TW201834669A - 用於造血幹細胞移植的組合物及方法 - Google Patents

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Abstract

本揭示提供不同治療性細胞群體，其形成可用於造血幹細胞/祖細胞移植之醫藥組合物。舉例而言，本揭示提供治療性細胞群體，其包含造血幹細胞/祖細胞、記憶性T細胞、調節性T細胞之富集群體，且其中該細胞群體空乏初始習用αβ-T細胞。本揭示進一步提供使用該治療性細胞群體之治療方法。在其他實施例中，本揭示提供產生治療性細胞群體之方法。

Description

用於造血幹細胞移植的組合物及方法
同種異體造血幹細胞移植(HSCT)通常涉及在調理方案後將來自免疫相容健康者(供體)之造血細胞轉移至患者。健康造血幹細胞(HSC)可替代患者之受損造血組織，且特定供體源之免疫細胞可對癌症、感染及免疫疾病具有治療效應。然而，同種異體HSCT之當前方法包括包含污染性、非治療性細胞之非均質細胞混合物或缺乏完整移植物之潛在治療益處之經純化但受限之細胞混合物。在前者情況下，雖然許多污染治療相關細胞之非治療性細胞係無害的，但即使一小部分特定錯誤細胞類型即可在接受者中引起嚴重之不良後果。舉例而言，污染移植細胞群體之殘餘腫瘤細胞或畸胎瘤起始細胞可在患者中接種腫瘤。在另一實例中，循環T細胞亞群可起始移植物抗宿主病(GVHD)，即同種異體HSCT之一種嚴重且通常致命之併發症。在該等情況下，由污染細胞引起之病理學取代移植期間所引入之其他T細胞之治療益處。在許多情形下，同種異體HSCT係針對潛在病症之治癒性療法，然而當移植物之污染性細胞對其新的宿主環境發生反應時，醫學治療確實會對患者造成傷害。因此，業內對於具有降低之有害細胞數量及治療性細胞之最佳混合物之HSC移植組合物存在高度未滿足之需求。
在一些實施中，本文中揭示醫藥組合物，其包含一或多個單位劑量之細胞移植物，其中每一單位劑量之細胞移植物包含接受該細胞移植物之個體之每公斤(kg)體重之治療性細胞群體。在一些實施例中，每一單位劑量之治療性細胞群體包含多於3 × 105 個造血幹細胞/祖細胞(HSPC)、多於3 × 105 個記憶性T細胞(Tmem)、多於5 × 105 個調節性T細胞(Treg)及少於3 × 105 個初始習用αβ-T細胞。在一些實施例中，單位劑量進一步包含0.5 × 103 至2000 × 103 個不變天然殺手T (iNKT)細胞。在一些實施例中，HSPC係CD34+ ，Tmem係CD3+ CD45RA- CD45RO+ ，Treg係CD4+ CD25+ CD127-/lo 、CD45RA+ 或其組合，且初始習用αβ-T細胞係CD3+ CD45RA+ CD25- Va24Ja18- 。在一些實施例中，iNKT係CD3+ Vα24Jα18+ 。 在一些實施例中，本文中所揭示之醫藥組合物包含富含HSPC、記憶性T細胞(Tmem)及Treg之治療性細胞群體，且其中該細胞群體空乏初始習用αβ-T細胞，其中該治療性細胞群體包含小於1:5之初始習用αβ-T細胞對Treg之比率。在一些實施例中，該醫藥組合物進一步包含不變iNKT且該治療性細胞群體包含小於100:1之初始習用αβ-T細胞對iNKT之比率。在一些實施例中，該治療性細胞群體包含小於1:400之初始習用αβ-T細胞對HSPC之比率；及小於1:800之初始習用αβ-T細胞對Tmem之比率。在一些實施例中，該治療性細胞群體包含iNKT且治療性細胞群體包含小於1:400之初始習用αβ-T細胞對HSPC之比率；小於1:800之初始習用αβ-T細胞對Tmem之比率；及小於100:1之初始習用αβ-T細胞對iNKT之比率。在一些實施例中，該治療性細胞群體包含小於1:400之初始習用αβ-T細胞對HSPC之比率。在一些實施例中，該治療性細胞群體包含小於1:3之初始習用αβ-T細胞對Tmem之比率。 在一些實施中，本文中揭示治療疾病或病症之方法，其包含向有需要之個體投與治療性細胞群體，其中該治療性細胞群體包含濃度為1.0 × 106 至50 × 106 個細胞/kg個體體重之HSPC、濃度為0.1 × 106 至1000 × 106 個細胞/kg個體體重之Tmem、濃度為0.1 × 106 至1000 × 106 個細胞/kg個體體重之Treg及濃度為少於3 × 105 個細胞/kg個體體重之初始習用αβ-T。在一些實施例中，該治療性細胞群體進一步包含濃度為0.5 × 103 至2000 × 103 個細胞/kg個體體重之iNKT細胞。 在一些實施例中，本文中揭示產生醫藥組合物之方法，其包含藉由以下處理至少一個樣品以提供治療性細胞群體： A. 使該樣品與特異性結合CD34之結合分子在條件下接觸以提供富含CD34+ 細胞之群體及CD34空乏細胞之群體，回收該富含CD34+ 細胞之群體且回收該CD34空乏細胞之群體；及 B. 使該CD34空乏細胞之群體與特異性結合CD25之結合分子在條件下接觸以提供富含CD25+ 細胞之群體及CD25空乏細胞之群體，回收該富含CD25+ 細胞之群體且回收該CD25空乏細胞之群體；及 C. 使該CD25空乏細胞之群體與特異性結合CD45RA之結合分子在條件下接觸以提供富含CD45RA+ 細胞之群體及CD45RA空乏細胞之群體且回收CD45RA空乏細胞之群體；及 D. 將該富含CD34+細胞之群體、該富含CD25+ 細胞之群體及該CD45空乏細胞之群體調配為適於向個體投與之醫藥組合物。
在某些實施例中，本揭示內容提供不同治療性細胞群體，其形成可用於造血幹細胞/祖細胞移植中之醫藥組合物。舉例而言，本揭示內容之一些實施例提供治療性細胞群體，其包含造血幹細胞/祖細胞(HSPC)、記憶性T細胞(Tmem)、調節性T細胞(Treg)之富集群體，且其中該細胞群體空乏初始習用αβ-T細胞。在一些實施例中，該治療性細胞群體進一步包含不變天然殺手T (iNKT)細胞。本揭示內容進一步提供使用治療性細胞群體之治療方法。在其他實施例中，本揭示內容提供產生治療性細胞群體之方法。 治療性細胞群體經雕塑以富集具有治療益處之細胞數量並空乏對移植物接受者有害(例如誘發繼發性疾病)之細胞群體。HSPC提供重構血液及免疫系統功能之短期益處，例如恢復紅血球、血小板及嗜中性球計數。HSPC之持久植入提供藉由產生T細胞及B細胞群體來重構適應性免疫功能。作為一般群體之供體T細胞對植入既有益又有害。Tmem細胞提供益處，此乃因Tmem介導移植物抗感染效應及移植物抗白血病效應二者，其中移植物抗宿主病(GVHD)之風險降低。初始及記憶性Treg細胞提供益處，此乃因Treg有助於防止移植物排斥並預防GVHD。相比之下，初始習用T細胞係GVHD及不適當免疫重構之原因。因此，降低或消除本文中所揭示經雕塑移植物中之初始習用T細胞藉由降低移植物接受者之GVHD發病率來增強治療益處。定義 在本說明書中，除非另有指示，否則任一濃度範圍、百分比範圍、比率範圍或整數範圍應理解為包括所列舉範圍及(在適當時)其分數部分(例如整數之十分之一及百分之一)內之任一整數值。同樣，除非另有指示，否則本文中所列舉之關於任何物理特徵(例如聚合物亞單元、大小或厚度)之任一數值範圍應理解為包括所列舉範圍內之任一整數。除非另有指示，否則如本文所用，術語「約」意指所指示範圍、值或結構之± 20%。術語「基本上由......組成」將申請專利範圍之範圍限定於所指定材料或步驟，或不實質上影響所主張發明之基本及新穎特徵之彼等。應理解，如本文所用之術語「一(a及an)」係指「一或多種」所列舉之組分。替代方案(例如「或」)之使用應理解為意指該等替代方案中之一者、兩者或其任何組合。如本文所用，術語「包括」、「具有」及「包含」同義地使用，該等術語及其變體意欲解釋為具有非限制性。 如本文所用，術語「治療性細胞」係指基於細胞向個體提供治療益處之能力經選擇或投與個體之細胞。例示性治療性細胞包括造血幹細胞/祖細胞、記憶性T細胞、調節性T細胞及不變天然殺手T細胞。治療性細胞群體可包括一種以上類型之治療性細胞，例如HSPC、Tmem、Treg、iNKT或其任何組合。治療性細胞群體可基本上包含單一治療性細胞類型。在治療性細胞群體之情形下，治療性細胞百分比(%)係指包括於治療性細胞之組合或組合物中之細胞類型之百分比，其中治療性細胞之總數加起來為100%且特定治療性細胞類型代表治療性細胞總數之一部分。舉例而言，包含30% HSPC之治療性細胞群體指示總治療性細胞群體之大約30%係HSPC。治療性細胞群體可存在於對個體具有中性效應之更大細胞群體內，且中性細胞不包括在總治療性細胞之計算中。 如本文所用，術語「造血幹細胞/祖細胞」或「HSPC」係指相對於其他類型之造血細胞，表現增加含量之表型標記物CD34、CD133、CD90或其任何組合之造血幹細胞及/或造血祖細胞(例如細胞對表型標記物之表現呈陽性，如藉由流式細胞術、西方墨點(western blot)或業內已知之其他方法所測定)。同樣，相對於其他類型之造血細胞，HSPC可對表現之標記物呈陰性。舉例而言，此等標記物包括CD19、TCRα、TCRβ、CD45RA、Lin、CD38或其任何組合。較佳地，HSPC係CD34+ 細胞及/或CD19- TCRα- 。HSPC可自我更新或可分化成(i) 骨髓祖細胞，其最終產生單核球及巨噬細胞、嗜中性球、嗜鹼性球、嗜酸性球、紅血球、巨核細胞/血小板或樹突細胞；或(ii) 淋巴樣祖細胞，其最終產生T細胞、B細胞及稱為天然殺手細胞(NK細胞)之淋巴球樣細胞。關於造血及HSPC分化之一般論述，參見Rowe等人，Cell Stem Cell . 2016. 18:707-720。 如本文所用，術語「初始習用αβ-T細胞」或「初始Tcon」係指表現表型標記物TCRα/β、CD45RA且表現中等至高含量之CD127 (CD127+ )且不表現CD45RO及CD25或其表現較低之未經歷抗原之T細胞。在一些實施例中，初始Tcon之特徵在於表現初始Tcon之表型標記物，包括TCRα、TCRβ、CD3、CD4或CD8、CD62L、CCR7、CD28、CD127及CD45RA。在一些實施例中，初始Tcon係CD3+ CD25- CD45RA+ 且包含多形TCRα及多形TCRβ。在一些實施例中，初始Tcon不係如本文中所定義之初始調節性T細胞。初始Tcon細胞不表現在iNKT細胞上發現之Vα24Jα18 TCR。 如本文所用，術語「調節性T細胞」或「Treg」係指能夠抑制自體免疫反應且表現表型標記物CD4、CD25且不表現CD127或其表現較低之T細胞亞類。Treg亦表現FOXP3，然而，CD127表現已展示與CD4+ CD25+ 細胞上之FOXP3表現呈負相關，且CD4+ CD25+ CD127-/ 低 表型視為係Treg之可接受之代用標記物且係細胞內FOXP3染色之實用替代物(Cozzo C等人，J Immunol. 2003年12月1日; 171:5678-82; Liu W等人，J Exp. Med . 2006. 203(7):1701-1711；Seddiki N等人，J Exp. Med . 2006; 203(7):1693-1700)。Treg可包括至少兩個亞類，本文中稱為初始Treg及記憶性Treg。 如本文所用，術語「初始Treg」係作為原代細胞表現表型標記物CD4、CD25及CD45RA且不表現CD45RO及CD127或其表現較低之未經歷抗原之調節性T細胞。初始Treg係有利的，此乃因該等細胞較已經歷抗原之Treg具有更高之對抗原反應可塑性。另外，與已經歷抗原之Treg相比，初始Treg具有增加之壽命。 如本文所用，術語「記憶性Treg」係能夠提供對自體免疫性之抑制效應且表現表型標記物CD4、CD25及CD45RO且不表現CD127及CD45RA或其表現較低之已經歷抗原之調節性T細胞。 如本文所用，術語「記憶性T細胞」或「Tmem」係指表現表型標記物TCRα、TCRβ、CD3、CD4或CD8、CD95及IL-2Rβ之已經歷抗原之T細胞。記憶性T細胞提供免疫性，且能夠在非活性狀態下持續較長時期。記憶性T細胞能夠在用抗原再攻擊時快速獲取效應功能。記憶性T細胞之群體可包括亞類T中央記憶細胞(TCM )及T效應記憶細胞 (TEM )之任何組合。 如本文所用，「T中央記憶細胞」或「TCM 」係指與初始Tcon細胞相比，表現表型標記物CD4或CD8、CD62L、CD45RO、CCR7、IL-2Rβ、CD28、CD127及CD95且不表現CD45RA或其表現較低之已經歷抗原之T細胞。中央記憶性T細胞可在抗原再攻擊後分化成TEM 細胞。 如本文所用，「T效應記憶細胞」或「TEM 」係指表現表型標記物CD4或CD8、CD45RO、CD127、IL-2Rβ及CD95且不表現或低表現CD45RA、CD62L、CCR7及CD28之已經歷抗原之T細胞。T效應記憶細胞最終分化且在抗原再刺激後獲取效應功能。 如本文所用，「T中央記憶幹細胞」或「TSCM 」係指表現表型標記物CD4或CD8、CD45RA、CD62L、CD95、IL-2Rβ、CCR7、CXCR3、CD122及LFA-1之已經歷抗原之T細胞。TSCM 細胞具有記憶性T細胞在抗原再攻擊後快速獲取效應功能之能力，但具有增強之幹細胞樣品質，例如與TCM 細胞相比長期之持久性。TSCM 細胞可產生中央記憶性、效應記憶性及效應T細胞亞群。 如本文所用，「不變天然殺手T細胞」或「iNKT」係CD1d限制性天然殺手T (NKT)細胞之亞類，該等細胞表現包含人類中Vα24Jα18 TCRα鏈(本文中稱為「Vα24Jα18+ 」)之高度保守之αβ-T細胞受體。iNKT細胞可藉由與CD1d-多聚體結合來鑑別，該等CD1d-多聚體係例如負載α-半乳糖基神經醯胺(GalCer)、PBS-57、PBS-44或其他天然或合成醣脂者，且可作為四聚體、樹枝狀聚合物及其他結構、Fc融合物或其任何組合發現。另一鑑別方法係特異性識別Vα24Jα18區之抗體或抗體組合。實例包括Vα24抗體、Jα18抗體或單株抗體純系6B11，其特異性結合至Vα24Jα18 TCR之獨特區且可用於鑑別iNKT細胞(Montoya等人，Immunology . 2007. 122(1):1-14)。在一些實施例中，iNKT細胞為CD1d-四聚體醣脂負載+ (CD1d-tet+ )、6B11+ 或兩者。iNKT細胞在本文中可互換地稱為CD1d-tet+ 、6B11+ 或Vα24Jα18+ 細胞。不希望受限於特定機制，認為iNKT細胞促進/加速Treg及HSPC之活性。 如本文中所提及，「譜系陽性」或「Lin+ 」細胞表現表型標記物，例如CD19、CD11c、CD66B、CD14、CD20或其任何組合。如本文中所提及，與HSPC、Treg、Tmem或iNKT細胞相比，「譜系陰性」或「Lin- 」細胞不表現表型標記物CD19、CD11c、CD66B、CD14、CD20或其任何組合或其表現較低。Lin+ 細胞表現存在於成熟類紅血球、顆粒球、巨噬細胞、NK細胞及B及T淋巴球上之表型標記物。 如本文所用，「樣品」係指細胞群體可自其分離、富集或空乏之細胞來源(例如生物組織)。在一些實施例中，樣品通常先前未經處理或已經最低限度地處理。舉例而言，樣品可係動員外周血、動員血球分離產物、骨髓、臍帶血、非動員血、非動員血球分離產物或其任何組合。在一些實施例中，樣品係藉由用密度梯度、Ficoll、Percoll、紅血球低滲溶解、氯化銨-鉀(ACK)緩衝液、洗滌至pH平衡等滲緩衝液中或其任何組合處理來製備或最低限度地處理。在一些實施例中，樣品係由單一組織收穫物來提供。在一些實施例中，樣品係由一或多種組織收穫物來提供。 如本文所用，「供體」係指樣品自其獲得之一或多個個體。舉例而言，供體可係指人類白血球抗原(HLA)匹配之同胞、HLA匹配之非親緣供體、部分匹配之非親緣供體、單倍體相合親緣供體、自體供體、HLA不匹配之同種異體供體、供體庫或其任何組合。在一些實施例中，供體可係個體。「供體組織」係指自供體收穫之組織。供體組織可係樣品。供體組織通常係與個體相同之物種。 如本文所用，「個體」或「接受者」係指一或多個需要接受本文中所揭示之治療、療法或細胞移植物之個體。可由本發明治療之個體通常係人類。然而，其他個體包括非人類靈長類動物、牛、馬、綿羊、山羊、豬、狗、貓、小鼠、兔、大鼠或天竺鼠。個體可係雄性或雌性且可為任何適宜年齡，包括嬰兒、少年、青少年、成年及老年個體。在治療期間及之後，個體成為接受者或移植物接受者。 如本文所用，「組織收穫」係指收集供體組織或來自供體之樣品之過程。組織收穫之非限制性實例包括收集來自供體之骨髓、外周血、臍帶血等。組織收穫可藉由業內已知之任何方法來實施。 如本文所用，關於混合物中細胞或細胞類型之群體的「富集」係指已經處理以使混合物中所富集細胞類型相對於其他細胞(例如，計及細胞類型)之相對量或比率增加之細胞群體。因此，取決於經受富集過程之原始細胞群體之來源，相對於混合物中之其他細胞，混合物或組合物可含有30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%或更多(在數量或計數方面)之「富集」細胞群體。在一些實施例中，相對於混合物中之其他細胞，富集過程可產生1.5倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、15倍、20倍、25倍、30倍、35倍、40倍、50倍、100倍、200倍、300倍、400倍、500倍、600倍、700倍、800倍、900倍、1,000倍、5,000倍、10,000倍或更多之「富集」細胞群體。舉例而言，在一些實施例中，富含iNKT細胞之細胞混合物可包含約0.03%至1% iNKT細胞、0.05%至0.5% iNKT細胞、0.1%至1% iNKT細胞或其任何組合。富集細胞群體之例示性方法包括磁力活化細胞分選(MACS)及螢光活化細胞分選(FACS)。 如本文所用，關於混合物中細胞或細胞類型之群體的「空乏」係指已經處理以減少混合物中所空乏細胞類型相對於其他細胞(例如，計及細胞類型)之相對量或比率之細胞群體。在一些實施例中，經受空乏過程之細胞可產生含有50%、45%、40%、35%、30%、25%、20%、15%、10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%或0.1%、0.01%、0.001%、0.0001%、0.00001%、0.000001%、0.0000001%、0.00000001%或更少(在數量或計數方面)之所「空乏」細胞群體之混合物或組合物。在一些實施例中，相對於未經處理之樣品，經受空乏過程之細胞可產生含有10倍、100倍、1,000倍、10,000倍、100,000倍、1,000,000倍、10,000,000倍或更少之空乏群體之混合物或組合物。在一些實施例中，在空乏細胞類型之處理步驟後，使用習用方法不再檢測到所空乏之細胞類型。 在某些實施例中，混合物中某一細胞類型之量富集且不同細胞類型之量空乏，例如CD34+ 細胞富集同時CD34- 細胞空乏。 對於標記物呈「陽性」之細胞群體係指高於同型對照上所發現程度之細胞群體之均勻染色。在一些實施例中，一或多種標記物之減少或低表現係指平均螢光強度(MFI)小於參考對照至少1 log10之丟失或量度。在一些實施例中，一或多種標記物增加或其高表現係指較同型對照或參考對照高至少1 log10之MFI的增加或量度。在一些實施例中，相對於參考群體，MFI增加至少2倍指示細胞對於標記物之表現呈陽性。舉例而言，與同型對照相比，對於標記物呈陽性之細胞群體可展示MFI高2倍至4倍、4倍至10倍、10倍至100倍及100倍至1,000倍、1,000倍至10,000倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、15倍、20倍、25倍、30倍、35倍、40倍、50倍、100倍、200倍、300倍、400倍、500倍、600倍、700倍、800倍、900倍、1,000倍、5,000倍、10,000倍或更多。在一些實施例中，對於一或多種標記物呈陽性之細胞群體係指當與參考細胞群體相比時，展現標記物之細胞百分比可係至少50%之細胞、55%之細胞、60%之細胞、65%之細胞、70%之細胞、75%之細胞、80%之細胞、85%之細胞、90%之細胞、95%之細胞及100%之細胞及介於50%與100%之間的任何%。 對於標記物呈「陰性」之細胞群體係指不存在高於同型對照之利用特定抗體之顯著細胞群體染色。在一些實施例中，相對於參考群體，MFI之至少2倍降低指示細胞對於標記物之表現呈陰性。舉例而言，與陽性對照相比，對於標記物呈陰性之細胞群體可展示MFI低2倍至4倍、4倍至10倍、10倍至100倍及100倍至1,000倍、1,000倍至10,000倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、15倍、20倍、25倍、30倍、35倍、40倍、50倍、100倍、200倍、300倍、400倍、500倍、600倍、700倍、800倍、900倍、1,000倍、5,000倍、10,000倍或更多。在一些實施例中，當與參考細胞群體相比時，一或多種標記物之減少或其低表現係指展現標記物之細胞在細胞群體中之減少百分比為至少20%之細胞、25%之細胞、30%之細胞、35%之細胞、40%之細胞、45%之細胞、50%之細胞、55%之細胞、60%之細胞、65%之細胞、70%之細胞、75%之細胞、80%之細胞、85%之細胞、90%之細胞、95%之細胞及100%之細胞及介於20%與100%之間的任何%。 如本文所用，「純度百分比」或「純度%」係指靶細胞之數量乘以100且然後除以所計數細胞事件之數量，如在流式細胞儀、血球計、庫爾特計數器(coulter counter)、顯微鏡術上或其他細胞計數方法(靶細胞數量× 100/細胞事件數量)所量測。 如本文所用，「總體產率百分比」或「總體產率%」係指處理步驟後之靶細胞數量乘以100且然後除以原始群體中靶細胞之數量(處理步驟後之靶細胞數量× 100 /原始群體中之靶細胞數量)。「處理步驟之產率百分比」或「處理步驟之產率%」係指處理步驟後之靶細胞數量乘以100且然後除以預處理群體中之靶細胞數量(處理步驟後之靶細胞數量× 100 /預處理群體中之靶細胞數量) 如本文所用，「粗分選」係指富集或空乏細胞群體之方法，其中取決於經受粗分選之原始細胞群體之來源，與起始細胞混合物相比，所得群體可含有至少30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或更多之特定細胞群體。實施粗分選之方法為業內所熟知且可包括密度分離、血球分離/白血球分離、四聚體抗體複合物調介之富集/空乏及磁力活化細胞分選(MACS)，例如CLINIMACS®、PRODIGY®或EASYSEP™/ROBOSEP™。 如本文所用，「精細分選」係指富集或空乏細胞群體之方法，其中與起始細胞混合物相比，所得群體可含有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、99.9%或更多之特定一或多種細胞群體。實施精細分選之方法為業內所熟知且可包括基於多參數螢光之分子表型(例如螢光活化細胞分選(FACS))及基於微流體之分選。其他實施精細分選之方法提供於(例如)美國臨時專利申請案第62/421,979號中，其係以全文引用的方式併入本文中。 如本文所用，術語「結合分子」可係大量不同分子或聚集物中之任一者，且該等術語可互換使用。蛋白質、多肽、肽、核酸(核苷酸、寡核苷酸及多核苷酸)、抗體、醣、多醣、脂質、受體、測試化合物(特定而言由組合化學所產生之彼等)可各自係或組合成(當彼此單獨或經由靶標配體結合時)結合分子。 如本文所用，「特異性結合」或「對......具特異性」係指結合分子(例如抗體)或結合結構域以等於或大於105 M-1 (其等於此締合反應之締合速率[k締合 ]對解離速率[k解離 ]之比率)之親和力或Ka (亦即，特定結合相互作用之平衡締合常數，單位為1/M)締合或合併至靶標(分子或複合物)，同時不與樣品中之任何其他分子或組分顯著締合或合併。可將結合分子或結合結構域分類為「高親和力」結合分子或結合結構域或為「低親和力」結合分子或結合結構域。「高親和力」結合分子或結合結構域係指Ka 為至少107 M-1 、至少108 M-1 、至少109 M-1 、至少1010 M-1 、至少1011 M-1 、至少1012 M-1 或至少1013 M-1 之彼等結合分子或結合結構域。「低親和力」結合分子或結合結構域係指Ka 為至多107 M-1 、至多106 M-1 、至多105 M-1 之彼等結合分子或結合結構域。或者，親和力可定義為單位為M (例如10-5 M至10-13 M)之特定結合相互作用之平衡解離常數(Kd )。 如本文所用，「經雕塑之細胞移植物」或「經雕塑之移植物」係指已自起始細胞群體處理以使特定細胞類型之數量在指定範圍內並將不期望之細胞類型降低或去除至指定範圍之細胞群體。通常將範圍提供為特定種類之細胞數量/kg患者體重，但亦可表示為移植物內之總數量。經雕塑之細胞移植物可包含包括靶細胞之細胞混合物，以計及自然界中不存在之細胞比率或自然界中不存在之百分比表示。 如本文所用，「單位劑量」係指用於接受經雕塑細胞移植物之個體之每公斤(kg)體重之治療性細胞群體之指定最小數量、指定數量或範圍。認識到單位劑量之數量端視於個體之大小而有所變化。端視於個體之體重，可將單位劑量分成單位劑量之一部分。在一些實施例中，可將治療性細胞群體(例如HPSC、Tmem、Treg、iNKT等)分至單獨容器中以用於向個體投與。治療性細胞組合物 在某些實施例中，本揭示內容提供不同治療性細胞群體，其形成可用於造血幹細胞/祖細胞移植之醫藥組合物。該等治療性細胞群體可包含造血幹細胞/祖細胞(HSPC)、記憶性T細胞(Tmem)、調節性T細胞(Treg)之富集群體，且其中細胞群體空乏初始習用αβ-T細胞。在一些實施例中，Treg包含初始Treg、記憶性Treg或兩者。在一些實施例中，Tmem包含T中央記憶幹細胞(TSCM )、T中央記憶細胞(TCM )群體、T效應記憶細胞(TEM )群體或其任何組合。在一些實施例中，治療性群體包括不變天然殺手T細胞(iNKT)之富集群體。 在一些實施例中，治療性組合物可包含HSPC及Tmem。在一些情形中，治療性組合物可包含HSPC、Tmem及Treg。在一些情形中，治療性組合物可包含HSPC及Treg。在一些情形中，治療性組合物可包含HSPC及iNKT細胞。在一些情形中，治療性組合物可包含HSPC、Treg、Tmem及iNKT細胞。 在本揭示內容之某些實施例中，HSPC係CD34+ 。HSPC可進一步或替代地描述為CD133+ 、CD90+ 、CD38- 、CD45RA- 、Lin- 或其任何組合。在一些實施例中，HSPC係CD19- 、TCRα/β- 或其組合。在一些實施例中，Treg係CD25+ 、CD4+ 及CD127-/lo 細胞或其任何組合。在一些實施例中，Treg係CD4+ 、CD25+ 、CD127-/lo 、FoxP3+ 或其任何組合。在一些實施例中，初始Treg係CD4+ 、CD25+ 、CD127-/lo 、FoxP3+ 、CD45RA+ 、CD45RO- 或其任何組合。在一些實施例中，記憶性Treg係CD4+ 、CD25+ 、CD127-/lo 、FoxP3+ 、CD45RA- 、CD45RO+ 或其任何組合。在一些實施例中，Tmem係CD25- 、CD45RA- 細胞或其任何組合。在一些實施例中，Tmem係CD3+ 、CD45RA- 、CD45RO+ 或其任何組合。在一些實施例中，TSCM 係CD45RA+ 及CD4+ 或CD8+ 。TSCM 可進一步描述為CD95+ 、CD122+ 、CXCR3+ 、LFA-1+ 或其任何組合。在一些實施例中，TCM 係CD45RO+ 及CD4+ 或CD8+ 。TCM 可進一步描述為CD45RA- 、CD62L+ 、CCR7+ 或其任何組合。在一些實施例中，TEM 係CD4+ 、CD45RO+ 、CD45RA- 、CD62L- 、CCR7- 或其任何組合。在一些實施例中，iNKT係CD1d-tet+ 、6B11+ 或兩者。在一些實施例中，iNKT係Vα24Jα18+ 。在一些實施例中，iNKT細胞可係CD25+ 、6B11+ 、CD4+ 、Vα24Jα18+ 、CD127dim/- 細胞或其任何組合。在本文中所闡述之任一實施例中，初始習用αβ-T細胞係CD25- 、CD45RA+ 或其任何組合。在一些實施例中，初始習用αβ-T細胞可係TCRα/β+ CD45RA+ 及CD25- 、CD127+ 或兩者。初始習用αβ-T細胞可進一步描述為TCRα+ TCRβ+ CD45RA+ CD45RO- CD25- CD95- IL-2Rβ- CD127+ Vα24Jα18- 。 在某些實施例中，治療性細胞之濃度係描述為HSPC對另一細胞類型之比率。在一些實施例中，HSPC對Tmem之比率包含以下範圍：500:1至1:1,000、400:1至1:1,000、300:1至1:1,000、200:1至1:1,000、100:1至1:1,000、50:1至1:1,000、10:1至1:1,000、5:1至1:1,000、4:1至1:1,000、3:1至1:1,000、2:1至1:1,000、1:1至1:1,000、500:1至1:900、500:1至1:800、500:1至1:700、500:1至1:600、500:1至1:500、500:1至1:400、500:1至1:300、500:1至1:200、500:1至1:100、500:1至1:50、500:1至1:20、500:1至1:10、500:1至1:9、500:1至1:8、500:1至1:7、500:1至1:6、500:1至1:5、500:1至1:4、500:1至1:3、500:1至1:2、500:1至1:1、400:1至1:900、300:1至1:800、200:1至1:700、100:1至1:600、50:1至1:500、10:1至1:400、5:1至1:300、4:1至1:200、3:1至1:100、2:1至1:50或1:1至1:20。 在一些實施例中，HSPC對Tmem之比率包含以下範圍：10:1至1:200、100:1至1: 2,000或1,000:1至1:20,000。 HSPC對Treg之比率可包含以下範圍：20:1至1:3、100:1至1:30、或200:1至1:300。HSPC對初始Treg之比率可包含以下範圍：1:500至100:1、1:400至100:1、1:300至100:1、1:200至100:1、1:100至100:1、1:50至100:1、1:20至100:1、1:10至100:1、1:5至100:1、1:1至100:1、1:200至50:1、1:200至20:1、1:200至10:1、1:200至5:1、1:100至1:1、40:1至1:3、200:1至1:15或400:1至1:150。HSPC對記憶性Treg之比率可包含以下範圍：1:500至10,000:1、1:400至10,000:1、1:300至10,000:1、1:200至10,000:1、1:100至10,000:1、1:50至10,000:1、1:20至10,000:1、1:10至10,000:1、1:5至10,000:1、1:1至10,000:1、1:500至5,000:1、1:500至1,000:1、1:500至900:1、1:500至800:1、1:500至700:1、1:500至600:1、1:500至500:1、1:500至400:1、1:500至300:1、1:500至200:1、1:500至100:1、1:500至50:1、1:500至20:1、1:500至10:1、1:500至5:1或1:500至1:1。 HSPC對iNKT之比率可包含以下範圍：1:2至1,000,000:1、1:2至500,000:1、1:1至500,000:1、100:1至1,000,000:1、100:1至500,000:1、100:1至100,000:1、500:1至1,000,000:1、500:1至500,000:1、500:1至100,000:1、1,000:1至100,000:1、1,000:1至1,000,000:1、1,000:1至500,000:1、1,000:1至100,000:1、10,000:1至1:2、100,000:1 - 1: 20或1,000,000:1 - 1:200。 在某些實施例中，治療性細胞之濃度係描述為初始習用αβ-T細胞對治療性細胞類型之比率。初始習用αβ-T細胞對HSPC之比率可小於1:3、小於1:50、小於1: 100、小於1: 200、小於1:300、小於1:400、小於1:500、小於1:600、小於1:700、小於1:800、小於1:900、小於1:1,000、小於1:1,500、小於1:2,000、小於1:3,000、小於1:4,000、小於1:5,000、小於1:6,000、小於1:7,000、小於1:8,000、小於1:9,000、小於1:10,000、小於1: 50,000、小於1:100,000、小於1:200,000、小於1:300,000、小於1:400,000、小於1:500,000、小於1:600,000、小於1:700,000、小於1:800,000、小於1:900,000、小於1:1,000,000。 初始習用αβ-T細胞對Tmem之比率可小於1:30、小於1:200、小於1:300、小於1:400、小於1:500、小於1:600、小於1:700、小於1:800、小於1:900、小於1:1000、小於1:5000、小於1:10000、小於1:15000、小於1:20000、小於1:25000、小於1:30000、小於1:35000、小於1:40000、小於1:45000或小於1:50000。 初始習用αβ-T細胞對Treg之比率可小於1:1、小於1:2、小於1:3、小於1:4、小於1:5、小於1:6、小於1:7、小於1:8、小於1:9、1:10、小於1:15、小於1:20、小於1:30、小於1:200、小於1:300、小於1:400、小於1:500、小於1:600、小於1:700、小於1:800、小於1:900、小於1:1000、小於1:5000、小於1:10000、小於1:15000、小於1:20000、小於1:25000、小於1:30000、小於1:35000、小於1:40000、小於1:45000或小於1:50000。初始習用αβ-T細胞對初始Treg之比率可小於1:1、小於1:2、小於1:3、小於1:4、小於1:5、小於1:6、小於1:7、小於1:8、小於1:9、1:10、小於1:15、小於1:20、小於1:30、小於1:200、小於1:300、小於1:400、小於1:500、小於1:600、小於1:700、小於1:800、小於1:900、小於1:1000、小於1:5000、小於1:10000、小於1:15000、小於1:20000、小於1:25000、小於1:30000、小於1:35000、小於1:40000、小於1:45000或小於1:50000。初始習用αβ-T細胞對記憶性Treg之比率可小於1:1、小於1:2、小於1:3、小於1:4、小於1:5、小於1:6、小於1:7、小於1:8、小於1:9、小於1:10、小於1:15、小於1:20、小於1:30、小於1:200、小於1:300、小於1:400、小於1:500、小於1:600、小於1:700、小於1:800、小於1:900、小於1:1000、小於1:5000、小於1:10000、小於1:15000、小於1:20000、小於1:25000、小於1:30000、小於1:35000、小於1:40000、小於1:45000或小於1:50000。 初始習用αβ-T細胞對iNKT之比率可小於100:1、小於1:1、小於1:2、小於1:3、小於1:4、小於1:5、小於1:6、小於1:7、小於1:8、小於1:9、小於1:10、小於1:15、小於1:20、小於1:30、小於1:200、小於1:300、小於1:400、小於1:500、小於1:600、小於1:700、小於1:800、小於1:900、小於1:1000、小於1:5000、小於1:10000、小於1:15000、小於1:20000、小於1:25000、小於1:30000、小於1:35000、小於1:40000、小於1:45000、小於1:50000。 在本揭示內容之一些實施例中，Tmem對Treg之比率不依賴於起始細胞之濃度(例如自起始濃度實質上改變)。此提供優點，此乃因Tmem之濃度可獨立於Treg之濃度受到控制(例如劑量遞增)。Tmem對Treg之比率可係30:1至1:1、25:1至1:1、20:1至1:1、15:1至1:1、10:1至1:1、9:1至1:1、8:1至1:1、7:1至1:1、6:1至1:1、5:1至1:1、4:1至1:1、3:1至1:1、2:1至1:1。在某些實施例中，Tmem對Treg之比率可係1:1至200:1、1:10至2000:1或1:100至20,000:1。Tmem對初始Treg之比率可係5:1至1:10、3:1至1:10、3:1至1:10、2:1至1:10或1:1至1:10。Tmem對記憶性Treg之比率可係27:1至0.9:1、30:1至1:10、25:1至1:10、20:1至1:10、15:1至1:10、10:1至1:10、30:1至1:9、30:1至1:8、30:1至1:7、30:1至1:6、30:1至1:5、30:1至1:4、30:1至1:3、30:1至1:2或30:1至1:1。 在本揭示內容之一些實施例中，Treg對iNKT之比率可係20,000:1至1:5、200,000:1至1:50或2,000,000:1至1:500。 在本揭示內容之一些實施例中，iNKT對Tmem之比率可係2:1至1:100,000、5: 1至1:1,000,000或10:1至1:10,000,000。在一些實施例中，組合物中初始習用aβ-T細胞之數量可少於HSPC數量之約2%、5%、7%、10%、12%、15%、17%、20%、25%、27%、30%、32%或35%。在一些實施例中，組合物中初始習用aβ-T細胞之數量可係HSPC數量之約2%、5%、7%、10%、12%、15%、17%、20%、25%、27%、30%、32%或35%。在一些實施例中，組合物中初始習用aβ-T細胞之數量可係HSPC數量之約2%至約7%、約2%至約10%、約2%至約15%、約2%至約20%、約2%至約25%、約2%至約30%、約2%至約35%、約7%至約10%、約7%至約15%、約7%至約20%、約7%至約25%、約7%至約30%、約7%至約35%、約10%至約15%、約10%至約20%、約10%至約25%、約10%至約30%、約10%至約35%、約15%至約20%、約15%至約25%、約15%至約30%、約15%至約35%、約20%至約25%、約20%至約30%、約20%至約35%、約25%至約30%、約25%至約35%或約30%至約35%。 在一些實施例中，組合物中初始習用aβ-T細胞之數量可少於Tmem細胞數量之約0.1%、1%、2%、5%、7%、10%、12%、15%、17%、20%、22%或25%。在一些實施例中，組合物中初始習用aβ-T細胞之數量可係至多約20%。在一些實施例中，組合物中初始習用aβ-T細胞之數量可係Tmem細胞數量之約0.1%至約2%、約0.1%至約5%、約0.1%至約10%、約0.1%至約15%、約0.1%至約20%、約2%至約5%、約2%至約10%、約2%至約15%、約2%至約20%、約5%至約10%、約5%至約15%、約5%至約20%、約10%至約15%、約10%至約20%或約15%至約20%。 在一些實施例中，組合物中初始習用aβ-T細胞之數量可少於Treg細胞數量之約0.05%、0.5%、1%、2%、5%、7%、10%、12%、15%、17%、20%、22%、25%或30%。在一些實施例中，組合物中初始習用aβ-T細胞之數量可係Treg細胞數量之約0.05%至約1%、約0.05%至約5%、約0.05%至約10%、約0.05%至約15%、約0.05%至約20%、約0.05%至約30%、約1%至約5%、約1%至約10%、約1%至約15%、約1%至約20%、約1%至約30%、約5%至約10%、約5%至約15%、約5%至約20%、約5%至約30%、約10%至約15%、約10%至約20%、約10%至約30%、約15%至約20%、約15%至約30%或約20%至約30%。 在一些實施例中，組合物中初始習用aβ-T細胞之數量可少於iNKT細胞數量之約1%、10%、20%、50%、70%、80%或90%。在一些實施例中，組合物中初始習用aβ-T細胞之數量可係iNKT細胞數量之約1%至約10%、約1%至約20%、約1%至約50%、約1%至約70%、約1%至約80%、約1%至約90%、約10%至約20%、約10%至約50%、約10%至約70%、約10%至約80%、約10%至約90%、約20%至約50%、約20%至約70%、約20%至約80%、約20%至約90%、約50%至約70%、約50%至約80%、約50%至約90%、約70%至約80%、約70%至約90%或約80%至約90%。 在某些實施例中，治療性細胞群體包含10%至65% HSPC。在某些實施例中，治療性細胞群體包含2%至20% Treg。在某些實施例中，治療性細胞群體包含25%至90% Tmem。在某些實施例中，治療性細胞群體包含少於2%之初始習用αβ-T細胞。在某些實施例中，治療性細胞群體包含：10%至65% HSPC；2%至20% Treg；25%至90% Tmem；及少於2%之初始習用αβ-T細胞。在一些實施例中，Treg群體包含2%至5%、2%至10%、2%至20%、2%至30%、2%至40%、2%至50%、5%至10%、5%至20%、5%至30%、5%至40%、5%至50%、10%至20%、10%至30%、10%至40%、10%至50%、15%至20%、15%至30%、15%至40%或15%至50%初始Treg。在一些實施例中，Treg群體包含75%至95%之記憶性Treg。在一些實施例中，初始T細胞群體包含0.1%至10%之TSCM 。在一些實施例中，Tmem群體包含0%至99%之TCM 。在一些實施例中，Tmem群體包含0%至99%之TEM 。在某些實施例中，該群體進一步包含0.01%至5%、0.05%至5%、0.1%至5%、0.5%至5%、1%至5%、0.01%至1.5%、0.05%至1.5%、0.1%至1.5%、0.5%至1.5%或1%至1.5%之iNKT。 在本文中所揭示之任一實施例中，細胞群體可藉由處理來自一或多個組織收穫物之樣品來提供。在一些實施例中，樣品或組織收穫物係來自單一供體。該一或多個組織收穫物可來自一或多個供體。舉例而言，組織收穫物可係HLA匹配之同胞供體、HLA匹配之非親緣供體、部分匹配之非親緣供體、單倍體相合親緣供體、自體供體、完全HLA失配之同種異體供體、供體庫或其任何組合。 在本文中所揭示之任一實施例中，細胞群體可係用於投與個體之調配物。在一些情形中，細胞群體可使用賦形劑來調配。在一些實施例中，細胞經調配用於輸注或注射。賦形劑可包含羅莫索-R (Normosol-R)及人類血清。人類血清可係總調配物之0.2%。人類血清可係總調配物之0.5%。人類血清可係總調配物之1%。人類血清可係總調配物之2%。另外，調配物可包含pH緩衝劑，例如0.1 mM - 100 mM磷酸鹽pH 6.0 - 9.0、0.1 - 100 mM HEPES pH 6.0 - 9.0、0.1 mM - 100 mM碳酸氫鹽pH 6.0 - 9.0、0.1 mM - 100 mM檸檬酸鹽pH 6.0 - 9.0、0.1 - 100 mM乙酸鹽pH 4.0 - 8.0或其任何組合。調配物可包含電解質，例如5 mM - 400 mM NaCl、0.5 mM - 50 mM KCl、0.05 mM - 50 mM CaCl2、0.05 mM - 50 mM MgCl2、0.05 mM - 50 mM LiCl2、0.05 mM - 50 mM MnCl2或其任何組合。調配物可包含能源，例如0.1 mM - 100 mM葡萄糖、0.1 mM - 100 mM丙酮酸鹽、0.1 mM - 100 mM果糖、0.1 - 100 mM蔗糖、0.1 - 50 mM甘油、0.1 mM - 100 mM葡萄糖酸內酯、0.1 - 100 mM葡萄糖酸鹽或其任何組合。調配物可包含抗氧化劑，例如0.05 - 10 mM麩胱甘肽(還原型)、0.05 - 10 mM麩胱甘肽(氧化型)、0.001 mM - 10 mM β-巰基乙醇、0.001 mM - 10 mM二硫蘇糖醇、0.01 - 100 mM抗壞血酸鹽、0.001 - 10 mM參(2-羧基乙基)膦或其任何組合。調配物可包含穩定劑，例如0.01% - 10%人類血清白蛋白、0.01% - 10%牛血清白蛋白、0.1% - 99%人類血清、0.1% - 99%胎牛血清、0.01% - 10% IgG、0.1% - 10%免疫球蛋白、0.06% - 60%海藻糖，或分子聚合物，如0.1% - 20%聚乙二醇(MW 200 - 20,000,000)，或其任何組合。 在本文中所揭示之一些實施中，細胞群體基於個體之體重(例如細胞數量/kg個體體重)經調配用於投與個體。細胞群體可調配為醫藥組合物。在一些實施例中，醫藥組合物包含單位劑量之細胞移植物(例如細胞群體)，其中每一單位劑量之細胞移植物包含用於接受該細胞移植物之個體之每公斤(kg)體重之治療性細胞群體。在一些實施例中，細胞之群體或單位劑量包含每kg個體約1 × 106 個HSPC至約20 × 106 個HSPC。在一些實施例中，細胞之群體或單位劑量包含每kg個體至少約1 × 106 個HSPC。在一些實施例中，細胞之群體或單位劑量包含每kg個體至多約20 × 106 個HSPC。在一些實施例中，群體或單位劑量包含以下範圍之HSPC細胞：約0.5 × 106 至50 × 106 個細胞/kg個體體重、1.0 × 106 至20 × 106 個細胞/kg個體體重或2.0 × 106 至10 × 106 個細胞/kg個體體重。 在一些實施例中，細胞之群體或單位劑量包含每kg個體約1 × 106 個HSPC至約2 × 106 個HSPC、約1 × 106 個HSPC至約5 × 106 個HSPC、約1 × 106 個HSPC至約7 × 106 個HSPC、約1 × 106 個HSPC至約10 × 106 個HSPC、約1 × 106 個HSPC至約15 × 106 個HSPC、約1 × 106 個HSPC至約20 × 106 個HSPC、約2 × 106 個HSPC至約5 × 106 個HSPC、約2 × 106 個HSPC至約7 × 106 個HSPC、約2 × 106 個HSPC至約10 × 106 個HSPC、約2 × 106 個HSPC至約15 × 106 個HSPC、約2 × 106 個HSPC至約20 × 106 個HSPC、約5 × 106 個HSPC至約7 × 106 個HSPC、約5 × 106 個HSPC至約10 × 106 個HSPC、約5 × 106 個HSPC至約15 × 106 個HSPC、約5 × 106 個HSPC至約20 × 106 個HSPC、約7 × 106 個HSPC至約10 × 106 個HSPC、約7 × 106 個HSPC至約15 × 106 個HSPC、約7 × 106 個HSPC至約20 × 106 個HSPC、約10 × 106 個HSPC至約15 × 106 個HSPC、約10 × 106 個HSPC至約20 × 106 個HSPC或約15 × 106 個HSPC至約20 × 106 個HSPC。在一些實施例中，細胞群體包含每kg個體約1 × 106 個HSPC、約2 × 106 個HSPC、約5 × 106 個HSPC、約7 × 106 個HSPC、約10 × 106 個HSPC、約15 × 106 個HSPC或約20 × 106 個HSPC。 在一些實施例中，細胞之群體或單位劑量包含每kg個體約1 × 106 個Tmem細胞至約100 × 106 個Tmem細胞。在一些實施例中，細胞之群體或單位劑量包含每kg個體至少約1 × 106 個Tmem細胞。在一些實施例中，細胞之群體或單位劑量包含每kg個體至多約100 × 106 個Tmem細胞。在一些實施例中，細胞之群體或單位劑量包含每kg個體約1 × 106 個Tmem細胞至約10 × 106 個Tmem細胞、約1 × 106 個Tmem細胞至約20 × 106 個Tmem細胞、約1 × 106 個Tmem細胞至約50 × 106 個Tmem細胞、約1 × 106 個Tmem細胞至約75 × 106 個Tmem細胞、約1 × 106 個Tmem細胞至約100 × 106 個Tmem細胞、約10 × 106 個Tmem細胞至約20 × 106 個Tmem細胞、約10 × 106 個Tmem細胞至約50 × 106 個Tmem細胞、約10 × 106 個Tmem細胞至約75 × 106 個Tmem細胞、約10 × 106 個Tmem細胞至約100 × 106 個Tmem細胞、約20 × 106 個Tmem細胞至約50 × 106 個Tmem細胞、約20 × 106 個Tmem細胞至約75 × 106 個Tmem細胞、約20 × 106 個Tmem細胞至約100 × 106 個Tmem細胞、約50 × 106 個Tmem細胞至約75 × 106 個Tmem細胞、約50 × 106 個Tmem細胞至約100 × 106 個Tmem細胞或約75 × 106 個Tmem細胞至約100 × 106 個Tmem細胞。在一些實施例中，細胞之群體或單位劑量包含每kg個體約1 × 106 個Tmem細胞、約10 × 106 個Tmem細胞、約20 × 106 個Tmem細胞、約50 × 106 個Tmem細胞、約75 × 106 個Tmem細胞或約100 × 106 個Tmem細胞。 在一些實施例中，細胞之群體或單位劑量包含每kg個體約0.5 × 106 個Treg細胞至約2.5 × 106 個Treg細胞。在一些實施例中，細胞之群體或單位劑量包含每kg個體至少約0.5 × 106 個Treg細胞。在一些實施例中，細胞之群體或單位劑量包含每kg個體至多約2.5 × 106 個Treg細胞。在一些實施例中，細胞之群體或單位劑量包含每kg個體約0.5 × 106 個Treg細胞至約1 × 106 個Treg細胞、約0.5 × 106 個Treg細胞至約1.5 × 106 個Treg細胞、約0.5 × 106 個Treg細胞至約2 × 106 個Treg細胞、約0.5 × 106 個Treg細胞至約2.5 × 106 個Treg細胞、約1 × 106 個Treg細胞至約1.5 × 106 個Treg細胞、約1 × 106 個Treg細胞至約2 × 106 個Treg細胞、約1 × 106 個Treg細胞至約2.5 × 106 個Treg細胞、約1.5 × 106 個Treg細胞至約2 × 106 個Treg細胞、約1.5 × 106 個Treg細胞至約2.5 × 106 個Treg細胞或約2 × 106 個Treg細胞至約2.5 × 106 個Treg細胞。在一些實施例中，細胞之群體或單位劑量包含每kg個體約0.5 × 106 個Treg細胞、約1 × 106 個Treg細胞、約1.5 × 106 個Treg細胞、約2 × 106 個Treg細胞或約2.5 × 106 個Treg細胞。在一些實施例中，細胞之群體或單位劑量包含以下範圍之初始Treg：每kg個體體重約0.1 × 106 至約500 × 106 個、約0.2 × 106 至約500 × 106 個、約0.3 × 106 至約500 × 106 個、約0.4 × 106 至約500 × 106 個、約0.5 × 106 至約500 × 106 個、約0.6 × 106 至約500 × 106 個、約0.7 × 106 至約500 × 106 個、約0.8 × 106 至約500 × 106 個、約0.9 × 106 至約500 × 106 個或約1 × 106 至約500 × 106 個細胞。在一些實施例中，細胞之群體或單位劑量包含0.005 × 106 個細胞/kg個體體重至500 × 106 個細胞/kg個體體重範圍內之記憶性Treg。 在一些實施例中，細胞之群體或單位劑量包含以下範圍之iNKT細胞：0.5 × 103 至2000 × 103 個細胞/kg個體體重、0.5 × 103 至1 × 107 個細胞/kg個體體重或1.0 × 104 至2.5 × 106 個細胞/kg個體體重。在一些實施例中，細胞之群體或單位劑量包含每kg個體約0.01 × 106 個iNKT細胞至約3 × 106 個iNKT細胞。在一些實施例中，細胞之群體或單位劑量包含每kg個體至少約0.01 × 106 個iNKT細胞。在一些實施例中，細胞之群體或單位劑量包含每kg個體至多約3 × 106 個iNKT細胞。在一些實施例中，細胞之群體或單位劑量包含每kg個體約0.01 × 106 個iNKT細胞至約0.1 × 106 個iNKT細胞、約0.01 × 106 個iNKT細胞至約1 × 106 個iNKT細胞、約0.01 × 106 個iNKT細胞至約1.5 × 106 個iNKT細胞、約0.01 × 106 個iNKT細胞至約2 × 106 個iNKT細胞、約0.01 × 106 個iNKT細胞至約3 × 106 個iNKT細胞、約0.1 × 106 個iNKT細胞至約1 × 106 個iNKT細胞、約0.1 × 106 個iNKT細胞至約1.5 × 106 個iNKT細胞、約0.1 × 106 個iNKT細胞至約2 × 106 個iNKT細胞、約0.1 × 106 個iNKT細胞至約3 × 106 個iNKT細胞、約1 × 106 個iNKT細胞至約1.5 × 106 個iNKT細胞、約1 × 106 個iNKT細胞至約2 × 106 個iNKT細胞、約1 × 106 個iNKT細胞至約3 × 106 個iNKT細胞、約1.5 × 106 個iNKT細胞至約2 × 106 個iNKT細胞、約1.5 × 106 個iNKT細胞至約3 × 106 個iNKT細胞或約2 × 106 個iNKT細胞至約3 × 106 個iNKT細胞。在一些實施例中，細胞之群體或單位劑量包含每kg個體約0.01 × 106 個iNKT細胞、約0.1 × 106 個iNKT細胞、約1 × 106 個iNKT細胞、約1.5 × 106 個iNKT細胞、約2 × 106 個iNKT細胞或約3 × 106 個iNKT細胞。在一些實施例中，細胞之群體或單位劑量包含少於1 × 106 個細胞/kg個體體重之初始習用αβ-T細胞範圍。在一些實施例中，細胞之群體或單位劑量包含少於3 × 105 個細胞/kg個體體重之初始習用αβ-T細胞範圍。在一些實施例中，細胞之群體或單位劑量包含少於7.5 × 104 個細胞/kg個體體重、少於5 × 104 個細胞/kg、少於1 × 104 個細胞/kg、少於0.5 × 104 個細胞/kg或少於1 × 103 個細胞/kg個體體重之初始習用αβ-T細胞範圍。 在一些實施例中，每一單位劑量之治療性細胞群體包含：1.0 × 106 至50 × 106 個造血幹細胞/祖細胞(HSPC)、0.1 × 106 至1000 × 106 個記憶性T細胞(Tmem)、0.1 × 106 至1000 × 106 個調節性T細胞(Treg)及少於3 × 105 個初始習用αβ-T。在一些實施例中，每一單位劑量之治療性細胞群體包含：3.0 × 106 至50 × 106 個造血幹細胞/祖細胞(HSPC)、0.3 × 106 至1000 × 106 個記憶性T細胞(Tmem)、0.5 × 106 至1000 × 106 個調節性T細胞(Treg)及少於3 × 105 個初始習用αβ-T。在一些實施例中，每一單位劑量之治療性細胞群體包含：1.0 × 106 至50 × 106 個造血幹細胞/祖細胞(HSPC)、0.3 × 106 至1000 × 106 個記憶性T細胞(Tmem)、0.5 × 106 至1000 × 106 個調節性T細胞(Treg)及少於3 × 105 個初始習用αβ-T。 在本文中所揭示之任一實施例中，HSPC可由與個體單倍體相合之供體提供。在一些實施例中，Treg、Tmem、iNKT或其任何組合係由為HLA匹配之同胞供體或HLA匹配之非親緣供體或部分匹配之HLA非親緣供體之供體提供。在一些實施例中，HSPC係由與個體單倍體相合之供體提供，且Treg、Tmem、iNKT或其任何組合係由為HLA匹配之同胞供體或HLA匹配之非親緣供體之供體提供。治療方法 本揭示內容提供在患有疾病、病狀或病症之個體中實施細胞移植物療法之方法，其包含：向該個體投與本文所闡述之任一治療性細胞移植物組合物。舉例而言，可將包含細胞之治療性組合物輸注至有需要之個體。 可治療之個體包括遭受以下之個體：白血病、淋巴瘤、慢性感染或自體免疫疾病、惡性或非惡性血液病、AML、ALL、CML、CLL、多發性骨髓瘤、霍奇金氏淋巴瘤(Hodgkin’s lymphoma)、非霍奇金氏淋巴瘤、MDS、淋巴球增生性疾病、1型糖尿病、先天性代謝異常、遺傳病、嚴重合併性免疫缺失病、鐮狀細胞貧血症、β-地中海型貧血、多發性硬化、實體器官移植、克隆氏病(Crohn’s disease)、潰瘍性結腸炎、狼瘡、噬血球性淋巴組織細胞增生症(Hemophagocytic lymphohistiocytosis)、肝醣儲積病症、乳癌、其他實體腫瘤、腦白質營養性障礙、黏液多醣體病或將受益於HSPC移植之任何其他疾病。在一些實施例中，個體遭受復發型ALL或AML或遭受具有少於10%母細胞之原發性難治性ALL或AML。在一些實施例中，個體遭受處於≥CR1或具有微小殘存疾病陽性之高風險AML。在一些實施例中，個體遭受處於＞=CR1或具有微小殘存疾病陽性之高風險ALL。在一些實施例中，個體遭受高風險CML。在一些實施例中，個體遭受高風險骨髓增生性病症。在一些實施例中，個體遭受對療法有反應之復發性非霍奇金氏淋巴瘤。在一些實施例中，個體遭受在移植時母細胞計數少於10%母細胞之MDS。在某些實施例中，個體具有以下特徵中之一或多者：年齡18-65、Karnofsky評分≥ 60或ECOG ≤ 2、HCT-共病指數≤ 4、肌酸酐＜ 1.5 mg/dL、心臟射血分數＞ 45%、校正DLCO＞ 60%預測、總膽紅素＜3倍正常值上限(ULN) (除非歸因於吉伯特氏症候群(Gilbert syndrome))、AST及ALT ＜ 3倍ULN、未懷孕或處於哺乳、HIV陰性且無將預期壽命限制在＜ 6個月之共存疾病。在某些實施例中，個體具有以下特徵中之一或多者：患者年齡0 - 3、3-6、6-12、12-14、12-18、18-65、65-70、70-75、75-80、80-90或更年老或其間之任何範圍、Karnofsky評分≥ 60或≥80或ECOG ≤ 2、HCT-共病指數≤ 4、肌酸酐＜ 1.5 mg/dL、心臟射血分數＞ 45%、校正DLCO＞ 60%預測、總膽紅素＜ 3倍上限或＜ 1.5倍正常值上限(ULN) (除非歸因於吉伯特氏症候群)、AST及ALT ＜ 3倍或＜ 1.5倍ULN、未懷孕或處於哺乳、HIV陰性且無將預期壽命限制在＜ 6個月之共存疾病。 本文中所闡述之治療性細胞組合物可替代傳統HCT投與。例示性治療性細胞組合物與減低強度調理(RIC)及清髓性(MA)方案相容。由於GVHD之風險降低，因此對於一些患者、尤其患有潛在惡性病之彼等患者可使用MA調理替代RIC。由於本文所揭示之治療性細胞組合物已減少GVHD，在多發性骨髓瘤(其中GVHD風險超過同種異體反應性且目前臨床上使用自體移植)之情形下同種異體反應性可係有益的。非惡性病狀有可能受益於增加之免疫重構及因此較低之感染率及較高之植入率及持久嵌合。 根據熟習此項技術者將明瞭之已知技術或其變化形式將本文中所闡述之治療性細胞組合物投與個體。 「有效量」或「治療有效量」係指當投與個體(例如人類)時，足以有助於治療疾病之本文中所闡述之組合物之量。構成「治療有效量」之組合物之量將端視於細胞製備物、病狀及其嚴重程度、投與方式及欲治療個體之年齡有所變化，但可由熟習此項技術者根據其自身知識及本揭示內容常規地確定。當提及單獨投與之個別活性成分或組合物時，治療有效劑量係指該單獨之成分或組合物。當提及組合時，治療有效劑量係指產生治療效應之活性成分、組合物或二者之合併量，無論係連續地、並行地抑或同時投與。 在一些實施例中，HSPC細胞係以以下濃度之CD34+ 細胞投與：1.0 × 106 至50 × 106 個細胞/kg個體體重、1.0 × 106 至20 × 106 個細胞/kg個體體重或2.0 × 106 至10 × 106 個細胞/kg個體體重。在一些實施例中，HSPC細胞係以每kg個體約1 × 106 個HSPC至約20 × 106 個HSPC之濃度投與。在一些實施例中，HSPC細胞係以每kg個體至少約1 × 106 個HSPC之濃度投與。在一些實施例中，HSPC細胞係以每kg個體至多約20 × 106 個HSPC之濃度投與。在一些實施例中，HSPC細胞係以以下濃度投與：每kg個體約1 × 106 個HSPC至約2 × 106 個HSPC、約1 × 106 個HSPC至約5 × 106 個HSPC、約1 × 106 個HSPC至約7 × 106 個HSPC、約1 × 106 個HSPC至約10 × 106 個HSPC、約1 × 106 個HSPC至約15 × 106 個HSPC、約1 × 106 個HSPC至約20 × 106 個HSPC、約2 × 106 個HSPC至約5 × 106 個HSPC、約2 × 106 個HSPC至約7 × 106 個HSPC、約2 × 106 個HSPC至約10 × 106 個HSPC、約2 × 106 個HSPC至約15 × 106 個HSPC、約2 × 106 個HSPC至約20 × 106 個HSPC、約5 × 106 個HSPC至約7 × 106 個HSPC、約5 × 106 個HSPC至約10 × 106 個HSPC、約5 × 106 個HSPC至約15 × 106 個HSPC、約5 × 106 個HSPC至約20 × 106 個HSPC、約7 × 106 個HSPC至約10 × 106 個HSPC、約7 × 106 個HSPC至約15 × 106 個HSPC、約7 × 106 個HSPC至約20 × 106 個HSPC、約10 × 106 個HSPC至約15 × 106 個HSPC、約10 × 106 個HSPC至約20 × 106 個HSPC或約15 × 106 個HSPC至約20 × 106 個HSPC。在一些實施例中，HSPC細胞係以以下濃度投與：每kg個體約1 × 106 個HSPC、約2 × 106 個HSPC、約5 × 106 個HSPC、約7 × 106 個HSPC、約10 × 106 個HSPC、約15 × 106 個HSPC或約20 × 106 個HSPC。 在一些實施例中，Tmem係以以下濃度投與：0.1 × 106 至1000 × 106 個細胞/kg個體體重、1.0 × 106 至250 × 106 個細胞/kg個體體重或2.9 × 106 至10.1 × 106 個細胞/kg個體體重、10.1 × 106 至30.1 × 106 個細胞/kg個體體重、30.1 × 106 至101 × 106 個細胞/kg個體體重、1.0 × 106 至100 × 106 個細胞/kg個體體重。在一些實施例中，Tmem細胞係以每kg個體約1 × 106 個Tmem細胞至約100 × 106 個Tmem細胞之濃度投與。在一些實施例中，Tmem細胞係以每kg個體至少約1 × 106 個Tmem細胞之濃度投與。在一些實施例中，Tmem細胞係以每kg個體至多約100 × 106 個Tmem細胞之濃度投與。在一些實施例中，Tmem細胞係以以下濃度投與：每kg個體約1 × 106 個Tmem細胞至約10 × 106 個Tmem細胞、約1 × 106 個Tmem細胞至約20 × 106 個Tmem細胞、約1 × 106 個Tmem細胞至約50 × 106 個Tmem細胞、約1 × 106 個Tmem細胞至約75 × 106 個Tmem細胞、約1 × 106 個Tmem細胞至約100 × 106 個Tmem細胞、約10 × 106 個Tmem細胞至約20 × 106 個Tmem細胞、約10 × 106 個Tmem細胞至約50 × 106 個Tmem細胞、約10 × 106 個Tmem細胞至約75 × 106 個Tmem細胞、約10 × 106 個Tmem細胞至約100 × 106 個Tmem細胞、約20 × 106 個Tmem細胞至約50 × 106 個Tmem細胞、約20 × 106 個Tmem細胞至約75 × 106 個Tmem細胞、約20 × 106 個Tmem細胞至約100 × 106 個Tmem細胞、約50 × 106 個Tmem細胞至約75 × 106 個Tmem細胞、約50 × 106 個Tmem細胞至約100 × 106 個Tmem細胞或約75 × 106 個Tmem細胞至約100 × 106 個Tmem細胞。在一些實施例中，Tmem細胞係以以下濃度投與：每kg個體約1 × 106 個Tmem細胞、約10 × 106 個Tmem細胞、約20 × 106 個Tmem細胞、約50 × 106 個Tmem細胞、約75 × 106 個Tmem細胞或約100 × 106 個Tmem細胞。 在一些實施例中，Treg係以以下濃度投與：0.1 × 106 至1000 × 106 個細胞/kg個體體重、0.1 × 106 至5 × 106 個細胞/kg個體體重或0.5 × 106 至2.5 × 106 個細胞/kg個體體重。在一些實施例中，Treg係以每kg個體約0.5 × 106 個Treg細胞至約2.5 × 106 個Treg細胞之濃度投與。在一些實施例中，Treg係以每kg個體至少約0.5 × 106 個Treg細胞之濃度投與。在一些實施例中，Treg係以每kg個體至多約2.5 × 106 個Treg細胞之濃度投與。在一些實施例中，Treg係以以下濃度投與：每kg個體約0.5 × 106 個Treg細胞至約1 × 106 個Treg細胞、約0.5 × 106 個Treg細胞至約1.5 × 106 個Treg細胞、約0.5 × 106 個Treg細胞至約2 × 106 個Treg細胞、約0.5 × 106 個Treg細胞至約2.5 × 106 個Treg細胞、約1 × 106 個Treg細胞至約1.5 × 106 個Treg細胞、約1 × 106 個Treg細胞至約2 × 106 個Treg細胞、約1 × 106 個Treg細胞至約2.5 × 106 個Treg細胞、約1.5 × 106 個Treg細胞至約2 × 106 個Treg細胞、約1.5 × 106 個Treg細胞至約2.5 × 106 個Treg細胞或約2 × 106 個Treg細胞至約2.5 × 106 個Treg細胞。在一些實施例中，Treg係以以下濃度投與：每kg個體約0.5 × 106 個Treg細胞、約1 × 106 個Treg細胞、約1.5 × 106 個Treg細胞、約2 × 106 個Treg細胞或約2.5 × 106 個Treg細胞。 在一些實施例中，初始Treg係以以下濃度投與：約0.1 × 106 至約500 × 106 個細胞/kg個體體重、約0.2 × 106 至約500 × 106 個細胞/kg個體體重、約0.3 × 106 至約500 × 106 個細胞/kg個體體重、約0.4 × 106 至約500 × 106 個細胞/kg個體體重、約0.5 × 106 至約500 × 106 個細胞/kg個體體重、約0.6 × 106 至約500 × 106 個細胞/kg個體體重、約0.7 × 106 至約500 × 106 個細胞/kg個體體重、約0.8 × 106 至約500 × 106 個細胞/kg個體體重、約0.9 × 106 至約500 × 106 個細胞/kg個體體重或約1 × 106 至約500 × 106 個細胞/kg個體體重。 在一些實施例中，記憶性Treg係以0.005 × 106 至500 × 106 個細胞/kg個體體重之濃度投與。 在一些實施例中，iNKT細胞係以以下濃度投與：0.5 × 102 至2000 × 103 個細胞/kg個體體重、0.5 × 102 至1 × 104 個細胞/kg個體體重、0.5 × 103 至1 × 105 個細胞/kg個體體重、0.5 × 104 至1 × 106 個細胞/kg個體體重、0.5 × 105 至1 × 107 個細胞/kg個體體重、0.5 × 102 至1 × 107 個細胞/kg個體體重或1.0 × 104 至2.5 × 106 個細胞/kg個體體重。在一些實施例中，iNKT細胞係以每kg個體約0.01 × 106 個iNKT細胞至約3 × 106 個iNKT細胞之濃度投與。在一些實施例中，iNKT細胞係以每kg個體至少約0.01 × 106 個iNKT細胞之濃度投與。在一些實施例中，iNKT細胞係以每kg個體至多約3 × 106 個iNKT細胞之濃度投與。在一些實施例中，iNKT細胞係以以下濃度投與：每kg個體約0.01 × 106 個iNKT細胞至約0.1 × 106 個iNKT細胞、約0.01 × 106 個iNKT細胞至約1 × 106 個iNKT細胞、約0.01 × 106 個iNKT細胞至約1.5 × 106 個iNKT細胞、約0.01 × 106 個iNKT細胞至約2 × 106 個iNKT細胞、約0.01 × 106 個iNKT細胞至約3 × 106 個iNKT細胞、約0.1 × 106 個iNKT細胞至約1 × 106 個iNKT細胞、約0.1 × 106 個iNKT細胞至約1.5 × 106 個iNKT細胞、約0.1 × 106 個iNKT細胞至約2 × 106 個iNKT細胞、約0.1 × 106 個iNKT細胞至約3 × 106 個iNKT細胞、約1 × 106 個iNKT細胞至約1.5 × 106 個iNKT細胞、約1 × 106 個iNKT細胞至約2 × 106 個iNKT細胞、約1 × 106 個iNKT細胞至約3 × 106 個iNKT細胞、約1.5 × 106 個iNKT細胞至約2 × 106 個iNKT細胞、約1.5 × 106 個iNKT細胞至約3 × 106 個iNKT細胞或約2 × 106 個iNKT細胞至約3 × 106 個iNKT細胞。在一些實施例中，iNKT細胞係以以下濃度投與：每kg個體約0.01 × 106 個iNKT細胞、約0.1 × 106 個iNKT細胞、約1 × 106 個iNKT細胞、約1.5 × 106 個iNKT細胞、約2 × 106 個iNKT細胞或約3 × 106 個iNKT細胞。 在一些實施例中，所投與之細胞包含少於3 × 105 個細胞/kg個體體重之初始習用αβ-T細胞。在一些實施例中，所投與之細胞包含少於2 × 105 個細胞/kg個體體重、少於1 × 105 個細胞/kg個體體重、少於7.5 × 104 個細胞/kg個體體重、少於5 × 104 個細胞/kg個體體重、少於1 × 104 個細胞/kg個體體重、少於0.5 × 104 個細胞/kg個體體重或少於1 × 103 個細胞/kg個體體重之初始習用αβ-T細胞。 如實例中所進一步論述，治療性細胞組合物之純度可對治療之臨床結果係重要的。舉例而言，與使用高保真度分選技術(例如FACS)製備之治療性細胞組合物相比，使用導致低純度之方法利用治療性細胞處理可包括初始Tcon污染細胞之細胞部分可因導致較高程度之GVHD、急性GVHD等級3-4、類固醇抗性急性GVHD等級3-4、慢性GVHD、移植失敗、移植物排斥、嚴重感染、器官衰竭、VOD/SOS及復發而損害治療效能。 不期望受限於理論，據信與傳統清髓性HSPC移植程序相比，本文所揭示之治療性細胞組合物在清髓性移植程序中提供優異治療益處，此乃因與HSPC一起提供之Treg、Tmem及iNKT細胞導致對個體免疫系統之早期拯救。當個體接受傳統清髓性HSPC移植時，免疫系統可需要一年的時間來開始顯著地恢復並提供保護性免疫。相比之下，認為在本發明所揭示之治療性組合物中Treg、Tmem或iNKT細胞與HSPC一起引入提供對個體之消融免疫細胞的補充。該等補充細胞在投與後不久即開始提供顯著之免疫功能。因此，與傳統HSPC移植相比，本發明所揭示之治療性細胞組合物提供優異治療益處。亦相信，調節性T細胞可有助於植入並藉由抑制實體組織中之同種異體反應性T細胞來預防GVHD。亦認為iNKT細胞為Treg供應陽性反饋信號以促進抑制性環境，尤其在實體組織中。亦認為HSPC將重構清髓患者之血液及免疫系統，包括NK細胞之重構，進一步認為該等細胞提供移植物抗白血病效應。亦認為記憶性T細胞在有限時間內(少於5年)提供抗感染效應及抗白血病效應。由於其壽命有限，故該等細胞不能維持延長之移植物抗宿主病反應。 在一些實施例中，治療性細胞群體作為分開之醫藥組合物投與個體。舉例而言，經富集之HSPC、Tmem、Treg或iNKT細胞群體可依序投與。在一些實施例中，治療性細胞群體係以多劑量投與。在一些情形中，細胞群體之劑量可包含HSPC。在一些情形中，細胞群體之劑量可包含Treg細胞。在一些情形中，細胞群體之劑量可包含Tmem細胞。在一些情形中，細胞群體之劑量可包含iNKT細胞。在一些實施例中，治療性細胞群體係作為單一醫藥組合物同時投與個體。劑量可根據療程來投與。療程可包含以1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天間隔向個體投與劑量。療程可包含以1週、2週、3週或4週間隔向個體投與劑量。療程可包含以1個月、2個月、3個月或4個月間隔向個體投與劑量。 在一些實施例中，本文中所闡述之治療性組合物可作為分開之細胞群體投與。舉例而言，第一劑量之治療性組合物可包含單獨或以任何組合投與HSPC群體、Treg細胞群體或Tmem細胞群體中之任一者。然後隨後劑量可包含第一劑量中不存在之以上細胞類型中之任一者。劑量亦可包含iNKT細胞。舉例而言，第一劑量可包含HSPC，而第二劑量包含Treg及Tmem細胞。亦可向個體投與劑量之其他組合。 在一些實施例中，治療性組合物之完整劑量可包含複數個劑量。本文中所闡述之完整治療性組合物可以至少1個劑量投與。本文中所闡述之完整治療性組合物可以至多30個劑量投與。在一些情形中，本文中所闡述之完整治療性組合物可以約2個劑量、5個劑量、10個劑量、15個劑量、20個劑量、25個劑量或30個劑量投與。在一些情形中，完整治療性組合物之劑量可包含HSPC、Treg細胞、Tmem細胞。在一些情形中，完整治療性組合物之個別劑量可包含不同細胞群體。 在一些實施例中，單位劑量可包含至少3 × 105 個HSPC/kg個體。在一些實施例中，單位劑量可包含至少3 × 105 個Treg細胞/kg個體。在一些實施例中，單位劑量可包含至少3 × 105 個Tmem細胞/kg個體。在一些實施例中，單位劑量可包含至少3 × 105 個iNKT細胞/kg個體。在一些實施例中，單位劑量可包含小於3 × 105 個Tcon細胞/kg個體。 在一些實施例中，完整治療性組合物可在約1天內投與。在一些情形中，完整治療性組合物可在至多30天內投與。舉例而言，第一劑量之本文中所闡述之治療性組合物可在1天內投與且第二劑量係在10天後投與。在一些情形中，完整治療性組合物可在約1天、2天、5天、10天、15天、20天或30天內投與。 在一些實施例中，細胞係自以下供體分離：HLA匹配之同胞供體、HLA匹配之非親緣供體、部分匹配之非親緣供體、單倍體相合親緣供體、自體供體、HLA不匹配之供體、供體庫或其任何組合。在一些實施例中，治療性細胞群體係同種異體的。在一些實施例中，治療性細胞群體係自體的。在一些實施例中，治療性細胞群體係單倍體相合的。在一些實施例中，治療性細胞群體係自以下分離：動員外周血、動員血球分離產物、骨髓、臍帶血、非動員血、非動員血球分離產物或其任何組合。 在一些實施例中，治療性細胞群體係源自單一組織收穫物。在一些實施例中，治療性細胞群體係源自一或多種組織收穫物。在一些實施例中，治療性細胞群體包含由至少第一供體提供之HSPC及由至少第二供體提供之Treg及Tmem。在一些實施例中，治療性細胞群體包含由至少第二供體提供之iNKT細胞。在某些實施例中，第一供體與個體單倍體相合。在某些實施例中，第二供體係HLA匹配之同胞供體或HLA匹配或部分匹配之非親緣供體。 在一些實施例中，個體在治療之前已經輻射、化學療法、重組蛋白、抗體或毒素偶聯抗體或其任何組合調理。在一些實施例中，藉由首先用清髓性療法治療個體來對個體進行細胞移植物療法調理。例示性清髓性療法包括化學療法或放射療法。認為清髓性療法藉由使腫瘤減積來提供治療益處。癌細胞通常較許多正常細胞更易受化學療法/放射療法影響。然而，若腫瘤起始細胞在化學療法/放射療法過程中存活，則個體具有復發風險。因此，高程度之化學療法可有助於改良腫瘤起始群體之消除；然而，在該等濃度下會對正常細胞產生毒性。儘管一些易受影響之正常細胞係非必需的，但高位準之化學療法將造血幹細胞殺死至致死程度。清髓性方案根除足夠量之HSC，若不進行移植，患者將死亡。當將HSPC輸注至清髓個體中時，供體細胞可拯救該個體且重構該個體之血液及免疫系統以生存。在一些實施例中，清髓性療法包含投與白消安(busulfan)、環磷醯胺、TBI、氟達拉濱(fludarabine)、依託泊苷(etoposide)或其任何組合。在一些實施例中，清髓性療法包含投與抗cKIT抗體。在一些實施例中，清髓性療法包含投與抗體藥物偶聯物。抗體藥物偶聯物可係(例如)抗CD45-肥皂草毒素或抗cKit-肥皂草毒素治療性抗體。在一些實施例中，清髓性療法係減低強度調理療法。 在某些實施例中，治療性細胞群體係作為包含免疫抑制劑之組合療法投與個體。例示性免疫抑制劑包括西羅莫司(sirolimus)、他克莫司(tacrolimus)、環孢素、麥考酚酯(mycophenolate)、抗胸腺細胞球蛋白、皮質類固醇、鈣調神經磷酸酶抑制劑、抗代謝物，例如胺甲喋呤、移植後環磷醯胺或其任何組合。在一些實施例中，個體僅用西羅莫司或他克莫司預治療作為針對GVHD之預防。在一些實施例中，治療性細胞群體係在免疫抑制劑之前投與個體。在一些實施例中，治療性細胞群體係在免疫抑制劑之後投與個體。在一些實施例中，治療性細胞群體係與免疫抑制劑並行投與個體。在一些實施例中，治療性細胞群體係在無免疫抑制劑之情形下投與個體。在一些實施例中，接受治療性細胞群體之患者接受免疫抑制劑少於6個月、5個月、4個月、3個月、2個月、1個月、3週、2週或1週。 在一些實施例中，接受Bu/Flu及/或Bu/Cy之個體係在第+3天以0.03 mg/kg/天之初始劑量開始靜脈內輸注他克莫司，其中目標為4-8 ng/ml。在一些實施例中，接受Cy/TBI (亦針對TBI/VP-16或TBI/VP-16/Cy)之個體在第+3天以6 mg速效劑量(loading dose)之初始劑量開始、之後每日2 mg靜脈內輸注西羅莫司，其中目標為3-8 ng/ml。若個體變得不耐受其特定GVHD預防法或由治療醫師確定改變之其他原因，則治療醫師可酌情改變預防法，建議利用他克莫司、西羅莫司或嗎替麥考酚酯。若出現GVHD，則將起始適當治療時間表及劑量。發生急性GVHD之接受者將在治療醫師之慎重考慮下進行治療。細胞群體之選擇及分選 在調配或投與治療性細胞之前，自供體(例如外周血單核細胞、骨髓、臍帶血)獲得一或多種細胞來源，治療性細胞自其富集或空乏。富集或空乏細胞混合物中特定亞群細胞群體之方法為業內所熟知。舉例而言，細胞群體可藉由以下來富集或空乏：密度分離、花結四聚體抗體複合物調介之富集/空乏、磁力活化細胞分選(MACS)、基於多參數螢光之分子表型(例如螢光活化細胞分選(FACS))或其任何組合。提供富集或空乏細胞群體之其他方法，例如美國臨時申請案62/421,979；美國專利申請公開案第2014/0011690號；及美國專利申請公開案第2016/0245805號，其係以全文引用的方式併入本文中。共同地，該等富集或空乏細胞群體之方法可在本文中概言之稱為「分選」細胞群體或使細胞「在條件下」接觸以形成或產生富集(+)或空乏(-)細胞群體。 因此，本揭示內容之實施例包括產生醫藥組合物之方法，其包含處理至少一種樣品以提供：(a)富集造血幹細胞/祖細胞(HSPC)之群體；(b)富集調節性T細胞(Treg)之群體；(c)富集記憶性T細胞(Tmem)之群體；及(d) 將經富集之HSPC、記憶性T細胞及Treg群體調配為適於向個體投與之醫藥組合物，其中(a)-(c)之該等群體空乏初始習用αβ-T細胞。在一些實施例中，該方法可進一步包含處理樣品以提供富集iNKT細胞之群體。 在一些實施例中，該方法進一步包含處理樣品以提供空乏Lin+ 細胞之細胞群體。該方法可包含提供富集初始Treg之群體、富集記憶性Treg之群體或兩者。在一些實施例中，提供富集Tmem之群體包含提供富集T中央記憶幹細胞(TSCM )之群體、富集T中央記憶細胞(TCM )之群體、富集T效應記憶細胞(TEM )之群體或其任何組合。在一些實施例中，該方法可進一步包含處理樣品以提供富集iNKT細胞之群體。 在一些實施例中，富集HSPC之群體包含至少50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%或更多之CD34+ HSPC。在一些實施例中，空乏Lin+ 細胞之細胞群體包含1% - 30%之Lin+ 細胞、較佳地少於1%之Lin+ 細胞。在一些實施例中，富集Treg之群體包含20% - 99.9%之Treg。在一些實施例中，富集Tmem之群體包含10% - 99.9%之Tmem。在一些實施例中，富集iNKT之群體包含10% - 99.9%之iNKT。 在一些實施例中，調配醫藥組合物包含將經富集之HSPC群體、記憶性T細胞群體、Treg群體、iNKT群體或其任何組合組合成經富集細胞之混合群體。 在一些實施例中，經富集細胞之混合群體包含包括以下範圍之HSPC對Tmem之比率：500:1至1:1,000、400:1至1:1,000、300:1至1:1,000、200:1至1:1,000、100:1至1:1,000、50:1至1:1,000、10:1至1:1,000、5:1至1:1,000、4:1至1:1,000、3:1至1:1,000、2:1至1:1,000、1:1至1:1,000、500:1至1:900、500:1至1:800、500:1至1:700、500:1至1:600、500:1至1:500、500:1至1:400、500:1至1:300、500:1至1:200、500:1至1:100、500:1至1:50、500:1至1:20、500:1至1:10、500:1至1:9、500:1至1:8、500:1至1:7、500:1至1:6、500:1至1:5、500:1至1:4、500:1至1:3、500:1至1:2、500:1至1:1、400:1至1:900、300:1至1:800、200:1至1:700、100:1至1:600、50:1至1:500、10:1至1:400、5:1至1:300、4:1至1:200、3:1至1:100、2:1至1:50或1:1至1:20。在一些實施例中，經富集細胞之混合群體包含包括以下範圍之HSPC對Tmem之比率：10:1至1:200、100:1至1: 2,000或1,000:1至1:20,000。 在一些實施例中，經富集細胞之混合群體包含可包括以下範圍之HSPC對Treg之比率：20:1至1:3、100:1至1:30或200:1至1:300。HSPC對初始Treg之比率可包含以下範圍：1:500至100:1、1:400至100:1、1:300至100:1、1:200至100:1、1:100至100:1、1:50至100:1、1:20至100:1、1:10至100:1、1:5至100:1、1:1至100:1、1:200至50:1、1:200至20:1、1:200至10:1、1:200至5:1、1:100至1:1、40:1至1:3、200:1至1:15或400:1至1:150。 在一些實施例中，經富集細胞之混合群體包含可包括以下範圍之HSPC對記憶性Treg之比率：1:500至10,000:1、1:400至10,000:1、1:300至10,000:1、1:200至10,000:1、1:100至10,000:1、1:50至10,000:1、1:20至10,000:1、1:10至10,000:1、1:5至10,000:1、1:1至10,000:1、1:500至5,000:1、1:500至1,000:1、1:500至900:1、1:500至800:1、1:500至700:1、1:500至600:1、1:500至500:1、1:500至400:1、1:500至300:1、1:500至200:1、1:500至100:1、1:500至50:1、1:500至20:1、1:500至10:1、1:500至5:1或1:500至1:1。 在一些實施例中，經富集細胞之混合群體包含可包括以下範圍之HSPC對iNKT之比率：1:2至1,000,000:1、1:2至500,000:1、1:1至500,000:1、100:1至1,000,000:1、100:1至500,000:1、100:1至100,000:1、500:1至1,000,000:1、500:1至500,000:1、500:1至100,000:1、1,000:1至100,000:1、1,000:1至1,000,000:1、1,000:1至500,000:1、1,000:1至100,000:1、10,000:1至1:2、100,000:1 - 1: 20或1,000,000:1 - 1:200。 在一些實施例中，經富集細胞之混合群體包含以下之初始習用αβ-T細胞對HSPC之比率：小於1:3、小於1:50、小於1: 100、小於1: 200、小於1: 300、小於1:400、小於1: 500、小於1:600、小於1:700、小於1:800、小於1:900、小於1:1,000、小於1:1,500、小於1: 2,000、小於1: 3,000、小於1: 4,000、小於1: 5,000、小於1:6,000、小於1:7,000、小於1:8,000、小於1:9,000、小於1:10,000、小於1: 50,000、小於1:100,000、小於1:200,000、小於1:300,000、小於1:400,000、小於1:500,000、小於1:600,000、小於1:700,000、小於1:800,000、小於1:900,000或小於1:1,000,000。 在一些實施例中，經富集細胞之混合群體包含可為以下之初始習用αβ-T細胞對Tmem之比率：小於1:30、小於1:200、小於1:300、小於1:400、小於1:500、小於1:600、小於1:700、小於1:800、小於1:900、小於1:1000、小於1:5000、小於1:10000、小於1:15000、小於1:20000、小於1:25000、小於1:30000、小於1:35000、小於1:40000、小於1:45000或小於1:50000。 初始習用αβ-T細胞對Treg之比率可小於1:1、1:10、小於1:30、小於1:200、小於1:300、小於1:400、小於1:500、小於1:600、小於1:700、小於1:800、小於1:900、小於1:1000、小於1:5000、小於1:10000、小於1:15000、小於1:20000、小於1:25000、小於1:30000、小於1:35000、小於1:40000、小於1:45000或小於1:50000。初始習用αβ-T細胞對初始Treg之比率可小於1:1、1:10、小於1:30、小於1:200、小於1:300、小於1:400、小於1:500、小於1:600、小於1:700、小於1:800、小於1:900、小於1:1000、小於1:5000、小於1:10000、小於1:15000、小於1:20000、小於1:25000、小於1:30000、小於1:35000、小於1:40000、小於1:45000或小於1:50000。初始習用αβ-T細胞對記憶性Treg之比率可小於1:1、小於1:2、小於1:3、小於1:4、小於1:5、小於1:6、小於1:7、小於1:8、小於1:9、小於1:10、小於1:15、小於1:20、小於1:30、小於1:200、小於1:300、小於1:400、小於1:500、小於1:600、小於1:700、小於1:800、小於1:900、小於1:1000、小於1:5000、小於1:10000、小於1:15000、小於1:20000、小於1:25000、小於1:30000、小於1:35000、小於1:40000、小於1:45000或小於1:50000。初始習用αβ-T細胞對iNKT之比率可小於100:1、小於1:1、小於1:2、小於1:3、小於1:4、小於1:5、小於1:6、小於1:7、小於1:8、小於1:9、小於1:10、小於1:15、小於1:20、小於1:30、小於1:200、小於1:300、小於1:400、小於1:500、小於1:600、小於1:700、小於1:800、小於1:900、小於1:1000、小於1:5000、小於1:10000、小於1:15000、小於1:20000、小於1:25000、小於1:30000、小於1:35000、小於1:40000、小於1:45000、小於1:50000。 在本揭示內容之一些實施例中，Tmem對Treg之比率不依賴於起始細胞之濃度(例如自起始濃度實質上改變)。此提供優點，此乃因Tmem之濃度可獨立於Treg之濃度受到控制(例如劑量遞增)。Tmem對Treg之比率可係30:1至1:1、25:1至1:1、20:1至1:1、15:1至1:1、10:1至1:1、9:1至1:1、8:1至1:1、7:1至1:1、6:1至1:1、5:1至1:1、4:1至1:1、3:1至1:1、2:1至1:1。在某些實施例中，Tmem對Treg之比率可係1:1至200:1、1:10至2000:1或1:100至20,000:1。Tmem對初始Treg之比率可係5:1至1:10、3:1至1:10、3:1至1:10、2:1至1:10或1:1至1:10。Tmem對記憶性Treg之比率可係27:1至0.9:1、30:1至1:10、25:1至1:10、20:1至1:10、15:1至1:10、10:1至1:10、30:1至1:9、30:1至1:8、30:1至1:7、30:1至1:6、30:1至1:5、30:1至1:4、30:1至1:3、30:1至1:2或30:1至1:1。 在本揭示內容之一些實施例中，Treg對iNKT之比率可係20,000:1至1:5、200,000:1至1:50或2,000,000:1至1:500。 在本揭示內容之一些實施例中，iNKT對Tmem之比率可係2:1至1:100,000、5: 1至1:1,000,000或10:1至1:10,000,000。 在一些實施例中，HSPC係CD34+ 。HSPC可進一步描述為CD133+ 、CD90+ 、CD38- 、CD45RA- 、Lin- 或其任何組合。在一些實施例中，HSPC係CD19- 、TCRα/β- 或其組合。在一些實施例中，Lin+ 細胞表現CD19、CD11c、CD66B、CD14、CD20或其任何組合。在一些實施例中，Treg係CD4+ 、CD25+ 、CD127-/lo 、FoxP3+ 或其任何組合。在一些實施例中，初始Treg係CD4+ 、CD25+ 、CD127-/lo 、FoxP3+ 、CD45RA+ 、CD45RO- 或其任何組合。在一些實施例中，記憶性Treg係CD4+ 、CD25+ 、CD127-/lo 、FoxP3+ 、CD45RA- 、CD45RO+ 或其任何組合。在一些實施例中，Tmem係CD3+ 、CD45RA- 、CD45RO+ 或其任何組合。在一些實施例中，TSCM 係CD45RA+ 及CD4+ 或CD8+ 。TSCM 可進一步描述為CD95+ 、CD122+ 、CXCR3+ 、LFA-1+ 或其任何組合。在一些實施例中，TCM 係CD45RO+ 及CD4+ 或CD8+ 。TCM 可進一步描述為CD45RA- 、CD62L+ 、CCR7+ 或其任何組合。在一些實施例中，TEM 係CD4+ 、CD45RO+ 、CD45RA- 、CD62L- 、CCR7- 或其任何組合。在一些實施例中，iNKT係CD1d-tet+ 、6B11+ 、Va24Ja18+ 或其任何組合。在本文中所闡述之任一實施例中，初始習用αβ-T細胞係TCRα/β+ CD45RA+ 及CD25- 、CD127+ 或兩者。初始習用αβ-T細胞可進一步描述為TCRα+ TCRβ+ CD45RA+ CD45RO- CD25- CD95- IL-2Rβ- CD127+ 。 在一些實施例中，可對生物樣品進行分選以分離所關注群體，例如HSPC、Treg細胞、Tmem細胞或其組合。在一些情形中，可使生物樣品與特異性結合CD34之分子接觸以用於分離HSPC。可使樣品富集CD34+ 以產生CD34+ 細胞群體及CD34- 細胞群體。在一些情形中，可使CD34- 細胞群體與特異性結合CD25之分子接觸。然後藉由以下使樣品富集CD25+ 細胞：針對CD25+ 細胞群體對CD34- 細胞群體進行分選，藉此產生CD34- CD25- 細胞群體及CD34- CD25+ 細胞群體。可進一步對該CD34- CD25+ 細胞群體進行分選以產生Treg細胞群體。可使CD34- CD25+ 細胞與特異性結合CD4之分子及特異性結合CD127之分子接觸。然後可對該等細胞進行分選以產生CD34- CD25+ CD4+ CD127dim/- Treg細胞群體。在一些情形中，可進一步對CD34- CD25- 細胞群體進行分選以富集Tmem細胞。可使該等細胞與特異性結合CD45RA之分子接觸。可對細胞樣品進行分選以產生CD34- CD25- CD45RA- Tmem細胞群體。可棄掉CD45RA+ 初始習用αβ-T細胞以空乏初始習用αβ-T細胞。 在一些實施例中，可對生物樣品進行分選以分離所關注群體，例如HSPC、Treg細胞、Tmem細胞、iNKT細胞或其組合。在一些情形中，可使生物樣品與特異性結合CD34之分子接觸以用於分離HSPC。可使樣品富集CD34+ 以產生CD34+ 細胞群體及CD34- 細胞群體。在一些情形中，可使該CD34- 細胞群體與特異性結合CD25之分子及特異性結合6B11之分子接觸。然後可藉由以下使樣品富集CD25+ 及6B11+ 細胞：針對CD25+ 細胞群體對CD34- 細胞群體進行分選，藉此產生CD34- CD25- 6B11- 細胞群體及CD34- CD25+ 6B11+ 細胞群體。可進一步對CD34- CD25+ 6B11+ 細胞群體進行分選以產生Treg及iNKT細胞群體。可使CD34- CD25+ 6B11+ 細胞與特異性結合CD4之分子及特異性結合CD127之分子接觸。然後可對該等細胞進行分選以產生CD34- CD25+ 6B11+ CD4+ CD127dim/- Treg細胞群體。在一些情形中，可進一步對CD34- CD25- 6B11- 細胞群體進行分選以富集Tmem細胞。可使該等細胞與特異性結合CD45RA之分子接觸。可對細胞樣品進行分選以產生CD34- CD25- 6B11- CD45RA- Tmem細胞群體。可棄掉CD45RA+ 初始習用αβ-T細胞以空乏初始習用αβ-T細胞。在一些實施例中，產生本文中所闡述之治療性組合物之方法可包含分開分選不同之細胞群體。舉例而言，HSPC、Treg細胞、Tmem細胞及/或iNKT細胞可進行分開分選。可混合分開分選之群體以形成治療性組合物。在一些情形中，單獨之細胞群體可分離自不同供體。舉例而言，HSPC可分離自供體1且Treg及Tmem細胞可分選自供體2。或者，所有細胞群體可分離自同一供體。在一些實施例中，樣品包含動員外周血、動員血球分離產物、骨髓、臍帶血、非動員血、非動員血球分離產物或其任何組合。在一些實施例中，樣品包含源自PBMC之經培養細胞。在一些實施例中，樣品包含源自經誘導之多潛能幹細胞(iPSC)之經培養細胞。在一些實施例中，製備樣品以用於進行以下處理：密度梯度、Ficoll、Percoll、紅血球低滲溶解、氯化銨-鉀(ACK)緩衝液或其任何組合。在一些實施例中，樣品係由單一組織收穫物來提供。在一些實施例中，樣品係由一或多種組織收穫物來提供。實例分選方案 1 在某些實施例中，產生醫藥組合物之方法包含：A. 使樣品與特異性結合CD34之分子在條件下接觸以形成CD34+ 細胞之群體及CD34- 細胞之群體，自該樣品回收CD34+ 細胞之該群體且自該樣品回收CD34- 細胞之該群體；及B. 處理CD34- 細胞之該群體以提供至少一種富集治療性細胞之群體，其包含Treg、Tmem、iNKT或其任何組合(參見圖1A及B)。在一些實施例中，步驟B包含實施精細分選以提供富集治療性細胞之群體(參見圖1A)。舉例而言，步驟B可包含使CD34- 細胞之該群體與以下各項接觸：特異性結合CD45RA之分子、特異性結合CD45RO之分子、特異性結合CD4之分子、特異性結合CD8之分子、特異性結合CD25之分子、特異性結合CD127之分子、CD1d-tet、6B11單株抗體或其功能片段或其任何組合。 在某些實施例中，步驟B包含：i. 使CD34- 細胞之該群體與至少一種特異性結合CD45RA之分子在條件下接觸以形成CD45RA+ 細胞之群體及CD45RA- 細胞之群體，且回收CD45RA- 細胞之該群體；及ii. 實施精細分選以自CD45RA+ 細胞之該群體提供富集治療性細胞之群體。精細分選可包含使CD45RA+ 細胞之該群體與以下各項接觸：特異性結合CD4之分子、特異性結合CD8之分子、特異性結合CD25之分子、特異性結合CD127之分子、CD1d-tet、6B11單株抗體或其功能片段或其任何組合。精細分選可進一步包含使CD45RA- 細胞之該群體與特異性結合CD45RA之分子、特異性結合CD45RO之分子或其組合接觸。 在某些實施例中，步驟B包含：i. 使CD34- 細胞之該群體與至少一種特異性結合Lin+ 標記物之結合分子在條件下接觸以形成Lin+ 細胞之群體及Lin- 細胞之群體，且回收Lin- 細胞之該群體；及ii. 實施精細分選以自Lin- 細胞之該群體提供富集治療性細胞之群體。在一些實施例中，精細分選包含使Lin- 細胞之該群體與以下各項接觸：特異性結合CD45RA之分子、特異性結合CD45RO之分子、特異性結合CD4之分子、特異性結合CD8之分子、特異性結合CD25之分子、特異性結合CD127之分子、CD1d-tet分子、6B11單株抗體或其功能片段或其任何組合。 在某些實施例中，步驟B包含：i. 使CD34- 細胞之該群體與至少一種特異性結合至少一種Lin+ 標記物之結合分子在條件下接觸以形成Lin+ 細胞之群體及Lin- 細胞之群體，且回收Lin- 細胞之該群體；及ii. 使Lin- 細胞之該群體與特異性結合CD25之結合分子在條件下接觸以形成CD25+ 細胞之群體及CD25- 細胞之群體，回收CD25+ 細胞之該群體，藉此產生包含Treg之細胞群體，且回收CD25- 細胞之該群體；及iii. 使CD25- 細胞之該群體與特異性結合CD45RA之結合分子在條件下接觸以形成CD45RA+ 細胞之群體及CD45RA- 細胞之群體，且回收CD45RA- 細胞之該群體(參見圖1A)。在一些實施例中，步驟ii.進一步包含使Lin- 細胞與CD1d-tet、6B11單株抗體或其功能片段或其組合在條件下接觸以形成CD1d-tet+ 細胞之群體、6B11+ 細胞之群體或其組合以及CD1d-tet- 細胞、6B11- 細胞之群體或其組合，且回收CD1d-tet+ 細胞之該群體。在一些實施例中，同時回收CD25+ 細胞之群體及CD1d-tet+ 細胞、6B11+ 細胞或兩者之群體。在一些實施例中，該方法進一步包含對步驟ii.之CD25+ 細胞之群體實施精細分選以提供初始Treg細胞之群體、記憶性Treg細胞之群體、iNKT細胞之群體或其任何組合。在一些實施例中，回收CD45RA+ 細胞之群體且進一步實施精細分選以提供Treg、iNKT或兩者之群體。實例分選方案 2 在某些實施例中，產生醫藥組合物之方法包含：A. 對至少第一樣品實施第一粗分選，藉此提供CD34+ 細胞之富集群體；B. 對第二樣品實施第二粗分選，藉此提供Lin- 細胞之群體；C. 對Lin- 細胞之該群體實施第三粗分選，藉此提供CD45RA- 記憶性T細胞之群體且提供CD45RA+ 細胞之群體；及D. 對CD45RA+ 細胞之該群體實施精細分選，藉此提供Treg之群體(參見圖2及3)。 在一些實施例中，第二樣品包含自步驟A回收之CD34- 細胞之群體(參見圖3)。在一些實施例中，第一樣品包含至少一種單倍體相合樣品(參見圖2A)。在一些實施例中，第一樣品包含至少兩種單倍體相合樣品(參見圖2B)。在一些實施例中，第一樣品包含動員外周血、動員血球分離產物、骨髓、臍帶血、非動員血、非動員血球分離產物或其任何組合。在一些實施例中，第二樣品包含外周血單核細胞(PBMC)、動員外周血、動員血球分離產物、骨髓、臍帶血、非動員血、非動員血球分離產物或其任何組合。在一些實施例中，第一樣品或第二樣品係同種異體的、自體的或其組合。在一些實施例中，第二樣品係來自HLA匹配之非親緣供體、HLA匹配之同胞供體或其組合(參見圖2A及B)。 在一些實施例中，第一、第二或第三粗分選包含密度分離、四聚體抗體複合物調介之富集/空乏、磁力活化細胞分選、血球分離、白血球分離或其任何組合。 在一些實施例中，精細分選可包含使用基於多參數螢光之分子表型之純化。精細分選可提供初始Treg細胞之群體、記憶性Treg細胞之群體、iNKT細胞之群體或其任何組合。精細分選可包含使CD45RA+ 細胞與特異性結合CD25之結合分子在條件下接觸以提供CD25+ 細胞之群體及CD25- 細胞之群體，且回收CD25+ 細胞之群體，藉此提供Treg之群體。在一些實施例中，進一步在條件下對CD25+ 細胞之該群體進行分選以提供初始Treg細胞之群體。在一些實施例中，精細分選包含使CD45RA+ 細胞與CD1d-tet、6B11單株抗體或其功能片段或其組合在條件下接觸以提供CD1d-tet+ 細胞、6B11+ 細胞或兩者之群體，且回收CD1d-tet+ 細胞、6B11+ 細胞或兩者之群體。實例分選方案 3 在某些實施例中，產生醫藥組合物之方法包含：A. 使樣品與特異性結合Lin+ 標記物之結合分子在條件下接觸以提供Lin+ 細胞之群體及Lin- 細胞之群體，且回收Lin- 細胞之該群體；B. 使該等Lin- 細胞與特異性結合CD34之結合分子及特異性結合CD25之結合分子在條件下接觸以提供CD34+ 細胞之群體、CD25+ 細胞之群體及CD34- CD25- 細胞之群體，且回收CD34+ 細胞及CD25+ 細胞並回收CD34- CD25- 細胞之該群體；及C. 使CD34- CD25- 細胞之該群體與特異性結合CD45RA之結合分子在條件下接觸以提供CD45RA+ 細胞之群體及CD45RA- 細胞之群體，且回收CD45RA- 之群體(參見圖4)。 在一些實施例中，步驟B進一步包含使Lin- 細胞與CD1d-tet、6B11單株抗體或其功能片段或其組合在條件下接觸以提供CD1d-tet+ 細胞、6B11+ 細胞或其組合之群體，且回收CD1d-tet+ 細胞、6B11+ 細胞或其組合(參見圖4)。在一些實施例中，該方法進一步包含對CD34+ 細胞、CD25+ 細胞、CD1d-tet+ 細胞、6B11+ 細胞或其任何組合實施精細分選，藉此提供CD34+ 細胞、CD25+ 細胞、CD1d-tet+ 細胞、6B11+ 細胞或其任何組合之群體(參見圖4)。在一些實施例中，精細分選包含使CD34+ 細胞、CD25+ 細胞、CD1d-tet+ 細胞、6B11+ 細胞或其任何組合與特異性結合CD34之結合分子、特異性結合CD4之結合分子、特異性結合CD25之結合分子、特異性結合CD127之結合分子、CD1d-tet、6B11單株抗體或其功能片段或其任何組合在條件下接觸以提供高度富含CD34+ 細胞、CD4+ CD25+ CD127-/Lo 細胞、CD1d-tet+ 細胞或其組合之細胞群體(參見圖4)。實例分選方案 4 在某些實施例中，產生醫藥組合物之方法包含：A. 對樣品實施粗分選以提供Lin+ 細胞之群體及Lin- 細胞之群體，且回收Lin- 細胞之群體；B. 對Lin- 細胞之群體實施粗分選以提供富含HSPC及Tmem之群體及CD45RA+ 細胞之群體，且回收HSPC及Tmem之該群體並回收CD45RA+ 細胞之該群體；及C. 對CD45RA+ 細胞之該群體實施精細分選以提供Treg之群體(參見圖5)。在一些實施例中，精細分選進一步包含使CD45RA+ 細胞之該群體與特異性結合CD34之結合分子、特異性結合CD4之結合分子及特異性結合CD127之結合分子在條件下接觸以提供CD34+細胞之群體及CD4+ CD25+ CD127-/Lo 細胞之群體，且回收CD34+細胞之群體及CD4+ CD25+ CD127-/Lo 細胞之群體。在一些實施例中，精細分選進一步包含使群體CD45RA+ 細胞與CD1d-tet、6B11單株抗體或其功能片段或其組合接觸，且回收CD1d-tet+ 細胞、6B11+ 細胞或其組合之群體。在一些實施例中，粗分選包含密度分離、四聚體抗體複合物調介之富集/空乏、磁力活化細胞分選、血球分離、白血球分離或其任何組合。實例分選方案 5 在某些實施例中，產生醫藥組合物之方法包含：A. 使樣品與特異性結合CD34之結合分子在條件下接觸以提供CD34+ 細胞之群體及CD34- 細胞之群體，回收CD34+ 細胞之該群體且回收CD34- 細胞之該群體；B. 使CD34- 細胞之該群體與特異性結合CD25之結合分子在條件下接觸以提供CD25+ 細胞之群體及CD25- 細胞之群體，回收CD25+ 細胞之該群體且回收CD25- 細胞之該群體；及C. 使CD25- 細胞之該群體與特異性結合CD45RA之結合分子在條件下接觸以提供CD45RA+ 細胞之群體及CD45RA- 細胞之群體，且回收CD45RA- 細胞之群體(參見圖6、10、11、12)。 在一些實施例中，步驟B進一步包含：i. 使CD34- 細胞之該群體與CD1d-tet、6B11單株抗體或其功能片段或其組合在條件下接觸以提供CD1d-tet+ 細胞之群體、6B11+ 細胞之群體或其組合及CD1d-tet- 細胞之群體、6B11- 細胞之群體或其組合，且回收CD1d-tet+ 細胞之群體、6B11+ 細胞之群體或其組合，藉此提供iNKT空乏細胞之群體且回收CD1d-tet- 細胞之群體、6B11- 細胞之群體或兩者，藉此提供iNKT空乏細胞之群體；及ii. 使iNKT空乏細胞之該群體與特異性結合CD25之結合分子在條件下接觸以提供CD25+ 細胞之群體及CD25- 細胞之群體，且回收CD25+ 細胞之該群體並回收CD25- 細胞之群體(參見圖6)。 在一些實施例中，步驟B包含使CD34- 細胞之該群體與特異性結合CD25之結合分子及CD1d-tet、6B11單株抗體或其功能片段或其組合在條件下接觸以提供CD25+ 細胞之群體及CD1d-tet+ 細胞、6B11+ 細胞之群體或其組合及CD34- CD25- iNKT空乏細胞之群體，且回收CD25+ 細胞之該群體及CD1d-tet+ 細胞、6B11+ 細胞或其組合之該群體，且回收CD34- CD25- iNKT空乏細胞之該群體(參見圖10)。 在一些實施例中，步驟B包含：i. 使CD34- 細胞之該群體與特異性結合CD25之結合分子及CD1d-tet、6B11單株抗體或其功能片段或其組合在條件下接觸以提供CD25+ 細胞之群體及CD1d-tet+ 細胞、6B11+ 細胞之群體或其組合以及CD34- CD25- iNKT空乏細胞之群體，且回收CD25+ 細胞之該群體及CD1d-tet+ 細胞、6B11+ 細胞或其組合之該群體，且回收CD34- CD25- iNKT空乏細胞之該群體；及ii. 藉由使細胞與特異性結合CD4之結合分子、特異性結合CD25之結合分子、特異性結合CD127之結合分子、CD1d-tet、6B11單株抗體或其功能片段或其任何組合接觸對CD25+ 細胞之該群體及CD1d-tet+ 細胞、6B11+ 細胞或其組合之該群體實施精細分選，以提供富含CD4+ CD25+ CD127-/Lo 細胞、CD1d-tet+ 細胞、6B11+ 細胞或其任何組合之細胞群體(參見圖11)。 在一些實施例中，步驟B包含：i. 使CD34- 細胞之該群體與包含標籤(例如螢光藻紅素)之抗CD25抗體及生物素化之6B11單株抗體(6B11-生物素)接觸。然後使6B11-生物素與偶聯有與抗CD25抗體相同的標籤之鏈黴抗生物素蛋白接觸。在一些實施例中，鏈黴抗生物素蛋白偶聯至藻紅素/Cy7 (SAv-PE/Cy7)。然後使細胞與抗標籤磁性粒子接觸。在一些實施例中，磁性粒子係抗PE磁性粒子(例如磁珠)。然後使用MACS分離CD25+ 細胞及6B11結合細胞以產生CD25+ 細胞及6B11+ 細胞之群體及CD34- CD25- iNKT空乏細胞之群體(參見圖15)。在一些實施例中，步驟B進一步包含：ii. 藉由使細胞與特異性結合CD4之結合分子及特異性結合CD127之結合分子在條件下接觸對CD25+ 細胞及6B11+ 細胞之群體實施精細分選，以提供富含CD4+ CD25+ CD127-/Lo 細胞之細胞群體及富含6B11+ CD127+ 細胞之細胞群體或其任何組合。在一些實施例中，CD4結合分子係經抗CD4 PerCP標記之抗體。在一些實施例中，CD127結合分子係經抗CD127 APC標記之抗體。精細分選可包含FACS，其中檢測CD25-PE、6B11-生物素-SAv-PE/Cy7、CD4-PerCP及CD127-APC。 在一些實施例中，藉由精細分選進一步對步驟A中所回收之CD34+ 細胞之該群體、步驟B中所回收之CD25+ 細胞之該群體或兩者進行處理，其包含使CD34+ 細胞、CD25+ 細胞或其組合與特異性結合CD34之結合分子、特異性結合CD127之結合分子、特異性結合CD45RA之結合分子或其任何組合接觸(參見圖12)。實例分選方案 6 在某些實施例中，產生醫藥組合物之方法包含：A. 使樣品與特異性結合CD34之結合分子及特異性結合CD25之結合分子在條件下接觸以提供CD34+ 細胞之群體、CD25+ 細胞之群體及CD34- CD25- 細胞之群體，回收CD34+ 細胞之該群體及CD25+ 細胞之該群體，且回收CD34- CD25- 細胞之該群體；及B. 使CD34- CD25- 細胞之該群體與特異性結合CD45RA之結合分子在條件下接觸以提供CD45RA+ 細胞之群體及CD45RA- 細胞之群體，且回收CD45RA- 細胞之該群體(參見圖7)。在一些實施例中，步驟A進一步包含使樣品與CD1d-tet、6B11單株抗體或其功能片段或其組合在條件下接觸以提供CD1d-tet+ 細胞之群體、6B11+ 細胞之群體或其組合，且回收CD1d-tet+ 細胞之該群體、6B11+ 細胞之該群體或其組合(參見圖7)。在一些實施例中，該方法進一步包含對步驟A中所提供之細胞群體實施精細分選，其係藉由使該等細胞與特異性結合CD34之結合分子、特異性結合CD4之結合分子、特異性結合CD25之結合分子、特異性結合CD127之結合分子、CD1d-tet或其任何組合接觸來實施，以提供富含CD34+ 細胞、CD4+ CD25+ CD127-/Lo 細胞、CD1d-tet+ 細胞或其任何組合之細胞群體(參見圖8)。實例分選方案 7 在某些實施例中，產生醫藥組合物之該等方法包含同時處理樣品以提供包含HSPC、Tmem、初始Treg、記憶性Treg且包含少於5%之不期望細胞類型之富集細胞群體(參見圖13)。在一些實施例中，使樣品與以下各項接觸：特異性結合CD34之結合分子、特異性結合CD4之結合分子、特異性結合CD8之結合分子、特異性結合CD25之結合分子、特異性結合CD127之結合分子、特異性結合CD45RA之結合分子、特異性結合CD45RO之結合分子或其任何組合。在一些實施例中，該方法進一步包含使樣品與CD1d-tet、6B11單株抗體或其功能片段或其組合接觸，且回收CD1d-tet+ 細胞之群體、6B11+ 細胞之群體或其組合。在一些實施例中，使樣品與特異性結合CD34之結合分子接觸且回收CD34+ 細胞之群體，藉此產生HSPC之群體。在一些實施例中，使樣品與特異性結合CD3之結合分子接觸且不結合特異性結合CD45RA之結合分子、特異性結合CD45RO之結合分子或其組合，且回收CD3+ CD45RA- CD45RO+ 細胞之群體。在一些實施例中，使樣品與特異性結合CD4之結合分子、特異性結合CD25之結合分子、特異性結合CD127之結合分子、特異性結合CD45RA之結合分子、特異性結合CD45RO之結合分子或其任何組合接觸，且回收CD4+ CD25+ CD127-/lo CD45RA+ CD45RO- 細胞之群體、CD4+ CD25+ CD127-/lo CD45RA- CD45RO+ 細胞之群體。 在上文所提及之實施例中之任一者中，治療性細胞群體包含少於2%、少於1%、少於0.5%、少於0.1%、少於0.01%、少於0.001%之初始習用αβ-T細胞。 在上文所提及之實施例中之任一者中，Lin+ 標記物可係CD19、CD11c、CD66B、CD14、CD20或其任何組合。 在上文所提及之實施例中之任一者中，特異性結合CD34、Lin+標記物、CD25、CD45RA、CDR45RO、CD4、CD8、CD127、CD90、CD133、CD38、CD95、CD122、CXCR3、LFA-1、CD62L、CCR7或任何其他細胞標記物之分子係抗體或抗體片段。 如本文所用之術語「抗體」係廣義術語且係以其普通意義使用，包括(但不限於)指天然抗體以及非天然抗體，包括(例如)單鏈抗體、嵌合、雙功能及人類化抗體以及其抗原結合片段。應瞭解，自其產生抗體之分子的表位或區域之選擇將決定其特異性，例如對於分子之各種形式(若存在)或對於全部(例如所有或實質上所有分子)。 產生抗體之方法充分確立。熟習此項技術者應認識到許多程序可用於產生抗體，例如如Antibodies, A Laboratory Manual, Ed Harlow及David Lane, Cold Spring Harbor Laboratory (1988), Cold Spring Harbor, N.Y.中所闡述。熟習此項技術者亦應瞭解，可自遺傳資訊藉由各種程序來製備模擬抗體之結合片段或Fab片段(Antibody Engineering: A Practical Approach (Borrebaeck, C.編輯), 1995, Oxford University Press, Oxford; J. Immunol. 149, 3914-3920 (1992))。針對諸如蛋白質及標記物等分子之單株及多株抗體亦可商業購得(R and D Systems, Minneapolis, Minn.；HyTest Ltd., Turk, Finland；Abcam Inc., Cambridge, Mass., USA, Life Diagnostics, Inc., West Chester, Pa., USA；Fitzgerald Industries International, Inc., Concord, Mass., USA；BiosPacific, Emeryville, Calif.)。 在一些實施例中，抗體係多株抗體。在其他實施例中，抗體係單株抗體。在實施例中，本揭示內容之抗體與根據本發明方法所提取之細胞群體之下游應用相容。舉例而言，本揭示內容之抗體可係非免疫原性人類化抗體。在一些實施例中，本揭示內容之抗體包含可用於在樣品提取之前或之後固定抗體之表位標籤，藉此自所提取之細胞群體空乏抗體。 捕獲結合配偶體及檢測結合配偶體對(例如，捕獲及檢測抗體對)可用於本揭示內容之實施例中。因此，在一些實施例中，使用分選及純化方案，其中通常使用兩種結合配偶體(例如，兩種抗體)。一種結合配偶體係捕獲配偶體，其通常固定於粒子上，且另一結合配偶體係檢測結合配偶體，其通常附接可檢測之標記。此等抗體對可自若干個商業來源獲得，例如BiosPacific, Emeryville, Calif.。抗體對亦可藉由業內所熟知之方法來設計及製備。在具體實施例中，抗體經生物素化或經生物素標記。 在一些實施例中，存在第二成像組分，其非特異性地結合起始細胞群體之所有成員。因此，可讀取此信號以使空腔之間之螢光量正規化。一個實例係將結合在起始細胞群體之細胞表面上遍在表現的一或多種蛋白質之抗體。 在一些實施例中，抗體或抗體片段偶合至螢光染料、半抗原或磁性粒子或經其標記。 可用於標記結合配偶體以使其能夠在粒子混合物中進行檢測或區分之若干種策略為業內所熟知。該等標記可藉由任何已知方式來附接，包括利用非特異性或特異性相互作用之方法。另外，可直接或藉助結合配偶體來完成標記。 發射(例如來自部分之螢光)應足夠，以容許使用本文中所闡述之檢測器進行檢測。通常，本揭示內容之組合物及方法利用高度螢光部分，例如當在部分之激發波長下由電磁輻射源刺激時能夠發射電磁輻射之部分。若干個部分適用於本揭示內容之組合物及方法。 可藉由除電磁輻射以外之能源活化之標記亦可用於本揭示內容。此等標記可藉由(例如)電、熱或化學反應(例如化學發光標記)來活化。同樣，多種酶促活化之標記為業內人士所熟知。 通常，部分之螢光涉及以下各項之組合：量子效率及足以使得部分可在所揭示檢測器中高於背景值而被檢測之光漂白缺乏、以及分析之期望檢測極限、準確度及精密度之所需一致性。 此外，部分具有與其在所選分析中之用途一致之性質。在一些實施例中，分析係免疫分析，其中螢光部分附接至抗體；該部分必須具有使得其不與其他抗體或蛋白質聚集，或其經歷不超過與分析所需準確度及精密度一致之聚集的性質。在一些實施例中，螢光部分染料分子具有以下之組合：1) 高吸收係數；2) 高量子產率；3) 高光穩定性(低光漂白)；及4) 與所關注分子(例如蛋白質)之標記之相容性，使得其可使用本揭示內容之分析儀及系統進行分析(例如不會引起所關注蛋白質之沈澱或該部分所附接之蛋白質之沈澱)。 螢光部分可包含單一實體(量子點或螢光分子)或複數個實體(例如複數個螢光分子)。應瞭解，當「部分」(如本文所用之該術語)係指一組螢光實體(例如複數個螢光染料分子)時，每一個別實體可單獨地附接至結合配偶體或該等實體可一起附接，只要該等實體作為一個團體提供可檢測到之足夠螢光即可。 在一些實施例中，螢光染料分子包含至少一個經取代之吲哚鎓環系統，其中吲哚鎓環之3-碳上之取代基含有化學反應基或偶聯物質。實例包括Alexa Fluor分子。 在一些實施例中，標記包含第一類型及第二類型之標記，例如兩種不同的ALEXA FLUOR®染料(Invitrogen)，其中第一類型及第二類型之染料分子具有不同的發射光譜。 用於螢光部分中之可用螢光實體之非包括性列表包括：ALEXA FLUOR® 488、ALEXA FLUOR® 532、ALEXA FLUOR® 555、ALEXA FLUOR® 647、ALEXA FLUOR® 700、ALEXA FLUOR® 750、螢光黃、B-藻紅素、別藻藍蛋白、PBXL-3、Atto 590及Qdot 605。 標記可藉由業內已知之任何方法附接至粒子或結合配偶體，包括吸收、共價結合、生物素/鏈黴抗生物素蛋白或其他結合對。另外，標記可藉助連接體附接。在一些實施例中，標記由分析物裂解，藉此自粒子釋放標記。或者，分析物可防止連接體之裂解。 經分離之細胞群體可立即使用或可在分離後使用業內熟知之方法在活體外培養。可將細胞群體培養於培養基中，例如RPMI-1640、DMEM、X-Vivo 10、X-vivo 15或變體及其組合。培養基可包含1 - 20%之人類血清。培養基可包含使受體活化之細胞介素或分子，例如雷帕黴素(rapamycin)、SCF、SDF-1、TPO、IL-2、IL-3、IL-4、IL-6、IL-7、IL-10、IL-15、IL-17、IL-18、IL-23、IL-33、TGF-b、IFNg、IFNa與其組合。細胞群體可用激動劑刺激，該等激動劑係例如含有結合分子(例如抗CD3、抗CD28、CD64、CD86、抗IL-21R、CD137或其組合)之多價展示之粒子(微粒、奈米粒子、蛋白質或細胞)。 另外，可將細胞冷凍或可將其在分離之前或之後冷凍。在將細胞儲存較長時期之情形下，則較佳在大約-80℃下或於液氮中儲存以確保細胞可在解凍之後再次使用。出於此目的，通常將細胞與培養基、葡萄糖等一起儲存於DMSO及/或FCS/HS中。在細胞解凍後可立即將細胞直接用於治療目的或活體外實驗，或可使用生長因子、抗原、細胞等使其擴增及/或分化。 實例1 經雕塑細胞移植物之產生 細胞之富集及空乏以多個步驟發生以調配用於輸注之最終產物。下文闡述每一選擇程序，並簡要闡述程序。此過程概述於圖14中。步驟 A ： CD34+ 細胞富集係使用CLINIMACS細胞選擇系統(Miltenyi Biotec, Bergish-Gladbach, Germany)上之免疫磁性細胞選擇來實施。簡言之，當收集兩種血球分離產物並洗滌以去除過多血漿及血小板時，將供體血球分離產物合併。根據製造商之指南，用補充有0.5% HSA (工作緩衝液)並添加IVIg以降低Miltenyi微珠試劑與細胞之非特異性結合之CLINIMACS緩衝液將體積調整至針對細胞數量及CD34+ 細胞含量所指示之體積。使用製造商之產物含量指南，用CLINIMACS CD34試劑標記細胞產物。藉由用工作緩衝液稀釋並藉由離心去除來降低未結合之試劑。將經標記之細胞產物連接至CLINIMACS裝置，其控制將細胞裝載至用於免疫磁性選擇經標記細胞之一次性使用之管路組中。藉由去除磁場來釋放保留之細胞並引導至附接至CLINIMACS管路組之陽性部分袋中。將CD34+ 富集細胞重新懸浮於作為指定輸注介質之補充有2% HSA之羅莫索-R中。保留陰性部分(CD34選擇流過物(flow-through))用於進一步細胞處理。步驟 B ： 藉由免疫磁性選擇使用CLINIMACS系統自步驟A陰性部分(CD34選擇流過物)富集調節性T細胞及iNKT細胞。調整部分體積並用PE/Cy7偶聯之CD1d四聚體試劑標記細胞。在洗滌以自細胞懸浮液去除未結合之試劑後，用Miltenyi Biotec之抗CD25及抗PE微珠試劑標記細胞，洗滌以去除未結合之珠粒，並使用LS管路組裝載至CLINIMACS上。經標記之細胞保留在磁化管柱上。在將磁場去除後，CD25+ 及CD1d+ 細胞自管柱釋放至附接至管路組之陽性部分袋。保留含有空乏CD25+ 及CD1d+ 細胞之細胞的流過物(陰性部分)以用於隨後細胞選擇程序(下文步驟C)。CD25+ 細胞及CD1d+ 細胞之富集係下文步驟D中用於進一步富集之中間步驟。步驟 C ： 藉由免疫磁性選擇使用CD45RA表現作為供體記憶細胞指示物，將CD25/CD1d富集陰性部分中之細胞分離成初始及記憶性亞群。製備細胞並用CLINIMACS CD45RA試劑標記。在洗滌以自細胞懸浮液去除未結合之試劑之後，將細胞分階段裝載至配備有空乏管路組之CLINIMACS上。經標記之細胞保留在磁化管柱上並自管柱移除至附接至管路組之靶細胞袋。將含有空乏CD45RA+ 細胞之細胞的流過部分添加至最終產物以確保包括供體記憶細胞。步驟 D ： 藉由細胞分選使用BD FACS ARIA進一步純化Treg及iNKT細胞。將在步驟B中藉由富集CD25+ 及CD1d+ 細胞回收之CD25+ 細胞進行體積調整以用於用PerCP偶聯小鼠抗人類CD4及APC偶聯小鼠抗人類CD127單株抗體試劑及額外CD25 PE (Miltenyi Biotec)及CD1d-tet PE-Cy7標記。在洗滌以去除未結合之試劑後，利用針對含有CD4-PerCP+ x CD25 PE+、CD127-APC dim/neg細胞(Treg)及CD127+ x CD1d-tet-PE/Cy7+ (iNKT)之分子表型之單一淋巴球細胞設定之門對細胞進行分選。 將自細胞選擇程序回收且意欲用於輸注之細胞亞群重新懸浮於補充有0.5% HSA (白蛋白-人類，25%, Grifols, Clayton, NC)之羅莫索-R, pH 7.2 (Hospira, Lake Forest, IL)中。將細胞部分以1×108 個細胞/ml之最大密度合併於單一血液轉移袋中，並在連續監測之安全冰箱中置於2至8℃下。 實例2 用抗iNKT抗體產生經雕塑細胞移植物 細胞之富集及空乏以多個步驟發生以調配用於輸注之最終產物。下文闡述每一選擇程序，並簡要闡述程序。此過程概述於圖15中。步驟 A ： CD34+ 細胞富集係使用CLINIMACS細胞選擇系統(Miltenyi Biotec, Bergish-Gladbach, Germany)上之免疫磁性細胞選擇來實施。簡言之，洗滌供體血球分離產物以去除過量之血漿及血小板。若收集到兩種供體血球分離產物，則將其合併。根據製造商之指南，用補充有0.5% HSA (工作緩衝液)並添加IVIg以降低Miltenyi微珠試劑與細胞之非特異性結合之CLINIMACS緩衝液將體積調整至針對細胞數量及CD34+ 細胞含量所指示之體積。使用製造商之產物含量指南，用CLINIMACS CD34試劑標記細胞產物。藉由用工作緩衝液稀釋並藉由離心去除來降低未結合之試劑。將經標記之細胞產物連接至CLINIMACS裝置，其控制將細胞裝載至用於免疫磁性選擇經標記細胞之一次性使用之管路組中。藉由去除磁場來釋放保留之細胞並引導至附接至CLINIMACS管路組之陽性部分袋中。將CD34+ 富集細胞重新懸浮於作為指定輸注介質之補充有2% HSA之羅莫索-R中。保留陰性部分(CD34選擇流過物)用於進一步細胞處理。步驟 B ： 藉由免疫磁性選擇使用CLINIMACS系統自步驟A陰性部分(CD34選擇流過物)富集調節性T細胞及iNKT細胞。調整部分體積並用抗CD25-PE (Miltenyi Biotec)及生物素偶聯6B11單株抗體(抗iNKT)標記細胞。在洗滌以自細胞懸浮液去除未結合之試劑之後，用PE/Cy7偶聯之鏈黴抗生物素蛋白標記細胞並再次洗滌。然後用抗PE微珠試劑(Miltenyi Biotec)標記細胞，洗滌以去除未結合之珠粒，並使用LS TS管路組使用CD133富集程式裝載至CLINIMACS上。經標記之細胞保留在磁化管柱上。在將磁場去除後，CD25+ 及6B11+ 細胞自管柱釋放至附接至管路組之靶標部分袋。保留含有空乏CD25+ 及6B11+ 細胞之細胞的流過物(非靶標部分)以用於隨後細胞選擇程序(下文步驟D)。CD25+ 細胞及6B11+ 細胞之富集係下文步驟C中用於進一步富集之中間步驟。步驟 C ： 藉由螢光活化細胞分選進一步純化Treg及iNKT細胞。將在步驟B中藉由富集CD25+ 及6B11+ 細胞所回收之CD25+ 細胞進行體積調整以用於用PerCP偶聯小鼠抗人類CD4 (Miltenyi Biotec)及APC偶聯小鼠抗人類CD127單株抗體試劑(Miltenyi Biotec)以及額外CD25 PE (Miltenyi Biotec)及鏈黴抗生物素蛋白PE-Cy7標記。在洗滌以去除未結合之試劑之後，利用針對含有CD4-PerCP+ x CD25 PE+、CD127-APC dim/neg細胞(Treg)及CD127+ x 6B11-PE/Cy7+ (iNKT)之分子表型之單一淋巴球細胞設定之門對細胞進行分選。步驟 D ： 藉由免疫磁性選擇使用CD45RA表現作為供體記憶細胞指示物，將CD25/6B11陰性部分中之細胞分離成初始及記憶性亞群。製備細胞並用CLINIMACS CD45RA試劑標記。在洗滌以自細胞懸浮液去除未結合之試劑之後，將細胞分階段裝載至配備有空乏管路組之CLINIMACS上。經標記之細胞保留在磁化管柱上並自管柱移除至附接至管路組之靶細胞袋。將含有空乏CD45RA+ 細胞之細胞的流過物部分添加至最終產物以確保包括供體記憶細胞。將自細胞選擇程序回收且意欲用於輸注之細胞亞群重新懸浮於補充有0.5% HSA (白蛋白-人類，25%, Grifols, Clayton, NC)之羅莫索-R, pH 7.2 (Hospira, Lake Forest, IL)中。將細胞部分以1×108 個細胞/ml之最大密度合併於單一血液轉移袋中，並在連續監測之安全冰箱中置於2至8℃下。 表1. 用於例示性經雕塑移植物組合物之試劑及靶細胞數量。 實例3清髓性造血 細胞移植 ( 同種異體 MA-HCT) 之鼠類模型中之經雕塑 細胞移植物對充滿 T 細胞及空乏 T 細胞之同種異體移植物 使用骨髓清除及細胞移植物移植之鼠類模型來評價與已知細胞移植物相比本文中所闡述之例示性經雕塑細胞移植物之性能。圖16繪示實驗程序之圖表。為模擬清髓患者，將8-12週齡BALB/c受體小鼠稱重，且然後在第-2天用來自在160 KeV下並藉助0.5 mm Cu過濾之Rad-Source RS2000輻照器之400/400雷得(rad)之分開劑量輻照。將小鼠切換至抗生素食物持續6週。為模擬殘存疾病，在-1天經由尾靜脈將2,500 - 10,000個J774 GFP-Luc細胞靜脈內注射至每一小鼠中。J774細胞系係最初源自BALB/c小鼠之骨髓細胞系且與BALB/c接受者小鼠同源。對J774細胞進行修飾以表現GFP及螢光素酶轉基因。表2中所匯總之三種不同細胞組合物用於模擬同種異體造血細胞移植(HCT)。如下文所闡述自C57B1/6小鼠之造血組織製備細胞組合物，且在第0天經由BALB/c小鼠之眼眶後脈管叢靜脈內輸注。實驗同類群組通常為5-9隻小鼠。將來自七個獨立實驗之數據合併並呈現於圖17中。 表2. 投與BALB/c小鼠之細胞組合物。 每天檢查小鼠之困厄(distress)。每週兩次量測身體狀況(BC)分數及體重。將BC ≤1.5之小鼠安樂死。死亡時體重＜70%其原始重量之小鼠評分為GVHD。移植後30天內死亡＞70%體重之小鼠評分為植入失敗。將所有死亡小鼠解剖並用螢光顯微鏡檢查肝及脾中之腫瘤生長。存在GFP+腫瘤結節評分為復發(參見圖17C)。在第+10天使一些小鼠同類群組在Xenogen IVIS100上經受生物發光成像(參見圖17D)。 接受經雕塑細胞移植物組合物之小鼠勝於所有其他同類群組(參見圖17A及B)。94%之該等小鼠存活至第+175天且無復發跡象。3%之該等小鼠死於GVHD且3%死於植入失敗。與BMT及HSPC組合物相比改良之性能指示，GvL效應一直維持，但GVHD及植入失敗率顯著降低。 相比之下，接受BMT細胞組合物之所有小鼠在第+30天之前均死於GVHD。在第+10天在生物發光成像中未在該等小鼠中發現復發跡象。此外，在屍檢分析中未觀察到造血器官上之腫瘤結節生長。此結果指示，移植物中之T細胞足以對抗癌細胞，且指示來自移植物之強GvL，儘管處於均勻致死性GVHD之背景中。應注意，在人類患者中，同種異體移植物來源與接受者在HLA-單倍型上緊密匹配，而BALB/c及C57Bl/6小鼠完全失配。因此，相對於此處所觀察到之GVHD反應，診療所中所觀察到之GVHD反應強烈減輕。 接受HSCT細胞組合物之小鼠具有混合結果。51%之小鼠長期存活至第+175天。9%之HSCT接受者死於植入失敗，如藉由在第+30天之前死亡且體重＞70%所證明。3%之小鼠死於GVHD，如在死亡前最後一次量測時體重＜70%所證明。36%之小鼠在死亡時具有復發跡象。此同類群組中之高復發率係源自HSCT後之長時間免疫抑制，此乃因在移植後前幾週內T細胞計數仍較低。相比之下，人類HSCT接受者在移植後第一年內亦遭受低T細胞計數及較高之復發率。因此，HSCT移植模型反映由於T細胞空乏所致之人類患者GvL缺乏。相對於充滿T細胞之同種異體移植物，用CD34+ 同種異體移植物治療之人類患者中觀察到增加之復發率。 實例4在同種異體 MA-HCT 之鼠類模型中藉由 MACS / FACS 對僅 MACS 所產生之經雕塑 細胞移植物之比較 此實驗對上文所示之經雕塑細胞移植物組合物數據與另一同類群組之小鼠進行比較。在用僅由MACS產生之經雕塑細胞移植物或由MACS及FACS之組合產生的經雕塑細胞移植物治療之動物中評價GVL及GVHD (參見表3)。準備該等小鼠並遵循上文進行。同類群組為5-7隻小鼠且數據係彙集自3個獨立實驗。 表3. 僅由MACS或由MACS及FACS之組合產生之經雕塑細胞移植物 使用如實例3中所闡述之MACS及FACS之組合製備MACS/FACS經雕塑細胞移植物小鼠。FACS純度通常大於95%。相比之下，僅MACS富集之樣品之純度通常為20%-80%。僅MACS小鼠之同種異體淋巴球並未藉由FACS進一步純化，且此組合物之治療益處嚴重受損。與MACS/FACS經雕塑細胞移植物小鼠之94%存活率相比，至第+175天僅54%之僅MACS之小鼠存活(參見圖18)。所有死亡病例均展現體重＜70%之起始重量，此指示GVHD為死亡原因。該等小鼠中無小鼠顯示屍檢復發跡象。與MACS/FACS製造方法相比，僅MACS製造中高程度之致死性GVHD展示在清髓性造血細胞移植(MA-HCT)之移植物改造情形下該等細胞群體之純度之重要性。儘管不希望受理論束縛，但用僅MACS之經雕塑細胞移植物治療之小鼠之GVHD盛行率認為係Tcon細胞污染之結果。 實例5在同種異體 MA-HCT 鼠類模型中經雕塑 細胞移植物對具有反向添加 T 細胞之 BMT 之比較 將經雕塑細胞移植物組合物與投與BMT組合物之同類群組進行比較，該等投與BMT組合物之同類群組具有不同量之T細胞添加至cKIT+ HSPC部分(HSPC + T細胞反向添加)。作為背景，T細胞反向添加係骨髓移植之實驗性臨床方法。作為實例，臨床中心實施T細胞空乏(例如通常CD34+細胞CLINIMACS分離)，且然後將一些T細胞反向添加至移植物或在晚些時候將其移植。注意，在反向添加程序中，T細胞係大量T細胞，此乃因T細胞係自所收集之CD34- 部分提供且未經進一步處理。通常以較BMT移植物中之天然含量低10-1000倍之含量重新引入T細胞。 在本實例中，向每一反向添加同類群組投與cKIT+ HSPC部分，其含有1 × 105 個、2 × 105 個、4 × 105 個或2 × 106 個來自脾細胞之反向添加T細胞。相比之下，經雕塑細胞移植物含有平均2.5 × 105 個T細胞。然而，一些經雕塑細胞移植物實驗採用多達5 × 106 個經雕塑T細胞，而其他實驗採用少至1 × 105 個經雕塑T細胞。 在完全失配C57Bl/6淋巴球授受性地轉移至BALB/c小鼠中之情形下，即使1 × 105 個T細胞即足以在100%之接受者中誘發致死性GVHD (圖19)。注意，在投與介於1 × 105 個與4 × 105 個之間的反向添加T細胞之小鼠中死亡時間延長，但無小鼠長期存活。相比之下，94% (30/32)之用經雕塑細胞移植物治療之小鼠展示至第+175天之長期存活至。屍檢時無小鼠顯示復發跡象。因此，經雕塑細胞移植物組合物之T細胞組分既減輕GVHD反應又賦予GVL治療益處。在簡單地將降低數量之T細胞反向添加至cKIT+磁力富集之骨髓細胞中未觀察到類似結果。 實例6在同種異體 HCT 之異種移植物模型中利用人類源雕塑之 細胞移植物對未處理 PBMC 之 GVHD 發作之延遲時間 TrimaAccel® LRS室之白血球濃縮物係在來自4名人類供體之血小板去除(Plateletpheresis)程序之後回收的。藉由密度梯度(Ficoll)及ACK溶解去除紅血球。將所得PBMC洗滌且2.5 × 108 個來自每一供體之細胞經處理成經雕塑細胞移植物淋巴球部分。更特定而言，最初使用MACS處理Treg及iNKT (亦即，粗分選)。將樣品用抗CD25 PE及生物素偶聯之抗iNKT抗體6B11染色，且然後洗滌；用鏈黴抗生物素蛋白PE-Cy7染色且然後再次洗滌；且用抗PE微珠染色。然後使用Miltenyi AutoMACS上之Possel_S程式對樣品進行正向富集。將經正向富集之部分進一步用抗CD127 APC及抗CD4 PerCP染色，且根據以下參數進一步在BD FACSAriaII上純化至＞98純度%：Treg：CD4+ CD25+ CD127- 且iNKT：CD127+ 6B11+ 。 將來自AutoMACS管柱之陰性部分進一步用抗CD45RA微珠染色，且使用Deplete_S程式來空乏CD45RA+部分中之初始T細胞。剩餘細胞係CD45RA-CD45RO+，其指示記憶性T細胞。 基於每一亞型(其在供體之間有所不同)之最終產率來調配經雕塑細胞移植物。PBMC群組經調配以使相等數量之CD3+ T細胞與來自匹配供體之經雕塑細胞移植物組合物中之記憶性T細胞之數量匹配。最終調配物範圍呈現於表4中。 表4. 淋巴球調配物 對於異種移植物實驗而言，使用免疫缺陷(NSG)小鼠，此乃因功能性鼠類免疫系統將基於物種特異性差異迅速排斥所進入之人類組織。缺乏B、T及NK細胞之NSG小鼠使得其成為用於異種移植物實驗之適宜宿主。為進一步使宿主準備植入淋巴球，給予小鼠非致死劑量之輻射。NSG利用來自在160 KeV下並藉助0.5 mm Cu過濾之Rad-Source RS2000輻照器之250雷得輻照且切換至抗生素食物。在同一天，將經調配之細胞注射至5隻小鼠/每一供體之同類群組中，且如上文所闡述進行追蹤。在此情形下，已知人類PBMC引發強烈GVHD反應。結果展示，與僅15%之接受PBMC中相等劑量之CD3+細胞之小鼠相比，70%之接受經雕塑細胞移植物淋巴球之小鼠存活至第+90天(參見圖20)。在所有死亡病例中，GVHD均被評定為死亡原因。人類淋巴球針對鼠類組織之異種反應強烈；然而，經雕塑細胞移植物不僅延遲致死性GVHD之發作(其將具有臨床價值)，而且其使得大部分小鼠持久存活。 實例7調節性 T 細胞及 iNKT 之分離 以下實驗展示產生用於經雕塑細胞移植物組合物及療法中之Treg及iNKT細胞部分之方法。外周血單核球(PBMC)係如實例6自來自3個供體之膚色血球層LRS室分離。將PBMC合併且然後以2 × 108 個細胞/ml之濃度重新懸浮並染色。將Treg用抗CD25 PE染色並將iNKT細胞用生物素偶聯6B11抗體(抗iNKT)在室溫染色30分鐘，洗，且然後用鏈黴抗生物素蛋白PE-Cy7在室溫染色10分鐘。藉由用緩衝液洗滌細胞將過量抗體去除，之後以2 × 108 個細胞/mL用抗PE微珠染色。將細胞用抗PE微珠在室溫下染色30分鐘。染色後，將細胞用緩衝液洗滌並藉助40微米孔網過濾以在分離之前去除團塊。使用CLINIMACS LS TS管路組使用製造商之CD133富集方案(裝載速度：10 mL / min，3次再裝載)來分選細胞。Treg及iNKT富集細胞係在陽性部分中收集且剩餘細胞係在陰性部分中收集。將相對於每一樣品之所量測樣品體積之已知體積的一部分移除並在Beckman Coulter Cytoflex上使用參考珠粒進行計數並用於計算產率。 藉由計算經富集部分中Treg及iNKT細胞相對於富集前細胞之純度及產率評價自PBMC分離Treg及iNKT細胞之性能。在使用抗PE珠粒之代表性實驗中，Treg之純度自約5%增加至60% (圖21A及表5)。所測試之抗PE珠粒將NKT細胞之純度自0.02%增加至0.04% (圖21B及表6)。 表5. Treg細胞之純度百分比及產率。 表6. iNKT細胞之純度百分比及產率 該等數據展示，藉由小心地滴定磁力選擇試劑，可在不有害地損害產率之情形下獲得較高純度之富集細胞。另外，可以與粗製PBMC產物類似或相同之條件再處理陰性部分以回收更多靶細胞。此意外的發現使得滿足CLINIMACS後Treg/iNKT部分之目標規格之過程成為可能。 實例8記憶性 T 細胞之分離 PBMC係如實例6自來自3個供體之膚色血球層LRS室分離。將PBMC合併且然後以2 × 108 個細胞/mL將1 × 109 個細胞重新懸浮。用製造商推薦使用之CD45RA微珠之一半(0.5 µL抗CD45RA / 6.6 × 106 個PBMC，而非1.0 µL抗CD45RA / 6.6 × 106 個PBMC)將細胞染色。洗滌細胞並在CLINIMACS Depletion 2.1 (6 mL/min流速)上運行。收穫陽性及陰性部分二者並分析。將相對於每一樣品之所量測樣品部分體積之已知體積的一部分移除並用針對CD3、CD45RA及CD45RO之螢光偶聯單株抗體染色，洗滌，且在Beckman Coulter CYTOFLEX流式細胞儀上使用參考珠粒計數以計算純度及產率(圖22)。 藉由計算經富集部分中CD3+ CD45RA+ 及CD3+ CD45RO+ 細胞相對於富集前細胞之純度及產率評價分離初始T細胞(Tn)及記憶性T細胞之性能。使用CD45RA微珠之製造商推薦劑量之一半，Tmem對Tn之比率自起始PBMC樣品中之2.25:1變為處理樣品中之50298:1 (表7)。此外，此過程後Tmem之產率為27.5%。該等研究展示用降低量之CD45RA微珠製造經雕塑細胞移植物之可行性。 表7. 針對空乏CD45RA+ 細胞使用磁力分選富集記憶性T細胞之性能 實例9調節性 T 細胞及初始調節性 T 細胞之分離 表徵Treg群體之以下實驗產生本文中所揭示之例示性方法。PBMC係如實例6自來自2個供體之膚色血球層LRS室分離。將PBMC合併且然後以2 × 108 個細胞/ml之濃度重新懸浮並染色。使用抗CD25磁性微珠分選出Treg。使用CLINIMACS LS TS管路組使用製造商之CD133空乏方案(裝載速度：10 mL / min，3次再裝載)來分選細胞。Treg富集細胞係在陽性部分中收集且剩餘細胞係在陰性部分中收集。 根據製造商之說明書將Treg富集部分用抗CD25 PE、CD4PerCP、CD127APC、CD45RA-FITC及CD45RO-APC-Cy7進行染色。藉由用緩衝液洗滌細胞將過量抗體去除。將Treg富集部分在Beckman Coulter Cytoflex上使用參考珠粒進行計數並用於計算純度百分比及產率。藉由計算經富集部分中Treg細胞相對於富集前細胞之純度及產率評價自PBMC分離Treg之性能。 圖23A展示Treg陽性部分包含88.5%之CD4+ CD25+ 細胞，其中81.0%為CD127+ 。另外，圖23A展示CD4+ CD25+ CD127+ 細胞群體(Treg)包含67.1%之記憶性Treg (CD45RO+ )及17.8%之初始Treg (CD45RA+ )。圖23B提供Treg陽性部分中總體Treg及初始Treg之純度及產率之匯總。 此數據展示，本文中所闡述之方法提供包括大量原本在CD45RA空乏步驟中將丟失之初始Treg之Treg群體。 上文所闡述之各個實施例可經組合以提供其他實施例。本說明書中所提及之所有美國專利、美國專利申請公開案、美國專利申請案、外國專利、外國專利申請案及非專利出版物(包括(但不限於)於2016年11月14日提出申請之美國臨時專利申請案第62/421,979號)均係以全文引用的方式併入本文中。若需要採用各種專利、申請案及公開案之概念來提供其他實施例，則可修改實施例之態樣。 鑒於上文詳述之說明可對實施例作出此等及其他改變。一般而言，在以下申請專利範圍中，所用術語不應解釋為將申請專利範圍限於說明書及申請專利範圍中所揭示之特定實施例，而應解釋為包括所有可能實施例以及此等申請專利範圍所賦予之等效物之全部範圍。因此，申請專利範圍並不受本揭示內容限制。
圖1A-B：圖1A顯示用於產生經雕塑移植細胞組合物之方法之示意圖示。圖1B顯示用於產生經雕塑移植細胞組合物之方法之示意圖示。 圖2A-B：圖2A顯示用於產生經雕塑移植細胞組合物之方法之示意圖示。圖2B顯示用於產生經雕塑移植細胞組合物之方法之示意圖示。 圖3顯示用於產生經雕塑移植細胞組合物之方法之示意圖示。 圖4顯示用於產生經雕塑移植細胞組合物之方法之示意圖示。 圖5顯示用於產生經雕塑移植細胞組合物之方法之示意圖示。 圖6顯示用於產生經雕塑移植細胞組合物之方法之示意圖示。 圖7顯示用於產生經雕塑移植細胞組合物之方法之示意圖示。 圖8顯示用於產生經雕塑移植細胞組合物之方法之示意圖示。 圖9顯示用於產生經雕塑移植細胞組合物之方法之示意圖示。 圖10顯示用於產生經雕塑移植細胞組合物之方法之示意圖示。 圖11顯示用於產生經雕塑移植細胞組合物之方法之示意圖示。 圖12顯示用於產生經雕塑移植細胞組合物之方法之示意圖示。 圖13顯示用於產生經雕塑移植細胞組合物之方法之示意圖示。 圖14顯示用於產生經雕塑移植細胞組合物之方法之示意圖示。 圖15顯示用於產生經雕塑移植細胞組合物之方法之示意圖示。 圖16繪示與骨髓移植(BMT)及造血幹細胞移植(HSCT)組合物相比評價經雕塑細胞移植物之性能之實驗設計。 圖17A-D顯示與骨髓移植(BMT)及造血幹細胞移植(HSCT)組合物相比，經雕塑細胞移植物之性能。圖17A. 隨時間之存活百分比之卡普蘭-邁耶(Kaplan-Meier)曲線。圖17B. 按總體存活、復發、植入失敗及GVHD評價之最終結果。圖17C. 自HSCT小鼠解剖之脾中J774 GPF-Luc腫瘤之例示性顯微照片。圖17D. 比較在第+10天使用Xenogen IVIS100產生之GFP+細胞之存在的代表性生物發光影像。 圖18繪示經用磁力分選(MACS)及螢光活化分選(FACS)產生之經雕塑細胞移植物治療與僅用MACS產生之經雕塑細胞移植物治療相比小鼠存活百分比之卡普蘭-邁耶曲線。 圖19繪示卡普蘭-邁耶曲線，其顯示投與經雕塑細胞移植物之小鼠與投與包括在分離後反向添加之T細胞之CD34+ 細胞組合物之小鼠相對之存活。 圖20繪示顯示授受性轉移之異種移植物模型中存活小鼠之卡普蘭-邁耶曲線，其中小鼠之同類群組投與人類PBMC或源自人類組織之經雕塑細胞移植物組合物。 圖21A-B繪示使用MACS富集來自外周血單核球(PBMC)之調節性T細胞及iNKT細胞。圖21A顯示流式細胞術數據，其顯示預分選PBMC及富集群體中Treg之純度%及產率%。圖21B顯示流式細胞術數據，其顯示預分選PBMC及富集群體中iNKT細胞之純度%及產率%。 圖22A-B繪示使用磁力分選富集來自PBMC之記憶性T細胞。圖22A顯示使用磁力分選PBMC產生之CD3+ CD45RO+ 細胞之產率%及初始T:記憶性T細胞之比率。圖22B顯示流式細胞術數據，其顯示合併之PBMC及CD45RA空乏樣品中之CD45RO及CD45RA細胞。 圖23A-B繪示CD25+ 細胞之磁力分離。圖23A顯示經磁力分離之CD25+細胞之流式細胞術分析，其展示CD25+ CD127+ Treg之有效分離並表徵記憶性Treg及初始Treg細胞之亞群體。圖23B顯示針對來自兩個供體之Treg及初始Treg之磁力分離策略之例示性性能。

Claims (183)

  1. 一種醫藥組合物，其包含富含造血幹細胞/祖細胞(HSPC)、記憶性T細胞(Tmem)及調節性T細胞(Treg)之治療性細胞群體，且其中該等細胞群體空乏初始習用αβ-T細胞，其中該醫藥組合物包含小於1:5之初始習用αβ-T細胞對Treg之比率。
  2. 如請求項1之醫藥組合物，其進一步包含不變天然殺手T細胞(iNKT)之富集群體。
  3. 如請求項1或2之醫藥組合物，其包含一或多個單位劑量之細胞移植物，其中每一單位劑量之細胞移植物包含接受該細胞移植物之個體體重每公斤(kg)的治療性細胞群體，且其中每一單位劑量之治療性細胞群體包含： 超過3 × 105 個造血幹細胞/祖細胞(HSPC)， 超過3 × 105 個記憶性T細胞(Tmem)， 超過5 × 105 個調節性T細胞(Treg)，及 少於3 × 105 個初始習用αβ-T。
  4. 如請求項3之醫藥組合物，其中該單位劑量進一步包含超過0.5 × 103 個iNKT細胞。
  5. 如請求項1至4中任一項之醫藥組合物，其中每一單位劑量之治療性細胞群體包含： 1.0 × 106 至50 × 106 個造血幹細胞/祖細胞(HSPC)， 0.3 × 106 至1000 × 106 個記憶性T細胞(Tmem)， 0.5 × 106 至1000 × 106 個調節性T細胞(Treg)，及 少於3 × 105 個初始習用αβ-T。
  6. 如前述請求項中任一項之醫藥組合物，其中該單位劑量進一步包含濃度0.5 × 103 至2000 × 103 個細胞/kg之不變天然殺手T (iNKT)細胞。
  7. 如前述請求項中任一項之醫藥組合物，其中該Treg包含初始Treg之群體、記憶性Treg之群體或兩者。
  8. 如前述請求項中任一項之醫藥組合物，其中該Tmem包含T中央記憶細胞(TCM )之群體、T效應記憶細胞(TEM )之群體或其任何組合。
  9. 如前述請求項中任一項之醫藥組合物，其包含T中央記憶幹細胞(T stem central memory cells)(TSCM )之群體。
  10. 如前述請求項中任一項之醫藥組合物，其中該等HSPC係CD34+ 。
  11. 如前述請求項中任一項之醫藥組合物，其中該等HSPC係CD133+ 、CD90+ 、CD38- 、CD45RA- 、Lin- 或其任何組合。
  12. 如前述請求項中任一項之醫藥組合物，其中該等HSPC係cKIT+ 。
  13. 如前述請求項中任一項之醫藥組合物，其中該等HSPC係CD19- 、TCRα- 或其組合。
  14. 如前述請求項中任一項之醫藥組合物，其中該等Tmem係CD3+ 、CD45RA- 、CD45RO+ 或其任何組合。
  15. 如前述請求項中任一項之醫藥組合物，其中該等Treg係CD4+ 、CD25+ 、CD127-/lo 、FoxP3+ 或其任何組合。
  16. 如前述請求項中任一項之醫藥組合物，其中該等初始Treg係CD4+ 、CD25+ 、CD127-/lo 、FoxP3+ 、CD45RA+ 、CD45RO- 或其任何組合。
  17. 如前述請求項中任一項之醫藥組合物，其中該等記憶性Treg係CD4+ 、CD25+ 、CD127-/lo 、FoxP3+ 、CD45RA- 、CD45RO+ 或其任何組合。
  18. 如前述請求項中任一項之醫藥組合物，其中該等TSCM 係CD45RA+ 及CD4+ 或CD8+ 。
  19. 如請求項18之醫藥組合物，其中該等TSCM 係CD95+ 、CD122+ 、CXCR3+ 、LFA-1+ 或其任何組合。
  20. 如前述請求項中任一項之醫藥組合物，其中該等TCM 係CD45RO+ 及CD4+ 或CD8+ 。
  21. 如請求項20之醫藥組合物，其中該等TCM 係CD45RA- 、CD62L+ 、CCR7+ 或其任何組合。
  22. 如前述請求項中任一項之醫藥組合物，其中該等TEM 係CD4+ 、CD45RO+ 、CD45RA- 、CD62L- 、CCR7- 或其任何組合。
  23. 如前述請求項中任一項之醫藥組合物，其中該等iNKT係CD1d-tet+ 、6B11+ 或兩者。
  24. 如前述請求項中任一項之醫藥組合物，其中該等iNKT係Vα24Jα18+ 。
  25. 如前述請求項中任一項之醫藥組合物，其中該等初始習用αβ-T細胞係CD25- 、CD127+ ，或兩者，以及TCRα+ 及CD45RA+ 。
  26. 如前述請求項中任一項之醫藥組合物，其中該等初始習用αβ-T細胞係TCRα+ TCRβ+ CD45RA+ CD45RO- CD25- CD95- IL-2Rβ- CD127+ 。
  27. 如前述請求項中任一項之醫藥組合物，其中HSPC對Tmem之比率係500:1至1:1,000。
  28. 如前述請求項中任一項之醫藥組合物，其中HSPC對Treg之比率係約100:1至約1:30。
  29. 如前述請求項中任一項之醫藥組合物，其中HSPC對初始Treg之比率係1:500至100:1。
  30. 如前述請求項中任一項之醫藥組合物，其中HSPC對記憶性Treg之比率係1:500至10,000:1。
  31. 如前述請求項中任一項之醫藥組合物，其中HSPC對iNKT之比率係1:2至500,000:1。
  32. 如前述請求項中任一項之醫藥組合物，其中初始習用αβ-T細胞對HSPC之比率係小於1:3、較佳地小於1:400。
  33. 如前述請求項中任一項之醫藥組合物，其中初始習用αβ-T細胞對Tmem之比率係小於1:30、較佳地小於1:800。
  34. 如前述請求項中任一項之醫藥組合物，其中初始習用αβ-T細胞對初始Treg之比率係小於1:1、較佳地小於1:10。
  35. 如前述請求項中任一項之醫藥組合物，其中初始習用αβ-T細胞對記憶性Treg之比率係小於1:1、較佳地小於1:100。
  36. 如前述請求項中任一項之醫藥組合物，其中初始習用αβ-T細胞對iNKT之比率係小於100:1、較佳地小於1:1。
  37. 如前述請求項中任一項之醫藥組合物，其中Tmem對Treg之比率係2000:1至1:10、較佳地30:1至1:1。
  38. 如前述請求項中任一項之醫藥組合物，其中Tmem對初始Treg之比率係3:1至0.1:1。
  39. 如前述請求項中任一項之醫藥組合物，其中Tmem對記憶性Treg之比率係27:1至0.9:1。
  40. 如前述請求項中任一項之醫藥組合物，其中iNKT對Tmem之比率係約5:1至約1:1,000,000。
  41. 如前述請求項中任一項之醫藥組合物，其中該單位劑量包含1.0 × 106 至50 × 106 個HSPC。
  42. 如前述請求項中任一項之醫藥組合物，其中該單位劑量包含0.3 × 106 至1000 × 106 個記憶性T細胞。
  43. 如前述請求項中任一項之醫藥組合物，其中該單位劑量包含0.5 × 106 至1000 × 106 個Treg細胞。
  44. 如前述請求項中任一項之醫藥組合物，其中該單位劑量包含0.2 × 106 至500 × 106 個初始Treg細胞。
  45. 如前述請求項中任一項之醫藥組合物，其中該單位劑量包含0.5 × 106 至500 × 106 個記憶性Treg細胞。
  46. 如前述請求項中任一項之醫藥組合物，其中該單位劑量包含0.5 × 103 至2000 × 103 個iNKT細胞。
  47. 如前述請求項中任一項之醫藥組合物，其中該單位劑量包含少於3 × 105 個初始習用αβ-T細胞。
  48. 如前述請求項中任一項之醫藥組合物，其中該細胞群體係藉由處理一或多種組織收穫物提供。
  49. 如請求項48之醫藥組合物，其中該一或多種組織收穫物係來自一或多個供體。
  50. 如請求項48或49之醫藥組合物，其中該等組織收穫物係來自HLA匹配之同胞(sibling)供體、HLA匹配之非親緣(unrelated)供體、部分匹配之非親緣供體、單倍體相合(haploidentical)親緣(related)供體、自體供體、HLA不匹配之同種異體供體、供體庫或其任何組合。
  51. 如前述請求項中任一項之醫藥組合物，其中該等HSPC係由與該個體單倍體相合之供體提供。
  52. 如前述請求項中任一項之醫藥組合物，其中該等Treg、Tmem、iNKT或其任何組合係由HLA匹配之同胞供體或HLA匹配之非親緣供體之供體提供。
  53. 如前述請求項中任一項之醫藥組合物，其中該等細胞經調配用於輸注或注射。
  54. 如前述請求項中任一項之醫藥組合物，其中該細胞群體包含用於投與個體之調配物。
  55. 如請求項54之醫藥組合物，其中該調配物包含羅莫索-R (Normosol-R)及人類血清。
  56. 如請求項54或55之醫藥組合物，其中該人類血清為總調配物之1%。
  57. 一種如前述請求項中任一項之醫藥組合物之用途，其用於治療疾病或病症。
  58. 如請求項57之用途，其中該疾病或病症係白血病、淋巴瘤、慢性感染，或自體免疫疾病、惡性或非惡性血液病、AML、ALL、CML、CLL、多發性骨髓瘤、霍奇金氏淋巴瘤(Hodgkin’s lymphoma)、非霍奇金氏淋巴瘤、MDS、淋巴球增生性疾病、1型糖尿病、先天性代謝異常、遺傳病、鐮狀細胞貧血症、β-地中海型貧血、多發性硬化、實體器官移植、克隆氏病(Krohn’s disease)、潰瘍性結腸炎、狼瘡、噬血球性淋巴組織細胞增生症、肝醣儲積病症、黏液多醣體病，或受益於HSPC移植之任何其他疾病。
  59. 如請求項57或58中任一項之用途，其中該每一治療性細胞群體係作為個別醫藥組合物投與該個體。
  60. 如請求項57或58中任一項之用途，其中該等治療性細胞群體係作為單一醫藥組合物投與該個體。
  61. 如請求項57至60中任一項之用途，其中該等細胞係自以下供體分離：HLA匹配之同胞供體、HLA匹配之非親緣供體、部分匹配之非親緣供體、單倍體相合親緣供體、自體供體、HLA不匹配之供體、供體庫或其任何組合。
  62. 如請求項57至61中任一項之用途，其中該治療性細胞群體係同種異體或自體的。
  63. 如請求項57至62中任一項之用途，其中該治療性細胞群體係自體的。
  64. 如請求項57至63中任一項之用途，其中該治療性細胞群體係單倍體相合的。
  65. 如請求項57至64中任一項之用途，其中該治療性細胞群體係分離自動員(mobilized)外周血、動員血球分離產物、骨髓、臍帶血、非動員(non-mobilized)血、非動員血球分離產物或其任何組合。
  66. 如請求項57至65中任一項之用途，其中該治療性細胞群體係源自單一組織收穫物。
  67. 如請求項57至66中任一項之用途，其中該治療性細胞群體係源自一或多個組織收穫物。
  68. 如請求項57至67中任一項之用途，其中該治療性細胞群體包含由至少第一供體提供之HSPC及由至少第二供體提供之Treg及Tmem。
  69. 如請求項68之用途，其中該治療性細胞群體包含由至少該第二供體提供之iNKT細胞。
  70. 如請求項68或69之用途，其中該第一供體與該個體係單倍體相合的。
  71. 如請求項68至70中任一項之用途，其中該第二供體係HLA匹配之同胞供體或HLA匹配或部分匹配之非親緣供體。
  72. 如請求項57至71中任一項之用途，其中該個體係人類、非人類靈長類動物、牛、馬、綿羊、山羊、豬、狗、貓、小鼠、兔、大鼠或天竺鼠。
  73. 一種產生如前述請求項中任一項之醫藥組合物之方法，其包含處理至少一種樣品以提供： a. 富集造血幹細胞/祖細胞(HSPC)之群體； b. 富集調節性T細胞(Treg)之群體； c. 富集記憶性T細胞(Tmem)之群體；及 d. 將該等富集之HSPC、記憶性T細胞及Treg群體調配為適於向個體投與之醫藥組合物，其中a.至c.之群體空乏初始習用αβ-T細胞。
  74. 如請求項73之方法，其進一步包含處理該樣品以提供空乏Lin+ 細胞之細胞群體。
  75. 如請求項73或74之方法，其中提供富集Treg之群體包含提供富集初始Treg之群體、富集記憶性Treg之群體或兩者。
  76. 如請求項73至75中任一項之方法，其中提供富集Tmem之群體包含提供富集T中央記憶細胞(TCM )之群體、富集T效應記憶細胞(TEM )之群體或其任何組合。
  77. 如請求項73至76中任一項之方法，其進一步包含處理該樣品以提供富集iNKT細胞之群體。
  78. 如請求項73至77中任一項之方法，其中富集HSPC之群體包含至少50%之CD34+ HPSC。
  79. 如請求項73至78中任一項之方法，其中空乏Lin+ 細胞之細胞群體包含1% - 30%之Lin+ 細胞、較佳地少於1%之Lin+ 細胞。
  80. 如請求項73至79中任一項之方法，其中富集Treg之群體包含20% - 99.9%之Treg。
  81. 如請求項73至80中任一項之方法，其中富集Tmem之群體包含10% - 99.9%之Tmem。
  82. 如請求項73至81中任一項之方法，其中富集iNKT之群體包含10% - 99.9%之iNKT。
  83. 如請求項73至82中任一項之方法，其中調配該醫藥組合物包含將該富集之HSPC群體、記憶性T細胞群體、Treg群體、iNKT群體或其任何組合組合成富集細胞之混合群體。
  84. 如請求項83之方法，其中富集細胞之混合群體包含500:1至1:1,000之HSPC對記憶性T細胞之比率。
  85. 如請求項83或84之方法，其中富集細胞之混合群體包含1:500至100:1之HSPC對初始Treg之比率。
  86. 如請求項83至85中任一項之方法，其中富集細胞之混合群體包含1:500至10,000:1之HSPC對記憶性Treg之比率。
  87. 如請求項83至86中任一項之方法，其中富集細胞之混合群體包含1:2至500,000:1之HSPC對iNKT之比率。
  88. 如請求項83至87中任一項之方法，其中富集細胞之混合群體包含小於1:3、較佳地小於1:400之初始習用αβ-T細胞對HSPC之比率。
  89. 如請求項83至88中任一項之方法，其中富集細胞之混合群體包含小於1:30、較佳地小於1:800之初始習用αβ-T細胞對Tmem之比率。
  90. 如請求項83至89中任一項之方法，其中富集細胞之混合群體包含小於1:1、較佳地小於1:10之初始習用αβ-T細胞對初始Treg之比率。
  91. 如請求項83至90中任一項之方法，其中富集細胞之混合群體包含小於1:1、較佳地小於1:100之初始習用αβ-T細胞對記憶性Treg之比率。
  92. 如請求項83至91中任一項之方法，其中富集細胞之混合群體包含小於100:1、較佳地小於1:1之初始習用αβ-T細胞對iNKT之比率。
  93. 如請求項83至92中任一項之方法，其中富集細胞之混合群體包含30:1至1:1之Tmem對Treg之比率。
  94. 如請求項83至93中任一項之方法，其中富集細胞之混合群體包含3:1至0.1:1之Tmem對初始Treg之比率。
  95. 如請求項83至94中任一項之方法，其中富集細胞之混合群體包含27:1至0.9:1之Tmem對記憶性Treg之比率。
  96. 如請求項83至95中任一項之方法，其中富集細胞之混合群體包含少於0.0014%之初始習用αβ-T細胞。
  97. 如請求項74至96中任一項之方法，其中Lin+細胞表現CD19、CD11c、CD66B、CD14、CD20或其任何組合。
  98. 如請求項73至97中任一項之方法，其中該HSPC係CD34+。
  99. 如請求項73至98中任一項之方法，其中該HSPC係CD19-及TCRα/β-。
  100. 如請求項73至99中任一項之方法，其中該HSPC係CD133+、CD90+、CD38-、CD45RA-、Lin-或其任何組合。
  101. 如請求項73至100中任一項之方法，其中該Tmem係CD45RA- 、CD45RO+ 或其任何組合。
  102. 如請求項101中任一項之方法，其中該Tmem係TCM 。
  103. 如請求項102之方法，其中該TCM 係CD45RO+ 及CD4+ 或CD8+ 。
  104. 如請求項102或103之方法，其中該TCM 係CD45RA- 、CD62L+ 、CCR7+ 或其任何組合。
  105. 如請求項101之方法，其中該Tmem係TEM 。
  106. 如請求項105之方法，其中該TEM 係CD4+ 、CD45RA+ 、CD45RO- 、CD62L- 、CCR7- 或其任何組合。
  107. 如請求項73至106中任一項之方法，其中該Treg係CD4+ 、CD25+ 、CD127-/lo 、FoxP3+ 或其任何組合。
  108. 如請求項107之方法，其中該Treg係初始Treg、記憶性Treg或兩者。
  109. 如請求項108之方法，其中該初始Treg係CD4+ 、CD25+ 、CD127-/lo 、FoxP3+ 、CD45RA+ 、CD45RO- 或其任何組合。
  110. 如請求項108之方法，其中該記憶性Treg係CD4+ 、CD25+ 、CD127-/lo 、FoxP3+ 、CD45RA- 、CD45RO+ 或其任何組合。
  111. 如請求項73至110中任一項之方法，其中該樣品包含動員外周血、動員血球分離產物、骨髓、臍帶血、非動員血、非動員血球分離產物或其任何組合。
  112. 如請求項73至111中任一項之方法，其中製備該樣品用於以下處理：密度梯度、Ficoll、Percoll、紅血球低滲溶解、氯化銨-鉀(ACK)緩衝液或其任何組合。
  113. 如請求項73至111中任一項之方法，其中該樣品係由單一組織收穫物提供。
  114. 如請求項73至111中任一項之方法，其中該樣品係由一或多種組織收穫物提供。
  115. 如請求項73至114中任一項之方法，其中該富集之細胞群體係藉由以下提供：密度分離、四聚體抗體複合物調介之富集/空乏、磁力活化細胞分選、基於多參數螢光之分子表型或其任何組合。
  116. 如請求項73至115中任一項之方法，其包含： A. 使該樣品與特異性結合CD34之分子在條件下接觸以形成CD34+ 細胞之群體及CD34- 細胞之群體，自該樣品回收CD34+ 細胞之群體且自該樣品回收CD34- 細胞之群體；及 B. 處理CD34- 細胞之群體以提供至少一種包含Treg、Tmem、iNKT或其任何組合之富集治療性細胞之群體。
  117. 如請求項116之方法，其中步驟B包含實施精細分選以提供富集治療性細胞之群體。
  118. 如請求項116或117之方法，其中步驟B包含使CD34- 細胞之群體接觸特異性結合CD45RA之分子、特異性結合CD45RO之分子、特異性結合CD4之分子、特異性結合CD8之分子、特異性結合CD25之分子、特異性結合CD127之分子、CD1d-tet、6B11單株抗體或其功能片段，或其任何組合。
  119. 如請求項116之方法，其中步驟B包含： i. 使CD34- 細胞之群體與至少一種特異性結合CD45RA之分子在條件下接觸以形成CD45RA+ 細胞之群體及CD45RA- 細胞之群體，且回收CD45RA- 細胞之群體；及 ii. 實施精細分選以自CD45RA+ 細胞之群體提供富集治療性細胞之群體。
  120. 如請求項119之方法，其中該精細分選包含使CD45RA+ 細胞之群體接觸特異性結合CD4之分子、特異性結合CD8之分子、特異性結合CD25之分子、特異性結合CD127之分子、CD1d-tet、6B11單株抗體或其功能片段，或其任何組合。
  121. 如請求項120之方法，其中該精細分選進一步包含使CD45RA- 細胞之群體接觸特異性結合CD45RA之分子、特異性結合CD45RO之分子或其組合。
  122. 如請求項116之方法，其中步驟B包含： i. 使CD34- 細胞之群體與至少一種特異性結合Lin+ 標記物之結合分子在條件下接觸以形成Lin+ 細胞之群體及Lin- 細胞之群體，且回收Lin- 細胞之群體；及 ii. 實施精細分選以自Lin- 細胞之群體提供富集治療性細胞之群體。
  123. 如請求項122之方法，其中該Lin+ 標記物係CD19、CD11c、CD66B、CD14、CD20或其任何組合。
  124. 如請求項122或123之方法，其中該精細分選包含使Lin- 細胞之群體接觸特異性結合CD45RA之分子、特異性結合CD45RO之分子、特異性結合CD4之分子、特異性結合CD8之分子、特異性結合CD25之分子、特異性結合CD127之分子、CD1d-tet分子、6B11單株抗體或其功能片段，或其任何組合。
  125. 如請求項116之方法，其中步驟B包含： i. 使CD34- 細胞之群體與至少一種特異性結合至少一種Lin+ 標記物之結合分子在條件下接觸以形成Lin+ 細胞之群體及Lin- 細胞之群體，且回收Lin- 細胞之群體；及 ii. 使Lin- 細胞之群體與特異性結合CD25之結合分子在條件下接觸以形成CD25+ 細胞之群體及CD25- 細胞之群體，回收CD25+ 細胞之群體，藉此產生包含Treg之細胞群體，且回收CD25- 細胞之群體；及 iii. 使CD25- 細胞之群體與特異性結合CD45RA之結合分子在條件下接觸以形成CD45RA+ 細胞之群體及CD45RA- 細胞之群體，且回收CD45RA- 細胞之群體。
  126. 如請求項125之方法，其中該Lin+ 標記物係CD19、CD11c、CD66B、CD14、CD20或其任何組合。
  127. 如請求項125或126之方法，其中步驟ii.進一步包含使該等Lin- 細胞與CD1d-tet、6B11單株抗體或其功能片段或其組合在條件下接觸以形成CD1d-tet+ 細胞之群體、6B11+ 細胞之群體或其組合，及CD1d-tet- 細胞、6B11- 細胞或其組合之群體，且回收CD1d-tet+ 細胞之群體。
  128. 如請求項119至127中任一項之方法，其中同時回收CD25+ 細胞之群體，及CD1d-tet+ 細胞、6B11+ 細胞或兩者之群體。
  129. 如請求項125至128中任一項之方法，其進一步包含對步驟ii.之CD25+ 細胞之群體實施精細分選以提供初始Treg細胞之群體、記憶性Treg細胞之群體、iNKT細胞之群體或其任何組合。
  130. 如請求項125至129中任一項之方法，其中回收CD45RA+ 細胞之群體且進一步實施精細分選以提供Treg、iNKT或兩者之群體。
  131. 如請求項117至130中任一項之方法，其中該精細分選包含使用基於多參數螢光之分子表型之純化。
  132. 如請求項73至115中任一項之方法，其包含： A. 對至少第一樣品實施第一粗分選，藉此提供CD34+ 細胞之富集群體； B. 對第二樣品實施第二粗分選，藉此提供Lin- 細胞之群體； C. 對Lin- 細胞之群體實施第三粗分選，藉此提供CD45RA- 記憶性T細胞之群體且提供CD45RA+ 細胞之群體；及 D. 對CD45RA+ 細胞之群體實施精細分選，藉此提供Treg之群體。
  133. 如請求項132之方法，其中該第二樣品包含自步驟A回收之CD34- 細胞之群體。
  134. 如請求項132或133之方法，其中該第一樣品包含至少一種單倍體相合樣品。
  135. 如請求項132或133之方法，其中該第一樣品包含至少兩種單倍體相合樣品。
  136. 如請求項132至135中任一項之方法，其中該第一樣品包含動員外周血、動員血球分離產物、骨髓、臍帶血、非動員血、非動員血球分離產物或其任何組合。
  137. 如請求項132至136中任一項之方法，其中該第二樣品包含外周血單核細胞(PBMC)、動員外周血、動員血球分離產物、骨髓、臍帶血、非動員血、非動員血球分離產物或其任何組合。
  138. 如請求項132至137中任一項之方法，其中該第一、第二或第三粗分選包含密度分離、四聚體抗體複合物調介之富集/空乏、磁力活化細胞分選、血球分離、白血球分離或其任何組合。
  139. 如請求項132至138中任一項之方法，其中該精細分選包含使用基於多參數螢光之分子表型之純化。
  140. 如請求項132至139中任一項之方法，其中該精細分選提供初始Treg細胞之群體、記憶性Treg細胞之群體、iNKT細胞之群體或其任何組合。
  141. 如請求項132至140中任一項之方法，其中該精細分選包含使該等CD45RA+ 細胞與特異性結合CD25之結合分子在條件下接觸以提供CD25+ 細胞之群體及CD25- 細胞之群體，且回收CD25+ 細胞之群體，藉此提供Treg之群體。
  142. 如請求項141之方法，其中進一步在條件下對CD25+ 細胞之群體進行分選以提供初始Treg細胞之群體。
  143. 如請求項132至142中任一項之方法，其中該精細分選包含使該等CD45RA+ 細胞與CD1d-tet、6B11單株抗體或其功能片段或其組合在條件下接觸以提供CD1d-tet+ 細胞、6B11+ 細胞或兩者之群體，且回收CD1d-tet+ 細胞、6B11+ 細胞或兩者之群體。
  144. 如請求項132至143中任一項之方法，其中該第一樣品或該第二樣品係同種異體的、自體的或其組合。
  145. 如請求項132至144中任一項之方法，其中該第二樣品係來自HLA匹配之非親緣供體、HLA匹配之同胞供體或其組合。
  146. 如請求項132至145中任一項之方法，其中該Lin+ 標記物係CD19、CD11c、CD66B、CD14、CD20或其任何組合。
  147. 如請求項73至115中任一項之方法，其包含： A. 使該樣品與特異性結合Lin+ 標記物之結合分子在條件下接觸以提供Lin+ 細胞之群體及Lin- 細胞之群體，且回收Lin- 細胞之群體；及 B. 使該等Lin- 細胞與特異性結合CD34之結合分子及特異性結合CD25之結合分子在條件下接觸以提供CD34+ 細胞之群體、CD25+ 細胞之群體及CD34- CD25- 細胞之群體，且回收該等CD34+ 細胞及CD25+ 細胞並回收CD34- CD25- 細胞之群體；及 C. 使CD34- CD25- 細胞之群體與特異性結合CD45RA之結合分子在條件下接觸以提供CD45RA+ 細胞之群體及CD45RA- 細胞之群體，並回收CD45RA- 之群體。
  148. 如請求項147之方法，其中該Lin+ 標記物係CD19、CD11c、CD66B、CD14、CD20或其任何組合。
  149. 如請求項147或148之方法，其中步驟B進一步包含使該等Lin- 細胞與CD1d-tet、6B11單株抗體或其功能片段或其組合在條件下接觸以提供CD1d-tet+ 細胞、6B11+ 細胞或其組合之群體，且回收該等CD1d-tet+ 細胞、6B11+ 細胞或其組合。
  150. 如請求項147至149中任一項之方法，其進一步包含對該等CD34+ 細胞、CD25+ 細胞、CD1d-tet+ 細胞、6B11+ 細胞或其任何組合實施精細分選，藉此提供CD34+ 細胞、CD25+ 細胞、CD1d-tet+ 細胞、6B11+ 細胞之群體或其任何組合。
  151. 如請求項150之方法，其中該精細分選包含使該等CD34+ 細胞、CD25+ 細胞、CD1d-tet+ 細胞、6B11+ 細胞或其任何組合與特異性結合CD34之結合分子、特異性結合CD4之結合分子、特異性結合CD25之結合分子、特異性結合CD127之結合分子、CD1d-tet、6B11單株抗體或其功能片段或其任何組合在條件下接觸以提供高度富含CD34+ 細胞、CD4+ CD25+ CD127-/Lo 細胞、CD1d-tet+ 細胞之細胞群體或其組合。
  152. 如請求項73至115中任一項之方法，其包含： A. 對該樣品實施粗分選以提供Lin+ 細胞之群體及Lin- 細胞之群體，且回收Lin- 細胞之群體；及 B. 對Lin- 細胞之群體實施粗分選提供富含HSPC及Tmem之群體以及CD45RA+ 細胞之群體，且回收HSPC及Tmem之群體並回收CD45RA+ 細胞之群體；及 C. 對CD45RA+ 細胞之群體實施精細分選以提供Treg之群體。
  153. 如請求項152之方法，其中該精細分選進一步包含使CD45RA+ 細胞之群體與特異性結合CD34之結合分子、特異性結合CD4之結合分子及特異性結合CD127之結合分子在條件下接觸以提供CD34+細胞之群體及CD4+ CD25+ CD127-/Lo 細胞之群體，且回收CD34+細胞之群體及CD4+ CD25+ CD127-/Lo 細胞之群體。
  154. 如請求項152至153之方法，其中該精細分選進一步包含使CD45RA+ 細胞之群體與CD1d-tet、6B11單株抗體或其功能片段或其組合接觸，且回收CD1d-tet+ 細胞、6B11+ 細胞或其組合之群體。
  155. 如請求項152至154中任一項之方法，其中該粗分選包含密度分離、四聚體抗體複合物調介之富集/空乏、磁力活化細胞分選、血球分離、白血球分離或其任何組合。
  156. 如請求項152至155中任一項之方法，其中該精細分選包含使用基於多參數螢光之分子表型之純化。
  157. 如請求項73至115中任一項之方法，其包含： A. 使該樣品與特異性結合CD34之結合分子在條件下接觸以提供CD34+ 細胞之群體及CD34- 細胞之群體，回收CD34+ 細胞之群體且回收CD34- 細胞之群體；及 B. 使CD34- 細胞之群體與特異性結合CD25之結合分子在條件下接觸以提供CD25+ 細胞之群體及CD25- 細胞之群體，回收CD25+ 細胞之群體且回收CD25- 細胞之群體；及 C. 使CD25- 細胞之群體與特異性結合CD45RA之結合分子在條件下接觸以提供CD45RA+ 細胞之群體及CD45RA- 細胞之群體，且回收CD45RA- 細胞之群體。
  158. 如請求項157之方法，其中步驟B進一步包含： i. 使CD34- 細胞之群體與CD1d-tet、6B11單株抗體或其功能片段或其組合在條件下接觸以提供CD1d-tet+ 細胞之群體、6B11+ 細胞之群體或其組合及CD1d-tet- 細胞之群體、6B11- 細胞之群體或其組合，且回收CD1d-tet+ 細胞之群體、6B11+ 細胞之群體或其組合，並回收CD1d-tet- 細胞之群體、6B11- 細胞之群體或兩者，藉此提供iNKT空乏細胞之群體；及 ii. 使iNKT空乏細胞之群體與特異性結合CD25之結合分子在條件下接觸以提供CD25+ 細胞之群體及CD25- 細胞之群體，且回收CD25+ 細胞之群體並回收CD25- 細胞之群體。
  159. 如請求項157之方法，其中步驟B包含使CD34- 細胞之群體與特異性結合CD25之結合分子及CD1d-tet、6B11單株抗體或其功能片段或其組合在條件下接觸以提供CD25+ 細胞之群體及CD1d-tet+ 細胞、6B11+ 細胞或其組合之群體以及CD34- CD25- iNKT空乏細胞之群體，且回收CD25+ 細胞之群體及CD1d-tet+ 細胞、6B11+ 細胞或其組合之群體，並回收CD34- CD25- iNKT空乏細胞之群體。
  160. 如請求項157之方法，其中步驟B包含： i. 使CD34- 細胞之群體與特異性結合CD25之結合分子及CD1d-tet、6B11單株抗體或其功能片段或其組合在條件下接觸以提供CD25+ 細胞之群體及CD1d-tet+ 細胞、6B11+ 細胞或其組合之群體以及CD34- CD25- iNKT空乏細胞之群體，且回收CD25+ 細胞之群體及CD1d-tet+ 細胞、6B11+ 細胞或其組合之群體，並回收CD34- CD25- iNKT空乏細胞之群體；及 ii. 對CD25+ 細胞之群體及CD1d-tet+ 細胞、6B11+ 細胞或其組合之群體實施精細分選，其係藉由使該等細胞與特異性結合CD4之結合分子、特異性結合CD25之結合分子、特異性結合CD127之結合分子、CD1d-tet、6B11單株抗體或其功能片段或其任何組合接觸，以提供富含CD4+ CD25+ CD127-/Lo 細胞、CD1d-tet+ 細胞、6B11+ 細胞或其任何組合之細胞群體。
  161. 如請求項160之方法，其中步驟i.包含使CD34- 細胞之群體與包含標籤之抗CD25抗體及生物素化之6B11單株抗體接觸，並使該6B11-生物素與偶聯標籤之鏈黴抗生物素蛋白(streptavidin)接觸。
  162. 如請求項161之方法，其中該標籤係藻紅素(PE)。
  163. 如請求項161或162之方法，其中該鏈黴抗生物素蛋白偶聯至PE/Cy7。
  164. 如請求項161至163之方法，其中然後使該等CD34- 細胞與抗標籤磁性粒子接觸。
  165. 如請求項164之方法，其中該等抗標籤磁性粒子係抗PE磁性粒子。
  166. 如請求項160至165中任一項之方法，其中CD25+ 細胞及6B11+ 細胞係使用磁力分選分離。
  167. 如請求項160至166中任一項之方法，其中ii.包含對CD25+ 細胞及6B11+ 細胞之該群體實施精細分選，其係藉由使該等細胞與特異性結合CD4之結合分子及特異性結合CD127之結合分子在條件下接觸來實施，以提供富含CD4+ CD25+ CD127-/Lo 細胞之細胞群體及富含6B11+ CD127+ 細胞之細胞群體或其任何組合。
  168. 如請求項167之方法，其中該CD4結合分子係抗CD4 PerCP標記之抗體，該CD127結合分子係抗CD127 APC標記之抗體，或其組合。
  169. 如請求項167或168之方法，其中該精細分選包含螢光活性細胞分選並檢測PE標記之CD25、PE/Cy7標記之6B11、PerCP標記之CD4及APC標記之CD127。
  170. 如請求項157之方法，其中藉由精細分選對步驟A中所回收之CD34+ 細胞之群體、步驟B中所回收之CD25+ 細胞之群體或兩者進一步處理，其包含使該等CD34+ 細胞、該等CD25+ 細胞或其組合與特異性結合CD34之結合分子、特異性結合CD127之結合分子、特異性結合CD45RA之結合分子或其任何組合接觸。
  171. 如請求項73至115中任一項之方法，其包含： A. 使該樣品與特異性結合CD34之結合分子及特異性結合CD25之結合分子在條件下接觸以提供CD34+ 細胞之群體、CD25+ 細胞之群體及CD34- CD25- 細胞之群體，回收CD34+ 細胞之群體及CD25+ 細胞之群體，且回收CD34- CD25- 細胞之群體；及 B. 使CD34- CD25- 細胞之群體與特異性結合CD45RA之結合分子在條件下接觸以提供CD45RA+ 細胞之群體及CD45RA- 細胞之群體，且回收CD45RA- 細胞之群體。
  172. 如請求項171之方法，其中步驟A進一步包含使該樣品與CD1d-tet、6B11單株抗體或其功能片段或其組合在條件下接觸以提供CD1d-tet+ 細胞之群體、6B11+ 細胞之群體或其組合，且回收CD1d-tet+ 細胞之群體、6B11+ 細胞之群體或其組合。
  173. 如請求項171或172之方法，其進一步包含對步驟A中所提供之該細胞群體實施精細分選，其係藉由使該等細胞與特異性結合CD34之結合分子、特異性結合CD4之結合分子、特異性結合CD25之結合分子、特異性結合CD127之結合分子、CD1d-tet或其任何組合接觸，以提供富含CD34+ 細胞、CD4+ CD25+ CD127-/Lo 細胞、CD1d-tet+ 細胞或其任何組合之細胞群體。
  174. 如請求項73至115中任一項之方法，其中該方法包含同時處理該樣品以提供包含HSPC、Tmem、初始Treg、記憶性Treg，且包含少於5%之不期望細胞類型之富集細胞群體。
  175. 如請求項174之方法，其中使該樣品接觸特異性結合CD34之結合分子、特異性結合CD4之結合分子、特異性結合CD8之結合分子、特異性結合CD25之結合分子、特異性結合CD127之結合分子、特異性結合CD45RA之結合分子、特異性結合CD45RO之結合分子或其任何組合。
  176. 如請求項175之方法，其進一步包含使該樣品與CD1d-tet、6B11單株抗體或其功能片段或其組合接觸，且回收CD1d-tet+ 細胞之群體、6B11+ 細胞之群體或其組合。
  177. 如請求項174至176中任一項之方法，其中使該樣品與特異性結合CD34之結合分子接觸且回收CD34+ 細胞之群體，藉此產生HSPC群體。
  178. 如請求項174至177中任一項之方法，其中使該樣品接觸特異性結合CD3之結合分子且不結合特異性結合CD45RA之結合分子、特異性結合CD45RO之結合分子或其組合，且回收CD3+ CD45RA- CD45RO+ 細胞之群體。
  179. 如請求項174至178中任一項之方法，其中使該樣品與特異性結合CD4之結合分子、特異性結合CD25之結合分子、特異性結合CD127之結合分子、特異性結合CD45RA之結合分子、特異性結合CD45RO之結合分子或其任何組合接觸，且回收CD4+ CD25+ CD127-/lo CD45RA+ CD45RO- 細胞之群體、CD4+ CD25+ CD127-/lo CD45RA- CD45RO+ 細胞之群體。
  180. 如請求項73至179中任一項之方法，其中該治療性細胞群體包含少於2%之初始習用αβ-T細胞。
  181. 如請求項73至180中任一項之方法，其中該特異性結合CD34、Lin+標記物、CD25、CD45RA、CDR45RO、CD4、CD8、CD127、CD90、CD133、CD38、CD95、CD122、CXCR3、LFA-1、CD62L、CCR7或任何其他細胞標記物之分子係抗體或抗體片段。
  182. 如請求項73至181中任一項之方法，其中該抗體或抗體片段偶合至螢光染料、半抗原或磁性粒子。
  183. 如請求項73至182中任一項之方法，其中該等細胞係新分離細胞。
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Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110621321A (zh) 2017-03-15 2019-12-27 浩康生物系统公司 用于造血干细胞移植的组合物和方法
EP3749334A4 (en) 2018-02-08 2021-11-17 The Board of Trustees of the Leland Stanford Junior University PROCESSES FOR TRANSPLANTATION OF ALLOGENIC HEMATOPOIETIC STEM CELLS
EP3880794A4 (en) * 2018-11-13 2022-08-24 CN. USA Biotech Holdings, Inc. COMPOSITIONS CONTAINING AN EXPANDED AND ENRICHED POPULATION OF SUPERACTIVATED CYTOKINE KILLER T LYMPHOCYTES AND METHODS OF MAKING THEM
US20230172984A1 (en) * 2020-04-23 2023-06-08 The Regents Of The University Of California CLEARANCE OF SENESCENT CELLS BY ACTIVATION OF iNKT CELLS
US20210356456A1 (en) * 2020-05-13 2021-11-18 Becton, Dickinson And Company Blood based controls for complex panel
CA3197122A1 (en) * 2020-11-04 2022-05-12 Everett Hurteau Meyer Methods for allogeneic hematopoietic stem cell transplantation

Family Cites Families (81)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US1030009A (en) 1910-08-24 1912-06-18 Nathaniel Nelson Controlling mechanism for punch-presses and like machinery.
US5858358A (en) 1992-04-07 1999-01-12 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy Methods for selectively stimulating proliferation of T cells
US5514340A (en) 1994-01-24 1996-05-07 Magnetix Biotechnology, Inc. Device for separating magnetically labelled cells
IL112969A (en) 1994-03-17 2001-05-20 Baxter Int Pharmaceutical compositions for the treatment of cancer comprising allogenic lymphocytes or their combination with a t-cell activator
DK0937251T3 (da) 1996-09-06 2007-02-19 Ortho Mcneil Pharm Inc Oprensning af antigenspecifikke T-celler
AU753975B2 (en) 1997-12-04 2002-10-31 Duke University Methods of isolating and using CD7+CD34-Lin-hematopoietic cells
DE60019111T2 (de) * 1999-05-28 2006-01-26 Stemcell Technologies Inc. Verfahren zur zellseparation unter verwendung von immunorosetten
US6544506B2 (en) 2000-01-05 2003-04-08 Yeda Research & Development Co. Ltd. Veto cells effective in preventing graft rejection and devoid of graft versus host potential
US20060222633A1 (en) 2000-05-11 2006-10-05 Yale University Prevention, decrease, and/or treatment of immunoreactivity by depleting and/or inactivating antigen presenting cells in the host
US20020127208A1 (en) 2000-08-31 2002-09-12 Waller Edmund K. Method of transplantation using chemotherapy-treated allogeneic cells that enhance immune responses without graft versus host disease
US20040228845A1 (en) 2003-05-14 2004-11-18 Ildstad Suzanne T. Methods of using CD8+/TCR- facilitating cells (FC) for the engraftment of purified hematopoietic stem cells (HSC)
US20060018885A1 (en) 2000-11-14 2006-01-26 Ildstad Suzanne T Methods for increasing HSC graft efficiency
WO2003012060A2 (en) 2001-08-01 2003-02-13 Jewish Hospital Healthcare Services, Inc. Cellular compositions which facilitate engraftment of hematopoietic stem cells while minimizing the risk of gvhd
US20030147865A1 (en) 2002-02-07 2003-08-07 Benoit Salomon Cell therapy using immunoregulatory T-cells
WO2003072068A2 (en) 2002-02-27 2003-09-04 University Of South Carolina Targeted immunotherapy of acute lymphoblastic leukemia (all)
CA2496251A1 (en) 2002-08-21 2004-03-04 Ivan N. Rich High-throughput assay of hematopoietic stem and progenitor cell proliferation
US7651855B2 (en) 2003-04-17 2010-01-26 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Regulatory T cells and their use in immunotherapy and suppression of autoimmune responses
US20080095749A1 (en) 2004-03-22 2008-04-24 Sudeepta Aggarwal Mesenchymal stem cells and uses therefor
US20050214265A1 (en) 2004-03-24 2005-09-29 Iidstad Suzanne T Method for improving bone marrow engraftment
US20090297471A1 (en) 2004-05-28 2009-12-03 Mayo Foundation For Medical Education And Research Methods For Autologous Stem Cell Transplantation
US20060127399A1 (en) 2004-09-13 2006-06-15 Defu Zeng Compositions and methods for inducing chimerism in a subject
KR20080105555A (ko) 2007-05-31 2008-12-04 인하대학교 산학협력단 중간엽 골수세포를 이용한 이식편대숙주질환 치료제 및치료방법
SI1926813T2 (sl) 2005-09-23 2019-11-29 Tigenix S A U Celična populacija z imunoregulatorno aktivnostjo, postopek za izolacijo in uporabe
KR20180105266A (ko) 2005-12-29 2018-09-27 안트로제네시스 코포레이션 태반 줄기 세포 집단
EP1987135A2 (en) 2006-01-27 2008-11-05 Auxocell Laboratories, Inc. Methods and compositions relating to stem cell transplantation
US8383095B2 (en) * 2006-02-14 2013-02-26 Cellerant Therapeutics, Inc. Methods and compositions for enhancing engraftment of hematopoietic stem cells
US20080038231A1 (en) 2006-06-15 2008-02-14 Rodgerson Denis O Processing procedure for peripheral blood stem cells
WO2008036374A2 (en) * 2006-09-21 2008-03-27 Medistem Laboratories, Inc. Allogeneic stem cell transplants in non-conditioned recipients
CA2668673A1 (en) 2006-11-08 2008-05-22 Aldagen, Inc. Methods for improved engraftment following stem cell transplantation
US8632768B2 (en) 2008-05-30 2014-01-21 University Of Louisville Research Foundation, Inc. Human facilitating cells
US8951793B2 (en) 2008-08-21 2015-02-10 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Method of making an isolated population of FOXP3+ regulatory T cells
RU2506311C2 (ru) 2008-10-30 2014-02-10 Йеда Рисёрч Энд Девелопмент Ко. Лтд. Т-клетки центральной памяти против третьей стороны, способы их получения и их применение в трансплантации и лечении заболеваний
JP5756017B2 (ja) 2008-11-07 2015-07-29 サニーブルック ヘルス サイエンシズ センター ヒト前駆ｔ細胞
CN102271711B (zh) 2008-12-12 2014-06-18 国立大学法人东京大学 每种维持移植物抗肿瘤效应的免疫重建促进剂或感染预防剂
DE102009040716B4 (de) 2009-09-10 2011-07-14 Miltenyi Biotec GmbH, 51429 Verwendung von CD154 zur Identifizierung und Abtrennung von nicht-regulatorischen T-Zellen aus einem Gemisch mit regulatorischen T-Zellen
EP3097917B1 (en) * 2010-04-09 2019-08-14 Fred Hutchinson Cancer Research Center Compositions and methods for providing hematopoietic function without hla matching
EP2378287A1 (en) 2010-04-15 2011-10-19 TXCell New method for isolating Tr1 cells
US8957928B2 (en) 2010-06-04 2015-02-17 Ricoh Company, Ltd. Image forming apparatus
EP2593542B1 (en) 2010-07-13 2018-01-03 Anthrogenesis Corporation Methods of generating natural killer cells
AU2012205643A1 (en) 2011-01-10 2013-07-25 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Enhancement of allogeneic hematopoietic stem cell transplantation
EP2686417B1 (de) * 2011-03-17 2016-06-08 Miltenyi Biotec GmbH Tcralpha/beta-depletierte zellpräparationen
CA2840424C (en) * 2011-07-01 2022-02-01 Beckman Coulter, Inc. Regulatory t cells and methods of identifying, obtaining and using to treat immuno-based disorders
EP2753351B1 (en) 2011-09-08 2017-06-21 Yeda Research and Development Co. Ltd. Anti third party central memory t cells, methods of producing same and use of same in transplantation and disease treatment
AU2012323781B8 (en) * 2011-10-14 2015-05-14 Teva Pharmaceuticals Australia Pty Ltd. Antibodies to CD1d
US9896659B2 (en) 2011-10-19 2018-02-20 Stowers Institute For Medical Research Methods, kits, and compositions for stem cell self-renewal
WO2013076268A1 (en) 2011-11-23 2013-05-30 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Population of immunoregulatory t cells specific for an irrelevant antigen and uses thereof for preventing or treating immune diseases
SG11201403456UA (en) 2011-12-22 2014-07-30 Yeda Res & Dev A combination therapy for a stable and long term engraftment using specific protocols for t/b cell depletion
US9657290B2 (en) 2012-07-03 2017-05-23 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Scalable bio-element analysis
AU2013292330B2 (en) 2012-07-20 2018-07-12 Taiga Biotechnologies, Inc. Enhanced reconstitution and autoreconstitution of the hematopoietic compartment
DK2953634T3 (da) 2013-02-07 2021-08-30 Massachusetts Gen Hospital Fremgangsmåder til udvidelse eller udtømning af regulerende t-celler
KR102164270B1 (ko) 2013-03-25 2020-10-12 고에키 자이단 호징 고베 이료 산교 도시 스이신 기코 세포의 선별 방법
CN111265531B (zh) 2013-10-25 2023-11-10 药品循环有限责任公司 治疗和预防移植物抗宿主病的方法
CN105916521A (zh) 2013-11-15 2016-08-31 人类起源公司 包含人胎盘灌注液细胞、其亚群的组合物及其用途
WO2015112793A2 (en) * 2014-01-27 2015-07-30 St. Jude Children's Research Hospital, Inc. Methods of expanding ex vivo natural killer t (nkt) cells and therapeutic uses thereof
EP3107996B1 (en) 2014-02-21 2020-02-19 Colmmune, Inc. Tscm cells and methods for use
EP3190415B1 (en) * 2014-07-25 2019-05-01 Riken Memory invariant nkt cell marker
EP3194577A4 (en) 2014-09-17 2018-04-04 The Johns Hopkins University Reagents and methods for identifying, enriching, and/or expanding antigen-specific t cells
JP7146397B2 (ja) 2014-11-17 2022-10-04 アディセット バイオ， インコーポレイテッド 改変γδＴ細胞
WO2016100236A2 (en) 2014-12-15 2016-06-23 Bellicum Pharmaceuticals, Inc. Methods for controlled elimination of therapeutic cells
AU2015374296B2 (en) 2014-12-29 2021-09-02 Novartis Ag Methods of making chimeric antigen receptor-expressing cells
CA2972899C (en) 2014-12-30 2023-08-08 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Methods to improve cell therapy
US20160243168A1 (en) 2015-02-17 2016-08-25 Cantex Pharmaceuticals, Inc. Adoptive cell transfer methods
US10526600B2 (en) 2015-02-22 2020-01-07 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Micro-screening apparatus, process, and products
EP3292200A4 (en) * 2015-05-05 2018-10-31 Fate Therapeutics, Inc. Modulation of t lymphocytes
US20180153145A1 (en) 2015-05-22 2018-06-07 Champions Oncology, Inc. Humanized mice and uses thereof
MA42895A (fr) * 2015-07-15 2018-05-23 Juno Therapeutics Inc Cellules modifiées pour thérapie cellulaire adoptive
US10660954B2 (en) 2015-07-31 2020-05-26 University Of Florida Research Foundation, Incorporated Hematopoietic stem cells in combinatorial therapy with immune checkpoint inhibitors against cancer
CN108025023A (zh) 2015-08-25 2018-05-11 Uab研究基金会 用于干细胞移植的方法
WO2017042170A1 (en) 2015-09-07 2017-03-16 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) A new subpopulation of cd8+cd45rclow tregs and uses thereof
EP3349770A1 (en) 2015-09-14 2018-07-25 Regents of the University of Minnesota Nk cells exhibiting an adaptive phenotype and methods for preparing and for using
WO2017078807A1 (en) 2015-11-04 2017-05-11 Fate Therapeutics, Inc. Methods and compositions for inducing hematopoietic cell differentiation
WO2017094008A1 (en) 2015-12-01 2017-06-08 The Medical Research, Infrastructure, And Health Services Fund Of The Tel Aviv Medical Center Improved cytometric assays
JP2018537472A (ja) 2015-12-04 2018-12-20 フレッド ハッチンソン キャンサー リサーチ センター 増殖造血幹細胞／前駆細胞集団の利用
EP3405568A4 (en) * 2016-01-20 2019-12-04 Fate Therapeutics, Inc. COMPOUNDS AND METHODS FOR IMMUNOCELL MODULATION IN ADOPTIVE IMMUNOTHERAPIES
CA3010236A1 (en) * 2016-01-20 2017-07-27 Fate Therapeutics, Inc. Compositions and methods for immune cell modulation in adoptive immunotherapies
WO2017132446A1 (en) 2016-01-29 2017-08-03 Tract Therapeutics, Inc. Immune cell selection, expansion, and use
WO2017156365A1 (en) 2016-03-11 2017-09-14 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Methods of generating antigen-specific t cells for adoptive immunotherapy
US20170296588A1 (en) 2016-04-19 2017-10-19 AngioStem, Inc. Mesenchymal stem cells derived from placental sources
EP3484496B1 (en) 2016-07-14 2023-12-27 University of Southern California Methods and composition for producing and using immune cells and stem cells for cell-based therapies
WO2018053485A1 (en) 2016-09-19 2018-03-22 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Micro-screening and sorting apparatus, process, and products
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