RU2484465C1 - Способ определения степени агрегации клеток крови - Google Patents
Способ определения степени агрегации клеток крови Download PDFInfo
- Publication number
- RU2484465C1 RU2484465C1 RU2012109442/15A RU2012109442A RU2484465C1 RU 2484465 C1 RU2484465 C1 RU 2484465C1 RU 2012109442/15 A RU2012109442/15 A RU 2012109442/15A RU 2012109442 A RU2012109442 A RU 2012109442A RU 2484465 C1 RU2484465 C1 RU 2484465C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- aggregation
- blood cells
- blood
- time
- degree
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Изобретение относится к медицине и биологии и может быть использовано для оценки изменений агрегатного состояния клеток крови. Сущность способа: получают препарат клеток крови и определяют степень агрегации клеток крови в зависимости от оптических свойств препарата, производится микросъемка препарата крови в момент времени t1 вблизи начала агрегации клеток крови и в момент времени t2 вблизи окончания агрегации клеток крови. Затем распознаются на микроснимках единичные клетки крови, и степень агрегации клеток крови определяется по формуле A=1-N/K, где А - степень агрегации крови, N - количество единичных клеток крови на снимке, полученном в момент времени t2, К - количество единичных клеток крови на снимке, полученном в момент времени t1. Изобретение обеспечивает повышение производительности и точности определения степени агрегации клеток крови, что дает возможность диагностики расстройств микроциркуляции крови при различных заболеваниях и патологических состояниях. 2 ил.
Description
Изобретение относится к медицине и биологии и может быть использовано для оценки изменений агрегатного состояния клеток крови и точной диагностики расстройств микроциркуляции крови при различных заболеваниях и патологических состояниях.
Известен способ определения агрегации эритроцитов на основе оценки скорости оседания эритроцитов (СОЭ). Способ заключается в сравнении уровня свободно осевших клеток, в вертикально установленном капилляре с кровью в течение 2 часов и принудительно осажденных эритроцитов крови путем их центрифугирования в течение 20 минут при 3000 об/мин [1].
Был предложен новый вариант оценки агрегации эритроцитов на основе исследования микроскопической картины оседания эритроцитов в гематокритном капилляре, с регистрацией скорости оседания клеток [2]. Однако круглое сечение капиллярной трубки не позволяет точно сфокусировать изображение клеток или их агрегатов. Кроме того, на скорость оседания эритроцитов и в этом случае существенно сказывается разная вязкость среды (плазмы) и концентрация эритроцитов (их гематокрит). Следовательно, точность определения агрегации эритроцитов этим методом будет заметно ограничена.
Общим существенным недостатком вариантов метода СОЭ для анализа агрегации эритроцитов является то, что скорость оседания клеток сильно зависит от плотности среды (вязкости плазмы) и от концентрации клеток (гематокрита), и в меньшей степени от объединения клеток в комплексы-агрегаты. Вследствие чего точность и достоверность метода вызывает сомнение.
Также известен способ измерения степени агрегации эритроцитов на основе оценки светопропускания через пробу цельной крови или суспензии эритроцитов в агрегирующей среде [3]. Способ основан на измерении интенсивности светопропускания в зависимости от агрегатного состояния крови. Интенсивная агрегация в образце крови характеризуется более высокой интенсивностью прохождения света через образец крови и наоборот.
Фотометрический метод является наиболее распространенным для исследования агрегационных свойств эритроцитов. С помощью этого метода возможна количественная оценка агрегатного состояния крови - размеров и плотности микроагрегатов эритроцитов.
Интенсивность света, прошедшего через слой суспензии эритроцитов, изменяется в соответствии с их агрегатным состоянием, которое характеризуется размерами и плотностью образующихся агрегатов. Возможности измерения прозрачности крови практически ограничены слоями толщиной 2-3 мм. Так как исследуемая проба крови представляет собой суспензию взвешенных эритроцитов, то на интенсивность прошедшего светового потока будут оказывать большое влияние рассеивающие свойства агрегатов эритроцитов. Кроме этого при измерении в суспензии взвешенных эритроцитов интенсивность прошедшего светового потока зависит не только от размеров и формы эритроцитов, но и от их объемной концентрации и функционального состояния гемоглобина. В связи с этим более широкое применение получили методы исследования суспензии эритроцитов в отраженном световом потоке.
Для изучения агрегации эритроцитов применяют метод «силлектрометрии», сущность которого состоит в уменьшении светорассеивания после прекращения перемешивания в процессе дезагрегации-агрегации клеток [4].
Разновидностью способа оценки агрегации при светопропускании является пьезодинамическая агрегатометрия [5]. В поле зрения микроскопа со встроенным фоторезистором располагается предметное стекло с наклеенным на расстоянии 3 диаметров эритроцита покровным стеклом. На покровном стекле жестко закреплен пьезокристалл, питаемый от звукового генератора. В полость между стеклами вводится проба гепаринизированной цельной крови. По мере увеличения напряжения звукового генератора возрастает мощность колебания верхнего стекла, и агрегаты начинают разрушаться. Соответственно меняются экстинция и сигнал с фоторезистора. По достижении полной дезагрегации и выход кривой, регистрируемой самописцем, на плато, напряжение сбрасывается и регистрируется процесс спонтанной агрегации.
Недостатком способа светопропускания является невозможность дифференцировать истинные агрегаты от простого оптического сближения клеток. Также невозможно корректно определить агрегацию эритроцитов при низких величинах гематокрита (Hct>35%), что снижает степень достоверности полученного результата.
Наиболее близки к заявленному является способ определения агрегации эритроцитов путем прямой микроскопии разбавленной (1:200) суспензии эритроцитов в собственной плазме или декстране [6]. Способ заключается в приготовлении суспензии эритроцитов, помещении ее в счетную камеру Горяева, и под микроскопом подсчитываются отдельно неагрегированные клетки и агрегаты эритроцитов. Рассчитывается индекс агрегации эритроцитов как отношение числа агрегатов к числу неагрегированных эритроцитов.
Основным недостатком способа является то, что при ручном подсчете клеток и агрегатов процесс агрегатообразования в счетной камере продолжается, и их число изменяется в разных местах камеры непредсказуемо, что влечет за собой большие ошибки в определении уровня агрегации в целом. Кроме того, в данном способе увеличение размеров агрегатов существенно скажется на итоговом результате.
Способ очень трудоемок и требует значительных затрат времени и опытного персонала для адекватной обработки микроскопической картины агрегации.
Целью изобретения является повышение производительности и точности определения степени агрегации клеток крови.
Поставленная цель достигается тем, что в способе определения степени агрегации клеток крови получают препарат клеток крови и определяют степень агрегации клеток крови в зависимости от оптических свойств препарата.
Новым является то, что производится микросъемка препарата крови в момент времени t1 вблизи начала агрегации клеток крови и в момент времени t2 вблизи окончания агрегации клеток крови. Затем распознаются на микроснимках единичные клетки крови, и степень агрегации клеток крови определяется по формуле А=1-N/K, где А - степень агрегации крови, N -количество единичных клеток крови на снимке, полученном в момент времени t2, K - количество единичных клеток крови на снимке, полученном в момент времени t1.
Способ может быть реализован с помощью устройства, включающего, например, микрокамеру для съемки препарата крови, микроскоп, оборудованный цифровым окуляром и компьютер.
Реализация способа осуществляется следующим образом. Известным способом приготавливается препарат крови и фиксируется начало момента времени t0. Препарат крови помещается на предметный столик микроскопа и в момент времени близкий к началу агрегации крови t1, например спустя 60 сек после момента приготовления препарата t0, получают цифровой снимок. Затем в момент времени t2, близкий к моменту завершения агрегации, например спустя 180 сек после приготовления препарата крови, производят второй снимок. На полученных снимках осуществляют распознавание единичных клеток крови. Распознавание единичных клеток крови наиболее простая задача потому, что форма и размеры единичной клетки известны. Подсчитывается количество единичных клеток на снимках полученных в моменты времени t1 и t2. Очевидно, что из всех единичных клеток крови, зарегистрированных в момент времени t1, количество которых обозначим K, к моменту времени t2 останется не образовавших агрегаты N единичных клеток крови. Поэтому для определения степени агрегации клеток крови предлагается формула
А=1-N/K,
где А - степень агрегации клеток крови,
N - количество единичных клеток в момент времени t2,
K - количество единичных клеток в момент времени t1.
На фиг.1 представлен микроснимок препарата крови (для определения степени агрегации эритроцитов) в момент времени t1.
На фиг.2 представлен микроснимок препарата крови (для определения степени агрегации эритроцитов) в момент времени t2.
Количество единичных эритроцитов на фиг.1 K=65, количество единичных эритроцитов на фиг.2 N=24. Подставляя значения K и N в формулу, получаем значение степени агрегации клеток крови А.
А=1-24/65=0,63.
Компьютерная обработка полученных микроснимков крови позволяет полностью автоматизировать весь процесс и реализовать его в короткое время.
Преимущество данного метода заключается в повышении точности, оперативности и производительности, за счет сокращения времени анализа, определения степени агрегации клеток крови при компьютерном анализе изображения процесса агрегации.
Литература
1. Dintenfass L., Elevation of plasma viscosity and aggregation of red blood cells in melanoma metastasis // Biorheoloigy. - 1978. - Vol.15. - 99-106.
2. Baskurt O.K. Uyuklu M., Sebahat O., Meiselman H.J. Measurement of red blood cell aggregation in disposable capillary tubes. Clinical Hemorheol. and Microcirculation. - 2011. - Vol.47. - 295-305.
3. Левтов B.A., Левкович Ю.И., Потапова И.В. и др. Об исследовании агрегационных свойств крови // Физиология человека. - 1978. - №3. - С.504-513.
4. Schmid-Schönbein Н., Barcard В., Hilbrand Е. Erythrocyte aggregation: causes, consequences and methods of assesment // Tijdschr. NVKC. - 1990 - Vol.15. - P.88-97.
5. Тухватуллин P.T., Левтов B.A., Шуваева B.H. Агрегация эритроцитов в крови, помещенной в макро- и микрокюветы // Физиол. журнал. - 1986. - Т.72. - №6. - С.775-7784.
6. Селезнев С.А., Вашетина С.М., Музаркевич Г.Е. Комплексная оценка кровообращения в экспериментальной патологии. - Л.: Медицина, 1976. - 207 с.
Claims (1)
- Способ определения степени агрегации клеток крови, заключающийся в получении препарата клеток крови и определении степени агрегации клеток крови в зависимости от оптических свойств препарата, отличающийся тем, что производится микросъемка препарата крови в момент времени t1 вблизи начала агрегации клеток крови и в момент времени t2 вблизи окончания агрегации клеток крови, распознаются на микроснимках единичные клетки крови, и степень агрегации клеток крови определяется по формуле 1-N/К, где N - количество единичных клеток крови на снимке, полученном в момент времени t2, К - количество единичных клеток крови на снимке, полученном в момент времени t1.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2012109442/15A RU2484465C1 (ru) | 2012-03-12 | 2012-03-12 | Способ определения степени агрегации клеток крови |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2012109442/15A RU2484465C1 (ru) | 2012-03-12 | 2012-03-12 | Способ определения степени агрегации клеток крови |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2484465C1 true RU2484465C1 (ru) | 2013-06-10 |
Family
ID=48785813
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2012109442/15A RU2484465C1 (ru) | 2012-03-12 | 2012-03-12 | Способ определения степени агрегации клеток крови |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2484465C1 (ru) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2590985C2 (ru) * | 2014-08-19 | 2016-07-10 | Федеральное Государственное Бюджетное Образовательное Учреждение Высшего Профессионального Образования "Нижегородская Государственная Сельскохозяйственная Академия (ФГБОУ ВПО НГСХА) | Способ оценки агрегатного состояния эритроцитов в аутологичной сыворотке крови |
| RU2605843C2 (ru) * | 2015-03-30 | 2016-12-27 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Нижегородская государственная сельскохозяйственная академия" (ФГБОУ ВПО НГСХА) | Способ микроскопической оценки агрегатного состояния эритроцитов в аутоплазме |
| RU2691388C2 (ru) * | 2016-06-10 | 2019-06-13 | Федеральное Государственное Бюджетное Образовательное Учреждение Высшего Образования "Нижегородская Государственная Сельскохозяйственная Академия" (ФГБОУ ВО НГСХА) | Способ оценки изменения размеров агрегатов эритроцитов |
| RU2704969C1 (ru) * | 2018-07-09 | 2019-11-01 | Федеральное Государственное Бюджетное Образовательное Учреждение Высшего Образования "Нижегородская Государственная Сельскохозяйственная Академия" (ФГБОУ ВО НГСХА) | Способ морфологической оценки агрегации эритроцитов, индуцированной высокомолекулярными полимерами |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2319965C1 (ru) * | 2006-11-27 | 2008-03-20 | Государственное учреждение Московский областной научно-исследовательский клинический институт им. М.Ф. Владимирского (МОНИКИ им. М.Ф. Владимирского) | Способ определения степени нарушения агрегатного состояния крови при воспалительных процессах у детей |
| RU2336525C2 (ru) * | 2006-09-08 | 2008-10-20 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования Российский государственный медицинский университет Министерства здравоохранения Российской Федерации | Способ определения агрегации тромбоцитов в плазме крови и времени ее коагуляции |
| RU2447450C2 (ru) * | 2009-12-07 | 2012-04-10 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Ивановская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию" | Способ оценки степени тяжести нарушения агрегации эритроцитов |
-
2012
- 2012-03-12 RU RU2012109442/15A patent/RU2484465C1/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2336525C2 (ru) * | 2006-09-08 | 2008-10-20 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования Российский государственный медицинский университет Министерства здравоохранения Российской Федерации | Способ определения агрегации тромбоцитов в плазме крови и времени ее коагуляции |
| RU2319965C1 (ru) * | 2006-11-27 | 2008-03-20 | Государственное учреждение Московский областной научно-исследовательский клинический институт им. М.Ф. Владимирского (МОНИКИ им. М.Ф. Владимирского) | Способ определения степени нарушения агрегатного состояния крови при воспалительных процессах у детей |
| RU2447450C2 (ru) * | 2009-12-07 | 2012-04-10 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Ивановская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию" | Способ оценки степени тяжести нарушения агрегации эритроцитов |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| ЛИСЕНКО О.С. Гемосканирование - новое в диагностике или скрытое мошенничество? Автореф. дисс. - Луганск, 2010. Найдено в Google: bibliofond.ru/view.aspx?id=136492. * |
| СЕЛЕЗНЕВ С.А. Комплексная оценка кровообращения в экспериментальной патологии. - Л.: Медицина, 1976, 207 с. * |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2590985C2 (ru) * | 2014-08-19 | 2016-07-10 | Федеральное Государственное Бюджетное Образовательное Учреждение Высшего Профессионального Образования "Нижегородская Государственная Сельскохозяйственная Академия (ФГБОУ ВПО НГСХА) | Способ оценки агрегатного состояния эритроцитов в аутологичной сыворотке крови |
| RU2605843C2 (ru) * | 2015-03-30 | 2016-12-27 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Нижегородская государственная сельскохозяйственная академия" (ФГБОУ ВПО НГСХА) | Способ микроскопической оценки агрегатного состояния эритроцитов в аутоплазме |
| RU2691388C2 (ru) * | 2016-06-10 | 2019-06-13 | Федеральное Государственное Бюджетное Образовательное Учреждение Высшего Образования "Нижегородская Государственная Сельскохозяйственная Академия" (ФГБОУ ВО НГСХА) | Способ оценки изменения размеров агрегатов эритроцитов |
| RU2704969C1 (ru) * | 2018-07-09 | 2019-11-01 | Федеральное Государственное Бюджетное Образовательное Учреждение Высшего Образования "Нижегородская Государственная Сельскохозяйственная Академия" (ФГБОУ ВО НГСХА) | Способ морфологической оценки агрегации эритроцитов, индуцированной высокомолекулярными полимерами |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2484465C1 (ru) | Способ определения степени агрегации клеток крови | |
| Lazareva et al. | Blood refractive index modelling in the visible and near infrared spectral regions | |
| Treeby et al. | Measurement of the ultrasound attenuation and dispersion in whole human blood and its components from 0–70 MHz | |
| Nedosekin et al. | Photoacoustic and photothermal detection of circulating tumor cells, bacteria and nanoparticles in cerebrospinal fluid in vivo and ex vivo | |
| Golan et al. | Noninvasive imaging of flowing blood cells using label-free spectrally encoded flow cytometry | |
| KR102149318B1 (ko) | 소량 응집 검정 | |
| EP3462170A1 (en) | Specific malaria detection with digital holographic microscopy | |
| Wiegmann et al. | Influence of standard laboratory procedures on measures of erythrocyte damage | |
| CA2912270A1 (en) | Quantifying neutrophil concentration in blood | |
| Caimi et al. | Techniques to evaluate erythrocyte deformability in diabetes mellitus | |
| Paul et al. | Quantitative absorption imaging of red blood cells to determine physical and mechanical properties | |
| JP2018509954A (ja) | 循環細胞バイオマーカーのｉｎ ｖｉｖｏ捕捉のための微小デバイス | |
| Popov et al. | Glucose sensing in flowing blood and intralipid by laser pulse time-of-flight and optical coherence tomography techniques | |
| RU2379687C2 (ru) | Способ определения динамики оседания клеток крови | |
| Mantskava et al. | Hemorheological disorders in patients with type 1 or 2 diabetes mellitus and foot gangrene | |
| Stephen et al. | Analytical comparison between microhematocrit and automated methods for packed cell volume (PCV) determination | |
| ITFI20110078A1 (it) | Metodo per la determinazione di analiti nel plasma diluito ottenuto da sangue intero, e dispositivo atto a realizzarlo | |
| Kellerer et al. | Two-photon microscopy of acoustofluidic trapping for highly sensitive cell analysis | |
| RU2722898C1 (ru) | Способ выявления патологических изменений в структурных элементах мембран эритроцитов | |
| Can et al. | Modeling diffuse reflectance spectra of donated blood with their hematological parameters | |
| Sumathi et al. | To Investigate the Refractive Index of Blood Plasma Suspended in Various Tonicity Solutions | |
| US20100272651A1 (en) | Method for assessing potential for tumor development and metastasis | |
| US20240201068A1 (en) | System for dissociation of solid biopsy and a method for inspection | |
| TWI846041B (zh) | 游移細胞之偵測系統及方法 | |
| RU2605843C2 (ru) | Способ микроскопической оценки агрегатного состояния эритроцитов в аутоплазме |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20170313 |