RU2631607C1 - Средство для профилактики лейкоза крупного рогатого скота и способ его применения - Google Patents

Средство для профилактики лейкоза крупного рогатого скота и способ его применения Download PDF

Info

Publication number
RU2631607C1
RU2631607C1 RU2016145862A RU2016145862A RU2631607C1 RU 2631607 C1 RU2631607 C1 RU 2631607C1 RU 2016145862 A RU2016145862 A RU 2016145862A RU 2016145862 A RU2016145862 A RU 2016145862A RU 2631607 C1 RU2631607 C1 RU 2631607C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
solution
prevention
sodium chloride
protein fraction
molecular weight
Prior art date
Application number
RU2016145862A
Other languages
English (en)
Inventor
Владислав Николаевич Ласкавый
Original Assignee
Владислав Николаевич Ласкавый
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Владислав Николаевич Ласкавый filed Critical Владислав Николаевич Ласкавый
Priority to RU2016145862A priority Critical patent/RU2631607C1/ru
Priority to EP17873383.8A priority patent/EP3403668A4/en
Priority to BR112019003609A priority patent/BR112019003609A2/pt
Priority to CA3018982A priority patent/CA3018982C/en
Priority to CN201780050553.XA priority patent/CN109641040B/zh
Priority to MX2019002570A priority patent/MX2019002570A/es
Priority to PCT/RU2017/000404 priority patent/WO2018097750A1/ru
Priority to AU2017363399A priority patent/AU2017363399B2/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2631607C1 publication Critical patent/RU2631607C1/ru
Priority to US15/836,943 priority patent/US10434163B2/en

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/02—Bacterial antigens
    • A61K39/04—Mycobacterium, e.g. Mycobacterium tuberculosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74—Bacteria
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/02—Peptides of undefined number of amino acids; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/164—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
    • C07K14/35—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Mycobacteriaceae (F)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/55—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the host/recipient, e.g. newborn with maternal antibodies
    • A61K2039/552—Veterinary vaccine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/58—Medicinal preparations containing antigens or antibodies raising an immune response against a target which is not the antigen used for immunisation
    • A61K2039/585—Medicinal preparations containing antigens or antibodies raising an immune response against a target which is not the antigen used for immunisation wherein the target is cancer
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/80—Vaccine for a specifically defined cancer
    • A61K2039/804—Blood cells [leukemia, lymphoma]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2121/00—Preparations for use in therapy

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

Изобретение относится к ветеринарной медицине, а именно к средству для профилактики лейкоза крупного рогатого скота. Средство для профилактики лейкоза крупного рогатого скота, которое содержит водорастворимую белковую фракцию с молекулярной массой 18-20 кДа, выделенную из продуктов разрушения микобактерий туберкулеза, и характеризующуюся наличием пиков при длине волны 214 нм в ультрафиолетовой области спектра, фосфатно-солевой буферный раствор, водный раствор муравьиного альдегида и изотонический раствор натрия хлорида, взятые в определенном соотношении компонентов. Способ применения средства для профилактики лейкоза крупного рогатого скота. Вышеописанное средство эффективно для профилактики лейкоза крупного рогатого скота, позволяет эффективно и с минимальными затратами обеспечить целенаправленный иммунный ответ путем активизации клеточного иммунитета против вируса лейкоза крупного рогатого скота за счет увеличения количества киллерных клеток. 2 н.п. ф-лы, 1 ил., 3 табл., 3 пр.

Description

Изобретение относится к области ветеринарной медицины и может быть использовано для профилактики лейкоза крупного рогатого скота. Изобретение расширяет арсенал средств заявленного назначения и обеспечивает пожизненную устойчивость животных к вирусу лейкоза.
Известны средства для профилактики лейкоза крупного рогатого скота и способы профилактики заболевания с использованием этих средств.
Известна инактивированная вакцина против лейкоза крупного рогатого скота (см. авторское свидетельство СССР №820015 по кл. А61К 39/12, опуб. 23.10.87), содержащая белковые фракции р25 и gP70, выделенные из лейкоцитарных клеток периферической крови больных лейкозом животных.
Полученный антиген-белковый иммунизирующий агент вводят телятам в возрасте 1-3 месяца с полным адъювантом Фрейнда в соотношении 1:1. Иммунизацию проводят трехкратно с интервалом 10-12 дней.
Известна также инактивированная вакцина против лейкоза крупного рогатого скота (см. патент РФ №2202367 по кл. МПК А61К 39/12, опуб. 20.04.2003), содержащая вируссодержащие лейкоцитарные клетки периферической крови животных. Иммунизацию животных проводят подкожно трехкратно с интервалом 10-14 дней. Животных вакцинируют в возрасте от 2-х месяцев до 2-х лет.
Однако, применение вакцин не нашло широкого практического использования из-за отсутствия средств коррекции иммунологической недостаточности и образования антител с низким титром.
Известны различные препараты для профилактики лейкоза крупного рогатого скота.
В частности, известно применение янтарного биостимулятора (см. патент РФ №2420275 по кл. МПК А61К 31/194, опуб. 10.06.2011), поликарбоксиэтилена (см. патент РФ №2421184 по кл. МПК 2421184, опуб. 20.06.2011), метронидазола и норсульфазола или сульфадимезина (см. патент РФ №2300883 по кл. МПК А61К 67/02, опуб. 20.06.2007), лигфола (см. патент РФ №2320357 по кл. МПК А61К 36/00, опуб. 27.03.2008) и других.
Однако, воздействие этих препаратов на иммунную систему при лейкозе не изучено и практического применения эти препараты не нашли.
В частности, метронидазол и сульфаниламиды обладают бактерицидным, а не вирулицидным действием, что не позволяет оказывать специфическое действие на вирус лейкоза. Лигфол представляет собой гидролизат природного лигнина, действующим началом которого являются гуминовые вещества. Лигфол проявляет стресс-корректорное и адаптогенное действие, инъекции болезненны и вызывают длительное беспокойство животных. Воздействие янтарного биостимулятора, представляющего собой смесь янтарной кислоты и антисептика стимулятора Дорогова (АСД) фракция №2, как и любого биологически-активного препарата, также изучено мало и требует дополнительных исследований.
Наиболее близким к заявляемому является профилактика лейкоза крупного рогатого скота на основе туберкулезного анатоксина (см. патент РФ №2396978 по кл. МПК А61К 39/295, опуб. 20.08.2010). Туберкулезный анатоксин вводят подкожно за 20-30 суток до вакцинации инактивированной вакциной против лейкоза КРС. Туберкулезный анатоксин получают (см., например, патент РФ №2392002 по кл. МПК А61К 39/00, опуб. 20.06.2010) путем детоксикации туберкулезных экзо- и эндотоксинов двумя детоксикаторами - 0,2% раствором формалина в течение 7-9 суток при 42-45°C и 0,5% раствором этония в течение 7-9 суток при 42-45°C.
Однако, в известном способе профилактики лейкоза используют сам продукт разрушения микобактерий, а не выделенную из него белковую фракцию. Продукт разрушения содержит и белки, и липиды, и полисахариды. Липиды и полисахариды увеличивают иммуногенную нагрузку на организм животных, изменяют состояние гомеостаза и препятствуют целенаправленному иммунному ответу на белки микобактерий, что, в конченом итоге, снижает эффективность профилактических мер и не обеспечивает пожизненной устойчивости животных к заболеванию.
Изобретение направлено на решение задачи расширения спектра профилактических препаратов и формирования новых подходов к проблеме профилактики лейкоза крупного рогатого скота, позволяющих обеспечить пожизненную устойчивость животных к заражению лейкозом.
Достигаемый при этом технический результат заключается в создании средства и способа профилактики лейкоза крупного рогатого скота, позволяющих эффективно и с минимальными затратами обеспечить целенаправленный иммунный ответ путем активизации клеточного иммунитета против вируса лейкоза крупного рогатого скота за счет увеличения количества киллерных клеток.
Для решения поставленной задачи и достижения указанного технического результата предложена группа изобретений, а именно - средство для профилактики лейкоза КРС и способ его применения.
Указанный технический результат в части самого средства достигается тем, что средство для профилактики лейкоза крупного рогатого скота, согласно изобретению, содержит водорастворимую белковую фракцию с молекулярной массой 18-20 кДа, выделенную из продуктов разрушения микобактерий туберкулеза, и характеризующуюся наличием пиков при длине волны 214 нм в ультрафиолетовой области спектра, фосфатно-солевой буферный раствор, водный раствор муравьиного альдегида и изотонический раствор натрия хлорида при следующем соотношении компонентов, мас. %:
водорастворимая белковая фракция
с молекулярной массой 18-20 кДа,
выделенная из продуктов разрушения
микобактерий туберкулеза 0,05-0,125%
фосфатно-солевой буферный раствор 9,95-24,875
водный раствор муравьиного альдегида 0,025-0,046
изотонический раствор натрия хлорида остальное
Указанный технический результат в части способа применения этого средства достигается тем, что телятам 1-9-дневного возраста вводят однократно внутримышечно в дозе 4,0-6,0 мл средство, содержащее водорастворимую белковую фракцию с молекулярной массой 18-20 кДа, выделенную из продуктов разрушения микобактерий туберкулеза, и характеризующуюся наличием пиков при длине волны 214 нм в ультрафиолетовой области спектра, фосфатно-солевой буферный раствор, водный раствор муравьиного альдегида и изотонический раствор натрия хлорида при следующем соотношении компонентов, мас. %:
водорастворимая белковая фракция
с молекулярной массой 18-20 кДа,
выделенная из продуктов разрушения
микобактерий туберкулеза 0,05-0,125%
фосфатно-солевой буферный раствор 9,95-24,875
водный раствор муравьиного альдегида 0,025-0,046
изотонический раствор натрия хлорида остальное
Указанные признаки являются существенными и достаточными для получения требуемого технического результата.
В известных авторам источниках патентной и научно-технической информации не описано средства для профилактики лейкоза крупного рогатого скота, обеспечивающего пожизненную устойчивость животных к заражению лейкозом за счет активизации клеточного иммунитета путем увеличения количества киллерных клеток. Смесь выделенной из продуктов разрушения микобактерий туберкулеза водорастворимой белковой фракции с молекулярной массой 18-20 кДа в фосфатно-солевом буферном растворе с растворами муравьиного альдегида и хлорида натрия обеспечивает активизацию киллерной системы защиты, а именно - вовлечение в иммунный ответ субпопуляции Т-лимфоцитов: Th0.
В заявляемом средстве для профилактики лейкоза крупного рогатого скота используют смесь раствора муравьиного альдегида с изотоническим раствором хорда натрия не в качестве детоксикатора, а в качестве компонента, обеспечивающего стабилизацию иммунного ответа на уровне киллерной системы.
Введение только белковой фракции или только муравьиного альдегида не дает желаемого результата. Только синергизм компонентов и экспериментальным путем подобранные их соотношения позволили получить высокий эффект устойчивости животных к заражению лейкозом за счет активизации киллерной системы. При этом концентрация муравьиного альдегида не изменяет структуру белкового компонента микобактерий.
Авторами найден новый, неочевидный подход к решению задачи профилактики лейкоза КРС путем использования смеси компонентов (белковой фракции с определенной молекулярной массой, выделенной из продуктов разрушения микобактерий туберкулеза и смеси растворов муравьиного альдегида и хлорида натрия) для увеличения количества киллерных клеток иммунной системы.
Известно, что киллерные клетки тормозят развитие опухолевых клеток (см., например, патент РФ №2443411 по кл. МПК А61К 9/08, опубл. 27.02.2012; патент РФ №2262941 по кл. МПК А61К 35/16, опуб. 27.10.2005). Однако они используются исключительно для лечения заболевания.
Использование механизма увеличения киллерных клеток иммунной системы для профилактики лейкоза неизвестно и нигде не описано.
Также неизвестно использование белковой фракции, выделенной из продуктов разрушения микобактерий туберкулеза, для профилактики лейкоза.
Введение средства телятам до 10-дневного возраста (т.е. в неонатальный период) на основе смеси выделенной белковой фракции с раствором муравьиного альдегида для профилактики лейкоза крупного рогатого скота также неизвестно.
Обработка телят в неонатальный период данным средством объясняется тем, что у таких телят при рождении гуморальный иммунитет отсутствует, а клеточный достаточно развит. Активизация клеточного иммунитета в столь раннем возрасте и, как следствие, киллерной системы иммунитета, обеспечивает пожизненную устойчивость животных к заражению лейкозом.
Известно, что за клеточный иммунитет отвечают цитотоксические Т-лимфоциты CD8 и воспалительные Т-лимфоциты CD4 (Тh1), за гуморальный - Т-хелперные лимфоциты CD4 (Th2) и В-лимфоциты.
В данном изобретении решена задача активизации эффективного иммунитета против лейкоза путем увеличения цитотоксических лимфоцитов (CD8) и воспалительных Т-лимфоцитов CD4 (Th1), уменьшения Т-хелперных лимфоцитов CD4 (Th2) и увеличения количества третьей субпопуляции Т-лимфоцитов - Th0.
Таким образом, в организме животных заранее создаются условия для увеличения количества киллерных клеток, которые, являясь барьером, препятствуют развитию опухолевых клеток. Данный механизм позволяет сохранить баланс клеточного и гуморального иммунитетов, который поддерживается на протяжении всей жизни.
Сказанное позволяет сделать вывод о наличии в заявляемом изобретении критерия «изобретательский уровень».
Изобретение иллюстрируется рисунком 1, на котором представлена хроматограмма белковой фракции, выделенной из продуктов разрушения возбудителя туберкулеза бычьего вида M.bovis (штамм №8).
Средство для профилактики лейкоза крупного рогатого скота готовят следующим образом.
В качестве продуктов разрушения возбудителя туберкулеза используют ППД-туберкулин для млекопитающих, полученный из штамма M.bovis №8 и представляющий собой прозрачную жидкость светло-коричневого цвета (см. Инструкцию по применению туберкулина очищенного (ППД) для млекопитающих, утвержденную заместителем Руководителя Россельхознадзора 30.09.2011).
Для получения белковой фракции жидкость с продуктами разрушения возбудителя осаждают солевым раствором (например, сульфатом аммония) и центрифугируют. Надосадок удаляют, а осадок перерастворяют в солевом буферном растворе.
Проводят диализ, доводят рН раствора до 7,0-7,4, после чего определяют концентрацию белка общепринятыми методами, в частности - методом Лоури.
Выбор значений показателя рН растворителя объясняется значением показателя в клетках организма. Общеизвестно (см., например, http://zenslim.ru/content), что в клетках организма рН имеет значение около 7,0, во внеклеточной жидкости - 7,4.
Молекулярную массу белка определяли с помощью жидкостной хроматографии высокого давления (HPLC), которую проводили, в частности, на жидкостном хроматографе «Стайер», с использованием спектрофотометрического детектора А214 (длина волны 214 нм). Для разделения использовали колонку BioSep-SEC-S 2000 5 мкм 145А, 300×7,8 мм. В качестве элюента применяли 0,01М фосфатно-солевой буфер, скорость потока - 1 мл в минуту, либо 0,01М фосфатносолевой буфер с 0,025% раствором азида натрия рН 6,8 и при скорости потока 2 мл в минуту.
В качестве стандартов использовали бычий сывороточный альбумин с молекулярной массой 64-70 кДа, лактоферрин с молекулярной массой 75-80 кДа и папаин с молекулярной массой 20 кДа.
Учитывали такие стандартные показатели, как время задержки образца на колонке или время ретракции (RT, мин), интенсивность пиков по высоте (mAU) и относительно количественное содержание вещества, которое определялось как % отношения каждого пика к общей площади пиков (А, %).
Основные белки в выделенной из продуктов разрушения возбудителя туберкулеза бычьего вида M.bovis (штамм №8) имели молекулярную массу 18-20 кДа (см. рис.1).
В таблице 1 представлен результат хроматографии композиции на основе белковой фракции, выделенной из продуктов разрушения возбудителя туберкулеза.
Figure 00000001
Далее смешивают полученную белковую фракцию с молекулярной массой 18-20 кДа в буферном растворе, в котором содержится от 4,8 мг/мл до 5,2 мг/мл белка (т.е. от 0,48% до 0,52%), с изотоническим раствором хлорида натрия 085,-0,95% концентрации.
Для приготовления 50% раствора белковой фракции берут 1 часть буферного раствора с белком и добавляют 1 часть изотонического раствора.
Состав полученной смеси будет следующим:
- белковая фракция - 0,24%-0,26%,
- фосфатно-солевой буферный раствор - 49,74%-49,76%,
- раствор хлорида натрия - остальное.
При приготовлении 20% раствора белковой фракции состав полученной смеси будет следующим:
- белковая фракция - 0,096% - 0,104%,
- фосфатно-солевой буферный раствор - 49,896%-49,904%
- раствор хлорида натрия - остальное.
Далее готовят смесь водного раствора муравьиного альдегида с изотоническим раствором натрия хлорида.
Для этого берут 0,15-0,25 мл 36,5-37,5%-ного медицинского раствора муравьиного альдегида (формальдегида), добавляют его в 99,75-99,85 мл изотонического 0,85%-ного (или 0,95%-ного) раствора хлорида натрия. Смесь растворов тщательно перемешивают.
Соотношение частей компонентов раствора муравьиного альдегида и изотонического раствора хлорида натрия были подобраны экспериментальным путем.
При приготовлении препарата из 37%-ного раствора муравьиного альдегида конечная концентрация муравьиного альдегида в полученном препарате будет составлять 0,055-0,0925 мас. %.
Затем смешивают полученную смесь растворов: белковой фракции в буферном и изотоническом растворах со смесью растворов муравьиного альдегида и изотоническим раствором хлорида натрия.
Пример 1 приготовления средства для профилактики лейкоза
Берут 100 мл ППД-туберкулин для млекопитающих, полученный из штамма M.bovis №8. Из него готовят белковую фракцию следующим образом.
К 100 мл туберкулина добавляют 42 г сульфата аммония для осаждения белка, центрифугируют при 4500 об/мин. в течение 20 мин. Надосадок удаляют, а осадок перерастворяют в 1 мл 0,01М раствора фосфатно-солевого буфера. Диализуют при помощи диализной мембраны с диаметром пор 3500 Да в 0,01М растворе фосфатно-солевого буфера в течение 24 часов, доводят рН раствора до 7,2-7,4, после чего определяют концентрацию белка методом Лоури на биохимическом анализаторе StatFax 3300.
Количество белковой фракции из продуктов разрушения возбудителя туберкулеза составляло 5,0 мг/мл.
Аналогично описанному в примере 1 были получены белковые фракции из других партий ППД-туберкулина. Количество белка везде варьировалось от 4,8 до 5,2 мг/мл.
Далее смешивают полученную белковую фракцию с молекулярной массой 18-20 кДа в буферном растворе, в котором содержится 5 мг/мл белка (т.е. 0,5%), с изотоническим раствором хлорида натрия 085,-0,95% концентрации.
Затем готовят смесь водного раствора муравьиного альдегида с изотоническим раствором хлорида натрия.
Для этого берут 0,2 мл 37%-ного медицинского раствора муравьиного альдегида (формальдегида), добавляют его в 99,8 мл изотонического 0,85%-ного раствора хлорида натрия. Смесь растворов тщательно перемешивают. Конечная концентрация муравьиного альдегида в полученном препарате будет составлять 0,074 мас. %.
Смешивают белковую фракцию в фосфатно-солевом буферном растворе со смесью растворов муравьиного альдегида и натрия хлорида в равных соотношениях -1:1.
Содержание компонентов препарата будет следующим, мас. %:
водорастворимая белковая фракция
с молекулярной массой 18-20 кДа,
выделенная из продуктов разрушения
микобактерий штамма M.bovis №8 0,125
фосфатно-солевой буферный раствор 24,875
водный раствор муравьиного альдегида 0,037
изотонический раствор натрия хлорида остальное
Аналогично описанному готовили препарат из белковых фракций с содержанием белка от 0,48% и 0,52%.
Пример 2. Обоснование количественного содержания компонентов в препарате.
В экспериментах было использовано 120 телят 2-9-дневного возраста, из которых 108 вводили средство в дозах от 4 до 6 мл для профилактики лейкоза при разных количественных содержаниях компонентов.
При этом 12 голов были контрольными, которым вводили физиологический раствор в дозе 5 мл на голову.
Результаты представлены в таблице 2.
Figure 00000002
В контрольной группе из 12 голов пало 4 головы, что составило 33,3%.
Пример 3.
Для обоснования увеличения количества киллерных клеток в организме животных (нетелей и коров) проводили иммунологические исследования крови животных, обработанных в возрасте 2-9 дней средством для профилактики лейкоза крупного рогатого скота:
- нетелей 2,5-летнего возраста,
- коров 5-летнего возраста,
Результаты представлены в таблице 3.
Figure 00000003
Из таблицы 3 следует, что у 2,5-годовалых нетелей регистрируется снижение соотношения Т-хелперов к Т-супрессорам (Тх/Тс) и увеличение количества третьей субпопуляции Т-лимфоцитов - Th0.
У 5-летних (опытных) коров регистрируется достоверное повышение содержания всех фракций лимфоцитов (Т и В) при сохранении повышенного содержания Th0 (киллеров).
Результаты серологических исследований на наличие антител к вирусу лейкоза, проведенные в реакции иммунодиффузии, у нетелей и коров в возрасте соответственно 2,5 года и 5 лет были отрицательны.
Таким образом, заявляемое средство для профилактики лейкоза крупного рогатого скота, а также способ его применения обеспечивают пожизненную устойчивость животных к заражению лейкозом путем активизации клеточного иммунитета против вируса лейкоза крупного рогатого скота за счет увеличения количества киллерных клеток.

Claims (4)

1. Средство для профилактики лейкоза крупного рогатого скота, характеризующееся тем, что оно содержит водорастворимую белковую фракцию с молекулярной массой 18-20 кДа, выделенную из продуктов разрушения микобактерий туберкулеза, и характеризующуюся наличием пиков при длине волны 214 нм в ультрафиолетовой области спектра, фосфатно-солевой буферный раствор, водный раствор муравьиного альдегида и изотонический раствор натрия хлорида при следующем соотношении компонентов, мас.%:
водорастворимая белковая фракция с молекулярной массой 18-20 кДа, выделенная из продуктов разрушения микобактерий туберкулеза 0,05-0,125 фосфатно-солевой буферный раствор 9,95-24,875 водный раствор муравьиного альдегида 0,025-0,046 изотонический раствор натрия хлорида остальное
2. Способ применения средства для профилактики лейкоза крупного рогатого скота, включающий внутримышечное введение телятам 1-9-дневного возраста в дозе 4,0-6,0 мл на голову средства, содержащего водорастворимую белковую фракцию с молекулярной массой 18-20 кДа, выделенную из продуктов разрушения микобактерий туберкулеза и характеризующуюся наличием пиков при длине волны 214 нм в ультрафиолетовой области спектра, фосфатно-солевой буферный раствор, водный раствор муравьиного альдегида и изотонический раствор натрия хлорида при следующем соотношении компонентов, мас.%:
водорастворимая белковая фракция с молекулярной массой 18-20 кДа, выделенная из продуктов разрушения микобактерий туберкулеза 0,05-0,125 фосфатно-солевой буферный раствор 9,95-24,875 водный раствор муравьиного альдегида 0,025-0,046 изотонический раствор натрия хлорида остальное
RU2016145862A 2016-11-22 2016-11-22 Средство для профилактики лейкоза крупного рогатого скота и способ его применения RU2631607C1 (ru)

Priority Applications (9)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2016145862A RU2631607C1 (ru) 2016-11-22 2016-11-22 Средство для профилактики лейкоза крупного рогатого скота и способ его применения
EP17873383.8A EP3403668A4 (en) 2016-11-22 2017-06-13 MEANS FOR PREVENTING HORN CATTLE LEUKOSIS AND METHOD OF APPLICATION
BR112019003609A BR112019003609A2 (pt) 2016-11-22 2017-06-13 remédio para profilaxia de leucemia bovina e método de uso.
CA3018982A CA3018982C (en) 2016-11-22 2017-06-13 Remedy for bovine leukemia prophylaxis and use thereof
CN201780050553.XA CN109641040B (zh) 2016-11-22 2017-06-13 用于预防牛白血病的药剂及其使用方法
MX2019002570A MX2019002570A (es) 2016-11-22 2017-06-13 Agente para la profilaxis de la leucosis bovina y metodo para su uso.
PCT/RU2017/000404 WO2018097750A1 (ru) 2016-11-22 2017-06-13 Средство для профилактики лейкоза крупного рогатого скота и способ его применения
AU2017363399A AU2017363399B2 (en) 2016-11-22 2017-06-13 Agent for the prophylaxis of bovine leukosis and method for the use thereof
US15/836,943 US10434163B2 (en) 2016-11-22 2017-12-11 Remedy for bovine leukemia prophylaxis and use thereof

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2016145862A RU2631607C1 (ru) 2016-11-22 2016-11-22 Средство для профилактики лейкоза крупного рогатого скота и способ его применения

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2631607C1 true RU2631607C1 (ru) 2017-09-25

Family

ID=59931316

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2016145862A RU2631607C1 (ru) 2016-11-22 2016-11-22 Средство для профилактики лейкоза крупного рогатого скота и способ его применения

Country Status (9)

Country Link
US (1) US10434163B2 (ru)
EP (1) EP3403668A4 (ru)
CN (1) CN109641040B (ru)
AU (1) AU2017363399B2 (ru)
BR (1) BR112019003609A2 (ru)
CA (1) CA3018982C (ru)
MX (1) MX2019002570A (ru)
RU (1) RU2631607C1 (ru)
WO (1) WO2018097750A1 (ru)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2784067C1 (ru) * 2021-09-22 2022-11-23 Владислав Николаевич Ласкавый Композиция для поддержания нормального состояния гомеостаза и препарат на её основе
WO2023048596A1 (ru) * 2021-09-22 2023-03-30 Владислав Николаевич ЛАСКАВЫЙ Композиция для поддержания нормального состояния гомеостаза и препарат на её основе

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2005127138A (ru) * 2005-08-29 2007-03-10 Юрий Федорович Бардеев (RU) Способ профилактики и лечения лейкоза крупного рогатого скота(варианты)
RU2008112753A (ru) * 2008-04-02 2009-10-10 ФГОУ ВПО Курская государственная сельскохозяйственная академия им. профессора И.И. Иванова (RU) Способ получения туберкулезного анатоксина
RU2396978C1 (ru) * 2009-03-05 2010-08-20 Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования Курская государственная сельскохозяйственная академия имени профессора И.И. Иванова Способ профилактики развития лейкоза крупного рогатого скота
RU2420275C1 (ru) * 2009-12-16 2011-06-10 Государственное научное учреждение Курский научно-исследовательский институт агропромышленного производства Способ профилактики лейкоза крупного рогатого скота

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DK79893D0 (da) * 1993-07-02 1993-07-02 Statens Seruminstitut New vaccine
RU2146533C1 (ru) * 1998-08-19 2000-03-20 Ласкавый Владислав Николаевич Способ профилактики туберкулеза молодняка крупного рогатого скота
NZ537242A (en) * 2002-06-21 2008-10-31 Newcastle Innovation Ltd Probiotic propionibacterium jensenii 702
WO2007121194A1 (en) * 2006-04-10 2007-10-25 The Regents Of The University Of California Immunostimulatory recombinant intracellular pathogen immunogenic compositions and methods of use
RU2390559C1 (ru) * 2008-10-22 2010-05-27 Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования Казанский государственный медицинский университет Способ получения антигена из micobacterium tuberculosis
PL2661253T3 (pl) * 2011-01-04 2017-08-31 Archivel Farma, Sl Preparat liposomowy odpowiedni do leczenia lub zapobiegania gruźlicy
EP3038648A4 (en) * 2013-08-30 2017-04-19 Longhorn Vaccines and Diagnostics, LLC Enhancing immunity to tuberculosis
RU2558924C1 (ru) * 2014-07-15 2015-08-10 Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Научно-исследовательский ветеринарный институт Нечернозёмной зоны Российской Федерации" Способ профилактики лейкоза молодняка крупного рогатого скота

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2005127138A (ru) * 2005-08-29 2007-03-10 Юрий Федорович Бардеев (RU) Способ профилактики и лечения лейкоза крупного рогатого скота(варианты)
RU2008112753A (ru) * 2008-04-02 2009-10-10 ФГОУ ВПО Курская государственная сельскохозяйственная академия им. профессора И.И. Иванова (RU) Способ получения туберкулезного анатоксина
RU2396978C1 (ru) * 2009-03-05 2010-08-20 Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования Курская государственная сельскохозяйственная академия имени профессора И.И. Иванова Способ профилактики развития лейкоза крупного рогатого скота
RU2420275C1 (ru) * 2009-12-16 2011-06-10 Государственное научное учреждение Курский научно-исследовательский институт агропромышленного производства Способ профилактики лейкоза крупного рогатого скота

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2784067C1 (ru) * 2021-09-22 2022-11-23 Владислав Николаевич Ласкавый Композиция для поддержания нормального состояния гомеостаза и препарат на её основе
WO2023048596A1 (ru) * 2021-09-22 2023-03-30 Владислав Николаевич ЛАСКАВЫЙ Композиция для поддержания нормального состояния гомеостаза и препарат на её основе

Also Published As

Publication number Publication date
EP3403668A4 (en) 2019-11-27
BR112019003609A2 (pt) 2019-07-09
US10434163B2 (en) 2019-10-08
EP3403668A1 (en) 2018-11-21
WO2018097750A1 (ru) 2018-05-31
AU2017363399A1 (en) 2019-02-14
CA3018982C (en) 2022-09-13
CA3018982A1 (en) 2018-05-31
AU2017363399B2 (en) 2019-09-26
CN109641040B (zh) 2023-02-28
MX2019002570A (es) 2019-07-01
US20180169207A1 (en) 2018-06-21
CN109641040A (zh) 2019-04-16

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Byars et al. Adjuvant formulation for use in vaccines to elicit both cell-mediated and humoral immunity
James et al. The influence of adjuvant on induction of protective immunity by a non-living vaccine against schistosomiasis.
RU2631607C1 (ru) Средство для профилактики лейкоза крупного рогатого скота и способ его применения
JP7079819B2 (ja) 化合物および方法
CN115501333A (zh) 一种疫苗佐剂、疫苗组合物及其应用
CN115651088A (zh) 人参总多糖的制备方法和应用、人参总多糖疫苗佐剂及其疫苗组合物
RU2378011C1 (ru) Способ профилактики бруцеллеза крупного рогатого скота
RU2368391C1 (ru) Способ получения комплексного иммуностимулирующего препарата для повышения естественной резистентности организма животных
JPS6338971B2 (ru)
RU2396978C1 (ru) Способ профилактики развития лейкоза крупного рогатого скота
RU2348427C2 (ru) Адъювантная композиция для инъекционных вакцин против тканевых гельминтозов
JPS6236501B2 (ru)
RU2609858C1 (ru) Способ профилактики ларвальной стадии альвеолярного эхинококкоза
WO2024040979A1 (zh) 一种人参酸性多糖疫苗佐剂、疫苗组合物及其应用
Savina et al. The effect of synthetic adjuvant on the formation of the immune response
RU2279274C2 (ru) Способ профилактики вторичного альвеолярного эхинококкоза (гидатидоза)
RU2076715C1 (ru) Способ получения препарата "аффинолейкин" для противоинфекционной иммунотерапии
CN116115746A (zh) 含有木鳖子总皂苷和铝盐的疫苗佐剂及其疫苗组合物
Seiler et al. BCG versus VCN: The antigenicity and the adjuvant effect of both compounds
HRP20050763A2 (en) Ganglioside based vaccine compositions for subcutaneous administration
RU2590598C1 (ru) Вакцина для профилактики сибирской язвы и некробактериоза животных и способ получения её
RU2021817C1 (ru) Способ получения вакцины против холеры
RU2601915C1 (ru) Способ лечения тейлериоза крупного рогатого скота
RU2229895C1 (ru) Вакцина против вирусной геморрагической болезни кроликов
RU2636454C2 (ru) Вакцина для профилактики некробактериоза животных и способ её получения

Legal Events

Date Code Title Description
PC41 Official registration of the transfer of exclusive right

Effective date: 20180507