RU2627445C2 - Способы идентификации, выделения, истощения и обогащения популяций tr1 клеток, популяции tr1 клеток, фармацевтические композиции, способ мониторинга эффекта терапии - Google Patents
Способы идентификации, выделения, истощения и обогащения популяций tr1 клеток, популяции tr1 клеток, фармацевтические композиции, способ мониторинга эффекта терапии Download PDFInfo
- Publication number
- RU2627445C2 RU2627445C2 RU2012148391A RU2012148391A RU2627445C2 RU 2627445 C2 RU2627445 C2 RU 2627445C2 RU 2012148391 A RU2012148391 A RU 2012148391A RU 2012148391 A RU2012148391 A RU 2012148391A RU 2627445 C2 RU2627445 C2 RU 2627445C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- cells
- resting
- activated
- population
- cd62l
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 112
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title claims abstract description 19
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 title claims abstract description 11
- 230000000694 effects Effects 0.000 title claims abstract description 9
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 title claims abstract description 5
- 210000003289 regulatory T cell Anatomy 0.000 claims abstract description 383
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 366
- 101001018097 Homo sapiens L-selectin Proteins 0.000 claims abstract description 97
- 102100033467 L-selectin Human genes 0.000 claims abstract description 97
- 101001057504 Homo sapiens Interferon-stimulated gene 20 kDa protein Proteins 0.000 claims abstract description 88
- 101001055144 Homo sapiens Interleukin-2 receptor subunit alpha Proteins 0.000 claims abstract description 88
- 102100026878 Interleukin-2 receptor subunit alpha Human genes 0.000 claims abstract description 88
- 102100021593 Interleukin-7 receptor subunit alpha Human genes 0.000 claims abstract description 86
- 101001043809 Homo sapiens Interleukin-7 receptor subunit alpha Proteins 0.000 claims abstract description 85
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims abstract description 70
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims abstract description 14
- 101000716102 Homo sapiens T-cell surface glycoprotein CD4 Proteins 0.000 claims abstract 16
- 102100036011 T-cell surface glycoprotein CD4 Human genes 0.000 claims abstract 16
- 230000000284 resting effect Effects 0.000 claims description 157
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 51
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 51
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 51
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 28
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 8
- 230000000779 depleting effect Effects 0.000 claims description 8
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 claims description 7
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 6
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 claims description 5
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 claims description 4
- 230000004044 response Effects 0.000 claims description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 5
- 230000002040 relaxant effect Effects 0.000 abstract 3
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 41
- 230000005291 magnetic effect Effects 0.000 description 32
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 27
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 27
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 23
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 22
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 22
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 22
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 22
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 19
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 17
- 210000002501 natural regulatory T cell Anatomy 0.000 description 16
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 14
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 13
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 13
- 239000002771 cell marker Substances 0.000 description 13
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 13
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 12
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 11
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 10
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 10
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 10
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 10
- 101000914514 Homo sapiens T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Proteins 0.000 description 9
- 102100027213 T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Human genes 0.000 description 9
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 9
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 9
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 9
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 9
- 239000013566 allergen Substances 0.000 description 8
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 8
- 238000009739 binding Methods 0.000 description 8
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 8
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 8
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 8
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 8
- 108050007280 Claudin-11 Proteins 0.000 description 7
- -1 IgM Proteins 0.000 description 7
- 102000004388 Interleukin-4 Human genes 0.000 description 7
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 7
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 7
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 7
- 229960004784 allergens Drugs 0.000 description 7
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 7
- 239000006249 magnetic particle Substances 0.000 description 7
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 7
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 7
- 102100028682 Claudin-11 Human genes 0.000 description 6
- 108010083674 Myelin Proteins Proteins 0.000 description 6
- 102000006386 Myelin Proteins Human genes 0.000 description 6
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 6
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 6
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 6
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 6
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 6
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 6
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 6
- 238000004091 panning Methods 0.000 description 6
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 6
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 5
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 5
- 108010038453 Interleukin-2 Receptors Proteins 0.000 description 5
- 102000010789 Interleukin-2 Receptors Human genes 0.000 description 5
- 102000011195 Profilin Human genes 0.000 description 5
- 108050001408 Profilin Proteins 0.000 description 5
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 5
- 238000002659 cell therapy Methods 0.000 description 5
- BFMYDTVEBKDAKJ-UHFFFAOYSA-L disodium;(2',7'-dibromo-3',6'-dioxido-3-oxospiro[2-benzofuran-1,9'-xanthene]-4'-yl)mercury;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Na+].O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC(Br)=C([O-])C([Hg])=C1OC1=C2C=C(Br)C([O-])=C1 BFMYDTVEBKDAKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 5
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 5
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 5
- 230000004968 inflammatory condition Effects 0.000 description 5
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 5
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 5
- 210000005012 myelin Anatomy 0.000 description 5
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 5
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 5
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 5
- 230000001902 propagating effect Effects 0.000 description 5
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 5
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 4
- 101000934346 Homo sapiens T-cell surface antigen CD2 Proteins 0.000 description 4
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 4
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 4
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 4
- 102000003816 Interleukin-13 Human genes 0.000 description 4
- 108090000176 Interleukin-13 Proteins 0.000 description 4
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 4
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 4
- 206010034277 Pemphigoid Diseases 0.000 description 4
- 102100025237 T-cell surface antigen CD2 Human genes 0.000 description 4
- 102000004887 Transforming Growth Factor beta Human genes 0.000 description 4
- 108090001012 Transforming Growth Factor beta Proteins 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 4
- 208000000594 bullous pemphigoid Diseases 0.000 description 4
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 4
- 238000011161 development Methods 0.000 description 4
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 4
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 4
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- 230000006058 immune tolerance Effects 0.000 description 4
- 238000007885 magnetic separation Methods 0.000 description 4
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 description 4
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 4
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 4
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 4
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N tgfbeta Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N 0.000 description 4
- 244000144730 Amygdalus persica Species 0.000 description 3
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 3
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 3
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920001917 Ficoll Polymers 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 3
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- 101001063392 Homo sapiens Lymphocyte function-associated antigen 3 Proteins 0.000 description 3
- 101000946843 Homo sapiens T-cell surface glycoprotein CD8 alpha chain Proteins 0.000 description 3
- 101000914484 Homo sapiens T-lymphocyte activation antigen CD80 Proteins 0.000 description 3
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 3
- 102000010787 Interleukin-4 Receptors Human genes 0.000 description 3
- 108010038486 Interleukin-4 Receptors Proteins 0.000 description 3
- 102100030984 Lymphocyte function-associated antigen 3 Human genes 0.000 description 3
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 3
- 108010013731 Myelin-Associated Glycoprotein Proteins 0.000 description 3
- 102100021831 Myelin-associated glycoprotein Human genes 0.000 description 3
- 235000006040 Prunus persica var persica Nutrition 0.000 description 3
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 3
- 102100034922 T-cell surface glycoprotein CD8 alpha chain Human genes 0.000 description 3
- 102100027222 T-lymphocyte activation antigen CD80 Human genes 0.000 description 3
- 206010067584 Type 1 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 3
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000000149 argon plasma sintering Methods 0.000 description 3
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 description 3
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 3
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 3
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 3
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 3
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 3
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 3
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 3
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 3
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 3
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 239000003226 mitogen Substances 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 3
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 3
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 3
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 3
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 3
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 3
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- SLXKOJJOQWFEFD-UHFFFAOYSA-N 6-aminohexanoic acid Chemical compound NCCCCCC(O)=O SLXKOJJOQWFEFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091006112 ATPases Proteins 0.000 description 2
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 2
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 2
- 102000057290 Adenosine Triphosphatases Human genes 0.000 description 2
- 240000007087 Apium graveolens Species 0.000 description 2
- 235000015849 Apium graveolens Dulce Group Nutrition 0.000 description 2
- 235000010591 Appio Nutrition 0.000 description 2
- 102100024222 B-lymphocyte antigen CD19 Human genes 0.000 description 2
- 102000049320 CD36 Human genes 0.000 description 2
- 108010045374 CD36 Antigens Proteins 0.000 description 2
- 208000011231 Crohn disease Diseases 0.000 description 2
- 102000004163 DNA-directed RNA polymerases Human genes 0.000 description 2
- 108090000626 DNA-directed RNA polymerases Proteins 0.000 description 2
- 244000000626 Daucus carota Species 0.000 description 2
- 235000002767 Daucus carota Nutrition 0.000 description 2
- 102000009093 Dihydrolipoyllysine-residue acetyltransferase Human genes 0.000 description 2
- 108010073112 Dihydrolipoyllysine-residue acetyltransferase Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 101710129990 Eukaryotic initiation factor 4A-III Proteins 0.000 description 2
- 102100022461 Eukaryotic initiation factor 4A-III Human genes 0.000 description 2
- 208000004262 Food Hypersensitivity Diseases 0.000 description 2
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 2
- 102000028180 Glycophorins Human genes 0.000 description 2
- 108091005250 Glycophorins Proteins 0.000 description 2
- 102000002812 Heat-Shock Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010004889 Heat-Shock Proteins Proteins 0.000 description 2
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 2
- RPTUSVTUFVMDQK-UHFFFAOYSA-N Hidralazin Chemical compound C1=CC=C2C(NN)=NN=CC2=C1 RPTUSVTUFVMDQK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101000980825 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD19 Proteins 0.000 description 2
- 101000883515 Homo sapiens Chitinase-3-like protein 1 Proteins 0.000 description 2
- 101000998120 Homo sapiens Interleukin-3 receptor subunit alpha Proteins 0.000 description 2
- 101000917858 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-A Proteins 0.000 description 2
- 101000917839 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Proteins 0.000 description 2
- 101000946889 Homo sapiens Monocyte differentiation antigen CD14 Proteins 0.000 description 2
- 101000581981 Homo sapiens Neural cell adhesion molecule 1 Proteins 0.000 description 2
- 108700005091 Immunoglobulin Genes Proteins 0.000 description 2
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 2
- 102100033493 Interleukin-3 receptor subunit alpha Human genes 0.000 description 2
- 108010038498 Interleukin-7 Receptors Proteins 0.000 description 2
- 208000012659 Joint disease Diseases 0.000 description 2
- 102000011782 Keratins Human genes 0.000 description 2
- 108010076876 Keratins Proteins 0.000 description 2
- 102000008192 Lactoglobulins Human genes 0.000 description 2
- 108010060630 Lactoglobulins Proteins 0.000 description 2
- 102100029185 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Human genes 0.000 description 2
- 108091054438 MHC class II family Proteins 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- 102100035877 Monocyte differentiation antigen CD14 Human genes 0.000 description 2
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 2
- 102100032977 Myelin-associated oligodendrocyte basic protein Human genes 0.000 description 2
- 102100027347 Neural cell adhesion molecule 1 Human genes 0.000 description 2
- PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N Nickel Chemical compound [Ni] PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010033645 Pancreatitis Diseases 0.000 description 2
- 201000011152 Pemphigus Diseases 0.000 description 2
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 2
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 2
- 102100035917 Peripheral myelin protein 22 Human genes 0.000 description 2
- 101710199257 Peripheral myelin protein 22 Proteins 0.000 description 2
- 101710093543 Probable non-specific lipid-transfer protein Proteins 0.000 description 2
- 108010010974 Proteolipids Proteins 0.000 description 2
- 102000016202 Proteolipids Human genes 0.000 description 2
- 244000018633 Prunus armeniaca Species 0.000 description 2
- 235000009827 Prunus armeniaca Nutrition 0.000 description 2
- 235000014443 Pyrus communis Nutrition 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 2
- 102100028601 Transaldolase Human genes 0.000 description 2
- 108020004530 Transaldolase Proteins 0.000 description 2
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 2
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 2
- 230000000172 allergic effect Effects 0.000 description 2
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 2
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 2
- 208000037979 autoimmune inflammatory disease Diseases 0.000 description 2
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical group C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 208000037976 chronic inflammation Diseases 0.000 description 2
- 208000037893 chronic inflammatory disorder Diseases 0.000 description 2
- 208000029078 coronary artery disease Diseases 0.000 description 2
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 2
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 2
- 230000016396 cytokine production Effects 0.000 description 2
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 2
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 2
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 2
- ZGSPNIOCEDOHGS-UHFFFAOYSA-L disodium [3-[2,3-di(octadeca-9,12-dienoyloxy)propoxy-oxidophosphoryl]oxy-2-hydroxypropyl] 2,3-di(octadeca-9,12-dienoyloxy)propyl phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].CCCCCC=CCC=CCCCCCCCC(=O)OCC(OC(=O)CCCCCCCC=CCC=CCCCCC)COP([O-])(=O)OCC(O)COP([O-])(=O)OCC(OC(=O)CCCCCCCC=CCC=CCCCCC)COC(=O)CCCCCCCC=CCC=CCCCCC ZGSPNIOCEDOHGS-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 2
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 2
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 2
- MURGITYSBWUQTI-UHFFFAOYSA-N fluorescin Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1C1C2=CC=C(O)C=C2OC2=CC(O)=CC=C21 MURGITYSBWUQTI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000020932 food allergy Nutrition 0.000 description 2
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 102000054350 human CHI3L1 Human genes 0.000 description 2
- 235000006486 human diet Nutrition 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000031261 interleukin-10 production Effects 0.000 description 2
- 230000017307 interleukin-4 production Effects 0.000 description 2
- 229940047122 interleukins Drugs 0.000 description 2
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 238000002826 magnetic-activated cell sorting Methods 0.000 description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 2
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 2
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 2
- 206010028417 myasthenia gravis Diseases 0.000 description 2
- 210000004248 oligodendroglia Anatomy 0.000 description 2
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 2
- 201000001976 pemphigus vulgaris Diseases 0.000 description 2
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 2
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 description 2
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 2
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 2
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 2
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 201000000596 systemic lupus erythematosus Diseases 0.000 description 2
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 206010043778 thyroiditis Diseases 0.000 description 2
- TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoserine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OC[C@H](N)C(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 0.000 description 1
- XZIIFPSPUDAGJM-UHFFFAOYSA-N 6-chloro-2-n,2-n-diethylpyrimidine-2,4-diamine Chemical compound CCN(CC)C1=NC(N)=CC(Cl)=N1 XZIIFPSPUDAGJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100038222 60 kDa heat shock protein, mitochondrial Human genes 0.000 description 1
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710103970 ADP,ATP carrier protein Proteins 0.000 description 1
- 101710133192 ADP,ATP carrier protein, mitochondrial Proteins 0.000 description 1
- 206010001052 Acute respiratory distress syndrome Diseases 0.000 description 1
- 208000026872 Addison Disease Diseases 0.000 description 1
- 108060003345 Adrenergic Receptor Proteins 0.000 description 1
- 102000017910 Adrenergic receptor Human genes 0.000 description 1
- 101710186708 Agglutinin Proteins 0.000 description 1
- 206010002198 Anaphylactic reaction Diseases 0.000 description 1
- 206010002556 Ankylosing Spondylitis Diseases 0.000 description 1
- 108090000672 Annexin A5 Proteins 0.000 description 1
- 102000004121 Annexin A5 Human genes 0.000 description 1
- 101710145634 Antigen 1 Proteins 0.000 description 1
- 206010003011 Appendicitis Diseases 0.000 description 1
- 244000105624 Arachis hypogaea Species 0.000 description 1
- 102000003823 Aromatic-L-amino-acid decarboxylases Human genes 0.000 description 1
- 108090000121 Aromatic-L-amino-acid decarboxylases Proteins 0.000 description 1
- 206010003211 Arteriosclerosis coronary artery Diseases 0.000 description 1
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 1
- 208000008439 Biliary Liver Cirrhosis Diseases 0.000 description 1
- 208000033222 Biliary cirrhosis primary Diseases 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 108010058432 Chaperonin 60 Proteins 0.000 description 1
- 102000012286 Chitinases Human genes 0.000 description 1
- 108010022172 Chitinases Proteins 0.000 description 1
- 206010008609 Cholangitis sclerosing Diseases 0.000 description 1
- 108010009685 Cholinergic Receptors Proteins 0.000 description 1
- VYZAMTAEIAYCRO-UHFFFAOYSA-N Chromium Chemical compound [Cr] VYZAMTAEIAYCRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100040836 Claudin-1 Human genes 0.000 description 1
- 108090000600 Claudin-1 Proteins 0.000 description 1
- 102000018159 Claudin-11 Human genes 0.000 description 1
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 1
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 1
- 102000000503 Collagen Type II Human genes 0.000 description 1
- 108010041390 Collagen Type II Proteins 0.000 description 1
- 102000004266 Collagen Type IV Human genes 0.000 description 1
- 108010042086 Collagen Type IV Proteins 0.000 description 1
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 108010026206 Conalbumin Proteins 0.000 description 1
- 206010010741 Conjunctivitis Diseases 0.000 description 1
- 239000000055 Corticotropin-Releasing Hormone Substances 0.000 description 1
- 108010001237 Cytochrome P-450 CYP2D6 Proteins 0.000 description 1
- 102100021704 Cytochrome P450 2D6 Human genes 0.000 description 1
- 102000003915 DNA Topoisomerases Human genes 0.000 description 1
- 108090000323 DNA Topoisomerases Proteins 0.000 description 1
- 238000000018 DNA microarray Methods 0.000 description 1
- 241000238557 Decapoda Species 0.000 description 1
- 101710088194 Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 201000004624 Dermatitis Diseases 0.000 description 1
- 206010012438 Dermatitis atopic Diseases 0.000 description 1
- 102100036912 Desmin Human genes 0.000 description 1
- 108010044052 Desmin Proteins 0.000 description 1
- 108010045579 Desmoglein 1 Proteins 0.000 description 1
- 108010032035 Desmoglein 3 Proteins 0.000 description 1
- 102000007577 Desmoglein 3 Human genes 0.000 description 1
- 102100034579 Desmoglein-1 Human genes 0.000 description 1
- 102100031920 Dihydrolipoyllysine-residue succinyltransferase component of 2-oxoglutarate dehydrogenase complex, mitochondrial Human genes 0.000 description 1
- 102100025012 Dipeptidyl peptidase 4 Human genes 0.000 description 1
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 description 1
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 description 1
- 102000016359 Fibronectins Human genes 0.000 description 1
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 description 1
- 102100028314 Filaggrin Human genes 0.000 description 1
- 101710088660 Filaggrin Proteins 0.000 description 1
- 206010016946 Food allergy Diseases 0.000 description 1
- 102000001390 Fructose-Bisphosphate Aldolase Human genes 0.000 description 1
- 108010068561 Fructose-Bisphosphate Aldolase Proteins 0.000 description 1
- 108010061711 Gliadin Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 102100031132 Glucose-6-phosphate isomerase Human genes 0.000 description 1
- 108010070600 Glucose-6-phosphate isomerase Proteins 0.000 description 1
- 102000008214 Glutamate decarboxylase Human genes 0.000 description 1
- 108091022930 Glutamate decarboxylase Proteins 0.000 description 1
- JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylethanolamin Natural products NCCOP(O)(=O)OCC(O)CO JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylserin Natural products OC(=O)C(N)COP(O)(=O)OCC(O)CO ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010018691 Granuloma Diseases 0.000 description 1
- 208000003807 Graves Disease Diseases 0.000 description 1
- 208000015023 Graves' disease Diseases 0.000 description 1
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 description 1
- 208000001204 Hashimoto Disease Diseases 0.000 description 1
- 208000030836 Hashimoto thyroiditis Diseases 0.000 description 1
- 208000035186 Hemolytic Autoimmune Anemia Diseases 0.000 description 1
- 102000031528 Heterogeneous-Nuclear Ribonucleoprotein D Human genes 0.000 description 1
- 108010085241 Heterogeneous-Nuclear Ribonucleoprotein D Proteins 0.000 description 1
- 102000018713 Histocompatibility Antigens Class II Human genes 0.000 description 1
- 102000006947 Histones Human genes 0.000 description 1
- 108010033040 Histones Proteins 0.000 description 1
- 101000908391 Homo sapiens Dipeptidyl peptidase 4 Proteins 0.000 description 1
- 101000994375 Homo sapiens Integrin alpha-4 Proteins 0.000 description 1
- 101000578784 Homo sapiens Melanoma antigen recognized by T-cells 1 Proteins 0.000 description 1
- 101001015220 Homo sapiens Myelin-associated oligodendrocyte basic protein Proteins 0.000 description 1
- 101000664703 Homo sapiens Transcription factor SOX-10 Proteins 0.000 description 1
- 101710146024 Horcolin Proteins 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 102000009438 IgE Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010073816 IgE Receptors Proteins 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 208000022559 Inflammatory bowel disease Diseases 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- 108010001127 Insulin Receptor Proteins 0.000 description 1
- 102100036721 Insulin receptor Human genes 0.000 description 1
- 102100032818 Integrin alpha-4 Human genes 0.000 description 1
- 102000000589 Interleukin-1 Human genes 0.000 description 1
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 1
- 102100039881 Interleukin-5 receptor subunit alpha Human genes 0.000 description 1
- 102000010782 Interleukin-7 Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010036012 Iodide peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 208000003456 Juvenile Arthritis Diseases 0.000 description 1
- 206010059176 Juvenile idiopathic arthritis Diseases 0.000 description 1
- 208000002260 Keloid Diseases 0.000 description 1
- 108010092694 L-Selectin Proteins 0.000 description 1
- 102000016551 L-selectin Human genes 0.000 description 1
- 102000004407 Lactalbumin Human genes 0.000 description 1
- 108090000942 Lactalbumin Proteins 0.000 description 1
- 101710189395 Lectin Proteins 0.000 description 1
- 102000003960 Ligases Human genes 0.000 description 1
- 108090000364 Ligases Proteins 0.000 description 1
- 102100027064 Lipoamide acyltransferase component of branched-chain alpha-keto acid dehydrogenase complex, mitochondrial Human genes 0.000 description 1
- 102000019298 Lipocalin Human genes 0.000 description 1
- 108050006654 Lipocalin Proteins 0.000 description 1
- 102100033468 Lysozyme C Human genes 0.000 description 1
- 102000043131 MHC class II family Human genes 0.000 description 1
- 101710179758 Mannose-specific lectin Proteins 0.000 description 1
- 101710150763 Mannose-specific lectin 1 Proteins 0.000 description 1
- 101710150745 Mannose-specific lectin 2 Proteins 0.000 description 1
- 108010000684 Matrix Metalloproteinases Proteins 0.000 description 1
- 102000002274 Matrix Metalloproteinases Human genes 0.000 description 1
- 208000009018 Medullary thyroid cancer Diseases 0.000 description 1
- 102100028389 Melanoma antigen recognized by T-cells 1 Human genes 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 description 1
- 101001092200 Mus musculus RNA binding protein fox-1 homolog 3 Proteins 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 102000008934 Muscle Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010074084 Muscle Proteins Proteins 0.000 description 1
- 101710091862 Myelin-associated oligodendrocyte basic protein Proteins 0.000 description 1
- 108090000235 Myeloperoxidases Proteins 0.000 description 1
- 102000003896 Myeloperoxidases Human genes 0.000 description 1
- 102000003505 Myosin Human genes 0.000 description 1
- 108060008487 Myosin Proteins 0.000 description 1
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 1
- 108010077641 Nogo Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000007999 Nuclear Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010089610 Nuclear Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000011931 Nucleoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108010061100 Nucleoproteins Proteins 0.000 description 1
- 108010047956 Nucleosomes Proteins 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 108010058846 Ovalbumin Proteins 0.000 description 1
- 108010064983 Ovomucin Proteins 0.000 description 1
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 1
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 1
- 108060005874 Parvalbumin Proteins 0.000 description 1
- 102000001675 Parvalbumin Human genes 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 1
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 1
- 244000025272 Persea americana Species 0.000 description 1
- 235000008673 Persea americana Nutrition 0.000 description 1
- 108010089430 Phosphoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000007982 Phosphoproteins Human genes 0.000 description 1
- 102000004861 Phosphoric Diester Hydrolases Human genes 0.000 description 1
- 108090001050 Phosphoric Diester Hydrolases Proteins 0.000 description 1
- 108010004729 Phycoerythrin Proteins 0.000 description 1
- 229920000776 Poly(Adenosine diphosphate-ribose) polymerase Polymers 0.000 description 1
- 208000012654 Primary biliary cholangitis Diseases 0.000 description 1
- 108700039882 Protein Glutamine gamma Glutamyltransferase 2 Proteins 0.000 description 1
- 102000001253 Protein Kinase Human genes 0.000 description 1
- 102000004022 Protein-Tyrosine Kinases Human genes 0.000 description 1
- 108090000412 Protein-Tyrosine Kinases Proteins 0.000 description 1
- 102100038095 Protein-glutamine gamma-glutamyltransferase 2 Human genes 0.000 description 1
- 201000004681 Psoriasis Diseases 0.000 description 1
- 201000001263 Psoriatic Arthritis Diseases 0.000 description 1
- 208000036824 Psoriatic arthropathy Diseases 0.000 description 1
- 208000006311 Pyoderma Diseases 0.000 description 1
- 241000238711 Pyroglyphidae Species 0.000 description 1
- LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M Pyruvate Chemical compound CC(=O)C([O-])=O LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000011530 RNeasy Mini Kit Methods 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 1
- 108700005075 Regulator Genes Proteins 0.000 description 1
- 208000013616 Respiratory Distress Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 102100029831 Reticulon-4 Human genes 0.000 description 1
- 206010039085 Rhinitis allergic Diseases 0.000 description 1
- 241000277263 Salmo Species 0.000 description 1
- 206010039710 Scleroderma Diseases 0.000 description 1
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 102000004598 Small Nuclear Ribonucleoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108010003165 Small Nuclear Ribonucleoproteins Proteins 0.000 description 1
- 206010041067 Small cell lung cancer Diseases 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 244000019194 Sorbus aucuparia Species 0.000 description 1
- 102000014169 Steroid 21-Hydroxylase Human genes 0.000 description 1
- 108010011732 Steroid 21-Hydroxylase Proteins 0.000 description 1
- 102000003673 Symporters Human genes 0.000 description 1
- 108090000088 Symporters Proteins 0.000 description 1
- 206010043561 Thrombocytopenic purpura Diseases 0.000 description 1
- 108010034949 Thyroglobulin Proteins 0.000 description 1
- 102000009843 Thyroglobulin Human genes 0.000 description 1
- 102100027188 Thyroid peroxidase Human genes 0.000 description 1
- 101710183280 Topoisomerase Proteins 0.000 description 1
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 1
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 1
- 102100038808 Transcription factor SOX-10 Human genes 0.000 description 1
- 206010052779 Transplant rejections Diseases 0.000 description 1
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 1
- 244000098338 Triticum aestivum Species 0.000 description 1
- 102000005937 Tropomyosin Human genes 0.000 description 1
- 108010030743 Tropomyosin Proteins 0.000 description 1
- 102000004243 Tubulin Human genes 0.000 description 1
- 108090000704 Tubulin Proteins 0.000 description 1
- 102000003425 Tyrosinase Human genes 0.000 description 1
- 108060008724 Tyrosinase Proteins 0.000 description 1
- 206010046851 Uveitis Diseases 0.000 description 1
- 102000013127 Vimentin Human genes 0.000 description 1
- 108010065472 Vimentin Proteins 0.000 description 1
- 206010000269 abscess Diseases 0.000 description 1
- 102000034337 acetylcholine receptors Human genes 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 230000003044 adaptive effect Effects 0.000 description 1
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 1
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 201000000028 adult respiratory distress syndrome Diseases 0.000 description 1
- 238000001261 affinity purification Methods 0.000 description 1
- 239000000910 agglutinin Substances 0.000 description 1
- 208000028004 allergic respiratory disease Diseases 0.000 description 1
- 201000010105 allergic rhinitis Diseases 0.000 description 1
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 1
- 108010004469 allophycocyanin Proteins 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000002269 analeptic agent Substances 0.000 description 1
- 230000036783 anaphylactic response Effects 0.000 description 1
- 208000003455 anaphylaxis Diseases 0.000 description 1
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 210000001367 artery Anatomy 0.000 description 1
- 230000002917 arthritic effect Effects 0.000 description 1
- 201000008937 atopic dermatitis Diseases 0.000 description 1
- 201000005000 autoimmune gastritis Diseases 0.000 description 1
- 201000000448 autoimmune hemolytic anemia Diseases 0.000 description 1
- 239000003855 balanced salt solution Substances 0.000 description 1
- 230000002902 bimodal effect Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 1
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 210000000621 bronchi Anatomy 0.000 description 1
- 238000010370 cell cloning Methods 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000005859 cell recognition Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000002490 cerebral effect Effects 0.000 description 1
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 description 1
- 201000001352 cholecystitis Diseases 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 229910052804 chromium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011651 chromium Substances 0.000 description 1
- 208000025302 chronic primary adrenal insufficiency Diseases 0.000 description 1
- 208000019425 cirrhosis of liver Diseases 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 206010009887 colitis Diseases 0.000 description 1
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 1
- 239000000084 colloidal system Substances 0.000 description 1
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000026758 coronary atherosclerosis Diseases 0.000 description 1
- IDLFZVILOHSSID-OVLDLUHVSA-N corticotropin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO)C1=CC=C(O)C=C1 IDLFZVILOHSSID-OVLDLUHVSA-N 0.000 description 1
- 229960000258 corticotropin Drugs 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000005202 decontamination Methods 0.000 description 1
- 230000003588 decontaminative effect Effects 0.000 description 1
- 238000000432 density-gradient centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 210000005045 desmin Anatomy 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 108010003123 dihydrolipoamide acyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 108010079167 dihydrolipoamide succinyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 230000006806 disease prevention Effects 0.000 description 1
- 208000007784 diverticulitis Diseases 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 210000003162 effector t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 238000007459 endoscopic retrograde cholangiopancreatography Methods 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000010195 expression analysis Methods 0.000 description 1
- 210000004700 fetal blood Anatomy 0.000 description 1
- 102000005525 fibrillarin Human genes 0.000 description 1
- 108020002231 fibrillarin Proteins 0.000 description 1
- 108060002895 fibrillin Proteins 0.000 description 1
- 102000013370 fibrillin Human genes 0.000 description 1
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 description 1
- 230000003176 fibrotic effect Effects 0.000 description 1
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N gamma-aminobutyric acid Chemical compound NCCCC(O)=O BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 208000024908 graft versus host disease Diseases 0.000 description 1
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 1
- BCQZXOMGPXTTIC-UHFFFAOYSA-N halothane Chemical compound FC(F)(F)C(Cl)Br BCQZXOMGPXTTIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003132 halothane Drugs 0.000 description 1
- 229910001385 heavy metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000008588 hemolysis Effects 0.000 description 1
- 208000002557 hidradenitis Diseases 0.000 description 1
- 230000013632 homeostatic process Effects 0.000 description 1
- 229940046533 house dust mites Drugs 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 229960002474 hydralazine Drugs 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000008629 immune suppression Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 230000000984 immunochemical effect Effects 0.000 description 1
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 210000002602 induced regulatory T cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 206010022498 insulinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 1
- PGHMRUGBZOYCAA-UHFFFAOYSA-N ionomycin Natural products O1C(CC(O)C(C)C(O)C(C)C=CCC(C)CC(C)C(O)=CC(=O)C(C)CC(C)CC(CCC(O)=O)C)CCC1(C)C1OC(C)(C(C)O)CC1 PGHMRUGBZOYCAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PGHMRUGBZOYCAA-ADZNBVRBSA-N ionomycin Chemical compound O1[C@H](C[C@H](O)[C@H](C)[C@H](O)[C@H](C)/C=C/C[C@@H](C)C[C@@H](C)C(/O)=C/C(=O)[C@@H](C)C[C@@H](C)C[C@@H](CCC(O)=O)C)CC[C@@]1(C)[C@@H]1O[C@](C)([C@@H](C)O)CC1 PGHMRUGBZOYCAA-ADZNBVRBSA-N 0.000 description 1
- GOMNOOKGLZYEJT-UHFFFAOYSA-N isoflavone Chemical compound C=1OC2=CC=CC=C2C(=O)C=1C1=CC=CC=C1 GOMNOOKGLZYEJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000008696 isoflavones Nutrition 0.000 description 1
- 201000002215 juvenile rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 1
- 108010028309 kalinin Proteins 0.000 description 1
- 210000001117 keloid Anatomy 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 230000002045 lasting effect Effects 0.000 description 1
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 1
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 1
- 239000006193 liquid solution Substances 0.000 description 1
- 230000000527 lymphocytic effect Effects 0.000 description 1
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 description 1
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 description 1
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 238000007898 magnetic cell sorting Methods 0.000 description 1
- 239000000696 magnetic material Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 208000023356 medullary thyroid gland carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 238000002493 microarray Methods 0.000 description 1
- 238000012737 microarray-based gene expression Methods 0.000 description 1
- 239000011325 microbead Substances 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 230000002438 mitochondrial effect Effects 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 238000012243 multiplex automated genomic engineering Methods 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 229910052759 nickel Inorganic materials 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001623 nucleosome Anatomy 0.000 description 1
- 229940092253 ovalbumin Drugs 0.000 description 1
- 239000006179 pH buffering agent Substances 0.000 description 1
- 210000002741 palatine tonsil Anatomy 0.000 description 1
- 208000021255 pancreatic insulinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000005298 paramagnetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000006201 parenteral dosage form Substances 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 235000020232 peanut Nutrition 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 1
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 1
- 210000001986 peyer's patch Anatomy 0.000 description 1
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N phosphatidylcholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N 0.000 description 1
- 150000008104 phosphatidylethanolamines Chemical class 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 1
- 108060006184 phycobiliprotein Proteins 0.000 description 1
- 238000000053 physical method Methods 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 208000005987 polymyositis Diseases 0.000 description 1
- 230000002980 postoperative effect Effects 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M propidium iodide Chemical compound [I-].[I-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CCC[N+](C)(CC)CC)=C1C1=CC=CC=C1 XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108060006633 protein kinase Proteins 0.000 description 1
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 1
- ZAHRKKWIAAJSAO-UHFFFAOYSA-N rapamycin Natural products COCC(O)C(=C/C(C)C(=O)CC(OC(=O)C1CCCCN1C(=O)C(=O)C2(O)OC(CC(OC)C(=CC=CC=CC(C)CC(C)C(=O)C)C)CCC2C)C(C)CC3CCC(O)C(C3)OC)C ZAHRKKWIAAJSAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 201000004335 respiratory allergy Diseases 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 201000000306 sarcoidosis Diseases 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 208000010157 sclerosing cholangitis Diseases 0.000 description 1
- 235000006414 serbal de cazadores Nutrition 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000008159 sesame oil Substances 0.000 description 1
- 235000011803 sesame oil Nutrition 0.000 description 1
- 229960002930 sirolimus Drugs 0.000 description 1
- QFJCIRLUMZQUOT-HPLJOQBZSA-N sirolimus Chemical compound C1C[C@@H](O)[C@H](OC)C[C@@H]1C[C@@H](C)[C@H]1OC(=O)[C@@H]2CCCCN2C(=O)C(=O)[C@](O)(O2)[C@H](C)CC[C@H]2C[C@H](OC)/C(C)=C/C=C/C=C/[C@@H](C)C[C@@H](C)C(=O)[C@H](OC)[C@H](O)/C(C)=C/[C@@H](C)C(=O)C1 QFJCIRLUMZQUOT-HPLJOQBZSA-N 0.000 description 1
- 208000000587 small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 229940035044 sorbitan monolaurate Drugs 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 210000001179 synovial fluid Anatomy 0.000 description 1
- 210000005222 synovial tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- MPLHNVLQVRSVEE-UHFFFAOYSA-N texas red Chemical compound [O-]S(=O)(=O)C1=CC(S(Cl)(=O)=O)=CC=C1C(C1=CC=2CCCN3CCCC(C=23)=C1O1)=C2C1=C(CCC1)C3=[N+]1CCCC3=C2 MPLHNVLQVRSVEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000892 thaumatin Substances 0.000 description 1
- 235000010436 thaumatin Nutrition 0.000 description 1
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 1
- 229960002175 thyroglobulin Drugs 0.000 description 1
- 210000001685 thyroid gland Anatomy 0.000 description 1
- 108040006218 thyroid-stimulating hormone receptor activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000015486 thyroid-stimulating hormone receptor activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- 230000001960 triggered effect Effects 0.000 description 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 210000005048 vimentin Anatomy 0.000 description 1
- 230000009278 visceral effect Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009736 wetting Methods 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 description 1
- 235000021241 α-lactalbumin Nutrition 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/577—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor involving monoclonal antibodies binding reaction mechanisms characterised by the use of monoclonal antibodies; monoclonal antibodies per se are classified with their corresponding antigens
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
- C12Q1/04—Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56966—Animal cells
- G01N33/56972—White blood cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/461—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
- A61K39/4611—T-cells, e.g. tumor infiltrating lymphocytes [TIL], lymphokine-activated killer cells [LAK] or regulatory T cells [Treg]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
- A61K39/4643—Vertebrate antigens
- A61K39/4644—Cancer antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/08—Antiallergic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
- C12N5/0636—T lymphocytes
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
- G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
- G01N33/5044—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics involving specific cell types
- G01N33/5047—Cells of the immune system
- G01N33/505—Cells of the immune system involving T-cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K2035/122—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells for inducing tolerance or supression of immune responses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/515—Animal cells
- A61K2039/5158—Antigen-pulsed cells, e.g. T-cells
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/705—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- G01N2333/70503—Immunoglobulin superfamily, e.g. VCAMs, PECAM, LFA-3
- G01N2333/70514—CD4
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/705—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- G01N2333/7056—Selectin superfamily, e.g. LAM-1, GlyCAM, ELAM-1, PADGEM
- G01N2333/70564—Selectins, e.g. CD62
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/705—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- G01N2333/70596—Molecules with a "CD"-designation not provided for elsewhere in G01N2333/705
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/705—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- G01N2333/715—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants for cytokines; for lymphokines; for interferons
- G01N2333/7155—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants for cytokines; for lymphokines; for interferons for interleukins [IL]
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Pathology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Virology (AREA)
Abstract
Группа изобретений относится к медицине и иммунологии и может быть использована для выделения, обогащения или истощения популяции отдыхающих Tr1 клеток и/или активированных Tr1 клеток. Способы по изобретению касаются идентификации, выделения, обогащения, истощения популяции отдыхающих Tr1 клеток и/или активированных Tr1 клеток, а также мониторинга in vitro эффекта терапии. Фармацевтические композиции по изобретению содержат клетки, экспрессирующие маркеры CD4,CD25,CD127 и CD62L. Набор по изобретению включает средства для определения экспрессии маркеров CD4,CD25,CD127 и CD62L на поверхности клеток. Использование изобретения позволяет идентифицировать отдыхающие Tr1 клетки как имеющие фенотип CD4+CD25-CD127lo/-CD62Llo/-, а активированные Tr1 клетки как имеющие фенотип CD4+CD25+CD127lo/-CD62Llo/-. 14 н. и 1 з.п. ф-лы, 2 табл., 5 ил., 4 пр.
Description
Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится к способам идентификации и/или выделения Tr1 клеток, отдыхающих Tr1 клеток и/или активированных Tr1 клеток, к популяциям, обогащенным Tr1 клетками, отдыхающими Tr1 клетками и/или активированными Tr1 клетками, к популяциям, истощенным по Tr1 клеткам, отдыхающим Tr1 клеток и/или активированным Tr1 клеткам, а также к способам и наборам для диагностики или лечения хронических воспалительных заболеваний, аутоиммунных заболеваний, аллергических заболеваний, рака и состояний, сопутствующих трансплантации органов.
Уровень техники
Гомеостаз иммунной системы зависит от баланса между иммунным ответом на инвазивный патоген и иммунной толерантностью к собственным антигенам. Как центральная, так и периферическая толерантность являются важными механизмами индукции и поддержания T-клеточной толерантности. В последнее десятилетие уделяется много внимания регуляторным Т-клеткам (Treg), которые играют важную роль в поддержании периферической иммунной толерантности. В настоящее время точно установлено, что Treg клетки могут быть разделены на два различных субтипа: природные Treg (nTreg) и индуцируемые Treg популяции, такие, как TGF-бета-индуцируемые Treg-клетки, Tr1 клетки или Th3 клетки. Популяции Treg играют главную роль в периферической иммунной толерантности, поэтому проблема идентификации, выделения или обогащения указанных различных субпопуляций Treg для облегчения постановки диагноза, оценки и лечения иммунологических состояний, таких, как хронические воспалительные заболевания, аутоиммунные заболевания или аллергические заболевания, приобрела первостепенное значение.
Например, после их идентификации, nTreg стали выявлять по экспрессии CD25. Однако, CD25 представляет собой маркер активации обычных Т-клеток (convT) и, соответственно, не является исключительным маркером Treg клеток. Последние успехи в распознавании nTreg клеток человека касаются идентификации поверхностных клеточных маркеров или внутриклеточных маркеров, таких, как Foxp3, CD 127 (WO 2007140472), CD45RA (WO 2007/117602), CD 134 (WO 2009/036521) и CD49d (WO 2009/047003). Что касается Tr1 клеток, их специфическая идентификация до сих пор затруднена и основывается главным образом на определении секреции IL-10. Таким образом, существует необходимость в создании способов лучшего и более точного распознавания Tr1 клеток. Кроме того, было доказано, что Tr1 клетки могут, применяться для клеточной терапии, поскольку введение Tr1 клеток пациентам с болезнью Крона облегчало их состояние. Поэтому существует необходимость более точной идентификации и выделения Tr1 клеток, поскольку они могут использоваться для клеточной терапии. Авторы настоящего изобретения обнаружили, что Tr1 клетки могут быть специфическим образом идентифицированы при помощи поверхностных клеточных маркеров CD 127 и CD62L. Более того, использование указанных двух маркеров в дополнении к использованию CD4 маркера и, возможно, CD25 маркера, позволяет отличать Tr1 клетки от обычных отдыхающих и активированных Т-клеток, а также среди отдыхающих и активированных nTreg клеток.
Раскрытие изобретения
Одним из объектов настоящего изобретения является способ идентификации Tr1 клеточной популяции, включающий определение экспрессии CD4, CD127 и CD62L маркеров на поверхности клеток в клеточной популяции, при этом клетки экспрессирующие CD4, а также экспрессирующие на низком уровне CD127 и CD62L, представляют собой Tr1 клетки.
Другим объектом данного изобретения является способ идентификации популяции отдыхающих Tr1-клеток, включающий определение экспрессии маркеров CD4, CD5 и, по крайней мере, одного из маркеров CD127 или CD62L, на поверхности клеток в клеточной популяции, при этом клетки, экспрессирующие CD4, а также экспрессирующие на низком уровне, по крайней мере, один из маркеров CD127 или CD62L, и не экспрессирующие CD25, представляют собой отдыхающие Tr1 клетки.
Еще одним объектом настоящего изобретения является способ идентификации популяции отдыхающих Tr1-клеток, включающий определение экспрессии маркеров CD4, CD25, CD127 и CD62L на поверхности клеток в клеточной популяции, при этом клетки, экспрессирующие CD4, а также экспрессирующие на низком уровне CD127 и CD62L, и не экспрессирующие CD25, представляют собой отдыхающие Tr1 клетки.
Еще одним объектом настоящего изобретения является способ идентификации популяции активированных Tr1-клеток, включающий определение экспрессии маркеров CD4, CD25, CD 127 и CD62L на поверхности клеток в клеточной популяции, при этом клетки, экспрессирующие CD4, CD25, а также экспрессирующие на низком уровне CD127 и CD62L, представляют собой активированные Tr1 клетки.
Другим объектом настоящего изобретения является способ выделения популяций отдыхающих или активированных Tr1 клеток, включающий идентификацию популяции отдыхающих Tr1 клеток или активированных Tr1 клеток при помощи способов, описанных выше, и выделение указанной популяции.
Еще одним объектом настоящего изобретения является выделенная популяция отдыхающих Tr1 клеток или активированных Tr1 клеток, полученная при помощи способа, описанного выше.
Другим объектом настоящего изобретения является выделенная популяция Tr1 клеток, полученная при помощи способа, описанного выше.
Еще одним объектом настоящего изобретения является выделенная популяция отдыхающих Tr1 клеток, полученная при помощи способа, описанного выше.
Еще одним объектом настоящего изобретения является выделенная популяция активированных Tr1 клеток, полученная при помощи способа, описанного выше.
Другим объектом настоящего изобретения является способ обогащения клеточной популяции Tr1 клетками, включающий идентификацию клеток, экспрессирующих CD4, а также экспрессирующих на низком уровне CD127 и CD26L, и отбор указанных клеток, что позволяет получить клеточную популяцию, обогащенную Tr1 клетками, при этом процент Tr1 клеток, по крайней мере, в два раза превышает процент Tr1 клеток в исходной популяции до обогащения.
Еще одним объектом настоящего изобретения является способ обогащения клеточной популяции отдыхающими Tr1 клетками, включающий идентификацию клеток, экспрессирующих CD4, а также экспресирующих на низком уровне, по крайней мере, один из маркеров CD127 или CD62L, и не экспрессирующих CD25, и отбор указанных клеток, что позволяет получить клеточную популяцию, обогащенную отдыхающими Tr1 клетками, при этом процент отдыхающих Tr1 клеток, по крайней мере, в два раза превышает процент отдыхающих Tr1 клеток в исходной популяции до обогащения.
Еще одним объектом настоящего изобретения является способ обогащения клеточной популяции активированными Tr1 клетками, включающий идентификацию клеток, экспрессирующих CD4, CD25, а также экспрессирующих на низком уровне CD127 и CD62L, и отбор указанных клеток, что позволяет получить клеточную популяцию, обогащенную активированными Tr1 клетками, при этом процент активированных Tr1 клеток, по крайней мере, в два раза превышает процент активированных Tr1 клеток в исходной популяции до обогащения.
Другим объектом настоящего изобретения является способ обогащения клеточной популяции отдыхающими и/или активированными Tr1 клетками, включающий идентификацию отдыхающих и/или активированных Tr1 клеток, как описано выше, и отбор указанных клеток, что позволяет получить клеточную популяцию, обогащенную отдыхающими и/или активированными Tr1 клетками, при этом процент отдыхающих и/или активированных Tr1 клеток, по крайней мере, в два раза превышает процент отдыхающих и/или активированных Tr1 клеток в исходной популяции до обогащения.
Другим объектом настоящего изобретения является популяция, обогащенная Tr1 клетками, отдыхающими или активированными Tr1 клетками, полученная при помощи способов, описанных выше.
Еще одним объектом настоящего изобретения является способ истощения клеточной популяции по Tr1 клеткам, отдыхающим Tr1 клеткам или активированным Tr1 клеткам, включающий идентификацию Tr1 клеток, отдыхающих Tr1 клеток или активированных Tr1 клеток в соответствии с настоящим изобретением, и элиминацию указанных клеток, что позволяет получить популяцию, истощенную по Tr1 клеткам, отдыхающим Tt1 клеткам или активированным Tr1 клеткам, при этом процент Tr1 клеток, отдыхающих или активированных Tr1 клеток, по крайней мере в 0,5 раз больше процента Tr1 клеток, отдыхающих Tr1 клеток или активированных Tr1 клеток в исходной популяции до истощения.
Еще одним объектом настоящего изобретения является способ истощения клеточной популяции по отдыхающим Tr1 клеткам и/или активированным Tr1 клеткам, включающий идентификацию отдыхающих Tr1 клеток и/или активированных Tr1 клеток при помощи способов, описанных выше, и элиминацию указанных клеток, что позволяет получить клеточную популяцию, истощенную по отдыхающим и/или активированным Tr1 клеткам, при этом процент отдыхающих и/или активированных Tr1 клеток, по крайней мере, в 0,75 раз больше процента отдыхающих Tr1 клеток и/или активированных Tr1 клеток в исходной популяции до истощения.
Другим объектом настоящего изобретения является клеточная популяция, истощенная по отдыхающим Tr1 клеткам и/или активированным Tr1 клеткам, полученная при помощи способа, описанного выше.
Другим объектом настоящего изобретения являются клеточная популяция, истощенная по Tr1 клеткам, отдыхающим Tr1 клеткам или активированным Tr1 клеткам, полученная при помощи способа, описанного выше.
Другим объектом настоящего изобретения является набор для идентификации или выделения Tr1 клеточной популяции, популяции отдыхающих Tr1 клеток или активированных Tr1 клеток, включающий средства для определения экспрессии маркеров CD4, CD25, CD127 и CD62L на поверхности клеток.
Еще одним объектом настоящего изобретения является фармацевтическая композиция, включающая выделенную популяцию отдыхающих и/или активированных Tr1 клеток, описанную выше, или популяцию, обогащенную отдыхающими и/или активированными Tr1 клетками, описанную выше, или популяцию, истощенную по отдыхающим и/или активированным Tr1 клеткам, описанную выше.
Согласно одному варианту осуществления изобретения, фармацевтическая композиция, содержащая выделенную популяцию отдыхающих и/или активированных Tr1 клеток, описанную выше, или популяцию, обогащенную отдыхающими и/или активированными Tr1 клетками, описанную выше, предназначена для профилактики или лечения иммунного ответа, ассоциированного с инфекцией или трансплантацией, или аллергического заболевания, а также для профилактики или лечения воспалительных состояний или аутоиммунных состояний.
Другим объектом настоящего изобретения являются выделенные и/или обогащенные Tr1 клетки, отдыхающие Tr1 клетки или активированные Tr1 клетки, как описано выше, для профилактики или лечения иммунного ответа, ассоциированного с инфекцией или трансплантацией, или аллергического заболевания, а также для профилактики или лечения воспалительных состояний или аутоиммунных состояний.
Другим объектом настоящего изобретения является популяция, истощенная по Tr1 клеткам, отдыхающим или активированным Tr1 клеткам, как описано выше, предназначенная для усиления иммунного ответа у нуждающегося в этом субъекта.
Согласно одному варианту осуществления изобретения, указанная клеточная популяция представляет собой специфическую к опухолевому антигену Т-клеточную популяцию.
Согласно еще одному варианту осуществления изобретения, фармацевтическая композиция, содержащая популяцию, истощенную по Tr1 клеткам, отдыхающим или активированным Tr1 клеткам, как описано выше, предназначена для лечения рака у субъекта, нуждающегося в таком лечении. Согласно другому варианту осуществления изобретения, указанная клеточная популяция представляет собой специфическую к опухолевому антигену T-клеточную популяцию.
Другим объектом настоящего изобретения является способ истощения популяции, как описано выше, который может использоваться для истощения ех vivo Tr1 клеток, отдыхающих Tr1 клеток или активированных Tr1 клеток, находящихся в крови субъекта, который нуждается в подобной процедуре.
Другим объектом настоящего изобретения является фармацевтическая композиция, содержащая смесь отдыхающих Tr1 клеток и активированных Tr1 клеток, при этом указанная смесь получена путем размножения in vitro выделенной популяции Tr1 клеток, полученной при помощи способа, описанного выше.
Согласно еще одному варианту осуществления изобретения, указанная фармацевтическая композиция предназначена для лечения иммунного ответа, ассоциированного с инфекцией или трансплантацией, или аллергического заболевания, а также для лечения и профилактики воспалительных состояний или аутоиммунных состояний.
Другим объектом настоящего изобретения является способ мониторинга терапевтического эффекта у субъекта in vitro, включающий идентификацию популяции отдыхающих и/или активированных Tr1 клеток в биологическом образце, полученном от субъекта до и после лечения при помощи способа, описанного выше, при этом увеличение популяции отдыхающих и/или активированных Tr1 клеток после лечения расценивается как ответ на проведенное лечение.
Краткое описание чертежей. Фиг.1. Поверхностная экспрессия CD25 и CD127 и внутриклеточная экспрессия Foxp3 клетками nTreg и Tr1 человека. Результаты выражены через средний % обнаруживающих экспрессию клеток в четырех различных Tr1 и nTreg клеточных популяциях, стимулированных связыванием молекул CD3 и CD28 (Act) или культивированных в отдыхающем состоянии (Res). Фиг.2. Поверхностная экспрессия CD62L клетками nTreg и Tr1 человека. Результаты выражены через средний % обнаруживающих экспрессию клеток в четырех различных Tr1 и nTreg клеточных популяциях, стимулированных связыванием молекул CD3 и CD28 (Act) или культивированных в отдыхающем состоянии (Res).
Фиг.3 (А). Поверхностная экспрессия CD62L, CD25 и CD127 клетками nTreg и Tr1 человека. Результаты выражены через величину средней интенсивности флуоресценции (MFI) популяций nTreg и Tr1 клеток, стимулированных связыванием CD3 и CD26 молекул (Act) или культивированных в отдыхающем состоянии (Res).
Фиг.3 (В). Представлены гистограммы проточного цитометрического окрашивания CD62L, CD25 и CD127 для nTreg и Tr1 клеток человека. Фиг.4. Поверхностная экспрессия CD62L активированными мышиными клетками nTreg и Tr1. Результаты выражены через средний % обнаруживающих экспрессию клеток.
Фиг.5 (А). Поверхностная экспрессия CD62L клетками CD4+Cd25-CD127lo. Фиг.5 (В). Результаты выражены через процент клеток, экспрессирующих CD62L в популяции CD4+CD25-CD127lo клеток.
Осуществление изобретения
Tr1 клетки - это отдельная клеточная популяция, которая характеризуется специфическим профилем секреции цитокинов, который описывается ниже. Tr1 клетки дифференцируются из "необученных" CD4+ Т-клеток, которые встретились с антигеном. Tr1 клетки, таким образом, можно обнаружить in vivo в двух состояниях: в активированном состоянии и в отдыхающем состоянии. Как упоминалось выше, распознать Tr1 клетки и, в частности, отдыхающие и активированные Tr1 клетки, при помощи поверхностных маркеров в настоящее время невозможно, поскольку не был установлен специфический поверхностный фенотип для данных популяций. Авторы настоящего изобретения неожиданно обнаружили, что отдыхающие Tr1 клетки имеют следующий фенотип CD4+CD25-CD127lo/-CD62Llo/-, а активированные Tr1 клетки имеют фенотип CD4+CD25+CD127lo/-CD62Llo/-. Это особенно неожиданно потому, что из области техники хорошо известно, что отдыхающие Т-клетки обычно экспрессируют высокие уровни CD62L.
Настоящее изобретение предлагает способы идентификации, выделения, обогащения и/или истощения Tr1 клеток человека, и, в частности, отдыхающих Tr1 клеток человека и активированных Tr1 клеток человека.
Изобретение также относится к полученным Tr1 клеткам, отдыхающим Tr1 клеткам и активированным Tr1 клеткам, а также к композициям на их основе и способам их применения.
Одним объектом настоящего изобретения является способ идентификации Tr1 клеточной популяции, включающий определение экспрессии маркеров CD4, CD127 и CD62L на поверхности клеток в клеточной популяции, при этом клетки, которые экспрессируют CD4, а также экспрессируют на низком уровне CD127 и CD62L, представляют собой Tr1 клетки.
Другим объектом настоящего изобретения является способ идентификации популяции отдыхающих Tr1 клеток, включающий определение экспрессии маркеров CD4, CD25 и, по крайней мере, одного из маркеров CD 127 или CD62L на поверхности клеток в клеточной популяции, при этом клетки, которые экспрессируют CD4, а также эспрессируют на низком уровне, по крайней мере, один из маркеров CD127 или CD62L, и не экспрессируют CD25, представляют собой отдыхающие Tr1 клетки.
Другим объектом настоящего изобретения является способ идентификации популяции активированных Tr1 клеток, включающий определение экспрессии маркеров CD4, CD25, CD 127 и CD62L на поверхности клеток в клеточной популяции, при этом клетки, которые экспрессируют CD4, CD25, а также экспрессируют на низком уровне CD 127 и CD62L, представляют собой активированные Tr1 клетки.
Другим объектом настоящего изобретения является способ идентификации популяции отдыхающих Tr1 клеток и/или популяции активированных Tr1 клеток в пределах популяции обычных отдыхающих и активированных Т-клеток и природных регулируемых отдыхающих и активированных Т-клеток, при этом отдыхающие Tr1 клетки имеют фенотип CD4+CD25-CD127lo/-CD62Llo/-, а активированные Tr1 клетки имеют фенотип CD4+CD25+CD127lo/-CD62L1o/-.
Авторы изобретения, таким образом, демонстрируют, что Tr1 клетки могут быть специфическим образом идентифицированы при помощи маркеров CD4, CD 127 и CD62L. Более точно, авторы изобретения также показывают, что отдыхающие Tr1 клетки можно отличить от активированных Tr1 клеток при помощи маркеров CD4, CD25, CD127 и CD62L. Используемый в тексте термин "маркер" относится к белкам, углеводам или липидам на поверхности клеток, которые могут применяться для распознавания клеточной популяции.
Используемый в тексте термин "экспрессия" относится к экспрессии гена или генного продукта, включая кодируемый полипептид или белок. Экспрессия генного продукта может быть определена, например, при помощи иммуноанализа с использованием одного или более антител, которые связывают полипептид. Альтернативно, экспрессию гена можно определить путем измерения уровней мРНК, например, при помощи RT-PCR, qPCR.
Термин "необученный" хорошо известен из области техники и относится к иммунной клетке или клеточной популяции, которая еще не встречалась со специфическим антигеном. Необученные Т-клетки являются отдыхающими клетками.
Термин "отдыхающий" (находящийся в состояни покоя) также хорошо известен из области техники и относится к иммунной клетке или клеточной популяции, которая не пролиферирует, не продуцирует цитокины и не экспрессирует обычные для иммунных клеток молекулы активации на своей поверхности, такие, как CD25. Отдыхающими Т-клетками могут быть необученные клетки или клетки памяти.
Термин "активированный" также хорошо известен из области техники и относится к иммунной клетке или клеточной популяции, которая пролиферирует и/или продуцирует цитокины и экспрессирует обычные для иммунных клеток молекулы активации на своей поверхности, такие как, CD25.
Что касается Т-лимфоцитов, то переход из состояния покоя в состояние активности опосредуется встречей Т-клетки со специфическим антигеном или запускается активирующими цитокинами или митогенами.
Термин "низкий" или обозначение "low" или "lo/-", используемые в тексте по отношению к CD1271o, CD62L1o/- или CD25L1o/", также хорошо известны из области техники и относятся к уровню экспрессии клеточного маркера, представляющего интерес, при этом уровень экспрессии клеточного маркера является более низким по сравнению с уровнем экспрессии этого клеточного маркера в анализируемой популяции клеток в целом. В частности, обозначение "low" ("lo") относится к отдельной популяции клеток, которая экспрессирует клеточный маркер на более низком уровне, чем одна или более другие отдельные популяции клеток.
Термин "высокий" или обозначение "hi" или термин "яркий" также хорошо известны из области техники и относятся к уровню экспрессии клеточного маркера, представляющего интерес, при этом уровень экспрессии указанного клеточного маркера является более высоким по сравнению с уровнем экспрессии этого клеточного маркера в анализируемой популяции клеток в целом.
Обозначения "+" и "-" хорошо известны из области техники и относятся к уровню экспрессии клеточного маркера, представляющего интерес, при этом уровень экспрессии клеточного маркера, обозначаемый как "+" является высоким или промежуточным, который также может обозначаться как "+/-", а уровень экспрессии обозначаемый знаком "-" является низким или нулевым. В целом, клетки, дающие интенсивность окрашивания 2,3,4 или 5%, обозначаются как "hi", при этом те, которые попадают в верхнюю половину популяции, относят к "+" клеткам. Клетки, интенсивность флуоресценции для которых ниже 50%, обозначаются как "lo"-клетки, а клетки, у которых интенсивность менее 5% обозначаются как "-" клетки.
Используемый здесь термин "CD127" обозначает рецептор интерлейкина-7, который находится на поверхности Tr1 клеток. Альфа цепь рецептора IL-7 описана в литературе (например, Goodwin et al. 1990, Cell, 60:941-951). IL-7R также обозначается в литературе как CD 127. "CD127+" относится к клеткам, которые дают промежуточное или яркое окрашивание при обработке меченым антителом к CD 127. "CD127lo/-" относится к клеткам, которые дают слабое/тусклое окрашивание или не окрашиваются вовсе при контакте с меченым антителом к CD127. В целом, клетки различают по уровню экспрессии CD127 на основании легко определяемой разницы интенсивности окрашивания, что хорошо известно специалистам в данной области. Согласно некоторым вариантам осуществления изобретения, основанием для обозначения клетки как "CD127lo/-" является распределение интенсивности флуоресценции, наблюдаемое для всех клеток, при этом клетки, демонстрирующие интенсивность флуоресценции ниже 50%, 40%, 30% или 20% обозначаются как "CD127lO/-" клетки. Клетка обозначается как "CD127-", когда интенсивность ее флуоресценции ниже десятого процентиля. В некоторых случаях, частоту распределения CD127 окрашивания определяют для всех клеток и популяционную кривую строят для популяций с высоким и более низким окрашиванием, а клетки относят к той популяции, к которой они с большей статистической вероятностью должны относиться на основании статистического анализа соответствующих распределений в популяции. Согласно некоторым вариантам, "CD127lo/-" клетки дают интенсивность окрашивания, которая в два или три раза меньше, чем у CD127 + клеток.
Используемый здесь термин "CD62L" относится к L-селектину, который представляет собой важную молекулу адгезии для миграции лимфоцитов. "CD62L+" обозначают клетки, которые дают промежуточное или яркое окрашивание при обработке меченым антителом к CD62L. "CD26Llo/-" относится к клеткам, которые дают слабое/тусклое окрашивание или не окрашиваются вовсе при контакте с меченым антителом к CD62L. В-целом, клетки различают по уровню экспрессии CD 12 7 на основании легко определяемой разницы интенсивности окрашивания, что хорошо известно специалистам в данной области. Согласно некоторым вариантам осуществления изобретения, основанием для обозначения клетки как “CD62Llo/-" является распределение интенсивности флуоресценции, наблюдаемое для всех клеток, при этом клетки, демонстрирующие интенсивность флуоресценции ниже 50%, 40%, 30% или 20% обозначаются как "CD62Llo/-" клетки. Клетка обозначается как "CD62L-", когда интенсивность ее флуоресценции ниже десятого процентиля. В некоторых случаях, частоту распределения CD 127 окрашивания определяют для всех клеток и популяционную кривую строят для популяций с высоким и более низким окрашиванием, а клетки относят к той популяции, к которой они с большей статистической вероятностью должны относиться на основании статистического анализа соответствующих распределений в популяции. Согласно некоторым вариантам, "CD62Llo/-" клетки дают интенсивность окрашивания, которая в два или три раза меньше, чем у CD62L + клеток.
Используемый здесь термин "CD4" относится к поверхностному клеточному гликопротеину, который обычно обнаруживается на поверхности зрелых Т-хелперов и незрелых тимоцитов, а также на поверхности моноцитов и макрофагов. На Т-клетках, CD4 является ко-рецептором для Т-клеточного рецептора (TCR) и захватывает тирозинкиназу 1 ck. Своим D1-участком, CD4 может прикрепляться к бета 2-домену молекул МНС II класса. Обозначение "CD4+" относится к клеткам, которые дают яркое окрашивание при контакте с меченым анти-CD4-антителом, а обозначение "CD4-" относится к клеткам, которые дают слабое, тусклое окрашивание или не окрашиваются вовсе при контакте с меченым флуоресцентной меткой CD4 антителом. В целом все клетки распределяют в соответствии с их уровнем экспрессии CD4 на основании легко определяемой разницы интенсивности окрашивания, поскольку CD4 окрашивание четко является бимодальным. В некоторых случаях частоту распределения CD4 окрашивания определяют для всех клеток и популяционную кривую строят для популяций с высоким и более низким окрашиванием, а клетки относят к той популяции, к которой они с большей статистической вероятностью должны относиться на основании статистического анализа соответствующих распределений в популяции. Согласно некоторым вариантам, "CD4-" клетки дают интенсивность окрашивания, которая в два или три раза меньше, чем у CD4+клеток.
Используемый здесь термин "CD25" относится к альфа субъединице рецептора интерлейкина-2, одноцепочечному гликопротеину, имеющему молекулярный вес 55 кД. После активации Т-клеток антигеном или митогеном в присутствии монокина интерлейкина-1, интерлейкин-2 (IL-2) начинает быстро синтезироваться и секретироваться. В ответ на это субпопуляция Т-клеток экспрессирует высокоаффинные рецепторы для IL-2. Эти клетки пролиферируют, увеличивая популяцию Т-клеток, которые способны выполнять функции клеток-хелперов, супрессоров и цитотоксические функции. Рецептор к IL-2 обнаруживается не только на Т-клетках. Обозначение "CD25hi относится к клеткам, которые дают яркое окрашивание при контакте с меченым анти-CD25-антителом. Обозначение "CD25+" относится к клеткам, которые окрашиваются менее ярко при контакте с меченым анти-С025-антителом, а обозначение "CD25lo/-" относится к клеткам, которые дают слабое, тусклое окрашивание или не окрашиваются вовсе при контакте с меченым CD25 антителом. В целом, клетки различают по уровню экспрессии CD25 на основании легко определяемой разницы интенсивности окрашивания, что хорошо известно специалистам в данной области. В некоторых случаях основанием для отнесения клетки к какой-либо категории на основании уровня экспрессии CD25, а именно hi, +или -, является распределение интенсивности окрашивания, наблюдаемое для всех клеток. В целом, клетки, демонстрирующие интенсивность окрашивания выше 2, 3, 4 или 5% обозначаются как “hi” при этом те, которые попадают в верхнюю половину популяции, относят к "+" клеткам. Клетки интенсивность флуоресценции, для которых ниже 50%, обозначаются как "CB25lo”-клетки, а клетки, у которых интенсивность менее 5%, обозначаются как CD25-клетки.
Используемый здесь термин "Foxp3" относится к ядерному белку Foxp3, который, как считается, выполняет роль фактора транскрипции (Hori et al., 2003; Yasayko, J. E. et al., Nat. Genet. 27, 68-73, 2001; Fontenot, J.D. et al., Nat. Immunol. 4:330-336, 2003; Khattri, R. et al., Nat. Immunol. 4:337-342, 2003). Поскольку Foxp3 расположен внутри клеток, его экспрессия может быть оценена при помощи внутриклеточной проточной цитометрии с использованием меченого анти-Foxp3-антитела (eBioscience inc or BD biosciences).
Согласно настоящему изобретению, Tr1 клетки обладают способностью секретировать высокие уровни IL-10 и промежуточные уровни TGF-β после активации. Tr1 клетки отличаются, в частности, своим уникальным профилем секреции цитокинов: они продуцируют высокие уровни IL-10, средние уровни TGF-β и средние уровни IFN-γ, но не продуцируют IL-4 или IL-2. Продукцию цитокинов обычно оценивают в культуре клеток после активации при помощи поликлональных активаторов Т-лимфоцитов, таких, как анти-CD3+апти-CD28 антитела или интерлейкин-2, РМА + иономицин. Альтернативно, продукцию цитокинов оценивают в культуре клеток после активации специфическим T-клеточным антигеном, представляемым антиген-презентирующими клетками. Высокие уровни IL-10 соответствуют, по крайней мере, 500 пг/мл, обычно более 1, 2, 4, 6, 8, 10, 14, 16, 18 или 20 тысячам пг/мл. Средние уровни секреции TGF-β соответствуют, по крайней мере, 100 пг/мл, обычно более 200, 300, 400, 600, 800 или 1000 пг/мл. Средние уровни секреции IFN-γ соответствуют концентрациям, находящимся в пределах от 0,1 пг/мл до, по крайней мере, 400 пг/мл, обычно более 600, 800, 1000, 1200, 1400, 1600, 1800 или 2000 пг/мл. Низкие уровни секреции IL-4 или IL-2 или отсутствие секреции соответствуют концентрации приблизительно 500 пг/мл, предпочтительно, менее 250, 100, 75 или 50 пг/мл, или еще меньше.
Tr1 клетки могут дополнительно характеризоваться по поверхностным маркерам. Указанные маркеры поверхности клеток могут распознаваться реагентами, которые специфически связываются с ними. Например, белки, углеводы или липиды на поверхности Tr1 клеток могут иммунологически распознаваться антителами, специфичными для определенного белка или углевода (для более подробной информации об использовании антител к маркерам см. Harlow, Using Antibodies: A Laboratory Manual. Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, N.Y., 1999; также раздел ПРИМЕРЫ). Набор маркеров, присутствующих и отсутствующих на поверхности Tr1 клеток, является их специфической характеристикой. Таким образом, Tr1 клетки могут быть отобраны при помощи позитивной и негативной селекции с использованием поверхностных клеточных маркеров. Реагент, который связывается с поверхностным клеточным маркером, экспрессируемым Tr1 клетками, "позитивный маркер", может использоваться для позитивной селекции Tr1 клеток (то есть, остающихся клеток, которые экспрессируют поверхностный клеточный маркер). Наоборот, негативная селекция основана на том факте, что определенные поверхностные клеточные маркеры не экспрессируются Tr1 клетками. Следовательно, "негативный маркер" (то есть маркер, отсутствующий на поверхности Tr1 клеток) может использоваться для исключения из популяции тех клеток, которые не являются Tr1 клетками; клетки, связывающие реагент, специфичный для негативного маркера, удаляются.
Согласно одному варианту осуществления изобретения, распознавание клеток на основании определяемой экспрессии поверхностных клеточных маркеров происходит путем сравнения экспрессии поверхностного клеточного маркера со средней величиной экспрессии этого маркера контрольной популяцией клеток. Например, экспрессия маркера на поверхности Tr1 клеток может сравниваться со средней величиной экспрессии этого маркера другими клетками, выделенными из того же образца, что и Tr1 клетки. Другим способом распознавания клеток на основании экспрессии поверхностных маркеров является исследование клеток при помощи проточной флуометрии с использованием комбинации реагентов (см. Givan A, Flow Cytometry: First Principles. Wiley-Liss, New York, 1992; Owens M A & Loken M R., Flow Cytometry: Principles for Clinical Laboratory Practice, Wiley-Liss, New York, 1995).
Под "комбинацией реагентов" понимаются, по крайней мере, два реагента, которые связываются с поверхностными клеточными маркерами, как присутствующими (позитивный маркер), так и отсутствующими (негативный маркер) на поверхности Tr1 клеток, или реагенты, которые связываются с комбинацией позитивных и негативных маркеров. Например, использование комбинации антител, специфичных для поверхностных маркеров Tr1 клеток, приводит к выделению Tr1 клеток из различных образцов/тканей и/или к их обогащению.
При отборе клеток по фенотипическим характеристикам, полученных из образца, антитела, которые распознают видовые специфические варианты маркеров, используются для обогащения и селекции Tr1 клеток. Термин "обогащенный" в отношении обогащенной популяции клеток может быть определен как увеличение количества клеток, имеющих определенный маркер, во фракционированном наборе клеток по сравнению с количеством клеток, имеющих маркер в нефракционированном наборе клеток. В определенных случаях популяцию обогащают по Tr1 клеткам при помощи реагентов, которые связывают специфические поверхностные маркеры, специфичные для Tr1 клеток, после чего эти клетки отделяют при помощи различных методов сортировки клеток, таких, как флуоресцентная сортировка клеток (FACS, Fluorescence-Activated Cell Sorting), использование твердофазных магнитных шариков и т.д. В некоторых случаях может использоваться комбинация методов сортировки клеток, например, магнитный отбор с последующей FACS. Чтобы усилить обогащение, позитивный отбор комбинируют с негативным для выделения Tr1 клеток на основе клеточных маркеров. Предполагается, что выделение/обогащение Tr1 клеток с использованием клеточных маркеров может осуществляться в любом порядке. Следовательно, этап позитивной селекции может непосредственно предшествовать этапу негативной селекции, или наоборот. Считается также, что выделение/обогащение может осуществляться и при объединении этапов позитивной и негативной селекции. Следовательно, выделение/обогащение осуществляют, выполняя сначала этапы позитивной селекции в соответствии с используемым способом, а затем этапы негативной селекции в соответствии с используемым способом, или наоборот.
Термин "анти Х-антитело" или "X антитело", согласно настоящему изобретению, относится к антителу, которое может специфически связываться с X. В частности, анти-CD127-антитело или CD127 антитело обладает способностью связывать CD127. К антителам, которые используются в соответствии с настоящим изобретением, относятся, без ограничений указанными, рекомбинантные антитела, поликлональные антитела, моноклональные антитела, химерные антитела, человеческие моноклональные антитела, гуманизированные или приматизированные моноклональные антитела, а также фрагменты антител. В настоящее время коммерчески доступно большое количество специфических антител к лимфоцитарным биомаркерам. К ним относятся анти-CD127, анти-CD4, анти-CD62L и анти CD25 антитела. Термин "антитело" относится к полипептиду, содержащему структурную область, кодируемую иммуноглобулиновым геном, или ее фрагменты, которые специфически связываются с антигеном и распознают его. К распознаваемым иммуноглобулиновым генам относятся гены каппа, лямбда, альфа, гамма, дельта, ипсилон и мю константных участков, а также многочисленные гены вариабельных участков. Легкие цепи классифицируются как каппа или лямбда. Тяжелые цепи классифицируются как гамма, мю, альфа, дельта или ипсилон, что, в свою очередь, определяет класс иммуноглобулина, IgG, IgM, IgA, IgD и IgE, соответственно. Обычно антиген-связывающий участок антител является наиболее важным участком, определяющим специфичность и аффинность связывания. Типичная структурная единица иммуноглобулина (антитела) представляет собой тетрамер. Каждый тетрамер состоит из двух идентичных пар полипептидных цепей, каждая пара включает одну "легкую" (около 25 кД) и одну "тяжелую" цепь (приблизительно 50-70 кД). N-конец каждой цепи определяет вариабельный участок, включающий, приблизительно, 100-110 аминокислот и, в первую очередь, ответственный за распознавание антитела. Термины вариабельная легкая цепь (VL) и вариабельная тяжелая цепь (VH) относятся к указанным легким и тяжелым цепям, соответственно. Антитела существуют, например, в форме интактных иммуноглобулинов, или в виде набора хорошо изученных фрагментов, получаемых при расщеплении целых иммуноглобулинов различными пептидазами. Так, например, пепсин расщепляет антитело ниже дисульфидных мостиков в шарнирной области с образованием фрагмента F(ab)’2, димера Fab, который сам по себе является легкой цепью, соединенной с VH-CH1 дисульфидной связью. F(ab)’2 может быть восстановлен в умеренных условиях для разрушения дисульфидных связей в шарнирной области, что приводит к превращению F(ab)’2 димера в Fab’ мономер. Fab’ мономер по существу представляет собой Fab с частью шарнирной области (см. Fundamental Immunology. Paul ed., 3d ed. 1993). Несмотря на то, что различные антительные фрагменты образуются при расщеплении интактного антитела, любой специалист в данной области понимает, что указанные фрагменты могут быть синтезированы de novo как при помощи химического синтеза, так и при помощи технологий рекомбинантных ДНК. Таким образом, термин «антитело», используемый здесь, также относится к фрагментам антитела, которые могут быть получены как путем модификации целого антитела, синтезированы de novo при помощи рекомбинантных ДНК технологий (например, одноцепочечной Fv), а также идентифицированы с использованием фаговых дисплейных библиотек (см, например, McCafferty et al., Nature 348:552-554, 1990). В некоторых случаях высокоаффинный лиганд к мишени может использоваться вместо антитела. Понятие "специфически (или селективно) связывается", используемое по отношению к антителу, или "специфически (или селективно) иммунологически реагирует с", используемое по отношению к белку или пептиду, относится к реакции связывания, которая выявляет присутствие белка, обычно в гетерогенной популяции белков и других биомолекул. Специфическое связывание с антителом при таких условиях требует антитела, которое выбрано по причине своей специфичности к определенному белку. Например, поликлональные антитела могут отбираться таким образом, чтобы остались только те поликлональные антитела, которые специфически реагируют с выбранным антителом и не реагируют с другими белками. Такой отбор может осуществляться путем исключения антител, которые перекрестно реагируют с другими молекулами. Предпочтительно, "метка" или "детектируемое вещество" ковалентно или нековалентно прикрепляется к антителу. Метка может выявляться спектрометрическим, фотохимическим, биохимическим, иммунохимическим, химическим способом или любым другим физическим способом. Особенно полезными метками являются флуоресцентные красители. Способы прикрепления меток к антителам хорошо известны специалистам в данной области. Наиболее предпочтительными являются метки, которые прикрепляются к антителам посредством линкера, который может быть легко отщеплен или отделен или подвержен гидролизу при взаимодействии с заданным ферментом в физиологических условиях. Антитело также может быть конъюгировано с магнитной частицей, такой, как парамагнитная микробусина (Miltenyi Biotec, Germany). Активированная Т-клетка, связанная с антителом, меченным магнитной меткой, может быть выделена при помощи технологий, включающих, без ограничений указанными, магнитную сортировку клеток. Подходящим образом меченные антитела к CD127, CD62L, CD4 и CD25, а также к другим многочисленным кластерам дифференцировки, являются коммерчески доступными и хорошо известны специалистам в данной области. Антитело может быть мечено до или после контакта с образцом, или до или после контакта с CD. CD-антитело может быть мечено путем контактирования с меченым антителом, которое связывается с CD-антителом. Используемый здесь термин "CD" или "кластер дифференцировки" или "общая детерминанта" относится к молекулам на поверхности клеток, которые распознаются антителами.
Согласно данному изобретению, популяция Tr1 клеток может быть идентифицирована путем определения экспрессии CD4, CD 127 и CD62L маркеров на поверхности клеток в клеточной популяции: клетки, экспрессирующие CD4 (то есть CD4+ клетки) и экспрессирующие низкие уровни CD 127 и CD62L (то есть, клетки, являющиеся CD127lo/- и CD62Llo/-), относятся к Tr1 клеткам.
Согласно данному изобретению, популяция отдыхающих Tr1 клеток может быть идентифицирована путем определения экспрессии на поверхности клеток CD4, CD25 и, по крайней мере, одного из маркеров CD 127 или CD62L в клеточной популяции: клетки, экспрессирующие CD4 (то есть CD4+ клетки) и экспрессирующие низкий уровень, по крайней мере, одного из маркеров CD127 или CD62L (то есть CD127lo/- и/или CD62Llo/-), предпочтительно, низкий уровень CD 127 или CD62L, и не экспрессирующие CD25 (то есть, CD25- клетки) относятся к отдыхающим Tr1 клеткам.
Согласно одному варианту осуществления изобретения, также оценивается маркер Foxp3, при этом клетки, экспрессирующие CD4 (то есть CD4+ клетки) и экспрессирующие на низком уровне, по крайней мере, один из маркеров CD 127 или CD62L (то есть CD127lo/- и/или CD62Llo/-), предпочтительно, экспрессирующие на низком уровне CD 127 или CD62L, и не экспрессирующие CD25 (то есть, CD25- клетки) и, дополнительно, не экспрессирующие Foxp3 (то есть Foxp3-клетки) относятся к отдыхающим Tr1 клеткам.
Согласно данному изобретению, популяция активированных Tr1 клеток может быть идентифицрована путем определения экспрессии на поверхности клеток CD4, CD25, CD127 и CD62L маркеров в клеточной популяции: клетки, экспрессирующие CD4 и CD25 (то есть, CD4+ и CD25+ клетки) и экспрессирующие на низком уровне CD127 и CD62L (то есть CD127lo/- и/или CD62Llo/- клетки) относятся к активированным Tr1 клеткам.
Согласно одному варианту осуществления изобретения, также оценивается маркер Foxp3, при этом, клетки, экспрессирующие CD4 и CD25 (то есть, CD4+ и CD25+ клетки) и экспрессирующие низкие уровни CD127 и CD62L (то есть CD12710/- и/или CD62Llo/- клетки), и экспрессирующие Foxp3 (то есть Fохр3+ клетки) относятся к активированным Tr1 клеткам.
Предпочтительными реагентами, которые связываются с указанными маркерами (CD4, CD25, CD127, CD62L и Foxp3) и используются для идентификации указанных Tr1 клеток, являются антитела. Согласно дополнительному варианту осуществления изобретения, антитела конъюгированы с флуорохромом или магнитной частицей. Согласно другому варианту осуществления изобретения, клеточную селекцию осуществляют при помощи проточной цитометрии, флуоресцентной сортировки клеток, магнитной селекции, аффинной хроматографии или пэннинга, а также при помощи комбинации указанных способов.
Другим объектом изобретения является выделенная популяция Tr1 клеток, полученная при помощи способа идентификации, описанного выше, с последующей селекцией клеток.
Другим объектом настоящего изобретения является выделенная популяция отдыхающих Tr1 клеток, полученная при помощи способа идентификации клеток, описанного выше, с последующей селекцией клеток.
Еще одним объектом настоящего изобретения является выделенная популяция активированных Tr1 клеток, полученная при помощи способа идентификации клеток, описанного выше, с последующей селекцией клеток.
Еще одним объектом настоящего изобретения является популяция отдыхающих и активированных Tr1 клеток, полученная при помощи способа идентификации клеток, описанного выше, с последующей селекцией клеток.
Термин "выделенный" относится к клетке или клеточной популяции, которая изолирована из своего естественного окружения (такого, как периферическая кровь), удалена или отделена и, по крайней мере, на 75%, 80%, 85%, предпочтительно, приблизительно на 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% свободна от других клеток, которые присутствуют в естественной среде, но не имеют поверхностных клеточных маркеров, на основании экспрессии которых и была выделена клеточная популяция.
Способы выделения или отделения клеточной популяции хорошо известны специалистам в данной области и включают, без ограничений указанными, сортировку клеток при помощи проточной цитометрии, магнитную селекцию, аффинную хроматографию, пэннинг или комбинации указанных способов.
Еще одним объектом настоящего изобретения является фармацевтическая композиция, содержащая или включающая изолированную популяцию отдыхающих и/или активированных Tr11 клеток, как описано выше. Согласно одному варианту осуществления изобретения, указанная фармацевтическая композиция содержит фармацевтически приемлемый носитель.
Фармацевтически приемлемые носители, которые могут использоваться в соответствии с настоящим изобретением, являются стандартными. В источнике Remington’s Pharmaceutical Sciences, 16th edition, Osol, A. Ed. (1980) описываются композиции и лекарственные формы, подходящие для фармацевтической доставки композиции, заявленной в соответствии с настоящим изобретением. В целом, природа носителя зависит от используемого способа введения. В частности, лекарственные формы для парентерального введения обычно содержат в качестве носителей инъекционные жидкости, такие, как вода, физиологический раствор, сбалансированные солевые растворы, водная декстроза, кунжутное масло, глицерол, этанол, комбинации указанных веществ и т.д. Носитель и композиция могут быть стерильными, а лекарственная форма соответствует предполагаемому способу введения. Помимо нейтральных биологических носителей, фармацевтические композиции могут содержать минимальные количества нетоксичных вспомогательных веществ, таких, как увлажняющие или эмульгирующие агенты, консерванты, рН буферирующие агенты и подобные соединения, например, ацетат натрия или монолаурат сорбитана. Композиция может представлять собой жидкий раствор, суспензию, эмульсию.
Другим объектом настоящего изобретения является способ обогащения клеточной популяции Tr1 клетками, включающий идентификацию клеток, экспрессирующих CD4, а также экспрессирующих на низком уровне CD 127 и CD62L, и отбор указанных клеток, что позволяет получить клеточную популяцию, обогащенную Tr1 клетками.
Еще одним объектом настоящего изобретения является способ обогащения клеточной популяции отдыхающими Tr1 клетками, включающий идентификацию клеток, экспрессирующих CD4, а также экспрессирующих на низком уровне, по крайней мере, один из маркеров CD127 или CD62L, предпочтительно экспрессирующих на низком уровне CD127 и CD62L, и не экспрессирующих CD25, и отбор указанных клеток, что позволяет получить клеточную популяцию, обогащенную отдыхающими Tr1 клетками.
Еще одним объектом настоящего изобретения является способ обогащения клеточной популяции активированными Tr1 клетками, включающий идентификацию клеток, экспрессирующих CD4, CD25, а также экспрессирующих на низком уровне CD127 и CD62L, и отбор указанных клеток, что позволяет получить клеточную популяцию, обогащенную активированными Tr1 клетками.
Другим объектом настоящего изобретения является популяция, обогащенная Tr1 клетками, полученная при помощи способа, описанного выше.
Другим объектом настоящего изобретения является популяция, обогащенная отдыхающими Tr1 клетками, полученная при помощи способа, описанного выше.
Еще однимобъектом настоящего изобретения является популяция, обогащенная активированными Tr1 клетками, полученная при помощи способа, описанного выше.
Предпочтительными реагентами, которые связываются с указанными маркерами (CD4, CD125, CD127 и CD62L) для отбора/обогащения указанных клеток, являются антитела. Согласно дополнительному варианту осуществления изобретения, антитела конъюгированы с флуорохромом или магнитной частицей. Согласно другому варианту осуществления изобретения, селекцию клеток осуществляют при помощи проточной цитометрии, флуоресцентной сортировки клеток, магнитной селекции, аффинной хроматографии, или пэннинга, или при помощи комбинации указанных способов.
Композиция/популяция, обогащенная Tr1-клетками, представляет собой такую композицию/популяцию, в которой процент Tr1 клеток выше, чем процент Tr1 клеток в популяции клеток, образующейся естественным образом. Популяция, обогащенная Tr1 клетками, необязательно может представлять собой гомогенную популяцию Tr1 клеток. Согласно определенным вариантам осуществления изобретения, по крайней мере, приблизительно, 50%, приблизительно, 55%, приблизительно, 60%, приблизительно, 65%, приблизительно, 70%, приблизительно, 75%, приблизительно, 80%, приблизительно, 85%, приблизительно, 90%, приблизительно, 95%, приблизительно, 98% или, приблизительно, 99% клеток в композиции представляют собой Tr1 клетки. Согласно другим вариантам осуществления изобретения, процент Tr1 клеток в обогащенной композиции/популяции, по крайней мере, в два раза, в 5 раз, в 10 раз, в 20 раз, в 30 раз, в 40 раз, в 50 раз, в 60 раз, в 70 раз, в 80 раз, в 90 раз, в 100 раз выше, чем процент Tr1 клеток перед обогащением. Используемый здесь термин "приблизительно", стоящий перед каким-либо числовым значением, означает разброс в пределах 10% от заданного числового значения.
Любой источник клеток, содержащий Tr1 клетки, может использоваться для выделения/обогащения Tr1 клеток. К подходящим источникам относятся, без ограничений указанными, периферическая кровь, синовиальная жидкость, селезенка, тимус, лимфатические узлы, костный мозг, Пейеровы бляшки и миндалины.
Способы обогащения различаются в зависимости от уровня обогащения, ассоциированного с каждым этапом процесса обогащения. Уровень обогащения и процент чистоты Tr1 клеток будет зависеть от множества факторов, включая, без ограничений указанными, природу донора и источника клеток/ткани и характер течения заболевания у донора. Согласно некоторым вариантам осуществления изобретения, Tr1 клетки обогащают, по крайней мере, приблизительно, в 2 раза, приблизительно, в 5 раз, приблизительно, в 10 раз, приблизительно, в 15 раз, приблизительно, в 20 раз, приблизительно, в 25 раз, приблизительно, в 30 раз, приблизительно, в 35 раз, приблизительно, в 40 раз, приблизительно, в 45 раз, приблизительно, в 50 раз, приблизительно, в 55 раз, приблизительно, в 60 раз, приблизительно, в 65 раз, приблизительно, в 70 раз, приблизительно, в 75 раз, приблизительно, в 80 раз, приблизительно, в 85 раз, приблизительно, в 90 раз, приблизительно, в 95 раз, приблизительно, в 100 раз, приблизительно, в 105 раз, приблизительно, в 110 раз, приблизительно, в 115 раз, приблизительно, в 120 раз, приблизительно, в 130 раз, приблизительно, в 140 раз, приблизительно, в 150 раз или, приблизительно, в 200 раз.
Способы выделения, изолирования или селекции клеток включают, без ограничений указанными, магнитную сепарацию с использованием магнитных бус с нанесенными антителами (Schwartz, et al., патент США No. 5,759,793) и аффинную хроматографию или "пэннинг" с использованием антитела, прикрепленного к твердой матрице (например, планшету). К другим методикам, позволяющим достичь точной селекции, относятся флуоресцентная сортировка клеток (FACS), которая может иметь различные уровни сложности, например, множественные цветные каналы, каналы, регистрирующие свет под низким углом или приглушенный рассеянный свет, или импедансные каналы. Мертвые клетки могут элиминироваться путем селекции с использованием красителей для мертвых клеток, например (пропидий иодид, LDS). Красные кровяные клетки могут быть удалены, например, при помощи отстаивания, гемолиза или центрифугирования в градиенте фиколл-пак. Может применяться любая методика, если она не оказывает вредного влияния на жизнеспособность отобранных клеток.
Для удобства антитела конъюгируют с различными метками в нескольких целях: например, с магнитными бусами для облегчения выделения Tr1 клеток; с биотином, который связывается с высокой аффинностью с авидином или стрептавидином; флуорохромами, которые могут использоваться в аппарате для флуоресцентной сортировки клеток; гаптенами и т.д. Многоцветный анализ может использоваться вместе с FACS или в комбинации с иммуномагнитной сепарацией и проточной цитометрией. Многоцветный анализ представляет интерес для сепарации клеток и основан на определении многочисленных поверхностных антигенов, например, не CD4+ маркеров иммунных клеток (CD8, CD14, CD16, CD19, CD36, CD56, CD123, TCR гамма/дельта и гликофорин А), CD4, CD25, CD127 и CD62L. Флуорохромы, которые могут использоваться для такого многоцветного анализа включают, без ограничений указанными, фикобилипротеины, например, фикоэритрин и аллофикоцианины; флуоресцин и техасский красный.
Магнитная сепарация представляет собой методику, которая используется для селективного сохранения магнитных материалов в сосуде, таком, как колонка или пробирка для центрифугирования, в градиенте магнитного поля. Tr1 клетки могут быть мечены путем прикрепления магнитных частиц к поверхности клеток посредством специфических взаимодействий, включая иммунно-аффинные взаимодействия. Суспензию, содержащую Tr1 клетки и находящуюся в подходящем сосуде, затем подвергают воздействию магнитного поля с градиентами достаточной силы для отделения Tr1 клеток от других клеток в суспензии. Затем сосуд отмывают подходящей жидкостью для удаления немеченых клеток и получают очищенную суспензию Tr1 клеток.
Значительная часть магнитных систем для нанесений меток представлена суперпарамагнитными частицами, с поверхностью которых ковалентно связано антитело или стрептавидин. С целью сепарации клеток такие частицы могут использоваться как для позитивной селекции, когда помечаются магнитными метками и сохраняются клетки, представляющие интерес, так и для негативной селекции, когда сохраняется и помечается магнитными метками большинство клеток, не представляющих интереса. Диаметр используемых частиц широко варьирует, приблизительно, от 50-100 нм для частиц MACS (Miltenyi Biotec) и StemSep (ТМ), а также коллоида (StemCell Technologies) до 150-450 нм для EasySep(R) (StemCell technologies) и частиц Imag (BD Biosciences), вплоть до 4,2 мкм для Dynabeads (Dynal Biotech). Тип используемой частицы зависит от используемой магнитной методики сепарации меченых клеток.
Выделяют два важнейших класса методик магнитной сепарации, каждый из которых, для удобства и в силу практических причин подразумевает использованием перманентных магнитов вместо электромагнитов. Первый класс - это высокоградиентная сепарация в магнитном поле на колонке, при которой в качестве меток для интересующих мишеней используются маленькие частицы со слабыми магнитными свойствами, а разделение указанных мишеней происходит на колонке, заполненной намагничиваемой матрицей. Когда магнитное поле воздействует на колонку, создаются очень высокие градиенты в непосредственной близости к поверхности матричных элементов. Такие высокие градиенты необходимы для того, чтобы разделить мишени, меченые указанными частицами, с относительно слабыми магнитными свойствами. Второй класс представлен методикой, осуществляемой в пробирке, которая подразумевает использование в качестве меток для интересующих мишеней частиц с более сильными магнитными свойствами. Указанные мишени, представляющие интерес, затем разделяют в пробирке для центрифугирования при помощи магнитных полей, которые генерируют магнитом, расположенным за пределами пробирки. Указанный метод имеет преимущество, поскольку он не требует использования намагничиваемой матрицы для создания градиентов; и, следовательно, не требует применения дорогой одноразовой колонки или колонки, которая может использоваться многократно, что сопровождается неудобными процедурами очистки и деконтаминации.
Когда клетки-мишени помещают на магнит, они мигрируют по направлению к участку или участкам с наибольшей силой магнитного поля и остаются в магнитном поле до тех пор, пока клетки, не имеющие метки, не будут удалены. Затем нужные клетки собирают и после удаления из магнитного поля используют. В том случае, когда требуется негативная селекция сохраняют клетки, не имеющие метки, которые затем используют для различных целей. FACS позволяет разделить субпопуляции клеток на основании их способности рассеивать свет при прохождении через лазерный луч. Прямое светорассеивание (FALS) обусловлено размером клеток, а светорассеивание под углом, также известное как боковое светорассеивание (SSC) обусловлено плотностью клеток, клеточным содержимым и ядерно-цитоплазматическим соотношением, то есть комплексностью клетки. Поскольку клетки могут помечаться антителами, конъюгированными с флуоресцентным красителем, они также могут характеризоваться интенсивностью флуоресценции антитела. Согласно некоторым вариантам осуществления изобретения, Tr1 клетки, заявленные в соответствии с настоящим изобретением, выделяют при помощи иммунно-магнитной хроматографии. Например, анти CD4-антитело прикрепляют к магнитным бусинам. Указанные меченные антителом магнитные бусины используют как основу для аффинной очистки. Меченную антителом фракцию Т-клеток помещают на магнитную аффинную колонку. Клетки, которые не прикрепились, удаляют, а прикрепившиеся клетки элюируют с магнитной колонки путем удаления магнитного поля. Согласно другому варианту осуществления изобретения, клетки сначала метят при помощи антитела (например, анти-СВ4), а затем при помощи вторичного антитела, прикрепленного к магнитной бусине или сфере.
Согласно другому варианту осуществления изобретения, второе антитело, иммунореактивное по отношению к Tr1 клеткам, может использоваться для обогащения популяции Tr1 клетками. Методика использования вторых антител хорошо известна специалистам в данной области. Обычно, вторые антитела представляют собой антитела, иммунореагирующие с константными участками первого антитела. Предпочтительными вторыми антителами являются антитела (иммуноглобулины) кролика, мыши, крысы, козы и лошади, они являются коммерчески доступными. Коммерчески доступные наборы содержат вторые антитела, конъюгированные с метками, такими, как (без ограничений указанными) магнитные частицы или флуорохромы.
Согласно одному варианту осуществления изобретения, способ обогащения популяции Tr1 клетками, отдыхающими Tr1 клетками или активированными Tr1 клетками может включать:
- взаимодействие клеточной популяции, по крайней мере, с одним реагентом, который связывается с маркером не CD4+ клеток, что приводит к истощению не CD4+ клеток;
- идентификацию Tr1 клеток, отдыхающих Tr1 клеток или активированных Tr1 клеток как описано выше, их отбор и выделение. Примерами маркеров, которые связываются с не CD4+ клетками являются, без ограничений указанными, CD8, CD14, CD16, CD19, CD36, CD56, CD123 и гликофорин А.
Предпочтительными реагентами, которые связываются с указанными маркерами являются антитела. Согласно дополнительному варианту осуществления изобретения, антитела конъюгированы с флуорохромом или магнитной частицей. Согласно еще одному варианту осуществления изобретения, клеточную селекцию осуществляют при помощи проточной цитометрии, флуоресцентной сортировки клеток, магнитной селекции, аффинной хроматографии или пэннинга, а также при помощи комбинации указанных способов.
Согласно одному варианту осуществления изобретения популяция Tr1 клеток, выделенная при помощи способа, заявленного в соответствии с настоящим изобретением, может быть дополнительно размножена при помощи in vitro способа, описанного в заявке W02006/10882. Указанный способ включает:
а) культивирование при температуре Т1 ниже 35°С в культуральной среде Mf, содержащей питающие клетки, таких, как питающие клетки насекомых;
указанная температура Т1 обеспечивает пролиферацию питающих клеток, при этом указанные питающие клетки экспрессируют факторы, которые взаимодействуют со следующими белками на поверхности клеток:
- комплекс CD3/TCR;
- CD28 белок;
- IL-2 рецептор;
- CD2 белок;
- IL-4 рецептор
б) обеспечение контактирования питающих клеток, полученных на этапе а), очищенных или неочищенных от их культуральной среды Mf, с популяцией Tr1 клеток, содержащейся в культуральной среде Мр, при этом указанная культуральная среда Мр первоначально не содержит факторы, перечисленные при описании этапа а), для того, чтобы получить смесь, содержащую Tr1-клеточную популяцию, питающие клетки и культуральную среду Мр;
в) культивирование смеси, полученной на этапе б) при температуре Т2, которая составляет, по крайней мере, 35°С, причем указанный температурный режим выбран для того, чтобы происходила пролиферация Tr1 клеток, но не происходила пролиферация питающих клеток;
г) получение популяции Tr1 клеток, размноженной описанным выше образом.
Примерами факторов, которые взаимодействуют с указанными выше белками на поверхности клеток, являются:
- анти CD3 моноклональное антитело или модифицированное анти CD3 антитело, причем анти CD3 внутрицитоплазматический домен тяжелой цепи замещен трансмембранным доменом;
- анти CD28 антитело или его фрагмент, или белок CD80 или CD86;
- IL-2, секретируемый питающими клетками;
- CD58 белок;
- интерлейкин, выбранный из группы, включающей IL-4 и IL-13.
Согласно одному варианту осуществления изобретения, Tr1 клетки, полученные указанным выше способом, могут быть клонированы при помощи стандартных способов клонирования Т-клеток.
Согласно еще одному варианту осуществления изобретения, Tr1 клетки, полученные указанным выше способом, или клоны Tr1 клеток могут замораживаться и храниться.
Другим объектом настоящего изобретения является способ истощения клеточной популяции по Tr1 клеткам, включающий идентификацию клеток, экспрессирующих CD4, а также экспрессирующих на низком уровне CD127 и CD62L, и элиминацию указанных клеток, что позволяет получить/выделить клеточную популяцию, истощенную по Tr1 клеткам.
Другим объектом настоящего изобретения является способ истощения клеточной популяции по отдыхающим Tr1 клеткам, включающий идентификацию клеток, экспрессирующих CD4, а также экспрессирующих на низком уровне, по крайней мере, один из маркеров CD127 или CD62L, предпочтительно, экспрессирующих на низком уровне CD127 и CD62L, и не экспрессирующих CD25, и элиминацию указанных клеток, что позволяет получить/выделить клеточную популяцию, истощенную по отдыхающим Tr1 клеткам.
Другим объектом настоящего изобретения является способ истощения клеточной популяции по активированным Tr1 клеткам, включающий идентификацию клеток, экспрессирующих CD4, CD25, а такжр экспрессирующих на низком уровне CD127 и CD62L, и элимиацию указанных клеток, что позволяет получить/выделить клеточную популяцию, истощенную по активированным Tr1 клеткам.
Истощенная Tr1-клеточная композиция/популяция представляет собой такую композицию/популяцию Tr11 клеток, в которой процент Tr1 клеток ниже, чем процент Tr1 клеток в исходной популяции.
Другим объектом настоящего изобретения является популяция, истощенная по Tr1 клеткам, полученная при помощи способа, описанного выше.
Другим объектом настоящего изобретения является популяция, истощенная по отдыхающим Tr1 клеток, полученная при помощи способа, описанного выше.
Еще одним объектом настоящего изобретения является популяция, истощенная по активированным Tr1 клеткам, полученная при помощи способа, описанного выше.
Как уже объяснялось выше, к способам выделения клеток относятся, без ограничений указанными, магнитная сепарация с использованием магнитных бус с прикрепленным антителом, аффинная хроматография или "пэннинг" с использованием антитела, присоединенного к твердой матрице (например, планшету) и флуоресцентная сортировка клеток (FACS). Вместо отбора, Tr1 клетки элиминируют.
Согласно некоторым вариантам осуществления изобретения, процент Tr1 клеток в истощенной композиции/популяции по крайней мере в 0,75, 0,7, 0,6, 0,5, 0,4, 0,3, 0,25, 0,2, 0,15, 0,1 выше процента Tr1 в исходной популяции/композиции.
Другим объектом настоящего изобретения является фармацевтическая композиция, содержащая или включающая в себя популяцию, истощенную по отдыхающим и/или активированным Tr1 клеткам, и фармацевтически приемлемый носитель.
Другим объектом настоящего изобретения является набор для идентификации и выделения Tr1 клеточной популяции, популяции отдыхающих Tr1 клеток или популяции активированных Tr1 клеток, или набор для обогащения клеточной популяции Tr1 клетками, отдыхающими Tr1 клетками или активированными Tr1 клетками, или набор для истощения клеточной популяции по Tr1 клеткам, отдыхающим Tr1 клеткам или активированным Tr1 клеткам, причем указанный набор содержит реагенты для определения экспрессии CD4, CD25, CD127 и CD62L на поверхности клеток.
Предпочтительно, указанные реагенты представляют собой антитела. Согласно другим вариантам осуществления изобретения, указанные антитела конъюгированы с флуорохромом или магнитными частицами.
Согласно другому варианту осуществления изобретения, указанный набор дополнительно содержит реагент для определения экспрессии Foxp3. Предпочтительно, указанный реагент представляет собой антитело. Более предпочтительно, указанное антитело конъюгировано с флуорохромом.
Еще одним объектом настоящего изобретения является способ ингибирования иммунного ответа у субъекта, нуждающегося в этом, включающий введение эффективного количества выделенных или обогащенных Tr1 клеток, отдыхающих или активированных Tr1 клеток, заявленных в соответствии с настоящим изобретением, указанному субъекту.
Другим объектом настоящего изобретения является способ ингибирования иммунного ответа у субъекта, нуждающегося в этом, включающий выделение отдыхающих Tr1 клеток из биологического образца, согласно способу, описанному выше, размножение популяции Tr1 клеток, и введение размноженной популяции Tr1 клеток субъекту. Соответственно, размноженная популяция Tr1 клеток, введенная субъекту, ингибирует нежелательный иммунный ответ за счет своей супрессивной активности, что позволяет обеспечивает лечение состояний, ассоциированных с нежелательным иммунным ответом.
Одно из преимуществ выделенных отдыхающих Tr1 клеток в свете клеточной терапии заключается в том, что вводимая клеточная популяция является чистой. Другим преимуществом использования отдыхающих Tr1 клеток является их эффективность. В действительности специалистам в данной области известно, что активация ранее активированной популяции Т-клеток индуцирует гибель клеток in vitro, что приводит к меньшей эффективности in vivo. Еще одним преимуществом использования чистой Tr1 клеточной популяции является эффективность относительно цены и времени. Действительно, размножение популяции in vitro до количества, достаточного для адекватной клеточной терапии, занимает всего около 2 недель.
Согласно одному варианту осуществления изобретения, отдыхающие Tr1 клетки могут быть выделены из крови, например, из периферической крови или пуповинной крови, или из тканевого биопсийного материала, например, ткани лимфатических узлов, ткани кишечника или синовиальной ткани, слизистых оболочек, а также их смывов после бронхоальвеолярного лаважа и из спиномозговой жидкости.
Согласно другому варианту осуществления изобретения, отдыхающие Tr1 клетки являются аутологичными или аллогенными. Термин "аллогенные клетки", используемый здесь, относится к клеткам, выделенным из организма одного субъекта (донора) и вводимым в организм другого субъекта (реципиента или хозяина). Термин "аутологичные клетки", используемый здесь, обозначает клетки, которые выделены из организма донора и вводятся ему же. Способы размножения популяции отдыхающих Tr1 клеток хорошо известны специалистам в данной области.
Согласно одному варианту осуществления изобретения, популяцию отдыхающих Tr1 клеток размножают in vitro при помощи способа, описанного в заявке WO 2006/10882. Указанный способ включает:
а) культивирование при температуре Т1 ниже 35°С в культуральной среде Mf питающих клеток, таких, как питающие клетки насекомых; указанная температура Т1 обеспечивает пролиферацию питающих клеток, при этом указанные питающие клетки экспрессируют факторы, которые взаимодействуют со следующими белками на поверхности клеток:
- комплекс CD3/TCR;
- CD28 белок;
- IL-2 рецептор;
- CD2 белок;,
- IL-4 рецептор;
б) обеспечение контактирования питающих клеток, полученных на этапе а), очищенных или неочищенных от культуральной среды Mf, с популяцией Tr1 клеток, содержащейся в культуральной среде Мр, при этом указанная культуральная среда Мр первоначально не содержит факторы, перечисленные при описании этапа а), для того, чтобы получить смесь, содержащую Tr1-клеточную популяцию, питающие клетки и культуральную среду Мр;
в) культивирование смеси, полученной на этапе б) при температуре Т2, которая составляет, по крайней мере, 35°С, указанный температурный режим выбран для того, чтобы происходила пролиферация Tr1 клеток, но не происходила пролиферация питающих клеток;
г) получение популяции Tr1 клеток, размноженной описанным выше образом.
Примерами факторов, которые взаимодействуют с указанными выше белками на поверхности клеток, являются:
- анти CD3 моноклональное антитело или модифицированное анти CD3 антитело, при этом анти CD3 внутрицитоплазматический домен тяжелой цепи замещен трансмембранным доменом;
- белок CD80 или CD86;
- IL-2, секретируемый питающими клетками;
- CD58 белок;
- интерлейкин, выбранный из группы, включающей IL-4 и IL-13.
Для активации популяции Т-клеток посредством TCR/CD3 комплекса может использоваться анти СО3-моноклональное антитело, предпочтительно, модифицированное анти CD3 антитело, при этом модификация анти-CD3 антитела заключается в замещении внутрицитоплазматического домена трансмембранным доменом, таким образом, что указанное модифицированное анти-CD3 антитело прикрепляется к клеточной мембране питающих клеток и взаимодействует с белковым комплексом CD3/TCR Т-клеток. Фактор, взаимодействующий с CD28 белком, присутствующим на поверхности антиген-специфичных Tr1 клеток и экспрессируемым питающими клетками, может быть представлен анти CD8 моноклональным антителом или его фрагментом, способным перекрестие связываться с молекулой CD28; в таком случае модификация анти CD8 моноклонального антитела заключается в добавлении трансмембранного домена для того, чтобы он прикреплялся к клеточной поверхности питающих клеток. Предпочтительно, вместо анти CD8 моноклонального антитела может использоваться природный лиганд для CD8, а именно, например, член семейства В7 белков, такой как В7-1 (CD80) и В7-2 (CD86) белок.
Фактор, экспрессируемый питающими клетками, который взаимодействует с CD2, может быть представлен анти CD2 моноклональным антителом или его фрагментом, способным перекрестно связывать молекулу CD2; модификация анти-CD2 моноклонального антитела может быть осуществлена за счет добавления трансмембранного домена для прикрепления к поверхности питающих клеток. Предпочтительно, вместо анти CD2 моноклонального антитела может использоваться природный лиганд, а именно белок CD58. Дополнительно к факторам, которые прикрепляются к мембранам питающих клеток, для размножения антиген-специфической Tr1 клеточной популяции необходимы секретируемые факторы, такие, как интерлейкины. Такими интерлейкинами являются IL-2, который взаимодействует с IL-2 рецептором, присутствующим на поверхности антиген-специфических Tr1 клеток, а также IL-4 или IL-13, которые взаимодействуют с рецептором IL-4 антиген-специфических Tr1 клеток.
Согласно другому варианту осуществления изобретения, популяцию отдыхающих Tr1 клеток размножают путем культивирования Tr1 клеток с шариками анти-СВ3/28 в присутствии цитокинов, таких, как IL-2, IL-4, IL-13 и/или IL-15. Примером указанного набора для размножения популяции отдыхающих Tr1 клеток является набор Dynabeads ®, выпускаемый компанией Invitrogen (Cat No111-4D).
Согласно другому варианту осуществления изобретения, популяцию отдыхающих Tr1 клеток размножают путем культивирования Tr1 клеток с аутологичным PBL, лейкоцитами, РВМС, антиген-презентирующими клетками или искусственно созданными антиген-презентирующими клетками, экспрессирующими МНС класса II, такими, как L клетки, в присутствии антигена.
Согласно другому варианту осуществления изобретения, отдыхающие Tr1 клетки размножают путем культивирования Tr1 клеток с митогеном, таким, как РНА в присутствии цитокина, такого, как IL-2. '
Согласно еще одному варианту осуществления изобретения, популяция Tr1 клеток, размноженная указанным образом, может клонироваться при помощи стандартных способов клонирования клеток.
Согласно одному варианту осуществления настоящего изобретения, популяция Tr1 клеток, размноженная указанным образом, или клоны Tr1 клеток могут быть заморожены для хранения.
Согласно одному варианту осуществления изобретения, размноженные Tr1 клетки являются специфичными к антигену или к множеству антигенов.
Примерами антигенов, к которым такие размноженные Tr1 клетки могут быть специфичными, являются, без ограничений указанными, аутоантигены, пищевые антигены из стандартного пищевого рациона человека, воспалительные антигены, такие, как антигены, ассоциированные с рассеянным склерозом или заболеваниями суставов, и аллергены.
Термин "пищевые антигены из стандартного пищевого рациона человека" относится к иммуногенным пептидам, которые попадают в организм из пищевых продуктов, традиционных для человека, таким, как пищевые антигены из следующего перечня (без ограничений указанными): бычьи антигены, такие, как липокалин, Са-связывающий S100, альфа-лактальбумин, лактоглобулины, такие, как бета-лактоглобулин, бычий сывороточный альбумин, казенны. К пищевым антигенам также могут относиться антигены атлантической семги, такие, как парвальбумин; куриные антигены, такие, как овомукоид, овальбумин, Ag22, кональбумин, лизоцим или куриный сывороточный альбумин; арахис, антигены креветок, такие, как тропомиозин; антигены пшеницы, такие, как агглютинин или глиадин; антигены сельдерея, такие, как профилин сельдерея; антигены моркови, такие, как профилин моркови; антигены яблок, такие, как тауматин, яблочный белок-переносчик липидов, профилин яблока; антигены груши, такие, как профилин груши, изофлавонредуктаза; антигены авокадо, такие, как эндохитиназа; антигены абрикоса, такие, как абрикосовый белок-переносчик липидов; антигены персика, такие, как персиковый белок-переносчик липидов или персиковый профилин; антигены сои, такие, как HPS, соевый профилин или (SAM22) PR-IO prot.
Термин "аутоантиген" относится к иммуногенному пептиду, полученному из белка, выделенного из организма того же индивидуума. Аутоантигеном может быть, например, аутоантиген из представленного ниже списка (без ограничений указанными): рецептор ацетилхолина, актин, транслокатор нуклеотида аденина, адренорецептор, декарбоксилаза ароматических L-аминокислот, рецептор азиоалогликопротеина, бактерицидный белок, увеличивающий проницаемость клеточной мембраны (BPi), кальцийчувствительный рецептор, фермент, расщепляющий боковые цепи холестерола, коллаген IV типа, цитохром Р450 2D6, десмин, десмоглеин-1, десмоглеин-3, F-актин, GM-ганглиозиды, глутаматдекарбоксилаза, рецептор глутамата, Н/К АТФаза, 17-гидроксилаза, 21 -гидроксилаза, IA-2 (ICAS12), инсулин, рецептор инсулина, фактор Касла I типа, функциональный антиген лейкоцитов I, миелин-ассоциированный гликопротеин, основный миелиновый белок, миелиновый олигодендроцитарный белок, миозин, Р80-коилин, пируватдегидрогеназный комплекс Е2 (PDC-E2), симпортер натрия и йода, SOX-10, общий мышечный белок щитовидной железы и глаза, тиреоглобулин, тиреоид пероксидаза, рецептор тиреотропина, тканевая трансглутаминаза, коактиватор транскрипции р75, триптофан гидроксилаза, тирозиназа, тирозингидроксилаза, АСТН, аминоацил-тРНК-гистидил синтетаза, кардиолипин, карбоновая ангидраза II, цебтромер-ассоциированные белки, ДНК-зависимая стимулируемая нуклеосомами АТФаза, фибрилларин, фибронектин, глюкозо-6-фосфат изомераза, бета 2-гликопротеин I, гоглин [95, 95, 160, 180], белки теплового шока, гемидесмосомальный белок 180, гистоны Н2А, Н2В, кератин, рецептор IgE, Ku-ДНК протеинкиназа, Ки-нуклеопротеин, La фосфопротеин, миелопероксидаза, протеиназа 3, РНК полимераза I-III, белок распознавания сигналов, топоизомераза I, тубулин, вименсцин, миелин-ассоциированный олигодендроцитарный основный белок (МОВР, от англ. Myelin Associated Oligodendrocyte Basic Protein), протеолипидный белок, олигодендроцитарный специфический белок (OSP/Claudin 11), циклическая нуклеотид 3’ фосфодиэстераза (CNPase), ВР антиген 1 (BPAGl-e), трансальдолаза (TAL), человеческие митохондриальные аутоантигены PDC-E2 (Novo 1 и 2), OGDC-E2 (Novo 3) и BCOADC-E2 (Novo 4), буллезный пемфигоид (ВР) 180, ламинин 5 (EN5), DEAD-box белок 48 (DDX48) или ассоциированный с инсулиномой антиген-2.
Термин "антиген, ассоциированный с рассеянным склерозом" относится к миелиновому основному белку (МВР), миелин-ассоциированному гликопротеину (MAG), миелиновому олигодендроцитарному белку (MOG), протеолипидному белку (PLP), олигодендроцитарному миелиновому олигопротеину (OMGP), миелин-ассоциированному олигодендроцитарному основному белку (МОВР), олигодендроцитарному специфическому белку (OSP/Claudin 1), белкам теплового шока, олигодендроцитарным специфическим белкам (OSP), NOGO А,, гликопротеину Ро, периферическому миелиновому белку 22 (РМР22), 2’3’-циклической нуклеотид-3’-фосфодиэстеразе (CNPase), фрагментам, вариантам и комбинациям указанных соединений.
Термин "антиген, ассоциированный с заболеваниями суставов" относится к цитруллин-замещенным циклическим и линейным пептидам филаггрина, пептидам коллагена II типа, пептидам хрящевого гликопротеина 39 (HCgp39) человека, HSP, пептидам гетерогенных ядерных нуклеопротеинов (hnRNP), A2 пептидам, hnRNP B1, hnRNP D, Ro60/52, HSP60, 65, 70 и 90, BiP, кератину, виментину, фибриногену, пептидам коллагена 1,111 IV и V типов, аннексину V, глюкозо-6-фосфатизомеразе (GPI), ацетил-калпастатину, пируватдегидрогеназе (PDH), альдолазе, топоизомеразе 1, snRNP, PARP, Scl-70, Scl-100, фосфолипидным антигенам, включая анионный кардиолипин и фосфатидилсерин, нейтрально заряженный фосфатидилэтаноламин и фосфатидилхолин, матричным металлопротеиназам, фибриллину и аггрекану.
Термин "аллерген" относится к вдыхаемым аллергенам, аллергенам, поступающим через пищеварительный тракт и к контактным аллергенам. Примерами аллергенов являются, без ограничений указанными, вдыхаемые аллергены пыльцы растений (Cup, Jun), клещи домашней пыли (Der, Gly, Туг, Lep), собак, кошек и крыс (Can, Fel, Mus, Rat). Примерами контактных аллергенов являются, без ограничений указанными, тяжелые металлы (такие, как никель, хром, золото), латекс, гаптены, такие, как галотан, гидралазин.
Согласно одному варианту осуществления изобретения, на основе размноженной популяции Tr1 клеток может быть создана лекарственная форма для парентерального, внутримышечного, внутритканевого, внутривенного или интраперитонеального введения, интраназального ингаляционного введения, легочного ингаляционного введения, внутрикожного или внутрисуставного введения.
Предпочтительно, размноженная популяция Tr1 клеток в составе лекарственной формы, вводится внутримышечно, интраперитонеально или внутривенно, либо непосредственно в лимфатические узлы пациента; внутривенное введение является наиболее предпочтительным.
Другим объектом настоящего изобретения является фармацевтическая композиция, содержащая или включающая размноженную популяцию Tr1 клеток, которая представляет собой смесь отдыхающих Tr1 клеток и активированных Tr1 клеток, и фармацевтически приемлемый носитель.
Другим объектом настоящего изобретения является фармацевтическая композиция, включающая смесь отдыхающих Tr1 клеток и активированных Tr1 клеток, при этом указанная смесь получена путем размножения клеточной популяции in vitro с последующим выделением Tr1 клеточной популяции при помощи способа, описанного выше.
Соответственно, фармацевтическая композиция включает отдыхающие Tr1 клетки, имеющие следующий фенотип CD4+CD25-CD127lo/- CD62Llo/-, и активированные Tr1 клетки, имеющие следующий фенотип CD4+, CD25+, CD 127lo/-, CD62Llo/-.
Фенотип Tr1 клеток, предназначенных для введения нуждающемуся субъекту, может быть уточнен при помощи проточной цитометрии.
На момент завершения этапа размножения популяции, Tr1 клетки остаются в двух состояниях: в состоянии покоя (отдыха) или в активированном состоянии. Без намерения ограничивать себя какой-либо теорией, авторы изобретения предположили, что композиция, содержащая смесь отдыхающих Tr1 клеток и активированных Tr1 клеток, представляет особый интерес, поскольку активированные Tr1 клетки будут обладать способностью подавлять воспаление сразу после введения композиции, в то время как отдыхающие Tr1 клетки нуждаются в активации in situ для последующей пролиферации in vivo и реализуют свою супрессивную активность в отдаленное время.
Согласно одному варианту осуществления изобретения, указанный выше субъект перенес трансплантацию органов, такую, как трансплантация костного мозга или органная трансплантация, либо проходит эту процедуру в настоящее время.
Другим объектом изобретения является способ профилактики или лечения воспалительных состояний у субъекта, нуждающегося в этом, заключающийся во введении субъекту эффективного количество выделенных и обогащенных Tr1 клеток, отдыхающих Tr1 клеток или активированных Tr1 клеток, в соответствии с настоящим изобретением.
Другим объектом настоящего изобретения является способ профилактики или лечения аутоиммунного заболевания у субъекта, нуждающегося в подобном лечении, заключающийся во введении субъекту эффективного количества выделенных и обогащенных Tr1 клеток, отдыхающих Tr1 клеток или активированных Tr1 клеток, в соответствии с настоящим изобретением.
Согласно одному варианту осуществления изобретения, популяция клеток может быть получена из организма субъекта, которому затем будет вводиться композиция, обогащенная по Tr1 клеткам.
Согласно еще одному варианту осуществления изобретения для субъекта является желательным подавление иммунного ответа.
Согласно другому варианту осуществления изобретения, субъектом является человек, страдающий от воспалительного состояния и/или заболевания/нарушения, включая, без ограничений указанными, неаутоимунные воспалительные заболевания пищеварительного тракта, послеоперационную спаечную болезнь, заболевание коронарных артерий, фиброз печени, острый респираторный дистресс синдром, острый воспалительный панкреатит, панкреатит, индуцированный эндоскопической ретроградной холангиопанкреатографией, ожоги, атеросклероз коронарных, церебральных и периферических артерий, аппендицит, холецистит, дивертикулит, висцеральные фиброзные болезни, заживление ран, рубцовые изменения кожи (келоиды, гнойный гидраденит), гранулематозные заболевания (саркоидоз, первичный билиарный цирроз), астму, гангренозную пиодермию, синдром Свита, болезнь Бехчета, первичный склерозирующий холангит и абсцессы.
Согласно другому варианту осуществления изобретения, субъектом является человек, страдающий от аутоиммунного состояния и/или заболевания/нарушения, включая, без ограничений укаказанными, системную красную волчанку, вульгарную пузырчатку, тиреоидит, тромбоцитопеническую пурпуру, болезнь Грейвса, сахарный диабет, ювенильный диабет, спонтанный аутоиммунный диабет, миастению гравис, болезнь Аддисона, артритические состояния, такие, как ревматоидный артрит, анкилозирующий спондилит, ювенильный идиопатический артрит, псориатический артрит, рассеянный склероз, псориаз, увеит, аутоиммунную гемолитическую анемию, склеродермию, воспалительные заболевания кишечника, такие, как аутоиммунные воспалительные заболевания пищеварительного тракта, болезнь Крона, колит, воспаление кишечника, обусловленное пищевой аллергией, синдром Шегрена, болезнь Хашимото, миастению гравис, аутоиммунные полиэндокринопатические синдромы, сахарный диабет I типа (TIDM), аутоиммунный гастрит, аутоиммунный увеоретинит, полимиозит и тиреоидит, встречающиеся также при генерализованных аутоиммунных заболеваниях, характерных примером которых у человека является системная красная волчанка. Термин "аутоантиген" или "собственный антиген", используемый здесь, относится к антигену или эпитопу, который является нативным антигеном млекопитающего и при этом иммуногенным при определенном заболевании млекопитающего.
Клетки, используемые в соответствии с изобретением, могут применяться для предотвращения или лечения трансплантационных реакций, таких, как реакция трансплантат против хозяина (GVHD), отторжение трансплантата и при пересадках гематопоэтических стволовых клеток.
Согласно другому варианту осуществления изобретения, субъект страдает от аллергического или астматического состояния. Примерами аллергических или астматических состояний являются, без ограничений указанными, астма, атопический дерматит, аллергический ринит, конъюктивит, экзема, контактная аллергия, респираторная аллергия, пищевая аллергия и анафилаксия.
Введение Tr1 клеток пациенту осуществляют при помощи способов, хорошо известных из области техники, таких, как адоптивный перенос клеток. Вкратце, смешанную популяцию клеток выделяют из организма потенциального донора. В зависимости от назначения, клетки могут быть выделены в период ремиссии заболевания или во время активной фазы заболевания. Обычно это осуществляют путем забора цельной крови и выделения гранулоцитов при помощи лейкафереза (лейкоцитоферез). Например, было показано, что лейкаферез больших объемов (LVL) позволяет получить максимальное количество лейкоцитов из крови. Собранные лимфоциты могут быть разделены при помощи технологий сепарации клеток, основанных на выявлении Tr1-специфических клеточных маркеров, таких, как здесь описанные; после чего полученные клетки вводят пациенту, донору клеток (за исключением GCHD, когда донор и реципиент различаются), для адоптивной иммунной супрессии. Пациенту вводят, приблизительно от 103 до 1011, предпочтительно от 104 до 109, предпочтительно, 105 до 109, предпочтительно, от 106 до 109, более предпочтительно, 106 до 108 Trl клеток.
Используемый здесь термин "эффективное количество" означает количество терапевтического вещества или композиции, которое является достаточным для подавления (на некоторое время) или уменьшения тяжести и/или продолжительности течения заболевания или одного или нескольких симптомов заболевания; профилактики прогрессирования заболевания; регрессии заболевания; профилактики рецидивов заболевания; развития, возникновения или прогрессирования одного или нескольких симптомов, ассоциированных с заболеванием; детекции заболевания или усиления или улучшения профилактического или лечебного эффекта(ов) другой терапии (например, профилактического или лекарственного агента). Эффективное количество будет меняться в зависимости от возраста, пола, расы, видовых признаков, общего состояния пациента и т.д., тяжести заболевания, против которого направлено лечение, природы вводимого агента, продолжительности лечения, наличия любого сопутствующего лечения, используемого фармацевтически приемлемого носителя и подобных факторов, которые находятся в компетенции специалиста в данной области. В зависимости от ситуации, "эффективное количество" в каждом конкретном случае может определяться специалистом на основании, соответствующих описаний и литературных источников и/или путем рутинных экспериментальных исследований (например, см. Gennaro et al., Eds. Remington’s The Science and Practise of Pharmacy, 20th edition, 2000; Lippincott Williams and Wilkins, Baltimore MD; Braunwald et al., Eds. Harrison’s Principles of Internal Medicine, 15th edition, 2001; McGraw Hill, NY; Berkow et al., Eds. The Merck Manual of Diagnosis and Therapy, 1992; Merck Research Laboratories, Rahway NJ).
Термины "предотвращать", "профилактика" и "превентивный", используемые здесь, обозначают предупреждение развития или возникновения заболевания или предупреждение рецидива, возникновения или развития одного или нескольких симптомов заболевания у субъекта, которое достигается за счет введения лекарственного агента (например, профилактического или лечебного агента), или введения комбинации лекарственных агентов (например, комбинации профилактических или лечебных агентов). Под термином "лечение" подразумевается, что достигается, по крайней мере, улучшение симптомов, ассоциированных с заболеванием у пациента; при этом термин "улучшение" используется в широком смысле и относится, по крайней мере, к уменьшению величины какого-либо параметра, например, симптома, ассоциированного с заболеванием, по поводу которого проводится лечение. Таким образом, термин "лечение" также включает ситуации, при которых патологическое состояние или, по крайней мере, ассоциированные с ним симптомы, полностью подавляются, например, предотвращается их появление, останавливается их развитие или они исчезают и, таким образом, пациент больше не страдает от патологического состояния или, по крайней мере, от симптомов, характерных для этой патологии. Используемый здесь термин "субъект" относится к животному, предпочтительно, млекопитающему, наиболее предпочтительно, к человеку.
Другим объектом изобретения является способ усиления иммунного ответа трансплантированной клеточной популяцией у субъекта, нуждающегося в этом, заключающийся во введении указанному субъекту эффективного количества клеточной популяции, истощенной по Tr1 клеткам, отдыхающим Tr1 клеткам или активированным Tr1 клеткам, как описано выше.
Другим объектом настоящего изобретения является способ усиления иммунного ответа трансплантированной клеточной популяции у субъекта, нуждающегося в этом, заключающийся во введении указанному субъекту эффективного количества клеточной популяции, истощенной по отдыхающим Tr1 клеткам и/или активированным Tr1 клеткам, как описано выше.
Соответственно, отсутствие Tr1 клеток в трансплантированной клеточной популяции обеспечивает усиление желаемого иммунного ответа, поскольку Tr1 клетки не осуществляют своего супрессивного действия.
Согласно одному варианту осуществления изобретения, указанный способ предназначен для лечения субъекта, проходящего противоопухолевую терапию.
Согласно еще одному варианту осуществления изобретения, трансплантируемая клеточная популяция представляет собой популяцию антиген-специфичных эффекторных Т-клеток. Предпочтительно, указанная Т-клеточная популяция является специфичной для опухолевого антигена, такого, как антиген MART-1 (Melan А) меланомы или MAGE 1, 2, 3 меланомы, медуллярного рака щитовидной железы, мелкоклеточного рака легких, плоскоклеточного рака толстого кишечника и/или бронхов. В указанных вариантах осуществления изобретения клеточная популяция, предназначенная для трансплантации, истощена по отдыхающим и/или активированным Tr1 клеткам in vitro перед введением пациенту, проходящему лечение.
Было показано, что истощение регуляторных Т-клеток усиливает опосредованный вакцинами иммунный ответ у пациентов с раком (Dannull et al., 2005, 115(12):3623-3633). Следовательно, согласно другому варианту осуществления изобретения, предполагается, что истощение Tr1 клеток, отдыхающих Tr1 клеток и/или активированных Tr1 клеток, может использоваться для клеточной терапии при лечении раковых или инфекционных заболеваний, поскольку указанные Tr1 клетки могут неблагоприятно влиять на лечение. Например, в случае противоопухолевой терапии, временное истощение Tr1 клеток может представлять интерес перед началом протокола вакцинации/иммунотерапии; указанное временное истощение достигается за счет истощения крови пациента ex vivo при помощи специального аппарата в соответствии со способом истощения, заявленным в настоящем изобретении;
после истощения кровь немедленно возвращается обратно пациенту. Таким образом, в соответствии с данным вариантом осуществления изобретения, истощение отдыхающих и/или активированных Tr1 клеток в крови пациента осуществляется ех vivo посредством специального аппарата.
Другим объектом настоящего изобретения является способ мониторинга in vitro эффекта терапии у субъекта, заключающийся в идентификации популяции отдыхающих и/или активированных Tr1 клеток в биологическом образце до и после лечения; при этом увеличение популяции отдыхающих и/или активированных Tr1 клеток после лечения означает наличие ответа на проводимую терапию.
Хорошо известно, что количество Tr1 клеток уменьшается у субъектов, страдающих от аутоиммунных и воспалительных заболеваний, таких, как рассеянный склероз, астма, вульгарная пузырчатка и ревматоидный артрит. Таким образом, субъект, у которого после лечения наблюдается увеличение популяции отдыхающих и/или активированных Tr1 клеток, считается пациентом, отвечающим на проводимую терапию. В соответствии с настоящим изобретением, идентификация популяции отдыхающих и/или активированных Tr1 клеток осуществляется при помощи способа, описанного выше. Согласно одному варианту осуществления изобретения, биологические образцы получают от субъекта перед началом лечения и в различное время после начала лечения, например, каждую неделю или каждый месяц во время лечения.
Изобретение иллюстрируется следующими примерами, представленными для подтверждения, но не ограничения объема притязаний.
Экспериментальные примеры
Пример 1. Выделение Tr1 клеток
Tr1 клетки были выделены как описано у Brun et al. (International Immunopharmacology, 2009). Вкратце, клетки из периферической крови выделяли при помощи центрифугирования в градиенте плотности фиколла и культивировали с плотностью 2×106 клеток на мл в присутствии пищевого антигена, для того, чтобы обеспечить пролиферацию антиген-специфичных Tr1 клеток. Через 13 дней культивирования клетки клонировали при помощи метода серийных разведении в течение 3-х недель. Выращенные клоны затем размножали при помощи CD3/CD28 стимулирующих агентов и цитокинов (IL-2 и IL-4). Целостность клонов Tr1 клеток оценивали на основании профиля продукции цитокинов клетками; при этом клетки демонстрировали высокую продукцию IL-10, средний уровень продукции IFN-γ и низкую продукцию IL-4 (см. Brun et al., International Immunopharmacology, 2009). Для получения мышиных Tr1 клеток, спленоциты активировали анти-CD3 и анти-CD28 моноклональными антителами в течение 7 дней в присутствии IL-10, анти-IL-12 и анти-IL-4. Полученную клеточную популяцию клонировали на облученных сингенных спленоцитах и анти-CD3 антителах в течение 3-х недель. Оценивали профиль секреции цитокинов выращенных клонов. Клоны, которые показывали высокую продукцию IL-10, средний уровень продукции IFN-γ и низкую продукцию IL-4, были идентифицированы как Tr1 клетки.
Пример 2. Выделение CD4+ Т-лимфоцитов и Treg клеток
РВМС выделяли из лейкоцитарной пленки, полученной из цельной крови здоровых волонтеров, при помощи седиментации в градиенте плотности на фиколл-пак PLUS (GE healthcare). Клетки, собранные с поверхности градиента, дважды отмывали средой RPMI 1640, подсчитывали и сразу же использовали для MACS и окрашивания. Вкратце, CD4+ Т-клетки выделяли негативной селекцией из общей РВМС при помощи CD4 набора (Dynal) с получением популяции CD4+ клеток со степенью очистки 92-98%. Размножение популяции очищенных CD4+ Treg клеток in vitro осуществляли, как описано у Battaglia et al (The journal of Immunology, 2006). Вкратце, выделенные CD4+ T-клетки активировали при помощи анти-CD3/анти-CD28 покрытых магнитных бус (Dynabeads для увеличения популяции CD3/CD28 Т-клеток, Dynal Invitrogen). Клетки культивировали в присутствии среды X-vivo 15 с добавлением 5% смешанной АВ человеческой сыворотки (Sigma), 1% пенициллина/стрептомицина в присутствии 100 мкМ рапамицина. Осуществляли три раунда стимуляции, каждый продолжительностью 7 дней, начиная со 2-го раунда добавляли IL-2 (100 Ед/мл).
Пример 3. Проточная цитометрия
Для анализа клеток человека при помощи проточной цитометрии использовали следующие антитела: РЕ-конъюгированное анти-СШ27 антитело (клон R 34.34 компании Beckman Coulter), FITC-меченое анти-С04 антитело компании Becton Dickinson (клон #RP4-T4), РеСу5-меченное анти-CD62L антитело (клон Dreg56 компании Becton Dickinson) и аллофикоцианин-конъюгированное анти-СВ25 антитело (клон М-А251 компании Becton Dickinson). Внутрицитоплазматическое окрашивание на Foxp3 человека осуществляли при помощи РЕ-конъюгированного анти Foxp3 антитела (клон 259 D/C7 компании BD) и набора для внутрицитоплазматического окрашивания (BD) в соответствии с инструкциями производителя. Для проточной цитометрии мышиных клеток использовали РЕСу7-конъюгированные анти CD4 антитела (клон RM4-15), АРС-конъюгированные анти-CD25 антитела (клон РС61), РЕ-конъюгированные анти-FoxP3 антитела (клон MF23) и РЕ-конъюгированные анти CD62E антитела (клон Ме114). Все антимышиные антитела были получены в компании Becton Dickinson.
Пример 4. Анализ генной экспрессии
Анализ генной экспрессии осуществляли при помощи ДНК-микрочипов, как описано у Dayem et al (Comp Funct Genom, 2003). Для этой цели клеточные образцы лизировали, а РНК стабилизировали реагентом Trizol (Invitrogen). РНК очищали при помощи мининабора RNeasy фирмы Qiagen, а остаточные количества ДНК удаляли при помощи ДНК-азы лаборатории Ambion (DNA-free). Концентрацию и количество выделенной РНК определяли при помощи аппаратов NanoDrop (Thermo) и Agilent Bioanalyzer 2100. РНК подвергали гибридизации на человеческих микрочипах Affymetrix (Affymetrix-HuGene-1_0-st-vl).
Результаты экспериментов
Природные CD4+ регуляторные клетки (n Treg клетки) впервые были описаны по конститутивной экспрессии молекулы CD25. Кроме того, CD25 также является маркером активации для всех типов Т-клеток и, следовательно, с его помощью можно различить n Treg клетки и активированные обычные Т-клетки (conv T-клетки). Те же правила правомерны и для экспрессии основного регуляторного гена Foxp3, чья экспрессия является конститутивной для n Treg клеток и подвергается повышенной регуляции на активированных convT-клетках. Через несколько лет после открытия Foxp3 и CD25 как конститутивных маркеров n Treg клеток, было обнаружено, что экспрессия молекулы CD 127 является конститутивно низкой на поверхности n Treg клеток, но относительно конститутивно высокой на поверхности обычных Т-клеток, что позволяет различить две указанные популяции клеток даже в активированном состоянии:
CD3+CD4+Foxp3+CD25+CD127lo = n Treg клетки (отдыхающие и активированные),
CD3+CD4+Foxp3+CD25+CD127lo - активированные conv Т-клетки,
CD3+CD4+Foxp3-CD25-CD127hi = отдыхающие conv Т-клетки.
Помимо n Treg клеток, другая хорошо изученная регуляторная клеточная популяция задействована в иммунной толерантности. Эта популяция обозначается как Tr1 лимфоциты и также была фенотипирована по экспрессии указанных выше молекул. Ниже представлены результаты:
CD3+CD4+Foxp3+CD25+CD127lo - активированные Tr1 клетки;
CD3+CD4+Foxp3-CD25-CD127lo = отдыхающие Tr1 клетки.
Представленные результаты показывают, что отдыхающие Tr1 клетки можно отличить от n Treg клеток путем определения экспрессии CD25 и CD127, или путем определения экспрессии Foxp3, CD25 и CD127. Однако, активированные Tr1 клетки демонстрируют тот же фенотип, что и nTreg клетки (Фиг.1).
Для того, чтобы проверить, можно ли различить указанные две популяции при помощи другой поверхностной молекулы, авторы проанализировали ряд клеток, экспрессирующих на своей поверхности CD62L, из n Treg и Tr1 популяций. Большое количество, как отдыхающих, так и активированных Treg клеток экспрессируют CD62L, в то время как экспрессия CD62L на поверхности, как отдыхающих, так и активированных Tr1 клеток была низкой (Фиг.2). Важно, что средняя интенсивность флуоресценции (MFI) при окрашивании на CD62L, CD127 и CD25 подтверждает, что n Treg клетки конститутивно экспрессируют CD62L, о чем и говорилось выше. Наоборот, CD62L конститутивно отсутствует у Tr1 клеток (Фиг.3). Таким образом, фенотипирование по CD62L позволяет различить активированные Tr1 клетки и n Treg клетки, если включить его в представленную выше панель маркеров. MFI при окрашивании на CD 127 является низкой для всех четырех клеточных популяций. MFI при окрашивании на CD25 является конститутивно высокой для n Treg клеток, высокой для активированных Tr1 клеток, а у отдыхающих Tr1 клеток CD25 подвергается даун-регуляции и MFI является низкой. Это наблюдение также подтверждается результатами RT-PCR (Фиг.4):
CD3+CD4+Foxp3-CD25-CD127loCD62Llo = отдыхающие Tr1 клетки;
CD3+CD4+Foxp3+CD25+CD127loCD62Llo = активированные Tr1 клетки;
CD3+CD4+Foxp3+CD25+CD127loCD62Llo = n Treg клетки.
На Фиг.4 показано, что путем определения поверхностной экспрессии CD62L можно различить популяции активированных Tr1 клеток и nTreg клеток не только у человека, но и у мыши.
Лейкоциты периферической крови, полученные от двух здоровых людей, окрашивали специфическими антителами к CD4, CD25, CD127 и CD62L, меченными флуоресцентными метками. Процент клеток, экспрессирующих CD62L, определяли в субпопуляции клеток, характеризующейся фенотипом CD4+CD25-CD127lo.
На фиг.5А и 5В показано, что для популяции с фенотипом CD4+CD25-CD127lo, определение маркера CD62L позволяет различить популяцию CD62Llo и популяцию CD62Lhi. Таким образом, определение маркеров CD4, CD25 и CD127 не достаточно для выявления отдыхающих Tr1 клеток в клеточной популяции. В таблице 1 показано, как отличить каждую клеточную популяцию на основании маркеров.
Таблица 1 | |||||
Отдыхающие conv Т-клетки | Актив. conv Т-клетки. | Отдых, и актив. nTreg клетки | Отдыхающие Tr1 клетки | Активированные Tr1 клетки | |
CD4 | + | + | + | + | + |
CD25 | - | + | + | - | + |
CD127 | + | + | низкий | низкий | низкий |
CD62L | + | - | высокий | низкий | низкий |
Дополнительно для распознавания клеточных популяций может использоваться маркер Foxp3
Таблица 2 | |||||
Отдыхающие conv Т-клетки | Актив. conv Т-клетки. | Отдых, и актив. n Treg клетки | Отдыхающие Tr1 клетки | Активированные Tr1 клетки | |
FOXP3 | - | + | + | - | + |
Claims (15)
1. Способ идентификации популяции отдыхающих Tr1 клеток, отличающийся тем, что определяют экспрессию маркеров CD4, CD25, CD127 и CD62L на поверхности клеток, при этом клетки, экспрессирующие CD4, а также экспрессирующие на низком уровне CD127, CD62L, и не экспрессирующие CD25, представляют собой отдыхающие Tr1 клетки.
2. Способ идентификации популяции активированных Tr1 клеток, отличающийся тем, что определяют экспрессию маркеров CD4, CD25, CD127 и CD62L на поверхности клеток, при этом клетки, экспрессирующие CD4, CD25, а также экспрессирующие на низком уровне CD127 и CD62L, представляют собой активированные Tr1 клетки.
3. Способ выделения популяции активированных или отдыхающих Tr1 клеток, отличающийся тем, что идентифицируют популяции отдыхающих Tr1 клеток или популяции активированных Tr1 клеток по п. 1 или 2, и выделяют указанные популяции.
4. Выделенная популяция отдыхающих или активированных Tr1 клеток, полученная способом по п. 3.
5. Способ обогащения клеточной популяции отдыхающими и/или активированными Tr1 клетками, отличающийся тем, что идентифицируют отдыхающие и/или активированные Tr1 клетки по п. 1 или 2, и осуществляют селекцию указанных клеток, что позволяет получить клеточную популяцию, обогащенную отдыхающими и/или активированными Tr1 клетками, при этом процент отдыхающих и/или активированных Tr1 клеток, по крайней мере, в два раза превышает процент отдыхающих и/или активированных Tr1 клеток в исходной популяции до обогащения.
6. Клеточная популяция, обогащенная отдыхающими или активированными Tr1 клетками, полученная способом по п. 5.
7. Способ истощения клеточной популяции по отдыхающим Tr1 клеткам и/или активированным Tr1 клеткам, отличающийся тем, что идентифицируют отдыхающие Tr1 клетки, как указано в п. 1, и/или активированные Tr1 клеток, как указано в п. 2, и удаляют указанные клетки, что позволяет получить клеточную популяцию, истощенную по отдыхающим и/или активированным Tr1 клеткам, при этом процент отдыхающих и/или активированных Tr1 клеток в 0,75 больше процента отдыхающих Tr1 клеток или активированных Tr1 клеток в исходной популяции до истощения.
8. Клеточная популяция, истощенная по отдыхающим или активированным Tr1 клеткам, полученная способом по п. 7.
9. Набор для идентификации или выделения популяции отдыхающих и/или активированных Tr1 клеток, включающий средства для определения экспрессии маркеров CD4, CD25, CD127 и CD62L на поверхности клеток.
10. Фармацевтическая композиция отдыхающих или активированных Tr1 клеток, отличающаяся тем, что содержит клетки, экспрессирующие маркеры CD4, CD25, CD127 и CD62L на поверхности, причем клетки с пониженной экспрессией CD127 и CD62L, экспрессирующие CD4 и не экспрессирующие CD25, представляют собой отдыхающие Tr1 клетки; клетки с пониженной экспрессией CD127 и CD62L и экспрессирующие маркеры CD4, CD25 представляют собой активированные Tr1 клетки.
11. Фармацевтическая композиция обогащенных отдыхающих и/или активированных Tr1 клеток, отличающаяся тем, что содержит клетки, экспрессирующие маркеры CD4, CD25, CD127 и CD62L на поверхности, причем клетки с пониженной экспрессией CD127 и CD62L, экспрессирующие CD4 и не экспрессирующие CD25, представляют собой отдыхающие Tr1 клетки; клетки с пониженной экспрессией CD127 и CD62L и экспрессирующие маркеры CD4, CD25 представляют собой активированные Tr1 клетки.
12. Фармацевтическая композиция истощенных отдыхающих и/или активированных Tr1 клеток, отличающаяся тем, что содержит клетки, экспрессирующие маркеры CD4, CD25, CD127 и CD62L на поверхности, причем клетки с пониженной экспрессией CD127 и CD62L, экспрессирующие CD4 и не экспрессирующие CD25, представляют собой отдыхающие Tr1 клетки; клетки с пониженной экспрессией CD127 и CD62L и экспрессирующие маркеры CD4, CD25 представляют собой активированные Tr1 клетки.
13. Фармацевтическая композиция по п. 12, отличающаяся тем, что указанные клетки являются специфичными к опухолевому антигену.
14. Фармацевтическая композиция отдыхающих Tr1 клеток и активированных Tr1 клеток, которые получены путем размножения in vitro выделенной популяции отдыхающих Tr1 клеток способом по п. 3, и размножение осуществляют путем культивирования клеточной популяции в присутствии антитела к CD3, которое активирует отдыхающие Tr1 клетки.
15. Способ мониторинга in vitro эффекта терапии у субъекта, отличающийся тем, что идентифицируют популяции отдыхающих и/или активированных Tr1 клеток в биологическом образце, полученном от субъекта до начала лечения и после лечения, способом по п. 1 или 2, при этом увеличение популяции отдыхающих и/или активированных Tr1 клеток после лечения расценивается как ответ на проводимую терапию.
Applications Claiming Priority (5)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US32445010P | 2010-04-15 | 2010-04-15 | |
EP10368021A EP2378287A1 (en) | 2010-04-15 | 2010-04-15 | New method for isolating Tr1 cells |
US61/324,450 | 2010-04-15 | ||
EP10368021.1 | 2010-04-15 | ||
PCT/IB2011/001232 WO2011128779A1 (en) | 2010-04-15 | 2011-04-15 | New methods for isolating tr1 cells |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2012148391A RU2012148391A (ru) | 2014-05-20 |
RU2627445C2 true RU2627445C2 (ru) | 2017-08-08 |
Family
ID=42479677
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2012148391A RU2627445C2 (ru) | 2010-04-15 | 2011-04-15 | Способы идентификации, выделения, истощения и обогащения популяций tr1 клеток, популяции tr1 клеток, фармацевтические композиции, способ мониторинга эффекта терапии |
Country Status (13)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20130034528A1 (ru) |
EP (2) | EP2378287A1 (ru) |
JP (2) | JP6031436B2 (ru) |
KR (1) | KR20130065657A (ru) |
CN (1) | CN102947702B (ru) |
AU (1) | AU2011241892B2 (ru) |
BR (1) | BR112012026349A2 (ru) |
CA (1) | CA2796317A1 (ru) |
CL (1) | CL2012002871A1 (ru) |
MX (1) | MX2012011987A (ru) |
NZ (1) | NZ603029A (ru) |
RU (1) | RU2627445C2 (ru) |
WO (1) | WO2011128779A1 (ru) |
Families Citing this family (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP2378287A1 (en) * | 2010-04-15 | 2011-10-19 | TXCell | New method for isolating Tr1 cells |
RU2523058C2 (ru) * | 2012-06-29 | 2014-07-20 | Общество с ограниченной ответственностью "Регенекс" | Способ терапии ремиттирующего рассеянного склероза |
TW201834669A (zh) | 2017-03-15 | 2018-10-01 | 美商歐卡生物系統公司 | 用於造血幹細胞移植的組合物及方法 |
JP7422667B2 (ja) | 2018-02-08 | 2024-01-26 | ザ ボード オブ トラスティーズ オブ ザ レランド スタンフォード ジュニア ユニバーシティー | 同種造血幹細胞移植のための方法 |
CN112020516A (zh) * | 2018-03-13 | 2020-12-01 | 塔斯克疗法有限公司 | 用于肿瘤特异性细胞清除的抗-cd25 |
US20220088072A1 (en) * | 2018-11-09 | 2022-03-24 | Regenex LLC | Treatment method for psoriasis |
EP3876962A1 (en) * | 2018-11-09 | 2021-09-15 | Regenex Llc | Treatment method for graft-versus-host disease |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CA2660605A1 (en) * | 2006-08-11 | 2008-02-14 | Life Sciences Research Partners Vzw | Immunogenic peptides and their use in allergic and autoimmune disorders |
US20080279834A1 (en) * | 2005-03-31 | 2008-11-13 | Case Western Reserve University | Methods and Reagents for Identifying/Isolating T Regulatory (Treg) Cells and for Treating Individuals |
Family Cites Families (11)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5409813A (en) | 1993-09-30 | 1995-04-25 | Systemix, Inc. | Method for mammalian cell separation from a mixture of cell populations |
EP1712615A1 (en) | 2005-04-15 | 2006-10-18 | Txcell | In vitro production of a cell population using feeder cells |
WO2007117602A2 (en) | 2006-04-07 | 2007-10-18 | Biogen Idec Ma Inc. | Isolation and use of human regulatory t cells |
CA2655392A1 (en) | 2006-05-31 | 2007-12-06 | The Regents Of The University Of California | Cd127 expression inversely correlates with foxp3 and suppressive function of cd4+ tregs |
AU2008301240B2 (en) | 2007-09-20 | 2014-07-31 | St Vincent's Hospital Sydney Limited | A method for identifying antigen-specific regulatory T cells |
US20110014697A1 (en) | 2007-10-12 | 2011-01-20 | Olaf Roetzschke | Method and Kit for Rapid Isolation of Human Foxp3+ Treg Cells |
EP2050814A1 (en) * | 2007-10-17 | 2009-04-22 | Txcell | Compositions for treating multiple sclerosis |
EP2062970A1 (en) * | 2007-11-26 | 2009-05-27 | Txcell | Compositions for treating an intestinal inflammatory condition |
EP2113560A1 (en) * | 2008-04-28 | 2009-11-04 | TXCell | Compositions for treating an arthritic condition |
PL2113254T3 (pl) * | 2008-04-28 | 2013-01-31 | Txcell | Kompozycje do leczenia autoimmunologicznego stanu zapalnego |
EP2378287A1 (en) * | 2010-04-15 | 2011-10-19 | TXCell | New method for isolating Tr1 cells |
-
2010
- 2010-04-15 EP EP10368021A patent/EP2378287A1/en not_active Withdrawn
-
2011
- 2011-04-15 RU RU2012148391A patent/RU2627445C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2011-04-15 CA CA2796317A patent/CA2796317A1/en not_active Abandoned
- 2011-04-15 JP JP2013504355A patent/JP6031436B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2011-04-15 WO PCT/IB2011/001232 patent/WO2011128779A1/en active Application Filing
- 2011-04-15 CN CN201180029496.XA patent/CN102947702B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2011-04-15 US US13/641,215 patent/US20130034528A1/en not_active Abandoned
- 2011-04-15 MX MX2012011987A patent/MX2012011987A/es active IP Right Grant
- 2011-04-15 BR BR112012026349A patent/BR112012026349A2/pt not_active IP Right Cessation
- 2011-04-15 EP EP11735533.9A patent/EP2558857B1/en not_active Not-in-force
- 2011-04-15 NZ NZ603029A patent/NZ603029A/en not_active IP Right Cessation
- 2011-04-15 AU AU2011241892A patent/AU2011241892B2/en not_active Ceased
- 2011-04-15 KR KR1020127030001A patent/KR20130065657A/ko not_active Application Discontinuation
-
2012
- 2012-10-12 CL CL2012002871A patent/CL2012002871A1/es unknown
-
2016
- 2016-06-09 JP JP2016115602A patent/JP2016192970A/ja active Pending
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20080279834A1 (en) * | 2005-03-31 | 2008-11-13 | Case Western Reserve University | Methods and Reagents for Identifying/Isolating T Regulatory (Treg) Cells and for Treating Individuals |
CA2660605A1 (en) * | 2006-08-11 | 2008-02-14 | Life Sciences Research Partners Vzw | Immunogenic peptides and their use in allergic and autoimmune disorders |
WO2008017517A1 (en) * | 2006-08-11 | 2008-02-14 | Life Sciences Research Partners Vzw | Immunogenic peptides and their use in immune disorders |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
BRUSKO T.M. et al Human regulatory T cells: role in autoimmune disease and therapeutic opportunities// Immunological Reviews 2008, Vol. 223: 371-390. * |
СВИРИДОВА В.С и др. Т-лимфоциты — ключевые иммунорегуляторные клетки// Бюллетень сибирской медицины N1, 2007. с 83-88. * |
СВИРИДОВА В.С и др. Т-лимфоциты — ключевые иммунорегуляторные клетки// Бюллетень сибирской медицины N1, 2007. с 83-88. BRUSKO T.M. et al Human regulatory T cells: role in autoimmune disease and therapeutic opportunities// Immunological Reviews 2008, Vol. 223: 371-390. * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP2378287A1 (en) | 2011-10-19 |
EP2558857A1 (en) | 2013-02-20 |
JP2016192970A (ja) | 2016-11-17 |
CA2796317A1 (en) | 2011-10-20 |
CL2012002871A1 (es) | 2013-08-02 |
EP2558857B1 (en) | 2017-09-06 |
NZ603029A (en) | 2014-10-31 |
AU2011241892B2 (en) | 2015-05-21 |
RU2012148391A (ru) | 2014-05-20 |
BR112012026349A2 (pt) | 2016-07-19 |
KR20130065657A (ko) | 2013-06-19 |
CN102947702B (zh) | 2015-12-09 |
MX2012011987A (es) | 2013-03-05 |
AU2011241892A1 (en) | 2012-11-08 |
JP2013529069A (ja) | 2013-07-18 |
CN102947702A (zh) | 2013-02-27 |
WO2011128779A1 (en) | 2011-10-20 |
JP6031436B2 (ja) | 2016-11-24 |
US20130034528A1 (en) | 2013-02-07 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
ES2686593T3 (es) | Expresión de CD127 que correlaciona inversamente con FoxP3 y la función supresora de Treg CD4+ | |
JP7254128B2 (ja) | CD8+CD45RClow Tregの新しい亜集団およびその使用 | |
RU2627445C2 (ru) | Способы идентификации, выделения, истощения и обогащения популяций tr1 клеток, популяции tr1 клеток, фармацевтические композиции, способ мониторинга эффекта терапии | |
KR102107862B1 (ko) | 조절 t 세포, 및 cd6-발현 또는 cd4, cd25 및 cd127의 조합을 사용하여 이를 확인 및 단리하는 방법 | |
US20150210982A1 (en) | Isolation and Use of Human Regulatory T Cells | |
JP2017148042A (ja) | Il−13産生tr1−様細胞及びその使用 | |
RU2766691C9 (ru) | НОВАЯ СУБПОПУЛЯЦИЯ CD8+CD45RClow КЛЕТОК TREG И ЕЕ ПРИМЕНЕНИЯ | |
WO2017098014A1 (en) | A method for obtaining hematopoetic cell population containing regulatory t cells (tregs) specific for an irrelevant antigen | |
Sirkiä | Small-molecules as regulatory T cell modulators: A pilot screen |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
FA92 | Acknowledgement of application withdrawn (lack of supplementary materials submitted) |
Effective date: 20160701 |
|
FZ9A | Application not withdrawn (correction of the notice of withdrawal) |
Effective date: 20160804 |
|
HC9A | Changing information about inventors | ||
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20180416 |