RU2652890C1 - Способ получения рекомбинантного белка GAGE1 человека - Google Patents
Способ получения рекомбинантного белка GAGE1 человека Download PDFInfo
- Publication number
- RU2652890C1 RU2652890C1 RU2016145433A RU2016145433A RU2652890C1 RU 2652890 C1 RU2652890 C1 RU 2652890C1 RU 2016145433 A RU2016145433 A RU 2016145433A RU 2016145433 A RU2016145433 A RU 2016145433A RU 2652890 C1 RU2652890 C1 RU 2652890C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- protein
- gage1
- recombinant
- recombinant human
- plasmid
- Prior art date
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
- C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
- C07K14/4748—Tumour specific antigens; Tumour rejection antigen precursors [TRAP], e.g. MAGE
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/82—Translation products from oncogenes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/70—Vectors or expression systems specially adapted for E. coli
- C12N15/72—Expression systems using regulatory sequences derived from the lac-operon
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
- C12P21/02—Preparation of peptides or proteins having a known sequence of two or more amino acids, e.g. glutathione
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/185—Escherichia
- C12R2001/19—Escherichia coli
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Virology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Изобретение относится к биотехнологии, конкретно к получению рекомбинантных белков человека, и может быть использовано для получения и очистки рекомбинантного белка GAGE1 человека. Способ получения рекомбинантного белка GAGE1 человека состоит из создания рекомбинантной плазмиды pGAGE1 на основе рЕТ-30а, экспрессии рекомбинатного белка и его хроматографической очистки и последующей ренатурации и стерилизующей фильтрации. Изобретение позволяет получить рекомбинантный белок человека GAGE1 с выходом очищенного белка 24,5 мг/л культуры E. coli штамма BL21(DE3)pLysS. 3 ил.
Description
Изобретение относится к биотехнологии и касается способа выделения и очистки рекомбинантного белка GAGE1 человека (p4GAGEl), пригодного для научно-исследовательских работ.
Белки семейства GAGE относятся к раково-тестикулярным антигенам и насчитывают около 16 членов на данный момент. Белки семейства GAGE могут быть потенциальными антигенами для иммунотерапии широкого спектра онкологических заболеваний, так как экспрессируются в различных типах опухолей, но не в нормальных тканях, а также вызывают иммунный ответ [Van den Eynde В, Peeters О, De Backer О, Gaugler В, Lucas S, Boon T. A new family of genes coding for an antigen recognized by autologous cytolytic T-lymphocytes on a human melanoma. J Exp Med, 1995; 182; c. 689-698]. Для оценки прогностических и терапевтических свойств антигенов необходима проверка их экспрессии на уровне белка. Создание продуцентов рекомбинантных белков это быстрый способ получения чистого белка, пригодного для иммунизации с целью получения специфических антител. Чистый рекомбинантный белок также может быть использован для детекции гуморального иммунного ответа в сыворотке крови онкологических больных и для нагрузки дендритных клеток при создании дендритноклеточной вакцины. Кроме того, чистый рекомбинантный белок может быть основой противоопухолевой иммуногенной композиции.
Все белки семейства GAGE очень похожи между собой по аминокислотному составу. Филогенетически ген GAGE1 признан самым древним в кластере генов семейства GAGE, и его белок имеет самый большой размер в семействе [Gjerstorff MF, Ditzel HJ. An overview of the GAGE cancer/testis antigen family with the inclusion of newly identified members. Tissue Antigens. 2008; 71(3): c. 187-192]. Полноразмерный рекомбинантный белок GAGE1 человека содержит практически все эпитопы, которые можно выделить при процессинге других белков семейства GAGE. Использование GAGE1 в научно-прикладных исследованиях будет иметь ряд преимуществ по сравнению с другими белками. Благодаря большему количеству эпитопов можно стимулировать развитие B- и T-клеток, обладающих широким репертуаром рецепторов, позволяющих распознать как GAGE1, так и другие белки семейства GAGE.
Наиболее близким к заявляемому способу является способ получения рекомбинантного белка GAGE12 [Gjerstorff MF, Besir Н, Larsen MR, Ditzel HJ. Expression, purification and characterization of the cancer-germline antigen GAGE 121: a candidate for cancer immunotherapy. Protein Expr Purif 2010; 73: 217-222], принятый за прототип. Способ состоит в том, что рекомбинантный белок GAGE 12 человека экспрессируют в дрожжевом продуценте Pichia pastoris (GS115). Далее получают биомассу клеток, которую ресуспендируют в соответствующем буфере и выделяют целевой белок с помощью трех последовательных хроматографических очисток: аффинной, ионобменной и гель-фильтрации. После первого этапа аффинной хроматографии получают белок с 60% электрофоретической чистотой. Общий выход чистого рекомбинантного белка составляет 10,5 мг/л исходной культуры продуцента после первого этапа хроматографической очистки и 6 мг/л культуры после дополнительных двух этапов хроматографической очистки.
Недостатками способа являются невысокий общий выход белка, а также присутствие олигомерных форм белка при его экспрессии, что требует многоэтапной хроматографической очистки.
Задача заявляемого изобретения состоит в создании способа получения рекомбинантного белка GAGE1 человека более высокой степени очистки и более высокого общего выхода белка с использованием одного этапа хроматографической очистки.
Технический результат заявляемого способа состоит в получении рекомбинантного белка GAGE1 человека с чистотой более 95% и общим выходом 24,5 мг/л культуры продуцента с использованием одного этапа хроматографической очистки.
Поставленная задача решается использованием бактериального продуцента рекомбинантного белка и введением предварительного этапа отмывки клеток продуцента от части неспецифических белков.
Сущность заявляемого способа получения рекомбинантного белка GAGE1 человека состоит в использовании рекомбинантной плазмиды pGAGE1, размером 5763 пар нуклеотидов, кодирующей рекомбинантный белок p4GAGE1. Эта рекомбинантная плазмида представляет собой плазмидный вектор, состоящий из следующих элементов: последовательности кодирующей рекомбинантный белок p4GAGE1 с сайтами узнавания для рестриктаз EcoRI и HindIII, промотора Т7, гена устойчивости к канамицину, последовательности инициации репликации pBR322(ori), гена, кодирующего lac-индуктор, и последовательностей, необходимых для инициации трансляции белка в клетках Е. coli.
Способ получения рекомбинантного белка p4GAGE1 осуществляется следующим образом.
Синтезируют последовательность ДНК, кодирующую человеческий ген GAGE1. В качестве источника гена GAGE1 используют кДНК клеточной линии эритроидного миелолейкоза К562. Ген GAGE1 человека выделяют методом амплификации с помощью олигонуклеотидных праймеров. Получают последовательность ДНК, содержащую кодирующую последовательность гена GAGE1. Нуклеотидные последовательности праймеров, используемых при синтезе кодирующей последовательности гена GAGE1 представлены в Перечне последовательностей - SEQ ID NO: 1, 2.
Далее конструируют плазмидный вектор для экспрессии рекомбинантного белка. Для этого фрагмент ДНК, кодирующий соответствующий белок GAGE1, обрабатывают ферментами рестрикции HindIII и EcoRI и вставляют по сайтам рестрикции HindIII и EcoRI в вектор рЕТ-30a (Novagen), получая при этом вектор pGAGE1. Соответствие последовательности ДНК плазмидного вектора pGAGEl схеме конструирования подтверждают методом прямого секвенирования по Сэнгеру. ДНК последовательности, кодирующей рекомбинантный белок GAGE1 человека, представлена в Перечне последовательностей - SEQ ID NO: 3 и аминокислотная последовательность рекомбинантного белка GAGE1 человека - SEQ ID NO: 4.
Затем синтезируют рекомбинантный белок в клетках Е. coli. Клетки Е. coli штамма BL21(DE3) pLysS трансформируют плазмидой pGAGE1 и выращивают в течение 18 ч при 37°C в агаризованной среде LB с добавлением канамицина (20 мкг/мл) и хлорамфеникола (34 мкг/мл). Затем несколько колоний вносят в свежую среду ТВ с канамицином и хлорамфениколом в тех же концентрациях и подращивают 3-4 ч до плотности OD600=0.6, затем вносят изопропил-β-D-1-тиогалактопиранозид до конечной концентрации 0,5 мМ для индукции синтеза целевого белка. Растят биомассу клеток продуцента 20 часов для синтеза p4GAGE1 при 25°C с принудительной аэрацией. Центрифугируют полученную суспензию клеток при 5 тыс. об/мин в течение 10 мин, супернатант удаляют.
Способ иллюстрируется фиг. 1(а, b), 2 и 3.
На фиг. 1(a, b) представлена электрофореграмма белков бактериального продуцента P4GAGE1: а - культура бактерий без индукции синтеза белка, b - культура бактерий, продуцирующих рекомбинантный белок GAGE1 человека.
На фиг. 2 представлена электрофореграмма белков разных этапов очистки белка P4GAGE1 из бактериальной культуры: 1 - фракция белков, содержащих p4GAGE1, перед нанесением на колонку, 2, 3 - фракции промывки колонки, 4-8 - элюция очищенного P4GAGE1 с колонки.
На фигуре 3 представлена денситограмма очищенного рекомбинантного белка GAGE1 человека.
Клетки Е. coli, содержащие плазмиду pGAGE1, эффективно поддерживали экспрессию целевого рекомбинантного белка размером 27 кДа. Целевой белок экспрессировался в виде нерастворимых телец включения. Для очистки рекомбинантного белка p4GAGE1 из штамма-продуцента Е. coli, содержащего плазмиду pGAGE1 осадок клеток, полученный из культуры Е. coli на предыдущем этапе, ресуспендируют в буфере для обработки ультразвуком (50 мМ трис-HCl, рН=8,0, 20 мМ ЭДТА). Клетки подвергают двукратному замораживанию-оттаиванию. После этого клетки подвергают ультразвуковой дезинтеграции (22 кГц, 3×10 с), добавляют ингибиторы протеаз, рибонуклеазу до концентрации 2 ед./мл и дезоксирибонуклеазу до концентрации 300000 ед./мл и инкубируют в течение 10 мин при комнатной температуре. Фрагменты разрушенных клеток осаждают центрифугированием (100000 g, 4°C, 1 ч).
Далее проводят процедуру отмывки телец включения. Для этого осадок ресуспендируют в буфере, содержащем 50 мМ трис-HCl, рН=8,0, 0,2 мМ ЭДТА, 0,05М NaCl, и подвергают действию ультразвука, как описано выше, с последующим центрифугированием (10000 об/мин, 5 мин). Процедуру отмывки телец включения повторяют еще два раза. Такая процедура позволяет удалить часть белков продуцента и подготовить лизат смеси белков, обогащенный целевым рекомбинантным белком для последующей очистки методом металлохелатной аффинной хроматографии. Полученный препарат телец включения рекомбинантного белка растворяют в буфере, содержащем 50 мМ трис-HCl, pH=7,5, 6 М мочевину. Далее проводят металлохелатную аффинную хроматографию при умеренном давлении (BioLogic, "Bio-Rad") (скорость протока 2 мл/мин) на колонке с Ni+ агарозой (GE Healthcare), уравновешенной буфером, содержащим 50 мМ трис-HCl, рН=7,5, 6 М мочевину. После нанесения препарата колонку промывают буфером для уравновешивания, содержащим 50 мМ трис-HCl, рН=7,5, 6 М мочевину, 2% Твин-20, а затем тем же буфером, содержащим 50 мМ трис-HCl, рН=7,5, 6 М мочевину. Элюцию белка проводят буфером, содержащим 50 мМ трис-HCl, pH=7,5, 200 мМ имидазола, 6 М мочевину. Фракции анализируют с помощью электрофореза в полиакриламидном геле. На фиг.2 показано, что фракции элюции содержат очищенный белок. Содержащие целевой белок фракции объединяют и 2 раза проводят диализ против 100-кратного объема буфера, содержащего 5% глицерин, 10 мМ трис-HCl, рН 7,5, 0,1 мМ ЭДТА, 0,05 М NaCl. Затем 2 раза проводят диализ раствора, содержащего рекомбинантный белок, против 0,9% раствора NaCl и осуществляют стерилизующую фильтрацию через фильтр 0,22 мкм. Аликвоты хранят при -70°C либо подвергают лиофилизации.
Наличие и чистоту целевого белка проверяют с помощью денатурирующего электрофореза в 10% полиакриламидном геле согласно стандартной методике. Денситометрию электрофореграммы очищенного белка проводят с помощью программы Phoretix 1D Advanced v. 5.10. На фиг. 3 показано, что получен белок с чистотой более 95%. Аминокислотная последовательность полученного чистого рекомбинантного белка подтверждается методом масс-спектрометрии и соответствует SEQ ID NO: 4.
Уровень продукции целевого белка (общий выход) в штамме Е. coli, трансформированном плазмидой pGAGE1, составляет 24,5 мг/л культуры продуцента, что в 6 раз выше, чем в приведенном способе прототипа.
Таким образом, предлагаемый способ позволяет получить рекомбинантный белок GAGE1 человека с более высокой степенью очистки, составляющей не менее 95%, и общим выходом белка 24,5 мг/л.
Claims (1)
- Способ получения рекомбинантного белка GAGE1 человека, состоящий из создания рекомбинантной плазмиды, экспрессии рекомбинатного белка и его хроматографической очистки, отличающийся тем, что полноразмерную кодирующую последовательность природного гена GAGE1 человека, полученную с помощью праймеров SEQ ID NO: 1 и 2, клонируют в плазмиду рЕТ-30а по сайтам рестрикции EcoRI и HindIII, получая рекомбинантную плазмиду pGAGE1 размером 5763 п. н., содержащую последовательность SEQ ID NO: 3, кодирующую рекомбинантный белок GAGE1, с сайтами узнавания для рестриктаз EcoRI и HindIII, промотора Т7, гена устойчивости к канамицину, последовательности инициации репликации pBR322(ori), и последовательностей, необходимых для инициации трансляции белка в клетках Е. coli., и получают рекомбинантный белок GAGE1 человека с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 4, путем его экспрессии в бактериальных клетках E. coli штамма BL21(DE3)pLysS, содержащих плазмиду pGAGE1; при этом очистку рекомбинантного белка GAGE1 человека из штамма-продуцента осуществляют методом металлохелатной аффинной хроматографии с предварительной трехкратной отмывкой нерастворимых белков продуцента с помощью буфера 50 мМ трис-HCl, рН=8,0, 0,2 мМ ЭДТА, 0,05М NaCl и последующей ренатурацией и стерилизующей фильтрацией.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2016145433A RU2652890C1 (ru) | 2016-11-21 | 2016-11-21 | Способ получения рекомбинантного белка GAGE1 человека |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2016145433A RU2652890C1 (ru) | 2016-11-21 | 2016-11-21 | Способ получения рекомбинантного белка GAGE1 человека |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2652890C1 true RU2652890C1 (ru) | 2018-05-03 |
Family
ID=62105304
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2016145433A RU2652890C1 (ru) | 2016-11-21 | 2016-11-21 | Способ получения рекомбинантного белка GAGE1 человека |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2652890C1 (ru) |
-
2016
- 2016-11-21 RU RU2016145433A patent/RU2652890C1/ru active
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| GJERSTORFF M. F. et al. An overview of the GAGE cancer/testis antigen family with the inclusion of newly identified members, Tissue Antigens, 2008, V. 71, N. 3, p. 187-192. * |
| GJERSTORFF M. F. et al. Expression, purification and characterization of the cancer-germline antigen GAGE12I: a candidate for cancer immunotherapy, Protein expression and purification, 2010. V. 73, N. 2, p. 217-222. * |
| ФИНАШУТИНА Ю. П. и др. Экспрессия и очистка рекомбинантного раково-тестикулярного антигена GAGE1, Российский биотерапевтический журнал, 2016, Т. 15, N. 1, с.111-112. * |
| ФИНАШУТИНА Ю. П. и др. Экспрессия и очистка рекомбинантного раково-тестикулярного антигена GAGE1, Российский биотерапевтический журнал, 2016, Т. 15, N. 1, с.111-112. GJERSTORFF M. F. et al. Expression, purification and characterization of the cancer-germline antigen GAGE12I: a candidate for cancer immunotherapy, Protein expression and purification, 2010. V. 73, N. 2, p. 217-222. GJERSTORFF M. F. et al. An overview of the GAGE cancer/testis antigen family with the inclusion of newly identified members, Tissue Antigens, 2008, V. 71, N. 3, p. 187-192. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR870009020A (ko) | 하이브리드 인터페론 및 그의 제조방법 | |
| CN111856006B (zh) | 牛支原体分泌蛋白MbovP274的应用 | |
| CN114657113A (zh) | 一种表达全能核酸酶的重组菌及其应用 | |
| CN108822195B (zh) | 砀山酥梨具有促进花粉管生长功能的蛋白、编码基因PbrTTS1及其应用 | |
| RU2652890C1 (ru) | Способ получения рекомбинантного белка GAGE1 человека | |
| KR20150117645A (ko) | 쌀 종자로부터 재조합 인간 염기성 섬유아세포성장인자를 생성하는 방법 | |
| JP5926800B2 (ja) | アグロシベ・アエゲリタのレクチンａａｌ−２、及びそのコード遺伝子、その調製方法、及び応用 | |
| JP2021536253A (ja) | 組換えレクチンタンパク質の調製のための改善されたプロセス | |
| CN105884876B (zh) | 一种蚯蚓多肽、其编码序列及其应用 | |
| JPH06311884A (ja) | プラスミド及びそれで形質転換されたエ シェリチア・コリ | |
| RU2590701C2 (ru) | Антигенная композиция и ее терапевтическое применение для профилактики и лечения онкологических заболеваний, рекомбинантная плазмидная днк, обеспечивающая синтез гибридного белка, а также способ получения белка | |
| TWI432579B (zh) | 單步驟純化重組胃幽門螺旋桿菌嗜中性白血球激活蛋白（ｈｐ－ｎａｐ）的方法 | |
| CN113683707B (zh) | 一种抗原融合蛋白及其编码基因和应用 | |
| RU2687435C1 (ru) | Способ получения рекомбинантного противоопухолевого модифицированного белка DR5-B человека | |
| CN113527502B (zh) | 一种用于治疗类风湿性关节炎的纳米抗体重组蛋白 | |
| JP3752223B2 (ja) | ハリエニシダ由来のレクチンタンパク質をコードする遺伝子、その遺伝子がコードするタンパク質及びその製造方法 | |
| AU2019100685A4 (en) | POLYCLONAL ANTIBODY AGAINST TOXOPLASMA GONDII UBIQUITIN ACTIVATING ENZYME 1 (TgUba1) AND PREPARATION METHOD AND APPLICATION | |
| Gao et al. | Schistosoma japonicum: screening of cercariae cDNA library by specific single-chain antibody against SIEA26-28 ku and immunization experiment of the recombinant plasmids containing the selected genes | |
| RU2426780C2 (ru) | ЭКСПРЕССИОННАЯ ПЛАЗМИДНАЯ ДНК p6E-tTF, КОДИРУЮЩАЯ ВНЕКЛЕТОЧНЫЙ И ТРАНСМЕМБРАННЫЙ ДОМЕНЫ ТКАНЕВОГО ФАКТОРА ЧЕЛОВЕКА И ШТАММ E.coli BL21[DE3]/p6E-tTF-ПРОДУЦЕНТ РЕКОМБИНАНТНОГО ТКАНЕВОГО ФАКТОРА ЧЕЛОВЕКА | |
| RU2274656C1 (ru) | Способ получения высокоочищенного рекомбинантного полипептида со свойствами фактора некроза опухолей альфа человека | |
| Munadziroh et al. | Reconstruction and Optimized Expression of a Synthetic Secretory Leukocyte Protease Inhibitor (SLPI) Gene in Escherichia coli BL21 | |
| Chu-Dao et al. | Effect of Freeze-Thaw and Urea in Solubility of GPC3-Csub Protein Expressed in Escherichia coli | |
| Krivenko et al. | Development of Tumor-Directed Gene-Engineered Preparations for Immunotherapy of Cancer. III. Construction of an Expression Plasmid and Production of Human Vaccinating Oncopeptide VNT22 (MUC1) on the basis of a E. coli Recombinant Producing Strain | |
| CN113717289A (zh) | 一种sac-trail融合蛋白及其制备方法和应用 | |
| JP2843048B2 (ja) | 新規な組換リンホトキシン誘導体 |