JP2018537472A - 増殖造血幹細胞／前駆細胞集団の利用 - Google Patents

Abstract

増殖臍帯血造血幹細胞／前駆細胞（ＨＳＰＣ）の使用について説明する。例としては、移植拒絶反応の軽減と、免疫寛容の誘導と、完全静脈栄養（ＴＰＮ）の補給、オピオイドの使用、粘膜炎及び医療処置後の入院の低減と、同種異系移植後の移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）の軽減が挙げられる。

Description

関連出願の相互参照
本願は、２０１５年１２月４日に提出された米国特許仮出願第６２／２６３，４７０号と、２０１５年１２月４日に提出された米国特許仮出願第６２／２６３，５７３号（いずれも、参照により、その全体が本明細書に援用される）に基づく優先権を主張するものである。

政府支援の言明
本発明は、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈにより付与されたＲＣ２ＨＬ１０１８４４と、Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓによって付与されたＨＨＳ０１００２００８０００６４Ｃの下、政府の支援によって行われたものである。米国政府は、本発明において一定の権利を有する。

増殖臍帯血造血幹細胞／前駆細胞（ＨＳＰＣ）の使用について説明する。例としては、移植拒絶反応の軽減と、免疫寛容の誘導と、完全静脈栄養（ＴＰＮ）の補給、オピオイドの使用及び医療処置後の入院の低減と、粘膜炎の軽減と、同種異系移植後の移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）の軽減が挙げられる。

ＵＳ２０１３／００９５０７９には、いずれかの患者に、その患者と臨床製品とのいかなる程度の免疫学的な適合もなしに、安全に投与できるＣＤ３４＋濃縮型増殖ヒト臍帯血幹細胞（Ｅｘｐ−ＣＢＳＣ）を含む画期的な臨床製品の開発について記載されている。Ｅｘｐ−ＣＢＳＣは、免疫抑制状態の患者が免疫機能を回復させる時間を短縮することが示された。例えば、Ｅｘｐ−ＣＢＳＣは、化学療法の患者が、Ｅｘｐ−ＣＢＳＣを投与されなかった場合よりも速く、免疫機能を回復させるのを助けた。急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）及び急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）の治療として臍帯血移植を受けるための前処置後の重度の免疫不全状態の患者でも、同じ効果が見られた。Ｅｘｐ−ＣＢＳＣは同様に、これらの臍帯血移植レシピエントの患者が、Ｅｘｐ−ＣＢＳＣを投与されなかった患者よりも速く、免疫機能を回復させるのを助けた。Ｅｘｐ−ＣＢＳＣは、免疫機能の低下または不全による感染、疾患の再発、及び治療によるその他の高致死率な合併症を軽減することによって、患者の転帰を大きく改善させた。

米国特許出願公開第２０１３／００９５０７９号明細書

本開示は、ＵＳ２０１３／００９５０７９に記載されているＣＤ３４＋濃縮型増殖ヒト臍帯血幹細胞（Ｅｘｐ−ＣＢＳＣ）には、多様な患者集団において、予期しなかった追加の臨床効果があることを示す。例えば、Ｅｘｐ−ＣＢＳＣは、移植拒絶反応を軽減し、完全静脈栄養の補給、オピオイドの使用及び医療処置後の入院を低減し、粘膜炎を軽減し、同種異系移植後の移植片対宿主病を軽減する。Ｅｘｐ−ＣＢＳＣの予期しなかったこれらの追加の臨床効果は、患者の転帰も大きく改善させる。移植拒絶反応、粘膜炎及び移植片対宿主病の軽減により、移植後の生存期間とクオリティオブライフが向上する。完全静脈栄養の補給の低減により、このような人工栄養が原因で発生し得る多くの合併症が回避される。オピオイドの使用に対する患者の暴露の低減は、現在蔓延している鎮痛薬乱用に対処する助けとなることができる。最終的には、医療処置後の入院の低減により、診療に関わるコストが削減されるとともに、同様に、患者が入院中に負担する機会損失コストが削減される。これらの利用と利点についてはそれぞれ、下記の発明を実施するための形態でさらに詳しく説明する。これらの形態は、個別に、また連動して、多様な患者集団において、ＵＳ２０１３／００９５０７９に記載されているＥｘｐ−ＣＢＳＣによって得られる大きな臨床効果に関するさらなるエビデンスを提供する。

ＣＤ３４＋細胞の集団を濃縮して、その濃縮集団を増殖する例示的な手順を示しているフローチャートである。 本明細書とＵＳ２０１３／００９５０７９に記載されている方法を用いて増殖した後の細胞の表現型である。 本明細書とＵＳ２０１３／００９５０７９に記載されている方法を用いて培養した後の増殖前と増殖後の細胞絶対数と増殖率である。 本明細書とＵＳ２０１３／００９５０７９に記載されている方法を用いた１９種類のフルスケール増殖液における、増殖後の全有核細胞及びＣＤ３４＋細胞の開始時の数と、終了時の数と、増殖率の値である。 本明細書とＵＳ２０１３／００９５０７９に記載されている方法を用いて増殖した後のそれぞれの増殖ヒト臍帯血幹細胞試料の総有核細胞数（ＴＮＣ）及びＣＤ３４＋細胞数と、凍結保存前の細胞生存率と、各凍結バッグ内のＴＮＣ及びＣＤ３４＋細胞数である。 図６Ａ〜６Ｃ：Ｄｅｌｔａ１^{ｅｘｔ−ＩｇＧ}（ＤＸＩ）で培養したマウス細胞の注入により、主要組織適合遺伝子複合体不適合レシピエントが再構築され、全身放射線照射（ＴＢＩ）によって誘導される死滅が緩和される。実験設計（図６Ａ）：Ｂ６−Ｌｙ５ａ（Ｈ−２ｂ、ＣＤ４５．１）マウスから得たＬＳＫをソーティングし、ＤＸＩ（５ｍｇ／ｍｌ）またはＩｇＧをコートしたフラスコで２週間培養した。６〜８週齢のＢＡＬＢ／ｃＪ（Ｈ−２ｄ、ＣＤ４５．２）マウスに致死量放射線照射を８．５ＧｙのＴＢＩ（^１３７Ｃｓ γ線）で行ってから２〜４時間以内に、ＤＸＩまたはＩｇＧで培養した細胞（培養終了時の新鮮な細胞、または事前に凍結保存した細胞）を静脈内移植した。（図６Ｂ）：１４日の培養の終了時におけるＩｇＧ培養細胞（上のパネル）とＤＸＩ培養細胞（下のパネル）のフローサイトメトリー解析結果である。１×１０^６個の新鮮なＤＸＩ培養細胞またはＩｇＧ培養細胞の移植からの示されている経過時点における末梢血（ＰＢ）と骨髄（ＢＭ）中のドナー細胞（４５．１＋）の割合である（図６Ｃ）。挿入図は、同種異系のＤＸＩ培養細胞を移植した代表的なマウスから、移植後６０日目に得たＰＢ中のドナー（４５．１＋）細胞（左パネル）と、ドナー細胞の骨髄及びＴリンパ球系列分布（右パネル）のフローサイトメトリー解析結果を示している。ＰＢ及びＢＭ中のドナー細胞（４５．１＋）の割合（％）の平均値±標準誤差（バー）である。 図６Ａ〜６Ｃ：Ｄｅｌｔａ１^{ｅｘｔ−ＩｇＧ}（ＤＸＩ）で培養したマウス細胞の注入により、主要組織適合遺伝子複合体不適合レシピエントが再構築され、全身放射線照射（ＴＢＩ）によって誘導される死滅が緩和される。実験設計（図６Ａ）：Ｂ６−Ｌｙ５ａ（Ｈ−２ｂ、ＣＤ４５．１）マウスから得たＬＳＫをソーティングし、ＤＸＩ（５ｍｇ／ｍｌ）またはＩｇＧをコートしたフラスコで２週間培養した。６〜８週齢のＢＡＬＢ／ｃＪ（Ｈ−２ｄ、ＣＤ４５．２）マウスに致死量放射線照射を８．５ＧｙのＴＢＩ（^１３７Ｃｓ γ線）で行ってから２〜４時間以内に、ＤＸＩまたはＩｇＧで培養した細胞（培養終了時の新鮮な細胞、または事前に凍結保存した細胞）を静脈内移植した。（図６Ｂ）：１４日の培養の終了時におけるＩｇＧ培養細胞（上のパネル）とＤＸＩ培養細胞（下のパネル）のフローサイトメトリー解析結果である。１×１０^６個の新鮮なＤＸＩ培養細胞またはＩｇＧ培養細胞の移植からの示されている経過時点における末梢血（ＰＢ）と骨髄（ＢＭ）中のドナー細胞（４５．１＋）の割合である（図６Ｃ）。挿入図は、同種異系のＤＸＩ培養細胞を移植した代表的なマウスから、移植後６０日目に得たＰＢ中のドナー（４５．１＋）細胞（左パネル）と、ドナー細胞の骨髄及びＴリンパ球系列分布（右パネル）のフローサイトメトリー解析結果を示している。ＰＢ及びＢＭ中のドナー細胞（４５．１＋）の割合（％）の平均値±標準誤差（バー）である。 図７Ａ〜７Ｇ：ＤＸＩで培養した凍結保存同種異系細胞の注入により、ドナー特異的免疫寛容が誘導され、皮膚移植片の寿命が延長される。（図７Ａ）：実験設計：ＢＡＬＢ／ｃＪ（Ｈ−２ｄ）マウスに、７．５ＧｙのＴＢＩまたは８．０ＧｙのＴＢＩから２〜４時間以内に、５×１０^６個の同系ＢＡＬＢ／ｃＪ（Ｈ−２ｄ）ＢＭ細胞（コントロールマウス、ｎ＝２０）またはＤＸＩで培養した凍結保存同種異系Ｂ６−Ｌｙ５ａ（Ｈ−２ｂ）細胞（ＤＸＩマウス、ｎ＝３３）を移植した。（図７Ｂ、７Ｃ）：移植から６０日後に、各マウスに、２枚の皮膚移植片を移植した。コントロールマウスには、同系のＨ−２ｄ（ｎ＝９）皮膚移植片、同種異系のＨ−２ｂ（ｎ＝１３）皮膚移植片またはサードパーティーのＨ−２ｋ（ｎ＝１２）皮膚移植片を移植した。ＤＸＩマウスには、同系のＨ−２ｄ（ｎ＝２１）皮膚移植片、同種異系のＨ−２ｂ（ｎ＝２１）皮膚移植片またはサードパーティーのＨ−２ｋ（ｎ＝２０）皮膚移植片を移植した。（図７Ｂ）：同系ＢＭ細胞とともに、Ｈ−２ｄ及びＨ−２ｂ、Ｈ−２ｄ及びＨ−２ｋ、またはＨ−２ｂ及びＨ−２ｋの皮膚移植片を移植したＢＡＬＢ／ｃＪ（Ｈ−２ｄ）マウスの代表的な皮膚移植片である。（図７Ｃ）：ＤＸＩで培養した同種異系細胞とともに、Ｈ−２ｄ及びＨ−２ｂ、Ｈ−２ｄ及びＨ−２ｋ、またはＨ−２ｂ及びＨ−２ｋの皮膚移植片を移植したＢＡＬＢ／ｃＪ（Ｈ−２ｄ）マウスの代表的な皮膚移植片である。（図７Ｄ）：ＤＸＩで培養した細胞を移植したＢＡＬＢ／ｃＪマウスの、術後６０日における代表的な健常なＨ−２ｂ皮膚移植片（左下パネルの矢印と、右下パネルの下側の矢印）と、Ｈ−２ｄ皮膚移植片（右下パネルの上側の矢印）である。（図７Ｅ〜７Ｇ）：同系の（Ｈ−２ｄ）皮膚移植片（コントロールでは９匹、ＤＸＩマウスでは２１匹）（図７Ｅ）と、同種異系の（Ｈ−２ｂ）皮膚移植片（コントロールでは１３匹、ＤＸＩマウスでは２１匹）（図７Ｆ）と、サードパーティーの（Ｈ−２ｋ）皮膚移植片（コントロールでは１２匹、ＤＸＩマウスでは２０匹）（図７Ｇ）の３０日生存率である。^＊＊＊では、ｐ＜０．００１である。 図７Ａ〜７Ｇ：ＤＸＩで培養した凍結保存同種異系細胞の注入により、ドナー特異的免疫寛容が誘導され、皮膚移植片の寿命が延長される。（図７Ａ）：実験設計：ＢＡＬＢ／ｃＪ（Ｈ−２ｄ）マウスに、７．５ＧｙのＴＢＩまたは８．０ＧｙのＴＢＩから２〜４時間以内に、５×１０^６個の同系ＢＡＬＢ／ｃＪ（Ｈ−２ｄ）ＢＭ細胞（コントロールマウス、ｎ＝２０）またはＤＸＩで培養した凍結保存同種異系Ｂ６−Ｌｙ５ａ（Ｈ−２ｂ）細胞（ＤＸＩマウス、ｎ＝３３）を移植した。（図７Ｂ、７Ｃ）：移植から６０日後に、各マウスに、２枚の皮膚移植片を移植した。コントロールマウスには、同系のＨ−２ｄ（ｎ＝９）皮膚移植片、同種異系のＨ−２ｂ（ｎ＝１３）皮膚移植片またはサードパーティーのＨ−２ｋ（ｎ＝１２）皮膚移植片を移植した。ＤＸＩマウスには、同系のＨ−２ｄ（ｎ＝２１）皮膚移植片、同種異系のＨ−２ｂ（ｎ＝２１）皮膚移植片またはサードパーティーのＨ−２ｋ（ｎ＝２０）皮膚移植片を移植した。（図７Ｂ）：同系ＢＭ細胞とともに、Ｈ−２ｄ及びＨ−２ｂ、Ｈ−２ｄ及びＨ−２ｋ、またはＨ−２ｂ及びＨ−２ｋの皮膚移植片を移植したＢＡＬＢ／ｃＪ（Ｈ−２ｄ）マウスの代表的な皮膚移植片である。（図７Ｃ）：ＤＸＩで培養した同種異系細胞とともに、Ｈ−２ｄ及びＨ−２ｂ、Ｈ−２ｄ及びＨ−２ｋ、またはＨ−２ｂ及びＨ−２ｋの皮膚移植片を移植したＢＡＬＢ／ｃＪ（Ｈ−２ｄ）マウスの代表的な皮膚移植片である。（図７Ｄ）：ＤＸＩで培養した細胞を移植したＢＡＬＢ／ｃＪマウスの、術後６０日における代表的な健常なＨ−２ｂ皮膚移植片（左下パネルの矢印と、右下パネルの下側の矢印）と、Ｈ−２ｄ皮膚移植片（右下パネルの上側の矢印）である。（図７Ｅ〜７Ｇ）：同系の（Ｈ−２ｄ）皮膚移植片（コントロールでは９匹、ＤＸＩマウスでは２１匹）（図７Ｅ）と、同種異系の（Ｈ−２ｂ）皮膚移植片（コントロールでは１３匹、ＤＸＩマウスでは２１匹）（図７Ｆ）と、サードパーティーの（Ｈ−２ｋ）皮膚移植片（コントロールでは１２匹、ＤＸＩマウスでは２０匹）（図７Ｇ）の３０日生存率である。^＊＊＊では、ｐ＜０．００１である。 図７Ａ〜７Ｇ：ＤＸＩで培養した凍結保存同種異系細胞の注入により、ドナー特異的免疫寛容が誘導され、皮膚移植片の寿命が延長される。（図７Ａ）：実験設計：ＢＡＬＢ／ｃＪ（Ｈ−２ｄ）マウスに、７．５ＧｙのＴＢＩまたは８．０ＧｙのＴＢＩから２〜４時間以内に、５×１０^６個の同系ＢＡＬＢ／ｃＪ（Ｈ−２ｄ）ＢＭ細胞（コントロールマウス、ｎ＝２０）またはＤＸＩで培養した凍結保存同種異系Ｂ６−Ｌｙ５ａ（Ｈ−２ｂ）細胞（ＤＸＩマウス、ｎ＝３３）を移植した。（図７Ｂ、７Ｃ）：移植から６０日後に、各マウスに、２枚の皮膚移植片を移植した。コントロールマウスには、同系のＨ−２ｄ（ｎ＝９）皮膚移植片、同種異系のＨ−２ｂ（ｎ＝１３）皮膚移植片またはサードパーティーのＨ−２ｋ（ｎ＝１２）皮膚移植片を移植した。ＤＸＩマウスには、同系のＨ−２ｄ（ｎ＝２１）皮膚移植片、同種異系のＨ−２ｂ（ｎ＝２１）皮膚移植片またはサードパーティーのＨ−２ｋ（ｎ＝２０）皮膚移植片を移植した。（図７Ｂ）：同系ＢＭ細胞とともに、Ｈ−２ｄ及びＨ−２ｂ、Ｈ−２ｄ及びＨ−２ｋ、またはＨ−２ｂ及びＨ−２ｋの皮膚移植片を移植したＢＡＬＢ／ｃＪ（Ｈ−２ｄ）マウスの代表的な皮膚移植片である。（図７Ｃ）：ＤＸＩで培養した同種異系細胞とともに、Ｈ−２ｄ及びＨ−２ｂ、Ｈ−２ｄ及びＨ−２ｋ、またはＨ−２ｂ及びＨ−２ｋの皮膚移植片を移植したＢＡＬＢ／ｃＪ（Ｈ−２ｄ）マウスの代表的な皮膚移植片である。（図７Ｄ）：ＤＸＩで培養した細胞を移植したＢＡＬＢ／ｃＪマウスの、術後６０日における代表的な健常なＨ−２ｂ皮膚移植片（左下パネルの矢印と、右下パネルの下側の矢印）と、Ｈ−２ｄ皮膚移植片（右下パネルの上側の矢印）である。（図７Ｅ〜７Ｇ）：同系の（Ｈ−２ｄ）皮膚移植片（コントロールでは９匹、ＤＸＩマウスでは２１匹）（図７Ｅ）と、同種異系の（Ｈ−２ｂ）皮膚移植片（コントロールでは１３匹、ＤＸＩマウスでは２１匹）（図７Ｆ）と、サードパーティーの（Ｈ−２ｋ）皮膚移植片（コントロールでは１２匹、ＤＸＩマウスでは２０匹）（図７Ｇ）の３０日生存率である。^＊＊＊では、ｐ＜０．００１である。 図７Ａ〜７Ｇ：ＤＸＩで培養した凍結保存同種異系細胞の注入により、ドナー特異的免疫寛容が誘導され、皮膚移植片の寿命が延長される。（図７Ａ）：実験設計：ＢＡＬＢ／ｃＪ（Ｈ−２ｄ）マウスに、７．５ＧｙのＴＢＩまたは８．０ＧｙのＴＢＩから２〜４時間以内に、５×１０^６個の同系ＢＡＬＢ／ｃＪ（Ｈ−２ｄ）ＢＭ細胞（コントロールマウス、ｎ＝２０）またはＤＸＩで培養した凍結保存同種異系Ｂ６−Ｌｙ５ａ（Ｈ−２ｂ）細胞（ＤＸＩマウス、ｎ＝３３）を移植した。（図７Ｂ、７Ｃ）：移植から６０日後に、各マウスに、２枚の皮膚移植片を移植した。コントロールマウスには、同系のＨ−２ｄ（ｎ＝９）皮膚移植片、同種異系のＨ−２ｂ（ｎ＝１３）皮膚移植片またはサードパーティーのＨ−２ｋ（ｎ＝１２）皮膚移植片を移植した。ＤＸＩマウスには、同系のＨ−２ｄ（ｎ＝２１）皮膚移植片、同種異系のＨ−２ｂ（ｎ＝２１）皮膚移植片またはサードパーティーのＨ−２ｋ（ｎ＝２０）皮膚移植片を移植した。（図７Ｂ）：同系ＢＭ細胞とともに、Ｈ−２ｄ及びＨ−２ｂ、Ｈ−２ｄ及びＨ−２ｋ、またはＨ−２ｂ及びＨ−２ｋの皮膚移植片を移植したＢＡＬＢ／ｃＪ（Ｈ−２ｄ）マウスの代表的な皮膚移植片である。（図７Ｃ）：ＤＸＩで培養した同種異系細胞とともに、Ｈ−２ｄ及びＨ−２ｂ、Ｈ−２ｄ及びＨ−２ｋ、またはＨ−２ｂ及びＨ−２ｋの皮膚移植片を移植したＢＡＬＢ／ｃＪ（Ｈ−２ｄ）マウスの代表的な皮膚移植片である。（図７Ｄ）：ＤＸＩで培養した細胞を移植したＢＡＬＢ／ｃＪマウスの、術後６０日における代表的な健常なＨ−２ｂ皮膚移植片（左下パネルの矢印と、右下パネルの下側の矢印）と、Ｈ−２ｄ皮膚移植片（右下パネルの上側の矢印）である。（図７Ｅ〜７Ｇ）：同系の（Ｈ−２ｄ）皮膚移植片（コントロールでは９匹、ＤＸＩマウスでは２１匹）（図７Ｅ）と、同種異系の（Ｈ−２ｂ）皮膚移植片（コントロールでは１３匹、ＤＸＩマウスでは２１匹）（図７Ｆ）と、サードパーティーの（Ｈ−２ｋ）皮膚移植片（コントロールでは１２匹、ＤＸＩマウスでは２０匹）（図７Ｇ）の３０日生存率である。^＊＊＊では、ｐ＜０．００１である。 図７Ａ〜７Ｇ：ＤＸＩで培養した凍結保存同種異系細胞の注入により、ドナー特異的免疫寛容が誘導され、皮膚移植片の寿命が延長される。（図７Ａ）：実験設計：ＢＡＬＢ／ｃＪ（Ｈ−２ｄ）マウスに、７．５ＧｙのＴＢＩまたは８．０ＧｙのＴＢＩから２〜４時間以内に、５×１０^６個の同系ＢＡＬＢ／ｃＪ（Ｈ−２ｄ）ＢＭ細胞（コントロールマウス、ｎ＝２０）またはＤＸＩで培養した凍結保存同種異系Ｂ６−Ｌｙ５ａ（Ｈ−２ｂ）細胞（ＤＸＩマウス、ｎ＝３３）を移植した。（図７Ｂ、７Ｃ）：移植から６０日後に、各マウスに、２枚の皮膚移植片を移植した。コントロールマウスには、同系のＨ−２ｄ（ｎ＝９）皮膚移植片、同種異系のＨ−２ｂ（ｎ＝１３）皮膚移植片またはサードパーティーのＨ−２ｋ（ｎ＝１２）皮膚移植片を移植した。ＤＸＩマウスには、同系のＨ−２ｄ（ｎ＝２１）皮膚移植片、同種異系のＨ−２ｂ（ｎ＝２１）皮膚移植片またはサードパーティーのＨ−２ｋ（ｎ＝２０）皮膚移植片を移植した。（図７Ｂ）：同系ＢＭ細胞とともに、Ｈ−２ｄ及びＨ−２ｂ、Ｈ−２ｄ及びＨ−２ｋ、またはＨ−２ｂ及びＨ−２ｋの皮膚移植片を移植したＢＡＬＢ／ｃＪ（Ｈ−２ｄ）マウスの代表的な皮膚移植片である。（図７Ｃ）：ＤＸＩで培養した同種異系細胞とともに、Ｈ−２ｄ及びＨ−２ｂ、Ｈ−２ｄ及びＨ−２ｋ、またはＨ−２ｂ及びＨ−２ｋの皮膚移植片を移植したＢＡＬＢ／ｃＪ（Ｈ−２ｄ）マウスの代表的な皮膚移植片である。（図７Ｄ）：ＤＸＩで培養した細胞を移植したＢＡＬＢ／ｃＪマウスの、術後６０日における代表的な健常なＨ−２ｂ皮膚移植片（左下パネルの矢印と、右下パネルの下側の矢印）と、Ｈ−２ｄ皮膚移植片（右下パネルの上側の矢印）である。（図７Ｅ〜７Ｇ）：同系の（Ｈ−２ｄ）皮膚移植片（コントロールでは９匹、ＤＸＩマウスでは２１匹）（図７Ｅ）と、同種異系の（Ｈ−２ｂ）皮膚移植片（コントロールでは１３匹、ＤＸＩマウスでは２１匹）（図７Ｆ）と、サードパーティーの（Ｈ−２ｋ）皮膚移植片（コントロールでは１２匹、ＤＸＩマウスでは２０匹）（図７Ｇ）の３０日生存率である。^＊＊＊では、ｐ＜０．００１である。 骨髄破壊的臍帯血移植を受けた小児患者であって、体外増殖前駆細胞を投与したかまたはしなかった小児患者の初期入院の平均期間である。 骨髄破壊的臍帯血移植を受けた小児患者であって、体外増殖前駆細胞を投与したかまたはしなかった小児患者における完全静脈栄養（ＴＰＮ、左パネル）とアヘン剤注入（右パネル）の平均使用数である。 図１０Ａ〜１０Ｂ：体外増殖前と後の移植臍帯血に含まれるＣＤ３４＋細胞（図１０Ａ）と全有核細胞（図１０Ｂ）の数の中央値（バー）、四分位範囲（ボックス）及び範囲（ひげ）を未操作臍帯血ユニット（複数可）の総数と比べたものである。有核細胞数では、増殖有核細胞の数と、未操作有核細胞の組み合わせの数との間に、統計的な差は見られなかった（ｐ＝０．７８７）が、ＣＤ３４＋細胞数は、増殖臍帯血の方が有意に高かった（ｐ＜０．０００１）。増殖臍帯血では、増殖前の値と比べて、有核細胞とＣＤ３４＋細胞が有意に増加していた（有核細胞ではｐ＝０．０００６、ＣＤ３４＋細胞ではｐ＜０．０００１）。有核細胞は、中央値で１．９倍（範囲は０．８〜６．９倍）増殖し、ＣＤ３４＋細胞は、中央値で４０．２倍（範囲は２３．８〜１２３．１倍）増殖した。 臍帯血移植を受けた患者のうち、体外増殖細胞のレシピエントと、ＦＨＣＲＣのヒストリカルコントロールにおけるユニットと患者の特徴である。 ３年無病生存率（ＤＦＳ）である。体外増殖細胞レシピエントが８６％（９５％ＣＩ：５６〜９６）であるのに対して、コントロールは６７％（９５％ＣＩ：５２〜７８）である。 群ごとの非再発期死亡の累積発現率である。コントロール群の患者の方が、移植関連死亡率（ＴＲＭ）が有意に高く、体外増殖細胞レシピエントでは、ＴＲＭは見られなかった（コントロール群では１６％（９５％ＣＩ：７〜２７）であったのに対し、体外増殖細胞レシピエントでは０であった）。 群ごとの再発期死亡の累積発現率である。２つの群間では、有意差は見られず、体外増殖細胞レシピエントでは、１３％（９５％ＣＩ：２〜３４）であったのに対して、コントロールでは１６％（９５％ＣＩ：７〜２８）であった。 より重症なグレードＩＩＩ〜ＩＶの急性ＧＶＨＤの群ごとの累積発現率である。体外増殖細胞を投与した患者と、コントロール群の患者において、有意差が見られ、体外増殖細胞のレシピエントでは０％であったのに対して、コントロールでは２６％（９５％ＣＩ：１４〜３８）であった。

ＵＳ２０１３／００９５０７９には、いずれかの患者に、その患者と臨床製品とのいかなる程度の免疫学的な適合性もなしに、安全に投与できたＣＤ３４＋濃縮型増殖ヒト臍帯血幹細胞（Ｅｘｐ−ＣＢＳＣ）を含む画期的な臨床製品の開発について記載されている。Ｅｘｐ−ＣＢＳＣは、免疫抑制状態の患者が免疫機能を回復させる時間を短縮することが示された。例えば、Ｅｘｐ−ＣＢＳＣは、化学療法の患者が、Ｅｘｐ−ＣＢＳＣを投与されなかった場合よりも速く、免疫機能を回復させるのを助けた。急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）及び急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）の治療として臍帯血移植を受けるために、重度の免疫不全状態にした患者でも、同じ効果が見られた。Ｅｘｐ−ＣＢＳＣは同様に、これらの臍帯血移植レシピエントの患者が、Ｅｘｐ−ＣＢＳＣを投与されなかった場合よりも速く、免疫機能を回復させるのを助けた。Ｅｘｐ−ＣＢＳＣは、免疫機能の低下または不全による感染、疾患の再発、及び治療によるその他の高致死率な合併症を軽減することによって、免疫抑制後の患者の転帰を大きく改善させた。

本開示は、ＵＳ２０１３／００９５０７９に記載されているＥｘｐ−ＣＢＳＣには、多様な患者集団において、予期しなかった追加の臨床効果があることを示す。例えば、Ｅｘｐ−ＣＢＳＣは、移植拒絶反応、粘膜炎、完全静脈栄養の補給、オピオイドの使用、及び医療処置後の入院を低減し、同種異系移植後の移植片対宿主病を軽減する。Ｅｘｐ−ＣＢＳＣの予期しなかった、多様な患者におけるこれらの追加の臨床効果は、患者の転帰も大きく改善させる。移植拒絶反応、粘膜炎及び移植片対宿主病の軽減により、固形組織移植及び／または同種異系移植後の生存とクオリティオブライフが向上する。完全静脈栄養の補給の低減により、このような人工栄養が原因で発生し得る多くの合併症が回避される。オピオイドの使用に対する患者の暴露の低減は、現在蔓延している鎮痛薬乱用に対処する助けとなることができる。最終的には、医療処置後の入院の低減により、診療に関わるコストが削減されるとともに、同様に、患者が入院中に負担する機会損失コストが削減される。これらの利用と利点についてはそれぞれ、以下でさらに詳しく説明する。これらの利用と利点は、個別に、または連動して、ＵＳ２０１３／００９５０７９に記載されているＥｘｐ−ＣＢＳＣによって、多様な患者集団において得られる大きな臨床効果に関するさらなるエビデンスを提供する。

Ｅｘｐ−ＣＢＳＣの新たな利用法について説明する前に、念のために、助けとなる定義と、Ｅｘｐ−ＣＢＳＣの作製方法と、それらの特徴を示す。

造血幹細胞：造血幹細胞は、多能性を持っており、最終的には、あらゆるタイプの最終分化血液細胞を作り出す。造血幹細胞は自己複製することができ、あるいは、指向性の向上した前駆細胞に分化することができ、その前駆細胞は、ほんの数種類の血液細胞の祖先であることが不可逆的に決定されている。例えば、造血幹細胞は、（ｉ）骨髄前駆細胞（最終的に、単球と、マクロファージ、好中球、好塩基球、好酸球、赤血球、巨核球／血小板、樹状細胞を生み出す）または（ｉｉ）リンパ前駆細胞（最終的に、Ｔ細胞、Ｂ細胞、及びナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）というリンパ球様細胞を生み出す）に分化できる。幹細胞が骨髄前駆細胞に分化すると、その子孫は、リンパ球系列の細胞を生み出すことはできず、同様に、リンパ前駆細胞は、骨髄系列の細胞を生み出すことはできない。造血と造血幹細胞の分化に関する大まかな考察については、Ｃｈａｐｔｅｒ １７，Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄ Ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｔｈｅ Ｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅ ｏｆ Ｔｉｓｓｕｅｓ，Ａｌｂｅｒｔｓ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｃｅｌｌ，２ｎｄ Ｅｄ．，Ｇａｒｌａｎｄ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， Ｎ．Ｙ．、Ｃｈａｐｔｅｒ ２ ｏｆ Ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，Ａｕｇｕｓｔ ２００６及びＣｈａｐｔｅｒ ５ ｏｆ Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ，２００９，Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ，Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓを参照されたい。

造血幹細胞を特徴付けるためのインビトロアッセイとインビボアッセイ、例えば、免疫不全マウスにおける脾臓コロニー形成（ＣＦＵ−Ｓ）アッセイ及び再構築アッセイが開発されている。さらに、モノクローナル抗体の認識によって定められる細胞表面タンパク質マーカーの有無を用いて、造血幹細胞の認識と単離が行われている。このようなマーカーとしては、ＣＤ３４、ＣＤ３８、ＣＤ４３、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＤ５９、ＣＤ９０、ＣＤ１０９、ＣＤ１１７、ＣＤ１３３、ＣＤ１６６及びＨＬＡ ＤＲ、ならびにこれらを組み合わせたものが挙げられる。Ｃｈａｐｔｅｒ ２ ｏｆ Ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，Ａｕｇｕｓｔ ２００６と、本明細書に引用されている参考文献を参照されたい。

臍帯血の採取：ヒト臍帯血及び／またはヒト胎盤血が、臍帯血幹細胞の供給源である。このような血液は、当該技術分野において知られているいずれかの方法によって採取できる。幹細胞の供給源として、臍帯血または胎盤血を利用すると、臍帯血と胎盤血を容易に、ドナーに外傷を与えることなく得ることができることを含め、多くの利点が得られる。例えば、ヒトの出産時に臍帯血と胎盤血を採取することの考察については、米国特許第５，００４，６８１号を参照されたい。特定的な実施形態では、臍帯血の採取は、Ｇｏｏｄｍａｎらの米国特許第７，１４７，６２６Ｂ２号に開示されている方法によって行う。採血は、無菌状態で行う必要がある。採血後すぐに、臍帯血または胎盤血を抗凝固剤と混合する必要がある。このような抗凝固剤は、ＣＰＤ（シトレート−フォスフェート−デキストロース）、ＡＣＤ（アシッドシトレート−デキストロース）、Ａｌｓｅｖｅｒ液（Ａｌｓｅｖｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９４１，Ｎ．Ｙ．Ｓｔ．Ｊ．Ｍｅｄ．４１：１２６）、Ｄｅ Ｇｏｗｉｎ液（Ｄｅ Ｇｏｗｉｎ，ｅｔ ａｌ．，１９４０，Ｊ．Ａｍ．Ｍｅｄ．Ａｓｓ．１１４：８５０）、Ｅｄｇｌｕｇａｔｅ−Ｍｇ（Ｓｍｉｔｈ，ｅｔ ａｌ．，１９５９，Ｊ．Ｔｈｏｒａｃ．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．Ｓｕｒｇ．３８：５７３）、Ｒｏｕｓ−Ｔｕｒｎｅｒ液（Ｒｏｕｓ ａｎｄ Ｔｕｒｎｅｒ，１９１６，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２３：２１９）、その他のグルコース混合物、ヘパリン、エチルビスクムアセテートなどを含め、当該技術分野において知られているいずれかの抗凝固剤であることができる。概して、Ｈｕｒｎ，１９６８，Ｓｔｏｒａｇｅ ｏｆ Ｂｌｏｏｄ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐｐ．２６−１６０）を参照されたい。特定的な実施形態では、ＡＣＤを用いることができる。

臍帯血は、臍帯から直接的なドレナージによって、及び／または産後の胎盤の根元及び拡張血管から穿刺吸引によって採取できる。概して、米国特許第５，００４，６８１号を参照されたい。

特定の実施形態では、採取した血液試料に対して、ルーチンとして、または臨床で指示された場合のいずれかに、下記の検査を行うことができる。
（ｉ）細菌培養：微生物汚染がないことを確認するために、ルーチンとしての好気及び嫌気条件での院内細菌培養のような確立されたアッセイを行うことができる。
（ｉｉ）病原微生物の診断スクリーニング：特定の病原微生物が存在しないことを確認するために、様々な診断検査を用いることができる。血液を通ることのできる多くの病原体のいずれかに関する診断スクリーニングは、標準的な手順によって行うことができる。一例としては、採取した血液試料（または母体血試料）に対して、ヒト免疫不全ウイルス１型または２型（ＨＩＶ−１またはＨＩＶ−２）の存在に関する診断スクリーニングを行うことができる。ビリオン、ウイルスのコードするタンパク質、ＨＩＶに特異的な核酸、ＨＩＶタンパク質に対する抗体などの検出に基づく多くのアッセイ系のうちのいずれかを用いることができる。採取血液は、ヒトＴリンパ球向性ウイルスＩ型及びＩＩ型（ＨＴＬＶ−Ｉ及びＨＴＬＶ−ＩＩ）、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、サイトメガロウイルス、梅毒、ウエストナイルウイルス、ならびに米国食品医薬品局のような、該当する規制当局によって指定されているその他の感染性物質を含む他の感染症について検査することもできる。

好ましくは、臍帯血を採取する前に、当該臍帯血細胞が、がん、白血病、免疫障害、神経障害、肝炎またはＡＩＤＳなどの遺伝的疾患または感染症を移し得るリスクを特定するために、母体の健康履歴を確認する。採取した臍帯血試料に対して、細胞生存率、ＨＬＡタイピング、ＡＢＯ／Ｒｈタイピング、ＣＤ３４＋細胞数、総有核細胞数のうちの１つ以上に関して検査を行うことができる。

臍帯血幹細胞の濃縮：１人のヒトから出産時に、臍帯血及び／または胎盤血を採取したら、その血液を処理して、濃縮造血幹細胞集団、または臍帯血幹細胞集団を形成する濃縮造血幹細胞集団・前駆細胞集団を作製する。造血幹細胞または造血幹細胞・前駆細胞は、造血幹細胞または造血幹細胞・前駆細胞上で、他のタイプの造血細胞よりも高レベルで発現する特異的マーカーに対して陽性であることができる。例えば、このようなマーカーは、ＣＤ３４、ＣＤ４３、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＤ５９、ＣＤ９０、ＣＤ１０９、ＣＤ１１７、ＣＤ１３３、ＣＤ１６６、ＨＬＡ ＤＲまたはこれらを組み合わせたものであることができる。造血幹細胞または造血幹細胞・前駆細胞は、他のタイプの造血細胞よりも、特異的マーカーに対して陰性であることもできる。例えば、Ｌｉｎは、陰性マーカーとして機能する系列特異的な抗体を組み合わせたものである。ＣＤ３８も、陰性マーカーの一例となる。好ましくは、造血幹細胞または造血幹細胞・前駆細胞は、ＣＤ３４＋細胞である。好ましくは、ＣＢ幹細胞集団は、ＣＤ３４＋幹細胞またはＣＤ３４＋幹・前駆細胞が濃縮された（すなわち、Ｔ細胞が枯渇された）ものである。したがって、濃縮とは、試料中の造血幹細胞または造血幹細胞・前駆細胞の割合を（濃縮手順前の試料中の割合よりも）上昇させるプロセスを指す。精製は、濃縮の一例である。特定的な実施形態では、ＣＤ３４＋細胞（またはその他の好適な抗原に対して陽性の細胞）の数の増大（濃縮手順前の試料に対する、濃縮試料中の細胞の割合として）は、５倍、５０倍、１００倍、２００倍、３５０倍またはそれを超える規模である。特定的な実施形態では、ＣＤ３４＋細胞は、ＣＤ３４に対するモノクローナル抗体（その抗体は、磁気ビーズにコンジュゲートされている）と、ＣＤ３４＋細胞を分離するための磁気細胞分離装置を用いて濃縮する。

特定的な実施形態では、濃縮処理前においては、採取した臍帯血及び／または胎盤血は新鮮であり、事前に凍結保存されていない。

当該技術分野において知られているいずれかの細胞分離／選択技法を用いて、造血幹細胞または造血幹細胞・前駆細胞の濃縮を行うことができる。例えば、細胞表面マーカーの発現差に依存する方法を用いることができる。例えば、ＣＤ３４に対するモノクローナル抗体を用いて、ＣＤ３４を発現している細胞が保持され、ＣＤ３４を発現していない細胞が保持されないようにして、細胞表面マーカーのＣＤ３４を発現している細胞を陽性選択することができる。さらに、使用する分離技法は、選択する細胞の生存能を最大化するものである必要がある。使用する具体的な技法は、分離効率、その方法の細胞毒性、実施のしやすさと速度、ならびに精巧な装置及び／または技術的スキルの必要性によって決まることになる。

分離手順としては、抗体をコートした磁気ビーズを用いる磁気分離、アフィニティクロマトグラフィー、モノクローナル抗体に結合しているか、モノクローナル抗体と併せて用いる細胞障害剤、例えば補体及び細胞毒素、ならびに固体マトリックス、例えばプレートに結合した抗体による「パニング」、またはその他の利便的な技法を挙げてよい。正確な分離／選択を実現する技法としては、様々な精巧度、例えば、複数のカラーチャネル、低角及び鈍角の光拡散検出チャネル、インピーダンスチャネルなどを有することのできる蛍光活性化セルソーターが挙げられる。

抗体は、マーカー、例えば、直接分離できるようにする磁気ビーズ、支持体に結合したアビジンまたはストレプトアビジンによって除去できるビオチン、蛍光活性化セルソーターとともに使用できる蛍光色素などとコンジュゲートして、特定のタイプの細胞の分離を容易にできるようにしてよい。選択される細胞の生存能に深刻な影響を及ぼさないいずれかの技法を用いてよい。

特定的な実施形態では、新鮮な臍帯血ユニットを処理して、磁気細胞分離器、例えば、酸化鉄とデキストランで構成されたナノサイズの超常磁性粒子を特定のモノクローナル抗体に結合させたもの用いるＣｌｉｎｉＭＡＣＳ（登録商標）Ｃｅｌｌ Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ（ドイツ、ベルギッシュ・グラートバッハのＭｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）とともに、磁性粒子に直接または間接的にコンジュゲートした抗ＣＤ３４抗体を用いて、ＣＤ３４＋細胞について選択、すなわち濃縮する。ＣｌｉｎｉＭＡＣＳ（登録商標）Ｃｅｌｌ Ｓｅｐａｒａｔｏｒは、一回の使用で廃棄する使い捨てのチューブセットが装備された密封滅菌システムである。この使い捨てのセットは、採取した臍帯血及び／または胎盤血を１ユニット処理して、ＣＤ３４＋細胞について濃縮するのに用いることができ、この処理後に破棄することができる。同様に、抗ＣＤ１３３抗体を用いて、ＣＤ１３３＋細胞を濃縮することができる。特定的な実施形態では、ＣＤ３４＋ＣＤ９０＋細胞について濃縮することができる。同様に、その標的抗原に対する抗体を用いて、ＣＤ４３、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＤ５９、ＣＤ９０、ＣＤ１０９、ＣＤ１１７、ＣＤ１６６、ＨＬＡ ＤＲまたはこれらを組み合わせたものを発現している細胞について濃縮することができる。

特定的な実施形態では、造血幹細胞または造血幹細胞・前駆細胞について濃縮するまで、１つ以上の臍帯血及び／または胎盤血試料をプールすることができる。特定的な実施形態では、造血幹細胞または造血幹細胞・前駆細胞について濃縮した後、個々のＣＢ幹細胞試料をプールすることができる。特定的な実施形態では、プールする臍帯血及び／もしくは胎盤血試料またはＣＢ幹細胞試料の数は、２個以上（例えば、２個、３個、７個、１５個、３５個）である。特定的な実施形態では、臍帯血及び／もしくは胎盤血試料またはＣＢ幹細胞試料は、存在する細胞のＨＬＡタイプにかかわらず、プールする。特定的な実施形態では、手段にかかわらず、そのプール中の試料間のＨＬＡの適合性の程度を割り出すための工程を行わない。特定の実施形態では、プール中の試料は、同じ人種、例えば、アフリカ系アメリカ人、コーカソイド、アジア人、ヒスパニック、ネイティブ・アメリカン、オーストラリアのアボリジニ、イヌイット、太平洋諸島系の個体の臍帯血及び／もしくは胎盤血に由来するか、または同じ民族、例えば、アイルランド人、イタリア人、日本人、中国人、ロシア人などの個体の臍帯血及び／もしくは胎盤血に由来する。

任意に応じて、造血幹細胞または造血幹細胞・前駆細胞について濃縮する前に、臍帯血の赤血球細胞と白血球細胞を分離することができる。赤血球細胞と白血球細胞を分離したら、赤血球細胞画分を破棄できるとともに、白血球細胞画分を上記のような磁気細胞分離器で処理することができる。白血球細胞と赤血球細胞の画分の分離は、遠心分離技法を含め、当該技術分野において知られているいずれかの方法によって行うことができる。使用できるその他の分離方法としては、市販品のＦＩＣＯＬＬ（商標）、ＦＩＣＯＬＬ−ＰＡＱＵＥ（商標）またはＰＥＲＣＯＬＬ（商標）（ニュージャージー州ピスカタウェイのＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）の使用が挙げられる。ＦＩＣＯＬＬ−ＰＡＱＵＥ（商標）は通常、コニカルチューブの下に配置し、全血を上に重層する。遠心分離後、上から下に向かって、血漿及びその他の構成成分と、末梢血単核球（白血球細胞）を含むバフィーコートという単核球層と、ＦＩＣＯＬＬ−ＰＡＱＵＥ（商標）と、赤血球及び顆粒球（ペレット形態で存在しているはずである）という、遠心後の層がコニカルチューブ内で視認可能になる。この分離技法により、末梢血単核球を容易に回収可能になる。

任意に応じて、ＣＤ３４＋細胞の選択前に、新鮮な臍帯血ユニットのアリコートの総有核細胞数及び／またはＣＤ３４＋含有量を調べることができる。特定的な実施形態では、ＣＤ３４＋細胞の選択後、ＣＤ３４＋（「ＣＢ幹細胞」）とＣＤ３４−細胞の画分の両方を回収する。患者に対するＨＬＡマッチングを行わなくても、任意に応じて、初期ＨＬＡタイピングの検査と後のキメリズムの検査用に、ＣＤ３４−細胞分画の試料から、ＤＮＡを抽出することができる。ＣＤ３４＋濃縮型幹細胞分画（「ＣＢ幹細胞」）は、増殖前に、後処理を行うことができ、例えば、輸送または保管のために、幹細胞を適切な細胞培養培地に懸濁できる。特定的な実施形態では、細胞培養培地としては、組み換えヒトインターロイキン−３（ｒｈＩＬ−３、例えば、１０ｎｇ／ｍｌまたは本明細書に記載されているその他の濃度）、組み換えヒトインターロイキン−６（ｒｈＩＬ−６、例えば、５０ｎｇ／ｍｌまたは本明細書に記載されているその他の濃度）、組み換えヒトトロンボポエチン（ｒｈＴＰＯ、５０ｎｇ／ｍｌまたは本明細書に記載されているその他の範囲）、組み換えヒトＦｌｔ−３リガンド（ｒｈＦｌｔ−３Ｌ、例えば、５０ｎｇ／ｍｌまたは本明細書に記載されているその他の濃度）及び組み換えヒト幹細胞因子（ｒｈＳＣＦ、例えば、５０ｎｇ／ｍｌまたは本明細書に記載されているその他の濃度）を添加したＳＴＥＭＳＰＡＮ（商標）無血清増殖培地（ブリティッシュコロンビア州バンクーバーのＳｔｅｍＣｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）が挙げられる。

特定的な実施形態では、臍帯血及び／または胎盤血試料は、赤血球が除去されたものであり、赤血球が除去された画分中のＣＤ３４＋細胞数を算出する。特定的な実施形態では、３５０万個超のＣＤ３４＋細胞を含む臍帯血及び／または胎盤血試料を上記の濃縮方法によって濃縮できるが、３５０万個未満のＣＤ３４＋細胞を含む試料を用いてもよい。

臍帯血幹細胞の増殖方法：上記の濃縮方法または当該技術分野において知られているその他の方法に従って、１人以上のヒトから出産時に採取したヒト臍帯血及び／またはヒト胎盤血からＣＢ幹細胞を単離した後、造血幹細胞または造血幹細胞・前駆細胞、例えばＣＤ３４＋細胞の数を増やすために、ＣＢ幹細胞を増殖する。増殖ＣＢ幹細胞を生み出すＣＢ幹細胞の数を増やす方法のうち、当該技術分野において知られているいずれかの方法を用いることができる。ＣＢ幹細胞は、細胞成長条件（例えば、有糸分裂を促す条件）下で培養して、ＣＢ幹細胞が成長及び分裂（増殖）して、増殖ＣＢ幹細胞集団を得るようにできる。特定的な実施形態では、細胞のＨＬＡのタイプにかかわらず、増殖技法を行う前または後に、出産時の１人のヒトの臍帯血及び／または胎盤血にそれぞれ由来する個々のＣＢ幹細胞集団をプールすることができる。特定的な実施形態では、増殖させる試料は、試料プールではない。特定的な実施形態では、増殖に用いる技法は、（ｉ）増殖試料中の造血幹細胞もしくは造血幹細胞・前駆細胞、例えばＣＤ３４＋細胞の数を未増殖のＣＢ幹細胞試料よりも増加させること、及び／または（ｉｉ）増殖試料中のＳＣＩＤ再構築細胞の数を増加させること（限界希釈解析によって割り出し、増殖試料を注入したＮＯＤ／ＳＣＩＤマウスでの正着が、未増殖試料の場合よりも増大したことによって示され、この際、未増殖試料と増殖試料は、同じ試料の異なるアリコートに由来するものであり、増殖試料に対しては、増殖技法を実施し、未増殖試料には実施しない）が示されている技法である。特定の実施形態では、この技法により、増殖試料中の造血幹細胞または造血幹細胞・前駆細胞の数が、未増殖のＣＢ幹細胞試料と比べて、５倍、７５倍、１００倍、２００倍、３５０倍、または５００倍以上増加する。造血幹細胞または造血幹細胞・前駆細胞は、ＣＤ３４、ＣＤ４３、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＤ５９、ＣＤ９０、ＣＤ１０９、ＣＤ１１７、ＣＤ１３３、ＣＤ１６６及びＨＬＡ ＤＲのうちの１つ以上に対して陽性であることができ、及び／または、Ｌｉｎ及び／もしくはＣＤ３８に対して陰性であることができる。特定的な実施形態では、正着の増大は、増殖試料のアリコートを注入したマウスの骨髄中のヒトＣＤ４５＋細胞の割合が、例えば、注入から１０日、３週間または９週間後に、未増殖試料のアリコートを注入したマウスよりも上昇したことを検出することによって検出できる（Ｄｅｌａｎｅｙ ｅｔ ａｌ．，２０１０，Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄ．１６（２）：２３２−２３６を参照されたい）。

このような増殖技法としては、米国特許第７，３９９，６３３号、Ｄｅｌａｎｅｙ ｅｔ ａｌ．，２０１０，Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄ．１６（２）：２３２−２３６、Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．，２００８，Ｂｌｏｏｄ １１１：３４１５−３４２３及びＨｉｍｂｕｒｇ ｅｔ ａｌ．，２０１０，Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄ．１６，４７５−４８２に記載されている技法と、ＷＯ／２０１３／０８６４３６に記載されているような芳香族炭化水素レセプターアンタゴニスト、ＷＯ／２０１３／１７９６３３に記載されているようなＬＩＬＲＢ２アゴニスト、及びヒドロゲル（例えば、両性イオン性ヒドロゲル）を用いた増殖と、下記の技法が挙げられる。

特定的な実施形態では、成長因子を用いてＣＢ幹細胞を培養し、細胞成長条件（例えば、有糸分裂を促進する条件）に暴露して、その幹細胞が増殖して、増殖ＣＢ幹細胞集団を得るようにする。特定的な実施形態では、分化を阻害するのに有効な量のＮｏｔｃｈ機能アゴニストを用いてＣＢ幹細胞を培養し、細胞成長条件（例えば、有糸分裂を促進する条件）に暴露して、ＣＢ幹細胞が増殖して、増殖ＣＢ幹細胞集団を得るようにする。特定的な実施形態では、分化を阻害するのに有効な量のＮｏｔｃｈ機能アゴニストを用いるとともに、成長因子の存在下で、ＣＢ幹細胞を培養し、細胞成長条件（例えば、有糸分裂を促進する条件）に暴露して、ＣＢ幹細胞が増殖して、増殖ＣＢ幹細胞集団を得るようにする。このようにして得られた増殖ＣＢ幹細胞集団は、後で使用するために凍結して、保存することができる。任意に応じて、患者に移植する前に、（例えば、分離、希釈によって）Ｎｏｔｃｈ経路アゴニストを不活化するか、または増殖ＣＢ幹細胞集団から除去する。

具体的な実施形態では、ＣＢ幹細胞は、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、２１日、２２日、２３日、２４日もしくは２５日以上培養し、または、特定的な実施形態では、ＣＢ幹細胞は、少なくとも１０日間培養する。

ＣＢ幹細胞を増殖するためのその他の例示的な培養条件は、Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．，２００８，Ｂｌｏｏｄ １１１：３４１５−３４２３に示されている。特定的な実施形態では、ＣＢ幹細胞は、ヘパリン、幹細胞因子、トロンボポエチン、インスリン様成長因子−２（ＩＧＦ−２）、線維芽細胞成長因子−１（ＦＧＦ−１）及びＡｎｇｐｔ１３またはＡｎｇｐｔ１５を添加した無血清培地で培養できる。特定的な実施形態では、培地に、１０μｇ／ｍｌのヘパリン、１０ｎｇ／ｍｌの幹細胞因子、２０ｎｇ／ｍｌのトロンボポエチン、２０ｎｇ／ｍｌのＩＧＦ−２、１０ｎｇ／ｍｌのＦＧＦ−１及び１００ｎｇ／ｍｌのＡｎｇｐｔ１３またはＡｎｇｐｔ１５を添加し、細胞を１９〜２３日間培養する。特定的な実施形態では、ＣＢ幹細胞は、１０μｇ／ｍｌのヘパリン、１０ｎｇ／ｍｌの幹細胞因子、２０ｎｇ／ｍｌのトロンボポエチン、１０ｎｇ／ｍｌのＦＧＦ−１及び１００ｎｇ／ｍｌのＡｎｇｐｔ１５を添加した無血清培地で、そのＣＢ幹細胞を１１〜１９日間培養することによって増殖できる。特定的な実施形態では、ＣＢ幹細胞は、５０ｎｇ／ｍｌの幹細胞因子、１０ｎｇ／ｍｌのトロンボポエチン、５０ｎｇ／ｍｌのＦｌｔ−３レセプターリガンド及び１００ｎｇ／ｍｌのインスリン様成長因子結合タンパク質−２（ＩＧＦＢＰ２）または５００ｎｇ／ｍｌのＡｎｇｐｔ１５を添加した無血清培地で、そのＣＢ幹細胞を１０日間培養することによって増殖できる。特定的な実施形態では、ＣＢ幹細胞は、１０μｇ／ｍｌのヘパリン、１０ｎｇ／ｍｌの幹細胞因子、２０ｎｇ／ｍｌのトロンボポエチン、１０ｎｇ／ｍｌのＦＧＦ−１、５００ｎｇ／ｍｌのＡｎｇｐｔ１５及び５００ｎｇ／ｍｌのＩＧＦＢＰ２を添加した無血清培地で、そのＣＢ幹細胞を１１日間培養することによって増殖できる。Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．，２００８，Ｂｌｏｏｄ １１１：３４１５−３４２３を参照されたい。

ＣＢ幹細胞を増殖するための例示的な培養条件は、Ｈｉｍｂｕｒｇ ｅｔ ａｌ．，２０１０，Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄ．，１６，４７５−４８２に示されている。特定的な実施形態では、ＣＢ幹細胞は、トロンボポエチン、幹細胞因子、Ｆｌｔ−３レセプターリガンド及びプレイオトロフィンを添加した液体懸濁培養液で培養できる。特定的な実施形態では、液体懸濁培養液に、２０ｎｇ／ｍｌのトロンボポエチン、１２５ｎｇ／ｍｌの幹細胞因子、５０ｎｇ／ｍｌのＦｌｔ−３レセプターリガンド及び１０ｎｇ／ｍｌ、１００ｎｇ／ｍｌ、５００ｎｇ／ｍｌまたは１０００ｎｇ／ｍｌのプレイオトロフィンを添加し、ＣＢ幹細胞を７日間培養する。

特定的な実施形態では、ＣＢ幹細胞の増殖後、細胞とＣＤ３４＋生細胞の総数を割り出し、試料が造血機能を発揮する効力を測定する。多くの臨床研究によって、移植幹細胞中の総有核細胞数とＣＤ３４＋細胞数は、好中球及び血小板の正着と、幹細胞移植後の移植不全と早期移植関連合併症（主に致死感染）の発生との相関が高いことが示されている。例えば、増殖中、培養開始から５〜８日目に、総有核生細胞数を割り出すために、試料を取ることができる。加えて、ＣＤ３４＋細胞の総数をマルチパラメータフローサイトメトリーによって、すなわち、試料中のＣＤ３４＋細胞の割合によって割り出すことができる。同様に、凍結保存前または解凍後に、増殖ＣＢ幹細胞試料中の総ＣＤ３４＋生細胞数を算出する目的で、総有核細胞数と、ＣＤ３４＋生細胞の割合を割り出すために、増殖ＣＢ幹細胞試料のアリコートを取ることができる。

特定的な実施形態では、総ＣＤ３４＋（又はその他の抗原に対して陽性の）生細胞数を、治療用の最終製品の発売のための効力アッセイとみなすことができる。生存能は、当該技術分野において知られているいずれかの方法、例えば、トリパンブルー排除法または７−ＡＡＤ排除法によって割り出すことができる。特定的な実施形態では、総有核細胞数（ＴＮＣ）とその他のデータを用いて、製品の効力を算出する。ＣＤ３４＋生細胞の割合は、フローサイトメトリーと、生細胞によって排除される染料の使用によって評価できる。ＣＤ３４＋生細胞の割合は、試料のアリコート中において、７−ＡＡＤ（またはその他の適切な染料）を排除するＣＤ３４＋細胞の数を、そのアリコートのＴＮＣ（生細胞と非生細胞の両方）で除した値である。試料中のＣＤ３４＋生細胞数は、ＣＤ３４＋生細胞数＝試料のＴＮＣ×試料中のＣＤ３４＋生細胞の割合という式によって算出できる。ＣＤ３４＋生細胞について濃縮中または増殖中の比例増加率は、培養後の総ＣＤ３４＋生細胞数／培養前の総ＣＤ３４＋生細胞という式によって算出できる。当然ながら、ＣＤ３４以外の抗原またはＣＤ３４に加えて、他の抗原を用いることができる。

Ｎｏｔｃｈアゴニスト：特定的な実施形態では、ＣＢ幹細胞は、Ｎｏｔｃｈ機能アゴニストと、１つ以上の成長因子またはサイトカインの存在下で、そのＣＢ幹細胞を所定の期間にわたって培養することによって増殖する。ＣＢ幹細胞の培養は、当該技術分野において知られているいずれかの好適な培養培地／条件で行うことができる（例えば、Ｆｒｅｓｈｎｅｙ Ｃｕｌｔｕｒｅ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌｓ，Ｗｉｌｅｙ−Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．（１９９４）を参照されたい）。培養時間は、本明細書に定義されているような増殖ＣＢ幹細胞集団を作製するのに十分な時間である。例えば、ＣＢ幹細胞は、Ｎｏｔｃｈ機能アゴニストと、１つ以上の成長因子またはサイトカインの存在下で、無血清培地において、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、２１日、２２日、２３日、２４日もしくは２５日間、または、特定的な実施形態では、少なくとも１０日間培養できる。任意に応じて、培養期間中のいずれかの時点に、培養培地を新鮮な培地と交換したり、または新鮮な培地を加えたりできる。

Ｎｏｔｃｈアゴニストは、Ｎｏｔｃｈ経路機能の活性化を促す、すなわち、活性化させるか、または活性を向上させる物質である。本明細書で使用する場合、「Ｎｏｔｃｈ経路機能」とは、Ｎｏｔｃｈの細胞内ドメインの核トランスロケーション、ＲＢＰ−Ｊκまたはそのショウジョウバエ相同体Ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ ｏｆ Ｈａｉｒｌｅｓｓの核トランスロケーション、Ｅｎｈａｎｃｅｒ ｏｆ Ｓｐｌｉｔ複合体のｂＨＬＨ遺伝子、例えばＭａｓｔｅｒｍｉｎｄの活性化、ＨＥＳ−１遺伝子またはＫＢＦ２（ＣＢＦ１ともいう）遺伝子の活性化、ショウジョウバエ神経芽細胞分離の阻害、及びＮｏｔｃｈのＤｅｌｔａ、Ｊａｇｇｅｄ／Ｓｅｒｒａｔｅ、Ｆｒｉｎｇｅ、ＤｅｌｔｅｘもしくはＲＢＰ−Ｊκ／Ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ ｏｆ Ｈａｉｒｌｅｓｓ、またはそのホモログもしくはアナログへの結合を含め、Ｎｏｔｃｈシグナリング（シグナル伝達）経路によって媒介される機能を意味するものとする。概して、Ｎｏｔｃｈシグナル伝達経路と、活性化に対するその作用の考察については、Ｋｏｐａｎ ｅｔ ａｌ．，２００９，Ｃｅｌｌ １３７：２１６−２３３による総説論文を参照されたい。また、Ｊａｒｒｉａｕｌｔ ｅｔ ａｌ．，１９９８，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１８：７４２３−７４３１も参照されたい。

Ｎｏｔｃｈの活性化は、細胞をＮｏｔｃｈアゴニストに暴露することによって行う。Ｎｏｔｃｈアゴニストは、可溶性分子、細胞表面上に組み換え発現する分子、前駆細胞が暴露される細胞単層上の分子、または固相上に固定化された分子であることができる。例示的なＮｏｔｃｈアゴニストは、Ｎｏｔｃｈの細胞外ドメインに結合して、Ｎｏｔｃｈシグナル伝達を活性化する細胞外結合リガンドのＤｅｌｔａ及びＳｅｒｒａｔｅ、またはＮｏｔｃｈの細胞外ドメインに結合して、Ｎｏｔｃｈシグナル伝達を活性化するＤｅｌｔａ断片もしくはＳｅｒｒａｔｅ断片である。ＤｅｌｔａとＳｅｒｒａｔｅの核酸配列及びアミノ酸配列は、ヒトを含むいくつかの種から単離されており、当該技術分野において知られており、国際公開第９３／１２１４１号、同第９６／２７６１０号、同第９７／０１５７１号、Ｇｒａｙ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈ．１５４：７８５−７９４に開示されている。特定的な実施形態では、Ｎｏｔｃｈアゴニストは、ＤｅｌｔａもしくはＳｅｒｒａｔｅタンパク質の固定化断片であって、そのタンパク質の細胞外ドメインをｍｙｃエピトープタグに融合したものを含む断片（それぞれ、Ｄｅｌｔａ^{ｅｘｔ−ｍｙｃ}もしくはＳｅｒｒａｔｅ^{ｅｘｔ−ｍｙｃ}）、またはＤｅｌｔａもしくはＳｅｒｒａｔｅタンパク質の固定化断片であって、そのタンパク質の細胞外ドメインをＩｇＧのＦｃ部分に融合したものを含む断片（それぞれ、Ｄｅｌｔａ^{ｅｘｔ−ＩｇＧ}もしくはＳｅｒｒａｔｅ^{ｅｘｔ−ＩｇＧ}）である。Ｎｏｔｃｈアゴニストとしては、Ｎｏｔｃｈタンパク質と、そのアナログ及び誘導体（断片を含む）、Ｎｏｔｃｈ経路の他の要素であるタンパク質と、そのアナログ及び誘導体（断片を含む）、そのタンパク質に対する抗体と、その抗体の断片またはその他の誘導体であって、その抗体の結合領域を含むもの、そのタンパク質と、その誘導体またはアナログをコードする核酸、ならびに、Ｎｏｔｃｈタンパク質またはＮｏｔｃｈ経路内のその他のタンパク質に結合するか、またはそのタンパク質と相互作用して、Ｎｏｔｃｈ経路の活性が促進されるようにするタンパク質と、その誘導体及びアナログが挙げられる。このようなアゴニストとしては、Ｎｏｔｃｈタンパク質と、細胞内ドメインを含むその誘導体、上記の物質をコードするＮｏｔｃｈ核酸、ＮｏｔｃｈリガンドのＮｏｔｃｈ相互作用ドメイン（例えば、ＤｅｌｔａまたはＳｅｒｒａｔｅの細胞外ドメイン）を含むタンパク質が挙げられる。その他のアゴニストとしては、ＲＢＰＲ／Ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ ｏｆ ＨａｉｒｌｅｓｓまたはＤｅｌｔｅｘが挙げられる。Ｆｒｉｎｇｅを用いて、例えばＤｅｌｔａタンパク質と連動して、Ｎｏｔｃｈ活性を増強できる。これらのタンパク質、その断片及び誘導体は、組み換え発現させて、単離することも、化学的に合成することもできる。

特定的な実施形態では、Ｎｏｔｃｈアゴニストは、Ｎｏｔｃｈをアゴナイズするタンパク質、またはその断片もしくは誘導体を組み換え発現させる細胞である。この細胞は、Ｎｏｔｃｈシグナル伝達を活性化すべきＣＢ幹細胞で利用できる形で、Ｎｏｔｃｈアゴニストを発現させる。例えば、その細胞表面などで、Ｎｏｔｃｈアゴニストを分泌、発現させる。

特定的な実施形態では、Ｎｏｔｃｈアゴニストは、Ｎｏｔｃｈシグナリング経路のメンバーに結合するペプチド模倣体、ペプチドアナログ、または有機分子である。このようなアゴニストは、当該技術分野において知られている結合アッセイから選択した結合アッセイ、例えば、Ｒｅｂａｙ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｃｅｌｌ ６７：６８７−６９９及び国際公開第９２／１９７３４号に記載されている細胞凝集アッセイによって同定することができる。

特定的な実施形態では、このアゴニストは、Ｎｏｔｃｈタンパク質またはＮｏｔｃｈの断片（そのＮｏｔｃｈの断片は、アゴニストタンパク質への結合を担うＮｏｔｃｈ領域、例えば、Ｎｏｔｃｈの上皮細胞成長因子様リピート１１及び１２を含む）への結合を媒介するＮｏｔｃｈ相互作用遺伝子によってコードされるタンパク質の断片を少なくとも含むタンパク質である。Ｎｏｔｃｈ相互作用遺伝子とは、本明細書で使用する場合、遺伝子のＮｏｔｃｈ、Ｄｅｌｔａ、Ｓｅｒｒａｔｅ、ＲＢＰＪκ、Ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ ｏｆ Ｈａｉｒｌｅｓｓ及びＤｅｌｔｅｘ、ならびにＤｅｌｔａ／ＳｅｒｒａｔｅファミリーまたはＤｅｌｔｅｘファミリーの他のメンバーのうち、配列相同性または遺伝的相互作用に基づき同定できるメンバー、より一般的には、分子間相互作用（例えば、インビトロでの結合または例えばショウジョウバエにおいて表現型的に示されるような遺伝的相互作用）によって同定される「Ｎｏｔｃｈカスケード」または「Ｎｏｔｃｈ群」の遺伝子のメンバーを意味するものとする。Ｎｏｔｃｈ結合タンパク質の例示的な断片であって、Ｎｏｔｃｈへの結合を担う領域を含む断片は、米国特許第５，６４８，４６４号、同第５，８４９，８６９号及び同第５，８５６，４４１号に記載されている。

Ｎｏｔｃｈアゴニストは、市場から得ることも、組み換え発現によって作製することも、化学的に合成することもできる。

特定的な実施形態では、Ｎｏｔｃｈアゴニストへの細胞の暴露は、細胞表面にＮｏｔｃｈリガンドを組み換え発現させる他の細胞とインキュベートすることによって行うのではなく（ただし、別の実施形態では、この方法を用いることができる）、無細胞Ｎｏｔｃｈリガンドに暴露することによって、例えば、Ｎｏｔｃｈの無細胞リガンド（そのリガンドは、固相の表面に固定化、例えば、組織培養皿の表面に固定化されている）とインキュベートすることによって行う。

具体的な実施形態では、Ｎｏｔｃｈ活性は、Ｎｏｔｃｈリガンド（例えば、Ｄｅｌｔａ、Ｓｅｒｒａｔｅ）をＮｏｔｃｈレセプターの細胞外部分に結合させることによって促進する。Ｎｏｔｃｈシグナリングは、Ｎｏｔｃｈの細胞外ドメインと、隣接細胞上で膜結合しているか、または固体表面に固定化されているそのリガンドとの物理的相互作用によって誘発されると見られる。完全長リガンドは、Ｎｏｔｃｈアゴニストである。１つの細胞上で発現すると、Ｎｏｔｃｈレセプターを発現する隣接細胞において、Ｎｏｔｃｈ経路の活性化を誘発するからである。可溶性のトランケート型ＤｅｌｔａまたはＳｅｒｒａｔｅ分子であって、そのタンパク質の細胞外ドメインまたはそのＮｏｔｃｈ結合部分を含み、組織培養プレートなどの固体表面に固定化されている分子が、特に好ましいＮｏｔｃｈ経路アゴニストである。このような可溶性タンパク質は、抗体または相互作用タンパク質、例えば、融合タンパク質としてＤｅｌｔａもしくはＳｅｒｒａｔｅとともに発現するエピトープタグ（例えば、抗体９Ｅ１０によって認識されるｍｙｃエピトープタグ）に対する抗体によって、または融合タンパク質としてＤｅｌｔａもしくはＳｅｒｒａｔｅとともに発現するエピトープタグ（例えば、プロテインＡが結合する免疫グロブリンエピトープタグ）と相互作用するタンパク質によって、固体表面に固定化できる。

特定的な実施形態では、また、Ａｒｔａｖａｎｉｓ−Ｔｓａｋｏｎａｓらの米国特許第５，７８０，３００号に記載されているように、Ｎｏｔｃｈアゴニストとしては、ＮｏｔｃｈまたはＮｏｔｃｈシグナリング経路のメンバーの活性化に必要な成熟または処理工程を媒介する細胞プロセスを促進または活性化する試薬、例えば、Ｎｏｔｃｈプロセッシングに必要なフューリン様コンバターゼ、Ｎｏｔｃｈの上流において、もしくはＮｏｔｃｈと平行して、Ｎｏｔｃｈ経路の活性化に必要であると考えられているメタロプロテアーゼ−ジスインテグリン（ＡＤＡＭ）のＫｕｚｂａｎｉａｎ（Ｓｃｈｌｏｎｄｏｒｆｆ ａｎｄ Ｂｌｏｂｅｌ，１９９９，Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｓｃｉ．１１２：３６０３−３６１７）、または、より一般的には、細胞輸送及びプロセッシングタンパク質（細胞コンパートメント間の移動に必要なＧＴＰａｓｅのｒａｂファミリーなど）（Ｒａｂ ＧＴＰａｓｅの概要については、Ｏｌｋｋｏｎｅｎ ａｎｄ Ｓｔｅｎｍａｒｋ，１９９７，Ｉｎｔ．Ｒｅｖ．Ｃｙｔｏｌ．１７６：１−８５を参照されたい）が挙げられる。このアゴニストは、上記のプロセスのうちの１つの活性を向上させるいずれかの分子、例えば、フューリン、Ｋｕｚｂａｎｉａｎもしくはｒａｂタンパク質、それらの断片、誘導体もしくはドミナントアクティブ変異体、または上記タンパク質に結合して、その機能を活性化するペプチド模倣体、ペプチドアナログもしくは有機分子をコードする核酸であることができる。

米国特許第５，７８０，３００号にはさらに、Ｎｏｔｃｈ経路を活性化するのに使用できるクラスのＮｏｔｃｈアゴニスト分子（及びその同定方法）、例えば、ＮｏｔｃｈアンキリンリピートとＲＢＰ−Ｊκとの解離を誘発することによって、ＲＢＰ−Ｊκが細胞質から核にトランスロケーションするのを促す分子が開示されている。

成長因子／サイトカイン：特定的な実施形態では、ＣＢ幹細胞は、Ｎｏｔｃｈ機能アゴニストと、１つ以上の成長因子またはサイトカインの存在下で、その細胞を所定の期間にわたって培養することによって増殖する。あるいは、ＣＢ幹細胞は、１つ以上の成長因子またはサイトカインの存在下で、その細胞を所定の期間にわたって培養することによって増殖する。ＣＢ幹細胞を分化させずに増殖するようにする場合、ＣＢ幹細胞は、成長を補助するが、分化は補助しない成長因子の存在下で培養する。成長因子は、いずれかのタイプの分子、例えば、細胞の増殖及び／または生存を促進するタンパク質または化学化合物であることができる。

１つ以上の成長因子へのＣＢ幹細胞の暴露は、ＮｏｔｃｈアゴニストへのＣＢ幹細胞の暴露前、その暴露と同時、またはその暴露後に行うことができる。具体的な例示的実施形態では、増殖培地に存在する成長因子としては、幹細胞因子（ＳＣＦ）（ｃ−ｋｉｔリガンドまたはマスト細胞成長因子としても知られている）、Ｆｌｔ−３リガンド（Ｆｌｔ−３Ｌ）、インターロイキン−６（ＩＬ−６）、インターロイキン−３（ＩＬ−３）、インターロイキン−１１（ＩＬ−１１）及びトロンボポエチン（ＴＰＯ）、顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、アンジオポエチン様タンパク質（Ａｎｇｐｔｌ）（Ａｎｇｐｔｌ２、Ａｎｇｐｔｌ３、Ａｎｇｐｔｌ５、Ａｎｇｐｔｌ７及びＭｆａｐ４）、インスリン成長因子−２（ＩＦＧ−２）、線維芽細胞成長因子−１（ＦＧＦ−１）という成長因子のうちの１つ以上が挙げられる。ＳＣＦ、Ｆｌｔ−３Ｌ、ＩＬ−６またはＴＰＯの量は、１０〜１０００ｎｇ／ｍｌ、特定的な実施形態では５０−５００ｎｇ／ｍｌ、特定的な実施形態では１００〜３００ｎｇ／ｍｌの範囲であることができる。特定的な実施形態では、ＳＣＦ、Ｆｌｔ−３Ｌ、ＩＬ−６またはＴＰＯの量は、１００ｎｇ／ｍｌ、１２５ｎｇ／ｍｌ、１５０ｎｇ／ｍｌ、１７５ｎｇ／ｍｌ、２００ｎｇ／ｍｌ、２２５ｎｇ／ｍｌ、２５０ｎｇ／ｍｌ、２７５ｎｇ／ｍｌ、３００ｎｇ／ｍｌ、３２５ｎｇ／ｍｌ、３５０ｎｇ／ｍｌ、３７５ｎｇ／ｍｌ、４００ｎｇ／ｍｌ、４２５ｎｇ／ｍｌまたは４５０ｎｇ／ｍｌである。ＩＬ−３、ＩＬ−１１、Ｇ−ＣＳＦまたはＧＭ−ＣＳＦの量は、２〜１００ｎｇ／ｍｌ、特定的な実施形態では５〜５０ｎｇ／ｍｌ、特定的な実施形態では７．５〜２５ｎｇ／ｍｌ、特定的な実施形態では１０〜１５ｎｇ／ｍｌの範囲であることができる。特定的な実施形態では、ＩＬ−３、ＩＬ−１１、Ｇ−ＣＳＦまたはＧＭ−ＣＳＦの量は、５ｎｇ／ｍｌ、６ｎｇ／ｍｌ、７ｎｇ／ｍｌ、８ｎｇ／ｍｌ、９ｎｇ／ｍｌ、１０ｎｇ／ｍｌ、１２．５ｎｇ／ｍｌまたは１５ｎｇ／ｍｌである。

特定的な実施形態では、ＣＢ幹細胞を増殖するために、細胞外マトリックスタンパク質が結合されている組織培養皿内で、その細胞を培養する。特定的な実施形態では、その細胞外マトリックスタンパク質は、フィブロネクチン（ＦＮ）またはその断片である。このような断片は、ＣＨ−２９６（Ｄａｏ ｅｔ ａｌ．，１９９８，Ｂｌｏｏｄ ９２（１２）：４６１２−２１）またはＲｅｔｒｏＮｅｃｔｉｎ（登録商標）（組み換えヒトフィブロネクチン断片）（ウィスコンシン州マディソンのＣｌｏｎｔｅｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．）であることができる。

特定的な実施形態では、ＣＢ幹細胞を増殖するために、固定化されたＤｅｌｔａリガンド、例えば、Ｄｅｌｔａの細胞外ドメインと、フィブロネクチンとを含むプラスチックの組織培養皿の上で、それぞれ１００ｎｇ／ｍｌのＳＣＦ及びＴＰＯと、１０ｎｇ／ｍｌのＧＭ−ＣＳＦの存在下で、その細胞を培養する。特定的な実施形態では、ＣＢ幹細胞を増殖するために、固定化されたＤｅｌｔａリガンドとフィブロネクチンとを含むプラスチックの組織培養皿の上で、それぞれ１００ｎｇ／ｍｌのＳＣＦ、Ｆｌｔ−３Ｌ、ＴＰＯ及びＩＬ−６と、１０ｎｇ／ｍｌのＩＬ−３の存在下で、その細胞を培養する。特定的な実施形態では、幹細胞を増殖するために、固定化されたＤｅｌｔａリガンドとフィブロネクチンとを含むプラスチックの組織培養皿の上で、それぞれ１００ｎｇ／ｍｌのＳＣＦ及びＦｌｔ−３Ｌと、それぞれ１０ｍｇ／ｍｌのＧ−ＣＳＦ及びＧＭ−ＣＳＦの存在下で、その細胞を培養する。特定的な実施形態では、ＣＢ幹細胞を増殖するために、固定化されたＤｅｌｔａリガンドとフィブロネクチンとを含むプラスチックの組織培養皿の上で、それぞれ１００ｎｇ／ｍｌのＳＣＦ、Ｆｌｔ−３Ｌ及びＴＰＯと、１０ｍｇ／ｍｌのＧＭ−ＣＳＦの存在下で、その細胞を培養する。特定的な実施形態では、ＣＢ幹細胞を増殖するために、固定化されたＤｅｌｔａリガンドとフィブロネクチンを含むプラスチックの組織培養皿の上で、それぞれ３００ｎｇ／ｍｌのＳＣＦ及びＦｌｔ−３Ｌと、それぞれ１００ｎｇ／ｍｌのＴＰＯ及びＩＬ−６と、１０ｍｇ／ｍｌのＩＬ−３の存在下で、その細胞を培養する。特定的な実施形態では、ＣＢ幹細胞を増殖するために、固定化されたＤｅｌｔａリガンドとフィブロネクチンとを含むプラスチックの組織培養皿の上で、それぞれ１００ｎｇ／ｍｌのＳＣＦ、Ｆｌｔ−３Ｌ及びＴＰＯと、それぞれ１０ｍｇ／ｍｌのＧ−ＣＳＦとＧＭ−ＣＳＦの存在下で、その細胞を培養する。特定的な実施形態では、フィブロネクチンは、組織培養皿から除外するか、または別の細胞外マトリックスタンパク質と交換する。ＣＢ幹細胞の増殖ためのさらなる例示的な培養条件については、Ｂｅｒｎｓｔｅｉｎらの米国特許第７，３９９，６３３Ｂ２号も参照されたい。

成長因子は、市場から得ることも、組み換え発現によって作製することも、化学的に合成することもできる。例えば、Ｆｌｔ−３Ｌ（ヒト）、ＩＧＦ−１（ヒト）、ＩＬ−６（ヒト及びマウス）、ＩＬ−１１（ヒト）、ＳＣＦ（ヒト）、ＴＰＯ（ヒト及びマウス）は、Ｓｉｇｍａ（ミズーリ州セントルイス）から購入できる。ＩＬ−６（ヒト及びマウス）、ＩＬ−７（ヒト及びマウス）、ならびにＳＣＦ（ヒト）は、Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．（メリーランド州ロックビル）から購入できる。

別の実施形態では、成長因子は、組み換え発現またはペプチドの化学合成（例えばペプチド合成装置）によって作製する。成長因子の核酸及びペプチド配列は概して、ＧｅｎＢａｎｋから入手可能である。

特定的な実施形態では、Ｎｏｔｃｈアゴニストの存在下で、ＣＢ幹細胞を増殖する目的で用いる成長因子（複数可）は、ＣＢ幹細胞と同じ種に由来するものである。

ＣＢ幹細胞を増殖するのに適する、成長因子の量または濃度は、成長因子調製物の活性と、成長因子とＣＢ幹細胞との種の一致性などによって決まることになる。概して、成長因子（複数可）とＣＢ幹細胞が同じ種である場合、培養培地中の成長因子の総量は、１ｎｇ／ｍｌ〜５μｇ／ｍｌ、特定的な実施形態では５ｎｇ／ｍｌ〜１μｇ／ｍｌ、特定的な実施形態では１０ｎｇ／ｍｌ〜２００ｎｇ／ｍｌの範囲である。特定的な実施形態では、ＣＢ幹細胞は、そのＣＢ幹細胞をＮｏｔｃｈアゴニストと１００ｎｇ／ｍｌのＳＣＦに暴露することによって増殖する。特定的な実施形態では、ＣＢ幹細胞は、そのＣＢ幹細胞をＮｏｔｃｈアゴニストと、それぞれ１００ｎｇ／ｍｌのＦｌｔ−３Ｌ、ＩＬ−６及びＳＣＦと、１０ｎｇ／ｍｌのＩＬ−１１に暴露することによって増殖する。

凍結保存及び解凍・凍結保存：臍帯血由来のＣＢ幹細胞を増殖した後、増殖ＣＢ幹細胞集団を得たら、その増殖ＣＢ幹細胞集団は、凍結保存することができる。特定的な実施形態では、増殖ＣＢ幹細胞集団を１つ以上のバッグ（またはユニット）で分割して、凍結することができる。特定的な実施形態では、２つ以上の増殖ＣＢ幹細胞集団をプールして、別々のアリコートに分割することができ、各アリコートを凍結する。特定的な実施形態では、増殖ＣＢ幹細胞は、新鮮である。すなわち、増殖または凍結保存の前に、事前に凍結されていない。「凍結する／凍結」及び「凍結保存した／凍結保存」という用語は、本願では、同義的に用いられている。凍結保存は、細胞を生きた形態で凍結する方法であって、当該技術分野において知られているいずれかの方法によることができる。細胞の凍結は通常、破壊的である。冷却すると、細胞内の水分が凍結する。そして、細胞膜に対する浸透作用、細胞の脱水、溶質濃度及び氷結晶の形成によって、障害が生じる。細胞外に氷が形成されると、利用可能な水分が溶液から除去され、細胞から抜き出て、浸透脱水と溶質濃度の上昇が生じて、最終的に、細胞が破壊される。考察については、Ｍａｚｕｒ，Ｐ．，１９７７，Ｃｒｙｏｂｉｏｌｏｇｙ １４：２５１−２７２を参照されたい。

これらの障害作用は、（ａ）凍結保護剤の使用、（ｂ）凍結速度の制御、及び（ｃ）分解反応を最小限にするのに十分に低い温度での保存によって回避できる。

使用できる凍結保護剤としては、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）（Ｌｏｖｅｌｏｃｋ ａｎｄ Ｂｉｓｈｏｐ，１９５９，Ｎａｔｕｒｅ１８３：１３９４−１３９５、Ａｓｈｗｏｏｄ−Ｓｍｉｔｈ，１９６１，Ｎａｔｕｒｅ１９０：１２０４−１２０５）、グリセロール、ポリビニルピロリジン（Ｒｉｎｆｒｅｔ，１９６０，Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８５：５７６）、ポリエチレングリコール（Ｓｌｏｖｉｔｅｒ ａｎｄ Ｒａｖｄｉｎ，１９６２，Ｎａｔｕｒｅ １９６：５４８）、アルブミン、デキストラン、スクロース、エチレングリコール、ｉ−エリトリトール、Ｄ−リビトール、Ｄ−マンニトール（Ｒｏｗｅ ｅｔ ａｌ．，１９６２，Ｆｅｄ．Ｐｒｏｃ．２１：１５７）、Ｄ−ソルビトール、ｉ−イノシトール、Ｄ−ラクトース、コリンクロリド（Ｂｅｎｄｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９６０，Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．１５：５２０）、アミノ酸（Ｐｈａｎ Ｔｈｅ Ｔｒａｎ ａｎｄ Ｂｅｎｄｅｒ，１９６０，Ｅｘｐ．Ｃｅｌｌ Ｒｅｓ．２０：６５１）、メタノール、アセトアミド、グリセロールモノアセテート（Ｌｏｖｅｌｏｃｋ，１９５４，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．５６：２６５）及び無機塩（Ｐｈａｎ Ｔｈｅ Ｔｒａｎ ａｎｄ Ｂｅｎｄｅｒ，１９６０，Ｐｒｏｃ．Ｓｏｃ．Ｅｘｐ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．１０４：３８８、Ｐｈａｎ Ｔｈｅ Ｔｒａｎ ａｎｄ Ｂｅｎｄｅｒ，１９６１，ｉｎ Ｒａｄｉｏｂｉｏｌｏｇｙ，Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｔｈｉｒｄ Ａｕｓｔｒａｌｉａｎ Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ ｏｎ Ｒａｄｉｏｂｉｏｌｏｇｙ，Ｉｌｂｅｒｙ ｅｄ．，Ｂｕｔｔｅｒｗｏｒｔｈ，Ｌｏｎｄｏｎ，ｐ．５９）が挙げられる。特定的な実施形態では、低濃度では細胞に対する毒性のない液体であるＤＭＳＯを使用する。ＤＭＳＯは、小分子であるので、細胞を自由に透過して、水と組み合わさって、その凍結能を改変して、氷の形成による損傷を防ぐことによって、細胞内オルガネラを保護する。血漿を（例えば、２０〜２５％の濃度まで）加えることにより、ＤＭＳＯの保護作用を高めることができる。

制御された遅い冷却速度が重要であることがある。凍結保護剤が異なったり（Ｒａｐａｔｚ ｅｔ ａｌ．，１９６８，Ｃｒｙｏｂｉｏｌｏｇｙ ５（１）：１８−２５）、細胞のタイプが異なったりすると、最適な冷却速度も異なる（例えば、冷却速度が、骨髄幹細胞の生存と、その移植潜在能力に及ぼす作用については、Ｒｏｗｅ ａｎｄ Ｒｉｎｆｒｅｔ，１９６２，Ｂｌｏｏｄ ２０：６３６、Ｒｏｗｅ，１９６６，Ｃｒｙｏｂｉｏｌｏｇｙ ３（１）：１２−１８、Ｌｅｗｉｓ，ｅｔ ａｌ．，１９６７，Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ ７（１）：１７−３２及びＭａｚｕｒ，１９７０，Ｓｃｉｅｎｃｅ１６８：９３９−９４９を参照されたい）。水が氷に変わる融解時の熱は、最小限でなければならない。冷却手順は、例えば、プログラム可能な凍結装置またはメタノール浴の手順を使用することによって行うことができる。

プログラム可能な凍結装置により、最適な冷却速度を割り出すことが可能になり、標準的な再現可能な冷却が容易になる。制御された速度のプログラム可能なフリーザー（ＣｒｙｏｍｅｄまたはＰｌａｎａｒなど）により、凍結レジメンを所望の冷却速度曲線に合わせることができるようになる。例えば、１０％ＤＭＳＯ及び２０％血漿中の骨髄細胞では、最適な速度は、０℃から−８０℃まで１℃〜３℃／分である。特定的な実施形態では、新生児細胞で、この冷却速度を使用できる。細胞を入れる容器は、凍結と解凍の両方を有効に制御するために、低温で安定しているとともに、速やかに熱を伝導できなければならない。複数の少量（１〜２ｍｌ）用には、密閉プラスチックバイアル（例えば、Ｎｕｎｃ、Ｗｈｅａｔｏｎ ｃｒｙｕｌｅｓ）またはガラスアンプルを使用でき、より多くの量（１００〜２００ｍｌ）は、冷却中の熱伝導の向上のために、金属プレート間に保持したポリオレフィンバッグ（例えば、Ｄｅｈｎｅｄ）で凍結できる。骨髄細胞バッグは、偶発的に３℃／分の冷却速度をもたらす、−８０℃のフリーザーに入れることによってうまく凍結されてきている。

特定的な実施形態では、メタノール浴の冷却法を用いることができる。メタノール浴の方法は、複数の少量アイテムを大規模に日常的に凍結保存するのに非常に適している。この方法には、凍結速度の手動制御も、凍結速度をモニタリングするための記録装置も不要である。特定的な実施形態では、ＤＭＳＯで処理した細胞を氷上で予冷して、冷却メタノールを含むトレイに移し、その後、そのトレイを−８０℃の機械的冷蔵庫（例えば、ＨａｒｒｉｓまたはＲｅｖｃｏ）に入れる。メタノール浴と試料の熱電対による測定から、１℃〜３℃／分という所望の冷却速度が示されている。少なくとも２時間後に、検体は、−８０℃の温度に達し、恒久保存のために、液体窒素（−１９６℃）に直接入れることができる。

十分に凍結した後、増殖ＣＢ幹細胞を長期極低温保存容器に移すことができる。特定的な実施形態では、試料は、液体窒素（−１９６℃）またはその蒸気（−１６５°Ｃ）中で極低温保存することができる。このような保存は、熱の漏洩と窒素の喪失が極限まで小さく保たれるように、極低真空状態及び内側が超断熱状態になっている大きなＴｈｅｒｍｏｓ容器のような高効率な液体窒素冷蔵庫の可用性によって大きく促進される。

好適なラックシステムは市販されており、個々の検体の目録の作成、保存及び検索に、そのシステムを用いることができる。

造血幹細胞、特に骨髄または末梢血由来の造血幹細胞の操作、凍結保存、及び長期保存のための考察事項及び手順の大部分は、増殖ＣＢ幹細胞に適用可能である。このような考察は、例えば、Ｇｏｒｉｎ，１９８６，Ｃｌｉｎｉｃｓ Ｉｎ Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｙ １５（１）：１９−４８、Ｂｏｎｅ−Ｍａｒｒｏｗ Ｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｏｎ，Ｃｕｌｔｕｒｅ ａｎｄ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ａ Ｐａｎｅｌ，Ｍｏｓｃｏｗ，Ｊｕｌ．２２−２６，１９６８，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ａｔｏｍｉｃ Ｅｎｅｒｇｙ Ａｇｅｎｃｙ，Ｖｉｅｎｎａ，ｐｐ．１０７−１８６という参照文献（参照により、本明細書に援用される）に見ることができる。

生細胞のその他の凍結保存方法またはその変形形態が利用可能であり、その使用が想定される（例えば、冷却金属ミラー法、Ｌｉｖｅｓｅｙ ａｎｄ Ｌｉｎｎｅｒ，１９８７，Ｎａｔｕｒｅ ３２７：２５５、Ｌｉｎｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９８６，Ｊ．Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍ．Ｃｙｔｏｃｈｅｍ．３４（９）：１１２３−１１３５。Ｓｅｎｋａｎらによる米国特許第４，１９９，０２２号、Ｓｃｈｗａｒｔｚによる米国特許第３，７５３，３５７号、Ｆａｈｙによる米国特許第４，５５９，２９８号も参照されたい）。

解凍：凍結細胞は、（例えば、３７℃〜４１℃に維持した水浴で）素早く解凍し、解凍したら、すぐに冷やすのが好ましい。特定的な実施形態では、凍結細胞を含むバイアルを、その首部まで温水浴に浸漬でき、ゆっくり回転させると、解凍の際に、細胞懸濁液が混合されるようになるとともに、温水から内側の氷塊への熱伝導が向上する。氷が完全に溶けたらすぐに、バイアルを氷中に入れることができる。

特定的な実施形態では、造血機能の必要なヒト患者において、造血機能をもたらすために、解凍した状態の増殖ＣＢ幹細胞試料またはその一部を注入できる。解凍した細胞の処理に関連するいくつかの手順が利用可能であり、望ましいとみなされた場合に、その手順を用いることができる。

凍結保護剤は、ヒトにおいて有毒である場合には、解凍した増殖ＣＢ幹細胞を治療で用いる前に取り除く必要がある。ＤＭＳＯを凍結保護剤として用いる実施形態では、細胞の喪失を回避するために、この工程を省くのが好ましい。ＤＭＳＯには、深刻な毒性はないからである。しかしながら、凍結保護剤を除去するのが望ましい場合には、その除去は、解凍時に行うのが好ましい。

凍結保護剤を除去する方法の１つは、低い濃度まで希釈することによるものである。これは、培地を加えてから、必要に応じて、遠心分離を１サイクル以上行って、細胞をペレット化し、上清を除去して、細胞を再懸濁することによって行うことができる。例えば、解凍した細胞中の細胞内ＤＭＳＯは、回収した細胞に悪影響を及ぼさないレベル（１％未満）まで減らすことができる。ＤＭＳＯの除去中に浸透勾配を損なう可能性を最小限にするために、上記の作業はゆっくり行うのが好ましい。

凍結保護剤の除去後、細胞数の計数（例えば、血球計算盤の使用による）と生存能の検査（例えば、トリパンブルー排除法による。Ｋｕｃｈｌｅｒ，１９７７，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ ａｎｄ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，Ｄｏｗｄｅｎ，Ｈｕｔｃｈｉｎｓｏｎ ＆ Ｒｏｓｓ，Ｓｔｒｏｕｄｓｂｕｒｇ，Ｐａ．，ｐｐ．１８−１９、１９６４，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｅｉｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｖｏｌ．１０，Ｙｅａｒ Ｂｏｏｋ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｉｎｃ．，Ｃｈｉｃａｇｏ，ｐｐ．３９−４７）を行って、細胞の生存を確認できる。試料中の抗原（例えばＣＤ３４）陽性生細胞の割合は、試料のアリコートにおいて７−ＡＡＤ（または生細胞によって排除されるその他の好適な染料）を排除する抗原陽性細胞の数を、試料のアリコート中の総有核細胞数（ＴＮＣ）（生細胞と非生細胞の両方）で除した値を算出することによって求めることができる。続いて、抗原陽性生細胞の割合に、試料のＴＮＣを掛けることによって、試料中の抗原陽性生細胞の数を求めることができる。

凍結保存前及び／または解凍後に、総有核細胞数、または特定的な実施形態では、ＣＤ３４＋もしくはＣＤ１３３＋細胞の総数を求めることができる。例えば、総有核細胞数は、血球計算盤と、トリパンブルー色素排除法を用いることによって求めることができる。細胞充実度の高い検体は、手動計数に適する濃度範囲まで希釈できる。生成物の最終的な細胞数は、いずれかの希釈係数について補正する。総有核細胞数は、１ｍＬ当たりの有核生細胞数×生成物の体積（ｍＬ）である。試料中のＣＤ３４＋またはＣＤ１３３＋陽性細胞の数は、例えば、蛍光色素にコンジュゲートした抗ＣＤ３４または抗ＣＤ１３３モノクローナル抗体を用いるフローサイトメトリーの使用によって求めることができる。

特定の実施形態では、出発臍帯血及び／または胎盤血と、ＣＢ幹細胞と、凍結保存前の増殖ＣＢ幹細胞または解凍後の増殖ＣＢ幹細胞の同一性及び純度に関して、マルチパラメータフローサイトメトリーによる免疫表現型解析を行うことができ、この解析によって、試料に存在する抗原陽性生細胞の割合が得られる。各試料は、蛍光色素に直接コンジュゲートしたモノクローナル抗体のパネルを用いて、１．ＣＤ３４＋ＨＰＣ、２．Ｔ細胞（ＣＤ３＋、ＣＤ４＋サブセットとＣＤ８＋のサブセットの両方を含む）、３．Ｂ細胞（ＣＤ１９＋またはＣＤ２０＋）、４．ＮＫ細胞（ＣＤ５６＋）、５．単球（ＣＤ１４＋）、６．骨髄単球（ＣＤ１５＋）、７．巨核球（ＣＤ４１＋）、８．樹状細胞（系列陰性／ＨＬＡ−ＤＲｂｒｉｇｈｔ及びＣＤ１２３ｂｒｉｇｈｔまたは系列陰性／ＨＬＡ−ＤＲｂｒｉｇｈｔ及びＣＤ１１ｃｂｒｉｇｈｔ）という細胞表現型のうちの１つ以上について調べることができる。

以下に、上記の方法に基づく具体的な例示的プロトコールを示す。臍帯血／胎盤血ユニット（複数可）を１人のヒトから出産時に採取することができる。続いて、採取した血液を抗凝固剤と混合して、凝固を防ぐことができる。この血液を、隔離した場所に４℃で、モニタリングしている冷蔵庫で保存できる。受領したユニット（複数可）を評価でき、どのユニット（複数可）を、増殖のために処理するかを判断することができる。ユニットに関して、受領日、そのユニットの経過時間、ドナーの在胎週数、ドナーの性別、ユニットの体積という情報を収集できる。さらに、各ユニットの総有核細胞数と総ＣＤ３４＋細胞数を割り出すことができ、ＣＤ３４＋細胞の割合を算出することができる。増殖のために、ユニットを選択するときには、隔離した場所からユニットを取り出し、固有の識別子のロットナンバーを割り当てることができ、そのロットナンバーは、製造プロセスを通じて維持することができる。

増殖培養を予定どおりに開始する前に、まず、組織培養容器を一晩、４℃で、または最低でも２時間、３７℃で、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中の２．５μｇ／ｍｌのＤｅｌｔａ１^{ｅｘｔ−ＩｇＧ}と、５μｇ／ｍｌのＲｅｔｒｏＮｅｃｔｉｎ（登録商標）（組み換えヒトフィブロネクチン断片）（ウィスコンシン州マディソンのＣｌｏｎｔｅｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．）でコーティングできる。続いて、そのフラスコをＰＢＳで洗浄し、ＰＢＳ−２％ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）でブロックすることができる。ＣｌｉｎｉＭＡＣＳ（登録商標） Ｐｌｕｓ Ｃｅｌｌ Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍを用いて、新鮮な臍帯血ユニットを処理して、ＣＤ３４＋細胞について選択できる。ＣＤ３４についての選択の前に、新鮮な臍帯血ユニットのアリコートの総細胞数とＣＤ３４含有量を調べることができる。処理の後、ＣＤ３４＋細胞画分とＣＤ３４−細胞画分を回収することができる。この手順に従って濃縮した後、試料中のＣＤ３４＋細胞の割合は概して、濃縮前の試料中のＣＤ３４＋細胞の割合と比べて、８８倍〜２２３倍上昇する。濃縮ＣＤ３４＋細胞画分を最終的な培養培地（ｒｈｌＬ−３（１０ｎｇ／ｍｌ）と、ｒｈＩＬ−６（５０ｎｇ／ｍｌ）と、ｒｈＴＰＯ（５０ｎｇ／ｍｌ）と、ｒｈＦｌｔ−３Ｌ（５０ｎｇ／ｍｌ）と、ｒｈＳＣＦ（５０ｎｇ／ｍｌ）とを添加したＳＴＥＭＳＰＡＮ（商標）という無血清増殖培地（ブリティッシュコロンビア州バンクーバーのＳｔｅｍＣｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を含む）に再懸濁できる。

特異的に標識して調製した組織培養容器の容器表面区域に、ＣＤ３４＋濃縮細胞を（例えば、≦１．８×１０^４個の総有核細胞数／ｃｍ^２という濃度で）加えてから、個々にモニタリングを行うアラーム付きインキュベーターであって、その生成物ロット専用のインキュベーターに入れることができる。２〜４日の培養後、初期体積の５０％の新鮮な培養培地（上記）を培養容器に加えることができる。細胞培養容器を定期的（１〜３日おき）にインキュベーターから取り出し、倒立顕微鏡によって、細胞の成長とコンタミネーションの徴候について調べることができる。５〜８日目に、培養容器を軽く攪拌して、細胞を混合でき、処理中の試験のために、１ｍｌの試料を取り出すことができる。細胞の試料を計数するとともに、ＣＤ３４、ＣＤ７、ＣＤ１４、ＣＤ１５及びＣＤ５６の発現について、表現型の解析を行うことができる。培養期間にわたって、細胞密度が≧８×１０^５細胞／ｍｌまで上昇したら、必要に応じて、細胞を追加のフラスコに移すことができる。凍結保存のために細胞を回収する前日に、新鮮な培地を加えることができる。

１４〜１６日目に、凍結保存のために、増殖細胞集団を回収できる。その容器を攪拌して、すべての中身を５００ｍｌの滅菌遠心チューブに移すことができる。回収した細胞を遠心分離してから、遠心分離によって、ＰＢＳ中で１回洗浄し、ＨＳＡと、Ｎｏｒｍｏｓｏｌ−Ｒ（イリノイ州レイクフォレストのＨｏｓｐｉｒａ）と、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）とを含む凍結保護剤溶液に再懸濁できる。リリース試験を実施するための試料を取ることができる。増殖ＣＢ幹細胞集団生成物は、速度制御フリーザーで凍結して、気相式液体窒素（ＬＮ２）フリーザーの貯蔵室に移すことができる。

培養期間の終了時、得られた細胞集団は、ＣＤ３４、ＣＤ７、ＣＤ１４、ＣＤ１５及びＣＤ５６抗原の存在に関するフローサイトメトリー解析によって示されるように、ＣＤ３４＋前駆細胞と、より成熟した骨髄及びリンパ球前駆細胞とを含み、不均質であるはずである。このプロセスによって増殖した細胞の増殖期間の終了時における典型的なフローサイトメトリーによる特徴は、図２に示されている。

培養期間中、ＣＤ３４＋細胞数と総細胞数は、有意に上昇しているはずであり、ＣＤ３４＋細胞の増加率は１００〜３８７倍、総細胞数の増加率は６１７〜３３３７倍の範囲であるはずである（Ｎ＝９の臍帯血ユニット。上記のような最終的な臨床増殖手順に従って処理）。免疫表現型解析によって測定すると、Ｔ細胞は本質的に完全に欠如しているはずである。機能的に、これらの細胞は、ＮＯＤ／ＳＣＩＤマウスモデルにおいて、多系列なヒト造血の正着を可能にする。

図３には、このプロトコールに従って実施した１０回のフルスケールの体外増殖から得られたデータが示されている。総細胞数の平均増加率は、１７２３±２３０倍（平均±ｓｅｍ）で、ＣＤ３４＋細胞では、１７９±３０倍（平均±ｓｅｍ）であった。図４には、１９回のフルスケールの体外増殖における増殖後の総有核細胞数とＣＤ３４＋細胞の開始時の数と、終了時の数と、増殖率の値が示されている。これらの１９ユニットの増殖ヒト臍帯血幹細胞は、１つ以上のバッグで凍結保存した。図５には、それぞれの増殖ヒト臍帯血幹細胞試料の総有核細胞数（ＴＮＣ）とＣＤ３４＋細胞数と、凍結保存前の細胞生存率と、それぞれの凍結バッグにおけるＴＮＣ数とＣＤ３４＋細胞数が示されている。さらに、追加の１２個の濃縮ＣＤ３４＋細胞試料をＤｅｌｔａ１^{ｅｘｔ−ＩｇＧ}によって増殖したところ、凍結保存前のＣＤ３４＋細胞の増殖率は、平均で１４１倍（ＳＥＭ１７）であることが示された。

上記の説明に続き、以下では、下記の用語の定義を示すのが有用である。

「ＣＢ幹細胞」（本明細書では、「ＣＢ幹細胞試料」ともいう）とは、造血幹細胞が濃縮されているか、造血幹細胞・前駆細胞が濃縮されている集団であって、出産時に採取したヒト臍帯血及び／またはヒト胎盤血に由来する集団を指す。造血幹細胞または造血幹・前駆細胞は、造血幹細胞または造血幹細胞・前駆細胞上において高レベルで発現する特異的マーカーに対して、他のタイプの造血細胞よりも陽性であることができる。例えば、このようなマーカーは、ＣＤ３４、ＣＤ４３、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＤ５９、ＣＤ９０、ＣＤ１０９、ＣＤ１１７、ＣＤ１３３、ＣＤ１６６、ＨＬＡ ＤＲまたはこれらを組み合わせたものであることができる。また、造血幹細胞または造血幹細胞・前駆細胞は、ある発現マーカーに対して、他のタイプの造血細胞よりも陰性であることができる。例えば、このようなマーカーは、Ｌｉｎ、ＣＤ３８またはこれらを組み合わせたものであることができる。特定的な実施形態では、造血幹細胞または造血幹細胞・前駆細胞は、ＣＤ３４＋細胞である。

「増殖ＣＢ幹細胞」（本明細書では、「増殖ＣＢ幹細胞試料」及び「Ｅｘ−ＣＢＳＣ」ともいう）とは、臍帯血造血幹細胞または造血幹細胞・前駆細胞の増殖技法を行ったＣＢ幹細胞を指し、その増殖技法は、（ｉ）試料アリコート中の造血幹細胞または造血幹細胞・前駆細胞の数を増加させること、すなわち増殖させること、及び／または（ｉｉ）ＳＣＩＤ再構築細胞の数を増加させること（限界希釈解析によって割り出し、そのようにして増殖させた試料アリコートを注入したＮＯＤ／ＳＣＩＤマウスでの正着が、増殖技法を行わなかった試料アリコートの場合よりも増大したことによって示される）ことが示されているものである。特定的な実施形態では、ＮＯＤ／ＳＣＩＤマウスにおける正着の増大は、増殖試料のアリコートを注入したマウスの方が、増殖前の試料アリコートを注入したマウスよりも、例えば注入から１０日後、３週間後または９週間後における骨髄中のヒトＣＤ４５＋細胞の割合が向上したことを検出することによって検出できる（Ｄｅｌａｎｅｙ ｅｔ ａｌ．，２０１０，Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄ．１６（２）：２３２−２３６を参照されたい）。特定的な実施形態では、その増殖技法により、増殖試料アリコートにおける造血幹細胞または造血幹細胞・前駆細胞の数は、少なくとも５０倍、７５倍、１００倍、１５０倍、２００倍、２５０倍、３００倍、３５０倍、４００倍、４５０倍または５００倍増加し、特定的な実施形態では、少なくとも１００倍増加する。

固形組織移植拒絶反応の軽減のためのＥｘ−ＣＢＳＣの利用：臓器機能障害または臓器不全に至る疾患と状態は、数多く存在する。特定の条件下では、臓器機能障害または不全を治療するための最善の治療選択肢は、臓器移植である。加えて、外傷または変性イベントを経験している個体では、臓器移植が有益であることがあり、またさらには、生命を救うものであり得る。例えば、熱傷及び／または倒壊の被害者は、皮膚移植片から恩恵を受けることができる。顔面移植でさえも、臨床領域に入ってきている。

主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）分子（ヒトでは、ヒト白血球抗原（ＨＬＡ））は、細胞の表面に存在し、これらの分子の特定の構造は典型的には、各個体に固有のものである（一卵性双生児を除く）。

ＨＬＡクラスＩ抗原（ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂ及びＨＬＡ−Ｃ）は、体のほぼすべての細胞（赤血球細胞と、中枢神経系の細胞を除く）の表面上に発現するとともに、ペプチド（このペプチドは、プロテアソームで分解される消化タンパク質から作られる）を細胞表面に提示する膜貫通タンパク質である。

ＨＬＡクラスＩＩ抗原（ＨＬＡ−ＤＰ、ＨＬＡ−ＤＭ、ＨＬＡ−ＤＯＡ、ＨＬＡ−ＤＯＢ、ＨＬＡ−ＤＱ及びＨＬＡ−ＤＲ）は、抗原をその細胞の外側から、Ｔ−リンパ球に提示する。これらの特定の抗原は、Ｔ−ヘルパー細胞を刺激して増殖させ、続いて、これらのＴ−ヘルパー細胞が、抗体を産生するＢ細胞を刺激して、その特異的な抗原に対する抗体を産生させる。自己抗原は、サプレッサーＴ細胞によって抑制される。

ＨＬＡクラスＩＩＩ抗原は、補体系の成分をコードする。

ヒト集団におけるＨＬＡの多様性は、疾患防御の一局面であり、その結果、血縁関係のない２人の個体が、すべての座に同じＨＬＡ分子を持つ可能性は非常に低い。したがって、ＨＬＡタイピングを行って、適切なアリル適合を確かめて、レシピエントによるドナー組織の拒絶を回避する必要がある。大半の組織タイピング（例えば、レシピエントに対する免疫学的な適合に関するタイピング）は、同定されているＨＬＡ抗原に特異的な抗体による血清学的な方法を用いて行う。ＨＬＡ抗原コード遺伝子における多型を検出するためのＤＮＡベースの方法も、ＨＬＡアリルのタイピングに用いられており、この方法は急速に、好ましいＨＬＡタイピング方法となってきている。ＨＬＡタイピングは、（１）ＨＬＡアリルを割り出すことによって（アリル特異的な配列を割り出すことによって、ＤＮＡ配列レベルで行う）（高解像度タイピング）及び／または（２）ＨＬＡ−抗原に特異的な抗体によって、ＨＬＡ抗原を血清学的に割り出すことによって（低解像度タイピング）行うことができる。

各個体の免疫系は、外来または「非自己」のＭＨＣまたはＨＬＡを持つ組織を攻撃するようにプログラムされている。これにより、治療のための移植における課題の１つは、レシピエント（宿主）の免疫系が移植片に及ぼす障害作用である。これらの障害作用に対処しなければ、移植拒絶反応が起こることがあり、例えば、重要器官が拒絶されると、死に至ることもある。したがって、本明細書で使用する場合、移植拒絶反応とは、固形組織の移植物質（例えば、器官、細胞群（例えば膵島β細胞）、皮膚移植片または毛髪）がレシピエント／宿主の免疫系によって拒絶されることを指す。特定的な実施形態では、移植拒絶反応とは、移植物質に対するレシピエント／宿主の免疫応答により、移植物質の８０％または９０％超の細胞または組織の壊死が見られることを意味する。特定的な実施形態では、移植拒絶反応とは、移植物質に対するレシピエント／宿主の免疫応答により、移植前の移植物質の生存能と比べて、移植物質の生存能が低下して、移植物質の想定される機能が、８０％または９０％超低下するようになることを意味する。

移植拒絶反応のリスクにより、ドナーとレシピエントとの間のＭＨＣ／ＨＬＡ適合度を最適化する試みが行われている。この場合、適合／不適合移植片と、適合不明（ｕｎｍａｔｃｈｅｄ）または適合不明（ｎｏｎ−ｍａｔｃｈｅｄ）移植片という用語が本明細書で使用されている場合、適合／不適合移植片と適合不明（ｕｎｍａｔｃｈｅｄ）または適合不明（ｎｏｎ−ｍａｔｃｈｅｄ）移植片の区別を明確にすることが有用となる。「適合」または「不適合」を指す免疫学的な適合性は、適合度を指す。例えば、６つのＨＬＡ抗原をタイピングして適合性を調べたときには、試料は、４／６、５／６または６／６のＨＬＡ抗原で適合したと言うことができる。４／６及び５／６が同じ試料は、２／６または１／６のＨＬＡ抗原で「不適合」であるということもできる。いずれのケースでも、ドナーとレシピエントとの間で、高い適合性が見られる（＞５０％適合）。これに対して、「適合判定なし」、「適合不明（ｕｎｍａｔｃｈｅｄ）」または「適合不明（ｎｏｎ−ｍａｔｃｈｅｄ）」とは、例えば、ドナーも、レシピエントも、ＨＬＡタイピングを行っていないために、ドナーとレシピエントとの適合度がわからないことを意味する。

移植医療では、ドナーとレシピエントとの間で考えられる免疫学的な適合度が高いことが好ましい。適合度が高いと、概して、レシピエントの拒絶応答の程度が低下するからである。移植物に対するレシピエント／宿主の免疫応答を抑制する薬物を用いることもできる。そのような免疫抑制剤（「拒絶反応抑制薬」）の例としては、プレドニゾン、シクロスポリンＡ及びシクロホスファミドが挙げられる。

移植を行う能力の向上にもかかわらず、移植片の維持には、課題が残っている。例えば、移植拒絶反応を防ぐために免疫抑制を行うと、日和見感染とがんのリスクが高まる。したがって、拒絶反応抑制のためのより有効な医療処置であって、移植片（すなわち患者）の寿命を延ばすとともに、クオリティオブライフを向上させる医療処置に対するニーズが存在する。

本開示は、Ｅｘ−ＣＢＳＣの投与により、移植拒絶反応が軽減されることを示す。さらに詳細には、実施例１に示されているように、Ｅｘ−ＣＢＳＣを投与すると、皮膚移植片の維持期間の延長によって示されているように、移植拒絶反応が有意に軽減される。Ｅｘ−ＣＢＳＣが、同種異系の皮膚移植片の拒絶反応を軽減する能力により、Ｅｘ−ＣＢＳＣが、他のタイプの固形組織の拒絶反応も軽減することになることが示されている。皮膚移植片の維持は特に難しいので、これらのタイプの移植片は、実験的な移植調査の「ゴールドスタンダード」になっているからである（Ａｎｄｅｒｓｏｎ ＆ Ｍａｔｚｉｎｇｅｒ，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．２００１．（７）１：８０−８７）。すべてのタイプの組織にわたり、固形組織の拒絶反応を担う主な機構は、ＭＨＣ分子の提示する非自己のドナー由来ペプチドによって生じる、Ｔ細胞の活性化である。非自己のドナー由来抗原に応答するＴ細胞サブセットは、メモリーＴ細胞になり、それ以降、ドナー組織に対する制御性免疫応答の発現を防ぐことになる。メモリーＴ細胞は、皮膚移植片（Ｂｅｎｉｃｈｏｕ ｅｔ ａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ．２０１１．３（６）：７５７−７７０）、ならびにその他のタイプの器官（肝臓（Ｄｏｎｃｋｉｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｔｒａｎｐｌａｎｔａｔｉｏｎ．２０１３．９６（３）：３０６−１５）、心臓（Ａｚｚａｗｉ，Ｊ Ｈｅａｒｔ Ｌｕｎｇ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．１９９８．１７：８８１−８８７）及び腎臓（Ｈｅｅｇｅｒ，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９９：１６３：２２６７−２２７５）など）の拒絶反応の重要な決定因子である。理論に拘束されるものではないが、Ｅｘ−ＣＢＳＣが皮膚移植片に対する寛容を誘導する理由の１つは、Ｅｘ−ＣＢＳＣの増殖の際に、ドナー特異的メモリーＴ細胞の二次リンパ組織を枯渇することによって、ドナー特異的制御性Ｔ細胞の活性を促すことである。ドナー特異的メモリーＴ細胞の抑制と、制御性Ｔ細胞の増強により、多くのタイプの器官の寛容を促すことができる。したがって、Ｅｘ−ＣＢＳＣは、多くのタイプの固形器官と組織の拒絶反応を防ぐのに有用となる。

さらに、実施例１では、固形組織拒絶反応の軽減が、免疫寛容に起因し得ることも示されている。この関連においては、免疫寛容とは、宿主による移植物質に対する免疫応答の強度低下を指す。特定的な実施形態では、免疫応答の強度は、本明細書に開示されているようなＥｘ−ＣＢＳＣを投与しなかった場合の移植物質に対する平均宿主免疫応答と比べて、５〜１００％、２５〜１００％または７５〜１００％低下することができる。特定的な実施形態では、免疫応答の強度は、移植物質が拒絶される時点を割り出すことによって測定することができる。例えば、免疫寛容により、移植物質は、更に長期間、存続及び機能可能になることができる。特定的な実施形態では、免疫寛容とは、特定の外来抗原によって、免疫応答が惹起されないか、または惹起される免疫応答が軽減される免疫系（宿主）状態を指すことができる。

上記に基づき、Ｅｘ−ＣＢＳＣを用いて、多様な患者集団と状況において、免疫寛容を誘導できる。すなわち、本明細書に開示されている特定的な実施形態は、Ｅｘ−ＣＢＳＣを投与して、対象において、移植片に対する免疫寛容をもたらすことを含む。免疫寛容状態の対象は、移植物質を著しく拒絶または破壊する免疫応答を発現しない。特定的な実施形態では、免疫寛容状態の対象は、抗原に結合できる抗体を産生することによって抗原に応答することをしないか、統計的に有意な程度及び／または臨床的に有意な程度低下したレベルで応答する。

特定的な実施形態では、本開示は、Ｅｘｐ−ＣＢＳＣを投与して、脂肪組織、血管、骨、骨髄、心臓細胞、軟骨、軟骨（ｃａｒｔｉｌａｇｉｎｏｕｓ）細胞、軟骨（ｃｈｏｎｄｒａｌ）細胞、蝸牛、結合組織、角膜、培養細胞単層、歯の組織、目、顔、筋膜、線維組織、足、機能的脊椎単位、髪、手、心臓、心臓弁、腸、膵島細胞、腎臓、水晶体、靱帯、肝臓、肺、半月板、筋腱移植片、筋肉組織、神経細胞、神経組織、骨軟骨細胞、骨形成原細胞、卵巣、膵臓、半腱様筋組織、皮膚、脾臓、幹細胞、胃、腱、精巣、１本または複数の歯及び椎間板の移植拒絶反応を軽減することを提供する。

上に示されているように、移植拒絶反応の軽減におけるＥｘ−ＣＢＳＣの有益な作用により、移植を受ける患者での免疫抑制の必要性を低減できる。したがって、Ｅｘ−ＣＢＳＣの投与後、患者に投与する免疫抑制剤を少なくしてよい。例示的な免疫抑制剤としては、シクロスポリン、シクロスポリンＡ、シクロホスファミド、プレドニゾン、デキサメタゾン、メトトレキセート、アザチオプリン、ミコフェノレートモフェチル、サリドマイド、ＦＫ−５０６（タクロリムス）、シロリムス、全身性ステロイド、局所ステロイド、広範な抗体、レセプターアゴニスト、レセプターアンタゴニスト及び当業者に知られているようなその他の薬剤が挙げられる。免疫抑制剤の投与の低減は、用量の低下、投与間隔の延長及び／または免疫抑制剤の投与を早期に止めることを通じて反映できる。

特定的な実施形態では、マウス（例えば、Ｃ５７ＢＬ／６マウス）の腎被膜下に移植物質を移植するとともに、Ｅｘ−ＣＢＳＣを投与することによって、実験的な移植拒絶反応を解析できる。移植レシピエントを殺処分し、細胞生存率に関して染色するか、または移植物質の部位（すなわち、移植物質の部位に存在する器官もしくは組織）で、好適な移植後時点に、免疫細胞化学染色を行うことによって、移植拒絶反応の軽減を確認することができる。移植物質部位の染色（例えばヘマトキシリン及びエオシン、または免疫染色）を行う時点は、例えば、移植した動物の平均生存時間または予想生存時間によって変化し得る。

様々なモデルにおいて、例えば、移植から１日〜１０年後（すなわち、１日後、５日後、１０日後、３０日後、１００日後以上、１年後または２年後以上）、特定的な実施形態では、移植から１０日〜１年後、より特定的な実施形態では、移植から１０〜１００日後に染色することによって、移植部位を解析できる。例えば、移植物質をマウスの腎被膜下に導入する場合、移植したマウスの腎臓を調べることができる。移植物質がまだ検出可能であり、及び／または特定的な実施形態では、移植物質が、組織塊に増殖していた場合には、移植物質は、正着がうまくいった（すなわち、拒絶されなかった）ことになる。

移植物質の検出と、移植物質の増殖は、例えば、移植部位（例えば腎臓）から調製した凍結切片をヘマトキシリン／エオシン染色して、移植レシピエントに由来しない（例えば、宿主腎臓に由来しない）新たな成長を検出することによって判断することができる。異種移植のケースでは、当該技術分野において知られている免疫細胞化学染色法に従って、移植物質の由来元である種の抗原に対して特異的な抗血清で特異的な免疫染色を行うことによって、陽性細胞が特定された場合に、移植物質は、正着がうまくいったことになる。あるいは、異種移植を行う実施形態では、移植片の種（移植物質の供給源である種）に由来する分子（すなわち、タンパク質または抗原）が移植レシピエントの血液中に検出された場合に、移植物質は、正着がうまくいったことになる。

完全静脈栄養の低減：完全静脈栄養（ＴＰＮ）は、経静脈栄養によって、患者の栄養必要量を満たすことを伴う。ＴＰＮ（高カロリー輸液という場合もある）は、組織の構築、エネルギー消費及びその他の生理作用に必要なすべての炭水化物、タンパク質、脂肪、水、電解質、ビタミン及びミネラルを供給する。

ＴＰＮは、最初は、消化管の重症及び大規模な外傷の手術後に用いる緊急処置として発案されたものである。静脈栄養は、完全的であるか、補足的であるかを問わず、今では、患者を食事の取れない状態にするか、または患者の食欲をなくす医学的介入後を含む多種多様な慢性状態で用いられている。

完全静脈栄養は、多くの患者にとって、命を救う栄養プログラムであるが、どの患者も、栄養混合物中の一部の要素に対する感受性と、栄養チューブによる感染の可能性により、有害反応に苦しむ場合がある。発症し得るその他の合併症としては、心過負荷、コリン欠乏、脱水、電解質平衡異常、高血糖、心臓への機械的外傷、代謝アシドーシス、代謝性骨疾患、静脈炎、腎疾患及び大静脈血栓が挙げられる。したがって、患者がＴＰＮを受ける時間の短縮には、重要な臨床効果がある。

本開示は、Ｅｘ−ＣＢＳＣを用いて、医療処置後の患者において、ＴＰＮを低減することを提供する。実施例２に記載されているように、本明細書に開示されているＥｘ−ＣＢＳＣには、小児患者において、臍帯血移植後のＴＰＮを低下させる劇的な効果があった。著しいことに、Ｅｘ−ＣＢＳＣの投与後、ＴＰＮの平均期間は、３０．１日から２０．７日に短縮した。この著しい低下により、ＴＰＮに伴う合併症の軽減を助けることができる。

オピオイドの使用の低減：医療処置に伴う疼痛を軽減するために、医療処置後に、オピオイドを投与することが多い。しかしながら、オピオイドの乱用は、米国で蔓延している。ＦＤＡ Ｃｏｎｓｕｍｅｒ Ｈｅａｌｔｈ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ，ＦＤＡ Ａｃｔｓ ｔｏ Ｒｅｄｕｃｅ Ｈａｒｍ ｆｒｏｍ Ｏｐｉｏｉｄ Ｄｒｕｇｓ，Ａｐｒｉｌ ２０１１。ＦＤＡは、２００７年には、３，３００万人を超える米国人がオピオイドを誤用し、５年前の２，９００万人から増加すると推定している。米国政府は、教育及びモニタリングプログラムを通じて、この蔓延に対処するように計画しているが、そのような戦略では、根柢をなすオピオイド化合物の中毒性という問題の核心には十分に対処できない可能性がある。

本明細書で使用する場合、オピオイドには、オピオイドレセプターを刺激する化合物が含まれる。オピオイドレセプターは、内因性オピオイドペプチドと臨床的に重要なアルカロイド鎮痛薬（モルヒネなど）の両方によって活性化されるＧタンパク質共役型レセプター（ＧＰＣＲ）である。オピオイドレセプターには、δ−オピオイドレセプター、κ−オピオイドレセプター及びμ−オピオイドレセプターという３つの主なタイプがある。オピオイドの例としては、アニレリジン、アリルプロジン、アルフェンタニル、アルファプロジン、ベンジルモルヒネ、ブプレノルフィン、ベジトラミド、ブトルファノール、コデイン、クロニタゼン、シクラゾシン、デゾシン、デソモルヒネ、ジヒドロモルヒネ、デキストロモラミド、ジアンプロミド、ジヒドロコデイン、ジエチルチアムブテン、ジメノキサドール、ジメフェプタノール、ジメチルチアムブテン、ジピパノン、ジオキサフェチルブチレート、エプタゾシン、エチルモルヒネ、エチルメチルチアムブテン、エトニタジン、エトヘプタジン、フェンタニル、ヒドロコドン、ヘロイン、６−ヒドロキシモルフォン、ヒドロキシペチジン、ヒドロモルフォン、イソメタドン、ケトベミドン、レバロルファン、レボフェナシルモルファン、ロフェンタニル、レボルファノール、モルヒネ、ミロフィン、メペリジン、メプタジノール、メタゾシン、メタドン、メトポン、モルヒネ、ナルセイン、ナルブフィン、ナロルフィン、ニコモルヒネ、ノルレボルファノール、ノルメタドン、ノルモルヒネ、ノルピパノン、アヘン、オキシコドン、オキシモルホン、ピリトラミド、パパベレタム、ペンタゾシン、フェナドキソン、フェナゾシン、フェノペリジン、ピミノジン、フェノモルファン、プロフェプタジン、プロメドール、プロペリジン、プロピラム、プロポキシフェン、スフェンタニル、チリジン、トラマドール、これらの立体異性体、これらの代謝物、これらの塩、これらのエーテル、これらのエステル及び／もしくはこれらの誘導体、及び／またはこれらの混合物が挙げられる。

μオピオイドレセプターを標的にするオピオイドアゴニストは、解熱薬及び／または非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）などの第２の鎮痛剤と組み合わせて投与することが多い。いくつかのケースでは、このような組み合わせにより、相加効果が得られ、いくつかのケースでは、疼痛の治療のために用いたときに、相乗効果が得られると考えられる。ＦＤＡにより認可されている組み合わせの例としては、ＰＥＲＣＯＣＥＴ（登録商標）（オキシコドン／アセトアミノフェン）とＶＩＣＯＤＩＮ（登録商標）（ヒドロコドン／アセトアミノフェン）が挙げられる。このような組み合わせは、鎮痛作用の向上により、患者に投与するオピオイドの量を低下させる形で投与できる（「オピオイド節減」）。したがって、上記のような組み合わせは、中毒性の高いオピオイドの乱用の可能性を低下させるための潜在的手段をもたらす。さらに、このような組み合わせは、オピオイドを原因とする他の副作用も軽減し得る。

上記にかかわらず、オピオイドの使用を抑制する追加の方法が必要とされており、本開示は、Ｅｘ−ＣＢＳＣを用いて、医療処置後の患者において、オピオイドの使用を低減することを提供する。実際、実施例２に示されているように、本明細書に開示されているＥｘ−ＣＢＳＣには、小児患者において、臍帯血移植後のオピオイドの使用を低減させる劇的な効果があった。著しいことに、Ｅｘ−ＣＢＳＣの投与後、アヘン剤の連続投薬の平均期間は、１８．１日から９．７日に短縮した。

入院の低減：医療コストは、高度な医療システムを持つ米国及びその他の国々の全域で、劇的に増大している。医療処置に伴う所要入院期間を短縮するいずれの方法も、増大する医療コストを軽減する助けとなる。さらに、患者は、長期入院を必要とする医療処置を受けている間、機会損失コストを負う。同様に、所要入院期間の短縮により、患者が、より楽しい活動及び／または収入につながる活動に戻る支援となる。したがって、医療処置に伴う所要入院期間を短縮するいずれの方法も、大きな社会的及び個人的メリットをもたらすことになる。

実施例２に記載されているように、本明細書に開示されているＥｘ−ＣＢＳＣには、小児患者で、臍帯血移植後の入院日数において、有意な効果があった。平均で、患者は、Ｅｘ−ＣＢＳＣの投与後、１２日早く退院した（５５．６日間の入院に対して、４３．２日間の入院）。

理論に拘束されるものではないが、Ｅｘ−ＣＢＳＣの投与後に、ＴＰＮ、オピオイドの使用及び入院の低減が観察されたことは、患者の診療に携わった医療従事者によって文書化されているように、粘膜炎（Ｅｘ−ＣＢＳＣの投与後にも観察されている）の軽減に関係し得る。粘膜炎は、口から肛門までの消化管の上皮組織の病変によって特徴付けられる炎症反応である。粘膜炎は、電離性放射線または化学療法剤のいずれかへの暴露に起因すると見られる。口内炎は、潰瘍を伴うか否かにかかわらず、口腔粘膜に影響を及ぼすいずれかの炎症反応である。粘膜炎は、臨床で認められている基準を用いて診断、測定及びモニタリングできる。したがって、本明細書に開示されている特定的な実施形態は、粘膜炎を軽減する必要のある患者において、Ｅｘ−ＣＢＳＣを投与して、粘膜炎を軽減することを含む。

バクテリアルトランスロケーションを軽減または予防することによって、消化管内膜（例えば腸粘膜）の健康を維持すると、本明細書に記載されている有益な臨床効果のいくつかが得られると見られる。バクテリアルトランスロケーションは、管腔内細菌が腸外部位に移動するプロセスである。動物モデルが入手可能であり、当業者に知られており、例えば、ｖａｎ Ｍｉｎｎｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔ Ｓｕｒｇ．２００７ Ｍａｙ；１１（５）：６８２−９に記載されている。

特定的な実施形態では、Ｅｘ−ＣＢＳＣは、抗微生物化合物と組み合わせて投与できる。抗微生物剤の例としては、抗微生物化合物、抗菌剤（例えば抗生物質）、抗真菌剤、抗感染剤及び抗ウイルス剤が挙げられる。当業者には分かるように、特定の化合物は、これらの一般的な分類の２つ以上に含まれることがある。

例示的な抗微生物剤としては、抗微生物ペプチド（ＡＭＰ）、クロルヘキシジンジアセテート及び炭酸銀を含む抗微生物化合物が挙げられる。

例示的な抗菌剤（例えば抗生物質）としては、アクラルビシン、アクチノマイシンＤ、アクチノプラノン、アドリアマイシン、アエロプリシニン誘導体、アミノグリコシド（例えばゲンタマイシンまたはネオマイシン）、アモキシシリン、アンピシリン、アムルビシン、アントラサイクリン、アジノマイシン−Ａ、アジスロマイシン、アズトレオナム、ビスカベリン、ブレオマイシンサルフェート、ブリオスタチン−１、カリケアマイシン、セフェピム、セフィキシム、セフトリアキソン、セファロスポリンＣ、セファマンドール、セファゾリン、クロラムフェニコール、クロモキシマイシン、シプロフロキサシン、クリンダマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ジトリサルビシンＢ、ドキソルビシン、ドキソルビシン−フィブリノゲン、ドキシサイクリン、エルサミシン−Ａ、エピルビシン、エルブスタチン、エリスロマイシン、エソルビシン、エスペラミシン−Ａｌ、エスペラミシン−Ａｌｂ、ホストリエシン、グリドバクチン、グレガチン−Ａ、グリンカマイシン、ハービマイシン、イダルビシン、イルジン、イミペネム、カズサマイシン、ケサリロジン、メノガリル、メロペネム、メトロニダゾール、マイトマイシン、ネオエナクチン、ネチルマイシン、オキサリシン、オキサウノマイシン、ペニシリン（例えば、オキサシリンまたはメズロシリン）、ペプロマイシン、ピラチン、ピラルビシン、ポロトラマイシン、ピリンダニシンＡ、リファンピシン、スペクチノマイシン、ストレプトマイシン、テトラサイクリン、チゲサイクリン、トブラマイシン及びトリメトプリムが挙げられる。

例示的な抗真菌剤としては、ポリエン抗真菌剤（アンホテリシンＢ、カンジシジン、フィリピン、ハマイシン、イミダキソール、ナタマイシン、ナイスタチン、リモシジン、チアゾール抗真菌剤及びトリアゾールなど）が挙げられる。イミダゾール抗真菌剤としては、ビホナゾール、クロトリマゾール、ブトコナゾール、エコナゾール、フェンチコナゾール、イソコナゾール、ケトコナゾール、ミコナゾール、オモコナゾール、オキシコナゾール、セルタコナゾール、スルコナゾール及びチオコナゾールが挙げられる。トリアゾール系抗真菌剤としては、アルバコナゾール、フルコナゾール、イサブコナゾール、イトラコナゾール、ポサコナゾール、ラブコナゾール、テルコナゾール及びボリコナゾールが挙げられる。チアゾール抗真菌剤としては、アバファンギンが挙げられる。アリルアミン抗真菌剤の例としては、アモロルフィン、ブテナフィン、ナフチフィン及びテルビナフィンが挙げられる。エキノカンジン抗真菌剤としては、アニデュラファンギン、カスポファンギン及びミカファンギンが挙げられる。追加の抗真菌剤としては、安息香酸、シクロピロックス、クリスタルバイオレット、フルシトシンまたは５−フルオロシトシン、グリセオフルビン、ハロプロギン、ポリゴジアール、トルナフテート及びウンデシレン酸が挙げられる。抗真菌剤特性を持つ精油としては、アリシン、シトロネラ油、ヤシ油、レモンマートル、ルゴールヨウ素、ニームシード油、オリーブリーフ、オレンジ油、オレガノ、パルマローザ油、パチョリ、セレン及びティーツリー油が挙げられる。

例示的な抗感染剤としては、ピリミジンアナログが挙げられる。ピリミジンアナログは概して、１つ以上の原子または化学基で置換されているか、またはピリミジン環構造中の１つ以上の炭素の位置において酸化されているピリミジン環構造（１，３−ジアジン）を持つ化合物を指す。特定的な実施形態では、ピリミジンアナログは、ピリミジン環構造中の炭素の位置に、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩのようなハロゲン置換基を含む。例示的なフルオロピリミジンとしては、５−フルオロシトシン、５−フルオロチミジン、５−ＦＵ、５−ＦＵｄＲ（５−フルオロ−デオキシウリジン、フロクスウリジン）、カペシタビン、フルオロデオキシウリジンモノフォスフェート（５−ｄＦＵＭＰ）、フルオロウリジントリフォスフェート（５−ＦＵＴＰ）、トリフルオロチミジン及びトリフルリジンが挙げられる。その他のハロゲン化ピリミジンアナログとしては、５−ブロモシトシン、５−ブロモデオキシウリジン（５−ＢｕｄＲ）、５−ブロモウラシル、５−クロロシトシン、５−クロロデオキシウリジン、５−クロロウラシル、５−ヨードシトシン、５−ヨードデオキシウリジン（５−ＩｕｄＲ）及び５−ヨードウラシルが挙げられる。

ウラシルピリミジンアナログとは、１つ以上の原子または化学基で置換されたウラシル環構造を含む化合物を指す。ウラシルアナログは、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩなどのハロゲン置換基を含む。特定の実施形態では、ウラシルアナログは、Ｆ置換基を含み、フルオロウラシルアナログという。例示的なフルオロウラシルアナログとしては、５−ＦＵ、カルモフール、ドキシフルリジン、エミテフール、フロクスウリジン及びテガフールが挙げられる。

その他の例示的な抗感染剤としては、クロルヘキシジン、銀化合物、銀イオン、銀粒子、またはその他の金属化合物、イオンもしくは粒子（金など）が挙げられる。追加の抗感染剤としては、２−ｐ−スルファニルアニリノエタノール、４−スルファニルアミドサリチル酸、４，４’−スルファニルジアニリン、アセトスルホン、アミフロキサシン、アミカシン、アモキシシリン、アンホテリシンＢ、アパルシリン、アピサイクリン、アプラマイシン、アルベカシン、アスポキシシリン、アザセリン、アジダンフェニコール、アジスロマイシン、アズトレオナム、バシトラシン、バンベルマイシン（類）、ビアペネム、ブロジモプリム、ブチロシン、カンジシジン（類）、カプレオマイシン、カルベニシリン、カルボマイシン、カルモナム、セファドロキシル、セファマンドール、セファトリジン、セフブペラゾン、セフクリジン、セフジニル、セフジトレン、セフェピム、セフェタメト、セフメノキシム、セフィキシム、セフミノクス、セフォジジム、セフォニシド、セフォペラゾン、セフォラニド、セフォタキシム、セフォテタン、セフォチアム、セフォゾプラン、セフピミゾール、セフピラミド、セフピロム、セフプロジル、セフロキサジン、セフタジジム、セフテラム、セフチブテン、セフトリアキソン、セフゾナム、セファレキシン、セファログリシン、セファロスポリンＣ、セフラジン、クロラムフェニコール、クロルヘキシジン、クロルフェネシン、クロルテトラサイクリン、シプロフロキサシン、シプロフロキサシン、クラリスロマイシン、クリナフロキサシン、クリンダマイシン、クロモサイクリン、コリスチン、シクラシリン、ダプソン、デメクロサイクリン、デルモスタチン（類）、ジアチモスルホン、ジベカシン、ジヒドロストレプトマイシン、ジリスロマイシン、エノキサシン、エンビオマイシン、エピシリン、エリスロマイシン、フィリピン、フレロキサシン、フロモキセフ、ホルチミシン（類）、フンギクロミン、ゲンタマイシン（類）、グルコスルホン、ソラスルホン、金化合物（塩化金、オーラノフィンなど）、金イオン、金粒子、グラミシジンＳ、グラミシジン（類）、グレパフロキサシン、グアメシクリン、ヘタシリン、イミペネム、ヨウ素、イセパマイシン、ジョサマイシン、カナマイシン（類）、ロイコマイシン（類）、リンコマイシン、ロメフロキサシン、ルセンソマイシン、リメサイクリン、メクロサイクリン、メパルトリシン、メロペネム、メタサイクリン、ミクロノミシン、ミデカマイシン（類）、ミノサイクリン、モキサラクタム、ムピロシン、ナジフロキサシン、ナタマイシン、ネオマイシン、ネチルミシン、ノルフロキサシン、ナイスタチン、オフロキサシン、オレアンドマイシン、オリゴマイシン（類）、オキシテトラサイクリン、パニペネム、パロモマイシン、パズフロキサシン、ペフロキサシン、ペニシリンＮ、ペリマイシンＡ、ピパサイクリン、ピペミド酸、ポリミキシン、ポビドン／ヨード、プリマイシン、ｐ−スルファニルベンジルアミン、キナシリン、リボスタマイシン、リファミド、リファンピン、リファマイシンＳＶ、リファペンチン、リファキシミン、リストセチン、リチペネム、ロキタマイシン、ロリテトラサイクリン、ロサラマイシン、ロソキサシン、ロキシスロマイシン、サラゾスルファジミジン、サンサイクリン、塩化銀、銀化合物（例えば銀イオン、硝酸銀、酸化銀）、銀粒子、シソマイシン、スパルフロキサシン、スペクチノマイシン、スピラマイシン、ストレプトマイシン、スクシスルホン、スルファクリソイジン、スルファロクス酸、スルファミドクリソイジン、スルファニル酸、スルホキソン、テイコプラニン、テマフロキサシン、テモシリン、テトラサイクリン、テトロキソプリム、チアンフェニコール、チアゾールスルホン、チオストレプトン、チカルシリン、チゲモナム、トブラマイシン、トスフロキサシン、トリメトプリム、トロスペクチノマイシン、トロバフロキサシン、ツベラクチノマイシン、ツベルシジン及びバンコマイシンが挙げられる。

例示的な抗ウイルス剤としては、５−ブロモウリジン、アシクロビル、アロブジン、アマンタジン、抗ウイルスタンパク質、アルビドール、ブリブジン、シドフォビル、ダクラタスビル、ドコサノール、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）活性化カスパーゼオリゴマライザー（ＤＲＡＣＯ）、ファムシクロビル、ＦＧＩ−１０４、フィアルウリジン、ホミビルセン、ホスカルネット、ＦＶ−１００、ガンシクロビル、イバシタビン、イドクスウリジン、イミキモド、イノシン、イノシンプラノベクス、インターフェロン、マリバビル、メチサゾン、モロキシジン、ヌクレオチド抗ウイルス剤、オラジェン（ｏｒａｇｅｎ）、ペンシクロビル、プレコナリル、ポドフィロトキシン、プロセッタ、ＰＳＩ−６１３０、ｒｅｃｉＧｅｎ、レシキモド、リバビリン、リンタトリモド、セマピモド、セトロブビル、シメプレビル、ソホスブビル、ソリブジン、タリバビリン、テコビリマット、テルビブジン、テノホビルアラフェナミドフマレート、テアフラビン、チロロン、トリフルリジン、トロマンタジン、バラシクロビル、バルガンシクロビル及びビダラビンが挙げられる。

ＨＳＰＣと抗微生物剤は、防腐剤と組み合わせて投与することもできる。例示的な防腐剤としては、アルコール（例えば、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール）、ｑｕａｔまたはＱＡＣとしても知られている四級アンモニウム塩（例えば、ベンザルコニウムクロリド（ＢＡＣ）、セチルトリメチルアンモニウムブロマイド（ＣＴＭＢ）、セチルピリジニウムクロリド（Ｃｅｔｒｉｍ、ＣＰＣ）及びベンゼトニウムクロリド（ＢＺＴ））、ホウ酸、ブリリアントグリーン、次亜塩素酸カルシウム、クロルヘキシジングルコネート、過酸化水素、ヨウ素（例えば、ポビドン−ヨード及びルゴールヨウ素）、マーキュロクロム、オクテニジンジヒドロクロリド、フェノール（石炭酸）化合物、ポリヘキサニド（ポリヘキサメチレンビグアニド、ＰＨＭＢ）、重炭酸ナトリウム、塩化ナトリウム、ならびに次亜塩素酸ナトリウムが挙げられる。

同種異系造血細胞の移植後の移植片対宿主病の軽減：造血細胞移植（ＨＣＴ）を用いて、延命することができ、または、ＨＣＴは、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、リンパ腫、多発性骨髄腫、重症再生不良性貧血、ならびに免疫不全及び自己免疫障害などを含む多種多様な血液のがん及び疾患に利用可能な唯一の治療措置であることもある。

ＨＣＴとその他のタイプの臓器移植をさらに広く、成功裏に適用する際の主な障壁の１つは、移植レシピエントにおける移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）のリスクである。ＧＶＨＤは、レシピエント（宿主）の組織を攻撃する免疫系細胞を含むかまたは産生するドナー組織（移植片または移植物）によって特徴付けられる。ＧＶＨＤは、移植物中の機能的な免疫細胞が、レシピエントを「外来物」として認識し、免疫学的攻撃を仕掛けると発症する。生命にかかわる多くの合併症は、ＧＶＨＤが原因で発症し、移植物質に由来する免疫細胞がレシピエントの器官を攻撃して、十分な損傷を与えると、ＧＶＨＤは、致命的になり得る。

ＧＶＨＤは、急性であることも、慢性であることもある。急性ＧＶＨＤは、肝臓、皮膚、粘膜、消化管（ＧＩ）、免疫系（造血系、例えば骨髄及び胸腺）自体、ならびに肺（特発性間質性肺炎の形態）の選択的な損傷によって特徴付けられる。急性ＧＶＨＤは、各器官の病期分類が、低い１（Ｉ）から高い４（ＩＶ）まで個々になされた総合的グレード（皮膚−肝臓−消化管）で病期分類がなされる。皮膚のＧＶＨＤにより、びまん性紅斑丘疹型発疹、場合によっては、レース状のパターンが現れる。肝臓のＧＶＨＤは、ビリルビンレベルによって測定できる。消化管は、腸管の炎症、粘膜の壊死脱落、下痢、腹痛、悪心及び嘔吐の存在及び／または重症度に基づいて評価できる。消化管のＧＶＨＤは、腸生検によって病期分類を行うことができる。腎臓機能も、クレアチニン及び／またはＢＵＮレベルを測定することによって評価することができる。説明されているＩ〜ＩＶの病期分類は、臨床で実施されており、十分に認められている。

グレードＩＶのＧＶＨＤの患者は通常、予後が悪い。ＧＶＨＤが重度な場合、疾患の制御には、ステロイドと追加の薬剤を伴う強力な更なる免疫抑制が必要となることがあり、患者は、その免疫抑制の結果、重大、またはさらには致命的な感染症を発現し得る。また、慢性ＧＶＨＤは、上記の器官を攻撃するが、長期間にわたり、結合組織と外分泌腺を損傷させることもある。

ＧＶＨＤの病態生理には、ドナーＴ細胞と宿主抗原提示細胞との相互作用、その後の炎症性サイトカインの産生（サイトカインストーム）と、それに並行して、標的器官を損傷させる同種反応性Ｔエフェクター細胞（Ｔエフェクター）の活性化が伴う。これに対して、ドナー由来の成熟ｆｏｘｐ３＋Ｔ制御性細胞（Ｔｒｅｇｓ）は、同種反応性をダウンレギュレートできる。したがって、１つの仮説は、ＧＶＨＤの重症度では、ドナーＴエフェクターとドナーＴｒｅｇｓとの比率が、重要な役割を果たすということである。しかしながら、移植造血細胞中のＴ細胞の枯渇によってＧＶＨＤを軽減する試みは、がん治療の関連においては、治療における移植片対白血病（ＧＶＬ）効果の喪失、患者（宿主）における造血細胞の正着不全、及び日和見感染率の向上により、悪性腫瘍の有意な再発につながった。

臍帯血を用いて、同種異系または遺伝的に同一ではない、すなわち不適合な造血幹細胞移植が行われている。このタイプの幹細胞は、より入手しやすく、レシピエントに対する慢性ＧＶＨＤのリスクが低く、ドナーが痛みを伴わず、重要なことに、ドナーとレシピエントとのＨＬＡ組織タイプの適合度が低くてもよく、適合する血縁成人または十分に適合する非血縁成人のボランティアドナーを特定できない患者が、ＨＣＴを投与されるチャンスが広がるからである。現在、臍帯血移植の臨床現場では、ドナー組織とレシピエントのＨＬＡタイピングは、６つのＨＬＡ抗原またはアリル、通常は、ＨＬＡ−Ａ座、ＨＬＡ−Ｂ座及びＨＬＡ−ＤＲ座のそれぞれ２つ、またはＨＬＡ−Ａ座、ＨＬＡ−Ｂ座及びＨＬＡ−Ｃ座のそれぞれ１つ、ＨＡＬ−ＤＲＢ１座、ＨＬＡ−ＤＱＢ１座及びＨＬＡ−ＤＰＢ１座のそれぞれ１つを確認することに関するものである（例えば、Ｋａｗａｓｅ ｅｔ ａｌ．，２００７，Ｂｌｏｏｄ１１０：２２３５−２２４１を参照されたい）。４／６もしくは５／６の不適合、または６／６の適合が、臨床ケアの基準である。

しかしながら、ヒトでの血液移植の細胞源として臍帯血を用いることの重大な障壁は、１つの臍帯血ユニット中の造血幹細胞／前駆細胞は、白血球細胞及び血小板の回復（造血再構築）の重大な遅延と、移植不全リスクの向上により、移植を安全に行うには不十分である場合が多い点である。したがって、これらの患者は、移植関連死の重大なリスクにさらされる。１つの臍帯血ユニットのサイズ（すなわち、ドナーからの１回分の輸血に含まれる造血細胞の数）は、血液移植には不十分なことが多かったので、２つの臍帯血ユニットが必要となることが多かった。２つの臍帯血ユニットの使用により、拒絶反応／移植不全のリスクが劇的に低下したが、造血回復までの時間は、大きく遅延したままで、そのため、生命にかかわる感染症と出血のリスクは上昇した。さらに、２つの臍帯血ユニットのアプローチでは、急性ＧＶＨＤのリスクも上昇し、臍帯血移植レシピエントでは、早期移植関連死のリスクが上昇したままであった。

固形組織移植の関連において、Ｅｘ−ＣＢＳＣの投与後に、免疫寛容が観察されたことを踏まえ、そのような免疫寛容が生じて、急性ＧＶＨＤも軽減できるか調べた。当初は、重大なＨＬＡ不適合の可能性により、急性ＧＶＨＤは、Ｅｘ−ＣＢＳＣの適合不明投与に伴う重大なリスクと考えられていた。しかしながら、実施例３に記載されているように、適合不明なＥｘ−ＣＢＳＣは、予想外にも、高リスクの急性白血病、慢性骨髄性白血病及び骨髄異形成症候群の治療のために、ＨＬＡ適合（６／６）または不適合（４／６もしくは５／６）な臍帯血移植を受けた患者において、急性ＧＶＨＤの発症と重症度を低減することを本開示は示す。ＨＬＡ適合または不適合臍帯血ユニットと組み合わせて、適合不明なＥｘ−ＣＢＳＣを投与した患者には、グレードＩＩＩ〜ＩＶのＧＶＨＤを発症した患者はいなかったが、臍帯血ユニットと組み合わせて、Ｅｘ−ＣＢＳＣを投与しなかった患者の２６％は、グレードＩＩＩ〜ＩＶのＧＶＨＤを発症した。この結果は重大である。上で示したように、グレードＩＶのＧＶＨＤの患者は通常、予後が悪いからである。ＧＶＨＤの発症と重症度の低減により、強力な免疫抑制の必要性が低下し、致命的な感染症及び／またはがんの発現リスクも低下する。この知見により、多種多様な患者及び移植の関連において、Ｅｘ−ＣＢＳＣが免疫寛容を誘導することも裏付けられる。

この関連においては、免疫寛容とは、移植物質による宿主に対する免疫応答強度の低下を指す。特定的な実施形態では、免疫応答強度は、本明細書に開示されているようなＥｘ−ＣＢＳＣを投与していない移植レシピエントと比べて、宿主に対する平均移植片免疫応答よりも５〜１００％、２５〜１００％または７５〜１００％低下できる。特定的な実施形態では、免疫応答強度は、ＧＶＨＤが現れる時点を割り出すことによって測定できる。例えば、免疫寛容により、宿主と宿主の器官は、より長期間にわたり生存及び機能可能になることができる。特定的な実施形態では、免疫寛容とは、特定の外来抗原によって、免疫応答が惹起されないか、または惹起される免疫応答が低下する免疫系（移植片）状態を指すことができる。

上記に基づき、本明細書に開示されている特定的な実施形態は、Ｅｘ−ＣＢＳＣを投与して、同種異系造血細胞移植液が、宿主に対して免疫寛容を示すようにすることを含む。免疫寛容を示す同種異系造血細胞移植液（移植体）は、宿主に対して有意な免疫応答を起こさず、宿主において、ＧＶＨＤ、特定的な実施形態では急性ＧＨＶＤ、より特定的な実施形態では、ステージＩＩＩまたはステージＩＶの急性ＧＶＨＤの発症及び／または重症度が低減されるようになる。特定的な実施形態では、免疫寛容を示す同種異系造血細胞移植液は、抗原に結合できる抗体を産生することによって、抗原に応答することをしないか、統計的に有意な程度低下したレベルで応答する。

上に示されているように、Ｅｘ−ＣＢＳＣの有益な作用により、同種異系造血細胞移植を受ける患者において、免疫抑制の必要性を軽減できる。したがって、Ｅｘ−ＣＢＳＣの投与後、同種異系造血細胞移植レシピエントに投与する免疫抑制剤を軽減してよい。上に示されているように、免疫抑制剤の投与の低減は、用量の低下、投与間隔の延長及び／または免疫抑制剤の投与を早期に止めることによって反映できる。

臍帯血移植後のＧＶＨＤの軽減について記載されている参照文献が数多く存在することに触れるのは有益である。これらの参照文献には主に、より標準的な骨髄移植後に発症するＧＶＨＤよりも、臍帯血移植後のＧＶＨＤが軽減されていることが記載されている。さらに、ＧＶＨＤの軽減により、概して、慢性ＧＶＨＤが軽減される。Ｅｘ−ＣＢＳＣの投与により、臍帯血移植に伴うＧＶＨＤがさらに軽減されることを本開示は提供する。Ｅｘ−ＣＢＳＣはさらに、急性ＧＶＨＤ、より詳細には、最も危険な形態の急性ＧＶＨＤであるステージＩＩＩ及びＩＶも軽減する。

臨床関連外でも、急性ＧＶＨＤの軽減効果は、動物モデルを用いて確認することもできる。例えば、免疫不全ＮＯＤ．ＳＣＩＤуｃ−／−（ＮＳＧ）マウス（例えばＪａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ製）に、２Ｇｙの放射線を照射後、健常なドナーから得た末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を合わせて２１０６個、注射することできる。ＧＶＨＤの発現と重症度の臨床パラメーターとして、注射したマウスの経時的な体重減少と生存率を評価できる。体重減少は、注射したマウスの初期体重に対する、ＰＢＭＣ注射後の異なる時点における体重の割合として表すことができる。血液と脾臓細胞も回収でき、ヒト特異的な蛍光ｍＡｂを用いて、フローサイトメトリーによって、Ｔ細胞の出現頻度を割り出すことができる。

患者への投与用のＥｘｐ−ＣＢＳＣユニットの選択：本開示を通じて、固形組織移植物質と臍帯血ユニットの免疫学的な適合性（例えば、ＨＬＡの適合性）の重要性について説明されている。これに対して、Ｅｘｐ−ＣＢＳＣは、免疫学的に適合させる必要はなく、むしろ、免疫学的な適合性に関わらず、いずれの患者にも投与できるオフザシェルフの製品として提供する。

特定的な実施形態では、Ｅｘｐ−ＣＢＳＣは、Ｅｘｐ−ＣＢＳＣのＨＬＡタイプを患者のＨＬＡタイプに免疫学的に適合させずに投与する。特定的な実施形態では、「ＨＬＡタイプを適合させずに」及び「免疫学的な適合判定なしに」とは、患者と試料との間で、ＨＬＡ抗原またはアリルのいずれかが適合しているようにする工程を経ないことを意味する。特定的な実施形態では、患者に投与するＥｘｐ−ＣＢＳＣの選択は、Ｅｘｐ−ＣＢＳＣを投与する予定の患者が、ＨＬＡ抗原またはアリルのいずかにおいて、Ｅｘｐ−ＣＢＳＣに適合しているか不適合かを考慮せずに行う。したがって、Ｅｘｐ−ＣＢＳＣ試料は、患者と同じＨＬＡタイプを有していることもあれば、Ｅｘｐ−ＣＢＳＣのＨＬＡタイプは、タイピングしたＨＬＡ抗原及び／またはアリルの１個、２個、３個、４個、５個、６個以上において、患者のＨＬＡタイプと異なることもある。特定的な実施形態では、Ｅｘｐ−ＣＢＳＣ試料のＨＬＡタイプは、タイピングしたすべてのＨＬＡ抗原及び／またはアリルにおいて、患者のＨＬＡタイプと異なっていてよい。しかしながら、疑念を回避するために、移植物質（例えば、固形組織または同種異系造血細胞移植液）は、現行の臨床ケア基準内で、免疫学的に適合させる。現行の臨床ケア基準では、免疫学的な適合内で、ある程度の不適合を許容できる。特定的な実施形態では、Ｅｘｐ−ＣＢＳＣは、骨髄系列細胞に分化できる。特定的な実施形態では、Ｅｘｐ−ＣＢＳＣは、リンパ球系列細胞に分化できる。特定的な実施形態では、Ｅｘｐ−ＣＢＳＣは、Ｔ細胞が枯渇されたものである。Ｔ細胞の枯渇は、能動的なプロセスによるものであることも、及び／またはＣＤ３４＋の選択と増殖培養中の受動的な除去によるものであることもできる。

適合不明なＥｘｐ−ＣＢＳＣの選択の際に考慮する任意のパラメーターには、総有核細胞数、ＣＤ３４＋（またはその他の好適な抗原に対して陽性の）総細胞数、試料の経過日数、患者の年齢、ドナーの人種または民族的バックグラウンド、患者の体重、特定の患者における治療対象の病状のタイプと重症度、患者の既存抗体検査結果などのうちの１つ以上を含めることができる。

特定的な実施形態では、患者への投与用のＥｘｐ−ＣＢＳＣを調製するために、細胞を培養培地から回収して、洗浄し、治療有効量で担体中に濃縮できる。例示的な担体としては、塩類溶液、緩衝塩類溶液、生理食塩水、水、ハンクス液、リンゲル液、Ｎｏｒｍｏｓｏｌ−Ｒ（Ａｂｂｏｔｔ Ｌａｂｓ）、Ｐｌａｓｍａ−Ｌｙｔｅ Ａ（登録商標）（イリノイ州モートングローブのＢａｘｔｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．）、グリセロール及びこれらを組み合わせたものが挙げられる。

特定的な実施形態では、担体には、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）もしくはその他のヒト血清成分、またはウシ胎仔血清を添加できる。特定的な実施形態では、注入用担体としては、５％ＨＳＡまたはデキストロースを含む緩衝塩類溶液が挙げられる。追加の等張化剤としては、三価以上の糖アルコールを含む多価糖アルコール、例えば、グリセリン、エリトリトール、アラビトール、キシリトール、ソルビトールまたはマンニトールなどが挙げられる。

担体としては、シトレート緩衝液、サクシネート緩衝液、タートレート緩衝液、フマレート緩衝液、グルコネート緩衝液、オキサレート緩衝液、ラクテート緩衝液、アセテート緩衝液、フォスフェート緩衝液、ヒスチジン緩衝液及び／またはトリメチルアミン塩などの緩衝剤を挙げることができる。

安定剤とは、充填剤から、細胞の容器壁への接着を防ぐのを助ける添加剤まで、様々な機能に及ぶことができる広範なカテゴリーの賦形剤を指す。典型的な安定剤としては、多価糖アルコール、アミノ酸（アルギニン、リシン、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アラニン、オルニチン、Ｌ−ロイシン、２−フェニルアラニン、グルタミン酸及びトレオニンなど）、有機糖または糖アルコール（ラクトース、トレハロース、スタキオース、マンニトール、ソルビトール、キシリトール、リビトール、ミオイノシトール、ガラクチトール、グリセロール及びイノシトールのようなシクリトールなど）、ＰＥＧ、アミノ酸ポリマー、含硫還元剤（尿素、グルタチオン、チオクト酸、ナトリウムチオグリコレート、チオグリセロール、α−モノチオグリセロール及びナトリウムチオサルフェートなど）、低分子量ポリペプチド（すなわち、１０残基未満）、タンパク質（ＨＳＡ、ウシ血清アルブミン、ゼラチンまたは免疫グロブリンなど）、親水性ポリマー（ポリビニルピロリドンなど）、単糖（キシロース、マンノース、フルクトース及びグルコースなど）、二糖（ラクトース、マルトース及びスクロースなど）、三糖（ラフィノースなど）、ならびに多糖（デキストランなど）を挙げることができる。

必要または有益な場合、製剤には、リドカインのような局所麻酔剤を含めて、注射部位の疼痛を緩和できる。

例示的な保存剤としては、フェノール、ベンジルアルコール、メタクレゾール、メチルパラベン、プロピルパラベン、オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド、ハロゲン化ベンザルコニウム、ヘキサメトニウムクロリド、アルキルパラベン（メチルパラベンまたはプロピルパラベンなど）、カテコール、レゾルシノール、シクロヘキサノール及び３−ペンタノールが挙げられる。

製剤内の治療有効量の細胞は、１０^２個超の細胞、１０^３個超の細胞、１０^４個超の細胞、１０^５個超の細胞、１０^６個超の細胞、１０^７個超の細胞、１０^８個超の細胞、１０^９個超の細胞、１０^１０個超の細胞または１０^１１個超であることができる。特定的な実施形態では、製剤を調整して、対象に投与したときに、１キログラム当たりに１００万〜２０００万個のＨＳＰＣを供給できる。

本明細書に開示されている製剤では、細胞は概して、１リットル以下、５００ｍｌ以下、２５０ｍｌ以下または１００ｍｌ以下の体積である。したがって、投与する細胞の密度は典型的には、１０４個超の細胞／ｍｌ、１０７個超の細胞／ｍｌもしくは１０８超の細胞／ｍｌ、またはそれを超える数（例えば１０９個の細胞／ｍｌ）である。

本明細書に開示されている製剤は、例えば、注射、注入、かん流または洗浄による投与用に調製できる。本発明の製剤はさらに、骨髄注射、静脈内注射、皮内注射、動脈内注射、結節内注射、リンパ内注射、腹腔内注射、病巣内注射、前立腺内注射、膣内注射、直腸内注射、局所注射、髄腔内注射、腫瘍内注射、筋肉内注射、小胞内注射及び／または皮下注射用に調合できる。

Ｅｘｐ−ＣＢＳＣ製剤を対象に投与する。対象としては、ヒト、ペット（イヌ、ネコ、爬虫類、トリなど）、家畜（ウマ、ウシ、ヤギ、ブタ、ニワトリなど）、及び実験動物（サル、ラット、マウス、魚など）が挙げられる。Ｅｘｐ−ＣＢＳＣ製剤は、対象に治療有効量で投与する。

治療有効量としては、有効量、予防的措置及び／または治療的措置をもたらす量が挙げられる。

「有効量」は、対象において所望の生理的変化をもたらすのに必要なＥｘｐ−ＣＢＳＣの量である。有効量は、研究目的で投与することが多い。実験モデルでは、本明細書に開示されている有効量は、（ｉ）移植拒絶反応を軽減すること、（ｉｉ）ＴＰＮを低減すること、（ｉｉｉ）生理的処置後にオピオイドの使用を低減すること、（ｉｖ）入院期間に当たる回復期間を短縮すること、（ｖ）急性ＧＶＨＤを軽減すること、（ｖｉ）免疫寛容を誘導すること、及び／または（ｖｉ）粘膜炎を軽減することのうちの１つ以上を行う。

「予防的措置」としては、状態の徴候または症状を示していない対象に行う措置であって、その状態（例えば、移植拒絶反応、ＧＶＨＤ）の発現リスクを軽減、予防または低下させる目的で行う措置が挙げられる。したがって、予防的措置は、例えば、移植拒絶反応、ならびに／またはステージＩＩＩ及び／もしくはステージＩＶのＧＶＨＤに対する予防的な措置として機能する。

「治療的措置」としては、状態の症状または徴候を示している対象に行う措置であって、その状態の重症度または進行を軽減する目的で対象に行う措置が挙げられる。治療的措置は、状態を部分的または完全に消散することもできる。本開示の関連においては、この状態としては、移植拒絶反応、ＴＰＮの使用、医療処置後のオピオイドの使用、入院、ＧＶＨＤ及び粘膜炎のうちの１つ以上が挙げられる。

示した状態の存在及び／または重症度を評価する方法は、本開示を通じて示されており、当業者が治療有効量を容易に特定できるようになっている。

医師、獣医または研究者は、例えば、標的、体重、状態のタイプ、移植物のタイプ、状態の重症度、分かる場合には、将来的に生じる関連イベント、過去または並行する治療的介入、対象の特発症及び投与経路などを含む物理的及び生理的要因のようなパラメーターを考慮して、特定の対象に対するＥｘｐ−ＣＢＳＣの実際の投与量を割り出すことができる。加えて、インビトロ及びインビボアッセイを任意に応じて用いて、最適な用量範囲の特定を助けることができる。

治療有効投与量としては、１０^２個超の細胞、１０^３個超の細胞、１０^４個超の細胞、１０^５個超の細胞、１０^６個超の細胞、１０^７個超の細胞、１０^８個超の細胞、１０^９個超の細胞、１０^１０個超の細胞または１０^１１個超の細胞を挙げることができる。特定的な実施形態では、治療有効量としては、１キログラム当たり１００万〜２０００万個のＨＳＰＣが挙げられる。

Ｅｘｐ−ＣＢＳＣは、例えば、注射、注入、かん流または洗浄によって投与でき、より特定的には、１回以上の骨髄注入、静脈内注入、皮内注入、動脈内注入、結節内注入、リンパ内注入、腹腔内注入、病巣内注入、前立腺内注入、膣内注入、直腸内注入、局所注入、髄腔内注入、腫瘍内注入、筋肉内注入、小胞内注入及び／もしくは皮下注入、及び／またはボーラス注射による投与を挙げることができる。

特定的な実施形態では、ＨＬＡの適合判定なしに（対象とＥｘｐ−ＣＢＳＣとの間で、適合度を割り出す工程を経ずに）、Ｅｘｐ−ＣＢＳＣの量を投与する。

Ｅｘｐ−ＣＢＳＣは、臨床的に有意義なタイムウィンドウ内で投与する。特定的な実施形態では、固形組織移植または同種異系造血細胞移植を受ける対象においては、臨床的に有意義なタイムウィンドウは、移植の１２時間以内であることができる（例えば、ＷＯ２００６／０４７５６９及びＷＯ２００７／０９５５９４を参照されたい）。特定的な実施形態では、臨床的に有意義なタイムウィンドウは、医療処置（移植など）の２４時間、３６時間、４８時間または１週間以内であることができる。臨床的に有意義なタイムウィンドウの上限は、Ｅｘｐ−ＣＢＳＣが有意義な臨床効果をもたらさなくなるまで、医学的介入とＥｘｐ−ＣＢＳＣの投与との間の遅延時間を延ばすことによって、実験によって割り出すことができる。

キット：キットは、本明細書に記載されている１つ以上のＥｘｐ−ＣＢＳＣ製剤の入った１つ以上の容器を含むことができる。特定的な実施形態では、そのキットは、他の細胞、組成物または製剤と組み合わせて用いる１つ以上のＥｘｐ−ＣＢＳＣ製剤の入った１つ以上の容器を含むことができる。このような容器（複数可）には、医薬または生物学的製品の製造、使用または販売を規制する行政機関によって規定されている形態の通知であって、行政機関によるヒトへの投与用の製造、使用または販売の認可を反映する通知を付随できる。その通知は、提供するＥｘｐ−ＣＢＳＣ製剤を免疫学的な適合判定なしに対象に投与できる旨を示すものであってよい。このキットは、そのキットを使用する際のさらなる説明、例えば、投与する際に細胞及び／または製剤を調製すること、関連する廃棄物の適切な破棄などに関する説明を含むことができる。この説明は、印刷した説明をキット内に入れた形態であることも、キット自体の一部に印刷することもできる。説明は、紙、パンフレット、チラシ、ＣＤ−ＲＯＭまたはコンピュータ可読デバイスの形態であってよく、あるいは、遠隔の場所（ウェブサイトなど）にある説明に誘導することもできる。特定的な実施形態では、キットは、そのキットを有効に使用するのに必要な医療器具（シリンジ、アンプル、チューブ材、フェイスマスク、針無流体移送器具、注射キャップ、スポンジ、滅菌接着片、Ｃｈｌｏｒａｐｒｅｐ、手袋など）の一部またはすべても含むことができる。本明細書に記載されているいずれのキットの中身は、様々であることができる。キットの説明によって、Ｅｘｐ−ＣＢＳＣを使用して、本明細書に記載されている新たな臨床的な用途を実現するように指示することになる。

例示的な実施形態：
１．同種異系皮膚移植片拒絶反応を軽減する必要のある対象における同種異系皮膚移植片拒絶反応の軽減方法であって、
同種異系皮膚移植を受ける臨床的に有意義なタイムウィンドウ内で、ＣＤ３４＋濃縮型増殖臍帯血試料（Ｅｘｐ−ＣＢＳＣ）を治療有効量、同種異系皮膚移植を必要とする対象に投与することによって、その対象において、同種異系皮膚移植片拒絶反応を軽減することを含む方法。

２．（ｉ）その同種異系皮膚移植片と対象が、免疫学的に適合しており、（ｉｉ）そのＥｘｐ−ＣＢＳＣを免疫学的な適合判定なしに、その対象に投与する、実施形態１に記載の方法。

３．そのＥｘｐ−ＣＢＳＣが、事前に凍結保存したものである、実施形態１または２に記載の方法。

４．そのＥｘｐ−ＣＢＳＣが、Ｔ細胞を含まない、実施形態１のいずれかに記載の方法。

５．その対象が、皮膚の外傷により、同種異系皮膚移植片拒絶反応の軽減を必要とする、実施形態１〜３のいずれかに記載の方法。

６．その外傷が、火、熱、圧力、穿刺及び／または擦過によるものである、実施形態５に記載の方法。

７．同種異系皮膚移植を受ける前に、その臨床的に有意義なタイムウィンドウが存在する、実施形態１〜６のいずれかに記載の方法。

８．その臨床的に有意義なタイムウィンドウが、その同種異系皮膚移植を受ける３６時間以内である、実施形態１〜７のいずれかに記載の方法。

９．その臨床的に有意義なタイムウィンドウが、その同種異系皮膚移植を受ける１２時間以内である、実施形態１〜７のいずれかに記載の方法。

１０．そのＥｘｐ−ＣＢＳＣが、少なくとも７５００万個のＣＤ３４＋細胞を含む、実施形態１〜９のいずれかに記載の方法。

１１．そのＥｘｐ−ＣＢＳＣが、出産時の１人のヒトの臍帯血及び／または胎盤血に由来するものである、実施形態１〜１０のいずれかに記載の方法。

１２．そのＥｘｐ−ＣＢＳＣが、２つ以上の異なる増殖ヒト臍帯血幹細胞試料の入ったプールを含み、そのプール中のそれぞれの異なる試料が、出産時における異なるヒトの臍帯血及び／または胎盤血に由来する、実施形態１〜１０のいずれかに記載の方法。

１３．その治療有効量が、対象の１キログラム当たりに１００万個〜２０００万個のＣＤ３４＋細胞を含む、実施形態１〜１２のいずれかに記載の方法。

１４．同種異系皮膚移植片拒絶反応を軽減する必要のある対象において、同種異系皮膚移植片拒絶反応を軽減する目的で、適合不明のＣＤ３４＋濃縮型増殖臍帯血試料（Ｅｘｐ−ＣＢＳＣ）を使用すること。

１５．その使用に、臨床的に有意義なタイムウィンドウ内で、同種異系皮膚移植を必要とする対象に、治療有効量を投与することが含まれる、実施形態１４に記載の使用。

１６．そのＥｘｐ−ＣＢＳＣが、事前に凍結保存したものである、実施形態１４または１５に記載の使用。

１７．そのＥｘｐ−ＣＢＳＣが、Ｔ細胞を含まない、実施形態１４〜１６のいずれかに記載の使用。

１８．その対象が、皮膚の外傷により、同種異系皮膚移植片拒絶反応を軽減する必要のある、実施形態１４〜１７のいずれかに記載の使用。

１９．その外傷が、火、熱、圧力、穿刺及び／または擦過によるものである、実施形態１８に記載の使用。

２０．同種異系皮膚移植を受ける前に、臨床的に有意義なタイムウィンドウが存在する、実施形態１５〜１９のいずれかに記載の使用。

２１．その臨床的に有意義なタイムウィンドウが、同種異系皮膚移植を受ける３６時間以内である、実施形態１５〜２０のいずれかに記載の使用。

２２．その臨床的に有意義なタイムウィンドウが、同種異系皮膚移植を受ける１２時間以内である、実施形態１５〜２０のいずれかに記載の使用。

２３．そのＥｘｐ−ＣＢＳＣが、少なくとも７５００万個のＣＤ３４＋細胞を含む、実施形態１４〜２２のいずれかに記載の使用。

２４．そのＥｘｐ−ＣＢＳＣが、出産時の１人のヒトの臍帯血及び／または胎盤血に由来する、実施形態１４〜２３のいずれかに記載の使用。

２５．そのＥｘｐ−ＣＢＳＣが、２つ以上の異なる増殖ヒト臍帯血幹細胞試料の入ったプールを含み、そのプール中のそれぞれの異なる試料が、出産時における異なるヒトの臍帯血及び／または胎盤血に由来する、実施形態１４〜２３のいずれかに記載の使用。

２６．その治療有効量が、対象の１キログラム当たりに１００万個〜２０００万個のＣＤ３４＋細胞を含む、実施形態１５〜２５のいずれかに記載の使用。

２７．移植レシピエントにおいて免疫寛容を誘導する目的で、適合不明のＣＤ３４＋濃縮型増殖臍帯血試料（Ｅｘｐ−ＣＢＳＣ）を使用すること。

２８．その使用に、臨床的に有意義なタイムウィンドウ内で、免疫寛容を誘導する必要のある対象に、治療有効量を投与することが含まれる、実施形態２７に記載の使用。

２９．そのＥｘｐ−ＣＢＳＣが、事前に凍結保存したものである、実施形態２７または２８に記載の使用。

３０．そのＥｘｐ−ＣＢＳＣが、Ｔ細胞を含まない、実施形態２７〜２９のいずれかに記載の使用。

３１．その移植レシピエントが、固形組織移植レシピエントである、実施形態２７〜３０のいずれかに記載の使用。

３２．その固形組織が、脂肪組織、血管、骨、骨髄、心臓細胞、軟骨、軟骨（ｃａｒｔｉｌａｇｉｎｏｕｓ）細胞、軟骨（ｃｈｏｎｄｒａｌ）細胞、蝸牛、結合組織、角膜、培養細胞単層、歯の組織、目、顔、筋膜、線維組織、足、機能的脊椎単位、髪、手、心臓、心臓弁、腸、膵島細胞、腎臓、水晶体、靱帯、肝臓、肺、半月板、筋腱移植片、筋肉組織、神経細胞、神経組織、骨軟骨細胞、骨形成原細胞、卵巣、膵臓、半腱様筋組織、皮膚、脾臓、胃、腱、精巣、歯または椎間板を含む、実施形態３１に記載の方法。

３３．その移植レシピエントが、造血細胞移植レシピエントである、実施形態２７〜３０のいずれかに記載の使用。

３４．その移植レシピエントが、同種異系移植レシピエントである、実施形態２７〜３３のいずれかに記載の使用。

３５．その移植レシピエントが、同種異系臍帯血移植レシピエントである、実施形態２７〜３０のいずれかに記載の使用。

３６．その免疫寛容の誘導によって、その対象への免疫抑制薬の投与が低減される、実施形態２７〜３５のいずれかに記載の使用。

３７．その免疫抑制薬が、シクロスポリン、シクロスポリンＡ、シクロホスファミド、プレドニゾン、デキサメタゾン、メトトレキセート、アザチオプリン、ミコフェノレート、モフェチル、サリドマイド、リチウム、ＦＫ−５０６、シロリムス、ＡＴＧ、インフリキシマブ及び全身性ステロイドのうちの１つ以上を含む、実施形態３６に記載の使用。

３８．移植を受ける前に、臨床的に有意義なタイムウィンドウが存在する、実施形態２８〜３７のいずれかに記載の使用。

３９．その臨床的に有意義なタイムウィンドウが、移植を受ける３６時間以内である、実施形態２８〜３８のいずれかに記載の使用。

４０．その臨床的に有意義なタイムウィンドウが、移植を受ける１２時間以内である、実施形態２８〜３８のいずれかに記載の使用。

４１．そのＥｘｐ−ＣＢＳＣが、少なくとも７５００万個のＣＤ３４＋細胞を含む、実施形態２７〜４０のいずれかに記載の使用。

４２．そのＥｘｐ−ＣＢＳＣが、出産時の１人のヒトの臍帯血及び／または胎盤血に由来する、実施形態２７〜４１のいずれかに記載の使用。

４３．そのＥｘｐ−ＣＢＳＣが、２つ以上の異なる増殖ヒト臍帯血幹細胞試料の入ったプールを含み、そのプール中のそれぞれの異なる試料が、出産時における異なるヒトの臍帯血及び／または胎盤血に由来する、実施形態２７〜４１のいずれかに記載の使用。

４４．その治療有効量が、対象の１キログラム当たりに１００万個〜２０００万個のＣＤ３４＋細胞を含む、実施形態２８〜４３のいずれかに記載の使用。

４５．固形組織移植レシピエントにおける固形組織移植片に対する免疫寛容の誘導方法であって、
固形組織移植を受ける臨床的に有意義なタイムウィンドウ内で、ＣＤ３４＋濃縮型増殖臍帯血試料（Ｅｘｐ−ＣＢＳＣ）を治療有効量、その移植レシピエントに投与することによって、その固形組織移植レシピエントにおいて、その固形組織移植片に対する免疫寛容を誘導することを含む方法。

４６．（ｉ）その固形組織移植片と対象が、免疫学的に適合しており、（ｉｉ）そのＥｘｐ−ＣＢＳＣを免疫学的な適合判定なしに、その対象に投与する、実施形態４５に記載の方法。

４７．そのＥｘｐ−ＣＢＳＣが、事前に凍結保存したものである、実施形態４５または４６に記載の方法。

４８．そのＥｘｐ−ＣＢＳＣが、Ｔ細胞を含まない、実施形態４５〜４７のいずれかに記載の方法。

４９．免疫寛容が、固形組織移植の転帰の改善によって立証される、実施形態４５〜４８のいずれかに記載の方法。

５０．Ｅｘｐ−ＣＢＳＣを投与しない対照集団よりも、移植拒絶反応が軽減することによって、その固形組織移植の転帰の改善が立証される、実施形態４９に記載の方法。

５１．その固形組織移植片が、脂肪組織、血管、骨、骨髄、心臓細胞、軟骨、軟骨（ｃａｒｔｉｌａｇｉｎｏｕｓ）細胞、軟骨（ｃｈｏｎｄｒａｌ）細胞、蝸牛、結合組織、角膜、培養細胞単層、歯の組織、目、顔、筋膜、線維組織、足、機能的脊椎単位、髪、手、心臓、心臓弁、腸、膵島細胞、腎臓、水晶体、靱帯、肝臓、肺、半月板、筋腱移植片、筋肉組織、神経細胞、神経組織、骨軟骨細胞、骨形成原細胞、卵巣、膵臓、半腱様筋組織、皮膚、脾臓、胃、腱、精巣、歯または椎間板を含む、実施形態４９〜５０のいずれかに記載の方法。

５２．Ｅｘｐ−ＣＢＳＣを投与しない対照集団よりも、免疫抑制薬の投与が低減されることによって、その固形組織移植の転帰の改善が立証される、実施形態４９〜５１のいずれかに記載の方法。

５３．その免疫抑制薬が、シクロスポリン、シクロスポリンＡ、シクロホスファミド、プレドニゾン、デキサメタゾン、メトトレキセート、アザチオプリン、ミコフェノレート、モフェチル、サリドマイド、リチウム、ＦＫ−５０６、シロリムス、ＡＴＧ、インフリキシマブ及び全身性ステロイドのうちの１つ以上を含む、実施形態５２に記載の方法。

５４．固形組織移植を受ける前に、臨床的に有意義なタイムウィンドウが存在する、実施形態４５〜５３のいずれかに記載の方法。

５５．その臨床的に有意義なタイムウィンドウが、固形組織移植を受ける３６時間以内である、実施形態４５〜５４のいずれかに記載の方法。

５６．その臨床的に有意義なタイムウィンドウが、固形組織移植を受ける１２時間以内である、実施形態４５〜５４のいずれかに記載の方法。

５７．そのＥｘｐ−ＣＢＳＣが、少なくとも７５００万個のＣＤ３４＋細胞を含む、実施形態４５〜５６のいずれかに記載の方法。

５８．そのＥｘｐ−ＣＢＳＣが、出産時の１人のヒトの臍帯血及び／または胎盤血に由来する、実施形態４５〜５７のいずれかに記載の方法。

５９．そのＥｘｐ−ＣＢＳＣが、２つ以上の異なる増殖ヒト臍帯血幹細胞試料の入ったプールを含み、そのプール中のそれぞれの異なる試料が、出産時における異なるヒトの臍帯血及び／または胎盤血に由来する、実施形態４５〜５７のいずれかに記載の方法。

６０．その治療有効量が、対象の１キログラム当たりに１００万個〜２０００万個のＣＤ３４＋細胞を含む、実施形態４５〜５９のいずれかに記載の方法。

６１．免疫抑制薬の投与を低減する必要のある対象において、免疫抑制薬の投与を低減する目的で、適合不明のＣＤ３４＋濃縮型増殖臍帯血試料（Ｅｘｐ−ＣＢＳＣ）を使用すること。

６２．その使用に、臨床的に有意義なタイムウィンドウ内で、免疫抑制薬の投与を低減する必要のある対象に、治療有効量を投与することが含まれる、実施形態６１に記載の使用。

６３．そのＥｘｐ−ＣＢＳＣが、事前に凍結保存したものである、実施形態６１または６２に記載の使用。

６４．そのＥｘｐ−ＣＢＳＣが、Ｔ細胞を含まない、実施形態６１〜６３のいずれかに記載の使用。

６５．その免疫抑制薬が、シクロスポリン、シクロスポリンＡ、シクロホスファミド、プレドニゾン、デキサメタゾン、メトトレキセート、アザチオプリン、ミコフェノレート、モフェチル、サリドマイド、リチウム、ＦＫ−５０６、シロリムス、ＡＴＧ、インフリキシマブ及び全身性ステロイドのうちの１つ以上を含む、実施形態６１〜６４のいずれかに記載の方法。

６６．移植処置が原因で、その対象に免疫抑制薬を投与する、実施形態６１〜６５のいずれかに記載の使用。

６７．その移植処置が、固形組織移植処置を含む、実施形態６６に記載の使用。

６８．その固形組織移植片が、脂肪組織、血管、骨、骨髄、心臓細胞、軟骨、軟骨（ｃａｒｔｉｌａｇｉｎｏｕｓ）細胞、軟骨（ｃｈｏｎｄｒａｌ）細胞、蝸牛、結合組織、角膜、培養細胞単層、歯の組織、目、顔、筋膜、線維組織、足、機能的脊椎単位、髪、手、心臓、心臓弁、腸、膵島細胞、腎臓、水晶体、靱帯、肝臓、肺、半月板、筋腱移植片、筋肉組織、神経細胞、神経組織、骨軟骨細胞、骨形成原細胞、卵巣、膵臓、半腱様筋組織、皮膚、脾臓、胃、腱、精巣、歯または椎間板を含む、実施形態６７に記載の使用。

６９．その移植処置が、造血細胞移植処置を含む、実施形態６６のいずれかに記載の使用。

７０．その移植処置が、同種異系移植処置を含む、実施形態６６〜６９のいずれかに記載の使用。

７１．その移植処置が、同種異系臍帯血移植処置を含む、実施形態６６のいずれかに記載の使用。

７２．移植処置の前に、臨床的に有意義なタイムウィンドウが存在する、実施形態６２〜７１のいずれかに記載の使用。

７３．その臨床的に有意義なタイムウィンドウが、移植処置の３６時間内である、実施形態６２〜７２のいずれかに記載の使用。

７４．その臨床的に有意義なタイムウィンドウが、移植処置の１２時間以内である、実施形態６２〜７２のいずれかに記載の使用。

７５．そのＥｘｐ−ＣＢＳＣが、出産時の１人のヒトの臍帯血及び／または胎盤血に由来する、実施形態６１〜７４のいずれかに記載の使用。

７６．そのＥｘｐ−ＣＢＳＣが、２つ以上の異なる増殖ヒト臍帯血幹細胞試料の入ったプールを含み、そのプール中のそれぞれの異なる試料が、出産時における異なるヒトの臍帯血及び／または胎盤血に由来する、実施形態６１〜７４のいずれかに記載の使用。

７７．その治療有効量が、対象の１キログラム当たりに１００万個〜２０００万個のＣＤ３４＋細胞を含む、実施形態６２〜７６のいずれかに記載の使用。

７８．固形組織移植レシピエントに必要な免疫抑制薬の量の低減方法であって、
固形臓器移植を受ける臨床的に有意義なタイムウィンドウ内で、ＣＤ３４＋濃縮型増殖臍帯血試料（Ｅｘｐ−ＣＢＳＣ）を治療有効量、その移植レシピエントに投与することによって、その固形組織移植レシピエントに必要な免疫抑制薬の量を低減することを含む方法。

７９．（ｉ）その固形組織移植片と対象が、免疫学的に適合しており、（ｉｉ）そのＥｘｐ−ＣＢＳＣを免疫学的な適合判定なしに、対象に投与する、実施形態７８に記載の方法。

８０．そのＥｘｐ−ＣＢＳＣが、事前に凍結保存したものである、実施形態７８または７９に記載の方法。

８１．そのＥｘｐ−ＣＢＳＣが、Ｔ細胞を含まない、実施形態７８〜８０のいずれかに記載の方法。

８２．その免疫抑制薬が、シクロスポリン、シクロスポリンＡ、シクロホスファミド、プレドニゾン、デキサメタゾン、メトトレキセート、アザチオプリン、ミコフェノレート、モフェチル、サリドマイド、リチウム、ＦＫ−５０６、シロリムス、ＡＴＧ、インフリキシマブ及び全身性ステロイドのうちの１つ以上を含む、実施形態７８〜８１のいずれかに記載の方法。

８３．その固形組織移植片が、脂肪組織、血管、骨、骨髄、心臓細胞、軟骨、軟骨（ｃａｒｔｉｌａｇｉｎｏｕｓ）細胞、軟骨（ｃｈｏｎｄｒａｌ）細胞、蝸牛、結合組織、角膜、培養細胞単層、歯の組織、目、顔、筋膜、線維組織、足、機能的脊椎単位、髪、手、心臓、心臓弁、腸、膵島細胞、腎臓、水晶体、靱帯、肝臓、肺、半月板、筋腱移植片、筋肉組織、神経細胞、神経組織、骨軟骨細胞、骨形成原細胞、卵巣、膵臓、半腱様筋組織、皮膚、脾臓、胃、腱、精巣、歯または椎間板を含む、実施形態７８〜８２のいずれかに記載の方法。

８４．その固形組織移植片が、同種異系固形組織移植片を含む、実施形態７８〜８３のいずれかに記載の方法。

８５．固形組織移植の前に、臨床的に有意義なタイムウィンドウが存在する、実施形態７８〜８４のいずれかに記載の方法。

８６．その臨床的に有意義なタイムウィンドウが、固形組織移植を受ける３６時間以内である、実施形態７８〜８５のいずれかに記載の方法。

８７．その臨床的に有意義なタイムウィンドウが、固形組織移植を受ける１２時間以内である、実施形態７８〜８５のいずれかに記載の方法。

８８．そのＥｘｐ−ＣＢＳＣが、少なくとも７５００万個のＣＤ３４＋細胞を含む、実施形態７８〜８７のいずれかに記載の方法。

８９．そのＥｘｐ−ＣＢＳＣが、出産時の１人のヒトの臍帯血及び／または胎盤血に由来する、実施形態７８〜８８のいずれかに記載の方法。

９０．そのＥｘｐ−ＣＢＳＣが、２つ以上の異なる増殖ヒト臍帯血幹細胞試料の入ったプールを含み、そのプール中のそれぞれの異なる試料が、出産時における異なるヒトの臍帯血及び／または胎盤血に由来する、実施形態７８〜８８のいずれかに記載の方法。

９１．その治療有効量が、対象の１キログラム当たりに１００万個〜２０００万個のＣＤ３４＋細胞を含む、実施形態７８〜９０のいずれかに記載の方法。

９２．完全静脈栄養（ＴＰＮ）を低減する必要のある対象においてＴＰＮを低減する目的で、適合不明のＣＤ３４＋濃縮型増殖臍帯血試料（Ｅｘｐ−ＣＢＳＣ）を使用すること。

９３．その使用に、臨床的に有意義なタイムウィンドウ内で、ＴＰＮを低減する必要のある対象に、治療有効量を投与することが含まれる、実施形態９２に記載の使用。

９４．そのＥｘｐ−ＣＢＳＣが、事前に凍結保存したものである、実施形態９２または９３に記載の使用。

９５．そのＥｘｐ−ＣＢＳＣが、Ｔ細胞を含まない、実施形態９２〜９４のいずれかに記載の使用。

９６．その対象が、医療処置後にＴＰＮを受ける、実施形態９２〜９５のいずれかに記載の使用。

９７．その医療処置が移植を含む、実施形態９６に記載の使用。

９８．その移植が、固形組織移植を含む、実施形態９７に記載の使用。

９９．その固形組織移植が、脂肪組織、血管、骨、骨髄、心臓細胞、軟骨、軟骨（ｃａｒｔｉｌａｇｉｎｏｕｓ）細胞、軟骨（ｃｈｏｎｄｒａｌ）細胞、蝸牛、結合組織、角膜、培養細胞単層、歯の組織、目、顔、筋膜、線維組織、足、機能的脊椎単位、髪、手、心臓、心臓弁、腸、膵島細胞、腎臓、水晶体、靱帯、肝臓、肺、半月板、筋腱移植片、筋肉組織、神経細胞、神経組織、骨軟骨細胞、骨形成原細胞、卵巣、膵臓、半腱様筋組織、皮膚、脾臓、胃、腱、精巣、歯または椎間板を含む、実施形態９８に記載の使用。

１００．その移植が、造血細胞移植処置を含む、実施形態９７のいずれかに記載の使用。

１０１．その移植が、同種異系移植処置を含む、実施形態９７〜１００のいずれかに記載の使用。

１０２．その移植が、同種異系臍帯血移植処置を含む、実施形態９７のいずれかに記載の使用。

１０３．その対象が、小児の対象である、実施形態９２〜１０２のいずれかに記載の使用。

１０４．その医療処置の前に、臨床的に有意義なタイムウィンドウが存在する、実施形態９３〜１０３のいずれかに記載の使用。

１０５．その臨床的に有意義なタイムウィンドウが、その医療処置の３６時間以内である、実施形態９３〜１０４のいずれかに記載の使用。

１０６．その臨床的に有意義なタイムウィンドウが、その医療処置の１２時間以内である、実施形態９３〜１０４のいずれかに記載の使用。

１０７．そのＥｘｐ−ＣＢＳＣが、少なくとも７５００万個のＣＤ３４＋細胞を含む、実施形態９２〜１０６のいずれかに記載の使用。

１０８．そのＥｘｐ−ＣＢＳＣが、出産時の１人のヒトの臍帯血及び／または胎盤血に由来する、実施形態９２〜１０７のいずれかに記載の使用。

１０９．そのＥｘｐ−ＣＢＳＣが、２つ以上の異なる増殖ヒト臍帯血幹細胞試料の入ったプールを含み、そのプール中のそれぞれの異なる試料が、出産時における異なるヒトの臍帯血及び／または胎盤血に由来する、実施形態９２〜１０７のいずれかに記載の使用。

１１０．その治療有効量が、対象の１キログラム当たりに１００万個〜２０００万個のＣＤ３４＋細胞を含む、実施形態９３〜１０９のいずれかに記載の使用。

１１１．同種異系移植を受けた後に、完全静脈栄養（ＴＰＮ）を受けることになる小児患者を特定することと、
その小児患者に、その同種異系移植の臨床的に有意義なタイムウィンドウ内で、適合不明のＣＤ３４＋濃縮型増殖臍帯血試料（Ｅｘｐ−ＣＢＳＣ）を投与することと、
を含み、
それによって、その小児患者が、同種異系移植後に完全静脈栄養（ＴＰＮ）を使用することを低減する方法。

１１２．（ｉ）その同種異系移植片と対象が、免疫学的に適合しており、（ｉｉ）そのＥｘｐ−ＣＢＳＣを免疫学的な適合判定なしに、その対象に投与する、実施形態１１１に記載の方法。

１１３．そのＥｘｐ−ＣＢＳＣが、事前に凍結保存したものである、実施形態１１１または１１２に記載の方法。

１１４．そのＥｘｐ−ＣＢＳＣが、Ｔ細胞を含まない、実施形態１１１〜１１３のいずれかに記載の方法。

１１５．その同種異系移植が、固形組織移植を含む、実施形態１１１〜１１４のいずれかに記載の方法。

１１６．その固形組織移植が、脂肪組織、血管、骨、骨髄、心臓細胞、軟骨、軟骨（ｃａｒｔｉｌａｇｉｎｏｕｓ）細胞、軟骨（ｃｈｏｎｄｒａｌ）細胞、蝸牛、結合組織、角膜、培養細胞単層、歯の組織、目、顔、筋膜、線維組織、足、機能的脊椎単位、髪、手、心臓、心臓弁、腸、膵島細胞、腎臓、水晶体、靱帯、肝臓、肺、半月板、筋腱移植片、筋肉組織、神経細胞、神経組織、骨軟骨細胞、骨形成原細胞、卵巣、膵臓、半腱様筋組織、皮膚、脾臓、胃、腱、精巣、歯または椎間板を含む、実施形態１１５に記載の方法。

１１７．その同種異系移植が、造血細胞移植を含む、実施形態１１１〜１１４のいずれかに記載の方法。

１１８．その同種異系移植が、臍帯血移植処置を含む、実施形態１１１〜１１４のいずれかに記載の方法。

１１９．その移植の前に、臨床的に有意義なタイムウィンドウが存在する、実施形態１１１〜１１８のいずれかに記載の方法。

１２０．その臨床的に有意義なタイムウィンドウが、その移植を受ける３６時間以内である、実施形態１１１〜１１９のいずれかに記載の方法。

１２１．その臨床的に有意義なタイムウィンドウが、その移植を受ける１２時間以内である、実施形態１１１〜１１９のいずれかに記載の方法。

１２２．そのＥｘｐ−ＣＢＳＣが、少なくとも７５００万個のＣＤ３４＋細胞を含む、実施形態１１１〜１２１のいずれかに記載の方法。

１２３．その治療有効量が、対象の１キログラム当たりに１００万個〜２０００万個のＣＤ３４＋細胞を含む、実施形態１１１〜１２２のいずれかに記載の方法。

１２４．医療処置後の対象による完全静脈栄養（ＴＰＮ）の使用の低減方法であって、その医療処置の臨床的に有意義なタイムウィンドウ内で、ＣＤ３４＋濃縮型増殖臍帯血試料（Ｅｘｐ−ＣＢＳＣ）を治療有効量、その対象に投与することによって、医療処置後のその対象によるＴＰＮの使用を低減することを含む方法。

１２５．そのＥｘｐ−ＣＢＳＣを免疫学的な適合判定なしに、対象に投与する、実施形態１２４に記載の方法。

１２６．そのＥｘｐ−ＣＢＳＣが、事前に凍結保存したものである、実施形態１２４または１２５に記載の方法。

１２７．そのＥｘｐ−ＣＢＳＣが、Ｔ細胞を含まない、実施形態１２４〜１２６のいずれかに記載の方法。

１２８．その医療処置が、移植を含む、実施形態１２４〜１２７のいずれかに記載の方法。

１２９．その移植が、固形組織移植を含む、実施形態１２８に記載の方法。

１３０．その固形組織移植が、脂肪組織、血管、骨、骨髄、心臓細胞、軟骨、軟骨（ｃａｒｔｉｌａｇｉｎｏｕｓ）細胞、軟骨（ｃｈｏｎｄｒａｌ）細胞、蝸牛、結合組織、角膜、培養細胞単層、歯の組織、目、顔、筋膜、線維組織、足、機能的脊椎単位、髪、手、心臓、心臓弁、腸、膵島細胞、腎臓、水晶体、靱帯、肝臓、肺、半月板、筋腱移植片、筋肉組織、神経細胞、神経組織、骨軟骨細胞、骨形成原細胞、卵巣、膵臓、半腱様筋組織、皮膚、脾臓、胃、腱、精巣、歯または椎間板を含む、実施形態１２９に記載の方法。

１３１．その移植が、造血細胞移植を含む、実施形態１２８のいずれかに記載の方法。

１３２．その移植が、同種異系移植を含む、実施形態１２８〜１３１のいずれかに記載の方法。

１３３．その移植が、同種異系臍帯血移植を含む、実施形態１２８のいずれかに記載の方法。

１３４．その対象が、小児の対象である、実施形態１２４〜１３３のいずれかに記載の方法。

１３５．その移植の前に、臨床的に有意義なタイムウィンドウが存在する、実施形態１２４〜１３４のいずれかに記載の方法。

１３６．その臨床的に有意義なタイムウィンドウが、その移植を受ける３６時間以内である、実施形態１２４〜１３５のいずれかに記載の方法。

１３７．その臨床的に有意義なタイムウィンドウが、その移植を受ける１２時間以内である、実施形態１２４〜１３５のいずれかに記載の方法。

１３８．そのＥｘｐ−ＣＢＳＣが、少なくとも７５００万個のＣＤ３４＋細胞を含む、実施形態１２４〜１３７のいずれかに記載の方法。

１３９．その治療有効量が、対象の１キログラム当たりに１００万個〜２０００万個のＣＤ３４＋細胞を含む、実施形態１２４〜１３８のいずれかに記載の方法。

１４０．オピオイドの使用を低減する必要のある対象において、オピオイドの使用を低減する目的で、適合不明のＣＤ３４＋濃縮型増殖臍帯血試料（Ｅｘｐ−ＣＢＳＣ）を使用すること。

１４１．その使用に、臨床的に有意義なタイムウィンドウ内で、オピオイドの使用を低減する必要のある対象に、治療有効量を投与することが含まれる、実施形態１４０に記載の使用。

１４２．そのＥｘｐ−ＣＢＳＣが、事前に凍結保存したものである、実施形態１４０または１４１に記載の使用。

１４３．そのＥｘｐ−ＣＢＳＣが、Ｔ細胞を含まない、実施形態１４０〜１４２のいずれかに記載の使用。

１４４．そのオピオイドが、アニレリジン、アリルプロジン、アルフェンタニル、アルファプロジン、ベンジルモルヒネ、ブプレノルフィン、ベジトラミド、ブトルファノール、コデイン、クロニタゼン、シクラゾシン、デゾシン、デソモルヒネ、ジヒドロモルヒネ、デキストロモラミド、ジアンプロミド、ジヒドロコデイン、ジエチルチアムブテン、ジメノキサドール、ジメフェプタノール、ジメチルチアムブテン、ジピパノン、ジオキサフェチルブチレート、エプタゾシン、エチルモルヒネ、エチルメチルチアムブテン、エトニタジン、エトヘプタジン、フェンタニル、ヒドロコドン、ヘロイン、６−ヒドロキシモルフォン、ヒドロキシペチジン、ヒドロモルフォン、イソメタドン、ケトベミドン、レバロルファン、レボフェナシルモルファン、ロフェンタニル、レボルファノール、モルヒネ、ミロフィン、メペリジン、メプタジノール、メタゾシン、メタドン、メトポン、モルヒネ、ナルセイン、ナルブフィン、ナロルフィン、ニコモルヒネ、ノルレボルファノール、ノルメタドン、ノルモルヒネ、ノルピパノン、アヘン、オキシコドン、オキシモルホン、ピリトラミド、パパベレタム、ペンタゾシン、フェナドキソン、フェナゾシン、フェノペリジン、ピミノジン、フェノモルファン、プロフェプタジン、プロメドール、プロペリジン、プロピラム、プロポキシフェン、スフェンタニル、チリジン、トラマドール、これらの立体異性体、これらの代謝物、これらの塩、これらのエーテル、これらのエステル及び／もしくはこれらの誘導体、及び／またはこれらの混合物のうちの１つ以上から選択されている、実施形態１４０〜１４３のいずれかに記載の使用。

１４５．そのオピオイドが、第２の活性成分と混合されている、実施形態１４０〜１４４のいずれかに記載の使用。

１４６．そのオピオイドと第２の活性成分が、オキシコドンとアセトアミノフェン、またはヒドロコドンとアセトアミノフェンを含む、実施形態１４５に記載の使用。

１４７．その対象が、医療処置後にオピオイドを投与される、実施形態１４０〜１４６のいずれかに記載の使用。

１４８．その医療処置が、移植を含む、実施形態１４７に記載の使用。

１４９．その移植が、固形組織移植を含む、実施形態１４８に記載の使用。

１５０．その固形組織移植が、脂肪組織、血管、骨、骨髄、心臓細胞、軟骨、軟骨（ｃａｒｔｉｌａｇｉｎｏｕｓ）細胞、軟骨（ｃｈｏｎｄｒａｌ）細胞、蝸牛、結合組織、角膜、培養細胞単層、歯の組織、目、顔、筋膜、線維組織、足、機能的脊椎単位、髪、手、心臓、心臓弁、腸、膵島細胞、腎臓、水晶体、靱帯、肝臓、肺、半月板、筋腱移植片、筋肉組織、神経細胞、神経組織、骨軟骨細胞、骨形成原細胞、卵巣、膵臓、半腱様筋組織、皮膚、脾臓、胃、腱、精巣、歯または椎間板を含む、実施形態１４９に記載の使用。

１５１．その移植が、造血細胞移植を含む、実施形態１４８のいずれかに記載の使用。

１５２．その移植が、同種異系移植を含む、実施形態１４８〜１５１のいずれかに記載の使用。

１５３．その移植が、同種異系臍帯血移植を含む、実施形態１４８のいずれかに記載の使用。

１５４．その対象が、小児の対象である、実施形態１４１〜１５３のいずれかに記載の使用。

１５５．その医療処置前に、臨床的に有意義なタイムウィンドウが存在する、実施形態１４２〜１５４のいずれかに記載の使用。

１５６．その臨床的に有意義なタイムウィンドウが、その医療処置の３６時間以内である、実施形態１４２〜１５５のいずれかに記載の使用。

１５７．その臨床的に有意義なタイムウィンドウが、その医療処置の１２時間以内である、実施形態１４２〜１５５のいずれかに記載の使用。

１５８．そのＥｘｐ−ＣＢＳＣが、少なくとも７５００万個のＣＤ３４＋細胞を含む、実施形態１４１〜１５７のいずれかに記載の使用。

１５９．そのＥｘｐ−ＣＢＳＣが、出産時の１人のヒトの臍帯血及び／または胎盤血に由来する、実施形態１４１〜１５８のいずれかに記載の使用。

１６０．そのＥｘｐ−ＣＢＳＣが、２つ以上の異なる増殖ヒト臍帯血幹細胞試料の入ったプールを含み、そのプール中のそれぞれの異なる試料が、出産時における異なるヒトの臍帯血及び／または胎盤血に由来する、実施形態１４１〜１５８のいずれかに記載の使用。

１６１．その治療有効量が、対象の１キログラム当たりに１００万個〜２０００万個のＣＤ３４＋細胞を含む、実施形態１４２〜１６０のいずれかに記載の使用。

１６２．同種異系移植を受けた後に、オピオイドを投与される小児患者を特定することと、
その同種異系移植の臨床的に有意義なタイムウィンドウ内で、適合不明のＣＤ３４＋濃縮型増殖臍帯血試料（Ｅｘｐ−ＣＢＳＣ）をその小児患者に投与することと、
を含み、
それによって、同種異系移植後のその小児患者によるオピオイドの使用を低減する方法。

１６３．（ｉ）その同種異系移植片と対象が、免疫学的に適合しており、（ｉｉ）そのＥｘｐ−ＣＢＳＣを免疫学的な適合判定なしに、その対象に投与する、実施形態１６２に記載の方法。

１６４．そのＥｘｐ−ＣＢＳＣが、事前に凍結保存したものである、実施形態１６２または１６３に記載の方法。

１６５．そのＥｘｐ−ＣＢＳＣが、Ｔ細胞を含まない、実施形態１６２〜１６４のいずれかに記載の方法。

１６６．そのオピオイドが、アニレリジン、アリルプロジン、アルフェンタニル、アルファプロジン、ベンジルモルヒネ、ブプレノルフィン、ベジトラミド、ブトルファノール、コデイン、クロニタゼン、シクラゾシン、デゾシン、デソモルヒネ、ジヒドロモルヒネ、デキストロモラミド、ジアンプロミド、ジヒドロコデイン、ジエチルチアムブテン、ジメノキサドール、ジメフェプタノール、ジメチルチアムブテン、ジピパノン、ジオキサフェチルブチレート、エプタゾシン、エチルモルヒネ、エチルメチルチアムブテン、エトニタジン、エトヘプタジン、フェンタニル、ヒドロコドン、ヘロイン、６−ヒドロキシモルフォン、ヒドロキシペチジン、ヒドロモルフォン、イソメタドン、ケトベミドン、レバロルファン、レボフェナシルモルファン、ロフェンタニル、レボルファノール、モルヒネ、ミロフィン、メペリジン、メプタジノール、メタゾシン、メタドン、メトポン、モルヒネ、ナルセイン、ナルブフィン、ナロルフィン、ニコモルヒネ、ノルレボルファノール、ノルメタドン、ノルモルヒネ、ノルピパノン、アヘン、オキシコドン、オキシモルホン、ピリトラミド、パパベレタム、ペンタゾシン、フェナドキソン、フェナゾシン、フェノペリジン、ピミノジン、フェノモルファン、プロフェプタジン、プロメドール、プロペリジン、プロピラム、プロポキシフェン、スフェンタニル、チリジン、トラマドール、これらの立体異性体、これらの代謝物、これらの塩、これらのエーテル、これらのエステル及び／もしくはこれらの誘導体、及び／またはこれらの混合物のうちの１つ以上から選択されている、実施形態１６２〜１６５のいずれかに記載の方法。

１６７．そのオピオイドが、第２の活性成分と混合されている、実施形態１６２〜１６６のいずれかに記載の方法。

１６８．そのオピオイドと第２の活性成分が、オキシコドンとアセトアミノフェン、またはヒドロコドンとアセトアミノフェンを含む、実施形態１６７に記載の方法。

１６９．その同種異系移植が、固形組織移植を含む、実施形態１６２〜１６８のいずれかに記載の方法。

１７０．その固形組織移植が、脂肪組織、血管、骨、骨髄、心臓細胞、軟骨、軟骨（ｃａｒｔｉｌａｇｉｎｏｕｓ）細胞、軟骨（ｃｈｏｎｄｒａｌ）細胞、蝸牛、結合組織、角膜、培養細胞単層、歯の組織、目、顔、筋膜、線維組織、足、機能的脊椎単位、髪、手、心臓、心臓弁、腸、膵島細胞、腎臓、水晶体、靱帯、肝臓、肺、半月板、筋腱移植片、筋肉組織、神経細胞、神経組織、骨軟骨細胞、骨形成原細胞、卵巣、膵臓、半腱様筋組織、皮膚、脾臓、胃、腱、精巣、歯または椎間板を含む、実施形態１６９に記載の方法。

１７１．その同種異系移植が、造血細胞移植を含む、実施形態１６２〜１６８のいずれかに記載の方法。

１７２．その同種異系移植が、臍帯血移植処置を含む、実施形態１６２〜１６８のいずれかに記載の方法。

１７３．その移植の前に、臨床的に有意義なタイムウィンドウが存在する、実施形態１６２〜１７２のいずれかに記載の方法。

１７４．その臨床的に有意義なタイムウィンドウが、その移植を受ける３６時間以内である、実施形態１６２〜１７３のいずれかに記載の方法。

１７５．その臨床的に有意義なタイムウィンドウが、その移植を受ける１２時間以内である、実施形態１６２〜１７３のいずれかに記載の方法。

１７６．そのＥｘｐ−ＣＢＳＣが、少なくとも７５００万個のＣＤ３４＋細胞を含む、実施形態１６２〜１７５のいずれかに記載の方法。

１７７．その治療有効量が、対象の１キログラム当たりに１００万個〜２０００万個のＣＤ３４＋細胞を含む、実施形態１６２〜１７６のいずれかに記載の方法。

１７８．医療処置後の対象によるオピオイドの使用の低減方法であって、その医療処置の臨床的に有意義なタイムウィンドウ内で、ＣＤ３４＋濃縮型増殖臍帯血試料（Ｅｘｐ−ＣＢＳＣ）を治療有効量、その対象に投与することによって、医療処置後のその対象によるオピオイドの使用を低減することを含む方法。

１７９．そのＥｘｐ−ＣＢＳＣを免疫学的な適合判定なしに、その対象に投与する、実施形態１７８に記載の方法。

１８０．そのＥｘｐ−ＣＢＳＣが、事前に凍結保存したものである、実施形態１７８または１７９に記載の方法。

１８１．そのＥｘｐ−ＣＢＳＣが、Ｔ細胞を含まない、実施形態１７８〜１８０のいずれかに記載の方法。

１８２．そのオピオイドが、アニレリジン、アリルプロジン、アルフェンタニル、アルファプロジン、ベンジルモルヒネ、ブプレノルフィン、ベジトラミド、ブトルファノール、コデイン、クロニタゼン、シクラゾシン、デゾシン、デソモルヒネ、ジヒドロモルヒネ、デキストロモラミド、ジアンプロミド、ジヒドロコデイン、ジエチルチアムブテン、ジメノキサドール、ジメフェプタノール、ジメチルチアムブテン、ジピパノン、ジオキサフェチルブチレート、エプタゾシン、エチルモルヒネ、エチルメチルチアムブテン、エトニタジン、エトヘプタジン、フェンタニル、ヒドロコドン、ヘロイン、６−ヒドロキシモルフォン、ヒドロキシペチジン、ヒドロモルフォン、イソメタドン、ケトベミドン、レバロルファン、レボフェナシルモルファン、ロフェンタニル、レボルファノール、モルヒネ、ミロフィン、メペリジン、メプタジノール、メタゾシン、メタドン、メトポン、モルヒネ、ナルセイン、ナルブフィン、ナロルフィン、ニコモルヒネ、ノルレボルファノール、ノルメタドン、ノルモルヒネ、ノルピパノン、アヘン、オキシコドン、オキシモルホン、ピリトラミド、パパベレタム、ペンタゾシン、フェナドキソン、フェナゾシン、フェノペリジン、ピミノジン、フェノモルファン、プロフェプタジン、プロメドール、プロペリジン、プロピラム、プロポキシフェン、スフェンタニル、チリジン、トラマドール、これらの立体異性体、これらの代謝物、これらの塩、これらのエーテル、これらのエステル，及び／もしくはこれらの誘導体、及び／またはこれらの混合物のうちの１つ以上から選択されている、実施形態１７８〜１８１のいずれかに記載の方法。

１８３．そのオピオイドが、第２の活性成分と混合されている、実施形態１７８〜１８２のいずれかに記載の方法。

１８４．そのオピオイドと第２の活性成分が、オキシコドンとアセトアミノフェン、またはヒドロコドンとアセトアミノフェンを含む、実施形態１８３に記載の方法。

１８５．その医療処置が、移植を含む、実施形態１７８〜１８４のいずれかに記載の方法。

１８６．その移植が、固形組織移植を含む、実施形態１８５に記載の方法。

１８７．その固形組織移植が、脂肪組織、血管、骨、骨髄、心臓細胞、軟骨、軟骨（ｃａｒｔｉｌａｇｉｎｏｕｓ）細胞、軟骨（ｃｈｏｎｄｒａｌ）細胞、蝸牛、結合組織、角膜、培養細胞単層、歯の組織、目、顔、筋膜、線維組織、足、機能的脊椎単位、髪、手、心臓、心臓弁、腸、膵島細胞、腎臓、水晶体、靱帯、肝臓、肺、半月板、筋腱移植片、筋肉組織、神経細胞、神経組織、骨軟骨細胞、骨形成原細胞、卵巣、膵臓、半腱様筋組織、皮膚、脾臓、胃、腱、精巣、歯または椎間板を含む、実施形態１８６に記載の方法。

１８８．その移植が、造血細胞移植を含む、実施形態１８５〜１８４のいずれかに記載の方法。

１８９．その移植が、同種異系移植を含む、実施形態１８５〜１８８のいずれかに記載の方法。

１９０．その移植が、同種異系臍帯血移植を含む、実施形態１８５のいずれかに記載の方法。

１９１．その対象が、小児の対象である、実施形態１７８〜１９０のいずれかに記載の方法。

１９２．その移植の前に、臨床的に有意義なタイムウィンドウが存在する、実施形態１７８〜１９１のいずれかに記載の方法。

１９３．その臨床的に有意義なタイムウィンドウが、その移植を受ける３６時間以内である、実施形態１７８〜１９２のいずれかに記載の方法。

１９４．その臨床的に有意義なタイムウィンドウが、その移植を受ける１２時間以内である、実施形態１７８〜１９２のいずれかに記載の方法。

１９５．そのＥｘｐ−ＣＢＳＣが、少なくとも７５００万個のＣＤ３４＋細胞を含む、実施形態１７８〜１９４のいずれかに記載の方法。

１９６．その治療有効量が、対象の１キログラム当たりに１００万個〜２０００万個のＣＤ３４＋細胞を含む、実施形態１７８〜１９５のいずれかに記載の方法。

１９７．入院を低減する必要のある対象において入院を低減する目的で、適合不明のＣＤ３４＋濃縮型増殖臍帯血試料（Ｅｘｐ−ＣＢＳＣ）を使用すること。

１９８．その使用に、臨床的に有意義なタイムウィンドウ内で、入院を低減する必要のある対象に、治療有効量を投与することが含まれる、実施形態１９７に記載の使用。

１９９．そのＥｘｐ−ＣＢＳＣが、事前に凍結保存したものである、実施形態１９７または１９８に記載の使用。

２００．そのＥｘｐ−ＣＢＳＣが、Ｔ細胞を含まない、実施形態１９７〜１９９のいずれかに記載の使用。

２０１．その対象が、移植処置のために入院している、実施形態１９７〜２００のいずれかに記載の使用。

２０２．その移植処置が、固形組織移植を含む、実施形態２０１に記載の使用。

２０３．その固形組織移植が、脂肪組織、血管、骨、骨髄、心臓細胞、軟骨、軟骨（ｃａｒｔｉｌａｇｉｎｏｕｓ）細胞、軟骨（ｃｈｏｎｄｒａｌ）細胞、蝸牛、結合組織、角膜、培養細胞単層、歯の組織、目、顔、筋膜、線維組織、足、機能的脊椎単位、髪、手、心臓、心臓弁、腸、膵島細胞、腎臓、水晶体、靱帯、肝臓、肺、半月板、筋腱移植片、筋肉組織、神経細胞、神経組織、骨軟骨細胞、骨形成原細胞、卵巣、膵臓、半腱様筋組織、皮膚、脾臓、胃、腱、精巣、歯または椎間板を含む、実施形態２０２に記載の使用。

２０４．その移植処置が、造血細胞移植を含む、実施形態２０１のいずれかに記載の使用。

２０５．その移植処置が、同種異系移植を含む、実施形態２０１〜２０４のいずれかに記載の使用。

２０６．その移植処置が、同種異系臍帯血移植を含む、実施形態２０１のいずれかに記載の使用。

２０７．その対象が、小児の対象である、実施形態１９７〜２０６のいずれかに記載の使用。

２０８．その医療処置の前に、臨床的に有意義なタイムウィンドウが存在する、実施形態１９８〜２０７のいずれかに記載の使用。

２０９．その臨床的に有意義なタイムウィンドウが、その医療処置の３６時間以内である、実施形態１９８〜２０８のいずれかに記載の使用。

２１０．その臨床的に有意義なタイムウィンドウが、その医療処置の１２時間以内である、実施形態１９８〜２０８のいずれかに記載の使用。

２１１．そのＥｘｐ−ＣＢＳＣが、少なくとも７５００万個のＣＤ３４＋細胞を含む、実施形態１９７〜２１０のいずれかに記載の使用。

２１２．そのＥｘｐ−ＣＢＳＣが、出産時の１人のヒトの臍帯血及び／または胎盤血に由来する、実施形態１９７〜２１１のいずれかに記載の使用。

２１３．そのＥｘｐ−ＣＢＳＣが、２つ以上の異なる増殖ヒト臍帯血幹細胞試料の入ったプールを含み、そのプール中のそれぞれの異なる試料が、出産時における異なるヒトの臍帯血及び／または胎盤血に由来する、実施形態１９７〜２１１のいずれかに記載の使用。

２１４．その治療有効量が、対象の１キログラム当たりに１００万個〜２０００万個のＣＤ３４＋細胞を含む、実施形態１９８〜２１３のいずれかに記載の使用。

２１５．同種異系移植を受けた後に入院する小児患者を特定することと、
その同種異系移植の臨床的に有意義なタイムウィンドウ内で、適合不明のＣＤ３４＋濃縮型増殖臍帯血試料（Ｅｘｐ−ＣＢＳＣ）をその小児患者に投与することと、
を含み、
それによって、同種異系移植後のその小児患者の入院期間を短縮する方法。

２１６．（ｉ）その同種異系移植片と対象が、免疫学的に適合しており、（ｉｉ）そのＥｘｐ−ＣＢＳＣを免疫学的な適合判定なしに、その対象に投与する、実施形態２１５に記載の方法。

２１７．そのＥｘｐ−ＣＢＳＣが、事前に凍結保存したものである、実施形態２１５または２１６に記載の方法。

２１８．そのＥｘｐ−ＣＢＳＣが、Ｔ細胞を含まない、実施形態２１５〜２１７のいずれかに記載の方法。

２１９．その同種異系移植が、固形組織移植を含む、実施形態２１５〜２１８のいずれかに記載の方法。

２２０．その固形組織移植が、脂肪組織、血管、骨、骨髄、心臓細胞、軟骨、軟骨（ｃａｒｔｉｌａｇｉｎｏｕｓ）細胞、軟骨（ｃｈｏｎｄｒａｌ）細胞、蝸牛、結合組織、角膜、培養細胞単層、歯の組織、目、顔、筋膜、線維組織、足、機能的脊椎単位、髪、手、心臓、心臓弁、腸、膵島細胞、腎臓、水晶体、靱帯、肝臓、肺、半月板、筋腱移植片、筋肉組織、神経細胞、神経組織、骨軟骨細胞、骨形成原細胞、卵巣、膵臓、半腱様筋組織、皮膚、脾臓、胃、腱、精巣、歯または椎間板を含む、実施形態２１９に記載の方法。

２２１．その同種異系移植が、造血細胞移植を含む、実施形態２１５〜２１８のいずれかに記載の方法。

２２２．その同種異系移植が、臍帯血移植処置を含む、実施形態２１５〜２１８のいずれかに記載の方法。

２２３．その移植の前に、臨床的に有意義なタイムウィンドウが存在する、実施形態２１５〜２２２のいずれかに記載の方法。

２２４．その臨床的に有意義なタイムウィンドウが、その移植を受ける３６時間以内である、実施形態２１５〜２２３のいずれかに記載の方法。

２２５．臨床的に有意義なタイムウィンドウが、その移植を受ける１２時間以内である、実施形態２１５〜２２３のいずれかに記載の方法。

２２６．そのＥｘｐ−ＣＢＳＣが、少なくとも７５００万個のＣＤ３４＋細胞を含む、実施形態２１５〜２２５のいずれかに記載の方法。

２２７．その治療有効量が、対象の１キログラム当たりに１００万個〜２０００万個のＣＤ３４＋細胞を含む、実施形態２１５〜２２６のいずれかに記載の方法。

２２８．医療処置後の対象の入院期間の短縮方法であって、その医療処置の臨床的に有意義なタイムウィンドウ内で、ＣＤ３４＋濃縮型増殖臍帯血試料（Ｅｘｐ−ＣＢＳＣ）を治療有効量、その対象に投与することによって、医療処置後のその対象の入院期間を短縮することを含む方法。

２２９．そのＥｘｐ−ＣＢＳＣを免疫学的な適合判定なしに、その対象に投与する、実施形態２２８に記載の方法。

２３０．そのＥｘｐ−ＣＢＳＣが、事前に凍結保存したものである、実施形態２２８または２２９に記載の方法。

２３１．そのＥｘｐ−ＣＢＳＣが、Ｔ細胞を含まない、実施形態２２８〜２３０のいずれかに記載の方法。

２３２．その医療処置が、移植を含む、実施形態２２８〜２３１のいずれかに記載の方法。

２３３．その移植が、固形組織移植を含む、実施形態２３２に記載の方法。

２３４．その固形組織移植が、脂肪組織、血管、骨、骨髄、心臓細胞、軟骨、軟骨（ｃａｒｔｉｌａｇｉｎｏｕｓ）細胞、軟骨（ｃｈｏｎｄｒａｌ）細胞、蝸牛、結合組織、角膜、培養細胞単層、歯の組織、目、顔、筋膜、線維組織、足、機能的脊椎単位、髪、手、心臓、心臓弁、腸、膵島細胞、腎臓、水晶体、靱帯、肝臓、肺、半月板、筋腱移植片、筋肉組織、神経細胞、神経組織、骨軟骨細胞、骨形成原細胞、卵巣、膵臓、半腱様筋組織、皮膚、脾臓、胃、腱、精巣、歯または椎間板を含む、実施形態２３３に記載の方法。

２３５．その移植が、造血細胞移植を含む、実施形態２３２のいずれかに記載の方法。

２３６．その移植が、同種異系移植を含む、実施形態２３２〜２３５のいずれかに記載の方法。

２３７．その移植が、同種異系臍帯血移植を含む、実施形態２２８〜２３１のいずれかに記載の方法。

２３８．その対象が、小児の対象である、実施形態２２８〜２３７のいずれかに記載の方法。

２３９．その移植の前に、臨床的に有意義なタイムウィンドウが存在する、実施形態２２８〜２３８のいずれかに記載の方法。

２４０．その臨床的に有意義なタイムウィンドウが、その移植を受ける３６時間以内である、実施形態２２８〜２３９のいずれかに記載の方法。

２４１．その臨床的に有意義なタイムウィンドウが、その移植を受ける１２時間以内である、実施形態２２８〜２３９のいずれかに記載の方法。

２４２．そのＥｘｐ−ＣＢＳＣが、少なくとも７５００万個のＣＤ３４＋細胞を含む、実施形態２２８〜２４１のいずれかに記載の方法。

２４３．その治療有効量が、対象の１キログラム当たりに１００万個〜２０００万個のＣＤ３４＋細胞を含む、実施形態２２８〜２４２のいずれかに記載の方法。

２４４．粘膜炎を軽減する必要のある対象の粘膜炎を軽減する目的で、適合不明のＣＤ３４＋濃縮型増殖臍帯血試料（Ｅｘｐ−ＣＢＳＣ）を使用すること。

２４５．その使用に、臨床的に有意義なタイムウィンドウ内で、粘膜炎を軽減する必要のある対象に、治療有効量を投与することが含まれる、実施形態２４４に記載の使用。

２４６．そのＥｘｐ−ＣＢＳＣが、事前に凍結保存したものである、実施形態２４４または２４５に記載の使用。

２４７．そのＥｘｐ−ＣＢＳＣが、Ｔ細胞を含まない、実施形態２４４〜２４６のいずれかに記載の使用。

２４８．その対象が、移植処置のために、粘膜炎を軽減する必要のある、実施形態２４４〜２４７のいずれかに記載の使用。

２４９．その移植処置が、固形組織移植を含む、実施形態２４８に記載の使用。

２５０．その固形組織移植が、脂肪組織、血管、骨、骨髄、心臓細胞、軟骨、軟骨（ｃａｒｔｉｌａｇｉｎｏｕｓ）細胞、軟骨（ｃｈｏｎｄｒａｌ）細胞、蝸牛、結合組織、角膜、培養細胞単層、歯の組織、目、顔、筋膜、線維組織、足、機能的脊椎単位、髪、手、心臓、心臓弁、腸、膵島細胞、腎臓、水晶体、靱帯、肝臓、肺、半月板、筋腱移植片、筋肉組織、神経細胞、神経組織、骨軟骨細胞、骨形成原細胞、卵巣、膵臓、半腱様筋組織、皮膚、脾臓、胃、腱、精巣、歯または椎間板を含む、実施形態２４９に記載の使用。

２５１．その移植処置が、造血細胞移植を含む、実施形態２４８に記載の使用。

２５２．その移植処置が、同種異系移植を含む、実施形態２４８〜２５１のいずれかに記載の使用。

２５３．その移植処置が、同種異系臍帯血移植を含む、実施形態２４８に記載の使用。

２５４．その対象が、小児の対象である、実施形態２４４〜２５３のいずれかに記載の使用。

２５５．その医療処置の前に、臨床的に有意義なタイムウィンドウが存在する、実施形態２４５〜２５４のいずれかに記載の使用。

２５６．臨床的に有意義なタイムウィンドウが、その医療処置の３６時間以内である、実施形態２４５〜２５５のいずれかに記載の使用。

２５７．その臨床的に有意義なタイムウィンドウが、その医療処置の１２時間以内である、実施形態２４５〜２５５のいずれかに記載の使用。

２５８．そのＥｘｐ−ＣＢＳＣが、少なくとも７５００万個のＣＤ３４＋細胞を含む、実施形態２４４〜２５７のいずれかに記載の使用。

２５９．そのＥｘｐ−ＣＢＳＣが、出産時の１人のヒトの臍帯血及び／または胎盤血に由来する、実施形態２４４〜２５８のいずれかに記載の使用。

２６０．そのＥｘｐ−ＣＢＳＣが、２つ以上の異なる増殖ヒト臍帯血幹細胞試料の入ったプールを含み、そのプール中のそれぞれの異なる試料が、出産時における異なるヒトの臍帯血及び／または胎盤血に由来する、実施形態２４４〜２５８のいずれかに記載の使用。

２６１．その治療有効量が、対象の１キログラム当たりに１００万個〜２０００万個のＣＤ３４＋細胞を含む、実施形態２４５〜２６０のいずれかに記載の使用。

２６２．同種異系移植を受けることに基づき、粘膜炎を発症するリスクのある小児患者を特定することと、
その同種異系移植の臨床的に有意義なタイムウィンドウ内で、適合不明のＣＤ３４＋濃縮型増殖臍帯血試料（Ｅｘｐ−ＣＢＳＣ）を投与することと、
を含み、
それによって、リスクのある小児患者において、粘膜炎を軽減する方法。

２６３．（ｉ）その同種異系移植片と対象が、免疫学的に適合しており、（ｉｉ）そのＥｘｐ−ＣＢＳＣを免疫学的な適合判定なしに、その対象に投与する、実施形態２６２に記載の方法。

２６４．そのＥｘｐ−ＣＢＳＣが、事前に凍結保存したものである、実施形態２６２または２６３に記載の方法。

２６５．そのＥｘｐ−ＣＢＳＣが、Ｔ細胞を含まない、実施形態２６２〜２６４のいずれかに記載の方法。

２６６．その同種異系移植が、固形組織移植を含む、実施形態２６２〜２６５のいずれかに記載の方法。

２６７．その固形組織移植が、脂肪組織、血管、骨、骨髄、心臓細胞、軟骨、軟骨（ｃａｒｔｉｌａｇｉｎｏｕｓ）細胞、軟骨（ｃｈｏｎｄｒａｌ）細胞、蝸牛、結合組織、角膜、培養細胞単層、歯の組織、目、顔、筋膜、線維組織、足、機能的脊椎単位、髪、手、心臓、心臓弁、腸、膵島細胞、腎臓、水晶体、靱帯、肝臓、肺、半月板、筋腱移植片、筋肉組織、神経細胞、神経組織、骨軟骨細胞、骨形成原細胞、卵巣、膵臓、半腱様筋組織、皮膚、脾臓、胃、腱、精巣、歯または椎間板を含む、実施形態２６６に記載の方法。

２６８．その同種異系移植が、造血細胞移植を含む、実施形態２６２〜２６５のいずれかに記載の方法。

２６９．その同種異系移植が、臍帯血移植処置を含む、実施形態２６２〜２６５のいずれかに記載の方法。

２７０．その移植の前に、臨床的に有意義なタイムウィンドウが存在する、実施形態２６２〜２６９のいずれかに記載の方法。

２７１．臨床的に有意義なタイムウィンドウが、その移植を受ける３６時間以内である、実施形態２６２〜２７０のいずれかに記載の方法。

２７２．臨床的に有意義なタイムウィンドウが、その移植を受ける１２時間以内である、実施形態２６２〜２７０のいずれかに記載の方法。

２７３．そのＥｘｐ−ＣＢＳＣが、少なくとも７５００万個のＣＤ３４＋細胞を含む、実施形態２６２〜２７２のいずれかに記載の方法。

２７４．その治療有効量が、対象の１キログラム当たりに１００万個〜２０００万個のＣＤ３４＋細胞を含む、実施形態２６２〜２７３のいずれかに記載の方法。

２７５．医療処置後の対象の粘膜炎の軽減方法であって、その医療処置の臨床的に有意義なタイムウィンドウ内で、ＣＤ３４＋濃縮型増殖臍帯血試料（Ｅｘｐ−ＣＢＳＣ）を治療有効量、その対象に投与することによって、医療処置後のその対象の粘膜炎を軽減することを含む方法。

２７６．そのＥｘｐ−ＣＢＳＣを免疫学的な適合判定なしに、その対象に投与する、実施形態２７５に記載の方法。

２７７．そのＥｘｐ−ＣＢＳＣが、事前に凍結保存したものである、実施形態２７５または２７６に記載の方法。

２７８．そのＥｘｐ−ＣＢＳＣが、Ｔ細胞を含まない、実施形態２７５〜２７７のいずれかに記載の方法。

２７９．その医療処置が、移植を含む、実施形態２７５〜２７８のいずれかに記載の方法。

２８０．その移植が、固形組織移植を含む、実施形態２７９に記載の方法。

２８１．その固形組織移植が、脂肪組織、血管、骨、骨髄、心臓細胞、軟骨、軟骨（ｃａｒｔｉｌａｇｉｎｏｕｓ）細胞、軟骨（ｃｈｏｎｄｒａｌ）細胞、蝸牛、結合組織、角膜、培養細胞単層、歯の組織、目、顔、筋膜、線維組織、足、機能的脊椎単位、髪、手、心臓、心臓弁、腸、膵島細胞、腎臓、水晶体、靱帯、肝臓、肺、半月板、筋腱移植片、筋肉組織、神経細胞、神経組織、骨軟骨細胞、骨形成原細胞、卵巣、膵臓、半腱様筋組織、皮膚、脾臓、胃、腱、精巣、歯または椎間板を含む、実施形態２８０に記載の方法。

２８２．その移植が、造血細胞移植を含む、実施形態２７９のいずれかに記載の方法。

２８３．その移植が、同種異系移植を含む、実施形態２７９〜２８２のいずれかに記載の方法。

２８４．その移植が、同種異系臍帯血移植を含む、実施形態２７９のいずれかに記載の方法。

２８５．その対象が、小児の対象である、実施形態２７５〜２８４のいずれかに記載の方法。

２８６．その医療処置の前に、臨床的に有意義なタイムウィンドウが存在する、実施形態２７５〜２８５のいずれかに記載の方法。

２８７．臨床的に有意義なタイムウィンドウが、その移植を受ける３６時間以内である、実施形態２７５〜２８６のいずれかに記載の方法。

２８８．その臨床的に有意義なタイムウィンドウが、その移植を受ける１２時間以内である、実施形態２７５〜２８６のいずれかに記載の方法。

２８９．そのＥｘｐ−ＣＢＳＣが、少なくとも７５００万個のＣＤ３４＋細胞を含む、実施形態２７５〜２８８のいずれかに記載の方法。

２９０．その治療有効量が、対象の１キログラム当たりに１００万個〜２０００万個のＣＤ３４＋細胞を含む、実施形態２７５〜２８９のいずれかに記載の方法。

２９１．急性移植片対宿主病を軽減する必要のある対象において、急性移植片対宿主病を軽減する目的で、適合不明のＣＤ３４＋濃縮型増殖臍帯血試料（Ｅｘｐ−ＣＢＳＣ）を使用すること。

２９２．その使用に、臨床的に有意義なタイムウィンドウ内で、急性移植片対宿主病を軽減する必要のある対象に、治療有効量を投与することが含まれる、実施形態２９１に記載の使用。

２９３．そのＥｘｐ−ＣＢＳＣが、事前に凍結保存したものである、実施形態２９１または２９２に記載の使用。

２９４．そのＥｘｐ−ＣＢＳＣが、Ｔ細胞を含まない、実施形態２９１〜２９３のいずれかに記載の使用。

２９５．急性ＧＶＨＤの軽減に、ステージＩＩＩの急性ＧＶＨＤの軽減が含まれる、実施形態２９１〜２９４のいずれかに記載の使用。

２９６．急性ＧＶＨＤの軽減に、ステージＩＶの急性ＧＶＨＤの軽減が含まれる、実施形態２９１〜２９５のいずれかに記載の使用。

２９７．その対象が、同種異系造血細胞移植のために、急性移植片対宿主病を軽減する必要のある、実施形態２９１〜２９６のいずれかに記載の使用。

２９８．その同種異系造血細胞移植が、臍帯血移植を含む、実施形態２９７に記載の使用。

２９９．その臍帯血移植液と対象が、４／６、５／６または６／６のＨＬＡ抗原で適合している、実施形態２９８に記載の使用。

３００．その対象が、小児の対象である、実施形態２９１〜２９９のいずれかに記載の使用。

３０１．その医療処置の前に、臨床的に有意義なタイムウィンドウが存在する、実施形態２９２〜３００のいずれかに記載の使用。

３０２．その臨床的に有意義なタイムウィンドウが、その医療処置の３６時間以内である、実施形態２９２〜３０１のいずれかに記載の使用。

３０３．その臨床的に有意義なタイムウィンドウが、その医療処置の１２時間以内である、実施形態２９２〜３０１のいずれかに記載の使用。

３０４．そのＥｘｐ−ＣＢＳＣが、少なくとも７５００万個のＣＤ３４＋細胞を含む、実施形態２９１〜３０３のいずれかに記載の使用。

３０５．そのＥｘｐ−ＣＢＳＣが、出産時の１人のヒトの臍帯血及び／または胎盤血に由来する、実施形態２９１〜３０４のいずれかに記載の使用。

３０６．そのＥｘｐ−ＣＢＳＣが、２つ以上の異なる増殖ヒト臍帯血幹細胞試料の入ったプールを含み、そのプール中のそれぞれの異なる試料が、出産時における異なるヒトの臍帯血及び／または胎盤血に由来する、実施形態２９１〜３０４のいずれかに記載の使用。

３０７．その治療有効量が、対象の１キログラム当たりに１００万個〜２０００万個のＣＤ３４＋細胞を含む、実施形態２９２〜３０６のいずれかに記載の使用。

３０８．同種異系移植を受けることに基づき、急性移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）のリスクのある患者を特定することと、
その同種異系移植の臨床的に有意義なタイムウィンドウ内で、適合不明のＣＤ３４＋濃縮型増殖臍帯血試料（Ｅｘｐ−ＣＢＳＣ）を投与することと、
を含み、
それによって、リスクのあるその患者において、急性ＧＶＨＤを軽減する方法。

３０９．（ｉ）その同種異系移植片と対象が、免疫学的に適合しており、（ｉｉ）そのＥｘｐ−ＣＢＳＣを免疫学的な適合判定なしに、その対象に投与する、実施形態３０８に記載の方法。

３１０．そのＥｘｐ−ＣＢＳＣが、事前に凍結保存したものである、実施形態３０８または３０９に記載の方法。

３１１．そのＥｘｐ−ＣＢＳＣが、Ｔ細胞を含まない、実施形態３０８〜３１０のいずれかに記載の方法。

３１２．急性ＧＶＨＤの軽減に、ステージＩＩＩの急性ＧＶＨＤの軽減が含まれる、実施形態３０８〜３１１のいずれかに記載の方法。

３１３．急性ＧＶＨＤの軽減に、ステージＩＶの急性ＧＶＨＤの軽減が含まれる、実施形態３０８〜３１２のいずれかに記載の方法。

３１４．その対象が、同種異系造血細胞移植のために、急性ＧＶＨＤを軽減する必要のある、実施形態３０８〜３１３のいずれかに記載の方法。

３１５．その同種異系造血細胞移植が、臍帯血移植を含む、実施形態３１４に記載の方法。

３１６．その臍帯血移植液と対象が、４／６、５／６または６／６のＨＬＡ抗原で適合している、実施形態３１５に記載の方法。

３１７．その対象が、小児の対象である、実施形態３０８〜３１６のいずれかに記載の方法。

３１８．その医療処置の前に、臨床的に有意義なタイムウィンドウが存在する、実施形態３０８〜３１７のいずれかに記載の方法。

３１９．その臨床的に有意義なタイムウィンドウが、その医療処置の３６時間以内である、実施形態３０８〜３１８のいずれかに記載の方法。

３２０．その臨床的に有意義なタイムウィンドウが、その医療処置の１２時間以内である、実施形態３０８〜３１８のいずれかに記載の方法。

３２１．そのＥｘｐ−ＣＢＳＣが、少なくとも７５００万個のＣＤ３４＋細胞を含む、実施形態３０８〜３２０のいずれかに記載の方法。

３２２．そのＥｘｐ−ＣＢＳＣが、出産時の１人のヒトの臍帯血及び／または胎盤血に由来する、実施形態３０８〜３２１のいずれかに記載の方法。

３２３．そのＥｘｐ−ＣＢＳＣが、２つ以上の異なる増殖ヒト臍帯血幹細胞試料の入ったプールを含み、そのプール中のそれぞれの異なる試料が、出産時における異なるヒトの臍帯血及び／または胎盤血に由来する、実施形態３０８〜３２１のいずれかに記載の方法。

３２４．その治療有効量が、対象の１キログラム当たりに１００万個〜２０００万個のＣＤ３４＋細胞を含む、実施形態３０８〜３２３のいずれかに記載の方法。

実施例１．Ｎｏｔｃｈ増殖マウス造血幹細胞・前駆細胞を投与したＭＨＣ不適合レシピエントにおける移植片拒絶反応の軽減：主要組織適合遺伝子複合体が完全に不適合なレシピエントに、体外増殖マウス造血幹細胞・前駆細胞（ＨＳＰＣ）を注入すると、ドナー由来であるが、サードパーティーのものではない皮膚移植片の寿命が改善される。この知見から、マウスｈ−ＡＲＳモデルにおいて、体外で増殖させた不適合ＨＳＰＣにより、ドナー特異的免疫寛容が生じることが示される。

同種異系造血幹細胞移植（ＨＣＴ）は、固形臓器移植レシピエントにおいて、ドナー特異的免疫寛容を促し、その後、急性及び慢性移植片拒絶反応のリスクを低下させる（Ｍｉｌｌａｎ ｅｔ ａｌ．，２００２，Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ；７３：１３８６−１３９１、Ｓｃａｎｄｌｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，２００８，Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ３５８：３６２−３６８、Ｇｒａｎａｄｏｓ ｅｔ ａｌ．，２０１５，Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｏｒｇａｎ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．２０：４９−５６）。腎臓移植レシピエントにおいて、骨髄非破壊的ＨＣＴの設定で、持続的な混合キメリズムと免疫抑制薬の完全な退薬とともに、同種異系移植片に対する免疫寛容がうまく生じることが観察されている（Ｋａｗａｉ ｅｔ ａｌ．，Ａｍ Ｊ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ ２０１４，１４：１５９９−１６１１、Ｓｃａｎｄｌｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ａｍ Ｊ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ ２０１５，１５：６９５−７０４、Ｓｏｒｏｆ ｅｔ ａｌ．，Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ １９９５，５９：１６３３−１６３５）。興味深いことに、腎臓同種異系移植片に対する寛容は、ヒト以外の霊長類動物とヒトにおいて、キメリズムが一過性でも誘導されている（Ｓｏｒｏｆ ｅｔ ａｌ．，Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ １９９５，５９：１６３３−１６３５、Ｋａｗａｉ ａｎｄ Ｓａｃｈｓ，Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｏｒｇａｎ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ ２０１３，１８：４０２−４０７）。この現象は、非成熟樹状細胞またはＴ細胞のようなドナー造血細胞の一過性の増殖によるものであったが、この一過性の増殖により、ドナー反応性レシピエントＴ細胞が胸腺で除去されたり、ドナー特異的制御性Ｔ細胞が誘導されたりすることがあるという仮説をＫａｗａｉは立てた。

この実施例では、致死量の放射線照射後、ＭＨＣが不適合の凍結保存体外増殖マウスＨＳＰＣ（Ｌｉｎ−Ｓｃａ１＋ｃＫｉｔ＋［ＬＳＫ］細胞）生成物を注入すると、ドナー特異的免疫寛容が誘導され、その結果、ドナー皮膚同種異系移植片の寿命が延長されることが報告されている。これらのデータにより、この臨床的に有意義な万能ドナーの凍結保存オフザシェルフ細胞生成物が、臓器移植レシピエントにおいて、ドナー特異的寛容を誘導して、移植拒絶反応を軽減し得ることが更に裏付けられる。

方法：マウス：雌または雄のＢ６−Ｌｙ５ａ（Ｈ−２ｂ、ＣＤ４５．１＋）マウスを交配させ、Ｆｒｅｄ Ｈｕｔｃｈｉｎｓｏｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ（ＦＨＣＲＣ）のＡｎｉｍａｌ Ｈｅａｌｔｈ Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓの総合施設において、特定病原体未感染の状態で維持した。雌のＢＡＬＢ／ｃＪ（Ｈ−２ｄ、ＣＤ４５．２＋）及びＣ３Ｈ（Ｈ−２ｋ、ＣＤ４５．２＋）マウスをＪａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（メイン州バーハーバー）から購入した。マウスは、標準的な条件下で維持し、すべての実験は、ＦＨＣＲＣ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ（ＩＡＣＵＣ）の承認と指導の下で行った。

マウス造血幹細胞・前駆細胞の単離と増殖：以前に説明されたように（Ｖａｒｎｕｍ−Ｆｉｎｎｅｙ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １９９８，９１：４０８４−４０９１）、蛍光活性化セルソーター（ＦＡＣＳ）Ａｒｉａ（ニュージャージー州フランクリンレイクスのＢｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ［ＢＤ］）を用いることによって、Ｂ６−Ｌｙ５ａマウスＢＭ由来のＬＳＫ細胞を濃縮した。それぞれのソーティング後、ソーティングした集団の純度を確認したところ、９０％を超えていた。６ウェルの非組織培養処理プレートに、操作したＮｏｔｃｈリガンド（Ｄｅｌｔａ１ｅｘｔ−ＩｇＧ、ＤＸＩ）またはヒトＩｇＧを５ｍｇ／ｍｌの濃度で２時間、３７℃でコーティングしてから、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で洗浄し、２％ウシ血清アルブミンを含むＰＢＳで少なくとも３０分ブロックした。ソーティングしたＬＳＫ細胞を、ＤＸＩまたはＩｇＧの存在下で、２０％ウシ胎仔血清（Ｈｙｃｌｏｎｅ ＦＢＳ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）、１％ペニシリン−ストレプトマイシン、ならびにマウス幹細胞因子、ヒトＦｌｔ−３リガンド、ヒトＩＬ−６（それぞれ１００ｎｇ／ｍｌ）及びヒトＩＬ−１１（１０ｎｇ／ｍｌ、すべてのサイトカインは、ニュージャージー州ロッキーヒルのＰｅｐｒｏＴｅｃｈから購入した）というサイトカインを添加したイスコブ改変ダルベッコ培地（マサチューセッツ州ウォルサムのＴｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）において培養した（Ｖａｒｎｕｍ−Ｆｉｎｎｅｙ ｅｔ ａｌ．，２００３，１０１：１７８４−１７８９）。１４日間の培養中、細胞密度を１×１０^６細胞／ｍｌに維持した。１４日間の最後に、増殖したＬＳＫ細胞を回収し、新鮮な細胞を移植実験に用いたか、または９０％ＦＢＳ＋１０％ジメチルスルホキシドにおいて凍結保存した。移植日に、トリパンブルー色素排除を用いることによって、解凍後の細胞の回収を行い、フローサイトメトリーを用いることによって、ＬＳＫ表現型の維持を割り出した。

放射線照射、造血幹細胞移植及びドナーキメリズムの追跡：セシウム源（カリフォルニア州サンフランシスコのＪＬ Ｓｈｅｐｈｅｒｄ ＆ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ）を用いて、８１．４ｃＧｙ／分の線量率で、６〜８週齢の雌のＢＡＬＢ／ｃＪマウスに、６．５〜８．５Ｇｙのγ線照射を１回行った。４〜７２時間後、マウスに、ＩｇＧまたはＤＸＩで増殖した新鮮なまたは凍結保存したＬＳＫ細胞（示されているように、１×１０^６細胞、３×１０^６細胞、５×１０^６細胞及び１５×１０^６細胞）を静脈内注射した。性別の影響を取り除き、交絡変数を除去し、実験規模を縮小するために、雌のマウスのみをレシピエントとして使用した。ＩｇＧ増殖細胞により、ドナー細胞が再構築されなかったことを確認したら、その後の実験において、コントロールマウスに生理食塩水を注射した。マウスを毎日観察し、ＩＡＣＵＣから認可されたプロトコールによって定められた特定の基準を満たす瀕死のマウスを安楽死させ、放射線誘発毒性による実験死として文書に記録した。別のコホートのマウスの末梢血（ＰＢ）とＢＭにおいて、放射線照射後のフローサイトメトリーによって、ドナーのキメリズム（ＣＤ４５．１＋細胞の割合（％））とリンパ−骨髄系の分布を文書で記録した。

フローサイトメトリー：以前に説明されたように（Ｖａｒｎｕｍ−Ｆｉｎｎｅｙ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １９９８，９１：４０８４−４０９１）、ＦＡＣＳを用いることによって、Ｌｙ５ａマウスのＢＭ由来のＬＳＫ細胞を濃縮した。簡潔に述べると、Ｂ６−Ｌｙ５ａマウスのＢＭ細胞を、自家作製の系列（ＬＩＮ）カクテルとともにインキュベートした。このＬＩＮカクテルには、ＣＤ２に対する抗体（クローンＲＭ２−５）、ＣＤ３に対する抗体（クローン１７Ａ２）、ＣＤ５に対する抗体（クローン５３−７．３）、ＣＤ８ａに対する抗体（クローン５３−６．７）、ＣＤ１１ｂに対する抗体（クローンＭ１／７０）、ＧＲ１に対する抗体（クローンＲＢ６−８）、Ｂ２２０に対する抗体（クローンＲＡ３−６Ｂ２）及びＴＥＲ−１１９に対する抗体（クローンＴＥＲ−１１９）が含まれていた。すべての抗体は、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ製であり、ラットにおいて産生させた。ＬＩＮカクテルとともに１０分インキュベートした後、その試料を洗浄し、ヒツジ抗ラットＩｇＧビーズ（Ｄｙｎａｂｅａｄｓ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を加えた。ＤｙｎａＭａｇ ｍａｇｎｅｔｓ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いて、ＬＩＮ陽性細胞を分離した。ＬＩＮ陰性細胞をＳｃａ１−ＰＥ（クローンＥ１３−１６１．７）とｃ−ｋｉｔフルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）（クローン２Ｂ８）で染色し、ＦＡＣＳ ＡＲＩＡ ＩＩセルソーターを用いて、ＬＳＫ細胞を単離した。

眼窩後部採血法を用いることによって、血液試料を採取し、ＢＭ細胞を全身麻酔下で右または左大腿骨から吸引した。赤血球溶解後、ＰＢ及びＢＭ細胞をブロッキング試薬（２％ＦＢＳ、抗ＣＤ１６／ＣＤ３２抗体（２．４Ｇ２）を含むＰＢＳ）とともにインキュベートし、ＣＤ４５．１−ＰＥ−Ｃｙ７（クローンＡ２０）、ＣＤ４５．２−アロフィコシアニン（ＡＰＣ）−Ｃｙ７（クローン１０４）、ＣＤ３−ＦＩＴＣ（クローン１７Ａ２）、Ｇｒ１−ＡＰＣ（クローンＲＢ６−８Ｃ５）、Ｂ２２０−ＡＰＣ（クローンＲＡ３−６Ｂ２）という抗マウス特異的抗体（断りのない限り、すべてＢＤ製）で染色した。ＬＳＲＩＩ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いることによって、フローサイトメトリー解析を行った。ＦｌｏｗＪｏというソフトウェア（バージョン９．０）（カリフォルニア州のＴｒｅｅＳｔａｒ）を用いることによって、すべてのフローサイトメトリーデータを解析した。

皮膚移植手順：４０日超生存したマウスのサブセットにおいて、それらのマウスの両側に同種異系移植と同系皮膚移植を行うことによって、ドナー特異的寛容を評価した。両側の同種異系移植と同系皮膚移植は、２つの群のＢＡＬＢ／ｃＪマウスで行った。第１の群には、ＢＡＬＢ／ｃＪ皮膚移植を左側に行い、Ｂ６−Ｌｙ５ａまたはＣ３Ｈ（Ｈ−２ｋ、ＣＤ４５．２）のいずれかの皮膚移植を右側に行った。第２の群のＢＡＬＢ／ｃＪマウスには、Ｂ６−Ｌｙ５ａ皮膚移植を左側に行い、Ｃ３Ｈ皮膚移植を右側に行った。移植法は、以前に報告された方法（ＭｃＦａｒｌａｎｄ ａｎｄ Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ，Ｃｕｒｒ Ｐｒｏｔｏｃ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２００９，Ｃｈａｐｔｅｒ ４：Ｕｎｉｔ ４．４）から適合させた。簡潔に述べると、ドナーのＢＡＬＢ／ｃＪ、Ｂ６−Ｌｙ５ａ及びＣ３Ｈマウスを安楽死させ、腹部と体幹側部の皮膚を採取し、切断して小さい正方形にし、冷ＰＢＳ中に保管した。コントロール（ＢＡＬＢ／ｃＪバルクＢＭ細胞で再構築したもの）とキメラＢＡＬＢ／ｃＪマウスにイソフルレンで麻酔をかけ、両側の胸部背側側部に７〜１０ｍｍの移植床を作り、皮膚移植片を配置し、インサイチュで適切なサイズにトリミングし、断続縫合（５．０ワックスコーティングブレイド絹糸）で隅を固定した。移植片を非粘着性ガーゼパッド、紙テープ及びベトラップで被覆した。７日後、被覆材と縫合糸を除去し、その後、移植片を毎日スコア化した。拒絶反応の日は、移植片の＞８０％が壊死するか、痂皮化するかまたは移植床から剥離することとして定義した。

統計解析：すべての統計解析は、Ｐｒｉｓｍ ｖＶｅｒｓｉｏｎ ６．０ｆというソフトウェア（カリフォルニア州サンディエゴのＧｒａｐｈＰａｄ）を用いることによって行ったとともに、＜０．０５のｐ値が、統計的に有意な差を表すものとみなした。実験の結果は、平均±ＳＥＭとして表されている。正着データは、標準化スチューデントｔ検定を用いることによって解析したとともに、全生存率と移植片寿命は、カプラン−マイヤー生存曲線解析を用いることによって解析した。ロジスティック回帰を用いて、暴露集団の５０％を３０日以内に死亡させると予測される放射線量と、暴露集団の７０％を３０日以内に死亡させると予測される放射線量（ＬＤ７０／３０）を算出した。皮膚移植片の寿命データは、生存関数の同等性に関する層化ウィルコクソン（ブレスロー）検定を用いることによって解析した。

致死量の放射線照射後に、不適合な増殖マウス前駆細胞を注入すると、骨髄が速やかに回復する：フィブロネクチン断片と固定化Ｎｏｔｃｈリガンドを含む培養液中で増殖させたマウス及びヒトＨＳＰＣが、同系及び異種レシピエント細胞を効率的に再増殖させることが以前に示されている（Ｖａｒｎｕｍ−Ｆｉｎｎｅｙ ｅｔ ａｌ．，２００３，１０１：１７８４−１７８９、Ｄｅｌａｎｅｙ Ｃ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ ２００５，１０６：２６９３−２６９９）。この研究では、増殖マウスＨＳＰＣを、致死量の放射線照射後にＭＨＣ不適合レシピエントに注入したときに、同様に、速やかに造血を再構築できるか試験した。この実現のために、致死量放射線照射（８．５Ｇｙ）を行った６〜８週齢の雌のＢＡＬＢ／ｃＪ（Ｈ−２ｄ、ＣＤ４５．２）マウスに、ＩｇＧまたはＤｅｌｔａ１ｅｘｔ−ＩｇＧで１４日間増殖した新鮮な１×１０^６個のＢ６−Ｌｙ５ａ（Ｈ−２ｂ、ＣＤ４５．１）ＬＳＫ細胞を注射した（図６Ａ）。予想されたように、１４日の培養期間の最後に、Ｄｅｌｔａ１ｅｘｔ−ＩｇＧで培養した細胞の７６％が、Ｓｃａ−１＋ｃ−Ｋｉｔ＋であった（図６Ｂ、左下のパネル）とともに、顆粒球関連（ＧＲ−１及びＣＤ１１ｂ）抗原を発現した細胞はわずかであった（図６Ｂ、右下のパネル）。これに対して、コントロールのＩｇＧで培養した細胞には、Ｓｃａ−１＋ｃ−Ｋｉｔ＋のものはわずかであったとともに、大半は、ＧＲ−１＋及びＣＤ１１ｂ＋顆粒球であったことから、分化が示された（図６Ｂ、左上及び右上のパネル）。

新鮮なＤＸＩ培養細胞の注入から７日後には、ＭＨＣ不適合マウスのＰＢ及びＢＭの両方において、高レベルの正着が観察された（図６Ｃ）。これらのマウスでは、ドナー細胞が８週間にわたって減少し続け、その結果、移植から６０日後までに、ＰＢ中のドナー細胞のレベルは低くなった（４．５％±０．６％）。これに対して、コントロールのＩｇＧ培養細胞を注入したマウスでは、７日目のドナー正着率は低く（２４％±４％）、ＢＭでしか検出されなかった。この群では、１４日目には、ドナー細胞の正着は検出されなかった（図６Ｃ）。ＤＸＩ培養細胞の場合、早期におけるドナー由来の造血再構築は、主に骨髄であった（データは示されていない）が、移植の２カ月後においては、ドナー由来の造血は、主にＴリンパ球細胞（体外増殖した短期再構築細胞の子孫）であった（図６Ｃ、挿入図）。

ＤＸＩで培養した不適合細胞を注入すると、ドナー特異的寛容が誘導され、皮膚移植片の寿命が改善される（すなわち、移植拒絶反応が軽減される）：ＤＸＩ培養細胞とともに移植を行ったマウスのＰＢ中のドナーＴ細胞の低レベル状態が長期間続き、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）のエビデンスが見られなかったことから、すべてのＭＨＣのバリアを越えたドナー特異的移植寛容の存在が示唆された。これらのマウスで、ドナー特異的寛容が生じたか検討するために、コントロールの同系ＢＭまたはＤＸＩ培養細胞を移植した６０日後に、同系（ＢＡＬＢ／ｃＪ、Ｈ−２ｄ）皮膚移植片、ドナー（Ｂ６−Ｌｙ５ａ、Ｈ−２ｂ）皮膚移植片またはサードパーティー（Ｃ３Ｈ、Ｈ−２ｋ）皮膚移植片を外科的に移植することによって、マウスを感作した。いずれのマウスにも、腹部の両側に１枚ずつ、２枚の皮膚移植片を移植し、それぞれの腹部の移植片源は、同系／ドナー、同系／サードパーティーまたはドナー／サードパーティーであった（図７Ａ）。技術的な問題により、コントロール群では６枚、ＤＸＩ群では４枚の移植片が機能不全となった。同系ＢＭ（図７Ｂ、７Ｅ）またはＤＸＩで培養した同種異系細胞（図７Ｃ、７Ｅ）を事前に移植したマウスでは、同系皮膚移植片に対する拒絶反応は見られなかったが、すべてのマウスにおいて、移植片移植から最初の１３日以内に、すべてのサードパーティー皮膚移植片に対して拒絶反応が見られ、収縮性瘢痕組織が残った（図７Ｂ、７Ｃ、７Ｇ）。

これに対して、ドナー移植片の３０日生存率は、ＤＸＩ群において有意に向上し、３０日目までには、皮膚移植片の４８％（２１枚中１０枚）が健常に見え、拒絶反応の兆候（痂皮及び瘢痕）が見られなかった（図７Ｃ、７Ｆ、ｐ≦０．００１）。さらに、これらの移植片の１４％で、完全な正着が見られた（手術部位で白い地色に黒い毛が生えたことをエビデンスとした）（図７Ｄ）。これらのマウスにおける移植片寿命の延長は、免疫不全によるものではなかった。これらのマウスでは、すべてのサードパーティー皮膚移植片に対して拒絶反応が見られたからである（図７Ｃ、７Ｇ）。極めて対照的なことに、同系ＢＭ細胞を移植したマウスでは、すべてのドナー移植片に対して拒絶反応が見られた（図７Ｂ、７Ｆ）。興味深いことに、皮膚移植時のＰＢにおける持続的なドナー正着レベルは、移植片寿命と相関しなかった。理論に拘束されるものではないが、これらの結果から、皮膚移植片の寿命の向上が、ＤＸＩで培養した凍結保存同種異系細胞の注入によるドナー特異的免疫寛容の誘導に起因するという見方が裏付けられている。ＴＢＩから最初の３０日を越えて生き延びたマウスでは、実験中（９０日間）、いずれかの長期的な放射線被ばく合併症を発症したマウスはいなかった。

この実施例により、ＭＨＣ不適合マウスレシピエントにおいて、広範な致死量ＴＢＩ線量の照射後に、凍結保存した体外ＤＸＩ増殖マウスＨＳＰＣで処置したところ、その増殖細胞とレシピエントとの間に重大な不適合があるにもかかわらず、増殖細胞生成物の注入から７日目までに、ドナー由来骨髄細胞が速やかに回復したことが示されている。この実施例により、完全不適合マウスにおいて、ＢＭ及びＰＢにおける混合ドナーキメリズムの持続が、主要Ｈ２組織適合性のバリアを越えて、ＧＶＨＤのいずれのエビデンスもなしに可能になることが示されている。重要なことに、この調査では、移植後の免疫抑制または抗宿主抗体療法を使用しなかった（過去の研究では、これらの療法が必要であることが明らかになった）（Ｃｏｂｂｏｌｄ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ １９８６，３２３：１６４−１６６、Ｙａｍａｄａ ｅｔ ａｌ．，Ａｍ Ｊ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ ２０１５，１５：３０５５−３０６６、ｄｅ Ｖｒｉｅｓ−ｖａｎ ｄｅｒ Ｚｗａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｏｎｅ Ｍａｒｒｏｗ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ １９９８，２２：９１−９８）。

致死量放射線照射マウスにおいて、ドナー由来細胞の正着は、７日目にピークに達し、骨髄細胞が占めていた。その後、ドナー細胞の正着レベルは低下し、６０日目までには、ドナーの正着は、低レベルで安定化し、ほぼすべて、主にＣＤ３＋のＴリンパ球に由来しており、ＧＶＨＤのいずれのエビデンスもなかった。ＭＨＣ不適合細胞を移植したこれらのマウスにおけるＴリンパ球ドナーキメリズムは、ＭＨＣ適合ＤＸＩ増殖細胞を移植したマウスにおいて以前報告されたもの（Ｖａｒｎｕｍ−Ｆｉｎｎｅｙ ｅｔ ａｌ．，２００３，１０１：１７８４−１７８９）と同様であり、それらの細胞は、体外で生成した短期リンパ球骨髄再構築細胞の子孫である。Ｎｏｔｃｈシグナリングは、増殖再構築細胞から生成される子孫Ｔ細胞の発生に対して影響を及ぼさないものと見られる。ＮｏｔｃｈリガンドＤｅｌｔａ１を用いて、増殖を誘導した一方で、ＬＳＫの分化を阻害したからである。理論に拘束されるものではないが、すべてのＭＨＣのバリアを越えた免疫寛容の誘導は、ＤＸＩ増殖細胞を移植したマウスにおいて、有意に高い皮膚移植片生存率によって示された。他の研究者によって以前報告されたように（Ｓｏｒｏｆ ｅｔ ａｌ．，Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ １９９５，５９：１６３３−１６３５、Ｉｌｄｓｔａｄ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ １９８５，１６２：２３１−２４４）、キメリズムのレベルと移植片寿命の間には、いずれの相関関係も観察されなかった。低レベルのＴ細胞キメリズム（３．４％±５％、０．２％〜１１．２％の範囲）は、皮膚移植片に対するドナー特異的免疫寛容を起こすのに十分であった。しかしながら、移植片生存率は、８．０ＧｙのＴＢＩに暴露したマウスの方が、７．５ＧｙのＴＢＩに暴露したマウスよりも高かった（４０％）とともに、３０日目に、１０枚のうち１枚の皮膚移植片のみに対して、拒絶反応が見られなかった。この調査では、これらのマウスが、サードパーティー（Ｃ３Ｈ）抗原に対して応答したとともに、サードパーティー皮膚移植片に対して拒絶反応を速やかに示したことを示すことによって、これらのマウスにおける皮膚同種異系移植片寿命の延長は、具体的には、特異的ドナー抗原に対するレシピエントの応答性の欠如によるものであったことが示された。

今回の実施例は、凍結保存した体外増殖同種異系の不適合ＨＬＡ−ＨＳＰＣで処置したレシピエントにおけるドナー特異的寛容の誘導を示すための第１の実施例である。

実施例２：オピオイドの使用、ＴＰＮの補給、医療処置後の入院日数：体外増殖臍帯血前駆細胞の注入は、骨髄破壊的臍帯血移植を受ける小児患者における入院日数の短縮と、アヘン剤注入の使用軽減と、完全静脈栄養の低減と関連付けられている。

方法：この実施例には、骨髄破壊的前処置（ＦＬＵ／ＣＹ／１３．２ＧｙのＴＢＩ）を受ける小児患者（２１歳未満、ｎ＝３４）であって、増殖ＣＢ ＨＳＰＣ（新鮮なものまたは凍結保存したもの）を投与したかまたは投与しなかった小児を含めた。各患者において、初期入院期間中、アヘン鎮痛剤の（持続注入またはＰＣＡによる）使用と、ＴＰＮの使用を確かめた。両側独立ｔ検定によって、群間の統計的比較を行った。

結果：１１人の患者に、１〜２個の未操作ＣＢユニットに加えて、増殖ＣＢ ＨＳＰＣを投与し、同時コホートの２３人の患者には、増殖細胞を注入せずに、同じ前処置レジメンを行った。医療処置後の初期入院の平均期間は、４３．２日と５５．６日（ｐ＝０．０５）（図８）、アヘン剤の持続投与の平均期間は、９．７日と１８．１日（ｐ＝０．０７）、ＴＰＮ補給平均期間は、２０．７日と３０．１日（ｐ＝０．０６）（図９）であった。

この実施例によって、Ｅｘｐ−ＣＢＳＣの重要なさらなる利点が示されている。非経口栄養補給総量の軽減により、このような人工栄養に起因し得る多くの合併症が回避される。オピオイドの使用に対する患者の暴露の低減は、現在蔓延している鎮痛薬乱用に対処する助けとなることができる。最終的には、医療処置後の入院の低減により、診療に関わるコストが削減されるとともに、同様に、患者が入院中に負担する機会損失コストが削減される。

実施例３：急性ＧＶＨＤの軽減：１ユニットまたは２ユニットのＣＢＴを行った後に、事前に体外増殖と凍結保存を行ったＨＬＡ適合不明ＣＢ前駆細胞生成物を注入した患者において、安全性、実現可能性、予備的有効性を評価するための前向きオープンラベル単群試験を行った。

患者：適格患者は、６カ月以上、４５歳以下の高リスクの急性白血病、慢性骨髄性白血病または骨髄異形成症候群の患者であった。更なる組み入れ要件には、十分なパフォーマンスステータス、十分な器官機能、ＨＬＡクラスＩアリル（Ａ及びＢ）に関する中精度タイピングまたはＨＬＡクラスＩＩ ＤＲＢ１アリルに関する高精度タイピングによって４つ以上のＨＬＡ座が適合した１つまたは２つのＣＢユニットの利用可能性を含めた。総有核細胞数（ＴＮＣ）が≧２．５×１０^７個／ｋｇの６／６ユニット、ＴＮＣが≧４．０×１０^７個／ｋｇの５／６及び４／６ユニットについて、１ユニットＣＢＴを認めた。これらの閾値を満たさなかった場合には、２ユニットＣＢＴ（ｄＣＢＴ）を行い、各ユニットのＴＮＣは、≧１．５×１０^７個／ｋｇであることを要件とした。

体外増殖前駆細胞生成物：細胞の処理と製造：簡潔に述べると、ヒトＣＢ試料は、Ｐｕｇｅｔ Ｓｏｕｎｄ Ｂｌｏｏｄ Ｃｅｎｔｅｒ Ｃｏｒｄ Ｂｌｏｏｄ Ｂａｎｋによって、治験審査委員会の承認と、２１ＣＦＲ１２７１に従って定めたドナー適性を有する正常満期分娩者から得た。ＣＢユニットは、赤血球を除去し、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ ＣｌｉｎｉＭＡＣＳをメーカーの指示に従って用いて、ＣＤ３４＋細胞について臨床グレードの選択を行ったものであった。陰性画分は破棄した。

精製ＣＤ３４＋細胞によって培養を開始し、組織培養処理されていない７５〜２２５ｃｍ^２の組織培養用フラスコ（Ｎｕｎｃ、米国ピッツバーグ州のＴｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で１４〜１６日間培養した。培養容器は、臨床グレードのＮｏｔｃｈリガンド（Ｄｅｌｔａ１ｅｘｔ−ＩｇＧ、Ｆｒｅｄ ＨｕｔｃｈｉｎｓｏｎのＢｉｏｌｏｇｉｃｓ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ Ｆａｃｉｌｉｔｙで調製、ＤＭＦ ＢＢ−ＭＦ１２３６６）２．５μｇ／ｍｌ（ＮＯＤ／ＳＣＩＤ再構築細胞の作製に最適であることが以前示された密度）とともに、５ｎｇ／ｍｌのフィブロネクチン断片ＣＨ−２９６（日本、大津のＴａｋａｒａ Ｓｈｕｚｏ Ｃｏ．ＬＴＤ．）で２時間、３７°または一晩、４°で事前にコーティングし、ＰＢＳで洗浄した。細胞は、臨床グレードの組み換えヒトＩＬ−３（１０ｎｇ／ｍｌ）、ＩＬ−６、トロンボポエチン（ＴＰＯ）、Ｆｌｔ−３リガンド及び幹細胞因子（ＳＣＦ）（５０ｎｇ／ｍｌ）（ドイツ、フライブルクのＣｅｌｌＧｅｎｉｘ）を含む無血清培地（Ｓｔｅｍｓｐａｎ ＳＦＥＭ、カナダ、ブリティッシュコロンビア州バンクーバーのＳｔｅｍｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で培養した。細胞を新たな培養容器に分けて、培地１ミリリットル当たりに＜１×１０^６個の総細胞数という細胞密度を維持した。

培養の１４〜１６日目に、細胞の全体積を回収し、最終細胞数、ＣＤ３４及びＴＮＣ増殖率の算出、免疫表現型解析、細菌及び真菌の無菌性、ならびにエンドトキシンを含む最終リリース試験を行った。図１０Ａ及び１０Ｂには、増殖細胞性生成物の回収時におけるＣＤ３４＋細胞の平均増殖数（図１０Ａ）と、総有核細胞数の平均増殖数（図１０Ｂ）が示されている。続いて、その生成物を速度制御フリーザーで凍結保存した。

最終的な回収ＨＳＰＣ生成物：留意すべきことに、増殖移植液とともに注入された成熟Ｔ細胞はなかった。この生成物は、１つのＣＢユニットから単離したＣＤ３４＋ＨＳＰＣの培養後に作られた全子孫細胞から構成されていたからである。陰性画分に含まれるＴ細胞は、保持されておらず、Ｔ細胞は、１４日の培養期間では、産生または維持されない。Ｅｘｐ−ＣＢＳＣに由来する平均凍結前ＴＮＣは５．８×１０^７個／Ｋｇ（範囲は２．２×１０^７〜１０．９×１０^７）、平均凍結前ＣＤ３４＋細胞数は、０．２６×１０^６個／ｋｇ（範囲は３．１×１０^６〜１１．６×１０^６）であった。未操作移植液に由来する平均凍結前ＴＮＣは６．１×１０^７個／Ｋｇ（範囲は４．３×１０^７〜１７．１×１０^７）、平均凍結前ＣＤ３４＋細胞数は、０．２６×１０^６個／ｋｇ（範囲は０．０８×１０^６〜０．９８×１０^６）であった。Ｅｘｐ−ＣＢＳＣを投与された患者の未操作ユニットにおけるＴＮＣは、コントロール群における患者のＴＮＣよりも有意に高かった（図１１）。

統計解析：カプランとマイヤーの方法［ＭａｃＭｉｌｌａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ ２００９；１１３：２４１０−１５］を用いて、無病生存（ＤＦＳ）の確率を導き出した。累積発現率の推定を用いて、再発、非再発期死亡（ＮＲＭ）及び急性ＧＶＨＤの累積発現率を集約し、再発は、ＮＲＭの競合リスクとみなし、ＮＲＭは、再発の競合リスク、その他の各評価項目の無増悪死亡は、それぞれにおける競合リスクとみなした。

Ｅｘｐ−ＣＢＳＣを投与された患者群におけるＤＦＳ、ＮＲＭ、急性ＧＶＨＤを、ＥＰＣなしにＣＢＴを投与された５０人の患者の転帰と比較した。全員の患者には、同じ前処置レジメンとＧＶＨＤ予防策を行った。ファイン・グレー法を用いて、再発、ＮＲＭ及び急性ＧＶＨＤの発生率を比較した。

結果：生存患者の追跡期間中央値は、４．２年であった（範囲は２．９〜４．８年）。患者は、５〜４５歳（中央値は２１歳）、体重は２３〜８９ｋｇ（中央値は５９ｋｇ）であった。疾患には、ＡＭＬ（ｎ＝６）、ＡＬＬ（ｎ＝８）、ＭＤＳ（ｎ＝１）が含まれていた。移植時、６人の患者（４０％）に微小残存病変が残っていた（ＨＣＴの前に、慣例のベースラインとして、採取した骨髄穿刺液において、１０カラーマルチパラメーターフローサイトメトリーによって評価した疾患の存在として定義した）。４人（２７％）以外のすべての患者に２ＣＢユニットを投与して、所要の細胞量を実現させた。コントロール群と比較したところ、移植時の性別、年齢、体重、ＣＭＶセロステータス及び疾患の状態に関しては、差は見られなかった。

移植転帰：３年ＤＦＳの確率は、Ｅｘｐ−ＣＢＳＣのレシピエントでは８６％（９５％ＣＩ：５７〜９７）、コントロールでは、６７％であった（９５％ＣＩ：５２〜７８）（ｐ＝０．１６）（図１２Ａ）。図６Ｂには、Ｅｘｐ−ＣＢＳＣレシピエントにおけるＮＲＭの累積発現率をコントロールと比較したもの、図１２Ｃには、Ｅｘｐ−ＣＢＳＣレシピエントにおける再発の累積発現率をコントロールと比較したものが示されている。調査期間にわたって、ＮＲＭは観察されなかったが、２人の患者が、移植後５３日目と２１９目に再発し、その後、さらなる療法を行った後、死亡した。５３日目に再発した患者は、移植時に明らかな再発状態であった。

急性及び慢性ＧＶＨＤ：全員の患者が、３２日の期間中央値（１４〜８６日）で、グレードＩＩ以下の急性ＧＶＨＤと診断され、グレードＩＩＩ〜ＩＶのＧＶＨＤは観察されなかった。これに対して、コントロールでは、グレードＩＩＩ〜ＩＶのＧＶＨＤの累積発現率は２６％であった（ｐ＝０．００５）（図１３）。皮膚は、Ｅｘｐ−ＣＢＳＣを投与された群（ｎ＝１２）において、最も広く影響を受けた器官であった。８人（５３％）の患者に、６日の期間中央値（範囲は４〜９日）で、正着前症候群の治療を行ったとともに、５人（３３％）の患者が、１００日後にＧＶＨＤを発症していた。１００日後、評価可能な１３人の患者のうち、３人（２３％）が、遅発型ａＧＶＨＤの特徴を示したか、またはオーバーラップ症候群になったが、古典的なｃＧＶＨＤの特徴を有すると診断された者はいなかった。２年後には、９人の患者（７０％）が、免疫抑制から回復していた。

この調査では、疾患の再発により、２人が死亡したが、１５人の患者では、移植関連死は観察されず、高い全生存率が得られた。良好な転帰が観察されたのは、ＣＢＴを行った患者に見られた正着遅延の解消に起因すると見られるが、オフザシェルフのＥｘｐ−ＣＢＳＣを注入したことにより、移植片対白血病相互作用が増大し、その結果、移植片対白血病効果が増大したことも考えられる。少数の患者からは、確定的な結論は出せないが、患者の特徴（半数は、移植時にはＭＲＤ＋であった）と長期追跡により、これらの結果は、かなり有望となっている。

注入と関連する毒性は観察されなかったとともに、オフザシェルフのＥｘｐ−ＣＢＳＣ生成物に起因する重大な有害イベントは見られなかった。さらに驚くべきことに、今回の調査に含めた患者には、グレードＩＩＩ〜ＩＶのａＧＶＨＤになった者はいなかったことから、このオフザシェルフの生成物の免疫調節特性が示唆されている。このオフザシェルフの増殖生成物の存在下で、未操作ユニット由来の同種反応性Ｔ細胞がインビボで増殖し、ａＧＶＨＤを軽減できる特定の細胞サブユニットに分化することが考えられる。確認されれば、この観察は、重要な臨床的意義を持つことができる。重症形態のａＧＶＨＤが、罹病と死亡のリスクの増大と関連付けられていることを考えると［Ｂｒｕｎｓｔｅｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ ２００７；１１０：３０６４−７０、ＭａｃＭｉｌｌａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ ２００９；１１３：２４１０−１５］、このオフザシェルフの生成物の使用は、ａＧＶＨＤ軽減の目的で、異なる幹細胞源を用いる他のタイプのＨＣＴに拡大できるであろう。

当業者であれば分かるように、本明細書に開示されている各実施形態は、その具体的に示されている要素、工程、成分または構成要素を含むことも、その具体的に示されている要素、工程、成分または成分から本質的になることも、その具体的に示されている要素、工程、成分または成分からなることもできる。「ｉｎｃｌｕｄｅｓ（含む）」または「ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ（含む）」とは、「ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ（含む）」、「〜から本質的になる」または「〜からなる」を意味する。移行語の「ｃｏｍｐｒｉｓｅ（含む）」または「ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ（含む）」は、「〜が挙げられるが、これらに限らない」を意味し、明示されていない要素、工程、成分または構成要素を、たとえ大量でも含めることを可能にする。移行句の「〜からなる」は、示されていないあらゆる要素、工程、成分または構成要素を除外する。移行句の「〜から本質的になる」は、実施形態の範囲を、示されている要素、工程、成分、構成要素と、その実施形態に重大な影響を及ぼさない要素、工程、成分、構成要素に限定する。重大な影響により、本明細書に記載されているプロトコールによるＥｘｐ−ＣＢＳＣの投与によって（ｉ）移植拒絶反応、（ｉｉ）ＴＰＮ、オピオイドの使用及び医療処置後の入院日数、（ｉｉｉ）粘膜炎、または（ｉｖ）臍帯血移植後におけるグレードＩＩＩ及びグレードＩＶの急性ＧＶＨＤの発症及び／または重症度を軽減する効果が統計的に有意かつ臨床的に有意義な形で低下する。

別段の定めのない限り、本明細書及び請求項で用いられている、成分、特性（分子量、反応条件など）、の量を表しているすべての数字は、いずれの場合も、「約」という用語で修飾されているものとして理解するものとする。したがって、特に反対の記載がない限り、本明細書及び添付の請求項に定められている数値パラメーターは、本発明によって実現するように求められる所望の特性に応じて変化し得る近似値である。最低限でも、特許請求の範囲への均等論の適用を制限する試みとしてではなく、各数値パラメーターは少なくとも、報告されている有効数字の数を考慮するとともに、通常の四捨五入の技法を適用することによって解釈しなければならない。さらに明確にする必要があるときには、「約」という用語は、示されている数値または数値範囲と併せて用いられている場合に、当業者が「約」という用語のものと認める意味を有し、すなわち、示されている値または範囲よりも幾分大きいかまたは幾分小さく、示されている値の±２０％、示されている値の±１９％、示されている値の±１８％、示されている値の±１７％、示されている値の±１６％、示されている値の±１５％、示されている値の±１４％、示されている値の±１３％、示されている値の±１２％、示されている値の±１１％、示されている値の±１０％、示されている値の±９％、示されている値の±８％、示されている値の±７％、示されている値の±６％、示されている値の±５％、示されている値の±４％、示されている値の±３％、示されている値の±２％または示されている値の±１％の範囲までの値を示す。

本発明の広範な範囲を定めている数値範囲及びパラメーターは近似値であるが、具体例で定められている数値は、可能な限り正確に報告されている。しかしながら、いずれの数値にも、それぞれの試験測定値で見られる標準偏差から必然的に生じる一定の誤差が本来的に含まれる。

本発明を説明する文脈（特に、下記の請求項の文脈）で用いられている「ａ」、「ａｎ」、「ｔｈｅ」という用語及び類似の指示は、本明細書に別段の定めがない限り、または文脈上明らかに矛盾がない限り、単数と複数の両方を網羅するように解釈するものとする。本明細書における数値範囲の列挙は、その範囲内にある別々の各値に個別に言及する簡便な方法として機能するように意図されているに過ぎない。本明細書に別段の定めのない限り、個別の各値は、本明細書に個別に列挙されているかのように、本明細書に組み込まれる。本明細書に記載されている方法はいずれも、本明細書に別段の定めのない限り、または文脈上明らかに矛盾がない限り、いずれかの好適な順序で行うことができる。本明細書に示されているすべての例または例示的な語句（例えば「など」）の使用は、本発明をさらに明確にするためのものとして意図されているに過ぎす、別段に特許請求されている本発明の範囲に制限を課すものではない。本明細書のいずれの語句も、特許請求されていない要素であって、本発明の実施に必須な要素を示すものと解釈すべきではない。

本明細書に開示されている本発明の代替的な要素または実施形態の群分けは、限定するものとして解釈しないものとする。各群のメンバーは、個別に、またはその群の他のメンバーもしくは本明細書に見られる他の要素といずれかに組み合わせた形で、言及及び特許請求してよい。便宜及び／または特許性のために、群の１つ以上のメンバーを群に含めたり、または群から削除したりしてよいことが予想される。このように含めたり、または削除したりしたときにはいずれも、本明細書には、添付の請求項で用いられているすべてのマーカッシュ群の記述を満たすように修正した群が含まれるものとみなす。

本発明の特定的な実施形態は、本発明を実施するための、本発明者に既知の最良の形態を含め、本明細書に記載されている。当然ながら、記載されているこれらの実施形態の変形形態は、上記の説明を読めば、当業者には明らかになるであろう。そのような変形形態を当業者が適宜採用することを本発明者は期待しているとともに、本明細書に具体的に記載されている以外の形で、本発明が実施されるように本発明者は意図している。したがって、準拠法で認められているように、本発明には、添付の請求項に示されている主題のあらゆる修正形態と均等物が含まれる。さらに、本明細書に別段の定めのない限り、または文脈上明らかに矛盾がない限り、その考え得るあらゆる変形形態において、上記要素をいずれかに組み合わせたものが含まれる。

さらに、本明細書を通じて、書籍、学術論文、専門書、特許、印刷刊行物など（「参照文献」と総称する）への参照が何度も行われている。上で引用した各参照文献は、参照により、引用されているその教示に関して、本明細書に個々に援用される。

最後に、本明細書に開示されている本発明の実施形態は、本発明の原理を例示するものであることを理解されたい。用いてよいその他の修正形態も、本発明の範囲内である。したがって、例として、また非限定的なものとして、本明細書の教示に従って、本発明の代替的な構成を用いてよい。したがって、本発明は、示されているとともに、説明されているものと全く同じ構成に限定されない。

本明細書に示されている詳細は、一例であるとともに、本発明の好ましい実施形態の例示的な考察を目的とするものに過ぎず、本発明の様々な実施形態の原理及び概念的態様の最も有用かつ理解しやすい説明であると考えられる内容を示すために記載されている。この点においては、本発明を根本的に理解するのに、必要以上に詳しく、本発明の構造的な詳細を示す試みは行われておらず、当業者であれば、図面及び／または実施例を取り上げて行った説明により、本発明のいくつかの形態をいかにして実施できるかが分かる。

本開示で用いられている定義及び説明は、下記の例で明確かつ明瞭に修正されていない限り、またはその意味を適用すると、いずれかの構成が無意味になったりもしくは本質的に無意味になったりしない限り、あらゆる今後の構成において優先されるように意図されている。その用語の構成により、無意味または本質的に無意味になる場合には、その定義は、Ｗｅｂｓｔｅｒ’ｓ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ，３ｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎまたは当業者に知られている辞書（Ｏｘｆｏｒｄ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｅｄ．Ａｎｔｈｏｎｙ Ｓｍｉｔｈ，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ，２００４）など）から採用するものとする。

Claims (324)

1. 同種異系皮膚移植片拒絶反応を軽減する必要のある対象における同種異系皮膚移植片拒絶反応の軽減方法であって、同種異系皮膚移植片拒絶反応を軽減する必要のある前記対象に、同種異系皮膚移植片を受ける臨床的に有意義なタイムウィンドウ内で、ＣＤ３４＋濃縮型増殖臍帯血試料（Ｅｘｐ−ＣＢＳＣ）を治療有効量投与することによって、前記対象において、同種異系皮膚移植片拒絶反応を軽減することを含む前記方法。
2. （ｉ）前記同種異系皮膚移植片と前記対象が、免疫学的に適合しており、（ｉｉ）前記Ｅｘｐ−ＣＢＳＣを免疫学的な適合判定なしに、前記対象に投与する、請求項１に記載の方法。
3. 前記Ｅｘｐ−ＣＢＳＣが、事前に凍結保存したものである、請求項１に記載の方法。
4. 前記Ｅｘｐ−ＣＢＳＣが、Ｔ細胞を含まない、請求項１に記載の方法。
5. 前記対象が、皮膚の外傷のために、同種異系皮膚移植片拒絶反応の軽減を必要とする、請求項１に記載の方法。
6. 前記外傷が、火、熱、圧力、穿刺及び／または擦過によるものである、請求項５に記載の方法。
7. 前記同種異系皮膚移植を受ける前に、前記臨床的に有意義なタイムウィンドウが存在する、請求項１に記載の方法。
8. 前記臨床的に有意義なタイムウィンドウが、前記同種異系皮膚移植片を受ける３６時間以内である、請求項１に記載の方法。
9. 前記臨床的に有意義なタイムウィンドウが、前記同種異系皮膚移植片を受ける１２時間以内である、請求項１に記載の方法。
10. 前記Ｅｘｐ−ＣＢＳＣが、少なくとも７５００万個のＣＤ３４＋細胞を含む、請求項１に記載の方法。
11. 前記Ｅｘｐ−ＣＢＳＣが、出産時の１人のヒトの臍帯血及び／または胎盤血に由来する、請求項１に記載の方法。
12. 前記Ｅｘｐ−ＣＢＳＣが、２つ以上の異なる増殖ヒト臍帯血幹細胞試料の入ったプールを含み、前記プール中のそれぞれの異なる試料が、出産時における異なるヒトの臍帯血及び／または胎盤血に由来する、請求項１に記載の方法。
13. 前記治療有効量が、前記対象の１キログラム当たりに１００万個〜２０００万個のＣＤ３４＋細胞を含む、請求項１に記載の方法。
14. 同種異系皮膚移植片拒絶反応を軽減する必要のある対象において、同種異系皮膚移植片拒絶反応を軽減する目的で、適合不明のＣＤ３４＋濃縮型増殖臍帯血試料（Ｅｘｐ−ＣＢＳＣ）を使用すること。
15. 前記使用に、臨床的に有意義なタイムウィンドウ内で、同種異系皮膚移植片拒絶反応を軽減する必要のある前記対象に、治療有効量を投与することが含まれる、請求項１４に記載の使用。
16. 前記Ｅｘｐ−ＣＢＳＣが、事前に凍結保存したものである、請求項１４に記載の使用。
17. 前記Ｅｘｐ−ＣＢＳＣが、Ｔ細胞を含まない、請求項１４に記載の使用。
18. 前記対象が、皮膚の外傷のために、同種異系皮膚移植片拒絶反応の軽減を必要とする、請求項１４に記載の使用。
19. 前記外傷が、火、熱、圧力、穿刺及び／または擦過によるものである、請求項１８に記載の使用。
20. 前記同種異系皮膚移植を受ける前に、前記臨床的に有意義なタイムウィンドウが存在する、請求項１５に記載の使用。
21. 前記臨床的に有意義なタイムウィンドウが、前記同種異系皮膚移植片を受ける３６時間以内である、請求項１５に記載の使用。
22. 前記臨床的に有意義なタイムウィンドウが、前記同種異系皮膚移植片を受ける１２時間以内である、請求項１５に記載の使用。
23. 前記Ｅｘｐ−ＣＢＳＣが、少なくとも７５００万個のＣＤ３４＋細胞を含む、請求項１４に記載の使用。
24. 前記Ｅｘｐ−ＣＢＳＣが、出産時の１人のヒトの臍帯血及び／または胎盤血に由来する、請求項１４に記載の使用。
25. 前記Ｅｘｐ−ＣＢＳＣが、２つ以上の異なる増殖ヒト臍帯血幹細胞試料の入ったプールを含み、前記プール中のそれぞれの異なる試料が、出産時における異なるヒトの臍帯血及び／または胎盤血に由来する、請求項１４に記載の使用。
26. 前記治療有効量が、前記対象の１キログラム当たりに１００万個〜２０００万個のＣＤ３４＋細胞を含む、請求項１５に記載の使用。
27. 移植レシピエントにおいて免疫寛容を誘導する目的で、適合不明のＣＤ３４＋濃縮型増殖臍帯血試料（Ｅｘｐ−ＣＢＳＣ）を使用すること。
28. 前記使用に、臨床的に有意義なタイムウィンドウ内で、免疫寛容を誘導する必要のある前記対象に、治療有効量を投与することが含まれる、請求項２７に記載の使用。
29. 前記Ｅｘｐ−ＣＢＳＣが、事前に凍結保存したものである、請求項２７に記載の使用。
30. 前記Ｅｘｐ−ＣＢＳＣが、Ｔ細胞を含まない、請求項２７に記載の使用。
31. 前記移植レシピエントが、固形組織移植レシピエントである、請求項２７に記載の使用。
32. 前記固形組織が、脂肪組織、血管、骨、骨髄、心臓細胞、軟骨、軟骨（ｃａｒｔｉｌａｇｉｎｏｕｓ）細胞、軟骨（ｃｈｏｎｄｒａｌ）細胞、蝸牛、結合組織、角膜、培養細胞単層、歯の組織、目、顔、筋膜、線維組織、足、機能的脊椎単位、髪、手、心臓、心臓弁、腸、膵島細胞、腎臓、水晶体、靱帯、肝臓、肺、半月板、筋腱移植片、筋肉組織、神経細胞、神経組織、骨軟骨細胞、骨形成原細胞、卵巣、膵臓、半腱様筋組織、皮膚、脾臓、胃、腱、精巣、歯または椎間板を含む、請求項２７に記載の方法。
33. 前記移植レシピエントが、造血細胞移植レシピエントである、請求項２７に記載の使用。
34. 前記移植レシピエントが、同種異系移植レシピエントである、請求項２７に記載の使用。
35. 前記移植レシピエントが、同種異系臍帯血移植レシピエントである、請求項２７に記載の使用。
36. 前記免疫寛容の誘導により、前記対象への免疫抑制薬の投与が低減される、請求項２７に記載の使用。
37. 前記免疫抑制薬が、シクロスポリン、シクロスポリンＡ、シクロホスファミド、プレドニゾン、デキサメタゾン、メトトレキセート、アザチオプリン、ミコフェノレート、モフェチル、サリドマイド、リチウム、ＦＫ−５０６、シロリムス、ＡＴＧ、インフリキシマブ及び全身性ステロイドのうちの１つ以上を含む、請求項３６に記載の使用。
38. 前記移植を受ける前に、前記臨床的に有意義なタイムウィンドウが存在する、請求項２８に記載の使用。
39. 前記臨床的に有意義なタイムウィンドウが、移植を受ける３６時間以内である、請求項２８に記載の使用。
40. 前記臨床的に有意義なタイムウィンドウが、移植を受ける１２時間以内である、請求項２８に記載の使用。
41. 前記Ｅｘｐ−ＣＢＳＣが、少なくとも７５００万個のＣＤ３４＋細胞を含む、請求項２７に記載の使用。
42. 前記Ｅｘｐ−ＣＢＳＣが、出産時の１人のヒトの臍帯血及び／または胎盤血に由来する、請求項２７に記載の使用。
43. 前記Ｅｘｐ−ＣＢＳＣが、２つ以上の異なる増殖ヒト臍帯血幹細胞試料の入ったプールを含み、前記プール中のそれぞれの異なる試料が、出産時における異なるヒトの臍帯血及び／または胎盤血に由来する、請求項２７に記載の使用。
44. 前記治療有効量が、前記対象の１キログラム当たりに１００万個〜２０００万個のＣＤ３４＋細胞を含む、請求項２８に記載の使用。
45. 固形組織移植レシピエントにおける固形組織移植片に対する免疫寛容の誘導方法であって、
    固形組織移植を受ける臨床的に有意義なタイムウィンドウ内で、ＣＤ３４＋濃縮型増殖臍帯血試料（Ｅｘｐ−ＣＢＳＣ）を治療有効量、前記移植レシピエントに投与することによって、前記固形組織移植レシピエントにおいて、前記固形組織移植片に対する免疫寛容を誘導することを含む前記方法。
46. （ｉ）前記固形組織移植片と前記対象が、免疫学的に適合しており、（ｉｉ）前記Ｅｘｐ−ＣＢＳＣを免疫学的な適合判定なしに、前記対象に投与する、請求項４５に記載の方法。
47. 前記Ｅｘｐ−ＣＢＳＣが、事前に凍結保存したものである、請求項４５に記載の方法。
48. 前記Ｅｘｐ−ＣＢＳＣが、Ｔ細胞を含まない、請求項４５に記載の方法。
49. 免疫寛容が、固形組織移植の転帰の改善によって立証される、請求項４５に記載の方法。
50. Ｅｘｐ−ＣＢＳＣを投与しない対照集団よりも、移植拒絶反応が軽減されることによって、前記固形組織移植の転帰の改善が立証される、請求項４９に記載の方法。
51. 前記固形組織移植片が、脂肪組織、血管、骨、骨髄、心臓細胞、軟骨、軟骨（ｃａｒｔｉｌａｇｉｎｏｕｓ）細胞、軟骨（ｃｈｏｎｄｒａｌ）細胞、蝸牛、結合組織、角膜、培養細胞単層、歯の組織、目、顔、筋膜、線維組織、足、機能的脊椎単位、髪、手、心臓、心臓弁、腸、膵島細胞、腎臓、水晶体、靱帯、肝臓、肺、半月板、筋腱移植片、筋肉組織、神経細胞、神経組織、骨軟骨細胞、骨形成原細胞、卵巣、膵臓、半腱様筋組織、皮膚、脾臓、胃、腱、精巣、歯または椎間板を含む、請求項４５に記載の方法。
52. Ｅｘｐ−ＣＢＳＣを投与しない対照集団よりも、免疫抑制薬の投与が低減されることによって、前記固形組織移植の転帰の改善が立証される、請求項４９に記載の方法。
53. 前記免疫抑制薬が、シクロスポリン、シクロスポリンＡ、シクロホスファミド、プレドニゾン、デキサメタゾン、メトトレキセート、アザチオプリン、ミコフェノレート、モフェチル、サリドマイド、リチウム、ＦＫ−５０６、シロリムス、ＡＴＧ、インフリキシマブ及び全身性ステロイドのうちの１つ以上を含む、請求項５２に記載の方法。
54. 前記固形組織移植を受ける前に、前記臨床的に有意義なタイムウィンドウが存在する、請求項４５に記載の方法。
55. 前記臨床的に有意義なタイムウィンドウが、前記固形組織移植を受ける３６時間以内である、請求項４５に記載の方法。
56. 前記臨床的に有意義なタイムウィンドウが、前記固形組織移植を受ける１２時間以内である、請求項４５に記載の方法。
57. 前記Ｅｘｐ−ＣＢＳＣが、少なくとも７５００万個のＣＤ３４＋細胞を含む、請求項４５に記載の方法。
58. 前記Ｅｘｐ−ＣＢＳＣが、出産時の１人のヒトの臍帯血及び／または胎盤血に由来する、請求項４５に記載の方法。
59. 前記Ｅｘｐ−ＣＢＳＣが、２つ以上の異なる増殖ヒト臍帯血幹細胞試料の入ったプールを含み、前記プール中のそれぞれの異なる試料が、出産時における異なるヒトの臍帯血及び／または胎盤血に由来する、請求項４５に記載の方法。
60. 前記治療有効量が、前記対象の１キログラム当たりに１００万個〜２０００万個のＣＤ３４＋細胞を含む、請求項４５に記載の方法。
61. 免疫抑制薬の投与を低減する必要のある対象において、免疫抑制薬の投与を低減する目的で、適合不明のＣＤ３４＋濃縮型増殖臍帯血試料（Ｅｘｐ−ＣＢＳＣ）を使用すること。
62. 前記使用に、臨床的に有意義なタイムウィンドウ内で、免疫抑制薬の投与を低減する必要のある前記対象に、治療有効量を投与することが含まれる、請求項６１に記載の使用。
63. 前記Ｅｘｐ−ＣＢＳＣが、事前に凍結保存したものである、請求項６１に記載の使用。
64. 前記Ｅｘｐ−ＣＢＳＣが、Ｔ細胞を含まない、請求項６１に記載の使用。
65. 前記免疫抑制薬が、シクロスポリン、シクロスポリンＡ、シクロホスファミド、プレドニゾン、デキサメタゾン、メトトレキセート、アザチオプリン、ミコフェノレート、モフェチル、サリドマイド、リチウム、ＦＫ−５０６、シロリムス、ＡＴＧ、インフリキシマブ及び全身性ステロイドのうちの１つ以上を含む、請求項６１に記載の方法。
66. 前記対象が、移植処置のために、免疫抑制薬を投与されている、請求項６１に記載の使用。
67. 前記移植処置が、固形組織移植処置である、請求項６６に記載の使用。
68. 前記固形組織移植が、脂肪組織、血管、骨、骨髄、心臓細胞、軟骨、軟骨（ｃａｒｔｉｌａｇｉｎｏｕｓ）細胞、軟骨（ｃｈｏｎｄｒａｌ）細胞、蝸牛、結合組織、角膜、培養細胞単層、歯の組織、目、顔、筋膜、線維組織、足、機能的脊椎単位、髪、手、心臓、心臓弁、腸、膵島細胞、腎臓、水晶体、靱帯、肝臓、肺、半月板、筋腱移植片、筋肉組織、神経細胞、神経組織、骨軟骨細胞、骨形成原細胞、卵巣、膵臓、半腱様筋組織、皮膚、脾臓、胃、腱、精巣、歯または椎間板を含む、請求項６７に記載の使用。
69. 前記移植処置が、造血細胞移植処置である、請求項６６に記載の使用。
70. 前記移植処置が、同種異系移植処置である、請求項６６に記載の使用。
71. 前記移植処置が、同種異系臍帯血移植処置である、請求項６６に記載の使用。
72. 前記移植処置の前に、前記臨床的に有意義なタイムウィンドウが存在する、請求項６２に記載の使用。
73. 前記臨床的に有意義なタイムウィンドウが、移植処置の３６時間以内である、請求項６２に記載の使用。
74. 前記臨床的に有意義なタイムウィンドウが、移植処置の１２時間以内である、請求項６２に記載の使用。
75. 前記Ｅｘｐ−ＣＢＳＣが、出産時の１人のヒトの臍帯血及び／または胎盤血に由来する、請求項６１に記載の使用。
76. 前記Ｅｘｐ−ＣＢＳＣが、２つ以上の異なる増殖ヒト臍帯血幹細胞試料の入ったプールを含み、前記プール中のそれぞれの異なる試料が、出産時における異なるヒトの臍帯血及び／または胎盤血に由来する、請求項６１に記載の使用。
77. 前記治療有効量が、前記対象の１キログラム当たりに１００万個〜２０００万個のＣＤ３４＋細胞を含む、請求項６２に記載の使用。
78. 固形組織移植レシピエントに必要な免疫抑制薬の量の低減方法であって、
    固形臓器移植を受ける臨床的に有意義なタイムウィンドウ内で、ＣＤ３４＋濃縮型増殖臍帯血試料（Ｅｘｐ−ＣＢＳＣ）を治療有効量、前記移植レシピエントに投与することによって、前記固形組織移植レシピエントに必要な免疫抑制薬の量を低減することを含む前記方法。
79. （ｉ）前記固形組織移植片と前記対象が、免疫学的に適合しており、（ｉｉ）前記Ｅｘｐ−ＣＢＳＣを免疫学的な適合判定なしに、前記対象に投与する、請求項７８に記載の方法。
80. 前記Ｅｘｐ−ＣＢＳＣが、事前に凍結保存したものである、請求項７８に記載の方法。
81. 前記Ｅｘｐ−ＣＢＳＣが、Ｔ細胞を含まない、請求項７８に記載の方法。
82. 前記免疫抑制薬が、シクロスポリン、シクロスポリンＡ、シクロホスファミド、プレドニゾン、デキサメタゾン、メトトレキセート、アザチオプリン、ミコフェノレート、モフェチル、サリドマイド、リチウム、ＦＫ−５０６、シロリムス、ＡＴＧ、インフリキシマブ及び全身性ステロイドのうちの１つ以上を含む、請求項７８に記載の方法。
83. 前記固形組織移植が、脂肪組織、血管、骨、骨髄、心臓細胞、軟骨、軟骨（ｃａｒｔｉｌａｇｉｎｏｕｓ）細胞、軟骨（ｃｈｏｎｄｒａｌ）細胞、蝸牛、結合組織、角膜、培養細胞単層、歯の組織、目、顔、筋膜、線維組織、足、機能的脊椎単位、髪、手、心臓、心臓弁、腸、膵島細胞、腎臓、水晶体、靱帯、肝臓、肺、半月板、筋腱移植片、筋肉組織、神経細胞、神経組織、骨軟骨細胞、骨形成原細胞、卵巣、膵臓、半腱様筋組織、皮膚、脾臓、胃、腱、精巣、歯または椎間板を含む、請求項７８に記載の方法。
84. 前記固形組織移植が、同種異系固形組織移植である、請求項７８に記載の方法。
85. 前記固形組織移植の前に、前記臨床的に有意義なタイムウィンドウが存在する、請求項７８に記載の方法。
86. 前記臨床的に有意義なタイムウィンドウが、前記固形組織移植を受ける３６時間以内である、請求項７８に記載の方法。
87. 前記臨床的に有意義なタイムウィンドウが、前記固形組織移植を受ける１２時間以内である、請求項７８に記載の方法。
88. 前記Ｅｘｐ−ＣＢＳＣが、少なくとも７５００万個のＣＤ３４＋細胞を含む、請求項７８に記載の方法。
89. 前記Ｅｘｐ−ＣＢＳＣが、出産時の１人のヒトの臍帯血及び／または胎盤血に由来する、請求項７８に記載の方法。
90. 前記Ｅｘｐ−ＣＢＳＣが、２つ以上の異なる増殖ヒト臍帯血幹細胞試料の入ったプールを含み、前記プール中のそれぞれの異なる試料が、出産時における異なるヒトの臍帯血及び／または胎盤血に由来する、請求項７８に記載の方法。
91. 前記治療有効量が、前記対象の１キログラム当たりに１００万個〜２０００万個のＣＤ３４＋細胞を含む、請求項７８に記載の方法。
92. 完全静脈栄養（ＴＰＮ）を低減する必要のある対象におけるＴＰＮを低減する目的で、適合不明のＣＤ３４＋濃縮型増殖臍帯血試料（Ｅｘｐ−ＣＢＳＣ）を使用すること。
93. 前記使用に、臨床的に有意義なタイムウィンドウ内で、ＴＰＮを低減する必要のある前記対象に、治療有効量を投与することが含まれる、請求項９２に記載の使用。
94. 前記Ｅｘｐ−ＣＢＳＣが、事前に凍結保存したものである、請求項９２に記載の使用。
95. 前記Ｅｘｐ−ＣＢＳＣが、Ｔ細胞を含まない、請求項９２に記載の使用。
96. 前記対象が、医療処置後にＴＰＮを受ける、請求項９２に記載の使用。
97. 前記医療処置が移植である、請求項９６に記載の使用。
98. 前記移植が、固形組織移植である、請求項９７に記載の使用。
99. 前記固形組織移植が、脂肪組織、血管、骨、骨髄、心臓細胞、軟骨、軟骨（ｃａｒｔｉｌａｇｉｎｏｕｓ）細胞、軟骨（ｃｈｏｎｄｒａｌ）細胞、蝸牛、結合組織、角膜、培養細胞単層、歯の組織、目、顔、筋膜、線維組織、足、機能的脊椎単位、髪、手、心臓、心臓弁、腸、膵島細胞、腎臓、水晶体、靱帯、肝臓、肺、半月板、筋腱移植片、筋肉組織、神経細胞、神経組織、骨軟骨細胞、骨形成原細胞、卵巣、膵臓、半腱様筋組織、皮膚、脾臓、胃、腱、精巣、歯または椎間板を含む、請求項９８に記載の使用。
100. 前記移植が、造血細胞移植処置である、請求項９７に記載の使用。
101. 前記移植が、同種異系移植処置である、請求項９７に記載の使用。
102. 前記移植が、同種異系臍帯血移植処置である、請求項９７に記載の使用。
103. 前記対象が、小児の対象である、請求項９２に記載の使用。
104. 前記医療処置の前に、前記臨床的に有意義なタイムウィンドウが存在する、請求項９３に記載の使用。
105. 前記臨床的に有意義なタイムウィンドウが、前記医療処置の３６時間以内である、請求項９３に記載の使用。
106. 前記臨床的に有意義なタイムウィンドウが、前記医療処置の１２時間以内である、請求項９３に記載の使用。
107. 前記Ｅｘｐ−ＣＢＳＣが、少なくとも７５００万個のＣＤ３４＋細胞を含む、請求項９２に記載の使用。
108. 前記Ｅｘｐ−ＣＢＳＣが、出産時の１人のヒトの臍帯血及び／または胎盤血に由来する、請求項９２に記載の使用。
109. 前記Ｅｘｐ−ＣＢＳＣが、２つ以上の異なる増殖ヒト臍帯血幹細胞試料の入ったプールを含み、前記プール中のそれぞれの異なる試料が、出産時における異なるヒトの臍帯血及び／または胎盤血に由来する、請求項９２に記載の使用。
110. 前記治療有効量が、前記対象の１キログラム当たりに１００万個〜２０００万個のＣＤ３４＋細胞を含む、請求項９３に記載の使用。
111. 同種異系移植を受けた後に、完全静脈栄養（ＴＰＮ）を受けることになる小児患者を特定することと、
     前記同種異系移植の臨床的に有意義なタイムウィンドウ内で、適合不明のＣＤ３４＋濃縮型増殖臍帯血試料（Ｅｘｐ−ＣＢＳＣ）を前記小児患者に投与することと、
     を含み、
     それによって、前記同種異系移植後の前記小児患者による完全静脈栄養（ＴＰＮ）の使用を低減する方法。
112. （ｉ）前記同種異系移植と前記対象が、免疫学的に適合しており、（ｉｉ）前記Ｅｘｐ−ＣＢＳＣを免疫学的な適合判定なしに、前記対象に投与する、請求項１１１に記載の方法。
113. 前記Ｅｘｐ−ＣＢＳＣが、事前に凍結保存したものである、請求項１１１に記載の方法。
114. 前記Ｅｘｐ−ＣＢＳＣが、Ｔ細胞を含まない、請求項１１１に記載の方法。
115. 前記同種異系移植が、固形組織移植である、請求項１１１に記載の方法。
116. 前記固形組織移植が、組織、血管、骨、骨髄、心臓細胞、軟骨、軟骨（ｃａｒｔｉｌａｇｉｎｏｕｓ）細胞、軟骨（ｃｈｏｎｄｒａｌ）細胞、蝸牛、結合組織、角膜、培養細胞単層、歯の組織、目、顔、筋膜、線維組織、足、機能的脊椎単位、髪、手、心臓、心臓弁、腸、膵島細胞、腎臓、水晶体、靱帯、肝臓、肺、半月板、筋腱移植片、筋肉組織、神経細胞、神経組織、骨軟骨細胞、骨形成原細胞、卵巣、膵臓、半腱様筋組織、皮膚、脾臓、胃、腱、精巣、歯または椎間板を含む、請求項１１５に記載の方法。
117. 前記同種異系移植が、造血細胞移植である、請求項１１１に記載の方法。
118. 前記同種異系移植が、臍帯血移植処置である、請求項１１１に記載の方法。
119. 前記移植の前に、前記臨床的に有意義なタイムウィンドウが存在する、請求項１１１に記載の方法。
120. 前記臨床的に有意義なタイムウィンドウが、前記移植を受ける３６時間以内である、請求項１１１に記載の方法。
121. 前記臨床的に有意義なタイムウィンドウが、前記移植を受ける１２時間以内である、請求項１１１に記載の方法。
122. 前記Ｅｘｐ−ＣＢＳＣが、少なくとも７５００万個のＣＤ３４＋細胞を含む、請求項１１１に記載の方法。
123. 前記治療有効量が、前記対象の１キログラム当たりに１００万個〜２０００万個のＣＤ３４＋細胞を含む、請求項１１１に記載の方法。
124. 医療処置後の対象による完全静脈栄養（ＴＰＮ）の使用の低減方法であって、前記医療処置の臨床的に有意義なタイムウィンドウ内で、ＣＤ３４＋濃縮型増殖臍帯血試料（Ｅｘｐ−ＣＢＳＣ）を治療有効量、前記対象に投与することによって、前記医療処置後の前記対象によるＴＰＮの使用を低減することを含む前記方法。
125. 前記Ｅｘｐ−ＣＢＳＣを免疫学的な適合判定なしに、前記対象に投与する、請求項１２４に記載の方法。
126. 前記Ｅｘｐ−ＣＢＳＣが、事前に凍結保存したものである、請求項１２４に記載の方法。
127. 前記Ｅｘｐ−ＣＢＳＣが、Ｔ細胞を含まない、請求項１２４に記載の方法。
128. 前記医療処置が、移植である、請求項１２４に記載の方法。
129. 前記移植が、固形組織移植である、請求項１２８に記載の方法。
130. 前記固形組織移植が、脂肪組織、血管、骨、骨髄、心臓細胞、軟骨、軟骨（ｃａｒｔｉｌａｇｉｎｏｕｓ）細胞、軟骨（ｃｈｏｎｄｒａｌ）細胞、蝸牛、結合組織、角膜、培養細胞単層、歯の組織、目、顔、筋膜、線維組織、足、機能的脊椎単位、髪、手、心臓、心臓弁、腸、膵島細胞、腎臓、水晶体、靱帯、肝臓、肺、半月板、筋腱移植片、筋肉組織、神経細胞、神経組織、骨軟骨細胞、骨形成原細胞、卵巣、膵臓、半腱様筋組織、皮膚、脾臓、胃、腱、精巣、歯または椎間板を含む、請求項１２９に記載の方法。
131. 前記移植が、造血細胞移植である、請求項１２８に記載の方法。
132. 前記移植が、同種異系移植である、請求項１２８に記載の方法。
133. 前記移植が、同種異系臍帯血移植である、請求項１２８に記載の方法。
134. 前記対象が、小児の対象である、請求項１２４に記載の方法。
135. 前記移植の前に、前記臨床的に有意義なタイムウィンドウが存在する、請求項１２４に記載の方法。
136. 前記臨床的に有意義なタイムウィンドウが、前記移植を受ける３６時間以内である、請求項１２４に記載の方法。
137. 前記臨床的に有意義なタイムウィンドウが、前記移植を受ける１２時間以内である、請求項１２４に記載の方法。
138. 前記Ｅｘｐ−ＣＢＳＣが、少なくとも７５００万個のＣＤ３４＋細胞を含む、請求項１２４に記載の方法。
139. 前記治療有効量が、前記対象の１キログラム当たりに１００万個〜２０００万個のＣＤ３４＋細胞を含む、請求項１２４に記載の方法。
140. オピオイドの使用を低減する必要のある対象において、オピオイドの使用を低減する目的で、適合不明のＣＤ３４＋濃縮型増殖臍帯血試料（Ｅｘｐ−ＣＢＳＣ）を使用すること。
141. 前記使用に、臨床的に有意義なタイムウィンドウ内で、オピオイドの使用を低減する必要のある前記対象に、治療有効量を投与することが含まれる、請求項１４０に記載の使用。
142. 前記Ｅｘｐ−ＣＢＳＣが、事前に凍結保存したものである、請求項１４０に記載の使用。
143. 前記Ｅｘｐ−ＣＢＳＣが、Ｔ細胞を含まない、請求項１４０に記載の使用。
144. 前記オピオイドが、アニレリジン、アリルプロジン、アルフェンタニル、アルファプロジン、ベンジルモルヒネ、ブプレノルフィン、ベジトラミド、ブトルファノール、コデイン、クロニタゼン、シクラゾシン、デゾシン、デソモルヒネ、ジヒドロモルヒネ、デキストロモラミド、ジアンプロミド、ジヒドロコデイン、ジエチルチアムブテン、ジメノキサドール、ジメフェプタノール、ジメチルチアムブテン、ジピパノン、ジオキサフェチルブチレート、エプタゾシン、エチルモルヒネ、エチルメチルチアムブテン、エトニタジン、エトヘプタジン、フェンタニル、ヒドロコドン、ヘロイン、６−ヒドロキシモルフォン、ヒドロキシペチジン、ヒドロモルフォン、イソメタドン、ケトベミドン、レバロルファン、レボフェナシルモルファン、ロフェンタニル、レボルファノール、モルヒネ、ミロフィン、メペリジン、メプタジノール、メタゾシン、メタドン、メトポン、モルヒネ、ナルセイン、ナルブフィン、ナロルフィン、ニコモルヒネ、ノルレボルファノール、ノルメタドン、ノルモルヒネ、ノルピパノン、アヘン、オキシコドン、オキシモルホン、ピリトラミド、パパベレタム、ペンタゾシン、フェナドキソン、フェナゾシン、フェノペリジン、ピミノジン、フェノモルファン、プロフェプタジン、プロメドール、プロペリジン、プロピラム、プロポキシフェン、スフェンタニル、チリジン、トラマドール、これらの立体異性体、これらの代謝物、これらの塩、これらのエーテル、これらのエステル及び／またはこれらの誘導体、及び／またはこれらの混合物のうちの１つ以上から選択されている、請求項１４０に記載の使用。
145. 前記オピオイドが、第２の活性成分と混合されている、請求項１４０に記載の使用。
146. 前記オピオイドと第２の活性成分が、オキシコドンとアセトアミノフェン、またはヒドロコドンとアセトアミノフェンを含む、請求項１４５に記載の使用。
147. 前記対象が、医療処置後にオピオイドを投与される、請求項１４０に記載の使用。
148. 前記医療処置が、移植である、請求項１４７に記載の使用。
149. 前記移植が、固形組織移植である、請求項１４８に記載の使用。
150. 前記固形組織移植が、脂肪組織、血管、骨、骨髄、心臓細胞、軟骨、軟骨（ｃａｒｔｉｌａｇｉｎｏｕｓ）細胞、軟骨（ｃｈｏｎｄｒａｌ）細胞、蝸牛、結合組織、角膜、培養細胞単層、歯の組織、目、顔、筋膜、線維組織、足、機能的脊椎単位、髪、手、心臓、心臓弁、腸、膵島細胞、腎臓、水晶体、靱帯、肝臓、肺、半月板、筋腱移植片、筋肉組織、神経細胞、神経組織、骨軟骨細胞、骨形成原細胞、卵巣、膵臓、半腱様筋組織、皮膚、脾臓、胃、腱、精巣、歯または椎間板を含む、請求項１４９に記載の使用。
151. 前記移植が、造血細胞移植である、請求項１４８に記載の使用。
152. 前記移植が、同種異系移植である、請求項１４８に記載の使用。
153. 前記移植が、同種異系臍帯血移植である、請求項１４８に記載の使用。
154. 前記対象が、小児の対象である、請求項１４１に記載の使用。
155. 前記医療処置の前に、前記臨床的に有意義なタイムウィンドウが存在する、請求項１４２に記載の使用。
156. 前記臨床的に有意義なタイムウィンドウが、前記医療処置の３６時間以内である、請求項１４２に記載の使用。
157. 前記臨床的に有意義なタイムウィンドウが、前記医療処置の１２時間以内である、請求項１４２に記載の使用。
158. 前記Ｅｘｐ−ＣＢＳＣが、少なくとも７５００万個のＣＤ３４＋細胞を含む、請求項１４１に記載の使用。
159. 前記Ｅｘｐ−ＣＢＳＣが、出産時の１人のヒトの臍帯血及び／または胎盤血に由来する、請求項１４１に記載の使用。
160. 前記Ｅｘｐ−ＣＢＳＣが、２つ以上の異なる増殖ヒト臍帯血幹細胞試料の入ったプールを含み、前記プール中のそれぞれの異なる試料が、出産時における異なるヒトの臍帯血及び／または胎盤血に由来する、請求項１４１に記載の使用。
161. 前記治療有効量が、前記対象の１キログラム当たりに１００万個〜２０００万個のＣＤ３４＋細胞を含む、請求項１４２に記載の使用。
162. 同種異系移植を受けた後に、オピオイドを投与されることになる小児患者を特定することと、
     前記同種異系移植の臨床的に有意義なタイムウィンドウ内で、適合不明のＣＤ３４＋濃縮型増殖臍帯血試料（Ｅｘｐ−ＣＢＳＣ）を前記小児患者に投与することと、
     を含み、
     それによって、前記同種異系移植後の前記小児患者によるオピオイドの使用を低減する方法。
163. （ｉ）前記同種異系移植と前記対象が、免疫学的に適合しており、（ｉｉ）前記Ｅｘｐ−ＣＢＳＣを免疫学的な適合判定なしに、前記対象に投与する、請求項１６２に記載の方法。
164. 前記Ｅｘｐ−ＣＢＳＣが、事前に凍結保存したものである、請求項１６２に記載の方法。
165. 前記Ｅｘｐ−ＣＢＳＣが、Ｔ細胞を含まない、請求項１６２に記載の方法。
166. 前記オピオイドが、アニレリジン、アリルプロジン、アルフェンタニル、アルファプロジン、ベンジルモルヒネ、ブプレノルフィン、ベジトラミド、ブトルファノール、コデイン、クロニタゼン、シクラゾシン、デゾシン、デソモルヒネ、ジヒドロモルヒネ、デキストロモラミド、ジアンプロミド、ジヒドロコデイン、ジエチルチアムブテン、ジメノキサドール、ジメフェプタノール、ジメチルチアムブテン、ジピパノン、ジオキサフェチルブチレート、エプタゾシン、エチルモルヒネ、エチルメチルチアムブテン、エトニタジン、エトヘプタジン、フェンタニル、ヒドロコドン、ヘロイン、６−ヒドロキシモルフォン、ヒドロキシペチジン、ヒドロモルフォン、イソメタドン、ケトベミドン、レバロルファン、レボフェナシルモルファン、ロフェンタニル、レボルファノール、モルヒネ、ミロフィン、メペリジン、メプタジノール、メタゾシン、メタドン、メトポン、モルヒネ、ナルセイン、ナルブフィン、ナロルフィン、ニコモルヒネ、ノルレボルファノール、ノルメタドン、ノルモルヒネ、ノルピパノン、アヘン、オキシコドン、オキシモルホン、ピリトラミド、パパベレタム、ペンタゾシン、フェナドキソン、フェナゾシン、フェノペリジン、ピミノジン、フェノモルファン、プロフェプタジン、プロメドール、プロペリジン、プロピラム、プロポキシフェン、スフェンタニル、チリジン、トラマドール、これらの立体異性体、これらの代謝物、これらの塩、これらのエーテル、これらのエステル及び／またはこれらの誘導体、及び／またはこれらの混合物のうちの１つ以上から選択されている、請求項１６２に記載の方法。
167. 前記オピオイドが、第２の活性成分と混合されている、請求項１６２に記載の方法。
168. 前記オピオイドと第２の活性成分が、オキシコドンとアセトアミノフェン、またはヒドロコドンとアセトアミノフェンを含む、請求項１６７に記載の方法。
169. 前記同種異系移植が、固形組織移植である、請求項１６２に記載の方法。
170. 前記固形組織移植が、脂肪組織、血管、骨、骨髄、心臓細胞、軟骨、軟骨（ｃａｒｔｉｌａｇｉｎｏｕｓ）細胞、軟骨（ｃｈｏｎｄｒａｌ）細胞、蝸牛、結合組織、角膜、培養細胞単層、歯の組織、目、顔、筋膜、線維組織、足、機能的脊椎単位、髪、手、心臓、心臓弁、腸、膵島細胞、腎臓、水晶体、靱帯、肝臓、肺、半月板、筋腱移植片、筋肉組織、神経細胞、神経組織、骨軟骨細胞、骨形成原細胞、卵巣、膵臓、半腱様筋組織、皮膚、脾臓、胃、腱、精巣、歯または椎間板を含む、請求項１６９に記載の方法。
171. 前記同種異系移植が、造血細胞移植である、請求項１６２に記載の方法。
172. 前記同種異系移植が、臍帯血移植処置である、請求項１６２に記載の方法。
173. 前記移植の前に、前記臨床的に有意義なタイムウィンドウが存在する、請求項１６２に記載の方法。
174. 前記臨床的に有意義なタイムウィンドウが、前記移植を受ける３６時間以内である、請求項１６２に記載の方法。
175. 前記臨床的に有意義なタイムウィンドウが、前記移植を受ける１２時間以内である、請求項１６２に記載の方法。
176. 前記Ｅｘｐ−ＣＢＳＣが、少なくとも７５００万個のＣＤ３４＋細胞を含む、請求項１６２に記載の方法。
177. 前記治療有効量が、前記対象の１キログラム当たりに１００万個〜２０００万個のＣＤ３４＋細胞を含む、請求項１６２に記載の方法。
178. 医療処置後の対象によるオピオイドの使用の低減方法であって、前記医療処置の臨床的に有意義なタイムウィンドウ内で、ＣＤ３４＋濃縮型増殖臍帯血試料（Ｅｘｐ−ＣＢＳＣ）を治療有効量、前記対象に投与することによって、前記医療処置後の前記対象によるオピオイドの使用を低減することを含む前記方法。
179. 前記Ｅｘｐ−ＣＢＳＣを免疫学的な適合判定なしに、前記対象に投与する、請求項１７８に記載の方法。
180. 前記Ｅｘｐ−ＣＢＳＣが、事前に凍結保存したものである、請求項１７８に記載の方法。
181. 前記Ｅｘｐ−ＣＢＳＣが、Ｔ細胞を含まない、請求項１７８に記載の方法。
182. 前記オピオイドが、アニレリジン、アリルプロジン、アルフェンタニル、アルファプロジン、ベンジルモルヒネ、ブプレノルフィン、ベジトラミド、ブトルファノール、コデイン、クロニタゼン、シクラゾシン、デゾシン、デソモルヒネ、ジヒドロモルヒネ、デキストロモラミド、ジアンプロミド、ジヒドロコデイン、ジエチルチアムブテン、ジメノキサドール、ジメフェプタノール、ジメチルチアムブテン、ジピパノン、ジオキサフェチルブチレート、エプタゾシン、エチルモルヒネ、エチルメチルチアムブテン、エトニタジン、エトヘプタジン、フェンタニル、ヒドロコドン、ヘロイン、６−ヒドロキシモルフォン、ヒドロキシペチジン、ヒドロモルフォン、イソメタドン、ケトベミドン、レバロルファン、レボフェナシルモルファン、ロフェンタニル、レボルファノール、モルヒネ、ミロフィン、メペリジン、メプタジノール、メタゾシン、メタドン、メトポン、モルヒネ、ナルセイン、ナルブフィン、ナロルフィン、ニコモルヒネ、ノルレボルファノール、ノルメタドン、ノルモルヒネ、ノルピパノン、アヘン、オキシコドン、オキシモルホン、ピリトラミド、パパベレタム、ペンタゾシン、フェナドキソン、フェナゾシン、フェノペリジン、ピミノジン、フェノモルファン、プロフェプタジン、プロメドール、プロペリジン、プロピラム、プロポキシフェン、スフェンタニル、チリジン、トラマドール、これらの立体異性体、これらの代謝物、これらの塩、これらのエーテル、これらのエステル及び／またはこれらの誘導体、及び／またはこれらの混合物のうちの１つ以上から選択されている、請求項１７８に記載の方法。
183. 前記オピオイドが、第２の活性成分と混合されている、請求項１７８に記載の方法。
184. 前記オピオイドと第２の活性成分が、オキシコドンとアセトアミノフェン、またはヒドロコドンとアセトアミノフェンを含む、請求項１８３に記載の方法。
185. 前記医療処置が、移植である、請求項１７８に記載の方法。
186. 前記移植が、固形組織移植である、請求項１８５に記載の方法。
187. 前記固形組織移植が、脂肪組織、血管、骨、骨髄、心臓細胞、軟骨、軟骨（ｃａｒｔｉｌａｇｉｎｏｕｓ）細胞、軟骨（ｃｈｏｎｄｒａｌ）細胞、蝸牛、結合組織、角膜、培養細胞単層、歯の組織、目、顔、筋膜、線維組織、足、機能的脊椎単位、髪、手、心臓、心臓弁、腸、膵島細胞、腎臓、水晶体、靱帯、肝臓、肺、半月板、筋腱移植片、筋肉組織、神経細胞、神経組織、骨軟骨細胞、骨形成原細胞、卵巣、膵臓、半腱様筋組織、皮膚、脾臓、胃、腱、精巣、歯または椎間板を含む、請求項１８６に記載の方法。
188. 前記移植が、造血細胞移植である、請求項１８５に記載の方法。
189. 前記移植が、同種異系移植である、請求項１８５に記載の方法。
190. 前記移植が、同種異系臍帯血移植である、請求項１８５に記載の方法。
191. 前記対象が、小児の対象である、請求項１７８に記載の方法。
192. 前記移植の前に、前記臨床的に有意義なタイムウィンドウが存在する、請求項１７８に記載の方法。
193. 前記臨床的に有意義なタイムウィンドウが、前記移植を受ける３６時間以内である、請求項１７８に記載の方法。
194. 前記臨床的に有意義なタイムウィンドウが、前記移植を受ける１２時間以内である、請求項１７８に記載の方法。
195. 前記Ｅｘｐ−ＣＢＳＣが、少なくとも７５００万個のＣＤ３４＋細胞を含む、請求項１７８に記載の方法。
196. 前記治療有効量が、前記対象の１キログラム当たりに１００万〜２０００万個のＣＤ３４＋細胞を含む、請求項１７８に記載の方法。
197. 入院を低減する必要のある対象において入院を低減する目的で、適合不明のＣＤ３４＋濃縮型増殖臍帯血試料（Ｅｘｐ−ＣＢＳＣ）を使用すること。
198. 前記使用に、臨床的に有意義なタイムウィンドウ内で、入院を低減する必要のある前記対象に、治療有効量を投与することが含まれる、請求項１９７に記載の使用。
199. 前記Ｅｘｐ−ＣＢＳＣが、事前に凍結保存したものである、請求項１９７に記載の使用。
200. 前記Ｅｘｐ−ＣＢＳＣが、Ｔ細胞を含まない、請求項１９７に記載の使用。
201. 前記対象が、移植処置のために入院している、請求項１９７に記載の使用。
202. 前記移植処置が、固形組織移植である、請求項２０１に記載の使用。
203. 前記固形組織移植が、脂肪組織、血管、骨、骨髄、心臓細胞、軟骨、軟骨（ｃａｒｔｉｌａｇｉｎｏｕｓ）細胞、軟骨（ｃｈｏｎｄｒａｌ）細胞、蝸牛、結合組織、角膜、培養細胞単層、歯の組織、目、顔、筋膜、線維組織、足、機能的脊椎単位、髪、手、心臓、心臓弁、腸、膵島細胞、腎臓、水晶体、靱帯、肝臓、肺、半月板、筋腱移植片、筋肉組織、神経細胞、神経組織、骨軟骨細胞、骨形成原細胞、卵巣、膵臓、半腱様筋組織、皮膚、脾臓、胃、腱、精巣、歯または椎間板を含む、請求項２０２に記載の使用。
204. 前記移植処置が、造血細胞移植である、請求項２０１に記載の使用。
205. 前記移植処置が、同種異系移植である、請求項２０１に記載の使用。
206. 前記移植処置が、同種異系臍帯血移植である、請求項２０１に記載の使用。
207. 前記対象が、小児の対象である、請求項１９７に記載の使用。
208. 前記医療処置の前に、前記臨床的に有意義なタイムウィンドウが存在する、請求項１９８に記載の使用。
209. 前記臨床的に有意義なタイムウィンドウが、前記医療処置の３６時間以内である、請求項１９８に記載の使用。
210. 前記臨床的に有意義なタイムウィンドウが、前記医療処置の１２時間以内である、請求項１９８に記載の使用。
211. 前記Ｅｘｐ−ＣＢＳＣが、少なくとも７５００万個のＣＤ３４＋細胞を含む、請求項１９７に記載の使用。
212. 前記Ｅｘｐ−ＣＢＳＣが、出産時の１人のヒトの臍帯血及び／または胎盤血に由来する、請求項１９７に記載の使用。
213. 前記Ｅｘｐ−ＣＢＳＣが、２つ以上の異なる増殖ヒト臍帯血幹細胞試料の入ったプールを含み、前記プール中のそれぞれの異なる試料が、出産時における異なるヒトの臍帯血及び／または胎盤血に由来する、請求項１９７に記載の使用。
214. 前記治療有効量が、前記対象の１キログラム当たりに１００万個〜２０００万個のＣＤ３４＋細胞を含む、請求項１９８に記載の使用。
215. 同種異系移植を受けた後に入院することになる小児患者を特定することと、
     前記同種異系移植の臨床的に有意義なタイムウィンドウ内で、適合不明のＣＤ３４＋濃縮型増殖臍帯血試料（Ｅｘｐ−ＣＢＳＣ）を前記小児患者に投与することと、
     を含み、
     それによって、前記同種異系移植後の前記小児患者の入院期間を短縮する方法。
216. （ｉ）前記同種異系移植片と前記対象が、免疫学的に適合しており、（ｉｉ）前記Ｅｘｐ−ＣＢＳＣを免疫学的な適合判定なしに、前記対象に投与する、請求項２１５に記載の方法。
217. 前記Ｅｘｐ−ＣＢＳＣが、事前に凍結保存したものである、請求項２１５に記載の方法。
218. 前記Ｅｘｐ−ＣＢＳＣが、Ｔ細胞を含まない、請求項２１５に記載の方法。
219. 前記同種異系移植が、固形組織移植である、請求項２１５に記載の方法。
220. 前記固形組織移植が、脂肪組織、血管、骨、骨髄、心臓細胞、軟骨、軟骨（ｃａｒｔｉｌａｇｉｎｏｕｓ）細胞、軟骨（ｃｈｏｎｄｒａｌ）細胞、蝸牛、結合組織、角膜、培養細胞単層、歯の組織、目、顔、筋膜、線維組織、足、機能的脊椎単位、髪、手、心臓、心臓弁、腸、膵島細胞、腎臓、水晶体、靱帯、肝臓、肺、半月板、筋腱移植片、筋肉組織、神経細胞、神経組織、骨軟骨細胞、骨形成原細胞、卵巣、膵臓、半腱様筋組織、皮膚、脾臓、胃、腱、精巣、歯または椎間板を含む、請求項２１９に記載の方法。
221. 前記同種異系移植が、造血細胞移植である、請求項２１５に記載の方法。
222. 前記同種異系移植が、臍帯血移植処置である、請求項２１５に記載の方法。
223. 前記移植の前に、前記臨床的に有意義なタイムウィンドウが存在する、請求項２１５に記載の方法。
224. 前記臨床的に有意義なタイムウィンドウが、前記移植を受ける３６時間以内である、請求項２１５に記載の方法。
225. 前記臨床的に有意義なタイムウィンドウが、前記移植を受ける１２時間以内である、請求項２１５に記載の方法。
226. 前記Ｅｘｐ−ＣＢＳＣが、少なくとも７５００万個のＣＤ３４＋細胞を含む、請求項２１５に記載の方法。
227. 前記治療有効量が、前記対象の１キログラム当たりに１００万個〜２０００万個のＣＤ３４＋細胞を含む、請求項２１５に記載の方法。
228. 医療処置後の対象の入院期間の短縮方法であって、前記医療処置の臨床的に有意義なタイムウィンドウ内で、ＣＤ３４＋濃縮型増殖臍帯血試料（Ｅｘｐ−ＣＢＳＣ）を治療有効量、前記対象に投与することによって、前記医療処置後の前記対象の入院期間を短縮することを含む前記方法。
229. 前記Ｅｘｐ−ＣＢＳＣを免疫学的な適合判定なしに、前記対象に投与する、請求項２２８に記載の方法。
230. 前記Ｅｘｐ−ＣＢＳＣが、事前に凍結保存したものである、請求項２２８に記載の方法。
231. 前記Ｅｘｐ−ＣＢＳＣが、Ｔ細胞を含まない、請求項２２８に記載の方法。
232. 前記医療処置が、移植である、請求項２２８に記載の方法。
233. 前記移植が、固形組織移植である、請求項２３２に記載の方法。
234. 前記固形組織移植が、脂肪組織、血管、骨、骨髄、心臓細胞、軟骨、軟骨（ｃａｒｔｉｌａｇｉｎｏｕｓ）細胞、軟骨（ｃｈｏｎｄｒａｌ）細胞、蝸牛、結合組織、角膜、培養細胞単層、歯の組織、目、顔、筋膜、線維組織、足、機能的脊椎単位、髪、手、心臓、心臓弁、腸、膵島細胞、腎臓、水晶体、靱帯、肝臓、肺、半月板、筋腱移植片、筋肉組織、神経細胞、神経組織、骨軟骨細胞、骨形成原細胞、卵巣、膵臓、半腱様筋組織、皮膚、脾臓、胃、腱、精巣、歯または椎間板を含む、請求項２３３に記載の方法。
235. 前記移植が、造血細胞移植である、請求項２３２に記載の方法。
236. 前記移植が、同種異系移植である、請求項２３２に記載の方法。
237. 前記移植が、同種異系臍帯血移植である、請求項２３２に記載の方法。
238. 前記対象が、小児の対象である、請求項２２８に記載の方法。
239. 前記移植の前に、前記臨床的に有意義なタイムウィンドウが存在する、請求項２２８に記載の方法。
240. 前記臨床的に有意義なタイムウィンドウが、前記移植を受ける３６時間以内である、請求項２２８に記載の方法。
241. 前記臨床的に有意義なタイムウィンドウが、前記移植を受ける１２時間以内である、請求項２２８に記載の方法。
242. 前記Ｅｘｐ−ＣＢＳＣが、少なくとも７５００万個のＣＤ３４＋細胞を含む、請求項２２８に記載の方法。
243. 前記治療有効量が、前記対象の１キログラム当たりに１００万個〜２０００万個のＣＤ３４＋細胞を含む、請求項２２８に記載の方法。
244. 粘膜炎を軽減する必要のある対象において、粘膜炎を軽減する目的で、適合不明のＣＤ３４＋濃縮型増殖臍帯血試料（Ｅｘｐ−ＣＢＳＣ）を使用すること。
245. 前記使用に、臨床的に有意義なタイムウィンドウ内で、粘膜炎を軽減する必要のある前記対象に、治療有効量を投与することが含まれる、請求項２４４に記載の使用。
246. 前記Ｅｘｐ−ＣＢＳＣが、事前に凍結保存したものである、請求項２４４に記載の使用。
247. 前記Ｅｘｐ−ＣＢＳＣが、Ｔ細胞を含まない、請求項２４４に記載の使用。
248. 前記対象が、移植処置のために、粘膜炎を軽減する必要のある、請求項２４４に記載の使用。
249. 前記移植処置が、固形組織移植である、請求項２４８に記載の使用。
250. 前記固形組織移植が、脂肪組織、血管、骨、骨髄、心臓細胞、軟骨、軟骨（ｃａｒｔｉｌａｇｉｎｏｕｓ）細胞、軟骨（ｃｈｏｎｄｒａｌ）細胞、蝸牛、結合組織、角膜、培養細胞単層、歯の組織、目、顔、筋膜、線維組織、足、機能的脊椎単位、髪、手、心臓、心臓弁、腸、膵島細胞、腎臓、水晶体、靱帯、肝臓、肺、半月板、筋腱移植片、筋肉組織、神経細胞、神経組織、骨軟骨細胞、骨形成原細胞、卵巣、膵臓、半腱様筋組織、皮膚、脾臓、胃、腱、精巣、歯または椎間板を含む、請求項２４９に記載の使用。
251. 前記移植処置が、造血細胞移植である、請求項２４８に記載の使用。
252. 前記移植処置が、同種異系移植である、請求項２４８に記載の使用。
253. 前記移植処置が、同種異系臍帯血移植である、請求項２４８に記載の使用。
254. 前記対象が、小児の対象である、請求項２４４に記載の使用。
255. 前記医療処置の前に、前記臨床的に有意義なタイムウィンドウが存在する、請求項２４５に記載の使用。
256. 前記臨床的に有意義なタイムウィンドウが、前記医療処置の３６時間以内である、請求項２４５に記載の使用。
257. 前記臨床的に有意義なタイムウィンドウが、前記医療処置の１２時間以内である、請求項２４５に記載の使用。
258. 前記Ｅｘｐ−ＣＢＳＣが、少なくとも７５００万個のＣＤ３４＋細胞を含む、請求項２４４に記載の使用。
259. 前記Ｅｘｐ−ＣＢＳＣが、出産時の１人のヒトの臍帯血及び／または胎盤血に由来する、請求項２４４に記載の使用。
260. 前記Ｅｘｐ−ＣＢＳＣが、２つ以上の異なる増殖ヒト臍帯血幹細胞試料の入ったプールを含み、前記プール中のそれぞれの異なる試料が、出産時における異なるヒトの臍帯血及び／または胎盤血に由来する、請求項２４４に記載の使用。
261. 前記治療有効量が、前記対象の１キログラム当たりに１００万個〜２０００万個のＣＤ３４＋細胞を含む、請求項２４５に記載の使用。
262. 同種異系移植を受けることに基づき、粘膜炎を発症するリスクのある小児患者を特定することと、
     前記同種異系移植の臨床的に有意義なタイムウィンドウ内で、適合不明のＣＤ３４＋濃縮型増殖臍帯血試料（Ｅｘｐ−ＣＢＳＣ）を投与することと、
     を含み、
     それによって、リスクのある前記小児患者において粘膜炎を軽減する方法。
263. （ｉ）前記同種異系移植片と前記対象が、免疫学的に適合しており、（ｉｉ）前記Ｅｘｐ−ＣＢＳＣを免疫学的な適合判定なしに、前記対象に投与する、請求項２６２に記載の方法。
264. 前記Ｅｘｐ−ＣＢＳＣが、事前に凍結保存したものである、請求項２６２に記載の方法。
265. 前記Ｅｘｐ−ＣＢＳＣが、Ｔ細胞を含まない、請求項２６２に記載の方法。
266. 前記同種異系移植が、固形組織移植である、請求項２６２に記載の方法。
267. 前記固形組織移植が、脂肪組織、血管、骨、骨髄、心臓細胞、軟骨、軟骨（ｃａｒｔｉｌａｇｉｎｏｕｓ）細胞、軟骨（ｃｈｏｎｄｒａｌ）細胞、蝸牛、結合組織、角膜、培養細胞単層、歯の組織、目、顔、筋膜、線維組織、足、機能的脊椎単位、髪、手、心臓、心臓弁、腸、膵島細胞、腎臓、水晶体、靱帯、肝臓、肺、半月板、筋腱移植片、筋肉組織、神経細胞、神経組織、骨軟骨細胞、骨形成原細胞、卵巣、膵臓、半腱様筋組織、皮膚、脾臓、胃、腱、精巣、歯または椎間板を含む、請求項２６６に記載の方法。
268. 前記同種異系移植が、造血細胞移植である、請求項２６２に記載の方法。
269. 前記同種異系移植が、臍帯血移植処置である、請求項２６２に記載の方法。
270. 前記移植の前に、前記臨床的に有意義なタイムウィンドウが存在する、請求項２６２に記載の方法。
271. 前記臨床的に有意義なタイムウィンドウが、前記移植を受ける３６時間以内である、請求項２６２に記載の方法。
272. 前記臨床的に有意義なタイムウィンドウが、前記移植を受ける１２時間以内である、請求項２６２に記載の方法。
273. 前記Ｅｘｐ−ＣＢＳＣが、少なくとも７５００万個のＣＤ３４＋細胞を含む、請求項２６２に記載の方法。
274. 前記治療有効量が、前記対象の１キログラム当たりに１００万個〜２０００万個のＣＤ３４＋細胞を含む、請求項２６２に記載の方法。
275. 医療処置後の対象の粘膜炎の軽減方法であって、前記医療処置の臨床的に有意義なタイムウィンドウ内で、ＣＤ３４＋濃縮型増殖臍帯血試料（Ｅｘｐ−ＣＢＳＣ）を治療有効量、前記対象に投与することによって、前記医療処置後の前記対象の粘膜炎を軽減することを含む前記方法。
276. 前記Ｅｘｐ−ＣＢＳＣを免疫学的な適合判定なしに、前記対象に投与する、請求項２７５に記載の方法。
277. 前記Ｅｘｐ−ＣＢＳＣが、事前に凍結保存したものである、請求項２７５に記載の方法。
278. 前記Ｅｘｐ−ＣＢＳＣが、Ｔ細胞を含まない、請求項２７５に記載の方法。
279. 前記医療処置が、移植である、請求項２７５に記載の方法。
280. 前記移植が、固形組織移植である、請求項２７９に記載の方法。
281. 前記固形組織移植が、脂肪組織、血管、骨、骨髄、心臓細胞、軟骨、軟骨（ｃａｒｔｉｌａｇｉｎｏｕｓ）細胞、軟骨（ｃｈｏｎｄｒａｌ）細胞、蝸牛、結合組織、角膜、培養細胞単層、歯の組織、目、顔、筋膜、線維組織、足、機能的脊椎単位、髪、手、心臓、心臓弁、腸、膵島細胞、腎臓、水晶体、靱帯、肝臓、肺、半月板、筋腱移植片、筋肉組織、神経細胞、神経組織、骨軟骨細胞、骨形成原細胞、卵巣、膵臓、半腱様筋組織、皮膚、脾臓、胃、腱、精巣、歯または椎間板を含む、請求項２８０に記載の方法。
282. 前記移植が、造血細胞移植である、請求項２７９に記載の方法。
283. 前記移植が、同種異系移植である、請求項２７９に記載の方法。
284. 前記移植が、同種異系臍帯血移植である、請求項２７９に記載の方法。
285. 前記対象が、小児の対象である、請求項２７５に記載の方法。
286. 前記医療処置の前に、前記臨床的に有意義なタイムウィンドウが存在する、請求項２７５に記載の方法。
287. 前記臨床的に有意義なタイムウィンドウが、前記移植を受ける３６時間以内である、請求項２７５に記載の方法。
288. 前記臨床的に有意義なタイムウィンドウが、前記移植を受ける１２時間以内である、請求項２７５に記載の方法。
289. 前記Ｅｘｐ−ＣＢＳＣが、少なくとも７５００万個のＣＤ３４＋細胞を含む、請求項２７５に記載の方法。
290. 前記治療有効量が、前記対象の１キログラム当たりに１００万個〜２０００万個のＣＤ３４＋細胞を含む、請求項２７５に記載の方法。
291. 急性移植片対宿主病を軽減する必要のある対象において、急性移植片対宿主病を軽減する目的で、適合不明のＣＤ３４＋濃縮型増殖臍帯血試料（Ｅｘｐ−ＣＢＳＣ）を使用すること。
292. 前記使用に、臨床的に有意義なタイムウィンドウ内で、急性移植片対宿主病を軽減する必要のある前記対象に、治療有効量を投与することが含まれる、請求項２９１に記載の使用。
293. 前記Ｅｘｐ−ＣＢＳＣが、事前に凍結保存したものである、請求項２９１に記載の使用。
294. 前記Ｅｘｐ−ＣＢＳＣが、Ｔ細胞を含まない、請求項２９１に記載の使用。
295. 前記急性ＧＶＨＤの軽減が、ステージＩＩＩの急性ＧＶＨＤの軽減である、請求項２９１に記載の使用。
296. 前記急性ＧＶＨＤの軽減が、ステージＩＶの急性ＧＶＨＤの軽減である、請求項２９１に記載の使用。
297. 前記対象が、同種異系造血細胞移植のために、急性移植片対宿主病を軽減する必要のある、請求項２９１に記載の使用。
298. 前記同種異系造血細胞移植が、臍帯血移植である、請求項２９７に記載の使用。
299. 前記臍帯血移植液と前記対象が、４／６、５／６または６／６のＨＬＡ抗原で適合している、請求項２９８に記載の使用。
300. 前記対象が、小児の対象である、請求項２９１に記載の使用。
301. 前記医療処置の前に、前記臨床的に有意義なタイムウィンドウが存在する、請求項２９２に記載の使用。
302. 前記臨床的に有意義なタイムウィンドウが、前記医療処置の３６時間以内である、請求項２９２に記載の使用。
303. 前記臨床的に有意義なタイムウィンドウが、前記医療処置の１２時間以内である、請求項２９２に記載の使用。
304. 前記Ｅｘｐ−ＣＢＳＣが、少なくとも７５００万個のＣＤ３４＋細胞を含む、請求項２９１に記載の使用。
305. 前記Ｅｘｐ−ＣＢＳＣが、出産時の１人のヒトの臍帯血及び／または胎盤血に由来する、請求項２９１に記載の使用。
306. 前記Ｅｘｐ−ＣＢＳＣが、２つ以上の異なる増殖ヒト臍帯血幹細胞試料の入ったプールを含み、前記プール中のそれぞれの異なる試料が、出産時における異なるヒトの臍帯血及び／または胎盤血に由来する、請求項２９１に記載の使用。
307. 前記治療有効量が、前記対象の１キログラム当たりに１００万個〜２０００万個のＣＤ３４＋細胞を含む、請求項２９２に記載の使用。
308. 同種異系移植を受けることに基づき、急性移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）のリスクのある患者を特定することと、
     前記同種異系移植の臨床的に有意義なタイムウィンドウ内で、適合不明のＣＤ３４＋濃縮型増殖臍帯血試料（Ｅｘｐ−ＣＢＳＣ）を投与することと、
     を含み、
     それによって、リスクのある前記患者における急性ＧＶＨＤを軽減する方法。
309. （ｉ）前記同種異系移植片と前記対象が、免疫学的に適合しており、（ｉｉ）前記Ｅｘｐ−ＣＢＳＣを免疫学的な適合判定なしに、前記対象に投与する、請求項３０８に記載の方法。
310. 前記Ｅｘｐ−ＣＢＳＣが、事前に凍結保存したものである、請求項３０８に記載の方法。
311. 前記Ｅｘｐ−ＣＢＳＣが、Ｔ細胞を含まない、請求項３０８に記載の方法。
312. 前記急性ＧＶＨＤの軽減が、ステージＩＩＩの急性ＧＶＨＤの軽減である、請求項３０８に記載の方法。
313. 前記急性ＧＶＨＤの軽減が、ステージＩＶの急性ＧＶＨＤの軽減である、請求項３０８に記載の方法。
314. 前記対象が、同種異系造血細胞移植のために、急性移植片対宿主病を軽減する必要のある、請求項３０８に記載の方法。
315. 前記同種異系造血細胞移植が、臍帯血移植である、請求項３１４に記載の方法。
316. 前記臍帯血移植液と前記対象が、４／６、５／６または６／６のＨＬＡ抗原で適合している、請求項３１５に記載の方法。
317. 前記対象が、小児の対象である、請求項３０８に記載の方法。
318. 前記医療処置の前に、前記臨床的に有意義なタイムウィンドウが存在する、請求項３０８に記載の方法。
319. 前記臨床的に有意義なタイムウィンドウが、前記医療処置の３６時間以内である、請求項３０８に記載の方法。
320. 前記臨床的に有意義なタイムウィンドウが、前記医療処置の１２時間以内である、請求項３０８に記載の方法。
321. 前記Ｅｘｐ−ＣＢＳＣが、少なくとも７５００万個のＣＤ３４＋細胞を含む、請求項３０８に記載の方法。
322. 前記Ｅｘｐ−ＣＢＳＣが、出産時の１人のヒトの臍帯血及び／または胎盤血に由来する、請求項３０８に記載の方法。
323. 前記Ｅｘｐ−ＣＢＳＣが、２つ以上の異なる増殖ヒト臍帯血幹細胞試料の入ったプールを含み、前記プール中のそれぞれの異なる試料が、出産時における異なるヒトの臍帯血及び／または胎盤血に由来する、請求項３０８に記載の方法。
324. 前記治療有効量が、前記対象の１キログラム当たりに１００万個〜２０００万個のＣＤ３４＋細胞を含む、請求項３０８に記載の方法。

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