RU2669941C2

RU2669941C2 - Композиции и способы для лечения t-клеточной лимфомы кожи

Info

Publication number: RU2669941C2
Application number: RU2015132959A
Authority: RU
Inventors: Ален Х. РУК; Джоэл М. ГЕЛФАНД; Мария М. ВЫСОЦКА; Бернис М. БЕНУА; Андреа Б. ТРОКСЕЛ
Original assignee: Дзе Трастиз Оф Дзе Юниверсити Оф Пенсильвания
Priority date: 2013-01-07
Filing date: 2014-01-06
Publication date: 2018-10-17
Also published as: US20150335637A1; RU2015132959A; JP2016504386A; RS61101B1; CA2896966A1; MX2015008773A; AU2014203896B2; CN105025854A; KR20150103718A; CY1123674T1; JP2019065026A; CA2896966C; PT2941233T; HRP20201630T1; WO2014107663A2; SI2941233T1; PL2941233T3; DK2941233T3; JP6457401B2; LT2941233T

Abstract

Группа изобретений относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использована для лечения T-клеточной лимфомы кожи (CTCL). Способы по изобретению включают введение субъекту терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции, содержащей 0,03-0,06% (по массе) 4-амино-α,α-диметил-2-этоксиметил-1H-имидазо[4,5-c]хинолин-1-этанола (резиквимода) или его фармацевтически приемлемой соли. Композицию наносят на по меньшей мере одно CTCL-поражение. Использование изобретений позволяет лечить CTCL за счет усиления клеточно-опосредованного иммунного ответа популяции клеток, которая включает клетки, затронутые CTCL, уменьшить побочные эффекты лечения. 2 н. и 18 з.п. ф-лы, 3 ил., 2 пр.

Description

ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ

В соответствии с § 119(e) раздела 35 Кодекса США (35 U.S.C.) по настоящей заявке испрашивается приоритет на основании предварительной заявки США №61/749739, поданной 7 января 2013 г., полное содержание которой включено в настоящий документ посредством ссылки.

ЗАЯВЛЕНИЕ О ФИНАНСИРОВАНИИ ИЗ ФЕДЕРАЛЬНОГО БЮДЖЕТА НАУЧНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ ИЛИ РАЗРАБОТОК

Настоящее изобретение было осуществлено при финансовой поддержке правительства в рамках грантов №№5R01 CA122569-4 и R01 FD004092, присужденных Национальным институтом здоровья. Правительство имеет определенные права на настоящее изобретение.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Т-клеточная лимфома кожи (CTCL) является относительно редким заболеванием, с частотой заболеваемости в США приблизительно 0,29 случая на 100000 человек в год. Даже если, согласно сообщениям, заболеваемость CTCL в Восточной Европе приблизительно в два раза ниже, это различие может быть связано с разной осведомленностью врачей о данном заболевании, а не с истинным различием в частоте заболеваемости. В США каждый год выявляют приблизительно 1500 новых случаев заболевания и регистрируют приблизительно 100-200 случаев смерти ежегодно. CTCL, как правило, развивается у пожилых людей (средний возраст на момент постановки диагноза 55-60 лет) и поражает в два раза больше мужчин, чем женщин. Средняя ожидаемая продолжительность жизни на момент постановки диагноза составляет 7-10 лет, даже без лечения.

CTCL является медленно развивающимся видом рака (низкой степени) лейкоцитов, который в основном поражает кожу и только во вторую очередь поражает другие участки тела. Это заболевание включает неконтролируемую пролиферацию T-лимфоцитов, известных как хелперные T-клетки (TH). Пролиферация хелперных T-клеток приводит к проникновению, или инфильтрации, этих аномальных клеток в дермальный и эпидермальный слои кожи. На коже могут возникать зудящие, слегка шелушащиеся поражения, хотя участки наибольшей инфильтрации не обязательно соответствуют участкам, где возникают поражения. Поражения чаще всего образуются на туловище, но могут присутствовать на любой части тела. При наиболее распространенной форме заболевания, также известной как фунгоидный микоз (MF), очаговые поражения переходят в прощупываемые бляшки, которые имеют более темный красный цвет и более четкие края. В конечном итоге могут развиваться опухоли кожи. И наконец, рак может прогрессировать за пределы кожи, часто в лимфатические узлы или внутренние органы. В редких случаях у заболевших людей может развиваться синдром Сезари (SS), лейкозный вариант MF.

Пролиферативные T-лимфоциты при CTCL характеризуются фенотипом CD4+/CD45RO+/CLA+/CCR4+. MF и SS отличаются по вовлечению периферической крови. MF, как правило, проявляется без явного участия периферической крови, выражающегося в циркуляции злокачественных T-клеток, в то время как SS, как правило, включает злокачественные T-клетки, диссеминированные в кровотоке. Вовлечение периферической крови, как правило, связано со снижением клеточно-опосредованного иммунитета, включая снижение продуцирования цитокинов TH1-типа, таких как, например, IFN-γ и IL-2, и возрастание продуцирования цитокинов TH2-типа, таких как, например, IL-4 и IL-5.

У пациентов с CTCL, в частности у пациентов с SS, наблюдается недостаток продуцирования IL-12, возникающий, по меньшей мере частично, в результате снижения количеств миелоидных дендритных клеток, которые являются важными продуцентами IL-12. IL-12 стимулирует пролиферацию NK-клеток и T-клеток, повышает цитолитическую активность NK-клеток и стимулирует продуцирование IFN-γ, который, в свою очередь, усиливает продуцирование IL-12 ДК и моноцитами.

Экзогенное введение цитокинов TH1-типа вызывает поддающиеся измерению клинические ответы у получавших их пациентов. Например, введение IFN-α, IFN-γ и/или IL-12 было использовано в такой терапии, однако поиск эффективных лекарственных средств с низкой частотой возникновения побочных эффектов и способностью стимулировать несколько компонентов иммунной системы продолжается.

В последние годы было приложено много усилий для разработки новых лекарственных соединений, которые действуют путем стимуляции некоторых ключевых элементов иммунной системы, а также путем подавления некоторых других элементов (смотрите, например, патенты США №№6039969 и 6200592). Данные соединения, называемые в настоящем документе модификаторами иммунного ответа (МИО) (IRM), по-видимому, действуют через основные механизмы иммунной системы, известные как Toll-подобные рецепторы (TLR), что приводит к биосинтезу цитокинов, индукции костимулирующих молекул и увеличению антиген-представляющей способности.

Они могут быть полезны для лечения широкого спектра заболеваний и состояний. Например, некоторые МИО могут быть полезны для лечения вирусных заболеваний (например инфекции вируса папилломы человека, гепатита, герпеса), неоплазий (например базально-клеточной карциномы, плоскоклеточной карциномы, старческого кератоза, меланомы) и опосредованных TH2 заболеваний (например астмы, аллергического ринита, атопического дерматита), аутоиммунных заболеваний (например рассеянного склероза), а также полезны в качестве адъювантов для вакцин.

Многие соединения МИО являются производными низкомолекулярного органического соединения амина имидазохинолина (смотрите, например, патент США №4689338), однако также известен ряд соединений других классов (смотрите, например, патенты США №№5446153, 6194425 и 6110929, и международную публикацию № WO 2005/079195), и еще больше новых соединений находятся в процессе разработки. Другие МИО имеют более высокую молекулярную массу, например, олигонуклеотиды, включая CpG (смотрите, например, патент США №6194388).

В данной области по-прежнему сохраняется потребность в новых и усовершенствованных композициях, которые можно использовать для лечения рефрактерных заболеваний или нарушений, таких как CTCL. Настоящее изобретение направлено на удовлетворение этой потребности.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

В одном аспекте изобретение относится к способу лечения или снижения тяжести Т-клеточной лимфомы кожи (CTCL) у субъекта, который нуждается в этом. В некоторых неограничивающих вариантах осуществления способ включает местное, чрескожное, внутрикожное или внутриочаговое введение субъекту терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции, содержащей соединение модификатора иммунного ответа (МИО), в результате чего происходит излечение или снижение тяжести CTCL у субъекта.

В другом аспекте изобретение относится к способу усиления клеточно-опосредованного иммунного ответа у субъекта, страдающего CTCL. В некоторых неограничивающих вариантах осуществления способ включает местное, чрескожное, внутрикожное или внутриочаговое введение субъекту терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции, содержащей соединение МИО, в результате чего клеточно-опосредованный иммунный ответ у субъекта усиливается.

В различных вариантах осуществления любого из указанных выше аспектов или любого аспекта изобретения, изложенного в настоящем документе, введение композиции субъекту является местным. В некоторых вариантах осуществления изобретения соединение МИО представляет собой 4-амино-α,α-диметил-2-этоксиметил-1H-имидазо[4,5-c]хинолин-1-этанол или его фармацевтически приемлемую соль. В других вариантах осуществления изобретения композиция представляет собой гель. В других вариантах осуществления изобретения композиция содержит от приблизительно 0,01% (по массе) МИО до приблизительно 0,5% (по массе) МИО. В других вариантах осуществления изобретения композиция содержит от приблизительно 0,03% (по массе) МИО до приблизительно 0,06% (по массе) МИО.

В различных вариантах осуществления любого из указанных выше аспектов или любого аспекта изобретения, изложенного в настоящем документе, композицию наносят на по меньшей мере одно CTCL-поражение субъекта. В некоторых вариантах осуществления изобретения введение приводит к по меньшей мере частичному устранению по меньшей мере одного CTCL-поражения, на которое была нанесена композиция. В других вариантах осуществления изобретения введение приводит к по меньшей мере частичному устранению по меньшей мере одного CTCL-поражения, на которое не была нанесена композиция. В других вариантах осуществления изобретения введение приводит к 50% или более устранению всех CTCL-поражений у субъекта. В других вариантах осуществления изобретения количество МИО, введенное субъекту, составляет от приблизительно 1 мкг/кг до приблизительно 10 мг/кг. В других вариантах осуществления изобретения количество МИО, введенное субъекту, составляет от приблизительно 100 нг/поражение до приблизительно 1 мг/поражение. В других вариантах осуществления изобретения композицию вводят субъекту с частотой по меньшей мере один раз в сутки, по меньшей мере один раз в неделю или по меньшей мере один раз в месяц. В других вариантах осуществления изобретения композицию вводят субъекту неоднократно на протяжении по меньшей мере одних суток, по меньшей мере одной недели, по меньшей мере одного месяца или по меньшей мере одного года.

В различных вариантах осуществления любого из указанных выше аспектов или любого аспекта изобретения, изложенного в настоящем документе, введение активирует системный клеточно-опосредованный противоопухолевый иммунный ответ у субъекта. В некоторых вариантах осуществления изобретения введение индуцирует инфильтрацию активированных NK-клеток или активированных T-клеток в по меньшей мере одно поражение у субъекта. В других вариантах осуществления изобретения введение приводит к повышению уровня гранзима или IFNα в по меньшей мере одном поражении у субъекта. В других вариантах осуществления изобретения введение активирует циркулирующие миелоидные дендритные клетки или циркулирующие NK-клетки в крови у субъекта. В других вариантах осуществления изобретения активированные циркулирующие миелоидные дендритные клетки имеют повышенную экспрессию CD80.

В различных вариантах осуществления любого из указанных выше аспектов или любого аспекта изобретения, изложенного в настоящем документе, композицию вводят субъекту в течение первого периода лечения и в течение второго периода лечения, и при этом первый период лечения и второй период лечения разделены периодом без лечения. В некоторых вариантах осуществления изобретения композицию вводят субъекту в течение первого периода лечения с частотой по меньшей мере один раз в сутки, по меньшей мере один раз в неделю или по меньшей мере один раз в месяц. В других вариантах осуществления изобретения гель вводят субъекту в течение второго периода лечения с частотой по меньшей мере один раз в сутки, по меньшей мере один раз в неделю или по меньшей мере один раз в месяц. В других вариантах осуществления изобретения первый период лечения составляет по меньшей мере приблизительно две недели, по меньшей мере приблизительно три недели, по меньшей мере приблизительно четыре недели, по меньшей мере приблизительно пять недель, по меньшей мере приблизительно шесть недель, по меньшей мере приблизительно семь недель или по меньшей мере приблизительно восемь недель. В других вариантах осуществления изобретения второй период лечения составляет по меньшей мере приблизительно две недели, по меньшей мере приблизительно три недели, по меньшей мере приблизительно четыре недели, по меньшей мере приблизительно пять недель, по меньшей мере приблизительно шесть недель, по меньшей мере приблизительно семь недель или по меньшей мере приблизительно восемь недель. В других вариантах осуществления изобретения период без лечения, разделяющий первый период лечения и второй период лечения, составляет по меньшей мере приблизительно одну неделю, по меньшей мере приблизительно две недели, по меньшей мере приблизительно три недели или по меньшей мере приблизительно четыре недели. В других вариантах осуществления изобретения субъект является млекопитающим. В других вариантах осуществления изобретения млекопитающее является человеком.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ

Следующее далее подробное описание предпочтительных вариантов осуществления изобретения будет более понятным при прочтении совместно с прилагаемыми чертежами. Для целей иллюстрации изобретения приведены чертежи, относящиеся к вариантам осуществления, которые в настоящее время являются предпочтительными. Следует понимать, однако, что изобретение не ограничено точными условиями и инструментарием вариантов осуществления, проиллюстрированных данными чертежами.

На фигуре 1, включающей фигуры 1A-1B, приведены фотографии пациента, принимающего участие в клиническом испытании, описанном в настоящей заявке. На фигуре 1A показано поражение на коже перед нанесением резиквимода, и на фигуре 1B показано поражение на коже в конце недели 8 лечения. Эти результаты свидетельствуют о том, что резиквимод приводит к устранению обработанного препаратом поражения и индуцирует разрешение удаленных поражений.

На фигуре 2 приведен график, иллюстрирующий процентную долю CD80-положительных миелоидных дендритных клеток в периферической крови пациентов, участвующих в испытании. Эти результаты показывают, что экспрессия CD80 была активирована в этих клетках в течение первых восьми недель терапии и вновь после четырехнедельного перерыва в лечении, заканчивающегося в неделю 12.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение относится к способу лечения T-клеточной лимфомы кожи (CTCL) у субъекта. У пациентов с запущенной формой CTCL в значительной степени нарушена способность генерировать клеточно-опосредованный иммунный ответ, и это нарушение мешает иммунной системе пациента контролировать и сдерживать CTCL. В неограничивающем варианте осуществления изобретения используют соединения модификатора иммунного ответа (МИО) для стимуляции иммунных ответов других, все еще восприимчивых популяций иммунных клеток, с целью оказания помощи в контроле и сдерживании CTCL.

Настоящее изобретение частично основано на том неожиданном открытии, что препарат, содержащий резиквимод (4-амино-α,α-диметил-2-этоксиметил-1H-имидазо[4,5-c]хинолин-1-этанол или его соль), является особенно эффективным для лечения CTCL, поскольку он оказывает местный провоспалительный эффект на обработанные им поражения-мишени, при том, что удаленные поражения также реагируют вследствие системной иммунной активации.

Как описано в настоящем документе, в обработанных препаратом поражениях-мишенях наблюдается заметный внутриочаговый приток активированных цитотоксических T-клеток и NK-клеток, проявляющих повышенную экспрессию гранзима и IFN-γ. В описании изобретения также предоставлены свидетельства нарастания системного иммунного ответа, включая прогрессирующую активацию циркулирующих в крови миелоидных дендритных клеток и NK-клеток. В конкретных вариантах осуществления препараты по настоящему изобретению вызывают клинический ответ высокой степени, как в подвергаемой местному лечению поражения-мишени, так и в удаленных поражениях, и обладают способностью значительно стимулировать системный клеточный иммунитет. Описанное в настоящем документе изобретение относится к лечению не только CTCL, но также и других видов рака кожи.

Определения

Если не указано иное, все технические и научные термины, используемые в настоящем документе, имеют то же значение, которое им обычно придают специалисты в области, к которой относится настоящее изобретение. Хотя любые методы и материалы, аналогичные или эквивалентные тем, которые описаны в настоящем документе, можно использовать на практике или при тестировании настоящего изобретения, описаны предпочтительные методы и материалы.

При использовании в настоящем документе каждый из следующих терминов имеет значение, связанное с ним в данном разделе.

При использовании в настоящем документе форма единственного числа применительно к объекту подразумевает один или более чем один (то есть по меньшей мере один). В качестве примера, «элемент» означает один элемент или более чем один элемент.

Слово «приблизительно» при использовании в настоящем документе применительно к измеряемой величине, такой как количество, временная продолжительность и тому подобное, охватывает вариации ±20% или ±10%, более предпочтительно ±5%, даже более предпочтительно ±1% и еще более предпочтительно ±0,1% от указанного значения, поскольку такие вариации являются подходящими для осуществления раскрытых способов.

Используемый в настоящем документе термин «МИО» означает модификатор иммунного ответа.

Используемый в настоящем документе термин «агонист» относится к соединению, которое способно связываться с рецептором (например TLR), индуцируя клеточную активность. Агонист может быть лигандом, который напрямую связывается с рецептором. Альтернативно, агонист может связываться с рецептором опосредованно, например, (a) образуя комплекс с другой молекулой, которая непосредственно связывается с рецептором, или (b) иным образом приводя к изменению другого соединения таким образом, что другое соединение непосредственно связывается с рецептором. Термин «агонист» может относиться к агонисту конкретного TLR (например агонист TLR6) или конкретного набора TLR (например агонист TLR 7/8 - агонист и TLR7, и TLR8).

Используемый в настоящем документе термин «клеточно-опосредованная иммунная активность» означает биологическую активность, считающуюся частью клеточно-опосредованного иммунного ответа, такую как, например, увеличение продуцирования по меньшей мере одного TH1 цитокина.

Используемый в настоящем документе термин «иммунная клетка» означает клетку иммунной системы, то есть клетку, напрямую или опосредованно вовлеченную в генерирование или поддержание иммунного ответа, является ли иммунный ответ врожденным, приобретенным, гуморальным или клеточно-опосредованным.

Используемый в настоящем документе термин «признак» или «клинический признак» означает объективный физический показатель, относящийся к конкретному состоянию, который способен обнаружить кто-либо иной, помимо пациента.

Используемый в настоящем документе термин «симптом» означает любой субъективный признак заболевания или состояния пациента.

Термин «устранение» применительно к поражению означает уменьшение размера, количества и/или степени тяжести одного или более поражений у субъекта. Таким образом, термин «устранение» можно применять к одному поражению, подгруппе всех поражений или всем поражениям субъекта. В одном варианте осуществления происходит устранение по меньшей мере одного поражения, в которое была введена композиция по изобретению. В другом варианте осуществления происходит устранение по меньшей мере одного поражения, в которое не была введена композиция по изобретению.

Термин «аномальные» при использовании в контексте организмов, тканей, клеток или их компонентов, относится к таким организмам, тканям, клеткам или их компонентам, которые отличаются по меньшей мере одной наблюдаемой или поддающейся обнаружению характеристикой (например возрастом, лечением, временем суток и так далее) от тех организмов, тканей, клеток или их компонентов, которые проявляют «нормальные» (ожидаемые) соответствующие характеристики. Характеристики, которые являются нормальными или ожидаемыми для клетки или ткани одного типа, могут быть аномальными для клетки или ткани другого типа.

Используемый в настоящем документе термин «заболевание» означает состояние здоровья животного, при котором животное не способно поддерживать гомеостаз, и при этом, если заболевание не ослабевает, то здоровье животного продолжает ухудшаться.

Напротив, используемый в настоящем документе термин «нарушение» у животного означает состояние здоровья животного, при котором животное способно поддерживать гомеостаз, но при котором состояние здоровья животного не столь благоприятное, как в отсутствие данного нарушения. При отсутствии лечения нарушение не обязательно вызывает дальнейшее ухудшение состояния здоровья животного.

В настоящем документе заболевание или нарушение называют «облегченным» или «излеченным», если степень тяжести симптома заболевания или нарушения, частота, с которой пациент испытывает такой симптом, или и то и другое, уменьшается.

Используемый в настоящем документе термин «снижать тяжесть» относится к любому уменьшению распространенности, тяжести, частоты и/или тому подобного симптома или клинического признака, характерного для конкретного состояния.

Используемый в настоящем документе термин «терапевтическое» лечение означает лечение, применяемое к субъекту, который проявляет признаки патологии, с целью уменьшения или устранения этих признаков.

Используемый в настоящем документе термин «лечение» или «процедуры» означает нанесение или введение лекарственного средства, то есть соединения по изобретению (одного или в сочетании с другим фармацевтическим средством), пациенту или нанесение или введение лекарственного средства в выделенную ткань или линию клеток, полученную у пациента (например, для диагностики или ex vivo применений), который имеет заболевание или нарушение, симптом заболевания или нарушения или у которого потенциально может развиться заболевание или нарушение, с целью вылечить, исцелить, облегчить, уменьшить, изменить, ликвидировать, ослабить, нормализовать или повлиять на заболевание или нарушение, симптомы заболевания или нарушения, или возможность для развития заболевания или нарушения. Такие процедуры могут быть специально приспособлены или изменены на основании знаний, полученных в области фармакогеномики.

Используемый в настоящем документе термин «предотвращать» или «предотвращение» означает, что нарушение или заболевание не возникает, если его не было прежде, или нарушение или заболевание не прогрессирует, если нарушение или заболевание уже развилось. Также учитывается возможность предотвращения некоторых или всех симптомов, связанных с нарушением или заболеванием.

Используемый в настоящем документе термин «пациент», «индивидуум» или «субъект» относится к человеку или к млекопитающему, отличному от человека. Млекопитающие, отличные от человека, включают, например, скот и домашних питомцев, например овец, крупный рогатый скот, свиней, собак, кошек и мышей. Предпочтительно пациент, индивидуум или субъект является человеком.

Используемые в настоящем документе термины «эффективное количество», «фармацевтически эффективное количество» и «терапевтически эффективное количество» означают нетоксичное, но достаточное для достижения желаемого биологического результата количество средства. Таким результатом может быть уменьшение и/или ослабление признаков, симптомов или причин заболевания, или любое другое желаемое изменение биологической системы. Соответствующее терапевтическое количество в каждом конкретном случае может определять рядовой специалист в данной области с использованием рутинного экспериментирования.

Используемый в настоящем документе термин «фармацевтически приемлемый» относится к материалу, такому как носитель или разбавитель, который не отменяет биологическую активность или свойства соединения и является относительно нетоксичным, то есть к материалу, который при введении индивидууму не вызывает нежелательные биологические эффекты или не взаимодействует разрушительным образом с каким-либо из компонентов композиции, в которой он содержится.

Используемое в настоящем документе выражение «фармацевтически приемлемая соль» относится к соли вводимого соединения, полученной из фармацевтически приемлемых нетоксичных кислот и оснований, включая неорганические кислоты, неорганические основания, органические кислоты, органические основания, их сольваты, гидраты и клатраты. Подходящие фармацевтически приемлемые кислотно-аддитивные соли можно получать из неорганической кислоты или из органической кислоты. Примеры неорганических кислот включают сульфат, гидросульфат, хлористоводородную, бромистоводородную, йодистоводородную, азотную, угольную, серную и фосфорную кислоты (включая гидрофосфат и дигидрофосфат). Соответствующие органические кислоты можно выбирать из алифатических, циклоалифатических, ароматических, аралифатических, гетероциклических, карбоновых и сульфоновых типов органических кислот, примеры которых включают муравьиную, уксусную, пропионовую, янтарную, гликолевую, глюконовую, молочную, яблочную, виннокаменную, лимонную, аскорбиновую, глюкуроновую, малеиновую, фумаровую, пировиноградную, аспарагиновую, глютаминовую, бензойную, антраниловую, 4-гидроксибензойную, фенилуксусную, миндальную, эмбоновую (памовую), метансульфоновую, этансульфоновую, бензолсульфоновую, пантотеновую, трифторметансульфоновую, 2-гидроксиэтансульфоновую, п-толуолсульфоновую, сульфаниловую, циклогексиламиносульфоновую, стеариновую, альгиновую, β-гидроксимасляную, салициловую, галактаровую и галактуроновую кислоты. Подходящие фармацевтически приемлемые основно-аддитивные соли соединений по изобретению включают, например, соли металлов, включая соли щелочных металлов, щелочноземельных металлов и соли переходных металлов, такие как, например, соли кальция, магния, калия, натрия и цинка. Фармацевтически приемлемые основно-аддитивные соли также включают органические соли, полученные из основных аминов, такие как, например, N,N'-дибензилэтилендиамин, хлорпрокаин, холин, диэтаноламин, этилендиамин, меглумин (N-метилглюкамин) и прокаин. Все эти соли можно получать из соответствующего соединения, проводя взаимодействие, например, соответствующей кислоты или основания с соединением.

Используемый в настоящем документе термин «композиция» или «фармацевтическая композиция» относится к смеси по меньшей мере одного соединения, полезного по изобретению, с фармацевтически приемлемым носителем. Фармацевтическая композиция облегчает введение соединения пациенту. Множество способов введения соединения существует в данной области, включая, но не ограничиваясь ими, внутривенное, пероральное, аэрозольное, ингаляционное, ректальное, вагинальное, чрескожное, интраназальное, трансбуккальное, подъязычное, парентеральное, интратекальное, внутрижелудочное, глазное, легочное и местное введения.

Используемый в настоящем документе термин «фармацевтически приемлемый носитель» означает фармацевтически приемлемый материал, композицию или носитель, такой как жидкий или твердый наполнитель, стабилизатор, диспергирующее средство, суспендирующее средство, разбавитель, эксципиент, загуститель, растворитель или инкапсулирующий материал, которые участвуют в переносе или транспортировке соединения, полезного по изобретению, в организме или в организм пациента так, что оно может выполнять предназначенную ему функцию. Как правило, такие конструкции переносятся или транспортируются от одного органа или части тела к другому органу или части тела. Каждый носитель может быть «приемлемым» в том смысле, что он совместим с другими ингредиентами препарата, включая соединение по изобретению, и не наносит вред пациенту. Некоторые примеры материалов, которые могут служить в качестве фармацевтически приемлемых носителей, включают: сахара, такие как лактоза, глюкоза и сахароза; крахмалы, такие как кукурузный крахмал и картофельный крахмал; целлюлозу и ее производные, такие как натрий-карбоксиметилцеллюлоза, этилцеллюлоза и ацетат целлюлозы; порошковый трагакант; солод; желатин; тальк; эксципиенты, такие как масло какао и воски для суппозиториев; масла, такие как арахисовое масло, хлопковое масло, сафлоровое масло, кунжутное масло, оливковое масло, кукурузное масло и соевое масло; гликоли, такие как пропиленгликоль; полиолы, такие как глицерин, сорбит, маннит и полиэтиленгликоль; сложные эфиры, такие как этилолеат и этиллаурат; агар; буферные средства, такие как гидроксид магния и гидроксид алюминия; поверхностно-активные вещества; альгиновую кислоту; апирогенную воду; изотонический солевой раствор; раствор Рингера; этиловый спирт; фосфатные буферные растворы и другие нетоксичные совместимые вещества, используемые в фармацевтических препаратах. Используемый в настоящем документе термин «фармацевтически приемлемый носитель» также включает любое и все покрытия, антибактериальные и противогрибковые средства и замедляющие всасывание вещества, и тому подобное, которые совместимы с активностью соединения по изобретению и являются физиологически приемлемыми для пациента. Дополнительные активные соединения также можно включать в композиции. «Фармацевтически приемлемый носитель» может также включать фармацевтически приемлемую соль соединения по изобретению. Другие дополнительные ингредиенты, которые можно включать в фармацевтические композиции, используемые на практике изобретения, известны в данной области и описаны, например, в книге Remington's Pharmaceutical Sciences (Genaro, Ed., Mack Publishing Co., 1985, Easton, PA), содержание которой включено в настоящий документ посредством ссылки.

Используемый в настоящем документе термин «эффективное количество» средства доставки представляет собой количество, достаточное для эффективного связывания или доставки соединения.

Используемый в настоящем документе термин «активность» означает дозу, необходимую для достижения половины максимального ответа (ED₅₀).

Используемый в настоящем документе термин «эффективность» означает максимальный эффект (E_max), достигаемый при анализе.

Диапазоны: в тексте данного описания различные аспекты изобретения могут быть представлены в формате диапазонов. Следует понимать, что описание в формате диапазонов предназначено лишь для удобства и краткости и не должно быть истолковано как негибкое ограничение объема изобретения. Соответственно, описание диапазона следует рассматривать как специально раскрывающее все возможные поддиапазоны, а также отдельные числовые значения в данном диапазоне. Например, описание такого диапазона, как от 1 до 6, следует считать специально раскрывающим такие поддиапазоны, как от 1 до 3, от 1 до 4, от 1 до 5, от 2 до 4, от 2 до 6, от 3 до 6 и так далее, а также отдельные числа в данном диапазоне, например 1, 2, 2,7, 3, 4, 5, 5,3 и 6. Это применяется независимо от ширины диапазона.

Описание

CTCL является медленно развивающимся видом рака (низкой степени) лейкоцитов, который в основном поражает кожу и только во вторую очередь поражает другие участки тела субъекта. Это заболевание включает неконтролируемую пролиферацию T-лимфоцитов, известных как хелперные T-клетки (TH). Пролиферация хелперных T-клеток приводит к проникновению, или инфильтрации, этих аномальных клеток в дермальный и эпидермальный слои кожи.

Модификаторы иммунного ответа («МИО») включают соединения, которые обладают иммуномодулирующей активностью, в том числе, но не ограничиваясь ими, противовирусной и противоопухолевой активностью. Некоторые МИО модулируют продуцирование и секрецию цитокинов. Например, некоторые соединения МИО вызывают продуцирование и секрецию таких цитокинов, как, например, интерфероны I типа, TNF-α, IL-1, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12, MIP-1 и/или MCP-1. В качестве другого примера, некоторые соединения МИО могут ингибировать продуцирование и секрецию некоторых TH2 цитокинов, таких как IL-4 и IL-5. Кроме того, некоторые соединения МИО, как сообщалось, подавляют IL-1 и TNF (смотрите патент США №6518265).

Некоторые МИО представляют собой низкомолекулярные органические соединения (например, с молекулярной массой до приблизительно 1000 Дальтон, предпочтительно до приблизительно 500 Дальтон), такие как те, которые описаны, например, в патентах США №№4689338, 4929624, 5266575, 5268376, 5346905, 5352784, 5389640, 5446153, 5482936, 5756747, 6110929, 6194425, 6331539, 6376669, 6451810, 6525064, 6541485, 6545016, 6545017, 6573273, 6656938, 6660735, 6660747, 6664260, 6664264, 6664265, 6667312, 6670372, 6677347, 6677348, 6677349, 6683088, 6756382, 6797718, 6818650 и 77091214, публикациях патентов США №№2004/0091491, 2004/0176367 и 2006/0100229 и международных публикациях №№ WO 2005/18551, WO 2005/18556, WO 2005/20999, WO 2005/032484, WO 2005/048933, WO 2005/048945, WO 2005/051317, WO 2005/051324, WO 2005/066169, WO 2005/066170, WO 2005/066172, WO 2005/076783, WO 2005/079195, WO 2005/094531, WO 2005/123079, WO 2005/123080, WO 2006/009826, WO 2006/009832, WO 2006/026760, WO 2006/028451, WO 2006/028545, WO 2006/028962, WO 2006/029115, WO 2006/038923, WO 2006/065280, WO 2006/074003, WO 2006/083440, WO 2006/086449, WO 2006/091394, WO 2006/086633, WO 2006/086634, WO 2006/091567, WO 2006/091568, WO 2006/091647, WO 2006/093514 и WO 2006/098852.

Дополнительные примеры низкомолекулярных МИО включают некоторые производные пурина (такие как те, которые описаны в патентах США №№6376501 и 6028076), некоторые производные амида имидазохинолина (такие как те, которые описаны в патенте США №6069149), некоторые производные имидазопиридина (такие как те, которые описаны в патенте США №6518265), некоторые производные бензимидазола (такие как те, которые описаны в патенте США №6387938), некоторые производные 4-аминопиримидина, конденсированного с пятичленным азотсодержащим гетероциклическим кольцом (такие как производные аденина, описанные в патентах США №6376501, 6028076 и 6329381 и в WO 02/08905) и некоторые производные 3-β-D-риборуранозилтиазоло[4,5-d]пиримидина (такие как те, которые описаны в публикации патента США №2003/0199461), и некоторые низкомолекулярные иммунопотенцирующие соединения, такие как те, которые описаны, например, в публикации патента США №2005/0136065.

В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения соединение МИО может представлять собой низкомолекулярный модификатор иммунного ответа (например, с молекулярной массой менее чем приблизительно 1000 Дальтон). В предпочтительных вариантах осуществления соединение МИО представляет собой 4-амино-α,α-диметил-2-этоксиметил-1H-имидазо[4,5-c]хинолин-1-этанол (то есть резиквимод) или его соль.

Если не указано иное, ссылка на соединение может подразумевать соединение в любой фармацевтически приемлемой форме, включая любой изомер (например диастереомер или энантиомер), соль, сольват, полиморф и тому подобное. В частности, если соединение является оптически активным, ссылка на соединение может подразумевать каждый из энантиомеров соединения, а также рацемические смеси энантиомеров.

В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения соединение МИО может представлять собой агонист по меньшей мере одного TLR, такого как, например, по меньшей мере один из TLR7 или TLR8. МИО может также в некоторых случаях представлять собой агонист TLR9. В некоторых вариантах осуществления соединение МИО может представлять собой агонист по меньшей мере одного из TLR7 и TLR8, такой как, например, агонист TLR7/8, избирательный агонист TLR8 или избирательный агонист TLR7.

Используемый в настоящем документе термин «избирательный агонист TLR8» относится к любому соединению, которое действует как агонист TLR8, но не действует как агонист TLR7.

Используемый в настоящем документе термин «избирательный агонист TLR7» относится к соединению, которое действует как агонист TLR7, но не действует как агонист TLR8.

Используемый в настоящем документе термин «агонист TLR7/8» относится к соединению, которое действует как агонист и для TLR7, и для TLR8.

Избирательный агонист TLR8 или избирательный агонист TLR7 может действовать как агонист для указанного TLR и одного или более из TLR1, TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR6, TLR9 или TLR10. Соответственно, при том, что термин «избирательный агонист TLR8» может относиться к соединению, которое действует как агонист для TLR8 и ни для какого другого TLR, он может альтернативно относиться к соединению, которое действует как агонист TLR8 и, например, TLR6. Аналогично, термин «избирательный агонист TLR7» может относиться к соединению, которое действует как агонист для TLR7 и ни для какого другого TLR, но он может альтернативно относиться к соединению, которое действует как агонист TLR7 и, например, TLR6.

Агонизм конкретного соединения в отношении TLR можно оценивать любым подходящим способом. Например, анализы и рекомбинантные линии клеток, подходящие для обнаружения агонизма тестируемого соединения в отношении TLR, описаны, например, в публикациях патентов США №№ US 2004/0014779, US 2004/0132079, US 2004/0162309, US 2004/0171086, US 2004/0191833 и US 2004/0197865.

Независимо от конкретно используемого анализа соединение может быть идентифицировано как агонист конкретного TLR, если проведение анализа с соединением приводит к по меньшей мере превышению пороговой величины для некоторой биологической активности, опосредованной конкретным TLR. И наоборот, можно определять, что соединение не действует как агонист конкретного TLR, если при использовании для проведения анализа, разработанного для обнаружения биологической активности, опосредованной конкретным TLR, соединение не приводит к превышению пороговой величины для биологической активности. Если не указано иное, возрастание биологической активности означает возрастание этой биологической активности по сравнению с той, которая наблюдается в соответствующем контроле. Анализ можно проводить в сочетании с соответствующим контролем или без него. При наличии опыта квалифицированный специалист в данной области может быть достаточно хорошо знаком с конкретным анализом (например, с диапазоном значений, наблюдаемых в соответствующем контроле в условиях конкретного анализа), так что может не быть необходимости в постоянном использовании контроля для определения агонизма соединения в отношении TLR в конкретном анализе.

Точное значение превышения пороговой величины биологической активности, опосредованной TLR, для определения того, является или не является конкретное соединение агонистом конкретного TLR, в данном анализе может варьироваться в зависимости от факторов, известных в данной области, включая, но не ограничиваясь ими, биологическую активность, наблюдаемую в конечной точке анализа, способ, используемый для измерения или обнаружения конечной точки анализа, отношение сигнал-шум в анализе, точность анализа, а также то, используется ли один и тот же анализ для определения агонизма соединения в отношении более чем одного TLR. Соответственно, не имеет смысла указывать, в целом, значение превышения пороговой величины для опосредованной TLR биологической активности, необходимое для идентификации соединения в качестве агониста или не агониста конкретного TLR для всех возможных анализов. Специалисты в данной области, однако, могут легко определять соответствующую пороговую величину с надлежащим учетом таких факторов.

В одном варианте осуществления в анализах с использованием клеток HEK293, трансфицированных экспрессируемым структурным геном TLR, можно использовать в качестве пороговой величины, например, по меньшей мере трехкратное возрастание опосредованной TLR биологической активности (например, активации NFKB), если соединение предоставлено в концентрации, например, от приблизительно 1 мкМ до приблизительно 10 мкМ для идентификации соединения как агониста TLR, трансфицированного в клетку. Однако при определенных обстоятельствах подходящими могут быть разные пороговые величины и/или разные диапазоны концентраций. Также, разные пороговые величины могут быть подходящими для разных анализов.

Предварительная обработка мононуклеарных клеток периферической крови (МКПК) интерфероном II типа, таким как, например, IFN-γ, приводит к значительному возрастанию продуцирования IL-12 клетками МКПК, стимулированными соединениями МИО. Фактически, было показано, что примирование IFN-γ приводит к появлению уровней продуцирования IL-12, сопоставимых с уровнями у здоровых добровольцев, которых подвергали такому же воздействию. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления способы по изобретению могут включать создание контакта популяции клеток с примирующей дозой IFN-γ II типа или введение пациенту примирующей дозы интерферона II типа. Интерферон II типа может быть получен рекомбинантными методами или быть природным.

Способы

В различных вариантах осуществления любого из указанных выше аспектов или любого аспекта изобретения, изложенного в настоящем документе, композицию наносят на по меньшей мере одно CTCL-поражение субъекта. В некоторых вариантах осуществления изобретения введение приводит к по меньшей мере частичному устранению по меньшей мере одному CTCL-поражению, на которую была нанесена композиция. В других вариантах осуществления изобретения введение приводит к по меньшей мере частичному устранению по меньшей мере одного CTCL-поражения, на которую не была нанесена композиция. В других вариантах осуществления изобретения введение приводит к 50% или более устранению всех CTCL-поражений у субъекта. В других вариантах осуществления изобретения количество МИО, введенное субъекту, составляет от приблизительно 1 мкг/кг до приблизительно 10 мг/кг. В других вариантах осуществления изобретения количество МИО, введенное субъекту, составляет от приблизительно 100 нг/поражение до приблизительно 1 мг/поражения. В других вариантах осуществления изобретения композицию вводят субъекту с частотой по меньшей мере один раз в сутки, по меньшей мере один раз в неделю или по меньшей мере один раз в месяц. В других вариантах осуществления изобретения композицию вводят субъекту неоднократно на протяжении по меньшей мере одних суток, по меньшей мере одной недели, по меньшей мере одного месяца или по меньшей мере одного года.

В различных вариантах осуществления любого из указанных выше аспектов или любого аспекта изобретения, изложенного в настоящем документе, введение активирует системный клеточно-опосредованный противоопухолевый иммунный ответ у субъекта. В некоторых вариантах осуществления изобретения введение индуцирует инфильтрацию активированных NK-клеток или активированных T-клеток в по меньшей мере одно поражение у субъекта. В других вариантах осуществления изобретения введение приводит к повышению уровня гранзима или IFNα в по меньшей мере одного поражения у субъекта. В других вариантах осуществления изобретения введение активирует циркулирующие миелоидные дендритные клетки или циркулирующие NK-клетки в крови у субъекта. В других вариантах осуществления изобретения активированные циркулирующие миелоидные дендритные клетки имеют повышенную экспрессию CD80.

Препарат, дозы и введение

Соединение МИО можно предоставлять в препарате, подходящем для контакта с клетками in vitro или для введения субъекту. В одном варианте осуществления препарат вводят субъекту ингаляционным, местным, пероральным, назальным, трансбуккальным, ректальным, плевральным, внутрибрюшинным, вагинальным, внутримышечным, подкожным, чрескожным, эпидуральным, интратекальным или внутривенным путем введения. В другом варианте осуществления препарат вводят местным, внутрикожным, чрескожным или внутриочаговым путем введения. В другом варианте осуществления препарат, содержащий соединение МИО, представляет собой гель.

В одном варианте осуществления субъект является птицей или млекопитающим, включая, но не ограничиваясь ими, мышь, крысу, хорька, морскую свинку, примата, отличного от человека (такого как обезьяна), собаку, кошку, лошадь, корову, свинью и других сельскохозяйственных животных. В другом варианте осуществления субъект является человеком.

В некоторых вариантах осуществления способы по настоящему изобретению включают введение соединения МИО субъекту в препарате, например, с концентрацией от приблизительно 0,0001% до приблизительно 20% (если не указано иное, все процентные доли, приведенные в настоящем документе, указаны по массе относительно общей массы препарата), хотя в некоторых вариантах осуществления соединение МИО можно вводить с использованием препарата, содержащего соединение МИО в концентрации, находящейся за пределами данного диапазона. В некоторых вариантах осуществления способ включает введение субъекту препарата, содержащего от приблизительно 0,01% до приблизительно 1% соединения МИО, например, препарата, содержащего от приблизительно 0,1% до приблизительно 0,5% соединения МИО. В некоторых других вариантах осуществления способы включают введение субъекту препарата, содержащего от приблизительно 0,01% до приблизительно 0,5% соединения МИО, например, от приблизительно 0,01% до приблизительно 0,2% соединения МИО, от приблизительно 0,01% до приблизительно 0,15% соединения МИО, от приблизительно 0,01% до приблизительно 0,1% соединения МИО, от приблизительно 0,025% до приблизительно 0,15% соединения МИО, от приблизительно 0,025% до приблизительно 0,1% соединения МИО, от приблизительно 0,05% до приблизительно 0,15% соединения МИО, от приблизительно 0,05% до приблизительно 0,1% соединения МИО или приблизительно 0,01%, 0,02%, 0,03%, 0,04%, 0,05%, 0,06%, 0,07%, 0,08%, 0,09% или 0,1% соединения МИО.

Количество соединения МИО, эффективное для лечения CTCL, представляет собой количество, достаточное для ограничения, уменьшения, ослабления или замедления прогрессирования или снижения тяжести по меньшей мере одного симптома или клинического признака CTCL. Точное количество соединения МИО для лечения CTCL будет варьироваться в зависимости от факторов, известных в данной области, включая, но не ограничиваясь ими, физическую и химическую природу соединения МИО, природу носителя, запланированный режим дозирования, состояние иммунной системы субъекта (например, подавленное, аномальное, стимулированное), способ введения соединения МИО и виды животных, которым вводят соединение МИО. Соответственно, не имеет смысла указывать конкретное количество, соответствующее количеству соединения МИО, эффективному для лечения CTCL для всех возможных применений. Специалисты в данной области, однако, могут легко определять соответствующее количество с надлежащим учетом таких факторов.

В некоторых вариантах осуществления способы по настоящему изобретению включают введение достаточного количества соединения МИО для обеспечения дозы, например, от приблизительно 100 пг/кг до приблизительно 50 мг/кг массы тела субъекта, хотя в некоторых вариантах осуществления способы можно осуществлять путем введения соединения МИО в дозе, находящейся за пределами данного диапазона. В некоторых из этих вариантов осуществления способ включает введение достаточного количества соединения МИО для обеспечения дозы от приблизительно 10 нг/кг до приблизительно 10 мг/кг массы тела субъекта. В некоторых вариантах осуществления дозу можно рассчитывать, используя значение фактической массы тела, полученное непосредственно перед началом курса лечения.

Площадь поверхности тела (м²) можно рассчитывать перед началом курса лечения, используя метод Дюбуа: м²=(масса кг^0,425×рост см^0,725)×0,007184. В таких вариантах осуществления способы по настоящему изобретению включают введение достаточного количества соединения МИО для обеспечения дозы, например, от приблизительно 0,01 мг/м² до приблизительно 500 мг/м² поверхности тела пациента, хотя в некоторых вариантах осуществления способы можно осуществлять путем введения соединения МИО в дозе, находящейся за пределами данного диапазона. В некоторых из этих вариантов осуществления способ включает введение достаточного количества соединения МИО для обеспечения дозы от приблизительно 0,1 мг/м² до приблизительно 250 мг/м² поверхности тела пациента.

В некоторых вариантах осуществления способы по настоящему изобретению включают введение достаточного количества соединения МИО в поражение для обеспечения дозы на каждое введение, например, от приблизительно 100 нг/поражение до приблизительно 1 мг/поражение субъекта. В некоторых из этих вариантов осуществления способ включает введение достаточного количества соединения МИО для обеспечения дозы на каждое введение, например, от приблизительно 100 мкг/поражение до приблизительно 1 мг/поражение субъекта. В различных вариантах осуществления способ включает введение достаточного количества соединения МИО для обеспечения дозы на каждое введение, например, по меньшей мере приблизительно 100 мкг/поражение, по меньшей мере приблизительно 200 мкг/поражение, по меньшей мере приблизительно 300 мкг/поражение, по меньшей мере приблизительно 400 мкг/поражение, по меньшей мере приблизительно 500 мкг/поражение, по меньшей мере приблизительно 600 мкг/поражение, по меньшей мере приблизительно 700 мкг/поражение, по меньшей мере приблизительно 800 мкг/поражение или по меньшей мере приблизительно 900 мкг/поражение субъекта.

Режим дозирования и продолжительность терапии могут зависеть, по меньшей мере частично, от многих факторов, известных в данной области, включая, но не ограничиваясь ими, физическую и химическую природу соединения МИО, природу носителя, вводимое количество МИО, состояние иммунной системы субъекта (например подавленное, аномальное, стимулированное), способ введения соединения МИО и виды животных, которым вводят соединение МИО. Соответственно, не имеет смысла указывать конкретный режим дозирования и продолжительность терапии, эффективные для лечения CTCL для всех возможных применений. Специалисты в данной области, однако, могут легко определять соответствующий режим дозирования и продолжительность терапии с надлежащим учетом таких факторов.

В некоторых вариантах осуществления соединение МИО можно вводить «по необходимости», то есть только когда появляются симптомы или клинические признаки CTCL. В других вариантах осуществления соединение МИО можно вводить в течение предписанного периода времени, например, по меньшей мере суток, по меньшей мере недели, по меньшей мере месяца или по меньшей мере года. В некоторых вариантах осуществления изобретения соединение МИО можно вводить, например, в пределах от одного введения до введения с частотой по меньшей мере один раз в сутки в течение длительного времени. В некоторых вариантах осуществления соединение МИО можно вводить по меньшей мере приблизительно один раз в сутки, по меньшей мере приблизительно один раз в неделю или по меньшей мере приблизительно один раз в месяц. В некоторых вариантах осуществления соединение МИО можно вводить по меньшей мере приблизительно два раза в сутки, по меньшей мере приблизительно два раза в неделю или по меньшей мере приблизительно два раза в месяц. Введение соединения МИО может быть непрерывным на протяжении предписанного периода времени или, альтернативно, в предписанный период времени можно включать один или более периодов без лечения.

Продолжительность терапии может составлять, например, по меньшей мере одну неделю, по меньшей мере две недели, по меньшей мере три недели, по меньшей мере четыре недели, по меньшей мере пять недель, по меньшей мере шесть недель, по меньшей мере семь недель, по меньшей мере восемь недель, по меньшей мере три месяца, по меньшей мере четыре месяца, по меньшей мере пять месяцев, по меньшей мере шесть месяцев, по меньшей мере семь месяцев, по меньшей мере восемь месяцев, по меньшей мере девять месяцев, по меньшей мере десять месяцев, по меньшей мере одиннадцать месяцев или по меньшей мере один год.

В различных вариантах осуществления соединение МИО можно вводить по меньшей мере один, по меньшей мере два, по меньшей мере три, по меньшей мере четыре, по меньшей мере пять, по меньшей мере шесть или по меньшей мере семь раз в неделю в течение по меньшей мере одной, по меньшей мере двух, по меньшей мере трех, по меньшей мере четырех, по меньшей мере пяти, по меньшей мере шести, по меньшей мере семи, по меньшей мере восьми, по меньшей мере девяти, по меньшей мере десяти, по меньшей мере одиннадцати, по меньшей мере двенадцати, по меньшей мере тринадцати, по меньшей мере четырнадцати, по меньшей мере пятнадцати или по меньшей мере шестнадцати недель, в по меньшей мере одном, по меньшей мере двух, по меньшей мере трех, по меньшей мере четырех, по меньшей мере пяти или по меньшей мере шести циклах без включенного периода без лечения или с включением по меньшей мере одного, по меньшей мере двух, по меньшей мере трех, по меньшей мере четырех, по меньшей мере пяти или по меньшей мере шести периодов без лечения из по меньшей мере одной, по меньшей мере двух, по меньшей мере трех, по меньшей мере четырех, по меньшей мере пяти, по меньшей мере шести, по меньшей мере семи, по меньшей мере восьми, по меньшей мере девяти или по меньшей мере десяти недель. В конкретных вариантах осуществления соединение МИО вводят по меньшей мере один, по меньшей мере два, по меньшей мере три, по меньшей мере четыре, по меньшей мере пять, по меньшей мере шесть раз или по меньшей мере ежедневно в течение каждого из двух 8-недельных циклов с 4-недельным периодом без лечения между 8-недельными циклами.

Фармацевтические композиции, используемые в способах по изобретению, могут быть соответствующим образом разработаны для назального, ингаляционного, перорального, ректального, вагинального, плеврального, внутрибрюшинного, парентерального, местного, чрескожного, легочного, интраназального, трансбуккального, глазного, эпидурального, интратекального, внутривенного или другого пути введения. В предпочтительном варианте осуществления композиции разработаны для местного, внутрикожного, чрескожного или внутриочагового введения.

Пути введения любой из композиций по изобретению включают ингаляционный, пероральный, назальный, ректальный, парентеральный, подъязычный, чрескожный, трансмукозальный (например, подъязычный, лингвальный, (транс)буккальный, (транс)уретральный, вагинальный (например транс- и перивагинальный), (интра)назальный и (транс)ректальный), интравезикулярный, внутрилегочный, интрадуоденальный, внутрижелудочный, интратекальный, эпидуральный, интраплевральный, внутрибрюшинный, подкожный, внутримышечный, внутрикожный, внутриартериальный, внутривенный, внутрибронхиальный, ингаляционный и местный пути введения.

Подходящие композиции и лекарственные формы включают, например, таблетки, капсулы, каплеты, пилюли, гелевые капсулы, лепешки, эмульсии, дисперсии, суспензии, растворы, сиропы, гранулы, шарики, чрескожные пластыри, гели, порошки, драже, жидкие мази, пастилки, кремы, пасты, пластыри, лосьоны, диски, суппозитории и жидкие спреи. Следует понимать, что препараты и композиции, которые можно использовать по настоящему изобретению, не ограничены конкретными препаратами и композициями, описанными в настоящем документе.

Препятствием для местного введения фармацевтических препаратов является роговой слой эпидермиса. Роговой слой представляет собой обладающий высокой устойчивостью слой, состоящий из белка, холестерина, сфинголипидов, свободных жирных кислот и различных других липидов, и включает ороговевшие и живые клетки. Одним из факторов, который ограничивают скорость проникновения (поток) соединения через роговой слой, является количество активного вещества, которое можно нагружать или наносить на поверхность кожи. Чем больше количество активного вещества, которое наносят на единицу площади кожи, тем больше градиент концентрации между поверхностью кожи и нижними слоями кожи, и в свою очередь, больше сила диффузии активного вещества через кожу. Таким образом, в случае препарата, содержащего активное вещество в большей концентрации, с большей вероятностью произойдет проникновение активного вещества через кожу, к тому же проникнет большее его количество и с более постоянной скоростью, чем в случае препарата, имеющего меньшую концентрацию, при прочих равных условиях.

Препараты, подходящие для местного введения, включают, но не ограничиваются ими, жидкость или полужидкие препараты, такие как мази, лосьоны, эмульсии типа масло-в-воде или вода-в-масле, такие как кремы, мази или пасты, а также растворы или суспензии. Местно вводимые препараты могут, например, содержать от приблизительно 1% до приблизительно 10% (по массе) активного ингредиента, хотя концентрация активного ингредиента может быть такой высокой, как предел растворимости активного ингредиента в растворителе. Препараты для местного введения могут дополнительно содержать один или более из дополнительных ингредиентов, описанных в настоящем документе.

Можно использовать усилители проникновения. Эти материалы увеличивают скорость проникновения лекарственных средств через кожу. Типичные в данной области усилители проникновения включают этанол, монолаурат глицерина, PGML (монолаурат полиэтиленгликоля), диметилсульфоксид и тому подобное. Другие усилители проникновения включают олеиновую кислоту, олеиловый спирт, этоксидигликоль, лаурокапрам, алканкарбоновые кислоты, диметилсульфоксид, полярные липиды или N-метил-2-пирролидон.

Один из приемлемых носителей для местной доставки некоторых композиций по изобретению может содержать липосомы. Композиции из липосом и способы их применения известны в данной области, смотрите, например, патент США №6323219.

В альтернативных вариантах осуществления активную при местном нанесении фармацевтическую композицию можно, необязательно, комбинировать с другими ингредиентами, такими как адъюванты, антиоксиданты, хелатирующие агенты, сурфактанты, пенообразователи, увлажняющие средства, эмульгаторы, загустители, буферные средства, консерванты и тому подобное. В другом варианте осуществления усилитель проницаемости или усилитель проникновения включен в композицию и эффективен для усиления чрескожного проникновения активного ингредиента в, и через, роговой слой по сравнению с композицией, не содержащей усилитель проникновения. Специалистам в данной области известны различные усилители проникновения, включая олеиновую кислоту, олеиловый спирт, этоксидигликоль, лаурокапрам, алканкарбоновые кислоты, диметилсульфоксид, полярные липиды или N-метил-2-пирролидон. В другом аспекте композиция может дополнительно содержать гидротропное средство, которое действует, увеличивая нарушение в структуре рогового слоя, и таким образом позволяет увеличивать транспорт через роговой слой. Специалистам в данной области известны различные гидротропные средства, такие как изопропиловый спирт, пропиленгликоль или ксилол сульфонат натрия.

Активную при местном нанесении фармацевтическую композицию следует наносить в количестве, эффективном для вызывания желаемых изменений. Используемый в настоящем документе термин «эффективное количество» должен означать количество, достаточное для покрытия области поверхности кожи, где желательно изменение. Активное соединение должно присутствовать в количестве от приблизительно 0,0001% до приблизительно 15% по массе к объему композиции. Более предпочтительно оно должно присутствовать в количестве от приблизительно 0,0005% до приблизительно 5% композиции, наиболее предпочтительно оно должно присутствовать в количестве от приблизительно 0,001% до приблизительно 1% композиции. Такие соединения могут иметь синтетическое или природное происхождение.

Дополнительные лекарственные формы по настоящему изобретению включают лекарственные формы, описанные в патентах США №№6340475, 6488962, 6451808, 5972389, 5582837 и 5007790. Дополнительные лекарственные формы по настоящему изобретению также включают лекарственные формы, описанные в патентных заявках США №№20030147952, 20030104062, 20030104053, 20030044466, 20030039688 и 20020051820. Дополнительные лекарственные формы по настоящему изобретению также включают лекарственные формы, описанные в заявках PCT №№ WO 03/35041, WO 03/35040, WO 03/35029, WO 03/35177, WO 03/35039, WO 02/96404, WO 02/32416, WO 01/97783, WO 01/56544, WO 01/32217, WO 98/55107, WO 98/11879, WO 97/47285, WO 93/18755 и WO 90/11757.

Препараты с контролируемым высвобождением и системы доставки лекарственных средств

Препараты с контролируемым или замедленным высвобождением фармацевтической композиции по изобретению можно получать с использованием общепринятой технологии. В некоторых случаях используемые лекарственные формы можно предоставлять в виде лекарственных форм с замедленным или контролируемым высвобождением из них одного или более активных ингредиентов, используя, например, гидропропилметилцеллюлозу, другие полимерные матрицы, гели, проницаемые мембраны, осмотические системы, многослойные покрытия, микрочастицы, липосомы или микросферы, либо их сочетание, для обеспечения желаемого профиля высвобождения в различных пропорциях. Подходящие препараты с контролируемым высвобождением, известные специалистам в данной области, включая те, которые описаны в настоящем документе, могут быть легко выбраны для использования с фармацевтическими композициями по изобретению.

Большинство фармацевтических препаратов с контролируемым высвобождением используют с общей целью усовершенствования лекарственной терапии по сравнению с тем, чего удается добиться при использовании их аналогов без контролируемого высвобождения. В идеале, использование оптимально разработанного препарата с контролируемым высвобождением в медицинской практике отличается тем, что минимальное количество субстанции лекарственного средства используют для лечения или контролирования состояния за минимальное количество времени. Преимущества препаратов с контролируемым высвобождением включают продленную активность лекарственного средства, меньшую частоту дозирования и лучшее соблюдение пациентами режима лечения. Кроме того, препараты с контролируемым высвобождением можно использовать для оказания влияния на время начала действия или другие характеристики, такие как уровень в крови лекарственного средства, и таким образом можно оказывать влияние на возникновение побочных эффектов.

Большинство препаратов с контролируемым высвобождением разработаны для начального высвобождения количества лекарственного средства, которое быстро производит желаемый терапевтический эффект, и постепенного и постоянного высвобождения других количеств лекарственного средства для поддержания этого уровня терапевтического эффекта в течение продолжительного периода времени. Для поддержания этого постоянного уровня лекарственного средства в организме лекарственное средство должно высвобождаться из лекарственной формы со скоростью, которая позволит заменять количество лекарственного средства, которое метаболизируется и выводится из организма.

Контролируемое высвобождение активного ингредиента можно стимулировать различными индукторами, например, pH, температурой, ферментами, водой или другими физиологическими условиями или соединениями. В настоящем документе термин «компонент с контролируемым высвобождением» в контексте настоящего изобретения определяют как соединение или соединения, включая, но не ограничиваясь ими, полимеры, полимерные матрицы, гели, проницаемые мембраны, липосомы или микросферы, либо их сочетания, которые способствуют контролируемому высвобождению активного ингредиента.

В некоторых вариантах осуществления препараты по настоящему изобретению могут представлять собой, но не ограничиваются ими, краткосрочные, быстродействующие препараты, а также препараты с контролируемым высвобождением, например замедленным высвобождением, отсроченным высвобождением и пульсирующим высвобождением.

Термин «замедленное высвобождение» используется в его обычном смысле для обозначения препарата лекарственного средства, который обеспечивает постепенное высвобождение лекарственного средства в течение продолжительного периода времени и который может, хотя и не обязательно, обеспечивать практически постоянные уровни лекарственного средства в крови в течение продолжительного периода времени. Период времени может быть продолжительностью в месяц или более, и высвобождение должно продолжаться дольше, чем высвобождение того же количества средства, введенного в болюсной форме.

Для замедленного высвобождения соединения можно формулировать с подходящим полимером или гидрофобным материалом, который придает соединениям свойства замедленного высвобождения. Как таковые, соединения, используемые в способе по изобретению, можно вводить в форме микрочастиц, например, путем инъекции, или в виде пластин или дисков путем имплантации.

В предпочтительном варианте осуществления изобретения соединения по изобретению вводят пациенту отдельно или в сочетании с другим фармацевтическим средством, используя препарат с замедленным высвобождением.

Термин «отсроченное высвобождение» используют в настоящем документе в его обычном смысле для обозначения препарата лекарственного средства, который обеспечивает начальное высвобождение лекарственного средства через некоторое время после введения лекарственного средства и который может, хотя и не обязательно, иметь отсрочку высвобождения, составляющую от приблизительно 10 минут вплоть до приблизительно 24 часов.

Термин «пульсирующее высвобождение» используют в настоящем документе в его обычном смысле для обозначения препарата лекарственного средства, который обеспечивает высвобождение лекарственного средства таким образом, чтобы были достигнуты пульсирующие профили лекарственного средства в плазме после введения лекарственного средства.

Термин «немедленное освобождение» используют в его обычном смысле для обозначения препарата лекарственного средства, который обеспечивает высвобождение лекарственного средства немедленно после введения лекарственного средства.

Используемый в настоящем документе термин «краткосрочное» подразумевает период времени вплоть до, и включая, приблизительно 24 часа, приблизительно 12 часов, приблизительно 8 часов, приблизительно 7 часов, приблизительно 6 часов, приблизительно 5 часов, приблизительно 4 часа, приблизительно 3 часа, приблизительно 2 часа, приблизительно 1 час, приблизительно 40 минут, приблизительно 20 минут или приблизительно 10 минут, а также любой или все полные или частичные интервалы в этих пределах, после введения лекарственного средства.

Используемый в настоящем документе термин «быстродействующее» подразумевает период времени вплоть до, и включая, приблизительно 24 часа, приблизительно 12 часов, приблизительно 8 часов, приблизительно 7 часов, приблизительно 6 часов, приблизительно 5 часов, приблизительно 4 часа, приблизительно 3 часа, приблизительно 2 часа, приблизительно 1 час, приблизительно 40 минут, приблизительно 20 минут или приблизительно 10 минут, а также любой или все полные или частичные интервалы в этих пределах, после введения лекарственного средства.

Специалисты в данной области знают или способны определить с использованием не более чем рутинных экспериментов многочисленные эквиваленты конкретных процедур, вариантов осуществления, заявленных свойств и примеров, описанных в настоящем документе. Такие эквиваленты считаются входящими в объем настоящего изобретения и охвачены прилагаемой формулой изобретения. Например, следует понимать, что модификации условий реакции, включая, но не ограничиваясь ими, время реакции, размер/объем реакционной смеси и экспериментальные реагенты, такие как растворители, катализаторы, давление, атмосферные условия, например, атмосфера азота, и восстанавливающие/окисляющие вещества, с признанными в данной области альтернативами и с использованием не более чем рутинных экспериментов, входят в объем настоящей заявки.

Следует понимать, что, если в настоящем документе приведены значения и диапазоны, все значения и диапазоны, охваченные этими значениями и диапазонами, должны входить в объем настоящего изобретения. Более того, все значения, попадающие в эти диапазоны, а также верхние или нижние пределы диапазона значений также предусмотрены в настоящей заявке.

Следующие примеры дополнительно иллюстрируют аспекты настоящего изобретения. Однако они ни в коей мере не ограничивают идеи или описание настоящего изобретения, изложенного в настоящем документе.

ПРИМЕРЫ

Далее изобретение описано со ссылкой на приведенные ниже примеры. Эти примеры приведены исключительно для целей иллюстрации, и изобретение не ограничено данными примерами, но охватывает все изменения, которые очевидны благодаря идеям, изложенным в настоящем документе.

Пример 1

Как впервые описано в настоящем документе, было начато открытое клиническое испытание фазы I геля резиквимода в различных дозах для пациентов со стадиями IA-IIA CTCL.

Четверым практически невосприимчивым к лечению пациентам (троим на стадии IB; одному на стадии IIA), на которых не подействовало в среднем более шести применяемых ранее методов лечения, включая интерферон, перорально принимаемый бексаротен, PUVA (псорален + УФА излучение), местное применение азотистого иприта, местное применение кармустина, применение сильных местных стероидов и облучение пучком электронов, наносили не более 500 мг/нанесение 0,06% геля резиквимода максимум на четыре поражения-мишени с разной частотой в течение двух восьминедельных циклов с четырехнедельным периодом без лечения между ними.

У всех получавших лечение пациентов наблюдалось исчезновение обработанных поражений-мишеней, а также улучшение состояния необработанных удаленных поражений и уменьшение зуда.

Все пациенты испытывали в течение нескольких дней небольшую лихорадку после начала применения лекарственного средства. Предварительные результаты показали заметный внутриочаговый приток активированных цитотоксических T-клеток и NK-клеток, проявляющих повышенную экспрессию гранзима и интерферона-гамма. Свидетельства нарастания системного иммунного ответа включали прогрессивную активацию циркулирующих миелоидных дендритных клеток и NK-клеток.

Результаты испытания фазы I показали, что гель резиквимода является эффективным лекарственным средством для CTCL с мощными стимулирующими иммунитет свойствами. Сообщаемые в настоящем документе результаты свидетельствуют о том, что резиквимод индуцирует клинический ответ высокой степени как в отношении обработанных, так и удаленных необработанных поражений, и обладает способностью значительно стимулировать системный клеточный иммунитет, направленный против CTCL. Эти выводы важны не только для лечения CTCL, но также и для лечения других видов рака кожи.

Пример 2

Испытание фазы I, описанное в примере 1, проводили в более широком масштабе, с участием в общей сложности десяти пациентов (все из которых не реагировали по меньшей мере на два применяемых ранее метода лечения, и большинство из которых не реагировали на пять или более применяемых ранее видов терапии). Восемь из этих пациентов получали лечение 0,06% гелем резиквимода, при этом остальные два пациента получали лечение 0,03% гелем резиквимода.

Схема завершающего исследования предусматривала в общей сложности вовлечение 16-20 пациентов, при этом первая половина группы получала местное лечение 0,06% гелем и вторая половина группы получала местное лечение 0,03% гелем.

В соответствии со схемой исследования разрешалась обработка только четырех-пяти поражений-мишеней в течение восьми недель, за которыми следовали четыре недели без лечения и другие восемь недель терапии. Окончательную оценку проводили через четыре недели после терапии.

Исходные данные были доступны для девяти пациентов.

Восемь из этих девяти пациентов демонстрировали значительный ответ на лечение, что измеряли по уменьшению поражений. Из этих восьми пациентов все демонстрировали значительный клинический ответ (определяемый как более чем 50% уменьшение степени поражения кожи поражениями Т-клеточной лимфомы кожи), и у двоих пациентов наблюдался полный клинический ответ (определяемый как избавление от всех признаков заболевания на коже и в других участках тела). На фигуре 1 представлены фотографии одного пациента в испытании фазы I. У этого пациента, который был невосприимчив к предыдущим видам лечения, наблюдали исчезновение кожных поражений к неделе 8 терапии.

Это является неожиданно высокой степенью ответа, который рассматривается в данной области как беспрецедентный, поскольку большинство средств местного действия вызывают степень ответа приблизительно 50% или менее. Настоящее лечение хорошо переносилось без каких-либо серьезных неблагоприятных эффектов; единственной незначительной проблемой было небольшое раздражение кожи, вызванное нанесением геля.

Анализ результатов испытания показал, что имела место заметная активация противоопухолевых иммунных ответов непосредственно в участках поражений, обработанных гелем местного действия. Этот ответ включал инфильтрацию поражений в процессе лечения высокоактивированными клетками - естественными киллерами, а также активированными CD8+ цитотоксическими T-клетками. Как NK-клетки, так и CD8+ T-клетки, проникающие в поражения в процессе лечения, экспрессировали на высоком уровне интерферон-гамма, гранзим и перфорин (причем гранзим и перфорин являются цитолитическими ферментами, необходимыми для уничтожения клеток опухолей).

Анализ результатов испытания также свидетельствовал об активации важных иммунных клеток в периферической крови пациентов, включая миелоидные дендритные клетки (о чем свидетельствовала повышенная экспрессия костимулирующей молекулы CD80) и циркулирующие клетки - естественные киллеры (о чем свидетельствовала повышенная экспрессия CD107 на CD56+ NK-клетках).

Фигура 2 иллюстрирует повышенную экспрессию CD80 на CD11c+ миелоидных дендритных клетках в периферической крови пациентов, указывающую на активацию этих клеток во время первых восьми недель терапии и вновь после четырехнедельного перерыва в лечении, который заканчивался в неделю 12.

Полученные результаты до сих пор являются беспрецедентными, с учетом предыдущих менее обнадеживающих данных по кожной терапии CTCL-поражений в реальной клинической практике. Испытание резиквимода для CTCL продемонстрировало, что местное лечение хорошо переносится, с легкостью соблюдается и вызывает лишь кожную токсичность I степени. Степени клинического ответа были высокими как для обработанных, так и для необработанных поражений, у невосприимчивых к лечению пациентов с CTCL на ранней стадии. Кроме того, исследования показали системную иммунную активацию у пациентов, получавших лечение гелем резиквимода.

Содержание каждого патента, патентной заявки и публикации, процитированных в настоящем документе, включено в настоящий документ посредством ссылки в полном объеме. При том, что настоящее изобретение раскрыто со ссылкой на конкретные варианты осуществления, очевидно, что другие варианты осуществления и вариации настоящего изобретения могут быть разработаны специалистами в данной области без отклонения от истинной сущности и объема изобретения. Прилагаемая формула изобретения предусмотрена для включения всех таких вариантов осуществления и эквивалентных вариаций.

Claims

1. Способ лечения или снижения тяжести Т-клеточной лимфомы кожи (CTCL) у субъекта, который нуждается в этом, включающий местное введение субъекту терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции, содержащей 0,03%-0,06% (по массе) 4-амино-α,α-диметил-2-этоксиметил-1H-имидазо[4,5-c]хинолин-1-этанола (резиквимода) или его фармацевтически приемлемой соли, в котором композицию наносят на по меньшей мере одно CTCL-поражение субъекта.

2. Способ по п.1, в котором композиция представляет собой гель.

3. Способ по п.1, в котором количество 4-амино-α,α-диметил-2-этоксиметил-1H-имидазо[4,5-c]хинолин-1-этанола (резиквимода) или его фармацевтически приемлемой соли, введенное субъекту, составляет от приблизительно 1 мкг/кг до приблизительно 10 мг/кг.

4. Способ по п.3, в котором количество 4-амино-α,α-диметил-2-этоксиметил-1H-имидазо[4,5-c]хинолин-1-этанола (резиквимода) или его фармацевтически приемлемой соли, введенное субъекту, составляет от приблизительно 100 нг/поражение до приблизительно 1 мг/поражение.

5. Способ по п.1, в котором композицию вводят субъекту с частотой по меньшей мере один раз в сутки, по меньшей мере один раз в неделю или по меньшей мере один раз в месяц.

6. Способ по п.1, в котором композицию вводят субъекту неоднократно на протяжении по меньшей мере одних суток, по меньшей мере одной недели, по меньшей мере одного месяца или по меньшей мере одного года.

7. Способ по п.1, в котором введение активирует системный клеточно-опосредованный противоопухолевый иммунный ответ у субъекта.

8. Способ по п.1, в котором композицию вводят субъекту в течение первого периода лечения и в течение второго периода лечения и в котором первый период лечения и второй период лечения разделены периодом без лечения.

9. Способ по п.8, в котором композицию вводят субъекту в течение первого периода лечения с частотой по меньшей мере один раз в сутки, по меньшей мере один раз в неделю или по меньшей мере один раз в месяц.

10. Способ по п.8, в котором гель вводят субъекту в течение второго периода лечения с частотой по меньшей мере один раз в сутки, по меньшей мере один раз в неделю или по меньшей мере один раз в месяц.

11. Способ по п.8, в котором первый период лечения составляет по меньшей мере приблизительно две недели, по меньшей мере приблизительно три недели, по меньшей мере приблизительно четыре недели, по меньшей мере приблизительно пять недель, по меньшей мере приблизительно шесть недель, по меньшей мере приблизительно семь недель или по меньшей мере приблизительно восемь недель.

12. Способ по п.8, в котором второй период лечения составляет по меньшей мере приблизительно две недели, по меньшей мере приблизительно три недели, по меньшей мере приблизительно четыре недели, по меньшей мере приблизительно пять недель, по меньшей мере приблизительно шесть недель, по меньшей мере приблизительно семь недель или по меньшей мере приблизительно восемь недель.

13. Способ по п.8, в котором период без лечения, разделяющий первый период лечения и второй период лечения, составляет по меньшей мере приблизительно одну неделю, по меньшей мере приблизительно две недели, по меньшей мере приблизительно три недели или по меньшей мере приблизительно четыре недели.

14. Способ по п.1, в котором субъект является млекопитающим.

15. Способ по п.14, в котором млекопитающее является человеком.

16. Способ усиления клеточно-опосредованного иммунного ответа у субъекта, страдающего CTCL, включающий местное введение субъекту терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции, содержащей 0,03%-0,06% (по массе) 4-амино-α,α-диметил-2-этоксиметил-1H-имидазо[4,5-c]хинолин-1-этанола (резиквимода) или его фармацевтически приемлемой соли, в котором композицию наносят на по меньшей мере одно CTCL-поражение субъекта.

17. Способ по п.16, в котором композицию вводят субъекту с частотой по меньшей мере один раз в сутки, по меньшей мере один раз в неделю или по меньшей мере один раз в месяц.

18. Способ по п.16, в котором композицию вводят субъекту в течение первого периода лечения и в течение второго периода лечения и в котором первый период лечения и второй период лечения разделены периодом без лечения.

19. Способ по п.16, в котором субъект является млекопитающим.

20. Способ по п.19, в котором млекопитающее является человеком.