RU2392002C2 - Способ получения туберкулезного анатоксина - Google Patents

Способ получения туберкулезного анатоксина Download PDF

Info

Publication number
RU2392002C2
RU2392002C2 RU2008112753/13A RU2008112753A RU2392002C2 RU 2392002 C2 RU2392002 C2 RU 2392002C2 RU 2008112753/13 A RU2008112753/13 A RU 2008112753/13A RU 2008112753 A RU2008112753 A RU 2008112753A RU 2392002 C2 RU2392002 C2 RU 2392002C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
tuberculosis
anatoxin
toxoid
days
allergens
Prior art date
Application number
RU2008112753/13A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2008112753A (ru
Inventor
Анатолий Алексеевич Евглевский (RU)
Анатолий Алексеевич Евглевский
Владислав Михайлович Коломиец (RU)
Владислав Михайлович Коломиец
Дмитрий Анатольевич Евглевский (RU)
Дмитрий Анатольевич Евглевский
Елена Анатольевна Тимкова (RU)
Елена Анатольевна Тимкова
Светлана Юрьевна Епифанова (RU)
Светлана Юрьевна Епифанова
Original Assignee
ФГОУ ВПО Курская государственная сельскохозяйственная академия им. профессора И.И. Иванова
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by ФГОУ ВПО Курская государственная сельскохозяйственная академия им. профессора И.И. Иванова filed Critical ФГОУ ВПО Курская государственная сельскохозяйственная академия им. профессора И.И. Иванова
Priority to RU2008112753/13A priority Critical patent/RU2392002C2/ru
Publication of RU2008112753A publication Critical patent/RU2008112753A/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2392002C2 publication Critical patent/RU2392002C2/ru

Links

Landscapes

  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

Изобретение относится к микробиологии и биотехнологии, в частности к получению туберкулезного анатоксина для специфической профилактики туберкулеза. Туберкулезный анатоксин получают путем детоксикации туберкулезных экзо- и эндотоксинов двумя детоксикаторами - 0,2% раствором формалина в течение 7-9 суток при 42-45°С и 0,5% раствором этония в течение 7-9 суток при 42-45°С. При этом происходит полная детоксикация токсинов и инактивация их аллергенных свойств при практически 100% расходовании формалина и этония. Затем производят сорбцию туберкулезного анатоксина на 1-3 мг/мл гидроксида алюминия и вдвое увеличивают концентрацию инактивированных токсино-аллергенов путем декантации 50±5% надосадочной жидкости. При использовании анатоксина, полученного способом по изобретению, вакцинированные животные приобретают устойчивость к заражению вирулентными микобактериями туберкулеза на фоне иммунологической перестройки организма и приобретают умеренную чувствительность к туберкулину.

Description

Изобретение относится к микробиологии и биотехнологии, в частности к технологии изготовления биопрепаратов для специфической профилактики туберкулеза.
Известны способы получения анатоксинов, аллергоидов, инактивированных вирусных и бактерийных вакцин с использованием 0,8±0,2% формалина.
При этом оценка качества вакцин проводится в определении способности выработки специфических антител - защитного титра. Однако при многих инфекционных заболеваниях (бруцеллез, туберкулез, туляремия и т.д.) иммунологические показатели не отражают защитных свойств биопрепарата, т.к. в их патогенезе ведущая роль принадлежит клеточному иммунитету. В этих случаях остаются в силе кожно-аллергическая проба и фактическая защищенность против той или иной инфекции, безопасность и эффективность биопрепарата (Воробьев А.А. Микробиология и иммунология. М.: Медицина, 1999, с.255-268; Медуницин Н.В. Биологические препараты: настоящее и будущее. Научно-практический журнал «Биопрепараты», 2001, №1, с.2-3).
Несмотря на длительное использование, с 1923 г., формалина для получения инактивированных вакцин, анатоксинов, исследования по замене формалина остаются актуальными.
Это связано с тем, что формалин способен вызывать аллергические реакции, денатурацию белков, онкогенные процессы. Сведения о возможной замене формалина или его производных на этоний при изготовлении инактивированных вирусных и бактерийных вакцин и анатоксинов и тем более в отношении детоксикации и инактивации туберкулезных токсино-аллергенов отсутствуют. Поэтому необходимы исследования не только по повышению эффективности инактивированных биопрепаратов, но и в направлении их безвредности.
За прототип взят «Способ получения туберкулезного анатоксина», Евглевский Ан. А., патент РФ №2139090 от 26.01.99, включающий выращивание микобактерий туберкулеза на синтетической среде в течение 55-60 суток, стерилизацию и детоксикацию токсино-аллергенов 0,8±0,2% раствором формалина при 42-45°С в течение 12-15 суток, сорбцию на гидроксиде алюминия из расчета 1-3 мг/мл.
Недостатком указанного способа является проведение детоксикации туберкулезных токсино-аллергенов одним детоксикатором - формалином в высокой концентрации в пределах 0,8% и низкое содержание исходных токсино-аллергенов до 2 мг/мл.
Для устранения указанных недостатков предлагается использование двух детоксикаторов в два этапа - первоначально 0,2% раствора формалина вместо 0,8%, а затем 0,5% раствора этония в течение 7-9 суток при 42-45°С, сорбция на гидроксиде алюминия и увеличение вдвое концентрации инактивированных токсино-аллергенов путем декантации 50±5% надосадочной жидкости.
Целью предлагаемого изобретения является снижение токсичности и повышение активности препарата путем детоксикации туберкулезных токсино-аллергенов двумя детоксикаторами - первоначально 0,2% раствором формалина вместо 0,8%, а затем 0,5% раствором этония при 42-45°С в течение 7-9 суток для обеспечения полной и необратимой детоксикации туберкулезных экзо- и эндотоксинов, сорбцией на гидроксиде алюминия из расчета 1-3 мг/мл и увеличение вдвое концентрации инактивированных токсино-аллергенов путем декантации 50±5% надосадочной жидкости.
Поставленная цель достигается снижением концентрации канцерогенного формалина с 0,8% до 0,2% и последующим прибавлением второго детоксикатора - 0,5% этония для полной детоксикации туберкулезных токсино-аллергенов из расчета 120±20 тысяч туберкулиновых единиц (международных) в 1 мл (≈2,5±0,2 мг/мл тубпротеина) при 42-45°С в течение 7-9 суток, сорбцией на гидроксиде алюминия 1-3 мг/мл и удалением декантацией 50% надосадочной жидкости, позволяющим увеличить вдвое концентрацию инактивированных токсино-аллергенов.
Следует дополнить, что безопасность и полезность использования этония (1,2-этилен-бис-(N-диметилкарбдецилоксиметил) аммония дихлорид - бисчетвертичное аммониевое соединение) подтверждена в выпуске различных растворов, мазей, паст в гуманной медицине при различных заболеваниях кожи (раны, ожоги, радиация), трофических язвах, дерматозах, кариесе зубов, стоматите, кератитах, язвах роговицы.
В патентной и научно-технической литературе не обнаружены технические решения, аналогичные заявляемому с использованием этония, что свидетельствует о новизне предлагаемого решения.
Применение двух детоксикаторов в предложенном режиме и увеличение вдвое концентрации инактивированных токсино-аллергенов позволяет достичь положительного эффекта - снижения токсичности препарата при повышении его эффективности.
Установлена возможность полной детоксикации всего комплекса туберкулезных экзо- и эндотоксино-аллергенов с помощью двух детоксикаторов и определена их концентрация, температурный и временной режим технологического процесса, позволяющие получить эффективный и безопасный туберкулезный анатоксин.
Результаты редуцирующего действия на туберкулезные токсино-аллергены этония и протективные свойства туберкулезного анатоксина представлены в следующих примерах.
Пример 1. Способ получения туберкулезного анатоксина и его проверка на полноту детоксикации токсино-аллергенов на сенсибилизированных морских свинках.
В раствор (300 мл) растворимых туберкулезных токсино-аллергенов (2,5 мг/мл≈120000 ТЕ(МЕ)) внесен формалин до 0,2% концентрации для проведения детоксикации при 42-45°С в течение 7 суток, а затем добавлен второй детоксикатор этоний до 0,5% концентрации для заключительной детоксикации при 42-45°С в течение 7 суток. Температурный режим 42-45°С является наиболее оптимальным. Затем проведена сорбция полученного анатоксина на гидроксиде алюминия из расчета 1-3 мг гидроксида/мл анатоксина и декантация 50±5% надосадочной жидкости для увеличения вдвое концентрации инактивированных токсино-аллергенов (до 5 мг/мл). Полученный анатоксин расфасовывают по флаконам и стерилизуют 30 минут при 1,0 атм.
Проверку туберкулезного анатоксина на остаточную аллергенную активность и токсичность провели на 9 морских свинках, сенсибилизированных внутрикожным введением суспензии вакцины БЦЖ (1 мг на голову) путем внутрикожного введения по 0,1 мл препарата в разведении 1:100 и 1:1000 в депилированные боковые поверхности.
При учете реакции через 24 и 48 часов у морских свинок не было отмечено гиперемии кожи до 6-8 мм на внутрикожное введение туберкулезного анатоксина.
В то же время на внутрикожное введение туберкулина с аллергенной активностью (1 мг/мл=50000 ТЕ) в разведении 1:1000 и 1:2000 отмечена гиперемия кожи в диаметре 14-18 мм.
Полученные результаты дают основание считать, что этоний с формалином способен ин активировать аллергенную активность молекулярного туберкулезного токсино-аллергена и детоксикацию его токсических свойств.
Пример 2. Изучение сенсибилизирующих свойств туберкулезного анатоксина после детоксикации токсино-аллергенов 0,2% раствором формалина с 0,5% этонием у коров. В исследованиях использовано 10 коров, которым двукратно подкожно с интервалом 12 суток был введен по 5,0 мл туберкулезный анатоксин. По истечении 30 суток после повторного введения туберкулезного анатоксина всех животных подвергли туберкулинизации путем внутрикожного введения туберкулина для млекопитающих - ППД серии №12 по 0,2 мл. При учете реакции через 72 часа у животных отмечено увеличение кожной складки в пределах 3-5-7 мм. Следовательно, подкожное введение туберкулезного анатоксина сопровождается аллергизацией организма, достоверно выраженными кожно-аллергическими реакциями.
Пример 3. Изучение сенсибилизирующих свойств туберкулезного анатоксина, полученного детоксикацией токсино-аллергенов 0,2% формалином с 0,5% этонием на морских свинках.
Туберкулезный анатоксин по 0,2 мл был введен двукратно подкожно 6 здоровым морским свинкам с интервалом 12 суток. По истечении 30 суток после второго введения туберкулезного анатоксина был введен туберкулин для млекопитающих с аллергенной активностью 50000 ТЕ/мл (ME) в разведении 1:1000 и 1:2000 по 0,1 мл в депилированные боковые поверхности каждой морской свинке. Учет реакции через 24 часа выявил у всех вакцинированных морских свинок кожно-аллергические реакции в виде гиперемии кожи до 8-9 мм в диаметре.
Пример 4. Изучение протективной активности туберкулезного анатоксина на морских свинках и кроликах.
В опыте использовано 6 морских свинок и 4 кролика, которым трехкратно с интервалом 10 дней был введен подкожно туберкулезный анатоксин в объеме 0,5 мл. По истечении 30 суток после 3-й вакцинации животных заразили свежевыделенными от больных туберкулезом людей лекарственно устойчивыми микобактериями туберкулеза в дозе 0,1 мг на одно животное. Наблюдение за животными проводили в течение 3-х месяцев.
При убое у кроликов и морских свинок не обнаружено поражений органов (печени, легких и лимфоузлов), за исключением одной свинки, у которой в лимфоузле от места заражения и в печени обнаружены макроскопические изменения, характерные для туберкулезных поражений. Контрольные 3 морские свинки погибли через 2-2,5 месяца после заражения микобактериями туберкулеза. Из результатов исследований следует, что туберкулезный анатоксин, полученный детоксикацией токсино-аллергенов 0,2% раствором формалина с 0,5% этонием, обеспечивает защиту от заболевания кроликов и морских свинок при массивной дозе заражения вирулентными микобактериями туберкулеза.

Claims (1)

  1. Способ получения туберкулезного анатоксина, включающий детоксикацию туберкулезных экзо- и эндотоксино-аллергенов, сорбцию полученного анатоксина на гидроксиде алюминия, стерилизацию, отличающийся тем, что детоксикацию 2,5±0,2 мг/мл туберкулезных токсино-аллергенов проводят последовательно двумя детоксикаторами - 0,2%-ным раствором формалина в течение 7-9 суток при 42-45°С и 0,5%-ным раствором этония при 42-45°С в течение 7-9 суток, сорбцию анатоксина на гидроксиде алюминия проводят из расчета 1-3 мг гидроксида на 1 мл анатоксина и концентрируют адсорбированный анатоксин декантацией 50±5% надосадочной жидкости.
RU2008112753/13A 2008-04-02 2008-04-02 Способ получения туберкулезного анатоксина RU2392002C2 (ru)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2008112753/13A RU2392002C2 (ru) 2008-04-02 2008-04-02 Способ получения туберкулезного анатоксина

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2008112753/13A RU2392002C2 (ru) 2008-04-02 2008-04-02 Способ получения туберкулезного анатоксина

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2008112753A RU2008112753A (ru) 2009-10-10
RU2392002C2 true RU2392002C2 (ru) 2010-06-20

Family

ID=41260410

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2008112753/13A RU2392002C2 (ru) 2008-04-02 2008-04-02 Способ получения туберкулезного анатоксина

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2392002C2 (ru)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2018097750A1 (ru) * 2016-11-22 2018-05-31 Владислав Николаевич ЛАСКАВЫЙ Средство для профилактики лейкоза крупного рогатого скота и способ его применения

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5504005A (en) * 1987-03-02 1996-04-02 Albert Einstein College Of Medicine Of Yeshiva University Recombinant mycobacterial vaccine
RU2139090C1 (ru) * 1999-01-26 1999-10-10 Закрытое акционерное общество "АгроБизнесЦентр" Способ получения туберкулезного анатоксина
RU2170588C1 (ru) * 2000-02-22 2001-07-20 Предприятие по производству бактерийных препаратов Научно-исследовательского института эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи РАМН Способ получения вакцины бцж-м для щадящей первичной иммунизации
RU2262950C2 (ru) * 2001-03-23 2005-10-27 Каунсил Оф Сайентифик Энд Индастриал Рисерч Способ получения вакцины для лечения туберкулеза и других внутриклеточных инфекционных заболеваний и вакцина, полученная по названному способу

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5504005A (en) * 1987-03-02 1996-04-02 Albert Einstein College Of Medicine Of Yeshiva University Recombinant mycobacterial vaccine
US5854055A (en) * 1987-03-02 1998-12-29 Albert Einstein College Of Medicine Of Yeshiva University, A Division Of Yeshiva University Recombinant mycobacteria
RU2139090C1 (ru) * 1999-01-26 1999-10-10 Закрытое акционерное общество "АгроБизнесЦентр" Способ получения туберкулезного анатоксина
RU2170588C1 (ru) * 2000-02-22 2001-07-20 Предприятие по производству бактерийных препаратов Научно-исследовательского института эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи РАМН Способ получения вакцины бцж-м для щадящей первичной иммунизации
RU2262950C2 (ru) * 2001-03-23 2005-10-27 Каунсил Оф Сайентифик Энд Индастриал Рисерч Способ получения вакцины для лечения туберкулеза и других внутриклеточных инфекционных заболеваний и вакцина, полученная по названному способу

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2018097750A1 (ru) * 2016-11-22 2018-05-31 Владислав Николаевич ЛАСКАВЫЙ Средство для профилактики лейкоза крупного рогатого скота и способ его применения
AU2017363399B2 (en) * 2016-11-22 2019-09-26 IVLEV, Andrei Valentinovich Agent for the prophylaxis of bovine leukosis and method for the use thereof

Also Published As

Publication number Publication date
RU2008112753A (ru) 2009-10-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Alexander et al. Prevention of invasive Pseudomonas infection in burns with a new vaccine
UA119244C2 (uk) Бактеріальна вакцина і спосіб її одержання
RU2428991C1 (ru) Сополимеры гетероцепных алифатических поли-n-оксидов, вакцинирующие и лекарственные средства на их основе
RU2392002C2 (ru) Способ получения туберкулезного анатоксина
RU2377014C1 (ru) Способ получения стафилококковой анатоксин-вакцины
EA037283B1 (ru) Комбинированная вакцинная композиция для многократного дозирования
RU2360697C1 (ru) Способ получения туберкулезного анатоксина
IE910424A1 (en) Novel vaccine and method therefor
RU2115433C1 (ru) Вакцина сибиреязвенная комбинированная
Rudbach et al. Immunotherapy with bacterial endotoxins
RU2378011C1 (ru) Способ профилактики бруцеллеза крупного рогатого скота
RU2122862C1 (ru) Бесклеточная антистафилококковая вакцина для лечения хронической стафилококковой инфекции
JP6712760B2 (ja) サルモネラワクチン
RU2396978C1 (ru) Способ профилактики развития лейкоза крупного рогатого скота
RU2392003C2 (ru) Способ получения сальмонеллезной вакцины
Savina et al. The effect of synthetic adjuvant on the formation of the immune response
RU2377016C1 (ru) Способ получения стафило-стрептококковой анатоксин-вакцины
RU2092184C1 (ru) Способ лечения инфекционных заболеваний
RU2021816C1 (ru) Способ получения вакцины против холеры
RU2406533C1 (ru) Вакцина ассоциированная против стрептококкоза и стафилококкоза крупного рогатого скота
RU2115432C1 (ru) Способ получения туберкулезного анатоксина
RU2021817C1 (ru) Способ получения вакцины против холеры
RU2421240C1 (ru) Способ получения стафилококковой вакцины
Havas et al. Effect of TEPC-183 plasmacytoma on resistance of passively or actively immunized BALB/c mice to infection with Streptococcus pneumoniae
Lusis et al. Immunization of mice and chinchillas against Pseudomonas aeruginosa

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20110403