RU2701145C1 - Способ генотипирования энтеровирусов методом секвенирования 1A-1B участка генома - Google Patents
Способ генотипирования энтеровирусов методом секвенирования 1A-1B участка генома Download PDFInfo
- Publication number
- RU2701145C1 RU2701145C1 RU2019121521A RU2019121521A RU2701145C1 RU 2701145 C1 RU2701145 C1 RU 2701145C1 RU 2019121521 A RU2019121521 A RU 2019121521A RU 2019121521 A RU2019121521 A RU 2019121521A RU 2701145 C1 RU2701145 C1 RU 2701145C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- genotyping
- enteroviruses
- pcr
- minutes
- sequencing
- Prior art date
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/125—Picornaviridae, e.g. calicivirus
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6806—Preparing nucleic acids for analysis, e.g. for polymerase chain reaction [PCR] assay
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Virology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Mycology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области молекулярной биологии, лабораторной диагностики, вирусологии и эпидемиологии и предназначено для генотипирования энтеровирусов методом секвенирования 1A-1B участка генома. Выделяют вирусную РНК, получают кДНК, которую используют в качестве матрицы при постановке реакции "полувложенной" ПЦР. Генотипирование обнаруженных энтеровирусов проводят методом сравнительного анализа последовательностей, полученных после секвенирования ампликонов, с последовательностями геномов энтеровирусов из международной базы генетических данных. Изобретение обеспечивает разработку более чувствительного метода генотипирования энтеровирусов.
Description
Изобретение относится к области молекулярной биологии, лабораторной диагностики, вирусологии и эпидемиологии, и предназначено для определения типовой таксономической принадлежности (генотипирования) энтеровирусов, обнаруженных в образцах клинического материала или в пробах из объектов окружающей среды, методом прямого секвенирования фрагмента структурной части их генома с последующим сравнением полученных в результате этого нуклеотидных последовательностей с нуклеотидными последовательностями структурной части генома ранее генотипированных энтеровирусов, либо с нуклеотидными последовательностями, депонированными в международных базах данных генетической информации, например, NCBI GenBank.
В соответствии с действующей классификацией, энтеровирусы человека относятся к роду Enterovirus семейства Picornaviridae порядка Picornavirales, включают в себя более ста типов и разделены на четыре вида (A, B, C, D) (Zell et al., 2017). Клинические проявления инфекции, вызванной энтеровирусами, характеризуются широким спектром, включающим лихорадочное заболевание, конъюнктивит, инфекции верхних и нижних дыхательных путей, гастроэнтерит, менингит, энцефалит и энцефаломиелит (Rotbart et al., 2000).
Определение таксономической принадлежности энтеровирусов, обнаруженных в клиническом материале или в пробах из объектов окружающей среды, с точностью до типа (типирование) необходимо для лабораторного подтверждения клинического диагноза, прогнозирования развития тяжелых форм энтеровирусной инфекции, проведения эпидемиологического анализа. До недавнего времени "золотым стандартом" типирования обнаруженных энтеровирусов оставалась реакция нейтрализации с типоспецифическими сыворотками. Однако, данный метод предполагает предварительное выделение изолятов живого вируса из исследуемого материала с помощью чувствительных клеток, что не всегда возможно вследствие особенностей биологии некоторых энтеровирусов, а также требует значительных затрат времени (до нескольких недель). Внедрение в лабораторную диагностику молекулярно-биологических методов (амплификация нуклеиновых кислот с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР), секвенирование нуклеиновых кислот и др.) позволило значительно упростить и ускорить процесс генотипирования энтеровирусов, а также сделать его более чувствительным и точным.
Известны следующие способы генотипирования энтеровирусов методом прямого секвенирования фрагмента структурной части их генома, описанные в научных публикациях:
1. Генотипирование энтеровирусов методом секвенирования фрагментов 1В или 1D участка генома, кодирующих белки VP2 или VP1 (Casas I, Palacios GF, Trallero G, Cisterna D, Freire MC, Tenorio A. Molecular characterization of human enteroviruses in clinical samples: comparison between VP2, VP1, and RNA polymerase regions using RT nested PCR assays and direct sequencing of products. J Med Virol. 2001 Sep;65(1):138-48.);
2. Генотипирование энтеровирусов методом секвенирования фрагмента 1A-1B участка генома, кодирующего структурные белки VP4-VP2 (Arola A, Santti J, Ruuskanen O, Halonen P, Hyypiä T. Identification of enteroviruses in clinical specimens by competitive PCR followed by genetic typing using sequence analysis. J Clin Microbiol. 1996 Feb;34(2):313-8.);
3. Генотипирование энтеровирусов методом секвенирования фрагмента 1D участка генома, кодирующего структурный белок VP1 (Oberste MS, Maher K, Kilpatrick DR, Pallansch MA. Molecular evolution of the human enteroviruses: correlation of serotype with VP1 sequence and application to picornavirus classification. J Virol. 1999 Mar;73(3):1941-8.);
Все эти методы позволяют определить генотип энтеровирусов, обнаруженных в клиническом материале или в пробах из объектов окружающей среды, путем амплификации и прямого секвенирования фрагмента структурной части их генома с последующим сравнением полученных в результате этого нуклеотидных последовательностей с нуклеотидными последовательностями структурной части генома ранее генотипированных энтеровирусов. Однако в качестве целевого фрагмента для амплификации и дальнейшего секвенирования различные методы используют участки структурной части генома, отличающиеся локализацией, вариабельностью и размером, а также разные режимы проведения ПЦР с разными праймерами, что влияет на их чувствительность и специфичность.
Наиболее близким к предлагаемому изобретению является метод генотипирования энтеровирусов с помощью однораундовой амплификации и прямого секвенирования фрагмента 1A-1B участка генома, кодирующего структурные белки VP4-VP2. Указанный метод использует для амплификации целевого участка генома однораундовую ПЦР с одной из двух комбинаций праймеров: 5' TCCTCCGGCCCCTGAATG 3' и 5' GGCAACTTCCACCACCACCC 3', либо 5' TACTTTGGGTGTCCGTGTTTC 3' и 5' GGCAACTTCCACCACCACCC 3'. (Arola A, Santti J, Ruuskanen O, Halonen P, Hyypiä T. Identification of enteroviruses in clinical specimens by competitive PCR followed by genetic typing using sequence analysis. J Clin Microbiol. 1996 Feb;34(2):313-8.). Учитывая высокую изменчивость энтеровирусов, использование для амплификации целевого фрагмента однораундовой ПЦР с описанными устаревшими праймерами существенно снижает чувствительность данного метода при генотипировании современных штаммов энтеровирусов человека разных видов.
Техническим результатом заявляемого изобретения является разработка более чувствительного метода генотипирования всех известных, на сегодняшний день, энтеровирусов.
Указанный технический результат достигается тем, что для амплификации целевого фрагмента вместо однораундовой ПЦР используется "полувложенная" ПЦР с использованием вырожденного праймера. Первый раунд "полувложенной" ПЦР проводится с комбинацией праймеров: 5' TCCTCCGGCCCCTGAATG 3' и 5' GGIARYTTCCAIYACCAICC 3', а второй раунд "полувложенной" ПЦР с комбинацией праймеров: 5' TACTTTGGGTGTCCGTGTTTC 3' и 5' GGIARYTTCCAIYACCAICC 3'.
Заявляется способ генотипирования энтеровирусов методом секвенирования 1A-1B участка генома, отличающийся тем, что выделяют вирусную РНК, получают кДНК, которую используют в качестве матрицы при постановке реакции "полувложенной" ПЦР, для проведения первого раунда "полувложенной" ПЦР готовят 25 мкл реакционной смеси, включающей: 2 ед. ДНК-полимеразы, 0,2 mM смесь dNTP, 5 pmol праймера 5' TCCTCCGGCCCCTGAATG 3', 20 pmol праймера 5' GGIARYTTCCAIYACCAICC 3', реакционный буфер: 67 mM Трис-HCl, pH 8,3, 2,0 mM MgCl2 и 10 мкл кДНК, ПЦР проводят по следующей схеме: 1 цикл - 95°С, 5 минут; 42 цикла - 95°С, 20 секунд, 55°С, 1,5 минуты, 72°С, 40 секунд; и заключительный цикл - 72°С, 5 минут, во втором раунде "полувложенной" ПЦР используют аналогичную реакционную смесь с праймерами 5' TACTTTGGGTGTCCGTGTTTC 3', 5 pmol и 5' GGIARYTTCCAIYACCAICC 3', 20 pmol, и 1 мкл амплификата, полученного в предыдущей реакции, схема проведения второго раунда: 1 цикл - 95°С, 5 минут; 30 циклов 95°С, 20 секунд, 58°С, 1 минута, 72°С, 40 секунд; 1 цикл - 72°С, 5 минут, секвенирование ампликонов проводят по прямой и обратной последовательности с праймерами 5' TACTTTGGGTGTCCGTGTTTC 3' для прямой последовательности и 5' GGIARYTTCCAIYACCAICC 3' для обратной последовательности на автоматическом генетическом анализаторе 3130 Genetic Analyzer, генотипирование обнаруженных энтеровирусов проводят методом сравнительного анализа последовательностей, полученных после секвенирования ампликонов, с последовательностями геномов энтеровирусов из международной базы генетических данных NCBI GenBank.
Осуществление изобретения.
В качестве материала использовали фекальные экстракты, ликвор, носоглоточные смывы, плазму крови и др. Выделение вирусной РНК из исследуемой пробы проводили с помощью коммерческих наборов реагентов, предназначенного для этих целей, например, методом сорбции на силикагелевом носителе с помощью набора реагентов "РИБО-сорб" (Интерлабсервис, Москва) или методом сорбции на магнитной силике с помощью комплекта реагентов "Магно-сорб" (Интерлабсервис, Москва). Далее суммарную РНК использовали в реакции обратной транскрипции для синтеза кДНК с использованием набора реагентов, предназначенного для этих целей, например, "РЕВЕРТА-L-100" (Интерлабсервис, Москва). Далее полученная кДНК использовалась в качестве матрицы при постановке реакции "полувложенной" ПЦР. Для проведения первого раунда "полувложенной" ПЦР готовили 25 мкл реакционной смеси, включающей: 2 ед. ДНК-полимеразы, 0,2 mM смесь dNTP, 5 pmol праймера 5' TCCTCCGGCCCCTGAATG 3', 20 pmol праймера 5' GGIARYTTCCAIYACCAICC 3', реакционный буфер (67 mM Трис-HCl (pH 8,3), 2,0 mM MgCl2) и 10 мкл кДНК. ПЦР проводили по следующей схеме: 1 цикл - 95°С - 5 минут; 42 цикла - 95°С - 20 секунд, 55°С - 1,5 минуты, 72°С - 40 секунд; и заключительный цикл - 72°С - 5 минут. Во втором раунде "полувложенной" ПЦР использовали аналогичную реакционную смесь с праймерами 5' TACTTTGGGTGTCCGTGTTTC 3' (5 pmol) и 5' GGIARYTTCCAIYACCAICC 3' (20 pmol), и 1 мкл амплификата, полученного в предыдущей реакции. Схема проведения второго раунда: 1 цикл - 95°С - 5 минут; 30 циклов - 95°С - 20 секунд, 58 гр. С - 1 минута, 72°С - 40 секунд; 1 цикл - 72°С - 5 минут. Для анализа продуктов амплификации использовали электрофорез в 2% агарозном геле с последующим окрашиванием бромистым этидием (0,5 мг/мл) и детекцией в ультрафиолетовом трансиллюминаторе. Секвенирование ампликонов проводили по прямой и обратной последовательности с праймерами 5' TACTTTGGGTGTCCGTGTTTC 3' (для прямой последовательности) и 5' GGIARYTTCCAIYACCAICC 3' (для обратной последовательности) на автоматическом генетическом анализаторе 3130 Genetic Analyzer (Thermo Fisher Scientific, США), следуя рекомендациям производителя. Выравнивание последовательностей нуклеотидов и аминокислот, а также филогенетический и молекулярно-эволюционный анализ и статистическую обработку результатов проводили с использованием компьютерной программы MEGA, версия 3.1 (Kumar S. et al.). Генотипирование обнаруженных энтеровирусов проводили с помощью программы BLAST (http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi) методом сравнительного анализа последовательностей, полученных после секвенирования ампликонов, с последовательностями геномов энтеровирусов из международной базы генетических данных NCBI GenBank.
Способ разработан и апробирован в лаборатории энтеральных вирусных инфекций ФБУН "Екатеринбургский научно-исследовательский институт вирусных инфекций" Роспотребнадзора.
Литература
1. Zell R., Delwart E., Gorbalenya A.E. et al. ICTV Virus Taxonomy Profile: Picornaviridae. J. Gen. Virol. 2017, 98(10): 2421-2422.
2. Rotbart H.A., Hayden F.G. Picornavirus infections: a primer for the practitioner. Arch Fam Med 2000; 9: 913 - 8.
3. Kumar S., Tamura K., Nei M. MEGA3: Integrated software for Molecular Evolutionary Genetics Analysis and sequence alignment. Briefings in Bioinformatics. 2004 (5): 150-163.
4. Arola A, Santti J, Ruuskanen O, Halonen P, Hyypiä T. Identification of enteroviruses in clinical specimens by competitive PCR followed by genetic typing using sequence analysis. J Clin Microbiol. 1996 Feb;34(2):313-8.
Claims (1)
- Способ генотипирования энтеровирусов методом секвенирования 1A-1B участка генома, отличающийся тем, что выделяют вирусную РНК, получают кДНК, которую используют в качестве матрицы при постановке реакции "полувложенной" ПЦР, для проведения первого раунда "полувложенной" ПЦР готовят 25 мкл реакционной смеси, включающей 2 ед. ДНК-полимеразы, 0,2 mM смесь dNTP, 5 pmol праймера 5' TCCTCCGGCCCCTGAATG 3', 20 pmol праймера 5' GGIARYTTCCAIYACCAICC 3', реакционный буфер: 67 mM Трис-HCl, pH 8,3, 2,0 mM MgCl2 и 10 мкл кДНК, ПЦР проводят по следующей схеме: 1 цикл - 95°С, 5 минут; 42 цикла - 95°С, 20 секунд, 55°С, 1,5 минуты, 72°С, 40 секунд и заключительный цикл - 72°С, 5 минут, во втором раунде "полувложенной" ПЦР используют аналогичную реакционную смесь с праймерами 5' TACTTTGGGTGTCCGTGTTTC 3', 5 pmol и 5' GGIARYTTCCAIYACCAICC 3', 20 pmol, и 1 мкл амплификата, полученного в предыдущей реакции, схема проведения второго раунда: 1 цикл - 95°С, 5 минут, 30 циклов - 95°С, 20 секунд, 58°С, 1 минута, 72°С, 40 секунд, 1 цикл - 72°С, 5 минут, секвенирование ампликонов проводят по прямой и обратной последовательности с праймерами 5' TACTTTGGGTGTCCGTGTTTC 3' для прямой последовательности и 5' GGIARYTTCCAIYACCAICC 3' для обратной последовательности на автоматическом генетическом анализаторе, генотипирование обнаруженных энтеровирусов проводят методом сравнительного анализа последовательностей, полученных после секвенирования ампликонов, с последовательностями геномов энтеровирусов из международной базы генетических данных.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2019121521A RU2701145C1 (ru) | 2019-07-10 | 2019-07-10 | Способ генотипирования энтеровирусов методом секвенирования 1A-1B участка генома |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2019121521A RU2701145C1 (ru) | 2019-07-10 | 2019-07-10 | Способ генотипирования энтеровирусов методом секвенирования 1A-1B участка генома |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2701145C1 true RU2701145C1 (ru) | 2019-09-25 |
Family
ID=68063207
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2019121521A RU2701145C1 (ru) | 2019-07-10 | 2019-07-10 | Способ генотипирования энтеровирусов методом секвенирования 1A-1B участка генома |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2701145C1 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2822162C1 (ru) * | 2023-07-31 | 2024-07-02 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") | Способ генотипирования изолятов и штаммов калицивируса кошек посредством филогенетического анализа с применением оргинальных олигонуклеотидных праймеров для высоковариабельного участка генов ORF2-ORF3 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6846621B1 (en) * | 1999-03-31 | 2005-01-25 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Typing of human enteroviruses |
| US7247457B2 (en) * | 2005-04-26 | 2007-07-24 | United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services, Centers For Disease Control And Prevention | Detection and identification of enteroviruses by semi-nested amplification of the enterovirus VP1 protein |
| RU2441917C2 (ru) * | 2010-04-12 | 2012-02-10 | Федеральное государственное учреждение науки "Нижегородский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени академика И.Н. Блохиной" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Способ идентификации 5'-нтр генома энтеровирусов геногруппы эвi и геногруппы эвii с использованием полимеразной цепной реакции |
-
2019
- 2019-07-10 RU RU2019121521A patent/RU2701145C1/ru active
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6846621B1 (en) * | 1999-03-31 | 2005-01-25 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Typing of human enteroviruses |
| US7247457B2 (en) * | 2005-04-26 | 2007-07-24 | United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services, Centers For Disease Control And Prevention | Detection and identification of enteroviruses by semi-nested amplification of the enterovirus VP1 protein |
| RU2441917C2 (ru) * | 2010-04-12 | 2012-02-10 | Федеральное государственное учреждение науки "Нижегородский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени академика И.Н. Блохиной" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Способ идентификации 5'-нтр генома энтеровирусов геногруппы эвi и геногруппы эвii с использованием полимеразной цепной реакции |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| AROLA A. et al. Identification of enteroviruses in clinical specimens by competitive PCR followed by genetic typing using sequence analysis. J Clin Microbiol. 1996 Feb; 34(2): 313-8. * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2822162C1 (ru) * | 2023-07-31 | 2024-07-02 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") | Способ генотипирования изолятов и штаммов калицивируса кошек посредством филогенетического анализа с применением оргинальных олигонуклеотидных праймеров для высоковариабельного участка генов ORF2-ORF3 |
| RU2828885C1 (ru) * | 2023-11-29 | 2024-10-21 | Федеральное бюджетное учреждение науки Федеральный научно-исследовательский институт вирусных инфекций "Виром" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФБУН ФНИИВИ "Виром" Роспотребнадзора) | Способ обнаружения генетического материала энтеровируса D68 методом полимеразной цепной реакции в реальном времени |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Zhou et al. | Advancements in detection of SARS-CoV-2 infection for confronting COVID-19 pandemics | |
| CN111004870B (zh) | 新型冠状病毒n基因核酸检测试剂盒 | |
| CN107475459B (zh) | 同时鉴别美洲型prrsv经典毒株、变异毒株及新型病毒类nadc30毒株的检测方法 | |
| CN111041129A (zh) | 检测6项呼吸道病毒的引物探针组合、试剂盒及应用 | |
| CN108676920B (zh) | 一种快速检测小鼠诺如病毒引物、试剂盒及其rt-rpa方法 | |
| CN111560478B (zh) | 一种一步法反转录PCR结合Sanger测序检测新型冠状病毒的试剂盒 | |
| CN111286559B (zh) | 检测非洲猪瘟病毒的引物、探针及试剂盒 | |
| CN110669870A (zh) | 一种帕利亚姆血清群病毒血清型的实时荧光定量rt-pcr检测引物、探针及检测试剂盒 | |
| CN105886663A (zh) | 一种锁核酸增敏的猪伪狂犬病毒野毒株荧光定量pcr的检测试剂盒 | |
| Li et al. | Development of a recombinase-aided amplification combined with lateral flow dipstick assay for the rapid detection of the African swine fever virus | |
| CN111676316B (zh) | 一种快速区分非洲猪瘟病毒基因ii型与其它基因型的引物、探针及其检测方法 | |
| CN103146846A (zh) | 一种基于单一标准品的四色荧光定量pcr方法和试剂盒 | |
| CN113046483A (zh) | 新型冠状病毒实时荧光rt-raa引物、探针及检测试剂盒 | |
| CN110527747B (zh) | 一种检测猪瘟病毒野毒株的试剂盒 | |
| RU2701145C1 (ru) | Способ генотипирования энтеровирусов методом секвенирования 1A-1B участка генома | |
| CN112011595A (zh) | 一种针对SARS-CoV-2病毒的全基因组扩增方法及应用及测序方法及试剂盒 | |
| CN116121464A (zh) | 一种猪肠道冠状病毒的多重RT-qPCR试剂盒及检测方法 | |
| CN111500768B (zh) | 鉴定新型冠状病毒的引物探针及在双重数字pcr的用途 | |
| RU2743352C1 (ru) | Способ дифференциальной амплификации фрагмента области VP1 генома энтеровирусов видов Enterovirus A и Enterovirus B | |
| CN113817870A (zh) | 同时检测七种呼吸道相关病毒的引物组合物及其应用 | |
| KR102076343B1 (ko) | 실시간 lamp법을 이용한 아데노바이러스 55형 검출용 조성물 및 이의 용도 | |
| JP7360752B2 (ja) | 重症熱性血小板減少症候群ウイルス遺伝子検出用組成物及びこれを用いた重症熱性血小板減少症候群の診断方法 | |
| CN114262758B (zh) | 检测新型冠状病毒突变株的试剂盒及检测方法 | |
| Koentjoro et al. | RNA Internal Control (IC) for Routine Clinical Diagnostic Real-Time Reverse Transcription-PCR SARS-CoV-2 | |
| RU2731716C1 (ru) | Набор для дифференциации пестивирусов крупного рогатого скота и способ дифференциации пестивирусов крупного рогатого скота |