RU2631792C2 - Способ получения зрелых антиген-активированных дендритных клеток с трансфекцией РНК опухолевых клеток рака молочной железы - Google Patents
Способ получения зрелых антиген-активированных дендритных клеток с трансфекцией РНК опухолевых клеток рака молочной железы Download PDFInfo
- Publication number
- RU2631792C2 RU2631792C2 RU2016100500A RU2016100500A RU2631792C2 RU 2631792 C2 RU2631792 C2 RU 2631792C2 RU 2016100500 A RU2016100500 A RU 2016100500A RU 2016100500 A RU2016100500 A RU 2016100500A RU 2631792 C2 RU2631792 C2 RU 2631792C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- rna
- transfection
- cells
- dendritic cells
- breast cancer
- Prior art date
Links
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 title claims abstract description 64
- 239000000427 antigen Substances 0.000 title claims abstract description 31
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 title claims abstract description 31
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 title claims abstract description 31
- 238000001890 transfection Methods 0.000 title claims abstract description 26
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 title claims abstract description 23
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 title claims abstract description 23
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 title claims abstract description 19
- 238000000034 method Methods 0.000 title abstract description 23
- 230000035800 maturation Effects 0.000 claims abstract description 11
- 239000006249 magnetic particle Substances 0.000 claims abstract description 4
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 claims description 14
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 11
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 claims description 8
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 claims description 6
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 claims description 6
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 3
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 claims 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 abstract description 15
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 abstract description 7
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 abstract description 7
- 230000028993 immune response Effects 0.000 abstract description 6
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 abstract description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 abstract 1
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 19
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 5
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 5
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 3
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 3
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 3
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 3
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 3
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 3
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- FGDZQCVHDSGLHJ-UHFFFAOYSA-M rubidium chloride Chemical compound [Cl-].[Rb+] FGDZQCVHDSGLHJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 2
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 2
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 1
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 101000960954 Homo sapiens Interleukin-18 Proteins 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 230000030741 antigen processing and presentation Effects 0.000 description 1
- 201000008274 breast adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 159000000007 calcium salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 230000007402 cytotoxic response Effects 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 230000012202 endocytosis Effects 0.000 description 1
- IINNWAYUJNWZRM-UHFFFAOYSA-L erythrosin B Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(I)C(=O)C(I)=C2OC2=C(I)C([O-])=C(I)C=C21 IINNWAYUJNWZRM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940011411 erythrosine Drugs 0.000 description 1
- 235000012732 erythrosine Nutrition 0.000 description 1
- 239000004174 erythrosine Substances 0.000 description 1
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 1
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 description 1
- 102000043959 human IL18 Human genes 0.000 description 1
- 229940040731 human interleukin-12 Drugs 0.000 description 1
- 230000007124 immune defense Effects 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 238000001638 lipofection Methods 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 229940102127 rubidium chloride Drugs 0.000 description 1
- 239000000021 stimulant Substances 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012096 transfection reagent Substances 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 102000003390 tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/10—Cells modified by introduction of foreign genetic material
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к способу получения зрелых антиген-активированных дендритных клеток (ДК) трансфекцией РНК опухолевых клеток рака молочной железы, и может быть использовано в медицине. Получают зрелые антиген-активированные ДК за счет сочетания магнитной трансфекции РНК опухолевых клеток рака молочной железы в соотношении 0,3 мкг РНК к 0,3 мкл взвеси магнитных частиц со стимулятором созревания
Description
Изобретение относится к иммунологии и биотехнологии, а именно к способам получения зрелых антиген-активированных дендритных клеток (ДК) с трансфекцией РНК опухолевых клеток рака молочной железы и может быть использовано впоследствии для стимуляции противоопухолевого цитотоксического иммунного ответа против клеток рака молочной железы.
Способы трансфекции антиген-активированных ДК сами по себе достаточно широко известны.
Известные способы введения векторов, содержащие необходимые нуклеиновые кислоты непосредственно в клетки хозяина, описаны в заявке на изобретение «Полипептиды, композиция, нуклеиновая кислота, клеточная линия, способ получения полипептида, способ лечения, клетка» (RU 94031472, C12Q 1/68, 1996). Как указано в данной заявке, нуклеиновые кислоты могут быть ДНК или РНК. Способы преобразования, которые различны в зависимости от типа клетки хозяина, включают электропорацию, трансфекцию с использованием хлорида кальция, хлорид рубидия, фосфат кальция, ДЭАЭ-декстрана или других веществ, бомбардировку микропулями; липофекцию; заражение (если вектор является инфицирующим агентом) и другие методы. При анализе других способов получения антиген-специфических цитотоксических клеток или иммунного ответа против опухолевых клеток больного анализировались и в данном изобретении описывались только способы получения антиген-активированных зрелых ДК.
Известен способ получения антиген-специфических цитотоксических клеток, при котором сначала получают зрелые ДК, а затем производят магнитную трансфекцию зрелых ДК экспрессионными плазмидами, содержащими ДНК-конструкции (RU 2013135146, C12N 1/00, 2013).
Известен также способ стимуляции цитотоксического иммунного ответа против клеток опухолевой линии аденокарциномы молочной железы, экспрессирующих специфические антигены, с помощью дендритных клеток, трансфицированных полиэпитопной ДНК-конструкцией (RU 2012135124, C07N 5/0784, 2012). Описанный способ включает, в том числе, трансфицирование уже зрелых ДК генетическими ДНК-конструкциями, несущими ЦТЛ- и Тх-эпитопы опухоль-ассоциированных антигенов рака молочной железы.
В описанных способах применяется магнитная трансфекция ДНК-конструкций в уже зрелые ДК.
Наиболее близким по технической сущности к заявляемому является способ получения антиген-активированных зрелых ДК, описанный как составная часть в заявке на изобретение «Способ индукции противоопухолевого цитотоксического иммунного ответа с помощью дендритных клеток, трансфицированных РНК опухолевых клеток против клеток рака молочной железы» (RU 2013158429, C12N 5/0784, 2013). Способ по заявке включает совместное культивирование аутологичных мононуклеарных клеток (МНК), выделенных из периферической крови с дендритными клетками (ДК), полученными из моноцитов прилипающей фракции МНК, трансфицированными РНК опухолевых клеток рака молочной железы (РМЖ), а затем подвергнутых стимулированному 
созреванию, отличающийся тем, что совместное культивирование неприлипающей фракции МНК и ДК, трансфицированных РНК аутологичных опухолевых клеток, проводят в присутствии рекомбинантного человеческого интерлейкина-12 и рекомбинантного человеческого интерлейкина-18, а для получения зрелых ДК после двух суток культивирования прилипающей фракции МНК больных РМЖ полученные незрелые ДК, трансфицированные опухолевыми РНК по прошествии суток подвергают стимулированному созреванию еще в течение суток. Способ получения антиген-активированных зрелых ДК в описанном способе включает получение прилипающей фракции мононуклеарных клеток (МНК), выделенной из периферической крови больного раком молочной железы, получение незрелых ДК, инкубирование ДК со стимуляторами созревания и трансфекцию РНК опухолевых клеток рака молочной железы.
Недостатком описанного способа получения антиген-активированных зрелых ДК является длительный срок их получения. Использованный способ оказывает непрямое токсичное действие на дендритные клетки и значительно снижает процент жизнеспособности (не более 21%) полученных зрелых дендритных клеток, что требует большого количества периферической крови для получения конечной фракции антиген-активированных дендритных клеток и необходимость проведения дополнительного этапа очистки от мертвых дендритных клеток с привлечением реактивов и специализированного оборудования, что также удлиняет процесс получения результата. Описанные недостатки вносят высокие риски и затраты в достижение требуемого результата - получения зрелых антиген-активированных дендритных клеток.
Задача, решаемая изобретением, заключается в сокращении на 1 сутки срока получения антиген-активированных зрелых ДК и повышении жизнеспособности полученных антиген-активированных зрелых ДК.
Поставленная задача решается тем, что в способе получения зрелых антиген-активированных дендритных клеток (ДК) с трансфекцией РНК опухолевых клеток рака молочной железы (РМЖ), включающем получение прилипающей фракции мононуклеарных клеток (МНК), выделенных из периферической крови больного, получение незрелых ДК, инкубирование ДК со стимуляторами созревания и трансфекцию РНК опухолевых клеток, причем получение зрелых антиген-активированных ДК производят в течение 24 часов сочетанием магнитной трансфекции РНК опухолевых клеток рака молочной железы в соотношении 0,3 мкг РНК к 0,3 мкл взвеси магнитных частиц со стимуляторами созревания, выбранными из ряда:
Сущность предлагаемого изобретения заключается в том, что антигенную активацию незрелых ДК проводят с помощью магнитной трансфекции РНК аутологичных опухолевых клеток рака молочной железы, а для досозревания ДК используют, например, рекомбинантный человеческий провоспалительный цитокин - фактор некроза опухоли (рчФНО-α) или ИЛ-1β, ЛПС или их любым сочетанием.
Принципиальным отличием разработанного способа является применение протоколов активации и созревания ДК, включающих магнитную трансфекцию с РНК, полученных из аутологичных незрелых опухолевых клеток рака молочной железы, что активирует ДК против собственных опухолевых антигенов, тем самым увеличивая цитотоксический ответ, а также сокращает стадию получения зрелых антиген-активированных ДК до 3 суток.
Во всех известных способах трансфицируют РНК в зрелые ДК и отличными от заявляемого способа (магнитная трансфекция).
Например, при применении химической трансфекции незрелых дендритных клеток сам трансфицирующий агент (соли кальция, липосомы, липоконъюгаты) оказывает негативное влияние на дендритные клетки, взаимодействуя с мембраной клеток, нарушая ее целостность, что приводит к гибели клеток.
Например, при применении электропорации незрелых дендритных клеток сам трансфицирующий агент доставляется посредством разряда электрического импульса, что оказывает негативное влияние на дендритные клетки, приводя к критическим повреждениям мембран клеток.
Особенностью применения магнитной трансфекции на стадии незрелых ДК заключается в том, что на этой стадии дифференцировки (созревания) дендритные клетки активно сами способны захватывать антигенный материал посредством эндоцитоза, помимо трансфекции, и на этой стадии активно работают механизмы процессинга антигена. На стадии зрелых дендритных клеток сами клетки практически не способны захватывать антигенный материал, на первый план выходит функция дендритных клеток - презентация антигенов опухолевых клеток основным эффекторным клеткам иммунной защиты (CD4+ и CD8+лимфоциты).
Изобретение осуществляется следующим образом.
Выделенная из периферической крови больных раком молочной железы прилипающая фракция мононуклеарных клеток культивируется в концентрации 1 млн/мл в полной среде, содержащей 10% эмбриональной телячьей сыворотки, 2 мМ L-глютамина, 10 мМ HEPES, 5×10-5 мМ 2 -меркаптоэтанола, 80 мкг/мл гентамицина, 100 мкг/мл ампициллина в атмосфере 5% CO2 при 37°C с добавлением рчГМ-КСФ (50 нг/мл) и рчИЛ-4 (100 нг/мл). Через 48 часов культивирования полученные незрелые ДК трансфицируют РНК аутологичных опухолевых клеток рака молочной железы методом магнитной трансфекции. Процедура магнитной трансфекции РНК в дендритные клетки составляет в среднем 45 минут и включает в себя смену питательной среды, приготовление реактива для трансфекции, содержащей РНК аутологичных опухолевых клеток рака молочной железы и магнитные частицы в соотношении 0,3 мкг РНК к 0,3 мкл взвеси магнитных частиц и инкубацию на универсальной магнитной плате. Далее для досозревания незрелых дендритных клеток вносится рчФНО-α в дозе 25 нг/мл в культуру клеток и инкубируют в течение 24 часов в условиях CO2-инкубатора. Чтобы оценить жизнеспособность полученных зрелых антиген-активированных дендритных клеток использовали краситель эритрозин. Жизнеспособность полученных зрелых антиген-активированных дендритных клеток составляла не менее 85%.
Для того, чтобы показать функциональную зрелость полученных антиген-активированных дендритных клеток, полученные ДК совместно культивировали с неприлипшей фракцией МНК. Далее оценивали влияние полученных зрелых антиген-активированных дендритных клеток на активацию лимфоцитов в культуре МНК, а именно пролиферативную активность CD4+ и CD8+лимфоцитов с помощью специфического красителя (CFSE) методом проточной цитофлуориметрии.
Показано достоверное повышение пролиферативной активности CD4+ и CD8+лимфоцитов, что служит показателем функциональной зрелости антиген-активированных дендритных клеток, полученных предложенным способом (см. таблицу).
Указанная проверка в объем защиты изобретения не входит. Предлагаемое изобретение позволяет в более короткие сроки получать зрелые антиген-активированные дендритные клетки, имеющие высокую жизнеспособность (не менее 85%), способные стимулировать пролиферативную активность CD4+ и CD8+ лимфоцитов в культуре мононуклеарных клеток.
Проведенные исследования показали, что разработанный способ получения зрелых антиген-активированных дендритных клеток с трансфекцией РНК аутологичных опухолевых клеток является эффективным и перспективным для дальнейшего его использования для стимуляции противоопухолевого цитотоксического иммунного ответа против клеток рака молочной железы.
Claims (1)
- Способ получения зрелых антиген-активированных дендритных клеток с трансфекцией РНК опухолевых клеток рака молочной железы, включающий получение прилипающей фракции мононуклеарных клеток, выделенных из периферической крови больного, получение незрелых дендритных клеток, инкубирование дендритных клеток со стимуляторами созревания и трансфекцию РНК опухолевых клеток, отличающийся тем, что получение зрелых антиген-активированных дендритных клеток производят в течение 24 часов сочетанием магнитной трансфекции РНК опухолевых клеток рака молочной железы в соотношении 0,3 мкг РНК к 0,3 мкл взвеси магнитных частиц со стимулятором созреванияв дозе 25 нг/мл.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2016100500A RU2631792C2 (ru) | 2016-01-11 | 2016-01-11 | Способ получения зрелых антиген-активированных дендритных клеток с трансфекцией РНК опухолевых клеток рака молочной железы |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2016100500A RU2631792C2 (ru) | 2016-01-11 | 2016-01-11 | Способ получения зрелых антиген-активированных дендритных клеток с трансфекцией РНК опухолевых клеток рака молочной железы |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2016100500A RU2016100500A (ru) | 2017-07-14 |
| RU2631792C2 true RU2631792C2 (ru) | 2017-09-26 |
Family
ID=59497257
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2016100500A RU2631792C2 (ru) | 2016-01-11 | 2016-01-11 | Способ получения зрелых антиген-активированных дендритных клеток с трансфекцией РНК опухолевых клеток рака молочной железы |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2631792C2 (ru) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2521506C1 (ru) * | 2013-04-01 | 2014-06-27 | Общество с ограниченной ответственностью "БиоМедТех" (ООО "БиоМедТех") | Способ генерации антиген-специфических цитотоксических клеток с противоопухолевой активностью при раке молочной железы |
| RU2013158429A (ru) * | 2013-12-26 | 2015-07-10 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Научно-исследовательский институт фундаментальной и клинической иммунологии" (НИИФКИ) | Способ индукции противоопухолевого цитотоксического иммунного ответа с помощью дендритных клеток, трансфицированных рнк опухолевых клеток, против клеток рака молочной железы |
-
2016
- 2016-01-11 RU RU2016100500A patent/RU2631792C2/ru active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2521506C1 (ru) * | 2013-04-01 | 2014-06-27 | Общество с ограниченной ответственностью "БиоМедТех" (ООО "БиоМедТех") | Способ генерации антиген-специфических цитотоксических клеток с противоопухолевой активностью при раке молочной железы |
| RU2013158429A (ru) * | 2013-12-26 | 2015-07-10 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Научно-исследовательский институт фундаментальной и клинической иммунологии" (НИИФКИ) | Способ индукции противоопухолевого цитотоксического иммунного ответа с помощью дендритных клеток, трансфицированных рнк опухолевых клеток, против клеток рака молочной железы |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| /s12026-015-8735-0. YU Z. et al., Allogeneic mRNA-based electrotransfection of autologous dendritic cells and specific antitumor effects against osteosarcoma in rats, Med. Oncol., 2012, v.29, p.3440-3448. BERTRAM J., MATra - Magnet Assisted Transfection: Combining Nanotechnology and Magnetic Forces to Improve Intracellular Delivery of Nucleic Acids, Current Pharmaceutical Biotechnology, 2006, v.7, p.277-285. * |
| BERTRAM J., MATra - Magnet Assisted Transfection: Combining Nanotechnology and Magnetic Forces to Improve Intracellular Delivery of Nucleic Acids, Current Pharmaceutical Biotechnology, 2006, v.7, p.277-285. * |
| SENNIKOV S.V. et al., Induction of an antitumor response using dendritic cells transfected with DNA constructs encoding the HLA-A*02:01- restricted epitopes of tumor-associated antigens in culture of mononuclear cells of breast cancer patients, Immunol. Res., 2015, * |
| SENNIKOV S.V. et al., Induction of an antitumor response using dendritic cells transfected with DNA constructs encoding the HLA-A*02:01- restricted epitopes of tumor-associated antigens in culture of mononuclear cells of breast cancer patients, Immunol. Res., 2015, DOI 10.1007/s12026-015-8735-0. YU Z. et al., Allogeneic mRNA-based electrotransfection of autologous dendritic cells and specific antitumor effects against osteosarcoma in rats, Med. Oncol., 2012, v.29, p.3440-3448. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2016100500A (ru) | 2017-07-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP5358683B2 (ja) | ナチュラルキラー細胞の増殖方法 | |
| CN105567634A (zh) | 一种用于nk细胞体外扩增的培养基及nk细胞体外扩增的方法 | |
| CA2796379A1 (en) | Method for proliferation of antigen-specific t cells | |
| JP2017533702A (ja) | 生体分子の免疫細胞への送達 | |
| EP1930414B1 (en) | Method for activation treatment of antigen-presenting cell | |
| JP2004536598A (ja) | 電気穿孔による真核細胞への線形ポリヌクレオチドの改良された形質移入 | |
| CN106635987B (zh) | 一种体外高效扩增nk细胞的方法及其应用 | |
| JP2022065102A (ja) | ナチュラルキラー細胞の生産方法 | |
| EA010434B1 (ru) | Способ получения цитотоксических лимфоцитов | |
| EA012520B1 (ru) | Способ получения цитотоксических лимфоцитов | |
| JPWO2009060865A1 (ja) | 医薬組成物及び医薬組成物の製造方法 | |
| AU2012334095A1 (en) | Vaccine for tumor immunotherapy | |
| CN109535241B (zh) | Dc-cik共培养细胞及其制备方法、致敏抗原和应用 | |
| RU2631792C2 (ru) | Способ получения зрелых антиген-активированных дендритных клеток с трансфекцией РНК опухолевых клеток рака молочной железы | |
| CN104524560A (zh) | 树突状细胞肿瘤疫苗及其制备方法和用途 | |
| CN112608903A (zh) | 一种淋巴细胞及其培养体系和培养方法 | |
| CN114250198A (zh) | 一种增强免疫细胞抗肿瘤效果的方法 | |
| Met et al. | Studies on mRNA electroporation of immature and mature dendritic cells: effects on their immunogenic potential | |
| WO2022007665A1 (zh) | 非病毒方法制备稳定高表达嵌合受体的nk细胞 | |
| CN112553157B (zh) | 一种淋巴细胞的扩增体系及扩增方法 | |
| TWI458485B (zh) | 毒殺型樹突細胞群組用於製備藥物的用途及包含其之醫藥組合物 | |
| CN117551618A (zh) | 一种k562工程细胞及其在体外扩增nk细胞中的应用 | |
| CN107574149B (zh) | 一种树突状细胞的促成熟方法及其用途 | |
| CN111117967A (zh) | 制备过表达外源基因的细胞的方法 | |
| RU2520091C2 (ru) | Способ стимуляции цитотоксического иммунного ответа против клеток опухолевой линии аденокарциномы молочной железы, экспрессирующих специфические антигены, с помощью дендритных клеток, трансфецированных полиэпитопной днк-конструкцией |