RU2676693C1 - Способ ранней генетической диагностики риска развития генитального эндометриоза - Google Patents
Способ ранней генетической диагностики риска развития генитального эндометриоза Download PDFInfo
- Publication number
- RU2676693C1 RU2676693C1 RU2017137477A RU2017137477A RU2676693C1 RU 2676693 C1 RU2676693 C1 RU 2676693C1 RU 2017137477 A RU2017137477 A RU 2017137477A RU 2017137477 A RU2017137477 A RU 2017137477A RU 2676693 C1 RU2676693 C1 RU 2676693C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- vegfa
- seq
- endometriosis
- risk
- genital endometriosis
- Prior art date
Links
- 201000009273 Endometriosis Diseases 0.000 title claims abstract description 49
- 210000004392 genitalia Anatomy 0.000 title claims abstract description 35
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 21
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 title abstract description 4
- 101150030763 Vegfa gene Proteins 0.000 claims abstract description 21
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 claims abstract description 15
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims abstract description 5
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims abstract description 5
- 238000007403 mPCR Methods 0.000 claims abstract description 5
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims abstract description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 4
- 238000011161 development Methods 0.000 abstract description 10
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 abstract description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 3
- 101000808011 Homo sapiens Vascular endothelial growth factor A Proteins 0.000 abstract description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 13
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 8
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 8
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 7
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 7
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 5
- 102000054765 polymorphisms of proteins Human genes 0.000 description 5
- 108010010234 HDL Lipoproteins Proteins 0.000 description 4
- 102000015779 HDL Lipoproteins Human genes 0.000 description 4
- 108010073929 Vascular Endothelial Growth Factor A Proteins 0.000 description 4
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 description 4
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 4
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 4
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 3
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 3
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 206010031252 Osteomyelitis Diseases 0.000 description 2
- 108010006785 Taq Polymerase Proteins 0.000 description 2
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 2
- 102100040247 Tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 238000013399 early diagnosis Methods 0.000 description 2
- 210000005168 endometrial cell Anatomy 0.000 description 2
- 208000000509 infertility Diseases 0.000 description 2
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 2
- 231100000535 infertility Toxicity 0.000 description 2
- 238000002357 laparoscopic surgery Methods 0.000 description 2
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- UDGUGZTYGWUUSG-UHFFFAOYSA-N 4-[4-[[2,5-dimethoxy-4-[(4-nitrophenyl)diazenyl]phenyl]diazenyl]-n-methylanilino]butanoic acid Chemical compound COC=1C=C(N=NC=2C=CC(=CC=2)N(C)CCCC(O)=O)C(OC)=CC=1N=NC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 UDGUGZTYGWUUSG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000003908 Cathepsin D Human genes 0.000 description 1
- 108090000258 Cathepsin D Proteins 0.000 description 1
- 206010008909 Chronic Hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 208000006545 Chronic Obstructive Pulmonary Disease Diseases 0.000 description 1
- 208000006154 Chronic hepatitis C Diseases 0.000 description 1
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 238000007400 DNA extraction Methods 0.000 description 1
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 1
- 208000005171 Dysmenorrhea Diseases 0.000 description 1
- 206010013935 Dysmenorrhoea Diseases 0.000 description 1
- 208000004483 Dyspareunia Diseases 0.000 description 1
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 206010071602 Genetic polymorphism Diseases 0.000 description 1
- 208000005176 Hepatitis C Diseases 0.000 description 1
- 206010020961 Hypocholesterolaemia Diseases 0.000 description 1
- 208000017170 Lipid metabolism disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037093 Menstruation Disturbances Diseases 0.000 description 1
- 206010027514 Metrorrhagia Diseases 0.000 description 1
- 101150028431 N5 gene Proteins 0.000 description 1
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 description 1
- 208000000450 Pelvic Pain Diseases 0.000 description 1
- 101150050863 T gene Proteins 0.000 description 1
- 102100039037 Vascular endothelial growth factor A Human genes 0.000 description 1
- 210000000683 abdominal cavity Anatomy 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000002491 angiogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003305 autocrine Effects 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000002146 bilateral effect Effects 0.000 description 1
- 238000002306 biochemical method Methods 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 1
- 238000010804 cDNA synthesis Methods 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007882 cirrhosis Effects 0.000 description 1
- 208000019425 cirrhosis of liver Diseases 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 230000030944 contact inhibition Effects 0.000 description 1
- 208000031513 cyst Diseases 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 201000006828 endometrial hyperplasia Diseases 0.000 description 1
- 210000004696 endometrium Anatomy 0.000 description 1
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000035558 fertility Effects 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 238000003205 genotyping method Methods 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 208000010710 hepatitis C virus infection Diseases 0.000 description 1
- 238000010562 histological examination Methods 0.000 description 1
- 230000013632 homeostatic process Effects 0.000 description 1
- 235000012907 honey Nutrition 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 1
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 230000001926 lymphatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 231100000544 menstrual irregularity Toxicity 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 230000003076 paracrine Effects 0.000 description 1
- 210000000505 parietal peritoneum Anatomy 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 210000004303 peritoneum Anatomy 0.000 description 1
- 230000003169 placental effect Effects 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 210000000664 rectum Anatomy 0.000 description 1
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000000472 traumatic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004291 uterus Anatomy 0.000 description 1
- ABDKAPXRBAPSQN-UHFFFAOYSA-N veratrole Chemical compound COC1=CC=CC=C1OC ABDKAPXRBAPSQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 1
- 230000009278 visceral effect Effects 0.000 description 1
- 210000000504 visceral peritoneum Anatomy 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к медицине, а именно к медицинской генетике, и позволяет прогнозировать риск развития генитального эндометриоза для индивидуумов славянской популяции Северо-Западного федерального округа. Способ включает экстракцию ДНК из крови с последующим проведением мультиплексной полимеразной цепной реакции в режиме реального времени, отличающийся тем, что проводят анализ полиморфных вариантов гена VEGFA: VEGFA_Forw SEQ ID N1, VEGFA_Rev SEQ ID N2, VEGFA_Wt SEQ ID N3, VEGFA_M SEQ ID N4. Прогнозируют повышенный риск развития генитального эндометриоза в случае выявления аллеля С и генотипа СС полиморфизма rs833061 460 С/Т SEQ ID N5 гена VEGFA. Способ прост в осуществлении, позволяет разрабатывать тактику лечения генитального эндометриоза с учетом индивидуальных (генетических) особенностей пациента.
Description
Настоящее изобретение относится к медицине, а именно к медицинской генетике и позволяет прогнозировать риск развития генитального эндометриоза у женщин репродуктивного возраста.
Эндометриоз является одной из наиболее острых проблем современной гинекологии и представляет собой гинекологическое заболевание, характеризующееся миграцией и пролиферацией клеток эндометрия за пределы полости матки, в первую очередь, в область тазовой брюшины и яичников [1]. Согласно данным научной периодики, окончательный диагноз эндометриоз часто верифицируют спустя 8 лет с момента появления первых симптомов болезни [4]. Одной из возможных причин диагностической задержки и/или ошибочного диагноза является неоптимальная первичная оценка тазовых болей пациенток [5]. Поздняя диагностика генитального эндометриоза проводит к ряду осложнений, в том числе к бесплодию и малигнизации очагов эндометриоза [1].
Клетки эндометрия переходят на интра-, ауто- и паракринный механизмы регуляции своего роста, что приводит к утрате контактного торможения и иммортализации [2]. Очаги эндометриоза становятся главными источниками цитокинов и факторов роста, таких как фактор роста эндотелия сосудов (VEGF), что способствует дальнейшему распространению эндометрия, инициируя нарушения гомеостаза органов и тканей брюшной полости [2].
VEGF, обладая мощным ангиогенным эффектом за счет стимуляции пролиферации эндотелиальных клеток, приводит к инициации ангиогенеза - одного из основных признаков развития генитального эндометриоза [3]. В результате анализа многочисленных популяционных исследований о наличии связи генных полиморфизмов с развитием эндометриоидных очагов, нами было выявлено, что функционально значимым является однонуклеотидный полиморфизм -460С/Т (rs833061) гена VEGFA.
Из уровня техники известен «Способ ранней диагностики наружного генитального эндометриоза у женщин» (RU 2247391 С2, 13.05.2003 г.), согласно которому диагностику наружного генитального эндометриоза осуществляют путем определения в пробе ткани активности катепсина D. При его значении 0,1 Ед.ферм.акт/ч и менее - диагностируют наружный генитальный эндометриоз. Недостатками данного решения является инвазивный способ взятия материала, а также высокая вероятность ошибки оператора при биопсии ткани эндометриоидного очага.
Аналогом заявляемого изобретения является «Способ диагностики наружного генитального эндометриоза» (RU 99111032 А, 20.02.2001 г.), определяющий наличие заболевания с помощью спонтанного НСТ-теста (нитросиний тетразолий-тест), оценивающего активность нейтрофилов крови пациента после инкубации клеток с плацентарным α-2 микроглобулином фертильности (ПАМГ-2). Недостатками данного способа является отсутствие возможности спрогнозировать развитие эндометриоза до его клинических проявлений. Кроме того, метод неспецифичен, так как нейтрофилы являются ключевыми участниками воспалительных процессов различного генеза.
Также аналогом является «Способ диагностики наружного генитального эндометриоза» (RU 2526823 С1, 05.08.2013 г.), включающий исследование сыворотки крови. Предложенный способ отличается тем, что биохимическим методом определяют содержание липопротеинов высокой плотности (ЛПВП). При величине 0,77 ммоль/л и выше диагностируют наружный генитальный эндометриоз. Недостатком данного метода является его неспецифичность и низкая точность, так как уровень ЛПВП, коррелирующий, по мнению авторов, с развитием эндометриоза, соответствует нормальным значениям; повышение уровня ЛПВП не является специфическим маркером эндометриоза и может наблюдаться при различных патологических состояниях, таких как хронический гепатит, цирроз печени [6, 7].
Наиболее близким по своим признакам, принятым за прототип, является «Способ прогнозирования риска развития гиперплазии эндометрия у женщин с генитальным эндометриозом» (RU 2468367 С1, 12.08.2011 г.), основанный на получении данных о полиморфизме -308G/A гена фактора некроза опухолей - a (TNF-a). Недостатками данного способа является низкая специфичность детектируемого маркера для ранней диагностики генитального эндометриоза, в связи с ассоциацией указанного полиморфизма с рядом других заболеваний: остеомиелитом [8], раком молочной железы [9], хронической обструктивной болезнью легких [10], В-клеточными опухолями лимфатической системы [11].
Задачей, на решение которой направлено заявляемое изобретение, является расширение арсенала способов прогнозирования развития генитального эндометриоза методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) в режиме реального времени у индивидуумов славянской популяции Северо-Западного федерального округа.
Технический результат использования изобретения - возможность прогнозирования риска развития эндометриоза у индивидуумов славянской популяции Северо-Западного федерального округа с учетом генетического полиморфизма rs833061 гена VEGFA.
Поставленная задача решается за счет того, что в способе ранней генетической диагностики риска развития генитального эндометриоза, включающим экстракцию ДНК из крови с последующим проведением мультиплексной полимеразной цепной реакции в режиме реального времени, согласно изобретению, проводят анализ полиморфных вариантов гена VEGFA: VEGFA_Forw SEQ ID N1, VEGFA_ Rev SEQ ID N2, VEGFA_Wt SEQ ID N3, VEGFA_M SEQ ID N4, и прогнозируют повышенный риск развития генитального эндометриоза в случае выявления аллеля С полиморфизма rs833061 гена VEGF A SEQ ID N5.
Новизна и изобретательский уровень заключаются в том, что из уровня техники неизвестна возможность раннего прогнозирования риска развития генитального эндометриоза на основе детекции полиморфизма rs833061 гена VEGFA. Нами выявлены однонуклеотидные полиморфизмы в гене VEGFA, поддерживающие развитие эндометриоидных поражений. Специфический маркер риска развития генитального эндометриоза поможет выявить патологию задолго до ее клинических проявлений, что позволит сформировать группы риска, организовать их мониторинг, а в случае заболевания, прогнозировать характер течения и предложить индивидуально подобранную терапию.
Детекция однонуклеотидных полиморфизмов может быть осуществлена методом мультиплексной ПЦР в режиме реального времени.
Способ осуществляется следующим образом:
Выделить геномную ДНК из цельной крови пациента и генотипировать методом ПЦР в режиме реального времени с использованием праймеров, фланкирующих полиморфизм и конкурирующих TaqMan-зондов. На 3'-конце зонда находится флуоресцентная метка - флуорофор (FAM, HEX), а на 5'-конце «гаситель» флуоресценции (RTQ1; BHQ-1). При близком расположении «гасителя» и флуорофора энергия, которая поглощена флуорофором, по принципу флуоресцентно-резонансного переноса переходит на «гаситель». Вследствие этого сигнал флуоресценции отсутствует. В процессе ПЦР при повышении температуры до 95°С происходит плавление цепей ДНК, праймеры гибридизуются с комплементарным участком ДНК при 63°С. В процессе амплификации ДНК-полимераза расщепляет зонд, при этом расстояние между «гасителем» и флуорофором увеличивается, инициируя флуоресценцию. В этот момент можно зарегистрировать флуоресцентный сигнал от флюорофора. Зонд с меткой FAM соответствует аллелю Т, зонд с красителем HEX - аллелю С для полиморфизма rs833061 гена VEGFA. Анализ полиморфизмов производят с использованием наборов для определения полиморфизма rs833061 гена VEGFA (ЗАО «Синтол»). В эппендорф/лунку объемом 0,2 мкл вносят 20 мкл смеси, включающей 10 мкл реакционной смеси, 10 мкл разбавителя и 0,5 мкл (2,5 Ед) Taq-полимеразы и 5 мкл ДНК образца. Емкость помещают в блок амплификатора в котором проводят считывание результатов ПЦР. Протокол ПЦР состоит из следующих этапов: нагрев реакционной смеси при 95°С - 3 мин и амплификация в течение 40 циклов в следующем режиме: 95°С - 15 сек, 63°С - 40 сек.
Таким образом, образец считается положительным на наличие полиморфного аллеля rs833061 гена VEGFA:
- если в результате ПЦР зарегистрирована флуоресценция по каналу FAM, то генотип гомозиготен по аллелю Т, при этом регистрируют генотип ТТ в участке rs833061 гена VEGFA.
- если в результате ПЦР зарегистрирована флуоресценция по каналам FAM и HEX, генотип гетерозиготен (ТС), при этом регистрируют генотип ТС в участке rs833061 гена VEGFA.
- если в результате ПЦР зарегистрирована флуоресценция по каналу HEX, то генотип гомозиготен по аллелю С, при этом регистрируют генотип СС в участке rs833061 гена VEGFA, что соответствует повышенному риску развития генитального эндометриоза.
Оборудование: амплификатор LightCycler 480 Instrument II («Roche», Швейцария) со стандартным программным обеспечением, дозаторы на 10 мкл, 100 мкл, 200 мкл, 1000 мкл («Biohit», Финляндия); эппендорфы на 0,2 мл, 1,5 мл. Реактивы: Набор для выделения ДНК «ДНК-Экстран-1»; набор реагентов для определения однонуклеотидного полиморфизма rs833061 rcHaVEGFA, состоящий из реагентов: 2,5× Разбавитель, 2,5× Реакционная смесь, Taq ДНК-полимераза, отрицательный контроль и положительный контроль для генотипов Т/Т, Т/С С/С.Реактивы хранят при температуре -20°С.
Материалом для исследования служила периферическая венозная кровь, полученная от 136 женщин (средний возраст 35,3±8,8 лет). В контрольную группу были включены 76 условно здоровых женщины (средний возраст 29,6±9,7 лет), в группу исследования - 60 женщин с диагнозом генитальный эндометриоз (средний возраст 32,1±12,4 лет).
Диагноз эндометриоза во всех случаях был поставлен в результате тщательного обследования висцеральной и париетальной брюшины на наличие гетеротопических эндометриоидных очагов в ходе лапароскопии, а также после гистероскопического исследования матки. Диагноз подтверждался с помощью гистологического исследования.
При поступлении в клинику большинство пациенток (59,40%) предъявляли жалобы на бесплодие (97,3% - первичное, 2,7% - вторичное), 49,02% - на болевой синдром, 33,33% - на дисменорею, 31,37% - на диспареунию, 19,61% - на нарушение менструального цикла по типу мено- и метроррагии. Наиболее часто во время лапароскопии диагностировались эндометриоидные кисты - в среднем в 83,7% (из них двусторонние в 30% случаев). Частота ретроцервикального эндометриоза не превышала 16,21%). Чаще встречался умеренно выраженный спаечный процесс органов малого таза: I-II степень составила 35,29%, III степень и IV степень - соответственно 9,81% и 3,92%.
За критерии включения принят возраст 18-45 лет, диагноз «генитальный эндометриоз» (подтвержденный лапароскопически и гистологически). Обе группы принадлежали к славянской популяции Северо-Западного федерального округа (г. Калининград и г. Санкт-Петербург). Со всеми пациентками было подписано информированное согласие на исследование.
На основании анамнеза и других полученных данных, проведена оценка взаимосвязи полиморфных вариантов гена VEGFA с повышенным риском развития генитального эндометриоза.
Генотипирование проводилось методом ПЦР в режиме реального времени с использованием амплификатора LightCycler 480 Instrument II («Roche», Швейцария) и наборов для определения полиморфизма rs833061 renaVEGFA с праймерами For: 5'-gagagtgaggacgtgt -3'; Rev 5'-gggagagggacacacagatc-3'; Probe1: (FAM)-tgagggTgttggagcg-(RTQ1); Probe2: (R6G)-ttgagggCgttggagc-(BHQ2) (ЗАО «Синтол»).
Статистическая обработка полученных результатов была осуществлена с помощью программы Statistica 10. Проверку на соответствие распределению частот генотипов равновесию Харди-Вайнберга, а также сравнение частот аллелей и генотипов в выборках проводили с применением критерия χ2, принимая уровень статистической значимости за 95% (р<0,05). Об ассоциации аллелей или генотипов (частоты которых в группах обследуемых достоверно отличались) с риском развития эндометриоза судили по величине отношения шансов (OR) с 95% доверительным интервалом (95% CI). Значения OR рассчитывали с помощью программы «Калькулятор для расчета отношения шансов» (http://gen-exp.ru/calculator_or.php). Ассоциация с высоким риском определялась, если значение OR было больше (>) 1, при величине OR меньше (<) 1 аллель или генотип был ассоциирован с пониженным риском развития генитального эндометриоза.
В проведенном исследовании установлена ассоциация аллеля С и генотипа СС полиморфизма rs833061460 С/Т гена VEGFA с повышенным риском развития генитального эндометриоза в славянской популяции Северо-Западного федерального округа (OR=2,11, 95%CI: 1,12-3,98, р=0,02) и (OR=2,57, 95%CI: 1,03-6,41, р=0,002), соответственно. Обнаружена взаимосвязь генотипа ТТ полиморфизма rs833061460 С/Т гена VEGFA с пониженным риском развития генитального эндометриоза (OR=0,43, 95%CI: 0,14-1,29, р=0,024).
Учитывая полученные данные, полиморфизм может быть использован для эффективной диагностики выявления предрасположенности к генитальному эндометриозу.
Таким образом, установлена ассоциация аллеля С и генотипа СС полиморфизма - rs833061460C/T гена VEGFA с повышенным риском развития генитального эндометриоза в два раза в славянской популяции Северо-Западного федерального округа, что свидетельствует о его значимом вкладе в патогенез развития данного заболевания.
Современные клинические методы диагностики эндометриоза являются недостаточными для своевременного принятия терапевтических или профилактических мер, направленных на предотвращение негативных последствий заболевания. Сущность изобретения заключается в определении полиморфизма гена rs833061460C/T гена VEGFA и прогнозе повышенного риска развития генитального эндометриоза до его клинических проявлений в случае выявления аллелей С полиморфизма rs833061460C/T гена VEGFA. Так, наличие аллеля С и генотипа СС полиморфизма rs833061460C/T гена VEGFA ассоциировано с повышенным риском развития генитального эндометриоза в два раза.
Способ прост в осуществлении, в его основе лежит мультиплексный ПЦР анализ полиморфизмов гена VEGFA с последующим расчетом отношения шансов риска развития генитального эндометриоза, что позволяет разрабатывать тактику лечения генитального эндометриоза с учетом индивидуальных (генетических) особенностей пациента.
Список использованной литературы
1. Moradi М., Parker М., Sneddon A., Lopez V., Ellwood D.Impact of endometriosis on women's lives: a qualitative study // BMC Womens Health. - 2014. - V. 14. - P. 123.
2. Наследникова И.О., Ильяди Е.Б., Уразова О.И., Ткачев В.Н., Евтушенко И.Д., Новицкий В.В., Кублинский К.С. Полиморфизм гена Р53 при генитальном эндометриозе // Фундаментальные исследования. - 2013. - №3-1. - С. 134-137.
3. Bhanoori М, ArvindBabu К., Pavankumar Reddy N.G., Lakshmi Rao К., Zondervan К., Deenadayal M., Kennedy S., Shivaji S. The vascular endothelial growth factor (VEGF)+405G>C 5'-untranslated region polymorphism and increased risk of endometriosis in South Indian women: a case control study // Hum Reprod. - 2005. - V. 20 (7). - P. 1844-1849.
4. Ballard K., Lowton K., Wright J. What's the delay? A qualitative study of women's experiences of reaching a diagnosis of endometriosis // FertilSteril. - 2006. - V. 86 (5). - P. 1296-1301.
5. Hudelist G., Tuttlies F., Rauter G., Pucher S., Keckstein J. Can transvaginal sonography predict infiltration depth in patients with deep infiltrating endometriosis of the rectum? // Hum Reprod. - 2009. - V. 24 (5). - P. 1012-1017.
6. Рыжкина A.B. Оптимизация терапии хронического гепатита С с нарушениями липидного обмена: автореф. дис. на соиск. учен. степ. канд. мед. наук (14.00.10) / Анна Владимировна Рыжкина; ФГУН «Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии». - Москва, 2010. - 21 с.
7. Телепнева Е.Ю. Оценка эффективности транспорта холестерина при гипохолестеринемии // Вестник витебского государственного медицинского университета. - 2009. - Т. 8 (3). - С. 27-35.
8. Мироманов A.M., Миронова О.Б., Мироманова Н.А., Трубицын М.В. Влияние полиморфизма гена TNFA-308G > А на экспрессию TNF-A у больных с развитием хронического травматического остеомиелита в забайкальском крае // Фундаментальные исследования. - 2015. - №1 (4). - С. 783-788.
9. Маливанова Т.Ф., Юрченко В.А., Скоромыслова Е.В., Мазуренко Н.Н. Влияние полиморфизма -308(G/A)TNF на общую выживаемость больных раком молочной железы // Вестник РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН. - 2012. - Т. 23 (1). - С. 40-44.
10. Сеитова Г.Н., Букреева Е.Б., Буйкин С.В., Бычкова О.Ю., Дементьева Е.А., Нестерович С.В., Пузырев В.П. Роль полиморфизма в промоторной области гена TNF в развитии хронической обструктивной болезни легких // Бюллетень сибирской медицины. - 2004. - №2. - С. 29-34.
11. Назарова Е.Л., Шардаков В.И., Демьянова В.Т., Загоскина Т.П., Зотина Е.Н. Об оценке полиморфизма генов цитокинов при В-клеточных опухолях лимфатической системы // Медицинская иммунология. - 2014. - Т. 16 (5). - С. 431-436.
Claims (1)
- Способ прогнозирования риска развития генитального эндометриоза для индивидуумов славянской популяции Северо-Западного федерального округа, включающий экстракцию ДНК из крови с последующим проведением мультиплексной полимеразной цепной реакции в режиме реального времени, отличающийся тем, что проводят анализ полиморфных вариантов гена VEGFA: VEGFA_Forw SEQ ID N1, VEGFA_Rev SEQ ID N2, VEGFA_Wt SEQ ID N3, VEGFA_M SEQ ID N4, и прогнозируют повышенный риск развития генитального эндометриоза в случае выявления аллеля С и генотипа СС полиморфизма rs833061 460 С/Т SEQ ID N5 гена VEGFA.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2017137477A RU2676693C1 (ru) | 2017-10-25 | 2017-10-25 | Способ ранней генетической диагностики риска развития генитального эндометриоза |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2017137477A RU2676693C1 (ru) | 2017-10-25 | 2017-10-25 | Способ ранней генетической диагностики риска развития генитального эндометриоза |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2676693C1 true RU2676693C1 (ru) | 2019-01-10 |
Family
ID=64958623
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2017137477A RU2676693C1 (ru) | 2017-10-25 | 2017-10-25 | Способ ранней генетической диагностики риска развития генитального эндометриоза |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2676693C1 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2809910C1 (ru) * | 2023-06-22 | 2023-12-19 | Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Белгородский государственный национальный исследовательский университет" (НИУ "БелГУ") | Способ прогнозирования риска развития эндометриоза у женщин без отягощенной наследственности с использованием генетических данных |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2247391C2 (ru) * | 2003-05-13 | 2005-02-27 | ГУ "Ивановский научно-исследовательский институт материнства и детства им. В.Н. Городкова" МЗ РФ | Способ ранней диагностики наружного генитального эндометриоза у женщин |
| RU2291439C1 (ru) * | 2005-07-04 | 2007-01-10 | Федеральное государственное учреждение "Ивановский научно-исследовательский институт материнства и детства им. В.Н. Городкова Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию" | Способ диагностики наружного генитального эндометриоза у женщин с бесплодием |
| RU2334987C1 (ru) * | 2007-04-12 | 2008-09-27 | Людмила Васильевна Дикарева | Способ диагностики патологии эндометрия у больных миомой матки |
| RU2363001C1 (ru) * | 2008-01-21 | 2009-07-27 | Федеральное Государственное Учреждение Ростовский НИИ акушерства и педиатрии Федерального агентства по высокотехнологичной медицинской помощи | Способ диагностики наружного генитального эндометриоза |
| RU2468367C1 (ru) * | 2011-08-12 | 2012-11-27 | Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Белгородский государственный национальный исследовательский университет" | Способ прогнозирования риска развития гиперплазии эндометрия у женщин с генитальным эндометриозом |
-
2017
- 2017-10-25 RU RU2017137477A patent/RU2676693C1/ru active
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2247391C2 (ru) * | 2003-05-13 | 2005-02-27 | ГУ "Ивановский научно-исследовательский институт материнства и детства им. В.Н. Городкова" МЗ РФ | Способ ранней диагностики наружного генитального эндометриоза у женщин |
| RU2291439C1 (ru) * | 2005-07-04 | 2007-01-10 | Федеральное государственное учреждение "Ивановский научно-исследовательский институт материнства и детства им. В.Н. Городкова Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию" | Способ диагностики наружного генитального эндометриоза у женщин с бесплодием |
| RU2334987C1 (ru) * | 2007-04-12 | 2008-09-27 | Людмила Васильевна Дикарева | Способ диагностики патологии эндометрия у больных миомой матки |
| RU2363001C1 (ru) * | 2008-01-21 | 2009-07-27 | Федеральное Государственное Учреждение Ростовский НИИ акушерства и педиатрии Федерального агентства по высокотехнологичной медицинской помощи | Способ диагностики наружного генитального эндометриоза |
| RU2468367C1 (ru) * | 2011-08-12 | 2012-11-27 | Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Белгородский государственный национальный исследовательский университет" | Способ прогнозирования риска развития гиперплазии эндометрия у женщин с генитальным эндометриозом |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| ZHEN ZHEN ZHAO et al. Polymorphisms in the vascular endothelial growth factor gene and the risk of familial endometriosis. Molecular Human Reproduction, Vol.14, No.9 pp. 531-538, 2008. * |
| ТИХОНЧУК Е.Ю. и др. Омиксные технологии в исследовании патогенеза эндометриоза (обзор литературы). Проблемы репродукции. 2016; 22(5): 110-122. * |
| ТИХОНЧУК Е.Ю. и др. Омиксные технологии в исследовании патогенеза эндометриоза (обзор литературы). Проблемы репродукции. 2016; 22(5): 110-122. ZHEN ZHEN ZHAO et al. Polymorphisms in the vascular endothelial growth factor gene and the risk of familial endometriosis. Molecular Human Reproduction, Vol.14, No.9 pp. 531-538, 2008. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2809910C1 (ru) * | 2023-06-22 | 2023-12-19 | Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Белгородский государственный национальный исследовательский университет" (НИУ "БелГУ") | Способ прогнозирования риска развития эндометриоза у женщин без отягощенной наследственности с использованием генетических данных |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US10947593B2 (en) | Biomarkers for premature birth | |
| Wang et al. | Aberrant methylation of the 3q25 tumor suppressor gene PTX3 in human esophageal squamous cell carcinoma | |
| EP2831270A1 (en) | Biomarker for bladder cancer | |
| TW202204638A (zh) | 結直腸癌的早期檢測、預測治療反應和預後之方法 | |
| US11149315B2 (en) | Method for predicting cervical shortening and preterm birth | |
| RU2676693C1 (ru) | Способ ранней генетической диагностики риска развития генитального эндометриоза | |
| CN110029165B (zh) | 一种用于检测子宫内膜癌易感相关遗传标记的试剂盒 | |
| RU2558854C1 (ru) | Способ прогнозирования риска развития эндометриоза | |
| US20190360061A1 (en) | Methods and kits for identifying pre-cancerous colorectal polyps and colorectal cancer | |
| US10954564B2 (en) | Combinations of cell free nucleic acids | |
| EP3162899A1 (en) | Biomarker for breast cancer | |
| RU2453850C2 (ru) | Способ прогнозирования характера поражения матки миоматозными узлами | |
| CN110129438B (zh) | 一种用于检测子宫内膜癌易感相关遗传分子标记的试剂盒 | |
| RU2616246C1 (ru) | Способ прогнозирования риска развития миоматозных узлов больших размеров у пациенток с миомой матки | |
| RU2740803C1 (ru) | Способ прогнозирования осложненного течения родового акта у юных первородящих женщин | |
| WO2022237855A1 (zh) | 子宫内膜癌的生物标记物和其应用 | |
| RU2795244C1 (ru) | Способ прогнозирования риска развития рака молочной железы у женщин с ожирением | |
| KR102152893B1 (ko) | 간세포암종 특이 mlh1 유전자에 대한 순환 종양 dna 변이 검출 용도 | |
| RU2650988C1 (ru) | Способ прогнозирования риска развития гиперпластических процессов эндометрия на основе генетических данных | |
| US20210095347A1 (en) | Combinations of cell free nucleic acids | |
| RU2678970C1 (ru) | Способ прогнозирования риска развития сочетания миомы матки и гиперпластических процессов эндометрия | |
| RU2650990C1 (ru) | Способ прогнозирования риска развития миомы матки | |
| CN116622842A (zh) | 一种用于肺腺癌非创早期诊断、药效评估的分子标志物及试剂盒 | |
| CN118028469A (zh) | 用于检测卵巢癌的组合物及其用途 | |
| Paliychuk et al. | THE FREQUENCY OF DETECTION OF ESR1 GENE POLYMORPHISMS IN PATIENTS WITH BENIGN PATHOLOGY OF FEMALE REPRODUCTIVE SYSTEM ORGANS WITH CANCER POSITIVE FAMILY HISTORY |