RU2739352C1 - Способ получения препарата для удаления ревматоидного фактора из крови больных ревматоидным артритом - Google Patents
Способ получения препарата для удаления ревматоидного фактора из крови больных ревматоидным артритом Download PDFInfo
- Publication number
- RU2739352C1 RU2739352C1 RU2020111879A RU2020111879A RU2739352C1 RU 2739352 C1 RU2739352 C1 RU 2739352C1 RU 2020111879 A RU2020111879 A RU 2020111879A RU 2020111879 A RU2020111879 A RU 2020111879A RU 2739352 C1 RU2739352 C1 RU 2739352C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- blood
- rheumatoid
- rheumatoid factor
- patients
- fragment
- Prior art date
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Immunology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- External Artificial Organs (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области фармацевтики, а именно к способу получения препарата для удаления ревматоидного фактора из крови больных ревматоидным артритом. Способ включает пропускание крови через сорбент, представляющий собой полиакриламидные железосодержащие гранулы, в которых в результате эмульсионной полимеризации иммобилизован Fc-фрагмент иммуноглобулина G, полученный при папаиновом гидролизе и очистке нативного человеческого иммуноглобулина G. Изобретение обеспечивает повышение сорбционной и специфической емкости препарата для удаления ревматоидного фактора из крови путем разделения человеческого иммуноглобулина IgG на фрагменты Fc и Fab и последующей работы только с фракцией, содержащей Fc фрагмент. 3 табл., 3 пр.
Description
Изобретение относится к области медицины, а именно к ревматологии, иммунологии и биотехнологии, и может быть использовано для совершенствования метода лечения ревматоидного артрита.
В патогенезе ревматоидного артрита (РА) ведущее значение имеют аутоиммунные реакции, в результате которых в организме человека продуцируются некоторые аномальные продукты клеток иммунной системы. К таким веществам относится ревматоидный фактор (РФ). Представляющий собой иммуноглобулины человека классов М, G, А, направленные против Fc-фрагмента IgG человека. Эти антитела в организме синтезируются плазматическими клетками синовиальной оболочки и оттуда попадают в кровь. Взаимодействуя с аутоантигеном, они образуют циркулирующие иммунные комплексы (ЦИК). Оседающие, главным образом, в синовиальной оболочке суставов. ЦИК вызывают повышение активности медиаторов воспаления, нарушают микроциркуляцию, активируют хемотаксис лейкоцитов и процессы фагоцитоза ЦИК лейкоцитами и макрофагами. В процессе фагоцитоза повреждаются лизосомы нейтрофилов и макрофагов, высвобождаются лизосомальные ферменты, которые разрушают клеточные структуры. Образуются новые аутоантигены и патологический процесс приобретает характер цепной реакции. Важное патогенетическое значение большинство авторов придают РФ класса IgG, так он составляет около 80% всех иммуноглобулинов человека и животных (Введение в иммунологию Цхалтубо-Кутаисское отделение грузинского научного общества иммунологов/Под. ред. Р.И. Сепиашвили - Цхалтубо-Кутаиси 1987 С.31.), (Bond A., Cooke А.С, Sumar N., Hay F.C. Glycosylation of IgG in the MRL/Ipr model of rheumatoid arthritis // Eur. Fed. Immunol. Soc. 10 th Meet., Edinburgh, 10-12 Sept., 1990: Abstr.-Edinburgh, 1990. - P. 103.).
В настоящее время определение РФ класса IgG в крови человека широко используется в медицинской диагностической практике, особенно для обследования пациентов с подозрением на ревматоидный артрит, для мониторинга течения РА, контроля эффективности проводимых лечебных мероприятий. Больные РА, имеющие высокий уровень РФ в крови, склонны к более агрессивному течению болезни и худшему исходу, чем слабоположительные по РФ. Высокий титр РФ ассоциируется с рядом аутоиммунных заболеваний и присутствием внесуставных проявлений и ревматических узлов (Новиков Д.К. Справочник по клинической иммунологии и аллергологии./ Д.К. Новиков - Минск: Беларусь, 1987. С. 223; Смердова М.А. Ревматоидный фактор в лабораторной диагностике /М.А. Смердова, Е.Ю.Косова /Информационный бюллетень Новости «Вектор-Бест» - 2000 - Т. 3, №17. - С. 5-7).
Таким образом, РФ принадлежит важнейшая роль в иммунопатогенезе развития ревматоидного артрита. Это диктует необходимость разработки и внедрения новых методов целенаправленной патогенетической терапии, способствующих непосредственной элиминации ревматоидного фактора из крови больных РА или угнетения его синтеза В -клетками.
Известен метод удаления указанных антител методом этапного плазмафереза, при котором проводится удаление плазмы больного в экстракорпоральном контуре малыми порциями по 300 мл с последующей инфузией пациенту изотонических солевых растворов и изоонкотических донорских белковых препаратов (Митысовская Н.П., Досин Ю.М., Лабань Ф.Н. и соавт.). Динамика иммунологических показателей больных ревматоидным артритом в процессе плазмафереза /Научно-практическая ревматология. - 2000. - №4. - С. 75.). Недостатком этого метода является его низкая избирательность и специфичность. При осуществлении такой процедуры вместе с ревматоидным фактором удаляются необходимые для организма альбумин, гормоны, нормальные иммуноглобулины, лекарственные препараты. Кроме того используемые белковые препараты являются чужеродными для организма, приводя к развитию аллергических реакций, дороги в цене, что затрудняют их широкому использованию.
Существует метод удаления ревматоидных факторов из крови путем пропускания ее через иммуносорбент, представляющий собой нерастворимый инертный носитель (агарозный гель в форме сефарозы CL-2B или сефарозы CL-4B), к которому после активации бромцианом ковалентно пришивается нативный или химически модифицированный иммуноглобулин G человека. Указанный способ имеет ряд недостатков. Сефароза имеет крайне высокую стоимость и поэтому не может найти широкого применения для приготовления иммуносорбентов в клинической практике. Бромциан, используемый для активации данного носителя, является высокотоксичным соединением, работа с ним представляет опасность для исследователя. При приготовлении сефарозы из агарозы существенная часть активных групп носителя, к которым впоследствии присоединяется иммуноглобулин G, блокируется поперечной сшивкой геля. В процессе образования ковалентных связей между матрицей и лигандом происходит частичное блокирование активных центров молекулы антигена. Вследствие указанных причин, плотность антигенных детерминант на поверхности иммуносорбента, используемого в прототипе, оказывается недостаточной, что приводит к недостаточной эффективности удаления ревматоидных факторов из крови (Эфферентные методы в медицине. М.: Медицина 1989 С. 64).
Наиболее близким к предложенному по принципу действия и достигаемому результату является способ удаления ревматоидного фактора из крови путем пропускания ее через иммуносорбент с иммобилизированным цельным нативным IgG человека, причем в качестве носителя используют железосодержащие полиакриламидные гранулы. В нашей лаборатории был получен подобный препарат (Гонтарь И.П., Заводовский Б.В., Липницкий С.А., Зборовский А.Б. «Способ очистки крови от ревматоидного фактора»/патент №2027192, 1995 г.).
Как известно человеческий иммуноглобулин состоит из Fab и Fc фрагментов, причем фрагмент Fab составляет примерно 2/3 иммуноглобулина IgG, a Fc - 1/3 (Иммунология А. Ройт, Дж. Бростофф, Д. Мейл - Москва «Мир» 2000 С. 97-112).
В работе была повышена сорбционная и специфическая емкость препарата путем разделения человеческого иммуноглобулина IgG на фрагменты Fc и Fab, и с последующей работой только с фракцией содержащей Fc фрагмент. Для разделения IgG человека на соответствующие фрагменты, мы использовали методику расщепление папаином.
Техническим результатом является повышение сорбционной и специфической емкости препарата для удаления ревматоидного фактора из крови путем разделения человеческого иммуноглобулина IgG на фрагменты Fc и Fab, и последующей работой только с фракцией содержащей Fc фрагмент.
В работе использовали 150 мг IG (1 ампула-1,5 мл, производитель: Микроген НПО Вирион г. Томск) и 1,5 мг меркурипапаина в 10 мл 0,1 М фосфатного буфера с рН 7,0, содержащего ЭДТА и цистеин. Инкубировали смесь 16 ч. При 37°С и против дистиллированной воды, затем диализировали при перемешивании в течение 48 ч. При 4°С. Продукты расщепления подвергали диализу против 0,01 М ацетатного буфера с рН=5,5 и затем проводили хроматографию на КМ-целлюлозе. Фрагменты IgG человека элюировали после папаинового гидролиза в градиенте фосфатного буфера 0,01-0,9 М с рН5,5 при длине волны 280 нм. Хроматографию выполняли при комнатной температуре для предотвращения кристаллизации Fc -фрагмента. Были получены две фракции содержащие Fab-фрагменты иммуноглобулина G и одна фракция - Fc-фрагменты (Иммунологические методы под редакцией Г. Фримеля - Москва «Медицина» 1987 С. 417-423). Для адекватного сравнения сорбционной емкости двух сорбентов были получены одинаковые гранулы как на основе IgG, так и на основе Fc -фрагментов.
Пример 1. Получение полиакриламидных гранул с магнитными свойствами с иммобилизированным нативным иммуноглобулином G человека.
В 2 мл нативного иммуноглобулина G человека, содержащего 200 мг белка растворяли соответственно 100 мг и 300 мг метиленбисакриламида и акриламида (Реанал, Венгрия).
В сосуд, содержащий 100 мл гексана и 0,5 мл эмульгатора СПЭН-85, подавали под давлением 0,2-1 атм газообразный азот по трубке сечением 0,8 мм таким образом, чтобы создавать интенсивное перемешивание в течение 5 мин. В колбу для полимеризации вносили 1 мл физиологического раствора с 200 мг окиси железа с гидрофильными свойствами и 10 мг персульфата аммония, через 1-2 мин. Добавляли 2 мл раствора, содержащего мономеры акриламида, метиленбисакриламида, IgG человека и 20 мкл NNN N-тетраметилендиамина (ТЭМЭД). После завершения полимеризации гранулы в течение 10-15 мин. отмывали ацетоном и физиологическим раствором с детергентом Твин-20 от непрореагировавших мономеров, эмульгатора и гексана. Гранулы имели стандартную сферическую форму с размером частиц геля 10-100 мкм. Соотношение полимерный носитель-железо = 2:1 (в пересчете на сухую массу).
Пример 2. Получение полиакриламидных гранул с магнитными свойствами с иммобилизированными Fc-фрагментами иммуноглобулина G человека.
Данный вид полиакриламидных гранул с магнитными свойствами и иммобилизированным Fc-фрагментами иммуноглобулина G человека получали аналогичным образом см. пример 1., только вместо 200 мг нативного иммуноглобулина G, брали 200 мг Fc- фрагмента этого иммуноглобулина, предварительно полученного при гидролизе папаином и его последующей очистки.
Пример 3. Сорбция ревматоидного фактора из крови больных ревматоидным артритом.
Для проведения сорбции использовали оригинальное устройство, создающее осевой и поперечный градиент магнитного поля напряженностью 4000-5000 Э, которое позволяет удерживать гранулы во взвешенном состоянии, одновременно перемещая их в различных направлениях (поперечном, продольном), что способствовало большему контакту иммуносорбента с кровью и препятствовало адгезии гранул друг с другом (Гонтарь И.П, Заводовский Б.В.., Зборовский А.Б., Зборовская И.А., Кабаков А.П., Самарин Н.В. «Способ проведения экстракорпоральной иммуносорбции»/ патент на изобретение №2098140, 1997 г.).
В колонку объемом 10 мл, оборудованного электромагнитом, вносили магнитоуправляемые полиакриламидные гранулы (МПГ) с иммобилизированным иммуноглобулином G человека при постоянной рециркуляции при t=370 с помощью насоса «MICROPERPEX» (LKB, Швеция) со скоростью 10 мл в час.. Используя эту колонку, была проведена обработка in vitro гепаринизированной крови 10 больных РА с высокой степенью активности основного заболевания. Через колонку перфузировали 20 мл нативной гепаринизированной крови со скоростью 10 мл/ч. После окончания перфузии МПГ отмывали от несвязавшихся белков забуференным физиологическим раствором рН 7,4 и проводили десорбцию РФ с сорбента 1 М глицин-HCI буфером рН2,2 двукратно по 10 мин. В качестве контроля использовали 10 сывороток крови практически здоровых лиц. Концентрацию ревматоидного фактора определяли непрямым твердофазным иммуноферментным методом (ИФА) на полистироловых планшетах (ELISA-тест) по классической методике, описанной в ряде источников литературы (Иммунологические методы / Под ред. Г. Фримеля: Пер. с англ.- М.: Медицина, 1987. - С. 472), (Bampton J., Park J., Kyle K. et al. Measurement of IgM, IgA and IgG rheumatoid factors by ELISA and comparison with other methods // Ann. Rheum. Diseases. - 1982. - Vol. 9 - P. 359-365.). Была также проведена проверка травматичности форменных элементов (эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов). До и после сорбции определяли содержание их по общепринятым методикам (Лабораторные методы исследования в клинике /Под ред. Меньшикова В.В. - М.: Медицина., 1987. - С. 458). Количество форменных элементов крови достоверно не изменялось. Значения всех исследуемых показателей для каждого образца измеряли двукратно до и после перфузии.
Аналогично провели адсорбцию ревматоидного фактора, используя сорбент с иммобилизированным Fc-фрагментом иммуноглобулина G.
Средняя величина оптической плотности у доноров для IgG составила 0,036±0,004, была определена верхняя граница нормальных показателей оптической плотности для IgG-РФ, определяемая как М+2σ составила 0,08.
Динамика плазменной концентрации ревматоиного фактора в том и другом случае приведена в таблице 1.
Эффективность удаления РФ с помощью МПГ на основе нативного IgG и Fc -фрагмента была определена в процессе длительности проведения этой процедуры (мин). Было выявлено, что сорбция РФ на основе Fc -фрагмента проходила быстрее, более чем в 2 раза, чем на основе нативного IgG (таб. 2, 3)
Claims (1)
- Способ получения препарата для удаления ревматоидного фактора из крови больных ревматоидным артритом, включающий пропускание крови через сорбент, представляющий собой полиакриламидные железосодержащие гранулы, отличающийся тем, что в результате эмульсионной полимеризации в гранулы иммобилизуют Fc-фрагмент иммуноглобулина G, полученный при папаиновом гидролизе и очистке нативного человеческого иммуноглобулина G.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2020111879A RU2739352C1 (ru) | 2020-03-23 | 2020-03-23 | Способ получения препарата для удаления ревматоидного фактора из крови больных ревматоидным артритом |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2020111879A RU2739352C1 (ru) | 2020-03-23 | 2020-03-23 | Способ получения препарата для удаления ревматоидного фактора из крови больных ревматоидным артритом |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2739352C1 true RU2739352C1 (ru) | 2020-12-23 |
Family
ID=74062997
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2020111879A RU2739352C1 (ru) | 2020-03-23 | 2020-03-23 | Способ получения препарата для удаления ревматоидного фактора из крови больных ревматоидным артритом |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2739352C1 (ru) |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2027192C1 (ru) * | 1991-09-03 | 1995-01-20 | Илья Петрович Гонтарь | Способ очистки крови от ревматоидного фактора |
RU2098140C1 (ru) * | 1994-11-18 | 1997-12-10 | Илья Петрович Гонтарь | Способ проведения экстракорпоральной иммуносорбции |
RU2385164C1 (ru) * | 2008-09-29 | 2010-03-27 | Общество с ограниченной ответственностью "Новые вакцины" | ПРИМЕНЕНИЕ Fc-ФРАГМЕНТОВ ИММУНОГЛОБУЛИНА КЛАССА G В КАЧЕСТВЕ АНТИГЕНА ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ РЕВМАТОИДНОГО АРТРИТА, СРЕДСТВО И СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ |
RU2473908C2 (ru) * | 2010-12-01 | 2013-01-27 | Федеральное бюджетное учреждение науки "Федеральный научный центр медико-профилактических технологий управления рисками здоровью населения" (ФБУН "ФНЦ медико-профилактических технологий управления рисками здоровью населения") | Способ количественного определения специфических иммуноглобулинов g к конъюгату формальдегид - сывороточный человеческий альбумин в сыворотке крови |
-
2020
- 2020-03-23 RU RU2020111879A patent/RU2739352C1/ru active
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2027192C1 (ru) * | 1991-09-03 | 1995-01-20 | Илья Петрович Гонтарь | Способ очистки крови от ревматоидного фактора |
RU2098140C1 (ru) * | 1994-11-18 | 1997-12-10 | Илья Петрович Гонтарь | Способ проведения экстракорпоральной иммуносорбции |
RU2385164C1 (ru) * | 2008-09-29 | 2010-03-27 | Общество с ограниченной ответственностью "Новые вакцины" | ПРИМЕНЕНИЕ Fc-ФРАГМЕНТОВ ИММУНОГЛОБУЛИНА КЛАССА G В КАЧЕСТВЕ АНТИГЕНА ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ РЕВМАТОИДНОГО АРТРИТА, СРЕДСТВО И СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ |
RU2473908C2 (ru) * | 2010-12-01 | 2013-01-27 | Федеральное бюджетное учреждение науки "Федеральный научный центр медико-профилактических технологий управления рисками здоровью населения" (ФБУН "ФНЦ медико-профилактических технологий управления рисками здоровью населения") | Способ количественного определения специфических иммуноглобулинов g к конъюгату формальдегид - сывороточный человеческий альбумин в сыворотке крови |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
ЗБОРОВСКИЙ А.Б. Возможности использования иммобилизированных наносистем в ревматологии // Ревматология. - 2009. - N 3. - С.53-57. * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US9173943B2 (en) | Imprinted polymer nanoparticles | |
US20050249724A1 (en) | Extracorporeal stablised expanded bed adsorption method for the treatment of sepsis | |
US4865841A (en) | Methods and compositions for transient elimination of humoral immune antibodies | |
JP2618497B2 (ja) | 腫瘍障害細胞誘導剤および腫瘍障害細胞誘導デバイス | |
RU2739352C1 (ru) | Способ получения препарата для удаления ревматоидного фактора из крови больных ревматоидным артритом | |
WO1990012632A1 (en) | Process for removing c-reactive protein and anti-phosphorylcholine antibodies from biological fluids | |
KR910004329B1 (ko) | 질병을 체외처치하는 치료장치 | |
JPS6090039A (ja) | 血液浄化吸着体 | |
JPH01119264A (ja) | 吸着体およびそれを用いた除去装置 | |
RU2027192C1 (ru) | Способ очистки крови от ревматоидного фактора | |
RU2366958C2 (ru) | Способ очистки крови от антител к тиреоидным гормонам с помощью иммобилизированного гранулированного магнитоуправляемого препарата | |
JPS6087854A (ja) | 血液浄化吸着材 | |
JPH01181875A (ja) | 免疫複合体の吸着体およびそれを用いた免疫複合体の除去装置 | |
RU2622005C2 (ru) | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СЕЛЕКТИВНОГО ИММУНОСОРБЕНТА ДЛЯ УДАЛЕНИЯ АНТИТЕЛ-IgG К ДЕСМОГЛЕИНУ 3 ТИПА ИЗ СЫВОРОТКИ КРОВИ БОЛЬНЫХ ПУЗЫРЧАТКОЙ | |
CN109627334A (zh) | 一种纳米抗体、以该纳米抗体为配基的吸附剂及其用途 | |
JPS63197462A (ja) | 抗−ヒトIgM免疫吸着剤およびその製造方法 | |
JPS59186559A (ja) | 自己抗体および/または免疫複合体吸着材 | |
JPS6155415B2 (ru) | ||
McDermott et al. | Relation of measles virus to encephalitogenic factor with reference to the aetiopathogenesis of multiple sclerosis | |
JPH03505287A (ja) | 生理学的流体を処理するための生物適合性、物質特異的試薬 | |
JP3073501B2 (ja) | C―反応性タンパクの修飾形態による免疫複合体の結合 | |
Akande-Sholabi et al. | Affinity binding macroporous monolithic cryogel as a matrix for extracorporeal apheresis medical devices | |
JPH0622632B2 (ja) | 吸着体および除去装置 | |
RU2088937C1 (ru) | Иммуносорбент для получения моноспецифической антисыворотки к транстиретину человека | |
JP2983955B2 (ja) | 腎糸球体基底膜付着性蛋白質の除去装置 |