RU2691388C2 - Способ оценки изменения размеров агрегатов эритроцитов - Google Patents
Способ оценки изменения размеров агрегатов эритроцитов Download PDFInfo
- Publication number
- RU2691388C2 RU2691388C2 RU2016123312A RU2016123312A RU2691388C2 RU 2691388 C2 RU2691388 C2 RU 2691388C2 RU 2016123312 A RU2016123312 A RU 2016123312A RU 2016123312 A RU2016123312 A RU 2016123312A RU 2691388 C2 RU2691388 C2 RU 2691388C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- aggregation
- aggregates
- erythrocyte
- erythrocytes
- size
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 18
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 56
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 claims abstract description 49
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 claims abstract description 49
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 claims abstract description 12
- 239000000411 inducer Substances 0.000 claims abstract description 9
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims abstract description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims abstract description 4
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 claims description 5
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 abstract description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 2
- 238000011835 investigation Methods 0.000 abstract 1
- 238000011005 laboratory method Methods 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 7
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 5
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 4
- 210000003617 erythrocyte membrane Anatomy 0.000 description 4
- ICAKDTKJOYSXGC-UHFFFAOYSA-K lanthanum(iii) chloride Chemical compound Cl[La](Cl)Cl ICAKDTKJOYSXGC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 4
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010009900 Colitis ulcerative Diseases 0.000 description 3
- 201000006704 Ulcerative Colitis Diseases 0.000 description 3
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 3
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L zinc dichloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Zn+2] JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- DPKHZNPWBDQZCN-UHFFFAOYSA-N acridine orange free base Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC2=NC3=CC(N(C)C)=CC=C3C=C21 DPKHZNPWBDQZCN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N benzoquinolinylidene Natural products C1=CC=CC2=CC3=CC=CC=C3N=C21 DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 1
- RBTARNINKXHZNM-UHFFFAOYSA-K iron trichloride Chemical compound Cl[Fe](Cl)Cl RBTARNINKXHZNM-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229910052746 lanthanum Inorganic materials 0.000 description 1
- FZLIPJUXYLNCLC-UHFFFAOYSA-N lanthanum atom Chemical compound [La] FZLIPJUXYLNCLC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OXNIZHLAWKMVMX-UHFFFAOYSA-N picric acid Chemical compound OC1=C([N+]([O-])=O)C=C([N+]([O-])=O)C=C1[N+]([O-])=O OXNIZHLAWKMVMX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000011592 zinc chloride Substances 0.000 description 1
- 235000005074 zinc chloride Nutrition 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторным методам исследования, и раскрывает способ одновременной оценки агрегационной способности эритроцитов и размеров их агрегатов. Способ характеризуется тем, что эритроциты выделяют из крови, помещают в кювету для изучения агрегации клеток, добавляют индуктор агрегации, после достижения максимальной степени агрегации прекращают перемешивание агрегатов эритроцитов, проводят запись оседания их агрегатов и регистрируют максимальную амплитуду агрегации эритроцитов и скорость оседания агрегатов эритроцитов, с помощью которых выносят суждение об агрегационной способности и изменении размеров агрегатов эритроцитов. 1 ил., 2 пр.
Description
Способ одновременной оценки агрегационной способности эритроцитов и размеров их агрегатов
Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для одновременной оценки агрегационной способности эритроцитов и размеров их агрегатов.
Известны способы оценки агрегационной способности эритроцитов при использовании в качестве индукторов агрегации хлористого лантана (Шереметьев Ю.А., Суслов Ф.Ю. Способ оценки изменения состояния мембран эритроцитов. Пат. 2082968 РФ, 1997), пикриновой кислоты (Шереметьев Ю.А., Шереметьева А.В., Успенский А.Н. Способ оценки изменения состояния мембран эритроцитов. 2238556 РФ, 2004), катионного красителя акридинового оранжевого (Шереметьев Ю.А., Шереметьева А.В. Способ оценки агрегационной способности эритроцитов. Пат. 2390778 РФ, 2010), хлористого цинка (Шереметьев Ю.А., Левин Г.Я., Поповичева А.Н. Способ оценки агрегационной способности эритроцитов. Пат.2452958 РФ, 2012) и трихлорида железа (Шереметьев Ю.А., Поповичева А.Н., Успенский А.Н., Левин Г.Я. Способ оценки агрегационной способности эритроцитов. Пат. 2667009 РФ, 2018).
Для изучения агрегации эритроцитов в кювету агрегометра с суспензией клеток добавляют индуктор агрегации и при постоянном перемешивании регистрируют максимальную степень агрегации эритроцитов (максимальная амплитуда агрегатограммы).
В то же время важным показателем агрегации является оценка размеров агрегатов эритроцитов. При этом определение размеров агрегатов проводят путем подсчета количества эритроцитов, вовлеченных в их агрегаты. Это относится к агрегации эритроцитов в виде «монетных столбиков» в аутологичной плазме крови.
Однако в агрегатах эритроцитов, полученных после добавления индукторов агрегации, очень трудно подсчитать количество клеток, так как агрегаты представляют собой глыбчатые структуры.
Поэтому задача создания способов одновременной оценки агрегационной способности эритроцитов и размеров их агрегатов является актуальной.
За прототип взят "Способ оценки изменения состояния мембран эритроцитов" (патент RU 2082968, 1997), включающий выделение эритроцитов из крови и регистрацию их агрегации, с использованием хлористого лантана в качестве индуктора агрегации эритроцитов. Перемешивание суспензии осуществляют с помощью электромеханической мешалки. Процесс агрегации регистрируется фотоколориметрически с записью на самописец в виде агрегатограммы. Об изменении состояния мембран эритроцитов судят по степени их агрегации в сравнении с контролем.
Однако этот способ не позволяет провести одновременную оценку агрегационной способности эритроцитов и размеров их агрегатов.
Задачей предлагаемого изобретения является одновременное определение агрегационной способности эритроцитов и размеров их агрегатов. При этом агрегация эритроцитов стимулируется различными индукторами.
Поставленная задача достигается тем, что предлагаемый способ одновременной оценки агрегационной способности эритроцитов и размеров их агрегатов включает выделение эритроцитов из крови, регистрацию максимальной степени их агрегации, стимулированной индукторами, прекращение перемешивания агрегатов эритроцитов после достижения максимальной амплитуды их агрегации, проведение записи оседания агрегатов эритроцитов и оценка скорости их оседания. По максимальной амплитуде агрегации и скорости оседания агрегатов эритроцитов судят об агрегационной способности и размерах их агрегатов.
Предлагаемый способ осуществляют следующим образом. Эритроциты трижды отмывают от плазмы и белых клеток центрифугированием в 10-кратном объеме физиологического раствора. Отмытые эритроциты ресуспендируют в соотношении 1:200 в забуференном физиологическом растворе (10 мМ трис-HCI, 150 мМ NaCI, рН 7.4), после чего 0.9 мл суспензии клеток помещают в кювету для изучения агрегации и добавляют 0.1 мл индуктора агрегации. Затем при постоянном перемешивании суспензии эритроцитов проводят запись агрегации эритроцитов. После достижения максимальной амплитуды агрегатограммы прекращают перемешивание суспензии эритроцитов и записывают оседание агрегатов. По максимальной амплитуде агрегатограммы и скорости оседания агрегатов эритроцитов судят об агрегационной способности клеток и размерах их агрегатов.
Пример 1. Отмытые эритроциты здорового донора ресуспендировали в соотношении 1:200 в забуференном физиологическом растворе (10 мМ трис-HCI, 150 мМ NaCI, рН 7.4), после чего 0.9 мл суспензии клеток помещали в кювету для изучения агрегации и добавляли 0.1 мл раствора хлористого лантана в финальной концентрации 160 мкМ. Затем при постоянном перемешивании суспензии эритроцитов проводили запись агрегации эритроцитов. После достижения максимальной амплитуды агрегатограммы прекращали перемешивание суспензии эритроцитов и записывали оседание их агрегатов. Максимальная амплитуда агрегатограммы эритроцитов составила 50%. Скорость оседания агрегатов эритроцитов (v) здорового донора составила 20 секунд.
Пример 2. Отмытые эритроциты больного неспецифическим язвенным колитом ресуспендировали в соотношении 1:200 в забуференном физиологическом растворе (10 мМ трис-HCI, 150 мМ NaCI, рН 7.4), после чего 0.9 мл суспензии клеток помещали в кювету для изучения агрегации и добавляли 0.1 мл раствора хлористого лантана в финальной концентрации 160 мкМ. Затем при постоянном перемешивании суспензии эритроцитов проводили запись агрегации эритроцитов. После достижения максимальной амплитуды агрегатограммы прекращали перемешивание суспензии эритроцитов и записывали оседание их агрегатов. Максимальная амплитуда агрегатограммы составила 35%. Скорость оседания агрегатов эритроцитов (v) больного неспецифическим язвенным колитом составило 90 секунд.
Таким образом, степень агрегационной способности эритроцитов и размеры их агрегатов эритроцитов больного неспецифическим язвенным колитом значительно меньше, чем у здорового донора.
Регистрацию агрегации эритроцитов и скорости оседания агрегатов эритроцитов осуществляли фотометрическим методом на лазерном агрегометре ЛА 230-2 НПФ «Биола».
На фигуре представлена агрегатограмма записи агрегации эритроцитов и оседания их агрегатов после добавления хлористого лантана.
Claims (1)
- Способ одновременной оценки агрегационной способности эритроцитов и размеров их агрегатов, включающий выделение эритроцитов из крови и регистрацию степени их агрегации, индуцируемой различными индукторами, отличающийся тем, что после достижения максимальной степени агрегации прекращают перемешивание агрегатов эритроцитов, проводят запись оседания агрегатов эритроцитов и определение скорости их оседания, по максимальной амплитуде агрегации и скорости оседания агрегатов эритроцитов судят об агрегационной способности и размерах их агрегатов.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2016123312A RU2691388C2 (ru) | 2016-06-10 | 2016-06-10 | Способ оценки изменения размеров агрегатов эритроцитов |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2016123312A RU2691388C2 (ru) | 2016-06-10 | 2016-06-10 | Способ оценки изменения размеров агрегатов эритроцитов |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2016123312A RU2016123312A (ru) | 2017-12-14 |
| RU2016123312A3 RU2016123312A3 (ru) | 2018-03-05 |
| RU2691388C2 true RU2691388C2 (ru) | 2019-06-13 |
Family
ID=60718167
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2016123312A RU2691388C2 (ru) | 2016-06-10 | 2016-06-10 | Способ оценки изменения размеров агрегатов эритроцитов |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2691388C2 (ru) |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2082968C1 (ru) * | 1991-12-10 | 1997-06-27 | Нижегородский сельскохозяйственный институт | Способ оценки изменения состояния мембран эритроцитов |
| RU2238556C2 (ru) * | 2002-02-13 | 2004-10-20 | Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Нижегородская государственная сельскохозяйственная академия" | Способ оценки изменения состояния мембран эритроцитов |
| RU2484465C1 (ru) * | 2012-03-12 | 2013-06-10 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Ярославский государственный педагогический университет" им. К.Д. Ушинского (ЯГПУ им. К.Д. Ушинского) | Способ определения степени агрегации клеток крови |
-
2016
- 2016-06-10 RU RU2016123312A patent/RU2691388C2/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2082968C1 (ru) * | 1991-12-10 | 1997-06-27 | Нижегородский сельскохозяйственный институт | Способ оценки изменения состояния мембран эритроцитов |
| RU2238556C2 (ru) * | 2002-02-13 | 2004-10-20 | Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Нижегородская государственная сельскохозяйственная академия" | Способ оценки изменения состояния мембран эритроцитов |
| RU2484465C1 (ru) * | 2012-03-12 | 2013-06-10 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Ярославский государственный педагогический университет" им. К.Д. Ушинского (ЯГПУ им. К.Д. Ушинского) | Способ определения степени агрегации клеток крови |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| DINTENFASS L. Elevation of plasma viscosity and aggregation of red blood cells in melanoma metastasis // Biorheoloigy. 1978. Vol.15. 99-106. . * |
| HESSEL E. et.al. Vox. Sang, 1985, v. 49, N2, p. 86-91. * |
| HESSEL E. et.al. Vox. Sang, 1985, v. 49, N2, p. 86-91. DINTENFASS L. Elevation of plasma viscosity and aggregation of red blood cells in melanoma metastasis // Biorheoloigy. 1978. Vol.15. 99-106. . * |
| ПОРФИРЬЕВ Е.Д. и др. Скорость оседания эритроцитов у лошадей разных пород. Вестник РУДН, серия Агрономия и животноводство, 2011, N 1 с. 67-79. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2016123312A3 (ru) | 2018-03-05 |
| RU2016123312A (ru) | 2017-12-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Alberro et al. | Extracellular vesicles in blood: sources, effects, and applications | |
| Brindle et al. | Application of spin-echo nuclear magnetic resonance to whole-cell systems. Membrane transport | |
| US10416168B2 (en) | Method of analyzing the content of drops and associated apparatus | |
| US11525826B2 (en) | Method for detecting and/or characterising tumour cells and associated apparatus | |
| JP6936984B2 (ja) | 希少細胞を用いて癌患者の予後を予測する方法 | |
| Lee et al. | Determination of serotonin concentration in single human platelets through single-entity electrochemistry | |
| Kalimuthu et al. | A simple approach for rapid and cost-effective quantification of extracellular vesicles using a fluorescence polarization technique | |
| Chang et al. | High-throughput immunomagnetic cell detection using a microaperture chip system | |
| Jin et al. | Iron transport in cancer cell culture suspensions measured by cell magnetophoresis | |
| KR20070119785A (ko) | 미세유체채널 및 자장을 이용한 아폽토틱 세포의 검침·분리방법 및 이를 위한 장치 | |
| RU2691388C2 (ru) | Способ оценки изменения размеров агрегатов эритроцитов | |
| Hamilton et al. | Investigating the impact of a primary tumor on metastasis and dormancy using MRI: new insights into the mechanism of concomitant tumor resistance | |
| Shiri et al. | Characterization of human glioblastoma versus normal plasma-derived extracellular vesicles preisolated by differential centrifugation using cyclical electrical field-flow fractionation | |
| CN104122285A (zh) | 一种基于磁性微珠的低场nmr稀有细胞检测方法 | |
| Lin | Magnetic particles for multidimensional in vitro bioanalysis | |
| CN104155325B (zh) | 一种基于磁性微珠的样品无转移低场nmr稀有细胞快速检测方法 | |
| Puthukodan et al. | Purification analysis, intracellular tracking, and colocalization of extracellular vesicles using atomic force and 3d single-molecule localization microscopy | |
| Richards et al. | Quantitative assays of chemotaxis and chemokinesis for human neural cells | |
| US20170315141A1 (en) | Methods for blood typing and antibody screening | |
| Yayon et al. | The transport of chloroquine across human erythrocyte membranes is mediated by a simple symmetric carrier | |
| JP2017129425A (ja) | 抗癌剤の評価方法 | |
| Zenhausern | Smartphone-Based Detection of Natural Killer Cells Using Flow-Based Measurement and Machine Learning Classification on Paper Microfluidics | |
| RU2688178C2 (ru) | Способ регистрации изменения поверхностного заряда эритроцитов | |
| RU2452958C1 (ru) | Способ оценки агрегационной способности эритроцитов | |
| CN106483298B (zh) | 用于检测细胞角蛋白19片段的化学发光免疫试剂盒 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20190611 |