RU2612355C2 - Питательная среда для суспензионного культивирования клеток млекопитающих - Google Patents
Питательная среда для суспензионного культивирования клеток млекопитающих Download PDFInfo
- Publication number
- RU2612355C2 RU2612355C2 RU2005116304A RU2005116304A RU2612355C2 RU 2612355 C2 RU2612355 C2 RU 2612355C2 RU 2005116304 A RU2005116304 A RU 2005116304A RU 2005116304 A RU2005116304 A RU 2005116304A RU 2612355 C2 RU2612355 C2 RU 2612355C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- sodium
- chloride
- nutrient medium
- tyrosine
- enzymatic
- Prior art date
Links
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано при производстве питательных сред для суспензионного культивирования клеток. Питательная среда для суспензионного культивирования клеток млекопитающих содержит натрий хлористый, калий хлористый, магний сернокислый, натрий фосфорнокислый двузамещенный, калий фосфорнокислый однозамещенный, кальций хлористый, натрий двууглекислый, L-аргинин, L-глутамин, L-тирозин, L-триптофан, L-цистин, пантотенат кальция, пиридоксаль НСl, тиамин, мезо-инозит, никотинамид, рибофлавин, фолиевую кислоту, глюкозу, ферментативный гидролизат мышечных белков, ферментативный гидролизат лактальбумина, сыворотку крупного рогатого скота, амфотерицин, бензилпенициллина натриевую соль, канамицина сульфат и дистиллированную воду при заданном содержании компонентов. Изобретение позволяет получить качественную и экономически выгодную питательную среду. 2 табл.
Description
Область техники, к которой относится изобретение
Область биотехнологии, сфера питательных сред, суспензионного культивирования клеток почки сирийского хомячка (ВНК-21).
Уровень техники
Из литературных данных известны прописи питательных сред для суспензионного культивирования клеток:
- среда Купера (Методические рекомендации по работе с клеточными культурами и средами / Под ред. А.А.Сомниной. - Ленинград. - 1975. - С.38-40),
- специальная среда для культивирования клеток ВНК-21 (Голубев Д.Б., Сомнина А.А., Медведева М.Н. Руководство по применению клеточных культур в вирусологии. - Л.: Медицина, 1976. С.19),
- среда Мак-Коя для суспензионного культивирования RPMI-1640 (Животная клетка в культуре (Методы и применение в биотехнологии) / Под ред. проф. Дьяконова Л.П., проф. Ситькова В.И. - М.: Компания Спутник, 2000. С.53-55).
В состав перечисленных питательных сред входят: неорганические соли, аминокислоты, витамины, углеводы. Из указанных аналогов наиболее близким к заявляемому изобретению (прототипом) является среда RPMI-1640 (табл.1).
Состав и количество ингредиентов основных питательных сред, используемых для суспензионного культивирования перевиваемой линии клеток почки сирийского хомячка в сравнении с патентуемой питательной средой
Табл.1 | |||||
Ингредиенты гр/л | Состав сред для суспензионного культивирования клеток | ||||
патентуемая среда | среда Купера | среда по Голубеву Д.Б. | RPMI-1640 | ||
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | |
Соли | |||||
Натрий хлористый - (NaCl) | 8,0 | 5,48 | 6,4 | 6,0 | |
Калий хлористый - (КСl) | 0,4 | 0,5 | 0,4 | 0,4 | |
Магний сернокислый -(MgSO4⋅7H2O) | 0,2 | - | 0,2 | 0,1 | |
Магний хлористый | |||||
(MgCl2⋅6H2O) | - | 0,2 | - | - | |
Натрий фосфорнокислый | |||||
двузамещенный - | |||||
(Na2HPO4⋅12H2O) | 0,15 | - | 0,12 | 1,0 | |
Калий фосфорнокислый | |||||
однозамещенный - (КН2РO4) | 0,06 | - | - | - | |
Кальций хлористый - (СаСl2) | 0,14 | 0,2 | 0,2 | - | |
Натрий двууглекислый - | |||||
(NаHCO3) | 0,35 | 2,5 | 2,75 | 2,0 | |
Нитрат железа | |||||
(Fe(NO3)3⋅7H2O) | - | - | 0,0001 | - | |
Хлорид аммония (NH4Cl) | - | 0,05 | - | - | |
Аминокислоты | |||||
1-аргинин НСl | - | 0,25 | - | - | |
1-аргинин | 0,042 | - | 0,42 | 0,2 | |
1-цистин | 0,032 | - | 0,024 | - | |
1-цистин 2НСl | - | - | - | 0,065 | |
1-глютамин | 0,584 | 0,1 | 0,292 | 0,3 | |
глицин | - | - | - | 0,01 | |
1-гистидин | - | - | 0,016 | - | |
1-изолейцин | - | - | 0,052 | 0,05 | |
1-лейцин | - | - | 0,052 | 0,05 | |
1-лизин НСl | - | - | 0,074 | 0,04 | |
1-метионин | - | 0,1 | 0,015 | 0,015 | |
1-фенилаланин | - | - | 0,033 | 0,015 | |
1-серин | - | - | - | 0,03 | |
1-треонин | - | - | 0,048 | 0,02 | |
1-тирозин | 0,02 | - | 0,036 | 0,02 | |
1-триптофан | 0,015 | - | 0,008 | 0,005 | |
1-валин | - | - | 0,047 | 0,02 | |
аспарагиновая кислота | - | - | - | 0,02 | |
глютаминовая кислота | - | 063 | - | 0,02 | |
1-гидроксипролин | - | - | - | 0,02 | |
1-пролин | - | - | 0,02 | ||
1-аспарагин Н2O | - | - | - | 0,0568 | |
глютацин | - | - | - | 0,001 | |
Витамины | |||||
холин-хлорид | - | 0,001 | 0,002 | 0,003 | |
пантотенат кальция | (В3) | 0,0034 | 0,001 | 0,002 | 0,00025 |
пиридоксаль⋅НСl | 0,0034 | - | 0,002 | - | |
пиридоксаль 5 фосфат | - | 0,001 | - | ||
тиамин | (B1) | 0,0034 | 0,001 | 0,002 | 0,001 |
мезо-инозит | 0,0068 | 0,01 | 0,0036 | 0,035 | |
никотинамид | (B5) | 0,0034 | 0,001 | - | 0,001 |
рибофлавин | (B2) | 0,00034 | 0,0001 | 0,0002 | 0,0002 |
фолиевая кислота | (В9) | 0,0034 | 0,001 | 0,002 | 0,001 |
D-биотин | - | 0,001 | - | 0,0002 | |
дрожжевой экстракт Дифко | - | 0,001 | - | - | |
Витамин В | - | - | - | 0,000005 | |
Антибиотики | |||||
бензилпенициллина натриевая | |||||
соль (ед.) | 1⋅105 | - | - | - | |
канамицина сульфат (ед.) | 1⋅105 | - | - | - | |
амфотерицин (ед.) | 2⋅103 | - | - | - | |
глюкоза | 3,6 | 6,0 | 4,5 | 2,2 | |
гидролизат мышечных белков | |||||
ферментативный сухой | |||||
ТУ 46. 12.20-80 | 1,25 | - | - | - | |
гидролизат лактальбумина | |||||
ферментативный | |||||
N L 0375 по кат.Sigma- | |||||
Aldridh Chemie CMBH | 1,25 | 5,0 | - | - | |
сыворотка кр. рог. скота | 70,0 | 100,0 | - | - | |
феноловый красный | - | 0,01 | 0,015 | 0,053 | |
дистиллированная вода | остальн. | остальн. | остальн. | остальн. |
В представленной таблице к существенным отличительным признакам патентуемой питательной среды относится то, что среда дополнительно содержит гидролизат мышечных белков ферментативный сухой и гидролизат лактальбумина ферментативный и только пять аминокислот вместо 20 аминокислот в прототипе.
Раскрытие изобретения
(1) Сведения, раскрывающие сущность изобретения
(1.1) Сущность изобретения: подобран состав компонентов питательной среды, включающий: гидролизат мышечных белков ферментативный сухой и гидролизат лактальбумина ферментативный; аминокислоты - аргинин, глутамин, тирозин, триптофан и цистин, обеспечивающий накопление клеток при суспензионном культивировании перевиваемой линии ВНК-21 до 3,5⋅106 кл./см3.
(1.2.) Техническим результатом заявляемого изобретения является создание экономически выгодной питательной среды для суспензионного культивирования клеток ВНК-21 в условиях массового биопроизводства при изготовлении культуральных вакцин.
Технический результат достигнут введением в состав питательной среды оптимального количественного соотношения компонентов, представленных в таблице 2.
Состав и количество ингредиентов питательной среды для суспензионного культивирования клеток почки сирийского хомячка (ВНК-21) (патентуемая)
Табл.2 | ||||
N п/п | Наименование компонентов | Количество (гр/л) | Фирма, N серии | |
Соли | ||||
1 | Натрий хлористый - (NaCl) | 8,0 | Россия | 1 |
2 | Калий хлористый - (КСl) | 0,4 | -“- | 23 |
3 | Магний сернокислый - (MgSO4⋅7H2O) |
0,2 | -“- | 9 |
4 | Натрий фосфорнокислый двузамещенный - (Na2HPO4⋅12Н2О) |
0,15 | -“- | 43 |
5 | Калий фосфорнокислый однозамещенный - (КН2РO4) |
0,06 | -“- | 8 |
6 | Кальций хлористый - (СаСl2) | 0,14 | ||
7 | Натрий двууглекислый - (NaHCO3) |
0,35 | -“- | 7 |
Аминокислоты | ||||
8 | 1-аргинин | 0,042 | Sigma | 102K0070 |
9 | 1-глютамин | 0,584 | -“- | 42K0889 |
10 | 1-тирозин | 0,02 | -“- | 78H06822 |
11 | 1-триптофан | 0,015 | -“- | 77H13631 |
12 | 1-цистин | 0,032 | -“- | 39H1091 |
Витамины | ||||
13 | пантотенат кальция (В3) | 0,0034 | -“- | 57H11053 |
14 | пиридоксаль⋅НСl | 0,0034 | -“- | 22K16425 |
15 | тиамин (B1) | 0,0034 | -“- | 20K09406 |
16 | мезо-инозит | 0,0068 | -“- | 12K0110 |
17 | никотинамид (B5) | 0,0034 | -“- | 119H8057 |
18 | рибофлавин (В2) | 0,00034 | -“- | 97H0433 |
19 | фолиевая кислота (В9) | 0,0034 | Индия | |
Антибиотики | ||||
20 | Бензилпенициллина натриевая соль (ед) |
1⋅105 | Россия | 318 |
21 | Канамицина сульфат (ед.) | 1⋅105 | -“- | 01-02 |
22 | Амфотерицин (ед.) | 2⋅103 | -“- | 140601 |
23 | глюкоза | 3,6 | Франция | |
24 | гидролизат мышечных белков ферментативный сухой ТУ 46. 12.20-80 |
1,25 | ФГУП ЩБК | 2-02 |
25 | гидролизат лактальбумина ферментативный |
1,25 | Sigma 11K1259 | |
26 | сыворотка крупного рогатого скота (мл) |
70,0 | ФГУП ЩБК 2-04 | |
27 | дистиллированная вода | остальное |
Осуществление изобретения
Изобретение относится к композиции, в которую входят ингредиенты в соотношениях количества граммов на 1 литр дистиллированной воды, указанных в таблице 2.
Способ получения композиции следующий: навески отдельных компонентов берут, соблюдая правила взвешивания для весов соответствующего класса. Учитывая объем приготавливаемой смеси, допускается взвешивание солей, гидролизатов, глюкозы на весах 3-го класса; навески отдельных аминокислот, витаминов и антибиотиков - на аналитических весах 2-го класса с соблюдением точности до второго знака после запятой.
Процесс приготовления питательной среды заключается в приготовлении солевой основы среды, которой является раствор Хенкса, и растворении в нем антибиотиков, солей, глюкозы, гидролизата мышечных белков ферментативного сухого и гидролизата лактальбумина ферментативного по 1,25 г/л с конечной концентрацией суммы гидролизатов в питательной среде, равной 0,25%, пяти аминокислот, сыворотки, витаминов, бикарбоната натрия.
Растворение компонентов питательной среды ведут в дистиллированной воде, имеющей температуру 35-40°С, при непрерывном перемешивании. В начале растворяют антибиотики и навески солей поочередно NaCl, KCl, MgSO4 7H2O, Na2HPO4 12H2O (развести в горячей воде), KH2PO4 до полного растворения предыдущей навески, вносят навеску глюкозы 3,6 гр/л среды. Дополнительно к механическому перемешиванию осуществляют перемешивание сжатым воздухом, т.е. барботированием в течение 10 минут. После растворения навесок убирают барботирование. В глюкозо-солевой раствор осторожно тонкой струйкой при механическом перемешивании вносят хлористый кальций (CaCl2) в виде 40%-ного раствора и вновь барботируют. Из указанного в табл.2 количества гидролизата мышечных белков ферментативного сухого и гидролизата лактальбумина ферментативного готовят 10%-ный раствор и вносят его в полученный глюкозо-солевой раствор и растворяют в течение 10 минут перемешиванием и барботированием.
Отдельно растворяют аминокислоты. Растворение навесок проводят последовательно согласно прописи питательной среды в таблице 2. L-цистин и l-тирозин растворяют отдельно в небольшом количестве дистиллированной воды при нагревании до кипения с добавлением по каплям концентрированной соляной кислоты (d=1,19) до полного просветления раствора. Сначала растворяют l-цистин, затем l-тирозин. Если при внесении l-тирозина раствор помутнел, необходимо вновь вносить по каплям концентрированную НСl, до полного растворения навески. Вместо l-цистина можно использовать l-цистин НСl и растворять l-цистин НСl просто в кипящей воде.
Все витамины, кроме рибофлавина и фолиевой кислоты, последовательно растворяют в небольшом количестве дистиллированной воды комнатной температуры. При этом каждую последующую навеску растворяют только после полного растворения предыдущей. Рибофлавин и фолиевую кислоту растворяют отдельно в небольшом количестве дистиллированной воды комнатной температуры с добавлением по каплям 20%-ного раствора NaOH до полного растворения навесок. Сначала растворяют рибофлавин, затем фолиевую кислоту, при растворении которой необходимо вновь по каплям вносить 20%-ный р-р NaOH до полного просветления раствора.
В глюкозо-солевой раствор вносят растворы аминокислот, витаминов, сыворотку, натрий двууглекислый и перемешивают. После внесения в среду всех необходимых компонентов добавляют дистиллированную воду до необходимого объема, перемешивают, стерилизуют фильтрацией в реактор для культивирования клеток.
Claims (2)
- Питательная среда для суспензионного культивирования клеток млекопитающих, содержащая натрий хлористый, калий хлористый, магний сернокислый, натрий фосфорнокислый двузамещенный, калий фосфорнокислый однозамещенный, кальций хлористый, натрий двууглекислый, L-аргинин, L-глутамин, L-тирозин, L-триптофан, L-цистин, пантотенат кальция, пиридоксаль НСl, тиамин, мезо-инозит, никотинамид, рибофлавин, фолиевую кислоту, глюкозу, ферментативный гидролизат мышечных белков, ферментативный гидролизат лактальбумина, сыворотку крупного рогатого скота, амфотерицин, бензилпенициллина натриевую соль, канамицина сульфат и дистиллированную воду, при следующем содержании компонентов, г/л:
-
натрий хлористый 8,0 калий хлористый 0,4 магний сернокислый 0,2 натрий фосфорнокислый двузамещенный 0,15 калий фосфорнокислый однозамещенный 0,06 кальций хлористый 0,14 натрий двууглекислый 0,35 L-аргинин 0,042 L-глутамин 0,584 L-тирозин 0,02 L-триптофан 0,015 L-цистин 0,032 пантотенат кальция 0,0034 пиридоксаль НСl 0,0034 тиамин 0,0034 мезо-инозит 0,0068 никотинамид 0,0034 рибофлавин 0,00034 фолиевая кислота 0,0034 глюкоза 3,6 ферментативный гидролизат мышечных белков 1,25 ферментативный гидролизат лактальбумина 1,25 сыворотка крупного рогатого скота 70,0 мл амфотерицин 2⋅103 ед. бензилпеницилина натриевая соль 1⋅105 ед. канамицина сульфат 1⋅105 ед. дистиллированная вода остальное
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2005116304A RU2612355C2 (ru) | 2005-05-31 | 2005-05-31 | Питательная среда для суспензионного культивирования клеток млекопитающих |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2005116304A RU2612355C2 (ru) | 2005-05-31 | 2005-05-31 | Питательная среда для суспензионного культивирования клеток млекопитающих |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2005116304A RU2005116304A (ru) | 2006-12-10 |
RU2612355C2 true RU2612355C2 (ru) | 2017-03-07 |
Family
ID=37665252
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2005116304A RU2612355C2 (ru) | 2005-05-31 | 2005-05-31 | Питательная среда для суспензионного культивирования клеток млекопитающих |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2612355C2 (ru) |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
SU1735360A1 (ru) * | 1989-11-22 | 1992-05-23 | Всесоюзный научно-исследовательский проектно-конструкторский институт прикладной биохимии | Питательна среда дл перевиваемых клеток млекопитающих |
RU2036233C1 (ru) * | 1991-11-27 | 1995-05-27 | Товарищество с ограниченной ответственностью - Научно-внедренческое предприятие "АПТ-Экология" | Питательная среда для выращивания первичных и перевиваемых клеток |
RU2201958C2 (ru) * | 2001-05-08 | 2003-04-10 | Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор" | Сухая стерильная малосывороточная питательная среда для культивирования клеток млекопитающих |
-
2005
- 2005-05-31 RU RU2005116304A patent/RU2612355C2/ru active IP Right Revival
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
SU1735360A1 (ru) * | 1989-11-22 | 1992-05-23 | Всесоюзный научно-исследовательский проектно-конструкторский институт прикладной биохимии | Питательна среда дл перевиваемых клеток млекопитающих |
RU2036233C1 (ru) * | 1991-11-27 | 1995-05-27 | Товарищество с ограниченной ответственностью - Научно-внедренческое предприятие "АПТ-Экология" | Питательная среда для выращивания первичных и перевиваемых клеток |
RU2201958C2 (ru) * | 2001-05-08 | 2003-04-10 | Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор" | Сухая стерильная малосывороточная питательная среда для культивирования клеток млекопитающих |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
Голубев Д.Б., Соминина А.А., Медведева М.Н., Руководство по применению клеточных культур в вирусологии, М, Медицина, 1976, с. 15-21. * |
Под ред. Дьяконова Л.П., Ситькова В.И., Животная клетка в культуре. Методы и. применение в биотехнологии, Спутник, М, 2000, с. 52-55. * |
Под ред. Пинаева Г.П., Методы культивирования клеток. Сборник научных трудов, М, Наука, 1988, с. 47-57. * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
RU2005116304A (ru) | 2006-12-10 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
USRE30985E (en) | Serum-free cell culture media | |
EP0544887B1 (en) | Media concentrate technology | |
CN101760442B (zh) | 适于mdck细胞大规模贴壁培养和单细胞悬浮培养的无血清培养基 | |
Evans et al. | Chemically defined media for cultivation of long-term cell strains from four mammalian species | |
CN109337861B (zh) | 一种支持产物高表达的cho细胞无血清培养基 | |
US6692961B1 (en) | Defined systems for epithelial cell culture and use thereof | |
ES2681993T3 (es) | Método para producir antígenos de Haemophilus influenzae de tipo b | |
CN101988047B (zh) | 一种低成本的昆虫细胞无血清培养基 | |
CA2005494A1 (en) | Cell culture medium for human liver epithelial cell line | |
CN105018416A (zh) | 一种悬浮培养bhk-21细胞的无血清无动物源培养基及其配制方法 | |
US4205126A (en) | Serum-free cell culture media | |
ES2377194T3 (es) | Suplemento de medios de cultivo de gametos y de embriones de mamÃferos y procedimiento de utilización del mismo | |
CN111944741B (zh) | Mdck细胞系的悬浮培养驯化方法 | |
CN105567628B (zh) | 一种全悬浮培养mdck细胞的低血清培养基 | |
JP4972261B2 (ja) | 金属結合化合物および細胞培養培地組成物中でのそれらの使用 | |
CN114107178B (zh) | 一种Vero细胞无血清基础培养基及其制备方法 | |
CN107435037A (zh) | 一种用于bhk细胞的无血清培养基 | |
RU2612355C2 (ru) | Питательная среда для суспензионного культивирования клеток млекопитающих | |
CN101914485A (zh) | 一种无血清大豆蛋白肽动物细胞培养基的配制方法 | |
US4282326A (en) | Cell culture medium supplement | |
US6767741B1 (en) | Metal binding compounds and their use in cell culture medium compositions | |
RU2722671C1 (ru) | BHK-21/SUSP/ARRIAH - перевиваемая суспензионная сублиния клеток почки новорожденного сирийского хомячка, предназначенная для репродукции вирусов ящура, бешенства, парагриппа-3, болезни Ауески при производстве противовирусных вакцин, а также для изготовления диагностических и профилактических ветеринарных биопрепаратов | |
WO1998016629A1 (en) | Defined systems for epithelial cell culture and use thereof | |
CN114540274A (zh) | 无血清培养基及其制备方法和用其培养2bs细胞的方法 | |
RU2703826C1 (ru) | Бессывороточная питательная среда для культивирования клеток MDCK или Vero или вакцинных штаммов вирусов кори или гриппа |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
QB4A | Licence on use of patent |
Effective date: 20080317 |
|
QZ41 | Official registration of changes to a registered agreement (patent) |
Free format text: LICENCE FORMERLY AGREED ON 20080317 Effective date: 20130307 |
|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20150601 |
|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20150601 |
|
NF4A | Reinstatement of patent |
Effective date: 20180605 |