RU2675995C1 - Штамм "ВН-3" вируса гепатита утят типа I рода Avihepatovirus семейства Picornaviridae для производства вакцинных препаратов и диагностических наборов - Google Patents

Штамм "ВН-3" вируса гепатита утят типа I рода Avihepatovirus семейства Picornaviridae для производства вакцинных препаратов и диагностических наборов Download PDF

Info

Publication number
RU2675995C1
RU2675995C1 RU2018117223A RU2018117223A RU2675995C1 RU 2675995 C1 RU2675995 C1 RU 2675995C1 RU 2018117223 A RU2018117223 A RU 2018117223A RU 2018117223 A RU2018117223 A RU 2018117223A RU 2675995 C1 RU2675995 C1 RU 2675995C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
ducklings
strain
type
virus
hepatitis virus
Prior art date
Application number
RU2018117223A
Other languages
English (en)
Inventor
Борис Борисович Трефилов
Нина Васильевна Никитина
Лариса Ивановна Явдошак
Михаил Михайлович Трубицын
Original Assignee
Федеральное государственное бюджетное научное учреждение Федеральный научный центр "Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт птицеводства" Российской академии наук
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Федеральное государственное бюджетное научное учреждение Федеральный научный центр "Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт птицеводства" Российской академии наук filed Critical Федеральное государственное бюджетное научное учреждение Федеральный научный центр "Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт птицеводства" Российской академии наук
Priority to RU2018117223A priority Critical patent/RU2675995C1/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2675995C1 publication Critical patent/RU2675995C1/ru

Links

Classifications

    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12Viral antigens
    • A61K39/125Picornaviridae, e.g. calicivirus
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N7/00Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

Настоящее изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии. Предложен штамм «ВН-3» вируса гепатита утят типа I рода Avihepatovirus семейства Picornaviridae, выделенный от клинически больных утят, адаптированный к утиным эмбрионам и культуре клеток и аттенуированный в отношении утят. Полученный штамм депонирован в Государственную коллекцию вирусов в НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского ФГБНУ «ФНИЦЭМ им. Н.Ф. Гамалеи» Минздрава России под № 2859. Охарактеризованный штамм обладает высокой биологической, антигенной и иммуногенной активностью, найдет широкое применение в промышленном утководстве в качестве основного компонента инактивированных эмульгированных вакцинных препаратов против вирусного гепатита утят типа I и в изготовлении диагностических наборов иммуноферментного анализа. 4 табл., 3 пр.

Description

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии, а точнее к производству вакцинных препаратов против вирусного гепатита утят типа I и может быть применено для изготовления диагностических наборов.
Вирусный гепатит утят типа I (ВГУ-I) - малоизученная сверхострая контагиозная болезнь утят до 6-недельного возраста и латентно протекающая у уток, характеризующаяся преимущественным поражением печени и высокой смертностью среди молодняка от 30 до 95% [1, 3, 4, 5, 6, 7]. Экономический ущерб, причиняемый ВГУ-I, складывается из убытков гибели и выбраковки птицы, потери мясной продуктивности, нарушения племенной работы и затрат на проведение оздоровительных мероприятий. В настоящее время болезнь распространена по всему миру и включена МЭБ в перечень особо опасных болезней Санитарного кодекса наземных животных (2010).
Возбудитель ВГУ-I - РНК - содержащий вирус, принадлежащий к роду Avihepatovirus семейства Picornaviridae [8].
Важным средством борьбы против вирусного гепатита утят типа I, заболевания причиняющего значительный ущерб промышленному утководству, является вакцинопрофилактика. Технология производства вакцин предусматривает лиофилизацию препарата, воздействие химического агента, поэтому штамм вируса должен обладать выраженной устойчивостью к действию температурных факторов и процессу инактивации, не изменяя при этом антигенную структуру вируса.
В качестве прототипа выбран штамм «КМИЭВ-16» вируса гепатита утят [2]. Штамм выделен от утят 10 - суточного возраста при остром течении вирусного гепатита утят на 11-12 - суточных утиных эмбрионах при инокуляции суспензии в аллантоисную полость. Штамм вызывает гибель утиных эмбрионов, отставание в росте и развитии зародыша, нарушение его гемодинамики, воспалительно-дегенеративные изменения в печени и сердечной мышце. Штамм индуцирует цитопатический эффект литического типа в культуре клеток утиных эмбрионов. Физико-химические, биологические и морфологические маркеры прототипа представлены в табл.1.
Figure 00000001
В Республике Беларусь указанный штамм используется для производства аттенуированной вакцины против вирусного гепатита утят типа I [4]. Однако, штамм приведенного прототипа уступает по биологической и антигенной активности.
Задачей изобретения является получение вакцинного штамма вируса гепатита утят типа I, обладающего высокой антигенной и иммуногенной активностью, как до и после инактивации, в сочетании со способностью к высокому уровню репродукции в культуре клеток и утиных эмбрионах, отсутствием реактогенности для утят и сохранением термоустойчивости.
Поставленная задача достигается штаммом «ВН-3» вируса гепатита утят типа I рода Avihepatovirus семейства Picornaviridae для производства вакцинных препаратов и диагностических наборов, депонированным в Государственной коллекции вирусов в НИИ вирусологии им. Д.И.Ивановского, ФГБНУ «ФНИЦЭМ им. Н.Ф.Гамалеи» Минздрава России под №2859.
Вакцинный штамм адаптирован к утиным эмбрионам и культуре клеток утиных фибробластов, при этом сохраняет патогенность для эмбрионов и иммуногенность для утят.Штамм «ВН-3» соответствует по антигенной специфичности в 98% случаев эталонному и эпизоотическим изолятам вируса гепатита, циркулирующим в РФ.
Характеристика штамма «ВН-3»
Морфологическая характеристика
Вирионы сферической формы, размером 30-40 нм, нуклеокапсид содержит РНК.
Патогенные свойства
В опытах по определению патогенности заявляемого штамма использовали 11-12 - суточные утиные эмбрионы и утят 2 - суточного возраста. Утиные эмбрионы инфицировали в аллантоисную полость в дозе 3,0 lg ЭЛД50/0,2 см3, а утят внутримышечно, подкожно и интранозально в дозе 3,0 lg ЭЛД50/0,2 см3. Эмбрионы инкубировали в течение 72 часов при температуре (37±0,5)°С и относительной влажности 60-70%. За утятами наблюдали в течение 30 сут.
Результаты изучения патогенности штамма «ВН-3» для утиных эмбрионов представлены в табл. 2, а утят в табл. 3.
Figure 00000002
Figure 00000003
Данные, представленные в таблице 2, свидетельствуют о том, что при инокуляции в аллантоисную полость вируса гепатита штамма «ВН-3» вызывает 70-80% гибели утиных эмбрионов.
Данные, представленные в таблице 3, свидетельствуют о том, что штамм «ВН-3» не вызывает гибель и клиническое проявление болезни у утят.
Репликация в культуре клеток
Штамм репродуцируется в культуре утиных фибробластов и клетках почки утиного эмбриона, вызывая острую форму инфекции с выраженным цитопатическим эффектом через 72 - 96 часов и 48 - 72 часа соответственно и накапливается в титрах 4,5±0,25 и 5,75±0,3 lg ТЦД50/СМ3.
Терморезистентность
Штамм «ВН-3» термостабилен. Константа скорости инактивации (lgK=2,3Vt/VO:t) при температуре 56°С в течение 60 мин равняется 2,8 10-2lg.
Устойчивость к химическим агентам
Штамм «ВН-3» вируса гепатита не чувствителен к инактивирующему действию (20% конечная концентрация) эфира и хлороформа. Формальдегид в 0,1% концентрации при 37°С в течение 24 часов инактивировал инфекционную активность штамма с кинетической скоростью равной 5,9×10-4lg/ч.
Стерильность
Штамм «ВН-3» вируса гепатита свободен от контаминации бактериями, микоплазмами, грибами и другими вирусами.
Антигенная активность
Штамм «ВН-3» вируса гепатита индуцирует у утят выработку штаммспецифических вируснейтрализующих антител, а инактивированный вируссодержащий материал в адъювантной форме, введенный парентерально утятам, инициирует синтез антител в высоких титрах, регистрируемых в реакции нейтрализации (РН) и иммуноферментном анализе (ИФА), табл. 4.
Figure 00000004
Стабильность
Штамм «ВН-3» стабилен, его свойства сохраняются неизменными в течение 10 пассажей в культуре клеток и на утиных эмбрионах.
Сущность предлагаемого изобретения пояснена примерами его использования:
Пример 1. Получение антигена.
Вируссодержащий материал разводили до оптимальной заражающей дозы, равной 3,0 lg ЭЛД50/0,2 см3. Инокулировали 11-12 - суточные утиные эмбрионы в аллантоисную полость в оъеме 0,2 см3. Инфицированные эмбрионы инкубировали в термостате при температуре (37,0±0,5)°С и относительной влажности 60-70% в течение 72 ч. Овоскопирование проводили два раза в сутки. Эмбрионы, погибшие в течение 24 часов после заражения, выбраковывали, а павшие эмбрионы в последующие сутки хранили в холодильнике при температуре 4-6°C.Охлажденные эмбрионы вскрывали в асептических условиях, а хориоаллантоисную жидкость и зародышей собирали во флаконы емкостью 250-450 см3. Вируссодержащий материал гомогенизировали при 3000-5000 об/мин и центрифугировали при 3000 оборотов в течение 30 минут. Надосадочную жидкость проверяли наотсутствие контаминации высевами на среды: МПБ, МПА, МППБ под вазелиновым маслом и бульон Сабуро, а также на биологическую активность штамма вируса. Вируссодержащий материал с активностью не ниже 6,5-7,0 lg ЭЛД50/СМ3 хранили при температуре минус 20°С и использовали для изготовления вакцинных и диагностических препаратов.
Пример 2. Изготовление инактивированной вакцины.
Для приготовления инактивированной эмульгированной вакцины против вирусного гепатита утят типа I использовали штамм «ВН-3», полученный по методике, указанной в примере 1. Инактивацию вируссодержащего материала проводили теотропином (1,8,3,6-диэндометилен-1,3,6,8-тетраазациклодекан) в конечной концентрации 0,15% в течение 24 ч при температуре (37,0±0,5)°Си постоянном перемешивании. Контроль полноты инактивации вируса проводили методом трех последовательных пассажей на развивающихся утиных эмбрионах.
Эмульсию получали методом гомогенизации водного и масляного компонентов в соотношении 30:70 с помощью гомогенизатора Ultraturrax-T-25. В качестве масляной фазы использовали адъювант MontanidISA 70 фирмы «SEPPIC». Полученную вакцину контролировали на стерильность, стабильность эмульсии, безвредность и антигенную активность.
Пример 3. Определение антигенной активности вакцины.
Для изготовления инактивированной вакцины использовали вируссодержащий материал с биологической активностью равной 6,5 lg ЭЛД50/СМ3, определенной до инактивации. Утки взрослые в количестве 20 голов были разделены на 2 группы по 10 голов в каждой. Подопытные утки в количестве 10 голов вакцинировали подкожно в среднюю треть шеи в объеме 0,5 см3. Утки - 10 голов оставили в качестве контроля. Титр антител к вирусу гепатита в сыворотках крови определяли через 28 суток после вакцинации методом ИФА. Вакцину считали антигенно активной, если титры специфических антител к вирусу гепатита утят типа I были не ниже 10log2 при отсутствии антител в сыворотках крови у уток в контрольной группе.
Заявленный штамм «ВН-3» вируса гепатита утят типа I обладает высокой биологической, антигенной и иммуногенной активностью, найдет широкое применение в промышленном утководстве в качестве основного компонента вакцинных препаратов против вирусного гепатита утят типа I и в изготовлении диагностических наборов ИФА для контроля напряженности иммунитета.
Источники информации
1. Бубашко О.А. Вирусный гепатит утят в Республике Беларусь и его профилактика / О.А. Бубашко // Эпизоотология, иммунология, фармакология и санитария. - 2005 а. - №1. - С.25-28.
2. Бубашко О.А. Физико-химические, антигенные и иммуногенные свойства штамма КМИЭВ-16 вируса гепатита утят: Автореф. дис... канд. вет.наук: спец. 16.00.03 /О. А. Бубашко/ Ин-т экспер.вет.им. С.Н. Вышелесского. - Минск, 2005. - 19 с.
3. Князев В.П. Болезни водоплавающих птиц: монография / В.П. Князев // Владимир, 2010. - 160 с.
4. Курилович A.M. Иммуноморфогенез у утят, вакцинированных против вирусного гепатита, и влияние на него натрия тиосульфата: автореферат дис... канд. ветеринар, наук. / А. М. Курилович. - Витебск, 2003. -20 с.
5. Паникар И.И. Вирусный гепатит утят: эпизоотология, диагностика и специфическая профилактика / И.И. Паникар // Пробл. зооинженерии и вет.мед.: сб. науч. статей, повящ. 150-летию со дня основания Харьковского зооветеринарного ин-та. - Харьков, 2001. -Вып.9 (33). - Ч. 1. - С.24-27.
6. Kim М.С.Differential diagnosis between type-specific duck hepatitis virus type 1 (DHV-1) and multiplex polymerase chain reaction / M.C. Kim, Y. K. Kwon, S.J. Joh [et al.] // Avian Pathology. - 2008. - V. 37. - P. 171-177.
7. Kim M.C. Development of duck hepatitis A virus type 3 vaccine and it's use to protect ducklings against infections / M.C. Kim, M.J. Kim, Y.K. Kwon [et al.] // Vaccine. - 2009. - V. 27. - P. 6688-6694.
8. Tseng C.H, Knowles N.J., Tsai H.J. Molecular analysis of duck hepatitis virus type I indicates that it should be assigned to a new genus/C. H. Tseng, N.J. Knowles, H.J. Tsai// Virus Research. - 2007, - V. 123. - 190-203.

Claims (1)

  1. Штамм «ВН-3» вируса гепатита утят типа I рода Avihepatovirus семейства Picornaviridae для производства инактивированных эмульгированных вакцинных препаратов против вирусного гепатита утят типа I и диагностических наборов, депонированый в Государственной коллекции вирусов в НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского ФГБНУ «ФНИЦЭМ им. Н.Ф. Гамалеи» Минздрава России под №2859.
RU2018117223A 2018-05-08 2018-05-08 Штамм "ВН-3" вируса гепатита утят типа I рода Avihepatovirus семейства Picornaviridae для производства вакцинных препаратов и диагностических наборов RU2675995C1 (ru)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2018117223A RU2675995C1 (ru) 2018-05-08 2018-05-08 Штамм "ВН-3" вируса гепатита утят типа I рода Avihepatovirus семейства Picornaviridae для производства вакцинных препаратов и диагностических наборов

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2018117223A RU2675995C1 (ru) 2018-05-08 2018-05-08 Штамм "ВН-3" вируса гепатита утят типа I рода Avihepatovirus семейства Picornaviridae для производства вакцинных препаратов и диагностических наборов

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2675995C1 true RU2675995C1 (ru) 2018-12-25

Family

ID=64753623

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2018117223A RU2675995C1 (ru) 2018-05-08 2018-05-08 Штамм "ВН-3" вируса гепатита утят типа I рода Avihepatovirus семейства Picornaviridae для производства вакцинных препаратов и диагностических наборов

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2675995C1 (ru)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110129285A (zh) * 2019-05-29 2019-08-16 商丘美兰生物工程有限公司 一种高效筛选鸭肝炎病毒毒种的方法
RU2712948C1 (ru) * 2019-06-27 2020-02-03 Федеральное государственное бюджетное научное учреждение Федеральный научный центр "Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт птицеводства" Российской академии наук Вакцина против вирусного гепатита утят типа I

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SU1459239A1 (ru) * 1986-04-15 1990-09-15 Украинский научно-исследовательский институт птицеводства Штамм вируса гепатита ут т дл изготовлени вакцины против вирусного гепатита ут т

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SU1459239A1 (ru) * 1986-04-15 1990-09-15 Украинский научно-исследовательский институт птицеводства Штамм вируса гепатита ут т дл изготовлени вакцины против вирусного гепатита ут т

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
OIE. Manual of diagnostic tests and vaccines for terrestrial animals. Chapter 2.3.8 version adopted in May 2017, P.1-14. *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110129285A (zh) * 2019-05-29 2019-08-16 商丘美兰生物工程有限公司 一种高效筛选鸭肝炎病毒毒种的方法
CN110129285B (zh) * 2019-05-29 2022-12-13 商丘美兰生物工程有限公司 一种高效筛选鸭肝炎病毒毒种的方法
RU2712948C1 (ru) * 2019-06-27 2020-02-03 Федеральное государственное бюджетное научное учреждение Федеральный научный центр "Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт птицеводства" Российской академии наук Вакцина против вирусного гепатита утят типа I

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Mansoor et al. Preparation and evaluation of chicken embryo-adapted fowl adenovirus serotype 4 vaccine in broiler chickens
CN104250637B (zh) 一株禽流感h9n2亚型病毒株及其应用
RU2675995C1 (ru) Штамм "ВН-3" вируса гепатита утят типа I рода Avihepatovirus семейства Picornaviridae для производства вакцинных препаратов и диагностических наборов
RU2593718C1 (ru) Вакцина инактивированная эмульсионная против ящура типов а, о, азия-1
CN104258389B (zh) 一种疫苗组合物及其制备方法和应用
RU2603003C1 (ru) Вакцина инактивированная сорбированная против ящура типов а, о, азия-1
Ma et al. The Anti‐Porcine Parvovirus Activity of Nanometer Propolis Flavone and Propolis Flavone In Vitro and In Vivo
CN103908665A (zh) 一种疫苗组合物及其制备方法和应用
Mazija et al. Immunogenicity and safety of Queensland V4 and Ulster 2C strains of Newcastle disease virus given to maternally immune, newly hatched chickens by nebulization
RU2699671C1 (ru) Вакцина для ранней защиты против ящура типа О инактивированная эмульсионная
Ashraf et al. Interference between mild and pathogenic strains of infectious bursal disease virus in chickens
JPH07502174A (ja) 家禽病を発症させる新規バクテリアとそれから誘導されたワクチン
Al-Ebshahy et al. Protection conferred by a vaccine derived from an inactivated Egyptian variant of infectious bronchitis virus: a challenge experiment
CN103127497A (zh) 猪圆环病毒2型、肺炎支原体二联灭活疫苗及其制备方法
CN112646750B (zh) 一种血清18型鸭疫里默氏杆菌及应用
TWI300807B (en) Attenuated avian infectious bronchitis virus vaccines
Avila et al. Effects of probiotics and maternal vaccination on Salmonella enteritidis infection in broiler chicks
RU2647757C1 (ru) Штамм "Волгоградский" вируса нодулярного дерматита крупного рогатого скота для вирусологических, молекулярно-генетических, мониторинговых исследований, изготовления вакцин и диагностических препаратов
RU2560569C2 (ru) Штамм "алексеевский" вируса оспы свиней для вирусологических, молекулярно-генетических, мониторинговых исследований, изготовления вакцин и диагностических препаратов
RU2696007C1 (ru) Вакцина ассоциированная против парагриппа-3, инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи, рота- и коронавирусной инфекций крупного рогатого скота инактивированная эмульсионная
RU2658351C1 (ru) Штамм "гс-11" вируса инфекционного бронхита кур для производства инактивированных сорбированных и эмульгированных вакцин, а также диагностических целей
Carrasco et al. Protection levels of vaccinated pigeons (Columba livia) against a highly pathogenic Newcastle disease virus strain
El-Yuguda et al. Field trial of a thermostable peste des petits ruminants (PPR) vaccine in a semi-arid zone of Nigeria
RU2323741C2 (ru) Вакцина против гриппа птиц инактивированная эмульсионная
KR101360112B1 (ko) 공기전파가 가능한 신규한 h9n2형 저병원성 조류인플루엔자 바이러스 균주 및 그로부터 유래된 백신