RU2674995C2

RU2674995C2 - Фармацевтические комбинации

Info

Publication number: RU2674995C2
Application number: RU2015124954A
Authority: RU
Inventors: Дейл ПОРТЕР; Кэролайн Эмери; Луцзянь ТАНЬ; Падмаджа ЙЕРРАМИЛЛИ-РАО
Original assignee: Новартис Аг
Priority date: 2012-11-29
Filing date: 2013-11-26
Publication date: 2018-12-14
Also published as: EP2925366B1; WO2014085381A1; JP6437444B2; HUE037618T2; HK1215789A1; UA115250C2; BR112015012497A8; CA2892578A1; AU2013352379A1; EP2925366A1; PL2925366T3; BR112015012497A2; US20150306101A1; JP2016501222A; BR112015012497B1; RU2015124954A; DK2925366T3; CA2892578C; TR201806682T4; US9446043B2

Abstract

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к комбинации, содержащей соединение-ингибитор протеинкиназы С (PKC), которое представляет собой 3-(1H-индол-3-ил)-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)-хиназолин-4-ил]-1H-пиррол-2,5-дион или его фармацевтически приемлемую соль, и соединение-ингибитор митоген-активируемой протеинкиназы (MEK), которое представляет собой 2-гидроксиэтокси-амид 6-(4-бром-2-фторфениламино)-7-фтор-3-метил-3H-бензимидазол-5-карбоновой кислоты или его фармацевтически приемлемую соль, для одновременного, раздельного или последовательного введения для применения при лечении пролиферативного заболевания. Применение фармацевтической комбинации при получении лекарственного средства для лечения пролиферативного заболевания. Применение фармацевтической комбинации в производстве лекарственного средства для лечения меланомы. Способ лечения пролиферативного заболевания фармацевтической комбинацией пациента, страдающего от пролиферативного заболевания. Комбинированный состав для применения при лечении пролиферативного заболевания, содержащий (а) одну или более стандартных лекарственных форм соединения-ингибитора PKC, которое представляет собой 3-(1H-индол-3-ил)-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)-хиназолин-4-ил]-1H-пиррол-2,5-дион или его фармацевтически приемлемую соль, и (b) одну или более стандартных лекарственных форм соединения-ингибитора MEK, которое представляет собой 2-гидроксиэтокси-амид 6-(4-бром-2-фторфениламино)-7-фтор-3-метил-3H-бензимидазол-5-карбоновой кислоты. Вышеописанная фармацевтическая комбинация обладает синергетическим взаимодействием в отношении сильного ингибирования клеточной пролиферации. 5 н. и 29 з.п. ф-лы, 6 ил., 1 табл., 7 пр.

Description

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ

Данное изобретение относится к фармацевтической комбинации, содержащей (а) соединение-ингибитор протеинкиназы С (PKC) или его фармацевтически приемлемую соль и (b) одно или по меньшей мере одно соединение-ингибитор митоген-активируемой протеинкиназы (MEK) или его фармацевтически приемлемую соль, и, необязательно, по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель; к применению такой комбинации при лечении или предупреждении пролиферативных заболеваний, таких как рак; и к способам лечения субъекта, страдающего от пролиферативного заболевания, такого как рак, включающим введение терапевтически эффективного количества такой комбинации.

Данное изобретение относится также к фармацевтической комбинации, содержащей (а) соединение-ингибитор протеинкиназы С (PKC) 3-(1H-индол-3-ил)-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)-хиназолин-4-ил]-1H-пиррол-2,5-дион или его фармацевтически приемлемую соль и (b) по меньшей мере одно соединение-ингибитор митоген-активируемой протеинкиназы (MEK), выбранное из группы, содержащей (2-гидроксиэтокси)амид 6-(4-бром-2-фторфениламино)-7-фтор-3-метил-3H-бензимидазол-5-карбоновой кислоты, (S)-5-фтор-2-(2-фтор-4-(метилтио)фениламино)-N-(2-гидроксипропокси)-1-метил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-карбоксамид, PD0325901, PD-184352, RDEA119, GSK1120212, XL518, AS-701255, AS-701173, AS703026, RDEA436, E6201, RO4987655, JTP-74057, RG7167 или RG7420, или его фармацевтически приемлемую соль и, необязательно, по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель; к применению такой комбинации при лечении или предупреждении пролиферативных заболеваний, таких как рак; и к способам лечения субъекта, страдающего от пролиферативного заболевания, такого как рак, включающим введение терапевтически эффективного количества такой комбинации.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Увеальная меланома представляет собой злокачественное новообразование, которое возникает в пигментированных участках глаза, в частности, в радужной оболочке, цилиарном теле или хориоиде. Терапия увеальной меланомы включает локальную терапию с офтальмэктомией или брахитерапией. Приблизительно у половины пациентов развивается метастатическое заболевание, как правило, в печени и зачастую в легких и костях, и количество новых метастазов со временем продолжает расти, позволяя предположить, что заболевание развивается медленно. Перспектива пациентов с метастазами неблагоприятна. Для этого заболевания в настоящее время нет одобренной терапии.

Мутации, затрагивающие любой из двух генов, кодирующих альфа-субъединицы G-белка гетеротримерных комплексов G-белка (GNAQ и GNA11), были обнаружены в подавляющем большинстве опухолей (Van Raamsdonk CD, Bezrookove V, Green G, et al, Nature (2009); 457-599-601 и Van Raamsdonk CD, Griewank KG, et al (2010), N Eng J Med; 363:2191-9). Идентифицированные мутации представляют собой типичные активирующие мутации, затрагивающие другие G-белки.

Несмотря на многочисленные возможности лечения для онкологических пациентов, сохраняется необходимость в эффективных и безопасных терапевтических средствах, а также необходимость в новых комбинированных терапиях, которые могут быть введены для эффективного долгосрочного лечения рака.

Авторы данного изобретения обнаружили, что ингибирование сигнального каскада ниже от указанных G-белков может быть пригодным для лечения пролиферативного заболевания, такого как рак, например, опухоль с мутацией Gα (GNA11/GNAQ) и, в частности, увеальная меланома, метастатическая увеальная меланома и GNAQ- или GNA11-мутантная увеальная меланома.

Было обнаружено, что комбинация соединения-ингибитора протеинкиназы C (PKC) и соединения-ингибитора MEK является эффективной для отсрочки прогрессирования или лечения пролиферативного заболевания, в частности, увеальной меланомы, метастатической увеальной меланомы и GNAQ- или GNA11-мутантной увеальной меланомы.

Было неожиданно обнаружено, что комбинация эффективного количества ингибитора протеинкиназы C (PKC), например, 3-(1H-индол-3-ил)-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)-хиназолин-4-ил]-1H-пиррол-2,5-диона или его фармацевтически приемлемой соли, например, его ацетата, с эффективным количеством по меньшей мере одного соединения-ингибитора MEK, например, (2-гидроксиэтокси)-амида 6-(4-бром-2-фторфениламино)-7-фтор-3-метил-3H-бензимидазол-5-карбоновой кислоты или (S)-5-фтор-2-(2-фтор-4-(метилтио)фениламино)-N-(2-гидроксипропокси)-1-метил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-карбоксамида, более предпочтительно (2-гидроксиэтокси)-амида 6-(4-бром-2-фторфениламино)-7-фтор-3-метил-3H-бензимидазол-5-карбоновой кислоты, приводит к неожиданному улучшению лечения пролиферативных заболеваний, в частности, рака и, более конкретно, увеальной меланомы, метастатической увеальной меланомы и GNAQ- или GNA11-мутантной увеальной меланомы.

При одновременном, последовательном или раздельном введении предпочтительное соединение-ингибитор протеинкиназы C (PKC) и предпочтительное соединение-ингибитор MEK взаимодействуют синергетическим образом, интенсивно подавляя пролиферацию клеток, и являются неожиданно эффективными в моделях увеальной меланомы. Эта неожиданная синергетическая реакция позволяет снижать дозу, необходимую для каждого соединения, что приводит к снижению побочных эффектов и улучшению долгосрочной клинической эффективности соединений при лечении.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

В данном изобретении представлены фармацевтические комбинации и терапевтические способы, которые могут быть пригодными для замедления роста клеток опухоли с мутацией Gα (GNA11/GNAQ) и для лечения пролиферативных заболеваний, в частности, рака и, более конкретно, увеальной меланомы, метастатической увеальной меланомы и GNAQ- или GNA11-мутантной увеальной меланомы.

В данном изобретении представлены фармацевтические комбинации, содержащие: (а) ингибитор протеинкиназы С (PKC) или его фармацевтически приемлемую соль и (b) по меньшей мере один ингибитор митоген-активируемой протеинкиназы (MEK), и, необязательно, по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель.

В данном изобретении представлены также фармацевтические комбинации, состоящие из: (а) ингибитора протеинкиназы С (PKC) или его фармацевтически приемлемой соли и (b) одного ингибитора митоген-активируемой протеинкиназы (MEK), и, необязательно, по меньшей мере одного фармацевтически приемлемого носителя.

В описанных выше комбинациях соединение-ингибитор PKC может быть выбрано из группы, состоящей из

3-(1H-индол-3-ил)-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)-хиназолин-4-ил]-1H-пиррол-2,5-диона;

3-(1H-индол-3-ил)-4-[2-(пиперазин-1-ил)-хиназолин-4-ил]-1H-пиррол-2,5-диона;

3-[2-хлор-7-[(диметиламино)метил]-1-нафталенил]-4-[7-[2-(2-метоксиэтокси)этокси]-1H-индол-3-ил]-1H-пиррол-2,5-диона;

3-[3-(4,7-диазаспиро[2,5]окт-7-ил)-изохинолин-1-ил]-4-(7-метил-1H-индол-3-ил)-пиррол-2,5-диона,

(9S)-9-[(диметиламино)метил]-6,7,10,11-тетрагидро-9H,18H-5,21:12,17-диметенодибензо-[e,k]пирроло[3,4-h][1,4,13]оксадиазациклогексадецин-18,20(19H)-диона,

рубоксистаурина и

12-(2-цианоэтил)-6,7,12,13-тетрагидро-13-метил-5-оксо-5H-индоло(2,3-а)пирроло(3,4-с)-карбазола,

или их фармацевтически приемлемой соли.

В описанных выше комбинациях соединение-ингибитор MEK может быть независимо выбрано из ингибитора PKC и может быть выбрано из группы, состоящей из

(2-гидроксиэтокси)-амида 6-(4-бром-2-фторфениламино)-7-фтор-3-метил-3H-бензимидазол-5-карбоновой кислоты, (S)-5-фтор-2-(2-фтор-4-(метилтио)фениламино)-N-(2-гидроксипропокси)-1-метил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-карбоксамида, PD0325901, PD-184352, RDEA119, GSK1120212, XL518, AS-701255, AS-701173, AS703026, RDEA436, E6201, RO4987655, JTP-74057, RG7167 или RG7420,

или фармацевтически приемлемой соли.

В данном изобретении представлена также фармацевтическая комбинация, содержащая: (а) соединение-ингибитор протеинкиназы С (PKC) 3-(1H-индол-3-ил)-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)-хиназолин-4-ил]-1H-пиррол-2,5-дион (Соединение А) или его фармацевтически приемлемую соль и (b) по меньшей мере один ингибитор митоген-активируемой протеинкиназы (MEK), выбранный из группы, содержащей (2-гидроксиэтокси)-амид 6-(4-бром-2-фторфениламино)-7-фтор-3-метил-3H-бензимидазол-5-карбоновую кислоту (Соединение В), (S)-5-фтор-2-(2-фтор-4-(метилтио)-фениламино)-N-(2-гидроксипропокси)-1-метил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-карбоксамид (Соединение С), PD0325901, PD-184352, RDEA119, GSK1120212, XL518, AS-701255, AS-701173, AS703026, RDEA436, E6201, RO4987655, JTP-74057, RG7167 или RG7420, или его фармацевтически приемлемую соль, и, необязательно, по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель.

В предпочтительном варианте реализации данного изобретения компоненты комбинации представляют собой (а) соединение-ингибитор PKC 3-(1H-индол-3-ил)-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)-хиназолин-4-ил]-1H-пиррол-2,5-дион (Соединение А) или его фармацевтически приемлемую соль, и (b) по меньшей мере одно соединение-ингибитор MEK, выбранное из группы, состоящей из (2-гидроксиэтокси)-амида 6-(4-бром-2-фторфениламино)-7-фтор-3-метил-3H-бензимидазол-5-карбоновой кислоты (Соединение В) или (S)-5-фтор-2-(2-фтор-4-(метилтио)фениламино)-N-(2-гидроксипропокси)-1-метил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-карбоксамида (Соединение С), или его фармацевтически приемлемую соль.

В другом предпочтительном варианте реализации изобретения компоненты комбинации представляют собой (а) соединение-ингибитор PKC 3-(1H-индол-3-ил)-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)-хиназолин-4-ил]-1H-пиррол-2,5-дион (Соединение А) или его фармацевтически приемлемую соль, и (b) соединение-ингибитор MEK (2-гидроксиэтокси)-амид 6-(4-бром-2-фторфениламино)-7-фтор-3-метил-3H-бензимидазол-5-карбоновой кислоты (Соединение В) или его фармацевтически приемлемую соль.

Данное изобретение дополнительно относится к комбинированному препарату или к фармацевтической композиции, содержащей (а) соединение-ингибитор PCK 3-(1H-индол-3-ил)-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)-хиназолин-4-ил]-1H-пиррол-2,5-дион (Соединение А) или его фармацевтически приемлемую соль и (b) по меньшей мере один ингибитор MEK, выбранный из группы, содержащей (2-гидроксиэтокси)-амид 6-(4-бром-2-фторфениламино)-7-фтор-3-метил-3H-бензимидазол-5-карбоновой кислоты (Соединение В), (S)-5-фтор-2-(2-фтор-4-(метилтио)фениламино)-N-(2-гидроксипропокси)-1-метил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-карбоксамид (Соединение С), PD0325901, PD-184352, RDEA119, GSK1120212, XL518, AS-701255, AS-701173, AS703026, RDEA436, E6201, RO4987655, JTP-74057, RG7167 или RG7420, или его фармацевтически приемлемую соль, и, необязательно, по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель. B одном из вариантов реализации данное изобретение относится к комбинированному препарату, который содержит: (i) одну или более стандартных лекарственных форм компонента комбинации (а) и (ii) одну или более стандартных лекарственных форм компонента комбинации (b).

Данное изобретение относится, в частности, к фармацевтической комбинации, содержащей (а) соединение-ингибитор PKC 3-(1H-индол-3-ил)-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)-хиназолин-4-ил]-1H-пиррол-2,5-дион (Соединение А) или его фармацевтически приемлемую соль и (b) по меньшей мере один ингибитор MEK, выбранный из группы, содержащей (2-гидроксиэтокси)-амид 6-(4-бром-2-фторфениламино)-7-фтор-3-метил-3H-бензимидазол-5-карбоновой кислоты (Соединение В), (S)-5-фтор-2-(2-фтор-4-(метилтио)-фениламино)-N-(2-гидроксипропокси)-1-метил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-карбоксамид (Соединение С), PD0325901, PD-184352, RDEA119, GSK1120212, XL518, AS-701255, AS-701173, AS703026, RDEA436, E6201, RO4987655, JTP-74057, RG7167 или RG7420, или его фармацевтически приемлемую соль, и, необязательно, по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель, при этом указанная комбинация пригодна для лечения или предупреждения пролиферативного заболевания у субъекта, нуждающегося в этом.

Данное изобретение относится также к фармацевтической комбинации, содержащей (а) соединение-ингибитор PKC 3-(1H-индол-3-ил)-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)-хиназолин-4-ил]-1H-пиррол-2,5-дион (Соединение А) или его фармацевтически приемлемую соль и (b) по меньшей мере один ингибитор MEK, выбранный из группы, содержащей (2-гидроксиэтокси)-амид 6-(4-бром-2-фторфениламино)-7-фтор-3-метил-3H-бензимидазол-5-карбоновую кислоту (Соединение В), (S)-5-фтор-2-(2-фтор-4-(метилтио)-фениламино)-N-(2-гидроксипропокси)-1-метил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-карбоксамид (Соединение С), PD0325901, PD-184352, RDEA119, GSK1120212, XL518, AS-701255, AS-701173, AS703026, RDEA436, E6201, RO4987655, JTP-74057, RG7167 или RG7420, или его фармацевтически приемлемую соль, и, необязательно, по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель для применения при получении фармацевтической композиции или лекарственного средства для лечения или предупреждения пролиферативного заболевания у субъекта, нуждающегося в этом.

Данное изобретение относится также к применению ингибитора PKC 3-(1H-индол-3-ил)-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)-хиназолин-4-ил]-1H-пиррол-2,5-диона (Соединения А) или его фармацевтически приемлемой соли, в комбинации с по меньшей мере одним ингибитором MEK, выбранным из группы, содержащей (2-гидроксиэтокси)-амид 6-(4-бром-2-фторфениламино)-7-фтор-3-метил-3H-бензимидазол-5-карбоновой кислоты (Соединение В), (S)-5-фтор-2-(2-фтор-4-(метилтио)-фениламино)-N-(2-гидроксипропокси)-1-метил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-карбоксамид (Соединение С), PD0325901, PD-184352, RDEA119, GSK1120212, XL518, AS-701255, AS-701173, AS703026, RDEA436, E6201, RO4987655, JTP-74057, RG7167 или RG7420, или его фармацевтически приемлемую соль, для получения фармацевтической композиции или лекарственного средства для лечения или предупреждения пролиферативного заболевания.

Данное изобретение относится к способу лечения субъекта с пролиферативным заболеванием, включающему введение указанному субъекту комбинации, содержащей (а) соединение-ингибитор PKC 3-(1H-индол-3-ил)-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)-хиназолин-4-ил]-1H-пиррол-2,5-дион (Соединение А) или его фармацевтически приемлемую соль и (b) ингибитор MEK, выбранный из группы, содержащей (2-гидроксиэтокси)-амид 6-(4-бром-2-фторфениламино)-7-фтор-3-метил-3H-бензимидазол-5-карбоновой кислоты (Соединение В), (S)-5-фтор-2-(2-фтор-4-(метилтио)-фениламино)-N-(2-гидроксипропокси)-1-метил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-карбоксамид (Соединение С), PD0325901, PD-184352, RDEA119, GSK1120212, XL518, AS-701255, AS-701173, AS703026, RDEA436, E6201, RO4987655, JTP-74057, RG7167 или RG7420, или его фармацевтически приемлемую соль и, необязательно, по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель в таком количестве, которое является совместно терапевтически эффективным против пролиферативного заболевания.

В данном изобретении дополнительно представлена коммерческая упаковка, содержащая в качестве терапевтических средств комбинацию, содержащую (а) соединение-ингибитор PKC 3-(1H-индол-3-ил)-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)-хиназолин-4-ил]-1H-пиррол-2,5-дион (Соединение А) или его фармацевтически приемлемую соль и (b) ингибитор MEK, выбранный из группы, содержащей (2-гидроксиэтокси)-амид 6-(4-бром-2-фторфениламино)-7-фтор-3-метил-3H-бензимидазол-5-карбоновой кислоты (Соединение В), (S)-5-фтор-2-(2-фтор-4-(метилтио)-фениламино)-N-(2-гидроксипропокси)-1-метил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-карбоксамид (Соединение С), PD0325901, PD-184352, RDEA119, GSK1120212, XL518, AS-701255, AS-701173, AS703026, RDEA436, E6201, RO4987655, JTP-74057, RG7167 или RG7420, или его фармацевтически приемлемую соль, вместе с инструкциями по их одновременному, раздельному или последовательному введению для применения для отсрочки прогрессирования или лечения пролиферативного заболевания.

Описанные выше комбинации представлены также для одновременного, раздельного или последовательного введения, в частности, для лечения или предупреждения пролиферативного заболевания. Пролиферативное заболевание представляет собой рак и, более конкретно, увеальную меланому, метастатическую увеальную меланому, GNAQ- или GNA11-мутантную увеальную меланому и рак, и, более конкретно, увеальную меланому, метастатическую увеальную меланому и GNAQ- или GNA11-мутантную метастатическую увеальную меланому.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ

Фигура 1 иллюстрирует влияние 3-(1H-индол-3-ил)-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)-хиназолин-4-ил]-1H-пиррол-2,5-диона (Соединения А) и (2-гидроксиэтокси)-амида 6-(4-бром-2-фторфениламино)-7-фтор-3-метил-3H-бензимидазол-5-карбоновой кислоты (Соединения В) на пролиферацию увеальной меланомы in vitro. Рост клеточных линий увеальной меланомы в течение 6 дней измеряли при помощи технологии xCELLigence в присутствии 0,5 мкМ ДМСО, 0,5 мкМ AEB071, 0,5 мкМ Соединения B или 0,5 мкМ AEB071 + 0,5 мкМ Соединения В. B клеточных линиях 92.1 и OMM1, которые имеют мутации GNAQ и GNA11, соответственно, AEB071 замедляет клеточный рост, и этот эффект усиливается в комбинации с Соединением В. Поскольку Соединение B в качестве единственного средства имеет слабый эффект на рост обеих клеточных линий увеальной меланомы 92.1 и OMM1, то комбинация этих двух средств неожиданно оказалась способной полностью подавлять пролиферацию обеих клеточных линий.

Фигура 2 иллюстрирует более подробное рассмотрение схемы синергии между AEB071 и Соединением B в клеточной линии увеальной меланомы 92.1 и отображает синергетический эффект между этими двумя средствами. Показана матрица доз двух средств; влияние на клеточный рост по сравнению с необработанными клетками показано на верхней схеме, избыточное ингибирование - на центральной схеме, а ингибирование роста относительно нормализации к нулевому дню показан на нижней схеме. Оба средства, Соединение B и AEB071, по отдельности были активными в 92.1, но важно, что комбинирование этих двух средств привело более чем к аддитивному увеличению ответа при более низких дозах, что указывает на то, что комбинация обоих средств вместе является более эффективной для подавления пролиферации клеточной линии увеальной меланомы 92.1 in vitro, чем каждое средство по отдельности.

Фигура 3: оценили биохимический эффект указанных средств после обработки 0,5 мкМ AEB071, 0,5 мкМ Соединения B или 0,5 мкМ обоих средств вместе в клеточных линиях увеальной меланомы 92.1 и OMM-1. Уровни pMARCKS снизились. Добавление Соединения B к AEB071 не оказало дополнительного влияния на экспрессию pMARCKS. Обработка тех же клеток Соединением B привела к снижению уровней pERK1/2, как можно видеть через 2 часа; через 24 часа экспрессия pERK1/2 стала восстанавливаться. Кроме того, обработка одним средством, Соединением B, с течением времени привела к инициации экспрессии pMEK1/2 в обеих клеточных линиях; это четко наблюдали через 48 часов обработки. Неожиданно лишь комбинация AEB071 и Соединения B привела к устойчивому подавлению pERK1/2 и pMEK1/2. Важно, что AEB071 очевидно предотвращает индукцию pMEK, обусловленную обработкой Соединением B в качестве единственного средства. Следовательно, комбинация AEB071 и Соединения B приводит к устойчивому фосфопротеиновому ингибированию pMEK, pERK и pMARCKS.

Фигура 4 иллюстрирует in vivo активность AEB071 и Соединения B в модели ксенотрансплантата человеческой увеальной меланомы 92.1 на голых мышах. AEB071 вводили в дозе 91 мг/кг три раза в сутки (TID) в течение 21 дня. Эффективность определяли по замедлению роста опухоли на 17 день, последний день участия в исследовании всех мышей. Активность рассчитывали как отношение опухоль/контроль (О/К), среднее процентное изменение объема опухоли с 1 по 17 день у мышей, получавших лекарство (ΔT), относительно мышей, получавших носитель, или как T/T0, процентное снижение группового среднего объема опухоли с 1 дня. Как показано на Фигуре 4, монотерапия средством AEB071 привела к 3% О/К (p<0,01), а добавление Соединения B, вводимого два раза в сутки в дозе 3,5 мг/кг, в дополнение к схеме лечения AEB071, привело к -22% значения T-T0 (p<0,001 средней активности, но незначительно по сравнению с только AEB071). Соединение B не обладает собственной активностью в этой in vivo модели со значением О/К 84%. Следовательно, лечение препаратом AEB071 и Соединением B является эффективным в этой in vivo модели увеальной меланомы 92.1.

Фигура 5 иллюстрирует рост опухоли in vivo в модели ксенотрансплантата человеческой увеальной меланомы 92.1 на голых мышах в течение >70 дней. Мышам вводили дозы в течение 21 дня, затем лечение прекратили и контролировали рост опухоли. Через две недели после периода ввода доз опухоли в группе лечения монотерапией AEB071 прогрессировали с контрольной скоростью, а опухоли в комбинированной группе прогрессировали медленнее. Отсрочку роста опухоли не рассчитывали, поскольку две или более опухолей на группу после первоначального периода роста стали статичными, но тренд скорости роста опухоли показывает, что опухоли, обработанные комбинацией AEB071 с Соединением B, росли медленнее, чем опухоли, обработанные только AEB071. Опухоли, обработанные только Соединением В, не контролировали из-за низкой эффективности. Данные показывают, что комбинация AEB071 с Соединением B имеет более высокое изменение и продолжительность ответа, по сравнению с любым из средств в in vivo модели увеальной меланомы 92.1.

Фигура 6 иллюстрирует in vivo активность AEB071, введенного в дозе 90,95, 45,58 и 22,74 мг/кг (эквивалент 80, 40 и 20 мг/кг свободного основания) с вводом доз три раза в сутки (TID) в течение 21 дня, в комбинации с Соединением B в дозе 3,5 мг/кг, вводимым два раза в сутки, в модели ксенотрансплантата человеческой увеальной меланомы 92.1 на голых мышах. Эффективность определяли по замедлению роста опухоли на 22 день. Активность рассчитывали как отношение опухоль/контроль (О/К), среднее процентное изменение объема опухоли с 1 по 22 день у мышей, получавших лекарство (ΔT), относительно мышей, получавших носитель, или как T/T0, процентное снижение группового среднего объема опухоли с 1 дня. Как показано на Фигуре 6, монотерапия препаратом AEB071 в дозе 90,95 мг/кг привела к О/К 18% О/К(p<0,05). Монотерапия препаратом AEB071 в дозе 45,5 и 22,7 мг/кг привела к 52% и 91% О/К, соответственно, и незначительному среднему замедлению. Добавление Соединения В, вводимого два раза в сутки в дозе 3,5 мг/кг, с AEB071 в дозах 90,95 и 45,58 мг/кг привело к -52% и -12% значения T-T0, соответственно (p<0,001). Соединение B не обладает собственной активностью в этой in vivo модели со значением О/К 56%. Комбинация в высокой дозе обусловила четыре частичные регрессии. Лечение многократными дозами AEB071 в комбинации с Соединением B эффективно в in vivo модели увеальной меланомы 92.1. Эффективность комбинации увеличивается в зависимости от дозы, при этом повышение дозы AEB071 в комбинации с Соединением B приводит к более сильному изменению ответа.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

В данном документе описаны различные варианты реализации данного изобретения. Следует понимать, что особенности, указанные в каждом варианте реализации изобретения, могут быть комбинированы с другими конкретными особенностями с получением дополнительных вариантов реализации данного изобретения.

Данное изобретение относится к таким фармацевтическим комбинациям для одновременного, раздельного или последовательного введения, в частности, для применения при лечении или предупреждении пролиферативного заболевания.

Общие термины, используемые в данном документе, указаны со следующими значениями, если специально не указано иное:

Термины «содержащий» и «включающий» использованы в данном документе в их неограничивающем смысле, если не указано иное.

Термины в единственном числе в контексте описания изобретения (особенно в контексте следующей формулы изобретения) следует понимать как охватывающие и единственное, и множественное число, если в данном документе не указано или из контекста явно не следует иное. При использовании множественного числа для соединений, солей и т.п. также подразумевают одно соединение, соль или т.п.

Термин «комбинация», «терапевтическая комбинация» или «фармацевтическая комбинация», используемый в данном документе, обозначает либо фиксированную комбинацию в стандартной лекарственной форме, нефиксированную комбинацию, либо набор компонентов для комбинированного введения, в котором соединение-ингибитор PKC, например, Соединение А или его фармацевтически приемлемая соль, и по меньшей мере одно соединение-ингибитор MEK, например, Соединение B или Соединение С, или его фармацевтически приемлемая соль, могут быть введены одновременно, независимо в одно и то же время или по отдельности с временными интервалами, которые обеспечивают возможность проявления совместного, например, синергетического эффекта компонентов комбинации. Термин «фиксированная комбинация» означает, что активные ингредиенты, например, Соединение А, и другой компонент комбинации, например, Соединение В, вводят пациенту одновременно в форме единого целого или дозы. Термин «нефиксированная комбинация» означает, что активные ингредиенты, например, Соединение А или его фармацевтически приемлемую соль, и другой компонент комбинации, например, Соединение B или его фармацевтически приемлемую соль, вводят пациенту в виде отдельных единиц одновременно, параллельно или последовательно без каких-либо определенных ограничений по времени, при этом такое введение обеспечивает терапевтически эффективные уровни этих двух соединений в организме пациента. Последнее относится также к коктейльной терапии, например, к введению трех или более активных ингредиентов.

Термин «ингибитор протеинкиназы С» в данном документе относится к соединению, которое нацелено на, снижает или ингибирует протеинкиназу С. Термин PKC относится, в общем, к целому семейству изоформ: обычные изоформы; альфа, бета (β1 и β2) и гамма, новые изоформы; дельта, ипсилон, эта и тета, и атипичные изоформы; дзета и тау/лямбда.

Пригодные ингибиторы PKC включают малеимидные производные, такие как соединения, описанные в патентах США №5545636; 5668152; 5672681; 5698578; 5710145; 6645970; 7220774; 7235555; в публикации США №2008/0318975; в европейских патентах №0776895 В1; 0817627 В1; 1449529В1; 1337527 В1; и в публикациях PCT № WO 03/082859; и WO 07/006533. Каждая ссылка, цитируемая выше, включена в данный документ посредством ссылки.

Конкретные соединения-ингибиторы PKC, представляющие собой интерес, включают

сотрастаурин (известный также как AEB071 и описанный в патенте США №6645970),

3-(1H-индол-3-ил)-4-[2-(пиперазин-1-ил)-хиназолин-4-ил]-1H-пиррол-2,5-дион, описанный в Примере 70 публикации PCT № WO 2002/038561 или в патенте США №6645970),

3-[2-хлор-7-[(диметиламино)метил]-1-нафталенил]-4-[7-[2-(2-метоксиэтокси)этокси]-1H-индол-3-ил]-1H-пиррол-2,5-дион ((CAS №919992-85-1), описанный в публикации PCT № WO 07/006533 и в публикации США №2008/0318975),

3-[3-(4,7-диазаспиро[2,5]окт-7-ил)-изохинолин-1-ил]-4-(7-метил-1H-индол-3-ил)-пиррол-2,5-дион (описанный в Примере 69 патента США №7235555);

рубоксистаурин ((9S)-9-[(диметиламино)метил]-6,7,10,11-тетрагидро-9H,18H-5,21:12:17-диметенодибензо-[e,k]пирроло[3,4-h][1,4,13]оксадиазациклогексадецин-18,20(19H)-дион (известный также как LY-333531 и описанный в патенте США №5698578)) и мезилатную соль рубоксистаурина (описанную в патенте США №5710145 и в европейском патенте №0776895 В1);

и 12-(2-цианоэтил)-6,7,12,13-тетрагидро-13-метил-5-оксо-5H-индоло(2,3-а)пирроло(3,4-с)-карбазол (CAS №136194-77-9, имеющийся в продаже у компании Calbiochem® и описанный в патенте США №5489608).

Другие ингибиторы PKC могут быть выбраны из группы, состоящей из AD 198, апринокарсена, баланола, бриостатина 1, балфостина, цедефингола, CGP 53353, хелеритрина хлорида, циклоплатама, делкасертиба, энзастаурина, EP 70905, GF 109203X, гнидимакрина, GO 6976, GO 7716, GO 7775, GO 7852, HO 0303, ингенола мебутата, ISI 641, JTV 519, KAI 1678, LY 290181, LY 317644, мидостаурина, NA 0345, NPC 15437, NSC 639365, NSC 639366, NSC 646958, p XSC, RD 65071, RO 317549, RO 318220, RO 318425, RO 318830, RO 320432, Safingol, SPC 104065, стауроспорина, тепренона, токоферола сукцината, UCN 01 и UCN 1028С. B некоторых вариантах реализации изобретения ингибитор PKC представляет собой мидостаурин, энзастаурин или стауроспорин. B некоторых вариантах реализации изобретения ингибитор PKC представляет собой 3-(1H-индол-3-ил)-4-[2-(пиперазин-1-ил)хиназолин-4-ил]-1H-пиррол-2,5-дион, описанный в Примере 70 публикации PCT № WO 2002/038561 или в патенте США №6645970).

Каждая ссылка, цитируемая выше, включена в данный документ посредством ссылки.

Термин «ингибитор MEK» в данном документе относится к соединению, которое нацелено на, снижает или ингибирует активность киназы MAP, MEK. Мишени ингибитора MEK включают, но не ограничиваясь этим, ERK. Косвенные мишени ингибитора MEK включают, но не ограничиваясь этим, циклин D1.

Термин «фармацевтическая композиция» в данном документе относится к смеси или раствору, содержащему по меньшей мере одно терапевтическое средство, подлежащее введению субъекту, например, млекопитающему или человеку, для предупреждения или лечения конкретного заболевания или состояния, поразившего млекопитающее или человека.

Термин «фармацевтически приемлемый» в данном документе относится к таким соединениям, материалам, композициям и/или лекарственным формам, которые по результатам тщательной медицинской клинической оценки являются пригодными для контакта с тканями организма субъекта, например, млекопитающего или человека, без избыточной токсичности, раздражения, аллергической реакции или других проблем или осложнений, соразмерных с приемлемым соотношением пользы и риска.

Термин «совместное введение» или «комбинированное введение» при использовании в данном документе охватывает введение выбранных терапевтических средств одному пациенту и включает схемы лечения, в которых эти средства не обязательно вводят одним и тем же способом введения или в одно и то же время.

Термин «лечить» или «лечение» при использовании в данном документе включает облегчение, уменьшение или улучшение по меньшей мере одного симптома у субъекта или обеспечение отсрочки прогрессирования заболевания. Например, лечение может быть уменьшением одного или нескольких симптомов расстройства или полным устранением расстройства, такого как рак. B значении данного изобретения термин «лечить» означает также остановку, отсрочку возникновения (т.е. период до клинического проявления заболевания) и/или уменьшение риска развития или ухудшения заболевания. Термин «защищать» при использовании в данном документе означает предупреждение, отсрочку или лечение, или все эти действия, сообразно обстоятельствам, развития или длительности, или осложнения заболевания у субъекта.

Термин «предупреждать», «предупреждающий» или «предупреждение» при использовании в данном документе включает предупреждение по меньшей мере одного симптома, связанного с или обусловленного состоянием, заболеванием или расстройством, подлежащим предупреждению.

Термин «совместно терапевтически активные» или «совместный терапевтический эффект» при использовании в данном документе означает, что терапевтические средства могут быть введены по отдельности (с хронологическим смещением, особенно при последовательном введении) с такими интервалами времени, что у теплокровных животных, особенно у людей, подлежащих лечению, они все еще проявляют (предпочтительно синергетическое) взаимодействие (совместный терапевтический эффект). И в этом случае можно, помимо прочего, затем определить уровни в крови, показывающие, что оба соединения содержатся в крови человека, подлежащего лечению, по меньшей мере в течение определенного интервала времени.

Термин «фармацевтически эффективное количество» или «клинически эффективное количество» комбинации терапевтических средств представляет собой количество, достаточное для обеспечения заметного улучшения относительно исходного состояния клинически наблюдаемых признаков и симптомов расстройства, которое лечат указанной комбинацией.

Термин «синергетический эффект» при использовании в данном документе относится к действию двух терапевтических средств, таких как, например, соединение формулы (I), например, Соединения А, и соединения-ингибитора MEK согласно данному изобретению, например, Соединения В, обеспечивающему эффект, например, замедления симптоматического прогрессирования пролиферативного заболевания, в частности, рака или его симптомов, который больше, чем простое суммирование эффектов каждого лекарства, введенного по отдельности. Синергетический эффект может быть рассчитан, например, при помощи пригодных способов, таких как сигмоидальное уравнение для вычисления максимальной эффективности (Holford, N.H.G. and Scheiner, L.B., Clin. Pharmacokinet. 6: 429-453 (1981)), уравнение аддитивности Лоу (Loewe, S. and Muischnek, H., Arch. Exp. Pathol Pharmacol. 114: 313-326 (1926)) и уравнение медианного эффекта (Chou, T.C. and Talalay, P., Adv. Enzyme Regul. 22: 27-55 (1984)). Каждое уравнение, упомянутое выше, может быть применено в отношении экспериментальных данных с получением соответствующего графика для облегчения оценки эффекта лекарственной комбинации. Соответствующие графики, связанные с уравнениями, упомянутыми выше, представляют собой кривую зависимости эффекта от концентрации, кривую изоболограммы и кривую показателя аддитивности, соответственно.

Термин «субъект» или «пациент» при использовании в данном документе включает животных, которые могут страдать или быть поражены раком или любым расстройством, которое включает, прямо или косвенно, рак. Примеры субъектов включают млекопитающих, например, людей, собак, коров, лошадей, свиней, овец, коз, котов, мышей, кроликов, крыс и трансгенных животных, не являющихся человеком. B предпочтительном варианте реализации изобретения субъект представляет собой человека, например, человека, страдающего или имеющего риск возникновения или потенциально способного заболеть раком.

Термины «около» или «приблизительно» имеют значение в пределах 10%, более предпочтительно в пределах 5% от данного значения или диапазона.

Фармацевтические комбинации согласно данному изобретению могут содержать соединение-ингибитор PKC 3-(1H-индол-3-ил)-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)-хиназолин-4-ил]-1H-пиррол-2,5-дион (здесь и далее упоминаемый как («Соединение А») в качестве ингибитора протеинкиназы С. Соединение А представляет собой соединение-ингибитор протеинкиназы С (PKC) Формулы I

Соединение А описано в WO 02/38561 и в патенте США №6645970. Синтез Соединения А и его ацетатной соли описан в Примере 56 публикации WO 02/38561, которая включена в данный документ посредством ссылки в полном объеме.

При упоминании Соединения А, термин «соль» или «соли» следует понимать как соль Соединения А, которая присутствует отдельно или в смеси со свободным соединением Формулы (I), и, предпочтительно, представляют собой фармацевтически приемлемые соли. Такие соли образованы, например, в форме кислотно-аддитивных солей, предпочтительно, с органическими или неорганическими кислотами, из соединения Формулы (I) с основным атомом азота, в частности, фармацевтически приемлемые соли. Пригодные неорганические кислоты представляют собой, например, галогеноводородные кислоты, такие как хлористоводородная кислота, серная кислота или фосфорная кислота. Пригодные органические кислоты представляют собой, например, карбоновые кислоты или сульфоновые кислоты, такие как уксусная кислота, фумаровая кислота или метансульфоновая кислота. Для выделения или очистки можно также использовать фармацевтически неприемлемые соли, например, пикраты или перхлораты. Для терапевтического применения применяют только фармацевтически приемлемые соли или свободные соединения (сообразно обстоятельствам, в форме фармацевтических препаратов), и поэтому они являются предпочтительными. С учетом близкой взаимосвязи между новыми соединениями в свободной форме и этими соединениями в форме их солей, включая соли, которые могут быть использованы в качестве промежуточных соединений, например, для очистки или идентификации новых соединений, любое упоминание свободных соединений выше и ниже по тексту следует понимать как относящееся также к соответствующим солям, где это уместно и целесообразно. Соли Соединения А, предпочтительно, представляют собой фармацевтически приемлемые соли; пригодные противоионы, образующие фармацевтически приемлемые соли, известны в данной области техники. Наиболее предпочтительная соль Соединения А представляет собой ацетатную соль.

Фармацевтические комбинации согласно данному изобретению могут содержать соединение-ингибитор MEK, выбранное из группы, содержащей (2-гидроксиэтокси)-амид 6-(4-бром-2-фторфениламино)-7-фтор-3-метил-3H-бензимидазол-5-карбоновой кислоты, (S)-5-фтор-2-(2-фтор-4-(метилтио)фениламино)-N-(2-гидроксипропокси)-1-метил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-карбоксамид, PD0325901, PD-184352, RDEA119, GSK1120212, XL518, AS-701255, AS-701173, AS703026, RDEA436, E6201, RO4987655, JTR-74057, RG7167 или RG7420, или его фармацевтически приемлемую соль.

Соединение-ингибитор MEK (2-гидроксиэтокси)-амид 6-(4-бром-2-фторфениламино)-7-фтор-3-метил-3H-бензимидазол-5-карбоновой кислоты (Соединение В) представляет собой соединение формулы (II)

Соединение-ингибитор MEK (2-гидроксиэтокси)-амид 6-(4-бром-2-фторфениламино)-7-фтор-3-метил-3H-бензимидазол-5-карбоновой кислоты (Соединение В) описано в заявке PCT № WO 03/077914, а способы его получения описаны, например, в Примере 18 в той же заявке.

Помимо того, что описано в данном документе, соединения, используемые в данном изобретении, могут иметь один или более асимметричных центров, и могут быть получены в виде отдельных (R)- или (S)-стереоизомеров или в виде их смесей, описанных в заявке PCT № WO 03/077914. Если специально не указано иное, то описание или название конкретного соединения в данном описании и формуле изобретения следует считать включающими как их отдельные энантиомеры, так и диастереомерные смеси, рацемические или иные смеси. Соответственно, данное изобретение включает также все такие изомеры, в том числе диастереомерные смеси и разделенные энантиомеры соединений согласно данному изобретению. Диастереомерные смеси могут быть разделены на отдельные диастереомеры по их физико-химическим различиям при помощи способов, известных специалистам в данной области техники, например, хроматографией или фракционной кристаллизацией. Энантиомеры могут быть разделены превращением энантиомерной смеси в диастереомерную смесь по реакции с соответствующим оптически активным соединением (например, спиртом), разделением диастереомеров и превращением (например, гидролизом) отдельных диастереомеров в соответствующие чистые энантиомеры. Способы определения стереохимии или разделения стереоизомеров хорошо известны в данной области техники (см. обзор в 4 главе “Advanced organic Chemistry”, 4^th edition, J. March. John Wiley and Sons, Нью-Йорк, 1992).

Соединение-ингибитор MEK (S)-5-фтор-2-(2-фтор-4-(метилтио)-фениламино)-N-(2-гидроксипропокси)-1-метил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-карбоксамид (Соединение С) представляет собой соединение формулы (III)

Соединение-ингибитор MEK (S)-5-фтор-2-(2-фтор-4-(метилтио)-фениламино)-N-(2-гидроксипропокси)-1-метил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-карбоксамид (Соединение С) описано в Примере 25-ВВ заявки PCT № WO 2007/044084, где описаны также способы его получения.

Дополнительные ингибиторы MEK, которые могут быть использованы в комбинации согласно данному изобретению, включают, но не ограничиваясь этим, PD0325901 (Pfizer) (см. публикацию PCT № WO 02/06213), PD-184352 (Pfizer), RDEA119 (Ardea Biosciences), GSK1120212 (GlaxoSmithKline) (см. публикацию PCT № WO 05/121142), XL518 (Exelexis), AS-701255 (Merck Serono), AS-701173 (Merck Serono), AS703026 (Merck Serono), RDEA436 (Ardea Biosciences), E6201 (Eisai) (см. Goto et al, Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics, 3331(2): 485-495 (2009)), RO4987655 (Hoffmann-La Roche), JTR-74057, RG7167 и/или RG7420.

Предпочтительно, соединение-ингибитор MEK, используемое в комбинации согласно данному изобретению, выбрано из группы, состоящей из (2-гидроксиэтокси)-амида 6-(4-бром-2-фторфениламино)-7-фтор-3-метил-3H-бензимидазол-5-карбоновой кислоты (Соединения В), (S)-5-фтор-2-(2-фтор-4-(метилтио)фениламино)-N-(2-гидроксипропокси)-1-метил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-карбоксамида (Соединения С) или его фармацевтически приемлемой соли.

Соединение-ингибитор MEK, пригодное в комбинации согласно данному изобретению, представляет собой также PD0325901 N-[2(R),3-дигидроксипропокси]-3,4-дифтор-2-(2-фтор-4-йодфениламино)бензамид (см. публикацию PCT № WO 02/06213).

Предпочтительно, соединение-ингибитор, используемое в комбинации согласно данному изобретению, представляет собой (2-гидроксиэтокси)-амид 6-(4-бром-2-фторфениламино)-7-фтор-3-метил-3H-бензимидазол-5-карбоновой кислоты (Соединение В) или его фармацевтически приемлемую соль.

В отношении ингибиторов MEK термины «соль» или «соли», если не указано иное, включают соли кислотных и основных групп, которые могут присутствовать в соединениях согласно данному изобретению. Соединения согласно данному изобретению, которые являются основными по своей природе, могут образовывать широкий ряд солей с различными неорганическими и органическими кислотами. Кислоты, которые могут быть использованы для получения фармацевтически приемлемых кислотно-аддитивных солей таких основных соединений согласно данному изобретению, представляют собой кислоты, которые образуют нетоксичные кислотно-аддитивные соли, т.е. соли, содержащие фармацевтически приемлемые анионы, такие как ацетатные, бензоатные, бромидные, хлоридные, цитратные, фумаратные, гидробромидные, гидрохлоридные, йодидные, лактатные, малеатные, манделатные, нитратные, оксалатные, салицилатные, сукцинатные и тартратные соли. Поскольку одно соединение согласно данному изобретению может содержать более одного кислотного или основного фрагмента, то соединения согласно данному изобретению могут содержать моно-, ди- или трисоли в одном соединении.

В случае наличия кислотного фрагмента в соединении согласно данному изобретению, соль может быть образована обработкой соединения согласно данному изобретению основным соединением, в частности, неорганическим основанием. Предпочтительные неорганические соли представляют собой соли, образованные со щелочными и щелочноземельными металлами, такими как литий, натрий, калий, барий и кальций. Предпочтительные органические соли оснований включают, например, соли аммония, дибензиаммония, бензиламмония, 2-гидроксиэтиламмония, бис(2-гидроксиэтил)аммония, фенилэтилбензиламина, дибензилэтилендиамина и т.п. Другие соли кислых фрагментов могут включать, например, соли, образованные с прокаином, хинином и N-метилглюкозамином, а также соли, образованные с основными аминокислотами, такими как глицин, орнитин, гистидин, фенилглицин, лизин и аргинин. Особенно предпочтительная соль представляет собой натриевую или калиевую соль соединения согласно данному изобретению.

В отношении основных фрагментов, соль получают обработкой соединения согласно данному изобретению кислотным соединением, в частности, неорганической кислотой. Предпочтительные неорганические соли этого типа могут включать, например, гидрохлоридные, гидробромидные, сульфатные, фосфатные и т.п. соли. Предпочтительные органические соли этого типа могут включать, например, соли, образованные с уксусной, янтарной, лимонной, малеиновой, фумаровой, D-глутаминовой, гликолевой, бензойной, коричной и т.п. органическими кислотами. Особенно предпочтительная соль этого типа представляет собой гидрохлоридную или сульфатную соль Соединения B согласно данному изобретению.

Дополнительные фармацевтически приемлемые соли Соединения B и Соединения С, пригодные для данного изобретения, включают соли, описанные в заявке PCT № WO 03/077914 и в заявке PCT № WO 2007/044084, которые включены в данную заявку посредством ссылки.

Если не указано иное или очевидно не следует из контекста, то упоминание терапевтических средств, пригодных в фармацевтической комбинации согласно данному изобретению, содержит и свободное основание соединений и все фармацевтически приемлемые соли соединений.

Структура соединений, определяемая кодовыми номерами, тривиальными или торговыми названиями, может быть взята из актуального издания стандартного справочника “The Merck Index” или из баз данных, например, Patents International (IMS World Publications). Соответствующее содержание этих публикаций включено в данный документ посредством ссылки.

В каждом из представленных выше случаев, где представлены цитаты патентных заявок, рассматриваемый объект, имеющий отношение к представленным соединениям, включен в данную заявку посредством ссылки. Соединения, используемые в качестве терапевтических средств в фармацевтических комбинациях согласно данному изобретению, могут быть получены и введены, соответственно, так, как описано в цитированных документах. B границы объема данного изобретения входит также комбинация двух отдельных терапевтических средств, как описано выше, т.е. фармацевтическая комбинация в объеме данного изобретения может содержать также три терапевтических средства или более.

Фармацевтическая комбинация, которая содержит (а) соединение-ингибитор PKC или его фармацевтически приемлемую соль и (b) по меньшей мере одно соединение-ингибитор MEK или его фармацевтически приемлемую соль, и, необязательно, фармацевтически приемлемый носитель, упоминается здесь и далее как Комбинация согласно изобретению. Этот термин означает также фармацевтическую комбинацию, которая состоит из (а) соединения-ингибитора PCK или его фармацевтически приемлемой соли и (b) одного соединения-ингибитора MEK или его фармацевтически приемлемой соли, и, необязательно, фармацевтически приемлемого носителя, при этом ингибитор PKC и соединение-ингибитор MEK представляют собой единственные терапевтические средства.

Пример Комбинации согласно изобретению представляет собой фармацевтическую комбинацию, которая содержит (а) соединение-ингибитор PKC 3-(1H-индол-3-ил)-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)-хиназолин-4-ил]-1H-пиррол-2,5-дион (Соединение А) или его фармацевтически приемлемую соль и (b) по меньшей мере одно соединение-ингибитор MEK, выбранное из группы, содержащей (2-гидроксиэтокси)-амид 6-(4-бром-2-фторфениламино)-7-фтор-3-метил-3H-бензимидазол-5-карбоновой кислоты (Соединение В), (S)-5-фтор-2-(2-фтор-4-(метилтио)фениламино)-N-(2-гидроксипропокси)-1-метил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-карбоксамид (Соединение С), PD0325901, PD-184352, RDEA119, GSK1120212, XL518, AS-701255, AS-701173, AS703026, RDEA436, E6201, RO4987655, JTR-74057, RG7167 или RG7420, или его фармацевтически приемлемую соль, и, необязательно, фармацевтически приемлемый носитель.

В предпочтительном варианте реализации данного изобретения компоненты комбинации представляют собой (а) соединение-ингибитор PKC 3-(1H-индол-3-ил)-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)-хиназолин-4-ил]-1H-пиррол-2,5-дион (Соединение А) или его фармацевтически приемлемую соль и (b) соединение-ингибитор MEK, выбранное из группы, состоящей из (2-гидроксиэтокси)-амида 6-(4-бром-2-фторфениламино)-7-фтор-3-метил-3H-бензимидазол-5-карбоновой кислоты (Соединение В), (S)-5-фтор-2-(2-фтор-4-(метилтио)фениламино)-N-(2-гидроксипропокси)-1-метил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-карбоксамида (Соединение С), или его фармацевтически приемлемую соль.

В другом предпочтительном варианте реализации данного изобретения компоненты комбинации представляют собой (а) соединение-ингибитор PKC 3-(1H-индол-3-ил)-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)-хиназолин-4-ил]-1H-пиррол-2,5-дион (Соединение А) или его фармацевтически приемлемую соль и (b) соединение-ингибитор MEK (2-гидроксиэтокси)-амид 6-(4-бром-2-фторфениламино)-7-фтор-3-метил-3H-бензимидазол-5-карбоновой кислоты (Соединение В), или его фармацевтически приемлемую соль.

В предпочтительном варианте реализации данного изобретения компоненты комбинации представляют собой (а) соединение-ингибитор PKC 3-(1H-индол-3-ил)-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)-хиназолин-4-ил]-1H-пиррол-2,5-дион (Соединение А) или его фармацевтически приемлемую соль и (b) соединение-ингибитор MEK (S)-5-фтор-2-(2-фтор-4-(метилтио)фениламино)-N-(2-гидроксипропокси)-1-метил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-карбоксамида (Соединение С), или его фармацевтически приемлемую соль.

Данное изобретение относится также к комбинированному препарату или фармацевтической композиции, содержащей (а) соединение-ингибитор PKC, например, 3-(1H-индол-3-ил)-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)-хиназолин-4-ил]-1H-пиррол-2,5-дион (Соединение А) или его фармацевтически приемлемую соль и (b) соединение-ингибитор MEK, выбранное из группы, содержащей (2-гидроксиэтокси)-амид 6-(4-бром-2-фторфениламино)-7-фтор-3-метил-3H-бензимидазол-5-карбоновой кислоты, (S)-5-фтор-2-(2-фтор-4-(метилтио)фениламино)-N-(2-гидроксипропокси)-1-метил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-карбоксамид, PD0325901, PD-184352, RDEA119, GSK1120212, XL518, AS-701255, AS-701173, AS703026, RDEA436, E6201, RO4987655, JTR-74057, RG7167 или RG7420, или его фармацевтически приемлемую соль, и, необязательно, фармацевтически приемлемый носитель.

В отдельном варианте реализации данное изобретение относится к комбинированному препарату, который содержит: (i) одну или более стандартных лекарственных форм компонента комбинации (а) и (ii) одну или более стандартных лекарственных форм компонента комбинации (b).

Данное изобретение относится, в частности, к Комбинации согласно изобретению, пригодной для лечения или предупреждения пролиферативного заболевания у субъекта, нуждающегося в этом. B этом варианте реализации данного изобретения Комбинацию согласно изобретению используют для лечения или предупреждения пролиферативного заболевания, включающего введение субъекту комбинированной терапии, содержащей эффективное количество ингибитора PKC, например, 3-(1H-индол-3-ил)-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)-хиназолин-4-ил]-1H-пиррол-2,5-диона (Соединение А) или его фармацевтически приемлемой соли и соединения-ингибитора MEK, например, которое выбрано из группы, содержащей (2-гидроксиэтокси)-амид 6-(4-бром-2-фторфениламино)-7-фтор-3-метил-3H-бензимидазол-5-карбоновой кислоты, (S)-5-фтор-2-(2-фтор-4-(метилтио)фениламино)-N-(2-гидроксипропокси)-1-метил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-карбоксамид, PD0325901, PD-184352, RDEA119, GSK1120212, XL518, AS-701255, AS-701173, AS703026, RDEA436, E6201, RO4987655, JTR-74057, RG7167 или RG7420, или его фармацевтически приемлемой соли. Предпочтительно, соединение-ингибитор MEK вводят в терапевтически эффективных дозах, которые, при комбинировании, обеспечивают благоприятный эффект. Введение может быть одновременным или последовательным.

Пролиферативное заболевание, которое лечат или предупреждают при помощи Комбинации согласно данному изобретению, представляет собой, в основном, опухоль и/или рак. Примеры пролиферативных заболеваний включают меланому, в частности, увеальную меланому, метастатическую увеальную меланому, GNAQ- или GNA11-мутантную увеальную меланому и рак, и более конкретно, увеальную меланому, метастатическую увеальную меланому и GNAQ- или GNA11-мутантную метастатическую увеальную меланому.

В отдельном варианте реализации данного изобретения пролиферативное заболевание представляет собой солидную опухоль. Термин «солидная опухоль» специально означает меланому, в частности, увеальную меланому, например, метастатическую увеальную меланому. Кроме того, в зависимости от типа опухоли и конкретной используемой комбинации, может быть достигнуто уменьшение объема опухоли. Комбинации, описанные в данном документе, пригодны также для предупреждения метастатического распространения опухолей и роста или развития микрометастазов. Комбинации, описанные в данном документе, особенно пригодны для лечения пациентов с плохим прогнозом, особенно таких пациентов с плохим прогнозом, которые страдают от метастатической увеальной меланомы.

В дополнительном варианте реализации изобретения пролиферативное заболевание представляет собой меланому, в частности, увеальную меланому, например, метастатическую увеальную меланому.

В дополнительном варианте реализации изобретения пролиферативное заболевание представляет собой увеальную меланому, например, метастатическую увеальную меланому.

Следует понимать, что для лечения пролиферативного заболевания в соответствии с данным изобретением Комбинация согласно изобретению может быть использована самостоятельно.

Было обнаружено, что комбинированная терапия, содержащая Комбинацию согласно изобретению, приводит к неожиданному улучшению при лечении или предупреждении пролиферативных заболеваний, по сравнению с монотерапией. При одновременном, последовательном или раздельном введении, соединение-ингибитор PKC 3-(1H-индол-3-ил)-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)-хиназолин-4-ил]-1H-пиррол-2,5-дион (Соединение А) и соединение-ингибитор MEK (2-гидроксиэтокси)-амид 6-(4-бром-2-фторфениламино)-7-фтор-3-метил-3H-бензимидазол-5-карбоновой кислоты (Соединение В) синергетически взаимодействуют, подавляя клеточную пролиферацию.

Природа пролиферативных заболеваний является многофакторной. При некоторых обстоятельствах можно комбинировать лекарства с различными механизмами действия. Однако простое комбинирование терапевтических средств с различным механизмом действия не обязательно приводит к получению комбинаций с преимущественным действием.

Введение фармацевтической комбинации согласно данному изобретению может приводить не только к благоприятному эффекту, например, синергетическому терапевтическому эффекту, например, в отношении облегчения, отсрочки прогрессирования или подавления симптомов, но и к дополнительным, неожиданным благоприятным эффектам, например, к меньшему количеству побочных эффектов, улучшенному качеству жизни или снижению тяжести заболевания, по сравнению с монотерапией с применением только одного фармацевтически терапевтического средства, используемого в комбинации согласно данному изобретению.

Дополнительное преимущество заключается в том, что могут быть использованы более низкие дозы терапевтических средств Комбинации согласно изобретению, например, необходимые дозы зачастую могут быть не только уменьшены, но и могут применяться реже, или могут быть использованы для уменьшения случаев побочных эффектов, наблюдаемых при применении только одного из компонентов комбинации. Это соответствует желаниям и требованиям пациентов, подлежащих лечению.

При помощи общепризнанных экспериментальных моделей можно показать, что Комбинация согласно изобретению обеспечивает благоприятные эффекты, описанные ранее в данном документе. Специалисты в данной области техники могут выбрать релевантную экспериментальную модель для подтверждения указанных преимущественных эффектов. Фармакологическая активность Комбинации согласно изобретению может быть продемонстрирована, например, в исследовании на клеточной линии, как описано далее.

Пригодные клинические исследования представляют собой, например, открытые исследования с повышением доз у пациентов с пролиферативными заболеваниями. Такие исследования подтверждают, в частности, синергизм терапевтических средств Комбинации согласно изобретению. Преимущественное действие на пролиферативное заболевание может быть напрямую определено по результатам этих исследований, которые известны специалистам в данной области техники. Такие исследования могут быть, в частности, пригодными для сравнения эффекта монотерапии с использованием либо терапевтического средства, либо Комбинации согласно изобретению.

В отдельном варианте реализации изобретения дозу ингибитора PKC Соединения А повышают до достижения максимально переносимой дозы, а соединение-ингибитор MEK согласно данному изобретению вводят в фиксированной дозе. Альтернативно, ингибитор PKC Соединение А может быть введено в фиксированной дозе, а доза по меньшей мере одного ингибитора MEK согласно данному изобретению может быть увеличена. Каждый пациент может получать дозы ингибитора PKC Соединения А и/или ингибитора MEK согласно данному изобретению либо ежедневно, либо периодически. B таких испытаниях может быть определена эффективность лечения, например, спустя 12, 18 или 24 недели, путем определения оценок симптомов, например, каждые 6 недель.

В предпочтительном варианте реализации изобретения ингибитор MEK представляет собой Соединение B или его фармацевтически приемлемую соль. B предпочтительном варианте реализации изобретения ингибитор MEK представляет собой Соединение В.

В предпочтительном варианте реализации изобретения ингибитор MEK представляет собой Соединение С или его фармацевтически приемлемую соль.

Определение синергетического взаимодействия между одним или более компонентами, оптимального диапазона эффекта и абсолютных диапазонов доз для каждого компонента для определенного эффекта, могут быть достоверно измерены путем введения компонентов в различных диапазонах масс./масс. соотношений и дозах пациентам, нуждающимся в лечении.

В предпочтительном варианте реализации данного изобретения Комбинация согласно изобретению содержит соединение-ингибитор PKC 3-(1H-индол-3-ил)-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)-хиназолин-4-ил]-1H-пиррол-2,5-дион (Соединение А) или его фармацевтически приемлемую соль и соединение-ингибитор MEK, выбранное из группы, содержащей (2-гидроксиэтокси)-амид 6-(4-бром-2-фторфениламино)-7-фтор-3-метил-3H-бензимидазол-5-карбоновой кислоты (Соединение В), (S)-5-фтор-2-(2-фтор-4-(метилтио)фениламино)-N-(2-гидроксипропокси)-1-метил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-карбоксамид (Соединение С), PD0325901, PD-184352, RDEA119, GSK1120212, XL518, AS-701255, AS-701173, AS703026, RDEA436, E6201, RO4987655, JTR-74057, RG7167 или RG7420, или его фармацевтически приемлемую соль для лечения или предупреждения пролиферативного заболевания, например, увеальной меланомы, метастатической увеальной меланомы и GNAQ- или GNA11-мутантной увеальной меланомы, предпочтительно увеальной меланомы с мутациями в GNAQ или GNA11.

В отдельном аспекте данного изобретения представлена синергетическая комбинация для введения человеку, содержащая (a) соединение-ингибитор PKC 3-(1H-индол-3-ил)-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)-хиназолин-4-ил]-1H-пиррол-2,5-дион (Соединение А) или его фармацевтически приемлемую соль и (b) соединение-ингибитор MEK согласно данному изобретению, предпочтительно Соединение B или его фармацевтически приемлемую соль, в таком диапазоне комбинаций (масс./масс.), которое соответствует диапазонам, наблюдаемым в модели опухоли, например, как описано ниже в Примерах, которую используют для определения синергетического взаимодействия.

В другом аспекте данного изобретения представлена синергетическая комбинация для введения человеку, содержащая (а) соединение-ингибитор PKC 3-(1H-индол-3-ил)-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)-хиназолин-4-ил]-1H-пиррол-2,5-дион (Соединение А) или его фармацевтически приемлемую соль и (b) соединение-ингибитор MEK согласно данному изобретению, предпочтительно, соединение B или его фармацевтически приемлемую соль, в таком диапазоне комбинаций (масс./масс.), который соответствует диапазонам, наблюдаемым в модели опухоли, например, как описано ниже в Примерах, которую используют для определения синергетического взаимодействия.

В соответствии с дополнительным аспектом в данном изобретении представлена синергетическая комбинация для введения людям, содержащая (а) соединение-ингибитор PKC 3-(1H-индол-3-ил)-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)-хиназолин-4-ил]-1H-пиррол-2,5-дион (Соединение А) или его фармацевтически приемлемую соль и (b) соединение-ингибитор MEK согласно данному изобретению, предпочтительно соединение B или его фармацевтически приемлемую соль, при этом диапазон доз для каждого компонента соответствует синергетическим диапазонам в соответствующей модели опухоли, например, в моделях опухоли, описанных ниже в Примерах, используемых, главным образом, для определения синергетического взаимодействия.

Одной из задач данного изобретения является обеспечение фармацевтической композиции, содержащей такое количество Комбинации согласно изобретению, которое является совместно терапевтически эффективным против пролиферативного заболевания. B такой композиции комбинация компонентов (а) и (b) может быть введена либо в отдельной композиции, либо в стандартной лекарственной форме, вводимой параллельно, но раздельно, либо может быть введена последовательно любым подходящим способом. Стандартная лекарственная форма также может быть фиксированной комбинацией.

Фармацевтические композиции для раздельного введения обоих компонентов комбинации или для введения фиксированной комбинации, т.е. единой лекарственной композиции, содержащей Комбинацию согласно изобретению, могут быть получены по способам, известным per se, и они представляют собой композиции, пригодные для энтерального, такого как пероральное или ректальное, или парентерального введения млекопитающим (теплокровным животным), включая человека, содержащие терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного фармакологически активного компонента комбинации отдельно, например, как описано выше, или в комбинации с одним или более фармацевтически приемлемыми носителями, особенно подходящими для энтерального или парентерального применения.

Новая фармацевтическая композиция может содержать от около 0,1% до около 99,9%, предпочтительно, от около 1% до около 60% терапевтического средства(средств).

Подходящие фармацевтические композиции для комбинированной терапии для энтерального или парентерального введения представляют собой, например, композиции в стандартных лекарственных формах, таких как покрытые сахаром таблетки, таблетки, капсулы, суппозитории или ампулы. Если не указано иное, их получают по способам, известным per se, например, путем различного стандартного смешивания, растирания в порошок, прямого прессования, гранулирования, покрытия сахаром, растворения, процессов лиофилизации, гранулирования из расплава или технологий изготовления, понятных специалистам в данной области техники. Следует понимать, что разовое содержание компонента комбинации, содержащегося в отдельной дозе каждой лекарственной формы, не обязательно должно составлять эффективное количество, поскольку необходимое эффективное количество может быть достигнуто путем введения множества единиц дозирования.

Стандартная лекарственная форма, содержащая комбинацию средств или отдельные средства из комбинации средств, может быть в форме микротаблеток внутри капсулы, например, желатиновой капсулы. Для этого может быть использована желатиновая капсула, используемая в фармацевтических композициях, такая как твердая желатиновая капсула, известная как CAPSUGEL, доступная от Pfizer.

Стандартные лекарственные формы согласно данному изобретению могут необязательно дополнительно содержать дополнительные стандартные носители или вспомогательные вещества, используемые для фармацевтических препаратов. Примеры таких носителей включают, но не ограничиваясь этим, разрыхлители, связующие вещества, смазывающие вещества, скользящие средства, стабилизаторы и наполнители, разбавители, красители, ароматизаторы и консерванты. Специалисты в данной области техники могут выбрать один или несколько из упомянутых выше носителей с учетом конкретных требуемых свойств лекарственной формы путем стандартного экспериментирования и без лишних затрат. Количество каждого используемого носителя может варьироваться в диапазонах, стандартных в данной области техники. B следующих ссылках, которые включены в данный документ посредством ссылки, описаны приемы и вспомогательные вещества, используемые для составления пероральных лекарственных форм. Смотри The Handbook of Pharmaceutical Excipients, 4^th edition, Rowe et al., Eds., American Pharmaceuticals Association (2003); и Remington: the Science and Practice of Pharmacy, 20^th edition., Gennaro, Ed., Lippincott Williams & Wilkins (2003).

Эти необязательные дополнительные стандартные носители могут быть включены в пероральную лекарственную форму путем введения одного или более дополнительных стандартных носителей в исходную смесь до или во время гранулирования, или путем смешивания одного или более стандартных носителей с гранулами, содержащими комбинацию средств или отдельные средства из комбинации средств в пероральной лекарственной форме. B последнем варианте реализации комбинированная смесь может быть дополнительно перемешана, например, в V-образном смесителе, а затем ее прессуют или формуют в таблетку, например, сплошную таблетку, инкапсулируют в капсулу или наполняют ей пастилку.

Примеры фармацевтически приемлемых разрыхлителей включают, но не ограничиваясь этим, крахмалы; глины; целлюлозы; альгинаты; камеди; поперечно-сшитые полимеры, например, поперечно-сшитый поливинилпирролидон или кросповидон, например, Polyplasdone XL от International Specialty Products (Вэйн, штат Нью-Джерси); поперечно-сшитую карбоксиметилцеллюлозу натрия или кроскармеллозу натрия, например, AC-DI-SOL от FMC; и поперечно-сшитую карбоксиметилцеллюлозу кальция; соевые полисахариды; и гуаровую камедь. Содержание разрыхлителя может составлять от около 0% до около 10% массы композиции. B одном из вариантов реализации изобретения содержание разрыхлителя составляет от около 0,1% до около 5% массы композиции.

Примеры фармацевтически приемлемых связующих веществ включают, но не ограничиваясь этим, крахмалы; целлюлозу и ее производные, например, микрокристаллическую целлюлозу, например, Avicel PH от FMC (Филадельфия, штат Пенсильвания), гидроксипропилцеллюлозу, гидроксиэтилцеллюлозу и гидроксипропилметилцелюллозу Methocel от Dow Chemical Corp. (Мидлэнд, штат Миссури); сахарозу; декстрозу; кукурузный сироп; полисахариды; и желатин. Содержание связующего вещества может составлять от около 0% до около 50%, например, 2-20% массы композиции.

Примеры фармацевтически приемлемых смазывающих веществ и фармацевтически приемлемых скользящих средств включают, но не ограничиваясь этим, коллоидный диоксид кремния, трисиликат магния, крахмалы, тальк, трехосновной фосфат кальция, стеарат магния, стеарат алюминия, стеарат кальция, карбонат магния, оксид магния, полиэтиленгликоль, порошкообразную целлюлозу и микрокристаллическую целлюлозу. Содержание смазывающего вещества может составлять от около 0% до около 10% массы композиции. B одном из вариантов реализации изобретения содержание смазывающего вещества может составлять от около 0,1% до около 1,5% массы композиции. Содержание скользящего средства может составлять от около 0,1% до около 10% массы.

Примеры фармацевтически приемлемых наполнителей и фармацевтически приемлемых разбавителей включают, но не ограничиваясь этим, кондитерский сахар, прессуемый сахар, декстраты, декстрин, декстрозу, лактозу, маннит, микрокристаллическую целлюлозу, порошкообразную целлюлозу, сорбит, сахарозу и тальк. Содержание наполнителя и/или разбавителя, например, может составлять от около 0% до около 80% массы композиции.

В отдельном варианте реализации данное изобретение относится также к Комбинации согласно изобретению для применения при получении фармацевтической композиции или лекарственного средства для лечения или предупреждения пролиферативного заболевания у субъекта, нуждающегося в этом.

В дополнительном варианте реализации данное изобретение относится к применению (а) соединения-ингибитора PKC 3-(1H-индол-3-ил)-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)-хиназолин-4-ил]-1H-пиррол-2,5-диона (Соединения А) или его фармацевтически приемлемой соли и (b) по меньшей мере одного соединения-ингибитора MEK, выбранного из группы, содержащей (2-гидроксиэтокси)-амид 6-(4-бром-2-фторфениламино)-7-фтор-3-метил-3H-бензимидазол-5-карбоновой кислоты, (S)-5-фтор-2-(2-фтор-4-(метилтио)фениламино)-N-(2-гидроксипропокси)-1-метил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-карбоксамид, PD0325901, PD-184352, RDEA119, GSK1120212, XL518, AS-701255, AS-701173, AS703026, RDEA436, E6201, RO4987655, JTR-74057, RG7167 или RG7420, или его фармацевтически приемлемую соль, для получения фармацевтической композиции или лекарственного средства для лечения или предупреждения пролиферативного заболевания у субъекта, нуждающегося в этом. Предпочтительный ингибитор MEK выбран из (2-гидроксиэтокси)-амида 6-(4-бром-2-фторфениламино)-7-фтор-3-метил-3H-бензимидазол-5-карбоновой кислоты (Соединения В) или (S)-5-фтор-2-(2-фтор-4-(метилтио)фениламино)-N-(2-гидроксипропокси)-1-метил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-карбоксамида (Соединения С).

В соответствии с данным изобретением, терапевтически эффективное количество каждого из комбинированных компонентов Комбинации согласно изобретению может быть введено одновременно или последовательно и в любом порядке, и эти компоненты могут быть введены по отдельности или в виде фиксированной комбинации. Например, способ лечения пролиферативного заболевания согласно данному изобретению может включать (i) введение первого средства (а) в свободной форме или в форме фармацевтически приемлемой соли и (ii) введение средства (b) в свободной форме или в форме фармацевтически приемлемой соли, одновременно или последовательно в любом порядке, в совместно терапевтически эффективных количествах, предпочтительно в синергетически эффективных количествах, например, в ежедневных или прерывистых дозах, соответствующих количествам, описанным в данном документе. Отдельные компоненты Комбинации согласно изобретению могут быть введены по отдельности в различное время в течение курса терапии или параллельно в отдельных или единых комбинированных формах. Поэтому термин «введение» включает также применение пролекарства компонента комбинации, которое превращается in vivo в такой компонент комбинации. Следовательно, данное изобретение следует понимать как охватывающее все такие режимы одновременного или чередующегося лечения, и соответствующим образом следует интерпретировать термин «введение».

Эффективная доза каждого компонента комбинации, используемого в Комбинации согласно изобретению, может варьироваться в зависимости от конкретного используемого соединения или фармацевтической композиции, способа введения, состояния, подлежащего лечению, и тяжести состояния, подлежащего лечению. Следовательно, режим введения доз Комбинации согласно изобретению выбирают в соответствии с различными факторами, включая способ введения и почечную и печеночную функцию пациента. Опытный клиницист или врач может легко определить и предписать эффективное количество отдельных терапевтических средств, необходимое для облегчения, противодействия или остановки развития состояния.

Оптимальные соотношения отдельных и комбинированных доз, а также концентрации комбинированных компонентов (а) и (b) Комбинации согласно изобретению, которые обеспечивают эффективность без токсичности, основаны на кинетике доступности терапевтических средств для сайтов-мишеней, и их определяют при помощи способов, известных специалистам в данной области техники.

Эффективная доза каждого компонента комбинации может требовать более частного введения одного соединения(-ий), по сравнению с другим соединением(-ями) в комбинации. Поэтому для обеспечения правильного дозирования упакованные фармацевтические продукты могут содержать одну или более лекарственных форм, которые содержат комбинацию соединений, и одну или более лекарственных форм, которые содержат одно соединение комбинации, но не содержат другого соединения(-ий) комбинации.

При применении комбинированных компонентов, которые использованы в Комбинации согласно изобретению, в форме, продаваемой в виде одного лекарства, их доза и способ введения могут соответствовать информации, представленной на вкладыше упаковки соответствующего продаваемого лекарства, если в данном документе не указано иное.

Соединение-ингибитор PKC Соединение А может быть введено соответствующему субъекту ежедневно в виде одной или дробных доз, при этом эффективная доза составляет от около 0,05 до около 50 мг на кг массы тела в сутки, предпочтительно, от около 0,1 до около 25 мг на кг массы тела в сутки, более предпочтительно, от около 0,5 до около 10 мг на кг массы тела в сутки в виде одной или дробных доз. Для человека массой 70 кг диапазон предпочтительной дозы составляет около 35-700 мг в сутки.

Соединение-ингибитор MEK Соединение B может быть введено соответствующему субъекту в виде одной или дробных доз, при этом эффективная доза составляет от около 0,001 до около 100 мг на кг массы тела в сутки, предпочтительно от около 1 до около 35 мг/кг/сутки, в виде одной или дробных доз. Для человека массой 70 кг диапазон предпочтительной дозы составляет от около 0,05 до 7 г/сутки, предпочтительно от около 0,05 до около 2,5 г/сутки.

Соединение-ингибитор MEK Соединение С может быть введено соответствующему субъекту в виде одной или дробных доз, при этом эффективная доза составляет от около 0,001 до около 100 мг на кг массы тела в сутки, предпочтительно от около 1 до около 35 мг/кг/сутки, в виде одной или дробных доз. Для человека массой 70 кг диапазон предпочтительной дозы составляет от около 0,07 до 2,45 г/сутки, предпочтительно от около 0,05 до около 1,0 г/сутки.

Оптимальная доза каждого компонента комбинации для лечения пролиферативного заболевания может быть определена эмпирически для каждого индивидуума с применением известных способов, и она зависит от множества факторов, включая, но не ограничиваясь ими, степень распространения заболевания; возраст, массу тела, общее состояние здоровья, пол и питание индивидуума; время и способ введения; и другие лекарственные средства, которые принимает индивидуум. Оптимальные дозы могут быть установлены при помощи стандартного тестирования и способов, известных в данной области техники.

Количество каждого компонента комбинации, которое может быть смешано с материалами носителей для получения разовой лекарственной формы, варьируется в зависимости от проходящего лечение индивидуума и конкретного способа введения. B некоторых вариантах реализации изобретения стандартные лекарственные формы, содержащие комбинацию средств, описанную в данном документе, содержат такие количества каждого средства комбинации, которые обычно вводят при отдельном введении этих средств.

Частота введения доз может варьироваться в зависимости от используемого соединения и конкретного состояния, подлежащего лечению или предупреждению. Как правило, является предпочтительным применение минимальной дозы, достаточной для обеспечения эффективной терапии. Как правило, пациенты могут быть проверены на терапевтическую эффективность с применением анализов, пригодных для состояния, подлежащего лечению или предупреждению, которые хорошо известны специалистам в данной области техники.

Данное изобретение относится к способу лечения субъекта, страдающего от пролиферативного заболевания, включающему введение указанному субъекту Комбинации согласно изобретению в количестве, которое является совместно терапевтически эффективным против пролиферативного заболевания. B частности, пролиферативное заболевание, подлежащее лечению Комбинацией согласно изобретению, выбрано из меланомы, увеальной меланомы, метастатической увеальной меланомы, GNAQ- или GNA11-мутантной увеальной меланомы и GNAQ- или GNA11-мутантной метастатической увеальной меланомы.

Кроме того, лечение может включать хирургическое вмешательство или радиотерапию.

Данное изобретение дополнительно относится к Комбинации согласно изобретению для применения при лечении пролиферативного заболевания, в частности, рака, такого как увеальная меланома, метастатическая увеальная меланома, GNAQ- или GNA11-мутантная увеальная меланома и, более конкретно, увеальная меланома, метастатическая увеальная меланома и GNAQ- или GNA11-мутантная метастатическая увеальная меланома.

В данном изобретении дополнительно представлена коммерческая упаковка, содержащая терапевтические средства Комбинации согласно изобретению вместе с инструкциями по их одновременному, раздельному или последовательному введению для применения для отсрочки прогрессирования или лечения пролиферативного заболевания у субъекта, нуждающегося в этом.

Следующие Примеры иллюстрируют изобретение, описанное выше; однако они никоим образом не предназначены для ограничения границ объема данного изобретения. Преимущественные эффекты фармацевтической комбинации согласно данному изобретению могут быть определены также другими экспериментальными моделями, известными специалистам в данной области техники.

ПРИМЕРЫ

ПРИМЕР 1

Клеточные линии и клеточная культура

Клеточные линии увеальной меланомы 92.1 и OMM-1 выращивали в среде Roswell Park Memorial Institute (RPMI 1640) (American Type Culture Collection (ATCC №30-2001)) с добавлением 10% эмбриональной бычьей сыворотки и инкубировали при 37°С/5% диоксида углерода. Клеточная линия 92.1 имеет мутацию GNAQ, а клеточная линия OMM1 имеет мутацию в GNA11.

Получение соединений для in vitro экспериментов

Растворы соединений 3-(1H-индол-3-ил)-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)-хиназолин-4-ил]-1H-пиррол-2,5-диона, здесь и далее AEB071, и (2-гидроксиэтокси)-амида 6-(4-бром-2-фторфениламино)-7-фтор-3-метил-3H-бензимидазол-5-карбоновой кислоты, здесь и далее Соединение В, получали в диметилсульфоксиде (ДМСО) с конечной концентрацией 10 мМ.

Измерение пролиферации при помощи xCELLigence

Рост увеальных клеток непрерывно контролировали при помощи клеточного анализатора в реальном времени xCELLigence. Е-планшеты (Roche, №05232368001) инкубировали с клетками, добавленными в конечной концентрации 3000 клеток на 100 мкл на лунку. Сопротивление измеряли каждые 2 часа в течение 24 часов. Спустя 24 часа к лункам добавляли ДМСО, Соединение В, AEB071 или оба соединения в конечной концентрации 1 мкМ каждого соединения до общего объема 120 мкл. Сопротивление измеряли каждые 2 часа в течение 7 суток. Данные нормализовали к 0 дню до добавления соединения.

Показано влияние 3-(1H-индол-3-ил)-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)-хиназолин-4-ил]-1H-пиррол-2,5-диона (Соединения А) и (2-гидроксиэтокси)-амида 6-(4-бром-2-фторфениламино)-7-фтор-3-метил-3H-бензимидазол-5-карбоновой кислоты (Соединения В) на пролиферацию увеальной меланомы in vitro (Фигура 1). Рост клеточных линий увеальной меланомы в течение 6 суток измеряли при помощи технологии xCELLigence в присутствии 0,5 мкМ ДМСО, 0,5 мкМ AEB071, 0,5 мкМ Соединения B или 0,5 мкМ AEB071 + 0,5 мкМ Соединения В. B клеточных линиях 92.1 и OMM1, которые содержат мутации GNAQ и GNA11, соответственно, AEB071 замедляет рост клеток; этот эффект усилен при использовании в комбинации с Соединением В. Соединение B в качестве единственного средства имеет слабое влияние на рост обеих клеточных линий увеальной меланомы 92.1 и OMM1; было совершенно очевидно, что комбинация этих двух средств может полностью подавлять пролиферацию обеих клеточных линий.

ПРИМЕР 2

Клеточные линии и клеточная культура

Как в Примере 1.

Как в примере 1.

Клеточная пролиферация в матрице доз комбинации

Клетки высеивали при плотности 3000 клеток на 100 мкл среды на лунку в 96-луночных планшетах (Costar №3904) и инкубировали в течение ночи перед добавлением соединения. Готовили свежие растворы соединений в соответствующей культуральной среде и вручную добавляли на планшеты при помощи электронной многоканальной пипетки в трех экземплярах. Клетки обрабатывали только соединением или комбинацией AEB071 и Соединения B, разбавленной 1:2 для десяти точек разбавления в диапазоне от 0,039 мкМ до 10 мкМ. Жизнеспособность клеток оценивали во время добавления соединения и спустя 144 часа обработки путем количественного определения клеточных уровней АТФ при помощи набора Cell Titer Glo (Promega №G7571) в соответствии с протоколом производителя. Планшеты считывали на люминесцентном планшет-ридере (Victor X4, Perkin Elmer). Фракционное замедление роста рассчитывали при помощи XLfit и нормализовали к лункам, не содержащим соединения. Для расчета замедления роста сначала вычитали значение на 0 день, а затем рассчитывали замедление. Данные анализировали при помощи программного обеспечения Chalice (http://chalice.zalicus.com/documentation/analyzer/index.jsp) для расчета замедления роста, ингибирования и избытка HSA.

РЕЗУЛЬТАТЫ

Антипролиферативный эффект AEB071 в комбинации с Соединением B обусловлен синергией между этими двумя средствами, как показано на Фигуре 2. Фигура 2 иллюстрирует более подробное рассмотрение схемы синергии между этими двумя средствами в клеточной линии 92.1. Показана матрица доз двух средств; влияние на клеточный рост по сравнению с необработанными клетками показано на верхней схеме, избыточное ингибирование (HSA) показано на центральной схеме, а замедление роста относительно нормализации к нулевому дню показано на нижней схеме. В данной области техники известны способы расчета замедления роста, ингибирования и избытка HSA.

Оба средства, Соединение B и AEB071, были по отдельности активными в клеточной линии 92.1, но важно отметить, что комбинирование этих двух средств привело более чем к аддитивному увеличению ответа при более низких дозах. Например, 0,16 мкМ отдельно средства Соединения B привело к 57% замедлению роста, и 0,16 мкМ отдельно средства AEB071 привело к 19% замедлению роста, а комбинация этих двух средств в указанных дозах привела к замедлению роста 82% (Фигура 2, верхняя схема). Такая комбинация доз демонстрирует избыточное ингибирование, равное 25, как показано на средней схеме на Фигуре 2. Значения замедления и избыточного ингибирования для всех комбинаций доз представлены на Фигуре 2. Для расчета процентного замедления роста, представленного на нижней схеме на Фигуре 2, учитывали скорость роста клеток в течение 3 дней анализа. 100% указывает на стаз, что означает, что клетки не росли и не погибали в ходе анализа, значения свыше 100 указывают на гибель, при этом 200 означает полную гибель клеток, а значения менее 100 указывают на рост от начала анализа до конечной точки на 3 день.

ПРИМЕР 3: Биохимический профиль белкового иммуноблота после обработки лекарством клеточных линий увеальной меланомы 92.1 и OMM1.

Клетки увеальной меланомы инкубировали с 0,5 мкМ AEB071, 0,5 мкМ Соединения В, с обоими соединениями или только с ДМСО. Клетки лизировали спустя 2, 4, 8, 24 или 48 часов обработки в экстракционном буфере белков млекопитающих M-PER, содержащем таблетку с коктейлем ингибиторов фосфатазы PhosStop (Roche Diagnostics №04906837001) и таблетку с коктейлем полного ингибитора протеазы (Roche Diagnostics №11836145001). Белки разделяли на 4-12% Bis-Tris NuPAGE SDS геле (Invitrogen №WG1403Bx10), а затем переносили на нитроцеллюлозную мембрану, используя сухую систему блоттинга (Invitrogen iBLOT). Белки обнаруживали при помощи разбавлений 1:1000 анти-p44/42 MAPK (Cell Signaling Technologies №4377), анти-pMARCKS (Cell Signaling Technologies №2741), анти-pMEK1/2 (Cell Signaling Technologies №9121) и анти-бета-актина (Ambion № AM4202). Бета-актин обнаруживали при помощи подходящего вторичного антитела и системы обнаружения с инфракрасным красителем (Odyssey IRDye, LI-COR) в соответствии с протоколом производителя. Все остальные белки обнаруживали при помощи анти-кроличьего вторичного антитела HPR и проявляли, используя SuperSignal West Dura Chemiluminescent Substrate (Thermo Scientific №34076) на системе визуализации Syngene.

РЕЗУЛЬТАТЫ

Биохимическое действие этих средств оценивали после обработки 0,5 мкМ раствором AEB071 и 0,5 мкМ раствором Соединения В, или 0,5 мкМ растворами обоих средств одновременно в клеточных линиях увеальной меланомы 92.1 и OMM-1. Уровень pMARKCS был снижен (Фигура 3). Добавление Соединения B к AEB071 не оказало дополнительного влияния на экспрессию pMARCKS. Обработка тех же клеток Соединением B привела к снижению уровней pERK1/2, как можно видеть спустя 2 часа, а спустя 24 часа экспрессия pERK1/2 начала восстанавливаться. Кроме того, обработка Соединением B в качестве единственного средства с течением времени привела к инициации экспрессии pMEK1/2 в обеих клеточных линиях; это четко наблюдали спустя 48 часов обработки. Неожиданно, что лишь комбинация AEB071 и Соединения B привела к устойчивому подавлению pERK1/2, pMEK1/2. Важно, что AEB071 очевидно предотвращает индукцию pMEK, обусловленную Соединением B в качестве единственного средства обработки. Комбинация AEB071 и Соединения B подавляет компоненты этого пути в большей степени и в течение более продолжительного времени, по сравнению с любым из средств по отдельности.

Для оценки in vivo активности AEB071, Соединения B и комбинации AEB071 с Соединением В, как показано в Примерах 4, 5 и 6, использовали модель ксенотрансплантата человеческой увеальной меланомы 92.1 с мутацией GNAQ на голых мышах. Как можно видеть из полученных результатов, in vitro синергия, наблюдаемая между Соединением B и AEB071, трансформировалась в in vivo эффективность. Как показано на Фигуре 4, монотерапия соединением AEB071 привела к 3% О/К (p<0,01), добавление к этой схеме лечения соединением AEB071 Соединения В, вводимого дважды в сутки в дозе 3,5 мг/кг, привело к -22% T/T0 (средняя активность p<0,001, но не значительно в сравнении с только AEB071). Соединение B само по себе не обладало активностью со значением О/К 84%. Комбинация этих двух соединений сильно препятствует росту опухоли в модели увеальной меланомы 92.1 in vivo. Кроме того, лечение многократными дозами AEB071 в комбинации с Соединением B было эффективным в модели увеальной меланомы 92.1 in vivo, как показано на Фигуре 6. Эффективность этой комбинации увеличивалась в зависимости от дозы, при этом повышение дозы AEB071 в комбинации с Соединением В приводило к более высокой степени ответа.

ПРИМЕР 4: Оценка in vivo активности модели ксенотрансплантата человеческой увеальной меланомы 92.1 на голых мышах.

Получение соединения для in vivo экспериментов

Порошкообразный NVP-AEB071 (упоминаемый также как AEB071) (ацетатная соль, 87,96% свободного основания) добавляли к смеси 20% полиэтиленгликоля 400 (PEG400) : 4,5% 0,1 М HCl : 75,5% 5%-ного раствора декстрозы в воде (D5W), обозначенной как Носитель 1, и перемешивали с получением прозрачного красного раствора. NVP-Соединение B (упоминаемое также как Соединение В) готовили в виде однородной суспензии в смеси 1% карбоксиметилцеллюлозы: 0,5% Tween® 80 в деионизированной воде. Свежую суспензию готовили один раз в неделю для каждого соединения и хранили при 4°С.

Мыши

Самки бестимусных голых мышей (Crl:NU(Ncr)-Foxn1nu, Charles River) были 9-недельными и имели массу тела (МТ) в диапазоне 20,6-26,9 г на 1 день (D1) исследования. Животных ad libitum поили водой (обратный осмос, 1 м.д. Cl) и кормили кормом NIH 31 Modified and Irradiated Lab Diet®, состоящим из 18,0% неочищенного белка, 5,0% неочищенного жира и 5,0% неочищенного волокна. Мышей выращивали на Laboratory Animal Bedding от Enrich-o’cobs™ в статичных микроизоляторах с 12-часовым циклом освещения при 20-22°С (68-72°F) и влажности 40-60%. DRS-NC соответствует, в частности, рекомендациям Guide for Care and Use of Laboratory Animals в отношении ограничения свободы, содержания, хирургических процедур, кормления и регуляции жидкости, а также ветеринарного ухода. Программа защиты животных в DRS-NC аккредитована Association for Assessment and Accreditation of Laboratory Animal Care (AAALAC), что гарантирует соблюдение принятых стандартов по уходу и применению лабораторных животных.

Имплантация и измерение опухоли

Клетки увеальной меланомы 92.1 собирали во время экспоненциального роста и повторно суспендировали в холодном PBS (фосфатно-солевом буферном растворе) с 50% Matrigel™ (BD Biosciences). Каждой мыши в правый бок подкожно инокулировали 5×10⁶ клеток (0,2 мл клеточной суспензии). Для контролирования роста опухоли измеряли штангенциркулем в двух измерениях по мере приближения их среднего объема к заданному диапазону 100-150 мм³. Размер опухоли в мм³ рассчитывали по уравнению:

Объем опухоли = (ш² × д)/2

где ш = ширина, и д = длина опухоли в мм. Высоту опухоли можно оценить, приняв, что 1 мг эквивалентен 1 мм³ объема опухоли. Спустя двенадцать дней после имплантации клеток опухоли, на 1 день (D1) исследования животных с объемом опухоли 108-256 мм² разделили на шесть групп (n=10/группа) со средним объемом опухоли в группе 153-159 мм³.

AEB071 вводили в дозе 91 мг/кг три раза в сутки (TID) в течение 21 дня. Эффективность определяли по замедлению роста опухоли на 17 день, последний день участия всех мышей в исследовании. Активность рассчитывали как отношение опухоль/контроль (О/К), среднее процентное изменение объема опухоли с 1 по 17 день у мышей, получавших лекарство (ΔT), относительно мышей, получавших носитель, или как T/T0, процентное снижение в групповом среднем объеме опухоли с 1 дня. Как показано на Фигуре 4, монотерапия с AEB071 привела к 3% О/К (p<0,01). Добавление соединения В, вводимого дважды в день в дозе 3,5 мг/кг, к режиму лечения AEB071 привело к -22% T-T0 (средняя активность p<0,001, но не значительна в сравнении с только AEB071). Соединение B не обладало собственной активностью со значением О/К 84%.

ПРИМЕР 5

Как в Примере 4

Мыши

Как в Примере 4

Имплантация и измерение опухоли

Как в Примере 4

ПРИМЕР 6

Как в Примере 4

Мыши

Как в Примере 4

Имплантация и измерение опухоли

Как в Примере 4

Монотерапия с AEB071 привела к почти полному среднему стазу опухоли в течение периода введения доз, а комбинация обусловила слабое уменьшение средней опухоли. За две недели после периода введения доз опухоли прогрессировали с контрольной скоростью в группах лечения с монотерапией AEB071, тогда как опухоли прогрессировали медленнее в группе с комбинированным лечением (Фигура 5).

На Фигуре 5 показан рост опухоли in vivo в модели ксенотрансплантата человеческой увеальной меланомы 92.1 на голых мышах в течение >70 дней. Мышам вводили дозы в течение 21 дня, затем лечение прекращали и контролировали прирост опухоли. Спустя две недели после периода ввода доз опухоли прогрессировали с контрольной скоростью в группах лечения с монотерапией AEB071, тогда как опухоли прогрессировали с меньшей скоростью в группе с комбинированным лечением. Отсрочку роста опухоли не рассчитывали, поскольку две или более опухолей на группу стали статичными после первоначального периода роста, но тренд скорости роста опухоли показывает, что опухоли, обработанные комбинацией AEB071 с Соединением B росли медленнее, чем опухоли, обработанные только AEB071; опухоли, обработанные только Соединением В, не контролировали из-за низкой эффективности. Данные показывают, что комбинация AEB071 с Соединением B имеет более высокое изменение ответа, по сравнению с одним с любым одним средством в in vivo модели увеальной меланомы 92.1.

Фигура 6 иллюстрирует, что лечение многократными дозами AEB071 в комбинации с Соединением B было эффективным в дополнительном in vivo исследовании с применением модели увеальной меланомы 92.1. Эффективность комбинации увеличивалась в зависимости от дозы, при этом повышение дозы AEB071 в комбинации с Соединением B давало более высокую степень ответа. AEB071 вводили в дозах 90,95, 45,58 и 22,74 мг/кг (эквивалент 80, 40 и 20 мг/кг свободного основания) три раза в сутки (TID) в течение 21 дня в комбинации с Соединением B в дозе 3,5 мг/кг, которое вводили два раза в сутки, в модели ксенотрансплантата человеческой увеальной меланомы 92.1 на голых мышах. Эффективность определяли по замедлению роста опухоли на 22 день. Активность рассчитывали как отношение опухоль/контроль (О/К), среднее процентное изменение объема опухоли с 1 по 22 день у мышей, получавших лекарство (ΔT), относительно мышей, получавших носитель, или как T/T0, процентное снижение в групповом среднем объеме опухоли с 1 дня. Как показано на Фигуре 6, монотерапия препаратом AEB071 в дозе 90,95 мг/кг привела к 18% О/К (p<0,05). Монотерапия с 45,5 и 22,7 мг/кг приводила к 52% и 92% О/К, соответственно, и к несущественному среднему замедлению. Добавление Соединения В, вводимого два раза в день в дозе 3, /кг, в дополнение к дозам 90,95 и 45,58 мг/кг AEB071 приводило к -52% и -12% значения T-T0 (p<0,001 средней активности, но не значительно по сравнению с только AEB071), соответственно (p<0,001). Соединение B не обладает собственной активностью в этой in vivo модели со значением О/К 56%. Высокая доза комбинации приводила к четырем частичным регрессиям.

Выводы

Представлены экспериментальные данные, что комбинированное ингибирование PKC и MEK является синергетическим и эффективным при увеальной меланоме. Следовательно, такая комбинация является преимущественной при активации мутаций GNAQ или GNA11, поскольку активация мутаций в обоих генах приводит к зависимости от передачи сигналов PKC. Комбинирование указанных средств имеет антипролиферативное действие in vitro и является эффективным in vivo. Ингибирование PKC в клеточных линиях увеальной меланомы ослабляет pMARCKS, но оказывает умеренное действие на уровни pERK1/2. Ингибирование MEK одним средством может блокировать pERK1/2, однако с ингибитором MEK с течением времени возникают некоторые уровни pMEK1/2, что приводит к реактивации pERK1/2. Только комбинация ингибирования MEK и PKC может обеспечивать достижение устойчивого ослабления фосфорилирования MARCKS, ERK1/2 и MEK1/2.

ПРИМЕР 7

Представлено многоцентровое, многонациональное, открытое исследование комбинации AEB071 и Соединения В. Возможные пациенты представляют собой пациентов с диагностированной метастатической увеальной меланомой. Исследование состоит из двух частей. Фаза 1b представляет собой исследование повышения дозы, а Фаза II представляет собой рандомизированное исследование с двумя параллельными группами для оценки отношения MTD/RP2D {MTD (максимально переносимая доза)/RP2D (рекомендованная доза второй фазы)}, полученного на Фазе 1b. Исследование разработано как открытое (не слепое), поскольку все пациенты получают такую же дозу, как и другие пациенты, входящие в группу с одной дозой на Фазе Ib исследования, и принимают либо MTD/RP2D для комбинации AEB071 и Соединения В, вводимой BID (два раза в сутки), либо только MTD/RP2D для 45 мг Соединения В, вводимого BID (два раза в сутки) только в Фазе II исследования.

Экспериментальное лечение для оценки на Фазе Ib и Фазе II состоит из AEB071 и Соединения B или Соединения B в качестве единственного средства на Фазе II. Экспериментальное лечение вводят в виде фиксированной дозы, а не в соответствии с массой тела или площадью поверхности тела.

Все пациенты принимают лекарства ежедневно по 28-дневной схеме (цикл), без промежутка между циклами. Каждый пациент может продолжать лечение до тех пор, пока не прекратится благотворный эффект или пока он не почувствует значительные неблагоприятные явления, требующие устранения, прекращения на усмотрение исследователя или при аннулировании согласия пациента.

Фаза Ib представляет собой исследование повышения дозы, предназначенное для определения MTD (максимально переносимой дозы) и RP2D (рекомендованной дозы второй фазы) комбинированной терапии. AEB071 и Соединение B вводят всем пациентам на Фазе Ib исследования, а комбинированную дозу оценивают на безопасность путем повышения дозы AEB071 в комбинации с 30 мг дозой Соединения В.

Задача Фазы II данного исследования заключается в оценке ответа заболевания при помощи объективных измерений размера опухоли и для дополнительной характеристики безопасности и переносимости. Для получения такой оценки пациентов централизованно разделяют случайным образом 1:1 на группы, которые будут принимать либо MTD/RP2D для комбинации AEB071 и Соединения B BID, либо только 45 мг Соединения B BID (два раза в сутки).

AEB071 и Соединение B вводят перорально BID (два раза в сутки) в дозах, указанных ниже в Таблице, ежедневно, в течение каждого 28-дневного цикла.

Таблица Доза и схема лечения
Экспериментальное лечение	Фармацевтическая форма и способ введения	Доза (общая суточная доза), мг		Периодичность и/или схема
Экспериментальное лечение	Фармацевтическая форма и способ введения	Фаза I	Фаза II	Периодичность и/или схема
AEB071	Таблетка для перорального применения	400 (800)	RP2D (2×RP2D)	Ежедневно (28-дневные циклы)
Соединение В	Таблетка для перорального применения	30 (60)	45 (90)	Ежедневно (28-дневные циклы)

Лекарства вводят в то время как персонал исследовательского центра выполняет оценку опухоли. Если обнаруживают, что болезнь пациента прогрессирует, то лечение немедленно прекращают.

Claims

1. Фармацевтическая комбинация, содержащая соединение-ингибитор протеинкиназы С (PKC), которое представляет собой 3-(1H-индол-3-ил)-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)-хиназолин-4-ил]-1H-пиррол-2,5-дион или его фармацевтически приемлемую соль, и соединение-ингибитор митоген-активируемой протеинкиназы (MEK), которое представляет собой 2-гидроксиэтокси-амид 6-(4-бром-2-фторфениламино)-7-фтор-3-метил-3H-бензимидазол-5-карбоновой кислоты или его фармацевтически приемлемую соль, для одновременного, раздельного или последовательного введения для применения при лечении пролиферативного заболевания.

2. Фармацевтическая комбинация по п. 1, дополнительно содержащая по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель.

3. Фармацевтическая комбинация по п.1 для одновременного введения соединения-ингибитора PKC и соединения-ингибитора MEK.

4. Фармацевтическая комбинация по п.3 для одновременного введения соединения-ингибитора PKC и соединения-ингибитора MEK в виде отдельных доз.

5. Фармацевтическая комбинация по п.2 для последовательного введения соединения-ингибитора PKC и соединения-ингибитора MEK.

6. Фармацевтическая комбинация по п.1, где соединение-ингибитор PKC и соединение-ингибитор MEK составлены для перорального введения.

7. Фармацевтическая комбинация по п.6, где соединение-ингибитор PKC и соединение-ингибитор MEK составлены в виде таблеток.

8. Фармацевтическая комбинация по п.1, где (а) соединение-ингибитор PKC и (b) соединение-ингибитор MEK представлены в синергически эффективных количествах для лечения пролиферативного заболевания.

9. Фармацевтическая комбинация по п. 1, отличающаяся тем, что пролиферативное заболевание представляет собой рак.

10. Фармацевтическая комбинация по п. 9, отличающаяся тем, что пролиферативное заболевание представляет собой меланому.

11. Фармацевтическая комбинация по п.10, где меланома представляет собой увеальную меланому.

12. Фармацевтическая комбинация по п.10, где меланома представляет собой метастатическую увеальную меланому.

13. Фармацевтическая комбинация по п.10, где меланома представляет собой GNAQ-мутантную увеальную меланому.

14. Фармацевтическая комбинация по п.10, где меланома представляет собой GNA11-мутантную увеальную меланому.

15. Фармацевтическая комбинация по п. 1, которая представлена в форме коммерческой упаковки вместе с инструкциями по ее одновременному, раздельному или последовательному введению для применения для отсрочки прогрессирования или лечения пролиферативного заболевания.

16. Применение фармацевтической комбинации по п. 1 при получении лекарственного средства для лечения пролиферативного заболевания.

17. Применение по п. 16, в котором пролиферативное заболевание представляет собой рак.

18. Применение по п. 17, в котором пролиферативное заболевание представляет собой меланому.

19. Применение по п.18, где меланома представляет собой увеальную меланому.

20. Применение по п.18, где меланома представляет собой метастатическую увеальную меланому.

21. Применение по п.18, где меланома представляет собой GNAQ-мутантную увеальную меланому.

22. Применение по п.18, где меланома представляет собой GNA11-мутантную увеальную меланому.

23. Применение фармацевтической комбинации по п.1 в производстве лекарственного средства для лечения меланомы.

24. Применение по п.23, где меланома представляет собой увеальную меланому.

25. Применение по п.23, где меланома представляет собой метастатическую увеальную меланому.

26. Применение по п.23, где меланома представляет собой GNAQ-мутантную увеальную меланому.

27. Применение по п.23, где меланома представляет собой GNA11-мутантную увеальную меланому.

28. Способ лечения пролиферативного заболевания, включающий одновременное, раздельное или последовательное введение терапевтически эффективного количества соединения-ингибитора PKC, которое представляет собой 3-(1H-индол-3-ил)-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)-хиназолин-4-ил]-1H-пиррол-2,5-диона или его фармацевтически приемлемую соль, в комбинации с соединением-ингибитором MEK, которое представляет собой 2-гидроксиэтокси-амид 6-(4-бром-2-фторфениламино)-7-фтор-3-метил-3H-бензимидазол-5-карбоновой кислоты или его фармацевтически приемлемую соль, пациенту, нуждающемуся в этом, страдающему от пролиферативного заболевания.

29. Способ по п. 28, отличающийся тем, что пролиферативное заболевание представляет собой меланому.

30. Способ по п.29, где меланома представляет собой увеальную меланому.

31. Способ по п.29, где меланома представляет собой метастатическую увеальную меланому.

32. Способ по п.29, где меланома представляет собой GNAQ-мутантную увеальную меланому.

33. Способ по п.29, где меланома представляет собой GNA11-мутантную увеальную меланому.

34. Комбинированный состав для применения при лечении пролиферативного заболевания, содержащий (а) одну или более стандартных лекарственных форм соединения-ингибитора PKC, которое представляет собой 3-(1H-индол-3-ил)-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)-хиназолин-4-ил]-1H-пиррол-2,5-дион или его фармацевтически приемлемую соль, и (b) одну или более стандартных лекарственных форм соединения-ингибитора MEK, которое представляет собой 2-гидроксиэтокси-амид 6-(4-бром-2-фторфениламино)-7-фтор-3-метил-3H-бензимидазол-5-карбоновой кислоты.