RU2665836C1 - Способ оценки продуктивности рекомбинантных трансформантов дрожжей Pichia pastoris, секретирующих фитазы, относящиеся к кислым гистидиновым фосфатазам - Google Patents
Способ оценки продуктивности рекомбинантных трансформантов дрожжей Pichia pastoris, секретирующих фитазы, относящиеся к кислым гистидиновым фосфатазам Download PDFInfo
- Publication number
- RU2665836C1 RU2665836C1 RU2017145354A RU2017145354A RU2665836C1 RU 2665836 C1 RU2665836 C1 RU 2665836C1 RU 2017145354 A RU2017145354 A RU 2017145354A RU 2017145354 A RU2017145354 A RU 2017145354A RU 2665836 C1 RU2665836 C1 RU 2665836C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- productivity
- concentration
- transformants
- phytases
- pichia pastoris
- Prior art date
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Изобретение относится к биотехнологии. Предложен способ оценки продуктивности рекомбинантных трансформантов дрожжей Pichia pastoris, секретирующих фитазы. Способ включает точечное высевание колоний оцениваемых трансформантов на модифицированную диагностическую среду, представляющую собой минимальную питательную среду с добавлением витаминов, микроэлементов и фитата натрия в концентрации 0,5-1.0 (мас.%), с добавлением последовательно молочной кислоты до конечной концентрации 0,17-0,18 (мас.%), CaClдо концентрации 0,5-0,8 (мас.%) и метанола до концентрации 1,0-1,5 (мас.%), инкубацию на ней при 28-32°С в течение 24-48 ч и оценку продуктивности по соотношению диаметров зоны просветления и зоны нанесенной колонии, чем больше величина соотношения указанных диаметров, тем выше продуктивность. Способ обеспечивает отбор высокопродуктивных рекомбинантных трансформантов дрожжей Pichia pastoris, секретирующих фитазы, относящиеся к кислым гистидиновым фосфатазам. 1 табл., 2 пр., 2 ил.
Description
Изобретение относится к биотехнологии и предназначено для отбора высокопродуктивных рекомбинантных трансформантов дрожжей Pichia pastoris при конструировании штаммов-продуцентов, секретирующих фитазы, относящиеся к классу кислых гистидиновых фосфатаз.
Для улучшения питательных свойств растительных кормов в сельском хозяйстве широкое распространение получили ферменты - фитазы, относящиеся к классу кислых гистидиновых фосфатаз, катализирующие гидролиз фитатов (миоинозитол гексакисфосфатов) с отщеплением неорганического фосфата при кислых значениях рН среды. В настоящее время фитазы для сельскохозяйственных нужд производятся микробиологическим способом, в основном с использованием рекомбинантных дрожжевых продуцентов. Потребность промышленности в эффективных продуцентах постоянно возрастает [Hosseinkhani В., Emtiazi G., Nahvi I. Analysis of phytase producing bacteria (Pseudomonas sp.) from poultry faeces and optimization of this enzyme production. Afr. J. Biotechnol, 2009, 8(17), 4229-4232.]. Наиболее часто для высокоэффективной продукции гетерологичных белков используют метилотрофные дрожжи Pichia pastoris [Daly R., Hearn M.T. Expression of heterologous proteins in Pichia pastoris: a useful experimental tool in protein engineering and production. J. Mol Recognit., 2005, 18(2), 119-138. doi: 10.1002/jmr.687].
Известен способ отбора природных бактериальных штаммов, продуцирующих внеклеточную фитазу [S. Sreedevi, B.N. Reddy Screening for efficient phytase producing bacterial strains from different soils. International Journal of Biosciences Vol. 3, No. 1, p.76-85, 2013.] Способ заключается в том, что колонии исследуемых бактериальных штаммов высевают на чашки с диагностической средой, в качестве которой используют полную питательную среда (рН 7,0), содержащую в своем составе нерастворимый фитат кальция, и инкубируют при 37°С в течение 72 часов. Образование зоны просветления вокруг колонии свидетельствует о наличии фитазной активности, так как происходит гидролиз фитата кальция. Оценку продуктивности осуществляют по соотношению диаметров зоны просветления и зоны нанесенной колонии.
Однако, данный способ не подходит для дрожжей P. pastoris, так как для их роста полную питательную среду необходимо дополнить источником углерода, а фитазы класса кислых гистидиновых фосфатаз практически не диагностируются при нейтральном рН (оптимум рН для работы таких ферментов лежит в кислой области).
Известен способ отбора наиболее продуктивных трансформантов дрожжей Р. pastoris [Cheng Li, Ying Lin, Xueyun Zheng, Nuo Pang, Xihao Liao, Xiaoxiao Liu, Yuanyuan Huang Shuli Liang Combined strategies for improving expression of Citrobacter amalonaticus phytase in Pichia pastoris, BMC Biotechnology 2015, 15:88], основанный на двустадийном культивировании трансформантов в жидких полных питательных средах: сначала BMGY, где в качестве единственного источника углерода содержится глицерин, а затем в среде BMMY с индуктором экспрессии метанолом. Процесс культивирования занимает 5 суток, и затем измеряют фитазную активность в культуральной жидкости по модифицированной методике Зиля [Zyla К, Koreleski J, Swiatkiewicz S, Wikiera A, Kujawski M, Piironen J, et al. Effects of phosphorolytic and cell wall-degrading enzymes on the performance of growing broilers fed wheat-based diets containing different calcium levels. Poult Sci. 2000;79(l):66-76].
Методика заключается в приготовлении реакционной смеси, содержащей в своем составе 5 мМ фитат натрия, 100 мМ натрий ацетатный буфер (рН 5,5) и исследуемый образец супернатанта, с последующей инкубацией при температуре 37°С в течение 30 мин, окрашиванием колорирующим раствором в течение 10 мин и измерением оптической плотности на спектрофотометре при длине волны 415 нм. Такой способ отбора является длительным и трудоемким.
Задачей изобретения является расширение арсенала способов оценки продуктивности рекомбинантных трансформантов дрожжей Pichia pastoris, секретирующих фитазы, относящиеся к кислым гистидиновым фосфатазам.
Поставленная задача решена путем разработки способа оценки продуктивности рекомбинантных трансформантов дрожжей Pichia pastoris, секретирующих фитазы, относящиеся к кислым гистидиновым фосфатазам, включающего точечное высевание колоний оцениваемых трансформантов на модифицированную диагностическую среду, представляющую собой минимальную питательную среду след состава (мас.%): Na2HPO4 - 0,6; КН2РО4 - 0,3; NaCl - 0,05; NH4CL - 0,1; MgSO4 7Н2O - 0,065; агар - 2 с добавлением витаминов, микроэлементов и фитата натрия в концентрации (мас. %), фитат натрия 0,5 - 1.0, в которую последовательно добавляют молочную кислоту до конечной концентрации 0,17 - 0,18, CaCl2 до концентрации 0,5 - 0,8 и метанол до концентрации 1,0 - 1,5, инкубацию на ней при 28 - 32°С в течение 24-48 ч. и оценку продуктивности по соотношению диаметров зоны просветления и зоны нанесенной колонии, чем больше величина соотношения указанных диаметров, тем выше продуктивность трансформанта.
Существенными признаками данного изобретения являются использование молочной кислоты как подкисляющего агента, использование метанола в качестве единственного источника углерода, а также последовательность добавления компонентов среды (молочная кислота, затем CaCl2, затем метанол). Только совокупность указанных признаков обеспечивает решение поставленной задачи.
Витамины и микроэлементы добавляют в питательную среду с целью улучшить рост дрожжей. Для этого может быть использован любой витаминно-минеральный комплекс, подходящий для выращивания дрожжей на минимальной питательной среде [например, Бабьева И.П., Голубев В.И. методы выделения и идентификации дрожжей. М.: Пищевая промышленность, 1979, стр.48.].
Изобретение осуществляют следующим образом.
Готовят плотную минимальную питательную среду, содержащую фосфаты натрия и калия, хлорид натрия и аммония, сульфат магния и агар. Среду стерилизуют при нагревании, немного остужают, вносят стерилизованный раствор витаминов и микроэлементов, подходящих для дрожжей [например, Бабьева И.П., Голубев В.И. Методы выделения и идентификации дрожжей. М.: Пищевая промышленность, 1979, 2-254.] разливают по стерильным пробиркам, в которые добавляют стерилизованный раствор фитата натрия в концентрации (мас. %) 0,5 -1.0 и перемешивают. Фитат натрия можно добавить в среду и ранее, но предпочтительно добавлять его уже в пробирки, так как в этом случае легче осуществить тщательное перемешивание. Затем еще в горячий раствор последовательно добавляют молочную кислоту до конечной концентрации (мас. %), 0,17 - 0,18, CaCl2 до концентрации (мас. %.) 0,5 - 0,8 и метанол до концентрации (мас %.) 1,0 - 1,5. После добавления каждого компонента раствор тщательно перемешивают. Затем раствор переливают в чашки Петри и дают застыть. На чашку с диагностической средой точечно высевают тестируемые трансформанты дрожжей P. Pastoris и осуществляют инкубацию при 28 - 32°С в течение 24-48 ч. По окончании инкубации измеряют диаметры зон просветления (D) и колоний (Z) и по соотношению диаметров зоны просветления и зоны нанесенной колонии осуществляют оценку продуктивности тестируемых трансформантов.
Изобретение проиллюстрировано следующими фигурами графического изображения.
Фиг. 1 Экспрессионная плазмида pPIC9α-Phy, содержащая в своем составе ген, кодирующий бактериальную фитазу С. freundii
Фиг. 2. Зоны просветления вокруг колоний трансформантов P. pastoris на чашке с модифицированной диагностической средой после 24 часов культивирования.
Изобретение проиллюстрировано следующими примерами.
Пример 1. Получение трансформантов дрожжей P. pastoris, содержащих в составе хромосомы ген фитазы С.freundii
Клонирование гена, кодирующего бактериальную фитазу из Citrobacter freundii, относящуюся к классу кислых гистидиновых фосфатаз, осуществляют в составе коммерческого интеграционного экспрессионного вектора pPIC9α (Invitrogen) под сильным промотором АОХ1, индуцируемым метанолом.
Данная экспрессионная система наиболее востребована для получения ферментов в промышленности [Macauley-Patrick S., Fazenda M.L., McNeil В., et al. Heterologous protein production using the Pichia pastoris expression system. Yeast, 2005; 22, 249-270].
Фрагмент ДНК, содержащий кодирующую область гена бактериальной фитазы из С.freundii синтезируют методом ПЦР с использованием праймеров PhyC-F aagaattcgaagagcagaacggtatga и PhyC-R agcggccgcttacttattccgtaactg. В качестве матрицы используют общую ДНК бактерии С, freundii. Для получения экспрессионной плазмиды амплифицированные фрагменты ДНК обрабатывают эндонуклеазами рестрикции EcoRl, Notl и лигируют с ДНК аналогично расщепленного экспрессионного вектора pPIC9α. Полученной плазмидой трансформируют клетки Е. coli. Трансформанты отбирают по устойчивости к ампициллину. Плазмидную ДНК, выделенную из отобранных клонов, идентифицируют с помощью рестрикционного анализа.
Схематическое изображение плазмиды, содержащей в своем составе ген фитазы, представлено на фиг. 1.
Экспрессионную плазмиду обрабатывают эндонуклеазой рестрикции Bgfll, получаот экспрессионные кассеты, содержащие в своем составе плечи для интеграции, ген фитазы под индуцибельным промотором АOX1 и сигнальным пептидом, представляющим пре-про-последовательность α-фактора дрожжей S. cervisiae, селективный маркер HIS4.
Экспрессионными кассетами трансформируют клетки дрожжей P. pastoris. Трансформанты получают на минимальной среде следующего состава (мас. %): Na2HPO4 - 0,6; КН2РО4 - 0,3; NaCl - 0,05; NH4CL - 0,1; MgSO4 7Н2O - 0,065; агар - 2; глюкоза - 2; CaCl2 - 0,07; биотин, мг - 0,0002; кальций пантотенат - 0,04; фолиевая кислота - 0,0002; ниацин - 0,04; р-аминобензойная к-та - 0,02; пиридоксин гидрохлорид - 0,04; рибофлавин - 0,02; тиамин гидрохлорид - 0,04; борная кислота -0,05; CuSO4 - 0,004; KJ - 0,01; FeCl3 - 0,02; натрий молибдат - 0,02; ZnSO4- 0,04. Полученные трансформанты проверяют на наличие целевого гена в составе хромосомной ДНК методом ПЦР с использованием праймеров PhyC-F aagaattcgaagagcagaacggtatga и PhyC-R agcggccgcttacttattccgtaactg. Наличие ПЦР-фрагментов размера 1236 п.н. подтверждает присутствие гена фитазы С.freundii в составе хромосом полученных трансформантов.
Пример 2. Оценка продуктивности полученных трансформантов дрожжей P. pastoris в чашечном тесте с модифицированной диагностической средой
Диагностическую среду готовят следующим образом: раствор, содержащий (мас. %): Na2HPO4 - 0,6; КН2РO4 - 0,3; NaCl - 0,05; NH4Cl - 0,1; MgSO4 7Н2O - 0,065; агар - 2; стерилизуют при 121°С и 0,8 атм, остужают до 60°, вносят в него стерильный раствор витаминов и микроэлементов следующего состава (мас. %): биотин, мг - 0,0002; кальций пантотенат - 0,04; фолиевая кислота - 0,0002; ниацин - 0,04; р-аминобензойная к-та - 0,02; пиридоксин гидрохлорид - 0,04; рибофлавин - 0,02; тиамин гидрохлорид - 0,04; борная кислота - 0,05; меди сульфат - 0,004; калий йодид - 0,01; железа хлорид - 0,02; натрий молибдат - 0,02; цинк сульфат - 0,04 и разливают по стерильным пробиркам, в которые добавляют раствор фитата натрия (предварительно стерилизованный фильтрованием) до концентрации 0,75, перемешивают на вортексе.
Затем добавляют молочную кислоту (89%) до концентрации (мас. %) 0,18, перемешивают, добавляют стерильный раствор 1М CaCl2 до концентрации (мас. %) 0,56, перемешивают до однородного состояния образовавшийся белый осадок нерастворимого фитата кальция и добавляют метанол до концентрации (мас. %) 1,19%. Затем перемешивают и разливают по чашкам.
На чашку с диагностической средой точечно высевают полученные рекомбинантные трансформанты дрожжей P. pastoris. После 24 ч культивирования при 30°С измеряют диаметры зон просветления (D) и колоний (Z) (фиг. 2).
Наличие фитазной активности определяют по появлению зоны просветления вокруг колонии. О величине продуктивности трансформантов судят по соотношению значений диаметров зоны просветления и колонии.
Чем выше продуктивность трансформанта, тем больше величина соотношения указанных диаметров, т.е. значение D/Z. Результаты для трансформантов 1-4 приведены в таблице.
Для проверки выводов, сделанных на основе результатов чашечного теста, проведено количественное измерение активности тестируемой бактериальной фитазы.
Для этого штаммы выращивают на жидкой среде YPD [Бабьева И.П., Голубев В.И. Методы выделения и идентификации дрожжей. М.: Пищевая промышленность, 1979, 2-254.] с добавлением 1% глюкозы в течение 24 ч, затем индуцируют экспрессию гена фитазы путем добавления 2% метанола каждые 24 ч в течение 5 суток. Количественно продуктивность трансформантов оценивают по активности фитазы, образовавшейся в культуральной жидкости, для чего клетки осаждают центрифугированием и в отобранном супернатанте анализируют фитазную активность модифицированным методом Фиске-Субарроу [Bae L.J., Yanke K.J., Cheng H.D., et al. A novel staining method for detecting phytase activity. J Microbiol Methods, 1999, 39(1), 17-22.]. Результаты измерения продуктивности трансформантов представлены в таблице.
Как видно из данных, представленных в таблице 1, количественные измерения продуктивности трансформантов проведенные модифицированным методом Фиске-Субарроу, подтверждают результаты, полученные заявляемым способом.
Таким образом, заявляемый способ достаточно просто и быстро позволяет оценить продуктивность и отобрать наиболее продуктивные рекомбинантные трансформанты дрожжей P. pastoris, секретирующих фитазы, относящиеся к кислым гистидиновым фосфатазам.
Claims (1)
- Способ оценки продуктивности рекомбинантных трансформантов дрожжей Pichia pastoris, секретирующих фитазы, относящиеся к кислым гистидиновым фосфатазам, включающий точечное высевание колоний оцениваемых трансформантов на модифицированную диагностическую среду, представляющую собой минимальную питательную среду (мас.%): Na2HPO4 - 0,6; КН2РО4 - 0,3; NaCl - 0,05; NH4CL - 0,1; MgSO4 7Н2O - 0,065; агар - 2 с добавлением витаминов и микроэлементов, необходимых для роста указанных дрожжей, а также фитата натрия в концентрации (мас.%): фитат натрия 0,5-1.0, в которую последовательно добавляют молочную кислоту до конечной концентрации (мас.%) 0,17-0,18, СаСl2 до концентрации (мас.%) 0,5-0,8 и метанол до концентрации (мас.%) 1,0-1,5, инкубацию на ней при 28-32°С в течение 24-48 ч и оценку продуктивности по соотношению диаметров зоны просветления и зоны нанесенной колонии, чем больше величина соотношения указанных диаметров, тем выше продуктивность.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2017145354A RU2665836C1 (ru) | 2017-12-22 | 2017-12-22 | Способ оценки продуктивности рекомбинантных трансформантов дрожжей Pichia pastoris, секретирующих фитазы, относящиеся к кислым гистидиновым фосфатазам |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2017145354A RU2665836C1 (ru) | 2017-12-22 | 2017-12-22 | Способ оценки продуктивности рекомбинантных трансформантов дрожжей Pichia pastoris, секретирующих фитазы, относящиеся к кислым гистидиновым фосфатазам |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2665836C1 true RU2665836C1 (ru) | 2018-09-04 |
Family
ID=63459941
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2017145354A RU2665836C1 (ru) | 2017-12-22 | 2017-12-22 | Способ оценки продуктивности рекомбинантных трансформантов дрожжей Pichia pastoris, секретирующих фитазы, относящиеся к кислым гистидиновым фосфатазам |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2665836C1 (ru) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2737621C1 (ru) * | 2019-12-03 | 2020-12-01 | Акционерное Общество "Биоамид" | Трансформант дрожжей Pichia pastoris, продуцирующий фитазу Escherichia coli |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2409670C1 (ru) * | 2009-07-10 | 2011-01-20 | Федеральное государственное унитарное предприятие "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов" (ФГУП ГосНИИгенетика) | Рекомбинантная плазмида для экспрессии в дрожжах pichia pastoris гена фитазы (варианты), штамм дрожжей pichia pastoris - продуцент фитазы (варианты) |
RU2504579C2 (ru) * | 2012-04-12 | 2014-01-20 | Федеральное государственное унитарное предприятие "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов" (ФГУП "ГосНИИгенетика") | РЕКОМБИНАНТНЫЙ ШТАММ ДРОЖЖЕЙ Yarrowia lipolytica - ПРОДУЦЕНТ ФИТАЗЫ |
WO2014138703A1 (en) * | 2013-03-08 | 2014-09-12 | Keck Graduate Institute Of Applied Life Sciences | Yeast promoters from pichia pastoris |
-
2017
- 2017-12-22 RU RU2017145354A patent/RU2665836C1/ru active
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2409670C1 (ru) * | 2009-07-10 | 2011-01-20 | Федеральное государственное унитарное предприятие "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов" (ФГУП ГосНИИгенетика) | Рекомбинантная плазмида для экспрессии в дрожжах pichia pastoris гена фитазы (варианты), штамм дрожжей pichia pastoris - продуцент фитазы (варианты) |
RU2504579C2 (ru) * | 2012-04-12 | 2014-01-20 | Федеральное государственное унитарное предприятие "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов" (ФГУП "ГосНИИгенетика") | РЕКОМБИНАНТНЫЙ ШТАММ ДРОЖЖЕЙ Yarrowia lipolytica - ПРОДУЦЕНТ ФИТАЗЫ |
WO2014138703A1 (en) * | 2013-03-08 | 2014-09-12 | Keck Graduate Institute Of Applied Life Sciences | Yeast promoters from pichia pastoris |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2737621C1 (ru) * | 2019-12-03 | 2020-12-01 | Акционерное Общество "Биоамид" | Трансформант дрожжей Pichia pastoris, продуцирующий фитазу Escherichia coli |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CA2755417C (en) | New fungal production system | |
CA2684650A1 (en) | Expression system | |
CN112204136B (zh) | 植酸酶突变体 | |
CN108102994B (zh) | 一种抗酸胁迫元器件 | |
RU2665836C1 (ru) | Способ оценки продуктивности рекомбинантных трансформантов дрожжей Pichia pastoris, секретирующих фитазы, относящиеся к кислым гистидиновым фосфатазам | |
EP4063482A1 (en) | Modified cyanobacterium, modified cyanobacterium production method, and protein production method | |
JPS63501616A (ja) | 改良された酵母菌株 | |
Wang et al. | Role of AcndtA in cleistothecium formation, osmotic stress response, pigmentation and carbon metabolism of Aspergillus cristatus | |
RU2701498C1 (ru) | Рекомбинантный штамм дрожжей Pichia pastoris - продуцент фитазы | |
JP2003516112A (ja) | 相同又は非相同タンパク質生産のための組換えペニシリウム フニクロスム | |
CN116333067A (zh) | 抗菌肽突变体Sub168-QC/R、重组菌株及其应用 | |
CN112877309B (zh) | 一种N端延长型PTEN亚型PTENζ蛋白及其编码基因和应用 | |
CN102827860B (zh) | 一种用于重组蛋白分泌型表达的双基因突变大肠杆菌的构建方法 | |
Silakowski et al. | Stigmatella aurantiaca fruiting body formation is dependent on the fbfA gene encoding a polypeptide homologous to chitin synthases | |
Kojo et al. | Characterization of amylolytic enzyme overproducing mutant of Aspergillus luchuensis obtained by ion beam mutagenesis | |
CN112779169B (zh) | 一种产植酸酶的突变菌株及其应用 | |
Sasirega Raman et al. | Improvement of phytase biosynthesis by new bacterial isolate, Pediococcus pentosaceus C4/1A via continuous cultivation. | |
RU2737623C1 (ru) | Рекомбинантный штамм дрожжей Pichia pastoris с увеличенной продукцией фитазы Escherichia coli | |
CN111349575B (zh) | 组成型表达猪胃蛋白酶原c的毕赤酵母工程菌及其应用 | |
CN110484521B (zh) | 高热稳定性的植酸酶突变体KsPHY9及其基因和应用 | |
CN110484455B (zh) | 一种稳定高产植酸酶的木霉突变菌株 | |
Gordeeva et al. | Comparative Analysis of the Expression Efficiency of the Bacterial Phytase Genes in Pichia pastori s Yeast by the Plate Test | |
RU2737621C1 (ru) | Трансформант дрожжей Pichia pastoris, продуцирующий фитазу Escherichia coli | |
KR100778219B1 (ko) | 교배형 특이적 유전자에 의해 조절되는 반수체 제조용형질전환 효모 균주의 제조 | |
CN113429469A (zh) | 一种家蚕抗菌肽BMGlvA2重组蛋白制备方法及其应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PC41 | Official registration of the transfer of exclusive right |
Effective date: 20200731 |
|
QB4A | Licence on use of patent |
Free format text: LICENCE FORMERLY AGREED ON 20200924 Effective date: 20200924 |