RU2685413C1 - Способ изготовления эритроцитарного диагностикума для диагностики поллуроза-тифа птиц - Google Patents

Способ изготовления эритроцитарного диагностикума для диагностики поллуроза-тифа птиц Download PDF

Info

Publication number
RU2685413C1
RU2685413C1 RU2018113403A RU2018113403A RU2685413C1 RU 2685413 C1 RU2685413 C1 RU 2685413C1 RU 2018113403 A RU2018113403 A RU 2018113403A RU 2018113403 A RU2018113403 A RU 2018113403A RU 2685413 C1 RU2685413 C1 RU 2685413C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
erythrocytes
obtaining
taken
sensitization
final weight
Prior art date
Application number
RU2018113403A
Other languages
English (en)
Inventor
Анатолий Яковлевич Самуйленко
Светлана Анатольевна Гринь
Николай Васильевич Мельник
Роман Николаевич Мельник
Валентина Ивановна Клюкина
Евгения Семеновна Майстренко
Евгений Владимирович Сусский
Ирина Юрьевна Литенкова
Наталья Сергеевна Клюшинцева
Сергей Николаевич Ярцев
Original Assignee
Федеральное государственное бюджетное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Федеральное государственное бюджетное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности filed Critical Федеральное государственное бюджетное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности
Priority to RU2018113403A priority Critical patent/RU2685413C1/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2685413C1 publication Critical patent/RU2685413C1/ru

Links

Classifications

    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12QMEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6888Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms
    • C12Q1/689Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms for bacteria

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

Изобретение относится к ветеринарии, а именно к способу изготовления эритроцитарного диагностикума для диагностики пуллороза-тифа птиц. Способ включает получение бактериальной массы Salmonella gallinarum pullorum, выделение из нее антигенной фракции, Обработку бактериальной массы поверхностно-активным веществом с добавлением соды или щелочи в дистиллированной воде при 93-96°C с дальнейшей сенсебилизацией формалинизированных эритроцитов, их очисткой и получением целевого продукта в виде 10%-ной суспензии. В качестве ПАВ используется 0,8-1,2%-ный водный раствор Дезмола, взятый в конечной весовой концентрации 0,1-0,5%. Сенсебилизацию формалинизированных эритроцитов проводят в присутствии натриевой соли сукцината хитозана, взятой в конечной весовой концентрации 0,5-1,5%. Изобретение обеспечивает получение эритроцитарного диагностикума для диагностики пуллороза-тифа птиц с повышенной чувствительностью. 3 пр.

Description

Изобретение относится к ветеринарной микробиологии, в частности, к способам получения диагностических препаратов, используемых для массовой прижизненной диагностики пуллороза тифа птиц.
Известен способ получения эритроцитарного диагностикума для диагностики пуллороза-тифа птиц, включающий получение бактериальной массы Salmonella pullorum-gillinarum, выделение из нее антигенной фракции, формалинизацию эритроцитов баранов и сенсибилизацию формалинизированных эритроцитов полученным антигеном, отличающийся тем, что выделяют O-антигенную фракцию гидролизом бактериальной массы в 0,1%-ном растворе КОН при температуре 92-94°C в течение 110 120 мин, а сенсибилизацию проводят при температуре 45 50°C в течение 4 ч при концентрации O-антигенной фракции 1 1,2 мг на 1,0 см3 19 20%-ной взвеси эритроцитов в фосфатно-буферном растворе (Патент РФ №2070055, МПК A61K 39/112, G01N 33/555, опубликовано 10.12.1996).
Однако известный процесс изготовления пуллорного эритроцитарного антигена является недостаточно эффективным из-за низкого выхода целевого продукта.
Известен также способ изготовления эритроцитарного диагностикума для диагностики пуллороза-тифа птиц, включающий получение бактериальной массы Salmonella gallinarum pullorum, выделение из нее антигенной фракции обработкой бактериальной массы поверхностно-активным веществом с добавлением соды или щелочи в дистиллированной воде при 93 96°C с последующей сенсибилизацией формалинизированных эритроцитов, их очисткой и получением целевого продукта в виде 10%-ной суспензии (Патент РФ №2085949, МПК G01N 33/555, A61K 39/112, G01N 33/539, A61K 39/02, опубликовано 27.07.1997).
Задачей предполагаемого изобретения является повышение чувствительности целевого продукта.
Это достигается в способе изготовления эритроцитарного диагностикума для диагностики пуллороза-тифа птиц, включающий получение бактериальной массы Salmonella gallinarum pullorum, выделение из нее антигенной фракции обработкой бактериальной массы поверхностно-активным веществом с добавлением соды или щелочи в дистиллированной воде при 93 96°C с последующей сенсибилизацией формалинизированных эритроцитов, их очисткой и получением целевого продукта в виде 10%-ной суспензии тем, что в качестве поверхностно-активного вещества для выделения антигенной фракции используют 0,8-1,2%-ный водный раствор Дезмола, взятого в конечной весовой концентрации 0,1-0,5%, а сенсибилизацию формалинизированных эритроцитов проводят в присутствии натриевой соли сукцината хитозана, взятой в конечной весовой концентрации 0,5-1,5%.
Известно моюще-дезинфицирующие средства, представляющие собой смеси синтетических детергентов, главным образом анионоактивных и бактерицидных хлорсодержащих веществ. К числу таких средств относится дезмол (авт. свид. №223979, кл. C11D 3/065, 1966 г.). Дезмол содержит поверхностно-активное - вещество триполифосфат натрия, метасиликат натрия, хлорамин, кальцинированную соду, сульфат натрия и воду.
Известен способ получения натриевой соли сукцината хитозана (Патент RU 2144040, МПК С08В 37/08, A61K 31/722, Опубликовано 10.01.2000), который может быть использован в ветеринарии, медицине и косметике в качестве пленкообразователя, гидранта или эмульгатора.
В патентной и научно-технической литературе не известны технические решения, содержащие режимы способа изготовления эритроцитарного диагностикума для диагностики пуллороза-тифа птиц аналогичное заявляемому, т.е. предложение соответствует критерию «новизны».
Все режимы способа осуществимы в промышленных условиях, направлены на решение реальной технической задачи, т.е. предложение «промышленно применимо».
Изобретение иллюстрируется на следующих примерах:
Пример 1.
А. Получение O-антигенной фракции.
Собранную биомассу после глубинного культивирования в биореакторах штамма S. gallinarum pullorum 24КСТ, ЛБ, 10-Б в "S''-форме возбудителя пуллороза-тифа ресуспендируют с помощью поверхностно-активного вещества и щелочи (0,8%-ный водный раствор Дезмола, взятого в конечной весовой концентрации 0,1% и 1%-ный водный раствор двууглекислого натрия, взятый в конечной весовой концентрации 0,1% или 0,2%-ный раствор NaOH, взятый в конечной весовой концентрации 0,01%) до концентрации 25 млрд. микробных клеток в 1 мл и экстрагируют в течение 60 мин при t 93-96°C. Экстракт освобождают от клеточного дейтрита центрифугированием на центрифуге OTP-101 К (20000 об/мин) и прогревают при t 93°C в течение 50 мин. Полученный экстракт фильтруют и используют для сенсибилизации эритроцитов барана.
Б. Сенсибилизация эритроцитов барана.
Сенсибилизацию формалинизированных эритроцитов проводят экстрактом антигенного комплекса в присутствии натриевой соли сукцината хитозана, взятой в конечной весовой концентрации 0,5%. На 1 л 20% взвеси формалинизированных эритроцитов на фосфатно-буферном растворе pH 7,2 добавляют 300 мл экстракта антигена. Тщательно перемешивают и подогревают в водяной бане при t 56°C 30 мин. Затем взвесь эритроцитов выдерживают при t 40°C 2 ч или при комнатной температуре 12 ч. Бутыли оставляют для осаждения методом отстоя. По мере оседания эритроцитов сенсибилизирующий раствор сливают, а к осадку доливают равный объем буфера с 0,15% формальдегида. Операцию повторяют 3-4 раза до полного осветления надосадочной жидкости.
Отмытые сенсибилизированные эритроциты фильтруют через бязево-марлевую салфетку, ресуспендируют в стерильном фосфатно-буферном растворе, содержащем 0,15% формальдегида, до 10% концентрации и выдерживают при t 37°C 24 ч. Далее производится расфасовка в 20 мл флаконы, получая состав 1 эритроцитарного диагностикума для диагностики пуллороза-тифа птиц.
Пример 2.
А. Получение О-антигенной фракции.
Собранную биомассу после глубинного культивирования в биореакторах штамма S. gallinarum pullorum 24КСТ, ЛБ, 10-Б в "S''-форме возбудителя пуллороза-тифа ресуспендируют с помощью поверхностно-активного вещества и щелочи (1,2%-ный водный раствор Дезмола, взятого в конечной весовой концентрации 0,5% и 2%-ный водный раствор двууглекислого натрия, взятый в конечной весовой концентрации 0,2% или 0,3%-ный раствор NaOH, взятый в конечной весовой концентрации 0,015%) до концентрации 25 млрд. микробных клеток в 1 мл и экстрагируют в течение 80 мин при t 96°C. Экстракт освобождают от клеточного дейтрита центрифугированием на центрифуге OTP-101 К (16000 об/мин) и прогревают при t 96°C в течение 60 мин. Полученный экстракт фильтруют и используют для сенсибилизации эритроцитов барана.
Б. Сенсибилизация эритроцитов барана.
Сенсибилизацию формалинизированных эритроцитов проводят экстрактом антигенного комплекса в присутствии натриевой соли сукцината хитозана, взятой в конечной весовой концентрации 1,5%. На 1 л 20% взвеси формалинизированных эритроцитов на фосфатно-буферном растворе pH 7,2 добавляют 300 мл экстракта антигена. Тщательно перемешивают и подогревают в водяной бане при t 56°C 30 мин. Затем взвесь эритроцитов выдерживают при t 40°C 2 ч или при комнатной температуре 12 ч. Бутыли оставляют для осаждения методом отстоя. По мере оседания эритроцитов сенсибилизирующий раствор сливают, а к осадку доливают равный объем буфера с 0,15% формальдегида. Операцию повторяют 3-4 раза до полного осветления надосадочной жидкости.
Отмытые сенсибилизированные эритроциты фильтруют через бязево-марлевую салфетку, ресуспендируют в стерильном фосфатно-буферном растворе, содержащем 0,2% формальдегида, до 10% концентрации и выдерживают при t 37°C 24 ч. Далее производится расфасовка в 20 мл флаконы, получая состав 2 эритроцитарного диагностикума для диагностики пуллороза-тифа птиц.
Пример 3. Эффективность эритроцитарного диагностикума (полученного согласно примерам 1-2 и прототипа) для диагностики пуллороза-тифа птиц определяют на курах. 60 цыплят в возрасте от 50 дней заражают возбудителем пуллороза-тифа в дозе 0,03 мл штаммом S. gallinarum pullorum 24КСТ, ЛБ, 10-Б в "S''-форме возбудителя и делят на три группы по 20 цыплят в каждой группы. Через 10 дней диагностику пуллороза-тифа определяют в кровекапельной реакции непрямой гемаплютинации (ККРНГА) на предметном стекле путем выявления антигена пуллороза-тифа. Кровь для ККРНГА берут у птиц из гребня или подкрыльцовой вены. Каплю крови наносят на сухое, обезжиренное предметное стекло и добавляют к ней каплю эритроцитарного диагностикума (полученного согласно примерам 1-2 и прототипа). Соотношение состава 1 или 2 или прототипа и крови должно быть 1:1. Кровь цыплят каждой группы смешивают с составом 1, 2 и прототипа (кровь группы 1 смешивают с составом 1, кровь группы 2 смешивают с составом 2, кровь группы 3 смешивают с составом, полученным согласно способу-прототипу). Предметное стекло покачивают на грелке-качалке при температуре от 37° до 40°C. Температура в помещении, где ставят реакцию, должна быть не ниже 18°C. На одном предметном стекле ставят одновременно не более трех реакций. Учет результатов реакции проводят визуально. Реакцию на эритроцитарный антиген считают положительной, если в течение 2 минут в смеси крови с антигеном выпали хорошо заметные хлопья коричневого цвета с просветлением жидкости Реакцию считают сомнительной, если в течение 2 минут в смеси крови с антигеном появились слабовыраженные мелкозернистые хлопья коричневого цвета; Отрицательная реакция характеризуется образованием в капле крови с антигеном равномерной стабильной гомогенной взвеси эритроцитов барана.
В группах 1 и 2 цыплят у всех цыплят реакция на эритроцитарный антиген была положительной. В группе 3 цыплят реакция на эритроцитарный антиген была положительной у 12 цыплят, у 5 цыплят реакция на эритроцитарный антиген была сомнительной, а у 3 цыплят реакция на эритроцитарный антиген была отрицательной.
Таким образом, чувствительность целевого продукта повысилась на 40%.
Кроме того, пуллорный эритроцитарный диагностикум, приготовленный предлагаемым способом, сохраняет свою активность и специфичность в течение 3-х лет при 4-8°C. При таком способе получают из бактериальной массы S.gallinarum-pullorum O-антиген, обладающий максимально возможной сенсибилизирующей, антителосвязывающей, агглютинирующей активностью, комплементарностью и способностью вступать в прочную химическую связь с рецепторами эритроцитов, который по своей диагностической ценности в кровекапельной реакции непрямой гемагглютинации превосходит известный пуллорный эритроцитарный диагностикум.

Claims (1)

  1. Способ изготовления эритроцитарного диагностикума для диагностики пуллороза-тифа птиц, включающий получение бактериальной массы Salmonella gallinarum pullorum, выделение из нее антигенной фракции обработкой бактериальной массы поверхностно-активным веществом с добавлением соды или щелочи в дистиллированной воде при 93-96°С с последующей сенсибилизацией формалинизированных эритроцитов, их очисткой и получением целевого продукта в виде 10%-ной суспензии, отличающийся тем, что в качестве поверхностно-активного вещества для выделения антигенной фракции используют 0,8-1,2%-ный водный раствор Дезмола, взятого в конечной весовой концентрации 0,1-0,5%, а сенсибилизацию формалинизированных эритроцитов проводят в присутствии натриевой соли сукцината хитозана, взятой в конечной весовой концентрации 0,5-1,5%.
RU2018113403A 2018-04-13 2018-04-13 Способ изготовления эритроцитарного диагностикума для диагностики поллуроза-тифа птиц RU2685413C1 (ru)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2018113403A RU2685413C1 (ru) 2018-04-13 2018-04-13 Способ изготовления эритроцитарного диагностикума для диагностики поллуроза-тифа птиц

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2018113403A RU2685413C1 (ru) 2018-04-13 2018-04-13 Способ изготовления эритроцитарного диагностикума для диагностики поллуроза-тифа птиц

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2685413C1 true RU2685413C1 (ru) 2019-04-18

Family

ID=66168168

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2018113403A RU2685413C1 (ru) 2018-04-13 2018-04-13 Способ изготовления эритроцитарного диагностикума для диагностики поллуроза-тифа птиц

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2685413C1 (ru)

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2085949C1 (ru) * 1996-04-10 1997-07-27 Николай Данилович Скичко Способ изготовления эритроцитарного диагностикума для диагностики поллуроза-тифа птиц
UA63003U (ru) * 2011-02-21 2011-09-26 Государственное Учреждение "Украинский Научно-Исследовательский Противочумный Институт Имени И.И. Мечникова" Способ получения антигенного ешерихиозного эритроцитарного диагностикума
RU2609771C1 (ru) * 2015-11-09 2017-02-02 Федеральное казенное предприятие "Армавирская биологическая фабрика" (ФКП "Армавирская биофабрика") Способ получения эритроцитарного антигена для диагностики некробактериоза животных

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2085949C1 (ru) * 1996-04-10 1997-07-27 Николай Данилович Скичко Способ изготовления эритроцитарного диагностикума для диагностики поллуроза-тифа птиц
UA63003U (ru) * 2011-02-21 2011-09-26 Государственное Учреждение "Украинский Научно-Исследовательский Противочумный Институт Имени И.И. Мечникова" Способ получения антигенного ешерихиозного эритроцитарного диагностикума
RU2609771C1 (ru) * 2015-11-09 2017-02-02 Федеральное казенное предприятие "Армавирская биологическая фабрика" (ФКП "Армавирская биофабрика") Способ получения эритроцитарного антигена для диагностики некробактериоза животных

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Панферова Ю.А. и др. Детекция инфекции Coxiella burnetii у мигрирующих птиц в Болгарии //Инфекция и иммунитет. 2014. Т. 4. N 1. *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN104007269B (zh) 一种鸭疫里默氏杆菌间接血凝抗体检测试剂盒及其应用
CN103694348A (zh) 一种治疗猪病毒性腹泻生物制剂的制备和应用方法
Lyons Antibacterial immunity to Staphylococcus pyogenes
RU2685413C1 (ru) Способ изготовления эритроцитарного диагностикума для диагностики поллуроза-тифа птиц
Crook The Nagler reaction: the breakdown of lipo-protein complexes by bacterial toxins
Turner et al. Hemagglutinating virus isolated from cat scratch disease
Felton A study of the isolation and concentration of the specific antibodies of antipneumococcus sera
RU2673677C1 (ru) Средство для дезинвазии против цист букстонелл крупного рогатого скота
KARAVODIN et al. Inhibition of adherence and cytotoxicity by circulating immune complexes formed in experimental filariasis
CN103910798A (zh) 抗圆斑蝰蛇毒素和抗五步蛇毒素抗体及其制备方法和应用
RU2491545C1 (ru) Способ диагностики бруцеллеза
RU2525688C2 (ru) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ОЧИЩЕННОГО СОМАТИЧЕСКОГО АНТИГЕНА Dirofilaria immitis
RU2675255C1 (ru) Способ нормализации активности супероксиддисмутазы эритроцитов у новорожденных телят с дефицитом железа
RU2422832C1 (ru) Способ получения эритроцитарного антигенного гистоплазмозного и кокцидиоидомикозного диагностикума
RU2675365C1 (ru) Способ нормализации активности супероксиддисмутазы нейтрофилов у новорожденных телят с дефицитом железа
RU2410698C1 (ru) Способ получения эритроцитарного диагностикума для реакции непрямой гемагглютинации при коксиеллезе крупного рогатого скота
Bokhout et al. Preliminary investigation into the usefulness of the indirect haemagglutination
Newsome Species-specific serological tests for bilharzia
RU2679361C1 (ru) Способ получения биогенного стимулятора для коррекции иммунного статуса сельскохозяйственных животных
Kolmer et al. Complement fixation in acute anterior poliomyelitis
US1448290A (en) Method of producing with bacteria poisons intended for immunizing purposes
RU2786802C1 (ru) Способ определения активности лизоцима в ротовой жидкости
SU1069783A1 (ru) Способ получени туберкулезного диагностикума
SU1686372A1 (ru) Способ определени активности рецепторов нейтрофилов человека
RU2618465C1 (ru) Способ нормализации активности каталазы нейтрофилов у новорожденных телят с дефицитом железа