RU2666945C2 - Способ оценки агрегационной активности тромбоцитов - Google Patents
Способ оценки агрегационной активности тромбоцитов Download PDFInfo
- Publication number
- RU2666945C2 RU2666945C2 RU2016150612A RU2016150612A RU2666945C2 RU 2666945 C2 RU2666945 C2 RU 2666945C2 RU 2016150612 A RU2016150612 A RU 2016150612A RU 2016150612 A RU2016150612 A RU 2016150612A RU 2666945 C2 RU2666945 C2 RU 2666945C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- area
- aggregation
- aggregation activity
- platelet aggregation
- sector
- Prior art date
Links
- 230000000694 effects Effects 0.000 title claims abstract description 58
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 title claims abstract description 34
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 title claims abstract description 33
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 29
- 210000001772 blood platelet Anatomy 0.000 title abstract 6
- 208000010110 spontaneous platelet aggregation Diseases 0.000 claims abstract description 49
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims abstract description 35
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims abstract description 35
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims abstract description 17
- 239000000411 inducer Substances 0.000 claims abstract description 16
- 230000007423 decrease Effects 0.000 claims abstract description 10
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 6
- 229940127218 antiplatelet drug Drugs 0.000 claims abstract description 5
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims abstract description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 5
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 abstract description 3
- 238000010241 blood sampling Methods 0.000 abstract description 2
- 238000011158 quantitative evaluation Methods 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 239000005552 B01AC04 - Clopidogrel Substances 0.000 description 14
- GKTWGGQPFAXNFI-HNNXBMFYSA-N clopidogrel Chemical compound C1([C@H](N2CC=3C=CSC=3CC2)C(=O)OC)=CC=CC=C1Cl GKTWGGQPFAXNFI-HNNXBMFYSA-N 0.000 description 14
- 229960003009 clopidogrel Drugs 0.000 description 14
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 7
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 5
- 210000004623 platelet-rich plasma Anatomy 0.000 description 5
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 4
- 238000013176 antiplatelet therapy Methods 0.000 description 4
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 4
- 230000008859 change Effects 0.000 description 4
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 4
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 4
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 3
- 229920001296 polysiloxane Polymers 0.000 description 3
- 230000004044 response Effects 0.000 description 3
- 230000001732 thrombotic effect Effects 0.000 description 3
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 3
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 2
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 description 2
- UCTWMZQNUQWSLP-UHFFFAOYSA-N adrenaline Chemical compound CNCC(O)C1=CC=C(O)C(O)=C1 UCTWMZQNUQWSLP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- YZXBAPSDXZZRGB-DOFZRALJSA-N arachidonic acid Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCC(O)=O YZXBAPSDXZZRGB-DOFZRALJSA-N 0.000 description 2
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 2
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 2
- 230000003205 diastolic effect Effects 0.000 description 2
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 2
- 230000010118 platelet activation Effects 0.000 description 2
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 2
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 2
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 2
- 230000035488 systolic blood pressure Effects 0.000 description 2
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 description 2
- TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoserine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OC[C@H](N)C(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 0.000 description 1
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 1
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 1
- 102000002045 Endothelin Human genes 0.000 description 1
- 108050009340 Endothelin Proteins 0.000 description 1
- ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylserin Natural products OC(=O)C(N)COP(O)(=O)OCC(O)CO ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000621371 Homo sapiens WD and tetratricopeptide repeats protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000892274 Human adenovirus C serotype 2 Adenovirus death protein Proteins 0.000 description 1
- 206010020608 Hypercoagulation Diseases 0.000 description 1
- 102100025306 Integrin alpha-IIb Human genes 0.000 description 1
- 101710149643 Integrin alpha-IIb Proteins 0.000 description 1
- 108010035030 Platelet Membrane Glycoprotein IIb Proteins 0.000 description 1
- 101000820656 Rattus norvegicus Seminal vesicle secretory protein 4 Proteins 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 229940114079 arachidonic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000021342 arachidonic acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 229940082638 cardiac stimulant phosphodiesterase inhibitors Drugs 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 1
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 238000002477 conductometry Methods 0.000 description 1
- 239000003260 cyclooxygenase 1 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000005868 electrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- ZUBDGKVDJUIMQQ-UBFCDGJISA-N endothelin-1 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(O)=O)NC(=O)[C@H]1NC(=O)[C@H](CC=2C=CC=CC=2)NC(=O)[C@@H](CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H]2CSSC[C@@H](C(N[C@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N2)=O)NC(=O)[C@@H](CO)NC(=O)[C@H](N)CSSC1)C1=CNC=N1 ZUBDGKVDJUIMQQ-UBFCDGJISA-N 0.000 description 1
- 210000003038 endothelium Anatomy 0.000 description 1
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 1
- 208000019622 heart disease Diseases 0.000 description 1
- 230000023597 hemostasis Effects 0.000 description 1
- 230000013632 homeostatic process Effects 0.000 description 1
- 230000003027 hypercoagulation Effects 0.000 description 1
- 230000000023 hypocoagulative effect Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 239000002571 phosphodiesterase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 239000000106 platelet aggregation inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000010287 polarization Effects 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 239000002464 receptor antagonist Substances 0.000 description 1
- 229940044551 receptor antagonist Drugs 0.000 description 1
- 230000004895 regional blood flow Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 238000009097 single-agent therapy Methods 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- DSNBHJFQCNUKMA-SCKDECHMSA-N thromboxane A2 Chemical compound OC(=O)CCC\C=C/C[C@@H]1[C@@H](/C=C/[C@@H](O)CCCCC)O[C@@H]2O[C@H]1C2 DSNBHJFQCNUKMA-SCKDECHMSA-N 0.000 description 1
- 238000002834 transmittance Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/86—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood coagulating time or factors, or their receptors
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области медицины, а именно к области лабораторной диагностики, кардиологии, онкологии, терапии, и может быть использовано для оценки агрегационной активности тромбоцитов. Способ включает забор пробы крови, добавление индуктора агрегации к исследуемой пробе с последующим определением величины агрегации, тест проводят с цельной стабилизированной кровью с помощью низкочастотной пьезотромбоэластографии (НПТЭГ), для этого в кювету с пробой крови в объеме 0,38 мл добавляют 0,07 мл индуктора агрегации тромбоцитов АДФ, затем в течение 10 минут регистрируют кривую интенсивности агрегации тромбоцитов, причем запись проводят дважды: исходную до назначения препарата и контрольную после приема антиагрегантного препарата, далее определяют площадь сектора (S), ограниченного с одной стороны кривой, с другой - осью абсциссы. При превышении значения площади (S) относительно площади сектора (S), рассчитанной по референтным значениям контрольной группы условно здоровых лиц, равной 200-550 о.е., определяют повышение агрегационной активности тромбоцитов, а при снижении значения площади сектора (S) относительно площади сектора (S) определяют снижение агрегационной активности тромбоцитов. Изобретение обеспечивает сокращение времени подготовки образца крови для тестирования, повышение точности способа, возможность количественной оценки агрегационной активности тромбоцитов. 5 ил., 1 табл., 2 пр.
Description
Изобретение относится к области медицины, а именно к области лабораторной диагностики, кардиологии, онкологии, терапии, и может быть использовано для оценки агрегационной активности тромбоцитов.
Тромбоциты выполняют множество функций в поддержании гомеостаза организма, однако основной их функцией выступает участие в гемостазе, обусловленное ангиотрофической и адгезивно-агрегационной функциями [Балуда В.П. и др., 1980].
Под воздействием факторов, стимулирующих активацию тромбоцитов (тромбин, коллаген, АДФ, адреналин и т.д.), происходит их активация, функционально проявляющаяся изменением формы и экспонированием вторичных рецепторов, ключевыми из которых является GP IIb/IIIa. Помимо этого в процессе активации тромбоцита происходит экстернализация фосфатидилсерина с внутреннего слоя мембраны на наружный, результатом перемещения которого служит образование поверхности, на которой протекают гемокоагуляционные реакции [Кузник Б.И., 2010]. Являясь одним из основных составляющих тромбинового каскада, в условиях повышения агрегационной активности тромбоциты становятся первичным звеном, инициирующим фибриногенез. Это происходит за счет ряда причин, среди которых: изменение регионального кровотока, снижение тромборезистентности эндотелия (увеличение уровня эндотелина, тромбоксана А2 и т.д.) и др. [Бойцов С.А. 2004; Мазуров А.В., 2011].
В связи с вышеописанным, для предотвращения тромботических осложнений как при кардиологических заболеваниях, так и при других нозологиях, большое значение уделяется антиагрегантной терапии, составляющими которой являются ингибиторы ЦОГ-1 тромбоцитов, блокаторы P2Y12-рецепторов, антагонисты GPIIb/IIIa-рецепторов, ингибиторы фосфодиэстеразы и т.д., применяемые в виде монотерапии, а также в виде двойной антиагрегантной терапии. Множество из проводимых исследований выявляют не только резистентность к получаемой антиагрегантной терапии, но также и извращенный ответ, проявляющийся повышением функциональной активности форменных элементов крови после приема антиагреганта.
Вышеперечисленное диктует необходимость мониторинга эффективности применения антиагрегантов для профилактики развития тромботических осложнений на фоне длительной, а зачастую пожизненной терапии.
Известен способ определения агрегационной активности тромбоцитов методом низкочастотной контактной кондуктометрии. Суть метода заключается в измерении электропроводности цельной венозной нестабилизированной крови пропусканием через нее переменным током с частотой 200 Гц. Пробу крови помещают в термостатированную ячейку, погружают в нее пластинчатые электроды, соединенные с частотным генератором и блоком регистрации. За счет динамического изменения электрического сопротивления исследуемого образца крови, возникающего при коагуляции, происходит изменение проводимости, по которому оценивают наличие гипо- или гиперкоагуляционного состояния [Патент РФ №2282855, опубл. 27.08.2006]. Однако данный метод обладает рядом недостатков, среди которых: дороговизна измерительной ячейки, возникновение поляризационных явлений, приводящих к погрешности, и разрушение электродов за счет электролиза, возникающего за счет прямого контакта электродов с исследуемым образцом.
Наиболее близким к предлагаемому является способ оценки агрегации тромбоцитов турбидиметрическим методом (по Борну), на данный момент времени считающийся «золотым стандартом». Данный метод заключается в регистрации изменений светопропускания обогащенной тромбоцитами плазмы, произошедших в результате добавления индуктора агрегации тромбоцитов (АДФ, арахидоновая кислота и др.). При этом агрегация тромбоцитов отображается графически регистрируемым снижением оптической плотности и повышением светопропускания плазмой крови [Harrison Р. Platelet function analysis // Blood Reviews, 2005. Vol. 19. P. 111-123].
Основными недостатками данного метода являются: многоэтапный длительный преаналитический период пробоподготовки [Moffat K.A., Hayward С.Р., Raby A. Platelet Function Testing Performed by Light Transmittance Aggregometry // Hematology-coagulation. 2009. C. 1-8.], недостаточная точность измерений, обусловленная тем, что используют обогащенную тромбоцитами плазму, что исключает присутствие физиологического окружения тромбоцитов другими форменными элементами крови и т.д. в исследуемом образце, при этом не учитывается вклад, который вносит их взаимодействие с тромбоцитами. Также недостатком является невозможность осуществления количественной оценки агрегационной активности тромбоцитов.
Новым техническим результатом изобретения является сокращение времени подготовки образца крови для тестирования (отсутствие многоэтапного длительного преаналитического периода пробоподготовки), повышение точности способа за счет сохранения физиологического окружения тромбоцитов, возможность количественной оценки агрегационной активности тромбоцитов.
Для достижения нового технического результата в способе оценки агрегационной активности тромбоцитов, включающем забор пробы крови, добавление индуктора агрегации к исследуемой пробе с последующим определением величины агрегации, отличающемся тем, что тест проводят с цельной стабилизированной кровью с помощью низкочастотной пьезотромбоэластографии, для этого в кювету с пробой крови в объеме 0,38 мл добавляют 0,07 мл индуктора агрегации тромбоцитов, затем в течение 10 минут регистрируют кривую интенсивности агрегации тромбоцитов, далее определяют площадь сектора (S), ограниченного с одной стороны кривой, с другой - осью абсциссы, и при превышении значения площади (S) относительно площади сектора (S1), рассчитанного по референтным значениям контрольной группы условно здоровых лиц, определяют повышение агрегационной активности тромбоцитов, а при снижении значения площади (S2) относительно площади сектора (S1) определяют снижение агрегационной активности тромбоцитов.
Способ осуществляют следующим образом. У пациента из кубитальной вены, без наложения жгута, трехкомпонентным силиконированным шприцем, объемом 1 мл, производят забор цельной венозной крови. В течение 10 секунд от момента забора, кровь помещают в кювету, располагающуюся в термостате аппаратно-программного комплекса для клинико-диагностических исследований реологических свойств крови (АРП-01 М «Меднорд», Россия. Регистрационное свидетельство № ФСР 2010/09767 от 30 декабря 2010 года). В кювету помещают кровь в объеме 0,38 мл и добавляют 0,07 мл индуктора агрегации тромбоцитов. Интенсивность агрегации тромбоцитов регистрируют в виде кривой на экране персонального компьютера в течение 10 минут, под которой рассчитывают площадь (S). С помощью программы ИКС-ГЕМО 3-М и при превышении значения площади (S) относительно площади сектора (S1), рассчитанной по референтным значениям контрольной группы условно здоровых лиц, определяют повышение агрегационной активности тромбоцитов, а при снижении значения площади (S2) относительно площади сектора (S1) определяют снижение агрегационной активности тромбоцитов.
Способ основан на результатах анализа данных клинических исследований, проведенных у двух групп. Первую группу составили пациенты, нуждающиеся в назначении антиагрегантной терапии (n=10), вторую группу составили условно здоровые добровольцы (n=10), чьи показатели площади (S1) были определены как референтные значения агрегационной активности тромбоцитов, при наличии информированного согласия исследуемых обеих групп. У пациентов 1-ой группы была проведена сравнительная оценка динамики показателей «S» и «степень агрегации». Определение показателя «степень агрегации» производили методом исследования агрегации тромбоцитов по Борну на анализаторе агрегации «АЛАТ-2» БИОЛА (НПФ БИОЛА, Россия). Запись НПТЭГ проводилась дважды - исходная запись, до назначения препарата, и контрольная, после приема антиагрегантного препарата. Количественные данные представлены в виде Me [LQ; UQ], где Me - медиана, LQ - нижний квартиль, UQ - верхний квартиль, р - достигнутый уровень (Табл. 1 Приложения).
Референтные значения агрегационной активности тромбоцитов условно здоровых добровольцев, выражаемые показателем S1, по результатам проведенных исследований составили: 324 о.е. [200; 550].
Пример №1
20.07.2016. Здоровый доброволец Д., 36 лет. После получения информированного согласия произведена оценка агрегационной активности тромбоцитов до и после приема клопидогрела (150 мг).
10:00. Проведено обследование: уровень систолического артериального давления - 120, диастолического - 85 мм рт.ст, частота сердечных сокращений 71/мин.
Из кубитальной вены правой руки, без наложения жгута, с использованием иглы от трехкомпонентного силиконированного шприца, производили забор венозной крови в две одноразовые стерильные вакуумные пробирки для взятия крови (BD Vacutainer®), объемом 4,5 мл каждая, содержащие буферный раствор цитрата натрия (соотношение кровь:цитрат 9:1). 0,38 мл крови, взятых из первой пробирки, помещали в стандартную кювету, объемом 0,45 мл, находящуюся в термостате АРП-01 М «Меднорд». После этого в кювету добавляли индуктор АДФ, объемом 0,07 мл в концентрации 2,5×10-5 моль/л. На фиг. 1 представлена НПТЭГ, отображающая исходную агрегационную активность форменных элементов крови. Значение агрегационной активности тромбоцитов, определяемое методом НПТЭГ, находилось в пределах референтных значений (S=324 о.е.).
Параллельно с проводимым исследованием НПТЭГ проводили исследование агрегационной активности по методу Борна с использованием индуктора АДФ в концентрации 2,5×10-5 моль/л на обогащенной тромбоцитами плазме. Для получения обогащенной тромбоцитами плазмы использовали центрифугу LABOFUGE 200 (Германия). Содержимое второй пробирки центрифугировали на 3500 оборотах в течение 6 минут. После этого производили запись агрегатограммы с использованием агрегометра Биола АЛАТ-2 (Россия). На фиг. 2 представлена исходная агрегатограмма. Агрегационная активность тромбоцитов находилась в пределах референтных значений (степень агрегации 25%)
10:30. Прием 150 мг клопидогрела.
13:00. По стандартной методике производили забор крови венозной крови в две одноразовые стерильные вакуумные пробирки для взятия крови (BD Vacutainer®), объемом 4,5 мл каждая, содержащие буферный раствор цитрата натрия (соотношение кровь:цитрат 9:1). 0,38 мл крови, взятых из первой пробирки, помещали в стандартную кювету, объемом 0,45 мл, находящуюся в термостате АРП-01М «Меднорд». После этого в кювету добавляли индуктор АДФ, объемом 0,07 мл в концентрации 2,5×10-5 моль/л. На фиг. 1 приведена НПТЭГ после проведения пробы. Агрегационная активность тромбоцитов (S) составила 56,7 о.е. Параллельно по вышеописанной методике проводили исследование агрегационной активности тромбоцитов с индуктором АДФ в концентрации 2,5×10-5 моль/л на обогащенной тромбоцитами плазме (Биола АЛАТ-2, Россия). На фиг. 2 представлена агрегатограмма после приема 150 мг клопидогрела. Агрегационная активность тромбоцитов при проведении индуцированной агрегации по Борну составила 5%.
В ответ на фармакологическую нагрузку (Клопидогрел, 150 мг) регистрировали снижение агрегационной активности тромбоцитов (S) на 82,5%. Агрегационная активность тромбоцитов по данным агрегатометрии (по Борну) после приема 150 мг клопидогрела снизилась на 80%.
Вывод: оценка изменения агрегационной активности тромбоцитов, при сохранении их физиологического окружения, с помощью предлагаемого способа демонстрирует возможность его применения в клинической практике. При этом отпадает необходимость длительного этапа пробоподготовки с целью получения плазмы, насыщенной тромбоцитами, что существенно способствует оптимизации временного ресурса теста.
Пример №2
21.07.2016. Здоровый доброволец Л. 27 лет. После получения информированного согласия произведена оценка агрегационной активности тромбоцитов до и после приема клопидогрела (150 мг).
10:00. Проведено обследование: уровень систолического артериального давления - 118, диастолического - 75 мм рт.ст, частота сердечных сокращений 84/мин. Из кубитальной вены правой руки, без наложения жгута, с использованием иглы от трехкомпонентного силиконированного шприца, производили забор венозной крови в две одноразовые стерильные вакуумные пробирки для взятия крови (BD Vacutainer®), объемом 4,5 мл каждая, содержащие буферный раствор цитрата натрия (соотношение кровь:цитрат 9:1). 0,38 мл крови, взятых из первой пробирки, помещали в кювету, объемом 0,45 мл, находящуюся в термостате АРП-01 М «Меднорд». После этого в кювету добавляли индуктор АДФ, объемом 0,07 мл в концентрации 2,5×10-5 моль/л. На фиг. 3 представлена НПТЭГ, отображающая исходную агрегационную активность форменных элементов крови. Значение агрегационной активности тромбоцитов, определяемое методом НПТЭГ, находилось в пределах референтных значений условно здоровых лиц (S=200 о.е.). Параллельно, по вышеописанной методике проводили исследование агрегационной активности тромбоцитов с индуктором АДФ в концентрации 2,5×10-5 моль/л на обогащенной тромбоцитами плазме (Биола АЛАТ-2, Россия). На фиг. 4 представлена исходная агрегатограмма. Агрегационная активность тромбоцитов достигла 60%.
10:30. Прием 150 мг клопидогрела.
13:00. По стандартной методике производили забор крови венозной крови в две одноразовые стерильные вакуумные пробирки для взятия крови (BD Vacutainer®), объемом 4,5 мл каждая, содержащие буферный раствор цитрата натрия (соотношение кровь:цитрат 9:1). 0,38 мл крови, взятых из первой пробирки, помещали в стандартную кювету, объемом 0,45 мл, находящуюся в термостате АРП-01М «Меднорд». После этого в кювету добавляли индуктор АДФ, объемом 0,07 мл в концентрации 2,5×10-5 моль/л. На фиг. 3 приведена НПТЭГ после проведения пробы. Агрегационная активность тромбоцитов (S) составила 35 о.е. Параллельно по вышеописанной методике проводили исследование агрегационной активности тромбоцитов с индуктором АДФ в концентрации 2,5×10-5 моль/л на обогащенной тромбоцитами плазме (Биола АЛАТ-2, Россия). На фиг. 4 представлена агрегатограмма после приема 150 мг клопидогрела. Агрегационная активность тромбоцитов при проведении индуцированной агрегации по Борну составила 0%.
В ответ на фармакологическую нагрузку (Клопидогрел, 150 мг) регистрировали снижение агрегационной активности тромбоцитов (S) на 82,5%. Агрегационная активность тромбоцитов по данным агрегатометрии (по Борну) после приема 150 мг клопидогрела снизилась на 100%.
Вывод: оценка агрегационной активности тромбоцитов с помощью НПТЭГ с использованием пробы стабилизированной крови, в которой сохранено физиологическое окружение тромбоцитов, позволяет выполнить более объективную оценку их агрегационной активности, что открывает возможность применения предлагаемого способа в клинической практике. Также во время пробоподготовки для получения плазмы, обогащенной тромбоцитами по способу Борна, оказывается физическое воздействие на тромбоциты, что также снижает точность измерений и увеличивает его временной ресурс.
Приложение
Таблица 1. Показатель S1 здоровых добровольцев, рассчитанный методом НПТЭГ, в о.е.
Фиг. 1. Измерение агрегационной активности тромбоцитов с помощью НПТЭГ (Пример 1):
А1 - кривая исходного уровня агрегационной активности тромбоцитов;
В1 - кривая уровня агрегационной активности тромбоцитов через 2,5 часа от момента приема 150 мг клопидогрела.
Фиг. 2. Измерение агрегационной активности тромбоцитов по методу Борна (Пример 1):
А2 - кривая исходного уровня агрегационной активности тромбоцитов;
В2 - кривая уровня агрегационной активности тромбоцитов через 2,5 часа от момента приема 150 мг клопидогрела.
Фиг. 3. Измерение агрегационной активности тромбоцитов с помощью НПТЭГ (Пример 2):
A3 - кривая уровня агрегационной активности тромбоцитов;
B3 - кривая уровня агрегационной активности тромбоцитов через 2,5 часа от момента приема 150 мг клопидогрела.
Фиг. 4. Измерение агрегации тромбоцитов по методу Борна (Пример 2):
A4 - кривая исходного уровня агрегационной активности тромбоцитов;
В4-кривая уровня агрегационной активности тромбоцитов через 2,5 часа от момента приема 150 мг клопидогрела.
Фиг. 5. Измерение активности агрегации по предлагаемому способу (общая схема): (S) площадь сектора ОАХ, ограниченного с одной стороны кривой А, рассчитанной по показателям, характеризующим повышенную активность агрегации тромбоцитов, а с другой - осью абсциссы ОХ;
(S1) площадь сектора ОА11Х, ограниченного с одной стороны кривой А11, рассчитанной по референтным значениям контрольной группы условно здоровых лиц, а с другой - осью абсциссы ОХ;
(S2) площадь сектора ОА12Х, ограниченного с одной стороны кривой А12, рассчитанной по показателям, характеризующим пониженную активность агрегации тромбоцитов, а с другой - осью абсциссы ОХ.
Claims (1)
- Способ оценки агрегационной активности тромбоцитов, включающий забор пробы крови, добавление индуктора агрегации к исследуемой пробе с последующим определением величины агрегации, отличающийся тем, что тест проводят с цельной стабилизированной кровью с помощью низкочастотной пьезотромбоэластографии (НПТЭГ), для этого в кювету с пробой крови в объеме 0,38 мл добавляют 0,07 мл индуктора агрегации тромбоцитов АДФ, затем в течение 10 минут регистрируют кривую интенсивности агрегации тромбоцитов, причем запись проводят дважды: исходную до назначения препарата и контрольную после приема антиагрегантного препарата, далее определяют площадь сектора (S), ограниченного с одной стороны кривой, с другой - осью абсциссы, и при превышении значения площади (S) относительно площади сектора (S1), рассчитанной по референтным значениям контрольной группы условно здоровых лиц, равной 200-550 о.е., определяют повышение агрегационной активности тромбоцитов, а при снижении значения площади сектора (S) относительно площади сектора (S1) определяют снижение агрегационной активности тромбоцитов.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2016150612A RU2666945C2 (ru) | 2016-12-21 | 2016-12-21 | Способ оценки агрегационной активности тромбоцитов |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2016150612A RU2666945C2 (ru) | 2016-12-21 | 2016-12-21 | Способ оценки агрегационной активности тромбоцитов |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2016150612A RU2016150612A (ru) | 2018-06-22 |
RU2016150612A3 RU2016150612A3 (ru) | 2018-06-22 |
RU2666945C2 true RU2666945C2 (ru) | 2018-09-13 |
Family
ID=62713296
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2016150612A RU2666945C2 (ru) | 2016-12-21 | 2016-12-21 | Способ оценки агрегационной активности тромбоцитов |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2666945C2 (ru) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2750839C1 (ru) * | 2020-05-18 | 2021-07-05 | Общество с ограниченной ответственностью "Меднорд-Техника" (ООО "Меднорд-Т") | Устройство и способ экспресс-оценки агрегационной активности форменных элементов крови |
Families Citing this family (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN112526144A (zh) * | 2020-12-29 | 2021-03-19 | 滁州瑞谷生物技术有限公司 | 一种血小板聚集率检测方法及检测装置 |
RU2760095C1 (ru) * | 2021-05-26 | 2021-11-22 | Александр Геннадьевич Старовойтов | Способ количественной оценки агрегационной активности тромбоцитов у пациентов с новой коронавирусной инфекцией |
Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2205411C2 (ru) * | 2001-05-24 | 2003-05-27 | Алтайский государственный медицинский университет | Способ диагностики тромбофилии, обусловленной резистентностью фактора v к активированному протеину с |
RU2213976C2 (ru) * | 2001-02-20 | 2003-10-10 | Нижегородский государственный научно-исследовательский институт травматологии и ортопедии | Способ оценки агрегационных свойств тромбоцитов |
RU2263471C2 (ru) * | 2002-12-27 | 2005-11-10 | Старостин Павел Юрьевич | Способ определения функционального состояния системы гемостаза лиц пожилого и старческого возраста |
RU2391665C1 (ru) * | 2008-12-29 | 2010-06-10 | Общество с ограниченной ответственностью "ВИНТЕЛ" | Способ определения агрегационной активности тромбоцитов и устройство для его осуществления |
RU2533287C1 (ru) * | 2013-06-10 | 2014-11-20 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научный центр здоровья детей" Российской академии медицинских наук (ФГБУ "НЦЗД" РАМН) | Способ диагностики нарушений агрегации тромбоцитов при муковисцидозе у детей |
RU2601111C1 (ru) * | 2015-04-17 | 2016-10-27 | Евгений Витальевич Ройтман | Способ оценки гемостатической активности тромбоцитов |
-
2016
- 2016-12-21 RU RU2016150612A patent/RU2666945C2/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2213976C2 (ru) * | 2001-02-20 | 2003-10-10 | Нижегородский государственный научно-исследовательский институт травматологии и ортопедии | Способ оценки агрегационных свойств тромбоцитов |
RU2205411C2 (ru) * | 2001-05-24 | 2003-05-27 | Алтайский государственный медицинский университет | Способ диагностики тромбофилии, обусловленной резистентностью фактора v к активированному протеину с |
RU2263471C2 (ru) * | 2002-12-27 | 2005-11-10 | Старостин Павел Юрьевич | Способ определения функционального состояния системы гемостаза лиц пожилого и старческого возраста |
RU2391665C1 (ru) * | 2008-12-29 | 2010-06-10 | Общество с ограниченной ответственностью "ВИНТЕЛ" | Способ определения агрегационной активности тромбоцитов и устройство для его осуществления |
RU2533287C1 (ru) * | 2013-06-10 | 2014-11-20 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научный центр здоровья детей" Российской академии медицинских наук (ФГБУ "НЦЗД" РАМН) | Способ диагностики нарушений агрегации тромбоцитов при муковисцидозе у детей |
RU2601111C1 (ru) * | 2015-04-17 | 2016-10-27 | Евгений Витальевич Ройтман | Способ оценки гемостатической активности тромбоцитов |
Non-Patent Citations (4)
Title |
---|
CERUTTI E. et al. Thromboelastogram monitoring in the perioperative period of hepatectomy for adult living liver donation // Liver. Transpl. 2004. Vol. 10. P. 289-294. * |
CERUTTI E. et al. Thromboelastogram monitoring in the perioperative period of hepatectomy for adult living liver donation // Liver. Transpl. 2004. Vol. 10. P. 289-294. КИНЗЕРСКИЙ А.А. и др. Методика получения референтныхзначений низкочастотной пьезотромбоэластографии у крыс-самцов линии Wistar. Сибирский медицинский журнал (Иркутск), 2016, N 3, с. 25-28. * |
HARRISON Р. Platelet function analysis // Blood Reviews, 2005. Vol. 19. P. 111-123. * |
КИНЗЕРСКИЙ А.А. и др. Методика получения референтныхзначений низкочастотной пьезотромбоэластографии у крыс-самцов линии Wistar. Сибирский медицинский журнал (Иркутск), 2016, N 3, с. 25-28. * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2750839C1 (ru) * | 2020-05-18 | 2021-07-05 | Общество с ограниченной ответственностью "Меднорд-Техника" (ООО "Меднорд-Т") | Устройство и способ экспресс-оценки агрегационной активности форменных элементов крови |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
RU2016150612A (ru) | 2018-06-22 |
RU2016150612A3 (ru) | 2018-06-22 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US20200174027A1 (en) | Blood state evaluation device, blood state evaluation system, blood state evaluation method, and program | |
JP6442858B2 (ja) | 血液状態解析装置、血液状態解析システム、血液状態解析方法、および該方法をコンピューターに実現させるための血液状態解析プログラム | |
RU2666945C2 (ru) | Способ оценки агрегационной активности тромбоцитов | |
Seimiya et al. | Reducing the incidence of pseudohyperkalemia by avoiding making a fist during phlebotomy: a quality improvement report | |
Lippi et al. | Blood glucose determination: effect of tube additives | |
Zhang et al. | Biomarkers for prognostic functional recovery poststroke: a narrative review | |
JPWO2017141508A1 (ja) | 血小板凝集能解析装置、血小板凝集能解析システム、血小板凝集能解析用プログラム及び血小板凝集能の解析方法 | |
GÜNGÖR et al. | The relationship of mean platelet volume with retinopathy in type 2 diabetes mellitus | |
Mason et al. | The current role of platelet function testing in clinical practice | |
CN108508211A (zh) | 首发未用药精神分裂患者血清标志物fgf9及其应用 | |
Cheng et al. | Net platelet clot strength of thromboelastography platelet mapping assay for the identification of high on-treatment platelet reactivity in post-PCI patients | |
Sulaiman et al. | Mitigation and detection of spurious potassium and sodium results | |
Fauziah et al. | Electrolytes Levels (Na, K, Cl) in Serum Stored at 4 C Temperature | |
Agarwal et al. | Prognostication in pulmonary arterial hypertension | |
JP6750443B2 (ja) | 血小板凝集能解析方法、血小板凝集能解析装置、血小板凝集能解析用プログラム及び血小板凝集能解析システム | |
Novović et al. | Prediction of mortality with unmeasured anions in critically ill patients on mechanical ventilation | |
RU2447450C2 (ru) | Способ оценки степени тяжести нарушения агрегации эритроцитов | |
RU2601111C1 (ru) | Способ оценки гемостатической активности тромбоцитов | |
WO2022255348A1 (ja) | 可溶型clec2を用いた急性脳血管障害のリスク評価方法 | |
Littlejohn et al. | Current and emerging technologies in hematologic testing | |
JP6973585B2 (ja) | 血小板凝集能解析方法、血小板凝集能解析装置、血小板凝集能解析用プログラム及び血小板凝集能解析システム | |
RU2430364C1 (ru) | Способ прогнозирования характера прогрессирующего течения хронической болезни почек | |
Mutua | Evaluation of Prothrombin Time, International Normalized Ratio and Activated Partial Thromboplastin Time Tests In Diabetes Mellitus Patients At Meru Teaching And Referral Hospital In Kenya | |
Degerli et al. | Research Article Could Mean Platelet Volume Be a Reliable Indicator for Acute Mesenteric Ischemia Diagnosis? A Case-Control Study | |
Gao et al. | Continuous Monitoring of thrombus formation by Finite Element Methods (FEM) Coupled with Electrical Impedance Spectroscopy |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20191222 |