RU2672874C2 - Способы и системы для выявления и лечения опухолей, восприимчивых к антипрогестинам - Google Patents
Способы и системы для выявления и лечения опухолей, восприимчивых к антипрогестинам Download PDFInfo
- Publication number
- RU2672874C2 RU2672874C2 RU2014110504A RU2014110504A RU2672874C2 RU 2672874 C2 RU2672874 C2 RU 2672874C2 RU 2014110504 A RU2014110504 A RU 2014110504A RU 2014110504 A RU2014110504 A RU 2014110504A RU 2672874 C2 RU2672874 C2 RU 2672874C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- tumor
- cells
- foci
- tissue
- antibody
- Prior art date
Links
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 title claims abstract description 135
- 239000003418 antiprogestin Substances 0.000 title claims abstract description 101
- 230000000708 anti-progestin effect Effects 0.000 title claims abstract description 86
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 81
- 102000003998 progesterone receptors Human genes 0.000 claims abstract description 218
- 108090000468 progesterone receptors Proteins 0.000 claims abstract description 218
- RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N Progesterone Chemical compound C1CC2=CC(=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H](C(=O)C)[C@@]1(C)CC2 RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N 0.000 claims abstract description 58
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 54
- 239000000186 progesterone Substances 0.000 claims abstract description 27
- 229960003387 progesterone Drugs 0.000 claims abstract description 27
- IEXUMDBQLIVNHZ-YOUGDJEHSA-N (8s,11r,13r,14s,17s)-11-[4-(dimethylamino)phenyl]-17-hydroxy-17-(3-hydroxypropyl)-13-methyl-1,2,6,7,8,11,12,14,15,16-decahydrocyclopenta[a]phenanthren-3-one Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1[C@@H]1C2=C3CCC(=O)C=C3CC[C@H]2[C@H](CC[C@]2(O)CCCO)[C@@]2(C)C1 IEXUMDBQLIVNHZ-YOUGDJEHSA-N 0.000 claims abstract description 14
- 229950011093 onapristone Drugs 0.000 claims abstract description 14
- 230000009036 growth inhibition Effects 0.000 claims abstract description 12
- 230000002246 oncogenic effect Effects 0.000 claims abstract description 8
- 231100000590 oncogenic Toxicity 0.000 claims abstract description 7
- 230000012010 growth Effects 0.000 claims abstract description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims description 106
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 66
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 claims description 43
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 claims description 42
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 claims description 31
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 claims description 31
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 claims description 20
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 claims description 19
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 17
- 230000003623 progesteronic effect Effects 0.000 claims description 15
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 11
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 claims description 10
- -1 taxanes Chemical compound 0.000 claims description 10
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 9
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 claims description 8
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 claims description 7
- 206010046798 Uterine leiomyoma Diseases 0.000 claims description 6
- 230000009471 action Effects 0.000 claims description 6
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 6
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 6
- 201000010260 leiomyoma Diseases 0.000 claims description 6
- 206010027191 meningioma Diseases 0.000 claims description 6
- 201000007954 uterine fibroid Diseases 0.000 claims description 6
- 229960004679 doxorubicin Drugs 0.000 claims description 5
- 208000003174 Brain Neoplasms Diseases 0.000 claims description 4
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 claims description 4
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 claims description 4
- HKVAMNSJSFKALM-GKUWKFKPSA-N Everolimus Chemical compound C1C[C@@H](OCCO)[C@H](OC)C[C@@H]1C[C@@H](C)[C@H]1OC(=O)[C@@H]2CCCCN2C(=O)C(=O)[C@](O)(O2)[C@H](C)CC[C@H]2C[C@H](OC)/C(C)=C/C=C/C=C/[C@@H](C)C[C@@H](C)C(=O)[C@H](OC)[C@H](O)/C(C)=C/[C@@H](C)C(=O)C1 HKVAMNSJSFKALM-GKUWKFKPSA-N 0.000 claims description 3
- 229960005167 everolimus Drugs 0.000 claims description 3
- 206010046766 uterine cancer Diseases 0.000 claims description 3
- CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N Cyclophosphamide Chemical compound ClCCN(CCCl)P1(=O)NCCCO1 CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N Fluorouracil Chemical compound FC1=CNC(=O)NC1=O GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- ZDZOTLJHXYCWBA-VCVYQWHSSA-N N-debenzoyl-N-(tert-butoxycarbonyl)-10-deacetyltaxol Chemical compound O([C@H]1[C@H]2[C@@](C([C@H](O)C3=C(C)[C@@H](OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C=4C=CC=CC=4)C[C@]1(O)C3(C)C)=O)(C)[C@@H](O)C[C@H]1OC[C@]12OC(=O)C)C(=O)C1=CC=CC=C1 ZDZOTLJHXYCWBA-VCVYQWHSSA-N 0.000 claims description 2
- 229930012538 Paclitaxel Natural products 0.000 claims description 2
- 229940123237 Taxane Drugs 0.000 claims description 2
- RGHILYZRVFRRNK-UHFFFAOYSA-N anthracene-1,2-dione Chemical class C1=CC=C2C=C(C(C(=O)C=C3)=O)C3=CC2=C1 RGHILYZRVFRRNK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229940045799 anthracyclines and related substance Drugs 0.000 claims description 2
- 229940043275 anti-HER2 drug Drugs 0.000 claims description 2
- 229960000397 bevacizumab Drugs 0.000 claims description 2
- 229960004562 carboplatin Drugs 0.000 claims description 2
- 190000008236 carboplatin Chemical compound 0.000 claims description 2
- DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L cisplatin Chemical compound N[Pt](N)(Cl)Cl DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 2
- 229960004316 cisplatin Drugs 0.000 claims description 2
- 229960004397 cyclophosphamide Drugs 0.000 claims description 2
- 229960003668 docetaxel Drugs 0.000 claims description 2
- 229960002949 fluorouracil Drugs 0.000 claims description 2
- SDUQYLNIPVEERB-QPPQHZFASA-N gemcitabine Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1C(F)(F)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 SDUQYLNIPVEERB-QPPQHZFASA-N 0.000 claims description 2
- 229960005277 gemcitabine Drugs 0.000 claims description 2
- 229960001592 paclitaxel Drugs 0.000 claims description 2
- 229940046159 pegylated liposomal doxorubicin Drugs 0.000 claims description 2
- RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N taxol Chemical compound O([C@@H]1[C@@]2(C[C@@H](C(C)=C(C2(C)C)[C@H](C([C@]2(C)[C@@H](O)C[C@H]3OC[C@]3([C@H]21)OC(C)=O)=O)OC(=O)C)OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)C=1C=CC=CC=1)C=1C=CC=CC=1)O)C(=O)C1=CC=CC=C1 RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N 0.000 claims description 2
- 229960000575 trastuzumab Drugs 0.000 claims description 2
- 238000001262 western blot Methods 0.000 claims description 2
- 208000023965 endometrium neoplasm Diseases 0.000 claims 2
- 208000037841 lung tumor Diseases 0.000 claims 2
- 208000023958 prostate neoplasm Diseases 0.000 claims 2
- 208000025421 tumor of uterus Diseases 0.000 claims 2
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 claims 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 20
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 9
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 6
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 111
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 50
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 43
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 28
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 27
- 239000000583 progesterone congener Substances 0.000 description 19
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 18
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 18
- 230000003054 hormonal effect Effects 0.000 description 14
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 13
- 206010014733 Endometrial cancer Diseases 0.000 description 12
- 206010014759 Endometrial neoplasm Diseases 0.000 description 12
- 210000003855 cell nucleus Anatomy 0.000 description 11
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 11
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 11
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 9
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 9
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 9
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 8
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 8
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 7
- 229940011871 estrogen Drugs 0.000 description 7
- 239000000262 estrogen Substances 0.000 description 7
- 102000015694 estrogen receptors Human genes 0.000 description 7
- 108010038795 estrogen receptors Proteins 0.000 description 7
- 229960003248 mifepristone Drugs 0.000 description 7
- VKHAHZOOUSRJNA-GCNJZUOMSA-N mifepristone Chemical compound C1([C@@H]2C3=C4CCC(=O)C=C4CC[C@H]3[C@@H]3CC[C@@]([C@]3(C2)C)(O)C#CC)=CC=C(N(C)C)C=C1 VKHAHZOOUSRJNA-GCNJZUOMSA-N 0.000 description 7
- 210000002325 somatostatin-secreting cell Anatomy 0.000 description 7
- IJLXLZGJDSJGIQ-BILPMHSYSA-N (8r,9s,10r,13s,14s,16r,17s)-16-ethyl-17-(2-hydroxyacetyl)-13-methyl-2,6,7,8,9,10,11,12,14,15,16,17-dodecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-3-one Chemical compound C1CC2=CC(=O)CC[C@@H]2[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1C[C@@H](CC)[C@H](C(=O)CO)[C@@]1(C)CC2 IJLXLZGJDSJGIQ-BILPMHSYSA-N 0.000 description 6
- HKDLNTKNLJPAIY-WKWWZUSTSA-N Ulipristal Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1[C@@H]1C2=C3CCC(=O)C=C3CC[C@H]2[C@H](CC[C@]2(O)C(C)=O)[C@]2(C)C1 HKDLNTKNLJPAIY-WKWWZUSTSA-N 0.000 description 6
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 6
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 6
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 6
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 6
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 6
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 6
- 238000012151 immunohistochemical method Methods 0.000 description 6
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 6
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 6
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 6
- 239000002379 progesterone receptor modulator Substances 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 6
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 6
- RCOWGILQXUPXEW-FUSOFXSQSA-N (8s,11r,13s,14s,17r)-11-[4-(dimethylamino)phenyl]-17-hydroxy-17-[(z)-3-hydroxyprop-1-enyl]-13-methyl-1,2,6,7,8,11,12,14,15,16-decahydrocyclopenta[a]phenanthren-3-one Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1[C@@H]1C2=C3CCC(=O)C=C3CC[C@H]2[C@H](CC[C@@]2(O)\C=C/CO)[C@]2(C)C1 RCOWGILQXUPXEW-FUSOFXSQSA-N 0.000 description 5
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 5
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 5
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 5
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 5
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 5
- 230000002357 endometrial effect Effects 0.000 description 5
- 229950001701 lilopristone Drugs 0.000 description 5
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 5
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 5
- 229960000200 ulipristal Drugs 0.000 description 5
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 4
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 229940046836 anti-estrogen Drugs 0.000 description 4
- 230000001833 anti-estrogenic effect Effects 0.000 description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 4
- 238000004624 confocal microscopy Methods 0.000 description 4
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N dimethylselenoniopropionate Natural products CCC(O)=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000000328 estrogen antagonist Substances 0.000 description 4
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 4
- 238000011532 immunohistochemical staining Methods 0.000 description 4
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 4
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 4
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 4
- 108010077544 Chromatin Proteins 0.000 description 3
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 3
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 3
- 108010085012 Steroid Receptors Proteins 0.000 description 3
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 3
- 239000003886 aromatase inhibitor Substances 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 210000003483 chromatin Anatomy 0.000 description 3
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 3
- 125000002147 dimethylamino group Chemical group [H]C([H])([H])N(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 3
- 210000004696 endometrium Anatomy 0.000 description 3
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 3
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 3
- 108091008039 hormone receptors Proteins 0.000 description 3
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 3
- 238000012758 nuclear staining Methods 0.000 description 3
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 3
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 3
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 3
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 3
- 238000007634 remodeling Methods 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 230000004044 response Effects 0.000 description 3
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 3
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 3
- 102000005969 steroid hormone receptors Human genes 0.000 description 3
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 3
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 3
- DBLOJPKZEOYNBN-SQNIBIBYSA-N (8s,13s,14s)-13-methyl-2,6,7,8,11,12,14,15,16,17-decahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-3-one Chemical compound C1CC2=CC(=O)CCC2=C2[C@@H]1[C@@H]1CCC[C@@]1(C)CC2 DBLOJPKZEOYNBN-SQNIBIBYSA-N 0.000 description 2
- 102000008169 Co-Repressor Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010060434 Co-Repressor Proteins Proteins 0.000 description 2
- 238000000018 DNA microarray Methods 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 2
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 101100398282 Mus musculus Kit gene Proteins 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 2
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 2
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- NKANXQFJJICGDU-QPLCGJKRSA-N Tamoxifen Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(/CC)=C(C=1C=CC(OCCN(C)C)=CC=1)/C1=CC=CC=C1 NKANXQFJJICGDU-QPLCGJKRSA-N 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 2
- 230000003388 anti-hormonal effect Effects 0.000 description 2
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 2
- 229940046844 aromatase inhibitors Drugs 0.000 description 2
- GJMNAFGEUJBOCE-MEQIQULJSA-N asoprisnil Chemical compound C1([C@@H]2C3=C4CCC(=O)C=C4CC[C@H]3[C@@H]3CC[C@]([C@]3(C2)C)(COC)OC)=CC=C(\C=N\O)C=C1 GJMNAFGEUJBOCE-MEQIQULJSA-N 0.000 description 2
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 2
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 2
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 230000005754 cellular signaling Effects 0.000 description 2
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 2
- 150000001860 citric acid derivatives Chemical class 0.000 description 2
- 238000007398 colorimetric assay Methods 0.000 description 2
- 239000003433 contraceptive agent Substances 0.000 description 2
- 230000002254 contraceptive effect Effects 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 2
- 238000000799 fluorescence microscopy Methods 0.000 description 2
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 2
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 2
- 230000002055 immunohistochemical effect Effects 0.000 description 2
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 2
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 2
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 2
- 210000005075 mammary gland Anatomy 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000002611 ovarian Effects 0.000 description 2
- 230000027758 ovulation cycle Effects 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 2
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 150000003146 progesterones Chemical class 0.000 description 2
- 229940095055 progestogen systemic hormonal contraceptives Drugs 0.000 description 2
- 235000019260 propionic acid Nutrition 0.000 description 2
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 description 2
- IUVKMZGDUIUOCP-BTNSXGMBSA-N quinbolone Chemical compound O([C@H]1CC[C@H]2[C@H]3[C@@H]([C@]4(C=CC(=O)C=C4CC3)C)CC[C@@]21C)C1=CCCC1 IUVKMZGDUIUOCP-BTNSXGMBSA-N 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 2
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VHZPUDNSVGRVMB-RXDLHWJPSA-N (8s,11r,13s,14s,17s)-11-(4-acetylphenyl)-17-hydroxy-13-methyl-17-(1,1,2,2,2-pentafluoroethyl)-1,2,6,7,8,11,12,14,15,16-decahydrocyclopenta[a]phenanthren-3-one Chemical compound C1=CC(C(=O)C)=CC=C1[C@@H]1C2=C3CCC(=O)C=C3CC[C@H]2[C@H](CC[C@@]2(O)C(F)(F)C(F)(F)F)[C@]2(C)C1 VHZPUDNSVGRVMB-RXDLHWJPSA-N 0.000 description 1
- CIUICCYYGROKEM-UHFFFAOYSA-N 2h-phenanthren-3-one Chemical compound C1=CC=C2C3=CC(=O)CC=C3C=CC2=C1 CIUICCYYGROKEM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QOXOZONBQWIKDA-UHFFFAOYSA-N 3-hydroxypropyl Chemical group [CH2]CCO QOXOZONBQWIKDA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ARSRBNBHOADGJU-UHFFFAOYSA-N 7,12-dimethyltetraphene Chemical compound C1=CC2=CC=CC=C2C2=C1C(C)=C(C=CC=C1)C1=C2C ARSRBNBHOADGJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010022579 ATP dependent 26S protease Proteins 0.000 description 1
- 239000012103 Alexa Fluor 488 Substances 0.000 description 1
- 229940122815 Aromatase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- VFZRZRDOXPRTSC-UHFFFAOYSA-N DMBA Natural products COC1=CC(OC)=CC(C=O)=C1 VFZRZRDOXPRTSC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004568 DNA-binding Effects 0.000 description 1
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 1
- 101150029707 ERBB2 gene Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 208000001791 Leiomyomatosis Diseases 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 206010061309 Neoplasm progression Diseases 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N O-Xylene Chemical compound CC1=CC=CC=C1C CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700020962 Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010004729 Phycoerythrin Proteins 0.000 description 1
- 229940123788 Progesterone receptor antagonist Drugs 0.000 description 1
- 229940079156 Proteasome inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 208000002495 Uterine Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- SXEHKFHPFVVDIR-UHFFFAOYSA-N [4-(4-hydrazinylphenyl)phenyl]hydrazine Chemical compound C1=CC(NN)=CC=C1C1=CC=C(NN)C=C1 SXEHKFHPFVVDIR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 1
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 1
- 108010004469 allophycocyanin Proteins 0.000 description 1
- 210000003484 anatomy Anatomy 0.000 description 1
- 230000003466 anti-cipated effect Effects 0.000 description 1
- 229950003620 asoprisnil Drugs 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 201000002132 brain angioma Diseases 0.000 description 1
- 208000013693 brain hemangioma Diseases 0.000 description 1
- 210000005013 brain tissue Anatomy 0.000 description 1
- 201000010983 breast ductal carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000004422 calculation algorithm Methods 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 231100000357 carcinogen Toxicity 0.000 description 1
- 239000003183 carcinogenic agent Substances 0.000 description 1
- 230000022131 cell cycle Effects 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 210000003850 cellular structure Anatomy 0.000 description 1
- 230000002925 chemical effect Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 230000000973 chemotherapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 229930002875 chlorophyll Natural products 0.000 description 1
- 235000019804 chlorophyll Nutrition 0.000 description 1
- ATNHDLDRLWWWCB-AENOIHSZSA-M chlorophyll a Chemical compound C1([C@@H](C(=O)OC)C(=O)C2=C3C)=C2N2C3=CC(C(CC)=C3C)=[N+]4C3=CC3=C(C=C)C(C)=C5N3[Mg-2]42[N+]2=C1[C@@H](CCC(=O)OC\C=C(/C)CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)[C@H](C)C2=C5 ATNHDLDRLWWWCB-AENOIHSZSA-M 0.000 description 1
- 238000011281 clinical therapy Methods 0.000 description 1
- 230000003081 coactivator Effects 0.000 description 1
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 1
- ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L copper(II) sulfate Chemical compound [Cu+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000366 copper(II) sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 238000006471 dimerization reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 230000002900 effect on cell Effects 0.000 description 1
- 230000002124 endocrine Effects 0.000 description 1
- 210000005168 endometrial cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 238000009093 first-line therapy Methods 0.000 description 1
- 239000000834 fixative Substances 0.000 description 1
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002795 fluorescence method Methods 0.000 description 1
- 238000002073 fluorescence micrograph Methods 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 125000000457 gamma-lactone group Chemical group 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- WUEMPJNONXHVNQ-UHFFFAOYSA-N heptadeca-1,6-dien-5-one Chemical compound C=CCCC(C=CCCCCCCCCCC)=O WUEMPJNONXHVNQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001794 hormone therapy Methods 0.000 description 1
- 238000010191 image analysis Methods 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 238000003125 immunofluorescent labeling Methods 0.000 description 1
- 238000002991 immunohistochemical analysis Methods 0.000 description 1
- 238000013388 immunohistochemistry analysis Methods 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 238000011005 laboratory method Methods 0.000 description 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 1
- 229940124302 mTOR inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 1
- 239000003628 mammalian target of rapamycin inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000007431 microscopic evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000002297 mitogenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012120 mounting media Substances 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 238000003909 pattern recognition Methods 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 230000034918 positive regulation of cell growth Effects 0.000 description 1
- 230000035409 positive regulation of cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 229940124606 potential therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 239000003207 proteasome inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 238000000163 radioactive labelling Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000011514 reflex Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 230000009291 secondary effect Effects 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 229960001603 tamoxifen Drugs 0.000 description 1
- 230000008719 thickening Effects 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 230000005945 translocation Effects 0.000 description 1
- 230000005748 tumor development Effects 0.000 description 1
- 230000005751 tumor progression Effects 0.000 description 1
- 210000004291 uterus Anatomy 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 238000004018 waxing Methods 0.000 description 1
- 230000003313 weakening effect Effects 0.000 description 1
- 239000008096 xylene Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
- G01N33/57484—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites
- G01N33/57492—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites involving compounds localized on the membrane of tumor or cancer cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
- A61K31/415—1,2-Diazoles
- A61K31/4152—1,2-Diazoles having oxo groups directly attached to the heterocyclic ring, e.g. antipyrine, phenylbutazone, sulfinpyrazone
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
- A61K31/565—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids not substituted in position 17 beta by a carbon atom, e.g. estrane, estradiol
- A61K31/567—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids not substituted in position 17 beta by a carbon atom, e.g. estrane, estradiol substituted in position 17 alpha, e.g. mestranol, norethandrolone
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
- A61K31/57—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms, e.g. pregnane or progesterone
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
- A61K31/575—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids substituted in position 17 beta by a chain of three or more carbon atoms, e.g. cholane, cholestane, ergosterol, sitosterol
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
- A61K31/58—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids containing heterocyclic rings, e.g. danazol, stanozolol, pancuronium or digitogenin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
- A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
- C12Q1/025—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
- G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
- G01N33/5011—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics for testing antineoplastic activity
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/74—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving hormones or other non-cytokine intercellular protein regulatory factors such as growth factors, including receptors to hormones and growth factors
- G01N33/743—Steroid hormones
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/557—Eicosanoids, e.g. leukotrienes or prostaglandins
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/705—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- G01N2333/72—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants for hormones
- G01N2333/723—Steroid/thyroid hormone superfamily, e.g. GR, EcR, androgen receptor, oestrogen receptor
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Pathology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Oncology (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
Abstract
Группа изобретений относится к медицине и может быть использована для подавления роста опухоли, восприимчивой к ингибированию роста при действии антипрогестинов. Для этого получают образец ткани пациента, которая предположительно является онкогенной или раковой. Выявляют прогестероновый рецептор-позитивных (PR-позитивных) клеток в образце ткани. Определяют степени распространения очагов прогестеронового рецептора в ядрах прогестерон-позитивных клеток, имеющихся в указанном образце ткани. Вводят пациенту антипрогестин онапристон, если в указанном образце ткани присутствуют явно выраженные очаги скопления прогестеронового рецептора, которые превышают 5% от количества PR-позитивных клеток. Также предложены способы лечения пациента с опухолью, восприимчивой к ингибированию роста при действии антипрогестинов, или у которого предположительно имеется опухоль, восприимчивая к ингибированию роста при действии онапристона, и система для отнесения опухоли к числу восприимчивых к лечению онапристоном. Группа изобретений обеспечивает лечение пациента с опухолью, восприимчивой к ингибированию роста при действии онапристона. 4 н. и 13 з.п. ф-лы, 11 табл., 4 ил., 6 пр.
Description
Предпосылки изобретения
Настоящая заявка претендует на приоритет предварительной заявки на патент США № 61/542931, поданной 4 октября 2011, содержание которой включено в настоящую заявку в полном объеме посредством ссылки.
Прогестероновый рецептор (PR) присутствует в клетках в виде двух основных изоформ, PR-A и PR-B. В присутствии связанного прогестинового лиганда, такого как прогестерон, PR подвергается фосфорилированию по определенным сайтам, димеризуется, образует комплекс с рядом различных компонентов клеток (например, p300 и коактиватором стероидного рецептора) и связывается с определенными последовательностями ДНК, известными как прогестерон-респонсивные элементы (PRE), инициируя транскрипцию ДНК в РНК. Комплекс PR-лиганд также притягивает целый ряд других коактиваторов и корепрессоров, которые образуют клеточные компоненты, которые, в свою очередь, осуществляют транскрипцию определенных генов. Эти комплексы PR (известные также как очаги локализации) могут быть визуализированы в ядрах клеток, которые содержат прогестероновые рецепторы, в виде флуоресцирующих агрегатов с использованием иммуногистофлуоресцентных методик, а также в виде плотных ядерных агрегатов темной окраски, с использованием иммуногистохимических методик, описанных в настоящей заявке.
У женщины в предклимактерическом возрасте, во время фазы пролиферации (первой части менструального цикла), когда преобладающим гормоном является эстроген, а прогестерон секретируется в минимальных количествах, окрашивание нормальных клеток эндометрия для определения PR-A и PR-B (например, с использованием иммунофлуоресцентных методик и конфокальной микроскопии) выявляют диффузную модель окрашивания прогестеронового рецептора в ядре. В секреторной фазе (второй части менструального цикла), когда прогестерон является преобладающим гормоном, при использовании той же самой иммунофлуоресцентной методики и конфокальной микроскопии, окрашивание для выявления PR-A и PR-B показывает в ядре легко обнаружимые флуоресцентные агрегаты.
Было показано, что ингибиторы транскрипции РНК предотвращают образование очагов скопления PR, и было также показано, что ингибиторы протеасомы 26S разрушают очаги PR в ядрах. Поэтому считается, что наличие очагов скопления PR в клетках соответствует активным транскрипционным комплексам и указывает на активацию PR и следующую за ней экспрессию генов. Наоборот, диффузная модель окрашивания ядер или отсутствие очагов скопления PR указывает на присутствие PR, который является транскрипционно-неактивным. При действии нормальных тканей молочной железы и эндометрия (которые физиологически чувствительны к прогестерону) на прогестиновые лиганды можно наблюдать превращение диффузной модели окрашивания ядер в очаговые внутриядерные структуры, что указывает на активацию прогестеронового рецептора.
В то время как эстрогены оказывают митогенное действие (т.е. вызывают клеточную пролиферацию) на нормальные клетки эпителия молочной железы и эндометрия, действие прогестинов является более сложным. В эндометрии прогестины ингибируют развитие эстроген-индуцированного клеточного цикла на ранней фазе G1, тогда как в ткани молочной железы прогестины могут как стимулировать, так и ингибировать пролиферацию. Было показано, что в биопсии нормальной ткани молочной железы пролиферативная активность стимулируется прогестероном (Am J Obstet Gynecol, 1997). Эта неоднозначность привела к противоречивым экспериментальным данным при раке молочной железы. Например, прогестогены, по-видимому, оказывают непосредственное пролиферативное действие на клетки рака молочной железы in vitro, если используется среда, не содержащая фенолового красного. H.J. Kloosterboer, J. Steroid Biochem. Molec. Biol. Vol. 49, No 4-6, pp. 311-318, 1994. Однако, когда те же контрацептивные прогестогены, которые вызывают пролиферацию в линиях клеток рака молочной железы, исследовали в эстроген-зависимой модели рака молочной железы у крыс DMBA, они ингибировали прогрессирование опухоли. См. выше. В последнее время было показано, что многие из этих экспериментальных моделей in vitro являются неадекватными. См., например, Lange C. et al. Progesterone Receptor Action: Translating Studies in Breast Cancer Models to Clinical Insights. Chapter 7 в Innovative Endocrinology of Cancer; 94-111 (2010). Хотя в этих экспериментальных моделях была продемонстрирована вызванная прогестеронами пролиферация, большинство пролиферирующих клеток не экспрессировали PR. Таким образом, эти модели не обязательно предсказывают эффективность лечения антипрогестинами.
В злокачественных клетках также наблюдаются очаги скопления PR в ядрах, но их размер и состав отличаются от соответствующих очагов у нормальных клеток. Очаги скопления PR, наблюдаемые при раке, указывают на специфическую роль PR, которая согласуется со злокачественной природой клеток. Например, гены, активируемые под действием PR в злокачественных (раковых) клетках молочной железы, отличаются от генов, активируемых под действием PR в нормальных клетках молочной железы; в раковых клетках эндометрия очаги скопления PR, но не уровни PR, связаны с характеристиками злокачественности; очаги в раковых клетках крупнее, причиной чего могут быть изменения ремоделирования хроматина, которые часто встречаются при раке; очаги скопления PR в ядрах клеток рака молочной железы наблюдаются независимо от гормонального статуса (например, как при наличии, так и при отсутствии циркулирующего прогестерона, соответственно, у женщин в предклимактерическом и постклимактерическом возрасте). Очаги скопления PR наблюдались (например, с использованием иммунофлуоресцентных методик и конфокальной микроскопии) в опухолевых клетках примерно 50% PR-позитивных биопсий рака молочной железы человека. Образцы опухолей других пациентов демонстрировали диффузную модель PR окрашивания ядер опухолевых клеток при использовании иммунофлуоресцентных методик и конфокальной микроскопии, что указывает на не активированную или нефункциональную форму PR.
В большинстве случаев рак молочной железы поддается гормональному лечению (т.е. антиэстрогенами или ингибиторами ароматазы), которые в настоящее время являются одними из наиболее эффективных лекарственных средств, применяемых для терапии рака молочной железы. Гормональное лечение, как правило, назначают после идентификации рецепторов гормонов в раковых клетках. Онапристон (ONA) представляет собой антипрогестиновый препарат, который был первоначально разработан для применения в качестве контрацептива. Однако он продемонстрировал значительную активность при развитых формах рака молочной железы, при частоте реакции 10% в исследовании 101 пациента с раком молочной железы, имевших плохой прогноз, у которых оказалась неэффективной предшествующая гормональная терапия (например, рак молочной железы прогрессировал, несмотря на то, что пациент получал антиэстроген тамоксифен). В небольшом исследовании рака молочной железы, в котором ONA использовался в качестве гормонального лечения первой линии, ONA вызывал объективную частоту реакции 56%, т.е. обеспечивал эффективность на уровне верхней части диапазона результатов наилучших доступных средств для лечения этого заболевания. ONA связывается с PR, мешает фосфорилированию PR и не допускает димеризации PR. Комплекс PR-ONA слабо связывается или вообще не связывается с целевым сегментом ДНК и, следовательно, не активирует ремоделирование хроматина, которое необходимо для транскрипции ДНК. Было показано, что в системах in vitro ONA обращает образование агрегатов PR в ядрах за счет связывания искусственного лиганда с PR. Согласуясь с изложенным выше, исследования активации генов показали, что хотя прогестины и другие антипрогестины активируют прогестерон-респонсивные гены, ONA вызывает лишь минимальную активацию (т.е. 3 генов).
Кроме того, ONA является чистым антагонистом PR в концентрациях, которых можно достичь физиологическим путем. ONA не взаимодействует с другими стероидными рецепторами и не увеличивает секрецию эстрогенов у людей, которая является нежелательным побочным эффектом при терапии рака молочной железы, демонстрируемым другими антипрогестинами, такими как мифепристон.
Хотя онапристон был исследован ранее в качестве потенциального терапевтического агента для лечения рака молочной железы, его продвижение было остановлено по причине токсичности. Robertson et al., Onapristone, a Progesterone Receptor Antagonist, as First-line Therapy in Primary Breast Cancer European J. Of Cancer 35(2) 214-218 (1999). Важно выявить подгруппу пациентов с опухолями, которые, вероятнее всего, прореагируют на лечение, и столь же важно выявить подгруппу пациентов с опухолями, которые с наименьшей вероятностью прореагируют на лечение ONA и другими антипрогестинами. Выявление этих подгрупп даст пациентам с APF доступ к потенциально эффективному способу лечения рака, а пациентам, для которых лечение ONA или другими антипрогестинами не сможет принести пользы, избежать введения этих препаратов с нежелательной токсичностью.
В настоящее время только наличие или отсутствие эстрогеновых или прогестероновых рецепторов учитывается при принятии решения о том, применять ли эндокринное лечение в данном конкретном случае рака (например, рака молочной железы). Соответственно, стандартный анализ на PR подразделяет опухоли раковых пациентов на две категории: PR-позитивные или PR-негативные. Один из типов анализа позволяет количественно определять содержание PR от общего количества белка в клетке. Эти методы являются количественными и их можно легко автоматизировать, но они дают неудовлетворительные результаты в отношении точности, чувствительности и анализа клеточных субъядерных структур рецепторов. Второй тип анализа включает иммуногистохимические методы, в которых используются образцы тканей, зафиксированные формалином, и моноклональные антитела, меченные флуоресцентными частицами или хромофорами, нацеленные на рецепторы (либо по одному антителу для каждого из рецепторов PR-A и PR-B, или одно антитело, которое распознает оба рецептора). В случае применения иммуногистохимических методов, любая реакция окрашивания ядер, обнаружимая с помощью микроскопа в части клеток, превышающей определенный процент (как правило, ≥1%), считается PR-позитивной, согласно рекомендациям, известным в профессиональном сообществе. Как правило, в клинической практике для принятия решения о применении антигормонального лечения используется пограничное значение, составляющее ≥10% ER- или PR-позитивных клеток. При этом не принимается во внимание модель окрашивания клеток или ядер. Относительная интенсивность окрашивания (т.е. низкая, средняя или высокая) также используется как качественная мера позитивности относительно гормонального рецептора. Этот второй тип анализа является более трудоемким, и он не стандартизирован. Как правило, для IHC анализа используется микроскопическое исследование при низком увеличении для выявления наличия гормонального рецептора (либо эстрогенового рецептора (ER), либо PR). Используя традиционные методы, нельзя выполнить какой-либо анализ распределения клеток, кроме определения процентной доли опухолевых клеток, экспрессирующих идентифицированный гормональный рецептор. Исследование модели субъядерного распределения PR требует микроскопии с высокой разрешающей способностью. В противоположность этому, микроскопия с высокой разрешающей способностью не нужна для стандартного IHC определения гормональных рецепторов в ткани опухоли. Следовательно, эти стандартные методы определения гормональных рецепторов не способны дать информацию относительно субъядерного распределения PR.
Прогестины оказывают комплексное воздействие на ткани молочной железы и другие гормон-чувствительные ткани за счет нацеливания отдельных клеток и наличия косвенного влияния на клетки, не экспрессирующие PR. Комплексы в очагах скопления PR не являются качественно одинаковыми в нормальной ткани и раковой ткани, и они не обязательно активируют одни и те же гены, связанные с прогестероновым рецептором. Существующие клинические данные не полностью подтверждают точку зрения о том, что стандартные методики выявления клеток, позитивных в отношении гормональных рецепторов, способны предсказывать эффективность антигормональной терапии, независимо от того, направлена ли эта терапия против эстрогена или против прогестинов. В настоящее время решение о применении гормонального лечения (например, антиэстрогенов или ингибиторов ароматазы) у пациентов с раком молочной железы и с другими гормоночувствительными опухолями основывается на простом наличии гормональных рецепторов в образцах опухоли. Наличие гормональных рецепторов (ER или PR) не дает однозначной уверенности в реакции опухоли на гормональное лечение, поскольку только в 50-60% случаев опухолей, позитивных в отношении гормональных рецепторов, ожидается положительный эффект от лечения.
Существует потребность в унифицированном способе для предсказания эффективности ONA и других антипрогестинов против гетерогенных «естественных» опухолей. Кроме того, существует потребность в анализе, способном предсказывать терапевтическую эффективность ONA и других антипрогестинов против раковых заболеваний у индивидуальных пациентов.
Сущность изобретения
Важный вопрос, относящийся к лечению антипрогестинами, заключается в том, как идентифицировать активированные PR, которые являются подходящими мишенями для клинической терапии. Типовые способы по настоящему изобретению нацелены на выявление PR, находящихся в функциональном (активированном) состоянии, в тканях опухолей человека, которые можно легко получить в условиях клиники. Поскольку противодействие неактивным PR с помощью специфических антипрогестинов является терапевтически бессмысленным, способы по настоящему изобретению предоставляют новую и существенную информацию, служащую критерием для лечения пациентов антипрогестинами. Такой предсказательный диагностический тест мог бы обеспечить (1) унифицированные методы для принятия решения о лечении с применением ONA и других антипрогестинов, (2) критерии выбора индивидуальных пациентов и групп пациентов, которые, вероятнее всего, прореагируют на лечение, и (3) исключение тех индивидуальных пациентов, у которых маловероятна реакция или благоприятный результат от лечения антипрогестинами.
В одном из аспектов разработан способ выявления и лечения подгруппы прогестероновый рецептор (PR)-позитивных опухолей, наиболее восприимчивых к лечению антипрогестином, таким как онапристон (ONA). PR-позитивные опухоли, демонстрирующие плотную очаговую модель распределения PR в ядрах, которая описана в настоящей заявке, более восприимчивы к лечению антипрогестинами, такими как онапристон. Результаты, полученные для in vitro гомогенных экспериментальных моделей, не обязательно способны предсказывать свойства естественных гетерогенных опухолей.
В другом аспекте в изобретении предложен способ ингибирования роста опухоли, восприимчивой к ингибированию роста при действии антипрогестинов. Образец ткани, которая предположительно является онкогенной или раковой, можно отобрать из организма пациента. В образце ткани можно идентифицировать PR-позитивные клетки. Затем можно определить степень распространения очагов скопления прогестеронового рецептора в ядрах прогестерон-позитивных клеток из образца ткани, и если эта степень распространения в указанном образце ткани превышает примерно 5% PR-позитивных клеток, пациенту можно вводить антипрогестин.
Эти пациенты с большей вероятностью получат пользу от лечения антипрогестинами (например, ONA), которые инактивируют очаги скопления активированного прогестерона (APF) и предупреждают дальнейшее образование APF, по сравнению с пациентами, опухоли которых не экспрессируют активированный PR. Не активированную форму PR, как правило, можно отличить по диффузному окрашиванию PR в ядрах. Инактивация APF под действием антипрогестина может осуществляться по любому из нескольких механизмов, включая разрушение очагов и ингибирование активации очагов без существенного изменения их структуры. В одном из аспектов образование APF можно ингибировать или предотвратить антипрогестином в результате действия нескольких механизмов. Например, онапристон может мешать индивидуальным прогестероновым рецепторам димеризоваться и предотвращает фосфорилирование PR по сайтам фосфорилирования лиганда. Комплекс PR-ONA может слабо связываться или вообще не связываться с целевыми сегментами ДНК (PRE) и не способен вызвать ремоделирование хроматина, которое необходимо для транскрипции ДНК. В другом примере другие антипрогестины могут давать PR возможность димеризоваться и образовывать комплексы с коактиваторами или корепрессорами, которые не вызывают транскрипцию ДНК.
В этом примере может происходить связывание ДНК по сегменту PRE, но при этом транскрипция не осуществляется. Идентификация APF может приводить к решению о лечении антипрогестином, если лекарственное средство препятствует сигнальному пути PR. В одном из аспектов идентификация APF определяет статус сигнального пути PR, т.е. активирован этот путь или нет. Например, посредством идентификации APF можно было бы определить целесообразность применения мифепристона или любого антипрогестина, который образует комплекс с PR и связывается с ДНК. Активность других агентов, включая те, которые могли бы ингибировать фосфорилирование PR и за счет этого препятствовать активации PR, можно было бы предсказать по наличию APF в тех или иных раковых клетках. Таким образом, идентификация APF могла бы использоваться для получения информации о целесообразности лечения с помощью различных классов соединений, которые действуют за счет ингибирования функции PR.
Опухоли пациентов, в которых не образуются очаги активированного PR (APF), могут включать опухоли, являющиеся PR-негативными по данным стандартного анализа, или опухоли, которые по данным стандартного анализа являются PR-позитивными. В одном из аспектов любая опухоль/раковая опухоль, в которой обнаруживаются APF, является кандидатом на лечение с применением антипрогестинов, включая рак молочной железы, рак мозга, менингиомы, рак предстательной железы, рак яичника, рак эндометрия, лейомиому матки, рак легкого и рак матки. Легочный лейомиоматоз, который ранее был формально отнесен к раковому состоянию, вероятно, также мог бы подвергаться успешному лечению, если в аномальной ткани сформировались APF. В другом аспекте доброкачественные опухоли, которые не поддаются лечению стандартными способами, но содержащие APF, можно лечить антипрогестином, поскольку наличие APF показывает, что развитие опухоли стимулируется аномальной активацией PR, т.е. сигнальным путем прогестина.
Другой аспект изобретения относится к способу лечения пациента с опухолью, восприимчивой к ингибированию роста при действии антипрогестинов, путем получения образца ткани пациента, которая предположительно является онкогенной или раковой, и воздействия на указанную ткань антителом против рецептора прогестерона. За счет этого можно идентифицировать PR-позитивные клетки в указанном образце ткани. Можно определить степень распространения очагового связывания прогестеронового рецептора в ядрах клеток из образца ткани. Если степень распространения очагового связывания в указанном образце ткани превышает примерно 5% PR-позитивных клеток, пациенту вводят антипрогестин в дозе от примерно 10 до примерно 200 мг в день, в зависимости от эффективности, биодоступности и профиля безопасности антипрогестина.
В другом аспекте ткань представляет собой образец опухолевой ткани, выбранный из группы, состоящей из ткани молочной железы, ткани мозга, менингиом, ткани предстательной железы, ткани яичника, ткани эндометрия, лейомиомы матки, ткани легкого и ткани матки.
В другом аспекте наличие или отсутствие очагового распределения выявляется с помощью флуоресценции, колориметрической реакции (например, ферментной реакции), визуализацию которых проводят с помощью контрастно окрашивающих антител (например, хромофоров), радиоактивности и вестерн-блоттинга (например, дифференциального фосфорилирования PR).
В еще одном аспекте изобретения антипрогестин выбран из группы, состоящей из онапристона, лонапризана, мифепристона, PF-02413873, телапристона, лилопристона, ORG2058, асоприснила и улипристала.
Наличие очагового распределения активного прогестеронового рецептора выявляется по степени распространения очагов в ядрах, которая превышает примерно 5% PR-позитивных клеток. В другом аспекте опухоль может быть гетерогенной с точки зрения очагового распределения и демонстрировать активную модель связывания (A) с явно выраженными очагами скопления прогестеронового рецептора, диффузную модель связывания (D) без явно выраженных очагов скопления прогестеронового рецептора, или комбинацию модели A и модели D (AD) в различных участках опухоли.
В любом из перечисленных выше аспектов, если присутствует очаговое распределение (модели A или AD), интенсивность или плотность такого очагового распределения может быть оценена количественно. Например, антитела против прогестеронового рецептора могут нести радиоактивные метки, флуоресцентные метки, являться контрастно окрашенными антителами (хромофорами), их можно выявлять с помощью колориметрической реакции (например, ферментной реакции), или они могут нести другие метки, где можно измерить интенсивность сигнала метки и определить ее количество.
Описание чертежей
На фиг.1A и 1B показаны типовые модели иммуногистохимического окрашивания в коричневый цвет ядер клеток в образцах рака молочной железы человека, полученных из фиксированных формалином и заключенных в парафин биопсий с использованием антител, нацеленных на прогестероновый рецептор.
На фиг.2A и 2B показаны типовые модели иммуногистохимического окрашивания в зеленый цвет ядер клеток в образцах рака молочной железы человека, полученных из фиксированных формалином и заключенных в парафин биопсий с использованием антител, нацеленных на прогестероновый рецептор.
На фиг.3A и 3B показаны типовые модели иммуногистохимического окрашивания в коричневый цвет ядер клеток с контрастным окрашиванием фона HES в образцах рака молочной железы человека, полученных из фиксированных формалином и заключенных в парафин биопсий с использованием антител, нацеленных на прогестероновый рецептор; и
На фиг.4 показана процентная доля трех моделей связывания, A, AD и D для образцов рака молочной железы, позитивных в отношении PR-A и PR-B.
Подробное описание изобретения
Прежде чем описывать некоторые типовые аспекты настоящего изобретения, следует отметить, что изобретение не ограничено конкретными деталями конструкций или стадиями способов, которые изложены ниже по тексту. Описанные в заявке аспекты изобретения можно реализовать на практике или выполнить различными способами.
В настоящем описании фраза «лечение опухоли» означает ингибирование размножения опухолевых клеток, ингибирование распространения опухоли, уменьшение размера опухоли, уменьшение числа опухолевых клеток в организме, или облегчение или уменьшение симптомов заболевания, вызванного опухолью, ослабление роста опухоли (увеличение времени, которое необходимо для прогрессирования опухоли) или улучшение выживаемости пациентов, если смерть наступает от рака или от вторичных эффектов рака. Кроме того, указанный термин включает излечение рака. Опухоли включают как рак, так и опухоли, не являющиеся раком. Лечение считается терапевтическим, если достигается уменьшение смертности и/или болезненности, улучшение симптомов, связанных с опухолью, или если имеет место уменьшение нагрузки на организм от заболевания, которое может проявляться в сокращении числа опухолевых клеток в организме, уменьшении размеров опухоли или увеличении времени до прогрессирования заболевания, увеличении времени жизни без прогрессирования заболевания или увеличении времени жизни без заболевания.
В настоящем описании термин «APF-активный антипрогестин» и его эквиваленты относятся к антипрогестиновым препаратам, которые демонстрируют способность растворять или разрушать очаги скопления активированных PR (APF) в ядрах клеток или ингибировать образование APF в ядрах клеток, и это показывает, что механизм их действия включает сигнальный путь активации PR в клетке.
Термины «APF-позитивный», «позитивный в отношении очагов PR», «активированный PR», «PR в функциональном состоянии» и т.п. относятся к наличию агрегатов прогестероновых рецепторов в ядрах клеток.
Термин «очаговое распределение» относится к распределению в виде «очагов» (т.е. агрегатов прогестероновых рецепторов) в ядрах прогестерон-позитивных клеток. Пятнистая или гиперпятнистая модель распределения представляют собой термины, которые могут быть использованы в биологии в отношении очаговой модели распределения стероидных рецепторов в ядрах.
Термины «степень очагового распределения» или «степень распространения очагов» означают относительное количество очагов скопления PR в ядрах прогестерон-позитивных клеток. Степень очагового распределения можно определить количественно или качественно.
Например, для связывания с прогестероновыми рецепторами в ядрах клеток могут быть использованы колориметрические, ферментные или радиоактивные лиганды, например, антитела против прогестероновых рецепторов. Степень очагового распределения можно определить количественно, например, путем измерения интенсивности цвета, флуоресценции или уровня радиоактивного излучения, испускаемого меченым антителом. Степень очагового распределения можно определить качественно, сравнивая интенсивность связывания между контрольным образцом и меченым образцом с использованием светового микроскопа при подходящем увеличении, или с помощью методик, включая, но не ограничиваясь ими, микроматрицу ДНК, определение профиля белков, введение радиоактивных меток или другие аналогичные способы измерения APF.
Термин «диффузная модель» («диффузная структура») относится к мелкозернистой структуре, которая указывает на отсутствие очагового распределения.
Термин «прогестин» относится к природному или синтетическому прогестагенному веществу, которое имитирует некоторые или все действия прогестерона, также именуемому модулятором прогестеронового рецептора (PRM) или селективным модулятором прогестеронового рецептора (SPRM).
Термин «антипрогестин» относится к веществу, которое ингибирует образование, перенос, действие прогестагенных агентов или инактивирует их, в том числе, но не ограничиваясь ими, к онапристону, лонапризану, мифепристону, PF-02413873, телапристону, лилопристону, ORG2058, асоприснилу и улипристалу. PRM или SPRM могут обладать некоторыми антипрогестиновыми свойствами, и их можно считать антипрогестинами или прогестинами в зависимости от контекста их применения.
Термин «антитело» или «антитела» относится к белку, который способен специфично связываться с антигеном, и включает любые вещества или группы веществ, которые обладают специфичным сродством к связыванию с антигеном по сравнению со связыванием с другими веществами. Как правило, термин «антитело» включает поликлональные антитела, моноклональные антитела, антитела животного или человеческого происхождения, гуманизированные антитела (например, антитела, у которых не связывающиеся фрагменты имеют человеческое происхождение, а связывающиеся фрагменты имеют животное происхождение) и их фрагменты.
Термины антитела «против PR-A» и «против PR-B» относятся к антителам, нацеленным на изоформы прогестеронового рецептора PR-A и PR-B, соответственно. Термин антитело «против PR-AB» относится к антителу, способному связываться с обоими рецепторами PR-A и PR-B. Конкретные антитела, подходящие для применения в различных аспектах настоящего изобретения, включают, но не ограничиваются ими, PgR636 и PgR1294 (M.Press, et al. (Steroids (2002) 67:799-813)), Novacastra клон 16, клон SAN27, клон 1A6, Dako клон PgR636, Ventana, клон 1E2, Novus Biological клона антитела 1064-E2 против прогестеронового рецептора [p Ser162], Novus Biological клона антитела EP1516Y против прогестеронового рецептора [p Ser190], Novus Biological клона антитела 608 против прогестеронового рецептора [p Ser294], Abcam антитело Ref ab60954 против прогестеронового рецептора [p Ser400] и Genetex антитело Ref GTX118987 против прогестеронового рецептора [p Ser554].
Термин «вводить» относится к предоставлению лекарственного средства или средств, назначению одного или нескольких лекарственных средств или помещение одного или нескольких лекарственных средств в формуляр. Термин «предоставление» относится к дозированию лекарственного средства непосредственно в организм пациента любым подходящим путем введения (например, пероральным, инъекцией, внутривенным, внутримышечным, трансдермальным и т.д.) или предоставлению инструкций пациенту осуществить такое введение.
Один из аспектов настоящего изобретения относится к способу ингибирования роста опухоли, восприимчивой к ингибированию роста при действии антипрогестинов, включающему получение у пациента образца ткани, которая предположительно является онкогенной, и определения степени очагового распределения прогестеронового рецептора в ядрах клеток указанной ткани. Если степень очагового распределения превышает примерно 5%, пациенту можно вводить антипрогестин (например, онапристон, лонапризан, мифепристон, PF-02413873, телапристон, лилопристон, ORG2058, асоприснил и улипристал).
Хотя ранее проводились исследования роли PR, прогестинов и антипрогестинов при раке молочной железы и других видах рака, полученные результаты не позволили прийти к окончательным выводам, что вело к трудностям при диагностике и лечении пациентов. В ряде моделей в числе прочих факторов были продемонстрированы многочисленные и сложные взаимодействия различных частиц, штаммов, типов рака, канцерогенов и среды, окружающей опухоль. Без привязки к теории, PR может быть патологически активирован за счет изменившихся физиологических свойств, что влияет на активационный потенциал лиганда, приводя к аномальному и неуправляемому стимулированию роста и пролиферации клеток. Однако те модели, которые исследуются чаще всего, являются производными ограниченного числа исходных опухолей и, следовательно, неточно отражают физиологическую изменчивость различных типов опухолей или опухолей разных пациентов. То есть ограниченного количества моделей рака недостаточно для охвата всего многообразия раковых заболеваний, имеющихся в человеческой популяции.
Изучение образования очагов PR использовали для тестирования соединений на их способность вызывать транслокацию PR из цитоплазмы в ядро в клеточных линиях, созданных методами генной инженерии. В предназначенных для этого анализах, например, Thermo Scientific PR (Progesterone Receptor) Redistribution® Assay, используется анализ изображений и флуоресцентная микроскопия для количественного определения накопления PR в ядрах в присутствии тестируемого соединения. В противоположность этому, различные аспекты настоящего изобретения предназначены для определения очагов скопления PR в первичной опухолевой ткани, независимо от наличия лиганда PR или лекарственного средства. В одном из аспектов типовые способы, описанные в настоящей заявке, относятся к присутствию очагов скопления PR в ядрах клеток естественных опухолей, указывающему на аномалию, которая может использоваться для предсказания эффективности применения у данного пациента антипрогестинов, которые являются антагонистами PR. В другом аспекте в изобретении было обнаружено, что клиническое выявление конститутивно активированного PR указывает на опухоли и раковые заболевания, которые восприимчивы к лечению антипрогестинами, включая онапристон.
Онапристон (например, (8S,11R,13R,14S,17S)-11-[4-(диметиламино)фенил]-17-гидрокси-17-(3-гидроксипропил)-13-метил-1,2,6,7,8,11,12,14,15,16-декагидроциклопента[a]фенантрен-3-он) имеет следующую химическую структуру:
Другие антипрогестины включают: прогестогенные G-лактоны 3-(6,6-этилен-17B-гидрокси-3-оксо-17A-прегна-4-ен-17A-YL)пропионовой кислоты, гамма-лактон 3-(6,6-этилен-17.бета.-гидрокси-3-оксо-17.альфа.-прегна-4-ен-17.альфа.-y-l)пропионовой кислоты следующие соединения:
Мифепристон
(10S,11S,14S,15S,17R)-17-[4-(диметиламино)фенил]-14-гидрокси-15-метил-14-(проп-1-ин-1-ил)тетрацикло[8.7.0.0^{2,7}.0^{11,15}]гептадека-1,6-диен-5-он
Лилопристон
(11-бета,17-бета,17(z))-ропенил);эстра-4,9-диен-3-он,11-(4-(диметиламино)фенил)-17-гидрокси-17-(3-гидрокси-1-p;11β-[4-(диметиламино)фенил]-17β-гидрокси-17-[(Z)-3-гидрокси-1-пропенил]эстра-4,9-диен-3-он
ORG2058
(8R,9S,10R,13S,14S,16R,17S)-16-этил-17-(2-гидроксиацетил)-13-метил-2,6,7,8,9,10,11,12,14,15,16,17-додекагидро-1H-циклопента[a]фенантрен-3-он
Лонапризан
(8S,11R,13S,14S,17S)-11(4-ацетилфенил)-17-гидрокси-13-метил-17-(1,1,2,2,2-пентафторэтил)-1,2,6,7,8,11,12,14,15,16-декагидроциклопента[a]фенантрен-3-он
Асоприснил
(8S,11R,13S,14S,17S)-11[4-[(E)-гидроксииминометил]фенил]-17-метокси-17-(метоксиметил)-13-метил-1,2,6,7,8,11,12,14,15,16-декагидроциклопента[a]фенантрен-3-он
Улипристал
(8S,11R,13S,14S,17R)-17-ацетил-11-[4-(диметиламино)фенил]-17-гидрокси-13-метил-1,2,6,7,8,11,12,14,15,16-декагидроциклопента[a]фенантрен-3-он
PF-2413873
4-[3-циклопропил-1-(мезилметил)-5-метил-1H-пиразол-4-ил]окси-2,6-диметилбензонитрил
В другом аспекте настоящего изобретения очаговая модель связывания PR дает возможность провести более чувствительный и достоверный тест по сравнению с применяемым в настоящее время стандартным анализом PR. Пациенты, которые с помощью стандартных анализов PR отнесены как к числу PR-негативных, так и к числу PR-позитивных, могут оказаться позитивными при тесте на очаговую модель связывания PR в ядрах и, следовательно, могут стать кандидатами на лечение антипрогестинами, такими как онапристон. Так, например, пациента, ранее отнесенного к числу PR-негативных при использовании методов известного уровня техники, нельзя было бы считать кандидатом на лечение антипрогестинами, такими как онапристон. Наличие очагов PR у пациентов, отнесенных по результатам стандартных тестов к числу PR-негативных, могло бы объяснить кажущиеся аномалии, когда онапристон проявляет активность у некоторых из этих пациентов. Таким образом, некоторые аспекты настоящего изобретения могли бы сделать гормональное лечение потенциально доступным большему числу раковых больных, возможно, включая и тех пациентов с раком молочной железы, которые отнесены к числу «трижды негативных» (т.е. негативных в отношении эстрогенового рецептора (ER), PR и Her2).
Примеры иммуногистохимических методов, подходящих для применения в различных аспектах настоящего изобретения, описаны M.Press, et al. (Steroids (2002) 67:799-813) и M.Nadji (Anatomic Pathol. (2005) 123:21-27), причем указанные публикации включены в настоящую заявку в полном объеме посредством ссылки. В качестве примера, исходные образцы раковой ткани для исследования можно приготовить в виде парафиновых срезов или мазков, полученных после всасывания раковой ткани тонкой иглой, как известно в технике для стандартных анализов PR. При использовании парафиновых срезов на первом этапе плавят парафин, нагревая предметное стекло, и удаляют парафин ксилолом. Затем срезы повторно гидратируют, обрабатывая растворами с понижающимся содержанием этанола, и подвергают действию антитела, предпочтительно моноклонального антитела, которое специфично связывается с PR-A, PR-B или обоими рецепторами. Затем обнаруживают связывание антитела с использованием одного из методов, известных в технике для обнаружения связывания антител, примеры которых описаны ниже по тексту заявки.
Одним из примеров метода, подходящего для обнаружения связывания антитела с мишенью, является колориметрический анализ, как правило, ферментный колориметрический анализ. В одном таком методе для получения цветного окрашивания, видимого под световым микроскопом, используется пероксидаза. Перед инкубированием с антителом или антителами блокируют эндогенную пероксидазу в образце ткани, используя пероксид водорода, и, кроме того, блокируют эндогенный биотин, используя соответствующий реагент для блокирования биотина. Если исходное антитело является мышиным антителом, его впоследствии связывают с биотинилированным антимышиным иммуноглобулином. Для связывания фермента с комплексом антитело-мишень добавляют конъюгат стрептавидин-пероксидаза. Окраска появляется в результате добавления диаминобензидина и сульфата меди(II). Образец ткани можно подвергнуть контрастному окрашиванию с помощью красителя «зеленый прочный» для улучшения видимости окраски, обусловленной пероксидазой.
В качестве альтернативы, для обнаружения связывания антитела с PR-A, PR-B или обоими рецепторами можно использовать флуоресцентный метод. В этом случае первичное антитело с флуоресцентной меткой может быть связано с PR-мишенью и обнаружено непосредственно под флуоресцентным микроскопом. Однако неспецифическую флуоресценцию можно уменьшить с помощью метода, в котором происходит связывание немеченого первичного антитела с PR, а затем связывание флуоресцентно меченного вторичного антитела (например, антимышиного иммуноглобулина) с первичным антителом. В данном аспекте настоящего изобретения может использоваться любая флуоресцентная метка, известная для использования в иммуногистохимических анализах, например FITC (флуоресцеина изотиоцианат); флуоресцеин FITC 520 нм зеленый, Alexa 488 515 нм зеленый, фикоэритрин PE 565 нм желтый; фикоэритрин-Texas красный ECD 620 нм красный; фикоэритрин-цианин5 PC5 665 нм темно-красный; перидинин хлорофилл PerCP 670 нм темно-красный; фикоэритрин-цианин 5.5 PC5.5 703 нм дальний красный; фикоэритрин-цианин 7 PC7 755 дальний красный; E аллофикоцианин APC 660 нм темно-красный; аллофикоцианин-цианин 7 APC-CY7.
В описанных аспектах настоящего изобретения можно использовать как моноклональные, так и поликлональные антитела. Неполный перечень подходящих моноклональных антител описан M.Press, et al., см. выше, и в него входят два антитела, которые устойчивы к фиксации формалином и заключению в парафин (PgR636 и PgR1294). Конкретные антитела, подходящие для использования в описываемых аспектах настоящего изобретения, включают, но не ограничиваются ими, PgR636 и PgR1294 (M.Press, et al. (Steroids (2002) 67:799-813)), Novacastra клон 16, клон SAN27, клон 1A6, Dako клон PgR636, Ventana, клон 1E2, Novus Biological клона антитела 1064-E2 против прогестеронового рецептора [p Ser162]; Novus Biological клона антитела EP1516Y против прогестеронового рецептора [p Ser190], Novus Biological клона антитела 608 против прогестеронового рецептора [p Ser294], Abcam антитело Ref ab60954 против прогестеронового рецептора [p Ser400] и Genetex антитело Ref GTX118987 против прогестеронового рецептора [p Ser554].
В одном из аспектов связывание антитела с PR определяют наблюдением окрашенного препарата под соответствующим световым микроскопом или флуоресцентным микроскопом. Для определения, например, процентной доли клеток, позитивных с точки зрения связывания с антителом, обычно используют увеличение примерно 200× или 400×. Однако для улучшения чувствительности обнаружения APF может быть желательным рассматривать препараты при увеличении 800×-1000×, для облегчения изучения субъядерных структур.
Образцы, которые кажутся PR-негативными при микроскопическом исследовании, можно изучить с помощью проточной цитометрии для выявления позитивных образцов, находящихся ниже предела обнаружения световой или флуоресцентной микроскопии. Если проточная цитометрия показывает наличие небольшого числа позитивных клеток, для изучения субъядерных структур и выявления очагов скопления активированных прогестероновых рецепторов (APF) можно использовать микроскопию с высоким увеличением 800×-1000×. Однако, если позитивные клетки, обнаруженные способом проточной цитометрии, слишком малочисленны, чтобы их можно было надежно выявлять микроскопией для анализа APF, можно использовать сортировщик флуоресцентно-активированных клеток (FACS) с целью отделения позитивных клеток в суспензии от остальных, на основе их флуоресценции (например, Sony Cell Sorter SH800, Siemens Immulite 2000). Поскольку в процессе разделения позитивные клетки концентрируются, но не повреждаются, надежность и вероятность успешной визуализации APF при последующей микроскопической оценке существенно повышается.
Наличие или отсутствие APF в ядре индивидуальной опухолевой клетки можно обнаружить визуально с помощью светового или флуоресцентного микроскопа, или с применением любых других подходящих средств, например, флуоресцентных или колориметрических измерений. В одном из аспектов для обнаружения могут использоваться визуальные средства. Результаты окрашивания могут быть определены количественно путем регистрации наличия или отсутствия APF, или путем подсчета количества или процентной доли позитивных клеток. В качестве альтернативы, можно количественно определить конкретные характеристики окрашивания. Например, детектирование может включать регистрацию того, сопровождается ли очаговое связывание в форме APF диффузным окрашиванием ядер, определением количества или процентной доли позитивных клеток, и/или количественным определением интенсивности или количества/плотности APF. Плотность APF можно количественно выразить в виде среднего количества очагов/число клеток или с использованием произвольной шкалы (например, «немного», «среднее количество» или «много») Аналогично, интенсивность можно определить с использованием произвольной шкалы, например, низкая/средняя/высокая, или числовой шкалы, например, 1-5. В другом аспекте результаты анализа опухолевой ткани пациента можно сравнить с позитивными и/или негативными контрольными образцами.
В одном из аспектов образец опухолевой ткани расценивают как APF-позитивный, если 1-100%, 5-100%, 25-100% или 50-100% ядер прогестерон-позитивных клеток в образце демонстрируют наличие APF. В еще одном аспекте терапевтическая эффективность APF-активного антипрогестина может также находиться в корреляции с интенсивностью окрашивания APF или с количеством или плотностью APF, и эти параметры также могут использоваться для определения восприимчивости опухоли к лечению APF-активным антипрогестином. Как правило, и без привязки к теории, восприимчивость опухоли к лечению APF-активным антипрогестином будет увеличиваться с увеличением количества или процентной доли позитивных клеток, увеличением интенсивности APF и/или увеличением числа APF в клетках образца опухолевой ткани.
В следующем аспекте способы определения восприимчивости опухоли к APF-активным антипрогестинам могут быть либо ручными (например, визуальное обнаружение с использованием флуоресцентного микроскопа), либо автоматическими или полуавтоматическими, в которых используются методы для быстрого сканирования, детектирования и количественного измерения колориметрически- или флуоресцентно-меченных образцов ткани. Например, в некоторых аспектах может быть разработана и применена система полностью автоматизированного сканирования и анализа. Хотя в одном из аспектов может быть использован ручной выбор конкретных областей опухоли, которые необходимо исследовать (например, иммуногистохимическая система InScape® (Quest Diagnostics 3 Giralda Farms Madison, NJ 07940)), с целью обеспечения автоматического сканирования всего образца и анализа образца, окрашенного с помощью антиген-специфичных иммуногистохимических методов может использоваться автоматизированная система для сканирования и анализа APF в ядрах клеток. В другом аспекте может быть использовано распознавание образцов для создания цифрового изображения всего среза окрашенной ткани. Антиген-специфичный компьютерный алгоритм может быть использован для анализа результатов, исходя из полученного цифрового изображения, представляющего весь образец. В еще одном аспекте можно настроить программное обеспечение для отделения очагов PR от диффузного фонового окрашивания в ядрах и измерения интенсивности флуоресценции и размера очагов, переходя от клетки к клетке или от кластера к кластеру, повторяя этот процесс для каждой клетки или кластера по всей площади образца. Эти автоматизированные методы, при более низкой стоимости, в некоторых аспектах позволят получить повышенную точность и реализацию функций, которые невозможно осуществить вручную. Полная автоматизация может также сделать тест доступным для реализации в неспециализированных медицинских центрах.
В одном из аспектов решение о лечении пациента по результатам диагностического анализа основывается на количестве/процентной доле, интенсивности и/или плотности APF, в случае их присутствия. Без привязки к теории, предполагается, что эффективность лечения APF-активным антипрогестином будет повышаться с увеличением количества или процентной доли позитивных клеток, увеличением интенсивности APF и/или увеличением количества APF в клетках образца опухолевой ткани. Исходя из этих параметров, практикующий медик может также определить дозировку, расписание введения и продолжительность лечения. Соответственно, другой аспект изобретения относится к применению APF-активного антипрогестина для лечения APF-позитивной опухоли.
Опухоли, которые следует выявлять или лечить описанными выше способами, включают любые раковые или не раковые опухоли, в которых присутствуют APF, и в которых можно определить наличие APF. Такие опухоли или раковые опухоли включают рак молочной железы, рак легкого, рак матки, лейомиому матки, рак яичника, рак предстательной железы, рак мозга и ангиомы. Доброкачественные опухоли, которые можно идентифицировать или лечить согласно различным аспектам настоящего изобретения, включают менингиомы, 70% которых экспрессируют PR по данным стандартного анализа.
APF-активный антипрогестин, применяемый в описанных выше способах, может представлять собой любой антипрогестиновый препарат, обладающий способностью инактивировать APF (например, путем растворения или разрушения агрегатов, или предотвращения образования APF, или образования неактивных APF). Такие препараты включают онапристон (ONA), но другие соединения с аналогичным механизмом действия также подходят для применения в различных аспектах изобретения, описанных в тексте заявки.
Другой аспект изобретения относится к способам идентификации опухолей, восприимчивых к ингибированию роста под действием антипрогестинов, включающим отбор у пациента ткани, которая предположительно является онкогенной или раковой, и воздействие на указанную ткань антителом против прогестеронового рецептора. В образце ткани могут быть выявлены прогестерон-позитивные клетки. Можно определить степень очагового распределения прогестеронового рецептора в ядрах прогестерон-позитивных клеток образца ткани, и антипрогестин можно вводить пациенту, если эта степень очагового распределения в указанном образце ткани превышает примерно 5% PR-позитивных клеток.
В еще одном аспекте представлен способ лечения пациента с опухолью, восприимчивой к ингибированию роста при действии антипрогестинов. Этот способ включает получение у пациента образца ткани, которая предположительно является онкогенной, и воздействие на указанную ткань антителом против прогестеронового рецептора. В указанном образце ткани могут быть выявлены PR-позитивные клетки, и может быть зафиксировано очаговое распределение связывания прогестеронового рецептора в ядрах клеток. Если очаговое распределение связывания в виде моделей A или AD превышает 5% от PR-позитивных клеток в образце ткани, антипрогестин вводят пациенту в дозе от примерно 10 до примерно 200 мг в день, в зависимости от эффективности, биодоступности и профиля безопасности антипрогестина.
В другом аспекте степень очагового распределения можно определить подходящим способом, рассмотренным в настоящей заявке, включая иммуногистохимические способы, иммунофлуоресцентные способы, микроматрицу ДНК, определение профиля белков, введение радиоактивных меток или другие аналогичные для измерения APF способы.
В следующем аспекте опухолевую ткань выбирают из группы, состоящей из ткани молочной железы, тканей менингиом, ткани предстательной железы, ткани яичника, ткани эндометрия, ткани лейомиомы матки, ткани легкого и ткани матки.
В еще одном аспекте антипрогестин выбирают из группы, состоящей из онапристона, лонапризана, мифепристона, PF-02413873, телапристона, лилопристона, ORG2058, асоприснила и улипристала.
В другом аспекте степень очагового распределения определяют путем выявления модели связывания прогестеронового рецептора в ядрах прогестерон-позитивных клеток тканей. Гетерогенные опухоли включают клетки, которые могут содержать очаги активных прогестероновых рецепторов и очаги неактивных прогестероновых рецепторов. Поэтому могут иметься клеточные области, содержащие активные очаги, на которые указывают явно видимые сгущения в клеточных ядрах, и клеточные области, в которых наблюдается более диффузная структура.
Например, на фиг.1 изображены две типовые модели связывания, зафиксированные при окрашивании ядер в коричневый цвет с использованием антител против рецептора прогестерона в образцах тканей рака молочной железы человека, фиксированных формалином и заключенных в парафин, полученных из биопсий рака молочной железы пациентов. На фиг.1A показана диффузная зернистая модель (D), указывающая на клетки, которые вряд ли восприимчивы к лечению антипрогестинами. В противоположность этому, на фиг.1B показана пятнистая (крапчатая) модель связывания (A), указывающая на клетки, которые, вероятно, восприимчивы к лечению антипрогестинами. В смешанной модели, которая именуется моделью AD, сочетаются обе модели A и D.
В следующем аспекте антитело против рецептора прогестерона выбирают из группы, состоящей из анти-PR-A-антитела и анти-PR-B-антитела, смеси анти-PR-A и анти-PR-B антител и биспецифичных анти-PR AB антител.
В другом аспекте антипрогестин вводят в количестве от 10 до примерно 200 мг в день, в зависимости от эффективности, биодоступности и профиля безопасности антипрогестина. Без привязки к теории, полагают, что в результате выявления пациентов с опухолями, которые восприимчивы к лечению антипрогестинами, можно использовать более низкую дозу антипрогестина, что приводит к понижению риска токсических побочных эффектов. Так, например, более низкий диапазон доз может быть использован для пациентов, демонстрирующих степень очагового распределения прогестеронового рецептора более 5%. В одном из аспектов отнесение модели распределения к категориям A или AD могло бы привести к назначению различных доз, тогда как модель D могла бы показать, что лечение антипрогестином не оправдано.
В еще одном аспекте представлены способы скрининга противоопухолевых препаратов с точки зрения их способности инактивировать APF. Эти способы применимы, например, для выявления дополнительных антипрогестинов, которые могут быть кандидатами для применения в лечении APF-позитивных опухолей согласно способам, описанным в настоящей заявке. В одном из аспектов представлен способ скрининга лекарственного средства-кандидата по его способности уменьшать очаговое распределение прогестеронового рецептора в ядрах PR-позитивных клеток опухоли. Можно получить по меньшей мере два образца опухолевой ткани из одной и той же опухоли. Один из образцов опухоли можно подвергнуть воздействию лекарственного средства-кандидата. Затем образцы опухолевой ткани можно обработать антителами против прогестеронового рецептора и определить степень очагового распределения прогестероновых рецепторов в ядрах PR-позитивных клеток из образцов опухолевой ткани. Если очаговое распределение прогестеронового рецептора в образце опухолевой ткани, обработанном лекарственным средством-кандидатом, понижается по сравнению с образцом опухолевой ткани, который не обрабатывали лекарственным средством-кандидатом, то это лекарственное средство способно ослаблять очаговое распределение прогестеронового рецептора в PR-позитивных клетках опухоли.
Другой аспект настоящего изобретения относится к системе для отнесения опухоли к числу восприимчивых к лечению антипрогестином, включающей образец ткани и по меньшей мере одно антитело или связывающий фрагмент антитела, способные обнаружить прогестероновый рецептор. Антитело или связывающий фрагмент антитела могут быть использованы для определения степени очагового распределения прогестеронового рецептора в ядрах PR-позитивных клеток из образца опухолевой ткани. В другом аспекте опухоль восприимчива к лечению антипрогестином, если степень очагового распределения в ядрах PR-позитивных клеток превышает примерно 5%.
В следующем аспекте обнаружение ослабления наблюдаемого окрашивания APF служит признаком способности противоопухолевого средства дезактивировать APF. Обнаружение отсутствия значимого ослабления наблюдаемого окрашивания APF служит признаком отсутствия у противоопухолевого средства способности дезактивировать APF.
В другом аспекте APF-активный антипрогестин может быть использован в комбинации с дополнительным гормональным лечением, которое не действует через механизм инактивации APF (например, антиэстрогенами), для достижения улучшенной терапевтической эффективности по сравнению с любым из агентов при индивидуальном применении. В качестве альтернативы, APF-активный антипрогестин может быть использован в комбинации с одним или несколькими известными химиотерапевтическими агентами, которые не обладают APF-активностью по данным скрининга, для достижения улучшенной терапевтической эффективности по сравнению с любым из агентов при индивидуальном применении (например, в комбинации с такими средствами, как эверолимус, трастузумаб, TM1-D, анти-HER2 препараты, бевацизумаб, или химиотерапевтическим лечением такими агентами, как паклитаксел, доцетаксел, таксаны, доксорубицин, липосомальный доксорубицин, пегилированный липосомальный доксорубицин, антрациклины, антрацендионы, карбоплатин, цисплатин, 5-FU, гемцитабин и циклофосфамид). Например, эверолимус представляет собой ингибитор mTor, который показан в комбинации с ингибитором ароматазы и, в будущем, может быть показан в комбинации с антипрогестином.
В еще одном аспекте выявление наличия очагового распределения антитела против прогестероновых рецепторов в ядрах может служить признаком того, что опухоль пациента ранее лечили противоопухолевым препаратом, и она приобрела устойчивость к этому препарату, но по-прежнему восприимчива к APF-активному антипрогестину, такому как онапристон. В одном из аспектов этот способ может быть адаптирован для определения того, можно ли преодолеть невосприимчивость опухоли к химиотерапии, возникшую из-за предыдущего курса химиотерапии, путем лечения APF-активным антипрогестином. Преодоление такой устойчивости к химиотерапии, может быть основано на различных механизмах действия предыдущей химиотерапии и APF-активного антипрогестина.
Другой аспект относится к системе для определения опухоли как восприимчивой к лечению антипрогестином. Эта система включает образец ткани и по меньшей мере одно антитело или связывающий фрагмент антитела, способные обнаружить прогестероновый рецептор, где указанное антитело или связывающий фрагмент антитела используют для определения степени очагового распределения прогестеронового рецептора в ядрах клеток из образца опухолевой ткани, и где опухоль считается восприимчивой к лечению антипрогестином, если указанная степень очагового распределения превышает примерно 5%.
Пример 1
Образцы опухолей пациентов с раком молочной железы (инвазивная карцинома протоков) и раком эндометрия выбирали из архивов отделения патологической анатомии Oscar Lambert Cancer Center (Lille, France). Предварительно получали разрешение пациентов на использование их тканей для исследовательских целей. Получали образцы опухолевых тканей молочной железы и эндометрия, которые были зафиксированы в 4% формалиновом фиксаторе и заключены в парафин.
Иммуногистохимию (IHC) проводили на 3-4 мкм срезах архивных тканей опухолей молочной железы или эндометрия. Из образцов удаляли парафин, гидратировали и промывали рабочим буфером (0,05 моль/л Tris/HCl, 0,15 моль/л NaCl, 0,05% Tween 20, pH 7,6, Dako, Denmark код S3006). Демаскирование антигена проводили с помощью раствора Dako Target Retrieval Solution (модифицированный цитратный буфер, pH 6,1, Dako, Denmark, код S1699) на водяной бане при 98°C в течение 20 мин. Затем срезы покрывали блокирующим раствором Dako Peroxydase Block solution для блокирования эндогенных пероксидаз при комнатной температуре (КТ) в течение 5 мин (набор Dako EnVision® +/HRP Mouse (DAB+), Dako, Denmark, код K4007), промывали и инкубировали с первичными антителами в соответствующих оптимальных разбавлениях при КТ в течение 60 мин во влажной камере (таблица 1). После 5-мин промывания рабочим буфером использовали меченый полимер Dako Labelled Polymer (набор Dako EnVision® +/HRP Mouse (DAB+), Dako, Denmark, код K4007) для детектирования связывания первичного антитела при КТ в течение 30 мин. Затем для окрашивания субстрата использовали хромоген (DAB) в течение 5-10 мин при комнатной температуре, после чего осуществляли легкое контрастное окрашивание среза гематоксилином Джилла.
Образцы для отрицательного контроля получали заменой первичного антитела изотипом контрольного мышиного IgG1 (таблица 1) или чистым разбавителем для антител (отрицательный контроль с промывочным буфером) при иммуногистохимическом окрашивании.
Таблица 1 Антитела, применяемые для иммуногистохимии |
|||||
Антитело против | Клон | Разбавления | Хозяин/изотип | Поставщик | Код |
PR форма A | 16 | 1:100 (3,6 мкг/мл) | Мышиный IgG1 | Novocastra | PGR-312-L-CE |
1:200 (1,8 мкг/мл) | |||||
PR форма B | SAN27 | 1:100 (0,4 мкг/мл) | Мышиный IgG1 κ | Novocastra | PGR-B-CE |
1:200 (0,2 мкг/мл) | |||||
PR формы A/B | 1A6 | 1:40 (1,2 мкг/мл) | Мышиный IgG1 | Novocastra | PGR-L-CE |
1:80 (0,6 мкг/мл) | |||||
PR формы A/B | 16SAN27 | 1:100 (2 мкг/мл) | Мышиный IgG1 | Novocastra | PGR-AB-L-CE |
1:200 (1 мкг/мл) | |||||
Отрицательный контроль | DAK-GO1 | 1:25 (4 мкг/мл) | Мышиный IgG1 | Dako | XO931 |
1:100 (1 мкг/мл) | |||||
1:200 (0,5 мкг/мл) |
Иммуногистохимический анализ проводили с использованием микроскопа Zeiss Axioscope, снабженного цифровой камерой Imaging Model ROHS. Иммунореактивные сигналы выявляли по явно видимому коричневому окрашиванию ядер опухолевых клеток. Интенсивность окрашивания определяли, как 0 для отсутствия окраски, + для слабой окраски, ++ для умеренной окраски и +++ для сильной окраски.
Пример 2
Анализировали 12 образцов рака молочной железы с использованием 3 различных антител и 4 методов IHC. 6 образцов можно было обработать для последующего проведения иммуногистофлуоресцентного (IHF) анализа.
Иммуногистофлуоресцентное исследование проводили с использованием флуоресцентного микроскопа Zeiss, оборудованного CCD камерой с программой Smart Capture, специально предназначенной для регистрации флуоресцентных изображений. IHF осуществляли для срезов 3-4 мкм архивных образцов тканей опухолей молочной железы. Срезы депарафинировали, гидратировали и промывали в рабочем буфере (0,05 моль/л Tris/HCl, 0,15 моль/л NaCl, 0,05% Tween 20, pH 7,6, Dako, Denmark код S3006). Демаскирование антигена проводили с помощью раствора Dako Target Retrieval Solution (модифицированный цитратный буфер, pH 6,1, Dako, Denmark, код S1699) на водяной бане при 98°C в течение 20 мин. Затем срезы инкубировали с первичными антителами в подходящих оптимальных разбавлениях при КТ в течение 60 мин в темной влажной камере (таблица 2). После 5-минутного промывания рабочим буфером использовали подходящее вторичное антитело, конъюгированные с Alexa Fluor 488, для детектирования связывания первичного антитела при КТ в течение 30 мин (F(ab’)2 против мышиного IgG (H+L), Cell Signaling, USA, код 4408S, разбавление 1:1000; F(ab’)2 против кроличьего IgG (H+L), Cell Signaling, USA, код 4412S, разбавление 1:1000). Затем все образцы промывали и накрывали покровными стеклами, используя среду Vectashield® HardSet Mounting Medium (Vector Labs, USA, код H-1400) и хранили в темноте в охлажденном состоянии до исследования, чтобы сохранить способность образцов к флуоресценции. Образцы для отрицательного контроля получали путем замены при иммунофлуоресцентном окрашивании первичных антител изотипом контрольного мышиного IgG1 или кроличьей сывороткой (см. таблицу IHC), или чистым разбавителем для антител (отрицательный контроль с промывочным буфером).
Все образцы опухолей были PR-позитивными для трех различных антител. Однако исследование моделей распределения в ядрах не привело к окончательным выводам для 6 из 11 PR-позитивных образцов с биспецифичными A и B антителами (только 1 образец с этими антителами был PR-негативным). Шесть образцов подвергали IHF анализу со всеми антителами. В двух случаях методику IHF не удалось реализовать со всеми антителами, поскольку не осталось достаточного количества доступной опухолевой ткани. Четыре образца не удалось исследовать с PR B антителом. IHF исследование с другими антителами (PR-A и PR A+B) в одном случае не привело к определенным выводам при определении модели распределения в ядрах. Распределение PR в ядрах по данным IHF и наблюдаемые модели связывания согласовывались с данными IHC.
Затем исследовали большее количество образцов по методике IHC с использованием анти-PR-A антитела, анти-PR-B антитела или смеси обоих антител (далее именуемой A+B).
Подготавливали для исследования 75 образцов рака молочной железы и 25 образцов рака эндометрия. Для каждого меченого образца опухолей позитивное очаговое распределение определяли как процентную долю меченых опухолевых клеток от общего количества клеток в опухолевой ткани, исключая омертвевшие области.
Две основные модели распределения, обнаруженные в образцах, представлены на фиг.1. Приведенные изображения демонстрируют окрашивание образов тканей антителами против PR с использованием IHC. На фиг.1A показана коричневая, мелкозернистая и диффузная модель D. На фиг.1B показана пятнистая агрегированная структура, представляющая позитивную модель очагового связывания A. На фиг.2 показаны те же образцы обработанные с помощью IHF. На фиг.2A показана диффузная модель D, аналогичная полученной с помощью IHC на фиг.1A. На фиг.2B показана пятнистая агрегированная модель связывания, аналогичная фиг.1B. Диффузные модели D на фиг.1A и 2A аналогичны результатам для генно-инженерных клеток, которые экспрессируют флуоресцентный рецептор в отсутствии прогестерона или агониста прогестерона (Arnett-Manfield et al, 2004 1C Control, 1D и 1E), и для нормальной ткани эндометрия человека и ткани рака эндометрия (Arnett-Manfield et al, 2004 1A, 1B, 1C, 1D, 1E, 1F).
Активная модель A, наблюдаемая в фиксированных в формалине, заключенных в парафин опухолевых тканях, может отличаться от изображений, полученных для свежих клеток. Такой результат ожидается из-за того, что фиксация формалином и парафинирование ткани должны привести к изменению содержимого клеток, которое приводит к отличию модели распределения PR. Другое различие по сравнению с опубликованными исследованиями, в которых применялась IHF, относится к методу. В данном методе исследования конфокальный микроскоп (т.е. использующий два лазерных луча) позволяет получать высокое разрешение и 3D изображение; при этом используются тонкие срезы образцов тканей (например, толщиной 2 микрона). IHC модель проявляется в результате химической реакции, которая модифицирует содержимое клеток. В отличие от этого, в методе IHC используется традиционный широкопольный микроскоп для наблюдения срезов опухолей стандартной толщины (например, 4 микрона). Описанная методика IHC приводит к некоторой потере разрешения.
Методика IHF оказывает менее агрессивное химическое воздействие на опухолевые ткани в том отношении, что она не меняет микроскопическую структуру клеток. Для IHF требуется специализированное оборудование, патоморфолог, имеющий опыт работы с данной методикой, и, кроме того, исследование занимает существенно больше времени. IHF плохо сочетается с другими патоморфологическими исследованиями, такими как стандартная гистология, для которой требуются ткани, фиксированные формалином и залитые парафином. Таким образом, в одном из аспектов изобретения IHC можно использовать в качестве стандартной патоморфологической лабораторной методики. В методике IHC, разработанной в настоящем изобретении, для всех анализов использовали срезы тканей толщиной 4 мкм (толщина, обычно используемая для стандартных клинических анализов).
Фиг.3A и 3B эквивалентны фиг.1A и 1B с окрашиванием фона. Диффузную модель, наблюдаемую на фиг.5A или при иммунофлуоресценции, затемняют контрастным окрашиванием. Аналогично, фиг.5B демонстрирует крупные аномалии ядер. Однако однородная, диффузная модель на фиг.5A по-прежнему позволяет сделать вывод о наличии гомогенных ядер, тогда как ядра образца 1B подвергаются существенным искажениям на фиг.5B.
Таким образом, были обнаружены две основных модели: диффузное окрашивание PR в ядрах, указывающее на отсутствие активированных PR, и/или гетерогенное окрашивание, где в ядрах клеток можно обнаружить агрегаты, именуемые очагами скопления PR. Очаги скопления PR крупнее, чем элементы диффузной модели, которые, в свою очередь, значительно меньше (см. фигуры).
Пример 3
Для использования в различных аспектах настоящего изобретения было выявлено три категории фенотипов, которые наблюдались при высоких увеличениях (800×). В противоположность этому, для стандартного определения PR-статуса с помощью IHC использовалось стандартное увеличение (400×).
Выявленные категории (наблюдались при высоком увеличении)
D: диффузное окрашивание, очаги скопления PR отсутствуют (например, фиг.1A).
AD: области, в которых сочетаются A и D клетки, или наблюдается гетерогенное распределение очагов скопления PR, имеющих меньший размер, чем для модели A.
A: крупные очаги скопления PR, распределенные гетерогенным образом (например, фиг.1B).
Эту классификацию (D, AD и A) оценивали на примере 100 дополнительных образцов (75 образцов ткани рака молочной железы и 25 образцов ткани рака эндометрия). В некоторых случаях образцы были позитивными по одному из изотипов PR, но не по другому (например, позитивными по PR-A, но не по PR-B).
Образцы рака молочной железы (61 образец анализировали на экспрессию PR стандартными способами, 12 образцов были PR-негативными для всех антител, для 2 образцов имелись недостаточные данные).
Таблица 2 Опухолевые клетки рака молочной железы, позитивные по указанному антителу |
||||
Данные указаны в процентах | Число образцов | Среднее | Минимальное | Максимальное |
Анти-PR A+B | 54 | 34% | 5% | 90% |
только анти-PR A | 51 | 31% | 5% | 90% |
только анти-PR B | 52 | 32% | 5% | 85% |
либо A, либо B* | 58 | 36% | 5% | 95% |
* По каждому антителу получены примерно одинаковые статистические данные с одинаковой средней процентной долей PR-позитивных клеток (31-36%), и изменением процентной доли в одном и том же диапазоне (5-95%). * Данные получены в результате расчета, для которого выбрана наибольшая процентная доля PR-A или PR-B по результатам для использованных антител, причем доля PR-позитивных клеток не была одинаковой для обоих антител в одной биопсии. |
Таблица 3 Опухолевые клетки рака эндометрия, позитивные по указанному антителу |
||||
25 образцов (3 негативных образца для всех антител против PR) | ||||
Данные указаны в процентах | Число образцов | Среднее | Минимальное | Максимальное |
Анти-PR A+B | 19 | 31% | 2% | 100% |
только анти-PR A | 18 | 21% | 5% | 90% |
только анти-PR B | 18 | 23% | 5% | 85% |
либо A, либо B* | 20 | 27% | 5% | 90% |
C. Очаговое распределение
В данном разделе описана частота появления моделей A, AD, D и N (негативная, PR окрашивание отсутствует). Все образцы исследовали при высоком увеличении (800×). Два образца рака молочной железы не годились для исследования. Данные таблицы 4 демонстрируют, что отнесение образцов менялось в зависимости от использованного антитела (PR-A или PR-B), причем наибольшая зависимость от вида антитела наблюдалась для образцов с AD моделью. Это, вероятнее всего, отражает присущее раковой ткани нарушение регулирования двух прогестероновых рецепторов (PR-A и PR-B). В некоторых аспектах изобретения антитела, нацеленные на каждую из изоформ PR, могут быть использованы с целью получения дополнительной информации для интерпретации результатов анализа. Например, образец может иметь модель “D” при обработке антителом против PR-A и модель “AD” при обработке вторым антителом против PR-B. Исходя из последнего отнесения к модели “AD”, лечение антипрогестином могло бы потенциально подходить для данного случая. Аналогично, образец может соответствовать модели “A” с антителом против PR-A и модели “AD” с антителом против PR-B, что могло бы потенциально потребовать других (более высоких) доз антипрогестина из-за более высокой степени роста злокачественных клеток, на которую указывает нарушенная активность PR. Стандартные IHC методы определения PR не способны предоставить такую информацию, поскольку они указывают только на наличие или отсутствие гормональных рецепторов (т.е. ER и PR). О одном из аспектов, характер распределения активированных очагов PR, установленный на основе анализа с использованием одного или нескольких отдельных антител, мог бы предоставить дополнительную информацию для анализа модели активированных очагов PR.
Таблица 4 Очаговое распределение PR для клеток рака груди |
|||||
Данные для количества случаев | Количество образцов | A | AD | D | Нег. |
анти-PR A+B | 71 | 4 | 21 | 29 | 17 |
только анти-PR A | 67 | 3 | 19 | 29 | 16 |
только анти-PR B | 69 | 1 | 24 | 17 | 27 |
Данные в процентах | % | A | AD | D | Нег. |
анти-PR A+B | 101% | 6% | 30% | 41% | 24% |
только анти-PR A | 99% | 4% | 28% | 43% | 24% |
только анти-PR B | 100% | 1% | 35% | 25% | 39% |
Пример 4
В серии данных, приведенных в таблицах ниже по тексту, тот или иной образце опухоли мог бы быть APF-негативным для одного антитела и APF-позитивным для другого, т.е. демонстрировать различные модели APF для одного антитела против другого антитела. Однако результаты для антител против PR-A и PR-B в целом соответствуют друг другу. Количество совпадающих случаев показано в диагональных ячейках приведенных ниже комбинированных таблиц. Соответствие для двух наборов условий выделено затенением соответствующих ячеек таблицы. Эти результаты показывают, что в некоторых аспектах изобретения использование более чем одного антитела могло бы предоставить дополнительную информацию для выявления модели распределения APF в ядрах.
В приведенной ниже таблице 5 приведено сравнение моделей APF, полученных с использованием антитела против PR-A и смеси антител PR A+B, в образцах рака молочной железы. A: агрегированная модель с крупными очагами, AD: смесь A клеток и D клеток, или гетерогенные очаги среднего размера. D: диффузная модель или отсутствие очагов активированного PR. В столбцах показано отнесение образцов по модели связывания, выявленной с помощью только антител против PR-A, тогда как в строках показано отнесение образцов с использованием антител против PR-A + PR-B. Диагональные ячейки, выделенные серым фоном, показывают число совпадающих случаев, т.е. образцов, в которых выявлена одна и та же модель связывания с использованием обоих способов. В других ячейках показаны несовпадающие результаты, т.е. образцы с различными моделями связывания для каждого способа.
Таблица 6: Образцы рака молочной железы. В комбинированной таблице приведены результаты, полученные с использованием антитела против PR-B (PR-B) и смеси антител против PR-A и PR-B (PR A+B). A: агрегированная модель с крупными очагами, AD: смесь A клеток и D клеток, или гетерогенные очаги среднего размера. D: диффузная модель или отсутствие очагов активированного PR. В столбцах показано отнесение образцов по модели связывания, выявленной с помощью только антител против PR-B, тогда как в строках показано отнесение образцов с использованием антител против PR-A + PR-B. Диагональные ячейки, выделенные серым фоном, показывают число совпадающих случаев, т.е. образцов, в которых выявлена одна и та же модель связывания с использованием обоих способов. В других ячейках показаны несовпадающие результаты, т.е. образцы с различными моделями связывания для каждого способа.
Таблица 7: Образцы рака молочной железы. В комбинированной таблице приведены результаты, полученные с использованием антитела против PR-B (PR-B) и антитела против PR-A (PR-A). A: агрегированная модель с крупными очагами, AD: смесь A клеток и D клеток, или гетерогенные очаги среднего размера. D: диффузная модель или отсутствие очагов активированного PR. В столбцах показано отнесение образцов по модели связывания, выявленной с помощью только антител против PR-B, тогда как в строках показано отнесение образцов с использованием антител против PR-A. Диагональные ячейки, выделенные серым фоном, показывают число совпадающих случаев, т.е. образцов, в которых выявлена одна и та же модель связывания с использованием обоих способов. В других ячейках показаны несовпадающие результаты, т.е. образцы с различными моделями связывания для каждого способа.
Рак эндометрия
Аналогичные модели распределения PR в ядрах наблюдались в образцах рака эндометрия. Важно отметить, что в образцах биопсий были обнаружены нормальные фибробласты, и было зафиксировано, что они являются PR-позитивными. Эти нормальные фибробласты имели D фенотип распределения PR в ядрах, указывающий на то, что PR в этих нормальных клетках не активирован, вероятнее всего, потому, что пациенты находились в постклимактерическом возрасте и их организмы не вырабатывали физиологических уровней прогестерона. Поэтому указанные фибробласты не подвергались действию эндогенного прогестерона. В противоположность этому, раковые ткани демонстрировали активированную форму PR (APF) даже в отсутствие физиологического прогестерона, на что указывала модель распределения в фибробластах.
Таблица 8: Образцы рака эндометрия. В комбинированной таблице приведены результаты, полученные с использованием антитела против PR-A (PR-A) и смеси антител против PR-A и PR-B (PR A+B). A: агрегированная модель с крупными очагами, AD: смесь A клеток и D клеток, или гетерогенные очаги среднего размера. D: диффузная модель или отсутствие очагов активированного PR. В столбцах показано отнесение образцов по модели связывания, выявленной с помощью только антител против PR-A, тогда как в строках показано отнесение образцов с использованием антител против PR-A и PR-B. Диагональные ячейки, выделенные серым фоном, показывают число совпадающих случаев, т.е. образцов, в которых выявлена одна и та же модель связывания с использованием обоих способов. В других ячейках показаны несовпадающие результаты, т.е. образцы с различными моделями связывания для каждого способа.
Таблица 9: Образцы рака эндометрия. В комбинированной таблице приведены результаты, полученные с использованием антитела против PR-B (PR-B) и смеси антител против PR-A и PR-B (PR A+B). A: агрегированная модель с крупными очагами, AD: смесь A клеток и D клеток, или гетерогенные очаги среднего размера. D: диффузная модель или отсутствие очагов активированного PR. В столбцах показано отнесение образцов по модели связывания, выявленной с помощью только антител против PR-B, тогда как в строках показано отнесение образцов с использованием антител против PR-A и PR-B. Диагональные ячейки, выделенные серым фоном, показывают число совпадающих случаев, т.е. образцов, в которых выявлена одна и та же модель связывания с использованием обоих способов. В других ячейках показаны несовпадающие результаты, т.е. образцы с различными моделями связывания для каждого способа.
Таблица 10: Образцы рака эндометрия. В комбинированной таблице приведены результаты, полученные с использованием антитела против PR-B (PR-B) и антитела против PR-A (PR A). A: агрегированная модель с крупными очагами, AD: смесь A клеток и D клеток, или гетерогенные очаги среднего размера. D: диффузная модель или отсутствие очагов активированного PR. В столбцах показано отнесение образцов по модели связывания, выявленной с помощью только антител против PR-B, тогда как в строках показано отнесение образцов с использованием антитела против PR-A. Диагональные ячейки, выделенные серым фоном, показывают число совпадающих случаев, т.е. образцов, в которых выявлена одна и та же модель связывания с использованием обоих способов. В других ячейках показаны несовпадающие результаты, т.е. образцы с различными моделями связывания для каждого способа.
В одном из аспектов изобретения использование антител против PR-A и PR-B или биспецифичных антител против PR-A и PR-B может осуществляться совместно для идентификации AD-модели распределения PR в ядрах, если использование единственного антитела (например, PR-A или PR-B) в некоторых случаях может не выявить AD-модель.
В другом аспекте изобретения способы, раскрытые в тексте заявки, описывают модель распределения PR в ядрах в биопсиях раковых опухолей, выявленную, например, с помощью IHC и подтвержденную с использованием свежего образца ткани и IHF. Диффузная модель обнаруживается в нормальных клетках/тканях, которые не подвергались действию прогестинов в экспериментальных и физиологических условиях. Диффузная модель распределения в ядрах указывает на то, что PR в опухолевых клетках не активированы, и, следовательно, лечение опухоли антипрогестином вряд ли будет эффективным. Напротив, наличие модели AD или A, аналогично той картине, которая наблюдается, если экспериментальные модели или нормальные клетки подвергают действию прогестинов. Эти модели показывают, что PR активированы и транскрипционно активированы в некоторых клетках, и что лечение антипрогестинами в этих случаях, вероятно, окажется эффективным.
Проявление этих моделей (например, A и AD) в опухолях носит гетерогенный характер, и их доля в разных образцах различается, что является характерным для рака. Напротив, фенотип D является гомогенным, т.е. моделью, согласующейся с недостаточной биологической функцией PR. Экспрессия PR и проявление соответствующего фенотипа, как было сказано выше, различается в соответствии с изотипом экспрессируемого PR (A или B) и используемого антитела (например, биспецифичного AB, только A, только B и смеси A+B). Эта изменчивость модели распределения PR в ядрах не является неожиданной для естественных раковых опухолей человека, которые по своей природе являются гетерогенными.
Пример 5
Диаграмма, приведенная на фиг.4, показывает процентную долю образцов рака молочной железы, позитивных по PR-A и PR-B для трех моделей связывания, A, D и AD. Результаты подтверждают вывод о том, что позитивный статус по рецептору прогестерона, определенный стандартными способами, не коррелирует с присутствием PRF распределения, которое описано в настоящей заявке.
Пример 6
В таблице 11 показаны процентные доли клеток с моделью связывания “A” для образцов тканей, демонстрирующих клетки с обеими моделями связывания “A” и “D”. В столбце, озаглавленном “APR”, указаны все модели связывания, наблюдаемые в образце ткани, тогда как в столбце “A%” показаны процентные доли клеток в образце, которые демонстрируют модель связывания “A”. В каждой из строк таблицы показаны результаты для одного образца при использовании обоих видов антител анти-PR-A и анти-PR-B, или каждого из этих антител индивидуально.
Таблица 11 Процентные доли клеток, в которых выявлена модель APF с использованием различных антител |
|||||
PR-A+B | PR-A | PR-B | |||
APR | % клеток с APF | APR | % клеток с APF | APR | % клеток с APF |
AD | 30% | AD | AD | ||
A | AD | 5% | AD | ||
D | D | AD | 5% | ||
AD | AD | 0% | AD | 20% | |
D | AD | 0% | AD | 10% | |
AD | 10% | D | AD | ||
A | AD | 15% | A | ||
A | AD | 40% | AD | 20% | |
A | A | AD | 10% | ||
A | AD | 20% | AD | 20% | |
AD | 50% | D | D | ||
AD | 5% | AD | D | ||
AD | 5% | D | D | ||
AD | 70% | A | AD | 40% | |
AD | 5% | D | AD | ||
AD | 10% | Нег. | AD | 40% | |
AD | 60% | D | AD | 10% | |
AD | 30% | AD | D | ||
A | AD | 20% | D | ||
AD | AD | 20% | AD | ||
AD | 50% | AD | 30% | AD | 20% |
A | AD | 20% | AD | 20% | |
A | A | AD | 5% |
Хотя изобретение было описано в тексте заявки со ссылкой на конкретные варианты осуществления, следует понимать, что эти варианты осуществления являются лишь иллюстрацией основных идей и применений настоящего изобретения. Специалисту в данной области должно быть ясно, что в способы и системы, описанные в заявке, могут быть внесены различные модификации и изменения, без отступления от сущности и объема изобретения. Таким образом, имеется в виду, что настоящее изобретение включает различные модификации и варианты, которые входят в объем приложенной формулы изобретения, и их эквиваленты.
Claims (27)
1. Способ подавления роста опухоли, восприимчивой к ингибированию роста при действии антипрогестинов, включающий:
a) получение образца ткани пациента, которая предположительно является онкогенной или раковой;
b) выявление прогестероновых рецептор-позитивных (PR-позитивных) клеток в указанном образце ткани;
c) определение степени распространения очагов прогестеронового рецептора в ядрах прогестерон-позитивных клеток, имеющихся в указанном образце ткани; и
d) введение пациенту антипрогестина онапристона, если в указанном образце ткани присутствуют очаги скопления прогестеронового рецептора, которые превышают 5% от количества PR-позитивных клеток.
2. Способ по п.1, дополнительно включающий определение степени распространения очагов PR в ядрах клеток ткани путем действия на ткань антителом против прогестероновых рецепторов.
3. Способ по п.1, где опухоль выбрана из группы, состоящей из опухоли молочной железы, опухоли мозга, менингиомы, опухоли предстательной железы, опухоли яичника, опухоли эндометрия, лейомиомы матки, опухоли легкого и опухоли матки.
4. Способ по п.1, где степень распространения очагов PR определяют путем идентификации модели связывания прогестеронового рецептора в прогестерон-позитивных клетках ткани.
5. Способ по п.4, где модель связывания выбрана из группы, состоящей из диффузной (D), активной (A) и активной/диффузной (AD).
6. Способ по п.2, где для определения степени распространения очагов PR используют по меньшей мере два антитела.
7. Способ по п.2, где антитела выбраны из группы, состоящей из антитела против PR-A, антитела против PR-B, смеси антител против PR-A и PR-B и биспецифичных антител против PR-A и PR-B.
8. Способ по п.2, где степень распространения очагов прогестеронового рецептора определяют способом детектирования, выбранным из группы, состоящей из иммуногистохимии, иммунофлуоресценции и вестерн-блоттинга.
9. Способ по п.1, где антипрогестин вводят пациенту в количестве от 10 до 200 мг в день.
10. Способ лечения пациента с опухолью, восприимчивой к ингибированию роста при действии антипрогестинов, включающий:
a) получение образца ткани пациента, которая предположительно является онкогенной;
b) воздействие на указанный образец ткани антителом против прогестеронового рецептора;
c) выявление PR-позитивных клеток в указанном образце ткани;
d) выявление очагового распределения связывания прогестеронового рецептора в ядрах клеток ткани, где, если в указанном образце ткани присутствуют очаги скопления прогестеронового рецептора, которые превышают 5% от количества PR-позитивных клеток, пациенту вводят онапристон в дозе от 10 до 200 мг в день.
11. Способ по п.10, где опухоль выбрана из группы, состоящей из опухоли молочной железы, опухоли мозга, менингиомы, опухоли предстательной железы, опухоли яичника, опухоли эндометрия, лейомиомы матки, опухоли легкого и опухоли матки.
12. Способ по п.10, где степень распространения очагов PR определяют путем выявления модели связывания прогестеронового рецептора в клетках ткани.
13. Способ по п.12, где модель связывания выбрана из группы, состоящей из диффузной (D), активной (A) и активной/диффузной (AD).
14. Способ по п.10, где антитело выбрано из группы, состоящей из антитела против PR-A, антитела против PR-B, биспецифичного антитела против PR-A и PR-B и смеси антител против PR-A и PR-B.
15. Способ лечения пациента, у которого предположительно имеется опухоль, восприимчивая к ингибированию роста при действии онапристона, включающий:
a) выявление пациента, у которого очаги скопления прогестеронового рецептора в образце ткани превышают 5% от количества PR-позитивных клеток в биопсии опухолевой ткани; и
b) введение онапристона этому пациенту в количестве от 10 до 200 мг в день.
16. Способ по п.15, дополнительно включающий введение пациенту противоопухолевого соединения, выбранного из группы, состоящей из эверолимуса, трастузумаба, TM1-D, анти-HER2 препаратов, бевацизумаба, паклитаксела, доцетаксела, таксанов, доксорубицина, липосомального доксорубицина, пегилированного липосомального доксорубицина, антрациклинов, антрацендионов, карбоплатина, цисплатина, 5-FU, гемцитабина и циклофосфамида.
17. Система для отнесения опухоли к числу восприимчивых к лечению онапристоном, включающая образец опухоли и по меньшей мере одно антитело или связывающий фрагмент антитела, способные детектировать прогестероновый рецептор, где указанное антитело или связывающий фрагмент антитела применяют для определения степени распространения очагов прогестеронового рецептора в PR-позитивных ядрах клеток образца опухоли, и где опухоль считается восприимчивой к лечению онапристоном, если в указанном образце ткани присутствуют очаги скопления прогестеронового рецептора, которые превышают 5% от количества PR-позитивных клеток.
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201161542931P | 2011-10-04 | 2011-10-04 | |
US61/542,931 | 2011-10-04 | ||
PCT/US2012/058732 WO2013052652A1 (en) | 2011-10-04 | 2012-10-04 | Methods and systems for identifying and treating anti-progestin sensitive tumors |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2014110504A RU2014110504A (ru) | 2015-11-10 |
RU2672874C2 true RU2672874C2 (ru) | 2018-11-20 |
Family
ID=48044149
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2014110504A RU2672874C2 (ru) | 2011-10-04 | 2012-10-04 | Способы и системы для выявления и лечения опухолей, восприимчивых к антипрогестинам |
Country Status (14)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US9046534B2 (ru) |
EP (1) | EP2763680A4 (ru) |
JP (1) | JP6092880B2 (ru) |
KR (1) | KR102009007B1 (ru) |
CN (1) | CN103957920B (ru) |
AU (1) | AU2012318618B2 (ru) |
BR (1) | BR112014008203A2 (ru) |
CA (1) | CA2849335A1 (ru) |
HK (1) | HK1200104A1 (ru) |
IL (1) | IL231683B (ru) |
MX (1) | MX369028B (ru) |
RU (1) | RU2672874C2 (ru) |
WO (1) | WO2013052652A1 (ru) |
ZA (1) | ZA201401965B (ru) |
Families Citing this family (12)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN105792823B (zh) * | 2013-11-01 | 2019-11-12 | 皮特尼制药股份有限公司 | 治疗恶性肿瘤的药物组合 |
KR20170023771A (ko) * | 2014-04-08 | 2017-03-06 | 아르노 테라퓨틱스 인코포레이티드 | 프로게스테론 수용체 서브타입을 확인하기 위한 시스템 및 방법 |
WO2015162532A1 (en) * | 2014-04-24 | 2015-10-29 | Pfizer Inc. | Cancer treatment |
KR20170084086A (ko) | 2014-11-17 | 2017-07-19 | 아르노 테라퓨틱스 인코포레이티드 | 오나프리스톤 연장-방출 조성물 및 방법 |
CA2998924A1 (en) | 2015-09-25 | 2017-03-30 | Context Biopharma Inc. | Methods of making onapristone intermediates |
US10548905B2 (en) | 2015-12-15 | 2020-02-04 | Context Biopharma Inc. | Amorphous onapristone compositions and methods of making the same |
MX2018010564A (es) * | 2016-03-01 | 2018-11-09 | Corcept Therapeutics Inc | Uso de moduladores del receptor de glucocorticoides para potenciar inhibidores de puntos de regulacion. |
US20180148471A1 (en) | 2016-11-30 | 2018-05-31 | Arno Therapeutics, Inc. | Methods for onapristone synthesis dehydration and deprotection |
US11389432B2 (en) | 2018-12-19 | 2022-07-19 | Corcept Therapeutics Incorporated | Methods of treating cancer comprising administration of a glucocorticoid receptor modulator and a cancer chemotherapy agent |
US11234971B2 (en) | 2018-12-19 | 2022-02-01 | Corcept Therapeutics Incorporated | Methods of treating cancer comprising administration of a glucocorticoid receptor modulator and a cancer chemotherapy agent |
KR102072944B1 (ko) | 2019-07-23 | 2020-02-03 | (주)스타원코퍼레이션 | 펜을 이용한 학습 장치 |
RU2766662C1 (ru) * | 2021-05-18 | 2022-03-15 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр онкологии имени Н.Н. Петрова" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Способ определения лекарственной чувствительности немелкоклеточного рака легкого in vitro |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4742000A (en) * | 1986-05-02 | 1988-05-03 | University Of Chicago | Antibody to human progesterone receptor and diagnostic materials and methods |
US20040072811A1 (en) * | 2000-10-18 | 2004-04-15 | Jens Hoffmann | Use of antiprogestins for the induction of apoptosis in a cell |
US20110053900A1 (en) * | 2008-04-28 | 2011-03-03 | Repros Therapeutics Inc | Progesterone antagonists such as cdb-4124 in the treatment of breast cancer |
Family Cites Families (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5283190A (en) * | 1989-07-31 | 1994-02-01 | Traish Adbulmaged M | Specific monoclonal antibodies against a defined epitope of progesterone receptor and methods for their use |
MXPA03002955A (es) * | 2000-10-18 | 2003-08-07 | Schering Ag | Uso de antiprogestinas para la induccion de apoptosis en una celula. |
US20040121304A1 (en) * | 2001-12-21 | 2004-06-24 | Ulrike Fuhrmann | Method for screening for progesterone receptor isoform-specific ligands and for tissue-selective progesterone receptor ligands |
US20100160275A1 (en) * | 2006-09-26 | 2010-06-24 | Lee Eva Y H P | Methods and compositions for cancer prevention and treatment |
-
2012
- 2012-10-04 KR KR1020147010316A patent/KR102009007B1/ko active IP Right Grant
- 2012-10-04 EP EP12837954.2A patent/EP2763680A4/en not_active Withdrawn
- 2012-10-04 CN CN201280048864.XA patent/CN103957920B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2012-10-04 CA CA2849335A patent/CA2849335A1/en not_active Abandoned
- 2012-10-04 WO PCT/US2012/058732 patent/WO2013052652A1/en active Application Filing
- 2012-10-04 RU RU2014110504A patent/RU2672874C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2012-10-04 BR BR112014008203A patent/BR112014008203A2/pt not_active IP Right Cessation
- 2012-10-04 MX MX2014003690A patent/MX369028B/es active IP Right Grant
- 2012-10-04 JP JP2014534716A patent/JP6092880B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2012-10-04 AU AU2012318618A patent/AU2012318618B2/en not_active Ceased
- 2012-10-04 US US13/644,872 patent/US9046534B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2014
- 2014-03-18 ZA ZA2014/01965A patent/ZA201401965B/en unknown
- 2014-03-24 IL IL231683A patent/IL231683B/en not_active IP Right Cessation
-
2015
- 2015-01-19 HK HK15100581.8A patent/HK1200104A1/xx unknown
- 2015-04-28 US US14/698,100 patent/US20190145979A9/en not_active Abandoned
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4742000A (en) * | 1986-05-02 | 1988-05-03 | University Of Chicago | Antibody to human progesterone receptor and diagnostic materials and methods |
US20040072811A1 (en) * | 2000-10-18 | 2004-04-15 | Jens Hoffmann | Use of antiprogestins for the induction of apoptosis in a cell |
US20110053900A1 (en) * | 2008-04-28 | 2011-03-03 | Repros Therapeutics Inc | Progesterone antagonists such as cdb-4124 in the treatment of breast cancer |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
ARNETT-MANSFIELD R.L. et al., Focal Subnuclear Distribution of Progesterone Receptor Is Ligand Dependent and Associated with Transcriptional Activity, Molecular Endocrinology, 2007, 21(1):14-29. Найдено из Интернета [он-лайн] на сайте: http://press.endocrine.org/doi/pdf/10.1210/me.2006-0041. * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
BR112014008203A2 (pt) | 2017-04-18 |
US20130095170A1 (en) | 2013-04-18 |
NZ717890A (en) | 2017-10-27 |
ZA201401965B (en) | 2019-03-27 |
KR102009007B1 (ko) | 2019-08-08 |
IL231683A0 (en) | 2014-05-28 |
US20150241435A1 (en) | 2015-08-27 |
US9046534B2 (en) | 2015-06-02 |
CN103957920B (zh) | 2018-04-20 |
EP2763680A4 (en) | 2015-05-20 |
RU2014110504A (ru) | 2015-11-10 |
EP2763680A1 (en) | 2014-08-13 |
AU2012318618A1 (en) | 2014-04-17 |
CN103957920A (zh) | 2014-07-30 |
AU2012318618B2 (en) | 2017-01-12 |
KR20140093663A (ko) | 2014-07-28 |
CA2849335A1 (en) | 2013-04-11 |
HK1200104A1 (en) | 2015-07-31 |
MX2014003690A (es) | 2015-01-12 |
IL231683B (en) | 2019-02-28 |
NZ623140A (en) | 2016-06-24 |
WO2013052652A1 (en) | 2013-04-11 |
JP6092880B2 (ja) | 2017-03-08 |
MX369028B (es) | 2019-10-25 |
US20190145979A9 (en) | 2019-05-16 |
JP2014530812A (ja) | 2014-11-20 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
RU2672874C2 (ru) | Способы и системы для выявления и лечения опухолей, восприимчивых к антипрогестинам | |
Vereide et al. | Effect of levonorgestrel IUD and oral medroxyprogesterone acetate on glandular and stromal progesterone receptors (PRA and PRB), and estrogen receptors (ER-α and ER-β) in human endometrial hyperplasia | |
Koebele et al. | Hysterectomy uniquely impacts spatial memory in a rat model: a role for the nonpregnant uterus in cognitive processes | |
Kaygusuz et al. | Sclerosing stromal tumour in young women: clinicopathologic and immunohistochemical spectrum | |
KR20130101062A (ko) | 유방암 진단법 | |
Signorile et al. | Rectovaginal septum endometriosis: an immunohistochemical analysis of 62 cases | |
US20150285803A1 (en) | Systems and methods for identifying progesterone receptor subtypes | |
Awowole et al. | Clinical correlates of leiomyoma estrogen and progesterone receptors among Nigerian women | |
Kolanska et al. | Absence of predictable long-term molecular effect of ulipristal acetate (UPA) on the endometrium | |
EP2773962B1 (en) | Assay for predictive biomarkers of anti-estrogen efficacy | |
NZ623140B2 (en) | Methods and systems for identifying and treating anti-progestin sensitive tumors | |
NZ717890B2 (en) | Methods and Systems for Identifying and Treating Anti-Progestin Sensitive Tumors | |
Koebele et al. | Gynecological surgery in adulthood imparts cognitive and brain changes in rats: A focus on hysterectomy at short-, moderate-, and long-term intervals after surgery | |
Erdenebaatar | Elucidation of the involvement of prolactin in endometrial cancer: A novel therapeutic strategy for young hyperprolactinemic patients with endometrial cancer | |
Hofling | Testosterone and the postmenopausal breast: Aspects on cell proliferation and mammographic density | |
Al-Timimi | An Immunohistochemical Study of Hormone Binding Sites in the Normal and Neoplastic Human Ovarian Tissue |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
FA92 | Acknowledgement of application withdrawn (lack of supplementary materials submitted) |
Effective date: 20171011 |
|
FZ9A | Application not withdrawn (correction of the notice of withdrawal) |
Effective date: 20180725 |
|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20191005 |