RU2641102C1

RU2641102C1 - Новое водорастворимое производное салициламида, обладающее нейропротекторным действием при недостаточности мозгового кровообращения

Info

Publication number: RU2641102C1
Application number: RU2017108291A
Authority: RU
Inventors: Анатолий Кузьмич Брель; Иван Николаевич Тюренков; Светлана Викторовна Лисина; Елена Владимировна Волотова; Сергей Сергеевич Попов; Дмитрий Викторович Верхоляк
Priority date: 2017-03-13
Filing date: 2017-03-13
Publication date: 2018-01-16

Abstract

Изобретение относится к водорастворимому производному салициловой и гамма-аминомасляной кислот, а именно к дикалиевой соли 4-[(4'-салицилоиламино)бутаноиламино]бутановой кислоты указанной ниже формулы, которая обладает нейропротекторным действием при недостаточности мозгового кровообращения. 2 табл., 4 пр.

Description

Изобретение относится к области медицины и органической химии и касается нового биологически активного химического соединения, а именно дикалиевой соли 4-[(4'-салицилоиламино)бутаноиламино]бутановой кислоты формулы

проявляющего нейропротекторную активность при недостаточности мозгового кровообращения. Указанное соединение и его свойства в литературе не описаны.

Фармакологическая регуляция мозгового кровообращения относится к числу важнейших проблем медицины. Это определяется тем, что острые и хронические нарушения кровоснабжения мозга являются одной из главных причин смертности и инвалидизации населения. Патология мозгового кровообращения может быть связана с функциональными и органическими нарушениями (спазм сосудов, эмболии, тромбоз, атеросклероз сосудов, геморрагии). При этом страдают память, интеллектуальная и психическая сферы, поведенческие и моторные реакции. Эти неблагоприятные проявления нарастают постепенно и обычно связаны с возрастом и сопутствующими ему патологическими процессами (атеросклерозом сосудов, артериальной гипертензией, нарушением метаболизма и т.д.). Это обуславливает актуальность и востребованность разработок веществ, имеющих нейропротекторную активность при недостаточном мозговом кровообращении.

Наиболее близким по строению и свойствам к описываемому соединению является 4-[(4'-никотиниламино)бутироиламино]бутановая кислота (РФ 2436772). Однако данное соединение и его ноотропная активность была исследована с использованием методики условной реакции пассивного избегания (УРПИ) с последующим применением в качестве амнезирующего фактора электрошока. В эксперименте использовались неоперированные животные, а значит не изучалось действие 4-[(4'-никотиниламино)бутироиламино]бутановой кислоты в условиях недостаточности мозгового кровообращения.

Сущность изобретения состоит в синтезе нового водорастворимого соединения, а именно дикалиевой соли 4-[(4'-салицилоиламино)бутаноиламино]бутановой кислоты, которое проявляет нейропротекторную активность при недостаточности мозгового кровообращения, вызванного в эксперименте необратимой двусторонней окклюзией общих сонных артерий у животных.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. Синтез 4-[(2-гидроксибензоил)амино]бутановой кислоты может быть осуществлен по методике, описанной в RU 2495866.

Пример 2. Синтез 4-(салицилоиламино)бутирил хлорида. К 20 ммоль 4-(слицилоиламино)бутановой кислоты в 50 мл безводного бензола прибавляют 60 ммоль оксалил хлорида и 0.2 мл N,N-диметилформамида. Смесь кипятят в течение 1 часа. Выпавший после охлаждения смеси до комнатной температуры осадок хлорангидрида отфильтровывают, промывают холодным гексаном и высушивают. Целевой 4-(салицилоиламино)бутирил хлорид выделяют в виде белого кристаллического твердого вещества (4.35 г, 90%) с т.пл. 55-56°С. Содержание активного хлора: вычислено, %: Cl 14.67; найдено, %: 14.67.

Пример 3. Синтез дикалиевой соли 4-[(4'-салицилоиламино)бутаноиламино]бутановой кислоты. В реакторе, снабженном мешалкой, смешивают 20 мл воды, 10 ммоль гамма-аминомасляной кислоты и 25 ммоль NaOH. Затем при перемешивании и охлаждении присыпают 10 ммоль 4-(салицилоиламино)бутаноил хлорида, контролирую рН среды (рН>7). Смесь перемешивают еще 3 часа, подкисляют НСl и образовавшийся осадок отфильтровывают. После перекристаллизации из этанола получают 4-[(4'-салицилоиламино)бутаноиламино]бутановой кислоты в виде белого кристаллического вещества (2.34 г, 76%) с т. пл. 256-258°С. R_f 0.35 (хлороформ-этилацетат 1:2). 4-[(4'-салицилоиламино)бутаноиламино]бутановая кислота: Спектр ЯМР ¹Н (ДМСО-d₆), δ, м.д.: 9.84 с (1Н, -ОН), 8.35 с (1Н, -СООН), 7.62д (1Н, Ph), 7.25 с (1Н, -NH-), 7.35-7.27 м (2Н, Ph, J 6.3 Гц), 6.93д (1H Ph), 4.69 с (1Н, -NH-), 3.32-3.16 м (4Н, 2-СН₂-, J 12.7 Гц), 2.32-2.13 м (4Н, 2-СН₂-, J 9.6 Гц). 1.89-1.68 м (4Н, 2-СН₂-, J 7.8 Гц). Элементный анализ C₁₅H₂₀N₂O₅: вычислено, %: С 58.43, Н 6.54, N 9.09, О 25.95; найдено, %: С 58.40, Н 6.53, N 9.1, О 25.98.

Затем в реакторе смешивают 10 ммоль 4-[(4'-салицилоиламино)бутаноиламино]бутановой кислоты, 20 ммоль этилат калия и 50 мл бензола, перемешивают при кипении в течение 30 мин. После охлаждения продукт отделяют фильтрованием, промывают небольшим количеством бензола и сушат. Выход 97%. Т пл.=302°С с разложением. C₁₅H₁₈K₂N₂O₅: вычислено, %: С 46.85, Н 4.72, К 20.34, N 7.29; найдено, %: С 46.82, Н 4.73, К 20.31, N7.30.

Пример 4. Нейропротекторное действие вещества при недостаточности мозгового кровообращения, вызванного необратимой двусторонней окклюзией общих сонных артерий у крыс

Исследование выполнено на половозрелых беспородных крысах-самках 180-200 г., 3,5-4-месячного возраста, доставленных из питомника ФГУП ПЛЖ «Рапполово» (д. Рапполово, Ленинградская область). Все животные после транспортировки из питомника содержались в стандартных условиях вивария с 12 ч/12 ч свето/темновым циклом, температурой воздуха 20±2°С и влажностью 40-60% и проходили двухнедельный карантин, по окончании которого включались в исследование.

В ходе выполнения экспериментов были сформированы следующие группы: 1) ЛО (ложнооперированные) - животные, получавшие физиологический раствор, а при проведении операции которым под общие сонные артерии подводились, но не затягивались лигатуры; 2) контроль - животные, получавшие физиологический раствор и которым недостаточность мозгового кровообращения вызывали путем одномоментной двусторонней окклюзии общих сонных артерий (ОСА); 3) патентуемое соединение - животные, которым также перевязывали ОСА, но получавшие изучаемое соединение дозе 38 мг/кг внутрибрюшинно (профилактически однократно за 30 минут до перевязки и далее начиная с третьего дня после операции каждые 24 часа в течение 3х дней; 4) пирацетам - животные, которым перевязывали ОСА, но получавшие пирацетам в дозе 800 мг/кг внутрибрюшинно (в том же режиме, что и патентуемое соединение). Операционные вмешательства выполнялись с использованием хлоралгидрата (в дозе 400 мг/кг). Для оценки нейропротекторного действия патентуемого соединения при недостаточности мозгового кровообращения использовалась модель одномоментной необратимой билатеральной окклюзии ОСА [Мирзоян Р.С. Методические рекомендации по доклиническому изучению лекарственных средств для лечения нарушений мозгового кровообращения и мигрени //Руководство по доклиническому изучению лекарственных средств / Под. ред. А.Н. Миронова. Часть первая. - М.: Гриф и К, 2012. - 944 с.]. О нейропротекторном действии соединения судили по увеличению выживаемости животных после двусторонней ОСА и уменьшению у них выраженности неврологического дефицита по шкале McGraw в модификации И.В. Ганнушкиной, когнитивных нарушений в тестах «Условная реакция пассивного избегания» (УРПИ) и «Экстраполяционного избавления» (ТЭИ).

Тест УРПИ проводили в 3 этапа: «обучение», «воспроизведение №1» (для проверки запоминания) и «воспроизведение №2» после моделирования недостаточности мозгового кровообращения у крыс. На этапе «обучения» животное помещали в светлый отсек установки, из которого оно самостоятельно переходило в темный отсек с электродным полом, где получало болевое раздражение (U=40B, 3 импульса по 0,5 сек). При повторном заходе в темный отсек животное также получало болевое раздражение. Длительность наблюдения - 3 минуты. Спустя 24 часа на этапе «воспроизведения №1» животное опять помещали в светлый отсек установки, и наблюдали за ним в течение 3-х минут. Крысы, зашедшие в темный отсек на этапе «воспроизведения №1», исключались из эксперимента. Через 72 часа (после окклюзии ОСА) после моделирования недостаточности мозгового кровообращения проводили «воспроизведение №2». Фиксировался латентный период первого захода в темный отсек, при этом болевое раздражение не наносилось.

Установка для ТЭИ представляет собой цилиндрическую емкость (высота 40 см, диаметр 35 см), в которую до определенного уровня наливается вода (t=22°C). В центре емкости вертикально закреплен цилиндр, нижняя часть которого опущена в воду на 2,5 см. На этапе «обучения» животное помещается хвостом вниз во внутренний цилиндр и в течение 3-х минут оно должно решить задачу: поднырнуть под край цилиндра, после чего животное извлекается. Спустя 24 часа при первом воспроизведении исключаются животные, которые не смогли в течение 3-х минут решить «экстраполяционную задачу». «Воспроизведение №2» выполняется аналогично таковому в тесте УРПИ, через 72 часа (после окклюзии ОСА) после моделирования недостаточности мозгового кровообращения. В тесте ТЭИ фиксируется время решения задачи: латентный период подныривания.

Необратимая окклюзия ОСА вызывала выраженное нарушение мозгового кровообращения, которое приводило к гибели животных. Исследования показали, что патентуемое соединение - дикалиевая соль 4-[(4'-салицилоиламино)бутаноиламино]бутановой кислоты - достоверно повышало (в среднем на 20-50%) выживаемость крыс после перевязки ОСА по сравнению с группой контроля (контроль-ишемия) (таблица 1), при этом случаи смерти среди животных данной группы наблюдались только в период с 6 до 12 ч. Оказываемое им нейропротекторное действие превосходило таковое у пирацетама.

При оценке неврологического дефицита по шкале МсСrаw отмечено, что у животных с перевязанными ОСА, получавшими патентуемое соединение, неврологической дефицит был наименьшим среди всех исследуемых групп (таблица 2).

При выполнении и анализе результатов тестов УРПИ и ТЭИ отмечено, что выжившим животным с ОСА, получавшим патентуемое соединение, в тесте ТЭИ требовалось меньшее время для решения задачи экстраполяционного избавления, а в тесте УРПИ в темную камеру заходило 75% животных (в группе контроль 25%), что свидетельствует о сохранении памятного следа, связанного с аверсивным воздействием (таблица 2).

Таким образом, учитывая, что дикалиевая соль 4-[(4'-салицилоиламино)бутаноиламино]бутановой кислоты увеличивает выживаемость животных и снижает выраженность неврологических нарушений, в том числе когнитивного дефицита, после окклюзии общих сонных артерий, заявленное соединение может найти применение при создании новых лекарственных средств для лечения нарушений мозгового кровообращения ишемического генеза.

Claims

Новое водорастворимое производное салициловой и гамма-аминомасляной кислот, а именно дикалиевая соль 4-[(4'-салицилоиламино)бутаноиламино]бутановой кислоты формулы
обладающее нейропротекторным действием при недостаточности мозгового кровообращения.