro Ile Ala Lys Val Ser
1400 1405 1410
Ser Phe Pro Ser Ile Arg Pro Ile Tyr Leu Thr Arg Val Leu Phe
1415 1420 1425
Gln Asp Asn Ser Ser His Leu Pro Ala Ala Ser Tyr Arg Lys Lys
1430 1435 1440
Asp Ser Gly Val Gln Glu Ser Ser His Phe Leu Gln Gly Ala Lys
1445 1450 1455
Lys Asn Asn Leu Ser Leu Ala Ile Leu Thr Leu Glu Met Thr Gly
1460 1465 1470
Asp Gln Arg Glu Val Gly Ser Leu Gly Thr Ser Ala Thr Asn Ser
1475 1480 1485
Val Thr Tyr Lys Lys Val Glu Asn Thr Val Leu Pro Lys Pro Asp
1490 1495 1500
Leu Pro Lys Thr Ser Gly Lys Val Glu Leu Leu Pro Lys Val His
1505 1510 1515
Ile Tyr Gln Lys Asp Leu Phe Pro Thr Glu Thr Ser Asn Gly Ser
1520 1525 1530
Pro Gly His Leu Asp Leu Val Glu Gly Ser Leu Leu Gln Gly Thr
1535 1540 1545
Glu Gly Ala Ile Lys Trp Asn Glu Ala Asn Arg Pro Gly Lys Val
1550 1555 1560
Pro Phe Leu Arg Val Ala Thr Glu Ser Ser Ala Lys Thr Pro Ser
1565 1570 1575
Lys Leu Leu Asp Pro Leu Ala Trp Asp Asn His Tyr Gly Thr Gln
1580 1585 1590
Ile Pro Lys Glu Glu Trp Lys Ser Gln Glu Lys Ser Pro Glu Lys
1595 1600 1605
Thr Ala Phe Lys Lys Lys Asp Thr Ile Leu Ser Leu Asn Ala Cys
1610 1615 1620
Glu Ser Asn His Ala Ile Ala Ala Ile Asn Glu Gly Gln Asn Lys
1625 1630 1635
Pro Glu Ile Glu Val Thr Trp Ala Lys Gln Gly Arg Thr Glu Arg
1640 1645 1650
Leu Cys Ser Gln Asn Pro Pro Val Leu Lys Arg His Gln Arg Glu
1655 1660 1665
Ile Thr Arg Thr Thr Leu Gln Ser Asp Gln Glu Glu Ile Asp Tyr
1670 1675 1680
Asp Asp Thr Ile Ser Val Glu Met Lys Lys Glu Asp Phe Asp Ile
1685 1690 1695
Tyr Asp Glu Asp Glu Asn Gln Ser Pro Arg Ser Phe Gln Lys Lys
1700 1705 1710
Thr Arg His Tyr Phe Ile Ala Ala Val Glu Arg Leu Trp Asp Tyr
1715 1720 1725
Gly Met Ser Ser Ser Pro His Val Leu Arg Asn Arg Ala Gln Ser
1730 1735 1740
Gly Ser Val Pro Gln Phe Lys Lys Val Val Phe Gln Glu Phe Thr
1745 1750 1755
Asp Gly Ser Phe Thr Gln Pro Leu Tyr Arg Gly Glu Leu Asn Glu
1760 1765 1770
His Leu Gly Leu Leu Gly Pro Tyr Ile Arg Ala Glu Val Glu Asp
1775 1780 1785
Asn Ile Met Val Thr Phe Arg Asn Gln Ala Ser Arg Pro Tyr Ser
1790 1795 1800
Phe Tyr Ser Ser Leu Ile Ser Tyr Glu Glu Asp Gln Arg Gln Gly
1805 1810 1815
Ala Glu Pro Arg Lys Asn Phe Val Lys Pro Asn Glu Thr Lys Thr
1820 1825 1830
Tyr Phe Trp Lys Val Gln His His Met Ala Pro Thr Lys Asp Glu
1835 1840 1845
Phe Asp Cys Lys Ala Trp Ala Tyr Phe Ser Asp Val Asp Leu Glu
1850 1855 1860
Lys Asp Val His Ser Gly Leu Ile Gly Pro Leu Leu Val Cys His
1865 1870 1875
Thr Asn Thr Leu Asn Pro Ala His Gly Arg Gln Val Thr Val Gln
1880 1885 1890
Glu Phe Ala Leu Phe Phe Thr Ile Phe Asp Glu Thr Lys Ser Trp
1895 1900 1905
Tyr Phe Thr Glu Asn Met Glu Arg Asn Cys Arg Ala Pro Cys Asn
1910 1915 1920
Ile Gln Met Glu Asp Pro Thr Phe Lys Glu Asn Tyr Arg Phe His
1925 1930 1935
Ala Ile Asn Gly Tyr Ile Met Asp Thr Leu Pro Gly Leu Val Met
1940 1945 1950
Ala Gln Asp Gln Arg Ile Arg Trp Tyr Leu Leu Ser Met Gly Ser
1955 1960 1965
Asn Glu Asn Ile His Ser Ile His Phe Ser Gly His Val Phe Thr
1970 1975 1980
Val Arg Lys Lys Glu Glu Tyr Lys Met Ala Leu Tyr Asn Leu Tyr
1985 1990 1995
Pro Gly Val Phe Glu Thr Val Glu Met Leu Pro Ser Lys Ala Gly
2000 2005 2010
Ile Trp Arg Val Glu Cys Leu Ile Gly Glu His Leu His Ala Gly
2015 2020 2025
Met Ser Thr Leu Phe Leu Val Tyr Ser Asn Lys Cys Gln Thr Pro
2030 2035 2040
Leu Gly Met Ala Ser Gly His Ile Arg Asp Phe Gln Ile Thr Ala
2045 2050 2055
Ser Gly Gln Tyr Gly Gln Trp Ala Pro Lys Leu Ala Arg Leu His
2060 2065 2070
Tyr Ser Gly Ser Ile Asn Ala Trp Ser Thr Lys Glu Pro Phe Ser
2075 2080 2085
Trp Ile Lys Val Asp Leu Leu Ala Pro Met Ile Ile His Gly Ile
2090 2095 2100
Lys Thr Gln Gly Ala Arg Gln Lys Phe Ser Ser Leu Tyr Ile Ser
2105 2110 2115
Gln Phe Ile Ile Met Tyr Ser Leu Asp Gly Lys Lys Trp Gln Thr
2120 2125 2130
Tyr Arg Gly Asn Ser Thr Gly Thr Leu Met Val Phe Phe Gly Asn
2135 2140 2145
Val Asp Ser Ser Gly Ile Lys His Asn Ile Phe Asn Pro Pro Ile
2150 2155 2160
Ile Ala Arg Tyr Ile Arg Leu His Pro Thr His Tyr Ser Ile Arg
2165 2170 2175
Ser Thr Leu Arg Met Glu Leu Met Gly Cys Asp Leu Asn Ser Cys
2180 2185 2190
Ser Met Pro Leu Gly Met Glu Ser Lys Ala Ile Ser Asp Ala Gln
2195 2200 2205
Ile Thr Ala Ser Ser Tyr Phe Thr Asn Met Phe Ala Thr Trp Ser
2210 2215 2220
Pro Ser Lys Ala Arg Leu His Leu Gln Gly Arg Ser Asn Ala Trp
2225 2230 2235
Arg Pro Gln Val Asn Asn Pro Lys Glu Trp Leu Gln Val Asp Phe
2240 2245 2250
Gln Lys Thr Met Lys Val Thr Gly Val Thr Thr Gln Gly Val Lys
2255 2260 2265
Ser Leu Leu Thr Ser Met Tyr Val Lys Glu Phe Leu Ile Ser Ser
2270 2275 2280
Ser Gln Asp Gly His Gln Trp Thr Leu Phe Phe Gln Asn Gly Lys
2285 2290 2295
Val Lys Val Phe Gln Gly Asn Gln Asp Ser Phe Thr Pro Val Val
2300 2305 2310
Asn Ser Leu Asp Pro Pro Leu Leu Thr Arg Tyr Leu Arg Ile His
2315 2320 2325
Pro Gln Ser Trp Val His Gln Ile Ala Leu Arg Met Glu Val Leu
2330 2335 2340
Gly Cys Glu Ala Gln Asp Leu Tyr
2345 2350
<210> 27
<211> 736
<212> PRT
<213> Искуственная последовательность
<220>
<223> Описание искуственной последовательности: AAV Капсид
<400> 27
Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser
1 5 10 15
Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Ala Leu Gln Pro Gly Ala Pro Lys Pro
20 25 30
Lys Ala Asn Gln Gln His Gln Asp Asn Ala Arg Gly Leu Val Leu Pro
35 40 45
Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Gly Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro
50 55 60
Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp
65 70 75 80
Gln Gln Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala
85 90 95
Asp Ala Glu Phe Gln Glu Arg Leu Lys Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly
100 105 110
Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Leu Leu Glu Pro
115 120 125
Leu Gly Leu Val Glu Glu Ala Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg
130 135 140
Pro Val Asp Gln Ser Pro Gln Glu Pro Asp Ser Ser Ser Gly Val Gly
145 150 155 160
Lys Ser Gly Lys Gln Pro Ala Arg Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gln Thr
165 170 175
Gly Asp Ser Glu Ser Val Pro Asp Pro Gln Pro Leu Gly Glu Pro Pro
180 185 190
Ala Ala Pro Thr Ser Leu Gly Ser Asn Thr Met Ala Ser Gly Gly Gly
195 200 205
Ala Pro Met Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Asn Ser
210 215 220
Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Gln Trp Leu Gly Asp Arg Val Ile
225 230 235 240
Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu
245 250 255
Tyr Lys Gln Ile Ser Ser Gln Ser Gly Ala Ser Asn Asp Asn His Tyr
260 265 270
Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn Arg Phe His
275 280 285
Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gln Arg Leu Ile Asn Asn Asn Trp
290 295 300
Gly Phe Arg Pro Lys Lys Leu Ser Phe Lys Leu Phe Asn Ile Gln Val
305 310 315 320
Lys Glu Val Thr Gln Asn Asp Gly Thr Thr Thr Ile Ala Asn Asn Leu
325 330 335
Thr Ser Thr Val Gln Val Phe Thr Asp Ser Glu Tyr Gln Leu Pro Tyr
340 345 350
Val Leu Gly Ser Ala His Gln Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro Ala Asp
355 360 365
Val Phe Met Val Pro Gln Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asn Gly Ser
370 375 380
Gln Ala Val Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro Ser
385 390 395 400
Gln Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Gln Phe Ser Tyr Thr Phe Glu
405 410 415
Asp Val Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gln Ser Leu Asp Arg
420 425 430
Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gln Tyr Leu Tyr Tyr Leu Asn Arg Thr
435 440 445
Gln Gly Thr Thr Ser Gly Thr Thr Asn Gln Ser Arg Leu Leu Phe Ser
450 455 460
Gln Ala Gly Pro Gln Ser Met Ser Leu Gln Ala Arg Asn Trp Leu Pro
465 470 475 480
Gly Pro Cys Tyr Arg Gln Gln Arg Leu Ser Lys Thr Ala Asn Asp Asn
485 490 495
Asn Asn Ser Asn Phe Pro Trp Thr Ala Ala Ser Lys Tyr His Leu Asn
500 505 510
Gly Arg Asp Ser Leu Val Asn Pro Gly Pro Ala Met Ala Ser His Lys
515 520 525
Asp Asp Glu Glu Lys Phe Phe Pro Met His Gly Asn Leu Ile Phe Gly
530 535 540
Lys Glu Gly Thr Thr Ala Ser Asn Ala Glu Leu Asp Asn Val Met Ile
545 550 555 560
Thr Asp Glu Glu Glu Ile Arg Thr Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu Gln
565 570 575
Tyr Gly Thr Val Ala Asn Asn Leu Gln Ser Ser Asn Thr Ala Pro Thr
580 585 590
Thr Arg Thr Val Asn Asp Gln Gly Ala Leu Pro Gly Met Val Trp Gln
595 600 605
Asp Arg Asp Val Tyr Leu Gln Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His
610 615 620
Thr Asp Gly His Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Leu
625 630 635 640
Lys His Pro Pro Pro Gln Ile Met Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala
645 650 655
Asn Pro Pro Thr Thr Phe Ser Pro Ala Lys Phe Ala Ser Phe Ile Thr
660 665 670
Gln Tyr Ser Thr Gly Gln Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gln
675 680 685
Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gln Tyr Thr Ser Asn
690 695 700
Tyr Asn Lys Ser Val Asn Val Asp Phe Thr Val Asp Thr Asn Gly Val
705 710 715 720
Tyr Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Pro Leu
725 730 735
<210> 28
<211> 738
<212> PRT
<213> Искуственная последовательность
<220>
<223> Описание искуственной последовательности: AAV Капсид
<400> 28
Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser
1 5 10 15
Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro
20 25 30
Lys Ala Asn Gln Gln Lys Gln Asp Asn Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro
35 40 45
Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro
50 55 60
Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp
65 70 75 80
Gln Gln Leu Gln Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Arg Tyr Asn His Ala
85 90 95
Asp Ala Glu Phe Gln Glu Arg Leu Gln Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly
100 105 110
Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro
115 120 125
Leu Gly Leu Val Glu Ser Pro Val Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg
130 135 140
Pro Val Glu Pro Ser Pro Gln Arg Ser Pro Asp Ser Ser Thr Gly Ile
145 150 155 160
Gly Lys Lys Gly Gln Gln Pro Ala Lys Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gln
165 170 175
Thr Gly Asp Ser Glu Ser Val Pro Asp Pro Gln Pro Ile Gly Glu Pro
180 185 190
Pro Ala Ala Pro Ser Gly Val Gly Pro Asn Thr Met Ala Ala Gly Gly
195 200 205
Gly Ala Pro Met Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Ser
210 215 220
Ser Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Thr Trp Leu Gly Asp Arg Val
225 230 235 240
Ile Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His
245 250 255
Leu Tyr Lys Gln Ile Ser Asn Gly Thr Ser Gly Gly Ser Thr Asn Asp
260 265 270
Asn Thr Tyr Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn
275 280 285
Arg Phe His Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gln Arg Leu Ile Asn
290 295 300
Asn Asn Trp Gly Phe Arg Pro Lys Arg Leu Asn Phe Lys Leu Phe Asn
305 310 315 320
Ile Gln Val Lys Glu Val Thr Gln Asn Glu Gly Thr Lys Thr Ile Ala
325 330 335
Asn Asn Leu Thr Ser Thr Ile Gln Val Phe Thr Asp Ser Glu Tyr Gln
340 345 350
Leu Pro Tyr Val Leu Gly Ser Ala His Gln Gly Cys Leu Pro Pro Phe
355 360 365
Pro Ala Asp Val Phe Met Ile Pro Gln Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn
370 375 380
Asn Gly Ser Gln Ala Val Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr
385 390 395 400
Phe Pro Ser Gln Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Glu Phe Ser Tyr
405 410 415
Asn Phe Glu Asp Val Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gln Ser
420 425 430
Leu Asp Arg Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gln Tyr Leu Tyr Tyr Leu
435 440 445
Ser Arg Thr Gln Ser Thr Gly Gly Thr Ala Gly Thr Gln Gln Leu Leu
450 455 460
Phe Ser Gln Ala Gly Pro Asn Asn Met Ser Ala Gln Ala Lys Asn Trp
465 470 475 480
Leu Pro Gly Pro Cys Tyr Arg Gln Gln Arg Val Ser Thr Thr Leu Ser
485 490 495
Gln Asn Asn Asn Ser Asn Phe Ala Trp Thr Gly Ala Thr Lys Tyr His
500 505 510
Leu Asn Gly Arg Asp Ser Leu Val Asn Pro Gly Val Ala Met Ala Thr
515 520 525
His Lys Asp Asp Glu Glu Arg Phe Phe Pro Ser Ser Gly Val Leu Met
530 535 540
Phe Gly Lys Gln Gly Ala Gly Lys Asp Asn Val Asp Tyr Ser Ser Val
545 550 555 560
Met Leu Thr Ser Glu Glu Glu Ile Lys Thr Thr Asn Pro Val Ala Thr
565 570 575
Glu Gln Tyr Gly Val Val Ala Asp Asn Leu Gln Gln Gln Asn Ala Ala
580 585 590
Pro Ile Val Gly Ala Val Asn Ser Gln Gly Ala Leu Pro Gly Met Val
595 600 605
Trp Gln Asn Arg Asp Val Tyr Leu Gln Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile
610 615 620
Pro His Thr Asp Gly Asn Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe
625 630 635 640
Gly Leu Lys His Pro Pro Pro Gln Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val
645 650 655
Pro Ala Asp Pro Pro Thr Thr Phe Asn Gln Ala Lys Leu Ala Ser Phe
660 665 670
Ile Thr Gln Tyr Ser Thr Gly Gln Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu
675 680 685
Leu Gln Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gln Tyr Thr
690 695 700
Ser Asn Tyr Tyr Lys Ser Thr Asn Val Asp Phe Ala Val Asn Thr Glu
705 710 715 720
Gly Thr Tyr Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg
725 730 735
Asn Leu
<210> 29
<211> 14
<212> PRT
<213> Искуственная последовательность
<220>
<223> Описание искуственной последовательности: Пептид FVIII
<400> 29
Ser Phe Ser Gln Asn Pro Pro Val Leu Lys Arg His Gln Arg
1 5 10
<---

Claims (107)

1. Вариант нуклеиновой кислоты, кодирующий фактор VIII (FVIII), имеющий делецию B-домена, при этом вариант нуклеиновой кислоты имеет идентичность последовательности 95% или более с последовательностью SEQ ID NO: 7.
2. Вариант нуклеиновой кислоты по п. 1, при этом вариант нуклеиновой кислоты имеет 96% или большую идентичность последовательности с последовательностью SEQ ID NO: 7.
3. Вариант нуклеиновой кислоты по п. 1, при этом вариант нуклеиновой кислоты имеет 97% или большую идентичность последовательности с последовательностью SEQ ID NO: 7.
4. Вариант нуклеиновой кислоты по п. 1, при этом вариант нуклеиновой кислоты имеет 98% или более идентичность последовательности с последовательностью SEQ ID NO: 7.
5. Вариант нуклеиновой кислоты по п. 1, при этом вариант нуклеиновой кислоты имеет 99% или большую идентичность последовательности с последовательностью SEQ ID NO: 7.
6. Вариант нуклеиновой кислоты по п. 1, при этом вариант нуклеиновой кислоты имеет 20 или меньше, 15 или меньше или 10 или меньше динуклеотидов цитозин-гуанин (CpG), чем последовательность SEQ ID NO: 19.
7. Вариант нуклеиновой кислоты по п. 1, при этом вариант нуклеиновой кислоты имеет не более 5 динуклеотидов цитозин-гуанин (CpG).
8. Вариант нуклеиновой кислоты по п. 1, при этом вариант нуклеиновой кислоты имеет 4, 3, 2, 1 или 0 динуклеотидов цитозин-гуанин (CpG).
9. Вариант нуклеиновой кислоты по п. 1, при этом вариант нуклеиновой кислоты имеет 0 динуклеотидов цитозин-гуанин (CpG).
10. Вариант нуклеиновой кислоты по п. 1, при этом вариант нуклеиновой кислоты кодирует SEQ ID NO: 25, имеющую делецию одной или более аминокислот последовательности SFSQNPPVLKRHQR (SEQ ID NO: 29), или делецию всей последовательности SFSQNPPVLKRHQR.
11. Вариант нуклеиновой кислоты по п. 1, при этом вариант нуклеиновой кислоты кодирует SEQ ID NO: 25.
12. Вариант нуклеиновой кислоты по п. 1, при этом указанный FVIII-BDD относится к млекопитающему.
13. Вариант нуклеиновой кислоты, кодирующий фактор VIII человека, имеющий делецию В-домена (hFVIII-BDD), при этом вариант нуклеиновой кислоты имеет не более 2 динуклеотидов цитозин-гуанин (CpG), и при этом вариант нуклеиновой кислоты кодирует SEQ ID NO: 25.
14. Вариант нуклеиновой кислоты по п. 13, при этом вариант нуклеиновой кислоты имеет 1 динуклеотид цитозин-гуанин (CpG).
15. Вариант нуклеиновой кислоты по п. 13, при этом вариант нуклеиновой кислоты не имеет динуклеотидов цитозин-гуанин (CpG).
16. Вариант нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-15, в котором кодируемые FVIII-BDD или hFVIII-BDD идентичны hFVIII-BDD, кодируемому SEQ ID NO: 19.
17. Вариант нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-16, при этом вариант нуклеиновой кислоты отличается от FVIII-V3 (SEQ ID NO: 20) и CO3 (SEQ ID NO: 21).
18. Вариант нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-17, при этом вариант нуклеиновой кислоты кодирует SEQ ID NO: 25, имеющую делецию одной или более аминокислот последовательности SFSQNPPVLKRHQR (SEQ ID NO: 29) или делецию всей последовательности SFSQNPPVLKRHQR.
19. Вариант нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-17, при этом вариант нуклеиновой кислоты кодирует SEQ ID NO: 25.
20. Вектор для экспрессии кодируемого FVIII-BDD, содержащий вариант нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-19.
21. Экспрессионный вектор, содержащий вариант нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-19.
22. Экспрессионный вектор по п. 21, выбранный из группы, состоящей из аденовирусассоциированного вирусного (AAV) вектора, пертовирусного вектора, аденовирусного вектора, плазмиды или лентивирусного вектора.
23. Экспрессионный вектор по п. 22, при этом указанный AAV вектор содержит серотип AAV или псевдотип AAV, при этом указанный псевдотип AAV содержит серотип AAV капсида, отличающийся от серотипа ITR.
24. Экспрессионный вектор по п. 22 или 23, дополнительно содержащий интрон, контролирующий экспрессию элемент, один или более инвертированный концевой повтор (ITR) аденоассоциированный вирус (AAV) и/или полинуклеотидную последовательность-филлер.
25. Экспрессионный вектор по п. 24, в котором интрон находится внутри или фланкирует вариант нуклеиновой кислоты.
26. Экспрессионный вектор по п. 24, в котором контролирующий экспрессию элемент функционально связан с вариантом нуклеиновой кислоты.
27. Экспрессионный вектор по п. 24, в котором ITR AAV фланкируют 5'- или 3'-конец варианта нуклеиновой кислоты.
28. Экспрессионный вектор по п. 24, в котором полинуклеотидная последовательность-филлер фланкирует 5'- или 3'-конец варианта нуклеиновой кислоты.
29. Экспрессионный вектор по любому из пп. 24-28, в котором интрон, контролирующий экспрессию элемент, один или более инвертированных концевых повторов (ITR) аденоассоциированного вируса (AAV) и/или полинуклеотидная последовательность-филлер были модифицированы, чтобы иметь пониженное содержание динуклеотидов цитозин-гуанин (CpG).
30. Экспрессионный вектор по любому из пп. 24-28, в котором интрон, контролирующий экспрессию элемент, один или более инвертированных концевых повторов (ITR) аденоассоциированного вируса (AAV) и/или полинуклеотидная последовательность-филлер были модифицированы, чтобы иметь 20 или менее, 15 или менее, 10 или менее, 5 или менее или 0 динуклеотидов цитозин-гуанин (CpG).
31. Экспрессионный вектор по любому из пп. 24, 26, 29 и 30, в котором контролирующий экспрессию элемент содержит конститутивный или регулируемый контролирующий элемент, или тканеспецифический контролирующий экспрессию элемент, или промотор.
32. Экспрессионный вектор по любому из пп. 24, 26, 29 и 30, в котором контролирующий экспрессию элемент представляет собой элемент, который обеспечивает экспрессию в печени.
33. Экспрессионный вектор по любому из пп. 24, 26, 29 и 30, в котором контролирующий экспрессию элемент содержит промотор TTR или мутантный промотор TTR.
34. Экспрессионный вектор по п. 33, в котором мутантный промотор TTR содержит SEQ ID NO:22.
35. Экспрессионный вектор по любому из пп. 24-34, в котором ITR содержит один или более ITR любого из: серотипов AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, Rh10, Rh74 или AAV-2i8 AAV или их комбинацию.
36. Экспрессионный вектор по любому из пп. 23-29, при этом вектор содержит ITR, промотор, поли-А-сигнал и/или интронную последовательность, изложенную в SEQ ID NO: 23.
37. AAV вектор для экспрессии кодируемого FVIII-BDD, содержащий вариант нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-19 или экспрессионный вектор по любому из пп. 24-36.
38. AAV вектор по п. 37, при этом AAV вектор содержит модифицированную или вариантную последовательность капсида AAV VP1, VP2 и/или VP3 или последовательность капсида AAV VP1, VP2 и/или VP3 дикого типа.
39. AAV вектор по п. 37, в котором AAV вектор содержит модифицированную или вариантную последовательность капсида AAV VP1, VP2 и/или VP3, имеющую 90% или большую идентичность с последовательностями AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, Rh10, Rh74 или AAV-2i8 VP1, VP2 и/или VP3.
40. AAV вектор по п. 37, в котором вектор AAV содержит последовательность капсида VP1, VP2 или VP3, выбранную из любого из: серотипов AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, Rh10, Rh74 или AAV-2i8 AAV.
41. AAV вектор по п. 37, в котором вектор AAV содержит капсид, имеющий 90% или большую идентичность последовательности с капсидом LK03 (SEQ ID NO: 27).
42. AAV вектор по п. 37, в котором вектор AAV содержит капсид, имеющий 90% или большую идентичность последовательности с капсидом SPK (SEQ ID NO: 28).
43. AAV вектор по п. 37, в котором AAV вектор содержит капсид LK03 (SEQ ID NO: 27).
44. AAV вектор по п. 37, в котором AAV вектор содержит капсид SPK (SEQ ID NO: 28).
45. AAV вектор по п. 37, в котором AAV вектор содержит вариант нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 7 и последовательность капсида LK03 (SEQ ID NO: 27).
46. AAV вектор по п. 37, в котором AAV вектор содержит вариант нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 7 и капсид SPK (SEQ ID NO: 28).
47. AAV вектор по п. 37, в котором AAV вектор содержит вариант нуклеиновой кислоты и одно или более из мутированного промотора TTR (TTRmut), синтетического интрона, поли-A и ITR в SEQ ID NO: 23.
48. AAV вектор по п. 37, в котором AAV вектор содержит вариант нуклеиновой кислоты и одно или более из мутированного промотора TTR (TTRmut), синтетического интрона, поли-A и ITR в SEQ ID NO: 23 и последовательности капсида LK03 (SEQ ID NO: 27) или капсида SPK (SEQ ID NO: 28).
49. Клетка-хозяин для экспрессии FVIII-BDD, содержащая вариант нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-19 или вектор или экспрессионный вектор по любому из пп. 20-36.
50. Клетка-хозяин по п. 49, при этом указанные клетки-хозяева экспрессируют FVIII, кодируемый указанным вариантом нуклеиновой кислоты.
51. Клетка-хозяин для продуцирования векторов AAV, содержащая AAV вектор по любому из пп. 37-48.
52. Клетка-хозяин по п. 51, при этом указанные клетки-хозяева вырабатывают AAV вектор по любому из пп. 37-48.
53. Фармацевтическая композиция для лечения гемофилии А, содержащая вариант нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-19, вектор или экспрессионный вектор по любому из пп. 20-36 или AAV вектор по любому из пп. 37-48 в биологически совместимом носителе или эксципиенте.
54. Вариант нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-19, вектор или экспрессионный вектор по любому из пп. 20-36 или AAV вектор по любому из пп. 37-48, инкапсулированный в липосоме или смешанный с фосфолипидами или мицеллами.
55. Фармацевтическая композиция по п. 53, дополнительно содержащая пустой капсид AAV.
56. Фармацевтическая композиция по п. 53, дополнительно содержащая пустой капсид серотипа AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11 и/или AAV-Rh74.
57. Фармацевтическая композиция по п. 53, дополнительно содержащая пустой капсид AAV такого же серотипа, как и введенный AAV вектор.
58. Фармацевтическая композиция по п. 53, в которой пустой капсид представляет собой капсид LK03 (SEQ ID NO: 27) или капсид SPK (SEQ ID NO: 28).
59. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 55-58, в которой соотношение указанных пустых капсидов с указанным AAV вектором составляет приблизительно 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1 или 10:1.
60. Способ доставки или переноса последовательности нуклеиновых кислот в клетку млекопитающего, включающий введение или контакт варианта нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-19, вектора или экспрессионного вектора по любому из пп. 20-36 или AAV вектора по любому из пп. 37-48 указанному млекопитающему или в клетку млекопитающего, тем самым доставляя или перенося в клетку млекопитающего последовательность нуклеиновых кислот.
61. Способ лечения млекопитающего, нуждающегося в факторе VIII, включающий:
(a) предоставление варианта нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-19, вектора или экспрессионного вектора по любому из пп. 20-36 или AAV вектора по любому из пп. 37-48; и
(b) введение некоторого количества варианта нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-19, вектора или экспрессионного вектора по любому из пп. 20-36 или AAV вектора по любому из пп. 37-48 млекопитающему, при этом указанный фактор VIII экспрессируется у млекопитающего.
62. Способ по п. 60 или 61, при этом указанный фактор VIII, кодируемый вариантом нуклеиновой кислоты, экспрессируется в клетке, ткани или органе указанного млекопитающего.
63. Способ по п. 62, при этом клетка представляет собой секреторную клетку.
64. Способ по п. 62, в котором клетка представляет собой эндокринную клетку или эндотелиальную клетку.
65. Способ по п. 62, в котором клетка представляет собой гепатоцит, синусоидальную эндотелиальную клетку, мегакариоцит, тромбоцит или гемопоэтическую стволовую клетку.
66. Способ по п. 62, в котором ткань или орган указанного млекопитающего представляет собой печень.
67. Способ по любому из пп. 60-66, при этом у млекопитающего вырабатывается недостаточное количество белка фактора VIII или дефектного или аберрантного белка фактора VIII.
68. Способ по любому из пп. 60-66, при этом у млекопитающего имеется гемофилия A.
69. Способ по любому из пп. 60-66, в котором фактор VIII, кодируемый вариантом нуклеиновой кислоты, экспрессируется на уровнях, имеющих благотворное или терапевтическое действие на млекопитающее.
70. Способ лечения нарушения гемостаза нуждающегося в этом больного, содержащий введение терапевтически эффективного количества варианта нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-19, вектора или экспрессионного вектора по любому из пп. 20-36 или AAV вектора по любому из пп. 37-48 в биологически совместимом носителе больному.
71. Способ по пп. 60, 61 или 70, при этом указанное млекопитающее или указанный больной имеет расстройство, выбранное из группы, состоящей из гемофилии A, болезни фон Виллебранда и кровотечения, связанного с травмой, повреждением, тромбозом, тромбоцитопенией, инсультом, коагулопатией, диссеминированным внутрисосудистым свертыванием (ДВС) и лечением расстройств, сопровождающихся чрезмерным угнетением свертывания.
72. Способ по любому из пп. 60-71, при этом вариант нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-19, вектор или экспрессионный вектор по любому из пп. 20-36 или AAV вектор по любому из пп. 37-48 доставляют указанному млекопитающему или указанному больному внутривенно, внутриартериально, внутримышечно, подкожно, внутрь полости, или интубационно, или через катетер.
73. Способ по любому из пп. 60-71, при этом FVIII экспрессируется на уровнях по существу без повышенного риска тромбоза.
74. Способ по п. 73, при этом указанный риск тромбоза определяют посредством измерения продуктов разложения фибрина.
75. Способ по любому из пп. 60-71, при этом FVIII экспрессируется на уровнях более 1% от уровней FVIII, обнаруженных у субъекта без гемофилии A.
76. Способ по любому из пп. 60-71, при этом FVIII экспрессируется на уровнях более 3% от уровней FVIII, обнаруженных у субъекта без гемофилии A.
77. Способ по любому из пп. 60-71, при этом активность FVIII определяют в течение по меньшей мере 1, 2, 3 или 4 недель, или по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или 11 месяцев или по меньшей мере 1 года.
78. Способ по любому из пп. 60-71, при этом FVIII экспрессируется на уровнях более 1% или 3% от уровней FVIII, обнаруженных у субъекта без гемофилии A в течение по меньшей мере 1, 2, 3 или 4 недель, или по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или 11 месяцев, или по меньшей мере 1 года.
79. Способ по любому из пп. 60-71, при этом FVIII экспрессируется на уровнях, имеющих терапевтическое действие, в течение по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 или 14 дней, недель или месяцев.
80. Способ по любому из пп. 60-71, при этом указанный FVIII присутствует у млекопитающего или больного на уровнях, составляющих приблизительно 20% активности FVIII или более 20% активности в течение по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 или 14 календарных дней, недель или месяцев.
81. Способ по любому из пп. 60-71, при этом указанный FVIII экспрессируется на уровнях по меньшей мере 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49% или 50% от нормальных уровней FVIII.
82. Способ по любому из пп. 60-71, в котором AAV вектор вводят в дозе, меньшей, чем 1×1012 векторных геномов на килограмм (вг/кг) млекопитающего или больного, и указанный FVIII вырабатывается у млекопитающего или больного на уровнях, составляющих приблизительно 20% активности или более 20% активности в течение по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 или 14 календарных дней, недель или месяцев.
83. Способ по любому из пп. 60-71, в котором AAV вектор вводят в дозе, составляющей приблизительно 5×1011 векторных геномов на килограмм (вг/кг) млекопитающего или больного, и указанный FVIII вырабатывается у млекопитающего или больного на уровнях, составляющих приблизительно 20% активности или более 20% активности в течение по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 или 14 календарных дней, недель или месяцев.
84. Способ по любому из пп. 60-83, при этом указанным млекопитающим или указанным больным является человек.
85. Способ по любому из пп. 60-84, при этом указанное млекопитающее, указанный больной или указанный человек являются AAV-серопозитивными или -серонегативными.
86. Способ по любому из пп. 60-85, дополнительно включающий введение пустого капсида AAV указанному млекопитающему или указанному больному.
87. Способ по любому из пп. 60-85, дополнительно включающий введение пустого капсида серотипа AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11 и/или AAV-Rh74.
88. Способ по любому из пп. 60-85, дополнительно включающий введение пустого капсида AAV такого же серотипа, как и вводимый AAV вектор.
89. Способ по п. 88, в котором пустой капсид представляет собой капсид LK03 (SEQ ID NO: 27) или капсид SPK (SEQ ID NO: 28).
90. Способ по любому из пп. 86-89, в котором соотношение указанных пустых капсидов и указанного AAV вектора составляет приблизительно 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1 или 10:1.
91. Способ по любому из пп. 60-90, дополнительно включающий введение иммуносупрессивного средства.
92. Способ по любому из пп. 60-90, дополнительно включающий введение иммуносупрессивного средства после введения AAV вектора.
93. Способ по любому из пп. 60-90, дополнительно включающий введение иммуносупрессивного средства от момента времени в течение 1 часа вплоть до 45 дней после введения AAV вектора.
94. Способ по любому из пп. 91-93, в котором иммуносупрессивное средство содержит стероид, циклоспорин (например, циклоспорин A), микофенолат, ритуксимаб или его производное.
95. Способ по любому из пп. 60-94, в котором вектор AAV вводят в диапазоне от приблизительно 1×108 до приблизительно 1×1014 векторных геномов на килограмм (вг/кг) массы млекопитающего или больного.
96. Способ по любому из пп. 60-94, в котором AAV вектор вводят в диапазоне от приблизительно 1×109 до приблизительно 1×1013 векторных геномов на килограмм (вг/кг) массы млекопитающего или больного.
97. Способ по любому из пп. 60-94, в котором AAV вектор вводят в диапазоне от приблизительно 1×1010 до приблизительно 1×1012 векторных геномов на килограмм (вг/кг) массы млекопитающего или больного.
98. Способ по любому из пп. 60-94, в котором AAV вектор вводят в диапазоне от приблизительно 1×1011 до приблизительно 1×1012 векторных геномов на килограмм (вг/кг) массы млекопитающего или больного.
99. Способ по любому из пп. 60-94, в котором AAV вектор вводят в диапазоне от приблизительно 1×1012 до приблизительно 1×1013 векторных геномов на килограмм (вг/кг) массы млекопитающего или больного.
100. Способ по любому из пп. 60-94, в котором AAV вектор вводят в диапазоне от приблизительно 1×1013 до приблизительно 1×1014 векторных геномов на килограмм (вг/кг) массы млекопитающего или больного.
101. Способ по любому из пп. 60-94, в котором AAV вектор вводят в диапазоне от приблизительно 5×1011 до приблизительно 1×1012 векторных геномов на килограмм (вг/кг) массы млекопитающего или больного.
102. Способ по любому из пп. 60-94, в котором AAV вектор вводят в дозе, составляющей приблизительно 5×1011 векторных геномов на килограмм (вг/кг) массы млекопитающего или больного.
103. Способ по любому из пп. 60-102, дополнительно включающий обследование или мониторинг млекопитающего на наличие или количество антител к AAV, иммунного ответа против AAV, антител к FVIII, иммунного ответа против FVIII, количеств FVIII, уровня активности FVIII, количеств или уровней одного или более печеночных ферментов или частоты и/или тяжести и продолжительности эпизодов кровотечения.
104. Способ выработки белка FVIII, включающий экспрессию в клетке варианта нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-19 или вектора или экспрессионного вектора по любому из пп. 21-37 и извлечение указанного белка FVIII, выработанного клетками.
105. Способ по п. 104, дополнительно включающий очистку или выделение указанного белка FVIII, выработанного клетками.
RU2018119710A 2015-10-30 2016-10-31 Кодирующие фактор viii варианты с пониженным содержанием cpg, композиции и способы и применение в лечении нарушений гемостаза RU2745506C2 (ru)

Applications Claiming Priority (9)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201562249001P 2015-10-30 2015-10-30
US62/249,001 2015-10-30
US201662331872P 2016-05-04 2016-05-04
US62/331,872 2016-05-04
US201662349532P 2016-06-13 2016-06-13
US62/349,532 2016-06-13
US201662357874P 2016-07-01 2016-07-01
US62/357,874 2016-07-01
PCT/US2016/059793 WO2017075619A1 (en) 2015-10-30 2016-10-31 Cpg reduced factor viii variants, compositions and methods and uses for treatment of hemostasis disorders

Publications (3)

Publication Number Publication Date
RU2018119710A RU2018119710A (ru) 2019-12-06
RU2018119710A3 RU2018119710A3 (ru) 2020-04-02
RU2745506C2 true RU2745506C2 (ru) 2021-03-25

Family

ID=58630834

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2018119710A RU2745506C2 (ru) 2015-10-30 2016-10-31 Кодирующие фактор viii варианты с пониженным содержанием cpg, композиции и способы и применение в лечении нарушений гемостаза

Country Status (19)

Country Link
US (2) US20180312571A1 (ru)
EP (1) EP3368560A4 (ru)
JP (2) JP7088831B2 (ru)
KR (1) KR20180090795A (ru)
CN (1) CN108368164A (ru)
AU (1) AU2016344030B2 (ru)
BR (1) BR112018008766A2 (ru)
CA (1) CA3002689A1 (ru)
CL (1) CL2018001107A1 (ru)
CO (1) CO2018005306A2 (ru)
IL (1) IL258959B2 (ru)
MX (2) MX2018005490A (ru)
MY (1) MY190926A (ru)
PE (2) PE20231949A1 (ru)
PH (1) PH12018501055A1 (ru)
RU (1) RU2745506C2 (ru)
SA (1) SA518391463B1 (ru)
SG (1) SG11201802972UA (ru)
WO (1) WO2017075619A1 (ru)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2808564C2 (ru) * 2022-04-28 2023-11-29 Акционерное общество "БИОКАД" Кодон-оптимизированная нуклеиновая кислота, которая кодирует белок фактора свёртывания крови VIII c делетированным B доменом, и ее применение

Families Citing this family (20)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB201508026D0 (en) 2015-05-11 2015-06-24 Ucl Business Plc Capsid
CN108138159A (zh) 2015-06-23 2018-06-08 费城儿童医院 经修饰的因子ix、以及用于基因转移到细胞、器官和组织的组合物、方法和用途
EP3491008A2 (en) 2016-07-26 2019-06-05 BioMarin Pharmaceutical Inc. Novel adeno-associated virus capsid proteins
AU2018312565A1 (en) * 2017-08-01 2020-02-27 Spark Therapeutics, Inc. Factor VIII (FVIII) gene therapy methods
KR20200035130A (ko) * 2017-08-09 2020-04-01 바이오버라티브 테라퓨틱스 인크. 핵산 분자 및 이의 용도
KR101952102B1 (ko) * 2017-12-07 2019-02-26 주식회사 지앤피바이오사이언스 단백질 발현량이 증대된 인자 ⅷ 변이체 발현벡터
KR20210008501A (ko) 2018-05-09 2021-01-22 바이오마린 파머수티컬 인크. 페닐케톤뇨증을 치료하는 방법
JP2021523198A (ja) 2018-05-14 2021-09-02 ビオマリン プハルマセウトイカル インコーポレイテッド 幼若対象におけるａａｖベクターの安定的発現
TW202005978A (zh) 2018-05-14 2020-02-01 美商拜奧馬林製藥公司 新穎肝靶向腺相關病毒載體
US10842885B2 (en) 2018-08-20 2020-11-24 Ucl Business Ltd Factor IX encoding nucleotides
JP2021533805A (ja) * 2018-08-24 2021-12-09 スパーク セラピューティクス インコーポレイテッドSpark Therapeutics, Inc. 最適化されたプロモーター配列、イントロンを含まない発現構築物及び使用方法
BR112021009452A2 (pt) * 2018-11-16 2021-08-17 Spark Therapeutics, Inc. ensaio in vitro para detectar intensificadores e inibidores de transdução de vetor de vírus adeno-associados (aav) e/ou detectar ou quantificar anticorpos de ligação a anti-aav
GB201900702D0 (en) * 2019-01-18 2019-03-06 Univ Bristol Therapy
SG11202108357PA (en) 2019-02-15 2021-08-30 Crispr Therapeutics Ag Gene editing for hemophilia a with improved factor viii expression
AU2020234713A1 (en) * 2019-03-13 2021-11-04 Generation Bio Co. Non-viral DNA vectors and uses thereof for expressing FVIII therapeutics
EP4051704A2 (en) * 2019-11-01 2022-09-07 Freeline Therapeutics Limited Factor viii construct
WO2023036054A2 (en) * 2021-09-08 2023-03-16 Inspirar Limited Composition and method for treating hemophilia
WO2023211316A1 (en) * 2022-04-28 2023-11-02 Joint Stock Company "Biocad" Codon-optimized nucleic acid encoding the fviii-bdd
WO2024050039A2 (en) * 2022-08-31 2024-03-07 Hydrogene Therapeutics, Inc. Methods and compositions for hydrodynamic gene delivery
CN115948408A (zh) * 2022-09-23 2023-04-11 上海信致医药科技有限公司 改进的人凝血因子viii基因表达盒及其应用

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20030033074A (ko) * 2000-09-19 2003-04-26 에모리 유니버시티 변형된 인자 ⅷ
RU2285724C2 (ru) * 2000-03-10 2006-10-20 Эмори Юниверсити Рекомбинантная молекула днк, кодирующая модифицированный свиной фактор viii (pol 1212), экспрессирующие векторы, модифицированный свиной фактор viii, терапевтическая композиция, способы получения белка модифицированного свиного фактора viii (варианты) и линии клеток (варианты)
DE60042171D1 (de) * 1999-12-24 2009-06-18 Chemo Sero Therapeut Res Inst Faktor viii oder von willebrand faktor zur behandlung von thrombopathie assoziierenden hämorrhagischen erkrankungen
WO2013123457A1 (en) * 2012-02-15 2013-08-22 Biogen Idec Ma Inc. Recombinant factor viii proteins
US20150273082A1 (en) * 2009-07-08 2015-10-01 Ucl Business Plc Optimised coding sequence and promoter

Family Cites Families (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6818439B1 (en) 1994-12-30 2004-11-16 Chiron Corporation Methods for administration of recombinant gene delivery vehicles for treatment of hemophilia and other disorders
US20020065236A1 (en) 1998-09-09 2002-05-30 Yew Nelson S. CpG reduced plasmids and viral vectors
US20060099685A1 (en) 1999-04-15 2006-05-11 Yallop Christopher A Recombinant expression of factor VIII in human cells
DE102004037611B4 (de) * 2004-08-03 2013-10-02 Geneart Ag Induzierbare Genexpression
GB0908515D0 (en) 2009-05-18 2009-06-24 Apitope Technology Bristol Ltd Peptide
EA029045B1 (ru) 2011-07-08 2018-02-28 Байоджен Хемофилия Инк. Химерные и гибридные полипептиды фактора viii и способы их применения
US20140271550A1 (en) 2013-03-14 2014-09-18 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Constructs and Methods for Delivering Molecules via Viral Vectors with Blunted Innate Immune Responses
EP3024498B1 (en) * 2013-07-22 2019-12-04 The Children's Hospital of Philadelphia Variant aav and compositions, methods and uses for gene transfer to cells, organs and tissues
EP3044231B1 (en) * 2013-09-12 2020-08-05 BioMarin Pharmaceutical Inc. Aav vectors comprising a gene encoding factor viii
WO2015054439A2 (en) * 2013-10-08 2015-04-16 Haplomics, Inc. Hybrid factor viii polypeptides for use to treat hemophilia a
GB201403684D0 (en) * 2014-03-03 2014-04-16 King S College London Vector
CA3237630A1 (en) * 2014-08-13 2016-02-18 The Children's Hospital Of Philadelphia An improved expression cassette for packaging and expression of variant factor viii for the treatment of hemostasis disorders
PE20181206A1 (es) 2015-10-28 2018-07-23 Sangamo Therapeutics Inc Construcciones especificas del higado, casetes de expresion del factor viii y metodos de uso de estos
AU2018312565A1 (en) 2017-08-01 2020-02-27 Spark Therapeutics, Inc. Factor VIII (FVIII) gene therapy methods

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE60042171D1 (de) * 1999-12-24 2009-06-18 Chemo Sero Therapeut Res Inst Faktor viii oder von willebrand faktor zur behandlung von thrombopathie assoziierenden hämorrhagischen erkrankungen
RU2285724C2 (ru) * 2000-03-10 2006-10-20 Эмори Юниверсити Рекомбинантная молекула днк, кодирующая модифицированный свиной фактор viii (pol 1212), экспрессирующие векторы, модифицированный свиной фактор viii, терапевтическая композиция, способы получения белка модифицированного свиного фактора viii (варианты) и линии клеток (варианты)
KR20030033074A (ko) * 2000-09-19 2003-04-26 에모리 유니버시티 변형된 인자 ⅷ
US20150273082A1 (en) * 2009-07-08 2015-10-01 Ucl Business Plc Optimised coding sequence and promoter
WO2013123457A1 (en) * 2012-02-15 2013-08-22 Biogen Idec Ma Inc. Recombinant factor viii proteins

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2808564C2 (ru) * 2022-04-28 2023-11-29 Акционерное общество "БИОКАД" Кодон-оптимизированная нуклеиновая кислота, которая кодирует белок фактора свёртывания крови VIII c делетированным B доменом, и ее применение

Also Published As

Publication number Publication date
PE20231949A1 (es) 2023-12-05
IL258959B1 (en) 2024-06-01
AU2016344030A1 (en) 2018-05-10
CA3002689A1 (en) 2017-05-04
RU2018119710A3 (ru) 2020-04-02
IL258959B2 (en) 2024-10-01
CL2018001107A1 (es) 2018-10-05
US11168124B2 (en) 2021-11-09
IL258959A (en) 2018-06-28
RU2018119710A (ru) 2019-12-06
JP7088831B2 (ja) 2022-06-21
PE20181168A1 (es) 2018-07-19
AU2016344030B2 (en) 2021-05-06
US20170216408A1 (en) 2017-08-03
CN108368164A (zh) 2018-08-03
EP3368560A4 (en) 2019-03-27
MX2023001600A (es) 2023-03-09
JP2019503649A (ja) 2019-02-14
MY190926A (en) 2022-05-20
BR112018008766A2 (pt) 2018-10-30
JP2022137029A (ja) 2022-09-21
SG11201802972UA (en) 2018-05-30
WO2017075619A1 (en) 2017-05-04
EP3368560A1 (en) 2018-09-05
CO2018005306A2 (es) 2018-11-30
US20180312571A1 (en) 2018-11-01
MX2018005490A (es) 2018-08-16
SA518391463B1 (ar) 2022-12-13
PH12018501055A1 (en) 2019-01-28
KR20180090795A (ko) 2018-08-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2745506C2 (ru) Кодирующие фактор viii варианты с пониженным содержанием cpg, композиции и способы и применение в лечении нарушений гемостаза
JP7499174B2 (ja) 第ｖｉｉｉ因子（ｆｖｉｉｉ）遺伝子治療法
KR102665348B1 (ko) 지혈 장애의 치료를 위한 변이체 인자 viii의 패키징 및 발현을 위한 개선된 발현 카세트
AU2016282781A1 (en) Modified Factor IX, and compositions, methods and uses for gene transfer to cells, organs and tissues
KR20210005146A (ko) 유전자 편집된 t 세포에서의 인간 foxp3의 발현
US20210393801A1 (en) Adeno-Associated Virus Vector Delivery for Muscular Dystrophies
KR20230069157A (ko) GJB2를 코딩하는 재조합 아데노 연관 바이러스 (rAAV) 및 그의 용도
RU2808274C2 (ru) Способы генотерапии с использованием гена фактора viii (fviii)
US20190144524A1 (en) Factor viii variants, nucleic acid sequences, and methods and uses for treatment of hemostasis disorders
CN116997657A (zh) 编码GJB2的重组腺相关病毒(rAAV)及其用途