RU2680690C2 - Композиция для ферментативного дегуммирования масла - Google Patents
Композиция для ферментативного дегуммирования масла Download PDFInfo
- Publication number
- RU2680690C2 RU2680690C2 RU2016137521A RU2016137521A RU2680690C2 RU 2680690 C2 RU2680690 C2 RU 2680690C2 RU 2016137521 A RU2016137521 A RU 2016137521A RU 2016137521 A RU2016137521 A RU 2016137521A RU 2680690 C2 RU2680690 C2 RU 2680690C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- oil
- enzyme
- composition
- phospholipase
- streptomyces
- Prior art date
Links
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 138
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 title claims description 35
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims abstract description 119
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims abstract description 119
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 claims abstract description 85
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 71
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 claims abstract description 48
- 239000012535 impurity Substances 0.000 claims abstract description 27
- 102100031415 Hepatic triacylglycerol lipase Human genes 0.000 claims abstract description 26
- 108010013563 Lipoprotein Lipase Proteins 0.000 claims abstract description 26
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 claims abstract description 22
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 22
- 239000004365 Protease Substances 0.000 claims abstract description 18
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 claims abstract description 18
- 108010058864 Phospholipases A2 Proteins 0.000 claims abstract description 14
- 239000011260 aqueous acid Substances 0.000 claims abstract description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 6
- 102100037611 Lysophospholipase Human genes 0.000 claims abstract 2
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 claims description 116
- 239000003921 oil Substances 0.000 claims description 86
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 claims description 86
- 239000012071 phase Substances 0.000 claims description 48
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 claims description 25
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 claims description 25
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 claims description 21
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 11
- 235000019419 proteases Nutrition 0.000 claims description 10
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 10
- 102000003779 Dipeptidyl-peptidases and tripeptidyl-peptidases Human genes 0.000 claims description 4
- 108090000194 Dipeptidyl-peptidases and tripeptidyl-peptidases Proteins 0.000 claims description 4
- 102000005593 Endopeptidases Human genes 0.000 claims description 3
- 108010059378 Endopeptidases Proteins 0.000 claims description 3
- 229940066758 endopeptidases Drugs 0.000 claims description 3
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 3
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 3
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 claims description 3
- 102000004400 Aminopeptidases Human genes 0.000 claims description 2
- 108090000915 Aminopeptidases Proteins 0.000 claims description 2
- 102000004860 Dipeptidases Human genes 0.000 claims description 2
- 108090001081 Dipeptidases Proteins 0.000 claims description 2
- 108030000089 Metallocarboxypeptidases Proteins 0.000 claims description 2
- 102000006166 Metallocarboxypeptidases Human genes 0.000 claims description 2
- 102000007983 Threonine endopeptidases Human genes 0.000 claims description 2
- 108030005531 Threonine endopeptidases Proteins 0.000 claims description 2
- 108010006303 Carboxypeptidases Proteins 0.000 claims 1
- 102000005367 Carboxypeptidases Human genes 0.000 claims 1
- 102000003843 Metalloendopeptidases Human genes 0.000 claims 1
- 108090000131 Metalloendopeptidases Proteins 0.000 claims 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 claims 1
- 125000001151 peptidyl group Chemical group 0.000 claims 1
- 108010059841 serine carboxypeptidase Proteins 0.000 claims 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 10
- 238000009472 formulation Methods 0.000 abstract 2
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 abstract 1
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 21
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 21
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 21
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Substances OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
- 102000014384 Type C Phospholipases Human genes 0.000 description 19
- 108010079194 Type C Phospholipases Proteins 0.000 description 19
- 235000021588 free fatty acids Nutrition 0.000 description 19
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 19
- 102100037883 Phospholipase B1, membrane-associated Human genes 0.000 description 18
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 18
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 18
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 16
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 102000015439 Phospholipases Human genes 0.000 description 14
- 108010064785 Phospholipases Proteins 0.000 description 14
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 14
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 13
- 239000010779 crude oil Substances 0.000 description 13
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 12
- 241000588698 Erwinia Species 0.000 description 11
- 241000235648 Pichia Species 0.000 description 11
- 241000223258 Thermomyces lanuginosus Species 0.000 description 11
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 11
- 230000003750 conditioning effect Effects 0.000 description 11
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 11
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 10
- 239000000047 product Substances 0.000 description 10
- 240000005384 Rhizopus oryzae Species 0.000 description 9
- 241000223229 Trichophyton rubrum Species 0.000 description 9
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 9
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 9
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 9
- 108700016155 Acyl transferases Proteins 0.000 description 8
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 8
- 235000019484 Rapeseed oil Nutrition 0.000 description 8
- 241000221662 Sclerotinia Species 0.000 description 8
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 description 7
- 241000235058 Komagataella pastoris Species 0.000 description 7
- 241000221960 Neurospora Species 0.000 description 7
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 description 7
- UHPMCKVQTMMPCG-UHFFFAOYSA-N 5,8-dihydroxy-2-methoxy-6-methyl-7-(2-oxopropyl)naphthalene-1,4-dione Chemical compound CC1=C(CC(C)=O)C(O)=C2C(=O)C(OC)=CC(=O)C2=C1O UHPMCKVQTMMPCG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 102000057234 Acyl transferases Human genes 0.000 description 6
- 241000228245 Aspergillus niger Species 0.000 description 6
- 241000223218 Fusarium Species 0.000 description 6
- 108020002496 Lysophospholipase Proteins 0.000 description 6
- 102000011420 Phospholipase D Human genes 0.000 description 6
- 108090000553 Phospholipase D Proteins 0.000 description 6
- 241000235527 Rhizopus Species 0.000 description 6
- 241000187176 Streptomyces violaceoruber Species 0.000 description 6
- 241000499912 Trichoderma reesei Species 0.000 description 6
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 description 6
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 6
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 6
- 238000007670 refining Methods 0.000 description 6
- ZIIUUSVHCHPIQD-UHFFFAOYSA-N 2,4,6-trimethyl-N-[3-(trifluoromethyl)phenyl]benzenesulfonamide Chemical compound CC1=CC(C)=CC(C)=C1S(=O)(=O)NC1=CC=CC(C(F)(F)F)=C1 ZIIUUSVHCHPIQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 240000006439 Aspergillus oryzae Species 0.000 description 5
- 235000002247 Aspergillus oryzae Nutrition 0.000 description 5
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 5
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 5
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 5
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 5
- 241000235395 Mucor Species 0.000 description 5
- 240000008338 Nigella arvensis Species 0.000 description 5
- 235000007413 Nigella arvensis Nutrition 0.000 description 5
- 235000016698 Nigella sativa Nutrition 0.000 description 5
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 5
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 5
- 235000013752 Rhizopus oryzae Nutrition 0.000 description 5
- 241000235546 Rhizopus stolonifer Species 0.000 description 5
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 5
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 5
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 5
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 5
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 5
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 5
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 5
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 5
- 235000012424 soybean oil Nutrition 0.000 description 5
- IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 1-palmitoyl-2-arachidonoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 0.000 description 4
- 240000002791 Brassica napus Species 0.000 description 4
- 241000193468 Clostridium perfringens Species 0.000 description 4
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 4
- 241001014264 Klebsiella variicola Species 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 101710118538 Protease Proteins 0.000 description 4
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 4
- 241000235402 Rhizomucor Species 0.000 description 4
- 241000235525 Rhizomucor pusillus Species 0.000 description 4
- 241000293869 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhimurium Species 0.000 description 4
- 241000221696 Sclerotinia sclerotiorum Species 0.000 description 4
- 241000607717 Serratia liquefaciens Species 0.000 description 4
- 241000607715 Serratia marcescens Species 0.000 description 4
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 230000001143 conditioned effect Effects 0.000 description 4
- 239000000787 lecithin Substances 0.000 description 4
- 235000010445 lecithin Nutrition 0.000 description 4
- 229940067606 lecithin Drugs 0.000 description 4
- -1 phospholipase A Chemical compound 0.000 description 4
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 4
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 4
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 4
- VUDQSRFCCHQIIU-UHFFFAOYSA-N 1-(3,5-dichloro-2,6-dihydroxy-4-methoxyphenyl)hexan-1-one Chemical compound CCCCCC(=O)C1=C(O)C(Cl)=C(OC)C(Cl)=C1O VUDQSRFCCHQIIU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000193755 Bacillus cereus Species 0.000 description 3
- 241000194107 Bacillus megaterium Species 0.000 description 3
- 235000004977 Brassica sinapistrum Nutrition 0.000 description 3
- 241000224495 Dictyostelium Species 0.000 description 3
- 241000168726 Dictyostelium discoideum Species 0.000 description 3
- 241000607471 Edwardsiella tarda Species 0.000 description 3
- 241000588914 Enterobacter Species 0.000 description 3
- 241000982867 Erwinia psidii Species 0.000 description 3
- 241000223192 Fusarium sporotrichioides Species 0.000 description 3
- 241000233732 Fusarium verticillioides Species 0.000 description 3
- 241000588915 Klebsiella aerogenes Species 0.000 description 3
- 241000588747 Klebsiella pneumoniae Species 0.000 description 3
- 241000186779 Listeria monocytogenes Species 0.000 description 3
- 241000134100 Neurospora dodgei Species 0.000 description 3
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 241000588769 Proteus <enterobacteria> Species 0.000 description 3
- 241000588778 Providencia stuartii Species 0.000 description 3
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000187392 Streptomyces griseus Species 0.000 description 3
- 241000607734 Yersinia <bacteria> Species 0.000 description 3
- 241000607447 Yersinia enterocolitica Species 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 3
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 3
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 3
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 3
- 210000001156 gastric mucosa Anatomy 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N glycerol group Chemical group OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 3
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 3
- 238000005191 phase separation Methods 0.000 description 3
- WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N phosphatidylcholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 239000003549 soybean oil Substances 0.000 description 3
- 229940098232 yersinia enterocolitica Drugs 0.000 description 3
- PXRKCOCTEMYUEG-UHFFFAOYSA-N 5-aminoisoindole-1,3-dione Chemical compound NC1=CC=C2C(=O)NC(=O)C2=C1 PXRKCOCTEMYUEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001220322 Arthroderma eboreum Species 0.000 description 2
- 241000033579 Arthroderma phaseoliforme Species 0.000 description 2
- 241001513093 Aspergillus awamori Species 0.000 description 2
- 241000892910 Aspergillus foetidus Species 0.000 description 2
- 241001225321 Aspergillus fumigatus Species 0.000 description 2
- 241000131386 Aspergillus sojae Species 0.000 description 2
- 241000194103 Bacillus pumilus Species 0.000 description 2
- 241000202341 Bacillus sporothermodurans Species 0.000 description 2
- 241000193388 Bacillus thuringiensis Species 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 241000193417 Brevibacillus laterosporus Species 0.000 description 2
- 241001494522 Citrobacter amalonaticus Species 0.000 description 2
- 241000580513 Citrobacter braakii Species 0.000 description 2
- 241000949030 Citrobacter farmeri Species 0.000 description 2
- 241000588919 Citrobacter freundii Species 0.000 description 2
- 241000949040 Citrobacter gillenii Species 0.000 description 2
- 241000588917 Citrobacter koseri Species 0.000 description 2
- 241000949041 Citrobacter murliniae Species 0.000 description 2
- 241000949031 Citrobacter rodentium Species 0.000 description 2
- 241000949032 Citrobacter sedlakii Species 0.000 description 2
- 241000949039 Citrobacter werkmanii Species 0.000 description 2
- 241000920610 Citrobacter youngae Species 0.000 description 2
- 241000193403 Clostridium Species 0.000 description 2
- 241000195493 Cryptophyta Species 0.000 description 2
- 241001442395 Dictyostelium mucoroides Species 0.000 description 2
- 241000607473 Edwardsiella <enterobacteria> Species 0.000 description 2
- 241000345369 Edwardsiella hoshinae Species 0.000 description 2
- 241000949274 Edwardsiella ictaluri Species 0.000 description 2
- 241000588697 Enterobacter cloacae Species 0.000 description 2
- 241000588694 Erwinia amylovora Species 0.000 description 2
- 241000971512 Erwinia aphidicola Species 0.000 description 2
- 241001062862 Erwinia billingiae Species 0.000 description 2
- 241000588722 Escherichia Species 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 2
- 241000122692 Fusarium avenaceum Species 0.000 description 2
- 241000427940 Fusarium solani Species 0.000 description 2
- 241000145502 Fusarium subglutinans Species 0.000 description 2
- 108010093096 Immobilized Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 241000186984 Kitasatospora aureofaciens Species 0.000 description 2
- 241001534216 Klebsiella granulomatis Species 0.000 description 2
- 241000588749 Klebsiella oxytoca Species 0.000 description 2
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N Lactic Acid Natural products CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000193386 Lysinibacillus sphaericus Species 0.000 description 2
- 241000306281 Mucor ambiguus Species 0.000 description 2
- 241000293033 Mucor amphibiorum Species 0.000 description 2
- 241000438099 Mucor endophyticus Species 0.000 description 2
- 241000907556 Mucor hiemalis Species 0.000 description 2
- 241000908234 Mucor indicus Species 0.000 description 2
- 241000498617 Mucor javanicus Species 0.000 description 2
- 241001149951 Mucor mucedo Species 0.000 description 2
- 244000309698 Mucor paronychius Species 0.000 description 2
- 241001506781 Mucor piriformis Species 0.000 description 2
- 241000272041 Naja Species 0.000 description 2
- 241000272137 Naja mossambica Species 0.000 description 2
- 241000018638 Neurospora terricola Species 0.000 description 2
- 241000121264 Neurospora tetrasperma Species 0.000 description 2
- 241000193418 Paenibacillus larvae Species 0.000 description 2
- 241000588912 Pantoea agglomerans Species 0.000 description 2
- 241000588701 Pectobacterium carotovorum Species 0.000 description 2
- 102000000571 Phospholipases A Human genes 0.000 description 2
- 108010002176 Phospholipases A Proteins 0.000 description 2
- 241000521510 Pichia barkeri Species 0.000 description 2
- 241000521553 Pichia fermentans Species 0.000 description 2
- 241000521549 Pichia heedii Species 0.000 description 2
- 241001489192 Pichia kluyveri Species 0.000 description 2
- 241000235645 Pichia kudriavzevii Species 0.000 description 2
- 241000517333 Pichia manshurica Species 0.000 description 2
- 241000235062 Pichia membranifaciens Species 0.000 description 2
- 241000521555 Pichia nakasei Species 0.000 description 2
- 241000235056 Pichia norvegensis Species 0.000 description 2
- 241000124061 Plectosphaerella cucumerina Species 0.000 description 2
- 241000588770 Proteus mirabilis Species 0.000 description 2
- 241000588767 Proteus vulgaris Species 0.000 description 2
- 241000588768 Providencia Species 0.000 description 2
- 241000588777 Providencia rettgeri Species 0.000 description 2
- 241000235403 Rhizomucor miehei Species 0.000 description 2
- 241000274048 Rhizomucor tauricus Species 0.000 description 2
- 241000293031 Rhizomucor variabilis Species 0.000 description 2
- 241000006328 Rhizopus azygosporus Species 0.000 description 2
- 241000378861 Rhizopus circinans Species 0.000 description 2
- 241000593344 Rhizopus microsporus Species 0.000 description 2
- 244000205939 Rhizopus oligosporus Species 0.000 description 2
- 235000000471 Rhizopus oligosporus Nutrition 0.000 description 2
- 241000006333 Rhizopus schipperae Species 0.000 description 2
- 241001248037 Rhizopus sexualis Species 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 2
- 241000533331 Salmonella bongori Species 0.000 description 2
- 241001138501 Salmonella enterica Species 0.000 description 2
- 241001300361 Sclerotinia borealis Species 0.000 description 2
- 241001518640 Sclerotinia homoeocarpa Species 0.000 description 2
- 241001518705 Sclerotinia minor Species 0.000 description 2
- 241000147799 Serratia entomophila Species 0.000 description 2
- 241000881765 Serratia ficaria Species 0.000 description 2
- 241000218654 Serratia fonticola Species 0.000 description 2
- 241001622810 Serratia grimesii Species 0.000 description 2
- 241000607694 Serratia odorifera Species 0.000 description 2
- 241001622809 Serratia plymuthica Species 0.000 description 2
- 241001135258 Serratia proteamaculans Species 0.000 description 2
- 241000975299 Serratia quinivorans Species 0.000 description 2
- 241000881771 Serratia rubidaea Species 0.000 description 2
- 241000607762 Shigella flexneri Species 0.000 description 2
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 241000193395 Sporosarcina pasteurii Species 0.000 description 2
- 229930182558 Sterol Natural products 0.000 description 2
- 241000958303 Streptomyces achromogenes Species 0.000 description 2
- 241000187758 Streptomyces ambofaciens Species 0.000 description 2
- 241001468227 Streptomyces avermitilis Species 0.000 description 2
- 241000187433 Streptomyces clavuligerus Species 0.000 description 2
- 241000187432 Streptomyces coelicolor Species 0.000 description 2
- 241000220254 Streptomyces coeruleorubidus Species 0.000 description 2
- 241000755265 Streptomyces davaonensis Species 0.000 description 2
- 241000187438 Streptomyces fradiae Species 0.000 description 2
- 241000187391 Streptomyces hygroscopicus Species 0.000 description 2
- 241000187389 Streptomyces lavendulae Species 0.000 description 2
- 241000187399 Streptomyces lincolnensis Species 0.000 description 2
- 241000970906 Streptomyces natalensis Species 0.000 description 2
- 241000122969 Streptomyces nodosus Species 0.000 description 2
- 241000187310 Streptomyces noursei Species 0.000 description 2
- 241000593945 Streptomyces platensis Species 0.000 description 2
- 241000187419 Streptomyces rimosus Species 0.000 description 2
- 241000970875 Streptomyces spectabilis Species 0.000 description 2
- 241000946767 Streptomyces toxytricini Species 0.000 description 2
- 241000531819 Streptomyces venezuelae Species 0.000 description 2
- 241000970854 Streptomyces violaceusniger Species 0.000 description 2
- 235000019486 Sunflower oil Nutrition 0.000 description 2
- 241000223260 Trichoderma harzianum Species 0.000 description 2
- 241000378866 Trichoderma koningii Species 0.000 description 2
- 241000223262 Trichoderma longibrachiatum Species 0.000 description 2
- 241001304120 Trichoderma pseudokoningii Species 0.000 description 2
- 241000223261 Trichoderma viride Species 0.000 description 2
- 241000223238 Trichophyton Species 0.000 description 2
- 241000893963 Trichophyton concentricum Species 0.000 description 2
- 241000893962 Trichophyton equinum Species 0.000 description 2
- 241001621837 Trichophyton gourvilii Species 0.000 description 2
- 241001045770 Trichophyton mentagrophytes Species 0.000 description 2
- 241001480046 Trichophyton schoenleinii Species 0.000 description 2
- 241000893982 Trichophyton simii Species 0.000 description 2
- 241000985906 Trichophyton soudanense Species 0.000 description 2
- 241001609978 Trichophyton terrestre Species 0.000 description 2
- 241001480048 Trichophyton tonsurans Species 0.000 description 2
- 241001244272 Trichophyton vanbreuseghemii Species 0.000 description 2
- 241000893966 Trichophyton verrucosum Species 0.000 description 2
- 241001480050 Trichophyton violaceum Species 0.000 description 2
- 241001621834 Trichophyton yaoundei Species 0.000 description 2
- 241001148126 Yersinia aldovae Species 0.000 description 2
- 241000063704 Yersinia aleksiciae Species 0.000 description 2
- 241000607475 Yersinia bercovieri Species 0.000 description 2
- 241001148127 Yersinia frederiksenii Species 0.000 description 2
- 241000607481 Yersinia intermedia Species 0.000 description 2
- 241001135251 Yersinia kristensenii Species 0.000 description 2
- 241001050874 Yersinia massiliensis Species 0.000 description 2
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 description 2
- 241000607477 Yersinia pseudotuberculosis Species 0.000 description 2
- 241001148128 Yersinia rohdei Species 0.000 description 2
- 241001148129 Yersinia ruckeri Species 0.000 description 2
- 241001476993 Yersinia similis Species 0.000 description 2
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 2
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 2
- 102000045404 acyltransferase activity proteins Human genes 0.000 description 2
- 108700014220 acyltransferase activity proteins Proteins 0.000 description 2
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 229940091771 aspergillus fumigatus Drugs 0.000 description 2
- 229940097012 bacillus thuringiensis Drugs 0.000 description 2
- 239000003225 biodiesel Substances 0.000 description 2
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 2
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 2
- 239000008139 complexing agent Substances 0.000 description 2
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 2
- 238000004332 deodorization Methods 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 239000008157 edible vegetable oil Substances 0.000 description 2
- 230000001804 emulsifying effect Effects 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 238000001095 inductively coupled plasma mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 210000003097 mucus Anatomy 0.000 description 2
- 125000002467 phosphate group Chemical group [H]OP(=O)(O[H])O[*] 0.000 description 2
- 150000008103 phosphatidic acids Chemical class 0.000 description 2
- 150000003905 phosphatidylinositols Chemical class 0.000 description 2
- 229940007042 proteus vulgaris Drugs 0.000 description 2
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 2
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 2
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 2
- 238000012552 review Methods 0.000 description 2
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 2
- 150000003432 sterols Chemical class 0.000 description 2
- 235000003702 sterols Nutrition 0.000 description 2
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 2
- 239000002600 sunflower oil Substances 0.000 description 2
- 229940055035 trichophyton verrucosum Drugs 0.000 description 2
- UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N triformin Chemical compound O=COCC(OC=O)COC=O UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ASWBNKHCZGQVJV-UHFFFAOYSA-N (3-hexadecanoyloxy-2-hydroxypropyl) 2-(trimethylazaniumyl)ethyl phosphate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(O)COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C ASWBNKHCZGQVJV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N (S)-malic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- XMTQQYYKAHVGBJ-UHFFFAOYSA-N 3-(3,4-DICHLOROPHENYL)-1,1-DIMETHYLUREA Chemical compound CN(C)C(=O)NC1=CC=C(Cl)C(Cl)=C1 XMTQQYYKAHVGBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001133760 Acoelorraphe Species 0.000 description 1
- 241001531491 Amphobotrys ricini Species 0.000 description 1
- 241001480052 Aspergillus japonicus Species 0.000 description 1
- 241000228251 Aspergillus phoenicis Species 0.000 description 1
- 241000588732 Atlantibacter hermannii Species 0.000 description 1
- 241000193744 Bacillus amyloliquefaciens Species 0.000 description 1
- 241000193410 Bacillus atrophaeus Species 0.000 description 1
- 241000193752 Bacillus circulans Species 0.000 description 1
- 241000193749 Bacillus coagulans Species 0.000 description 1
- 241000194108 Bacillus licheniformis Species 0.000 description 1
- 244000188595 Brassica sinapistrum Species 0.000 description 1
- BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N Calcium cation Chemical compound [Ca+2] BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000016401 Camelina Nutrition 0.000 description 1
- 244000197813 Camelina sativa Species 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 241000588923 Citrobacter Species 0.000 description 1
- 241001263195 Coremiostelium polycephalum Species 0.000 description 1
- 241001087672 Cosenzaea myxofaciens Species 0.000 description 1
- 102000051496 EC 3.4.15.- Human genes 0.000 description 1
- 108700035154 EC 3.4.15.- Proteins 0.000 description 1
- 241000982887 Erwinia mallotivora Species 0.000 description 1
- 241001212523 Erwinia papayae Species 0.000 description 1
- 241000556430 Erwinia persicina Species 0.000 description 1
- 241000587864 Erwinia piriflorinigrans Species 0.000 description 1
- 241000556426 Erwinia rhapontici Species 0.000 description 1
- 241000400604 Erwinia tasmaniensis Species 0.000 description 1
- 241000318001 Erwinia toletana Species 0.000 description 1
- 241000922683 Erwinia tracheiphila Species 0.000 description 1
- 241001240954 Escherichia albertii Species 0.000 description 1
- 241000588720 Escherichia fergusonii Species 0.000 description 1
- 241000259836 Escherichia senegalensis Species 0.000 description 1
- 241000833541 Fusarium caeruleum Species 0.000 description 1
- 241000006782 Fusarium chlamydosporum Species 0.000 description 1
- 241000223194 Fusarium culmorum Species 0.000 description 1
- 241000577846 Fusarium dimerum Species 0.000 description 1
- 241000146406 Fusarium heterosporum Species 0.000 description 1
- 241001208371 Fusarium incarnatum Species 0.000 description 1
- 241000145494 Fusarium napiforme Species 0.000 description 1
- 241000223221 Fusarium oxysporum Species 0.000 description 1
- 241001489200 Fusarium poae Species 0.000 description 1
- 241000690372 Fusarium proliferatum Species 0.000 description 1
- 241000145511 Fusarium sacchari Species 0.000 description 1
- 241000879141 Fusarium tricinctum Species 0.000 description 1
- 102000005744 Glycoside Hydrolases Human genes 0.000 description 1
- 108010031186 Glycoside Hydrolases Proteins 0.000 description 1
- 244000020551 Helianthus annuus Species 0.000 description 1
- 235000003222 Helianthus annuus Nutrition 0.000 description 1
- 102000004157 Hydrolases Human genes 0.000 description 1
- 108090000604 Hydrolases Proteins 0.000 description 1
- 241000588748 Klebsiella Species 0.000 description 1
- 241000881812 Kluyvera intermedia Species 0.000 description 1
- 241001099157 Komagataella Species 0.000 description 1
- 241000881808 Lelliottia amnigena Species 0.000 description 1
- 241000186781 Listeria Species 0.000 description 1
- JLVVSXFLKOJNIY-UHFFFAOYSA-N Magnesium ion Chemical compound [Mg+2] JLVVSXFLKOJNIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000235526 Mucor racemosus Species 0.000 description 1
- 241000221963 Neurospora africana Species 0.000 description 1
- 241000221961 Neurospora crassa Species 0.000 description 1
- 241000018686 Neurospora galapagosensis Species 0.000 description 1
- 241000221962 Neurospora intermedia Species 0.000 description 1
- 241000018637 Neurospora lineolata Species 0.000 description 1
- 241001647796 Neurospora pannonica Species 0.000 description 1
- 244000070804 Neurospora sitophila Species 0.000 description 1
- 235000000376 Neurospora sitophila Nutrition 0.000 description 1
- 241000385469 Neurospora sublineolata Species 0.000 description 1
- 240000007817 Olea europaea Species 0.000 description 1
- 241000178961 Paenibacillus alvei Species 0.000 description 1
- 241000194105 Paenibacillus polymyxa Species 0.000 description 1
- 102000004160 Phosphoric Monoester Hydrolases Human genes 0.000 description 1
- 108090000608 Phosphoric Monoester Hydrolases Proteins 0.000 description 1
- 241000521557 Pichia cactophila Species 0.000 description 1
- 241000784227 Pichia cecembensis Species 0.000 description 1
- 241000522591 Pichia cephalocereana Species 0.000 description 1
- 241000521509 Pichia deserticola Species 0.000 description 1
- 241000468776 Pichia exigua Species 0.000 description 1
- 241000521559 Pichia pseudocactophila Species 0.000 description 1
- 241000531883 Pichia scutulata Species 0.000 description 1
- 241000003593 Pichia sporocuriosa Species 0.000 description 1
- 241000531871 Pichia terricola Species 0.000 description 1
- 241000881813 Pluralibacter gergoviae Species 0.000 description 1
- 241001621838 Pluralibacter pyrinus Species 0.000 description 1
- 241001076189 Proteus hauseri Species 0.000 description 1
- 241001472782 Proteus penneri Species 0.000 description 1
- 241000588733 Pseudescherichia vulneris Species 0.000 description 1
- 241000589517 Pseudomonas aeruginosa Species 0.000 description 1
- 241000589540 Pseudomonas fluorescens Species 0.000 description 1
- 241000589776 Pseudomonas putida Species 0.000 description 1
- 241000589615 Pseudomonas syringae Species 0.000 description 1
- 241000496898 Sclerotinia spermophila Species 0.000 description 1
- 241001136641 Sclerotinia trifoliorum Species 0.000 description 1
- 102000003667 Serine Endopeptidases Human genes 0.000 description 1
- 108090000083 Serine Endopeptidases Proteins 0.000 description 1
- 241000607720 Serratia Species 0.000 description 1
- 241000978700 Serratia symbiotica Species 0.000 description 1
- 241000607768 Shigella Species 0.000 description 1
- 241000607766 Shigella boydii Species 0.000 description 1
- 241000607764 Shigella dysenteriae Species 0.000 description 1
- 241000607760 Shigella sonnei Species 0.000 description 1
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 1
- 241000223257 Thermomyces Species 0.000 description 1
- 241000223259 Trichoderma Species 0.000 description 1
- 241001464926 Yersinia mollaretii Species 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003929 acidic solution Substances 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 125000003158 alcohol group Chemical group 0.000 description 1
- BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N alpha-hydroxysuccinic acid Natural products OC(=O)C(O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000323 aluminium silicate Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 229940009098 aspartate Drugs 0.000 description 1
- 238000001636 atomic emission spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 229940054340 bacillus coagulans Drugs 0.000 description 1
- 239000003659 bee venom Substances 0.000 description 1
- 235000021028 berry Nutrition 0.000 description 1
- 238000004061 bleaching Methods 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000000828 canola oil Substances 0.000 description 1
- 235000019519 canola oil Nutrition 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 235000012343 cottonseed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000002385 cottonseed oil Substances 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 230000002939 deleterious effect Effects 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- 239000005293 duran Substances 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004945 emulsification Methods 0.000 description 1
- 229940092559 enterobacter aerogenes Drugs 0.000 description 1
- 150000002169 ethanolamines Chemical class 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 239000000446 fuel Substances 0.000 description 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- 125000005456 glyceride group Chemical group 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002354 inductively-coupled plasma atomic emission spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 229910010272 inorganic material Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011147 inorganic material Substances 0.000 description 1
- 239000003456 ion exchange resin Substances 0.000 description 1
- 229920003303 ion-exchange polymer Polymers 0.000 description 1
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 229910001425 magnesium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011090 malic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000001630 malic acid Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 150000002734 metacrylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002739 metals Chemical class 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 239000011368 organic material Substances 0.000 description 1
- 229940066734 peptide hydrolases Drugs 0.000 description 1
- 125000001095 phosphatidyl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000003495 polar organic solvent Substances 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000007127 saponification reaction Methods 0.000 description 1
- 229940007046 shigella dysenteriae Drugs 0.000 description 1
- 229940115939 shigella sonnei Drugs 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000004760 silicates Chemical class 0.000 description 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 1
- 239000010802 sludge Substances 0.000 description 1
- 239000003998 snake venom Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 238000001256 steam distillation Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 238000009875 water degumming Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
- C11B—PRODUCING, e.g. BY PRESSING RAW MATERIALS OR BY EXTRACTION FROM WASTE MATERIALS, REFINING OR PRESERVING FATS, FATTY SUBSTANCES, e.g. LANOLIN, FATTY OILS OR WAXES; ESSENTIAL OILS; PERFUMES
- C11B3/00—Refining fats or fatty oils
- C11B3/003—Refining fats or fatty oils by enzymes or microorganisms, living or dead
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23D—EDIBLE OILS OR FATS, e.g. MARGARINES, SHORTENINGS, COOKING OILS
- A23D9/00—Other edible oils or fats, e.g. shortenings, cooking oils
- A23D9/02—Other edible oils or fats, e.g. shortenings, cooking oils characterised by the production or working-up
- A23D9/04—Working-up
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L5/00—Preparation or treatment of foods or foodstuffs, in general; Food or foodstuffs obtained thereby; Materials therefor
- A23L5/20—Removal of unwanted matter, e.g. deodorisation or detoxification
- A23L5/25—Removal of unwanted matter, e.g. deodorisation or detoxification using enzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
- C11B—PRODUCING, e.g. BY PRESSING RAW MATERIALS OR BY EXTRACTION FROM WASTE MATERIALS, REFINING OR PRESERVING FATS, FATTY SUBSTANCES, e.g. LANOLIN, FATTY OILS OR WAXES; ESSENTIAL OILS; PERFUMES
- C11B3/00—Refining fats or fatty oils
- C11B3/001—Refining fats or fatty oils by a combination of two or more of the means hereafter
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
- C11B—PRODUCING, e.g. BY PRESSING RAW MATERIALS OR BY EXTRACTION FROM WASTE MATERIALS, REFINING OR PRESERVING FATS, FATTY SUBSTANCES, e.g. LANOLIN, FATTY OILS OR WAXES; ESSENTIAL OILS; PERFUMES
- C11B3/00—Refining fats or fatty oils
- C11B3/006—Refining fats or fatty oils by extraction
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
- C11B—PRODUCING, e.g. BY PRESSING RAW MATERIALS OR BY EXTRACTION FROM WASTE MATERIALS, REFINING OR PRESERVING FATS, FATTY SUBSTANCES, e.g. LANOLIN, FATTY OILS OR WAXES; ESSENTIAL OILS; PERFUMES
- C11B3/00—Refining fats or fatty oils
- C11B3/02—Refining fats or fatty oils by chemical reaction
- C11B3/04—Refining fats or fatty oils by chemical reaction with acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
- C11B—PRODUCING, e.g. BY PRESSING RAW MATERIALS OR BY EXTRACTION FROM WASTE MATERIALS, REFINING OR PRESERVING FATS, FATTY SUBSTANCES, e.g. LANOLIN, FATTY OILS OR WAXES; ESSENTIAL OILS; PERFUMES
- C11B3/00—Refining fats or fatty oils
- C11B3/16—Refining fats or fatty oils by mechanical means
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
- C11B—PRODUCING, e.g. BY PRESSING RAW MATERIALS OR BY EXTRACTION FROM WASTE MATERIALS, REFINING OR PRESERVING FATS, FATTY SUBSTANCES, e.g. LANOLIN, FATTY OILS OR WAXES; ESSENTIAL OILS; PERFUMES
- C11B5/00—Preserving by using additives, e.g. anti-oxidants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
- C12N9/18—Carboxylic ester hydrolases (3.1.1)
- C12N9/20—Triglyceride splitting, e.g. by means of lipase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
- C12N9/52—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from bacteria or Archaea
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
- C12N9/52—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from bacteria or Archaea
- C12N9/54—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from bacteria or Archaea bacteria being Bacillus
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y301/00—Hydrolases acting on ester bonds (3.1)
- C12Y301/01—Carboxylic ester hydrolases (3.1.1)
- C12Y301/01004—Phospholipase A2 (3.1.1.4)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y301/00—Hydrolases acting on ester bonds (3.1)
- C12Y301/01—Carboxylic ester hydrolases (3.1.1)
- C12Y301/01032—Phospholipase A1 (3.1.1.32)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y301/00—Hydrolases acting on ester bonds (3.1)
- C12Y301/04—Phosphoric diester hydrolases (3.1.4)
- C12Y301/04003—Phospholipase C (3.1.4.3)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
- C12Y304/11—Aminopeptidases (3.4.11)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
- C12Y304/13—Dipeptidases (3.4.13)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
- C12Y304/14—Dipeptidyl-peptidases and tripeptidyl-peptidases (3.4.14)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
- C12Y304/15—Peptidyl-dipeptidases (3.4.15)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
- C12Y304/16—Serine-type carboxypeptidases (3.4.16)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
- C12Y304/17—Metallocarboxypeptidases (3.4.17)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
- C12Y304/18—Cysteine-type carboxypeptidases (3.4.18)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
- C12Y304/19—Omega peptidases (3.4.19)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
- C12Y304/23—Aspartic endopeptidases (3.4.23)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
- C12Y304/25—Threonine endopeptidases (3.4.25)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y301/00—Hydrolases acting on ester bonds (3.1)
- C12Y301/01—Carboxylic ester hydrolases (3.1.1)
- C12Y301/01003—Triacylglycerol lipase (3.1.1.3)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y301/00—Hydrolases acting on ester bonds (3.1)
- C12Y301/04—Phosphoric diester hydrolases (3.1.4)
- C12Y301/04004—Phospholipase D (3.1.4.4)
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Mechanical Engineering (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Fats And Perfumes (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
Изобретение относится к масложировой промышленности. Способ дегуммирования составов, содержащих триглицериды, включающий следующие этапы: a) контактирование состава, содержащего триглицериды, с ферментативной композицией, включающей первый ферментативный компонент, содержащий фосфолипазу А1 и фосфолипазу А2, и второй ферментативный компонент, содержащий по меньшей мере одну протеазу, и b) отделение фосфолипидов и сопутствующих примесей от состава, содержащего триглицериды, в котором перед контактированием на этапе а) состав, содержащий триглицериды, приводят в контакт с водой и/или водным раствором кислоты, но водную фазу перед этапом а) не отделяют. Изобретение позволяет увеличить выход масла. 7 з.п. ф-лы, 3 ил., 3 табл., 1 пр.
Description
Область техники, к которой относится изобретение
Изобретение относится к композициям, содержащим по меньшей мере один фермент, расщепляющий фосфолипиды и по меньшей мере одну протеазу. Также изобретение относится к способу дегуммирования составов, содержащих триглицериды, с использованием композиции по изобретению, и к применению композиции по изобретению для дегуммирования составов, содержащих триглицериды.
Уровень техники
Триглицериды, получаемые из растительного сырья, в частности неочищенных растительных масел, содержат фосфатиды (фосфолипиды), белковые и углеводные компоненты, компоненты смол, слизей и камедей, а также коллоидные вещества, которые значительно сокращают срок хранения масла и снижают выход очищенного масла. Эти вещества поэтому подлежат удалению.
В процессе очистки (рафинирования) растительных масел удаляют нежелательные вещества, при наличии которых в масле его нельзя использовать. Различают химическое и физическое рафинирование. Химическое рафинирование состоит из процессов 1) дегуммирования, в ходе которого из масла удаляются фосфолипиды и ионы металлов; 2) нейтрализации щелочами, при которой экстрагируются жирные кислоты; 3) отбеливания для удаления окрашивающих масло веществ, ионов других металлов и оставшихся компонентов смол, слизей и камедей; 4) дезодорирование, перегонка с паром, при которой удаляются прочие вещества, негативно влияющие на запах и вкус масла. При физическом рафинировании масла осуществляется щелочная очистка (снижение кислотности, удаление кислот) наряду с дезодорированием в конце процесса очистки.
Дегуммирование масел может осуществляться путем экстракции фосфолипидов водой или водным раствором кислоты, образующей комплексы с ионами кальция (Ca2+) и магния (Mg2+), например водным раствором лимонной или фосфорной кислоты. Часто при этом вначале осуществляется водное дегуммирование, называемое предварительным, которое удаляет водорастворимые фосфолипиды. В настоящем документе употребляется термин «гидратируемые фосфолипиды».
Вопрос о гидратируемых и негидратируемых фосфолипидах обсуждается, например, в работе Nielsen, K., Composition of difficultly extractable soy bean phosphatides, J. Am. Oil. Chem. Soc. 1960, 37, 217-219 and A.J. Dijkstra, Enzymatic degumming, Eur. J. Lipid Sci. Technol. 2010, 112, 1178-1189. В частности, в их числе фосфатидилхолин и фосфатидилинозит. По опубликованным источникам, обработка масел разбавленными водными растворами кислот, образующих комплексы с кальцием и магнием, например лимонной или фосфорной кислоты, приводит к тому, что негидратируемые фосфолипиды становятся гидратируемыми. Для пищевого применения масла должно быть продемонстрировано, что содержание фосфора в нем понижено до 10 или менее частей на миллион (в опубликованных ранее работах содержание фосфора в масле определяли методом атомно-эмиссионной спектрометрии, ICP-AES). В отношении масел, используемых, например, для производства биодизельного топлива, действуют еще более строгие требования. Согласно принятым в странах Европейского союза стандартам, содержание фосфора в биодизельном топливе ограничивается пределом 5 частей на миллион, и практически целесообразно осуществлять снижение содержания фосфора уже на стадии масла.
Одним из недостатков обычно практикуемых процедур дегуммирования масла является то, что как водное предварительное дегуммирование, так и обработка водными растворами кислот приводят к потере масла, обусловленной эмульгированием части растительного масла в водной фазе, поскольку фосфолипиды, оказавшиеся в воде, действуют как эмульгирующие агенты. Эти потери составляют величину порядка нескольких процентов от количества исходно взятого неочищенного масла. Эмпирически установлено, что на каждые две фосфолипидных молекулы эмульгируется одна триглицеридная молекула (по описанию в публикации WO 08/094847). Так называемое ферментативное дегуммирование позволяет избежать ряда недостатков, присущих существующим методам рафинирования и/или усовершенствовать способы экстракции.
Применение фосфолипаз, в первую очередь фосфолипазы А, для дегуммирования неочищенных масел описано, например, в Европейском патенте 0513709 B1 (метод, называемый Enzymax®, предложенный компанией Lurgi, Франкфурт, Германия). Считается, что в результате расщепления жирных кислот образуется лизолецитин, который обладает значительно более низкой эмульгирующей способностью в отношении масел, а также значительно более высокой растворимостью в воде. В результате увеличиваются выход масла и растворимость в воде фосфолипидов, плохо поддающихся гидратации. Современный уровень знаний в области ферментативного дегуммирования масел суммирован в следующих статьях: A.J. Dijkstra, Recent developments in edible oil processing, Eur. J. Lipid Sci. Technol. 2009, 111, 857-864; A.J. Dijkstra, Enzymatic degumming, Eur. J. Lipid Sci. Technol. 2010, 112, 1178-1189. В них обсуждаются преимущества и недостатки отдельных фосфолипаз с точки зрения их использования для ферментативного дегуммирования масел, а также способы предварительной обработки различными кислотами.
С точки зрения выхода продукта (масла) в случае ферментативного дегуммирования лучше всего использовать высоко эффективную фосфолипазу С, под действием которой образуется диглицерид, растворимый в масле и фосфатидильный радикал, например при расщеплении фосфатидилхолина (из лецитина), очень легко растворяющийся в воде. Такие ферменты описаны в US 7,226,771 (корпорация Verenium). В обзорной статье на тему ферментативного дегуммирования к недостаткам этого подхода автор (A.J. Dijkstra) относит то обстоятельство, что он не обеспечивает превращения всех фосфолипидов, а только фосфатидилхолина и фосфатидилинозита, тогда как с трудом поддающиеся гидратированию этаноламины и фосфатидные кислоты не затрагиваются. Этот недостаток побудил в последующих разработках сочетать фосфолипазу С с фосфолипазой А или же с ацилтрансферазами, действующими на липиды. Использование комбинации фосфолипаз А и С для ферментативного дегуммирования описано в WO 08/094847. В этом патентном описании утверждается, что в результате смешивания фосфолипаз А и С достигается, с одной стороны, синергический эффект в отношении выхода продукта (масла) и, с другой стороны, очень низкое содержание фосфора в масле при приемлемой продолжительности реакции.
Комбинирование фосфолипазы С с ацилтрансферазами, действующими на липиды, описано в WO 2009/081094. В этой работе также утверждается, что сочетание ацилтрансферазы с фосфолипазой С дает увеличение выхода продукта (масла). Другой вариант ферментативного дегуммирования масла состоит в том, что проводится ферментативная обработка отделенной фазы фосфолипидов и сопутствующих примесей (gum phase) после дегуммирования масла обычным путем, например с помощью воды и/или лимонной кислоты. Такая обработка позволяет выделить некоторое количество растительного масла, эмульгированного в фосфолипидной фазе. Этот способ обсуждается, например, также в обзорной статье A.J. Dijkstra, Enzymatic degumming, Eur. J. Lipid Sci. Technol. 2010, 112, 1178-1189, p. 1184.
Также в PCT/EP2013/053199 описывается способ, в котором неочищенное масло дегуммируют с помощью комбинации фермента, расщепляющего форсфолипиды, с гликозидазой. В другом известном в данной области техники способе, описанном в ЕР 13166529.1, в ходе дегуммирования используется фосфатаза.
Наконец, вопрос рациональности использования фосфолипаз в долгосрочной перспективе по сравнению с другими методами дегуммирования обсуждается в статье L. De Maria & J. Vind & K.M. Oxenbøll & A. Svendsen & S. Patkar, Phospholipases and their industrial applications, Appl Microbiol Biotechnol (2007) 74:290-300, pp. 96 and 97. На примере маслозавода, переведенного с традиционного метода дегуммирования на способ с использованием фосфолипазы С, на котором проходит очистку 266 000 т масла соевых бобов в год, показано, что ферментативный метод позволяет экономить 120 000 ГДж энергии и 120 000 т эквивалентов CO2 в год. Такое количество эквивалентов СО2 соответствует его выбросу от 1600 средних антропогенных источников.
Принимая во внимание растущее мировое потребление пищевых масел и все более широкое использование растительных масел в качестве сырья для химической промышленности и в качестве топлива, существует постоянная потребность в дальнейшем совершенствовании дегуммирования составов, содержащих триглицериды, в частности растительных масел и/или фосфолипидной фазы (фосфолипидов и сопутствующих примесей) растительных масел.
Раскрытие изобретения
Авторы настоящей заявки поставили поэтому перед собой задачу разработать ферментативный способ дегуммирования, альтернативный известным в данной области техники способам дегуммирования составов, содержащих глицериды, в частности неочищенных растительных масел, который обеспечил бы дальнейшее снижение содержания фосфора в подлежащих дегуммированию триглицеридах или составов, содержащих триглицериды; повышение выхода продукта (масла) и/или увеличение скорости реакции ферментативного дегуммирования. В то же время этот способ должен дать возможность экономической выгоды при применении в промышленном масштабе.
В контексте изобретения под ферментативной активностью понимается катализирование химической реакции одним или более белками-катализаторами (ферментами). В результате такой реакции субстрат фермента превращается в один или более продуктов. Некоторые ферменты или ферментные композиции обладают одной или более ферментативными активностями. Индивидуальный фермент, например, может служить катализатором в более чем одной реакции (превращении субстрата в один или более продуктов), то есть обладать более чем одной ферментативной активностью. Многие ферментные композиции не являются биохимически чистыми продуктами и соответственно обладают несколькими ферментативными активностями. Ферментативная активность как величина связана со скоростью реакции. Эта величина показывает, сколько активного фермента имеется в ферментной композиции. Единица ферментативной активности 1U, или 1Е – это количество фермента, которое катализирует превращение одного микромоля субстрата в минуту при стандартных условиях (1Е = 1 мкмоль/мин).
Указанная цель изобретения достигается с помощью композиции, содержащей первый ферментный компонент, включающий по меньшей мере один фермент, расщепляющий фосфолипиды, и второй ферментный компонент, включающий по меньшей мере одну протеазу (в настоящем документе такая композиция называется композицией по изобретению).
В контексте изобретения фермент, расщепляющий фосфолипиды, - это предпочтительно фосфолипаза, способная отщеплять остаток жирной кислоты или фосфатидильный остаток или полярную группу, служащую «головой» фосфолипидной молекулы. Также фермент, расщепляющий фосфолипиды, является предпочтительно ацилтрансферазой, катализирующей реакцию, в которой отщепление жирнокислотного остатка (ацильной цепи) сочетается с переносом этой группы, после чего образуется эфир и свободный стерол в жирной фазе.
Фосфолипазы принадлежат к группе ферментов, называемых гидролазами: они гидролизуют эфирную связь в фосфолипидах. В зависимости от локализации ферментативного акта в молекуле субстрата фосфолипазы подразделяются на пять групп:
- фосфолипаза А1 (PLA1) отщепляет остаток жирной кислоты (ацильную цепь) в положении sn1 с образованием 2-лизофосфолипида;
- фосфолипаза А2 (PLA2) отщепляет остаток жирной кислоты (ацильную цепь) в положении sn2 с образованием 1-лизофосфолипида;
- фосфолипаза С (PLC) гидролизует фосфодиэфирную связь между глицериновым остатком и фосфатной группой;
- фосфолипаза D (PLD) отщепляет «голову» молекулы фосфолипида (гидролизует связь между фосфатной группой и спиртовой группой);
- фосфолипаза В (PLB) отщепляет обе (в положениях sn-1 и sn-2) ацильные цепи с образованием 1,2-лизофосфолипида.
В контексте изобретения под ацилтрансферазой понимается фермент, осуществляющий перенос ацильной группы, например остатка жирной кислоты (ацильной цепи) молекулы фосфолипида, на подходящий акцептор, например стерол, с образованием эфира.
В одном из своих предпочтительных воплощений изобретение относится к композициям, в которых первый ферментный компонент выбирают из группы, состоящей из фосфолипазы А1, фосфолипазы А2, фосфолипазы С, фосфолипазы В, фосфолипазы D, ацилтрансферазы и их смесей. Эти ферменты могут природными, происходящими из любого желаемого организма (в том числе могут быть выделены, например, из какого-либо термофильного организма) или синтезированными. Эти ферменты могут быть животного происхождения, например выделены из поджелудочной железы, или растительного либо микроорганизменного происхождения, например выделены из дрожжей или иных грибов, водорослей или бактерий. В контексте изобретения возможно также, что в состав того или иного ферментного компонента входят ферменты одного типа, но разного происхождения (из разных источников или видов). Также изобретение включает обладающие соответствующей ферментативной активностью рекомбинантные химерные слитые белки, происходящие от двух или более разных видов живых организмов.
В контексте изобретения предпочтительно используются фосфолипаза А1, фосфолипаза А2, фосфолипаза С, фосфолипаза В, фосфолипаза D, ацилтрансфераза и их смеси, из следующих источников: поджелудочная железа свиньи, поджелудочная железа быка, змеиный яд, пчелиный яд, микроорганизмы родов Aspergillus, Bacillus, Citrobacter, Clostridium, Dictyostelium, Edwardsiella, Enterobacter, Escherichia, Erwinia, Fusarium, Klebsiella, Listeria, Mucor, Naja, Neurospora, Pichia, Proteus, Pseudomonas, Providencia, Rhizomucor, Rhizopus, Salmonella, Sclerotinia, Serratia, Shigella, Streptomyces, Thermomyces, Trichoderma, Trichophyton, Whetzelinia, Yersinia.
Особенно предпочтительны фосфолипаза А1, фосфолипаза А2, фосфолипаза С, фосфолипаза В, фосфолипаза D, ацилтрансфераза и их смеси из следующих организмов: Aspergillus awamori, Aspergillus foetidus, Aspergillus fumigatus, Aspergillus japonicus, Aspergillus niger, Aspergillus oryzae, Bacillus alvei, Bacillus amyloliquefaciens, Bacillus anthracis, Bacillus atrophaeus, Bacillus cereus, Bacillus circulans, Bacillus coagulans, Bacillus larvae, Bacillus laterosporus, Bacillus megaterium, Bacillus natto, Bacillus pasteurii, Bacillus pumilus, Bacillus sphaericus, Bacillus sporothermodurans, Bacillus subtilis, Bacillus thuringiensis, Bacillus pseudoanthracis, Citrobacter amalonaticus, Citrobacter braakii, Citrobacter farmeri, Citrobacter freundii, Citrobacter gillenii, Citrobacter koseri, Citrobacter murliniae, Citrobacter rodentium, Citrobacter sedlakii, Citrobacter werkmanii, Citrobacter youngae, Clostridium perfringens, Dictyostelium discoideum, Dictyostelium mucoroides, Dictyostelium polycephalum, Edwardsiella hoshinae, Edwardsiella ictaluri, Edwardsiella tarda, Enterobacter amnigenus, Enterobacter aerogenes, Enterobacter cloacae, Enterobacter gergoviae, Enterobacter intermedius, Enterobacter pyrinus, Escherichia albertii, Escherichia blattae, Escherichia coli, Escherichia fergusonii, Escherichia hermannii, Escherichia senegalensis, Escherichia vulneris, Erwinia amylovora, Erwinia aphidicola, Erwinia billingiae, Erwinia carotovora, Erwinia herbicola, Erwinia oleae, Erwinia mallotivora, Erwinia papayae, Erwinia persicina, Erwinia piriflorinigrans, Erwinia psidii, Erwinia pyrifoliae, Erwinia rhapontici, Erwinia tasmaniensis, Erwinia toletana, Erwinia tracheiphila, Fusarium avenaceum, Fusarium avenaceum, Fusarium chlamydosporum, Fusarium coeruleum, Fusarium culmorum, Fusarium dimerum, Fusarium incarnatum, Fusarium heterosporum, Fusarium moniliforme, Fusarium napiforme, Fusarium oxysporum, Fusarium poae, Fusarium sporotrichiella, Fusarium tricinctum, Fusarium proliferatum, Fusarium sacchari, Fusarium solani, Fusarium sporotrichioides, Fusarium subglutinans, Fusarium tabacinum, Fusarium verticillioides, Klebsiella oxytoca, Klebsiella mobilis, Klebsiella singaporensis, Klebsiella granulomatis, Klebsiella pneumoniae, Klebsiella variicola, Listeria monocytogenes, Mucor amphibiorum, Mucor circinelloides, Mucor hiemalis, Mucor indicus, Mucor javanicus, Mucor mucedo, Mucor paronychius, Mucor piriformis, Mucor subtilissimus, Mucor racemosus, Naja mossambica, Neurospora Africana, Neurospora crassa, Neurospora discrete, Neurospora dodgei, Neurospora galapagosensis, Neurospora intermedia, Neurospora lineolata, Neurospora pannonica, Neurospora sitophila, Neurospora sublineolata, Neurospora terricola, Neurospora tetrasperma, Pichia barkeri, Pichia cactophila, Pichia cecembensis, Pichia cephalocereana, Pichia deserticola, Pichia eremophilia, Pichia exigua, Pichia fermentans, Pichia heedii, Pichia kluyveri, Pichia kudriavzevii, Pichia manshurica, Pichia membranifaciens, Pichia nakasei, Pichia norvegensis, Pichia orientalis, Pichia pastoris (Komagataella pastoris), Pichia pseudocactophila, Pichia scutulata, Pichia sporocuriosa, Pichia terricola, Proteus hauseri, Proteus mirabilis, Proteus myxofaciens, Proteus penneri, Proteus vulgaris, Pseudomonas aeruginosa, Pseudomonas fluorescens, Pseudomonas putida, Pseudomonas syringae, Providencia rettgeri, Providencia stuartii, Rhizomucor endophyticus, Rhizomucor miehei, Rhizomucor pakistanicus, Rhizomucor pusillus, Rhizomucor tauricus, Rhizomucor variabilis, Rhizopus arrhizus, Rhizopus azygosporus, Rhizopus circinans, Rhizopus japonicus, Rhizopus microsporus, Rhizopus nigricans, Rhizopus oligosporus, Rhizopus oryzae, Rhizopus schipperae, Rhizopus sexualis, Rhizopus stolonifer, Rhizopus artocarpi, Salmonella bongori, Salmonella enterica, Salmonella typhimurium, Sclerotinia borealis, Sclerotinia homoeocarpa, Sclerotinia libertiana, Sclerotinia minor, Sclerotinia ricini, Sclerotinia sclerotiorum, Sclerotinia spermophila, Sclerotinia trifoliorum, Serratia entomophila, Serratia ficaria, Serratia fonticola, Serratia grimesii, Serratia liquefaciens, Serratia marcescens, Serratia odorifera, Serratia plymuthica, Serratia proteamaculans, Serratia quinivorans, Serratia rubidaea, Serratia symbiotica, Shigella dysenteriae, Shigella flexneri, Shigella boydii, Shigella sonnei, Streptomyces achromogenes, Streptomyces ambofaciens, Streptomyces aureofaciens, Streptomyces avermitilis, Streptomyces carcinostaticus, Streptomyces cervinus, Streptomyces clavuligerus, Streptomyces coelicolor, Streptomyces coeruleorubidus, Streptomyces davawensis, Streptomyces fradiae, Streptomyces griseus, Streptomyces hygroscopicus, Streptomyces lavendulae, Streptomyces lincolnensis, Streptomyces natalensis, Streptomyces nodosus, Streptomyces noursei, Streptomyces peuceticus, Streptomyces platensis, Streptomyces rimosus, Streptomyces spectabilis, Streptomyces toxytricini, Streptomyces venezuelae, Streptomyces violaceoniger, Streptomyces violaceoruber, Thermomyces lanuginosa, Trichoderma harzianum, Trichoderma koningii, Trichoderma longibrachiatum, Trichoderma pseudokoningii, Trichoderma reesei, Trichoderma viride, Trichophyton concentricum, Trichophyton eboreum, Trichophyton equinum, Trichophyton gourvilii, Trichophyton kanei, Trichophyton megninii, Trichophyton mentagrophytes, Trichophyton phaseoliforme, Trichophyton raubitschekii, Trichophyton rubrum, Trichophyton schoenleinii, Trichophyton simii, Trichophyton soudanense, Trichophyton terrestre, Trichophyton tonsurans, Trichophyton vanbreuseghemii, Trichophyton verrucosum, Trichophyton violaceum, Trichophyton yaoundei, Whetzelinia schlerotiorum, Yersinia aldovae, Yersinia aleksiciae, Yersinia bercovieri, Yersinia enterocolitica, Yersinia frederiksenii, Yersinia intermedia, Yersinia kristensenii, Yersinia massiliensis, Yersinia mollaretii, Yersinia pestis, Yersinia pseudotuberculosis, Yersinia rohdei, Yersinia ruckeri, Yersinia similis.
В одном из особенно предпочтительных воплощений изобретения используются фосфолипаза А1, фосфолипаза А2, фосфолипаза В, фосфолипаза С и/или фосфолипаза D, происходящие из следующих источников: микроорганизмов Aspergillus niger, Aspergillus oryzae, Bacillus cereus, Bacillus megaterium, Bacillus subtilis, Citrobacter freundii, Enterobacter aerogenes, Enterobacter cloacae, Edwardsiella tarda, Erwinia herbicola, Escherichia coli, Clostridium perfringens, Dictyostelium discoideum, Fusarium oxysporium, Klebsiella pneumoniae, Listeria monocytogenes, Mucor javanicus, Mucor mucedo, Mucor subtilissimus, Naja mossambica, Neurospora crassa, Pichia pastoris (Komagataella pastoris), Pseudomonas species, Proteus vulgaris, Providencia stuartii, Rhizomucor pusillus, Rhizopus arrhizus, Rhizopus japonicus, Rhizopus stolonifer, Salmonella typhimurium, Serratia marcescens, Serratia liquefaciens, Sclerotinia libertiana, Shigella flexneri, Streptomyces violaceoruber, Trichophyton rubrum, Thermomyces lanuginosus, Trichoderma reesei, Whetzelinia sclerotiorum, Yersinia enterocolitica, поджелудочной железы свиньи, поджелудочной железы быка, змеиного яда или пчелиного яда.
По меньшей мере один фермент в первом ферментном компоненте композиции по изобретению может происходить как из одинаковых, так и из разных источников, предпочтительно одного или нескольких из указанных выше организмов/источников, причем особенно предпочтительны Aspergillus niger, Aspergillus oryzae, Fusarium oxysporium, Naja mossambica, Pichia pastoris (Komagataella pastoris), Streptomyces violaceoruber, Thermomyces lanuginosus, Trichoderma reesei, поджелудочная железа свиньи или поджелудочная железа быка.
В контексте изобретения термин «протеаза» означает один или более ферментов или ферментных композиций из ферментов класса 3.4 (пептидгидролазы). Этот термин включает пептидазы и/или протеиназы. Протеазы катализируют гидролиз пептидных связей. Ферменты в составе композиции по изобретению могут быть животного происхождения, например из слизистой желудка, растительного или микроорганизменного происхождения, например из дрожжей или других грибов, из водорослей или бактерий. В частности, протеазы в контексте изобретения - это предпочтительно один или более ферментов из следующих групп протеаз: аминопептидазы, аспартатэндопептидазы, дипептидазы, дипептидилпептидазы, трипептидилпептидазы, пептидилдипептидазы, сериновые карбоксипептидазы металлокарбоксипептидазы, цистеиновые карбоксипептидазы, омегапептидазы, сериновые эндопептидазы, цистеиновые эндопептидазы, аспарагиновые эндопептидазы, металлоэндопептидазы, треониновые эндопептидазы, эндопептидазы, причем предпочтение отдается использованию аспартатных эндопептидаз, сериновых эндопептидаз или металлоэндопептидаз.
В контексте изобретения отдается предпочтение использованию указанных протеаз из следующих источников: слизистая желудка млекопитающих, поджелудочная железа свиньи, поджелудочная железа быка, Aspergillus, Bacillus, Citrobacter, Clostridium, Dictyostelium, Edwardsiella, Enterobacter, Escherichia, Erwinia, Fusarium, Klebsiella, Listeria, Mucor, Naja, Neurospora, Pichia, Proteus, Pseudomonas, Providencia, Rhizomucor, Rhizopus, Salmonella, Sclerotinia, Serratia, Shigella, Streptomyces, Thermomyces, Trichoderma, Trichophyton, Whetzelinia, Yersinia.
Особенно предпочтительно использовать протеазы и их смеси из Aspergillus awamori, Aspergillus foetidus, Aspergillus fumigatus, Aspergillus japonicus, Aspergillus niger, Aspergillus oryzae, Aspergillus sojae, Bacillus alvei, Bacillus amyloliquefaciens, Bacillus anthracis, Bacillus atrophaeus, Bacillus cereus, Bacillus circulans, Bacillus coagulans, Bacillus larvae, Bacillus laterosporus, Bacillus megaterium, Bacillus natto, Bacillus pasteurii, Bacillus pumilus, Bacillus sphaericus, Bacillus sporothermodurans, Bacillus subtilis, Bacillus thuringiensis, Bacillus pseudoanthracis, Bacillus polymyxa, Citrobacter amalonaticus, Citrobacter braakii, Citrobacter farmeri, Citrobacter freundii, Citrobacter gillenii, Citrobacter koseri, Citrobacter murliniae, Citrobacter rodentium, Citrobacter sedlakii, Citrobacter werkmanii, Citrobacter youngae, Clostridium perfringens, Dictyostelium discoideum, Dictyostelium mucoroides, Dictyostelium polycephalum, Edwardsiella hoshinae, Edwardsiella ictaluri, Edwardsiella tarda, Enterobacter amnigenus, Enterobacter aerogenes, Enterobacter cloacae, Enterobacter gergoviae, Enterobacter intermedius, Enterobacter pyrinus, Escherichia albertii, Escherichia blattae, Escherichia coli, Escherichia fergusonii, Escherichia hermannii, Escherichia senegalensis, Escherichia vulneris, Erwinia amylovora, Erwinia aphidicola, Erwinia billingiae, Erwinia carotovora, Erwinia herbicola, Erwinia cleae, Erwinia mallotivora, Erwinia papayae, Erwinia persicina, Erwinia piriflorinigrans, Erwinia psidii, Erwinia pyrifoliae, Erwinia rhapontici, Erwinia tasmaniensis, Erwinia toletana, Erwinia tracheiphila, Fusarium avenaceum, Fusarium avenaceum, Fusarium chlamydosporum, Fusarium coeruleum, Fusarium culmorum, Fusarium dimerum, Fusarium incarnatum, Fusarium heterosporum, Fusarium moniliforme, Fusarium napiforme, Fusarium oxysporum, Fusarium poae, Fusarium sporotrichiella, Fusarium tricinctum, Fusarium proliferatum, Fusarium sacchari, Fusarium solani, Fusarium sporotrichioides, Fusarium subglutinans, Fusarium tabacinum, Fusarium verticillioides, Klebsiella oxytoca, Klebsiella mobilis, Klebsiella singaporensis, Klebsiella granulomatis, Klebsiella pneumoniae, Klebsiella variicola, Listeria monocytogenes, Mucor amphibiorum, Mucor circinelloides, Mucor hiemalis, Mucor indicus, Mucor javanicus, Mucor mucedo, Mucor paronychius, Mucor piriformis, Mucor subtilissimus, Mucor racemosus, Naja mossambica, Neurospora Africana, Neurospora crassa, Neurospora discrete, Neurospora dodgei, Neurospora galapagosensis, Neurospora intermedia, Neurospora lineolata, Neurospora pannonica, Neurospora sitophila, Neurospora sublineolata, Neurospora terricola, Neurospora tetrasperma, Pichia barkeri, Pichia cactophila, Pichia cecembensis, Pichia cephalocereana, Pichia deserticola, Pichia eremophilia, Pichia exigua, Pichia fermentans, Pichia heedii, Pichia kluyveri, Pichia kudriavzevii, Pichia manshurica, Pichia membranifaciens, Pichia nakasei, Pichia norvegensis, Pichia orientalis, Pichia pastoris, Pichia pseudocactophila, Pichia scutulata, Pichia sporocuriosa, Pichia terricola, Proteus hauseri, Proteus mirabilis, Proteus myxofaciens, Proteus penneri, Proteus vulgaris, Pseudomonas aeruginosa, Pseudomonas fluorescens, Pseudomonas putida, Pseudomonas syringae, Providencia rettgeri, Providencia stuartii, Rhizomucor endophyticus, Rhizomucor miehei, Rhizomucor pakistanicus, Rhizomucor pusillus, Rhizomucor tauricus, Rhizomucor variabilis, Rhizopus arrhizus, Rhizopus azygosporus, Rhizopus circinans, Rhizopus japonicus, Rhizopus microsporus, Rhizopus nigricans, Rhizopus oligosporus, Rhizopus oryzae, Rhizopus schipperae, Rhizopus sexualis, Rhizopus stonolifer, Rhizopus artocarpi, Salmonella bongori, Salmonella enterica, Salmonella typhimurium, Sclerotinia borealis, Sclerotinia homoeocarpa, Sclerotinia libertiana, Sclerotinia minor, Sclerotinia ricini, Sclerotinia sclerotiorum, Sclerotinia spermophila, Sclerotinia trifoliorum, Serratia entomophila, Serratia ficaria, Serratia fonticola, Serratia grimesii, Serratia liquefaciens, Serratia marcescens, Serratia odorifera, Serratia plymuthica, Serratia proteamaculans, Serratia quinivorans, Serratia rubidaea, Serratia symbiotica, Shigella dysenteriae, Shigella flexneri, Shigella boydii, Shigella sonnei, Streptomyces achromogenes, Streptomyces ambofaciens, Streptomyces aureofaciens, Streptomyces avermitilis, Streptomyces carcinostaticus, Streptomyces cervinus, Streptomyces clavuligerus, Streptomyces coelicolor, Streptomyces coeruleorubidus, Streptomyces davawensis, Streptomyces fradiae, Streptomyces griseus, Streptomyces hygroscopicus, Streptomyces lavendulae, Streptomyces lincolnensis, Streptomyces natalensis, Streptomyces nodosus, Streptomyces noursei, Streptomyces peuceticus, Streptomyces platensis, Streptomyces rimosus, Streptomyces spectabilis, Streptomyces toxytricini, Streptomyces venezuelae, Streptomyces violaceoniger, Streptomyces violaceoruber, Thermomyces lanuginosa, Trichoderma harzianum, Trichoderma koningii, Trichoderma longibrachiatum, Trichoderma pseudokoningii, Trichoderma reesei, Trichoderma viride, Trichophyton concentricum, Trichophyton eboreum, Trichophyton equinum, Trichophyton gourvilii, Trichophyton kanei, Trichophyton megninii, Trichophyton mentagrophytes, Trichophyton phaseoliforme, Trichophyton raubitschekii, Trichophyton rubrum, Trichophyton schoenleinii, Trichophyton simii, Trichophyton soudanense, Trichophyton terrestre, Trichophyton tonsurans, Trichophyton vanbreuseghemii, Trichophyton verrucosum, Trichophyton violaceum, Trichophyton yaoundei, Whetzelinia schlerotiorum, Yersinia aldovae, Yersinia aleksiciae, Yersinia bercovieri, Yersinia enterocolitica, Yersinia frederiksenii, Yersinia intermedia, Yersinia kristensenii, Yersinia massiliensis, Yersinia mollaretii, Yersinia pestis, Yersinia pseudotuberculosis, Yersinia rohdei, Yersinia ruckeri, Yersinia similis.
В контексте изобретения предпочтительно использовать протеазы из следующих источников: слизистая желудка млекопитающих, поджелудочная железа свиньи, поджелудочная железа быка, Aspergillus niger, Aspergillus oryzae, Aspergillus saitoi, Aspergillus sojae, Bacillus cereus, Bacillus licheniformis, Bacillus amyloliquefaciens, Bacillus polymyxa, Bacillus subtilis, Escherichia coli, Clostridium perfringens, Pichia pastoris (Komagataella pastoris), Pseudomonas species, Rhizomucor pusillus, Rhizopus arrhizus, Rhizopus japonicus, Rhizopus stolonifer, Salmonella typhimurium, Serratia marcescens, Serratia liquefaciens, Streptomyces griseus, Streptomyces violaceoruber, Thermomyces lanuginosus, Trichoderma reesei, Yersinia enterocolitica.
По меньшей мере одна протеаза второго ферментного компонента композиции по изобретению может происходить из одинаковых или разных источников, предпочтительно из одного или нескольких указанных выше организмов.
В одном из предпочтительных воплощений изобретения количество фермента (ферментов) первого ферментного компонента композиции по изобретению выбирают в диапазоне от 1 части на миллион (ppm) до 1000 ppm, более предпочтительно от 1 ppm (частей/млн.) до 250 ppm, особенно предпочтительно в диапазоне от 5 ppm до 200 ppm, исходя из количества масла. В другом предпочтительном воплощении изобретения ферментативную активность второго ферментного компонента предлагаемой композиции выбирают в диапазоне от 1 ppm дo 1000 ppm, более предпочтительно от 1 ppm до 250 ppm, особенно предпочтительно в диапазоне от 5 ppm до 200 ppm, исходя из количества масла.
В одном из предпочтительных воплощений изобретения активность фермента (ферментов) первого ферментного компонента предлагаемой композиции выбирают в диапазоне от 0,01 единицы на 1 г масла (Е/г) до 10 Е/г, более предпочтительно – в диапазоне от 0,1 Е/г до 5 Е/г, особенно предпочтительно в диапазоне от 0,2 Е/г до 3 Е/г и наиболее предпочтительно в диапазоне от 0,3 до 2 Е/г. В другом предпочтительном воплощении изобретения ферментативная активность фермента второго ферментного компонента предлагаемой композиции выбирают в диапазоне от 0,01 единицы на 1 г масла (Е/г) до 10 Е/г, предпочтительно в диапазоне от 0,1 Е/г до 5 Е/г, особенно предпочтительно в диапазоне от 0,2 Е/г до 3 Е/г и наиболее предпочтительно в диапазоне от 0,3 Е/г до 2 Е/г. (Одна международная единица ферментативной активности, 1 Е – количество микромолей субстрата, превращенных под действием данного фермента за 1 минуту, 1 мкмоль/мин).
В контексте изобретения особенно предпочтительны композиции, в которых отношение ферментативных активностей первого и второго ферментных компонентов предлагаемой композиции составляет от 0,001 : 20 до 20 : 0,001, предпочтительно от 0,1 : 10 дo 10 : 0,1, более предпочтительно от 0,25 : 7,5 дo 7,5 : 0,25, еще более предпочтительно от 0,5 : 5 дo 5 : 0,5 наиболее предпочтительно от 1 : 1 дo 1 : 5.
Соблюдая предпочтительное по изобретению соотношение первого и второго ферментных компонентов предлагаемой композиции, возможно еще более сократить объем фосфолипидной фазы. А это означает повышение выхода продукта – масла.
Для первого и/или второго ферментных компонентов композиции по изобретению можно использовать, например, лиофилизованные препараты ферментов, растворенные в соответствующем для данного фермента буферном растворе (стандартные буферные растворы, подходящие для конкретных ферментов, описаны в опубликованных работах), например цитратный буферный раствор (0,1 М; рН 5) или ацетатный буферный раствор (0,1 м; рН 5). В одном из предпочтительных воплощений изобретения ферменты, растворенные в подходящем буферном растворе, добавляют в неочищенное масло. Чтобы добиться лучшей растворимости используемых по изобретению ферментов, в частности в композициях, содержащих фосфолипазы, можно добавлять также органические растворители. Органические растворители используются, например, при отделении фосфолипидов; они описаны в опубликованных работах. По изобретению предпочтительно использовать неполярные органические растворители, например гексан или ацетон, или их смеси, предпочтительно в количестве от 1% (масса/масса) до 30% (масса/масса); примеры возможных растворителей описаны в Европейском патенте № 1531182 A2.
В другом предпочтительном воплощении изобретения первый и/или второй ферментные компоненты предлагаемой композиции используются на подложке. В качестве подложки по изобретению предпочтительны такие неорганические материалы, как силикагель, осажденный кремнезем, силикаты или алюмосиликаты, и такие органические материалы, как метакрилаты или ионообменные смолы. Материалы, используемые в качестве подложки, способствуют повторному использованию ферментов из эмульсии масло/вода на последующих этапах очистки и экономической осуществимости этого способа рафинирования.
В еще одном из предпочтительных воплощений изобретения предлагаемая композиция содержит один или более других компонентов, причем в их числе особенно предпочтительны выбираемые из группы, состоящей из цитратного и ацетатного буферных растворов.
Авторы изобретения обнаружили, что сочетание ферментных компонентов, указанных выше (первого и второго ферментных компонентов предлагаемой композиции) особенно эффективно снижает эмульгируемость триглицеридов в водной фазе. Поэтому композицию по изобретению особенно предпочтительно использовать для дегуммирования составов, включающих триглицериды, как, например, неочищенное растительное масло или фосфолипидная фаза растительного масла.
Таким образом, в другом своем аспекте изобретение относится к способу дегуммирования составов, содержащих триглицериды, который включает этапы
а) контактирования состава, содержащего триглицериды, с композицией по изобретению, описанной выше;
b) отделение фосфолипидов и сопутствующих примесей от состава, содержащего триглицериды.
В этой связи было обнаружено, что, применяя способ по изобретению, возможно еще более снизить содержание фосфолипидов в составах, содержащих триглицериды, по сравнению с использованием только фермента, расщепляющего фосфолипиды; также он позволяет увеличить выход масла, повысить скорость реакции в ходе ферментативного дегуммирования, уменьшить объем фосфолипидов с сопутствующими примесями и/или улучшить отделяемость образующейся фосфолипидной фазы. При этом содержание фосфора становится ниже 20 ppm, особенно предпочтительно ниже 10 ppm, еще более предпочтительно ниже 4 ppm.
Также с помощью способа по изобретению возможно снизить содержание кальция и магния в составах, включающих триглицериды, в частности в неочищенном растительном масле, так что оно становится менее 20 ppm, особенно предпочтительно ниже 15 ppm, еще более предпочтительно ниже 10 ppm, сверх того предпочтительно менее 8 ppm и наиболее предпочтительно мене 4 ppm. В еще одном предпочтительном воплощении изобретения содержание кальция и магния становится менее 3 ppm.
Способ по изобретению отличается особыми преимуществами, так как благодаря использованию протеазы усиливается эффект фермента, расщепляющего фосфолипиды. В результате использования протеазы снижается вязкость фосфолипидной фазы масла, а кроме того возрастает подвижность фосфолипидов. Также увеличивается доступность молекул фосфолипидов, находящихся на границе раздела фосфолипидной фазы и масла, для фермента, расщепляющего фосфолипиды.
Благодаря тому, что по изобретению по меньшей мере один фермент, расщепляющий фосфолипиды, сочетается с по меньшей мере одной протеазой, можно сократить добавление ферментов, расщепляющих фосфолипиды, например фосфолипазы А1 или А2, при необходимости комбинируемой с фосфолипазой С; тем самым снижается стоимость очистки, что тоже является преимуществом способа по изобретению.
В контексте изобретения термин «триглицериды» означает триэфиры глицерина с жирными кислотами, которые служат основными составляющими природных жиров и масел как растительного, так и животного происхождения. В контексте изобретения составы, содержащие триглицериды, включают растительные или животные жиры и масла и смеси этих жиров и масел как друг с другом, так и с синтетическими или модифицированными жирами и маслами. Приведенные здесь термины определяются более подробно ниже.
В контексте изобретения термин «растительное масло» означает любое масло растительного происхождения. Из числа масел, которые можно использовать по изобретению, особенно предпочтительны следующие: соевое, рапсовое, улучшенное рапсовое, подсолнечное, оливковое, пальмовое, ятрофное, рыжиковое, хлопковое масла и их смеси. Особенно подходят для использования по изобретению необработанные/неочищенные растительные масла. В настоящем документе термин «необработанное/неочищенное» применительно к маслу означает, что этот продукт еще не подвергался дегуммированию, нейтрализации, обесцвечиванию и/или дезодорированию. В контексте способа по изобретению также можно использовать смеси двух или более необработанных масел или подвергать обработке ферментами предварительно дегуммированное и/или предварительно кондиционированное масло.
В контексте изобретения термины «фосфолипидная фаза», «фосфолипиды и сопутствующие примеси/фосфолипиды с сопутствующими примесями», «фосфолипиды и сопутствующие примеси/фосфолипидная фаза растительного масла» означают все вещества, которые в результате обработки состава, содержащего триглицериды, кислыми и/или водными растворами осаждаются как более тяжелая фаза (Michael Bokisch: Fats and Oils Handbook, AOCS Press, Champaign, Illinois, 1998, pages 428-444). В настоящем документе термины «фосфолипидная фаза», «фосфолипиды и сопутствующие примеси/фосфолипиды с сопутствующими примесями», «фосфолипиды и сопутствующие примеси/фосфолипидная фаза растительного масла» употребляются как синонимы. Использование фосфолипидной фазы растительного масла в качестве исходного материала важно, в частности, для получения лецитина, являющегося существенным компонентом фосфолипидной фазы растительного масла.
В контексте изобретения термин «предварительное дегуммирование» или «дегуммирование водной средой» означает обработку неочищенного масла водой или водным раствором кислоты для удаления, насколько это возможно, водорастворимых фосфолипидов. В контексте изобретения термины «предварительное дегуммирование» и «дегуммирование водной средой» употребляются как синонимы. Также в ходе предварительного дегуммирования, или дегуммирования водной средой после добавления к маслу кислоты возможно добавление щелочи, чтобы нейтрализовать эту кислоту. Перед добавлением фермента водную фазу отделяют. После предварительного дегуммирования содержание фосфора в неочищенном масле снижается с примерно 500-1500 ppm (например, в соевом и в рапсовом маслах) до менее 200 ppm. В результате предварительного дегуммирования из полученной фосфолипидной фазы можно выделить лецитин и/или эту фазу можно подвергнуть дальнейшей переработке для использования в пищевых целях. Однако отделение водной фазы или снижение содержания фосфора имеет тот недостаток, что снижается выход конечного продукта – очищенного масла. Переходящие в водную фазу фосфатиды (фосфолипиды) обладают эмульгирующим эффектом, из-за чего некоторое количество масла оказывается в эмульгированном виде в водной фазе и отделяется вместе с ней. Дальнейшая обработка масла может осуществляться ферментативным путем.
В контексте изобретения термин «предварительное кондиционирование» применительно к маслу означает добавление воды и/или водного раствора кислоты к необработанному маслу. Затем путем добавления щелочи, например раствора гидроксида натрия, рН устанавливается таким, чтобы могла протекать следующая далее ферментативная реакция. Лучше всего, если устанавливается рН, оптимальный для этого фермента в интервале от 3,5 до 7. После этого водную фазу не отделяют, а прямо добавляют ферменты. На данный момент присутствующие фосфолипиды и сопутствующие примеси остаются в масле или в эмульсии. Водную фазу и соответственно ферменты отделяют только после того, как ферменты подействуют на неочищенное (при необходимости предварительно кондиционированное) масло.
В одном из предпочтительных воплощений изобретения в порядке предварительного кондиционирования к неочищенному маслу может быть добавлена вода или водный раствор кислоты и при необходимости щелочь для нейтрализации кислоты, но отделения водной фазы перед добавлением ферментов не делается. Отсутствие этапа отделения водной фазы перед добавлением ферментов увеличивает выход масла. Повышение выхода продукта (масла) на 1% имеет большое экономическое значение, поскольку, например, в производстве соевого масла этот один процент соответствует приблизительно 400 000 т масла в год. Таким образом способ по изобретению в этом своем предпочтительном воплощении позволяет впрямую использовать неочищенные масла из соевых бобов или семян рапса с содержанием фосфора от 100 ppm до 1500 ppm. Кроме того, исключение этапа отделения водной фазы перед добавлением ферментов упрощает способ очистки.
В другом предпочтительном воплощении изобретения на этапе а) предлагаемого способа не добавляется никаких дополнительных эмульгирующих агентов, например додецилсульфата натрия (SDS), помимо уже присутствующих эмульгирующих- агентов, например лецитина. Аналогично, в способе по изобретению предпочтительно отсутствует добавление солей, например, хлорида кальция (CaCl2).
Для дегуммирования соевого или рапсового, или подсолнечного масла особенно предпочтительно использовать комбинацию фосфолипазы А1 из Thermomyces lanuginosus или Fusarium oxysporium и/или фосфолипазы А2 из поджелудочной железы свиньи или быка или Trichoderma reesei, или Streptomyces violaceoruber, или Aspergillus niger и/или фосфолипазы C из Pichia pastoris с протеазой из желудка или из Bacillus amyloliquefaciens, или из Bacillus subtilis, или из Bacillus licheniformis, или из Aspergillus niger, или из Aspergillus oryzae.
В контексте изобретения контактирование состава, содержащего триглицериды, с композицией по изобретению на этапе а) предлагаемого способа может происходить любым известным специалистам в данной области техники образом, подходящим для задач изобретения. Предпочтительно контактирование состава, содержащего триглицериды, с композицией по изобретению на этапе а) предлагаемого способа достигается путем смешивания указанных состава и композиции.
После контактирования состава, содержащего триглицериды, с композицией по изобретению на этапе а) предлагаемого способа смесь указанных состава и композиции предпочтительно перемешивается, в частности предпочтительно перемешивается лопастной мешалкой со скоростью от 200 об/мин до 800 об/мин, предпочтительно от 250 об/мин до 600 об/мин, наиболее предпочтительно от 300 об/мин до 500 об/мин.
Температура смеси в ходе контактирования состава, содержащего триглицериды, с композицией по изобретению на этапе а) предлагаемого способа составляет предпочтительно от 15°C до 99°C, более предпочтительно от 20°C до 95°C, еще более предпочтительно от 22°C до 75°C, также предпочтительно от 25°C до 65°C, еще более предпочтительно от 30°C до 60°C и наиболее предпочтительно от 32°C до 55°C. При этом температуру указанной смеси следует выбирать так, чтобы она не превышала температуры денатурации используемых ферментов; предпочтительно, чтобы температура указанной смеси была по меньшей мере на 5°C ниже температуры, при которой эти ферменты денатурируют.
Продолжительность контактирования состава, содержащего триглицериды, с композицией по изобретению на этапе а) предлагаемого способа составляет предпочтительно от 1 минуты до 12 часов, более предпочтительно от 5 минут до 10 часов, также предпочтительно от 10 минут до 6 часов, еще более предпочтительно от 10 минут до 3 часов.
В ходе контактирования состава, содержащего триглицериды, с композицией по изобретению на этапе а) предлагаемого способа рН смеси составляет предпочтительно от 3 до 7,5, более предпочтительно от 4 до 6 и особенно предпочтительно от 4,0 до 5,5.
Контактирование состава, содержащего триглицериды, с первым и со вторым ферментными компонентами композиции по изобретению на этапе а) предлагаемого способа может происходить одновременно или последовательно. Если указанное контактирование осуществляется последовательно, то в контексте изобретения предпочтительно, чтобы состав, содержащий триглицериды, сначала контактировал со вторым ферментным компонентом. Если состав, содержащий триглицериды, сначала контактирует со вторым ферментным компонентом композиции по изобретению, а затем с первым ее ферментным компонентом, то особенно предпочтительно, чтобы после добавления одного из указанных компонентов и до добавления другого из них смесь перемешивалась в течение от 30 минут до 300 минут, предпочтительно от 60 минут до 240 минут, также предпочтительно от 70 минут до 120 минут.
Отделение фосфолипидов и сопутствующих примесей на этапе b) способа по изобретению может происходить любым известным специалистам в данной области техники образом, подходящим для задач изобретения. Предпочтительно, однако, чтобы указанное отделение осуществлялось с помощью какого-либо устройства, обеспечивающего разделение составляющих смесей, например путем центрифугирования или фильтрации. По изобретению предпочтительно использовать следующие разделяющие устройства: сопловые сепараторы, винтовые прессы, камерные сепараторы, дисковые триерные сепараторы, тарельчатые сепараторы с закрытым барабаном, двухфазовые декантеры, трехфазовые декантеры, трехопорные центрифуги, однобуферные центрифуги, вибрационные центрифуги с колеблющейся направляющей, вибрационные центрифуги, скоростные центрифуги с непроницаемой стенкой, винтовые центрифуги с непроницаемой стенкой, трубчатые центрифуги\, корзиночные центрифуги с ножевым съемом осадка, двухступенчатые подающие центрифуги, центрифуги-грохот со шнековой выгрузкой, центрифуги для стружки, центрифуги с выворачиваемым фильтром и универсальные центрифуги. В процессе центрифугирования происходит разделение фаз состава, содержащего триглицериды. Например в одном из предпочтительных воплощений изобретения, в котором составом, содержащим триглицериды, является неочищенное растительное масло, обработанное растительное масло, фосфолипиды с сопутствующими примесями и ферментная композиция оказываются в разных фазах, которые легко отделить одна от другой.
В одном из предпочтительных воплощений изобретения фазу, содержащую фосфолипиды с сопутствующими примесями, и фазу, содержащую композицию по изобретению, отделяют от обработанного масла. В этой связи особенно предпочтительно, чтобы первый и/или второй ферментный компоненты композиции по изобретению отделялись одновременно с фосфолипидами и сопутствующими примесями.
После указанного отделения ферменты, содержавшиеся в композиции по изобретению, можно регенерировать и/или очистить и использовать, например, вновь для дегуммирования. При необходимости для регенерации ферментов можно использовать адсорбент или подходящий вариант колоночной хроматографии. Потом можно использовать некоторое количество отделенной тяжелой фазы в дальнейшем дегуммировании масла способом по изобретению.
В другом своем предпочтительном воплощении изобретение относится к способу, описанному выше и включающему также этап
с) состав, содержащий триглицериды, который получен на этапе b), вновь контактирует с первым и/или вторым ферментными компонентами композиции по изобретению.
Контактирование на этапе с) способа по изобретению предпочтительно происходит в тех же условиях, которые описаны выше для этапа а) способа по изобретению. А именно, в одном из особенно предпочтительных воплощений изобретения первый и/или второй ферментный компоненты композиции по изобретению перед новым контактированием подвергаются регенерации.
В одном из особенно предпочтительных воплощений изобретения состав, содержащий триглицериды, перед контактированием на этапе с) способа по изобретению подвергается предварительному кондиционированию, как описано выше.
В одном из особенно предпочтительных воплощений изобретения контактирование на этапе с) происходит, как уже говорилось выше, соответственно контактированию на этапе а) способа по изобретению.
В другом своем аспекте изобретение относится к применению композиции по изобретению, как описано подробнее выше, для дегуммирования составов, содержащих триглицериды.
Особенно предпочтительные воплощения изобретения описаны ниже, но эти описания никоим образом не ограничивают объем изобретения, а служат просто для лучшего объяснения.
Предпочтительное воплощение A)
a) контактирование состава, содержащего триглицериды, который выбирают из неочищенного соевого, рапсового и/или подсолнечного масла, с композицией. содержащей первый ферментный компонент, представляющий собой по меньшей мере один фермент, выбираемый из группы, состоящей из фосфолипазы А1, фосфолипазы А2 и фосфолипазы С, и второй ферментный компонент, представляющий собой по меньшей мере один фермент, выбираемый из группы эндопротеаз;
b) отделение фосфолипидов и сопутствующих примесей от состава, содержащего триглицериды, путем центрифугирования.
В одном из особенно предпочтительных воплощений способа по изобретению в его предпочтительном воплощении А) перед этапом а) указанного способа осуществляется так называемое предварительное кондиционирование, при котором неочищенное масло на отдельном этапе способа смешивают с органической кислотой, предпочтительно с лимонной кислотой, взятой в количестве от 1,5 мл на 1 литр масла до 3 мл/л. При этом температура смеси доводится до предпочтительно 35-60°C, особенно предпочтительно до 48°C. По истечении времени реакции, составляющего от 30 минут до 2 часов, предпочтительно 1 час, рН смеси доводят до 5, прибавляя в стехиометрическом количестве раствор щелочи, предпочтительно раствор гидроксида натрия, взятого в количестве предпочтительно 0,5-2 моль на 1 литр смеси, особенно предпочтительно 1 моль/л. И только после того продолжают процедуру способа по данному изобретения, осуществляя этап а).
Предпочтительное воплощение В)
a) контактирование состава, содержащего триглицериды, который выбирают из неочищенного соевого и/или рапсового масла, с композицией, содержащей первый ферментный компонент, представляющий собой по меньшей мере один фермент, выбираемый из группы, состоящей из фосфолипазы А1, фосфолипазы А2 и фосфолипазы С, и второй ферментный компонент, представляющий собой по меньшей мере один фермент, выбираемый из группы эндопротеаз, причем особенно предпочтительно, чтобы по меньшей мере один фермент первого ферментного компонента композиции по изобретению был иммобилизован на подложке;
b) отделение фосфолипидов и сопутствующих примесей от состава, содержащего триглицериды, путем центрифугирования.
В одном из особенно предпочтительных воплощений способа по изобретению в его предпочтительном воплощении В) особенно предпочтительно, чтобы ферменты первого и/или второго ферментных компонентов композиции по изобретению использовались в водной фазе (буферном растворе с рН предпочтительно в интервале от 4 до 5,5, особенно предпочтительно рН 4,0-5,0) в концентрации 0,05-5% (масса/объем). Контактирование на этапе а) осуществляется предпочтительно при температуре от 22°C до 70°C, более предпочтительно от 25°C дo 65°C.
Кроме того, в предпочтительном воплощении В) способа по изобретению осуществляется постдегуммирование путем прибавления раствора органической кислоты и/или раствора щелочи (после этапа b)). При этом температура смеси доводится предпочтительно до 35-60°C, особенно предпочтительно до 48°C. По истечении времени реакции, составляющего от 30 минут до 2 часов, предпочтительно 1 час, рН смеси доводят до 5, прибавляя раствор щелочи, предпочтительно раствор гидроксида натрия, в концентрации предпочтительно 0,5-2 мол/л, особенно предпочтительно 1 моль/л.
Предпочтительное воплощение С)
a) контактирование состава, содержащего триглицериды, который выбирают из фосфолипидов с сопутствующими примесями растительного масла, с композицией, содержащей первый ферментный компонент, представляющий собой по меньшей мере один фермент, выбираемый из группы, состоящей из фосфолипазы А1, фосфолипазы А2 и фосфолипазы С, и второй ферментный компонент, представляющий собой по меньшей мере один фермент, выбираемый из группы протеаз, предпочтительно эндопротеаз, причем особенно предпочтительно, чтобы по меньшей мере один фермент первого ферментного компонента композиции по изобретению был иммобилизован на подложке;
b) отделение фосфолипидов и сопутствующих примесей от состава, содержащего триглицериды, путем центрифугирования.
Предпочтительное воплощение D)
a) контактирование состава, содержащего триглицериды, который выбирают из неочищенного соевого и/или неочищенного рапсового масла, с композицией, содержащей первый ферментный компонент, представляющий собой по меньшей мере один фермент, выбираемый из группы, состоящей из фосфолипазы А1, фосфолипазы А2 и фосфолипазы С, и второй ферментный компонент, представляющий собой по меньшей мере один фермент, выбираемый из группы протеаз, предпочтительно эндопротеаз, причем особенно предпочтительно, чтобы по меньшей мере один фермент первого ферментного компонента композиции по изобретению был иммобилизован на подложке;
b) отделение фосфолипидов и сопутствующих примесей от состава, содержащего триглицериды, путем центрифугирования.
В одном из особенно предпочтительных воплощений способа по изобретению в его предпочтительном воплощении D) особенно предпочтительно, чтобы перед этапом а) указанного способа осуществлялось предварительное кондиционирование, при котором неочищенное масло на отдельном этапе способа смешивают с органической кислотой, взятой в количестве 50-1500 ppm, предпочтительно с лимонной кислотой, взятой в количестве 100-1200 ppm. При этом температура смеси доводится предпочтительно до 40-90°C, особенно предпочтительно до 45-85°C. По истечении времени реакции, составляющего от 5 минут до 2 часов, предпочтительно 10-30 минут, смесь кондиционируют, прибавляя раствор щелочи, предпочтительно раствор гидроксида натрия, взятого в количестве предпочтительно 0,5-5 моль на 1 литр смеси, особенно предпочтительно 1 моль/л. И только после того продолжают процедуру способа по данному изобретения, осуществляя этап а).
Кроме того, можно снизить содержание фосфатидных кислот, оставшихся растворенными в составе, содержащем триглицериды, и не расщепленных фосфолипазами, путем снижения содержания кальция и/или магния в масле, обработанном способом по изобретению. Следовательно, описанные выше предпочтительные воплощения А)-D) способа по изобретению предпочтительно также дополнять последующим этапом, на котором снижается содержание двухвалентных ионов и, соответственно, содержание фосфора в масле путем повторного добавления комплексообразующих агентов, например лимонной или фосфорной, или щавелевой, или молочной, или яблочной кислоты.
Методы
В настоящей работе применялись следующие аналитические методы.
Определение содержания фосфора в растительных маслах
Фосфор определяли методом масс-спектрометрии с индуктивно-связанной плазмой согласно стандарту DEV E-22.
Определение содержания кальция и магния в растительных маслах
Кальций и магний определяли методом масс-спектрометрии с индуктивно-связанной плазмой согласно стандарту DEV E-22.
Определение содержания свободных жирных кислот (FFA)
Содержание свободных жирных кислот определяли по поглощению гидроксида натрия или гидроксида калия в реакции омыления. Получали величину содержания (в процентах) свободных жирных кислот в исследовавшихся маслах. Определение проводили согласно стандарту DIN 53402 (метод DGF C-V 2).
Определение объема фосфолипидной фазы
Объем фосфолипидной фазы ферментативно не обработанных и ферментативно обработанных фосфолипидов и сопутствующих примесей, присутствующих в масле, определяли следующим образом. Нагревали 10-миллилитровую стеклянную центрифужную пробирку до рабочей температуры реакционной смеси, помещали образцы (2х2 мл) и центрифугировали со скоростью 3000 об/мин при контролируемой температуре в течение по меньшей мере 4 минут; в результате фосфолипидная фаза отделялась от масла. Для анализа брали пробы из верхних фаз масла. Для дополнительного документирования результатов образование фаз фотографировали.
Вариант 1
Подлежащее обработке неочищенное масло в количестве 400-600 г загружается в 1000-миллилитровый реактор Duran DN120 и отбираются пробы для анализирования. Масло в реакторе с помощью греющей пластины нагревается до температуры 40-85°С, в частности 48-80°С. После того, как нужная температура достигнута, начинают предварительное кондиционирование. Для этого к маслу добавляют определенное, зависящее от количества масла количество раствора лимонной кислоты (например, 1000 ppm). Затем смесь перемешивают с помощью диспергатора Ultraturrax® в течение 1 минуты. Или же смесь инкубируют в течение 15 минут при перемешивании со скоростью 600 об/мин, чтобы произошла реакция с кислотой. Затем добавляют определенное количество раствора гидроксида натрия [1 моль/л, остаточное количество до 2% (объем/объем) или 3% (объем/объем) за вычетом воды от добавленных раствора кислоты и препарата фермента] до тех пор, пока рН не станет около 4; затем смесь инкубируют при перемешивании в течение еще 10 минут. Когда смесь остынет до температуры 48оС, прибавляют фермент, смесь ферментов или иммобилизованный фермент, предпочтительно растворенные в воде или в буферном растворе. Добавленный ферментный препарат размешивают в смеси – для этого скорость перемешивания на время увеличивают (1 минута при 900 об/мин), после чего продолжают перемешивать при меньшей скорости.
Пробы отбирают через определенные промежутки времени с помощью пипетки. Каждую пробу помещают в стеклянную центрифужную пробирку, нагретую до температуры реакционной смеси) и центрифугируют со скоростью 3000 об/мин при контролируемой температуре по меньшей мере в течение 4 минут, чтобы отделить фосфолипидную фазу от масла. Для дополнительного документирования результатов образование фаз фотографировали; в образцах супернатанта определяли содержание фосфора, кальция и магния.
Вариант 2
К неочищенному маслу прибавляли фосфолипазы и дополнительные ферменты в подходящей комбинации в свободном или иммобилизованном виде вместе с водной фазой (буферный раствор для ферментов, рН 4-5) в количестве от 0,05% (масса/объем) до 5% (масса/объем). Эту эмульсию, состоящую из воды, ферментов (в случае иммобилизованных ферментов с подложкой) и масла тщательно перемешивают. Реакцию следует проводить при контролируемой температуре от 20°С до 70°С, лучше от 40°С до 65°С. Когда произойдет разделение фаз и сформируются твердые компоненты, их удаляют каким-либо стандартным методом, известным специалистам в данной области техники, например путем центрифугирования или фильтрации. В качестве дополнительной обработки масло дегуммируют разбавленной кислотой (например, лимонной кислотой) или раствором щелочи известным специалистам в данной области техники образом.
Вариант 3
Фосфолипидную фазу обрабатывают ферментами. В результате дегуммирования, проведенного известным специалистам в данной области техники образом, получается фосфолипидная фаза, и к ней прибавляют ферменты, причем не только фосфолипазы. Добавляемые ферменты могут быть в растворенном виде в водной фазе или суспендированными в органическом растворителе. Смесь следует нагреть до температуры 20-70°С, лучше до температуры 35-60°С. Смесь тщательно перемешивают до тех, пока процесс не закончится, что можно контролировать путем измерения вязкости или визуально - по растворению плотной до того фосфолипидной фазы. Путем центрифугирования достигается разделение фаз, так что каждую фазу можно отделить. Как правило, верхняя фаза состоит из полученного масла, средняя фаза - из фосфолипидов, а нижняя фаза является водной и содержит ферменты. Путем соответствующей обработки водной фазы можно выделить из нее ферменты и использовать их повторно. Перед дальнейшим использованием масла или содержащей ферменты водной фазы в зависимости от содержания в них двухвалентных ионов можно удалить эти ионы путем добавления комплексообразующих агентов.
Примеры и иллюстрации
Ниже изобретение разъясняется более подробно с помощью фигур и примеров. Отметим, что примеры и фигуры, приведенные в настоящем документе, носят сугубо иллюстративный характер, демонстрируя особенно предпочтительные воплощения изобретения. Ни примеры, ни фигуры не ограничивают объем изобретения.
Иллюстрации
Фиг. 1 изображает неочищенное рапсовое масло; предварительное кондиционирование; воды суммарно 3%.
Фиг. 2 изображает неочищенное рапсовое масло; предварительное кондиционирование с добавлением фермента PLA1 (0,3 Е на 1 г масла); воды суммарно 3%.
Фиг. 3 изображает неочищенное рапсовое масло; предварительное кондиционирование с добавлением ферментов PLA1 (0,3 Е на 1 г масла) и пепсина (1 Е на 1 г масла); воды суммарно 3%.
Пример 1
Для реакции по варианту 1 использовали неочищенное рапсовое масло со следующими исходными характеристиками: содержание фосфора 1200 ppm, кальция 365 ppm, магния 155 ppm, свободных жирных кислот 1,99%. Это масло подвергали предварительному кондиционированию с помощью водных растворов лимонной кислоты (1000 ppm) и гидроксида натрия (1 моль/л). Через определенные промежутки времени отбирали пробы (см. фиг. 1 и таблицу 1). По завершении реакции отделяли фосфолипидную фазу путем центрифугирования и определяли характеристики оставшегося масла методом Сокслета.
Для сравнения указанное предварительное кондиционирование проводили с добавлением фермента – фосфолипазы А1 из гриба Thermomyces lanuginosus (Sigma-Aldrich) (см. фиг. 2, таблицу 2). На фиг. 3 и в таблице 3 представлены результаты предварительного кондиционирования с добавлением ферментов PLA1 из Thermomyces lanuginosus и пепсина из слизистой желудка свиньи (Sigma-Aldrich).
Таблица 1. Содержание фосфора, кальция, магния и свободных жирных кислот (FFA) после предварительного кондиционирования; воды суммарно 3%.
Время [мин] | 10 | 60 | 120 | 180 | 240 |
Ca [ppm] | 76 | 11 | 9,5 | 9,4 | 9,5 |
Mg [ppm] | 31 | 2,8 | 1,7 | 1,6 | 1,7 |
P [ppm] | 247 | 20 | 14 | 13 | 14 |
FFA [%] | 1,73 | 1,68 | 1,72 | ||
Фосфолипиды и сопутствующие примеси [%] 3 мин |
5,8 | 6,5 | 6,0 | 6,0 | 6,0 |
Таблица 2. Содержание фосфора, кальция, магния и свободных жирных кислот (FFA) после предварительного кондиционирования с добавлением PLA1 из Thermomyces lanuginosus (0,3 Е на 1 г масла; воды суммарно 3%.
Время [мин] | 10 | 60 | 120 | 180 | 240 |
Ca [ppm] | 26 | 9,7 | 8,7 | 7,9 | 7,9 |
Mg [ppm] | 9,7 | 2,1 | 1,8 | 1,4 | 1,5 |
P [ppm] | 82 | 17 | 15 | 12 | 12 |
FFA [%] | 1,76 | 2,35 | 2,14 | ||
Примеси [%] 3 мин | 6,5 | 5,6 | 5,0 | 4,5 | 5,5 |
Таблица 3. Содержание фосфора, кальция, магния и свободных жирных кислот (FFA) после предварительного кондиционирования с добавлением PLA1 из Thermomyces lanuginosus (0,3 Е на 1 г масла) и пепсина (1 Е на 1 г масла); воды суммарно 3%.
Время[мин] | 10 | 60 | 120 | 180 | 240 |
Ca [ppm] | 55 | 10 | 9,3 | 6,4 | 5,7 |
Mg [ppm] | 23 | 3,1 | 3 | 1,9 | 1,6 |
P [ppm] | 199 | 26 | 25 | 16 | 14 |
FFA [%] | 1,86 | 2,14 | 2,17 | ||
Фосфолипиды и сопутствующие примеси [%] 3 мин |
4,3 | 5,0 | 4,2 | 4,0 | 4,0 |
Как видно на фиг. 1, при использовании для предварительного кондиционирования неочищенного масла кислоты и щелочи объем фосфолипидной фазы немалый и существенно не уменьшается, несмотря на перемешивание со скоростью 600 об/мин. Единственная фотография соответствует одному образцу. Отбор проб проводили в определенные моменты времени, а именно через 10, 60, 120, 180 и 240 минут (слева направо). В таблице 1 представлены соответствующие аналитические данные: содержание фосфора снижается через 240 минут с 247 ppm дo 14 ppm; концентрация двухвалентных ионов кальция и магния уменьшается, кальция – с 76 ppm дo 9,5 ppm; концентрация магния за все время протекания реакции снижается с 31 ppm дo 1,7 ppm. Содержание свободных жирных кислот остается практически неизменным. Предварительное кондиционирование служит подготовительным процессом для дегуммирования масла и в то же время играет роль сравнительной обработки.
При использовании фосфолипазы А1 из гриба Thermomyces lanuginosus (Sigma-Aldrich), как показано на фиг. 2, заметно уменьшение объема фосфолипидной фазы за все время протекания реакции (одна фотография на каждое измерение/пробу) В таблице 2 представлены соответствующие аналитические данные и моменты времени отбора проб. Из таблицы 2 видно, что за 240 минут протекания реакции концентрация кальция снижается с 26 ppm дo 7,9 ppm, концентрация магния снижается с 9,7 ppm дo 1.5 ppm и содержание фосфора снижается с 82 ppm дo 12 ppm; содержание свободных жирных кислот возрастает с 1,76% дo 2,14%. Возрастание содержания свободных жирных кислот и снижение содержания фосфора свидетельствуют, что белок PLA1 проявляет свою ферментативную активность, и, следовательно, дегуммирование масла проходит успешно. Возрастание уровня свободных жирных кислот отражает активность фермента PLA1, который отщепляет от молекул фосфолипидов остатки жирных кислот; также объем фосфолипидной фазы постепенно снижается. На фиг. 3 можно видеть объем фосфолипидной фазы в масле, предварительно кондиционированном с добавлением фермента PLA1 и дополнительно пепсина. Из соответствующих аналитических данных, представленных в таблице 3 ясно, что уже через 120 минут достигается снижение объема фосфолипидной фазы до 4,2%, тогда как при использовании только PLA1 объем примесей составляет 5,0% (см. таблицу 2). Кроме того, содержание ионов (см. таблицу 3) сравнимо с таковым в случае использования только фермента PLA1 (см. таблицу 2). Содержание свободных жирных кислот возрастает с 1,86% дo 2,17%, что указывает на фосфолипазную активность. Полученные результаты показывают, что использование всего лишь одного дополнительного фермента - пепсина - приводит к гораздо большему сокращению фосфолипидной фазы и, следовательно, к увеличению выхода продукта реакции – масла.
Claims (11)
1. Способ дегуммирования составов, содержащих триглицериды, который включает следующие этапы:
a) контактирование состава, содержащего триглицериды, с ферментативной композицией, включающей первый ферментативный компонент, содержащий фосфолипазу А1 и фосфолипазу А2, и второй ферментативный компонент, содержащий по меньшей мере одну протеазу, и
b) отделение фосфолипидов и сопутствующих примесей от состава, содержащего триглицериды, в котором перед контактированием на этапе а) состав, содержащий триглицериды, приводят в контакт с водой и/или водным раствором кислоты, но водную фазу перед этапом а) не отделяют.
2. Способ по п. 1, в котором первый ферментативный компонент ферментативной композиции имеет активность в интервале от 0,01 до 10 Е/г масла.
3. Способ по п. 1 или 2, в котором второй ферментативный компонент выбирают из группы, состоящей из аминопептидаз, дипептидаз, дипептидилпептидаз, трипептидилпептидаз, пептидилпептидаз, сериновых карбоксипептидаз, металлокарбоксипептидаз, цистеиновых карбоксипептидаз, омегапептидаз, сериновых эндопептидаз, цистеиновых эндопептидаз, аспарагиновых эндопептидаз, металлоэндопептидаз, треониновых эндопептидаз, эндопептидаз и их смесей.
4. Способ по любому из пп. 1-3, в котором первый ферментативный компонент и второй ферментативный компонент присутствуют в соотношении от 0,001:20 до 20:0,001.
5. Способ по любому из пп. 1-4, в котором состав, содержащий триглицериды, выбирают из растительного масла и фосфолипидной фазы растительного масла.
6. Способ по любому из пп. 1-5, в котором первый и/или второй ферментный компоненты используются в иммобилизованном виде на подложке.
7. Способ по любому из пп. 1-6, в котором контактирование на этапе а) происходит при температуре от 22 до 70°C.
8. Способ по любому из пп. 1-7, дополнительно включающий этап
c) контактирования состава, содержащего триглицериды, полученного после этапа b), с первым и/или вторым ферментными компонентами.
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
EP14000633.9 | 2014-02-21 | ||
EP14000633.9A EP2910129A1 (de) | 2014-02-21 | 2014-02-21 | Zusammensetzung für die enzymatische Ölentschleimung |
PCT/EP2015/053504 WO2015124672A1 (de) | 2014-02-21 | 2015-02-19 | Zusammensetzung für die enzymatische ölentschleimung |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2016137521A3 RU2016137521A3 (ru) | 2018-03-22 |
RU2016137521A RU2016137521A (ru) | 2018-03-22 |
RU2680690C2 true RU2680690C2 (ru) | 2019-02-25 |
Family
ID=50272254
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2016137521A RU2680690C2 (ru) | 2014-02-21 | 2015-02-19 | Композиция для ферментативного дегуммирования масла |
Country Status (7)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20170058234A1 (ru) |
EP (2) | EP2910129A1 (ru) |
CN (1) | CN106231920A (ru) |
AR (1) | AR099500A1 (ru) |
CA (1) | CA2940260A1 (ru) |
RU (1) | RU2680690C2 (ru) |
WO (1) | WO2015124672A1 (ru) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2812109C2 (ru) * | 2019-03-22 | 2024-01-22 | Карджилл, Инкорпорейтед | Переработка масла |
Families Citing this family (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2018186734A1 (en) * | 2017-04-06 | 2018-10-11 | Purac Biochem B.V. | Enzymatic degumming of unrefined triglyceride oil |
CN108118004B (zh) * | 2017-12-15 | 2021-06-25 | 北京工商大学 | 一株喜仙人掌毕赤酵母在水果采后病害防治中的应用 |
US11539641B1 (en) | 2019-10-03 | 2022-12-27 | United Services Automobile Association (Usaa) | Systems and methods to utilize edge computing to respond to latency in connected vehicles |
CN111218406B (zh) * | 2020-01-10 | 2022-03-15 | 浙江工业大学 | 卷枝毛霉mf-8及其提高土茯苓中花旗松素含量的应用 |
EP3865560A1 (en) * | 2020-02-17 | 2021-08-18 | Daniel Rafael Solis Nadal | Use of phospholipase for olive oil extraction |
CN112760248B (zh) * | 2020-12-30 | 2022-08-05 | 西南大学 | 一种可防治桃褐腐病的林肯链霉菌及其应用 |
CN113831199B (zh) * | 2021-09-29 | 2022-08-23 | 高富嘻(海南)生物科技集团有限公司 | 一种富硒营养液及其制备方法与应用 |
CN114164151A (zh) * | 2021-12-03 | 2022-03-11 | 承德宝通矿业有限公司 | 一种解磷复合菌剂及其应用 |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20050059567A1 (en) * | 2003-09-11 | 2005-03-17 | The Procter & Gamble Company | Methods of formulating enzyme cocktails, enzyme cocktails for the removal of egg-based and grass-based stains and/or soils, compositions and products comprising same |
RU2389504C2 (ru) * | 2004-05-24 | 2010-05-20 | Новозимс А/С | Ферменты для фармацевтического применения |
EA015591B1 (ru) * | 2006-09-21 | 2011-10-31 | Верениум Корпорейшн | Фосфолипазы, кодирующие их нуклеиновые кислоты и способы их получения и применения |
Family Cites Families (11)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DK206489D0 (da) * | 1989-04-28 | 1989-04-28 | Novo Nordisk As | Method of inactivating phospholipase |
DE4115938A1 (de) | 1991-05-16 | 1992-11-19 | Metallgesellschaft Ag | Enzymatisches verfahren zur verminderung des gehaltes an phosphorhaltigen bestandteilen in pflanzlichen und tierischen oelen |
US6376450B1 (en) * | 1998-10-23 | 2002-04-23 | Chanchal Kumar Ghosh | Cleaning compositions containing multiply-substituted protease variants |
WO2002000908A2 (en) * | 2000-09-25 | 2002-01-03 | Novozymes A/S | Methods for processing crustacean material |
US7226771B2 (en) | 2002-04-19 | 2007-06-05 | Diversa Corporation | Phospholipases, nucleic acids encoding them and methods for making and using them |
DE10353150A1 (de) | 2003-11-14 | 2005-06-16 | Cognis Deutschland Gmbh & Co. Kg | Verfahren zur gleichzeitigen Herstellung von Sterolen und polaren Lipiden |
WO2008024840A2 (en) * | 2006-08-22 | 2008-02-28 | Dow Agrosciences Llc | Aqueous processing of oilseed press cake |
CN100513541C (zh) * | 2006-10-18 | 2009-07-15 | 江南大学 | 一种水酶法提取亚麻籽油的方法 |
ES2523300T3 (es) | 2007-01-30 | 2014-11-24 | Bunge Oils, Inc | Desgomado enzimático utilizando una mezcla de fosfolipasas PLA y PLC |
MX2010007014A (es) | 2007-12-21 | 2010-09-30 | Danisco | Procedimiento para refinacion de aceite comestible utilizando una lipido aciltransferasa. |
US20090246319A1 (en) * | 2008-03-31 | 2009-10-01 | Kraft Foods Holdings, Inc. | Process And Formulation For Making An Egg Product With Increased Functionality And Flavor |
-
2014
- 2014-02-21 EP EP14000633.9A patent/EP2910129A1/de not_active Withdrawn
-
2015
- 2015-02-19 AR ARP150100486A patent/AR099500A1/es unknown
- 2015-02-19 CN CN201580021252.5A patent/CN106231920A/zh active Pending
- 2015-02-19 WO PCT/EP2015/053504 patent/WO2015124672A1/de active Application Filing
- 2015-02-19 EP EP15705030.3A patent/EP3113625A1/de not_active Withdrawn
- 2015-02-19 CA CA2940260A patent/CA2940260A1/en not_active Abandoned
- 2015-02-19 RU RU2016137521A patent/RU2680690C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2015-02-19 US US15/119,802 patent/US20170058234A1/en not_active Abandoned
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20050059567A1 (en) * | 2003-09-11 | 2005-03-17 | The Procter & Gamble Company | Methods of formulating enzyme cocktails, enzyme cocktails for the removal of egg-based and grass-based stains and/or soils, compositions and products comprising same |
RU2389504C2 (ru) * | 2004-05-24 | 2010-05-20 | Новозимс А/С | Ферменты для фармацевтического применения |
EA015591B1 (ru) * | 2006-09-21 | 2011-10-31 | Верениум Корпорейшн | Фосфолипазы, кодирующие их нуклеиновые кислоты и способы их получения и применения |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2812109C2 (ru) * | 2019-03-22 | 2024-01-22 | Карджилл, Инкорпорейтед | Переработка масла |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN106231920A (zh) | 2016-12-14 |
RU2016137521A3 (ru) | 2018-03-22 |
US20170058234A1 (en) | 2017-03-02 |
RU2016137521A (ru) | 2018-03-22 |
EP3113625A1 (de) | 2017-01-11 |
CA2940260A1 (en) | 2015-08-27 |
AR099500A1 (es) | 2016-07-27 |
WO2015124672A1 (de) | 2015-08-27 |
EP2910129A1 (de) | 2015-08-26 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
RU2680690C2 (ru) | Композиция для ферментативного дегуммирования масла | |
CZ298366B6 (cs) | Zpusob snižování fosfor obsahujících podílu v rostlinných olejích | |
DK2814924T3 (en) | Method for enzymatic slimming | |
EP2545150B1 (en) | Process | |
EP1071734A1 (en) | An enzymatic oil-degumming process | |
US20130085287A1 (en) | Process | |
RU2680688C2 (ru) | Способ дегуммирования композиций, содержащих триглицерид | |
RU2637134C2 (ru) | Усовершенствованный способ водно-ферментативного дегуммирования растительных масел | |
WO2013104660A1 (en) | Process for treating a plant oil comprising hydrolysing chlorophyll or a chlorophyll derivative and involving partial caustic neutralisation | |
RU2772452C2 (ru) | Способ удаления смолистых веществ из растительного масла и его рафинирования | |
US20240150672A1 (en) | Removal of unwanted mineral oil hydrocarbons | |
EP3606354B1 (en) | Enzymatic degumming of unrefined triglyceride oil | |
JP3949901B2 (ja) | リン含有分の低い米ぬか油の製造方法 | |
US9657319B2 (en) | Process for production of low saturate oils | |
WO2013150856A1 (ja) | エステル交換油脂の製造方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20200220 |