WO2018097750A1 - Средство для профилактики лейкоза крупного рогатого скота и способ его применения - Google Patents

Средство для профилактики лейкоза крупного рогатого скота и способ его применения Download PDF

Info

Publication number
WO2018097750A1
WO2018097750A1 PCT/RU2017/000404 RU2017000404W WO2018097750A1 WO 2018097750 A1 WO2018097750 A1 WO 2018097750A1 RU 2017000404 W RU2017000404 W RU 2017000404W WO 2018097750 A1 WO2018097750 A1 WO 2018097750A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
solution
agent
sodium chloride
protein fraction
leukosis
Prior art date
Application number
PCT/RU2017/000404
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Владислав Николаевич ЛАСКАВЫЙ
Original Assignee
Владислав Николаевич ЛАСКАВЫЙ
ИВЛЕВ, Андрей Валентинович
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Владислав Николаевич ЛАСКАВЫЙ, ИВЛЕВ, Андрей Валентинович filed Critical Владислав Николаевич ЛАСКАВЫЙ
Priority to EP17873383.8A priority Critical patent/EP3403668A4/en
Priority to CA3018982A priority patent/CA3018982C/en
Priority to MX2019002570A priority patent/MX2019002570A/es
Priority to CN201780050553.XA priority patent/CN109641040B/zh
Priority to BR112019003609A priority patent/BR112019003609A2/pt
Priority to AU2017363399A priority patent/AU2017363399B2/en
Priority to US15/836,943 priority patent/US10434163B2/en
Publication of WO2018097750A1 publication Critical patent/WO2018097750A1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/02—Bacterial antigens
    • A61K39/04—Mycobacterium, e.g. Mycobacterium tuberculosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74—Bacteria
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/02—Peptides of undefined number of amino acids; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/164—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
    • C07K14/35—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Mycobacteriaceae (F)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/55—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the host/recipient, e.g. newborn with maternal antibodies
    • A61K2039/552—Veterinary vaccine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/58—Medicinal preparations containing antigens or antibodies raising an immune response against a target which is not the antigen used for immunisation
    • A61K2039/585—Medicinal preparations containing antigens or antibodies raising an immune response against a target which is not the antigen used for immunisation wherein the target is cancer
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/80—Vaccine for a specifically defined cancer
    • A61K2039/804—Blood cells [leukemia, lymphoma]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2121/00—Preparations for use in therapy

Definitions

  • the invention relates to the field of veterinary medicine and can be used for the prevention of leukemia in cattle.
  • the invention extends the arsenal of means of the claimed purpose and provides lifelong resistance of animals to the leukemia virus.
  • the resulting antigen-protein immunizing agent is administered to calves aged 1-3 months with Freund's complete adjuvant in a ratio of 1: 1. Immunization is carried out three times with an interval of 10-12 days.
  • an amber biostimulator see RF patent JY “2420275 for CL MPKA61K31 / 194, publ. 06/10/2011 1
  • polycarboxyethylene see RF patent N ° 2421 184 for CL IPC 2421 184, publ. 20.06 .201 1
  • metronidazole and norsulfazole or sulfadimezin see RF patent JY "2300883 according to IPC A61K67 / 02, publ. 06/20/2007
  • ligfola see RF patent JN ° 2320357 according to IPC A61K36 / 00, publ. 03/27/2008
  • metronidazole and sulfonamides have a bactericidal rather than virucidal effect, which does not allow a specific effect on the leukemia virus.
  • Ligfol is a hydrolyzate of natural lignin, the active principle of which are humic substances. Ligfol exhibits a stress-corrective and adaptogenic effect, injections are painful and cause long-term anxiety in animals.
  • the effect of the amber biostimulator which is a mixture of succinic acid and the Dorogov stimulant antiseptic (ASD) fraction N ° 2, like any biologically active drug, has also been little studied and requires additional research.
  • ASD Dorogov stimulant antiseptic
  • Tuberculous toxoid is administered subcutaneously 20-30 days before vaccination with an inactivated vaccine against cattle leukemia. Tuberculous toxoid receive (see, for example, RF patent N ° 2392002 according to class IPC A61K39 / 00, publ.
  • the destruction product of mycobacteria is used, and not the protein fraction isolated from it.
  • the product of destruction contains proteins, and lipids, and polysaccharides. Lipids and polysaccharides increase the immunogenic load on the animal organism, change the state of homeostasis and interfere with a targeted immune response to mycobacterial proteins, which, ultimately, reduces the effectiveness of preventive measures and does not ensure the animals' lifelong resistance to disease.
  • the invention is aimed at solving the problem of expanding the range of preventive drugs and the formation of new approaches to the problem of prevention of cattle leukemia, allowing to ensure lifelong resistance of animals to leukemia infection.
  • the technical result achieved in this case consists in the creation of a means and method for the prevention of cattle leukemia, which allows efficiently and with minimal costs to provide a targeted immune response by enhancing cellular immunity against cattle leukemia virus by increasing the number of killer cells.
  • a group of inventions is proposed, namely, a means for the prevention of cattle leukemia and a method for its use.
  • the tool for the prevention of leukemia in cattle contains a water-soluble a protein fraction with a molecular weight of 18-20 kDa, isolated from the destruction products of mycobacterium tuberculosis, and characterized by the presence of peaks at a wavelength of 214 nm in the ultraviolet region of the spectrum, phosphate-buffered saline, an aqueous solution of formic aldehyde and an isotonic sodium chloride solution in the following ratio of components , wt.%:
  • Mycobacterium tuberculosis 0.05-0.125% phosphate-buffered saline 9.95-24.875 aqueous solution of formic aldehyde 0.025-0.046 isotonic sodium chloride solution The rest The specified technical result in terms of the method of use of this tool is achieved in that calves 1-9 days administered once intramuscularly at a dose of 4.0-6.0 ml, an agent containing a water-soluble protein fraction with a molecular weight of 18-20 kDa, isolated from the destruction products of mycobacterium tuberculosis, and characterized by the presence of peaks at a wavelength of 214 nm ultraviolet, phosphate buffered saline, aqueous solution of formic aldehyde and isotonic sodium chloride at the following component ratio solution, wt.%:
  • Mycobacterium tuberculosis 0.05-0.125% phosphate-buffered saline 9.95-24.875 aqueous solution of formic aldehyde 0.025-0.046 isotonic sodium chloride solution These signs are essential and sufficient to obtain the desired technical result.
  • a mixture of formic aldehyde solution with isotonic sodium chord solution is used not as a detoxifier, but as a component that ensures the stabilization of the immune response at the level of the killer system.
  • a mixture of components protein fraction with a specific molecular weight isolated from the destruction products of mycobacterium tuberculosis and a mixture of solutions formic aldehyde and sodium chloride
  • killer cells inhibit the development of tumor cells (see, for example, RF patent N ° 244341 1 according to IPC A61K9 / 08, publ. 02.27.2012; RF patent L2262941 according to IPC A61K35 / 16, publ. 27.10. 2005). However, they are used solely to treat the disease.
  • CD8 cytotoxic T-lymphocytes and inflammatory CD4 (Thl) T-lymphocytes are responsible for cellular immunity
  • CD4 (Th2) T-helper lymphocytes and B-lymphocytes are responsible for humoral immunity.
  • This invention solves the problem of enhancing effective immunity against leukemia by increasing cytotoxic lymphocytes (CD8) and inflammatory T-lymphocytes CD4 (YOU), reducing T-helper lymphocytes CD4 (Th2) and an increase in the number of the third subpopulation of T lymphocytes - ThO.
  • Figure 1 shows the chromatogram of the protein fraction isolated from the destruction products of the bovine tuberculosis pathogen M. bovis (strain N.> 8).
  • Cattle leukemia prophylaxis is prepared as follows.
  • PPD-tuberculin for mammals is used, obtained from the M.bovis strain N ° 8 and which is a clear liquid of light brown color (see Instructions for the use of purified tuberculin (1SH) for mammals, approved by the Deputy Head of Rosselkhoznadzor 30.09 .2011).
  • the liquid with the pathogen destruction products is precipitated with saline solution (for example, ammonium sulfate) and centrifuged. The supernatant is removed and the sediment is redissolved in saline buffer.
  • saline solution for example, ammonium sulfate
  • Dialysis is carried out, the pH of the solution is adjusted to 7.0-7.4, after which the protein concentration is determined by conventional methods, in particular, by the Lowry method.
  • the choice of the pH of the solvent is explained by the value of the indicator in the cells of the body. It is well known (see, for example, http://zensHm.ru/content), that in the cells of the body the pH is about 7.0, in the extracellular fluid - 7.4.
  • the molecular weight of the protein was determined using high pressure liquid chromatography (HPLC), which was carried out, in particular, on a liquid chromatograph "Stayer", using a spectrophotometric detector A214 (wavelength 214 nm).
  • HPLC high pressure liquid chromatography
  • a BioSep-SEC-S 2000 column of 5 ⁇ m 145A, 300x7.8 mm was used.
  • 0.01 M phosphate-buffered saline, flow rate of 1 ml per minute, or 0.01 M phosphate-buffered saline with 0.025% sodium azide solution pH 6.8 and at a flow rate of 2 ml per minute were used.
  • Bovine serum albumin with a molecular weight of 64 - 70 kDa, lactoferrin with a molecular weight of 75 - 80 kDa and papain with a molecular weight of 20 kDa were used as standards.
  • the main proteins in the bovine tuberculosis pathogen M. bovis (strain N28) isolated from the destruction products of the causative agent had a molecular weight of 18-20 kDa (see Fig. 1).
  • Table 1 presents the result of chromatography of a composition based on a protein fraction isolated from the products of the destruction of the causative agent of tuberculosis.
  • the resulting protein fraction with a molecular weight of 18-20 kDa is mixed in a buffer solution that contains from 4.8 mg / ml to 5.2 mg / ml of protein (i.e., from 0.48% to 0.52%) , with isotonic sodium chloride solution 085, -0.95% concentration.
  • composition of the resulting mixture will be as follows:
  • Example 1 preparation for the prevention of leukemia
  • the amount of protein fraction from the destruction products of the tuberculosis pathogen was 5.0 mg / ml.
  • protein fractions were obtained from other batches of PPD-tuberculin.
  • the amount of protein everywhere ranged from 4.8 to 5.2 mg / ml.
  • the obtained protein fraction with a molecular weight of 18-20 kDa is mixed in a buffer solution containing 5 mg / ml of protein (i.e. 0.5%) with an isotonic solution of sodium chloride 085, -0.95% concentration.
  • the protein fraction is mixed in phosphate-buffered saline with a mixture of solutions of formic aldehyde and sodium chloride in equal proportions - 1: 1.
  • the content of the components of the drug will be as follows, wt.%:
  • isotonic sodium chloride solution Similarly to the described preparation, a preparation was prepared from protein fractions with a protein content of 0.48% and 0.52%.
  • Example 2 The rationale for the quantitative content of the components in the preparation.
  • the claimed agent for the prevention of leukemia in cattle as well as the method of its use, provide lifelong resistance of animals to infection with leukemia by enhancing cellular immunity against leukemia virus in cattle by increasing the number of killer cells.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

Изобретение относится к области ветеринарной медицины и может быть использовано для профилактики лейкоза крупного рогатого скота. Изобретение расширяет арсенал средств заявленного назначения и обеспечивает пожизненную устойчивость животных к вирусу лейкоза. Изобретение направлено на решение задачи расширения спектра профилактических препаратов и формирования новых подходов к проблеме профилактики лейкоза крупного рогатого скота, позволяющих обеспечить пожизненную устойчивость животных к заражению лейкозом. Технический результат заключается в создании средства и способа профилактики лейкоза крупного рогатого скота, позволяющих эффективно и с минимальными затратами обеспечить целенаправленный иммунный ответ путем активизации клеточного иммунитета против вируса лейкоза крупного рогатого скота за счет увеличения количества киллерных клеток. Средство для профилактики лейкоза крупного рогатого скота содержит водорастворимую белковую фракцию с молекулярной массой 18-20 кДа, выделенную из продуктов разрушения микобактерий туберкулеза, и характеризующуюся наличием пиков при длине волны 214 нм в ультрафиолетовой области спектра, фосфатно-солевой буферный раствор, водный раствор муравьиного альдегида и изотонический раствор натрия хлорида. Способ заключается во введении указанного средства телятам 1-9-дневного возраста однократно внутримышечно в дозе 4,0-6,0 мл на голову.

Description

СРЕДСТВО ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ ЛЕЙКОЗА
КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА И СПОСОБ ЕГО ПРИМЕНЕНИЯ
Изобретение относится к области ветеринарной медицины и может быть использовано для профилактики лейкоза крупного рогатого скота. Изобретение расширяет арсенал средств заявленного назначения и обеспечивает пожизненную устойчивость животных к вирусу лейкоза.
Известны средства для профилактики лейкоза крупного рогатого скота и способы профилактики заболевания с использованием этих средств.
Известна инактивированная вакцина против лейкоза крупного рогатого скота (см. авторское свидетельство СССР Ν» 820015 по кл. А61К39/12, опуб. 23.10.87), содержащая белковые фракции р25 и gP70, выделенные из лейкоцитарных клеток периферической крови больных лейкозом животных.
Полученный антиген-белковый иммунизирующий агент вводят телятам в возрасте 1-3 месяца с полным адъювантом Фрейнда в соотношении 1 : 1. Иммунизацию проводят трёхкратно с интервалом 10-12 дней.
Известна также инактивированная вакцина против лейкоза крупного рогатого скота (см. патент РФ 2202367 по кл. МПК А61К39/12, опуб. 20.04.2003), содержащая вируссодержащие лейкоцитарные клетки периферической крови животных. Иммунизацию животных проводят подкожно трёхкратно с интервалом 10-14 дней. Животных вакцинируют в возрасте от 2-х месяцев до 2-х лет. Однако, применение вакцин не нашло широкого практического использования из-за отсутствия средств коррекции иммунологической недостаточности и образования антител с низким титром.
Известны различные препараты для профилактики лейкоза крупного рогатого скота.
В частности, известно применение янтарного биостимулятора (см. патент РФ JY« 2420275 по кл. МПКА61К31/194, опуб. 10.06.201 1), поликарбоксиэтилена (см. патент РФ N° 2421 184 по кл. МПК 2421 184, опуб. 20.06.201 1), метронидазола и норсульфазола или сульфадимезина (см. патент РФ JY« 2300883 по кл. МПК А61К67/02, опуб. 20.06.2007), лигфола (см. патент РФ JN° 2320357 по кл. МПК А61К36/00, опуб. 27.03.2008) и других.
Однако, воздействие этих препаратов на иммунную систему при лейкозе не изучено и практического применения эти препараты не нашли.
В частности, метронидазол и сульфаниламиды обладают бактерицидным, а не вирулицидным действием, что не позволяет оказывать специфическое действие на вирус лейкоза. Лигфол представляет собой гидролизат природного лигнина, действующим началом которого являются гуминовые вещества. Лигфол проявляет стресс-корректорное и адаптогенное действие, инъекции болезненны и вызывают длительное беспокойство животных. Воздействие янтарного биостимулятора, представляющего собой смесь янтарной кислоты и антисептика стимулятора Дорогова (АСД) фракция N° 2, как и любого биологически- активного препарата, также изучено мало и требует дополнительных исследований.
Наиболее близким к заявляемому является профилактика лейкоза крупного рогатого скота на основе туберкулёзного анатоксина (см. патент РФ JYO 2396978 по кл. МПК А61К39/295, опуб. 20.08.2010). Туберкулёзный анатоксин водят подкожно за 20-30 суток до вакцинации инактивированной вакциной против лейкоза КРС. Туберкулёзный анатоксин получают (см., например, патент РФ N°2392002 по кл. МПК А61К39/00, опуб. 20.06.2010) путём детоксикации туберкулёзных экзо- и эндотоксинов двумя детоксикаторами - 0,2% раствором формалина в течение 7-9 суток при 42-45°С и 0,5% раствором этония в течение 7-9 суток при 42-45°С.
Однако, в известном способе профилактики лейкоза используют сам продукт разрушения микобактерий, а не выделенную из него белковую фракцию. Продукт разрушения содержит и белки, и липиды, и полисахариды. Липиды и полисахариды увеличивают иммуногенную нагрузку на организм животных, изменяют состояние гомеостаза и препятствуют целенаправленному иммунному ответу на белки микобактерий, что, в конченом итоге, снижает эффективность профилактических мер и не обеспечивает пожизненной устойчивости животных к заболеванию.
Изобретение направлено на решение задачи расширения спектра профилактических препаратов и формирования новых подходов к проблеме профилактики лейкоза крупного рогатого скота, позволяющих обеспечить пожизненную устойчивость животных к заражению лейкозом.
Достигаемый при этом технический результат заключается в создании средства и способа профилактики лейкоза крупного рогатого скота, позволяющих эффективно и с минимальными затратами обеспечить целенаправленный иммунный ответ путём активизации клеточного иммунитета против вируса лейкоза крупного рогатого скота за счёт увеличения количества киллерных клеток.
Для решения поставленной задачи и достижения указанного технического результата предложена группа изобретений, а именно - средство для профилактики лейкоза КРС и способ его применения.
Указанный технический результат в части самого средства достигается тем, что средство для профилактики лейкоза крупного рогатого скота, согласно изобретению, содержит водорастворимую белковую фракцию с молекулярной массой 18-20 кДа, выделенную из продуктов разрушения микобактерий туберкулёза, и характеризующуюся наличием пиков при длине волны 214 нм в ультрафиолетовой области спектра, фосфатно-солевой буферный раствор, водный раствор муравьиного альдегида и изотонический раствор натрия хлорида при следующем соотношении компонентов, мас.%:
водорастворимая белковая фракция с молекулярной массой 18-20 кДа,
выделенная из продуктов разрушения
микобактерий туберкулёза 0,05-0,125% фосфатно-солевой буферный раствор 9,95-24,875 водный раствор муравьиного альдегида 0,025-0,046 изотонический раствор натрия хлорида остальное Указанный технический результат в части способа применения этого средства достигается тем, что телятам 1-9-дневного возраста вводят однократно внутримышечно в дозе 4,0-6,0 мл средство, содержащее водорастворимую белковую фракцию с молекулярной массой 18-20 кДа, выделенную из продуктов разрушения микобактерий туберкулёза, и характеризующуюся наличием пиков при длине волны 214 нм в ультрафиолетовой области спектра, фосфатно-солевой буферный раствор, водный раствор муравьиного альдегида и изотонический раствор натрия хлорида при следующем соотношении компонентов, мас.%:
водорастворимая белковая фракция с молекулярной массой 18-20 кДа,
выделенная из продуктов разрушения
микобактерий туберкулёза 0,05-0,125% фосфатно-солевой буферный раствор 9,95-24,875 водный раствор муравьиного альдегида 0,025-0,046 изотонический раствор натрия хлорида остальное Указанные признаки являются существенными и достаточными для получения требуемого технического результата.
В известных авторам источниках патентной и научно-технической информации не описано средства для профилактики лейкоза крупного рогатого скота, обеспечивающего пожизненную устойчивость животных к заражению лейкозом за счёт активизации клеточного иммунитета путём увеличения количества киллерных клеток. Смесь выделенной из продуктов разрушения микобактерий туберкулёза водорастворимой белковой фракции с молекулярной массой 18-20 кДа в фосфатно-солевом буферном растворе с растворами муравьиного альдегида и хлорида натрия обеспечивает активизацию киллерной системы защиты, а именно - вовлечение в иммунный ответ субпопуляции Т- лимфоцитов: Th0
В заявляемом средстве для профилактики лейкоза крупного рогатого скота используют смесь раствора муравьиного альдегида с изотоническим раствором хорда натрия не в качестве детоксикатора, а в качестве компонента, обеспечивающего стабилизацию иммунного ответа на уровне киллерной системы.
Введение только белковой фракции или только муравьиного альдегида не даёт желаемого результата. Только синергизм компонентов и экспериментальным путём подобранные их соотношения позволили получить высокий эффект устойчивости животных к заражению лейкозом за счёт активизации киллерной системы. При этом, концентрация муравьиного альдегида не изменяет структуру белкового компонента микобактерий.
Авторами найден новый, неочевидный подход к решению задачи профилактики лейкоза КРС путём использования смеси компонентов (белковой фракции с определённой молекулярной массой, выделенной из продуктов разрушения микобактерий туберкулёза и смеси растворов муравьиного альдегида и хлорида натрия) для увеличения количества киллерных клеток иммунной системы.
Известно, что киллерные клетки тормозят развитие опухолевых клеток (см., например, патент РФ N° 244341 1 по кл. МПК А61К9/08, опуб. 27.02.2012; патент РФ ЛЬ2262941 по кл. МПК А61К35/16, опуб. 27.10.2005). Однако, они используются исключительно для лечения заболевания.
Использование механизма увеличения киллерных клеток иммунной системы для профилактики лейкоза неизвестно и нигде не описано.
Также неизвестно использование белковой фракции, выделенной из продуктов разрушения микобактерий туберкулёза, для профилактики лейкоза.
Введение средства телятам до 10-дневного возраста (т.е. в неонатальный период) на основе смеси выделенной белковой фракции с раствором муравьиного альдегида для профилактики лейкоза крупного рогатого скота также неизвестно.
Обработка телят в неонатальный период данным средством объясняется тем, что у таких телят при рождении гуморальный иммунитет отсутствует, а клеточный достаточно развит. Активизация клеточного иммунитета в столь раннем возрасте и, как следствие, киллерной системы иммунитета, обеспечивает пожизненную устойчивость животных к заражению лейкозом.
Известно, что за клеточный иммунитет отвечают цитотоксические Т-лимфоциты CD8 и воспалительные Т- лимфоциты CD4 (Thl ), за гуморальный - Т-хелперные лимфоциты CD4 (Th2) и В-лимфоциты.
В данном изобретении решена задача активизации эффективного иммунитета против лейкоза путём увеличения цитотоксических лимфоцитов (CD8) и воспалительных Т- лимфоцитов CD4 (ТЫ ), уменьшения Т-хелперных лимфоцитов CD4 (Th2) и увеличения количества третьей субпопуляции Т- лимфоцитов - ThO.
Таким образом, в организме животных заранее создаются условия для увеличения количества киллерных клеток, которые, являясь барьером, препятствуют развитию опухолевых клеток. Данный механизм позволяет сохранить баланс клеточного и гуморального иммунитетов, который поддерживается на протяжении всей жизни.
Сказанное позволяет сделать вывод о наличии в заявляемом изобретении критерия «изобретательский уровень».
Изобретение иллюстрируется рисунком 1 , на котором представлена хроматограмма белковой фракции, выделенной из продуктов разрушения возбудителя туберкулёза бычьего вида M.bovis (штамм N.>8).
Средство для профилактики лейкоза крупного рогатого скота готовят следующим образом.
В качестве продуктов разрушения возбудителя туберкулёза используют ППД-туберкулин для млекопитающих, полученный из штамма M.bovis N°8 и представляющий собой прозрачную жидкость светло-коричневого цвета (см. Инструкцию по применению туберкулина очищенного (1ШД) для млекопитающих, утверждённую заместителем Руководителя Россельхознадзора 30.09.2011).
Для получения белковой фракции жидкость с продуктами разрушения возбудителя осаждают солевым раствором (например, сульфатом аммония) и центрифугируют. Надосадок удаляют, а осадок перерастворяют в солевом буферном растворе.
Проводят диализ, доводят рН раствора до 7,0-7,4, после чего определяют концентрацию белка общепринятыми методами, в частности - методом Лоури.
Выбор значений показателя рН растворителя объясняется значением показателя в клетках организма. Общеизвестно (см., например, http://zensHm.ru/content), что в клетках организма рН имеет значение около 7,0, во внеклеточной жидкости - 7,4.
Молекулярную массу белка определяли с помощью жидкостной хроматографии высокого давления (HPLC), которую проводили, в частности, на жидкостном хроматографе «Стайер», с использованием спектрофотометрического детектора А214 (длина волны 214 нм). Для разделения использовали колонку BioSep-SEC-S 2000 5 мкм 145А, 300x7,8 мм. В качестве элюента применяли 0,01М фосфатно-солевой буфер, скорость потока - 1 мл в минуту, либо 0,01М фосфатносолевой буфер с 0,025 % раствором азида натрия рН 6,8 и при скорости потока 2 мл в минуту.
В качестве стандартов использовали бычий сывороточный альбумин с молекулярной массой 64 - 70 кДа, лактоферрин с молекулярной массой 75 - 80 кДа и папаин с молекулярной массой 20 кДа.
Учитывали такие стандартные показатели, как время задержки образца на колонке или время ретракции (RT, мин), интенсивность пиков по высоте (mAU) и относительно количественное содержание вещества, которое определялось как % отношения каждого пика к общей площади пиков (А, %).
Основные белки в выделенной из продуктов разрушения возбудителя туберкулёза бычьего вида M.bovis (штамм N28) имели молекулярную массу 18-20 кДа (см. рис.1).
В таблице 1 представлен результат хроматографии композиции на основе белковой фракции, выделенной из продуктов разрушения возбудителя туберкулёза.
Figure imgf000010_0001
Далее смешивают полученную белковую фракцию с молекулярной массой 18-20 кДа в буферном растворе, в котором содержится от 4,8 мг/мл до 5,2 мг/мл белка (т.е. от 0,48% до 0,52%), с изотоническим раствором хлорида натрия 085,-0,95% концентрации.
Для приготовления 50% раствора белковой фракции берут 1 часть буферного раствора с белком и добавляют 1 часть изотонического раствора.
Состав полученной смеси будет следующим:
- белковая фракция - 0,24% - 0,26%,
- фосфатно-солевой буферный раствор - 49,74%-49,76%
- раствор хлорида натрия - остальное.
При приготовлении 20% раствора белковой фракции полученной смеси будет следующим:
- белковая фракция - 0,096% - 0,104%,
- фосфатно-солевой буферный раствор - 49,896%-49,904%
- раствор хлорида натрия - остальное.
Далее готовят смесь водного раствора муравьиного альдегида с изотоническим раствором натрия хлорида.
Для этого берут 0, 15-0,25 мл 36,5-37,5%-ного медицинского раствора муравьиного альдегида (формальдегида), добавляют его в 99,75-99,85 мл изотонического 0,85%-ного (или 0,95%-ного) раствора хлорида натрия. Смесь растворов тщательно перемешивают.
Соотношение частей компонентов раствора муравьиного альдегида и изотонического раствора хлорида натрия были подобраны экспериментальным путём.
При приготовлении препарата из 37%-ного раствора муравьиного альдегида конечная концентрация муравьиного альдегида в полученном препарате будет составлять 0,055-0,0925 мас.%. Затем смешивают полученную смесь растворов: белковой фракции в буферном и изотоническом растворах со смесью растворов муравьиного альдегида и изотоническим раствором хлорида натрия. Пример 1 приготовления средства для профилактики лейкоза
Берут 100 мл ППД-туберкулин для млекопитающих, полученный из штамма M.bovis N°8. Из него готовят белковую фракцию следующим образом.
К 100 мл туберкулина добавляют 42 г сульфата аммония для осаждения белка, центрифугируют при 4500 об/мин. в течение 20 мин. Надосадок удаляют, а осадок перерастворяют в 1 мл 0,01М раствора фосфатно-солевого буфера. Диализуют при помощи диализной мембраны с диаметром пор 3500 Да в 0,01М растворе фосфатно-солевого буфера в течение 24 часов, доводят рН раствора до 7,2-7,4, после чего определяют концентрацию белка методом Лоури на биохимическом анализаторе StatFax 3300.
Количество белковой фракции из продуктов разрушения возбудителя туберкулёза составляло 5,0 мг/мл.
Аналогично описанному в примере 1 были получены белковые фракции из других партий ППД-туберкулина. Количество белка везде варьировалось от 4,8 до 5,2 мг/мл.
Далее смешивают полученную белковую фракцию с молекулярной массой 18-20 кДа в буферном растворе, в котором содержится 5 мг/мл белка (т.е. 0,5%), с изотоническим раствором хлорида натрия 085,-0,95% концентрации.
Затем готовят смесь водного раствора муравьиного альдегида с изотоническим раствором хлорида натрия.
Для этого берут 0,2 мл 37%-ного медицинского раствора муравьиного альдегида (формальдегида), добавляют его в 99,8 мл изотонического 0,85%-ного раствора хлорида натрия. Смесь растворов тщательно перемешивают. Конечная концентрация муравьиного альдегида в полученном препарате будет составлять 0,074 мас.%.
Смешивают белковую фракцию в фосфатно-солевом буферном растворе со смесью растворов муравьиного альдегида и натрия хлорида в равных соотношениях - 1: 1.
Содержание компонентов препарата будет следующим, мас.%:
водорастворимая белковая фракция
с молекулярной массой 18-20 кДа,
выделенная из продуктов разрушения
микобактерий штамма M.bovis Ν_>8 ...
фосфатно-солевой буферный раствор
водный раствор муравьиного альдегида
изотонический раствор натрия хлорида Аналогично описанному готовили препарат из белковых фракций с содержанием белка от 0,48% и 0,52%.
Пример 2. Обоснование количественного содержания компонентов в препарате.
В экспериментах было использовано 120 телят 2-9-дневного возраста, из которых 108 вводили средство в дозах от 4 до 6 мл для профилактики лейкоза при разных количественных содержаниях компонентов.
При этом, 12 голов были контрольными, которым вводили физиологический раствор в дозе 5 мл на голову.
Результаты представлены в таблице 2.
Таблица 2.
Количественное содержание Доза Кол- Пало Выжило компонентов, мас.% во
бел- фосф- р-р Изот ата телят абс. % абс. % ковая соле- мур. Р-р знач. знач.
фрак- вой альд Натр
ция буф.р Хл. Oc- 4 мл 12 0 0 12 100
0,037 тальн.
0,05 9,95
до 5 мл 12 1 8,3 1 1 91,7
100%
6 мл 12 3 25,0 9 75,0
Oc- 4 мл 12 2 16,7 10 83,3 тальн.
0,075 14,925 0,037 ДО 5 мл 12 0 0 12 100
100% 6 мл 12 2 16,7 10 83,3
Ос- 4 мл 12 0 0 12 100 тальн.
0,125 24,875 0,037
до 5 мл 12 0 0 12 100
100% 6 мл 12 1 8,3 1 1 91 ,7
В контрольной группе из 12 голов пало 4 головы, что составило
Пример 3.
Для обоснования увеличения количества киллерных клеток в организме животных (нетелей и коров) проводили иммунологические исследования крови животных, обработанных в возрасте 2-9 дней средством для профилактики лейкоза крупного рогатого скота:
- нетелей 2,5-летнего возраста,
- коров 5 -летнего возраста,
Результаты представлены в таблице 2.
Таблица 2.
Иммунологические показатели нетелей (2,5 года)
и коров 5 -летнего возраста
Хар-ка Т-лимф. Тх- Тс- Тх/Тс Т-актив. В-лимф. ThO группы лимф. лимф.
НЕТ] £ЛИ в возрасте 2,5 года
Не обра- 3343 ± 2054 ± 1295± 1,6± 1876± 459± 877± ботанные. 286,07 178,18 113,84 0,07 159,95 38,29 97,93
Обрабо- 3081 ± 1522 ± 1559 ± 1,0± 1631± 517 ± 1616 ± танные 249,9 133,1 132,3 0,14 133,51 39,5 242,7
КОРОВЫ 5-летнего возраста
Figure imgf000015_0001
Из таблицы 2 следует, что у 2,5-годовалых нетелей регистрируется снижение соотношения Т-хелперов к Т-супрессорам (Тх/Тс) и увеличение количества третьей субпопуляции Т-лимфоцитов - ThO.
У 5 -летних (опытных) коров регистрируется достоверное повышение содержания всех фракций лимфоцитов (Т и В) при сохранении повышенного содержания ThO (киллеров).
Результаты серологических исследований на наличие антител к вирусу лейкоза, проведённые в реакции иммунодиффузии, у нетелей и коров в возрасте соответственно 2,5 года и 5 лет были отрицательны.
Таким образом, заявляемое средство для профилактики лейкоза крупного рогатого скота, а также способ его применения обеспечивают пожизненную устойчивость животных к заражению лейкозом путём активизации клеточного иммунитета против вируса лейкоза крупного рогатого скота за счёт увеличения количества киллерных клеток.

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Средство для профилактики лейкоза крупного рогатого скота, характеризующееся тем, что оно содержит водорастворимую белковую фракцию с молекулярной массой 18-20 кДа, выделенную из продуктов разрушения микобактерий туберкулёза, и характеризующуюся наличием пиков при длине волны 214 нм в ультрафиолетовой области спектра, фосфатно-солевой буферный раствор, водный раствор муравьиного альдегида и изотонический раствор натрия хлорида при следующем соотношении компонентов, мас.%:
водорастворимая белковая фракция с молекулярной массой 18-20 кДа, выделенная из продуктов разрушения микобактерий туберкулёза 0,05-0,125 фосфатно-солевой буферный раствор 9,95-24,875 водный раствор муравьиного альдегида 0,025-0,046 изотонический раствор натрия хлорида остальное
2. Способ применения средства для профилактики лейкоза крупного рогатого скота, включающий внутримышечное введение телятам 1-9- дневного возраста в дозе 4,0-6,0 мл на голову средства, содержащего водорастворимую белковую фракцию с молекулярной массой 18-20 кДа, выделенную из продуктов разрушения микобактерий туберкулёза, и характеризующуюся наличием пиков при длине волны 214 нм в ультрафиолетовой области спектра, фосфатно-солевой буферный раствор, водный раствор муравьиного альдегида и изотонический раствор натрия хлорида при следующем соотношении компонентов, мас.%:
водорастворимая белковая фракция с молекулярной массой 18-20 кДа, выделенная из продуктов разрушения микобактерий туберкулёза... 0,05-0, 125 фосфатно-солевой буферный раствор 9,95-24,875 водный раствор муравьиного альдегида 0,025-0,046 изотонический раствор натрия хлорида остальное
PCT/RU2017/000404 2016-11-22 2017-06-13 Средство для профилактики лейкоза крупного рогатого скота и способ его применения WO2018097750A1 (ru)

Priority Applications (7)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP17873383.8A EP3403668A4 (en) 2016-11-22 2017-06-13 MEANS FOR PREVENTING HORN CATTLE LEUKOSIS AND METHOD OF APPLICATION
CA3018982A CA3018982C (en) 2016-11-22 2017-06-13 Remedy for bovine leukemia prophylaxis and use thereof
MX2019002570A MX2019002570A (es) 2016-11-22 2017-06-13 Agente para la profilaxis de la leucosis bovina y metodo para su uso.
CN201780050553.XA CN109641040B (zh) 2016-11-22 2017-06-13 用于预防牛白血病的药剂及其使用方法
BR112019003609A BR112019003609A2 (pt) 2016-11-22 2017-06-13 remédio para profilaxia de leucemia bovina e método de uso.
AU2017363399A AU2017363399B2 (en) 2016-11-22 2017-06-13 Agent for the prophylaxis of bovine leukosis and method for the use thereof
US15/836,943 US10434163B2 (en) 2016-11-22 2017-12-11 Remedy for bovine leukemia prophylaxis and use thereof

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2016145862 2016-11-22
RU2016145862A RU2631607C1 (ru) 2016-11-22 2016-11-22 Средство для профилактики лейкоза крупного рогатого скота и способ его применения

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
US15/836,943 Continuation US10434163B2 (en) 2016-11-22 2017-12-11 Remedy for bovine leukemia prophylaxis and use thereof

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2018097750A1 true WO2018097750A1 (ru) 2018-05-31

Family

ID=59931316

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/RU2017/000404 WO2018097750A1 (ru) 2016-11-22 2017-06-13 Средство для профилактики лейкоза крупного рогатого скота и способ его применения

Country Status (9)

Country Link
US (1) US10434163B2 (ru)
EP (1) EP3403668A4 (ru)
CN (1) CN109641040B (ru)
AU (1) AU2017363399B2 (ru)
BR (1) BR112019003609A2 (ru)
CA (1) CA3018982C (ru)
MX (1) MX2019002570A (ru)
RU (1) RU2631607C1 (ru)
WO (1) WO2018097750A1 (ru)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2023048596A1 (ru) * 2021-09-22 2023-03-30 Владислав Николаевич ЛАСКАВЫЙ Композиция для поддержания нормального состояния гомеостаза и препарат на её основе

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2005127138A (ru) * 2005-08-29 2007-03-10 Юрий Федорович Бардеев (RU) Способ профилактики и лечения лейкоза крупного рогатого скота(варианты)
RU2392002C2 (ru) * 2008-04-02 2010-06-20 ФГОУ ВПО Курская государственная сельскохозяйственная академия им. профессора И.И. Иванова Способ получения туберкулезного анатоксина
RU2396978C1 (ru) * 2009-03-05 2010-08-20 Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования Курская государственная сельскохозяйственная академия имени профессора И.И. Иванова Способ профилактики развития лейкоза крупного рогатого скота
RU2420275C1 (ru) * 2009-12-16 2011-06-10 Государственное научное учреждение Курский научно-исследовательский институт агропромышленного производства Способ профилактики лейкоза крупного рогатого скота

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DK79893D0 (da) * 1993-07-02 1993-07-02 Statens Seruminstitut New vaccine
RU2146533C1 (ru) * 1998-08-19 2000-03-20 Ласкавый Владислав Николаевич Способ профилактики туберкулеза молодняка крупного рогатого скота
EP1527159A4 (en) * 2002-06-21 2006-10-04 Univ Newcastle Res Ass PROBIOTIC PROPIONIBACTERIUM JENSENII 702
US8287879B2 (en) * 2003-10-16 2012-10-16 The Regents Of The University Of California Immunostimulatory recombinant intracellular pathogen immunogenic compositions and methods of use
RU2390559C1 (ru) * 2008-10-22 2010-05-27 Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования Казанский государственный медицинский университет Способ получения антигена из micobacterium tuberculosis
RU2648842C2 (ru) * 2011-01-04 2018-03-28 Арчивель Фарма, С.Л. Липосомный препарат, предназначенный для лечения или предупреждения туберкулеза
AU2014312135B2 (en) * 2013-08-30 2017-09-07 Longhorn Vaccines And Diagnostics, Llc Enhancing immunity to tuberculosis
RU2558924C1 (ru) * 2014-07-15 2015-08-10 Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Научно-исследовательский ветеринарный институт Нечернозёмной зоны Российской Федерации" Способ профилактики лейкоза молодняка крупного рогатого скота

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2005127138A (ru) * 2005-08-29 2007-03-10 Юрий Федорович Бардеев (RU) Способ профилактики и лечения лейкоза крупного рогатого скота(варианты)
RU2392002C2 (ru) * 2008-04-02 2010-06-20 ФГОУ ВПО Курская государственная сельскохозяйственная академия им. профессора И.И. Иванова Способ получения туберкулезного анатоксина
RU2396978C1 (ru) * 2009-03-05 2010-08-20 Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования Курская государственная сельскохозяйственная академия имени профессора И.И. Иванова Способ профилактики развития лейкоза крупного рогатого скота
RU2420275C1 (ru) * 2009-12-16 2011-06-10 Государственное научное учреждение Курский научно-исследовательский институт агропромышленного производства Способ профилактики лейкоза крупного рогатого скота

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
See also references of EP3403668A4 *

Also Published As

Publication number Publication date
US10434163B2 (en) 2019-10-08
CN109641040B (zh) 2023-02-28
EP3403668A1 (en) 2018-11-21
BR112019003609A2 (pt) 2019-07-09
CA3018982C (en) 2022-09-13
RU2631607C1 (ru) 2017-09-25
EP3403668A4 (en) 2019-11-27
CN109641040A (zh) 2019-04-16
MX2019002570A (es) 2019-07-01
US20180169207A1 (en) 2018-06-21
AU2017363399B2 (en) 2019-09-26
AU2017363399A1 (en) 2019-02-14
CA3018982A1 (en) 2018-05-31

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Boone et al. Virus‐augmented tumor transplantation antigens: Evidence for a helper antigen mechanism
JPH07504683A (ja) Ｇｍ−ｃｓｆのワクチンアジュバントとしての利用
James et al. The influence of adjuvant on induction of protective immunity by a non-living vaccine against schistosomiasis.
Hirsch et al. Effects of anti-thymocyte serum on Rauscher virus infection of mice
RU2631607C1 (ru) Средство для профилактики лейкоза крупного рогатого скота и способ его применения
WO2024066288A1 (zh) 一种疫苗佐剂、疫苗组合物及其应用
JPS6338971B2 (ru)
JPS6236501B2 (ru)
RU2396978C1 (ru) Способ профилактики развития лейкоза крупного рогатого скота
RU2676266C2 (ru) Адъювант для противовирусных вакцин
CA2136870C (fr) Complexe immunomodulateur anti-sida
WO2019202285A1 (en) Pharmaceutical compositions and associated kits and uses
Zhang et al. Exosome co-delivery of a STING agonist augments immunogenicity elicited by CVB3 VP1 vaccine via promoting antigen cross-presentation of CD8+ DCs
WO2024040979A1 (zh) 一种人参酸性多糖疫苗佐剂、疫苗组合物及其应用
HRP20050763A2 (en) Ganglioside based vaccine compositions for subcutaneous administration
Savina et al. The effect of synthetic adjuvant on the formation of the immune response
AU2012229234A1 (en) Vaccine formulation of mannose coated peptide particles
JPS6236500B2 (ru)
CN112138151B (zh) 一种口蹄疫疫苗组合物及其制备方法和应用
CN116115746A (zh) 含有木鳖子总皂苷和铝盐的疫苗佐剂及其疫苗组合物
Seiler et al. BCG versus VCN: The antigenicity and the adjuvant effect of both compounds
RU2380405C2 (ru) Способ получения рекомбинантного альфа 16-интерферона человека и фармацевтическая композиция для лечения вирусных заболеваний на основе рекомбинантного альфа 16-интерферона человека
CA1036494A (en) Vaccine for the prevention and treatment of vascular conditions
SCHMIDTKE et al. Experimental models of tumor immunotherapy
Hernandez-Franco et al. EFFECTS EFFECTIVE AND SAFE STIMULATION OF HUMORAL AND CELL-MEDIATED IMMUNITY BY INTRADERMAL IMMUNIZATION WITH A CYCLIC-DINUCLEOTIDE/NANOPARTICLE COMBINATION ADJUVANT

Legal Events

Date Code Title Description
WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2017873383

Country of ref document: EP

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2017873383

Country of ref document: EP

Effective date: 20180816

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 3018982

Country of ref document: CA

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2017363399

Country of ref document: AU

Date of ref document: 20170613

Kind code of ref document: A

REG Reference to national code

Ref country code: BR

Ref legal event code: B01A

Ref document number: 112019003609

Country of ref document: BR

REG Reference to national code

Ref country code: BR

Ref legal event code: B01E

Ref document number: 112019003609

Country of ref document: BR

Free format text: APRESENTE A TRADUCAO SIMPLES DA FOLHA DE ROSTO DA CERTIDAO DE DEPOSITO DA PRIORIDADE RU 2016145862; OU DECLARACAO DE QUE OS DADOS DO PEDIDO INTERNACIONAL ESTAO FIELMENTE CONTIDOS NA PRIORIDADE REIVINDICADA, CONTENDO TODOS OS DADOS IDENTIFICADORES DESTA (TITULARES, NUMERO DE REGISTRO, DATA E TITULO), CONFORME O PARAGRAFO UNICO DO ART. 25 DA RESOLUCAO 77/2013.

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 112019003609

Country of ref document: BR

Kind code of ref document: A2

Effective date: 20190222