RU2713333C2 - Способы получения т-клеток против антигена папилломавируса человека - Google Patents
Способы получения т-клеток против антигена папилломавируса человека Download PDFInfo
- Publication number
- RU2713333C2 RU2713333C2 RU2016103614A RU2016103614A RU2713333C2 RU 2713333 C2 RU2713333 C2 RU 2713333C2 RU 2016103614 A RU2016103614 A RU 2016103614A RU 2016103614 A RU2016103614 A RU 2016103614A RU 2713333 C2 RU2713333 C2 RU 2713333C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- cells
- hpv
- patient
- tumor
- cancer
- Prior art date
Links
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 title claims abstract description 210
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 67
- 239000000427 antigen Substances 0.000 title description 43
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 title description 43
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 title description 43
- 241001631646 Papillomaviridae Species 0.000 title 1
- 241000701806 Human papillomavirus Species 0.000 claims abstract description 282
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims abstract description 88
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims abstract description 17
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims abstract description 16
- 208000014829 head and neck neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 4
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 197
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 109
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 60
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 claims description 43
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 claims description 43
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 claims description 27
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 claims description 27
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 claims description 22
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 claims description 22
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 claims description 8
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 6
- 238000011467 adoptive cell therapy Methods 0.000 abstract description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 68
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 65
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 43
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 43
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 34
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 27
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 26
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 25
- 238000002659 cell therapy Methods 0.000 description 24
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 24
- 230000003044 adaptive effect Effects 0.000 description 23
- 210000003171 tumor-infiltrating lymphocyte Anatomy 0.000 description 23
- 230000012447 hatching Effects 0.000 description 22
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 21
- 101800001271 Surface protein Proteins 0.000 description 19
- 238000002591 computed tomography Methods 0.000 description 19
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 18
- 230000004044 response Effects 0.000 description 18
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 17
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 17
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 17
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 14
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 14
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 13
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 13
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 12
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 11
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 11
- 108700025316 aldesleukin Proteins 0.000 description 10
- 229960005310 aldesleukin Drugs 0.000 description 10
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 10
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 10
- 108091008819 oncoproteins Proteins 0.000 description 10
- 102000027450 oncoproteins Human genes 0.000 description 10
- 210000004197 pelvis Anatomy 0.000 description 9
- 108010002586 Interleukin-7 Proteins 0.000 description 8
- 102000000704 Interleukin-7 Human genes 0.000 description 8
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 description 8
- 230000000781 anti-lymphocytic effect Effects 0.000 description 8
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 description 8
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 8
- CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N Cyclophosphamide Chemical compound ClCCN(CCCl)P1(=O)NCCCO1 CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 102100028972 HLA class I histocompatibility antigen, A alpha chain Human genes 0.000 description 7
- 108010075704 HLA-A Antigens Proteins 0.000 description 7
- 241000701044 Human gammaherpesvirus 4 Species 0.000 description 7
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 description 7
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 7
- 229960004397 cyclophosphamide Drugs 0.000 description 7
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 7
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 7
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 7
- 229960000390 fludarabine Drugs 0.000 description 7
- GIUYCYHIANZCFB-FJFJXFQQSA-N fludarabine phosphate Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC(F)=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@@H]1O GIUYCYHIANZCFB-FJFJXFQQSA-N 0.000 description 7
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 7
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 description 6
- 108010017080 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 6
- 102000004269 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 6
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 6
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 6
- 210000000683 abdominal cavity Anatomy 0.000 description 6
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 description 6
- 210000000038 chest Anatomy 0.000 description 6
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 6
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 6
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 6
- 230000001400 myeloablative effect Effects 0.000 description 6
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 6
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 6
- 239000000047 product Substances 0.000 description 6
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 6
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 6
- 108010043121 Green Fluorescent Proteins Proteins 0.000 description 5
- 102000004144 Green Fluorescent Proteins Human genes 0.000 description 5
- -1 HLA -B Proteins 0.000 description 5
- 101001100327 Homo sapiens RNA-binding protein 45 Proteins 0.000 description 5
- 208000009608 Papillomavirus Infections Diseases 0.000 description 5
- 102100038823 RNA-binding protein 45 Human genes 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 5
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 5
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 238000003501 co-culture Methods 0.000 description 5
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 5
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 5
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 5
- 239000005090 green fluorescent protein Substances 0.000 description 5
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 5
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 5
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 5
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 5
- 238000011127 radiochemotherapy Methods 0.000 description 5
- 210000000626 ureter Anatomy 0.000 description 5
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 4
- 102100040485 HLA class II histocompatibility antigen, DRB1 beta chain Human genes 0.000 description 4
- 108010039343 HLA-DRB1 Chains Proteins 0.000 description 4
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 4
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 4
- 108010002616 Interleukin-5 Proteins 0.000 description 4
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 4
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 4
- 230000003750 conditioning effect Effects 0.000 description 4
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 4
- 238000002595 magnetic resonance imaging Methods 0.000 description 4
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 4
- BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N platinum Chemical compound [Pt] BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 4
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 3
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 3
- 108010058597 HLA-DR Antigens Proteins 0.000 description 3
- 102000006354 HLA-DR Antigens Human genes 0.000 description 3
- 101000578784 Homo sapiens Melanoma antigen recognized by T-cells 1 Proteins 0.000 description 3
- 101000767631 Human papillomavirus type 16 Protein E7 Proteins 0.000 description 3
- 102000003816 Interleukin-13 Human genes 0.000 description 3
- 108090000176 Interleukin-13 Proteins 0.000 description 3
- 108090001007 Interleukin-8 Proteins 0.000 description 3
- 102100028389 Melanoma antigen recognized by T-cells 1 Human genes 0.000 description 3
- 206010044002 Tonsil cancer Diseases 0.000 description 3
- 208000006842 Tonsillar Neoplasms Diseases 0.000 description 3
- 210000003815 abdominal wall Anatomy 0.000 description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 3
- 210000002255 anal canal Anatomy 0.000 description 3
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 3
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 3
- DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L cisplatin Chemical compound N[Pt](N)(Cl)Cl DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 229960004316 cisplatin Drugs 0.000 description 3
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 3
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 238000003114 enzyme-linked immunosorbent spot assay Methods 0.000 description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 3
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 3
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 3
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 3
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 3
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 3
- 230000003827 upregulation Effects 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- 101150009389 BZLF1 gene Proteins 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- 101100284398 Bos taurus BoLA-DQB gene Proteins 0.000 description 2
- 102000001326 Chemokine CCL4 Human genes 0.000 description 2
- 108010055165 Chemokine CCL4 Proteins 0.000 description 2
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 2
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 description 2
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 description 2
- 102000016911 Deoxyribonucleases Human genes 0.000 description 2
- 108010053770 Deoxyribonucleases Proteins 0.000 description 2
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 2
- 101150059079 EBNA1 gene Proteins 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 102100039619 Granulocyte colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 2
- 102100028971 HLA class I histocompatibility antigen, C alpha chain Human genes 0.000 description 2
- 102100036241 HLA class II histocompatibility antigen, DQ beta 1 chain Human genes 0.000 description 2
- 108010052199 HLA-C Antigens Proteins 0.000 description 2
- 108010010378 HLA-DP Antigens Proteins 0.000 description 2
- 102000015789 HLA-DP Antigens Human genes 0.000 description 2
- 108010062347 HLA-DQ Antigens Proteins 0.000 description 2
- 108010065026 HLA-DQB1 antigen Proteins 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 241000341655 Human papillomavirus type 16 Species 0.000 description 2
- 101000954519 Human papillomavirus type 18 Protein E6 Proteins 0.000 description 2
- 108090000174 Interleukin-10 Proteins 0.000 description 2
- 208000008839 Kidney Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 2
- 208000010505 Nose Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 208000002471 Penile Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 208000009565 Pharyngeal Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000004354 Vulvar Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 2
- 208000009956 adenocarcinoma Diseases 0.000 description 2
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 2
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 2
- 210000000436 anus Anatomy 0.000 description 2
- 230000001174 ascending effect Effects 0.000 description 2
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 230000002146 bilateral effect Effects 0.000 description 2
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 238000002725 brachytherapy Methods 0.000 description 2
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 2
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 2
- 102000054766 genetic haplotypes Human genes 0.000 description 2
- 238000003205 genotyping method Methods 0.000 description 2
- 102000006602 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Human genes 0.000 description 2
- 108020004445 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 230000002489 hematologic effect Effects 0.000 description 2
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 201000010982 kidney cancer Diseases 0.000 description 2
- 206010023841 laryngeal neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 239000007937 lozenge Substances 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 208000037819 metastatic cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000011575 metastatic malignant neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 238000002715 modification method Methods 0.000 description 2
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 2
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 2
- 210000003300 oropharynx Anatomy 0.000 description 2
- RZXMPPFPUUCRFN-UHFFFAOYSA-N p-toluidine Chemical compound CC1=CC=C(N)C=C1 RZXMPPFPUUCRFN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052697 platinum Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 238000002271 resection Methods 0.000 description 2
- 239000002924 silencing RNA Substances 0.000 description 2
- 206010041823 squamous cell carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 210000001215 vagina Anatomy 0.000 description 2
- 208000013139 vaginal neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 210000003905 vulva Anatomy 0.000 description 2
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PKDBCJSWQUOKDO-UHFFFAOYSA-M 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride Chemical compound [Cl-].C1=CC=CC=C1C(N=[N+]1C=2C=CC=CC=2)=NN1C1=CC=CC=C1 PKDBCJSWQUOKDO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000031261 Acute myeloid leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 206010001197 Adenocarcinoma of the cervix Diseases 0.000 description 1
- 208000034246 Adenocarcinoma of the cervix uteri Diseases 0.000 description 1
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 1
- 208000007860 Anus Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 241000238017 Astacoidea Species 0.000 description 1
- 208000010839 B-cell chronic lymphocytic leukemia Diseases 0.000 description 1
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 description 1
- 108010006654 Bleomycin Proteins 0.000 description 1
- 206010005949 Bone cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000018084 Bone neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000003174 Brain Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 206010007279 Carcinoid tumour of the gastrointestinal tract Diseases 0.000 description 1
- 208000017897 Carcinoma of esophagus Diseases 0.000 description 1
- 241001466804 Carnivora Species 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 241001227713 Chiron Species 0.000 description 1
- 102000007644 Colony-Stimulating Factors Human genes 0.000 description 1
- 108010071942 Colony-Stimulating Factors Proteins 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 208000000059 Dyspnea Diseases 0.000 description 1
- 206010013975 Dyspnoeas Diseases 0.000 description 1
- 238000011510 Elispot assay Methods 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 1
- 208000000461 Esophageal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 241000282324 Felis Species 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 108010029961 Filgrastim Proteins 0.000 description 1
- 229910052688 Gadolinium Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000022072 Gallbladder Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 1
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 1
- 208000032612 Glial tumor Diseases 0.000 description 1
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 229940031764 Gp100:209-217(210M) vaccine Drugs 0.000 description 1
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 102100028976 HLA class I histocompatibility antigen, B alpha chain Human genes 0.000 description 1
- 102100031547 HLA class II histocompatibility antigen, DO alpha chain Human genes 0.000 description 1
- 108010058607 HLA-B Antigens Proteins 0.000 description 1
- 102100031573 Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Human genes 0.000 description 1
- 208000017604 Hodgkin disease Diseases 0.000 description 1
- 208000021519 Hodgkin lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 208000010747 Hodgkins lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 241001272567 Hominoidea Species 0.000 description 1
- 101100005713 Homo sapiens CD4 gene Proteins 0.000 description 1
- 101000980932 Homo sapiens Cyclin-dependent kinase inhibitor 2A Proteins 0.000 description 1
- 101000746367 Homo sapiens Granulocyte colony-stimulating factor Proteins 0.000 description 1
- 101000866278 Homo sapiens HLA class II histocompatibility antigen, DO alpha chain Proteins 0.000 description 1
- 101000777663 Homo sapiens Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Proteins 0.000 description 1
- 101000946889 Homo sapiens Monocyte differentiation antigen CD14 Proteins 0.000 description 1
- 101000581981 Homo sapiens Neural cell adhesion molecule 1 Proteins 0.000 description 1
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 101100540311 Human papillomavirus type 16 E6 gene Proteins 0.000 description 1
- 108010003272 Hyaluronate lyase Proteins 0.000 description 1
- 102000001974 Hyaluronidases Human genes 0.000 description 1
- 206010021143 Hypoxia Diseases 0.000 description 1
- 101000668058 Infectious salmon anemia virus (isolate Atlantic salmon/Norway/810/9/99) RNA-directed RNA polymerase catalytic subunit Proteins 0.000 description 1
- 102000013691 Interleukin-17 Human genes 0.000 description 1
- 108050003558 Interleukin-17 Proteins 0.000 description 1
- 206010024291 Leukaemias acute myeloid Diseases 0.000 description 1
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 1
- 208000031422 Lymphocytic Chronic B-Cell Leukemia Diseases 0.000 description 1
- 102000043129 MHC class I family Human genes 0.000 description 1
- 108091054437 MHC class I family Proteins 0.000 description 1
- 108700018351 Major Histocompatibility Complex Proteins 0.000 description 1
- 102100035877 Monocyte differentiation antigen CD14 Human genes 0.000 description 1
- 208000003445 Mouth Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000034578 Multiple myelomas Diseases 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 208000033776 Myeloid Acute Leukemia Diseases 0.000 description 1
- AFBPFSWMIHJQDM-UHFFFAOYSA-N N-methyl-N-phenylamine Natural products CNC1=CC=CC=C1 AFBPFSWMIHJQDM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000001894 Nasopharyngeal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 102100027347 Neural cell adhesion molecule 1 Human genes 0.000 description 1
- 208000015914 Non-Hodgkin lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 206010057444 Oropharyngeal neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229930012538 Paclitaxel Natural products 0.000 description 1
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 206010034299 Penile cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010034811 Pharyngeal cancer Diseases 0.000 description 1
- 102000004160 Phosphoric Monoester Hydrolases Human genes 0.000 description 1
- 108090000608 Phosphoric Monoester Hydrolases Proteins 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 208000004880 Polyuria Diseases 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 102000002067 Protein Subunits Human genes 0.000 description 1
- 208000010378 Pulmonary Embolism Diseases 0.000 description 1
- 206010037423 Pulmonary oedema Diseases 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 238000010240 RT-PCR analysis Methods 0.000 description 1
- 239000008156 Ringer's lactate solution Substances 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 1
- 208000000453 Skin Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000032383 Soft tissue cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010041848 Squamous cell carcinoma of the cervix Diseases 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 241001493546 Suina Species 0.000 description 1
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 1
- 208000024313 Testicular Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010057644 Testis cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000023915 Ureteral Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010046392 Ureteric cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000002495 Uterine Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 210000001015 abdomen Anatomy 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 231100000403 acute toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000007059 acute toxicity Effects 0.000 description 1
- 238000011374 additional therapy Methods 0.000 description 1
- 206010065867 alveolar rhabdomyosarcoma Diseases 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 201000007696 anal canal cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000003484 anatomy Anatomy 0.000 description 1
- 230000010100 anticoagulation Effects 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 1
- 208000011769 benign colon neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 229960001561 bleomycin Drugs 0.000 description 1
- OYVAGSVQBOHSSS-UAPAGMARSA-O bleomycin A2 Chemical compound N([C@H](C(=O)N[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)NCCC=1SC=C(N=1)C=1SC=C(N=1)C(=O)NCCC[S+](C)C)[C@@H](O[C@H]1[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O1)O[C@@H]1[C@H]([C@@H](OC(N)=O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)C=1N=CNC=1)C(=O)C1=NC([C@H](CC(N)=O)NC[C@H](N)C(N)=O)=NC(N)=C1C OYVAGSVQBOHSSS-UAPAGMARSA-O 0.000 description 1
- 238000009534 blood test Methods 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- ZEWYCNBZMPELPF-UHFFFAOYSA-J calcium;potassium;sodium;2-hydroxypropanoic acid;sodium;tetrachloride Chemical compound [Na].[Na+].[Cl-].[Cl-].[Cl-].[Cl-].[K+].[Ca+2].CC(O)C(O)=O ZEWYCNBZMPELPF-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 1
- 210000004970 cd4 cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 201000006662 cervical adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 201000006612 cervical squamous cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 239000002975 chemoattractant Substances 0.000 description 1
- 230000003399 chemotactic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 208000032852 chronic lymphocytic leukemia Diseases 0.000 description 1
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 1
- 201000011024 colonic benign neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000000112 colonic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000026 common toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 206010052015 cytokine release syndrome Diseases 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000006735 deficit Effects 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 238000002224 dissection Methods 0.000 description 1
- 230000035619 diuresis Effects 0.000 description 1
- 210000000959 ear middle Anatomy 0.000 description 1
- 239000008151 electrolyte solution Substances 0.000 description 1
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 230000003631 expected effect Effects 0.000 description 1
- 208000024519 eye neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229960004177 filgrastim Drugs 0.000 description 1
- UIWYJDYFSGRHKR-UHFFFAOYSA-N gadolinium atom Chemical compound [Gd] UIWYJDYFSGRHKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000232 gallbladder Anatomy 0.000 description 1
- 201000007487 gallbladder carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- SDUQYLNIPVEERB-QPPQHZFASA-N gemcitabine Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1C(F)(F)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 SDUQYLNIPVEERB-QPPQHZFASA-N 0.000 description 1
- 229960005277 gemcitabine Drugs 0.000 description 1
- 230000030279 gene silencing Effects 0.000 description 1
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002773 hyaluronidase Drugs 0.000 description 1
- 230000007954 hypoxia Effects 0.000 description 1
- 238000011532 immunohistochemical staining Methods 0.000 description 1
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 1
- 239000003547 immunosorbent Substances 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000011221 initial treatment Methods 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 description 1
- 238000001361 intraarterial administration Methods 0.000 description 1
- 210000003228 intrahepatic bile duct Anatomy 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000007913 intrathecal administration Methods 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000000527 lymphocytic effect Effects 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- FVVLHONNBARESJ-NTOWJWGLSA-H magnesium;potassium;trisodium;(2r,3s,4r,5r)-2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanoate;acetate;tetrachloride;nonahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.O.O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[Mg+2].[Cl-].[Cl-].[Cl-].[Cl-].[K+].CC([O-])=O.OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O FVVLHONNBARESJ-NTOWJWGLSA-H 0.000 description 1
- 238000002826 magnetic-activated cell sorting Methods 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 208000006178 malignant mesothelioma Diseases 0.000 description 1
- 208000026037 malignant tumor of neck Diseases 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 210000005015 mediastinal lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 210000000713 mesentery Anatomy 0.000 description 1
- CSHFHJNMIMPJST-HOTGVXAUSA-N methyl (2s)-2-[[(2s)-2-[[2-[(2-aminoacetyl)amino]acetyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoate Chemical compound NCC(=O)NCC(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)OC)CC1=CC=CC=C1 CSHFHJNMIMPJST-HOTGVXAUSA-N 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 1
- 201000003956 middle ear cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 201000008106 ocular cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000002747 omentum Anatomy 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 201000006958 oropharynx cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960001592 paclitaxel Drugs 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 230000000149 penetrating effect Effects 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 210000003899 penis Anatomy 0.000 description 1
- 108010009779 peptide 32 Proteins 0.000 description 1
- 210000005105 peripheral blood lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000004303 peritoneum Anatomy 0.000 description 1
- 235000020030 perry Nutrition 0.000 description 1
- 201000008006 pharynx cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000004224 pleura Anatomy 0.000 description 1
- 201000003437 pleural cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- 208000037821 progressive disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 230000001902 propagating effect Effects 0.000 description 1
- XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M propidium iodide Chemical compound [I-].[I-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CCC[N+](C)(CC)CC)=C1C1=CC=CC=C1 XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 208000005333 pulmonary edema Diseases 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 1
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 1
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 1
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 1
- 208000013220 shortness of breath Diseases 0.000 description 1
- 201000000849 skin cancer Diseases 0.000 description 1
- 201000002314 small intestine cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000020382 suppression by virus of host antigen processing and presentation of peptide antigen via MHC class I Effects 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 1
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N taxol Chemical compound O([C@@H]1[C@@]2(C[C@@H](C(C)=C(C2(C)C)[C@H](C([C@]2(C)[C@@H](O)C[C@H]3OC[C@]3([C@H]21)OC(C)=O)=O)OC(=O)C)OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)C=1C=CC=CC=1)C=1C=CC=CC=1)O)C(=O)C1=CC=CC=C1 RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N 0.000 description 1
- 201000003120 testicular cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- UCFGDBYHRUNTLO-QHCPKHFHSA-N topotecan Chemical compound C1=C(O)C(CN(C)C)=C2C=C(CN3C4=CC5=C(C3=O)COC(=O)[C@]5(O)CC)C4=NC2=C1 UCFGDBYHRUNTLO-QHCPKHFHSA-N 0.000 description 1
- 229960000303 topotecan Drugs 0.000 description 1
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 1
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 1
- 201000011294 ureter cancer Diseases 0.000 description 1
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010046766 uterine cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010046885 vaginal cancer Diseases 0.000 description 1
- OGWKCGZFUXNPDA-XQKSVPLYSA-N vincristine Chemical compound C([N@]1C[C@@H](C[C@]2(C(=O)OC)C=3C(=CC4=C([C@]56[C@H]([C@@]([C@H](OC(C)=O)[C@]7(CC)C=CCN([C@H]67)CC5)(O)C(=O)OC)N4C=O)C=3)OC)C[C@@](C1)(O)CC)CC1=C2NC2=CC=CC=C12 OGWKCGZFUXNPDA-XQKSVPLYSA-N 0.000 description 1
- 229960004528 vincristine Drugs 0.000 description 1
- OGWKCGZFUXNPDA-UHFFFAOYSA-N vincristine Natural products C1C(CC)(O)CC(CC2(C(=O)OC)C=3C(=CC4=C(C56C(C(C(OC(C)=O)C7(CC)C=CCN(C67)CC5)(O)C(=O)OC)N4C=O)C=3)OC)CN1CCC1=C2NC2=CC=CC=C12 OGWKCGZFUXNPDA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000005102 vulva cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/461—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
- A61K39/4611—T-cells, e.g. tumor infiltrating lymphocytes [TIL], lymphokine-activated killer cells [LAK] or regulatory T cells [Treg]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
- A61K39/4643—Vertebrate antigens
- A61K39/4644—Cancer antigens
- A61K39/46449—Melanoma antigens
- A61K39/464492—Glycoprotein 100 [Gp100]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
- A61K39/464838—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
- A61P11/04—Drugs for disorders of the respiratory system for throat disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
- A61P15/02—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives for disorders of the vagina
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
- C12N5/0636—T lymphocytes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
- C12N5/0636—T lymphocytes
- C12N5/0638—Cytotoxic T lymphocytes [CTL] or lymphokine activated killer cells [LAK]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
- C12N7/02—Recovery or purification
- C12N7/025—Packaging cell lines, e.g. transcomplementing cell lines, for production of virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/57—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2
- A61K2039/572—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2 cytotoxic response
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/58—Medicinal preparations containing antigens or antibodies raising an immune response against a target which is not the antigen used for immunisation
- A61K2039/585—Medicinal preparations containing antigens or antibodies raising an immune response against a target which is not the antigen used for immunisation wherein the target is cancer
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/20—Cytokines; Chemokines
- C12N2501/23—Interleukins [IL]
- C12N2501/2302—Interleukin-2 (IL-2)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2502/00—Coculture with; Conditioned medium produced by
- C12N2502/30—Coculture with; Conditioned medium produced by tumour cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/20011—Papillomaviridae
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Virology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Oncology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Otolaryngology (AREA)
- Gynecology & Obstetrics (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Настоящее изобретение относится к иммунологии. Предложены способы получения популяции Т-клеток, специфичных в отношении папилломавируса человека (HPV), включающие разделение образца HPV-позитивной опухоли головы и шеи на многочисленные фрагменты; культивирование многочисленных фрагментов по отдельности; получение Т-клеток из культивируемых многочисленных фрагментов; тестирование по отдельности Т-клеток из многочисленных фрагментов на специфичное распознавание HPV; отбор Т-клеток, которые демонстрируют специфичное распознавание HPV, и увеличение числа отобранных Т-клеток для получения популяции HPV-специфичных Т-клеток. Данное изобретение может найти дальнейшее применение в адоптивной клеточной терапии. 2 н. и 11 з.п. ф-лы, 22 ил., 8 табл., 12 пр.
Description
Настоящее изобретение было создано при поддержке Правительства с №проекта ВС010984-05 Национальным институтом здоровья, Национальным институтом онкологии. Правительство имеет определенные права на изобретение.
Перекрестная ссылка на родственную заявку
В данной заявке на патент испрашивается приоритет предварительной заявки на патент США №61/846161, поданной 15 июля 2013 г., которая включена в данный документ посредством ссылки во всей ее полноте.
Предшествующий уровень техники
Первичной причиной некоторых типов рака, таких как, например, рак шейки матки, является инфекция папилломавирусом человека (HPV). Несмотря на успехи в лечении, таком как химиотерапия, прогноз для многих раковых заболеваний, включая раковые заболевания, ассоциированные с HPV, может быть плохим. Соответственно, существует неудовлетворенная потребность в дополнительных способах лечения рака, в частности, раковых заболеваний, ассоциированных с HPV.
Краткое изложение сущности изобретения
В одном воплощении изобретения предложен способ получения популяции HPV-специфичных Т-клеток, включающий: разделение образца HPV-позитивной опухоли на многочисленные фрагменты; культивирование по отдельности многочисленных фрагментов в присутствии только одного цитокина; получение Т-клеток из культивируемых многочисленных фрагментов; тестирование Т-клеток в отношении одного или обоих из специфичных распознавания аутологичной HPV-позитивной опухоли и распознавания антигена HPV; отбор Т-клеток, которые демонстрируют одно или оба из специфичных распознавания аутологичной HPV-позитивной опухоли и распознавания антигена HPV; и увеличение числа отобранных Т-клеток с получением популяции HPV-специфичных Т-клеток.
В другом воплощении изобретения предложен способ получения популяции HPV-специфичных Т-клеток, включающий: разделение образца HPV-позитивной опухоли на многочисленные фрагменты; культивирование по отдельности многочисленных фрагментов; получение Т-клеток из культивируемых многочисленных фрагментов; тестирование Т-клеток в отношении одного или обоих из специфичных распознавания аутологичной HPV-позитивной опухоли и распознавания антигена HPV; отбор Т-клеток, которые демонстрируют одно или оба из специфичных распознавания аутологичной HPV-позитивной опухоли и распознавания антигена HPV; и увеличение числа отобранных Т-клеток с использованием одного или обоих из (i) антитела ОКТ3 и (ii) интерлейкина-2 (IL-2) с получением популяции HPV-специфичных Т-клеток.
В еще одном воплощении изобретения предложен способ лечения или предупреждения рака у млекопитающего, включающий: разделение образца HPV-позитивной опухоли на многочисленные фрагменты; культивирование по отдельности многочисленных фрагментов; получение Т-клеток из культивируемых многочисленных фрагментов; тестирование Т-клеток в отношении одного или обоих из специфичных распознавания аутологичной HPV-позитивной опухоли и распознавания антигена HPV; отбор Т-клеток, которые демонстрируют одно или оба из специфичных распознавания аутологичной HPV-позитивной опухоли и распознавания антигена HPV; увеличение числа отобранных Т-клеток с получением популяции HPV-специфичных Т-клеток для адоптивной клеточной терапии; и введение увеличенного числа Т-клеток млекопитающему в эффективном количестве для лечения или предупреждения рака у млекопитающего.
Краткое описание нескольких видов графических материалов
Фиг. 1А представляет собой график, показывающий концентрацию интерферона гамма (IFN-γ) (пг/мл), секретируемого эффекторными проникающими в опухоль лимфоцитами (TIL от англ. - tumor infiltrating lymphocytes), полученными из 22 фрагментов опухоли (F1-F22) от пациента 1, или TIL меланомы, при совместном культивировании с мишенью - пулом пептидов gp100 (от англ. - glycoprotein 100 - гликопротеин 100) (закрашенные столбики) или пулом пептидов Е7 HPV 18 (незакрашенные столбики).
Фиг. 1Б представляет собой график, показывающий концентрацию IFN-γ (пг/мл), секретируемого эффекторными TIL меланомы или TIL, полученными из 22 фрагментов опухоли (F1-F22) от пациента 1, при совместном культивировании с мишенью - линией клеток аутологичной опухоли (незакрашенные столбики) или клетками 624 (линия клеток меланомы) (закрашенные столбики).
Фиг. 2А представляет собой график, показывающий концентрацию IFN-γ (пг/мл), секретируемого эффекторными TIL, полученными из фрагмента опухоли F16, F17 или F22 пациента 1, или клетками, которые давали пациенту для лечения («инфузионный мешок»), при совместном культивировании с мишенью - клетками аутологичной опухоли (закрашенные столбики), одноядерными клетками периферической крови (РВМС от англ. - peripheral blood mononuclear cells) из аутологичной ткани (заштрихованные столбики с восходящей диагональной штриховкой), опухолевыми клетками, совпадающими по всем локусам класса I (заштрихованные столбики с нисходящей диагональной штриховкой), клетками HeLa, не совпадающими по HLA (антиген лимфоцитов человека от англ. - human leukocyte antigens) (столбики с вертикальной штриховкой) или клетками CaSki, не совпадающими по HLA (столбики с горизонтальной штриховкой).
Фиг. 2Б представляет собой график, показывающий концентрацию IFN-γ (пг/мл), секретируемого эффекторными TIL от пациента 1, культивируемыми в одиночку (без опухоли) или при совместном культивировании с аутологичными опухолевыми клетками, которые были трансфицированы РНК сайленсинга против HLA-A, HLA-B, HLA-C, или РНК против иррелевантной мишени (на которую не осуществляется нацеливание).
Фиг. 2 В представляет собой график, показывающий концентрацию IFN-γ (пг/мл), секретируемого эффекторными TIL при совместном культивировании с клетками-мишенями (эффектор/мишени: TIL Пациента 1/аутологичные опухолевые клетки; клетки DMF5/624; или F15/ E6121-135 HPV18) без антитела (черные столбики), с антителом против HLA-A2 (заштрихованные столбики с нисходящей диагональной штриховкой) или с антителом против класса II (заштрихованные столбики с восходящей диагональной штриховкой). Белые столбики указывают эффекторные клетки, культивируемые в одиночку.
Фиг. 3 представляет собой график, показывающий концентрацию IFN-γ (пг/мл), секретируемого эффекторными TIL из фрагмента опухоли F16 или F22 Пациента 1; клетками, которые давали пациенту для лечения («инфузионный мешок»); TIL меланомы 1, 2 или 3 (культивируемые TIL из меланомных опухолей); TCR mE7 (Т-клетки, трансдуцированные для экспрессии TCR (рецептор Т-клетки) против E711-19 HPV 16); или TIL F15 (TIL от другого пациента, которые реагировали против Е6121-135 HPV 18, ограниченных классом II и, следовательно, блокируемыми НВ145) при совместном культивировании с пулом пептидов gp100 (белые столбики), антителом ОКТ3 (столбики с горизонтальной штриховкой) или дендритными клетками (DC), меченными пептидным пулом Е7 HPV 18 (черные столбики), пептидным пулом Е7 HPV 18 и W6/32 (заштрихованные столбики с тонкой восходящей диагональной штриховкой), Е711-19 HPV 16 (заштрихованные столбики с толстой восходящей диагональной штриховкой), Е711-19 HPV 16 и W6/32 (столбики в клетку), Е711-19 HPV 16 и НВ145 (столбики с перпендикулярными крестиками), Е6121-135 HPV 18 (заштрихованные столбики с нисходящей диагональной штриховкой), Е6121-135 HPV 18 и W6/32 (столбики с наклонным перекрещиванием) или Е6121-135 HPV 18 и НВ 145 (столбики с черными прямоугольниками с белым окаймлением).
Фиг. 4А и 4Б представляют собой графики, показывающий концентрацию IFN-γ (пг/мл), секретируемого клонами 1-24 (А) или клонами 24-48 (Б) эффекторных TIL, которые были клонированы из фрагмента опухоли F16 от Пациента 1, при совместном культивировании с пептидным пулом gp100 (серые столбики) или с пептидным пулом Е7 HPV 18 (черные столбики).
Фиг. 5 представляет собой график, показывающий концентрацию IFN-γ (пг/мл), секретируемого эффекторными TIL из 36 разных фрагментов опухоли (F1-F36) от Пациента 12 или TIL меланомы (DM5) (контроль) при совместном культивировании с дендритными клетками, меченными пептидным пулом Е6 HPV 18 (черные столбики), пептидным пулом Е7 HPV 18 (серые столбики) или пептидным пулом gp100 (контроль).
Фиг. 6 представляет собой график, показывающий концентрацию IFN-γ (пг/мл), секретируемого эффекторными TIL, полученными из фрагмента опухоли F1 пациента 12 или TIL меланомы 1, 2 или 3 при совместном культивировании с DC, которые были трансдуцированы лентивирусным вектором, кодирующим зеленый флуоресцентный белок (GFP от англ. - green fluorescent protein) (белые столбики) или Е6 HPV 18 (серые столбики), или меченными пептидным пулом gp100 (заштрихованные столбики с восходящей диагональной штриховкой) или пептидным пулом Е6 HPV 18 (заштрихованные столбики с нисходящей диагональной штриховкой). Столбики с горизонтальной штриховкой указывают TIL, культивируемые с антителом ОКТ3.
Фиг. 7А представляет собой график, показывающий концентрацию фактора некроза опухоли (TNF) α (пг/мл), секретируемого клонами 1, 3, 12 и 20, при культивировании в одиночку (серые столбики) или с пептидным пулом Е6 HPV 18 (черные столбики).
Фиг. 7Б представляет собой график, показывающий концентрацию TNFα (пг/мл), секретируемого клонами 3, 12 и 20, при культивировании в одиночку (белые столбики) или с пептидным пулом Е6 HPV 18 (серые столбики) или с пептидным подпулом 1 Е6 HPV 18 (заштрихованные столбики с восходящей диагональной штриховкой), подпулом 2 (заштрихованные столбики с нисходящей диагональной штриховкой), подпулом 3 (столбики с горизонтальной штриховкой), подпулом 4 (столбики с вертикальной штриховкой) или подпулом 5 (черные столбики).
Фиг. 7 В представляет собой график, показывающий концентрацию TNFα (пг/мл), секретируемого клонами 3, 12 и 20, при культивировании в одиночку (белые столбики) или с пептидом 30 Е6 HPV 18 (столбики с точками), пептидом 31 (черные столбики), пептидом 32 (серые столбики), пептидом 33 (столбики с вертикальной штриховкой), пептидом 34 (заштрихованные столбики с восходящей диагональной штриховкой), пептидом 35 (заштрихованные столбики с нисходящей диагональной штриховкой), пептидом 36 (столбики с квадратиками) или пептидом 37 (столбики с рисунком в виде наклонных прямоугольников).
Фиг. 8А-8В представляют собой графики, показывающие концентрацию TNFα (пг/мл), секретируемого клонами 3 (А), 12 (Б) и 20 (В), при совместном культивировании с аутологичными РВМС (мононуклеарная клетка периферической крови, от англ. - peripheral blood mononuclear cell) (P12) или РВМС от одного из Доноров 1-6.
Фиг. 9А представляет собой график, показывающий концентрацию IFN-γ (пг/мл), секретируемого клоном 3 фрагмента опухоли F15 Пациента 12, при совместном культивировании с аутологичными РВМС (Р12) или РВМС донора DRB1*15, DQB1*06, РВМС донора DRB1*15 или РВМС донора DQB1*06, меченными пептидом Е677-91 HPV 18 (незакрашенные столбики) или E6121-135 HPV 18 (закрашенные столбики).
Фиг. 9Б представляет собой график, показывающий концентрацию IFN-γ (пг/мл), секретируемого клоном 20 фрагмента опухоли F15 Пациента 12, при совместном культивировании с РВМС, меченными пептидом E6121-135 HPV 18, или Т-клетками mF5 (трансдуцированными для экспрессии TCR против MART-1), совместно культивируемыми с клетками 624 с антителами против HLA-DR (столбики с горизонтальной штриховкой), HLA-DQ (заштрихованные столбики с нисходящей диагональной штриховкой), HLA-DP (заштрихованные столбики с восходящей диагональной штриховкой), антителами против пан-класса I (черные столбики) или антителами против пан-класса II (белые столбики).
Фиг. 10 представляет собой график, показывающий концентрацию IFN-γ (пг/мл), секретируемого эффекторными TIL из 24 разных фрагментов опухоли (F1-F24) от Пациента 4 или TIL меланомы (контроль), при совместном культивировании с дендритными клетками, меченными пептидным пулом Е6 HPV 16 (заштрихованные столбики с нисходящей диагональной штриховкой), пептидным пулом Е7 HPV 16 (заштрихованные столбики с восходящей диагональной штриховкой) или пептидным пулом gp100 (контроль) (черные столбики). Звездочка (*) показывает TIL, инфундированные пациенту.
Фиг. 11А представляет собой график, показывающий концентрацию IFN-γ (пг/мл), секретируемого клонами CD8-позитивных эффекторных TIL от Пациента 4, при совместном культивировании с дендритными клетками, меченными пептидным пулом Е7 HPV 16 (закрашенные столбики), или без пептида (незакрашенные столбики).
Фиг. 11Б представляет собой график, показывающий концентрацию IFN-γ (пг/мл), секретируемого клонами CD4-позитивных эффекторных TIL от Пациента 4, при совместном культивировании с дендритными клетками, меченными пептидным пулом Е7 HPV 16 (закрашенные столбики), или без пептида (незакрашенные столбики).
Фиг. 11В представляет собой график, показывающий концентрацию IFN-γ (пг/мл), секретируемого клонами CD8-позитивных эффекторных TIL от Пациента 4, при совместном культивировании с дендритными клетками, меченными пептидным пулом Е6 HPV 16 (закрашенные столбики), или без пептида (незакрашенные столбики).
Фиг. 11Г представляет собой график, показывающий концентрацию IFN-γ (пг/мл), секретируемого клонами CD4-позитивных эффекторных TIL от Пациента 4, при совместном культивировании с дендритными клетками, меченными пептидным пулом Е6 HPV 16 (закрашенные столбики), или без пептида (незакрашенные столбики).
Фиг. 12А-Б представляют собой сканы компьютерной томографии (СТ от англ. - computed tomography) грудной клетки Пациента 4 до (А) и через девять месяцев после лечения (Б) адоптивной клеточной терапией. Стрелка в А указывает на раковое поражение в парааортальном лимфатическом узле.
Фиг. 12В-Г представляют собой сканы СТ грудной клетки Пациента 4 до (В) и через девять месяцев после лечения (Г) адоптивной клеточной терапией. Стрелка в B указывает на раковое поражение в левом лимфатическом узле корня легкого.
Фиг. 12Д-Е представляют собой сканы СТ таза Пациента 4 до (Д) и через девять месяцев после лечения (Е) адоптивной клеточной терапией. Стрелка в Д указывает на раковое поражение в общем подвздошном лимфатическом узле.
Фиг. 13 представляет собой график, показывающий концентрацию IFN-γ (пг/мл), секретированного эффекторными TIL из 24 разных фрагментов опухоли от Пациента 8 или TIL меланомы (контроль), при совместном культивировании с дендритными клетками, меченными пептидным пулом Е6 HPV 18 (заштрихованные столбики с нисходящей диагональной штриховкой), пептидным пулом Е7 HPV 18 (заштрихованные столбики с восходящей диагональной штриховкой) или пептидным пулом gp100 (контроль) (черные столбики). Звездочка (*) показывает TIL, инфундированные пациенту.
Фиг. 14А-Б представляют собой сканы магнитно-резонансной томографии (МРТ) печени Пациента 8 до (А) и через два месяца после лечения (Б) адоптивной клеточной терапией. Стрелка в А указывает на раковую массу в печени.
Фиг. 14В-Г представляют собой сканы СТ брюшной полости Пациента 8 до (В) и через два месяца после лечения (Г) адоптивной клеточной терапией. Стрелка в B указывает на раковое поражение в забрюшинном лимфатическом узле.
Фиг. 14Д-Е представляют собой сканы СТ брюшной полости Пациента 8 до (Д) и через два месяца (Е) после лечения адоптивной клеточной терапией. Стрелка в Д указывает на раковую массу в брюшной стенке.
Фиг. 14Ж-З представляют собой сканы СТ таза Пациента 8 до (Ж) и через два месяца (3) после лечения адоптивной клеточной терапией. Стрелка в Ж указывает на раковую массу в левой околотолстокишечной области.
Фиг. 15А представляет собой график, показывающий измерение размера опухоли (% изменения от исходного уровня) в парааортальном (кружки), в корне левого легкого (квадраты), в корне правого легкого (Δ) и общем подвздошном (∇) лимфатических узлах Пациента 4 в моменты времени (число месяцев) после инфузии HPV-TIL.
Фиг. 15Б представляет собой график, показывающий измерение размера опухоли (% изменения от исходного уровня) в желудочной стенке живота(кружки), парааортальном лимфатическом узле (квадраты), левой части таза (Δ) и правом мочеточнике (∇) Пациента 8 в моменты времени (число месяцев) после инфузии HPV-TIL.
Фиг. 16А-Г представляют собой замедленные, усиленные гадолинием Т1-взвешенные изображения МРТ Пациента 8. На каждом из А и В показана опухоль на поверхности печени до лечения. На Б и Г показано, что никакой опухоли не было через 11 месяцев после лечения. Стрелки в А и В показывают расположения опухолей.
Фиг. 17А представляет собой график, показывающий уровень сывороточного цитокина (пг/мл), измеренный у Пациента 4 в моменты времени (число суток) после лечения. Измеренные цитокины включают интерлейкин (IL-2 (закрашенные кружки), IL-4 (квадратики), IL-6 (), IL-13 (), гранулоцитарный колониестимулирующий фактор (G-CSF) (ромбы) и фактор некроза опухоли альфа (TNF-α) (незакрашенные кружки). Цитокины, которые вводили пациенту, подчеркнуты.
Фиг. 17Б представляет собой график, показывающий уровень сывороточного цитокина (пг/мл), измеренный у Пациента 8 в определенное число суток после лечения. Измеренные цитокины включают IL-2 (закрашенные кружки), IL-5 (закрашенные квадратики), IL-6 (), IL-8 (), G-CSF (ромбы), моноцитарный хемоаттрактантный белок-1 (МСР-1) (незакрашенные кружки) и TNF-α (незакрашенные квадратики). Цитокины, которые вводили пациенту, подчеркнуты.
Фиг. 18А-Г представляют собой графики, показывающие реактивность TIL, подлежащих введению Пациенту 4 (А и В) или Пациенту 8 (Б и Г) (закрашенные столбики), против Е6 HPV, Е7 HPV или вируса Эпштейна-Барр (EBV) (контроль) при измерении анализами секреции IFN-гамма (пг/мл) (А и Б) и ELISPOT (метод иммуноферментных пятен, от англ. - Enzyme-Linked ImmunoSpot) (В и Г). Незакрашенные столбики представляют реактивность Т-клеток, реагирующих с EBV, от того же самого пациента (контроль).
Фиг. 19А-Б представляют собой графики, показывающие число лимфоцитов (клеток/мм3) для Пациента 4 (А) и Пациента 8 (Б) в разные моменты времени (сутки) после инфузии TIL. Подсчитанные клетки включают Т-клетки CD8 (квадратики), Т-клетки CD4 (кружки), клетки NK (натуральный киллер) () и В-клетки ().
Фиг. 19В-Г представляют собой графики, показывающие Т-клетки, реагирующие с HPV, выявленные в периферической крови пациента 4 (В) или пациента 8 (Г) в разные моменты времени (месяцы) после инфузии TIL при измерении по IFN-гамма (пг/мл). Измеряли реактивность против Е6 HPV (серые столбики), Е7 EPV (черные столбики) или gp100 (контроль) (незакрашенные столбики).
Фиг. 19Д-Е представляют собой графики, показывающие количественное измерение Т-клеток, реагирующих с HPV, выявленных в периферической крови Пациента 4 (Д) или Пациента 8 (Е), в разные моменты времени (месяцы) после инфузии TIL при измерении ELISPOT. Измеряли реактивность против Е6 HPV (серые столбики), Е7 EPV (черные столбики) или gp100 (контроль) (незакрашенные столбики).
Фиг. 20А-Й представляют собой сканы магнитно-резонансной томографии (МРТ) Пациента 13, который имел метастатический рак миндалины, до (А, В, Д, Ж и И) и через четыре месяца после лечения (Б, Г, Е, З и Й) адоптивной клеточной терапией. Стрелки указывают на многочисленные злокачественные опухоли в легких и в правом корне легкого.
Фиг. 21А-Б представляют собой сканы СТ грудной клетки Пациента 4 до (А) и через 18 месяцев после лечения (Б) адоптивной клеточной терапией. Стрелка в А указывает на раковое поражение в парааортальном лимфатическом узле.
Фиг. 21В-Г представляют собой сканы СТ грудной клетки Пациента 4 до (В) и через 18 месяцев после лечения (Г) адоптивной клеточной терапией. Стрелка в B указывает на поражение левого корня легкого и трахеобронхиальное поражение.
Фиг. 21Д-Е представляют собой сканы СТ грудной клетки Пациента 4 до (Д) и через 18 месяцев (Е) после лечения адоптивной клеточной терапией. Стрелка в Д указывает на двухсторонние поражения корней легких.
Фиг. 21Ж-З представляют собой сканы СТ таза Пациента 4 до (Ж) и через 18 месяцев после лечения (3) адоптивной клеточной терапией. Стрелка в Ж указывает на раковое поражение в общем подвздошном лимфатическом узле.
Фиг. 22А-Б представляют собой сканы СТ брюшной полости Пациента 8 до (A) и через 11 месяцев после лечения (Б) адоптивной клеточной терапией. Стрелка в А указывает на раковое поражение в забрюшинном лимфатическом узле.
Фиг. 22В-Г представляют собой сканы СТ брюшной полости Пациента 8 до (B) и через 11 месяцев после лечения (Г) адоптивной клеточной терапией. Стрелка в B указывает на раковую массу в брюшной стенке и забрюшинную опухоль.
Фиг. 22Д-Е представляют собой сканы СТ брюшной полости Пациента 8 до (Д) и через 11 месяцев после лечения (Е) адоптивной клеточной терапией. Стрелка в Д указывает на раковую массу около ободочной кишки.
Фиг. 22Ж-З представляют собой сканы СТ таза Пациента 8 до (Ж) и через 11 месяцев после лечения (3) адоптивной клеточной терапией. Стрелка в Ж указывает на раковую массу в левой части таза. Треугольник в 3 указывает на стент мочеточника.
Подробное описание изобретения
Открыли, что можно получать популяции Т-клеток, специфичных в отношении папилломавируса человека (HPV), для целого ряда применений, например, для адоптивной клеточной терапии. Согласно способам по изобретению можно получать клетки, которые являются полезными для лечения целого ряда состояний, например, рака.
Способы по изобретению дают многочисленные преимущества. Например, согласно способам по изобретению, преимущественно, можно получать Т-клетки из HPV-позитивных раковых опухолей с качеством и в масштабе, подходящих для клинического применения. Дополнительно, согласно способам по изобретению, преимущественно, можно получать Т-клетки, которые распознают антигены Е6 и Е7 HPV, которые конститутивно и специфично экспрессируются раковыми клетками и не экспрессируются нормальными клетками. Следовательно, не будучи связанными конкретной теорией или механизмом, считается, что Т-клетки, полученные способами по изобретению, преимущественно нацелены на разрушение раковых клеток при минимизации или устранении разрушения нормальных, нераковых клеток, посредством этого, уменьшая, например, посредством минимизации или устранения, токсичность. Кроме того, поскольку воплощение способов по изобретению включает немиелоаблативную химиотерапию, способы по изобретению можно преимущественно использовать для лечения пациентов, которые не подходили бы для лечения, которое включает облучение всего организма (TBI, от англ. - total body irradiation), таких как, например, пациенты, которые уже подвергались миелоаблативной терапии, например, лучевой терапии, до лечения; пациенты с сопутствующими состояниями и пациенты с менее чем 2×106 клеток CD34+/кг. Кроме того, способы лечения рака по изобретению, преимущественно, могут успешно лечить или предупреждать HPV-позитивные раковые заболевания, которые не отвечают на другие типы лечения, такие как, например, одна химиотерапия, хирургическая операция или облучение.
Одно воплощение изобретения включает получение образца HPV-позитивной опухоли от млекопитающего. Образец опухоли можно получать от млекопитающего любым подходящим способом, таким как, например, биопсия или хирургическая резекция.
В одном воплощении данный способ может включать тестирование образца опухоли на инфекцию HPV. HPV может представлять собой любой подтип HPV. Предпочтительно подтип HPV представляет собой HPV 16 или HPV 18. Тестирование может включать тестирование на экспрессию любого белка (например, антигена), специфично экспрессируемого клетками, инфицированными HPV, такого как, например, любой один или более чем один из Е6 HPV 16, Е7 HPV 16, Е6 HPV 18 и Е7 HPV 18, экспрессию любой РНК, кодирущей HPV-специфичный белок, или их комбинацию. Тестирование на инфекцию HPV можно проводить любым подходящим способом, известным в данной области. Типичные анализы на HPV могут включать любой один или более чем один из генотипирования на основе полимеразной цепной реакции (ПЦР) с обратной транскриптазой (ОТ) и вестерн-блоттингов. Образец опухоли может быть позитивным в отношении любого подтипа инфекции HPV, такой как, например, инфекция HPV 16 или HPV 18.
Одно воплощение изобретения включает разделение образца HPV-позитивной опухоли на многочисленные фрагменты. Образец опухоли можно делить на любое подходящее число фрагментов, как, например, на 4, 8, 12, 16, 20, 24, 28, 32, 36, 40 или более фрагментов. Предпочтительно, образец опухоли делят на 24 фрагмента. Образец опухоли можно делить любым подходящим способом, например, механически (разъединяя опухоль с использованием, например, диссоциатора gentleMACS™, Miltenyi Biotec, Оберн, Калифорния) или ферментативно (например, коллагеназа или ДНКаза).
Одно воплощение изобретения включает культивирование многочисленных фрагментов по отдельности. В данном отношении фрагменты можно культивировать в отдельных контейнерах, например, в отдельных чашках или отдельных лунках планшета. Многочисленные фрагменты можно культивировать любым подходящим способом. Например, фрагменты можно культивировать в газопроницаемом контейнере, как описано в публикации заявки на патент США №2012/0244133. В одном воплощении изобретения фрагменты опухоли культивируют в присутствии комбинации двух или более чем двух цитокинов. В предпочтительном воплощении, однако, способ включает культивирование фрагментов опухоли в присутствии только одного цитокина. Цитокин может представлять собой любой подходящий цитокин, такой как, например, интерлейкин (IL)-2, IL-7, IL-15 или IL-12. Предпочтительно цитокин представляет собой IL-2. Фрагменты опухоли можно культивировать в любом подходящем количестве цитокина (например, от примерно 30 IU (международная единица)/мл до примерно 6000 IU/мл, предпочтительно примерно 6000 IU/мл). Предпочтительно способ включает культивирование фрагментов опухоли в примерно 6000 IU/мл IL-2.
Способ может включать получение Т-клеток из культивируемых многочисленных фрагментов. Способ может включать культивирование Т-клеток до конфлюентности (например, примерно 2×106 лимфоцитов на мл в 24-луночном планшете), например, от примерно 12 до примерно 28 суток.
Способ может включать тестирование Т-клеток на одно или оба из специфичных распознавания аутологичной HPV-позитивной опухоли и распознавания антигена HPV. Специфичное распознавание аутологичной HPV-позитивной опухоли можно тестировать любым способом, известным в данной области, например, измерением высвобождения цитокина (например, интерферона (IFN)-γ) после совместного культивирования с аутологичными HPV-позитивными опухолевыми клетками. Можно считать, что Т-клетки распознают HPV-позитивную опухоль, если, например, совместное культивирование с аутологичными HPV-позитивными опухолевыми клетками приводит к высвобождению IFN-γ, которое является одним или более чем одним из следующего: (i) в два раза больше, чем количество IFN-γ, которое измеряется при культивировании одних Т-клеток (фон); (ii) составляет по меньшей мере примерно 200 пг/мл или более (например, 200 пг/мл или более, 300 пг/мл или более, 400 пг/мл или более, 500 пг/мл или более, 600 пг/мл или более, 700 пг/мл или более, 1000 пг/мл или более, 5000 пг/мл или более, 7000 пг/мл или более, 10000 пг/мл или более, или 20000 пг/мл или более); и (iii) блокируется антителом против класса I МНС (главный комплекс гистосовместимости) более чем примерно на 40%, более чем примерно на 50% или более чем примерно на 60%.
Специфичное распознавание антигена HPV можно тестировать любым способом, известным в данной области, например, измерением высвобождения цитокина (например, IFN-γ) после совместного культивирования с антиген-негативными антигенпрезентирующими клетками (например, дендритными клетками), которые метили пептидом антигена HPV. Можно считать, что Т-клетки распознают антиген HPV, если, например, высвобождение IFN-γ является одним или обоими из следующего: (i) в два раза больше, чем количество IFN-γ, которое измеряется при культивировании Т-клеток с антигенпрезентирующими клетками, которые метили пептидом негативного контроля; и (ii) составляет по меньшей мере примерно 200 пг/мл или более (например, 200 пг/мл или более, 300 пг/мл или более, 400 пг/мл или более, 500 пг/мл или более, 600 пг/мл или более, 700 пг/мл или более, 1000 пг/мл или более, 5000 пг/мл или более, 7000 пг/мл или более, 10000 пг/мл или более, или 20000 пг/мл или более) IFN-γ при совместном культивировании с антиген-негативными антигенпрезентирующими клетками, меченными низкой концентрации пептида HPV 16 или HPV 18 (например, от примерно 0,05 нг/мл до примерно 5 нг/мл, 0,05 нг/мл, 0,1 нг/мл, 0,5 нг/мл, 1 нг/мл или 5 нг/мл). Т-клетки также могут секретировать IFN-γ при совместном культивировании с антиген-негативными антигенпрезентирующими клетками, меченными более высокими концентрациями пептида HPV.
Антиген HPV может представлять собой любой антиген HPV. Например, антиген HPV может представять собой любой один или более чем один из Е6 HPV 16, Е7 HPV 16, Е6 HPV 18 и Е7 HPV 18. В то время как в некоторых воплощениях популяция Т-клеток может специфично распознавать только один антиген HPV, в некоторых воплощениях популяция Т-клеток может специфично распознавать более чем один антиген HPV. В данном отношении популяция Т-клеток может содержать многочисленные Т-клетки, причем каждая имеет отличные специфичности в отношении HPV. Например, популяция Т-клеток может включать некоторые Т-клетки, которые специфично распознают Е6 HPV 16, и другие Т-клетки, которые специфично распознают Е7 HPV 16, или популяция может включать некоторые Т-клетки, которые специфично распознают Е6 HPV 18, и другие Т-клетки, которые специфично распознают Е7 HPV 18.
Способ может включать отбор Т-клеток, которые демонстрируют одно или оба из специфичных распознавания аутологичной HPV-позитивной опухоли и распознавания антигена HPV. В одном воплощении изобретения при тестировании Т-клеток в отношении одного или обоих из специфичных распознавания аутологичной HPV-позитивной опухоли и распознавания антигена HPV можно идентифицировать те культуры, которые содержат Т-клетки, которые распознают HPV, те культуры, которые содержат Т-клетки, реагирующие с HPV, также могут содержать дополнительные Т-клетки, которые реагируют против других антигенов опухоли, не являющихся антигенами HPV.
Соответственно, отобранная популяция Т-клеток может включать поликлональные Т-клетки с многими специфичностями. В другом воплощении изобретения тестирование идентифицирует культуры, которые содержат только Т-клетки, которые распознают HPV. В данном отношении выбранная популяция Т-клеток может включать Т-клетки со специфичностью только в отношении HPV.
Способ может дополнительно включать увеличение числа отобранных Т-клеток с получением популяции HPV-специфичных Т-клеток. Быстрое размножение дает увеличение числа антигенспецифичных Т-клеток по меньшей мере примерно в 100 раз (или в 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900 раз или более) на протяжении периода от примерно 10 до примерно 14 суток, предпочтительно примерно 14 суток. Более предпочтительно, быстрое размножение дает увеличение по меньшей мере примерно в 1000 раз (или 1500, 2000, 2500, 3000 раз или более) на протяжении периода от примерно 10 до примерно 14 суток, предпочтительно примерно 14 суток. Наиболее предпочтительно, быстрое размножение дает увеличение по меньшей мере от примерно 1000-кратного до примерно 3000-кратного на протяжении периода от примерно 10 до примерно 14 суток, предпочтительно примерно 14 суток.
Увеличение числа Т-клеток может осуществляться любым числом способов, которые известны в данной области, как описано, например, в патенте США 8034334; патенте США 8383099; публикации заявки на патент США №2012/0244133; Dudley et al., J. Immunother., 26: 332-42 (2003) и Riddell et al., J. Immunol. Methods, 128: 189-201 (1990). Например, число Т-клеток можно быстро увеличивать с использованием стимуляции неспецифичного рецептора Т-клеток в присутствии питающих лимфоцитов и одного из интерлейкина-2 (IL-2) или интерейкина-15 (IL-15), причем IL-2 является предпочтительным. Стимул неспецифичного рецептора Т-клеток может включать около 30 нг/мл ОКТ3, мышиного моноклонального антитела против CD3 (доступно от Ortho-McNeil, Раритан, Нью Джерси). В качестве альтернативы, число Т-клеток может быстро увеличиваться посредством стимуляции in vitro раковым антигеном (одним или более чем одним, включая его антигенные части, такие как эпитоп(пы), или клеткой), который возможно может экспрессироваться из вектора, например, 0,3 мкМ MART-1: 26-35 (27L) или gp100: 209-217 (210М), в присутствии фактора роста Т-клеток, как, например, 300 IU/мл IL-2 или IL-5, причем IL-2 является предпочтительным. Число Т-клеток, индуцированных in vitro, может быстро увеличиваться посредством повторной стимуляции тем же самым раковым антигеном(нами), которым метятся антигенпрезентирующие клетки. В одном воплощении число Т-клеток увеличивается в газопроницаемом контейнере, как описано в публикации заявки на патент США №2012/0244133.
В одном воплощении изобретения способ включает увеличение числа Т-клеток с использованием одного или обоих из (i) облученных аллогенных питающих клеток и (ii) облученных аутологичных питающих клеток, и одного или обоих из (iii) антитела ОКТ3 и (iv) фактора роста Т-клеток, такого как IL-2 или IL-15, причем IL-2 является предпочтительным. Способ может включать увеличение числа Т-клеток с использованием одного или обоих из (i) облученных аллогенных питающих клеток и (ii) облученных аутологичных питающих клеток, и одного или обоих из (iii) антитела ОКТ3 и (iv) интерлейкина (IL)-2. Предпочтительно способ включает увеличение числа Т-клеток с использованием одного или обоих из (i) облученных аллогенных питающих клеток и (ii) облученных аутологичных питающих клеток, и обоих из (iii) антитела ОКТ3 и (iv) интерлейкина (IL)-2. В особенно предпочтительном воплощении способ включает увеличение числа Т-клеток с использованием (i) облученных аллогенных питающих клеток, (ii) антитела ОКТ3 и (iii) интерлейкина (IL)-2.
В еще одном воплощении способ включает увеличение числа отобранных Т-клеток с использованием одного или обоих из (i) антитела ОКТ3 и (ii) интерлейкина (IL)-2, с получением популяции HPV-специфичных Т-клеток, возможно в комбинации с одним или обоими из облученных аллогенных питающих клеток и облученных аутологичных питающих клеток. В данном отношении согласно одному воплощению изобретения предложен способ получения популяции HPV-специфичных Т-клеток, включающий: разделение образца HPV-позитивной опухоли на многочисленные фрагменты; культивирование многочисленных фрагментов по отдельности; получение Т-клеток из культивируемых многочисленных фрагментов; тестирование Т-клеток на одно или оба из специфичных распознавания аутологичной HPV-позитивной опухоли и распознавания антигена HPV; отбор Т-клеток, которые демонстрируют одно или оба из специфичных распознавания аутологичной HPV-позитивной опухоли и распознавания антигена HPV; и увеличение числа отобранных Т-клеток с использованием одного или обоих из (i) антитела ОКТ3 и (ii) интерлейкина (IL)-2 с получением популяции HPV-специфичных Т-клеток. Разделение образца опухоли, культивирование фрагментов опухоли, получение Т-клеток, тестирование Т-клеток, отбор Т-клеток и увеличение числа отобранных Т-клеток можно проводить, как описано в данном документе по отношению к другим аспектам данного изобретения.
Популяция увеличенного числа Т-клеток, полученная способами по изобретению, может специфично распознавать HPV-позитивные клетки, например, HPV-позитивные раковые клетки. Клетки, которые распознаются Т-клетками, могут быть позитивными в отношении любого подтипа HPV, такого как, например, HPV 16 или HPV 18. В качестве альтернативы или дополнительно, популяция Т-клеток, полученная способами по изобретению, может специфично распознавать любой антиген HPV, такой как, например, любой один или более чем один из Е6 HPV 16, Е7 HPV 16, Е6 HPV 18 и Е7 HPV 18. В то время как в некоторых воплощениях популяция Т-клеток может специфично распознавать только один антиген HPV, в некоторых воплощениях популяция Т-клеток может специфично распознавать более чем один антиген HPV. В данном отношении популяция увеличенного числа Т-клеток может содержать многочисленные Т-клетки, причем каждая имеет отличную специфичность в отношении HPV. Например, популяция увеличенного числа Т-клеток может включать некоторые Т-клетки, которые специфично распознают Е6 HPV 16, и другие Т-клетки, которые специфично распознают Е7 HPV 16, или популяция может включать некоторые Т-клетки, которые специфично распознают Е6 HPV 18, и другие Т-клетки, которые специфично распознают Е7 HPV 18. Способность популяции увеличенного числа Т-клеток, полученных способами по изобретению, специфично распознавать HPV-позитивные клетки и специфично распознавать антиген HPV можно измерять, как описано в данном документе в отношении других аспектов изобретения.
Популяция Т-клеток, полученных способами по изобретению, может быть полезной для лечения или предупреждения состояний, ассоциированных с HPV, например, рака. Соответственно, согласно другому воплощению изобретения предложен способ лечения или предупреждения рака у млекопитающего, включающий получение популяции HPV-специфичных Т-клеток согласно любому из описанных в данном документе способов изобретения и введение популяции Т-клеток млекопитающему в эффективном количестве для лечения или предупреждения рака у млекопитающего.
Согласно другому воплощению изобретения предложен способ лечения или предупреждения рака у млекопитающего, включающий: разделение образца HPV-позитивной опухоли на многочисленные фрагменты; культивирование многочисленных фрагментов по отдельности; получение Т-клеток из культивируемых многочисленных фрагментов; тестирование Т-клеток на одно или оба из специфичных распознавания аутологичной HPV-позитивной опухоли и распознавания антигена HPV; отбор Т-клеток, которые демонстрируют одно или оба из специфичных распознавания аутологичной HPV-позитивной опухоли и распознавания антигена HPV; увеличение числа отобранных Т-клеток с получением популяции HPV-специфичных Т-клеток для адоптивной клеточной терапии; и введение увеличенного числа Т-клеток млекопитающему в эффективном количестве для лечения или предупреждения рака у млекопитающего. Разделение образца опухоли, культивирование фрагментов опухоли, получение Т-клеток, тестирование Т-клеток, отбор Т-клеток и увеличение числа отобранных Т-клеток можно проводить, как описано в данном документе по отношению к другим аспектам данного изобретения. Согласно другому воплощению изобретения предложен способ лечения или предупреждения состояния у млекопитающего, включающий получение популяции HPV-специфичных Т-клеток согласно любому из способов по изобретению, описанных в данном документе, и введение популяции Т-клеток млекопитающему в эффективном количестве для лечения или предупреждения состояния у млекопитающего, где состояние представляет собой рак, инфекцию HPV 16 или HPV-позитивное предопухолевое состояние.
Одно воплощение изобретения включает введение млекопитающему немиелоаблативной антилимфоцитарной химиотерапии. Немиелоаблативная антилимфоцитарная химиотерапия может представлять собой любую такую подходящую терапию, которую можно вводить любым подходящим путем. Немиелоаблативная антилимфоцитарная химиотерапия может включать введение циклофосфамида и флударабина, в частности, если раковое заболевание представляет собой HPV-позитивный рак, который может быть метастатическим. Предпочтительным путем введения циклофосфамида и флударабина является внутривенный. Подобным образом, можно вводить любую подходящую дозу циклофосфамида и флударабина. Предпочтительно около 60 мг/кг циклофосфамида вводится в течение двух суток, после чего вводится около 25 мг/м2 флударабина в течение пяти суток, особенно если рак представляет собой HPV-позитивный рак. В одном воплощении изобретения немиелоаблативная антилимфоцитарная химиотерапия вводится до введения Т-клеток.
Одно воплощение изобретения включает, после введения немиелоаблативной антилимфоцитарной химиотерапии, введение млекопитающему популяции HPV-специфичных Т-клеток, полученных любыми способами по изобретению, описанными в данном документе.
Т-клетки можно вводить любым подходящим путем, как известно в данной области. Предпочтительно Т-клетки вводятся в виде внутриартериальной или внутривенной инфузии, которая предпочтительно продолжается от примерно 30 до примерно 60 минут. Другие примеры путей введения включают внутрибрюшинное, подоболочечное и внутрилимфатическое.
Подобным образом, может вводиться любая подходящая доза Т-клеток. Предпочтительно вводятся от примерно 1,0×1010 Т-клеток до примерно 13,7×1010 Т-клеток, со средним значением примерно 5,0×1010 Т-клеток, в частности, если раковое заболевание представляет собой HPV-позитивный рак. В качестве альтернативы, вводятся от примерно 1,2×1010 до примерно 4,3×1010 Т-клеток.
В одном воплощении изобретения любой из способов, описанных в данном документе, может дополнительно включать объединение популяции HPV-специфичных Т-клеток с фармацевтически приемлемым носителем. Фармацевтически приемлемый носитель может представлять собой любой фармацевтически приемлемый носитель, который подходит для адоптивной клеточной терапии. Например, фармацевтически приемлемый носитель может включать любой изотоничный носитель, такой как, например, нормальный физиологический раствор (примерно 0,90% масс./об. NaCl в воде, примерно 300 мОсм/л NaCl в воде, или примерно 9,0 г NaCl на литр воды), раствор электролита NORMOSOL R (Abbott, Чикаго, Иллинойс), PLASMA-LYTE A (Baxter, Дирфилд, Иллинойс), примерно 5% декстрозы в воде или лактат Рингера. В одном воплощении фармацевтически приемлемый носитель дополнен человеческим сывороточным альбумином.
Одно воплощение изобретения включает обогащение культивируемых Т-клеток в отношении Т-клеток CD8+ до быстрого размножения клеток. После культивирования Т-клеток Т-клетки обедняются клетками CD4+ и обогащаются клетками CD8+, например, с использованием разделения на CD8 микрошариках (например, с использованием системы микрошариков CliniMACS plus CD8 (Miltenyi Biotec)). He будучи связанными конкретной теорией, считается, что обогащение некоторых культур Т-клеток CD8+ выявляет in vitro распознавание опухоли, которое может не быть очевидным в смешанной культуре, и улучшает распознавание in vitro опухоли в других культурах. Дополнительно, считается, что обогащенные Т-клетки CD8+ ведут себя более надежно и прогнозируемо при быстрых размножениях в клиническом масштабе, чем смешанные Т-клетки.
Одно воплощение изобретения включает обогащение культивируемых Т-клеток в отношении Т-клеток CD4+ до быстрого размножения клеток. После культивирования Т-клеток Т-клетки обедняются клетками CD8+ и обогащаются клетками CD4+, например, с использованием разделения на CD4 микрошариках (например, с использованием системы микрошариков CliniMACS plus CD8 (Miltenyi Biotec)).
В одном воплощении млекопитающему вводится фактор роста Т-клеток, который стимулирует рост и активацию аутологичных Т-клеток, либо сопутствующе с аутологичными Т-клетками, либо после аутологичных Т-клеток. Фактором роста Т-клеток может быть любой подходящий фактор роста, который стимулирует рост и активацию аутологичных Т-клеток. Примеры подходящих факторов роста Т-клеток включают интерлейкин (IL)-2, IL-7, IL-15 и IL-12, которые можно использовать одни или в разных комбинациях, таких как IL-2 и IL-7, IL-2 и IL-15, IL-7 и IL-15, IL-2, IL-7 и IL-15, IL-12 и IL-7, IL-12 и IL-15, или IL-12 и IL2. IL-12 является предпочтительным фактором роста Т-клеток.
В одном воплощении аутологичные Т-клетки модифицируются для экспрессии фактора роста Т-клеток, который стимулирует рост и активацию аутологичных Т-клеток. Подходящие факторы роста Т-клеток включают, например, любые из факторов роста, описанных выше. Подходящие способы модификации известны в данной области. См., например, Green and Sambrook, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 4th ed., Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, NY 2012 и Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Associates and John Wiley & Sons, NY, 1994. Желательно модифицированные аутологичные T-клетки экспрессируют фактор роста Т-клеток на высоком уровне. Кодирующие последовательности фактора роста Т-клеток, такие как кодирующая последовательность IL-2, легко доступны в данной области, как и промоторы, связывание которых функциональным образом с кодирующей последовательностью фактора роста Т-клеток стимулирует высокий уровень экспрессии.
Фактор роста Т-клеток можно вводить любым подходящим путем. При введении более чем одного фактора роста Т-клеток их можно вводить одновременно или последовательно в любом порядке и одинаковым путем или разными путями. Предпочтительно фактор роста Т-клеток, такой как IL-2, вводится внутривенно в виде болюсной инъекции. Дозировку фактора роста Т-клеток можно выбирать на основе переносимости пациента. Например, фактор роста Т-клеток может вводиться, пока не происходит одно или более чем одно лимитирующее нежелательное явление. Желательно дозировка фактора роста Т-клеток, такого как IL-2, является такой, которая считается высокой обычными специалистами в данной области. Предпочтительно вводится доза примерно 720000 IU/кг IL-2 три раза в сутки до переносимости, особенно когда рак представляет собой HPV-позитивный рак. Предпочтительно вводятся от примерно 5 до примерно 15 доз IL-2, в среднем около 9 доз.
В одном воплощении аутологичные Т-клетки могут быть модифицированы для экспрессии рецептора Т-клетки (TCR), имеющего антигенную специфичность в отношении антигена HPV, например, любого из антигенов HPV, описанных в данном документе. Подходящие способы модификации известны в данной области. См., например, Green and Sambrook и Ausubel выше. Например, Т-клетки могут быть трансдуцированы для экспрессии рецептора Т-клетки (TCR), имеющего антигенную специфичность в отношении антигена HPV, с использованием методик трансдукции, описанных в Heemskerk et al. Hum Gene Ther. 19:496-510 (2008) и Johnson et al. Blood 114: 535-46 (2009).
В том, что касается способов по изобретению, раковое заболевание может представлять собой любое раковое заболевание, включающее любое из следующих: острый лимфоцитарный рак, острый миелолейкоз, альвеолярная рабдомиосаркома, рак кости, рак мозга, рак молочной железы, рак ануса, анального канала или аноректума, рак глаза, рак внутрипеченочного желчного протока, рак суставов, рак шеи, желчного пузыря или плевры, рак носа, полости носа или среднего уха, рак полости рта, рак вагины, рак вульвы, хронический лимфолейкоз, хронический миелоидный рак, рак толстой кишки, рак пищевода, рак шейки матки, карциноидная опухоль желудочно-кишечного тракта, глиома, ходжкинская лимфома, рак гортанной части глотки, рак почки, рак гортани, рак печени, рак легкого, злокачественная мезотелиома, меланома, множественная миелома, рак носоглотки, неходжкинская лимфома, рак ротоглотки, рак яичника, рак пениса, рак пожделудочной железы, рак брюшины, сальника и брыжейки, рак глотки, рак предстательной железы, рак прямой кишки, рак почки, рак кожи, рак тонкой кишки, рак мягкой ткани, рак желудка, рак яичка, рак щитовидной железы, рак матки, рак мочеточника и рак мочевого пузыря. Предпочтительным раковым заболеванием является рак шейки матки, ротоглотки, ануса, анального канала, аноректума, вагины, вульвы или пениса. Особенно предпочтительным раковым заболеванием является HPV-позитивный рак. HPV-позитивный рак может представлять собой, например, HPV 16-позитивный или HPV 18-позитивный рак. В то время как раковые заболевания, чаще всего ассоциированные с инфекцией HPV, включают рак шейки матки, ротоглотки, ануса, анального канала, аноректума, вагины, вульвы или пениса, способы по изобретению можно использовать для лечения любого HPV-позитивного рака, включая раковые заболевания, которые встречаются в других анатомических областях.
Термин «млекопитающее» в том виде, как он используется в данном документе, относится к любому млекопитающему, включающему млекопитающих отряда Rodentia, таких как мыши и хомяки, и млекопитающих отряда Logomorpha, таких как кролики, но не ограничивается ими. Предпочтительно, что млекопитающие происходят из отряда Carnivora, включая кошачьих (кошки) и псовых (собаки). Более предпочтительно то, что млекопитающие происходят из отряда Artiodactyla, включая быковых (коров) и кабаньих (свиней), или отряда Perssodactyla, включая лошадиных (лошадей). Наиболее предпочтительно то, что млекопитающие происходят из отряда Primates, Ceboids или Simoids (обезьяны) или отряда Anthropoids (человек и человекообразные обезьяны). Особенно предпочтительным млекопитающим является человек.
Термины «лечить» и «предупреждать», а также слова, происходящие от них, в том виде, в котором они используются в данном документе, не обязательно подразумевают 100%-ное или полное излечение или предупреждение. Скорее имеются варьирующие степени лечения или предупреждения, среди которых обычный специалист в данной области узнает те, которые имеют потенциальную пользу или терапевтический эффект. В данном отношении способы по изобретению могут предоставлять любое количество любого уровня лечения или предупреждения рака у млекопитающего. Кроме того, лечение или предупреждение, предоставленное способом по изобретению, может включать лечение или предупреждение одного или более чем одного состояния или симптома заболевания, например, рака, который лечат или предупреждают. Например, лечение или предупреждение, предоставленное способом по изобретению, может включать стимуляцию регрессии опухоли. Также для целей, приведенных в данном документе, «предупреждение» может охватывать задержку начала заболевания или его симптома, или состояния.
Следующие примеры дополнительно иллюстрируют изобретение, но, конечно, не должны истолковываться как каким-либо образом ограничивающие его объем.
Пример 1
В данном примере продемонстрирован способ получения проникающих в HPV-позитивную опухоль лимфоцитов (TIL) для адоптивной клеточной терапии.
Пациенты входили в клинические протоколы и подписывали информированные согласия, которые были одобрены Экспертным советом Национального института рака до резекции опухоли. У пациентов вырезали опухоли. Опухоли тестировали на экспрессию Е6 HPV 16, Е7 HPV 16, Е6 HPV 18 и Е7 HPV 18 с использованием генотипирования полимеразной цепной реакцией (ПЦР) с обратной транскриптазой (ОТ).
Закладывали многочисленные (24) независимые культуры Е6 HPV 16-позитивных, Е7 HPV 16-позитивных, Е6 HPV 18-позитивных и Е7 HPV 18-позитивных TIL с использованием продуктов ферментативного расщепления и фрагментов опухоли (1-2 мм3), полученных острой диссекцией. TIL из продуктов расщепления опухоли получали культивированием суспензий одиночных клеток (5×105/мл), полученных посредством ферментативного расщепления фрагментов опухоли в течение ночи в средах, содержащих коллагеназу, гиалуронидазу и ДНКазу. Культуры фрагментов опухоли и продуктов расщепления инициировали в 2 мл лунках с полной средой (СМ) и IL-2 (6000 IU/мл, Chiron Corp., Эмервиль, Калифорния) в увлажненном инкубаторе при 37°C с 5% CO2. СМ включала RPMI1640 с глутамином плюс 10% человеческой АВ сыворотки, 25 мМ HEPES, 10 мкг/мл гентамицин и 5,5×10-5 М 2-меркаптоэтанол. Через пять суток после инициации из лунок отсасывали половину сред и заменяли свежей СМ и IL-2, и среды заменяли каждые двое-трое суток по мере необходимости. При данных условиях лимфициты сначала будут лизировать смежные клетки в лунке, а затем начнут размножаться и расти.
Культуры TIL достигали конфлюентного роста в исходной 2 мл лунке, и приросшие опухолевые клетки устраняли типично примерно через 12-28 суток после инициации. На практике это составляло примерно 4×106 лимфицитов из каждого исходного фрагмента опухоли или лунки с продуктами расщепления. Путем объединения всех лунок в одном 24-луночном планшете было бы получено приблизительно 5×107 клеток TIL.
При размножении культур, предназначенных для получения TIL, до конфлюентности в 2 мл лунках их тестировали на реактивность, специфичную в отношении HPV. Поскольку TIL были заложены в больших количествах (типично группы из 24 на опухоль), не было возможности индивидуально подсчитывать каждую культуру TIL. В анализе специфичности TIL измеряется активность на объем, а не активность на клетку. В каждой лунке осуществляли тщательное перемешивание, и сто микролитров лимфоцитов (оценочно 1×105 клеток) промывали и совместно культивировали в течение ночи с продуктом расщепления аутологичной опухоли или аутологичными дендритными клетками (DC), происходящими от моноцитов, меченными пептидными пулами Е6 и Е7 HPV 16 и HPV 18 MACS PEPTIVATOR. Пептидные пулы включали 15-мерные пептиды с 11-аминокислотными перекрываниями, которые покрывали полную последовательность Е6 или Е7 (HPV 16 или HPV 18). Пептидные пулы имели чистоту более 75% и имели низкое содержание эндотоксина. Затем измеряли высвобождение IFN-γ с использованием твердофазного иммуноферментного анализа (ELISA, от англ. - electronic intelligence search and analysis). Результаты показаны в Таблице А.
Осуществляли быстрое увеличение числа TIL, реагирующих с HPV, с использованием протокола быстрого размножения (REP), как описано ранее (Dudley et al., J. Immunother., 26: 332-42 (2003) и Riddell et al., J. Immunol. Methods, 128: 189-201 (1990)). Вкратце, клетки TIL культивировали в газопроницаемых колбах G-REX с 200-кратным избытком облученных (40 Гр) аллогенных «питающих» одноядерных клеток периферической крови в полной среде (СМ) с 30 нг/мл антитела против CD3 и 6000 IU/мл IL-2. Половину сред заменяли на сутки 5, используя СМ с 6000 IU/мл IL-2, и затем клетки по необходимости разделяли. TIL размножались в среднем более чем в 3000 раз.
Пример 2
Данный пример демонстрирует реактивность TIL от Пациента 1.
TIL получали, как описано в Примере 1, из 22 разных фрагментов опухоли (F1-F22) от Пациента 1. TIL от Пациента 1 или TIL меланомы (контроль) совместно культивировали с дендритными клетками, меченными пептидным пулом Е7 HPV 18 или пептидным пулом gp100 (контроль), и измеряли IFN-γ. Результаты показаны на Фиг. 1А-1Б. Как показано на Фиг. 1А-1Б, TIL из фрагмента опухоли 22 Пациента 1 распознавали линию аутологичной опухоли, но не пептиды Е7 HPV 18.
TIL из фрагментов опухоли F16, F17 или F22 пациента 1 или клетки, которые давали пациенту для лечения («инфузионный мешок»), совместно культивировали с аутологичной опухолью, одноядерными клетками периферической крови (РВМС) из аутологичной ткани, опухолевыми клетками, совпадающими по всем локусам класса I, клетками HeLa (несовпадающие по HLA) или клетками CaSki (несовпадающие по HLA). Измеряли IFN-γ. Результаты показаны на Фиг. 2А. Как показано на Фиг. 2А, TIL из фрагментов опухоли F16 и F22 демонстрировали распознавание аутологичной опухоли.
Аутологичные опухолевые клетки трансфицировали РНК сайленсинга против HLA-A, HLA-B, HLA-C или иррелевантной РНК (без направленного действия) и совместно культивировали с TIL от пациента 1. Измеряли IFN-γ. Результаты показаны на Фиг. 2Б. Как показано на Фиг. 2Б, распознавание TIL от Пациента 1 было ослаблено сайленсингом HLA-A.
Эффекторные клетки/клетки-мишени (TIL Пациента 1/аутологичные опухолевые клетки; клетки DMF5/624 или F15/HPV18E6121-135 Пациента 12 (Р12)) культивировали одни или совместно культивировали без антитела, с антителом против HLA-A2 или антителом против Класса II. Клетки DMF5 представляют собой Т-клетки, трансдуцированые для экспрессии TCR, ограниченного классом I МНС, против MART-1. Результаты показаны на Фиг. 2В. Как показано на Фиг. 2В, распознавание TIL от Пациента 1 не ингибировалось блокированием HLA-A*02, что свидетельствовало о распознавании опухоли, ограниченной HLA-А*01. Гаплотипом Пациента 1 был HLA-A*01, HLA-A*02.
TIL из фрагмента опухоли F16 или F22 Пациента 1; клетки, которые давали пациенту для лечения («инфузионный мешок»); TIL меланомы 1, 2 или 3 (TIL, культивируемые из меланомных опухолей); TCR mE7 (Т-клетки из РВМС, которые были трансдуцированы для экспрессии TCR против Е711-19 HPV 16) или TIL F15 (TIL от другого пациента, которые реагировали против E6121-135 HPV 18, ограниченные классом II и, следовательно, блокируемые НВ145) совместно культивировали с пептидным пулом gp100, антителом ОКТ3 или DC, меченными пептидным пулом Е7 HPV 18, пептидным пулом Е7 HPV 18 и W6/32, Е711-19 HPV 16, Е711-19 HPV 16 и W6/32, Е711-19 HPV 16 и НВ145, E6121-135 HPV 18, Е6121-135 HPV 18 и W6/32 или E6121-135 HPV 18 и НВ145. Результаты показаны на Фиг. 3. Как показано на Фиг. 3, TIL из фрагмента опухоли F16 от Пациента 1 демонстрировали ограниченное классом I распознавание пептидов Е7 HPV 18.
Пример 3
Данный пример демонстрирует клонирование TIL из фрагмента опухоли 16 Пациента 1 для выделения CD8-позитивных Т-клеток, реагирующих с Е7 HPV 18.
DC загружали Е7 HPV 18 и совместно культивировали с TIL из фрагмента опухоли 16 (F16) Пациента 1. TIL сортировали в отношении 4-1ВВ-позитивных клеток с использованием флуоресцентной сортировки клеток (FACS). Сортированные клетки культивировали в 96-луночных планшетах с двумя клетками на лунку. Клоны подвергали скринингу на реактивность к опухоли против пептидного пула gp100 или пептидного пула Е7 HPV 18. Результаты показаны на Фиг. 4А и 4Б. Как показано на Фиг. 4А и 4Б, клонирование CD8-позитивных Т-клеток из фрагмента опухоли F16 с использованием сортировки FACS на основе 4-1ВВ приводило к выделению двух клонов (12 и 21) с реактивностью к пептидному пулу Е7.
Пример 4
Данный пример демонстрирует реактивность TIL, полученных в Примере 1 от Пациента 12.
TIL получали, как описано в Примере 1, из 36 разных фрагментов опухоли (F1-F36) от Пациента 12. TIL от Пациента 12 или TIL меланомы (контроль) совместно культивировали с дендритными клетками, меченными пептидным пулом Е6 HPV 18, пептидным пулом Е7 HPV 18 или пептидным пулом gp100 (контроль), и измеряли IFN-γ. Результаты показаны на Фиг. 5. Как показано на Фиг. 5, TIL из фрагментов опухоли F1 и F15 от Пациента 12 демонстрировали наивысшие уровни продукции IFN-γ.
Аутологичные DC трансдуцировали лентивирусным вектором, кодирующим Е6 HPV 18, или лентивирусным вектором, кодирующим зеленый флуоресцентный белок (GFP). Другие аутологичные клетки метили пептидным пулом gp100 или пептидным пулом Е6 HPV 18. Трансдуцированные клетки совместно культивировали с TIL из фрагмента опухоли F1 Пациента 12 или TIL меланомы 1, 2 или 3. Результаты показаны на Фиг. 6. Как показано на Фиг. 6, TIL, полученные из фрагмента опухоли F1 Пациента 12 распознавали DC, трансдуцированные Е6 HPV 18, свидетельствуя о том, что TIL нацелены на антиген, подвергающийся природному процессингу и презентации.
Пример 5
Данный пример демонстрирует реактивность клонов TIL из фрагментов опухоли 1 и 15 Пациента 12 для выделения CD8-позитивных Т-клеток, реагирующих сЕ6 HPV18.
DC загружали Е6 HPV 18 и совместно культивировали с TIL из фрагментов опухоли 1 и 15 Пациента 12. TIL сортировали в отношении 4-1BB-позитивных клеток с использованием FACS. Клетки дополнительно сортировали на CD4-позитивные и CD8-позитивные популяции. Сортированные клетки культивировали в 96-луночных планшетах с двумя клетками на лунку. Клоны подвергали скринингу на реактивность в отношении опухоли против пептидного пула Е6 HPV 18. Из 480 лунок с CD4-позитивными клетками из F1 14 росли и 2 были реактивными. Из 912 лунок с CD8-позитивными клетками из F1 33 росли и ни одна не была реактивной. Из 470 лунок с CD4-позитивными клетками из F15 163 росли и 32 были реактивными. Из 960 лунок с CD8-позитивными клетками из F15 41 росли и ни одна не была реактивной.
Сортированные клетки CD4 также тестировали на реактивность при измерении по секреции фактора некроза опухоли (TNF) α при совместном культивировании с пептидным пулом Е6 HPV 18 (пул, охватывающий весь белок Е6), в отсутствие пептида, с подпулами белка Е6 HPV 18 или пптидами 30-37 пептидного пула Е6 HPV 18. Каждый подпул содержал часть исходного пептидного пула. Результаты показаны на Фиг. 7А-7В. Как показано на Фиг. 7А-7В, клоны 3, 12 и 20 фрагмента опухоли F1 от Пациента 12 реагировали против Е6 HPV 18. Клоны CD4-позитивных Т-клеток, которые были получены, распознавали два последовательных 15-мера с 11-аминокислотным перекрытием. Данные пептиды имели общий эпитоп Е6125-135 HPV 18.
Пример 6
Данный пример демонстрирует то, что клоны, полученные из фрагмента опухоли F15 Пациента 12, распознают E6121-135 HPV 18 HLA-DRB1*15-ограниченным путем.
Клоны 3, 12 и 20 совместно культивировали с РВМС донора с гаплотипами, изложенными в Таблице Б. РВМС доноров метили Е6121-135 HPV 18.
Измеряли секрецию TNFα. Результаты показаны на Фиг. 8А-8В. Как показано на Фиг. 8А-8В, клоны, полученные из фрагмента F15 Пациента 12, распознавали E6121-135 HPV 18, которым метили РВМС, которые совпадали и по HLA-DRB1*15 и по HLA-DQB1*06, но не РВМС, которые совпадали только по HLA-DQB1*06, свидетельствуя об ограничении по HLA-DRB1*15. Частота фенотипического аллеля HLA-DRB1*15 составляет 25 процентов.
TIL из клона 3 фрагмента опухоли F15 Пациента 12 совместно культивировали с аутологичными РВМС или РВМС донора, меченными Е677-91 HPV 18 или Е6121-135 HPV 18. Результаты показаны на Фиг. 9А. Как показано на Фиг. 9А, TIL из клона 3 фрагмента опухоли F15 Пациента 12 распознавали РВМС, совпадающие только по DRB1*15, но не только по DRB1*06.
TIL из клона 20 фрагмента опухоли F15 Пациента 12 совместно культивировали с E6121-135 HPV 18 в присутствии антител против HLA-DR, HLA-DQ, HLA-DP, антител против панкласса I или антител против панкласса II. Антитела против панкласса I и II блокируют связывание Т-клеток с молекулами МНС Класса I или Класса II соответственно. Результаты показаны на Фиг. 9Б. Как показано на Фиг. 9Б, распознавание когнатного пепида TIL из клона 20 фрагмента опухоли F15 Пациента 12 ингибировалось блокирующими антителами против HLA-DR. Как показано на Фиг. 9А и 9Б, TIL из фрагмента опухоли F15 Пациента 12 распознают Е6121-135 HPV 18 DRB1*15-ограниченным путем.
Пример 7
Данный пример демонстрирует реактивность TIL от Пациентов 4 и 8.
TIL получали, как описано в Примере 1, из 24 разных фрагментов опухоли (F1-F24) от Пациента 4 или Пациента 8. TIL от Пациента 4 или TIL меланомы (контроль) совместно культивировали с аутологичными DC, меченными пептидным пулом Е6 HPV 16, пептидным пулом Е7 HPV 16 или пептидным пулом gp100 (контроль), и измеряли IFN-γ. Результаты показаны на Фиг. 10. Как показано на Фиг. 10, TIL из фрагментов опухоли F4, F5, F14, F19 и F22 находились среди тех фрагментов опухоли, которые демонстрировали реактивность против аутологичных DC, меченных пептидными пулами Е6 и Е7 HPV 16.
TIL от Пациента 8 или TIL меланомы (контроль) совместно культивировали с аутологичными DC, меченными пептидным пулом Е6 HPV 18, пептидным пулом Е7 HPV 18 или пептидным пулом gp100 (контроль), и измеряли IFN-γ. Результаты показаны на Фиг. 13. Как показано на Фиг. 13, были получены TIL, которые демонстрировали реактивность против аутологичных DC, меченных пептидным пулом Е7 HPV18.
Пример 8
Данный пример демонстрирует клонирование TIL из фрагментов опухоли Пациента 4 для выделения CD4- и CD8-позитивных Т-клеток, реагирующих с HPV.
DC загружали Е6 HPV 16 или Е7 HPV 16 и совместно культивировали с TIL из фрагментов опухоли Пациента 4. TIL, реагирующие с Е6 HPV 16 и Е7 HPV 16, по отдельности сортировали на 4-1ВВ-позитивные клетки с использованием FACS. Число клеток увеличивали, как описано в Примере 1. Клетки дополнительно сортировали на 4-1ВВ-позитивные клетки посредством FACS. Сортированные клетки культивировали в 96-луночных планшетах с двумя клетками на лунку. Клетки дополнительно сортировали на CD4-позитивные и CD8-позитивные популяции. Клоны подвергали скринингу на реактивность с опухолью против пептидных пулов Е6 или Е7 HPV 16.
Результаты показаны на Фиг. 11А-11Г. Как показано на Фиг. 11А-11Г, были получены клоны CD8-позитивных и CD4-позитивных Т-клеток с реактивностью против Е6 и Е7 HPV 16.
Пример 9
Данный пример демонстрирует то, что адоптивная клеточная терапия с использованием Т-клеток против HPV лечит рак.
Критерии включения для исследования включали (1) рецидивирующий/не поддающийся лечению или метастатический рак шейки матки или высокий риск HPV-позитивного рака из любого места и (2) предшествующую химиотерапию платиной, включая химиолучевую терапию.
У пациентов производили резекцию опухолей. TIL получали из опухоли, выращивали, количество TIL увеличивали, и увеличенное количество TIL подвергали скринингу на реактвность с HPV, как описано в Примере 1.
Пациенты получали немиелоаблативную антилимфоцитарную подготовительную схему циклофосфамида (60 мг/кг/сутки) внутривенно (в.в.) в сутки -7 и -6, и флударабин (25 мг/м2/сутки) в.в. от суток -5 до -1.
TIL вводили пациентам внутривенно в сутки 0. Высокую дозу алдеслейкина (интерлейкин (IL)-2) (720000 IU/кг) вводили пациентам внутривенно в сутки 0-4.
Пациенты подвергались полной оценке опухоли через 4-6 недель после завершения исходной схемы лечения (определенной как последние сутки введения алдеслейкина). Если пациент имел стабильное заболевание или уменьшение опухоли, ежемесячно проводили повторные полные оценки в течение приблизительно 3-4 месяцев и затем каждые 3-4 месяца, пока не удовлетворялись критерии выхода из исследования. В качестве целевых поражений идентифицировали все измеримые поражения, вплоть до максимум 10 поражений, репрезентативных для всех вовлеченных органов, и записывали, и измеряли в исходный момент времени. Все другие поражения (или очаги заболевания) идентифицировали как нецелевые поражения и также записывали в исходный момент времени. Поражения оценивали согласно руководству по критериям оценки ответа при солидных опухолях (RECIST) (версия 1,0), как изложено в Таблице В (целевые поражения) и Таблице Г (нецелевые поражения).
Лечили одиннадцать пациентов. Результаты обобщены в Таблице Д.
Как показано в Таблице Д, из восьми пациентов, для которых были доступны результаты, адоптивная клеточная терапия TIL, реагирующими на HPV, приводила к трем объективным респондерам (OR), которые все были частичными респондерами (PR). Два частичных ответа продолжались через два месяца (Пациенты 3 и 4) после лечения, и один частичный ответ (Пациент 8) продолжался в девять месяцев после лечения.
Сканы компьютерной томографии (СТ) грудной клетки и таза Пациента 4 проводили до лечения и через девять месяцев после лечения. Результаты показаны на Фиг. 12А-Е. Как показано на Фиг. 12А-Б, раковое поражение в парааортальном лимфатическом узле уменьшилось на 100% через девять месяцев после лечения. Как показано на Фиг. 12В-Г, раковое поражение в лимфатическом узле корня левого легкого также уменьшилось на 100% через девять месяцев после лечения. Как показано на Фиг. 12Д-Е, раковое поражение в общем подвздошном лимфатическом узле также уменьшилось на 100% через девять месяцев после лечения.
Проводили сканирования магнитно-резонансной томографией (МРТ) печени Пациента 8 до лечения и через два месяца после лечения. Результаты показаны на Фиг. 14А-Б. Как показано на Фиг. 14А-Б, раковая масса на печени уменьшилась на 100% через два месяца после лечения. Также проводили сканирования СТ брюшной полости и таза Пациента 8 до лечения и через два месяца после лечения. Результаты показаны на Фиг. 14В-З. Как показано на Фиг. 14В-Г, раковое поражение в забрюшинном лимфатическом узле также уменьшилось на 100%. Как показано на Фиг. 14Д-Е, раковая масса в брюшной стенке также уменьшилась на 100%. Кроме того, как показано на Фиг. 14Ж-З, левая околотолстокишечная раковая масса кардинально уменьшалась.
Пример 10
В данном примере приведены обновленные результаты клинического исследования, описанного в Примере 9, которые были получены через девять месяцев после результатов, описанных в Примере 9. Данный пример демонстрирует то, что адоптивная клеточная терапия с использованием Т-клеток против HPV лечит рак.
Способы: клиническое испытание для лечения метастатических HPV-позитивных раковых заболеваний лимфоцитами, проникающими в опухоль (TIL), отобранными по реактивности к Е6 и Е7 EPV (HPV-TIL), проводили, как описано в Примере 9. Инфузии HPV-TIL предшествовало немиелоаблативное кондиционирование с последующим болюсом алдеслейкина в высокой дозе, как описано в Примере 9. Реактивность в отношении HPV оценивали ELISPOT, по образованию IFN-гамма и анализами экспрессии CD137.
Результаты: в данном исследовании лечили девять пациентов с раком шейки матки. Они получали медианное значение Т-клеток 81×109 (в интервале от 33 до 152×109) в виде одной инфузии. Инфундированные клетки обладали реактивностью против Е6 и/или Е7 HPV, связанных с высоким риском, у 6 из 8 пациентов. Два пациента без реактивности на HPV не отвечали на лечение. Три из шести пациентов с реактивностью на HPV демонстрировали объективные ответы опухолией по RECIST (1 - PR и 2 - CR). Один пациент имел наилучший ответ - 39%. Два пациента с широко распространившимися метастазами имели полные ответы опухолей, которые продолжались через 18 и 11 месяцев после лечения. Один пациент с полным ответом имел не поддающуюся лечению химиотерапией HPV-16-позитивную плоскоклеточную карциному (Пациент 4 Примера 9), а другой - не поддающуюся лечению химиолучевой терапией HPV-18-позитивную аденокарциному (Пациент 8 Примера 9). Оба пациента демонстрировали длительное повторное заселение Т-клетками, реагирующими на HPV, после лечения. Повышенные частоты HPV-специфичных Т-клеток выявлялись через 13 месяцев у одного пациента и 6 месяцев у другого. Два пациента с TIL, реагирующими на HPV, которые не отвечали на лечение, не демонстрировали повторного заселения Т-клетками, реагирующими на HPV.
В данном исследовании также лечили шесть пациентов не с раком шейки матки. Один пациент испытал объективный клинический ответ, то есть, частичный ответ метастатического рака миндалины, который продолжался через четыре месяца после лечения (Фиг. 20А-Й).
Данные результаты показаны в Таблицах Е-Ж.
Эти данные показывают, что HPV-TIL могут опосредовать надежную полную регрессию метастатического рака шейки матки, и что клеточная терапия может опосредовать полную регрессию эпителиального злокачественного образования. Эти данные также показывают, что HPV-TIL могут опосредовать регрессию метастатического рака миндалины.
Пример 11
Данный пример дополнительно описывает полные ответы опухолей, полученные в Примере 10 посредством адоптивной клеточной терапии с использованием Т-клеток HPV.
Способы
Получение HPV-TIL: проникающие в опухоль лимфоциты (TIL) выращивали из 2 мм фрагментов вырезанных опухолей, как описано ранее (Dudley et al., J. Immunother., 26(4): 332-42 (2003)). После двух-трех недель разрастания лимфоцитов культуры оценивали на клеточный состав посредством проточной цитометрии и на реактивность против HPV-типоспецифичных Е6 и Е7 посредством анализа образования интерферона (IFN)-гамма, как описано в разделе Оценка реактивности на онкопротеин HPV, приведенном ниже. Анализ проточной цитометрией проводили с флуоресцентными антителами, специфичными в отношении CD3, CD4, CD8 и CD56 (BD Biosciences). Культуры отбирали для дополнительного размножения на основе реактивности против онкопротеинов HPV, быстрого роста, высокой чистоты Т-клеток и высокой частоты Т-клеток CD8+. Увеличение числа клеток, используемых для лечения, проводили с использованием протокола быстрого размножения с газопроницаемыми колбами G-REX (Dudley et al., J. Immunother., 26(4): 332-42 (2003); Jin et al., J. Immunother., 35(3): 283-92 (2012)). Инфузионные продукты сертифицировали в отношении числа жизнеспособных клеток, чистоты Т-клеток (проточная цитометрия), эффективности (образование IFN-γ), стерильности (микробиологические исследования) и отсутствия опухолевых клеток (цитопатология).
Лечение пациентов: пациенты имели метастатический рак шейки матки и поддающееся измерению заболевание. Требовалось предварительное лечение платиновым агентом либо в ходе первичной химиолучевой терапии, либо в ситуации с метастазами. Схема кондиционирования состояла во введении 60 мг/кг циклофосфамида в.в. ежесуточно в течение двух суток, с последующим 25 мг/м2 флударабином в.в. ежесуточно в течение пяти суток. Клетки вводили в.в. на протяжении 20-30 минут. В.в. введение 720000 IU/кг алдеслейкина начинали в пределах 24 часов от инфузии клеток и продолжали каждые восемь часов до прекращения из-за токсичности или максимум на протяжении 15 доз. Введение филграстима начинали в сутки после инфузии клеток и продолжали, пока не восстанавливалось число нейтрофилов.
Ответы опухолей: исследования по визуализации в исходный момент времени производили в пределах четырех недель перед началом схемы кондиционирования. Последующую визуализацию производили через шесть недель после лечения, ежемесячно для трех оценок, каждые три месяца для трех оценок и затем каждые 6 месяцев для двух оценок.
Оценка реактивности онкопротеина HPV: реактивность HPV определяли посредством совместного культивирования Т-клеток (от 40000 до 100000 клеток) с аутологичными незрелыми дендритными клетками (40000 клеток), загруженными 1 мкМ пептидных пулов, охватывающих Е6, Е7, gp100 или EBNA1 и BZLF1 (Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, Германия). Пептидные пулы включали 15-мерные пептиды, перекрывающиеся на 11 аминокислот. Дендритные клетки получали из прикрепившейся фракции одноядерных клеток периферической крови (РВМС) или из клеток CD14+, выделенных из РВМС с использованием выделения с магнитными шариками (Miltenyi Biotec), путем культивирования в DMEM (среда Игла, модифицированная по Дульбекко), дополненной 10% человеческой сыворотки и 1000 IU/мл GM-CSF и 500 IU/мл IL-4, в течение пяти-шести суток. Контрольные Т-клетки против EBV получали перед лечением путем культивирования РВМС с пептидными пулами EBNA1 и BZLF1 (10 мкг/мл) в средах AIM-V/RPMI, дополненных 10% человеческой сыворотки и 3000 IU/мл IL-2. Для анализов образования IFN-γ концентрацию IFN-γ в супернатантах определяли после совместного культивирования в течение ночи (R&D Systems (Миннеаполис, Миннесота) или Thermo Fisher Scientific (Уолтем, Массачусетс)).
Анализ ELISPOT (Mabtech (Цинциннати, Огайо)) проводили согласно инструкциям изготовителя. Вкратце, планшеты ELIIP (WAIPSWU от Millipore (Биллерика, Массачусетс)), предварительно покрытые захватывающим антителом (клон 1-D1K, Mabtech), засевали 10000 эффекторных клеток и 40000 клеток-мишеней. После 16-18 часов инкубации определяли секрецию IFN-γ посредством добавления биотинилированного антитела против IFN-γ (7-В6-1 биотин, Mabtech) на два часа при комнатной температуре. После инкубации со стрептавидин-щелочной фосфатазой (Mabtech) в течение одного часа добавляли субстратный реактив (5-бром-4-хлор-3'-индолфосфат п-толуидин/хлорид тетразолия нитро-синий, Kirkegaard & Perry Laboratories, Inc. (Гейтерсберг, Мэриленд)) для обеспечения образования пятен. Образование пятен останавливали промывкой водопроводной водой. Пятна подсчитывали с использованием автоматизированного ридера IMMUNOSPOT (Cellular Technology, Ltd. (Шейкер Хайте, Огайо)). Ответы ELIPSOT против Е6 или Е7 определяли как положительные, если они более чем в два раза превышали негативный контроль и были больше, чем 10 пятен/лунку.
Анализы повышающей регуляции CD137 проводили посредством анализа проточной цитометрией после совместного культивирования в течение 20-24 часов (Wolfl et al., Blood, 110(1): 201-10 (2007)). Клетки метили флуоресцентными антителами против CD137, CD4, CD8 и CD3 (BD Biosciences, Сан Хосе, Калифорния). Перед получением данных клеточным анализатором BD FACSCANTO II (BD Biosciences) их контрастно окрашивали пропидия йодидом (BD Pharmingen, Франклин-Лейке, Нью-Джерси). Данные анализировали программой FLOWJO, Мас версии 10 (TreeStar, Ашленд, Орегон).
Иммуногистохимия: иммуногистохимические окрашивания проводили в Лаборатории патологии, NCl, на 4 мкМ срезах из зафиксированных в формалине, залитых в парафин метастатических опухолей согласно стандартным методикам. После депарафинизации, регидратации и демаскировки антигена срезы опухолей инкубировали с клоном 1F6 против человеческого CD4 (Novocastra, Вецлар, Германия) при разведении 1:80 в течение 2 часов, клоном CD8/144B против человеческого CD8 (Dako Corp., Глоструп, Дания) при разведении 1:50 в течение 2 часов или клоном JC8 против человеческого р16 (Santa Cruz, Даллас, Техас) при разведении 1:200 в течение 32 минут. Предметные стекла, окрашенные на CD4, окрашивали на AUTOSTAINER Link 48 (Dako Corp.) и визуализировали с использованием системы выявления ENVISION FLEX+ (Dako Corp.). Предметные стекла, окрашенные на CD8 и р16, окрашивали на VENTANA Benchmark XT (Ventana Medical Systems, Туксон, Аризона) и визуализировали с использованием системы выявления ULTRAVIEW (Ventana Medical Systems). Изображения получали с использованием микроскопии при 10× увеличении.
Определение поднаборов лимфоцитов из периферической крови: общий анализ крови с дифференциальным определением вручную проводился лабораторией гематологии клинического центра. Фенотипирование лимфоцитов в отношении Т-, В- и NK-клеток (естественный киллер) проводилось лабораторией иммунологии и проточной цитометрии NIH (Национальные институты здравоохранения) с использованием стандартизированных критериев.
Полимеразная цепная реакция с обратной транскриптазой (ПЦР-ОТ) в реальном времени: РНК выделяли из 2 мм фрагмента свежей опухолевой ткани с использованием набора RNEASY (Qiagen, Валенсия, Калифорния). Синтез первой нити ДНК посредством обратной транскрипции проводили с использованием суперсмеси кДНК QSCRIPT (Quanta Biosciences, Гейтерсберг, Мэриленд). Для HPV16-E6, HPV16-E7, HPV18-E6 и HPV18-E7 использовали сделанные на заказ последовательности праймеров и зондов TAQMAN (Applied Biosciences, Фостер-Сити, Калифорния). Для стандартизации уровней экспрессии онкопротеина использовали легко доступный набор праймеров и зондов для глицеральдегид-3-фосфатдегдрогеназы (GAPDH) (Hs02758991_g1, Applied Biosciences, Фостер-Сити, Калифорния). ПЦР-ОТ проводили на системе для ПЦР в реальном времени 7500 FAST (Applied Biosciences).
Анализ сывороточных уровней цитокинов: уровни 17 цитокинов (IL-1β, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-10, IL-12p70, IL-13, IL-17, гранулоцитарный колониестимулирующий фактор (G-CSF), гранулоцитарно-моноцитарный колониестимулирующий фактор (GM-CSF), IFN-γ, моноцитарный хемотактический белок (МСР)-1, воспалительный белок макрофагов (MIP)-1β и фактор некроза опухоли (TNF)-α) измеряли в сыворотках от пациентов, отобранных до и после лечения HPV-TIL, с использованием 17-плексного анализа человеческих цитокинов BIO-PLEX Pro (Bio-Rad Laboratories) согласно инструкциям изготовителя. Уровни цитокинов получали посредством системы BIO-PLEX 200 (Bio-Rad).
Описания клинических случаев
У Пациента 4 диагностировали плоходифференцированный плоскоклеточный рак шейки матки стадии 3В за четырнадцать месяцев до лечения HPV-TIL. Пациента исходно лечили цисплатином, винкристином и блеомицином, с последующей химиолучевой терапией гемцитабином плюс цисплатином и брахитерапией. Через два месяца был выявлен метастатический рак в паратрахеальном (подтвержден биопсией), трахеобронхиальном лимфатических узлах и лимфатических узлах корня легкого с двух сторон. Перед прогрессированием заболевания она получила четыре цикла топотекана и паклитаксела и затем была направлена для клинического испытания, описанного в Примерах 9 и 10. HPV-TIL были получены из резецированного паратрахеального лимфатического узла. Пациент получала антилимфоцитарную химиотерапию, с последующей однократной внутривенной инфузией 152×109 HPV-TIL и двумя дозами алдеслейкина. Дозирование алдеслейкина прекращали из-за утомляемости пациента. Ее выписывали из больницы после восстановления гематологических параметров через 12 суток после инфузии клеток.
За 17 месяцев до лечения HPV-TIL у Пациента 8 была диагностирована аденокарцинома шейки матки стадии IB2. Ее первичную опухоль лечили химиолучевой терапией с цисплатином, с последующей брахитерапией. Через пять месяцев она была отмечена как имеющая первичную опухоль, не поддающуюся лечению химиолучевой терапией (подтвержденную биопсией). Операция по жизненным показаниям идентифицировала участие парааортального и подвздошного лимфатического узла и остаточное заболевание в области таза. Ее раковое заболевание прогрессировало с затрагиванием дополнительных забрюшинных лимфатических узлов и поверхности печени, и у нее развились правый гидроуретеронефроз и двухсторонняя легочная эмболия, которые требовали мочеточникового стента и антикоагуляционной терапии. Данного пациента затем лечили согласно протоколу, описанному в данном Примере, с использованием HPV-TIL, полученных из двух брюшинных узлов. Она получала антилимфоцитарную химиотерапию, с последующим введением 75×109 клеток HPV-TIL и восьми доз алдеслейкина. Дозирование алдеслейкина останавливали из-за гипоксии, вторичной по отношению к отеку легкого, которая требовала дополнительного кислорода и проходила с диурезом. Выписка из больницы происходила через 11 суток после инфузии клеток.
Полные клинические ответы
Оба пациента до лечения имели диссеминированное прогрессирующее заболевание (Фиг. 12А-Е; Фиг. 14А-З; Фиг. 15А-Б; Фиг. 16А-Г; Фиг. 21А-З и Фиг. 22А-З). Пациент 4 имела метастатические опухоли, затрагивающие парааортальный медиастинальный лимфатический узел, корни легких с двух сторон, трахеобронхиальные лимфатические узлы и подвздошные лимфатические узлы (Фиг. 15А; Фиг. 12А-Е и Фиг. 21А-З). Пациент 8 имела метастатический рак, затрагивающий по меньшей мере семь сайтов: две опухоли на поверхности печени, парааортальный и аортокавальный лимфатические узлы, желудочная стенка, околотолстокишечная масса в левой части таза и узелок, закупоривающий правый мочеточник (Фиг. 15Б; Фиг. 14А-З; Фиг. 16А-Г и Фиг. 22А-З). Каждого пациента лечили одной инфузией Т-клеток, которая приводила к регрессии оухоли, которая происходила на протяжении месяцев (Фиг. 15А-Б). Оба пациента испытывали объективные полные ответы опухоли, которые продолжались через 18 и 11 месяцев после лечения (Фиг. 21А-З (Пациент 4) и Фиг. 22А-З (Пациент 8). У Пациента 8 удаляли установленный ранее стент мочеточника после регрессии опухоли, закупоривающей ее правый мочеточник (Фиг. 22Ж и З). Ни один из пациентов не получал дополнительной терапии. Оба пациента вернулись к полной занятости.
Токсичность HPV-TIL
Отсутствовали острые токсичности, связанные с инфузией клеток. Не происходило аутоиммунных нежелательных событий. Оба пациента демонстрировали кратковременные увеличения уровней сывороточных цитокинов (Фиг. 17А-Б), которые были ассоциированы с лихорадкой, но ни у одного пациента не развивался тяжелый синдром высвобождения цитокинов. Определяли уровни цитокинов в криоконсервированной сыворотке. Проводили тестирование в отношении следующих цитокинов: IL-1β, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-10, IL-12(p70), IL-13, IL-17, G-CSF, гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор (GM-CSF), IFN-γ, MCP-1, макрофагальный воспалительный белок 1 бета (MIP-1β) и TNF-α. Демонстрируются цитокины с уровнями, более чем в два раза превышающими исходный уровень при двух последовательных измерениях. Каждые восемь часов после инфузии клеток дозировали алдеслейкин (Пациент 4 получила две дозы, и Пациент 8 получила восемь доз). GCSF вводили ежесуточно, начиная с суток после инфузии клеток, и продолжали, пока не восстанавливалось количество нейтрофилов (Пациент 4 получила 11 доз, и Пациент 8 получила девять доз).
Алдеслейкин дозировали до переносимости по схеме протокола, прекращая дозирование из-за утомляемости у Пациента 4 и одышки у Пациента 8. Нежелательные события степени 3 и степени 4 перечислены в Таблице 3. Самыми обычными токсичностями были гематологические и ожидаемые эффекты антилимфоцитарной схемы кондиционирования (циклофосфамид и флударабин).
Экспрессия опухолевых антигенов и проникновение Т-клеток
Метастатическими опухолями, вырезанными для получения HPV-TIL, были плоскоклеточная карцинома от Пациента 4 и аденокарцинома от Пациента 8. Злокачественные клетки экспрессировали p161NK4A, чувствительный индикатор инфекции HPV высокого риска. Тип HPV и уровни экспрессии Е6 и Е7 - антигенов-мишеней HPV-TIL, определяли для каждой опухоли пациента посредством полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией (ПЦР-ОТ) в реальном времени. Пациент 4 имела HPV-16-позитивный рак, и Пациент 8 имела HPV-18-позитивный рак. Инфильтрат Т-клеток в опухолях от обоих пациентов демонстрировал смешанный состав с преимущественно клетками CD8+ у Пациента 4 и клеткми CD4+ у Пациента 8. И Т-клетки CD4+, и CD8+ вырастали из вырезанных опухолей. Инфундированные HPV-TIL состояли из 19% Т-клеток CD4+ и 79% CD8+ для Пациента 4 и 15% Т-клеток CD4+ и 87% CD8+ для Пациента 8.
Нацеливание HPV-TIL на онкопротеин HPV
HPV-TIL, введенные Пациенту 4, реагировали и против онкопротеина Е6, и против Е7, как демонстрируют анализы образования интерферона (IFN)-γ и ELISPOT (Фиг. 18А и В). Пять процентов и более чем семь процентов инфундированных клеток демонстрировали ответы на Е6 или Е7 соответственно, определенные анализом ELISPOT (Фиг. 18В и Г). Ответы на Е6 были опосредованы Т-клетками CD8+, и ответы на Е7 были опосредованы Т-клетками CD4+ и CD8+. Всего 14 процентов инфундированных клеток демонстрировали реактивность против HPV при измерении посредством анализа повышающей регуляции CD137. Для Пациента 8 HPV-TIL реагировали против Е7 (Фиг. 18Б), причем, при определении анализом ELISPOT, на данный антиген реагировали четыре процента Т-клеток (Фиг. 18Г). Данный ответ был в первую очередь опосредован Т-клетками CD4+.
Повторное заселение Т-клетками, реагирующими на онкопротеин После инфузии HPV-TIL следовало быстрое увеличение Т-клеток CD4+ и CD8+ периферической крови, но не NK и В-клеток (Фиг. 19А-Б). Увеличение числа инфундированных Т-клеток было ассоциировано с установлением и сохранением реактивности Т-клеток периферической крови против онкопротеинов HPV при измерении посредством анализов образования IFN-γ, ELISPOT и повышающей регуляции CD137 (Фиг. 19В-Е). Оба пациента имели слабую, если вообще имели, реактивность против Е6 или Е7 до лечения. После лечения Пациент 4 приобретала надежное распознавание Е6 и Е7 Т-клетками. Для Пациента 8 данное распознавание было слабее, но, тем не менее, было выявимым и, в соответствии с инфундированными Т-клетками, направленным только против Е7. Через один месяц после лечения 12 процентов Т-клеток периферической крови Пациента 4 реагировали с онкопротеином (семь процентов против Е6 и пять процентов против Е7) (Фиг. 19Д). Реактивность против данных антигенов поддерживалась, причем один процент Т-клеток периферической крови демонстрировал распознавание онкопротеина через четыре и 13 месяцев после инфузии клеток (Фиг. 19Д). Пациент 8 демонстрировала 0,4 процента Т-клеток, реагирующих на HPV, через один месяц после лечения (Фиг. 19Е). Данная реактивность поддерживалась, хотя и на меньшем уровне, через три и шесть месяцев после лечения (Фиг. 19Г и Е). В соответствии с реактивностью поднаборов Т-клеток в инфундированных HPV-TIL, HPV-специфичные Т-клетки, которые повторно зяселяли пациентов, были, главным образом, реагирующими на Е6 и Е7 Т-клетками CD8+ для Пациента 4 и реагирующими на Е7 Т-клетками CD4+ для Пациента 8.
Пример 12
В данном примере приведены обновленные результаты для Пациентов 4 и 8 из клинического исследования, описанного в Примерах 10 и 11, которые были получены через четыре месяца после результатов, описанных в Примерах 10 и 11. Данный пример демонстрирует то, что адоптивная клеточная терапия с использованием Т-клеток против HPV лечит рак.
Объективные полные ответы опухолей Пациентов 4 и 8, которых лечили, как описано в Примерах 10 и 11, продолжались через 22 и 15 месяцев после лечения соответственно.
Все ссылки, включая публикации, патентные заявки и патенты, процитированные в данном документе, являются тем самым включенными посредством ссылки в той же самой степени, как если бы каждая ссылка была бы индивидуально и конкретно указана как включенная посредством ссылки и была бы изложена в данном документе во всей ее полноте.
Применение терминов в единственном числе и «по меньшей мере» и аналогичных объектов в контексте описания изобретения (особенно в контексте следующей формулы изобретения) следует истолковывать как покрывающее объекты как в единственном, так и во множественном числе, если в данном документе не указано иное, или если это явно не противоречит контексту. Применение термина «по меньшей мере один», с последующим списком из одного или более чем одного предмета (например, «по меньшей мере один А и Б») следует истолковывать как означающее один предмет, выбранный из перечисленных предметов (А или Б), или любую комбинацию двух или более чем двух из перечисленных предметов (А и Б), если в данном документе не указано иное, или если это явно не противоречит контексту. Термины «вмещающий», «имеющий», «включающий» и «содержащий» следует истолковывать как неограничивающие термины (т.е. означающие «включающий, но не ограничивающийся»), если не указано иное. В данном документе просто подразумевается то, что перечисление интервалов значений служит в качестве сокращенного способа индивидуальной ссылки на каждое отдельное значение, попадающее в данный интервал, если в данном документе не указано иное, и каждое отдельное значение включено в описание, как если бы оно было индивидуально перечислено в данном документе. Все способы, описанные в данном документе, можно осуществлять в любом подходящем порядке, если в данном документе не указано иное, или если это явно не противоречит контексту. Применение любого и всех примеров или типичных формулировок (например, «такой как»), приведенных в данном документе, предназначено просто для лучшего освещения изобретения и не ставит ограничений на объем изобретения, если не заявлено иное. Никакую формулировку в описании изобретения не следует истолковывать как указывающую на какой-либо не заявленный в формуле изобретения элемент, являющийся существенным для воплощения изобретения на практике.
В данном документе описаны предпочтительные воплощения этого изобретения, включающие наилучший способ осуществления изобретения, известный авторам изобретения. При прочтении вышеизложенного описания обычным специалистам в данной области могут стать очевидными вариации данных предпочтительных воплощений. Авторы изобретения ожидают, что квалифицированные специалисты будет применять такие вариации сообразно обстоятельствам, и авторы изобретения подразумевают, что изобретение может воплощаться на практике иначе, чем конкретно описано в данном документе. Соответственно, данное изобретение включает все модификации и эквиваленты объекта изобретения, перечисленные в формуле изобретения, приложенной к нему, которые разрешаются применимым законом. Кроме того, данным изобретением охватывается любая комбинация вышеописанных элементов во всех их возможных вариациях, если в данном документе не указано иное, или если это явно не противоречит контексту.
Claims (25)
1. Способ получения популяции Т-клеток, специфичных в отношении папилломавируса человека (HPV), включающий:
разделение образца HPV-позитивной опухоли головы и шеи на многочисленные фрагменты;
культивирование многочисленных фрагментов по отдельности в присутствии только одного цитокина;
получение Т-клеток из культивируемых многочисленных фрагментов;
тестирование по отдельности Т-клеток из многочисленных фрагментов на специфичное распознавание HPV;
отбор Т-клеток, которые демонстрируют специфичное распознавание HPV; и
увеличение числа отобранных Т-клеток для получения популяции HPV-специфичных Т-клеток.
2. Способ по п. 1, в котором увеличение числа отобранных Т-клеток включает увеличение числа клеток с использованием одних или обеих из (i) облученных аллогенных питающих клеток и (ii) облученных аутологичных питающих клеток, и одного или обоих из (iii) антитела ОКТ3 и (iv) интерлейкина (IL)-2.
3. Способ по п. 1 или 2, в котором цитокин представляет собой IL-2.
4. Способ получения популяции HPV-специфичных Т-клеток, включающий:
разделение образца HPV-позитивной опухоли головы и шеи на многочисленные фрагменты;
культивирование многочисленных фрагментов по отдельности;
получение Т-клеток из культивируемых многочисленных фрагментов;
тестирование по отдельности Т-клеток из многочисленных фрагментов на специфичное распознавание HPV;
отбор Т-клеток, которые демонстрируют специфичное распознавание HPV; и
увеличение числа отобранных Т-клеток с использованием одного или обоих из (i) антитела ОКТ3 и (ii) интерлейкина (IL)-2 для получения популяции HPV-специфичных Т-клеток.
5. Способ по п. 4, в котором культивирование многочисленных фрагментов по отдельности включает культивирование многочисленных фрагментов в присутствии только одного цитокина.
6. Способ по п. 5, в котором цитокин представляет собой IL-2.
7. Способ по любому из пп. 4-6, в котором увеличение числа отобранных Т-клеток дополнительно включает применение одних или обеих из облученных аллогенных питающих клеток и облученных аутологичных питающих клеток.
8. Способ по любому из пп. 1, 2 и 4-6, в котором популяция HPV-специфичных Т-клеток распознает HPV 16-позитивные раковые клетки.
9. Способ по любому из пп. 1, 2 и 4-6, в котором популяция HPV-специфичных Т-клеток распознает Е6 HPV 16.
10. Способ по любому из пп. 1, 2 и 4-6, в котором популяция HPV-специфичных Т-клеток распознает Е7 HPV 16.
11. Способ по любому из пп. 1, 2 и 4-6, в котором популяция HPV-специфичных Т-клеток распознает HPV 18-позитивные раковые клетки.
12. Способ по любому из пп. 1, 2 и 4-6, в котором популяция HPV-специфичных Т-клеток распознает Е6 HPV 18.
13. Способ по любому из пп. 1, 2 и 4-6, в котором популяция HPV-специфичных Т-клеток распознает Е7 HPV 18.
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201361846161P | 2013-07-15 | 2013-07-15 | |
US61/846,161 | 2013-07-15 | ||
PCT/US2014/046478 WO2015009604A1 (en) | 2013-07-15 | 2014-07-14 | Methods of preparing anti-human papillomavirus antigen t cells |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2019105050A Division RU2809610C2 (ru) | 2013-07-15 | 2019-02-22 | Способы получения т-клеток против антигена папилломавируса человека |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2016103614A RU2016103614A (ru) | 2017-08-16 |
RU2016103614A3 RU2016103614A3 (ru) | 2018-06-18 |
RU2713333C2 true RU2713333C2 (ru) | 2020-02-04 |
Family
ID=51257632
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2016103614A RU2713333C2 (ru) | 2013-07-15 | 2014-07-14 | Способы получения т-клеток против антигена папилломавируса человека |
Country Status (9)
Country | Link |
---|---|
US (7) | US20160144018A1 (ru) |
EP (3) | EP4137564A1 (ru) |
JP (2) | JP6616295B2 (ru) |
CN (2) | CN105452448B (ru) |
AU (3) | AU2014290286A1 (ru) |
CA (1) | CA2918080A1 (ru) |
ES (2) | ES2773548T3 (ru) |
RU (1) | RU2713333C2 (ru) |
WO (1) | WO2015009604A1 (ru) |
Families Citing this family (27)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
AU2015380397B2 (en) * | 2015-01-31 | 2021-10-21 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Compositions and methods for T cell delivery of therapeutic molecules |
WO2017075571A1 (en) * | 2015-10-30 | 2017-05-04 | Children's National Medical Center | Generating hpv antigen-specific cells from a naive t cell population |
WO2017049237A1 (en) * | 2015-09-18 | 2017-03-23 | The General Hospital Corporation Dba Massachusetts General Hospital | Personalized approach to dosage of anti-fugetactic agent for treatment of cancer |
ES2964746T3 (es) * | 2015-12-30 | 2024-04-09 | Celgene Corp | Métodos de producción de linfocitos T y linfocitos T producidos mediante el mismo |
CA3037086A1 (en) | 2016-10-03 | 2018-04-12 | Juno Therapeutics, Inc. | Hpv-specific binding molecules |
MD3532607T2 (ro) | 2016-10-26 | 2024-07-31 | Iovance Biotherapeutics Inc | Restimularea limfocitelor infiltrante în tumori crioconservate |
TWI788307B (zh) | 2016-10-31 | 2023-01-01 | 美商艾歐凡斯生物治療公司 | 用於擴增腫瘤浸潤性淋巴細胞之工程化人造抗原呈現細胞 |
GB201700621D0 (en) | 2017-01-13 | 2017-03-01 | Guest Ryan Dominic | Method,device and kit for the aseptic isolation,enrichment and stabilsation of cells from mammalian solid tissue |
WO2018136762A1 (en) * | 2017-01-20 | 2018-07-26 | Atara Biotherapeutics, Inc. | Methods of treating multiple sclerosis using autologous t cells |
JOP20190224A1 (ar) | 2017-03-29 | 2019-09-26 | Iovance Biotherapeutics Inc | عمليات من أجل إنتاج الخلايا اللمفاوية المرتشحة للأورام واستخداماتها في العلاج المناعي |
US11254913B1 (en) | 2017-03-29 | 2022-02-22 | Iovance Biotherapeutics, Inc. | Processes for production of tumor infiltrating lymphocytes and uses of same in immunotherapy |
EP3635097A1 (en) | 2017-06-05 | 2020-04-15 | Iovance Biotherapeutics, Inc. | Methods of using tumor infiltrating lymphocytes in double-refractory melanoma |
CA3080546A1 (en) | 2017-10-03 | 2019-04-11 | Juno Therapeutics, Inc. | Hpv-specific binding molecules |
US11713446B2 (en) | 2018-01-08 | 2023-08-01 | Iovance Biotherapeutics, Inc. | Processes for generating TIL products enriched for tumor antigen-specific T-cells |
US20210015869A1 (en) | 2018-04-05 | 2021-01-21 | Juno Therapeutics, Inc. | T cells expressing a recombinant receptor, related polynucleotides and methods |
CA3094468A1 (en) | 2018-04-05 | 2019-10-10 | Juno Therapeutics, Inc. | Methods of producing cells expressing a recombinant receptor and related compositions |
TWI840351B (zh) | 2018-04-05 | 2024-05-01 | 美商奇諾治療有限公司 | T細胞受體及表現其之工程化細胞 |
WO2019196088A1 (en) * | 2018-04-13 | 2019-10-17 | Syz Cell Therapy Co. | Methods of obtaining tumor-specific t cell receptors |
MA52533A (fr) | 2018-04-27 | 2021-03-03 | Iovance Biotherapeutics Inc | Procédé en circuit fermé pour l'amplification et l'edition de gènes de lymphocytes d'infiltration des tumeurs et leurs utilisations en immunothérapie |
AU2019318560A1 (en) | 2018-08-09 | 2021-02-25 | Juno Therapeutics, Inc. | Processes for generating engineered cells and compositions thereof |
US20220050114A1 (en) | 2018-09-11 | 2022-02-17 | Juno Therapeutics, Inc. | Methods for mass spectrometry analysis of engineered cell compositions |
GB201821207D0 (en) * | 2018-12-24 | 2019-02-06 | Tcer Ab | Immunotherapy therapy |
WO2020223535A1 (en) | 2019-05-01 | 2020-11-05 | Juno Therapeutics, Inc. | Cells expressing a recombinant receptor from a modified tgfbr2 locus, related polynucleotides and methods |
MX2022007598A (es) | 2019-12-20 | 2022-09-23 | Instil Bio Uk Ltd | Dispositivos y métodos para el aislamiento de linfocitos infiltrantes de tumores y usos de los mismos. |
JP2023531531A (ja) | 2020-06-26 | 2023-07-24 | ジュノ セラピューティクス ゲーエムベーハー | 組換え受容体を条件付きで発現する操作されたt細胞、関連ポリヌクレオチド、および方法 |
WO2023196884A1 (en) | 2022-04-06 | 2023-10-12 | Juno Therapeutics, Inc. | Detection assay for human papillomavirus (hpv) type 16 (hpv-16) |
WO2023201369A1 (en) | 2022-04-15 | 2023-10-19 | Iovance Biotherapeutics, Inc. | Til expansion processes using specific cytokine combinations and/or akti treatment |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20110052530A1 (en) * | 2009-08-28 | 2011-03-03 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Serv | Adoptive cell therapy with young t cells |
Family Cites Families (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2004021995A2 (en) | 2002-09-06 | 2004-03-18 | The Government Of The United States Of America, Represented By The Secretary, Departement Of Health And Human Services | Immunotherapy with in vitro-selected antigen-specific lymphocytes after nonmyeloablative lymphodepleting chemotherapy |
CN1609196A (zh) * | 2003-10-17 | 2005-04-27 | 上海普泛生物科技有限公司 | 用于发现肿瘤特异性抗原和肿瘤特异性抗原决定簇的高产率t淋巴细胞克隆技术 |
US8759014B2 (en) * | 2008-02-11 | 2014-06-24 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Methods of obtaining antigen-specific T cell populations |
US20120244133A1 (en) | 2011-03-22 | 2012-09-27 | The United States of America, as represented by the Secretary, Department of Health and | Methods of growing tumor infiltrating lymphocytes in gas-permeable containers |
CN102816734A (zh) * | 2012-05-09 | 2012-12-12 | 阮润生 | 一种肿瘤抗原特异性t细胞的获取方法 |
-
2014
- 2014-07-14 JP JP2016527005A patent/JP6616295B2/ja active Active
- 2014-07-14 CN CN201480044285.7A patent/CN105452448B/zh active Active
- 2014-07-14 RU RU2016103614A patent/RU2713333C2/ru active
- 2014-07-14 EP EP22197914.9A patent/EP4137564A1/en active Pending
- 2014-07-14 AU AU2014290286A patent/AU2014290286A1/en not_active Abandoned
- 2014-07-14 WO PCT/US2014/046478 patent/WO2015009604A1/en active Application Filing
- 2014-07-14 EP EP14745056.3A patent/EP3022294B1/en active Active
- 2014-07-14 EP EP19209253.4A patent/EP3626817B1/en active Active
- 2014-07-14 CA CA2918080A patent/CA2918080A1/en active Pending
- 2014-07-14 CN CN202010606868.1A patent/CN111733131A/zh active Pending
- 2014-07-14 ES ES14745056T patent/ES2773548T3/es active Active
- 2014-07-14 US US14/905,138 patent/US20160144018A1/en not_active Abandoned
- 2014-07-14 ES ES19209253T patent/ES2932429T3/es active Active
-
2018
- 2018-12-13 US US16/218,658 patent/US20190117761A1/en not_active Abandoned
-
2019
- 2019-11-07 JP JP2019202239A patent/JP7315435B2/ja active Active
-
2020
- 2020-09-16 AU AU2020233702A patent/AU2020233702B2/en active Active
- 2020-12-07 US US17/113,570 patent/US11077182B2/en active Active
-
2021
- 2021-07-12 US US17/372,927 patent/US11376318B2/en active Active
- 2021-07-12 US US17/373,130 patent/US11338032B2/en active Active
- 2021-07-12 US US17/373,093 patent/US11331385B2/en active Active
-
2022
- 2022-06-13 US US17/838,662 patent/US11918640B2/en active Active
-
2023
- 2023-09-22 AU AU2023233209A patent/AU2023233209A1/en active Pending
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20110052530A1 (en) * | 2009-08-28 | 2011-03-03 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Serv | Adoptive cell therapy with young t cells |
Non-Patent Citations (8)
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
RU2713333C2 (ru) | Способы получения т-клеток против антигена папилломавируса человека | |
JP7181917B2 (ja) | 濃縮された腫瘍反応性t細胞集団を腫瘍から作製する方法 | |
JP7252383B2 (ja) | 末梢血から腫瘍反応性t細胞の濃縮された集団を作製する方法 | |
Kapanadze et al. | Regulation of accumulation and function of myeloid derived suppressor cells in different murine models of hepatocellular carcinoma | |
AU2006328943B2 (en) | Improved method for expansion of tumour-reactive T-lymphocytes for immunotherapy of patients with cancer | |
RU2809610C2 (ru) | Способы получения т-клеток против антигена папилломавируса человека | |
EP3500298A2 (en) | Regulation of tumor-associated t cells | |
US20180139937A1 (en) | Cell culture systems for producing il-33 induced t9 cells and methods of using the cells | |
O'Sullivan | The role of the innate immune system in cancer immunoediting and rejection [electronic resource] | |
O'Sullivan | The Role of the Innate Immune System in Cancer Immunoediting and Rejection | |
Naito | 45th Scientific Meeting of the Japanese Society for Mucosal Immunology/with Meeting Report by T. Yoshikawa |