RU2612018C1 - Способ подготовки мазков крови для подсчета ретикулоцитов - Google Patents
Способ подготовки мазков крови для подсчета ретикулоцитов Download PDFInfo
- Publication number
- RU2612018C1 RU2612018C1 RU2015154427A RU2015154427A RU2612018C1 RU 2612018 C1 RU2612018 C1 RU 2612018C1 RU 2015154427 A RU2015154427 A RU 2015154427A RU 2015154427 A RU2015154427 A RU 2015154427A RU 2612018 C1 RU2612018 C1 RU 2612018C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- reticulocytes
- smear
- blood
- counting
- stained
- Prior art date
Links
- 210000001995 reticulocyte Anatomy 0.000 title claims abstract description 48
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 title claims abstract description 40
- 239000008280 blood Substances 0.000 title claims abstract description 40
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 23
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 3
- 238000010186 staining Methods 0.000 claims abstract description 11
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 3
- 239000010432 diamond Substances 0.000 claims description 10
- 229910003460 diamond Inorganic materials 0.000 claims description 9
- 239000000834 fixative Substances 0.000 claims description 6
- 125000000853 cresyl group Chemical group C1(=CC=C(C=C1)C)* 0.000 abstract description 9
- 239000003973 paint Substances 0.000 abstract description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 7
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 7
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 5
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 5
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- XAEFZNCEHLXOMS-UHFFFAOYSA-M potassium benzoate Chemical compound [K+].[O-]C(=O)C1=CC=CC=C1 XAEFZNCEHLXOMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 3
- PIICEJLVQHRZGT-UHFFFAOYSA-N Ethylenediamine Chemical compound NCCN PIICEJLVQHRZGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010241 blood sampling Methods 0.000 description 2
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 2
- 229910000365 copper sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L copper(II) sulfate Chemical compound [Cu+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 208000032467 Aplastic anaemia Diseases 0.000 description 1
- 241000974482 Aricia saepiolus Species 0.000 description 1
- 102100022732 Diacylglycerol kinase beta Human genes 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101001044814 Homo sapiens Diacylglycerol kinase beta Proteins 0.000 description 1
- 230000001133 acceleration Effects 0.000 description 1
- FRTNIYVUDIHXPG-UHFFFAOYSA-N acetic acid;ethane-1,2-diamine Chemical compound CC(O)=O.CC(O)=O.CC(O)=O.CC(O)=O.NCCN FRTNIYVUDIHXPG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IENXJNLJEDMNTE-UHFFFAOYSA-N acetic acid;ethane-1,2-diamine Chemical compound CC(O)=O.NCCN IENXJNLJEDMNTE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 208000001031 fetal erythroblastosis Diseases 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 230000002489 hematologic effect Effects 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 230000000737 periodic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 238000007447 staining method Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/30—Staining; Impregnating ; Fixation; Dehydration; Multistep processes for preparing samples of tissue, cell or nucleic acid material and the like for analysis
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/483—Physical analysis of biological material
- G01N33/487—Physical analysis of biological material of liquid biological material
- G01N33/49—Blood
Abstract
Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, и может использоваться для автоматического подсчета количества ретикулоцитов на анализаторах мазков крови. Сущность изобретения: после первоначального суправитального окрашивания ретикулоцитов бриллиантовым крезиловым синим, мазки дополнительно фиксируют и окрашивают краской - фиксатором Май-Грюнвальда в течение 1 минуты, промывают проточной водой, высушивают и выполняют подсчет ретикулоцитов на автоматическом анализаторе мазков крови. Технический результат: повышение точности и ускорение подсчета ретикулоцитов. 2 ил., 3 пр.
Description
Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, и может использоваться для автоматического подсчета количества ретикулоцитов на анализаторах мазков крови.
Количество и качественный состав ретикулоцитов являются одними из важных показателей, характеризующих эффективность кроветворения, а их подсчет широко используется при проведении массовых профилактических осмотров и регламентируется рядом приказов. Использование автоматических анализаторов мазков крови позволяет автоматизировать оценку клеточного состава мазка крови, окрашенного по Романовскому-Гимза. Однако подсчет ретикулоцитов в таких мазках невозможен, из-за того, что при окраске по Романовскому-Гимза ретикуло-филаментарная субстанция не выявляется.
Известен метод подсчета количества ретикулоцитов после суправитального окрашивания в специально подготовленном мазке крови [Лабораторные методы исследования в клинике: Справочник / Меньшиков В.В., Делкторская Л.Н., Золотницкая Р.П. и др.; Под ред. В.В. Меньшикова. - М.: Медицина, 1987, - 368 с.: ил., стр. 118-119]. Для этого кровь, забранную с антикоагулянтом (этилендиамидтетраацетатом, гепарином или цитратом натрия), смешивают с раствором красителя бриллиантового крезилового синего (бриллиант-крезил блау), смесь инкубируют в течение 30 минут и готовят тонкий мазок. Однако при использовании автоматических анализаторов мазков крови данный способ окраски ретикулоцитов дает неточные результаты подсчета ретикулоцитов. Это связано с тем, что при этом способе окраски эритроциты окрашиваются бледно, в различные оттенки желто-синего цветов, что затрудняет автоматическое распознавание клеток и идентификацию ретикулофиламентарной субстанции, которая также окрашивается в сине-зеленый цвет (фиг. 1).
Технический результат: повышение точности и ускорение подсчета ретикулоцитов.
Указанный результат достигается путем изменения в протоколе окраски и использования автоматических анализаторов мазков крови.
Способ пояснен на фотографиях, где на первой фотографии (фиг. 1) показан результат традиционной окраски ретикулоцитов (прототип); эритроциты окрашены в различные оттенки зеленовато-синего цветов, в двух заметна синяя ретикуло-филиментарная субстанция ретикулоцитов. На другой фотографии продемонстрирован результат использования заявляемого способа подготовки мазка крови: эритроциты окрашены в ярко-красный цвет на фоне которого, ретикуло-филаментарная субстанция ретикулоцитов окрашена в ярко синий цвет (фиг. 2).
Способ осуществляется следующим образом.
У обследуемого забирают кровь с антикоагулянтом, например калиевой солью этилендиаминтетрауксусной кислоты. Выполняют суправитальную окраску ретикулоцитов с помощью бриллиантового крезилового синего (бриллиант-крезил блау). К 0,1 мл цельной крови добавляют 0,4 мл раствора красителя и инкубируют 30 минут. Затем из полученной смеси готовят тонкий мазок. После высыхания мазка, его дополнительно фиксируют и докрашивают краской-фиксатором Май-Грюнвальда. Для этого высушенный мазок помещают на 1 минуту в контейнер с краской-фиксатором, затем извлекают из контейнера и промывают проточной водой. После высушивания препарат исследуют на анализаторах мазков крови, например, Vision Hema® (FIRM MEDICA PRODUCT, Россия). Эритроциты окрашиваются в красный цвет, на фоне которого в ретикулоцитах четко видна синяя ретикуло-филаментарная субстанция (фиг. 2). Собирают и анализируют эритроциты, не менее 1000 штук. Подсчитывают количество эритроцитов, содержащих ретикуло-филаментарную субстанцию по отношению ко всем собранным эритроцитам. Результат выражают в процентах.
Для окраски мазков крови используют следующие растворы:
1) раствор бриллиантового крезилового синего в абсолютном спирте. Для приготовления абсолютного спирта необходимо выдержать 96% этанол в нескольких сменах прокаленного сульфата меди (до прекращения окрашивания порошка безводного сульфата меди в синий цвет). На 100 мл абсолютного спирта берут 1,2 г краски (Медицинские лабораторные технологии и диагностика: Справочник. Медицинские лабораторные технологии / Под редакцией проф. А.И. Карпищенко. - Санкт-Петербург; Интермедика, 2002. - 408 с. С.284).
2) краска-фиксатор Май-Грюнвальда - 1 г сухой краски нужно растворить в 1 л метилового спирта. (Медицинские лабораторные технологии и диагностика: Справочник. Медицинские лабораторные технологии / Под редакцией проф. А.И. Карпищенко. - Санкт-Петербург; Интермедика, 2002. - 408 с. С. 277).
Примеры конкретного выполнения:
Пример 1. Пациент И., 48 лет. Проходил периодический осмотр, как работник нефтеперерабатывающего предприятия. У пациента была забрана кровь с антикоагулянтом (калиевой солью этилендиаминуксусной кислоты) и подготовлены 2 мазка. Ретикулоциты в одном мазке окрашивали традиционным методом, только с использованием бриллиантового крезилового синего. Ретикулоциты во втором мазке окрашивали по предложенному способу. Для этого 0,1 мл крови смешивали с раствором бриллиантового крезилового синего и инкубировали 30 минут. Затем делали тонкий мазок крови. После высыхания мазок крови дополнительно фиксировали и окрашивали, погружая его в краску-фиксатор Май-Грюнвальда. В мазках определяли количество ретикулоцитов на анализаторе мазков крови Vision Hema® Pro (FIRM MEDICA PRODUCT, Россия) и ручным методом под световым микроскопом (Meiji, Япония).
Количество ретикулоцитов, подсчитанных на анализаторе мазков крови при традиционной окраске составило 1,5%, что превысило референсный диапазон нормы, а в мазке, окрашенном предложенным способом, составило - 0,9%, что соответствует нормальным значениям для взрослого человека. При ручном подсчете ретикулоцитов их количество в этих же мазках составило 0,8% и 0,9%, соответственно. Это указывает на повышение точности подсчета на анализаторах мазков крови при использовании предложенного способа подготовки мазков. При этом скорость исследования ретикулоцитов на анализаторе мазков крови составила 48 и 54 секунды, в то время как на ручной подсчет ретикулоцитов затрачивалось 270 и 238 секунд.
Таким образом, данный пример демонстрирует, что предложенная окраска ретикулоцитов при использовании анализаторов мазков крови ведет к увеличению точности результатов и ускорению подсчета ретикулоцитов.
Пример 2. Пациентка З. Госпитализирована в гематологическое отделение КМСЧ 1 г. Перми с диагнозом апластическая анемия. В рамках протокола обследования выполнен подсчет ретикулоцитов. У пациентки был выполнен забор крови с антикоагулянтом (калиевой солью этилендиаминуксусной кислоты) и подготовлены 2 мазка. Ретикулоциты в одном мазке окрашивали традиционным методом, только с использованием бриллиантового крезилового синего. Ретикулоциты во втором мазке окрашивали по предложенному способу. Для этого 0,1 мл крови смешивали с раствором бриллиантового крезилового синего и инкубировали 30 минут. Затем делали тонкий мазок крови. После высыхания мазок крови дополнительно фиксировали и окрашивали, погружая его в краску-фиксатор Май-Грюнвальда. В мазках определяли количество ретикулоцитов на анализаторе мазков крови Vision Hema® Pro (FIRM MEDICA PRODUCT, Россия) и ручным методом под световым микроскопом (Meiji, Япония).
Количество ретикулоцитов, подсчитанное на анализаторе мазков крови в мазке, окрашенном традиционно, составило 0,3%, в мазке, окрашенном модифицированным способом - 0,2%. При ручном подсчете результат 0,2% и 0,2%. При этом скорость подсчета ретикулоцитов на анализаторе мазков крови составила 58 и 52 секунды, в то время как на ручной подсчет ретикулоцитов затрачивалось 302 и 338 секунд.
В данном случае из-за низкого содержания ретикулоцитов существенных различий в результатах не обнаружено, однако, обращает внимание несколько завышенный результат, полученный на анализаторе мазков крови при исследовании мазка окрашенного обычным способом. Так же, как в предшествующем примере, продемонстрировано значительное (почти в 5 раза ускорение подсчета ретикулоцитов).
Пример 3. Пациент К. Госпитализирована в отделение патологии новорожденных ДГКБ №13 г. Перми с диагнозом гемолитическая болезнь новорожденных. В рамках протокола обследования выполнен подсчет OAK с подсчетом ретикулоцитов. У пациента была выполнен забор крови с антикоагулянтом (калиевой солью этилендиаминуксусной кислоты) и подготовлены 2 мазка. Ретикулоциты в одном мазке окрашивали традиционным методом, только с использованием бриллиантового крезилового синего. Ретикулоциты во втором мазке окрашивали предложенным способом. Для этого 0,1 мл крови, смешивали с раствором бриллиантовым крезиловым синим и инкубировали 30 минут. Затем делали тонкий мазок крови. После высыхания мазок крови дополнительно фиксировали и окрашивали, погружая его в краску-фиксатор Май-Грюнвальда. В мазках определяли количество ретикулоцитов на анализаторе мазков крови Vision Hema® Pro (FIRM MEDICA PRODUCT, Россия) и ручным методом под световым микроскопом (Meiji, Япония).
Количество ретикулоцитов, подсчитанное на анализаторе мазков крови в мазке, окрашенном традиционно, составило 30,3%, в мазке, окрашенном модифицированным способом, - 21,2%. При ручном подсчете результат 20,6% и 22,4%. При этом скорость подсчета ретикулоцитов на анализаторе мазков крови составила 52 и 51 секунды, в то время как на ручной подсчет ретикулоцитов затрачивалось 298 и 304 секунд.
На данном примере продемонстрировано снижение точности подсчета ретикулоцитов на анализаторах мазков крови в стеклопрепаратах, окрашенных традиционным методом, особенно при высоком содержании ретикулоцитов. Использование нового способа окраски мазков привело к практически полному совпадению результатов подсчета ретикулоцитов на автоматическом анализаторе и ручным способом, при этом скорость подсчета ретикулоцитов увеличилась более чем в 5 раз.
Claims (1)
- Способ подготовки мазков крови для подсчета ретикулоцитов путем суправитального окрашивания ретикулоцитов бриллиантовым крезиловым синим, отличающийся тем, что после окрашивания бриллиантовым крезиловым синим мазки дополнительно фиксируют и окрашивают краской - фиксатором Май-Грюнвальда в течение 1 минуты, промывают проточной водой, высушивают и выполняют подсчет ретикулоцитов на автоматическом анализаторе мазков крови.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2015154427A RU2612018C1 (ru) | 2015-12-17 | 2015-12-17 | Способ подготовки мазков крови для подсчета ретикулоцитов |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2015154427A RU2612018C1 (ru) | 2015-12-17 | 2015-12-17 | Способ подготовки мазков крови для подсчета ретикулоцитов |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2612018C1 true RU2612018C1 (ru) | 2017-03-01 |
Family
ID=58459130
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2015154427A RU2612018C1 (ru) | 2015-12-17 | 2015-12-17 | Способ подготовки мазков крови для подсчета ретикулоцитов |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2612018C1 (ru) |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SU84379A1 (ru) * | 1950-02-01 | 1950-11-30 | Н.Г. Алексеев | Способ окраски форменных элементов крови |
| US4193980A (en) * | 1978-01-05 | 1980-03-18 | Corning Glass Works | Dry preparation for reticulocyte staining |
| US4707451A (en) * | 1985-09-18 | 1987-11-17 | Becton, Dickinson And Company | Detection of reticulocytes |
| RU2224235C2 (ru) * | 2002-05-06 | 2004-02-20 | Белгородский государственный университет | Способ визуализации форменных элементов крови птиц на одном мазке |
-
2015
- 2015-12-17 RU RU2015154427A patent/RU2612018C1/ru active IP Right Revival
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SU84379A1 (ru) * | 1950-02-01 | 1950-11-30 | Н.Г. Алексеев | Способ окраски форменных элементов крови |
| US4193980A (en) * | 1978-01-05 | 1980-03-18 | Corning Glass Works | Dry preparation for reticulocyte staining |
| US4707451A (en) * | 1985-09-18 | 1987-11-17 | Becton, Dickinson And Company | Detection of reticulocytes |
| RU2224235C2 (ru) * | 2002-05-06 | 2004-02-20 | Белгородский государственный университет | Способ визуализации форменных элементов крови птиц на одном мазке |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0179107B1 (en) | Metachromatic dye sorption means for differential determination of sub-populations of lymphocytes | |
| JPH027427B2 (ru) | ||
| GB2095402A (en) | Metachromatic dye sorption means for differential determination of developmental stages of neutrophilic granulocytic cells and other leukocytes | |
| US3884579A (en) | Method for counting blood platelets | |
| DE3304795A1 (de) | Verfahren zur differentiellen bestimmung der entwicklungsstufen neutrophiler, granulozytischer zellen und anderer leukozyten mittels metachromatischer frabstoffadsorption und einer fluoreszenzlicht-emissionseinrichtung | |
| CN105548321A (zh) | 一种鉴别中蜂蜂蜜和意蜂蜂蜜的方法 | |
| CN109612807A (zh) | 一种尿液有形成分染色液 | |
| Adewoyin et al. | Erythrocyte morphology and its disorders | |
| RU2612018C1 (ru) | Способ подготовки мазков крови для подсчета ретикулоцитов | |
| Sareen et al. | Incubation and its effect on Leishman stain | |
| RU2484465C1 (ru) | Способ определения степени агрегации клеток крови | |
| CN109439624A (zh) | 一种用于识别或富集有核红细胞的方法 | |
| JP2022059586A (ja) | 光学顕微鏡法を用いた染色された網状赤血球の成熟度分類 | |
| CN109142761B (zh) | 网织红细胞模拟物及其制备方法与应用 | |
| Du et al. | A low-cost, accurate method for detecting reticulocytes at different maturation stages based on changes in the mitochondrial membrane potential | |
| CN112639467B (zh) | 血小板模拟粒子及其制备方法以及含该模拟粒子的质控物或校准物 | |
| RU2224235C2 (ru) | Способ визуализации форменных элементов крови птиц на одном мазке | |
| Clayton Jr et al. | New stain for fetal erythrocytes in peripheral blood smears | |
| RU2617237C2 (ru) | Способ получения препаратов изолированных клеток дермы | |
| Narasimha et al. | Anticoagulant induced artefacts in peripheral blood smears | |
| Powell | Anaemia: its many colours | |
| KNOTT | MEGALOCYTOSIS: A SIMPLIFIED METHOD OF DETECTION | |
| RU2231979C2 (ru) | Способ количественной цитологической оценки эффективности сперматогенеза | |
| RU1789927C (ru) | Способ иммунодиагностики инфекции | |
| Liu et al. | To Reduce the Hemocytometer Measurement Uncertainty of White Blood Cell Count by the Double Staining of Cell Nucleus |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20181218 |
|
| NF4A | Reinstatement of patent |
Effective date: 20210625 |