RU2671832C1 - Лекарственное средство и способ лечения нарушений врожденного иммунного ответа - Google Patents
Лекарственное средство и способ лечения нарушений врожденного иммунного ответа Download PDFInfo
- Publication number
- RU2671832C1 RU2671832C1 RU2016128070A RU2016128070A RU2671832C1 RU 2671832 C1 RU2671832 C1 RU 2671832C1 RU 2016128070 A RU2016128070 A RU 2016128070A RU 2016128070 A RU2016128070 A RU 2016128070A RU 2671832 C1 RU2671832 C1 RU 2671832C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- peptidase
- aspergillus niger
- aspergilloglutamyl
- gluten
- amylase
- Prior art date
Links
- 239000003814 drug Substances 0.000 title claims abstract description 19
- 230000015788 innate immune response Effects 0.000 title claims abstract description 7
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 25
- 201000010099 disease Diseases 0.000 title abstract description 12
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 title abstract description 12
- 241000228245 Aspergillus niger Species 0.000 claims abstract description 91
- 239000003392 amylase inhibitor Substances 0.000 claims abstract description 50
- 208000015943 Coeliac disease Diseases 0.000 claims abstract description 43
- 108090000637 alpha-Amylases Proteins 0.000 claims abstract description 36
- 102000004139 alpha-Amylases Human genes 0.000 claims abstract description 36
- 229940024171 alpha-amylase Drugs 0.000 claims abstract description 35
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 claims abstract description 29
- 239000002753 trypsin inhibitor Substances 0.000 claims abstract description 23
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 22
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 22
- 102000056251 Prolyl Oligopeptidases Human genes 0.000 claims abstract description 18
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 claims abstract description 17
- 101710178372 Prolyl endopeptidase Proteins 0.000 claims abstract description 16
- 230000000378 dietary effect Effects 0.000 claims abstract description 9
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims abstract description 8
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 claims description 124
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 claims description 124
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 claims description 91
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 77
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 77
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 claims description 71
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 53
- 108010068370 Glutens Proteins 0.000 claims description 48
- 235000021312 gluten Nutrition 0.000 claims description 45
- 235000013305 food Nutrition 0.000 claims description 35
- 239000013566 allergen Substances 0.000 claims description 21
- 108090000987 aspergillopepsin I Proteins 0.000 claims description 18
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 claims description 14
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 claims description 13
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 claims description 13
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 claims description 12
- 239000002775 capsule Substances 0.000 claims description 10
- 125000000291 glutamic acid group Chemical group N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)* 0.000 claims description 10
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 claims description 9
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 9
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 claims description 9
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 claims description 8
- 230000037213 diet Effects 0.000 claims description 8
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 claims description 8
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 claims description 8
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 7
- 239000003826 tablet Substances 0.000 claims description 7
- 206010000059 abdominal discomfort Diseases 0.000 claims description 5
- 208000022559 Inflammatory bowel disease Diseases 0.000 claims description 3
- 208000002551 irritable bowel syndrome Diseases 0.000 claims description 3
- 235000012054 meals Nutrition 0.000 claims description 3
- 101000765308 Aspergillus niger N-(5'-phosphoribosyl)anthranilate isomerase Proteins 0.000 claims 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 abstract description 8
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 abstract description 8
- 108090000432 Aspergillopepsin II Proteins 0.000 abstract description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 3
- 241000209140 Triticum Species 0.000 description 40
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 40
- 235000013405 beer Nutrition 0.000 description 33
- 239000000047 product Substances 0.000 description 33
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 29
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 25
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 25
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 24
- 235000008429 bread Nutrition 0.000 description 21
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 20
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 19
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 18
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 17
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 17
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 17
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 15
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 15
- 235000019419 proteases Nutrition 0.000 description 15
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 14
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 14
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 14
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 13
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 12
- 241000209219 Hordeum Species 0.000 description 11
- 235000007340 Hordeum vulgare Nutrition 0.000 description 11
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 11
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 10
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 10
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 10
- 101710118538 Protease Proteins 0.000 description 9
- 241000499912 Trichoderma reesei Species 0.000 description 9
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 102000013142 Amylases Human genes 0.000 description 8
- 108010065511 Amylases Proteins 0.000 description 8
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 8
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 8
- 235000007238 Secale cereale Nutrition 0.000 description 8
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 8
- 235000019418 amylase Nutrition 0.000 description 8
- 238000004895 liquid chromatography mass spectrometry Methods 0.000 description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 8
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 8
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 8
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 7
- 241000209056 Secale Species 0.000 description 7
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 7
- 235000015895 biscuits Nutrition 0.000 description 7
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 7
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 7
- 229940042399 direct acting antivirals protease inhibitors Drugs 0.000 description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 7
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 7
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 7
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 7
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 6
- 239000000463 material Substances 0.000 description 6
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 235000014594 pastries Nutrition 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- 101710171801 Alpha-amylase inhibitor Proteins 0.000 description 5
- 239000004382 Amylase Substances 0.000 description 5
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 5
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 description 5
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 5
- OWMVSZAMULFTJU-UHFFFAOYSA-N bis-tris Chemical compound OCCN(CCO)C(CO)(CO)CO OWMVSZAMULFTJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 5
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 5
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 5
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 5
- 229960004441 tyrosine Drugs 0.000 description 5
- 101000986989 Naja kaouthia Acidic phospholipase A2 CM-II Proteins 0.000 description 4
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 4
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 4
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 4
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 4
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 4
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 4
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 4
- YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N trichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- ZIIUUSVHCHPIQD-UHFFFAOYSA-N 2,4,6-trimethyl-N-[3-(trifluoromethyl)phenyl]benzenesulfonamide Chemical compound CC1=CC(C)=CC(C)=C1S(=O)(=O)NC1=CC=CC(C(F)(F)F)=C1 ZIIUUSVHCHPIQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000007319 Avena orientalis Nutrition 0.000 description 3
- 244000075850 Avena orientalis Species 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102100033357 Pancreatic lipase-related protein 2 Human genes 0.000 description 3
- 102000015439 Phospholipases Human genes 0.000 description 3
- 108010064785 Phospholipases Proteins 0.000 description 3
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 3
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 3
- 235000012791 bagels Nutrition 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 3
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 3
- 239000013568 food allergen Substances 0.000 description 3
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 3
- 235000012470 frozen dough Nutrition 0.000 description 3
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000006171 gluten free diet Nutrition 0.000 description 3
- 235000020884 gluten-free diet Nutrition 0.000 description 3
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 3
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 3
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 3
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 3
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 3
- 108060006613 prolamin Proteins 0.000 description 3
- 229940024999 proteolytic enzymes for treatment of wounds and ulcers Drugs 0.000 description 3
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 3
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 3
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 3
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- VBICKXHEKHSIBG-UHFFFAOYSA-N 1-monostearoylglycerol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(O)CO VBICKXHEKHSIBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DLFVBJFMPXGRIB-UHFFFAOYSA-N Acetamide Chemical compound CC(N)=O DLFVBJFMPXGRIB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091005508 Acid proteases Proteins 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- 239000004156 Azodicarbonamide Substances 0.000 description 2
- 239000001422 FEMA 4092 Substances 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 description 2
- 240000003183 Manihot esculenta Species 0.000 description 2
- 235000016735 Manihot esculenta subsp esculenta Nutrition 0.000 description 2
- 229920000881 Modified starch Polymers 0.000 description 2
- 108010038807 Oligopeptides Proteins 0.000 description 2
- 102000015636 Oligopeptides Human genes 0.000 description 2
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 2
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 2
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 description 2
- 108010064851 Plant Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000006010 Protein Disulfide-Isomerase Human genes 0.000 description 2
- RWRDLPDLKQPQOW-UHFFFAOYSA-N Pyrrolidine Chemical compound C1CCNC1 RWRDLPDLKQPQOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 2
- 229940025131 amylases Drugs 0.000 description 2
- XOZUGNYVDXMRKW-AATRIKPKSA-N azodicarbonamide Chemical compound NC(=O)\N=N\C(N)=O XOZUGNYVDXMRKW-AATRIKPKSA-N 0.000 description 2
- 235000019399 azodicarbonamide Nutrition 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 235000014121 butter Nutrition 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 239000012876 carrier material Substances 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 2
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N dimethylselenoniopropionate Natural products CCC(O)=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000012489 doughnuts Nutrition 0.000 description 2
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 2
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 2
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 2
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 2
- 235000019197 fats Nutrition 0.000 description 2
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 2
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 2
- -1 for example Proteins 0.000 description 2
- XLXSAKCOAKORKW-AQJXLSMYSA-N gonadorelin Chemical compound C([C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)NCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H]1NC(=O)CC1)C1=CC=C(O)C=C1 XLXSAKCOAKORKW-AQJXLSMYSA-N 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 2
- 230000009610 hypersensitivity Effects 0.000 description 2
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 2
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 2
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- PGLTVOMIXTUURA-UHFFFAOYSA-N iodoacetamide Chemical compound NC(=O)CI PGLTVOMIXTUURA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002366 lipolytic effect Effects 0.000 description 2
- YFVGRULMIQXYNE-UHFFFAOYSA-M lithium;dodecyl sulfate Chemical compound [Li+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O YFVGRULMIQXYNE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 2
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 2
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 235000019426 modified starch Nutrition 0.000 description 2
- 235000012459 muffins Nutrition 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- 108010032563 oligopeptidase Proteins 0.000 description 2
- 235000012771 pancakes Nutrition 0.000 description 2
- 229940055729 papain Drugs 0.000 description 2
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 description 2
- 235000015927 pasta Nutrition 0.000 description 2
- 235000012830 plain croissants Nutrition 0.000 description 2
- 235000021118 plant-derived protein Nutrition 0.000 description 2
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 2
- 235000012434 pretzels Nutrition 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- XXRYFVCIMARHRS-UHFFFAOYSA-N propan-2-yl n-dimethoxyphosphorylcarbamate Chemical compound COP(=O)(OC)NC(=O)OC(C)C XXRYFVCIMARHRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 2
- 108020003519 protein disulfide isomerase Proteins 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 235000011888 snacks Nutrition 0.000 description 2
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 2
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 2
- 235000012184 tortilla Nutrition 0.000 description 2
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 2
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 2
- 235000012773 waffles Nutrition 0.000 description 2
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 2
- QDZOEBFLNHCSSF-PFFBOGFISA-N (2S)-2-[[(2R)-2-[[(2S)-1-[(2S)-6-amino-2-[[(2S)-1-[(2R)-2-amino-5-carbamimidamidopentanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]hexanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-N-[(2R)-1-[[(2S)-1-[[(2R)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-amino-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)-1-oxopropan-2-yl]amino]-1-oxo-3-phenylpropan-2-yl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)-1-oxopropan-2-yl]pentanediamide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(N)=O)NC(=O)[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](N)CCCNC(N)=N)C1=CC=CC=C1 QDZOEBFLNHCSSF-PFFBOGFISA-N 0.000 description 1
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010000060 Abdominal distension Diseases 0.000 description 1
- 244000215068 Acacia senegal Species 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 206010054928 Allergy to plants Diseases 0.000 description 1
- 101710113918 Alpha-amylase inhibitor 0.19 Proteins 0.000 description 1
- 101710172128 Alpha-amylase/trypsin inhibitor Proteins 0.000 description 1
- 229940122816 Amylase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 206010002198 Anaphylactic reaction Diseases 0.000 description 1
- 108010064733 Angiotensins Proteins 0.000 description 1
- 102000015427 Angiotensins Human genes 0.000 description 1
- 208000006820 Arthralgia Diseases 0.000 description 1
- 102000004580 Aspartic Acid Proteases Human genes 0.000 description 1
- 108010017640 Aspartic Acid Proteases Proteins 0.000 description 1
- 102000035101 Aspartic proteases Human genes 0.000 description 1
- 108091005502 Aspartic proteases Proteins 0.000 description 1
- 241001149666 Aspergillus niger var. macrosporus Species 0.000 description 1
- 241000228251 Aspergillus phoenicis Species 0.000 description 1
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 1
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 101800004538 Bradykinin Proteins 0.000 description 1
- 102400000967 Bradykinin Human genes 0.000 description 1
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 240000006432 Carica papaya Species 0.000 description 1
- 235000009467 Carica papaya Nutrition 0.000 description 1
- 108010059892 Cellulase Proteins 0.000 description 1
- PTHCMJGKKRQCBF-UHFFFAOYSA-N Cellulose, microcrystalline Chemical compound OC1C(O)C(OC)OC(CO)C1OC1C(O)C(O)C(OC)C(CO)O1 PTHCMJGKKRQCBF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090000317 Chymotrypsin Proteins 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 101000904177 Clupea pallasii Gonadoliberin-1 Proteins 0.000 description 1
- 206010010356 Congenital anomaly Diseases 0.000 description 1
- 241001137251 Corvidae Species 0.000 description 1
- 244000303965 Cyamopsis psoralioides Species 0.000 description 1
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 1
- 101710121765 Endo-1,4-beta-xylanase Proteins 0.000 description 1
- 206010061958 Food Intolerance Diseases 0.000 description 1
- 206010017533 Fungal infection Diseases 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 108010061711 Gliadin Proteins 0.000 description 1
- 108010015776 Glucose oxidase Proteins 0.000 description 1
- 239000004366 Glucose oxidase Substances 0.000 description 1
- 239000000579 Gonadotropin-Releasing Hormone Substances 0.000 description 1
- 229920000084 Gum arabic Polymers 0.000 description 1
- QXZGBUJJYSLZLT-UHFFFAOYSA-N H-Arg-Pro-Pro-Gly-Phe-Ser-Pro-Phe-Arg-OH Natural products NC(N)=NCCCC(N)C(=O)N1CCCC1C(=O)N1C(C(=O)NCC(=O)NC(CC=2C=CC=CC=2)C(=O)NC(CO)C(=O)N2C(CCC2)C(=O)NC(CC=2C=CC=CC=2)C(=O)NC(CCCN=C(N)N)C(O)=O)CCC1 QXZGBUJJYSLZLT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010019233 Headaches Diseases 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 101150017040 I gene Proteins 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 108010008292 L-Amino Acid Oxidase Proteins 0.000 description 1
- 102000007070 L-amino-acid oxidase Human genes 0.000 description 1
- 235000013878 L-cysteine Nutrition 0.000 description 1
- 239000004201 L-cysteine Substances 0.000 description 1
- XNSAINXGIQZQOO-UHFFFAOYSA-N L-pyroglutamyl-L-histidyl-L-proline amide Natural products NC(=O)C1CCCN1C(=O)C(NC(=O)C1NC(=O)CC1)CC1=CN=CN1 XNSAINXGIQZQOO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010029541 Laccase Proteins 0.000 description 1
- 229920001732 Lignosulfonate Polymers 0.000 description 1
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 description 1
- 108090000128 Lipoxygenases Proteins 0.000 description 1
- 102000003820 Lipoxygenases Human genes 0.000 description 1
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 206010025476 Malabsorption Diseases 0.000 description 1
- 208000004155 Malabsorption Syndromes Diseases 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 101800001751 Melanocyte-stimulating hormone alpha Proteins 0.000 description 1
- 241001158961 Melba Species 0.000 description 1
- 229920000168 Microcrystalline cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000004368 Modified starch Substances 0.000 description 1
- 108090000189 Neuropeptides Proteins 0.000 description 1
- 102400001103 Neurotensin Human genes 0.000 description 1
- 101800001814 Neurotensin Proteins 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 1
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 1
- 208000001132 Osteoporosis Diseases 0.000 description 1
- 102400000050 Oxytocin Human genes 0.000 description 1
- 101800000989 Oxytocin Proteins 0.000 description 1
- XNOPRXBHLZRZKH-UHFFFAOYSA-N Oxytocin Natural products N1C(=O)C(N)CSSCC(C(=O)N2C(CCC2)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C1CC1=CC=C(O)C=C1 XNOPRXBHLZRZKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 description 1
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- 102100027467 Pro-opiomelanocortin Human genes 0.000 description 1
- 108010026552 Proteome Proteins 0.000 description 1
- 239000012614 Q-Sepharose Substances 0.000 description 1
- 238000010847 SEQUEST Methods 0.000 description 1
- 241000223256 Scytalidium lignicola Species 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 description 1
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 description 1
- 101000857870 Squalus acanthias Gonadoliberin Proteins 0.000 description 1
- 102400000096 Substance P Human genes 0.000 description 1
- 101800003906 Substance P Proteins 0.000 description 1
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000627 Thyrotropin-Releasing Hormone Substances 0.000 description 1
- 102400000336 Thyrotropin-releasing hormone Human genes 0.000 description 1
- 101800004623 Thyrotropin-releasing hormone Proteins 0.000 description 1
- ATJFFYVFTNAWJD-UHFFFAOYSA-N Tin Chemical compound [Sn] ATJFFYVFTNAWJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108060008539 Transglutaminase Proteins 0.000 description 1
- 101710162629 Trypsin inhibitor Proteins 0.000 description 1
- 102000018690 Trypsinogen Human genes 0.000 description 1
- 108010027252 Trypsinogen Proteins 0.000 description 1
- 229920001938 Vegetable gum Polymers 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000205 acacia gum Substances 0.000 description 1
- 235000010489 acacia gum Nutrition 0.000 description 1
- 150000007960 acetonitrile Chemical class 0.000 description 1
- 239000002535 acidifier Substances 0.000 description 1
- 229940095602 acidifiers Drugs 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 230000002009 allergenic effect Effects 0.000 description 1
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 230000036783 anaphylactic response Effects 0.000 description 1
- 208000003455 anaphylaxis Diseases 0.000 description 1
- 208000007502 anemia Diseases 0.000 description 1
- 239000004599 antimicrobial Substances 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 239000003696 aspartic proteinase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 229930194563 aspergillus acid Natural products 0.000 description 1
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 1
- 230000006472 autoimmune response Effects 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 235000015173 baked goods and baking mixes Nutrition 0.000 description 1
- OGBUMNBNEWYMNJ-UHFFFAOYSA-N batilol Chemical class CCCCCCCCCCCCCCCCCCOCC(O)CO OGBUMNBNEWYMNJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 108010019077 beta-Amylase Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 230000002457 bidirectional effect Effects 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 208000024330 bloating Diseases 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- QXZGBUJJYSLZLT-FDISYFBBSA-N bradykinin Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N1[C@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)CCC1 QXZGBUJJYSLZLT-FDISYFBBSA-N 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 235000012813 breadcrumbs Nutrition 0.000 description 1
- 235000021152 breakfast Nutrition 0.000 description 1
- 238000013124 brewing process Methods 0.000 description 1
- SXDBWCPKPHAZSM-UHFFFAOYSA-M bromate Inorganic materials [O-]Br(=O)=O SXDBWCPKPHAZSM-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- SXDBWCPKPHAZSM-UHFFFAOYSA-N bromic acid Chemical compound OBr(=O)=O SXDBWCPKPHAZSM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 229940106157 cellulase Drugs 0.000 description 1
- 235000012182 cereal bars Nutrition 0.000 description 1
- 230000001055 chewing effect Effects 0.000 description 1
- WORJEOGGNQDSOE-UHFFFAOYSA-N chloroform;methanol Chemical compound OC.ClC(Cl)Cl WORJEOGGNQDSOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019219 chocolate Nutrition 0.000 description 1
- 238000013375 chromatographic separation Methods 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 208000019902 chronic diarrheal disease Diseases 0.000 description 1
- 229960002376 chymotrypsin Drugs 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 235000012495 crackers Nutrition 0.000 description 1
- 235000012777 crisp bread Nutrition 0.000 description 1
- 239000002852 cysteine proteinase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 210000000172 cytosol Anatomy 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 238000013480 data collection Methods 0.000 description 1
- 230000007123 defense Effects 0.000 description 1
- 239000013530 defoamer Substances 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 230000006866 deterioration Effects 0.000 description 1
- 238000001784 detoxification Methods 0.000 description 1
- 235000007882 dietary composition Nutrition 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 235000021245 dietary protein Nutrition 0.000 description 1
- 150000004683 dihydrates Chemical class 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019800 disodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 239000008298 dragée Substances 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 208000000718 duodenal ulcer Diseases 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 239000008393 encapsulating agent Substances 0.000 description 1
- YERABYSOHUZTPQ-UHFFFAOYSA-P endo-1,4-beta-Xylanase Chemical compound C=1C=CC=CC=1C[N+](CC)(CC)CCCNC(C(C=1)=O)=CC(=O)C=1NCCC[N+](CC)(CC)CC1=CC=CC=C1 YERABYSOHUZTPQ-UHFFFAOYSA-P 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 235000012779 flatbread Nutrition 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 239000012628 flowing agent Substances 0.000 description 1
- 238000005187 foaming Methods 0.000 description 1
- 235000013355 food flavoring agent Nutrition 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 1
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 1
- 235000012055 fruits and vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 239000003349 gelling agent Substances 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 108010061330 glucan 1,4-alpha-maltohydrolase Proteins 0.000 description 1
- 229940116332 glucose oxidase Drugs 0.000 description 1
- 235000019420 glucose oxidase Nutrition 0.000 description 1
- 108010050792 glutenin Proteins 0.000 description 1
- YQEMORVAKMFKLG-UHFFFAOYSA-N glycerine monostearate Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC(CO)CO YQEMORVAKMFKLG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- SVUQHVRAGMNPLW-UHFFFAOYSA-N glycerol monostearate Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(O)CO SVUQHVRAGMNPLW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003147 glycosyl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 235000015220 hamburgers Nutrition 0.000 description 1
- 231100000869 headache Toxicity 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 229940059442 hemicellulase Drugs 0.000 description 1
- 108010002430 hemicellulase Proteins 0.000 description 1
- 108010018734 hexose oxidase Proteins 0.000 description 1
- 239000003906 humectant Substances 0.000 description 1
- 239000000416 hydrocolloid Substances 0.000 description 1
- 125000001165 hydrophobic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 208000026278 immune system disease Diseases 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 150000002476 indolines Chemical class 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000009413 insulation Methods 0.000 description 1
- 239000000787 lecithin Substances 0.000 description 1
- 235000010445 lecithin Nutrition 0.000 description 1
- 235000021374 legumes Nutrition 0.000 description 1
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 description 1
- 239000008297 liquid dosage form Substances 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 235000013310 margarine Nutrition 0.000 description 1
- 239000003264 margarine Substances 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 235000012439 matzos Nutrition 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 239000008108 microcrystalline cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000019813 microcrystalline cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229940016286 microcrystalline cellulose Drugs 0.000 description 1
- 239000011785 micronutrient Substances 0.000 description 1
- 235000013369 micronutrients Nutrition 0.000 description 1
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- PCJGZPGTCUMMOT-ISULXFBGSA-N neurotensin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]1NC(=O)CC1)C1=CC=C(O)C=C1 PCJGZPGTCUMMOT-ISULXFBGSA-N 0.000 description 1
- 235000012149 noodles Nutrition 0.000 description 1
- 231100000862 numbness Toxicity 0.000 description 1
- 230000031787 nutrient reservoir activity Effects 0.000 description 1
- 235000014571 nuts Nutrition 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- XNOPRXBHLZRZKH-DSZYJQQASA-N oxytocin Chemical compound C([C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](N)C(=O)N1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(N)=O)=O)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 XNOPRXBHLZRZKH-DSZYJQQASA-N 0.000 description 1
- 229960001723 oxytocin Drugs 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 108010091212 pepstatin Proteins 0.000 description 1
- FAXGPCHRFPCXOO-LXTPJMTPSA-N pepstatin A Chemical compound OC(=O)C[C@H](O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)C[C@H](O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CC(C)C FAXGPCHRFPCXOO-LXTPJMTPSA-N 0.000 description 1
- 239000000813 peptide hormone Substances 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 235000015108 pies Nutrition 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 235000013550 pizza Nutrition 0.000 description 1
- 108010025221 plasma protein Z Proteins 0.000 description 1
- 229920001515 polyalkylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920000223 polyglycerol Polymers 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 235000013606 potato chips Nutrition 0.000 description 1
- 235000012015 potatoes Nutrition 0.000 description 1
- 238000007781 pre-processing Methods 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 125000001500 prolyl group Chemical group [H]N1C([H])(C(=O)[*])C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 1
- 235000019260 propionic acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000007065 protein hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 229940121649 protein inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 239000012268 protein inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 1
- XNSAINXGIQZQOO-SRVKXCTJSA-N protirelin Chemical compound NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H]1NC(=O)CC1)CC1=CN=CN1 XNSAINXGIQZQOO-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- 108010001816 pyranose oxidase Proteins 0.000 description 1
- IUVKMZGDUIUOCP-BTNSXGMBSA-N quinbolone Chemical compound O([C@H]1CC[C@H]2[C@H]3[C@@H]([C@]4(C=CC(=O)C=C4CC3)C)CC[C@@]21C)C1=CCCC1 IUVKMZGDUIUOCP-BTNSXGMBSA-N 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 235000012471 refrigerated dough Nutrition 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 1
- 235000012780 rye bread Nutrition 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 150000003354 serine derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000003001 serine protease inhibitor Substances 0.000 description 1
- 239000011257 shell material Substances 0.000 description 1
- 238000004904 shortening Methods 0.000 description 1
- 239000007974 sodium acetate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011008 sodium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- ODFAPIRLUPAQCQ-UHFFFAOYSA-M sodium stearoyl lactylate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC(C)C(=O)OC(C)C([O-])=O ODFAPIRLUPAQCQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229940080352 sodium stearoyl lactylate Drugs 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 1
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000012222 talc Nutrition 0.000 description 1
- 239000006068 taste-masking agent Substances 0.000 description 1
- 229940034199 thyrotropin-releasing hormone Drugs 0.000 description 1
- 235000008371 tortilla/corn chips Nutrition 0.000 description 1
- 102000003601 transglutaminase Human genes 0.000 description 1
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 230000001810 trypsinlike Effects 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 239000001993 wax Substances 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- 208000016261 weight loss Diseases 0.000 description 1
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 1
- 235000012799 wholemeal bread Nutrition 0.000 description 1
- 229920001285 xanthan gum Polymers 0.000 description 1
- WHNFPRLDDSXQCL-UAZQEYIDSA-N α-msh Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(C)=O)C1=CC=C(O)C=C1 WHNFPRLDDSXQCL-UAZQEYIDSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
- A61K38/46—Hydrolases (3)
- A61K38/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- A61K38/488—Aspartic endopeptidases (3.4.23), e.g. pepsin, chymosin, renin, cathepsin E
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A21—BAKING; EDIBLE DOUGHS
- A21D—TREATMENT, e.g. PRESERVATION, OF FLOUR OR DOUGH, e.g. BY ADDITION OF MATERIALS; BAKING; BAKERY PRODUCTS; PRESERVATION THEREOF
- A21D8/00—Methods for preparing or baking dough
- A21D8/02—Methods for preparing dough; Treating dough prior to baking
- A21D8/04—Methods for preparing dough; Treating dough prior to baking treating dough with microorganisms or enzymes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A21—BAKING; EDIBLE DOUGHS
- A21D—TREATMENT, e.g. PRESERVATION, OF FLOUR OR DOUGH, e.g. BY ADDITION OF MATERIALS; BAKING; BAKERY PRODUCTS; PRESERVATION THEREOF
- A21D8/00—Methods for preparing or baking dough
- A21D8/02—Methods for preparing dough; Treating dough prior to baking
- A21D8/04—Methods for preparing dough; Treating dough prior to baking treating dough with microorganisms or enzymes
- A21D8/042—Methods for preparing dough; Treating dough prior to baking treating dough with microorganisms or enzymes with enzymes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L29/00—Foods or foodstuffs containing additives; Preparation or treatment thereof
- A23L29/06—Enzymes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L5/00—Preparation or treatment of foods or foodstuffs, in general; Food or foodstuffs obtained thereby; Materials therefor
- A23L5/20—Removal of unwanted matter, e.g. deodorisation or detoxification
- A23L5/25—Removal of unwanted matter, e.g. deodorisation or detoxification using enzymes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
- A61K38/46—Hydrolases (3)
- A61K38/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- A61K38/482—Serine endopeptidases (3.4.21)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0053—Mouth and digestive tract, i.e. intraoral and peroral administration
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12C—BEER; PREPARATION OF BEER BY FERMENTATION; PREPARATION OF MALT FOR MAKING BEER; PREPARATION OF HOPS FOR MAKING BEER
- C12C5/00—Other raw materials for the preparation of beer
- C12C5/004—Enzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
- C12N9/58—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from fungi
- C12N9/62—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from fungi from Aspergillus
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
- C12Y304/21—Serine endopeptidases (3.4.21)
- C12Y304/21026—Prolyl oligopeptidase (3.4.21.26), i.e. proline-specific endopeptidase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
- C12Y304/23—Aspartic endopeptidases (3.4.23)
- C12Y304/23018—Aspergillopepsin I (3.4.23.18)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
- C12Y304/23—Aspartic endopeptidases (3.4.23)
- C12Y304/23019—Aspergillopepsin II (3.4.23.19)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2250/00—Food ingredients
- A23V2250/20—Natural extracts
- A23V2250/208—Fungi extracts
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2300/00—Processes
- A23V2300/28—Hydrolysis, degree of hydrolysis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Immunology (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Mycology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Physiology (AREA)
- Transplantation (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Bakery Products And Manufacturing Methods Therefor (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
- Distillation Of Fermentation Liquor, Processing Of Alcohols, Vinegar And Beer (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к фармацевтической промышленности и представляет собой диетическую добавку, содержащую аспергиллоглутамил-пептидазу из Aspergillus niger, пролил-эндопептидазу и диетически пригодные вспомогательные вещества, а также фармацевтическую композицию для лечения непереносимости глютена у человека, содержащую аспергиллоглутамил-пептидазу из Aspergillus niger, пролил-эндопептидазу и фармацевтически пригодные вспомогательные вещества. Изобретение обеспечивает гидролиз ингибиторов альфа-амилазы/трипсина с целью лечения заболеваний, связанных с врожденным иммунным ответом у человека, или для обеспечения замедления проявления указанных заболеваний. 8 н. и 12 з.п. ф-лы, 6 пр., 2 табл., 5 ил.
Description
Область техники и сущность изобретения
Настоящее изобретение относится к лекарственному средству или диетической добавке, включающей аспергиллоглутамил-пептидазу из Aspergillus niger, которая способна к гидролизу растительных пищевых аллергенов, а более конкретно, ингибиторов альфа-амилазы/трипсина, тем самым позволяя лечить заболевания, обусловленные врожденным иммунным ответом у человека, и/или позволяя отсрочить проявления указанных заболеваний. Настоящее изобретение относится к открытию того, что аспергиллоглутамил-пептидаза из Aspergillus niger способна гидролизовать ингибиторы альфа-амилазы/трипсина, которые присутствуют в пшенице и родственных злаках, где указанные ингибиторы являются сильными индукторами врожденного иммунного ответа. Кроме того, настоящее изобретение относится к способу гидролиза ингибиторов альфа-амилазы/трипсина, включающему инкубацию композиции для употребления в качестве продукта питания, содержащей ингибиторы альфа-амилазы/трипсина, с аспергиллоглутамил-пептидазой из Aspergillus niger, где ингибиторы подвергаются гидролизу. Оно также относится к ферментной композиции, включающей аспергиллоглутамил-пептидазу из Aspergillus niger и дополнительный фермент, и к продукту питания, включающему аспергиллоглутамил-пептидазу из Aspergillus niger.
Предшествующий уровень техники
Растительные диетические аллергены являются широко распространенной группой растительных белков, включающих надсемейства купинов и проламинов, а также белковые молекулы защитной системы растений. Надсемейство проламинов включает несколько важных типов аллергенов бобовых, орехов, зерновых, фруктов и овощей, а также ингибиторы альфа-амилазы и протеазы зерновых. Проламины зерновыхых являются основными запасными белками в эндосперме семян зерновых и носят название глютенины и глиадииы в пшенице, секалины во ржи и гордеины в ячмене. Белковые ингибиторы альфа-амилазы являются не-глютеновыми белками. На основании структурного сходства, среди белковых ингибиторов альфа-амилазы растительного происхождения, как правило, выделяют шесть семейств, включающих лектин-иодобные, кноттин-подобные, СМ-белки, Кунитц-подобные, с-пуротиоиин-подобные, и тауматин-подобные (Richardson, 1990). СМ (хлороформ-метанол)-белки - большое семейство белков из семян зерновых культур, содержащих от 120 до 160 аминокислотных остатков, и пять дисульфидных связей. В них присутствует типичный двунаправленный домен альфа-амилазы/трипсина. Этот признак дает им возможность ингибировать активность альфа-амилазы и трипсиноподобных ферментов. Ингибитор альфа-амилазы 0.19 является одним из наиболее изученных ингибиторов этого семейства; он имеет широкую специфичность, и ингибирует альфа-амилазы насекомых, птиц и млекопитающих.
Кроме того, растительные защитные белки также включают ингибиторы иротеаз. Большинство органов хранения растений, таких как семена и клубни, содержат 1-10% от общего количества белков в качестве ингибиторов протеаз с различными биохимическими и структурными свойствами ингибирования различных типов протеаз. Белковые ингибиторы классифицируют на основе типа фермента, который они ингибируют: ингибиторы сериновых иротеаз, ингибиторы цистеиновых протеаз, ингибиторы аспарагиновых протеаз или ингибиторы металлокарбокси-протеаз.
В документе WO 2011/137322 недавно показано, что члены семейства неглютеновых ингибиторов альфа-амилазы/трипсина, содержащиеся в пшенице и родственных злаках, являются сильными индукторами врожденного иммунного ответа в тонкой кишке человека, таким образом, способствуя развитию таких заболеваний, как целиакия. Кроме того, ингибиторы альфа амилазы/трипсина также являются ключевыми факторами, способствующими развитию таких заболеваний или патологических состояний, как гиперчувствителыюсть к глютену, синдром раздраженного кишечника, воспалительное заболевание кишечника, а также внекишечное воспаление.
Целиакия, также известная как целиакия-спру, глютеновая энтеропатия или непереносимость глютена, является одной из наиболее частых пищевых непереносимостей во всем мире, с самым высоким уровнем распространенности в Европе, Северной и Южной Америке, и в Австралии. Целиакия представляет собой воспалительное заболевание верхних отделов тонкой кишки у генетически предрасположенных лиц, вызванное употреблением в пищу пшеницы, ячменя, ржи и их перекрестно связанных разновидностей, приводящее к синдрому мальабсорбции.
Глютен является основным пищевым белком, присутствующим в пшенице, ячмене, ржи, и их перекрестно связанных сортах. Глютен представляет собой сложную смесь из богатых глутамином и пролином глютениновых и проламиновых молекул, которые, как полагают, являются фактором, ответственным за индукцию целиакии у чувствительных человеческих индивидуумов. Из-за их необычной структуры с высоким содержанием пролина и глутамина, белки глютена частично устойчивы к кишечным ферментам, что приводит к наличию некоторых не подвергшихся деградации иммуногенных пептидов, которые могут восприниматься иммунной системой кишечника. Употребление таких белков чувствительными людьми производит к уплощению эпителиальной выстилки тонкой кишки, в нормальном состоянии пышной и подобной ковру, которая, как известно, отвечает за эффективное и экстенсивное терминальное расщепление пептидов и других питательных веществ. Клинические симптомы целиакии-спру включают утомляемость, хроническую диарею, нарушение усвоения питательных веществ, потерю веса, вздутие живота, анемию, а также существенно повышенный риск развития остеопороза и злокачественных опухолей кишечника (лимфомы и карциномы). Заболевание имеет частоту около 1 на 200 среди населения Европы и Северной Америки.
В настоящее время основным лечением непереносимости глютена является постоянное строгое исключение глютена из диеты, что трудновыполнимо. Однако важно выделить две категории непереносимость глютена для понимания того, как на болезнь влияет действие фермента в кишечнике. Целиакия-спру является аутоиммунным состоянием, генетическим воспалительным заболеванием тонкого кишечника. Когда белки глютена разрушаются в процессе пищеварения, они фрагментируются. Эти белковые фрагменты называются пептидами. У больных целиакией неадекватный иммунный ответ в тонком кишечнике инициируется одним типом пептидов, что приводит к повреждению клеток тонкой кишки.
Второй тип непереносимости глютена возникает, когда кишечник поврежден чем-либо иным, чем целиакия; например отрицательный эффект бактериальной или дрожжевой инфекции приводит к потере кишечных ферментов, что в свою очередь ведет к ухудшению переваривания глютена. Хотя ферментативная поддержка может быть полезна для больных целиакией, они должны оставаться на строго безглютеновой диете из-за возможной силы аутоиммунной реакции, когда следовые количества глютена остаются непереваренными.
Использование специфических ферментов в качестве добавки может быть эффективным для минимизации потребности в безглютеновой диете у тех лиц, которые подвержены риску развития непереносимости глютена, у чувствительных к глютену индивидуумов, или при непереносимости глютена из-за повреждения кишечника.
Использование экзогенных протеолитических ферментов для детоксикации глютена является одной из наиболее перспективных стратегий лечения целиакии. Такие ферменты могут быть использованы как для предварительной обработки муки, содержащей глютен, так и в качестве добавок. Пролил-эндопептидазы известны как ферменты, расщепляющие глютен, которые, как было показано, расщепляют глиадиновые пептиды (WO 2002/45524 и WO 2002/46381).
В WO 2011/137322 описано применение антител против альфа-амилазы СМ3 для лечения пациентов с целиакией, или для обработки пищевых композиций, а также рассматривается использование протеазы в качестве альтернативы. Тем не менее, в документе ничего не говорится о специфической ферментативной обработке для эффективного гидролиза ингибиторов альфа-амилазы/трипсина в желудочно-кишечном тракте или для предварительной обработки пищевых продуктов, полученных из пшеницы, ячменя, ржи и их перекрестно связанных сортов.
Индолины и пуротионины составляют группу богатых серой и основных низкомолекулярных белков, которые присутствуют в эндосперме некоторых зерновыхых. Например, идентичность последовательности альфа-пуртионинов из пшеницы, ржи и ячменя составляет более 80%. Пуртионин является членом семейства аллергенов, обозначенным Всемирной организацией здравоохранения - Международным Союзом иммунологических обществ, как «Tri а 37», и может представлять собой диагностический маркер для повышенного риска анафилаксии, индуцированной пшеницей (Pahr et al, J Allergy Cin Immunol., 132 (4), pp 1000-1003).
Необходимо обеспечить безопасный, эффективный и экономически конкурентоспособный способ деградации ингибиторов альфа-амилазы/триисина в желудочно-кишечном тракте, а также в пищевых композициях, содержащих такие ингибиторы; для лечения целиакии, повышения желудочно-кишечного комфорта у лиц с целиакией или чувствительностью к глютену, не связанной с целиакией, или для задержки появления желудочно-кишечного дискомфорта у здоровых людей, не чувствительных к глютену, путем снижения воздействия на кишечник растительных аллергенов, и более конкретно, ингибиторов альфа-амилазы/трипсина, таких как СМ3 и 0.19. Применение в соответствии с настоящим изобретением, не только решает проблему чувствительности к глютену/аллергии, но также позволяет стабилизировать пену при использовании с целью деградации ингибиторов амилазы и трипсина в пиве.
Раскрытие изобретения
Неожиданно авторы настоящего изобретения обнаружили, что фермент аспергиллоглутамил-пептидаза из Aspergillus niger имеет большой потенциал к гидролизу растительных аллергенов, таких как ингибиторы альфа-амилазы/трипсина в желудочно-кишечном тракте индивидуума, а также в пищевом матриксе, содержащем указанные ингибиторы, и следовательно, может быть использована в качестве лекарственного средства, диетической добавки, в предварительной обработке продуктов питания или в процессе приготовления выпекаемого продукта.
Таким образом, настоящее изобретение относится к диетической добавке или фармацевтической композиции, включающей аспергиллоглутамил-пептидазу из Aspergillus niger, пролил-эндопептидазу, и фармацевтически или диетически пригодные вспомогательные вещества. Аспергиллоглутамил-пептидаза из Aspergillus niger (AGP), которая раньше называлась аспергиллопепсином II, выделенная из Aspergillus niger var. macrosporus (EC 3.4.23.19), представляет собой уникальную протеазу, принадлежащую к семейству пептидаз А4. Этот фермент не гомологичен аспарагинововым протсазам, принадлежащим к пептидазам семейства А1, которые являются типичными пепсиноподобными кислыми протеазами, что делает их нечувствительными к специфическим ингибиторам, таким как пепстатин А. Поэтому этот фермент был также классифицирован как «пепстатин-нечувствительная» кислая протеиназа. Среди известных к настоящему времени глутаминовых пептидаз, AGP характерна тем, что она является единственным двухцепочечным ферментом. Аминокислотная последовательность фермента не имеет гомологии с типичными аспарагиновыми протеиназами.
Термин «аспергиллоглутамил-пептидаза из Aspergillus niger» в соответствии с настоящим изобретением включает ферменты, имеющие по меньшей мере 70% идентичности аминокислотной последовательности с аспергиллоглутамил-пептидазой из Aspergillus niger (UniProtKB/Swiss-Prot, идентификатор Р24665), например фермент, имеющий, по меньшей мере 80, 85, 90, 95, 98, 99% идентичности с Р24665. Наиболее предпочтительными гомологичными ферментами по настоящему изобретению являются сциталоглутамилпептидаза из Scytalidium lignicolum, кислые пептидазы В и С из Crypphoneclria parasitica, и кислая протеаза из Sclerotina sclerotiorum.
Аспергиллоглутамил-пептидаза из Aspergillus niger в диетической добавке или фармацевтической композиции, как описано в настоящей заявке, может присутствовать в чистом виде, либо в виде препарата, содержащего аспергиллоглутамил-пептидазу из Aspergillus niger, где по меньшей мере 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% или более от активности протеазы получено из аспергиллоглутамил-пептидазы из Aspergillus niger, где активность выражают в HPU (гистидиновых протеазных единицах); одна HPU является количеством фермента, гидролизующим количество гемоглобина в минуту, которое дает раствор с оптической плотностью при 275 нм, равной оптической плотности раствора, содержащего 1 мкг L-тирозина на мл в 0,1 М растворе НСl. Условия испытания: рН 1,75, температура 40°С, концентрация гемоглобина во время инкубации 16,7 г/л.
Активность (HPU/мл)=(ОПобр. - ОПконтр./S)×11/30; где
ОПобр.: оптическая плотность образца фильтрата (275 нм)
ОПконтр.: оптическая плотность образца чистого фильтрата (275 нм)
S: ОП стандартного раствора L-тирозина 1,1 мкг/мл (мл/мкг)
30: Время инкубации (мин)
11: общий объем реакционной смеси (мл).
Аспергиллоглутамил-пептидаза из Aspergillus niger в соответствии с настоящим изобретением может быть получена, как описано в «HIandbook of Proteolytic Enzymes», A.J. Barret, N.D. Rawlings, and J.F. Woessner eds.; Academic Press («Руководство по протеолитическим ферментам»); или в РСТ/ЕР 2013/066899.
Термин «фармацевтическая композиция» относится к лекарственному средству или лекарству, в то время как термин «диетическая добавка» относится к небольшому количеству активного вещества для добавления в рацион человека, упакованному в виде одной дозы или множества доз. Диетические добавки, как правило, не обеспечивают значительного количества калорий, но могут содержать другие питательные микронутриенты, такие как минералы и витамины.
Диетическая добавка или фармацевтическая композиция согласно настоящему изобретению дополнительно содержит фармацевтически пригодные вспомогательные вещества. «Вспомогательные вещества» являются наполнителями, носителями или разбавителями, включая воду, желатин любого происхождения, растительные камеди, лигнинсульфонат, тальк, сахара, крахмал, целлюлозу, микрокристаллическую целлюлозу, аравийскую камедь, растительные масла, полиалкиленгликоли, вкусоароматические агенты, консерванты, стабилизаторы, эмульгаторы, буферы, лубриканты, красители, смачивающие агенты, наполнители и тому подобное, но не ограничиваясь ими. Материал-носитель может быть органическим или неорганическим инертным материалом-носителем, пригодным для перорального/парентерального/инъекционного введения.
В настоящем изобретении диетическая добавка или фармацевтическая композиция аспергиллоглутамил-пептидазы из Aspergillus niger содержит от 1 до 100 HPU единиц аспергиллоглутамил-пептидазы из Aspergillus niger, предпочтительно от 10 до 50 HPU на порцию.
Кроме того, диетическая добавка или фармацевтическая композиция согласно настоящему изобретению дополнительно содержит пролил-эндопептидазу. Пролил-эндопептидаза млекопитающих является большим цитозольным ферментом, принадлежащим к отдельному классу сериновых пептидаз. Впервые она была описан в цитозоле мозга кролика как олигопептидаза, которая расщепляет нонапептидный брадикинин по связи пролин-фенилаланин. Фермент участвует в созревании и дирадации пептидных гормонов и нейропептидов, таких как альфа-меланоцит-стимулирующий гормон, рилизинг-фактор лютеинизирующего гормона (LH-RH), тиреотропин-рилизинг-гормон, ангиотензин, нейротензин, окситоцин, вещество Р и вазопрессип.Пролил-олигопептидаза расщепляет пептидные связи на С-концевой стороне остатков пролина. Ее активность сводится к действию на олигопептиды менее 10 кД и имеет абсолютное требование к гране-конфигурации пептидной связи предыдущего пролина.
Наиболее предпочтительной пролил-эндопептидазой в соответствии с настоящим изобретением является грибковый фермент пролил-эндопептидаза из Aspergillus niger (AN-PEP). AN-PEP может быть получена из DSM Food Specialties (Делфт, Нидерланды). Сочетание AN-PEP и AGP позволяет использовать одну диетическую добавку или фармацевтическую композицию в обоих аспектах глютеновой непереносимости/гиперчувствительности путем предоставления ферментов для гидролиза ингибиторов и альфа-амилазы, и трипсина, а также эпитопов глютена в желудочно-кишечном тракте. В таком случае, диетическая добавка или фармацевтическая композиция содержит от 10'000 до 100'000 PPI единиц (Protease Picomole International) фермента пролил-эндопептидазы. Пролин-протеазная единица (PPU) определяется как количество фермента, которое высвобождает 1 мкмоль п-нитроанилида в минуту при 37°С в цитратном/динатрий фосфатном буфере (рН 4,6) с использованием 0,37 мМ Z-Гли-Про-пара-нитроанилида (Bachem, Будендорф, Швейцария) в качестве субстрата.
Диетическая добавка или фармацевтическая композиция согласно настоящему изобретению может также дополнительно содержать аспергиллопеисин I. Аспергиллопепсин I (ЕС 3.4.23.18), также называемый кислотной протеазой Aspergillus, катализирует гидролиз белков с широкой специфичностью. Она, как правило, предпочитает гидрофобные остатки в Р1 и Р1', но также использует Лиз в Р1, что приводит к активации трипсиногена. Подходящий аспергиллопепсин I для всех вариантов осуществления настоящего изобретения может быть выделен из Aspergillus niger, Aspergillus saitoi и Trichoderma reesei. Предпочтительно, аспергиллопепсин I в соответствии с настоящим изобретением выделяют из Aspergillus niger. В таком случае, диетическая добавка или фармацевтическая композиция содержит от 1 до 1000 единиц HPU фермента аспергиллопепсин I, более предпочтительно, от 1 до 100 единиц HPU на порцию.
Диетическая добавка или фармацевтическая композиция согласно настоящему изобретению может быть в любой галеновой форме, которая подходит для введения человеку, но предпочтительны твердые или жидкие пероральные формы, например, в твердой форме, такие как диетические добавки, таблетки, пилюли, гранулы, драже, капсулы, жевательные составы и шипучие составы, такие как порошки и таблетки.
Диетические добавки и фармацевтические композиции могут быть изготовлены в форме составов для контролируемого (замедленного) высвобождения.
Во всех вариантах осуществления настоящего изобретения диетическая добавка или фармацевтическая композиция в соответствии с настоящим изобретением предпочтительно находится в форме таблетки, капсулы, саше, или любой другой лекарственной формы, в том числе жидкой лекарственной формы. Более предпочтительно, она находится в форме таблетки или капсулы. Капсулы, таблетки или саше или другие лекарственные формы могут находиться в контейнере, который может иметь любую обычную форму. Например, лекарственные формы могут быть помещены в банку, бутылку, жестяную коробку, чашку, дозатор, саше или тому подобное, где содержатся лекарственные формы в заданном количестве, например, с 30-дневным запасом, 60-дневным запасом, 90-дневным запасом, или в любом необходимом количестве. В дополнение и факультативно, капсулы могут быть в блистерной упаковке, в которой каждый блистер содержит заранее определенное количество капсул, обычно разовую дозу (обычно 1-4 капсулы). Компоновка количества капсул в блистере, количество блистеров на одной полосе блистерной упаковки, и количество полос блистерной упаковки, которые продаются в группе, могут быть представлены любыми подходящими количествами или конфигурациями.
Диетические или фармацевтические композиции в соответствии с настоящим изобретением могут дополнительно содержать защитные гидроколлоиды (такие как камеди, белки, модифицированные крахмалы), связующие агенты, пленкообразующие агенты, инкапсулирующие агенты/материалы, материалы стенки/оболочки, матриксные соединения, покрытия, эмульгаторы, поверхностно-активные агенты, солюбилизирующие агенты (масла, жиры, воски, лецитины и т.п.), адсорбенты, носители, наполнители, сопутствующие соединения, диспергирующие агенты, смачивающие агенты, технологические средства (растворители), текучие агенты, маскирующие вкус агенты, утяжелители, желирующие агенты, гелеобразующие агенты, антиоксиданты и противомикробные средства.
В контексте настоящего изобретения фармацевтическая композиция продается по рецепту или без рецепта врача, в то время как диетическая добавка должна продаваться без рецепта врача, и должна рассматриваться в качестве пищи.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение также относится к диетической добавке или фармацевтической композиции, включающей аспергиллоглутамил-пептидазу из Aspergillus niger для применения в качестве лекарственного средства. Таким образом, настоящее изобретение относится к применению диетической добавки или фармацевтической композиции, включающей аспергиллоглутамил-пептидазу из Aspergillus niger, в качестве лекарственного средства для лечения заболеваний. Предпочтительно, лекарственное средство предназначено для лечения пациента, страдающего от врожденного иммунного ответа в тонкой кишке. Еще более предпочтительно, лекарственное средство предназначено для лечения целиакии, непереносимости глютена без целиакии, чувствительности к глютену, синдрома раздраженного кишечника или воспалительного заболевания кишечника. Наиболее предпочтительно, лекарственное средство является диетической добавкой для поддержания или повышения желудочно-кишечного комфорта у индивидуумов, чувствительных к глютену, или для задержки появления желудочно-кишечного дискомфорта у лиц с целиакией или не связанной с целиакией чувствительностью к глютену, а также для уменьшения воздействия ингибиторов альфа-амилазы/трипсина у здоровых людей, тем самым поддерживая пищеварение. Ингибиторы альфа-амилазы/трипсина, которые разрушаются под действием данной композиции, являются растительными аллергенами: СМ 2, СМ 3, СМ 16 и 0.19, более предпочтительно, СМ 3 и 0.19, на основе их быстрой деградации с помощью аспергиллоглутамил-пептидазы Aspergillus niger. Идентификатором аминокислотной последовательности СМ 3 является SwissProt Р01083, в то время как идентификатором аминокислотной последовательности 0.19 является SwissProt Р01085.
Лекарственное средство или диетическая добавка в соответствии с настоящим изобретением предназначена для использования индивидуумами, которым необходимо снизить риск развития диетической аллергии на растительный белок, и которые испытывают желудочно-кишечный дискомфорт, связанный с целиакией-спру, а также непереносимостью глютена, не связанной с целиакией.
В предпочтительном варианте осуществления лекарственное средство применяют перорально в пределах 1 часа до или после приема пищи.
«Желудочно-кишечный комфорт» - занимает центральное место в качестве жизни. Развитие комфорта желудочно-кишечного пищеварения включает в себя регуляцию времени прохождения через желудочно-кишечный тракт и облегчение боли, связанной с пищеварением, и связанных с ним заболеваний.
«Не связанная с целиакией чувствительность к глютену» - Не связанная с целиакией чувствительность к глютену была введена для описания тех людей, которые не переносят глютен и испытывают симптомы, похожие на целиакию, но все же не имеют антитела и повреждения кишечника, характерные для целиакии. Не связанная с целиакией чувствительность к глютену является еще одной формой непереносимости глютена, где иммунный ответ менее охарактеризован. Не связанная с целиакией чувствительность к глютену разделяет многие симптомы с целиакией. Однако, в соответствии с Sapone et al. (2012), у индивидуумов с не связанной с целиакией чувствительностью к глютену преобладают внекишечные или не желудочно-кишечные симптомы, такие как головная боль, «помутнение сознания», боли в суставах и онемение в ногах, руках или пальцах. Симптомы обычно появляются через несколько часов или дней после употребления глютена; реакция характерна для врожденных нарушений иммунитета, таких как не связанная с целиакией чувствительность к глютену.
«Здоровый индивидуум» - при использовании в контексте настоящего изобретения здоровым индивидуумом является тот, у кого не была диагностирована целиакия.
«Задержка появления» означает облегчение состояния, ослабление тяжести симптомов, раннее вмешательство, и увеличение продолжительность времени до проявления заболевания, и не предназначается для ограничения ситуацией, когда пациент не испытывает каких-либо симптомов желудочно-кишечного дискомфорта.
Для использования в соответствии с настоящим изобретением, лекарственное средство или диетическую добавку вводят перорально в пределах 1 часа до или после еды.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу разрушения растительных аллергенов в диетической композиции, включающему инкубацию диетической композиции, содержащей растительные аллергены, с асиергиллоглутамил-пептидазой из Aspergillus niger, в течение времени, достаточного для гидролиза растительных аллергенов. Специалист в данной области техники сможет оценить количество фермента, которое нужно добавить к пищевому продукту, и время, необходимое для разрушения пищевых аллергенов, в зависимости от состава пищи, подвергаемой обработке. Обнаружение пищевых аллергенов может быть эффективно достигнуто с использованием специфических антител или с помощью масс-спектрометрии, в соответствии со способами, известными в данной области техники. Для пивных матриксов аспергиллоглутамил-пептидазу из Aspergillus niger добавляют в дозе от 50 до 2000 HPU на гектолитр пива, предпочтительно от 100 до 1000 HPU/гл нива. Для матриксов выпекаемой продукции аспергиллоглутамил-пептидазу из Aspergillus niger можно добавить в дозе от 10 до 5000 HPU/ кг композиции. Подходящие матриксы для выпекаемой продукции включают выпекаемую композицию, но не ограничиваются ей.
Неожиданно, при использовании аспергиллоглутамил-пептидазы при обработке пива при низкой концентрации от 0,5 до 500 мг/гл, предпочтительно от 1 до 50 мг/гл, более предпочтительно от 10 до 20 мг/гл, отмечалась стабилизация пивной пены.
Растительные аллергены, деградируемые с помощью аспергиллоглутамил-пептидазы из Aspergillus niger, предпочтительно являются аллергенами, содержащимися в пшенице, ячмене, ржи, овсе и их перекрестно связанных разновидностях; такими как ингибиторы альфа-амилазы/трипсина, более предпочтительно, растительными аллергенами СМ 2, СМ 3, СМ 16, и 0.19, и еще более предпочтительно, СМ 3 и 0.19, на основе их быстрой деградации с помощью аспергиллоглутамил-пептидазы из Aspergillus niger. Идентификатором аминокислотной последовательности СМ 3 является SwissProt Р01083, а идентификатором аминокислотной последовательности 0.19 является SwissProt Р01085.
В настоящем варианте осуществления пищевая композиция представляет собой диетической продукт, содержащий пшеницу, ячмень, рожь, овес и/или их перекрестно связанные разновидности. Предпочтительными пищевыми композициями являются пиво на различных стадиях процесса пивоварения, выпекаемая композиция, тесто, кислое тесто или выпекаемый продукт, такой как хлеб.
В данном способе аспергиллоглутамил-пептидаза из Aspergillus niger предпочтительно может быть дополнена пролил-эндопептидазой, предпочтительно, пролил-эндопептидазой из Aspergillus niger, для того, чтобы также разрушить эпитопы глютена, и, факультативно, также с ферментом аспергиллопепсином I.
Предпочтительное количество фермента, которое необходимо добавить в диетическую композицию в указанном выше способе, зависит от пищевого матрикса и установленного количества глютена и ингибитора трипсина/альфа-амилазы.
В еще одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к продукту питания, полученному вышеуказанным способом разрушения растительных аллергенов в пищевом продукте, включающим инкубацию диетической композиции, содержащей растительные аллергены, с аспергиллоглутамил-пептидазой из Aspergillus niger, в течение времени, достаточного для гидролиза растительных аллергенов, где указанная композиция содержит деградированные ингибиторы альфа-амилазы/трипсина. Предпочтительным продуктом питания является выпекаемый продукт, такой как хлеб, тесто, пиво.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение также относится к выпекаемой композиции и ферментной композиции или к тесту, включающим аспергиллоглутамил-пептидазу из Aspergillus niger. Оно также относится к способу приготовления теста, включающему стадию добавления аспергиллоглутамил-пептидазы из Aspergillus niger по меньшей мере в один ингредиент теста.
Выпекаемые продукты часто делают с использованием муки, содержащей глютен. Поэтому выпекаемые продукты представляют собой диетической продукт, который может быть не пригоден для людей глютеновой чувствительностью. Выпекаемая композиция в соответствии с настоящим изобретением включает пшеницу, ячмень, рожь, овес и/или их перекрестно связанные разновидности, предпочтительно в виде муки и аспергиллоглутамил-пептидазы из Aspergillus niger. Выпекаемая композиция может содержать от 10 до 5000 HPU аспергиллоглутамил-пептидазы из Aspergillus niger на кг муки.
В одном аспекте выпекаемая композиция включает аспергиллоглутамил-пептидазу из Aspergillus niger в количестве от 20 до 3000 HPU/кг муки, в другом аспекте в количестве от 30 до 1000 HPU/кг муки, в количестве от 40 до 500 HPU/кг муки, в количестве от 50 до 250 HPU/кг муки. В одном аспекте выпекаемая композиция включает от 1 ч./млн. до 2000 ч./млн. аспергиллоглутамил-пептидазы из Aspergillus niger, обладающей активностью в диапазоне примерно от 1000 до 50000 HPU/г.
В одном аспекте выпекаемая композиция включает 10-200 ч./млн. аспергиллоглутамил-пептидазы из Aspergillus niger, обладающей активностью в диапазоне примерно от 1000 до 50000 HPU/г.
Выпекаемая композиция в соответствии с изобретением может содержать по меньшей мере один дополнительный фермент, как описано в настоящей заявке.
«Дополнительный фермент» - термин «дополнительный фермент» здесь и далее в настоящей заявке включает амилазу, такую как альфа-амилаза, бета-амилаза, мальтогенная амилаза; циклодекситрин-глюканотрансферазу; протеазу, пептидазу, такую как пролил-эндопептидаза, предпочтительно, пролил-эндопептидаза из Aspergillus niger, для того, чтобы также деградировать эпитопы глютена, и факультативно, также с ферментом аспергиллопепсином I; трансглутаминазу; липазу, такую как триацилглицерин-липаза, галактолипаза, фосфолипаза; целлюлазу; гемицеллюлазу, в частности пентозаназу, такую как ксиланаза; белковую дисульфид-изомеразу, например, белковую дисульфид-изомеразу, как описано в WO 95/00636; гликозилтраисферазу, пероксидазу; лакказу; или оксидазу, такую как гексозооксидаза, глюкозооксидаза, альдозооксидаза, пиранозооксидаза, липоксигеназа или оксидаза L-аминокислот; или G4-образующую амилазу; но не ограничивается ими.
В одном варианте осуществления ферментной композиции согласно изобретению дополнительный фермент представляет собой липолитический фермент, предпочтительно фосфолипазу, галактолипазу или фермент, обладающий как фосфолипазной, так и галактолипазной активностью.
В одном варианте осуществления ферментной композиции согласно изобретению дополнительным ферментом является Panamore® от DSM, как описано в WO2009/106575. Подходящий липолитический фермент может включать Lipopan®F, Lipopan®50 и Lipopan® от Novozymes.
В одном из вариантов осуществления ферментной композиции согласно изобретению дополнительный фермент представляет собой фермент, как описано в WO 9826057, или как описано в US RE38,507, или как описано в WO 9943794, в частности, в ЕР 1058724 В1.
В одном аспекте ферментной композиции согласно изобретению дополнительный фермент представляет собой амилазу, как описано в US 8426182.
Дополнительный фермент может включать G4-образующую амилазу. G4-образующая амилаза представляет собой фермент, который, среди прочего, способен катализировать расщепление крахмала. В частности, он способен к расщеплению α-D-(1→4) О-гликозидных связей в крахмале. Он может упоминаться как глюкан-1,4-альфа-мальтотетрагидролаза (ЕС 3.2.1.60). Он может также обозначаться как мальтотетрагидролаза. Подходящие G4-образующие амилазы могут быть G4-образующими амилазами, описанными в любом из WO 9950399, WO 2005007818, WO 2004111217, WO 2005003339, WO 2005007818, WO 2005007867, WO2006003461, WO 2007007053, WO 2007148224, WO 2009083592, WO 2009088465.
Примером пищевого продукта является выпекаемый продукт.
«Выпекаемый продукт» - термин относится к хлебопекарным пищевым продуктам/хлебобулочным изделиям, приготовленным из теста. Примеры выпекаемых продуктов типа белого, черного хлеба или хлеба из цельной муки грубого помола, которые могут быть предпочтительно произведены в соответствии с настоящим изобретением, включают хлеб (в частности, белый, из цельной муки или ржаной хлеб), как правило, в виде буханок или рулетов, хлеб типа французского багета, пирожные, круассаны, булочки, панеттоне, макароны, лапшу (вареную или стир-фрай), питу и другие виды плоского хлеба, тортилыо, тако, пироги, блины; выпекаемье, в частности, бисквиты; пончики, в том числе дрожжевые пончики; баранки, коржи, вареный хлеб, хрустящий хлеб, шоколадные пирожные, слойки, закусочные продукты (например, претцели, чипсы тортилья, искусственные закусочные продукты, искусственные картофельные чипсы). Термин «выпекаемый продукт» включает хлеб, содержащий от 2 до 30 масс. % сахара; хлеб, содержащий фрукты; завтраки из зерновых, зерновые батончики; пирожные, не содержащие яиц; мягкие рулеты и хлеб, не содержащий глютена. Хлеб, не содержащий глютена, здесь и далее в настоящей заявке означает хлеб, который содержит не более 20 ч./млн. глютена. Для безглютеновой диеты считаются приемлемыми некоторые злаки и источники крахмала. Часто используемыми источниками являются картофель, рис и тапиока (полученная из маниоки). Выпекаемый продукт включает формовой хлеб, буханки, бублики; булочки, такие как булочки для гамбургера или приготовленные на пару булочки; чапати, сухари, сушеные ломтики паровых булочек, панировочные сухари, мацу, фокаччо, тосты Мельба, галеты, крутоны, мягкие претцели, мягкий и твердый хлеб, хлебные палочки, дрожжевой хлеб и хлеб на основе химических разрыхлителей; продукты из слоеного теста, такие как датская сдоба, круассаны или продукты из пресного слоеного теста, маффины, пирожные из слоеного теста; бублики, кондитерские оболочки, крекеры, вафли, пиццу, тортилью, макаронные продукты, блины, вафли, частично запеченные продукты и охлажденные и замороженные продукты из теста; но не ограничивается ими. Пирожные включают песочное пирожное, такое как, например, фунтовый кекс и масляный кекс, и в том числе кексы из взбитого теста, например, такие как безе, бисквит, бисквитное пирожное, рулет, генуэзский бисквит и шифоновый бисквит, по не ограничиваются ими.
Примером частично выпеченного продукта является, без ограничения, частично выпекаемый хлеб, который доводят до готовности в момент продажи или потребления с коротким вторым процессом выпечки. Хлеб может быть белым или черным формовым хлебом; такой хлеб может, например, быть изготовлен с использованием так называемого Американского способа для бисквита и теста или Американского прямого способа.
«Тесто» - термин «тесто» означает в настоящей заявке смесь муки и других ингредиентов, в частности, ингредиентов теста. В одном из аспектов тесто является достаточно плотным для замешивания и раскатки. Тесто может быть свежим, замороженным, приготовленным или частично запеченным. Получение замороженного теста описывается Kulp and Lorenz в «Frozen and Refrigerated Doughs and Batters» («Замороженное и охлажденное тесто»). Термин «тесто» в настоящем изобретении включает жидкое тесто. Жидкое тесто представляет собой полужидкую смесь, достаточно жидкую, чтобы стекать каплями или выливаться из ложки, из одного или нескольких видов муки в сочетании с жидкостями, такими как вода, молоко или яйца, используемую для приготовления различных пищевых продуктов, включая пирожные.
«Ингредиент теста» - Ингредиент теста включает в себя любой компонент, выбранный из муки, яйца, воды, соли, сахара, ароматизаторов, жира (в том числе сливочного масла, маргарина, растительного масла и шортенинга), пекарских дрожжей, химического разрыхлителя, молока, подкислителей (включая аскорбиновую кислоту, бромат и азодикарбонамид (АДА)), восстанавливающих агентов (включая L-цистеин), эмульгаторов (включая моно/диглицериды, моноглицериды, такие как глицерин моностеарат (ГМС), натрия стеароиллактилат (НСЛ), кальция стеароил лактилат (КСЛ), сложные эфиры полиглицерина и жирных кислот (ПГЭ) и сложные эфиры диацетилвинной кислоты и моно- и диглицеридов (DATEM)), камедей (включая гуаровую и ксантановая камедь), кислот (включая лимонную кислоту, пропионовую кислоту), крахмала, модифицированного крахмала, глютена, увлажнителей (включая глицерин) и консервантов.
В предпочтительном варианте осуществления настоящее изобретение относится к ферментной композиции, содержащей аспергиллоглутамил-пептидазу из Aspergillus niger и по меньшей мере один дополнительный фермент.Ферментная композиция может содержать от 10 до 5000 HPU аспергиллоглутамил-пептидазы из Aspergillus niger на кг композиции.
В одном аспекте ферментная композиция содержит от 1 до 2000 ч./млн. аспергиллоглутамил-пептидазы из Aspergillus niger, обладающей активностью в диапазоне примерно от 1000 до 50000 HPU/г. В одном аспекте ферментная композиция содержит от 10 до 200 ч./млн. аспергиллоглутамил-пептидазы из Aspergillus niger, обладающей активностью в диапазоне примерно от 1000 до 50000 HPU/г
В одном варианте осуществления ферментная композиция в соответствии с изобретением обеспечивается в сухом виде, что позволяет легко добавлять ее к тесту, или по меньшей мере к одному ингредиенту теста, но также возможны и жидкие формы.
Способ в соответствии с настоящим изобретением для приготовления теста включает стадию добавления аспергиллоглутамил-пептидазы из Aspergillus niger по меньшей мере к одному ингредиенту теста. Аспергиллоглутамил-пептидаза из Aspergillus niger может быть добавлена на любой стадии приготовления теста, и может быть добавлена в одну, две или более стадий.
Если имеется один или несколько дополнительных ферментов, то эти ферменты могут быть добавлены отдельно или вместе с аспергиллоглутамил-иептидазой из Aspergillus niger в соответствии с изобретением, например, в качестве ферментной композиции согласно настоящему изобретению,
Кроме того, изобретение относится к способу получения выпекаемого продукта, причем этот способ включает выпекание теста в соответствии с изобретением. В одном из вариантов осуществления способа производства выпеченного продукта выпекаемый продукт является хлебом или пирожным.
Специалисту в данной области техники известно, как приготовить тесто или выпекаемый продукт, начиная с ингредиентов теста. Кроме того, изобретение относится к выпеченному продукту, полученному способом производства выпекаемого продукта в соответствии с настоящим изобретением.
Кроме того, изобретение относится к применению аспергиллоглутамил-пептидазы из Aspergillus niger в производстве выпекаемого продукта. Краткое описание фигур
Фигура 1: 4-12% ДСН-ПАГЭ (от 4 до 12% Бис-Трис гель) анализ различных образцов с инкубацией ингибиторов альфа-амилазы пшеницы с различными протеазами и пепсином при имитации условий желудка. Включены два контрольных образца с обработкой пепсином без дополнительного фермента. Стрелка указывает на положение трех основных белковых продуктов, присутствующих в препарате альфа-амилазы.
- Маркеры молекулярной массы: дорожки 1, 2 и 15
- Обработка пролин-специфической эндопротеазой из A. niger при Т=0, дорожка 3; Т=90 минут, дорожка 4.
- Обработка аспергиллоглутамил-пептидазой из A. niger при Т=0, дорожка 5; Т=90 минут, дорожка 6.
- Пепсин при Т=0, дорожка 7; Т=90 мин, дорожка 8
- Папайи при Т=0, дорожка 9; Т=90 минут, дорожка 10
- Multifect PR® 15L при Т=0, дорожка 11; Т=90 минут, дорожка 12
- Аспергиллопепсин I при Т=0, дорожка 13; Т=90 минут, дорожка 14
- Пепсин при Т=0, дорожка 16; Т=90 минут, дорожка 17.
Фигура 2: Препаративный ДСН-ПАГЭ ингибиторов альфа-амилазы пшеницы, для определения характера наиболее распространенных белков, присутствующих в полосах B1-G1.
Фигура 3: 4-12% ДСН-ПАГЭ (от 4 до 12% Бис-Трис гель) анализ различных образцов, при инкубации стандартизированного количества глютена пшеницы с увеличением концентрации аспергиллоглутамил-пептидазы из Aspergillus niger (AGP) при имитации условий желудка. Стрелка указывает на положение ингибиторов альфа-амилазы пшеницы 0.19, СМ2 и СМ16 (см. Пример 1).
- Маркеры молекулярной массы (Mark 12™ Unstaned Standard, Life Technologies): дорожка 13.
- Очищенные ингибиторы альфа-амилазы/протеазы: дорожка 14.
- Без добавления аспергиллоглутамил-пептидазы из A. niger: дорожка 1=0, дорожка 2=60 минут.
- Добавление аспергиллоглутамил-пептидазы из A. niger 0,09 мг/мл: дорожка 3=0, дорожка 4=60 минут
- Добавление аспергиллоглутамил-пептидазы из A. niger 0,19 мг/мл: дорожка 5=0, дорожка 6=60 минут.
- Добавление аспергиллоглутамил-пептидазы из A. niger 0,28 мг/мл: дорожка 7=0, дорожка 8=60 минут.
- Добавление аспергиллоглутамил-пептидазы из A. niger 0,37 мг/мл: дорожка 9=0, дорожка, 10=60 минут.
- Добавление аспергиллоглутамил-пептидазы из A. niger 0,47 мг/мл: дорожка 11=0, дорожка 12=60 минут.
Фигура 4: 4-12% ДСН-ПАГЭ (от 4 до 12% Бис-Трис гель) анализ различных образцов при инкубации полученных из пшеницы пуротионинов с различными протеазами с пепсином в условиях имитации желудка. Стрелка указывает положение очищенных пуротионинов.
- Маркеры молекулярной массы: дорожки 1, 2, 9 и 10
- Аспергиллоглутамил-пептидаза из A. niger при Т=0, дорожка 3; Т=90 минут, дорожка 4.
- Пролин-специфичная эндопротеаза из A. niger при Т=0, дорожка 5; Т=90 минут, дорожка 6.
- Multifect® PR 15L (аспергиллопепсин I-подобная протеаза из Trichoderma reesei) при Т=0, дорожка 7; и Т=90 минут, дорожка 8.
Фигура 5: 4-12% ДСН-ПАГЭ (от 4 до 12% Бис-Трис гель) анализ различных образцов при инкубации пуротионинов, полученных из пшеницы, с различными протеазами и пепсином в условиях, имитирующих желудок. Стрелка указывает положение очищенных пуротионинов.
- Маркеры молекулярной массы: дорожка 1.
- Очищенные пуротионины пшеницы: дорожка 2.
- Multifect® PR 15 L (аспергиллопепсин I-подобная протеаза из Trichoderma reesei, http//biosciences.dupont.com) при: Т=0, дорожка 3; Т=90 минут, дорожка 4.
- Смесь 90 масс. % (фермента к присутствующему белку) Multifect® PR 15L и 10% аспергиллоглутамил-пептидазы из A. niger при Т=0, дорожка 5; Т=90 минут, дорожка 6.
- Proctase (не-ГМО смесь протеаз, секретируемых A.niger, включающая примерно 85% аспергиллоиепсина I) при Т=0, дорожка 7; Т=90 минут, дорожка 8.
Изобретение далее иллюстрируется следующими примерами.
Примеры
Пример 1: Аспергиллоглутамил-пептидаза из Aspergillus niger эффективно расщепляет ингибиторы альфа амилаз/трипсина из пшеницы при имитации условий желудка, в то время как другие кислые эндопротеазы не являются эффективными.
Материалы и методы
Получение аспергиллопепсина I из Aspergillus niger
Ген аспергиллопепсина I из Aspergillus niger (рерА; Anl4g04710) был подвергнут гиперэкспрессии в A. niger, с использованием методов, описанных в публикации WO 98/46772. В WO 98/46772 описано, как выбрать трансформантов на чашках с агаром, содержащих ацетамид, а также как выбрать целевые мультикопийные интеграты. Трансформанты A.niger, содержащие множество копий кассеты экспрессии, были отобраны для дальнейшего производства материала образца. Трансформированный штамм A.niger подвергали ферментации в модифицированной среде КСМ-ферментации, рН 6,2 (40 г/л мальтозы, 30 г/л Bacto-soytone, 70 г/л натрия цитрата трехзамещешюго дигидрата, 15 г/л (NH4)2SO4, 1 г/л NaH2PO4*2H2O, 1 г/л MgSO4*7H2O, 1 г/л L-Аргипипа, 0,25 мл/л пеногасителя Clerol). Полученный культуральный бульон фильтровали, подвергали стерилизующей фильтрации, и затем концентрировали с помощью ультрафильтрации. Хроматографию проводили путем внесения фермента на колонку с Q-сефарозой ХК 26/10 в 50 ммоль/л натрий-ацетатном буфере, рН 5,6, с последующим элюированием в солевом градиенте. Присутствие белка аспергиллопепсина I в различных фракциях определяли количественно по интенсивности цветных полос белка после 4-12% ДСН-ПАГЭ (NuPAGE Bis-Tris гель, Invitrogen).
Ферментативный анализ
Инкубацию проводили в 50 ммоль/л цитрата натрия при рН 4,0 в течение 90 минут при 37°С. Во всех соответствующих инкубациях пепсин присутствовал в концентрации белка фермента 0,2 мг/мл. Пролин-специфическую эндопротеиназу тестировали в концентрации 0,5 мг белка фермента на мл, другие кислотные эндопротеиназы в концентрации 0,05 мг белка фермента на мл. Ингибитор амилазы был добавлен последним и присутствовал в концентрации 2 мг/мл.
При Т=0, 100 мкл реакционной смеси переносили в 400 мкл 25% ТХУК. После 90 минут инкубации при температуре 37°С, еще 100 мкл переносили в 400 мкл свежего раствора ТХУК. Спустя 2 ч при температуре 4°С, образцы центрифугировали в течение 10 мин при 14'000 оборотов в минуту. После центрифугирования добавляли 65 мкл фосфатного буфера, рН 7, 25 мкл лития додецилсульфата (ЛДС) и 10 мкл образца редуцирующего агента. Образцы хранили при 4°С в течение ночи и затем готовили для ДСН-ПАГЭ, в соответствии с протоколом Invitrogen (Invitrogen, www.lifetechnologies.com).
Определение активности аспергиллоглутамил-пептидазы из Aspergillus niser (HPU)
20,0 г гемоглобина из бычьей крови (Sigma, продукт Н2625) суспендировали примерно в 700 мл воды и перемешивали в течение 10 мин при комнатной температуре. После добавления 3,73 г хлорида калия (KCl), рН доводили до 1,75 с 0,5 моль/л соляной кислоты. Объем суспензии гемоглобина доводили до 1 л водой. Значение рН проверяли снова и доводили до рН 1,75.
Ферментные растворы готовили путем растворения очищенной аспергиллоглутамил-пептидазы, полученной, как описано выше, в буфере KСl/НСl, содержащем 3,73 г/л КСl, с рН, доведенным до 1,75 с 2,0 моль/л НСl. Чтобы проверить активность аспергиллоглутамил-пептидазы, 5 мл раствора гемоглобина нагревали при 40°С, а затем 1 мл раствора фермента с активностью от 5 до 25 Гистидиновых Протеазных Единиц (HPU/мл) добавляли, чтобы начать реакцию. Через 30 минут реакцию останавливали добавлением 5 мл раствора трихлоруксусной кислоты (140 г/л) для осаждения более крупных пептидных фрагментов. Контрольное измерение проводили путем добавления 1,0 мл образца фермента к смеси 5 мл раствора гемоглобина и 5 мл раствора трихлоруксусной кислоты. Пробирки инкубировали при 40°С в течение 30 минут, чтобы завершить осаждение. После центрифугирования оптическую плотность прозрачной надосадочной жидкости, содержащей небольшие пептиды, измеряли при 275 нм. Результат сравнивали с результатом, полученным для раствора L-тирозина 1 мкг/мл.
Одна единица HPU является количеством фермента, которое гидролизует такое количество гемоглобина в минуту, которое дает раствор с оптической плотностью при 275 нм, равной оптической плотности раствора, содержащего 1 мкг L-тирозина на мл в 0,1 М растворе НСl. Условия испытания: рН 1,75, температура 40°С, концентрация гемоглобина во время инкубации 16,7 г/л.
Активность (HPU/мл)=(ОПобр. - ОПконтр./S)×11/30; где
ОПобр.: оптическая плотность образца фильтрата (275 нм)
ОПконтр.: оптическая плотность образца чистого фильтрата (275 нм)
S: ОП стандартного раствора L-тирозина 1,1 мкг/мл (мл/мкг)
30: Время инкубации (мин)
11: общий объем реакционной смеси (мл).
ЖХ-МС/МС анализ
Расщепление in-vitro
Образец растворяли до концентрации 1 мг/мл в воде MilliQ. Раствор разбавляли в 10 раз в 100 мМ NH4HCO3 (рН 7,8). Образец восстанавливали путем добавления ДТТ, 5 мМ, при 30-минутной инкубации при комнатной температуре, и алкилировали добавлением иодацетамида (ИАА), 5,5 мМ, при 30-минутной инкубации при комнатной температуре в темноте. Расщепление с помощью трипсина проводили при 37°С в течение ночи.
Расщепление в геле
Гелевые полосы вырезали из геля, используя резак ExQuest (BioRad, Hercules, Калифорния, США) и переносили на планшеты для связывания белка (Eppendorf, Гамбург, Германия). Кусочки геля промывали путем добавления 75 мкл 50 мМ NH4HCO3 для набухания, и 75 мкл ацетонитрила для сушки, всего 3 промывания. Промытые кусочки геля расщепляли трипсином, путем инкубации при 37°С в течение ночи. Образцы обрабатывали ультразвуком в течение 1 минуты, и надосадочную жидкость собирали в во флакон для инъекций.
LC-MS/MS анализ
Образцы подкисляли 1% муравьиной кислотой и анализировали на Accela-LTQ-Velos (Thermo Scientific, Сан-Диего, Калифорния, США). Хроматографическое разделение осуществляли на колонке С-18 Eclipse XDB Zorbax (Agilent, Санта-Клара, Калифорния, США) размером 2,1×100 мм с размером частиц 1,8 мкм, с диаметром пор 80 Ангстрем, с применением градиента с (А) водой класса ЖХ-МС, содержащей 0,1% муравьиной кислоты; (Б) ацетонитрила класса ЖХ-МС, содержащего 0,1% раствор муравьиной кислоты (Biosolve BV, Нидерланды) в качестве подвижной фазы. Градиент поддерживали от 5 до 40% В в течение 83 минут. Скорость потока поддерживали на уровне 0,4 мл/мин, используя вводимый объем 25 мкл, и устанавливая температуру колонки 50°С. Сбор данных MS осуществляли с использованием 10 верхних зависимых от данных результатов с диапазоном массы 400-2000 m/z, с помощью динамического исключения и включения заряда только в положениях 2 и 3. МС/МС эксперименты проводили с шириной изоляции, установленной на 3,0, а нормализованную энергию коллизии устанавливали на 35. Поиск в базе данных осуществляли с использованием Sorcerer 2 (Sorcerer™-SEQUEST®) поисковой системы и Trans Proteome Pipeline (ТРР), с использованием трипсина в качестве предпочтительного фермента. Были рассмотрены только белки, идентифицированные со степенью достоверности >90%. Проводили поиск в базе данных SwissProt.
Результаты
В настоящем примере мы показали (см. Фигуру 1), что в смоделированных условиях желудка, только аспергиллоглутамил-пептидаза из Aspergillus niger среди ряда кислых эндопротеиназ способна эффективно разлагать очищенный препарат, включающий различные ингибиторы альфа-амилазы пшеницы (ингибитор альфа-амилазы из семян пшеницы, тип 1, Sigma). В эксперименте сравнивали эффективность следующих ферментов в присутствии пепсина (контроль):
- Пепсин (из слизистой оболочки желудка свиньи, Sigma),
- Пролин-специфическая эндопротеиназа из Aspergillus niger (MaxiPro PSP, DSM Food Specialities, Делфт, Нидерланды)
- Папаин (Collupuline, DSM Food Specialities, Делфт, Нидерланды),
- Аспергиллоглутамил-пептидаза из Aspergillus niger, также называемая аспергиллопепсином II (MaxiPro HSP, DSM Food Specialities, Делфт, Нидерланды),
- Аспергиллопепсин I (см. Материалы и методы),
- Multifect PR 15 L (аспергиллопепсин I-подобная протеаза из Trichoderma reesei; http//biosciences.dupont.com).
Результаты (см. Фигуру 1) показывают, что очищенный препарат ингибитора альфа-амилазы пшеничного глютена включает три основные белковые полосы массой приблизительно 12 кДа (см. стрелку). Эти данные также показывают, что в имитированных условиях желудка и в присутствии пепсина и равных количеств различных протеиназ, аспергиллоглутамил-пептидаза из Aspergillus niger является наиболее эффективной в расщеплении этих трех основных полос, присутствующих в очищенном препарате ингибиторов альфа-амилазы.
Для подтверждения природы различных белков, присутствующих в каждой из этих полос, образцы полос геля вырезали, экстрагировали и идентифицировали присутствующие белки с использованием ЖХ-МС/МС анализа, как описано в Материалах и методах выше.
В этом случае раствора ингибитора альфа-амилазы Sigma 10 мг/мл разбавляли в 10 раз водой. Затем 65 мкл этого раствора смешивали с 25 мкл образца LiДС и 10 мкл образца восстанавливающего агента, нагревали в течение 10 мин при 70°С, после чего белки разделяли с помощью ДСН-ПАГЭ в соответствии с протоколом Invitrogen. Затем гель фиксировали в течение 1 часа со смесью 50% метанола/7%-ной уксусной кислоты, дважды промывали деминерализованной водой и окрашивали с Sypro Rubin в течение ночи. Образцы геля были получены из трех полос, предположительно, ингибитора альфа-амилазы, как показано на Фигуре 2. В соответствии с данным ЖХ-МС/МС, полученными для экстрагированных белков, белки, присутствующие в наибольшем количестве в виде полос С1 и В1, были ингибиторами альфа-амилазы пшеницы с SwissProt номерами доступа SwissProt P17314 (CM 3) и Р16159 (CM 16), в полосах E1 и D1 - ингибиторами альфа-амилазы пшеницы Р01085 (0.19), Р16851 (СМ 2) и Р16159 (СМ 16), а в полосах G1 и F1 - Р01083 (СМ 3).
Эти данные показывают, что аспергиллоглутамил-пептидаза из Aspergillus Niger на удивление наиболее эффективна в расщеплении ингибиторов альфа-амилазы пшеницы в условиях желудка и, прежде всего, ингибиторов альфа амилазы пшеницы СМ 2, 3 СМ, СМ 16, и 0.19.
Пример 2: Аспергиллоглутамил-пептидаза из Aspergillus niger расщепляет ингибиторы альфа-амилазы/трипсина в пиве и стабилизирует пену.
В соответствии с аминокислотными последовательностями, ячмень содержит ингибиторы альфа-амилазы, которые очень похожи на ингибиторы альфа-амилазы, присутствующие в пшенице. Таким образом, пиво представляет собой диетической продукт, который может иметь значение для людей, чувствительных к глютену. В пиве, как и в других пищевых продуктах, ингибиторы альфа-амилазы присутствуют либо в качестве интактной молекулы, либо в виде пептидов, достаточно больших, чтобы вызвать иммунный ответ. Например, при ЖХ-МС/МС анализе 16 различных сортов пива мы идентифицировали около 3300 различных пептидов длиной более 9 аминокислот с последовательностями, приписываемым ингибиторам альфа-амилазы. Этот результат иллюстрирует потенциальную значимость ингибиторов альфа-амилазы для людей чувствительных к глютену, и тем самым актуальность аспергиллоглутамил-пептидазы для производства пива.
Использование протеаз во время фазы ферментации пива или за ее пределами довольно распространено для предотвращения так называемого холодного помутнения. Исторически кислые протеазы с широкой специфичностью, такие как Proctase или папаин, были использованы для этой цели, но в настоящее время пролин-специфичпая эндопротеаза, называемая Brewers Clarex, представляет предпочтительный вариант. Основная причина перехода от ферментов с такой широкой специфичностью к высоко специфичному продукту Brewers Clarex является то, что применение ферментов широкой специфичности, как правило, приводит к получению пива с плохой пенообразующей способностью. Таким образом, любое негативное воздействие на пивную пену является необходимым условием применения протеолитической обработки при производстве пива. Для того, чтобы проверить влияние аспергиллоглутамил-пептидазы из Aspergillus niger на формирование пивной пены, был проведен следующий эксперимент.
Бутылочное пиво большого международного бренда было получено из местного супермаркета. Бутылки осторожно открывали, добавляли соответствующий фермент(ы) и сразу же снова закрывали бутылки нова с использованием новой кронен-пробки. После тщательного перемешивания, бутылки хранили при 20°С. Данные, представленные в вышеприведенном примере 1, показывают, что концентрация аспергиллоглутамил-пептидазы, необходимой для разрушения ингибиторов альфа-амилазы, по меньшей мере в десять раз ниже, чем концентрация пролин-специфичной эндопротеазы. Типичный промышленный уровень использования коммерческого пролин-специфичного продукта Brewers Clarex составляет 3 г/гл пива, что соответствует 150 мг чистого белка фермента на гл пива. В настоящем эксперименте пролин-специфичную эндопротеазу также добавляли в этой концентрации, но две других протеазы были добавлены в концентрациях только 15 мг чистого белка фермента на гл пива. После инкубации в течение одной недели, стабильность пены всех сортов пива измеряли в соответствии с Analytica-EBC методом 9,42 с использованием оборудования Haffmans (устройство для отбора образцов Inpack 2000 в сочетании с тестером стабильности пены NIBEM ТРН, Haffmans BV, Венло, Нидерланды). Средние значения пены от двух образцов на инкубацию приведены в Таблице 1.
Как и следовало ожидать, стабильность пены пива, инкубированного с пролин-специфичной эндопротеазой, добавленной в концентрациях, пригодных для предотвращения помутнения (т.е. 150 мг/гл), сопоставима с данными, полученными для эталонного продукта (коммерческого пива без добавления протеазы). Неожиданное наблюдение состоит в том, что при добавлении низкой концентрации аспергиллоглутамил-пептидазы или аспергиллопепсин-1-подобного фермента стабильность пены пива значительно увеличивалась, даже если ее применяли в сочетании с промышленно используемыми уровнями пролин-специфичной эндопротеазы. Этот результат наводит на мысль, что добавление аспергиллоглутамил-пептидазы, например, с целью уничтожения крупных пептидов ингибиторов альфа-амилазы, обеспечивает стабилизацию пивной пены в качестве желательного побочного эффекта.
Пример 3: Аспергиллоглутамил-пептидаза из Aspergillus niger расщепляет ингибиторы альфа-амилазы/трипсина дозозависимым образом.
В настоящем примере мы определяли количество белка фермента аспергиллоглутамил-пептидазы из Aspergillus niger, необходимого для гидролиза в имитированных условиях желудка ингибиторов альфа-амилазы/протеазы, присутствующих в 1 г пшеничного глютена. Для этого глютен пшеницы (Sigma) растворяли в 50 ммоль/л лимонной кислоты, рН 4,0 в концентрации 9,35 мг/мл. К раствору при тщательном перемешивании добавляли фермент пепсин для достижения конечной концентрации 0,2 мг/мл, а затем отбирали шесть образцов по 1 мл. К этим шести образцам добавляли возрастающие количества чистого фермента аспергиллоглутамил-пептидазы из Aspergillus niger. Для образца 1: AGP не добавляли, для образца 2: 0,09 мг, для образца 3: 0,19 мг, для образца 4: 0,28 мг, для образца 5: 0,37 мг, а для последнего образца: 0,47 мг. Затем различные образцы инкубировали в течение 60 минут при температуре 37°С, и из каждого образца отбирали аликвоты для анализа ДСН-ПАГЭ при Т=0 мин и Т=60 мин. Анализ ДСН-ПАГЭ проводили в соответствии с протоколом Invitrogen.
Результаты (см. Фигуру 3) показывают, что при добавлении 0,28 мг чистой аспергиллоглутамил-пептидазы из Aspergillus niger ингибиторы альфа-амилазы/протеазы, присутствующие в 9,35 мг глютена пшеницы, могут быть гидролизованы в течение одного часа. Это означает, что 30 мг чистой аспергиллоглутамил-пептидазы из Aspergillus niger (что соответствует 15000 HPU) может справиться с 1 грамм пшеничного глютена при таких имитированных условиях желудка. Таким образом, после частичной фрагментации ингибиторов альфа-амилазы/протеазы посредством перорального препарата аспергиллоглутамил-пептидазы из Aspergillus niger, вновь сформированные пептидные ингибиторы будут дополнительно разрушаться до неиммуногенных олигопептидов пепсином при прохождении через желудок, и после поступления в двенадцатиперстную кишку - панкреатическими протеазами, такими как трипсин и химотрипсин.
Пример 4: Гомолог аспергиллопепсина I из Т. reesei может расщеплять пуритионины, полученные из пшеницы, в условиях желудка.
Материалы и методы
Пуритионины выделяли, как описано Ohtani et al. (J. Biochem. 82, 753-767 (1977)), с некоторыми изменениями. Надосадочную жидкость из пшеницы подвергали хроматографии на SP-Сефарозе-6 FF (Amersham), уравновешенной 20 мМ натрия фосфата, рН 7,2, и элюировали с линейным градиентом от 0 до 1,0 моль/л NaCl в том же буфере. Наличие чистого пуритионина с молекулярной массой приблизительно 5 кДа в различных фракциях определяли посредством ДСН-ПАГЭ. Фракции, показывающие одну полосу белка, собирали, концентрировали с помощью мембраны Amicon 3 кДа, а затем лиофилизировали. Идентичность и чистоту выделенного белка подтверждали посредством ЖХ-МС/МС анализа, по существу, как описано в Примере 1, с использованием базы данных UniProt/SwissProt.
Ферментативный анализ
Инкубацию очищенных пуритионинов с различными протеазами проводили в 50 мМ цитрате натрия при pH 4,0 в течение 90 минут при 37°С, аналогично условиям, указанным в Примере 1 настоящей заявки. Во всех соответствующих инкубациях пепсин присутствовал в концентрации белка 0,2 мг/мл. Аспергиллоглутамил-пептидазу, пролин-специфичную эндопротеиназу и Multifect PR 15L тестировали в концентрации 0,11 мг ферментного белка/мл. Пуротионин пшеницы был добавлен последним, и присутствовал в концентрации 0,44 мг/мл.
Результаты
В эксперименте сравнивали эффективность следующих ферментов в присутствии пепсина:
Аспергиллоглутамил-пептидаза из Aspergillus niger, также называемая аспергиллопепсином II (MaxiPro HSP, DSM Food Specialities, Делфт, Нидерланды),
- Пролин-специфичная эндопротеиназа из Aspergillus niger (MaxiPro PSP, DSM Food Specialities, Делфт, Нидерланды),
- Multifect PR 15L (аспергиллопепсин I-подобная протеаза из Trichoderma reesei; http//biosciences.dupont.com).
Полученные результаты (см. Фигуру 4) показывают, что в имитированных условиях желудка и при равных количествах различных протеиназ, аспергиллопепсин I-подобные протеазы из Trichoderma reesei эффективно деградирует пуритионин, полученный из пшеницы.
Пример 5: Расщепление полученных из пшеницы пуритионинов в условиях желудка.
Материалы и методы
Пуритионины были выделены из пшеницы, как описано в примере 4. Proctase получали из Meiji (Токио, Япония).
Результаты
Как показано с помощью продуктов расщепления пуритионинов пшеницы на Фигуре 5, ферментные продукты, содержащие либо аспергиллопепсин I из Aspergillus niger, либо его гомолог из Trichoderma reesei, могут гидролизовать пуритионины пшеницы в имитированных условиях желудка.
Пример 6: При эффективных дозах аспергиллоглутамил-пептидаза и аспергиллопепсин I-подобные ферменты не оказывают негативного влияния на пивную пену.
Пиво содержит ингибиторы альфа-амилазы/трипсина ячменного происхождения, которые, как известно, высоко гомологичны аллергенным ингибиторам альфа-амилазы/трипсина, присутствующим в пшенице (Okada et al., J. Agric. Food Chem. 2008, 56, 1458-1464). Результаты, приведенные в Примере 1 настоящей заявки, показывают, что аспергиллоглутамил-пептидаза может эффективно гидролизовать различные ингибиторы альфа-амилазы/трипсина. Таким образом, при добавлении аспергиллоглутамил-пептидазы к пиву можно ожидать, что ингибиторы альфа-амилазы/трипсина из ячменя также будут гидролизоваться. В Примере 2 мы показали, что добавление соответствующих кислых протеаз не оказывает негативного влияния на качество пивной пены. В настоящем примере мы показали, что дозы ферментов аспергиллоглумил-пептидазы, аспергиллопепсина I или гомолога аспергиллопепсина I из Trichoderma reesei, необходимые для гидролиза известных аллергенов пива, таких как ингибиторы альфа-амилазы/трипсина и белка Z (Garcia-Casado et al., J Allergy Clin Immunol, 108 (4), p.p.647-649), не оказывают негативного влияния на стабильность пивной пены, даже в сочетании с количествами пролин-специфичных эндопротеаз (MaxiPro PSP, DSM Food Specialities, Делфт, Нидерланды), которые необходимы для предотвращения холодного помутнения.
Бутылочное пиво большого международного бренда было получено из местного супермаркета. Бутылки осторожно открывали, добавляли соответствующие ферменты и сразу же снова закрывали бутылки с использованием новой кронен-пробки. После тщательного перемешивания бутылки хранили при 20°С в течение одной недели. Стабильность пены измеряли, как описано в Примере 2, и средние значения пены для двух повторностей на инкубацию приведены в Таблице 2. Полученные данные четко показывают, что высокие дозы различных добавленных кислых протеаз не оказывают негативного влияния на образование пены.
Claims (20)
1. Диетическая добавка, содержащая аспергиллоглутамил-пептидазу из Aspergillus niger, пролил-эндопептидазу и диетически пригодные вспомогательные вещества.
2. Фармацевтическая композиция для лечения непереносимости глютена у человека, содержащая аспергиллоглутамил-пептидазу из Aspergillus niger, пролил-эндопептидазу и фармацевтически пригодные вспомогательные вещества.
3. Диетическая добавка по п.1, дополнительно содержащая аспергиллопепсин I.
4. Фармацевтическая композиция по п.2, дополнительно содержащая аспергиллопепсин I.
5. Диетическая добавка по п.1, которая находится в форме таблетки, капсулы или жидкого состава.
6. Фармацевтическая композиция по п.2, которая находится в форме таблетки, капсулы или жидкого состава.
7. Диетическая добавка по п. 1 для поддержания или повышения желудочно-кишечного комфорта у людей, чувствительных к глютену, или для задержки появления желудочно-кишечного дискомфорта при целиакии, или у людей с не являющейся целиакией непереносимостью глютена, а также для уменьшения воздействия ингибитора альфа-амилазы/трипсина у здоровых индивидуумов.
8. Диетическая добавка по п.7, которая дополнительно содержит пролил-эндопептидазу и диетически пригодные вспомогательные вещества.
9. Применение фармацевтической композиции, содержащей аспергиллоглутамил-пептидазу из Aspergillus niger, в качестве лекарственного средства для лечения непереносимости глютена у человека.
10. Применение по п.9, где композиция дополнительно содержит пролил-эндопептидазу и фармацевтически пригодные вспомогательные вещества.
11. Применение по п. 9 или 10, где композиция дополнительно содержит аспергиллопепсин I.
12. Применение по п.9 или 10, где лекарственное средство предназначено для лечения пациента, страдающего от врожденного иммунного ответа в тонкой кишке.
13. Применение по п.9 или 10, где лекарственное средство предназначено для лечения целиакии, непереносимости глютена, которая не является целиакией, чувствительности к глютену, синдрома раздраженного кишечника или воспалительного заболевания кишечника.
14. Применение по п.9 или 10, где лекарственное средство применяют перорально в течение 1 часа до или после еды.
15. Способ разрушения растительных аллергенов в диетической композиции, включающий инкубацию диетической композиции, содержащей растительные аллергены, с аспергиллоглутамил-пептидазой из Aspergillus niger, в течение времени, достаточного для гидролиза растительных аллергенов.
16. Продукт питания, приготовленный посредством инкубации пищевого продукта, содержащего растительные аллергены, с аспергиллоглутамил-пептидазой из Aspergillus niger, в течение времени, достаточного для гидролиза растительных аллергенов, где указанный продукт питания содержит деградированные ингибиторы альфа-амилазы/трипсина.
17. Хлебопекарная композиция, включающая аспергиллоглутамил-пептидазу из Aspergillus niger и пролил-эндопептидазу.
18. Хлебопекарная композиция по п. 17, которая представляет собой тесто.
19. Способ приготовления теста, включающий стадию добавления аспергиллоглутамил-пептидазы из Aspergillus niger к по меньшей мере одному ингредиенту теста.
20. Ферментная композиция для приготовления продукта питания, содержащая аспергиллоглутамил-пептидазу из Aspergillus niger и по меньшей мере один дополнительный фермент.
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
EP13196580.8 | 2013-12-11 | ||
EP13196580.8A EP2883458A1 (en) | 2013-12-11 | 2013-12-11 | Medicament and method for treating innate immune response diseases |
PCT/EP2014/077355 WO2015086737A1 (en) | 2013-12-11 | 2014-12-11 | Medicament and method for treating innate immune response diseases |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2671832C1 true RU2671832C1 (ru) | 2018-11-07 |
Family
ID=49759104
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2016128070A RU2671832C1 (ru) | 2013-12-11 | 2014-12-11 | Лекарственное средство и способ лечения нарушений врожденного иммунного ответа |
Country Status (10)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US10413599B2 (ru) |
EP (2) | EP2883458A1 (ru) |
JP (1) | JP6862627B2 (ru) |
KR (1) | KR102341353B1 (ru) |
CN (1) | CN105813474A (ru) |
BR (1) | BR112016013072B1 (ru) |
ES (1) | ES2759065T3 (ru) |
PL (1) | PL3079495T3 (ru) |
RU (1) | RU2671832C1 (ru) |
WO (1) | WO2015086737A1 (ru) |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2023525856A (ja) * | 2020-05-12 | 2023-06-19 | グルータジェン ピーティーワイ リミテッド | Ati消化のための方法及び組成物 |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20100322912A1 (en) * | 2007-12-10 | 2010-12-23 | Chaitan Khosla | Combination Enzyme Therapy for Gastric Digestion of Dietary Gluten in Celiac Sprue Patients |
EA015575B1 (ru) * | 2005-03-16 | 2011-10-31 | Атьял Фармасеутика Лда. | Закваска, способ ее получения и применение закваски |
EP2409711A1 (en) * | 2002-02-14 | 2012-01-25 | The Board of Trustees of The Leland Stanford Junior University | Enzyme treatment of foodstuffs for celiac sprue |
Family Cites Families (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DK81193D0 (da) * | 1993-07-06 | 1993-07-06 | Novo Nordisk As | Enzym |
US6960462B2 (en) * | 2000-02-08 | 2005-11-01 | Dsm Ip Assets B.V | Use of acid-stable subtilisin proteases in animal feed |
RU15575U1 (ru) | 2000-05-25 | 2000-10-27 | Общество с ограниченной ответственностью Научно-производственная компания "КЕДР-89" | Установка для димеризации легких олефинов |
US7320788B2 (en) * | 2002-02-14 | 2008-01-22 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Enzyme treatment of foodstuffs for Celiac Sprue |
US7067124B2 (en) * | 2003-03-28 | 2006-06-27 | National Enzyme Company | Protease composition and method for treating a digestive disorder |
WO2005027953A2 (en) * | 2003-09-23 | 2005-03-31 | Dsm Ip Assets B.V. | Use of proline specific endoproteases to hydrolyse peptides and proteins |
US7628985B2 (en) * | 2004-04-26 | 2009-12-08 | The Board Of Regents Of The Leland Stanford Junior University | Therapeutic enzyme formulations and uses thereof in celiac sprue and/or dermatitis herpetoformis |
EP2136833B1 (en) * | 2007-03-16 | 2019-05-01 | The Board of Trustees of the Leland Stanford Junior University | Combination enzyme therapy for digestion of dietary gluten |
WO2012146717A1 (en) | 2011-04-29 | 2012-11-01 | Dsm Ip Assets B.V. | Preparation of an egg white composition |
-
2013
- 2013-12-11 EP EP13196580.8A patent/EP2883458A1/en not_active Ceased
-
2014
- 2014-12-11 KR KR1020167018205A patent/KR102341353B1/ko active IP Right Grant
- 2014-12-11 CN CN201480067431.8A patent/CN105813474A/zh active Pending
- 2014-12-11 RU RU2016128070A patent/RU2671832C1/ru active
- 2014-12-11 EP EP14809872.6A patent/EP3079495B1/en active Active
- 2014-12-11 ES ES14809872T patent/ES2759065T3/es active Active
- 2014-12-11 BR BR112016013072-3A patent/BR112016013072B1/pt active IP Right Grant
- 2014-12-11 WO PCT/EP2014/077355 patent/WO2015086737A1/en active Application Filing
- 2014-12-11 JP JP2016536845A patent/JP6862627B2/ja active Active
- 2014-12-11 US US15/101,630 patent/US10413599B2/en active Active
- 2014-12-11 PL PL14809872T patent/PL3079495T3/pl unknown
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP2409711A1 (en) * | 2002-02-14 | 2012-01-25 | The Board of Trustees of The Leland Stanford Junior University | Enzyme treatment of foodstuffs for celiac sprue |
EA015575B1 (ru) * | 2005-03-16 | 2011-10-31 | Атьял Фармасеутика Лда. | Закваска, способ ее получения и применение закваски |
US20100322912A1 (en) * | 2007-12-10 | 2010-12-23 | Chaitan Khosla | Combination Enzyme Therapy for Gastric Digestion of Dietary Gluten in Celiac Sprue Patients |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Samanta Stoven et. all. "Celiac Disease -Advances in Treatment via Gluten Modification", Clin Gastroenterol Hepatol., 2012 August; 10(8), 859-862. * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
KR20160090396A (ko) | 2016-07-29 |
ES2759065T3 (es) | 2020-05-07 |
WO2015086737A1 (en) | 2015-06-18 |
JP6862627B2 (ja) | 2021-04-21 |
BR112016013072A2 (pt) | 2018-05-22 |
KR102341353B1 (ko) | 2021-12-21 |
EP3079495B1 (en) | 2019-10-02 |
US20160346364A1 (en) | 2016-12-01 |
EP2883458A1 (en) | 2015-06-17 |
CN105813474A (zh) | 2016-07-27 |
EP3079495A1 (en) | 2016-10-19 |
US10413599B2 (en) | 2019-09-17 |
PL3079495T3 (pl) | 2020-04-30 |
BR112016013072B1 (pt) | 2021-06-01 |
JP2017504581A (ja) | 2017-02-09 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Scherf et al. | Novel approaches for enzymatic gluten degradation to create high-quality gluten-free products | |
Gobbetti et al. | Sourdough lactobacilli and celiac disease | |
De Angelis et al. | Mechanism of degradation of immunogenic gluten epitopes from Triticum turgidum L. var. durum by sourdough lactobacilli and fungal proteases | |
Rizzello et al. | Use of fungal proteases and selected sourdough lactic acid bacteria for making wheat bread with an intermediate content of gluten | |
Gerez et al. | A combination of two lactic acid bacteria improves the hydrolysis of gliadin during wheat dough fermentation | |
Mäkinen et al. | Oat malt as a baking ingredient–A comparative study of the impact of oat, barley and wheat malts on bread and dough properties | |
Al‐Doury et al. | Rice‐endosperm and rice‐bran proteins: A review | |
Shetty et al. | Discovery, cloning and characterisation of proline specific prolyl endopeptidase, a gluten degrading thermo-stable enzyme from Sphaerobacter thermophiles | |
Loponen et al. | Prolamin hydrolysis and pentosan solubilization in germinated-rye sourdoughs determined by chromatographic and immunological methods | |
US11723960B2 (en) | Compositions and methods for treating gluten intolerance and disorders arising therefrom | |
ES2554107T3 (es) | Un método para mejorar las propiedades reológicas de una masa de harina refinada | |
US20170295804A1 (en) | Rice Flour as an Alternative to Wheat Flour and Method for Producing Gluten-Free Bread Made from Rice Flour | |
US20150223506A1 (en) | Method for partial degradation of gluten | |
JP2000513231A (ja) | ベーキングにおけるデアミダーゼの利用 | |
Costantini et al. | How cereal flours, starters, enzymes, and process parameters affect the in vitro digestibility of sourdough bread | |
Suter et al. | Who is to blame for the increasing prevalence of dietary sensitivity to wheat? | |
RU2671832C1 (ru) | Лекарственное средство и способ лечения нарушений врожденного иммунного ответа | |
Bradauskiene et al. | Recent advances in biotechnological methods for wheat gluten immunotoxicity abolishment–a review | |
Di Cagno et al. | Adverse reactions to gluten: Exploitation of sourdough fermentation | |
WO2021095707A1 (ja) | 血糖値低下用又はgi値低下用の組成物又は組み合わせ | |
US6485761B1 (en) | Methods for using lactonohydrolases in baking | |
Yazici et al. | Celiac Disease: Myth or Reality | |
Azizi et al. | Investigating and comparing the enzymatic activity of wheat, Quinoa and Amaranth | |
JP2023030773A (ja) | 小麦ふすま含有ベーカリー食品の製造方法 |